JP2000503659A

JP2000503659A - Therapeutic application of T-BAM (CD40-L) technology to treat inflammatory kidney disease with a starting point other than the deposition of autoantibodies

Info

Publication number: JP2000503659A
Application number: JP9526174A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．イエリン，マイケル; レダーマン，セス; チェス，レオナルド; エヌ．カープサス，ミハイル; ダブリュー．トーマス，デイビッド
Original assignee: ザトラスティーズオブコロンビアユニバーシティインザシティーオブニューヨーク; バイオジェン，インコーポレイテッド
Priority date: 1996-01-16
Filing date: 1997-01-16
Publication date: 2000-03-28
Also published as: CA2243531A1; WO1997026000A1; EP0874637A1; MX9805724A; AU1748897A

Abstract

(57)【要約】細胞表面上にCD40を有する腎細胞のCD40リガンドによる活性化が、インビボおよびエクスビボの両方で、細胞上でのCD40リガンドとCD40との間の相互作用を阻害し得る因子を用いて阻害される。炎症性腎疾患が処置される。 (57) [Summary] Activation of kidney cells with CD40 on the cell surface by CD40 ligand is inhibited, both in vivo and ex vivo, with factors that can inhibit the interaction between CD40 ligand and CD40 on cells. Inflammatory renal disease is treated.

Description

【発明の詳細な説明】自己抗体の沈着以外の開始点を有する炎症性腎疾患を処置するためのT-BAM(CD40-L)技術の治療的適用本出願は、1996年５月１日に出願された米国特許出願第08/641,473号、および 1996年１月16日に出願された米国特許出願第08/587,334号に優先権を主張し、これらの内容は本明細書中で参考として援用される。本明細書中に開示される発明は、米国保健社会福祉省の米国国立衛生研究所助成金番号K08-AR-01904、RO1-CA55713、RO1-AI-28367、RO1-AI-14969、HL21006、 HL42833、HL50629、およびRO1-AI-14969の下で政府の支援を得てなされた。従って、合衆国政府は、本発明に対して特定の権利を有する。本出願を通して、種々の参考文献が括弧内にて言及される。これらの刊行物のその全体における開示は、本発明が関係する技術水準をより十分に記載するために、本出願に参考として援用される。これらの参考文献についての十分な著書目録の引用は本文中に見出され得る。発明の背景免疫複合体沈着は、全身性エリテマトーデスに付随する糸球体腎炎を含む種々の腎疾患の免疫病原の媒介に重要な役割を果たしていることが知られている。しかし、腎間質中の白血球(主にＴ細胞および単球)浸潤は、しばしばループス腎炎および他の炎症性腎疾患に認められる。最終的に腎の瘢痕化および終末器の損傷をもたらし得る腎の炎症過程におけるＴ細胞浸潤の正確な役割は、現在のところ未知である。単核細胞浸潤の程度が腎不全への進行と相関することは興味深い。いくつかの証拠から、間質のＴ細胞は、ループス腎炎を含む炎症性腎疾患の開始 (initiation)および／または伝搬に直接的な免疫病理学的な役割を果たしていることが示唆される。 CD40は、種々の細胞に発現される細胞表面分子であり、そしてCD40Lと呼ばれる30〜33kDaの活性化誘導CD4⁺Ｔ細胞カウンターレセプターと相互作用する。CD 40L-CD40相互作用は、Ｔ細胞-Ｂ細胞相互作用において広範に研究されており、そしてＴ細胞依存性Ｂ細胞分化ならびにIgG、IgA、およびIgE産生に必須である。CD40はまた、単球、樹状細胞、上皮細胞、内皮細胞、および線維芽細胞で発現される。これらの細胞でのCD40発現は、サイトカイン、特にIFN−γによってインビトロでアップレギュレートされる。インビボ研究から、慢性関節リウマチ滑膜または乾癬のプラークのような炎症部位においてCD40発現が顕著にアップレギュレートされることが実証された。抗CD40mAbまたはCD40L⁺細胞を利用したインビトロの研究から、CD40が単球、樹状細胞、上皮細胞、内皮細胞、および線維芽細胞で機能的に発現されることが実証されている。国際特許公開WO 93/09812(1993年５月27日)のような、特発性自己免疫疾患(薬物誘導性狼瘡を含む)の処置の初期の開示は、CD40がＢ細胞の表面に発現されるという発見に基づいていた。狼癒の開始点は、腎における自己抗体の沈着であり、次いでこれにより腎組織の破壊に関与する細胞が誘引される。以下で議論する CD40が尿細管細胞で発現されるという発見により、自己抗体の沈着以外の開始点を有する炎症性腎疾患を処置するための基礎が提供される。発明の要旨本発明は、細胞の表面にCD40を有する腎細胞のCD40リガンドによる活性化の阻害方法を提供する。本方法は、細胞をCD40リガンドと細胞上のCD40との間の相互作用を阻害し得る因子と接触させる工程を包含し、この因子は細胞の活性化を阻害するのに有効な量で存在する。本発明は、被験体において、細胞の表面にCD40を有する腎細胞のCD40リガンドによる活性化の阻害方法を提供する。本方法は、CD40リガンドと細胞上のCD40との間の相互作用を阻害し得る因子を被験体に投与する工程を包含し、この因子は、被験体の細胞の活性化を阻害するのに有効な量で存在する。本発明は、被験体において、炎症性腎疾患を処置する方法を提供する。本方法は、CD40リガンドと細胞上のCD40との間の相互作用を阻害し得る因子を被験体に投与する工程を包含し、この因子は、被験体の細胞の活性化を阻害するのに有効量で存在し、それにより炎症性腎疾患(自己抗体沈着以外の開始点を有する)が処置される。図面の説明図1A〜1Y：残基Gly116-Leu261を含むヒトCD40Lの可溶性細胞外フラグメントの結晶構造の原子座標(Brookhaven Protein Data Bank形式)(配列番号１)。図2A〜2C：正常腎におけるCD40の発現。コントロールマウスIgG(図2A、倍率25× )または抗CD40mAb G28.5(図2Bおよび2C、倍率40×)で染色した正常腎の凍結切片を示す。遠位尿細管および間質の毛細血管はCD40を発現し、一方近位尿細管はCD 40^-である(図２Ｂ)。ボーマン嚢の糸球体細胞および上皮細胞は、CD40を発現する(図２Ｃ)。図3A〜3C：びまん性増殖性ループス腎炎におけるCD40の発現。コントロールマウスIgG(図3A、倍率25×)または抗CD40mAb G28.5(図3Bおよび3C、倍率40×)で染色した、クラスIVのループス腎炎の患者由来の腎生検の凍結切片を示す。図3Bは、遠位尿細管および近位尿細管の濃いCD40染色を示す。図3Cは、糸球体におけるCD 40発現の増加および拡散を示す。図3Cもまた、上皮由来の糸球体半月がCD40⁺であることを示す。図4A：クラスIVのループス糸球体腎炎の間質単核細胞上でのCD40L発現。腎生検標本から得た、抗CD40L mAb 5c8で染色した凍結切片を示す。結合した抗体を、V 対比染色した。CD40Lの免疫活性を、単核細胞の染色として記す。図4B：クラスIVのループス糸球体腎炎の間質単核細胞のアイソタイプコントロール染色。図4Aで研究されたのと同じ患者から得、そしてIgG2aアイソタイプコ liteキットで、続いて色原体3-アミノ-9-エチルカルバゾール(VectorLaborator 免疫活性(染色)の欠損に留意。図５：クラスIVのループス糸球体腎炎の間質単核細胞上でのCD40L発現。腎生検標本から得た、抗CD40L mAb 5c8で染色した凍結切片を示す。この標本は、図4A キットで、続いて色原体3-アミノ-9-エチルカルバゾール(Vector Laboratories) 免疫活性が、単核細胞の染色として記される。アイソタイプコントロールmAbでの染色はネガティブであった(示さず)。図６：巣状分節状糸球体硬化症(FSGS)における腎CD40発現。腎生検標本から得た、抗CD40 mAb G28.5で染色した凍結切片を示す。結合した抗体を、Vectastain した。濃いCD40染色に留意。アイソタイプコントロールmAbでの染色はネガティブであった(示さず)。図７：巣状文節状糸球体硬化症における間質単核細胞でのCD40L発現。図６で研究した患者と同じ患者から得た、抗CD40L mAb 5c8で染色した凍結切片を示す。チルカルバゾール(Vector Laboratories)で可視化した。組織を、Mayerのヘマト記される。アイソタイプコントロールmAbでの染色は、ネガティブであった(示さず)。図８：IgA腎症における腎CD40発現。腎生検標本から得た、抗CD40 mAb G28.5で続いて色原体3-アミノ-9-エチルカルバゾール(Vector Laboratories)で可視化し留意。アイソタイプコントロールmAbでの染色は、ネガティブであった(示さず) 。図９：IgA腎症の間質単核細胞でのCD40L発現。図８で研究した患者と同じ患者から得た、抗CD40L mAb 5c8で染色した凍結切片を示す。結合した抗体を、Vecta比染色した。CD40L免疫活性は、単核細胞の染色として記される。アイソタイプコントロールmAbでの染色は、ネガティブであった(示さず)。詳細な説明本発明は、細胞表面にCD40を有する腎細胞のCD40リガンドによる活性化を阻害する方法を提供する。本方法は、細胞を、CD40リガンドと細胞上のCD40との間の相互作用を阻害し得る因子と接触させる工程を包含し、この因子は細胞の活性化を阻害するのに有効な量で存在する。本発明の１つの実施態様において、因子は、CD40リガンドとCD40との間の任意の相互作用を阻害し得る。「CD40リガンドと細胞上のCD40との間の相互作用」は、CD40−CD40リガンドの相互関係の１つ以上の局面(機能的または構造的)をいう。従って、１つの実施態様において、相互作用を阻害する因子は、CD40リガンドの細胞性CD40への結合をブロックするかまたは消失させる様式でCD40リガンドに競合的に結合し得る。別の実施態様において、相互作用を阻害する因子は、CD40リガンドの細胞性CD40への結合は阻害しないが、CD40連結に対する細胞応答に、例えば細胞性CD40またはCD40-因子複合体のターンオーバー速度を変化させることによって、CD40のCD40リガンドとの結合動態を変化させることによって、またはCD40連結に応答した細胞活性化の速度または程度を変化させることによって、影響を与える様式で、CD40またはCD40リガンドに会合し得る。特定の実施態様において、CD40保有腎細胞は、以下からなる群より選択される：糸球体内皮細胞、メサンギウム細胞、遠位尿細管細胞、近位尿細管細胞、壁側上皮細胞、臓側上皮細胞、へンレ係蹄またはその脚の細胞、および間質の炎症性細胞。より特定の実施態様において、壁側上皮細胞は、糸球体半月の壁側上皮細胞である。本発明の１つの実施態様において、因子は、CD40リガンドの細胞上のCD40への結合を阻害する。本発明の１つの実施態様において、因子は、タンパク質である。本発明の別の実施態様において、因子は、非タンパク質である。本明細書中で使用する用語非タンパク質は、単純なまたは結合したポリペプチド鎖以外のエレメントを包含する任意のおよび全ての化合物または因子を含む。これには、ペプチド結合を有さないアミノ酸のようなエレメント；β、γ、またはδアミノ酸のような非タンパク質アミノ酸、Ｄ型アミノ酸、または他の非タンパク質アミノ酸（ホモシステイン、ホモセリン、シトルリン、オルチニン、γ−アミノブチル酸、カナバニン、ジェンコール酸、またはβシアノアラニンを含む）；単糖類、多糖類、または炭水化物部分；脂肪酸または脂質部分；ヌクレオチド部分、無機部分；または他の非タンパク質エレメントが挙げられる。特定の実施態様において、タンパク質は、CD40リガンドと細胞上のCD40との間の相互作用を阻害し得る抗体またはその部分を包含する。抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。より特定の実施態様では、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体5c8(ATCC受託番号HB 10916)が特異的に結合するエピトープに特異的に結合する。このようなモノクローナル抗体の例は、モノクローナル抗体5c8(ATCC受託番号HB 10916)である。別の実施態様において、抗体は、CD40に特異的に結合する。抗CD40抗体の一例は、Genzyme Customer Servi ce(製品 80-3702-01、Cambridge，MA)から入手可能なモノクローナルマウス抗ヒトCD40である。他の実施態様において、モノクローナル抗体は、キメラ抗体、霊長類化(primatized)抗体、ヒト化抗体、または第１のヒト由来のCDR領域および第２のヒト由来の抗体骨格を含む抗体である。「キメラ」抗体、「霊長類化」抗体、および「ヒト化」抗体の意味およびそれらの産生方法は、当業者に周知である。例えば、1990年７月26日に公開されたPC T国際公開番号WO 90/07861(Queenら)；およびQueenら、Proc．Nat'l．Acad．Sci .USA(1989)86:10029を参照のこと。霊長類化抗体の作製方法は、例えば、PCT国際公開番号WO /02108、国際出願番号PCT/US92/06194(IDECP harmaceuticals)に対応する；およびNewmanら、Biotechnology（1992）10:1455-1460に開示されている(これらは本出願に参考として援用される)。一般に、ヒト化抗体は、ヒトフレームワーク領域セグメントに機能的に連結した非ヒト抗体の相補性決定領域(CDR)を１つ以上含む抗体である。非ヒト抗体に結合したさらなる残基は必要に応じて存在し得る。代表的には、少なくとも１つの重鎖または１つの軽鎖が非ヒトCDRを含む。代表的には、非ヒトCDRは、マウス CDRである。一般に、霊長類化抗体は、ヒト以外の霊長類種の抗体の相補性決定領域(CDR)を１つ以上含み、ヒト以外の霊長類のフレームワーク領域セグメントに機能的に連結した抗体である。CDRが由来する種と関連するさらなる残基が必要に応じて存在し得る。代表的には、少なくとも１つの重鎖または１つの軽鎖は、ヒト以外の霊長類でない種のCDRを含む。代表的には、CDRはヒトCDRである、一般に、キメラ抗体は、その軽鎖および／または重鎖が異なる種由来の領域を含む抗体である。例えば、ある種の１つ以上の可変(Ｖ)領域セグメントは、別の種の１つ以上の定常(Ｃ)領域に連結し得る。代表的には、キメラ抗体は、ヒト定常領域セグメントに連結したマウスの可変領域セグメントを含むが、他の哺乳動物種が使用され得る。モノクローナル抗体5c8は、ハイブリドーマ細胞（特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約の規定の下、1991年11月14日にAmerican T ype Culture Collection(ATCC),12301 Parklawn Drive，Rockville，Maryland20 852，U.S.A.に寄託された）によって産生される。ハイブリドーマは、ATCC受託番号HB 10916を与えられた。特定の実施態様において、抗体の部分は、軽鎖または重鎖の相補性決定領域または可変領域を含む。別の特定の実施態様において、この抗体の部分は相補性決定領域または可変領域を含む。別の特定の実施態様において、この抗体の部分は Fabまたは一本鎖抗体を含む。一本鎖抗体は、単一のタンパク質鎖のタンパク質スペーサーによって連結された可変領域からなる。別の実施態様において、このタンパク質は、細胞上でのCD40リガンドとCD40との間の任意の相互作用を阻害し得る、CD40リガンドの可溶性細胞外領域もしくはその部分またはその改変体；あるいは細胞上でのCD40リガンドとCD40との間の任意の相互作用を阻害し得る、CD40の可溶性細胞外領域もしくはその部分またはその変異体を含む。特定の実施態様において、CD40リガンドまたはCD40の可溶性細胞外領域はモノマーである。別の実施態様において、CD40の可溶性細胞外領域はオリゴマーである。改変体は、アミノ酸配列においてもしくは配列を含まない様式においてまたは両方において、天然に存在するCD40またはCD40リガンドと異なり得る。アミノ酸配列における改変体は、天然に存在するCD40またはCD40リガンドにおける一つ以上のアミノ酸が、異なる天然のアミノ酸、アミノ酸誘導体、または非天然のアミノ酸で置換された場合に産生される。特に好ましい改変体は、天然に存在するCD 40またはCD40リガンド、または天然に存在するCD40またはCD40リガンドの生物学的に活性なフラグメントを含み、その配列は一つ以上の保存性アミノ酸置換により野生型配列と異なり、代表的には、タンパク質またはペプチドの２次構造および疎水的性質に最少の影響を有する。改変体はまた、CD40またはCD40リガンドの生物学的活性を破壊しない一つ以上のアミノ酸非保存的置換、欠失、または挿入によって異なる配列を有し得る。保存的置換は代表的には、１つのアミノ酸の類似した性質の別のアミノ酸への置換（例えば、以下の群の内の置換：バリン、グリシン；グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン）を含む。非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、およびメチオニンを含む。極性の中性アミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンを含む。正電荷（塩基性）アミノ酸は、アルギニン、リジン、およびヒスチジンを含む。負電荷（酸性）アミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。他の保存的置換は、表１から得られ得、そしてさらに他はDayhoffによってAtl as of Protein Sequence and Stracture(1988)に記載される。本発明の範囲内の他の改変体は、ペプチド安定性を増大させる改変を有する改変体である。そのような改変体は、例えば、ペプチド配列における一つ以上の非ペプチド結合（ペプチド結合を置換する）を含み得る。さらに含まれるのは：天然に生じるＬ-アミノ酸以外の残基（例えば、Ｄ-アミノ酸または天然に生じないアミノ酸もしくはβまたはγアミノ酸のような合成アミノ酸）を含む改変体および環状改変体である。ポリペプチドへのＬ-アミノ酸のかわりにＤ−アミノ酸の組み込みは、プロテアーゼへのその耐性を増大し得る。米国特許第5,219,990号を参照のこと。本発明のペプチドはまた、挿入、欠失、および保存的かまたは非保存的のいずれかの置換のような種々の変更（このような変更は、それらの使用において特定の利点を提供し得る）によって修飾され得る。他の実施態様において、より保存的でないアミノ酸置換を有する改変体はまた、例えば、電荷、構成および他の生物学的性質における変化を生じることによって所望される誘導体を生じ得る。そのような置換は、例えば、親水性の残基の疎水性の残基との置換、システインまたはプロリンの別の残基との置換、小さい側鎖を有する残基の巨大な側鎖を有する残基との置換、または正味の正電荷を有する残基の正味の負電荷を有する残基との置換を含む。所定の置換の結果が確実性を持って予測し得ない場合、誘導体は、所望の特徴の存在または不在を決定するために、本明細書中に開示の方法に従って容易にアッセイされ得る。本発明の範囲内の改変体は、CD40の細胞外領域またはCD40リガンドの細胞外領域と少なくとも80％の相同性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質およびペプチドを含む。より好ましくは、配列相同性は、少なくとも90％、または少なくとも95％である。骨格（scaffold）の置換物を置き換えることが可能であるように、骨格を修飾する官能基を類似の特徴により特徴付けられる基と置換することもまた可能である。これらの置換は、最初は保存的である、すなわち、置換基は、もとの基とおよそ同じ大きさ、形、疎水性および電荷を有する。非配列改変は、例えば、天然に存在するCD40またはCD40リガンドの一部のインビボまたはインビトロの化学的誘導体、ならびにアセチル化、メチル化、リン酸化、カルボキシル化、またはグリコシル化における変化を含む。さらなる実施態様において、CD40リガンドおよびCD40の細胞外領域を含むタンパク質は、その活性が保存される化学的改変によって改変させる。例えば、タンパク質は、アミド化、硫酸化、単一または複数のハロゲン化、アルキル化、カルボキシル化、またはリン酸化され得る。タンパク質はまた（例えば、アセチル基ファルネシル部分、または脂肪酸で（これらは、飽和、モノ不飽和またはポリ不飽和であり得る））単一または複数アシル化され得る。脂肪酸はまた、単一または複数フッ素化され得る。本発明はまた、タンパク質のメチオニンアナログ（例えば、メチオニンスルホンおよびメチオニンスルホキシドアナログ）を含む。本発明はまた、タンパク質の塩（例えば、アンモニウム塩（アルキルまたはアリールアンモニウム塩を含む）、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸化水素塩、リン酸化２水素、チオ硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、安息香酸塩、スルホン酸塩、チオスルホン酸塩、メシレート、エチルスルホン酸塩、およびベンゼンスルホン酸塩）を含む。可溶性の、モノマー性CD40-Lタンパク質は、CD40-Lの細胞外領域の全てまたは一部を含み得る。CD40-Lの細胞外領域は、CD40に結合するドメインを含む。従って、可溶性のCD40-Lは、CD40LとCD40保有細胞との間の相互作用を阻害し得る。本発明は、sCD40-Lが、CD40-Lの細胞外領域の全てもしくはフラグメントまたはC D40に結合するドメインを含む誘導体を構成し得ることを意図する。可溶性CD40タンパク質(sCD40)は、CD40の細胞外領域を含む。sCD40は、CD40L およびCD40保有細胞の間の相互作用を阻害する。sCD40は、モノマーまたはオリゴマーの形態であり得る。本発明の別の実施態様において、CD40の可溶性の細胞外領域またはその部分を含むタンパク質は、CD40の細胞外領域またはその部分に融合したFc領域をさらに含む。特定の実施態様において、Fc領域は、プロテインＡまたはプロテインＧに結合し得る。別の実施態様において、Fc領域は、IgG、IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄ 、IgA、IgA₁、IgA₂、IgM、IgD、またはIgEを含む。可溶性CD40/Fc融合タンパク質は、所望の配列由来のフラグメントの切断および連結する酵素の従来の技術を用いて調製され得る。融合タンパク質のための適切なFc領域は、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇに結合し得るFc領域か、または Fc領域を含む融合タンパク質の精製または検出において用いられ得る抗体によって認識し得るFc領域である。例えば、Fc領域は、ヒトIgG₁またはマウスIgG₁のFc 領域を含み得る。本発明はまた、CD40/Fc融合タンパク質をコードする核酸分子も提供する。組換え手段により可溶性形態の膜分子を作成する方法（ここで、膜通過および細胞質ドメインをコードする配列が欠失される）は、周知である。一般的には、 Hammondsら、米国特許第5,057,417号を参照のこと。さらに、sCD40およびCD40/F cの融合タンパク質を調製する方法も周知である。例えば、PCT国際公開番号第WO 93/08207号；Fanslowら、「Soluble Forms of CD40 Inhibit Biologic Response s of Human B Cells.」J ．Immunol.,149巻、655-60頁(1992年７月)を参照のこと。本発明の実施態様において、因子は、スクリーニング方法により選択される。特定の実施態様において、因子は、以下の工程を包含するスクリーニング方法によって選択される：細胞試料を単離する工程；CD40保有細胞の活性化を許容する条件下で試料を培養する工程；CD40保有細胞を活性化するために有効な、ATCC 受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体5c8により特異的に認識されるタンパク質を発現している細胞、またはATCC受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体 5c8により特異的に認識されるタンパク質と試料とを接触させる工程；因子がCD4 0保有細胞の活性化を阻害し得る場合、CD40保有細胞の活性化を阻害するのに有効な一定量の因子と試料を接触させる工程；およびATCC受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体5c8により特異的に認識されるタンパク質を発現する細胞またはATCC受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体5c8により特異的に認識されるタンパク質を有する細胞が、因子の存在下でCD40保有細胞を活性化するかどうかを決定する工程。細胞試料は、培養における細胞株または動物から単離された細胞（例えば、固形組織から分散させた細胞、骨髄生検由来の細胞、または体液（例えば血液もしくはリンパ液）から単離された細胞）を含む種々の組織から単離され得る。別の特定の実施態様において、因子（分子）は、細胞上でのCD40リガンドとCD 40との間の相互作用を阻害し得るCD40リガンドの可溶性細胞外領域またはその一部の３次元構造に基づいて選択される。因子は、既知の因子のライブラリーから選択され、既知の因子から３次元構造に基づいて改変されるか、または３次元構造に基づいて新たに設計されそして合成され得る。特定の実施態様において、因子（分子）は、CD40リガンドの可溶性細胞外領域またはその一部とリード阻害因子との複合体の３次元構造に基づく、リード阻害因子の構造最適化により、設計される。リード阻害因子は、同定されている分子であり、CD40リガンドに接触したときに、CD40リガンドの可溶性細胞外領域、CD40、またはその一部と結合しそして複合体化し、それにより複合体化したまたは結合したCD40リガンドまたはCD 40リガンドの一部の、CD40保有細胞を活性化する能力を減少させる、分子である。別の実施態様において、リード阻害因子は、CD40リガンドの細胞外領域、CD40 、またはCD40リガンドの一部およびCD40の両方との三次の複合体のいずれかと相互作用することにより作用し得、複合体化したCD40リガンド-CD40の、CD40保有細胞を活性化する能力を減少させる。本発明の方法において、CD40リガンドは、可溶性であるかまたは細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）に結合しているかのいずれかであり得、そして全長の天然CD40リガンドまたはその一部のいずれかであり得る。CD40保有細胞を活性化する能力の減少は、種々の方法で測定され得る。１つの方法では、CD40リガンドが、阻害剤の存在下で、同様の条件下で、阻害剤なしで同様の量のCD40リガンドでの細胞の処理と比較して、CD40保有細胞の活性化を引き起こす程度がより低いことを示すことにより測定され得る。CD40保有細胞を活性化する能力の減少はまた、結合していないCD40リガンドと比較して、同様の条件下でCD40保有細胞と同程度の活性化を生じるためにはより高い濃度の阻害剤-CD4 0リガンド複合体が必要とされることにより示され得る。極端には、阻害剤に接触したCD40リガンドは、結合していないCD40リガンドまたはその一定の部分によりこれらの細胞を活性化し得る濃度および条件下では、CD40保有細胞を活性化し得ない。因子（分子）は、残基Gly116-Leu261（配列番号１）(sCD40L(116-261))を含むヒトCD40Lの細胞外ドメインの可溶性フラグメントの結晶構造を用いて、コンピュータースクリーニング方法により選択され得る。スクリーニング方法で使用されるべき結晶構造は、分子置換方法により、２Å の解像度で決定されている。簡潔に述べると、アミノ酸残基GIy116からＣ末端残基Leu261を含むヒトCD40リガンドの細胞外ドメインの可溶性フラグメントは、まず可溶性形態に生成され、次いで精製されそして結晶化された。結晶は、回折データを収集するために用いられた。分子置換および洗練は、XPLORプログラムパッケージおよびQUANTA(Molecular Simulations，Inc.)ソフトウェアを用いて行われた。詳細には、ヒトsCD40Lの３次元モデルは、マウスCD40Lモデルを用いて、QUANTAタンパク質相同性モデリングソフトウェアを用いて構築された。このモデルは、XPLORを用いて、結晶解析計算のためのプローブとして使用され得、そしてXPLORを用いて洗練された。sCD40Lの結晶構造を決定するこの方法は、Karpu sasら、「ヒトCD40リガンドの細胞外フラグメントの２Å結晶構造」、Structure （1995年10月）3(10):1031-1039にさらに詳細に記載されている。sCD40L(116-26 1)の原子座標は、図１Ａ〜Ｙに提供される。因子を選択するためのスクリーニング方法は、以下に記載するように、コンピューター薬物設計および反復的構造最適化を含む。因子は、コンピューター薬物設計を用いて選択された阻害剤であり得る。本方法を使用して、sCD40L結晶構造座標は、CD40に結合することが予測される分子構造のリストを出力するコンピュータープログラム（例えば、DOCKのような）のための入力として使用される。そのようなコンピュータープログラムの使用は、周知である。例えば、Kuntz、「薬物の設計および発見のための構造に基づくストラテジー」、Science、257巻、1078頁(1992)を参照のこと。次いで、分子構造のリストは、CD40結合について生化学的アッセイによりスクリーニングされ得る。周知の、競合型生化学アッセイが使用され得る。例えば、Bajorathら、「レセプター-リガンド相互作用に重要な、CD40およびそのリガンドの残基の同定」Bioch emistry ，34，1833頁(1995)を参照のこと。従って、CD40Lに結合することが見出されている構造は、本発明のための因子として使用され得る。因子はまた、構造最適化の相互作用サイクルによって決定された、改変されたまたは設計された分子であり得る。このアプローチを用いて、上記のコンピューターアプローチまたは他のアプローチを用いて見出されたCD40Lの低分子阻害剤は、sCD40Lおよび分子置換によって解明された複合体の結晶構造と同時結晶化され得る。分子置換によって示されたこの情報は、この分子がCD40Lとどのように相互作用しているかを明らかにすることにより、阻害剤の構造を最適化するために使用され得る。低分子は、CD40Lに対する特異性および親和性を含む、その生理化学的特性を改善するために改変され得る。本発明の１つの実施態様において、因子は低分子である。本明細書中で使用されるように、低分子は、20Daと1×10⁶Da間の分子量、好ましくは50Da〜2kDaの分子量を有する化合物である。本発明はまた、被験体において細胞表面上にCD40を有する腎細胞のCD40リガンドによる活性化を阻害する方法を提供する。この方法は、その被験体に細胞上の CD40リガンドとCD40との間の相互作用を阻害し得る因子を投与する工程を包含し、その被験体中の細胞の活性化を阻害するのに効果的な量でその因子は、存在する。特定の実施態様において、CD40を有する腎細胞は、糸球体上皮細胞、メサンギウム細胞、遠位尿細管、近位尿細管、壁上皮細胞、内臓上皮細胞、ヘンレわなの細胞、またはその肢、および間質炎症性細胞からなる群から選択される。より特定の実施態様において、壁上皮細胞は、半月体壁上皮細胞である。本発明の１つの実施態様において、因子は細胞上でCD40リガンドのCD40への結合を阻害する。本発明の１つの実施態様において、因子はタンパク質である。本発明の別の実施態様において、因子は非タンパク質である。特定の実施態様において、このタンパク質は、細胞上でCD40リガンドとCD40との間のいかなる相互作用も阻害し得る、抗体またはその部分を含む。この抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。より特定の実施態様において、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体5c8（ATCC受託番号第HB109l6 号）が特異的に結合するエピトープに特異的に結合する。そのようなモノクローナル抗体の例は、モノクローナル抗体5c8（ATCC受託番号第HB10916号）である。他の実施態様において、モノクローナル抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体である。特定の実施態様において、抗体の部分は、軽鎖または重鎖の相補的決定領域または可変領域を含む。別の特定の実施態様において、抗体の部分は、相補的決定領域または可変領域を含む。別の特定の実施態様において、抗体の部分は、Fab または一本鎖抗体を含む。別の実施態様において、このタンパク質は、細胞上でCD40リガンドとCD40との間の任意の相互作用を阻害し得る、CD40リガンドの可溶性細胞外領域、またはその部分；あるいは細胞上でCD40リガンドおよびCD40の間の任意の相互作用を阻害し得る、CD40の可溶性細胞外領域、またはその部分を含む。特定の実施態様において、CD40リガンドまたはCD40の可溶性細胞外領域はモノマーである。別の実施態様において、CD40の可溶性細胞外領域はオリゴマーである。本発明の別の実施態様において、CD40の可溶性細胞外領域またはその一部を含むタンパク質は、CD40の細胞外領域またはその一部に融合したFc領域をさらに含む。特定の実施態様において、Fc領域は、プロテインＡまたはプロテインＧに結合し得る。別の特定の実施態様において、Fc領域はIgG、IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄ 、IgA、IgA₁、IgA₂、IgM、IgD、またはIgEを含む。上記の方法により処置され得る被験体は、動物である。好ましくは、動物は哺乳動物である。処置され得る哺乳動物の例としては、ヒト、ヒトを除く霊長類ｉ、齧歯類（ラット、マウス、ハムスター、およびモルモットを含む）、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、およびネコが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の実施態様において、因子は、スクリーニング方法により選択される。特定の実施態様において、因子は、以下の工程を包含するスクリーニング法によって選択される：細胞試料を単離する工程；CD40保有細胞の活性化を許容する条件下で試料を培養する工程；CD40保有細胞を活性化するために有効な、ATCC受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体 5c8により特異的に認識されるタンパク質を発現している細胞、またはATCC受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体5c 8により特異的に認識されるタンパク質と試料とを接触させる工程；因子がCD40 保有細胞の活性化を阻害し得る場合、CD40保有細胞の活性化を阻害するのに有効な一定量の因子と試料を接触させる工程；およびATCC受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体5c8により特異的に認識されるタンパク質を発現する細胞、またはATCC受託番号HB 10916を有するハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体5c8により特異的に認識されるタンパク質を有する細胞が、因子の存在下でCD40保有細胞を活性化するかどうかを決定する工程。細胞試料は、培養における細胞株または動物から単離された細胞（例えば、固形組織から分散させた細胞、骨髄生検由来の細胞、または体液（例えば血液もしくはリンパ液）から単離された細胞）を含む種々の組織から単離され得る。別の特定の実施態様において、細胞上でのCD40リガンドとCD40との間の任意の相互作用を阻害し得る分子（因子）は、CD40リガンドの可溶性細胞外領域またはその一部の３次元構造に基づいて選択される。分子は、既知の分子のライブラリーから選択され、既知の分子から３次元構造に基づいて改変されるか、または３次元構造に基づいて新たに設計されそして合成され得る。特定の実施態様において、因子または分子は、CD40リガンドの可溶性細胞外領域またはその一部とリード阻害因子との複合体の３次元構造に基づく、リード阻害因子の構造最適化により、設計される。処置の方法本発明は、被験体において、炎症性腎疾患を処置する方法を提供し、この方法は、細胞表面上にCD40を有する腎細胞のCD40リガンドによる活性化を阻害する上記の方法を包含し、これは、細胞上のCD40リガンドとCD40との間の相互作用を阻害する因子を被験体に投与する工程を包含し、その因子は、被験体における細胞の活性化を阻害するための有効量で存在し、それにより炎症性腎疾患を処置する。炎症性腎疾患は、腎臓における自己抗体蓄積によって惹起される疾患であってもよく、または腎臓における自己抗体蓄積によって惹起されない疾患であってもよい。本発明の方法が有用である多くの腎疾患は、多因子性の病因を有する疾患を含む。本発明の実施態様において、腎疾患は、膜性糸球体腎炎、微小変化群／急性尿細管壊死；乏免疫(pauci-immune)糸球体腎炎；巣状分節状糸球体硬化症；間質性腎炎；抗基底膜抗体疾患のような抗組織抗体誘導糸球体傷害；循環性免疫複合体疾患（circulating immune-complex disease）；多系疾患に関連した糸球体症（ glomerulopathies associated with multisystem diseases）；薬物誘導糸球体疾患；腎臓移植拒絶；急進行性糸球体腎炎（rapidly progressive glomerulonep hritis）；およびストレプトコッカス後糸球体腎炎からなる群から選択される。循環性免疫複合体疾患は、感染性心内膜炎、癩病、梅毒、Ｂ型肝炎、マラリア、およびDNA、チログロブリン、自己免疫グロブリン、赤血球ストローマ、腎尿細管抗原、および腫瘍特異的または腫瘍関連抗原のような内因性抗原の疾患を含む。多系疾患に関連した糸球体症は、糖尿病性腎症、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー疾患、血管炎、多発性骨髄腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、およびアミロイド症を含む。特定の実施態様において、血管炎は、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、結節性多発性動脈炎（ときどき、多発性動脈炎と呼ばれる）、ウェーグナー肉芽腫症、クリオグロブリン血症（ときどき、クリオ免疫グロブリン血症と呼ばれる）を含む。腎疾患はまた、毒素、新生物、過敏症ネフロパシー、シェーグレン症候群およびAIDSのような腎尿細管に影響する腎疾患でもあり得る。特定の実施態様において、乏免疫性糸球体腎炎は、ANCA+乏免疫性糸球体腎炎か、またはウェーグナー肉芽腫症である。別の特定の実施態様において、間質性腎炎は、薬物誘導間質性腎炎である。本発明の化合物は、医学的に受容可能な任意の様式で投与され得る。これは、静脈内、血管内、動脈内、皮下、筋肉内、腫瘍内、腹腔内、心室内、硬膜内またはその他のような非経口経路による注射、および経口、経鼻、眼、直腸、局所的、または吸入を含み得る。徐放投与もまた、特に、本発明に含まれ、蓄積としてのそのような手段により、侵食性移植物の蓄積注射が手術中に直接適用される。この化合物は、医学的に受容可能な、体重当たりのいかなる用量および投薬頻度でも投与される。受容可能な投薬量は、約0.01mg/kg被験体体重と200mg/kg被験体体重との間の範囲を含む。好ましい投薬量は、約0.1mg/kg被験体体重と50mg /kg被験体体重との間の範囲である。特に好ましい投薬量は、約1mg/kg被験体体重と30mg/kg被験体体重との間の投薬量である。投薬は、毎日〜毎月の範囲の間隔で反復される。１つの好ましい投与療法は、本発明の化合物を、一回の投与当たり静脈内に５mg/kg体重または10mg/kg体重で、処置の最初の三日間は毎日投与し、その後、この化合物を３週間おきに投与することである。別の好ましい養生法は、本発明の化合物を毎日、静脈内で５mg/kg体重で処置の最初の３日間投与し、その後、この化合物を皮下または筋肉内に週おきに10mg/被験体で投与することである。別の好ましい養生法は、本発明の化合物の単回用量を20mg/kg体重で非経口的に投与し、続いてこの化合物を１週間おきに10mg/被験体で皮下または筋肉内投与することである。本発明の化合物は、特定の適応症のために（例えば、被験体が短時間曝された抗原（例えば、処置の一日に投与された外来性抗原）に対する免疫応答を阻害すること）単回用量として投与され得る。このような抗原の例は、遺伝子治療ベクターまたは抗原性医薬品もしくは血液製剤のような治療剤と本発明の化合物との同時投与を含む。抗原が慢性的に存在する適応症において（例えば、移植組織または長期的に投与される抗原性医薬品に対する免疫反応の制御において）、本発明の化合物は、医学的に必要とされる時間の間だけ、数日または数週間から、被験体の一生までの範囲の間隔で投与される。炎症性応答は、浮腫および貪食白血球の移動での毛細血管拡張の結果としての、赤色度、腫脹、熱、および疼痛で特徴づけられる。炎症は、Gallin(Fundament al Immunology、26章、第２版、Raven Press、New York、1989、721〜733頁）によって、さらに定義され、本明細書中で参考として援用される。本発明は、以下の「実験の詳細」からよりよく理解される。しかし、当業者は、以下の請求の範囲により十分に記載されるように、議論された特定の方法および結果は本発明の単なる例示であることを容易に認識する。実験の詳細正常腎臓および全身性エリテマトーデスおよび他の腎疾患を伴う患者由来の腎生検標本におけるCD40の発現を試験した。患者および方法免疫組織化学 ngame、CA）を用いて以前に記載のように行った。簡単に述べれば、組織をまず、たアビジン／ビオチンブロッキングキットを利用してさらにブロックした。次いで、切片を、PBS中で、１：1000希釈の抗CD40mAb G28.5またはアイソタイプのコントロールmAbに続いてビオチン化ウマ抗マウスIgGで染色した。内在性ペルオキシダーゼ活性を1:400希釈のH₂O₂でブロックした。結合した抗体をVectastain AB C試薬、続いてクロモゲン3-アミノ-9-エチルカルバゾール（Vector Laboratorie 染色を視覚的に評価した。以下の表において、「0」は染色なしを示し；1＋は最小限の染色を示し；2＋は中程度の染色を示し；そして3＋は強度の染色を示す。結果正常腎臓におけるCD40発現の分析腎CD40発現の初期の研究は、CD40が正常に種々の組織の内皮細胞に発現するという観察によって促進された。この知見に一致して、腎間質毛細管および大血管がCD40を発現していることが見い出された。CD40はまた、糸球体内皮細胞、糸球体メサンギウム細胞、およびボーマン嚢の壁上皮細胞のような他の腎実質細胞においても発現していることが見い出された。糸球体内臓上皮細胞は、CD40を発現しない。遠位尿細管は、CD40について強度に免疫応答性であり、染色は側底膜に沿って最も強度であった。対照的に、近位尿細管は抗CD40mAbとは免疫応答性ではなかった。アイソタイプのコントロールmAbは腎標本を染色しなかった。抗CD4 0mAb G28.5で示される免疫応答性は、特異的である可能性が非常にあり、交差応答性を示さない。なぜなら、類似の染色が追加の抗CD40mAbで示されたからである。従って、腎実質細胞はディファレンシャルにCD40を発現していることが結論づけられる。全身性ルーパスエリテマトーデスにおける腎CD40発現の分析腎CD40発現がルーパス糸球体腎炎においてアップレギュレートされているかどうかを分析した。患者生検標本から得た凍結切片を、抗CD40mAb G28.5またはアイソタイプコントロールmAbで染色した。全身性ルーパスエリテマトーデスにおける腎CD40発現を分析した。クラスIII およびIVループス腎炎患者は、糸球体内皮細胞、メサンギウム細胞、および遠位尿細管において増加したCD40発現を有する傾向があった。さらに、近位尿細管は、クラスIIIおよびクラスIVループス腎炎患者においてCD40＋である。さらに、半月体形成を有する患者の壁上皮細胞において、驚くべきCD40発現がある。CD40 もまた、間質炎症性細胞に存在する。純粋クラスV疾患患者における腎CD40発現の分布および強度は、正常腎臓において見られるのと類似していた。腎CD40アップレギュレーションが全身性ルーパスエリテマトーデスに特有であるかどうかを調べた。これをおこなうため、CD40発現が、以下の腎疾患の患者において調査された：膜性糸球体腎炎、微小変化群／急性尿細管壊死、ANCA+乏免疫糸球体腎炎；巣状分節状糸球体硬化症、およびIgAネフロパシー。近位尿細管C D40発現は、ANCA+乏免疫糸球体、巣状分節状糸球体硬化症およびIgAネフロパシーにおいて、アップレギュレートされていた。対称的に、膜性糸球体腎炎、微小変化群／急性尿細管壊死における近位尿細管CD40免疫応答性はほとんどなかった。IgAネフロパシーにおける半月体壁上皮細胞もまた、驚くことにCD40＋である。間質炎症性細胞もまた、存在する場合、CD40を発現する。これらの知見は、CD 40 発現が種々の炎症性腎疾患においてアップレギュレートされることを示す。さらに、これらの研究は、腎実質細胞とのCD40L媒介の相互作用が正常腎生理および腎疾患における炎症性応答増強において役割を果たしていることを示す。炎症腎疾患における腎CD40リガンド発現の解析 SLE GN（ｎ＝18）患者由来の腎生検標本、ならびに正常腎臓、およびIgAネフロパシー、巣状分節状糸球体硬化症、微小変化群、特発性膜性糸球体腎炎および ANCA+乏免疫糸球体腎炎の患者由来の生検標本においてインサイチュCD40L発現を研究した。免疫組織化学的研究を、抗CD40L mAb 5C8またはコントロールmAbを利用して、凍結切片において行った。CD40L発現のアップレギュレーションが、クラスIVルーパス糸球体腎炎（図4A、4Bおよび５）、巣状分節状糸球体硬化症（図７）、およびIgAネフロパシー（図９）において観察される。CD40L発現は薄暗く示され、浸潤したいくつかの単核球のはっきりとした染色が見られた。これらの結果は、CD40L媒介シグナルが、腎臓においてCD40⁺標的細胞と相互作用することにより、炎症性糸球体または尿細管間質性疾患の免疫病原において役割を果たしていることのさらなる証拠を提供する。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Inflammatory renal disease with a starting point other than autoantibody deposition Therapeutic application of T-BAM (CD40-L) technology to treat cancer This application is related to US patent application Ser. No. 08 / 641,473 filed May 1, 1996, and Claiming priority in US Patent Application Serial No. 08 / 587,334, filed January 16, 1996, These contents are incorporated herein by reference. The invention disclosed herein is supported by the U.S. Department of Health and Human Services Money number K08-AR-01904, RO1-CA55713, RO1-AI-28367, RO1-AI-14969, HL21006, Made with government support under HL42833, HL50629, and RO1-AI-14969. Follow Accordingly, the United States Government has certain rights in the invention. Throughout this application, various references are referred to in parentheses. Of these publications The overall disclosure is intended to more fully describe the state of the art to which this invention pertains. Incorporated herein by reference. Sufficient book citations for these references The citation of the record can be found in the text.Background of the Invention Immune complex deposition has been implicated in various forms, including glomerulonephritis associated with systemic lupus erythematosus. It is known to play an important role in mediating the immunopathogenesis of kidney disease. I However, infiltration of leukocytes (primarily T cells and monocytes) in the renal interstitium often results in lupus nephritis. And other inflammatory kidney diseases. Eventual renal scarring and end-injury The exact role of T cell infiltration in the renal inflammatory process, which can lead to Unknown. It is interesting that the degree of mononuclear cell infiltration correlates with progression to renal failure. Some evidence suggests that stromal T cells may initiate inflammatory kidney diseases, including lupus nephritis plays a direct immunopathological role in (initiation) and / or transmission It is suggested that CD40 is a cell surface molecule expressed on various cells and is called CD40L 30-33 kDa activation-induced CD4⁺Interacts with T cell counter receptors. CD The 40L-CD40 interaction has been extensively studied in T cell-B cell interactions, And is essential for T cell-dependent B cell differentiation and IgG, IgA, and IgE production . CD40 is also expressed on monocytes, dendritic cells, epithelial cells, endothelial cells, and fibroblasts Is done. CD40 expression in these cells is induced by cytokines, especially IFN-γ. It is up-regulated in NBITRO. From in vivo studies, rheumatoid arthritis Significant upregulation of CD40 expression at sites of inflammation, such as membranes or psoriatic plaques It has been demonstrated that Anti-CD40mAb or CD40L⁺Inn using cell In vitro studies show that CD40 can be used in monocytes, dendritic cells, epithelial cells, endothelial cells, and fibroblasts. It has been demonstrated to be functionally expressed in cells. Idiopathic autoimmune diseases (drugs such as International Patent Publication WO 93/09812 (May 27, 1993)) Early disclosure of the treatment (including product-induced lupus) shows that CD40 is expressed on the surface of B cells It was based on the discovery. The starting point for wolf healing is the deposition of autoantibodies in the kidney This then attracts the cells involved in the destruction of kidney tissue. Discussed below Discovery that CD40 is expressed on tubular cells suggests a starting point other than autoantibody deposition The basis is provided for treating inflammatory renal diseases withSummary of the Invention The present invention inhibits the activation of kidney cells having CD40 on the cell surface by CD40 ligand. Provide harm methods. The method involves the interaction of cells with CD40 ligand and CD40 on cells. Contacting with a factor that can inhibit the action of the cell, which prevents cell activation. Present in an amount effective to harm. The present invention relates to a CD40 ligand for kidney cells having CD40 on the cell surface in a subject. To provide a method for inhibiting activation. The method involves the interaction of CD40 ligand with CD40 on cells. Administering to the subject an agent capable of inhibiting the interaction between Is present in an amount effective to inhibit activation of the subject's cells. The present invention provides a method of treating an inflammatory kidney disease in a subject. This method Subjects subjects to a factor that can inhibit the interaction between CD40 ligand and CD40 on cells. Administering the agent, wherein the factor is effective to inhibit the activation of a subject's cells. Present in amounts, thereby treating inflammatory kidney disease (having a starting point other than autoantibody deposition). Is placed.Description of the drawings Figures 1A-1Y: Ligation of soluble extracellular fragment of human CD40L containing residues Gly116-Leu261. Atomic coordinates of crystal structure (Brookhaven Protein Data Bank format) (SEQ ID NO: 1). Figures 2A-2C: CD40 expression in normal kidney. Control mouse IgG (Figure 2A, 25x magnification) ) Or frozen sections of normal kidney stained with anti-CD40 mAb G28.5 (FIGS.2B and 2C, magnification 40 ×) Is shown. Distal tubules and interstitial capillaries express CD40, while proximal tubules express CD40. 40^-(FIG. 2B). Bowman's capsule glomerular and epithelial cells express CD40 (FIG. 2C). Figures 3A-3C: CD40 expression in diffuse proliferative lupus nephritis. Control mau Stained IgG (Figure 3A, magnification 25x) or anti-CD40 mAb G28.5 (Figures 3B and 3C, magnification 40x) 3 shows a frozen section of a renal biopsy from a patient with class IV lupus nephritis. FIG. Shows deep CD40 staining of distal and proximal tubules. FIG.3C shows CD in glomeruli 40 shows increased and spread expression. FIG.3C also shows that the epithelium-derived glomerular⁺so Indicates that there is. FIG. 4A: CD40L expression on stromal mononuclear cells of class IV lupus glomerulonephritis. Kidney biopsy Shows frozen sections obtained from specimens and stained with anti-CD40L mAb 5c8. The bound antibody is Counterstained. CD40L immunoreactivity is reported as mononuclear cell staining. Figure 4B: Isotype control of stromal mononuclear cells of class IV lupus glomerulonephritis. Dyeing. Obtained from the same patient studied in FIG. lite kit followed by the chromogen 3-amino-9-ethylcarbazole (VectorLaborator Note the lack of immunoreactivity (staining). Figure 5: CD40L expression on stromal mononuclear cells of class IV lupus glomerulonephritis. Kidney biopsy Shows frozen sections obtained from specimens and stained with anti-CD40L mAb 5c8. This specimen is shown in Figure 4A Kit followed by chromogen 3-amino-9-ethylcarbazole (Vector Laboratories) Immune activity is noted as mononuclear cell staining. Isotype control mAb Staining was negative (not shown). Figure 6: Renal CD40 expression in focal segmental glomerulosclerosis (FSGS). Obtained from kidney biopsy specimen Shows frozen sections stained with anti-CD40 mAb G28.5. Vectastain did. Note dark CD40 staining. Negative staining with isotype control mAb (Not shown). Figure 7: CD40L expression on stromal mononuclear cells in focal segmental glomerulosclerosis. Fig. 6 3 shows a frozen section stained with anti-CD40L mAb 5c8, obtained from the same patient studied. Visualized with tilcarbazole (Vector Laboratories). Organization, Mayer's Hemato Is written. Staining with the isotype control mAb was negative (shown Zu). Figure 8: Renal CD40 expression in IgA nephropathy. Anti-CD40 mAb G28.5 from kidney biopsy specimen Subsequently, visualization was performed with the chromogen 3-amino-9-ethylcarbazole (Vector Laboratories). Attention. Staining with isotype control mAb was negative (not shown) . Figure 9: CD40L expression in stromal mononuclear cells of IgA nephropathy. The same patients studied in Figure 8 5 shows frozen sections stained with anti-CD40L mAb 5c8, obtained from. VectaSpecific staining was performed. CD40L immunoreactivity is noted as mononuclear cell staining. Isotype Staining with the control mAb was negative (not shown).Detailed description The present invention inhibits activation of kidney cells having CD40 on the cell surface by CD40 ligand Provide a way to The method comprises the steps of allowing a cell to interact between a CD40 ligand and CD40 on the cell. Contacting with a factor capable of inhibiting the interaction, wherein the factor activates the cell. Is present in an amount effective to inhibit P. In one embodiment of the invention, the factor is , Can inhibit any interaction between CD40 ligand and CD40. "With CD40 ligand An interaction with CD40 on a cell is one or more of the CD40-CD40 ligand interactions (Functional or structural). Thus, in one embodiment, the interaction Agents that block CD40 ligand binding to cellular CD40 or Can competitively bind to CD40 ligand in a disappearing manner. In another embodiment , Factors that Inhibit the Interaction Do Not Inhibit the Binding of CD40 Ligand to Cellular CD40 Has a cellular response to CD40 ligation, e.g., of cellular CD40 or CD40-factor complex By altering the turnover rate, the binding behavior of CD40 to CD40 ligand The rate of cell activation in response to altered CD40 or CD40 ligand in a manner that affects it by varying degrees To meet In certain embodiments, the CD40-bearing kidney cells are selected from the group consisting of: : Glomerular endothelial cells, mesangial cells, distal tubular cells, proximal tubular cells, parietal Epithelial cells, visceral epithelial cells, cells of the loop or its legs, and inflammatory stroma cell. In a more specific embodiment, the parietal epithelial cells are glomerular crescent parietal epithelial cells. Vesicles. In one embodiment of the invention, the factor is a CD40 ligand that binds to CD40 on cells. Inhibits binding. In one embodiment of the present invention, the factor is a protein. In another embodiment of the invention, the factor is a non-protein. In this specification The term non-protein used refers to elements other than simple or linked polypeptide chains. And any and all compounds or factors, including but not limited to This includes Pep Elements such as amino acids without tide bonds; of β, γ, or δ amino acids Such non-protein amino acids, D-type amino acids, or other non-protein amino acids (Homocysteine, homoserine, citrulline, ortinine, γ-aminobutyric acid , Canavanine, gencholate, or β-cyanoalanine); monosaccharides, polysaccharides Sugar or carbohydrate moiety; fatty acid or lipid moiety; nucleotide moiety, inorganic moiety Minutes; or other non-protein elements. In certain embodiments, the protein is between the CD40 ligand and CD40 on the cell. Antibodies or portions thereof that can inhibit the interaction of Antibodies are monoclonal Antibody or polyclonal antibody. In a more specific embodiment, the monochrome The null antibody specifically binds to monoclonal antibody 5c8 (ATCC accession number HB 10916). Specifically binds to an epitope. Examples of such monoclonal antibodies are This is a clonal antibody 5c8 (ATCC accession number HB 10916). In another embodiment, the anti- The body specifically binds to CD40. One example of an anti-CD40 antibody is Genzyme Customer Servi ce (product 80-3702-01, Cambridge, MA). CD40. In another embodiment, the monoclonal antibody is a chimeric antibody, A primatized antibody, a humanized antibody, or a first human-derived CDR region and An antibody comprising a second human-derived antibody scaffold. What are "chimeric", "primate" and "humanized" antibodies and what do they mean? Methods for their production are well known to those skilled in the art. For example, a PC released on July 26, 1990 T International Publication No. WO 90/07861 (Queen et al.); And Queen et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci See USA (1989) 86: 10029. Methods for producing primatized antibodies are described, for example, in PCT International Publication Number WO / 02108, International Application Number PCT / US92 / 06194 (IDECP harmaceuticals) And Newman et al., Biotechnology (1992) 10: 1455-1460. (These are incorporated herein by reference). Generally, a humanized antibody is operably linked to a human framework region segment. An antibody comprising one or more complementarity determining regions (CDRs) of a non-human antibody. For non-human antibodies Additional residues attached may be present if desired. Typically, at least one Heavy chain or one light chain comprises a non-human CDR. Typically, the non-human CDR is a mouse CDR. In general, primatized antibodies are used to determine the complementarity of antibodies of non-human primate species. Non-human primate framework region segment containing one or more CDRs Is an antibody operably linked to Additional residues related to the species from which the CDR is derived are required. It can be present as needed. Typically, at least one heavy chain or one light chain is And non-human primate CDRs. Typically, the CDRs are human CDRs, Generally, chimeric antibodies comprise regions whose light and / or heavy chains are from different species. Antibodies. For example, one or more variable (V) region segments May be linked to one or more constant (C) regions. Typically, a chimeric antibody is a human constant A mouse variable region segment linked to a region segment, but containing Seeds can be used. Monoclonal antibody 5c8 is used for hybridoma cells Under the terms of the Budapest Treaty on the International Recognition of the American Treaty on November 14, 1991 ype Culture Collection (ATCC), 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20 852, deposited with U.S.A.). Hybridoma is commissioned by ATCC Given the number HB 10916. In certain embodiments, the portion of the antibody comprises a light or heavy chain complementarity determining region. Or a variable region. In another specific embodiment, the portion of the antibody is complementary Includes constant or variable regions. In another specific embodiment, the portion of the antibody is Includes Fab or single chain antibodies. Single-chain antibodies are proteins of a single protein chain Consists of variable regions linked by a spacer. In another embodiment, the protein comprises a CD40 ligand and CD40 on a cell. The soluble extracellular region of the CD40 ligand or any interaction between A portion thereof or a variant thereof; or a part between CD40 ligand and CD40 on a cell. Soluble extracellular region of CD40 or a portion thereof or any Including mutants of In certain embodiments, the CD40 ligand or soluble The extracellular region is a monomer. In another embodiment, the soluble extracellular region of CD40 is It is an oligomer. The variant may be in the amino acid sequence or in a sequence-free manner or In both cases, it may differ from naturally occurring CD40 or a CD40 ligand. amino acid Variants in the sequence may include one or more of the naturally occurring CD40 or CD40 ligand. The amino acid above is a different natural amino acid, amino acid derivative, or non-natural amino acid. Produced when substituted with nonoic acid. Particularly preferred variants are naturally occurring CDs. Biology of 40 or CD40 ligand, or naturally occurring CD40 or CD40 ligand Contains highly active fragments, the sequence of which is modified by one or more conservative amino acid substitutions. Unlike the wild-type sequence, typically the secondary structure and And minimal impact on hydrophobic properties. Variants can also be CD40 or CD40 ligand. One or more non-conservative amino acid substitutions, deletions, or insertions that do not disrupt biological activity May have different sequences. A conservative substitution is typically a class of one amino acid. Substitution for another amino acid with similar properties (eg, substitution in the following group: valine, Lysine; glycine, alanine; valine, isoleucine; aspartic acid, gluta Minic acid; Asparagine, Glutamine; Serine, Threonine; Lysine, Arginine And phenylalanine, tyrosine). Non-polar (hydrophobic) amino acids are Alanine, leucine, isoleucine, valine, proline, phenylalanine, Includes tryptophan and methionine. The polar neutral amino acids are glycine, Phosphorus, threonine, cysteine, tyrosine, asparagine, and glutamine Including. Positively charged (basic) amino acids include arginine, lysine, and histidine. Including. Negatively charged (acidic) amino acids include aspartic acid and glutamic acid. Other conservative substitutions can be obtained from Table 1 and still others are described by Dayhoff in Atl as of Protein Sequence and Stracture (1988). Other variants within the scope of the invention are those having modifications that increase peptide stability. It is a transformation. Such variants include, for example, one or more non- It may contain peptide bonds (replace peptide bonds). Also included: Heaven Residues other than naturally occurring L-amino acids (eg, D-amino acids or non-naturally occurring Amino acids or synthetic amino acids such as β or γ amino acids) And cyclic variants. Substitution of D-amino acids for L-amino acids in polypeptides Incorporation can increase its resistance to proteases. U.S. Pat.No. 5,219,990 checking ... The peptides of the present invention also include insertions, deletions, and conservative or non-conservative Various changes, such as substitutions of any of them (such changes Which can provide the advantage of In other embodiments, variants with less conservative amino acid substitutions are also For example, by causing changes in charge, composition and other biological properties. To give the desired derivative. Such substitutions can be made, for example, by the sparseness of hydrophilic residues. Substitution with aqueous residues, substitution of cysteine or proline with another residue, smaller side Substitution of a residue with a chain for a residue with a large side chain, or has a net positive charge Substitution of any residue with a residue having a net negative charge. The result of a given replacement is certain If not predictable with a derivative, the derivative determines the presence or absence of the desired feature To be easily assayed according to the methods disclosed herein. Variants within the scope of the present invention are the extracellular region of CD40 or the extracellular region of CD40 ligand. Proteins and amino acids having an amino acid sequence having at least 80% homology to the Including peptides. More preferably, sequence homology is at least 90% or less. Both are 95%. Modify the scaffold to be able to replace scaffold substitutions It is also possible to replace the functional group You. These substitutions are initially conservative, i.e., the substituents are Almost the same size, shape, hydrophobicity and charge. Non-sequence modifications include, for example, Vivo or in vitro chemistry of CD40 or a portion of the CD40 ligand present in Derivatives and acetylation, methylation, phosphorylation, carboxylation, or Includes changes in lycosylation. In a further embodiment, a protein comprising a CD40 ligand and an extracellular region of CD40. Proteins are modified by chemical modifications that preserve their activity. For example, tongue Proteins are amidated, sulfated, single or multiple halogenated, alkylated, It can be boxylated or phosphorylated. Proteins also have (eg, acetyl groups) Farnesyl moieties, or fatty acids (which are saturated, monounsaturated or polyunsaturated) Can be saturated)) single or multiple acylated. Fatty acids are also single or May be multiple fluorinated. The invention also relates to methionine analogs of proteins (eg, Methionine sulfone and methionine sulfoxide analogs). Book The invention also relates to salts of proteins, such as ammonium salts (alkyl or aryl). Ammonium sulfate), sulfate, hydrogen sulfate, phosphate, hydrogen phosphate, Dihydrogen phosphate, thiosulfate, carbonate, bicarbonate, benzoate, sulfonate, Thiosulfonate, mesylate, ethylsulfonate, and benzenesulfone Acid salts). Soluble, monomeric CD40-L protein contains all or an extracellular region of CD40-L. May include some. The extracellular region of CD40-L contains a domain that binds to CD40. Follow Thus, soluble CD40-L can inhibit the interaction between CD40L and CD40-bearing cells. The present invention provides that sCD40-L comprises all or a fragment of the extracellular region of CD40-L or C It is contemplated that derivatives comprising a domain that binds to D40 may be constructed. Soluble CD40 protein (sCD40) contains the extracellular region of CD40. sCD40 is CD40L And inhibit the interaction between CD40-bearing cells. sCD40 is a monomer or It may be in the form of sesame. In another embodiment of the present invention, the soluble extracellular region of CD40 or a portion thereof is The protein contains an Fc region fused to the extracellular region of CD40 or a portion thereof. Including. In certain embodiments, the Fc region is located on protein A or protein G. Can be combined. In another embodiment, the Fc region is an IgG, an IgG.₁, IgG_Two, IgG_Three, IgG_Four , IgA, IgA₁, IgA_Two, IgM, IgD, or IgE. Soluble CD40 / Fc fusion proteins are capable of cleaving fragments from the desired sequence. And ligating enzymes can be prepared using conventional techniques. Suitable for fusion proteins A sharp Fc region is an Fc region capable of binding to protein A or protein G, or Antibodies that can be used in the purification or detection of fusion proteins containing an Fc region This is an Fc region that can be recognized. For example, the Fc region is a human IgG₁Or mouse IgG₁Fc Region. The invention also provides a nucleic acid molecule encoding a CD40 / Fc fusion protein. Also provide. Methods for making soluble forms of membrane molecules by recombinant means (where transmembrane and The sequence encoding the cytoplasmic domain is deleted). In general, See Hammonds et al., U.S. Patent No. 5,057,417. In addition, sCD40 and CD40 / F Methods for preparing fusion proteins of c are also well known. For example, PCT International Publication No. WO 93/08207; Fanslow et al., "Soluble Forms of CD40 Inhibit Biologic Response s of Human B Cells.J . Immunol.149, 655-60 (July 1992). . In an embodiment of the present invention, the factors are selected by a screening method. In certain embodiments, the factor is a screening method comprising the following steps: Selected by: isolating a cell sample; allowing activation of CD40-bearing cells Culturing the sample under different conditions; ATCC effective for activating CD40-bearing cells Monoclonal antibody produced by a hybridoma having accession number HB 10916 Cells expressing a protein that is specifically recognized by Monoclonal antibody produced by a hybridoma having accession number HB 10916 Contacting the sample with a protein specifically recognized by 5c8; 0 If it can inhibit the activation of CD40-bearing cells, it is useful for inhibiting the activation of CD40-bearing cells. Contacting the sample with an effective fixed amount of the factor; and having ATCC accession number HB 10916 Specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 produced by the hybridoma Cells expressing the recognized protein or hives having ATCC accession number HB 10916 Specific recognition by monoclonal antibody 5c8 produced by lidoma Whether cells with proteins activate CD40-bearing cells in the presence of factors Determining. The cell sample is a cell line in culture or cells isolated from an animal. Vesicles (eg, cells dispersed from solid tissue, cells from a bone marrow biopsy, or bodily fluid ( For example, cells isolated from blood or lymph) Can be done. In another specific embodiment, the factor (molecule) is a CD40 ligand and a CD40 ligand on a cell. Soluble extracellular region of CD40 ligand or one thereof that can inhibit the interaction between Selected based on the three-dimensional structure of the part. Factors from a library of known factors Selected and modified based on the three-dimensional structure from known factors, or It can be newly designed and synthesized based on the structure. In certain embodiments, the factor Child (molecule) is the soluble extracellular domain of CD40 ligand or a part thereof and lead inhibitor Design by optimizing the structure of lead inhibitors based on the three-dimensional structure of the complex with the child Is done. A lead inhibitor is a molecule that has been identified and contacts a CD40 ligand. Binds to the soluble extracellular domain of CD40 ligand, CD40, or a portion thereof. And thus complexed or bound CD40 ligand or CD A molecule that reduces the ability of some 40 ligands to activate CD40-bearing cells . In another embodiment, the lead inhibitor is the extracellular region of CD40 ligand, CD40 Or any of the tertiary complexes with both the CD40 ligand portion and CD40 CD40 ligand complexed CD40 ligand-CD40, which can act by interacting Reduce the ability to activate cells. In the method of the present invention, the CD40 ligand is Either soluble or bound to cells (eg, activated T cells) And can be either the full-length natural CD40 ligand or a portion thereof. You. The decrease in ability to activate CD40-bearing cells can be measured in various ways. One Who In the method, CD40 ligand is used in the presence of an inhibitor under the same conditions and without an inhibitor. Activates CD40-bearing cells compared to treatment of cells with similar amounts of CD40 ligand. It can be measured by indicating that the degree of occurrence is lower. Activates CD40-bearing cells Reduced ability to catalyze is also seen in similar conditions compared to unbound CD40 ligand. Higher concentration of inhibitor-CD4 to produce as much activation as CD40-bearing cells under This can be indicated by the need for a 0 ligand complex. In extreme cases, The touched CD40 ligand may be due to unbound CD40 ligand or certain portions thereof. At concentrations and conditions that can activate these cells, CD40-bearing cells can be activated. I can't get it. The factor (molecule) contains residues Gly116-Leu261 (SEQ ID NO: 1) (sCD40L (116-261)) Using the crystal structure of the soluble fragment of the extracellular domain of human CD40L, Can be selected by a computer screening method. The crystal structure to be used in the screening method depends on the molecular replacement method. Is determined by the resolution. Briefly, from the amino acid residue GIy116 to the C-terminal residue Soluble fragments of the extracellular domain of the human CD40 ligand, including the group Leu261, are also Produced in a soluble form, then purified and crystallized. Crystals are diffracted Used to collect data. Molecular replacement and refinement are described in the XPLOR program Package and using QUANTA (Molecular Simulations, Inc.) software. Was done. Specifically, a three-dimensional model of human sCD40L is obtained using a mouse CD40L model. Was constructed using the QUANTA protein homology modeling software. This model Dell can use XPLOR as a probe for crystallographic calculations, and And refined using XPLOR. This method of determining the crystal structure of sCD40L is described by Karpu sas et al., “2Å Crystal Structure of Extracellular Fragment of Human CD40 Ligand”,Structure (October 1995) 3 (10): 1031-1039. sCD40L (116-26 The atomic coordinates of 1) are provided in FIGS. Screenin for selecting factors The method of computerization involves computer drug design and iterative structural optimization, as described below. Including optimization. The agent can be an inhibitor selected using computer drug design. Head Using the sCD40L crystal structure coordinates, the molecular structure predicted to bind to CD40 A computer program that outputs a list of builds (eg, DOCK) Used as input for The use of such computer programs is Is knowledge. For example, Kuntz, "Structure-based strikes for drug design and discovery. Lattegy ",Science257, 1078 (1992). Then, the molecular structure The list can be screened for CD40 binding by a biochemical assay. Well-known, competitive biochemical assays can be used. For example, Bajorath et al., "Recep Identification of CD40 and its Ligand Residues Important for Tar-Ligand Interactions "Bioch emistry , 34, p. 1833 (1995). Therefore, it was found to bind to CD40L. The structure described can be used as a factor for the present invention. Factors also have a structure Modified or designed as determined by the interaction cycle of optimization Can be a child. Using this approach, the above computer approach or Are small molecule inhibitors of CD40L found using other approaches, sCD40L and Can be co-crystallized with the crystal structure of the complex elucidated by child replacement. For molecular replacement The information presented thus provides information on how this molecule interacts with CD40L Can be used to optimize the structure of the inhibitor. Low The molecule improves its physiochemical properties, including specificity and affinity for CD40L Can be modified to In one embodiment of the invention, the agent is a small molecule. Used herein As shown, the small molecule is 20 Da and 1 × 10⁶Molecular weight between Da, preferably between 50 Da and 2 kDa It is a compound having a molecular weight. The present invention also provides CD40 ligand for renal cells having CD40 on the cell surface in a subject. And a method for inhibiting activation by a drug. The method provides the subject with a cell-based Administering an agent capable of inhibiting the interaction between the CD40 ligand and CD40. The factor is present in an amount effective to inhibit the activation of cells in the subject. You. In certain embodiments, the renal cells having CD40 are glomerular epithelial cells, mesangi Cells, distal tubules, proximal tubules, parietal epithelial cells, visceral epithelial cells, Henle trap Cells, or limbs thereof, and stromal inflammatory cells. More special In certain embodiments, the parietal epithelial cells are crescentic epithelial cells. In one embodiment of the invention, the agent binds a CD40 ligand to CD40 on a cell. Inhibits binding. In one embodiment of the present invention, the factor is a protein. Another embodiment of the present invention In embodiments, the factor is a non-protein. In certain embodiments, the protein comprises a CD40 ligand and CD40 on a cell. Antibodies, or portions thereof, that can inhibit any interaction between the antibodies. This antibody is It is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody. In a more specific embodiment And monoclonal antibody 5c8 (ATCC Accession No. HB109l6) ) Specifically binds to an epitope that specifically binds. Such monochrome An example of a null antibody is monoclonal antibody 5c8 (ATCC Accession No. HB10916). In other embodiments, the monoclonal antibody is a chimeric or humanized antibody You. In certain embodiments, the portion of the antibody comprises the complementary determining region of the light or heavy chain. Or a variable region. In another specific embodiment, the portion of the antibody is complementarily determined. Region or variable region. In another specific embodiment, the portion of the antibody comprises a Fab Or a single chain antibody. In another embodiment, the protein comprises a CD40 ligand and a CD40 on a cell. The soluble extracellular region of the CD40 ligand, or any other Portion; or inhibits any interaction between CD40 ligand and CD40 on cells The soluble extracellular region of CD40, or a portion thereof. In certain embodiments And the soluble extracellular region of CD40 ligand or CD40 is a monomer. Another implementation In embodiments, the soluble extracellular region of CD40 is an oligomer. In another embodiment of the present invention, comprising the soluble extracellular region of CD40 or a part thereof. Proteins further include an Fc region fused to the extracellular region of CD40 or a portion thereof. No. In certain embodiments, the Fc region is linked to protein A or protein G. Can match. In another specific embodiment, the Fc region is an IgG, an IgG.₁, IgG_Two, IgG_Three, IgG_Four , IgA, IgA₁, IgA_Two, IgM, IgD, or IgE. Subjects that can be treated by the above methods are animals. Preferably, the animal is It is a milk animal. Examples of mammals that can be treated include humans, non-human primates i , Rodents (including rats, mice, hamsters, and guinea pigs), cattle, Ma, Include, but are not limited to, sheep, goats, pigs, dogs, and cats . In an embodiment of the present invention, the factors are selected by a screening method. In certain embodiments, the agent is used in a screening method that includes the following steps. Selected by: isolating a cell sample; allowing activation of CD40-bearing cells Culturing the sample under conditions; effective for activating CD40-bearing cells; Monoclonal antibody produced by a hybridoma having accession number HB 10916 Cells expressing a protein specifically recognized by 5c8, or ATCC contract Monoclonal antibody 5c produced by the hybridoma having the number HB 10916 Contacting the sample with a protein specifically recognized by 8; Effective in inhibiting the activation of CD40-bearing cells if it can inhibit the activation of carrying cells Contacting the sample with any fixed amount of factor; and having ATCC accession number HB 10916 Specific recognition by monoclonal antibody 5c8 produced by hybridoma Or a hive having ATCC accession number HB 10916 Specific recognition by monoclonal antibody 5c8 produced by lidoma Whether cells with proteins activate CD40-bearing cells in the presence of factors Determining. The cell sample is a cell line in culture or cells isolated from an animal. Vesicles (eg, cells dispersed from solid tissue, cells from a bone marrow biopsy, or bodily fluid ( For example, cells isolated from blood or lymph) Can be done. In another specific embodiment, any between the CD40 ligand and CD40 on the cell Molecules (factors) that can inhibit the interaction include the soluble extracellular region of CD40 ligand or The selection is made based on a part of the three-dimensional structure. Molecule is a library of known molecules Selected from known molecules and modified based on a three-dimensional structure from a known molecule, or 3 It can be newly designed and synthesized based on the dimensional structure. In certain embodiments Factor or molecule is associated with the soluble extracellular region of CD40 ligand or a portion thereof. Optimization of the lead inhibitor based on the three-dimensional structure of the complex with the lead inhibitor Design.Treatment method The present invention provides a method of treating inflammatory renal disease in a subject, the method comprising: Inhibits the activation of kidney cells with CD40 on the cell surface by CD40 ligand The method described above, which inhibits the interaction between CD40 ligand and CD40 on cells. Administering the harmful agent to the subject, wherein the agent comprises a cell in the subject. Is present in an effective amount to inhibit the activation of, thereby treating inflammatory kidney disease . Inflammatory renal disease is a disease caused by autoantibody accumulation in the kidney. Or a disease that is not caused by autoantibody accumulation in the kidney Good. Many kidney diseases for which the methods of the present invention are useful are diseases having a multifactorial etiology. including. In an embodiment of the present invention, the renal disease is membranous glomerulonephritis, minimal change group / acute urine Tubular necrosis; pauci-immune glomerulonephritis; focal segmental glomerulosclerosis; interstitial Nephritis; anti-tissue antibody-induced glomerular injury such as anti-basement membrane antibody disease; circulating immune complex Disease (circulating immune-complex disease); glomerulopathy associated with multisystem disease ( glomerulopathies associated with multisystem diseases); drug-induced glomeruli Disease; renal transplant rejection; rapidly progressive glomerulonep hritis); and post-streptococcal glomerulonephritis. Circulating immune complex diseases include infectious endocarditis, leprosy, syphilis, hepatitis B, malaria, And DNA, thyroglobulin, autoimmune globulin, erythrocyte stroma, renal kidney Includes diseases of ductal antigens and endogenous antigens such as tumor-specific or tumor-associated antigens . Glomerulopathies associated with multisystem disease include diabetic nephropathy, systemic lupus erythematosus, Disease, vasculitis, multiple myeloma, Waldenstrom macroglob Includes phosphoremia, and amyloidosis. In certain embodiments, the vasculitis is Noch-Schönlein purpura, polyarteritis nodosa (sometimes polyarteritis nodosa) ), Wegner's granulomatosis, cryoglobulinemia (sometimes O immunoglobulinemia). Kidney disease also includes toxins, neoplasms, irritability Kidneys affecting renal tubules such as nephropathy, Sjogren's syndrome and AIDS It can also be a disease. In certain embodiments, the poorly immune glomerulonephritis is ANCA + poor. If you have immune glomerulonephritis or Wegner granulomatosis. Another specific embodiment In, the interstitial nephritis is drug-induced interstitial nephritis. The compounds of the present invention can be administered in any medically acceptable manner. this is, Intravenous, intravascular, intraarterial, subcutaneous, intramuscular, intratumoral, intraperitoneal, intraventricular, intradural or Is injection by parenteral route such as other, and oral, nasal, ocular, rectal, topical Or inhalation. Sustained release administration is also specifically included in the present invention and By such means, depot injections of erosive implants are applied directly during surgery. The compound can be administered at any dose and frequency of body weight that is medically acceptable. Administered at any time. Acceptable dosages are approximately 0.01 mg / kg subject body weight and 200 mg / kg Includes range between subject weight. The preferred dosage is about 0.1 mg / kg subject body weight and 50 mg / kg subject body weight. A particularly preferred dosage is about 1 mg / kg of the subject. Dosage between weight and 30 mg / kg subject body weight. Dosing is between daily and monthly Repeated at intervals. One preferred dosing regimen is to administer the compound of the invention in a single administration. 5 mg / kg bw or 10 mg / kg bw daily for the first 3 days of treatment Thereafter, the compound is administered every three weeks. Another preferred curing The method involves administering a compound of the present invention intravenously at 5 mg / kg body weight daily for the first 3 days of treatment. The compound is then administered subcutaneously or intramuscularly at 10 mg / weekly That is. Another preferred regimen is to use a single dose of a compound of the invention at 20 mg / kg body weight. Parenteral administration, followed by subcutaneous or subcutaneous administration of the compound at 10 mg / subject every other week. Is intramuscular administration. Compounds of the invention may be useful for certain indications (eg, when subjects Inhibits the immune response to antigens (eg, foreign antigens administered during the day of treatment) That can be administered as a single dose. Examples of such antigens are gene therapy vectors Or a therapeutic agent such as an antigenic drug or blood product with a compound of the present invention. Including simultaneous administration. In indications where the antigen is chronically present (eg, Or control of the immune response to long-term administered antigenic drugs) Light compounds can be exposed for days or weeks only during medically needed times. It is administered at intervals ranging up to the life of the subject. The inflammatory response is a consequence of edema and capillary dilation in the migration of phagocytic leukocytes. , Redness, swelling, fever, and pain. Inflammation is caused by Gallin (Fundament al Immunology, Chapter 26, Second Edition, Raven Press, New York, 1989, pp. 721-733) Thus, it is further defined and incorporated herein by reference. The invention will be better understood from the Experimental Details below. But those skilled in the art Specific methods and methods discussed, as more fully set forth in the following claims. It is readily apparent that the results are merely illustrative of the present invention.Experimental details Normal kidney and kidney from patients with systemic lupus erythematosus and other renal diseases The expression of CD40 in biopsy specimens was tested.Patients and methods Immunohistochemistry ngame, CA) as described previously. In a nutshell, the organization first , Were further blocked using the avidin / biotin blocking kit. Next Sections were prepared in PBS at 1: 1000 dilution of anti-CD40 mAb G28.5 or isotype Staining was performed with biotinylated horse anti-mouse IgG following control mAb. Endogenous peroki Hidase at 1: 400 dilution for sidase activity_TwoO_TwoBlocked by. Vectastain AB C reagent followed by chromogen 3-amino-9-ethylcarbazole (Vector Laboratorie Staining was assessed visually. In the table below, "0" indicates no staining; 1+ indicates 2+ indicates moderate staining; and 3+ indicates intense staining .result Analysis of CD40 expression in normal kidney Early studies of renal CD40 expression indicate that CD40 is normally expressed on endothelial cells in various tissues. Was encouraged by the observation. Consistent with this finding, renal interstitial capillaries and large vessels Was found to express CD40. CD40 is also found in glomerular endothelial cells, glomeruli Somatic mesangial cells, and other renal parenchymal cells such as Bowman's capsule wall epithelial cells Was also found to be expressed. Glomerular visceral epithelial cells express CD40 do not do. Distal tubules are strongly immunoreactive for CD40 and staining is in the basolateral membrane Along the strongest. In contrast, proximal tubules are immunoreactive with anti-CD40 mAb There was no. Isotype control mAb did not stain kidney specimens. Anti-CD4 The immunoreactivity exhibited by 0 mAb G28.5 is very likely to be specific and cross-reactive. Does not show responsiveness. Because similar staining was shown with the additional anti-CD40 mAb You. Therefore, it was concluded that renal parenchymal cells differentially express CD40. Attached.Analysis of renal CD40 expression in systemic lupus lupus erythematosus Whether renal CD40 expression is up-regulated in Lupus glomerulonephritis Was analyzed. Frozen sections from patient biopsy specimens were used for anti-CD40 mAb G28.5 or Stained with isotype control mAb. Renal CD40 expression in systemic lupus lupus erythematosus was analyzed. Class III And IV lupus nephritis patients have glomerular endothelial cells, mesangial cells, and distal There was a tendency to have increased CD40 expression in the tubules. In addition, the proximal tubule CD40 + in patients with class III and class IV lupus nephritis. further, There is surprising CD40 expression in mural epithelial cells of patients with crescent formation. CD40 Is also present in stromal inflammatory cells. Renal CD40 expression in patients with pure class V disease Distribution and intensity were similar to those found in normal kidney. Renal CD40 up-regulation is specific to systemic lupus lupus erythematosus I checked whether or not. To do this, CD40 expression is increased in patients with the following renal diseases: Investigation: Membranous glomerulonephritis, minimal change group / acute tubular necrosis, ANCA + deprivation Glomerulonephritis; focal segmental glomerulosclerosis, and IgA nephropathy. Proximal tubule C D40 expression is dependent on ANCA + poor immune glomeruli, focal segmental glomerulosclerosis and IgA nephropathy -Was up-regulated. Symmetrically, membrane glomerulonephritis, microscopic Change group / negligible proximal tubular CD40 immunoreactivity in acute tubular necrosis . Crescent wall epithelial cells in IgA nephropathy are also surprisingly CD40 + . Stromal inflammatory cells, when present, also express CD40. These findings, CD 40 4 shows that expression is up-regulated in various inflammatory kidney diseases. Further In addition, these studies show that CD40L-mediated interactions with renal parenchymal cells Shows that it plays a role in enhancing the inflammatory response in kidney disease. Analysis of renal CD40 ligand expression in inflammatory kidney disease Kidney biopsy specimens from SLE GN (n = 18) patients, as well as normal kidney and IgA nef Lopathy, focal segmental glomerulosclerosis, minimal changes, idiopathic membranous glomerulonephritis and In situ CD40L expression in biopsy specimens from patients with ANCA + hypoimmune glomerulonephritis Studied. Immunohistochemical studies using anti-CD40L mAb 5C8 or control mAb And performed on frozen sections. Up-regulation of CD40L expression Las IV Lupus glomerulonephritis (Figures 4A, 4B and 5), focal segmental glomerulosclerosis (Figure 7), and IgA nephropathy (FIG. 9). CD40L expression is dim A clear staining of some of the mononuclear cells infiltrated and shown was seen. these The result shows that CD40L-mediated signal⁺Interacting with target cells Plays a role in the immune pathogenesis of inflammatory glomeruli or tubulointerstitial disease Provide further evidence of

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｃ０７Ｋ 16/18 // Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ６１Ｋ 37/02 15/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＣＣ１２Ｐ 21/08 5/00 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＭＸ (72)発明者イエリン，マイケルジェイ. アメリカ合衆国ニューヨーク 10463, リバーデイル，インディペンデンスアベニュー 2736 (72)発明者レダーマン，セスアメリカ合衆国ニューヨーク 10128, ニューヨーク，イースト 95ティーエイチストリート 143 (72)発明者チェス，レオナルドアメリカ合衆国ニューヨーク 10538, スカースデイル，グリーンエイカーズアベニュー 81 (72)発明者カープサス，ミハイルエヌ. アメリカ合衆国マサチューセッツ 02131，ロスリンデイル，ポプラーストリートナンバー２ 175 (72)発明者トーマス，デイビッドダブリュー. アメリカ合衆国マサチューセッツ 02181，ウェルズリー，アップランドロード９──────────────────────────────────────────────────続き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) G01N 33/566 C07K 16/18 // C07K 16/18 C12P 21/08 C12N 5/00 A61K 37/02 15 / 02 C12N 15/00 C C12P 21/08 5/00 (C12P 21/08 C12R 1:91) (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR , IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), AU, CA, JP, MX (72) Inventor Yerin, Michael Jay. United States of America New York 10463, Riverdale, Independence Avenue 2736 (72) Inventor Ledderman, Seth United States of America New York 10128, New York, East 95 T Tot 143 (72) Inventor Chess, Leonard, United States of America New York 10538, Scarsdale, Green Acres Avenue 81 (72) Inventor Carpsas, Mikhail N. USA Massachusetts 02131, Ross Lindale, Poplar Street No. 2 175 (72) Inventor Thomas , David W. Massachusetts, USA 02181, Wellesley, Upland Road 9

Claims

[Claims] 1. Inhibits activation of cells with CD40 on the cell surface by CD40 ligand In the preparation of a medicament for inhibiting the interaction between CD40 ligand and CD40. The use of the factor, wherein the CD40-bearing cell is a kidney cell. 2. The kidney cells are glomerular endothelial cells, mesangial cells, distal tubular cells, proximal Tubular cells, mural epithelial cells, visceral epithelial cells, cells of Henle's limb, and interstitial inflammatory cells The use according to claim 1, which is selected from the group consisting of vesicles. 3. 3. Use according to claim 2, wherein the parietal epithelial cells are crescentic epithelial cells. 4. The factor is produced by a hybridoma having ATCC Accession No.HB 10916. The monoclonal antibody 5c8 to be produced specifically binds to an antigen that specifically binds, Use according to claim 1. 5. The use according to claim 1, wherein the factor specifically binds to CD40. 6. The factor is selected from a library of known reagents, or The use according to claim 1, wherein the use is modified from a known factor. 7. The factor is selected from the group consisting of protein, non-protein, and small molecule The use according to claim 1, which is performed. 8. The use according to claim 7, wherein the protein is an antibody or a part thereof. 9. The antibody comprises a monoclonal antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, and a primate. The use according to claim 7, wherein the use is selected from the group consisting of conjugated antibodies. 10. The monoclonal antibody has a hybrid having ATCC Accession No.HB 10916. The use according to claim 9, which is a monoclonal antibody 5c8 produced by Doma. for. 11. The protein is a soluble extracellular region of the CD40 ligand, or Variants thereof, including recombinants, or portions thereof; Extracellular region, or a variant thereof containing conservative substitutions, or a portion thereof Use according to claim 7. 12. The soluble extracellular region of the CD40 ligand or CD40 is a monomer or an oligomer. The use according to claim 11, which is sesame. 13. The soluble extracellular region of CD40 or a portion thereof is the extracellular region of CD40 or Further comprising an Fc region fused to that portion or a CD40 ligand or portion thereof, Use according to claim 11. 14． The factor may be soluble in the extracellular region CD40 or a portion thereof in combination with a lead inhibitor. Selected by structure optimization of the lead inhibitor based on the three-dimensional structure of the coalescence Use according to item 1. 15. The factor is a specific factor that is caused by CD40 ligand of CD40-bearing renal cells involved in renal disease. The use according to claim 1, which specifically inhibits cell activation. 16. The renal disease is minimal change, acute tubular necrosis, interstitial nephritis, and amylo 16. The use according to claim 15, wherein the use is selected from the group consisting of idosis. 17． The factor is involved in kidney disease affecting renal tubules, The use according to claim 15, which specifically inhibits cell activation by CD40 ligand. . 18. Kidney disease affecting the renal tubules is associated with toxins and neoplasia 18. The use according to claim 17, wherein the use is selected from the group consisting of kidney disease. 19. Said factors are selected by a screening method comprising the following steps: Use according to claim 1: (A) isolating a sample of kidney cells; (B) allowing the kidney cells to be activated in the sample that is CD40-bearing cells Culturing under conditions that: (C) subjecting the sample to a hybridoma having ATCC Accession No. HB 10916 Expresses proteins specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 produced ATCC accession number, which is effective for activating cells or CD40-bearing kidney cells Monoclonal antibody 5c produced by a hybridoma having HB 10916 Contacting with a protein specifically recognized by 8; (D) if the factor can inhibit the activation of the CD40-bearing cell, the CD40-bearing kidney cell Contacting the sample with an effective amount of an agent to inhibit the activation of (E) produced by a hybridoma having ATCC accession number HB 10916 Expressing a protein specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 , Or produced by a hybridoma having ATCC accession number HB 10916 The protein specifically recognized by monoclonal antibody 5c8 is Determining whether to activate said CD40-bearing kidney cells below. 20. CD40 on the cell surface by a screening method comprising the following steps: To select factors that can inhibit the interaction of CD40 ligand with retained kidney cells the method of: (A) isolating a sample of kidney cells; (B) activating the renal cells in the sample, which is a CD40-bearing renal cell, Culturing under conditions that allow it; (C) subjecting the sample to a hybridoma having ATCC Accession No. HB 10916 Expresses proteins specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 produced ATCC accession number, which is effective for activating cells or CD40-bearing kidney cells Monoclonal antibody 5c produced by a hybridoma having HB 10916 Contacting with a protein specifically recognized by 8; (D) when the factor can inhibit the activation of CD40-bearing kidney cells, Contacting the sample with an effective amount of an agent to inhibit the activation of (E) produced by a hybridoma having ATCC accession number HB 10916 Expressing a protein specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 , Or produced by a hybridoma having ATCC accession number HB 10916 The protein specifically recognized by monoclonal antibody 5c8 is Determining whether to activate said CD40-bearing kidney cells below. 21. 21. The renal cell sample of claim 19 or 20, wherein the sample is isolated from tissue. the method of. 22. The sample of kidney cells may be a cell line in culture, cells isolated from an animal, 21. or a cell isolated from a body fluid. The method described in. 23. Kidney cells can inhibit the interaction between CD40 ligand and CD40 in vitro Contacting the factor with a renal cell bearing CD40 on the cell surface, A method for inhibiting activation by a ligand. 24. The kidney cells are glomerular endothelial cells, mesangial cells, distal tubular cells, Renal tubular cells, parietal epithelial cells, visceral epithelial cells, cells of Henle's limb, and stromal inflammatory 24. The method of claim 23, wherein the method is selected from the group consisting of cells. 25. 25. The method of claim 24, wherein said parietal epithelial cells are crescentic epithelial cells. 26. The factor specifically has a hybrid having ATCC Accession No.HB 10916 Monoclonal antibody 5c8 produced by ma binds to an antigen that specifically binds 24. The method of claim 23, wherein 27. 24. The method of claim 23, wherein said factor specifically binds to CD40. 28. The factor is selected from a library of known reagents, or 24. The method of claim 23, wherein is modified from a known factor. 29. The factor is selected from the group consisting of protein, non-protein, and small molecule. 24. The method of claim 23, wherein the method is selected. 30. 30. The method of claim 29, wherein said protein is an antibody or a portion thereof. . 31. The antibody comprises a monoclonal antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, and a primate. 30. The method of claim 29, wherein the method is selected from the group consisting of categorized antibodies. 32. Wherein the monoclonal antibody has ATCC accession number HB 10916 32. The monoclonal antibody 5c8 produced by a lidoma. the method of. 33. The protein is a soluble extracellular region of the CD40 ligand, or Variants thereof, including recombinants, or portions thereof; Extracellular region, or a variant thereof containing conservative substitutions, or a portion thereof 30. The method of claim 29. 34. The soluble extracellular region of the CD40 ligand or CD40 is a monomer or an oligomer. 34. The method of claim 33, wherein the method is sesame. 35. The soluble extracellular region of CD40 or a portion thereof or CD40 ligand or The part is the extracellular region of CD40 or a part thereof or the CD40 ligand or a part thereof 34. The method of claim 33, further comprising an Fc region fused to the moiety. 36. The factor may be soluble in the extracellular region CD40 or a portion thereof in combination with a lead inhibitor. Selected by structure optimization of the lead inhibitor based on the three-dimensional structure of the coalescence Item 24. The method according to Item 23. 37. Said factors are selected by a screening method comprising the following steps: The method according to claim 23: (A) isolating a sample of kidney cells; (B) allowing the kidney cells to be activated in the sample that is CD40-bearing cells Culturing under conditions that: (C) subjecting the sample to a hybridoma having ATCC Accession No. HB 10916 Expresses proteins specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 produced ATCC accession number, which is effective for activating cells or CD40-bearing kidney cells Monoclonal antibody 5c produced by a hybridoma having HB 10916 Contacting with a protein specifically recognized by 8; (D) if the factor can inhibit the activation of the CD40-bearing cell, the CD40-bearing kidney cell Contacting the sample with an effective amount of an agent to inhibit the activation of (E) produced by a hybridoma having ATCC accession number HB 10916 Expressing a protein specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 Or produced by a hybridoma having ATCC Accession No.HB 10916 The protein specifically recognized by the monoclonal antibody 5c8 Determining whether to activate the CD40-bearing kidney cells in the presence.