ITFI20070275A1

ITFI20070275A1 - "dispositivo e metodo di analisi microbiologica di campioni biologici"

Info

Publication number: ITFI20070275A1
Application number: IT000275A
Authority: IT
Inventors: Francesco Cocola; Michele Meloni
Original assignee: Diesse Diagnostica Senese Spa
Priority date: 2007-12-07
Filing date: 2007-12-07
Publication date: 2009-06-08
Also published as: JP2011505803A; CN101889207A; US9193985B2; CL2008003629A1; BRPI0821148A2; RU2531047C2; ES2566002T3; EP2250501A2; CN106841648B; CA2707258A1; RU2010128072A; CN106841648A; WO2009072161A3; JP5732702B2; CA2707258C; AR069592A1; US20100255529A1; US20160068796A1; RU2013156824A; AU2008332708A1

Description

“DISPOSITIVO E METODO DI ANALISI MICROBIOLOGICA DI CAMPIONI BIOLOGICI”

DESCRIZIONE

Campo tecnico

La presente invenzione riguarda metodi e dispositivi per eseguire analisi su campioni biologici, e più in particolare analisi microbiologiche per verificare l'esistenza di microrganismi a concentrazioni batteriologicamente significative all'interno di campioni di biologici, come in particolare ma non esclusivamente campioni di liquidi biologici, quali urina e sangue.

Stato della tecnica

E' noto eseguire analisi microbiologiche su campioni biologici, in particolare liquidi biologici, per verificare la presenza di agenti patogeni, in generale microrganismi che possono avere un effetto dannoso sulla salute dell'uomo o dell'animale. Analisi di questo tipo vengono comunemente eseguite su urina, sangue, feci e tamponi. In generale non è sufficiente verificare l'esistenza di agenti patogeni nel campione, bensì è anche necessario classificarli, cioè verificare di quale tipo di microrganismo si tratti, al fine di accertarne la pericolosità per la salute e prescrivere le necessarie cure.

I metodi tradizionali di analisi microbiologica di campioni di urina si basano sulla cosiddetta semina, che prevede di distribuire il campione da analizzare su un terreno di coltura e di mantenervelo per un elevato numero di ore (tipicamente 12 o più), al fine di verificare se sul terreno si sviluppano colonie di microrganismi. In caso positivo questi microrganismi vengono esaminati per verificarne la natura.

Quando si devono analizzare più campioni, processo di semina è estremamente lungo e richiede una certa preparazione da parte dell'operatore che la esegue. Maneggiare un elevato numero di campioni comporta rischi biologici ed anche rischi legati allo scambio degli stessi e quindi errate attribuzioni dei risultati fra i vari pazienti.

In F. Gardini et al. "A head space gas chromatographic approach for thè monitoring of thè microbial celi activity and thè celi viability evaluation" Journal of Microbiological Methods, 29 (1997) 103-114 è descritto un approccio basato sulla gas-cromatografia per rilevare l'attività microbiologica all'interno di campioni da analizzare. La gascromatografia è volta ad individuare la concentrazione del biossido di carbonio (CO2) presente nell'atmosfera in cui si trova il campione e la cui presenza è dovuta al metabolismo dei microrganismi presenti nel campione stesso. Questo approccio richiede macchinari complessi e costosi ed anche tempi lunghi di analisi.

In US-A-4.971.900 sono descritti un metodo ed un apparecchio per il rilevamento di agenti biologicamente attivi in campioni di varia natura, ad esempio anche urina. Il metodo si basa sull'analisi del contenuto di biossido di carbonio nell'atmosfera sovrastante il campione posto sul terreno di coltura. L'analisi viene protratta per molte ore ed il suo scopo è quello di individuare l'eventuale agente patogeno attraverso l'andamento temporale dello sviluppo di biossido di carbonio. Questa metodica di analisi richiede tempi estremamente lunghi e risulta particolarmente poco affidabile in quanto l'individuazione del microrganismo è affidata al corretto tracciamento di una curva temporale di sviluppo del biossido di carbonio. Problemi possono sorgere soprattutto quando all'interno del campione sono presenti agenti patogeni di tipo diverso che si sviluppano con tempi tra loro diversi.

In US-A-6.709.857 è descritto un sistema per il rilevamento ottico della concentrazione di gas in una fiala contenente un campione da analizzare. La concentrazione del gas è rilevata tramite spettroscopia fototermica.

In US-A-5.155.019 è descritto un metodo per rilevare la presenza di un'attività biologica in un campione tramite l'utilizzo di una analisi agli infrarossi del campione sigillato in un contenitore, per individuare la presenza e la concentrazione di biossido di carbonio nell'atmosfera sovrastante il campione in coltura all'interno del contenitore. Anche in questo caso sono richiesti tempi di analisi particolarmente lunghi ed un’apparecchiatura complessa.

In US-A-5.217.876 è descritto un metodo per rilevare la presenza di microrganismi in un campione in un contenitore. Il metodo è basato sull'idea di rilevare otticamente un cambiamento nel colore di un mezzo di rilevamento nel contenitore in cui è coltivato il campione, cambiamento che è conseguente allo sviluppo di biossido di carbonio a causa della presenza di un'attività microbilogica all'interno del campione. Anche in questo caso sono necessari lunghi tempi di analisi e, come nel caso precedentemente menzionato, il riconoscimento dell'agente patogeno presente nel campione non è particolarmente sicuro in quanto basato sull'andamento temporale dello sviluppo di biossido di carbonio.

Un metodo analogo è descritto in US-A-5.094.955.

In US-A-5.482.842 è descritto un ulteriore metodo per il rilevamento di microrganismi con liquido biologico, in particolare un campione di sangue. L'analisi viene eseguita tramite un emettitore ed un ricevitore di radiazione infrarossa. Anche in questo caso viene individuata la presenza di biossido di carbonio che si sviluppa a causa della presenza di microrganismi patogeni. Il biossido di carbonio ha un coefficiente di assorbimento della radiazione infrarossa diverso rispetto a quello dell'atmosfera normalmente presente (in assenza di agenti patogeni) al di sopra del livello del campione all'interno della fiala.

In US-A-5.856.175 è descritto un dispositivo per il rilevamento di agenti patogeni in campioni di liquidi biologici analogo a quello descritto in US-A-5.094.955 ed in US-A-5.217.876.

In US-A-5.814.474 è descritto un dispositivo per il rilevamento diretto di microrganismi in contenitori di coltura. Il dispositivo descritto serve all'analisi di campioni di urina, saliva o sangue. In sostanza, il metodo qui descritto è basato sull'analisi dell'atmosfera contenuta nella fiala in cui è inserito il campione in coltura. Il gas che si trova all'interno della fiala viene fatto passare attraverso sensori di gas per rilevarne la composizione e quindi, in base al risultato dell'analisi del gas, individuare i microrganismi presenti nel campione. Questo metodo di analisi è particolarmente complesso, richiede sensori di elevato costo e tempi di analisi lunghi.

Sommario dell’invenzione

Secondo un aspetto l'invenzione prevede un metodo che semplifica ed accelera le operazioni di analisi di liquidi biologici, in particolare ma non esclusivamente urina. Secondo alcune forme di realizzazione il metodo della presente invenzione permette di discriminare in una pluralità di campioni quelli sicuramente positivi da quelle sicuramente negativi, cioè i campioni all'interno dei quali è presente almeno un agente patogeno che deve essere individuato in una seconda fase di analisi più accurata, dai campioni sicuramente privi di agenti patogeni per i quali è pertanto inutile eseguire ulteriori analisi.

In questo modo nella successiva fase di analisi dei campioni, che può essere eseguita con un processo di semina od altro procedimento di tipo noto, vengono trattati solo alcuni dei campioni originariamente considerati, mentre quelli sicuramente negativi non richiedono di essere ulteriormente processati.

Secondo una forma di realizzazione il metodo della presente invenzione comprende le seguenti fasi:

a) introdurre un campione biologico da analizzare in una provetta contenente un terreno di coltura;

b) incubare la provetta per un primo intervallo di tempo;

c) dopo il primo intervallo di tempo, analizzare l'atmosfera presente in detta provetta;

d) in base alla quantità di biossido di carbonio rilevato nell'atmosfera, determinare se il campione biologico contiene una carica batterica patologicamente rilevante o non contiene una carica batterica biologicamente rilevante.

In sostanza la presente invenzione si basa sull'idea di utilizzare la quantità di biossido di carbonio rilevata nell'atmosfera interna ad un campione non per individuare il tipo di agente patogeno eventualmente presente nel campione stesso, come nei metodi tradizionali, bensì come parametro per discriminare campioni sicuramente negativi da quelli sicuramente positivi. L'individuazione del tipo di agente patogeno presente nei campioni positivi viene demandata ad una successiva fase di analisi più accurata, ad esempio un processo di semina, od altri sistemi noti, ad esempio descritti nelle pubblicazioni brevettuali menzionate nella parte introduttiva della presente descrizione. Peraltro, attualmente gli unici metodi che consentono in modo affidabile di individuare il tipo di microrga nismi presenti nei campioni sono quelli basati sulla semina, caratterizzati dagli inconvenienti sopra descritti.

In una forma di realizzazione è possibile prevedere due valori di soglia, con i quali viene confrontato il contenuto in biossido di carbonio che si sviluppa dopo un tempo determinato all'interno di ciascun singolo contenitore di campione in coltivazione. In alcune forme di realizzazione si può prevedere di classificare come sicuramente positivi i campioni, il cui contenuto di biossido di carbonio dopo l'intervallo di tempo di incubazione predeterminato è superiore ad un primo valore limite e di classificare come sicuramente negativi i campioni che, viceversa, presentano un contenuto di biossido di carbonio dopo lo stesso tempo di incubazione inferiore ad un secondo valore limite inferiore. I campioni intermedi possono essere considerati incerti e, per maggiore affidabilità dell'analisi, possono essere sottoposti ad una analisi dettagliata per verificare la presenza ed il tipo di microrganismi.

Viceversa, secondo una variante di realizzazione i campioni incerti, anziché essere sottoposti ad una analisi dettagliata, ad esempio ad un processo di semina, possono essere sottoposti ad un secondo intervallo di incubazione, eventualmente rinnovando l'atmosfera presente nei singoli contenitori dei campioni. Questo rinnovamento dell'atmosfera consente di eliminare il biossido di carbonio presente ed aggiungere ossigeno per far progredire l'eventuale metabolismo dei microrganismi presenti nel campione. Dopo un secondo intervallo di tempo di incubazione i campioni incerti vengono nuovamente sottoposti ad una verifica del contenuto di biossido di carbonio nell'atmosfera del contenitore. Questo contenuto viene comparato con un valore di soglia che discrimina tra campioni sicuramente positivi (per i quali il contenuto di biossido di carbonio è superiore al valore di soglia) e campioni sicuramente negativi, per i quali il contenuto di biossido di carbonio è inferiore al valore di soglia.

Con questa seconda modalità esecutiva si possono ridurre ulteriormente i campioni che devono essere sottoposti al successivo processo di semina, in quanto i campioni che risultano incerti dalla prima fase di analisi vengono ulteriormente suddivisi tra campioni sicuramente positivi e campioni sicuramente negativi. Questi ultimi non vengono sottoposti alla semina od altro procedimento di analisi per determinare il tipo di agenti patogeni contenuti al loro interno.

Ulteriori vantaggiose forme di realizzazione e possibili caratteristiche del metodo secondo l'invenzione sono indicate nelle allegate rivendicazioni dipendenti e verranno descritte in maggiore dettaglio nel seguito con riferimento ad un esempio di realizzazione.

Secondo un diverso aspetto, l'invenzione riguarda un dispositivo di analisi microbiologiche su campioni di liquidi biologici, quali urine o simili, comprendente:

una zona di incubazione per contenitori contenenti detti campioni;

un analizzatore per analizzare l'atmosfera interna di detti contenitori; un sistema smistatore per smistare i contenitori in base al contenuto di biossido di carbonio rilevato da detto analizzatore.

In sostanza, in alcune forme di realizzazione il dispositivo prevede una zona di incubazione, in cui i campioni, contenuti nei singoli contenitori, vengono incubati per un periodo di tempo adeguato, ad esempio nell'ordine di 1 ora. I campioni vengono poi analizzati tramite l'analizzatore e smistati, cioè suddivisi tra campioni positivi e campioni negativi. In una forma di realizzazione perfezionata il sistema smistatore suddivide i campioni che sono stati sottoposti a questa prima incubazione fra campioni sicuramente positivi, campioni sicuramente negativi e campioni incerti. Il dispositivo può presentare una seconda zona di incubazione per i campioni incerti, nei quali essi permangono per un secondo intervallo di tempo di incubazione, eventualmente dopo aver rinnovato l'atrnosfera all'interno dei loro contenitori per i motivi sopra esposti. Non si esclude la possibilità che la seconda fase di incubazione avvenga nella zona di incubazione, in cui avviene la prima incubazione dei singoli campioni. L'apparecchiatura sarà adeguatamente controllata da un microprocessore in modo tale che essa possa mantenere in memoria informazioni relative alla posizione dei contenitori con i campioni che stanno eseguendo la prima fase di incubazione e di quelli che stanno eseguendo la seconda fase di incubazione in modo da evitare errori nell’esecuzione della prima e della seconda fase di incubazione sui vari campioni contenuti nell'apparecchiatura o dispositivo di analisi.

Ulteriori vantaggiose caratteristiche e forme di realizzazione del dispositivo secondo l'invenzione sono indicate nelle allegate rivendicazioni e verranno descritte in maggiore dettaglio con riferimento ad un esempio di realizzazione non limitativo dell'invenzione.

Secondo un ulteriore aspetto, forma oggetto dell'invenzione anche una provetta dedicata al metodo di analisi e all'apparecchiatura secondo l'invenzione. Più in particolare, secondo una forma di realizzazione la provetta della presente invenzione è una provetta sottovuoto contenente un terreno di coltura idoneo allo sviluppo di microrganismi eventualmente presenti nello specifico campione biologico a cui la provetta è destinata, nonché un elemento agitatore magnetico posto all'interno della provetta stessa.

Breve descrizione dei disegni

L'invenzione sarà meglio compresa seguendo la descrizione e l'unito disegno il quale mostra una pratica forma di realizzazione non limitativa dell'invenzione. Più in particolare, nel disegno mostrano: la

Fig.1 una vista in pianta di un dispositivo secondo l'invenzione; la Fig.2 una sezione secondo ll-ll di Fig.1 ; la

Fig.3 una sezione secondo lll-lll di Fig.1 ; le

Figg.4A e 4B un dettaglio dell'analizzatore e del sistema di cannule od aghi per il prelievo dell'atmosfera dai singoli contenitori di campioni; le Figg.5A a 5E la sequenza di manipolazione dei campioni positivi; le Figg.6A a 6F la sequenza di manipolazione dei campioni incerti; la Fig.7 una sezione longitudinale di un contenitore con un elemento agitatore magnetico ed un agitatore esterno; e la

Fig.8 un diagramma di flusso del metodo di analisi secondo l'invenzione.

Descrizione dettagliata di forme di attuazione dell'invenzione

Con riferimento alle Figg.1 a 3, un dispositivo secondo l'invenzione, complessivamente indicato con 1 , comprende una zona 3 di carico dei rack R di contenitori P, nella quale singoli rack di contenitori P contenenti il campione biologico da analizzare vengono inseriti e movimentati secondo la freccia f5 da un primo convogliatore 5.

Nell’esempio illustrato i contenitori sono costituiti da provette sotto vuoto, con un tappo di tenuta, ma si deve comprendere che possono essere utilizzati anche contenitori di altro tipo, chiusi a tenuta affinché si possa eventualmente rilevare l’accumulo di biossido di carbonio al Irò interno a seguito del metabolismo di eventuali microrganismi contenuti nel campione e che si sviluppano grazie ad un terreno di coltura contenuto nella provetta in cui è posto il campione.

Adiacentemente alla zona di caricamento 3 è prevista una zona di incubazione 7, dove è disposto un secondo convogliatore 9 che movimenta i rack R di provette P secondo la freccia f9.

Con 11 è genericamente indicata una zona di sosta per provette P, preferibilmente alloggiate in rack R, contenenti campioni incerti che devono essere sottoposti ad una seconda incubazione. Fra la zona di incubazione 7 e la zona di sosta 11 sono disposti un analizzatore complessivamente indicato con 13 ed uno smistatore complessivamente indicato con 15. L'analizzatore esegue in sequenza sulle singole provette P dei rack R provenienti dalla zona di incubazione 7 l'analisi dell'atmosfera contenuta nelle provette stesse. In base all'esito dell'analisi eseguita dall'analizzatore 13, lo smistatore 15 smista le provette suddividendole fra provette contenenti campioni positivi, cioè sui quali deve essere eseguita una analisi per individuare i microrganismi patogeni contenuti nel campione, e provette contenenti campioni negativi, cioè su cui non è necessaria una ulteriore analisi, poiché essi non contengono agenti patogeni significati, ed infine in provette contenenti campioni incerti che vengono portati nella zona di sosta 11 per subire una seconda fase di incubazione.

Con specifico riferimento alla zona di caricamento 3, in essa vengono inseriti attraverso una apertura chiusa da uno sportello 17 (Fig.2) singoli rack R contenenti provette P in cui sono disposti campioni da analizzare. Il convogliatore 5 trasferisce a passi i singoli rack R dalla posizione di inserimento nella zona di caricamento 3 verso un trasferitore 21, che trasferisce i singoli rack R di provette P dalla zona di caricamento 3 alla zona di incubazione 7. In alcune forme di realizzazione il trasferitore 21 comprende un organo flessibile continuo 23 rinviato attorno a pulegge 25, 27 una almeno delle quali è motorizzata. All'organo flessibile 23 sono fissati uno o più spintori 29 che spingono i singoli rack R contenenti le provette P per movimentarli secondo la freccia f21 in una direzione ortogonale rispetto alla direzione di avanzamento f5 del convogliatore 5. Il trasferitore può assumere anche configurazioni diverse, ad esempio può comprendere una barra filettata a cui è impegnato un cursore con uno spintore. La rotazione della barra in un verso e nell’altro provoca l’avanzamento ed il ritorno del cursore e relativo spintore.

Qualunque sia la configurazione del trasferitore 21, esso provvede a trasferire i singoli rack R contenenti le provette P di campioni da analizzare dalla zona di caricamento 3, che può essere mantenuta a bassa temperatura per inibire o rallentare il metabolismo degli eventuali microrganismi presenti nei campioni, nella zona di incubazione 7, preferibilmente mantenuta a temperatura controllata, ad esempio attorno ai 37°C.

Nella zona di incubazione 7 il convogliatore 9 movimenta a passi i singoli rack R con le provette P dalla posizione in cui questi vengono inseriti dal trasferitore 21 alla zona di incubazione 7, verso una zona di analisi e smistamento, in cui sono posizionati l'analizzatore 13 e lo smistatore 15.

Nella zona di analisi e smistamento è previsto un secondo trasferitore 31 , analogo al trasferitore 21, e comprendente ad esempio un organo flessibile 33 rinviato attorno a pulegge 35, 37. All’organo flessibile 33 sono vincolati uno o più spintori 39 che spingono con un movimento controllato a passi i singoli rack R verso uno smistatore. Il trasferitore 31 è controllato da una unità elettronica programmabile di controllo, non mostrata, così da far avanzare a passi secondo la freccia f31 ciascun rack R sfilandolo dal convogliatore 9 e passando individualmente le singole provette P contenute nel rack R attraverso l'analizzatore 13. In questo modo ogni provetta può essere analizzata aspirando un campione dell'atmosfera in essa contenuta e determinando il contenuto di biossido di carbonio che si è sviluppato nella provetta per effetto del metabolismo di eventuali microrganismi patogeni che possono essere contenuti nel campione posto in coltura nelle provette P durante il periodo di incubazione nella zona di incubazione 7.

L'incubazione è di durata modesta rispetto ai tempi di incubazione utilizzati nei sistemi di analisi tradizionali, ed è protratta ad esempio all'incirca per un'ora, il convogliatore 9 essendo programmato per muoversi ad una velocità tale per cui il tempo di incubazione è sostanzialmente pari al tempo necessario per un singolo rack a passare dalla posizione in cui si trova il trasferitore 21 alla posizione in cui si trova il trasferitore 31.

Come mostrato in particolare anche in Fig.4 l'analizzatore in questo esempio di realizzazione è doppio e comprende un primo sensore 41 A ed un secondo sensore 41 B realizzati per determinare con sufficiente precisione il contenuto di biossido di carbonio all'interno delle singole provette P. Con questa doppia disposizione è possibile raddoppiare la velocità di analisi del dispositivo. Ciascun sensore 41 A, 41 B può essere realizzato in tecnica NDIR, ad esempio come descritto in US-A-6.255.653, il cui contenuto è incorporato nella presente descrizione. Ciascun sensore è collegato tramite un rispettivo condotto flessibile 43A, 43B ad un ago pervio 45, uno dei quali è visibile in Fig.4. I due aghi 45 sono portati da una slitta 47 scorrevole verticalmente su colonne di guida 49 secondo un movimento f47 impartito da un attuatore non mostrato. Il movimento di sollevamento ed abbassamento degli aghi 45 solidali alla slitta 47 serve per far penetrare i due aghi 45 nelle provette P che si vengono a trovare di volta in volta al di sotto della slitta 47. L'abbassamento degli aghi 45 è controllato in modo tale che gli aghi rimangano nella zona della singola provetta P in cui si trova l'atmosfera gassosa, indicata con G in Fig.4, senza toccare il campione biologico C, ad esempio un campione di urina, sangue od altro liquido biologico, raccolto nella parte più bassa della provetta P. Il movimento di abbassamento degli aghi 45 provoca la perforazione dei tappi T delle provette P, cosicché una parte del gas sovrastante il campione C può fluire attraverso gli aghi pervi 45, i condotti flessibili 43A, 43B, verso i sensori 41 A, 41 B dell'analizzatore 13. Le Figg.4A e 4B mostrano il movimento di penetrazione degli aghi pervi 45 attraverso i tappi T delle provette P per portarsi (Fig.4B) nella posizione di aspirazione del gas. Il gas trovantesi nella singola provetta P può fluire attraverso il rispettivo condotto 43A, 43B verso il sensore 41 A, 41 B per effetto della sovrappressione che si genera all'interno della provetta a causa dell'accumulo di biossido di carbonio sviluppato dal metabolismo degli eventuali microrganismi presenti nel campione C.

I sensori 41 A, 41 B sono in grado di individuare la quantità di biossido di carbonio presente nelle singole provette analizzate con precisione sufficiente agli scopi di seguito descritti. Non è necessaria una precisione elevata e neppure un rilevamento protratto o ripetuto nel tempo, come accade nei sistemi tradizionali in cui l’andamento della concentrazione di biossido di carbonio è preso come parametro significativo per determinare il tipo di microrganismo presente nel campione. Al contrario, secondo la presente invenzione ciò che rileva è sostanzialmente la presenza di biossido di carbonio come indice del metabolism di microrganismi presenti nel campione, la cui natura verrà eventualmente determinata in una fase successiva di analisi qualitativa eseguita sui campioni positivi.

Lo smistatone 15 esegue sulle singole provette P contenuti nei rack R operazioni che verranno descritte nel seguito con riferimento specifico alle Figg.5 e 6, in funzione della quantità di biossido di carbonio rilevata dai singoli sensori 41 A, 41 B.

Lo smistatone 15 provvede a prelevare le singole provette P dal rack R che viene fatto avanzare a passi dal trasferitore 31 per smistarli nella zona di sosta 11, oppure in un sottostante cassetto 51 (Fig.2), in cui si accumulano i campioni positivi, oppure ancora per lasciare i campioni negativi nel rack R che viene poi prelevato dall'operatore e svuotato delle provette P o semplicemente espulso dalla macchina analizzatrice per una successiva manipolazione da parte deN'operatore.

Più in particolare, nella forma di realizzazione illustrata lo smistatone 15 comprende una slitta 53 guidata su guide sostanzialmente verticali 55 e dotata di un movimento secondo la doppia freccia f53 (vedasi in particolare Fig.3). Sulla slitta 53 è mobile, lungo guide 57, un cursore 59 che porta una pinza 61 dotata di un elemento di apertura e chiusura comandato da un attuatore 63 portato dal cursore 59. Il cursore 59 è dotato di un movimento secondo la doppia freccia f59 (Fig.3) lungo lo sviluppo longitudinale della slitta 53. Con questo doppio movimento f59 ed f53 la pinza 61 può prelevare singole provette P dal rack R che viene spinto a passi dal trasferitore 31 per scaricarle attraverso un pozzetto 65 nel sottostante vano 51 o per inserirle nell'uno o nell'altro dei due rack R che si trovano nella zona di sosta 11.

Si deve comprendere che il numero dei rack R nella zona di sosta 11 può essere diverso rispetto a quello mostrato. Ad esempio può essere previsto un solo rack R oppure più di due rack R, nel qual caso ovviamente la corsa della pinza 61 con il suo cursore 59 nella direzione f59 sarà opportunamente allungata per raggiungere tutti i rack R disposti in parallelo nella zona di sosta 11.

Nelle Figg.5A - 5E è mostrato il movimento che esegue la pinza 61 per scaricare una provetta P<+>contenente un campione positivo (cioè nel quale si trova una carica batteria tale da richiedere una ulteriore analisi, ad esempio tramite una semina, allo scopo di individuare il tipo di microrganismi presenti), attraverso il pozzetto 65 nel vano 51 sottostante. In Fig.5A la pinza aperta viene abbassata verso la provetta P<+>che si trova al di sopra della pinza stessa e che è stata portata in tale posizione tramite un movimento secondo f31 del rispettivo rack ad opera del trasferitore 31. In Fig.5B la pinza si è abbassata e si è chiusa per impegnare la provetta P<+>. In Fig.5C la provetta è stata sollevata estraendo la provetta P<+>dal rack R cosicché con un movimento secondo f59 la provetta stessa viene portata al di sopra del pozzetto 65 (Fig.5B) dove la pinza 61 si apre per far cascare la provetta P<+>nel pozzetto stesso (Fig.5E). Attraverso il pozzetto la provetta P<+>raggiunge la zona di raccolta, da cui l'operatore preleverà tutte le provette che devono essere sottoposte ad una analisi secondo una metodica nota, per individuare i tipi di microrganismi presenti nei campioni contenuti in tali provette.

Quando il campione che si trova nella provetta P che deve essere prelevata dalla pinza 61 è negativo, cioè quando dopo l'incubazione di circa 1 ora nella zona di incubazione 7 l'analizzatore 41 A o 41 B non ha rilevato un significativo contenuto di biossido di carbonio nell'atmosfera prelevata dalla zona superiore della provetta P, tale provetta rimane nel rack R e quindi passa, senza essere manipolata dalla pinza 61 , oltre la posizione in cui si trova il manipolatore 15.

I campioni per i quali è stato rilevato un contenuto nell'atmosfera interna alla provetta di biossido di carbonio superiore ad un valore minimo (al di sotto del quale la provetta è considerata negativa), ma inferiore ad un valore massimo (oltre il quale la provetta viene considerata positiva), vengono prelevati dalla pinza 61 e manipolati secondo il ciclo schematicamente illustrato nelle Figg. BA-SE. In Fig.6A la pinza aperta è pronta per abbassarsi sulla provetta indicata con P<?>, che deve essere sottoposta ad ulteriore incubazione. In Fig.6B la pinza 61 si è abbassata e chiusa sulla provetta P?. La pinza 61 provvede poi ad estrarre secondo la freccia f53 la provetta P<?>ed a trasferirla verso uno dei rack R che si trovano nella zona di sosta 11 con un movimento che scavalca il pozzetto di scarico 65 come mostrato nelle Figg.6C e 6D. Raggiunta questa posizione, la pinza 61 si abbassa inserendo la provetta incerta P<?>nel rack R della zona di sosta 11 (Fig.6E), quindi si apre e si solleva lasciando la provetta nel rack per poi riportarsi nella posizione di presa di una nuova provetta P contenuta nel rack R che viene fatto avanzare a passi dal trasferitore 31 (Fig.6F).

In questo modo nei rack R della zona di sosta 11 si accumulano via via i singoli campioni incerti contenuti nelle provette P<?>, il cui contenuto in biossido di carbonio è compreso tra due valori di sosta minimo e massimo per i quali campioni è necessaria una ulteriore incubazione.

In una variante di realizzazione, si potrebbe prevedere di sottoporre tutti i campioni incerti ad una ulteriore analisi per individuare il tipo di microrganismi in essi contenuti, rinunciando quindi a prevedere la zona di sosta 11 , oppure lasciandola inattiva e smistando le provette semplicemente suddividendole fra positive e negative, scaricando perciò quelli che sono campioni incerti secondo la procedura sopra descritta direttamente nel pozzetto 65 insieme ai campioni positivi. Non si esclude la possibilità di non prevedere il pozzetto di scarico e di trasferire i campioni positivi ed incerti nella zona 11 da cui essi vengono prelevati a mano per un processo di semina od altra procedura di individuazione dei microrganismi patogeni al loro interno, mentre sui rack R originari provenienti dalla prima zona di incubazione rimangono le provette con i campioni sicuramente negativi.

Secondo ulteriori forme di realizzazione si possono porre nel pozzetto di scarico i campioni negativi, così che sui rack R provenienti dalla zona di incubazione non rimangono provette. In una ulteriore variante di realizzazione, i campioni sicuramente negativi possono essere trasferiti nella zona di sosta 11, i campioni sicuramente positivi possono essere scaricati attraverso il pozzetto nella zona sottostante ed i campioni incerti possono rimanere nel rack per essere reinseriti nella zona di caricamento.

Ciò che rileva, in sostanza, è il fatto che viene eseguito uno smistamento almeno tra provette positive e provette negative e preferibilmente tra provette positive, provette negative e provette incerte, queste ultime essendo destinate ad una seconda fase di incubazione.

Secondo alcune forme di realizzazione nella zona di sosta 11 possono essere previsti mezzi di incubazione affinché le provette incerte P<?>siano mantenute in condizioni di incubazione a temperatura controllata, ad esempio 37°C circa, direttamente nella zona di sosta 11 e da qui manipolate nel modo sopra descritto prevedendo ad esempio un secondo analizzatore nella zona di sosta 11 , oppure trasferendo i singoli rack dalla zona di sosta o seconda incubazione 11 alla zona in cui sono attivi i sensori 41 A, 41 B.

Secondo la forma di realizzazione preferita, tuttavia, i rack R che si sono riempiti nella zona di sosta 11 vengono prelevati dall'operatore che provvede a reinserirli nella zona di caricamento 3 affinché essi eseguono un nuovo ciclo di incubazione nella zona di incubazione 7.

Per consentire ai campioni incerti contenuti nelle provette P (P<?>) della zona di sosta 11 di far progredire il metabolismo dei microrganismi ivi presenti, secondo alcune forme di realizzazione nella zona di sosta 11 può essere previsto un dispositivo, genericamente indicato con 71, che provvedere ad iniettare ossigeno o comunque un gas contenente ossigeno nelle singole provette P che si trovano nella zona di sosta 11. Il dispositivo 71 può comprendere ad esempio una slitta 73 verticalmente mobile lungo colonne di guida 74 e portante una coppia di aghi 75A, 75B pervi che possono perforare le provette P che si trovano nella zona di sosta 11 ed insufflare al loro interno ossigeno od aria ambiente, alimentato ad esempio da un compressore collegato agli aghi 75A, 75B tramite condotti flessibili. L'avanzamento dei rack R nella zona di sosta 11 per consentire il loro riempimento con le provette incerte P<?>e la loro perforazione passando attraverso il dispositivo 71 è ottenuto ad esempio con due organi trasferitori 81 A, 81 B di conformazione sostanzialmente equivalente a quella dei trasferitori 21 , 31 e non descritti in maggiore dettaglio.

In questo modo i singoli rack R vengono gradualmente riempiti con le provette incerte P<?>passando sotto la slitta 53 e portano ciascuna provetta P sotto gli aghi 75A, 75B per far ricevere alle provette stesse ossigeno che possa far progredire il metabolismo dei microrganismi e quindi spingono i rack R fuori dalla zona di sosta 11 per consentirne la reintroduzione nella zona di caricamento 3.

Il dispositivo sarà provvisto di una interfaccia utente che consente di comunicare all'unità centrale della macchina quali rack R inseriti nella zona di caricamento 3 hanno subito già una prima fase di incubazione, e quindi contengono provette incerte, e quali invece sono caricati con provette nuove su cui deve essere eseguita la prima incubazione nella zona 7.

In questo modo la macchina, essendo dotata di encoder associati a tutti gli attuatori di movimentazione dei rack attraverso le varie zone della macchina, può sapere in ogni istante quale rack contiene provette già sottoposte ad una prima incubazione ed attualmente in fase di seconda incubazione e quali invece contengono provette che devono subire una prima incubazione, l'analisi ed una eventuale seconda incubazione qualora le provette risultassero incerte. In alternativa, anziché inseguire le singole provette con un controllo dei movimenti di avanzamento, si può prevedere un sistema di lettura di codici a barre o altri codici associati alle provette, per riconoscere ciascuna provetta nei punti essenziali del loro percorso attraverso la macchina.

Le provette contenenti campioni incerti (provette P<?>) provenienti dalla zona di sosta 11 , una volta che hanno eseguito una seconda fase di incubazione nella zona di incubazione 7 (o, in una variante di realizzazione, direttamente nella zona di sosta 11), vengono sottoposti ad una nuova analisi tramite l'analizzatore 13. Il contenuto di biossido di carbonio rilevato in questa seconda analisi viene confrontato preferibilmente con un singolo valore di soglia. I campioni che contengono una quantità di biossido di carbonio superiore al valore di soglia vengono considerati positivi e quindi scaricati tramite lo smistatore 15 nel pozzetto 65, mentre i campioni che contengono una quantità di biossido di carbonio inferiore a tale soglia vengono considerati negativi e rimangono nel rack che viene gradualmente espulso dalla zona 7 per effetto del trasferitore 31. La soglia che viene utilizzata per effettuare la discriminazione a seguito della seconda incubazione può essere pari alla soglia minima od alla soglia massima utilizzata per lo smistamento e la discriminazione delle provette che hanno subito una prima fase di incubazione.

L'intero procedimento è sommariamente schematizzato nel diagramma di flusso delle Figg.8A, 8B. Nel diagramma di flusso viene indicato come la singola provetta viene riempita con il campione da analizzare e quindi inserita nel dispositivo. Successivamente essa viene sottoposta ad una incubazione per un periodo ΔΤ e, terminata l'incubazione, viene eseguito il prelievo dell'atmosfera dalla provetta stessa. La quantità di biossido di carbonio rilevata viene confrontata con una prima soglia Smaxed una seconda soglia Smm·Se il contenuto di biossido di carbonio è superiore alla soglia Smaxil campione viene considerato positivo e scaricato, tramite lo smistatore 15, attraverso il pozzetto 65 nel vano inferiore 51. Se la quantità di biossido di carbonio è inferiore alla soglia Smmil campione viene considerato negativo e trattenuto nel rack per essere poi espulso dalla macchina. Se non si verifica né l'una né l'altra delle due condizioni, e quindi il contenuto di biossido di carbonio è compreso tra Smaxe Smm, nella provetta viene aggiunto ossigeno per consentire la prosecuzione del metabolismo e viene eseguita una seconda incubazione per un intervallo di tempo che in questo esempio è protratto per un tempo ΔΤ uguale a quello della prima incubazione, benché ciò non sia strettamente necessario, potendosi prevedere una durata diversa per le due fasi di incubazione. Terminata la seconda incubazione viene eseguito il prelievo dell'atmosfera dalla provetta e il contenuto di biossido di carbonio viene confrontato con una singola soglia che nell'esempio illustrato è la soglia Smax, ma che potrebbe essere pari alla soglia Sminoppure una soglia diversa dall soglie Smaxed Smin. Se il campione ha sviluppato una quantità di biossido di carbonio superiore a Smaxverrà considerato positivo altrimenti verrà considerato negativo.

Per ottimizzare l'incubazione dei campioni, secondo alcune forme di realizzazione nella zona di incubazione 7 sono previsti organi agitatori posizionati in modo opportuno lungo il percorso di avanzamento dei rack. Questi agitatori non sono mostrati nelle Figg.1 a 6 per semplicità di disegno, ma uno di essi è schematicamente rappresentato in Fig.7 al di sotto di una singola provetta P. L'agitatore di Fig.7 è genericamente indicato con 100. Esso comprende un attuatore 101, ad esempio un motorino elettrico, che porta in rotazione un elemento magnetico 103, ad esempio una barretta magnetica inserita all'interno di un disco calettato sull'alberino del motore 101. L'elemento magnetico 103 funziona da trascinatore magnetico per un elemento agitatore 107 contenuto nella provetta P ed annegato nel campione C che si trova nella provetta P medesima. L'accoppiamento magnetico tra l'elemento 103 e l'elemento 107 provoca, per effetto della rotazione del motorino 101, la rotazione dell'elemento 107. Quest'ultimo potrà essere opportunamente sagomato, ad esempio con delle alettature, per creare un movimento eventualmente ascensionale del campione C, presente nella provetta P per ottimizzarne le condizioni di incubazione all'interno della provetta P nella quale è anche contenuto il terreno di coltura.

In Fig.7 è anche schematicamente indicata un'altra possibile caratteristica del dispositivo secondo l'invenzione, costituita da un sensore genericamente indicato con 111 ed atto a rilevare il livello del campione C all'interno della provetta P. Il sensore 111 può essere un sensore capacitivo o di qualunque altro genere. Ad esempio esso può comprendere una coppia emettitore/ricevitore per individuare il livello del campione C per trasparenza. Il sensore 111 può essere corredato di un movimento verticale parallelo all'asse della provetta P per individuare il livello del campione C nella provetta. Il sensore 111 può essere disposto in qualunque punto idoneo all'interno del dispositivo 1 ad esempio nella zona lasciata libera fra la zona di caricamento 3 e la zona di incubazione 7 come schematicamente indicato con 111 in Fig.1 , così da determinare il livello del campione in ogni singola provetta durante il trasferimento delle provette stesse contenute nei rack R ad opera del trasferitore 21 dalla zona di caricamento 3 alla zona di incubazione 7.

La determinazione del livello del campione C in ciascuna provetta P consente di evitare l'accidentale immersione della punta degli aghi o cannule 45 all'interno del campione biologico, circostanza che danneggerebbe i sensori 41 A, 41 B. L'unità centrale di controllo della macchina può memorizzare il livello di campione C rilevato in ciascuna provetta P per far sì che il movimento di abbassamento della slitta 47 che porta gli aghi 45 sia sempre sufficiente a perforare i tappi T delle provette P, ma tale da non portare gli aghi a contatto con il campione.

Con il metodo e l'apparecchiatura sin qui descritti è possibile smistare un elevato numero di campioni contenuti in provette P dopo un primo periodo (ad esempio circa un'ora) di incubazione suddividendoli tra campioni sicuramente positivi, campioni sicuramente negativi ed eventualmente campioni incerti. Questi ultimi possono essere considerati positivi per sicurezza e per semplicità, oppure possono essere sottoposti ad un secondo ciclo di incubazione e quindi ad una seconda discriminazione tra campioni positivi e campioni negativi secondo metodica schematicamente riassunta nel diagramma di flusso delle Figg.8A, 8B. In definitiva, qualunque sia la metodica scelta, dopo un periodo di al massimo due ore è possibile ottenere da un elevato numero di campioni un primo risultato certo sui campioni sicuramente negativi ed una sostanziale riduzione dei campioni che devono essere sottoposti ad una più lunga e accurata analisi, ad esempio tramite semina, per individuare quali microrganismi si trovano all'interno dei campioni classificati come positivi. Solo questi campioni saranno quindi sottoposti a semina od altra analisi con sostanziale risparmio dei costi e di rischi.

Questo consente di ottenere sostanziali vantaggi rispetto a tutti i metodi di analisi tradizionali in particolare quelli descritti nella letteratura brevettuale citata nella parte introduttiva della presente descrizione.

Per automatizzare le analisi eseguite dal dispositivo sin qui descritto è possibile prevedere che le singole provette P siano marcate in fase di produzione con un codice univoco. Ciascuna provetta verrà poi corredata di un’etichetta, una fascetta o simile, recante un codice ad esempio sotto forma di codice a barre, bi-univocamente correlato ai dati del paziente a cui è stato prelevato il campione C contenuto nella provetta stessa. L'apparecchiatura 1 può essere corredata di un lettere di codice a barre o simili che legge il codice univoco applicato alla provetta in fase di produzione ed il codice relativo al paziente a cui appartiene il campione contenuto nella provetta stessa. Questi due codici vengono abbinati dall'unità centrale dell'apparecchio 1 cosicché il codice relativo al paziente, applicato ad esempio tramite una fascetta attorno al tappo della provetta P, può essere successivamente rimosso per agevolare le operazioni di analisi sui campioni ritenuti positivi. Queste analisi, ad esempio la semina, richiedono infatti la rottura della provetta e quindi il rischio di danneggiamento del codice a barre identificativo del paziente applicato sul tappo. L'abbinamento tra codice della provetta e codice del paziente, eseguito attraverso il lettore associato al dispositivo 1 , evita il rischio della perdita dei dati del paziente a cui appartiene il campione all'atto della rottura della provetta per eseguire la semina.

Le successive operazioni di analisi vengono eseguita in automatico memorizzando il codice identificativo della provetta che abbinato in modo biunivoco il codice del paziente e associando il risultato delle analisi al codice della provetta. Eseguite le analisi e ottenuto il risultato questi possono essere nuovamente abbinati ai dati del paziente tramite semplice recupero dei dati attraverso il codice identificativo del paziente ed il codice identificativo della provetta tra loro abbinati.

E' inteso che il disegno non mostra che una esemplificazione data solo quale dimostrazione pratica dell'invenzione, la quale può variare nelle forme e disposizioni senza peraltro uscire dal'ambito del concetto alla base dell'invenzione. L'eventuale presenza di numeri di riferimento nelle rivendicazioni accluse ha lo scopo di facilitare la lettura delle rivendicazioni con riferimento alla descrizione ed al disegno, e non limita l'ambito della protezione rappresentata dalle rivendicazioni.

Claims

RIVENDICAZIONI 1. Un metodo di analisi microbiologica di campioni biologici, comprendente le fasi di: a) introdurre un campione biologico da analizzare in un contenitore contenente un terreno di coltura; b) incubare il contenitore per un primo intervallo di tempo; c) dopo detto primo intervallo di tempo analizzare l'atmosfera presente in detto contenitore; d) in base alla quantità di biossido di carbonio rilevata in detta atmosfera, determinare se detto campione biologico contiene una carica batterica patologicamente rilevante o non contiene una carica batterica biologicamente rilevante.
2. Metodo come da rivendicazione 1, in cui, se il campione biologico contiene una carica batterica patologicamente rilevante, esso viene classificato positivo e sottoposto ad una analisi per determinare i microrganismi presenti.
3. Metodo come da rivendicazione 1 o 2, in cui se il campione biologico non contiene una carica batterica patologicamente rilevante, detto campione biologico viene classificato come negativo e non viene sottoposto ad una analisi per determinare i microrganismi presenti.
4. Metodo come da rivendicazione 1 , 2 o 3, comprendente le fasi di: dopo detto primo intervallo di tempo, confrontare l'atmosfera in detto contenitore con un valore massimo ed un valore minimo di concentrazione di biossido di carbonio; se l'atmosfera contiene una quantità di biossido di carbonio superiore al valore massimo, il campione viene classificato positivo e sottoposto ad una analisi per determinare i microrganismi presenti; se l'atmosfera contiene una quantità di biossido di carbonio inferiore al valore minimo, il campione viene classificato negativo e non viene sottoposto ad una analisi per determinare i microrganismi presenti; - se l'atmosfera contiene una quantità di biossido di carbonio compresa tra il valore massimo ed il valore minimo, detto campione biologico viene tenuto in incubazione per un secondo intervallo di tempo.
5. Metodo come da rivendicazione 4, in cui prima di detto secondo intervallo di tempo di incubazione, in detto contenitore viene immesso ossigeno.
6. Metodo come da rivendicazione 4 o 5, in cui al termine di detto secondo intervallo di tempo di incubazione, l'atmosfera in detto contenitore viene nuovamente analizzata e il campione biologico viene classificato positivo o negativo in base al contenuto di biossido di carbonio rilevato in detta atmosfera.
7. Metodo come da rivendicazione 6, in cui il campione biologico analizzato dopo il secondo intervallo di tempo di incubazione è classificato positivo o negativo a seconda che il contenuto di biossido di carbonio nell'atmosfera del contenitore sia superiore od inferire ad un valore di soglia.
8. Metodo come da rivendicazione 6 o 7, in cui se il campione biologico è classificato positivo dopo il secondo intervallo di incubazione viene sottoposto ad una analisi per determinare i microrganismi presenti, mentre se è classificato negativo su di esso non viene eseguita una analisi per determinare i microrganismi presenti.
9. Metodo come da una o più delle rivendicazioni precedenti, in cui durante detto primo intervallo di incubazione il campione biologico viene tenuto in condizioni termostatate.
10. Metodo come da una o più delle rivendicazioni precedenti, in cui durante detto primo intervallo di incubazione il campione biologico viene sottoposto ad agitazione.
11. Metodo come da una o più delle rivendicazioni precedenti, in cui durante detto secondo intervallo di incubazione il campione biologico viene tenuto in condizioni termostatate.
12. Metodo come da una o più delle rivendicazioni precedenti, in cui durante detto secondo intervallo di incubazione il campione biologico viene sottoposto ad agitazione.
13. Metodo come da una o più delle rivendicazioni precedenti, in cui viene analizzata una pluralità di campioni biologici in sequenza, e dopo una incubazione per detto primo intervallo di tempo l'atmosfera del contenitore di ciascun campione biologico viene analizzata e ciascun campione biologico viene inserito in uno dei seguenti gruppi in base al contenuto di biossido di carbonio rilevato in detta atmosfera: campioni positivi, che vengono sottoposti ad una successiva analisi per l'individuazione dei microrganismi presenti nel campione biologico; campioni negativi, su cui non viene eseguita l’analisi per l'individuazione dei microrganismi presenti; - campioni incerti, che vengono sottoposti ad una seconda incubazione per un secondo intervallo di tempo.
14. Metodo come da rivendicazione 13, in cui i campioni incerti, dopo detta seconda incubazione, vengono sequenzialmente classificati in uno dei seguenti gruppi in base al contenuto di biossido di carbonio rilevato nell'atmosfera del rispettivo contenitore : campioni positivi, che vengono sottoposti ad una successiva analisi per l'individuazione dei microrganismi presenti nel campione biologico; campioni negativi, su cui non viene eseguita detta analisi.
15. Un dispositivo per analisi microbiologiche su campioni di liquidi biologici comprendente: una zona di incubazione per contenitori contenenti detti campioni; un analizzatore per analizzare l'atmosfera interna di detti contenitori; un sistema smistatore per smistare i contenitori in base al contenuto di biossido di carbonio rilevato da detto analizzatore.
16. Dispositivo come da rivendicazione 15, comprendente una zona di sosta in cui vengono disposti i campioni che richiedono un secondo periodo di incubazione.
17. Dispositivo come da rivendicazione 15 o 16, in cui detto sistema smistatore smista i contenitori provenienti da detta zona di incubazione, per suddividere detti contenitori in: contenitori positivi destinati ad una analisi per l'individuazione dei microrganismi presenti nei rispettivi campioni; contenitori negativi, su cui non è necessario eseguire analisi per l'individuazione di microrganismi; - contenitori incerti che vengono sottoposti ad una seconda incubazione.
18. Dispositivo come da rivendicazione 16 e 17, in cui detto sistema smistatore trasferisce i contenitori positivi in una zona di prelievo di contenitori positivi e i contenitori incerti in detta seconda zona di sosta.
19. Dispositivo come da rivendicazione 15, 16, 17 o 18, in cui detto sisterna smistatore comprende un organo trasferitore per detti contenitori.
20. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 19, in cui detto analizzatore comprende un sensore di biossido di carbonio in tecnologia N-DIR.
21. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 20, in cui detto analizzatore comprende un condotto aspirante terminante con un ago pervio per aspirare gas dall'interno di detti contenitori, detto ago pervio e detti contenitori essendo dotati di un movimento relativo di penetrazione per perforare detti contenitori tramite detto ago.
22. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 21, in cui detto analizzatore comprende due sensori di biossido di carbonio e due condotti aspiranti terminanti con rispettivi aghi pervi per aspirare gas dall'interno di due contenitori simultaneamente, detti aghi pervi e detti contenitori essendo dotati di un movimento relativo di penetrazione degli aghi in detti contenitori.
23. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 22, in cui almeno detta zona di incubazione è mantenuta a temperatura controllata.
24. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 23, in cui in detta zona di incubazione sono previsti organi agitatori per agitare i campioni in detti contenitori.
25. Dispositivo come da rivendicazione 24, in cui detti organi agitatori sono agitatori magnetici.
26. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 25, comprendente una zona di caricamento di campioni da analizzare.
27. Dispositivo come da rivendicazione 28, in cui detta zona di caricamento è refrigerata.
28. Dispositivo come da rivendicazione 26 o 27, comprendente un convogliatore in detta zona di caricamento, per convogliare detti contenitori lungo la zona di caricamento.
29. Dispositivo come da rivendicazione 28, in cui detto convogliatore nella zona di caricamento è configurato per ricevere e convogliare rack di contenitori.
30. Dispositivo come da rivendicazione 28 o 29, comprendente un trasferitore per trasferire contenitori dalla zona di caricamento alla zona di incubazione.
31. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 30, in cui in detta zona di incubazione è disposto un convogliatore per movimentare contenitori da una posizione di inizio incubazione ad una posizione di fine incubazione.
32. Dispositivo come da rivendicazioni 30 e 31 , in cui detto trasferitore è disposto adiacentemente alla posizione di inizio incubazione.
33. Dispositivo come da rivendicazione 31 o 32, in cui adiacentemente a detta posizione di fine incubazione è previsto un estrattore che estrae i contenitori dalla prima zona di incubazione e li movimenta verso detto analizzatore.
34. Dispositivo come da rivendicazione 31 , 32 o 33, in cui detto convogliatore della zona di incubazione è disposto e realizzato per convogliare rack di contenitori.
35. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 34, in cui al di sotto della quota a cui si trova la zona di incubazione è posizionata una zona di raccolta di contenitori di campioni positivi.
36. Dispositivo come da rivendicazione 35, comprendente un pozzetto di trasferimento per gravità dei campioni positivi della zona di incubazione a detta zona di raccolta.
37. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 36, comprendente un convogliatore in detta zona di sosta per movimentare detti contenitori lungo detta zona di sosta.
38. Dispositivo come da rivendicazione 37, in cui detto convogliatore nella zona di sosta è configurato per ricevere e convogliare rack di contenitori.
39. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 38, comprendente almeno una cannula per iniettare un gas o miscela di gas contenente ossigeno in detti contenitori.
40. Dispositivo come da rivendicazione 21 o 22, comprendente un misuratore di livello del campione biologico contenuto nei contenitori, associato a detto o detti condotti aspiranti per evitare che l'ago o gli aghi pervi raggiungano il livello del campione nei contenitori.
41. Dispositivo come da una o più delle rivendicazioni 15 a 40, comprendente una zona di seconda incubazione, in cui detto smistatore inserisce i campioni che devono subire una seconda incubazione.
42. Un contenitore, in specie una provetta sotto vuoto per analisi biologiche, comprendente un terreno di coltura ed un agitatore magnetico al suo interno.