HU204575B - Process for producing 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dion - Google Patents

Description

A találmány tárgya továbbfejlesztett eljárás l-metill,4-androsztadién-3,17-dion (Atamesten néven forgalmazott gyógyszerkészítményünk hatóanyaga) mikrobiológiai úton történő előállítására Metenolonból.

A technika állása szerint ezt a vegyületet kétlépéses 5 eljárással, kémiai úton állítják elő Metenolonból (17βhidroxi-l-metil-5a-androszt-l-én-3-on).

A kiindulási anyagot szelén-dioxiddal oxidálják (1 174 778 sz. NSZK-beli szabadalmi leírás, C. A. 61, 12059a, 1964) és a kapott I7P-hidroxi-l-metil-l,4- 10 androsztadién-3-ont krőmsavval oxidálják (3 322 285 sz. NSZK-beli szabadalmi leírás). Az elért összkitermelés az elméleti 15%-a.

A találmány szerinti eljárás ezzel szemben egylépéses és 60% feletti hozamot eredményez. Ismeretesek 15 ugyan mikrobiológiai eljárások az 1,4-androsztadién3,17-dion előállítására (Steroids II, (3) 401-413, 1968), az ezek keretében alkalmazott mikroorganizmusok azonban a találmány szerinti eljárásban nem alkalmazhatók, tekintettel arra, hogy egyidejűleg inhibito- 20 rok adagolása válna szükségessé, ami az eljárás termékének elkülönítését megnehezítené.

A találmány szerinti eljárást olyan feltételek között hajtjuk végre, amelyeket szubsztrátumok mikroorganizmus-tenyészetekkel végzett mikrobiológiai dehid- 25 rogénezésénél alkalmaznak. így először az általánosan szokásos előkísérletekben az előnyös fermentációs feltételeket derítjük ki analitikai, főleg vékonyréteg-kromatográfiás módszereket alkalmazva, pl. a legkedvezőbb tápközegek, a megfelelő szubsztrátu- 30 moldó szerek és szuszpenzióképzők, a technikai feltételek, mint a hőmérséklet, levegőztetés, pH-érték, valamint a növesztés, a szubsztrátumadagoláshoz és a mikroorganizmus enzimének a szubsztrátummal való kapcsolatához tartozó optimális idők kiválasztását 35 végezzük el.

Ezzel kapcsolatban kimutatjuk, hogy az alkalmazott szubsztrátum-koncentráció célszerűen 100 és 2000 mg között van 1 liter tápközegre számítva. A pH-értékeket előnyösen az 5-7 közötti tartományba 40 állítjuk be. A tenyésztési hőmérséklet a 20-40 °C közötti tartományban van, előnyösen 25-35 °C. A levegőztetéshez előnyösen 0,5-5 liter/perc/liter tenyészfolyadék levegőt vezetünk be. A szubsztrátum átalakulását célszerűen próbaextraktumok elemzése 45 útján követjük.

A találmány szerinti alkalmas törzsek a Nocardiák, mint pl. a Nocardia corallina ATCC 14350 vagy a Mycobacteriumok, mint pl. a Mycobacterium rhodochrous ATCC 4276. Ezek az ATCC mikroorga- 50 nizmus-gyűjteményben a szakember rendelkezésére állnak.

Az elvégzett fermentáció után a fermentációs terméket ismert módon izoláljuk. Az izolálást pl. olyan módon végezhetjük el, hogy a fermentációs közeget vala- 55 mely vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, pl. etilacetáttal, butil-acetáttal vagy metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, az extraktumot besűrítjük, és az így kapott nyersterméket adott esetben kromatográfiával és/vagy átkristályosítással tisztítjuk. 60

Az ezután következő kiviteli példák a találmány szerinti eljárás magyarázatául szolgálnak. A találmány szerinti eljárás kiindulási anyagaként alkalmazott Metenolon Q^-hidroxi-l-metil-5a-androszt-l-én-3-on) a kereskedelemben hozzáférhető tennék (pl.: Rep-Research. Inc., Bayonne, Ν. I, AEA’).

l.példa literes Erlenmeyer lombikban levő 500 ml, 30 percig 120 °C hőmérsékleten autoklávban sterilezett tápközeget, amely 0,5% glükóz-monohidrátból, 0,5% élesztőkivonatbői, 0,2% kukoricalekvárból és 0,1% peptonból áll (pH=7,5), Nocardia corallina ATCC 14350 törzs ferde agar tenyészetével beoltunk, és 48 órán át forgó rázógépen 30 °C hőmérsékleten rázatjuk.

Ennek a tenyésztett közegnek 250 ml-ével 20 literes előfermentort oltunk be, amely 15 liter, 30 percen át 121 °C hőmérsékleten, 1,1 bar (110 kPa) túlnyomással sterilezett tápközeget tartalmaz, ennek a tápkőzegnek az összetétele azonos azzal, amelyet a fenti tenyésztő tápközegnél alkalmaztunk. Silicon SH, mint habgátló szer hozzáadásával 29 °C hőmérsékleten, 0,7 bar (70 kPa) túlnyomással tenyésztést végzünk 24 órán át, 15 liter/perc levegőátáramlást és 220 fordulat/perc keverést alkalmazva.

Ebből az előfermentációs tenyészetből steril körülmények között 0,9 litert kiveszünk és ezzel 20 literes főfermentort oltunk be, amely 14 liter sterilezett, az előfenneiitációs tenyésztésnél alkalmazottal azonos összetételű tápközeget tartalmaz. Az előfermentációnál alkalmazott körülmények között végzett 6 órás növesztés! fázis után 4,5 g Metenolon (17β-ΜάΓ0ΧΪl-metil-5ct-androszt-l-én-3-on) 60 ml dimetil-formamiddal képzett, sterilre szűrt oldatát adjuk a tenyészethez, és tovább folytatjuk a kevertetést és levegőztetést.

óra érintkeztetési idő után az átalakulás befejeződik. A tenyészlevet egyszer fél, majd kétszer 1/3 térfogat metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, az extraktumokat egyesítjük, és vákuumban szárazra bepároljuk A maradékot a habgáűő szer eltávolítása érdekében metanolban felvesszük, az oldhatatlan habgátló szert kettős redős szűrőn kiszűrjük, a szűrletet aktív szénnel kezeljük, és újból szárazra bepároljuk A maradékot ezután etil-acetátból átkristályosítjuk és vákuum-szárítószekrényben szárítjuk. 2,42 g (az elméleti kitermelés 54,6%-a) l-metil-l,4-androsztadién-3,17-diont kapunk (op.: 164-166 °C). További 0,45 g (az elméleti kitermelés 10%-a) l-metil-l,4-androsztadién-3,17-diont kapunk a kristályosítási anyalúg oszlopkromatográfiás tisztítása révén (szilikagéloszlop; eluálás hexán/aceton gradienssel).

2. példa

A Metenolont az 1. példában alkalmazott körülmények között Mycobacterium rhodochrous ATCC 4276 törzs alkalmazásával alakítjuk át l-metil-l,4-androsztadién-3,17-dionná. Kitermelés: az elméleti 59,5%-a (2,6 g).

Claims (1)

1. Eljárás l-metil-l,4-androsztadién-3,17-dion előállítására, azzal jellemezve, hogy 17P-hidroxi-l-metil-5aandroszt-l-én-3-ont a Nocardia corallina ATCC 14350 5 vagy a Myobacterium rhodochrous ATCC 4276 tenyészetével fermentálunk, és a fermentléből a tárgyi kör szerinti anyagot elkülönítjük.