HU194280B

HU194280B - Process for producing new gonadoliberin analogues of high effectivity and pharmaceutical compositions containing them

Info

Publication number: HU194280B
Application number: HU854070A
Authority: HU
Inventors: Janos Seproedi; Istvan Schoen; Zsolt Vadasz; Tamas Szirtes; Bela Kanyicska; Istvan Teplan; Judit Erchegyi; Gyoergyne Nyeki; Andras Selmeci
Original assignee: Richter Gedeon Vegyeszet
Priority date: 1985-10-22
Filing date: 1985-10-22
Publication date: 1988-01-28
Also published as: JPS6299397A; EP0220654A3; AU6423186A; IL80379A0; AU588058B2; FI864261A0; DK504386A; US4948873A; ES2002427A6; HUT42508A; DK504386D0; ZA867985B; FI864261A; EP0220654A2; GR862589B

Description

A találmány tárgya eljárás az új (I) általános képletű

Glp-His-Trp-Ser-X-W-Leu-Arg-Pro-Y (I) gonadoliberin-analógok savaddíciós sói — ahol X , Tyr- vagy 3,5-dibróm-tirozil-csoportot,

W Asu- vagy egy Asp(OR)- általános képletű csoportot jelent, amelyben az R egy 1-4 szénatomos alkil-csoportot, vagy egy fenil-(l—4 szénatomos)-alkil-csoportot képvisel és

Y jelentése glicinamid- vagy egy 1-4 szénatomos alkilamino-csoport valamint a hatóanyagként ezeket tartalmazó, szexuális folyamatokat befolyásoló gyógyászati készítmények előállítására.

A leírásban megnevezett α-aminosavak mindegyike ,,L” konfigurációjú, ezért ezt a továbbiakban nem jelöljük.

A hípotalamikus eredetű natív gonadoliberin nevű peptidhormon az agyalapi mirigyben a szexuális folyamatokat szabályozó luteinizáló hormont (a továbbiakban LH) és a follikulusz stimuláló hormont (a továbbiakban FSH) szabadítja fel. Ezen hormonokon keresztül végső soron stimulálható, illetve gátolható az ivarzás, a peteérés, az ovuláció, a spermatogenezis, stb., mely folyamatok alapvetően meghatározzák a gerincesek természetes szaporodását. Újabban a GnRH -analógok alkalmazásával prosztata és emlő tumorok gyógyítása mutatkozik ígéretesnek.

A natív GnRH szintetikus előállítására kidolgozott eljárást a 165 546 sz. magyar szabadalmi leírás ismerteti. Az ismert eljárás szerint 6+4 fragmens-kondenzációval állítják elő a GnRH-t. Lépésenként! felépítést alkalmaztak a 3,888,836 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint.

A GnRH terápiás alkalmazhatóságának ismeretében nagy számú analógot állítottak elő, amelyek közül különösen fontosak az úgynevezett szuperaktív GnRH-analógok. Ismeretes (J.Sandow és munkatársai, Control of Ovulation, Butterworths, London, 1978, 49—70.), hogyha a natív GnRH hatos helyzetű Gly csoportját bármilyen , JZ>” konfigurációjú a-aminosavra cseréljük, jelentősen megnő az így kapott GnRH-analóg hormon-hatásának (LH felszabadító hatás) mértéke, és megnő a hormon hatás időtartama is.

A 897 455 sz. belga szabadalmi leírásban olyan GnRH-analŐgokat ismertetnek, amelyekben a hatos helyzetű Gly csoportot egy D-l-amino-3,3-dimetil-butánsav-csoport helyettesíti. A 4,41,514 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás olyan szuperaktív GnRH-analógokra vonatkozik, amelyekben a hatos helyzetű Gly csoport helyén „D” konfigurációjú Trp, Alá, Phe, Lys, Pro, Met, Leu, Glu, Asn, Arg, Tyr, Cys, His, Chg, Nva, Om, Thr, Abu, Phg, Ile, Gin, Asp, Nle vagy Val állhat és a C-terminális Gly csoport hiányozhat és/vagy szubsztituálva lehet. A cél ve gyű leteket halak kezelésére javasolják használni. A 4,382,922 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból a hatos helyzetben szubsztituált fenil-csoportot tártál· mazó „D” konfigurációjú Phe-csoportot tartalmazó GnRH-analógok ismerhetők meg. A 24 38 350 sz. német szövetségi köztársaságbeli közzétételi irat a hatos helyzetben ,,D” konfigurációjú, szubsztituált Ser, Cys Asp, Glu, Orn és Lys csoportot tartalmazó analógokat ismertet. A 603 559 sz. svájci szabadalmi leírás szerint az 5,6 és 7 helyzetű aminosav-csoportokat helyettesítik főként „D” konfigurációjú egyéb aminosav-csoportokkal. Itt is konzekvensen ,,D'’ konfigurációjú aminosav-csoport van mindig a hatos helyzetben. Az irodalom a fentieken túlmenően még számos publikációt tartalmaz, amelyek mindegyike szuperaktív GnRHanalógokra vonatkozik. Ezekben azonban közös vonás az, hogy a hatos helyzetű aminosav-csoport mindig egy nem natív aminosavból vezethető le.

Ugyancsak jelentős GnRH aktivitással rendelkeznek azok az analógok is, amelyekben a hatos pozícióban valamilyen „L” konfigurációjú 0-aminosav van (187 503 sz. magyar szabadalmi leírás.)

Úgyszintén jelentős biológiai hatással rendelkzik az a GnRH-analóg js, amelyben a hatos és hetes pozíciókat egy „L” konfigurációjú γ-laktám gyűrű foglalja el (Science, 210, 656. (1980).

A fentiek alapján megállapítható, hogy a GnRH eddig ismertté vált analógjai kivétel nélkül tartalmaznak legalább egy olyan szerkezeti elemet, amely a természetben nem fordul elő. Márpedig endogén hatású peptidhormon ok gyógyászati célból történő alkalmazása esetén különösen előnyös, ha az kizárólag az élő anyagot alkotó natív aminosavakat tartalmaz, illetve ha kellő mértékben valószínűsíteni lehet, hogy a beadásra kerülő hatóanyag metabolikus termékei nem válthatnak ki nem kívánatos mellékhatásokat.

Célul tűztük ki olyan GnRHanalógok felépítését, amelyek a natív GnRH-nál hosszabban tartó és nagyobb LH felszabadító hatást mutatnak, és kizárólag „L” konfigurációjú α-aminosavakból épülnek fel.

Azt találtuk, hogy a találmányunk szerinti (I) általános képletű, ,,D” konfigurációjú aminosavat nem tartalmazó GnRH-analógok a natív GnRH-t messze meghaladó LH felszabadító hatékony ságúak.

A találmány szerint úgy járunk el, hogy

a) egy (II) általános képletű védett pepiidet

W—W—Leu—Arg—Pro—Y (II) ahol W és Y jelentése a fenti és V terc-butil-oxi-karbonil-, benzil-oxi-karbonil- vagy 9-fluoreníl-metol-oxikarbonil- védőcsoportot jelent — a V védőcsoport eltávolítása után egy (V) általános képletű

Glp-His-Trp-Ser-X-NH-NHj (V) pentapeptid-hidrazidból in situ képzett pentapeptidaziddal reagáltatunk. majd kívánt esetben egy kapott, a W helyén Asp(OR)-csoportot tartalmazó (Γ) általános képletű GnRH-analógot — ahol X Rés Yjelentése a fenti — W helyén Asu-csoportot tartalmazó (I) általános képletű GnRH-analógok előállítására — ahol X, Y és R jelentése a fenti — vízmentes szerves oldószerben valamely szerves tercier nitrogén bázissal kezelünk, vagy

X Y és R jelentése a fenti — vízmentes szerves oldószerben valamely szerves tercier nitrogénbázissal kezelünk, majd a kapott (I— általános képletű GnRH-analógot valamely savval kezelve savaddíciós sóvá alakítjuk, majd kívánt esetben a kapott (I) általános képletű GnRH-analógok savaddíciós sóját - ahol X, W és Y jelentése a fentiekben megadott — valamely más, gyógyászatilag elfogadható savval kezelve egy, a kapottól eltérő savaddíciós sóvá alakítjuk.

A találmányunk szerinti eljárásban szerves tercier nitrogénbázisként előnyösen trietil-amint, N-metilmorfolint vagy piridint használhatunk. Szerves oldószerként bármely poláros, aprotikus oldószer alkalmazható. Előnyös, ha oldószerként dimetil-formami-21 dót, szerves bázisként pedig trietil-amint alkalmazzunk.

Az X helyén 3,5-dibróm-tirozil-csoportt>t tartalmazó (I) általános képletű gonadoliberin-analógokat önmagában ismert, például katalitikus tridálási eljárások segítségével a megfeleld triciált származékokká lehet alakítani. Az ilyen radioaktív származékok az inaktív analógoknak a szervezetben valónyomonkövetésére használhatók.

A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként használt, kívánt esetben védett peptideket célszerűen fragmenskondenzációval, vagy lépésenként! lánchosszabbítással állíthatjuk elő a peptidkémiában önmagában ismert módszerek alkalmazásával. A peptidlánc egyes elemeit például valamely ismert módon aktivált aminosav-származék alkalmazásával kapcsolhatjuk össze így például az a) eljárásban felhasznált (Π) általános képletű peptideket egy (VI)

H—Leu—Arg(O)—Pro—Y (VI) általános képletű, adott esetben védett peptid-származék — ahol Y jelentése a fenti és O nitro-csoportot vagy hidrogénatomot jelent — és egy (VII)

V—Asp(OR)-OH (VII) . általános képletű, adott esetben védett aminosav-származék - ahol R és V jelentése a fenti - kondenzáltatása útján úgy állíthatjuk elő, hogy a (VII) általános képletű aminosav-származék α-helyzetű karboxil-csoportjának reakciókészségét például aktív észter kép. zéssel megnöveljük, majd az így kapott aktivált származékot reagáltatjuk a (VI) általános képletű pepiiddel, majd az adott esetben jelen levő nitro-csoportot eltávolítjuk.

Az a) és b) eljárás során lényegében véve azonos módon keletkezik az Asu-csoport a láncban levő -Asp(OR-, illetve -Asp-OR-csoport -OR-csoportjának kilépése mellett. A két eljárásban azonos reakciókörülményeket célszerű betartani.

A találmányunk szerinti eljárással kapott (I) általános képletű peptideket kívánt esetben gyógyászatitag elfogadható savakkal reagáltatva savaddíciós sóikká alakíthatjuk. Arra is van lehetőség, hogy a sók formájában‘kapott (I) általános képletű peptideket a só bázissal^ történő kezelése útján szabad állapotban nyerjük ki.

Az R helyén álló 1—4 szénatomos alkil-csoportok közül megnevezzük a metil-, az etil-, a n- és az i-propil-, a η-, az i-, a szék- és a terc-butil-csoportokat. Ezen alkil-csoportok előnyös képviselői a metil- és az étű-csoport.

A találmányunk szerinti (I) általános képletű GnRH-analógokat önmagában ismert módon gyógyászati készítménnyé alakíthatjuk. A gyógyászati készítmények előnyösen szilárd vagy cseppfolyós halmazállapotúak lehetnek. Ezek fontosabb képviselőiként megnevezzük a tablettákat, a drazsékat, a kapszulákat, a különféle egyéb porkészítményeket, valamint a különféle injekciós infúziós és inhalációs készítményeket, a kanalas orvosságokat és a különféle borogató folyadékokat.

A szuperaktiv GnRH-analógok közös jellemzője, hogy a natív GnRH-hoz képest többszörös mennyiségű LH hormont szabadítanak fel, és lényegesen hoszszabb ideig is tart a hatásuk. A fentiek szemléltetésére az 1. ábrán bemutatjuk a natív és néhány szuperaktív GnRH-analóg Valamint a találmányunk szerinti (I) általános képletű GnRH-analógok néhány képviselőjének LH felszabadító hatékonyságát. A körleteket hím egéren végeztük, a hatóanyagokat s.c. adtuk be az állatoknak és a szérum LH tartalmát radioimmunoassay módszerrel mértük.

Az ábrán jól látható, hogy a szuperaktív GnRHanalógok hatásának típusa és a hatás időbeli lefutása élesen eltér a natív GnRH hatásától. Az is látható, hogy a találmányunk szerinti (I) általános képletű GnRH-analógok hatása hasonló a szuperaktív analógokéhoz .

A hatásban mutatkozó eltérés magyarázata valószínűleg az, hogy a szuperaktív származékoknál megnő a biológiailag aktív konformerek relatív koncentrációja és ezek metabolikus stabilitása is nagyobb a natív anyagénál.

Az I. táblázatban megadjuk az (I) általános képletű GnRH-analógok egyik előnyös képviselőjének, az Asu⁶, dezGly¹⁰— GnRH-etilamidnak mért adatait.

I. táblázat

Szérum LH-koncentráció hím egéren. Dózis: 200 ng/egér i

Analóg neve Egér szérum LH [ng/ml] a kezelés után

4 6 órával

GnRH	85,2	81,4	87,0
D-Phe⁶, dezgLy¹⁰GnRH-etilamid	648,1	131,5	67,8
D-Ser(terc-butfl)⁶, dezGly¹⁰-GnRH- etilamid	1021,3	81,2	90,0
Asu⁶, dezGly¹⁰— GnRH-e tű-amid	958,4	702,3	216,2

A találmány szerinti eljárás szemléltetésére az alábbi 1-6. e) 8-9. kiviteli példákat adjuk meg anélkül azonban, hogy azok a találmányt bármilyen szempontból is korlátoznák. A példákban megadott vékonyrétegkromatográfiás Rt értékeket Merck gyártmányú „Kieselgel DC, AhiTolien” lapokon határoztuk meg Futtatásra az alábbi összetételű futtatószereket használtuk. Az összetétel adatok térfogatszázalékban értendők.

1. etil-acetát - pitidin - ecetsav víz- 60 : 20 : 6:11

2. etil-acetát — piridin — ecetsav — víz- 120 : 20 : 6:11

3. ecetsav-benzol- ' 1:7

4. n-butanol — ecetsav — víz - 4:1:1

5. etil-acetát — piridin — ecetsav — víz» 480:20:6:11

6. etil-acetát - piridin — ecetsav víz » 30 : 20 : 6 :11

7. ecetsav — benzol » 1 + 15

8. aceton — toluol 1:1

9. etil-acetát - piridin - ecetsav víz » 240 : 20 : 6 :11

10. butanol — ecetsav - víz — etil-acetát» >.l : 1 :1 :1

11. butanol — ecetsav — víz (felső fázis) » 4:1:5

12. butanol - piridin — ecetsavvíz» 120 : 20 : 6:11

13. i-propanol- 1 mol/1 vizes ecetsavoldat = 2:1

14. butanol - piridin — ecetsav — víz» 45 : 20 : 6:11

A leírásban használt aminosav és egyéb csoportrövidítések megegyeznek a peptid-kémiában használatos rövidítésekkel [J. Bioi. Chem., 247, 977. (1972)]. A Glp rövidítés piroglutamil-csoportot, a Dbt pedig

3,5-dibrón> tirozil-csoportot jelöl.

1. példa

Glp- His-Trp- Ser— Tyr— Asp(OMe)-Leu— Arg- Proetil ami d-bisz(triflu or-ace tát)

a) Z-Asp(OMe)-Leu-Arg(N02)-Pro-etilamid 3,77 g (8,4 mmól) Z-Asp()Me)-OPFP 60 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 0 °C-ra hűtjük, majd keverés közben 3,76 g (7,0 mmól) H-Leu-Arg (NO_a)-Pro-etilamid hidrogén-bromid sót adunk a reakcióelegyhez. Két óra múlva lassan hozzácsepegtetünk még 1,16 ml (9,1 mmól) trietil-amint, és a keverést még egy éjszakán át folytatjuk 0 °C-on. Ezután a kivált sót kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk, és a maradékként kapott olajat 240 ml etil-acetát és 80 ml mól/1 vizes káBum-hidrogén-szulfát-oldat keverékében oldjuk. A szerves fázist elválasztjuk és kétszer 70 ml mól/1 vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd háromszor 70 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal kirázzuk, vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk, szűrjük és szárazra pároljuk. Az így kapott olajos anyagot 55 ml forró etil-acetátban oldjuk, majd az oldatot 30 °C-ra hűtjük és lassú ütemben 400 ml étert csepegtetünk hozzá. A kivált anyagról az étert dekantáljuk, majd a maradékot éterrel eldöizsöljük. Szárítás után 3,60 g (72%) cím szerinti terméket kapunk. Móltömeg: 719.

Op.: 95-105 °C. [a]²⁵ „ » -66,8 ° (c » 1, metanol). Rf² = 0,68; Rf’ = 0,23fR_f ¹² = 0,67.

b) H-Asp(OMe)-Leu-Arg-Pro-etilamid-diacetát 2,16 g (3,0 mmól) Z—Asp(OMe)-Leu— Arg(NO₂) —Pro-etilamidot feloldunk 24 ml metanol és 24 ml ecetsav elegyében, majd keverés közben 900 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátort adunk hozzá 24 ml vízben szuszpendálva, és ezután 8 órán át hidrogéngázt áramoltatunk át á reakcióelegyen. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szárítjuk. így

1,73 g (87,3%) cím szerinti anyagot kapunk. Móltömeg: 660.

[<*]” = 57,0 ⁰ (C = 0,5 metanol).

Rf* = 0,54, Rf¹ »0,10;

Rf »O,22;Rf^U =0,46.

c) Glp—His-Trp—Ser—Tyr—Asp(OMe)—Leu-ArgPro-etilamid-bisz(trifluor-acetát)

651 mg (0,908 mmól) Glp—His-Trp—Ser—lyr— N₂H₃ pentapeptid-hidrazidot feloldunk 6 ml dimetilformamidban, az oldatot -15 °C-ra hű tjük, és keverés közben 0,61 ml 6 mól/1 dioxános hidrogén-klorid-oldatot (3,63 mmól) adunk hozzá,.A reakcióelegy hőmérsékletét továbbra is -15 °C-on tartva, keverés közben 62,6 mg (0,907 mmól) nátrium-nitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá, majd a reakcióelegyet további 15 percen keresztül -15 és -20 °C köztkeverjük. Ezután 545 mg (0,826 mmól) H-Asp(OMe)Leu-Arg-Pro-etflamid-diacetát só 6 ml dimetilformamiddal készített és -15 °C-ra hűtött oldatát adjuk a fentiek szerint elkészített azid-oldathaz, majd rögtön ezután 0,50 ml (3,632 mmól) trietil-amint adunk hozzá. így a reakcióelegy pH-ja 8 körülire áll be. Ezt követően fél órán át —10 és—15 °C között, majd 0 °C-on keverjük a reakcióelegyet. Három óra múlva 60 pl 6 mól/1 dioxánoe hidrogén-kloiid-oldattal (0,36 mmól) a reakcíóeiegy pH-ját mintegy 7-re állítjuk be, és tovább folytatjuk a keverést még 60 órán át ezen a hőmérsékleten. Ezután a kivált csapadékot kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a bepárlási maradékként kapott olajos anyagot Sephadex G—25 töltetű (2,6 x 113 cm-es) oszlopon 10%-os, vizes ecetsav-oldattal tisztítjuk. Az elúciót az UV abszorpciós mérésével (287 nm-en), illetve vékonyrétegkromatográfiásan követjük. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat bepároljuk, a maradékot liofllizáljuk. így 904 mg nyers cím szerinti pepiidet kapunk. Ezt a fentiekben megadott módon tovább tisztítjuk Sephadex G-25 tölteten.

A cím szerinti peptidet tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, majd a maradékot liofllizáljuk. 755 mg terméket kapunk, amit középnyomású folyadékkromatográfiával tovább tisztítunk. Fordított fázisú, 18 szénatomos alkil-csoportokat tartalmazó, Whatman LRP-1 jelű, 13-24 jum szemcseméretű töltetet és 2,5 x 40 cm méretű oszlopot használunk. Oldószerként i-propanol és 0,l%ros, vizes trifluorecetsav-oldat elegyét használjuk. A szerves komponens arányát 2%-ról 25%-ra növeljük a gradiens-elúdó folyamán. 400-400 ml eluens-térfogatot használunk. A tiszta frakciókat egyesítjük, bepároljuk, majd liofllizáljuk. így 500 mg (41,6%) tiszta, cím szerinti peptidet kapunk.

Móltömeg: 1454.

Rf = 0,60; Rf¹⁰ = 0,60; R/ » 0,06; R_f ¹³ « 0,61.

2. p é 1 d a

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asu-Leu-Arg-Pro-etilamid-dihidro-klorid mg (0,071 mmól) 1. példa szerint előállított

Glp- His-Trp—Ser— Tyr— Asp(OMe)— Leu— Arg-ProetiJamíd-bísz(trifluor-acetát) sót feloldunk 8 ml dimetil-formamidban és 1,2 ml (8,64 mmól) trietüamint adunk hozzá, majd az oldatot 25 °C-on 88 órán át állni hagyjuk. Ezután a re akcióé le gyet bepároljuk, majd rögtön ezután 30 ml ecetsavat adunk hozzá, és ezt le is pároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, az étert dekantáljuk és liofilizáljuk. A liofilizált terméket 5,2 ml 0,01 mól/1 vizes sósav-oldatban feloldjuk és az oldatot újra liofilizáljuk. így 21,4 mg (98,7%) cím szerinti pepiidet kapunk.

Móltömeg: 1267.

[aj./⁵ = 52,1 ° (c = 1,1%, metanol).

Rf =0,57, R_f ¹⁰ =0,58.

3. példa

Glp- His- T rp-Ser- T yr— Asp(OBzl)-Leu- Arg-Pr oe tilaniid-diacetát

a) Boc-Asp(OBzl)-Leu— Arg- -Pro-etilamid

490 mg Leu—Arg-Pro-etilainíd-dihidroklorid sót 10 ml dimetil-formamidban oldunk, majd az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben 5 mg Boc—Asp (OB7l)-OPFP 10 ml dimetil formami ddal készült oldatát adjuk hozzá. Ezután a reakcióelegy pH-ját trietil-aminnal (280 pl) 7-re állítjuk be, és a keverést 1 órán át 0 °C-on, majd szobahőmérsékleten 12 órán át folytatjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot szilikagél oszlopon (2 x 95 cm méretű) etil-acetát — piridin — ecetsav — víz 90 : 20 : 6 : 11 arányú elegyével kromatografáljuk. A cím szerinti vegyiilctet tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, a bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük. Így fehér por formájában 110 mg cím szerinti vegyületet kapunk.

O.p.: 111-113 °C.

R_f‘ =0,45.

b) II-Asp(OBzl)—Leu—Arg—Pro-etilamid-bisz(trifluor-acetát)

210 mg Boc—Asp(OBzl)—Leu—Arg—Pro-etilamid 4 ml tri fluor-e cetsavval készített oldatát 30 percen át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezt követően vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. Így 210 mg szilárd cím szerinti vegyületet kapunk.

Op.:98-103°C.

R_f* =0,25.

c) Glp -His- Trp-Ser-Tyr-Asp(OBzl)-Leu-ArgPr o-etilamid-diacetát

100,3 mg Glp-His-Trp— Ser-Tyr—N₂H₃ pentapeptid-hidrazidot feloldunk 2 ml dimetil-formamidban, az oldatot —10 °C-ra hűtjük és keverés közben 100 pl 6N vizes sósav-oldatot, majd 11 mg nátriumnitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá.

perc elteltével 116 mg H— Asp(OBzl)— Leu—Arg -Pro-etilamid-bisz(trifluor-acetát) só 0,5 ml dímetilformamid és 100 pl trictil-amin elegyével készített oldatát adjuk a kevert reakcioelegyhez. Ezután apH-t szükség esetén 7-re állítjuk. A keverést —10 °C-on 1 órán át, 0 °C-on 24 órán át folytatjuk. Ezt követően az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot Sephadex G-25 töltetű oszlopon (1 x 60 cm méretű) 10%-os vizes ecetsav-oldattal frakcionáljuk. A megfelelő frakciók egyesítése, bepárlása után a kapott maradékot az 1. példában ismertetett módon fordított fázisú kromatográfiával tisztítjuk. Oldószerként 10 tf% 2-propanol és 90 tf% 0,1%-os vizes trifluor-ecetsav-oldat elegyét (350 ml) használjuk úgy, hogy a tisztítás végire a 2-propanol aránya a 40 tf%-ot elérje. A cím szerinti vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, híg vizes ecetsav-oldalban oldjuk, majd liofilizáljuk. így 80 mg cím szerinti szilárd anyagot kapunk.

Rf = 0,6.

Aminosav-analízis: Asp = 0,99; Ser = 0,79; Glu = 1,03; Pro = 1,0; Leu = 1,3; Tyr = 0,83; His = 0,77; Arg = 1,2/ A triptofánt és az etilamint nem határoztuk meg.

4. példa

Glp-His-Trp-Se r-Db t—As p(OMe)—Le u-Arg-Pr oe tilaniid-diacetát

a) Boc— Trp-Ser- Dbt— OMe g Boc-Trp )G'PFP aminosav-származékot és 4,6 g II-Ser-Dbt— OMe dipeptidet feloldunk 60 ml dioxán és 20 ml etil-acetát 0 °C-ra lehűtött elegyében, majd az oldatot 1 órán át 0 °C-on és 24 órán át 20 °C-on keverjük. Ezt követően a reakcióelegyből az oldószert kidesztilláljuk, majd a maradékot etilacetátban feloldjuk, és 5%-os vizes citromsav-oldattal 0 °C-on, majd telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes ratrium-kJorid-oldattal liárom-háromszor szobahőmérsékleten kirázzuk. A szerves fázist vízmentes nátriunyszulfáton szárítjuk, szűrjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, és petroléter hozzáadásával kicsapjuk. A kivált anyagot szüljük, petroféterref mossuk, szárítjuk. így 6,8 g cím szerinti anyagot kapunk. Móltömeg: 727.

Rf = 0,75. Op.: 118-121 °C.

b) Η-Trp—Ser—Dbt—OMe-hidroklorid

3,5 g Boc-Trp—Ser-Dbt—OMe tripeptidet feloldunk 60 ml 4 mól/1 metanolos hidrogén-klorid-oldatban, majd az oldatot 2 órán át 20 ^cC-on keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot metanolban oldjuk, majd vákuumban ismét bepároljuk. A bepárlási maradékot szilárd nátrium-hidroxid felett vákuumban szárítjuk, végül etanólból éter hozzáadásával kicsapjuk, szűrjük, szárítjuk. így 2,5 g cím szerinti anyagot kapunk.

Mól tömeg: 663.

Op.: 215-217 °C.

Rf =0,45.

c) Glp—His-Trp-Ser-Dbt—OMe

393 mg Glp—His—N₂H₃ dipeptid-hidrazidot 35 ml dimetil-formamidban szuszpendálunk, 0,7 ml 6 mól/1 vizes sósav-oldatot adunk hozzá, majd a szuszpenziót —10 °C-ra hűljük. Ezt követően keverés közben 106 mg nátrium-nitrit tömény, vizes oldatát adjuk hozzá, majd 5 perc elteltével 927 mgH-Trp-Ser —Dbt— OMe-fiidroklorid só 3,5 ml dimetö-formamld és 0,1 ml trietil-amin elegyével készített, —5 °C-ra hűtött oldatát adjuk hozzá. Ezután az oldat pH-ját szükség esetén 7-re állítjuk be trietil-amlnnal, majd a réakcióelegyet —5 °C-on 1 óra hosszat, 0 ^eC-on pedig 2 óra hosszat keveijük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot etil-acetáttal, majd éterrel eldöizsöljük, szűrjük. Az így kapott nyers terméket szilikagél oszlopon (8x2 cm) a 4. számú oldószereleggyel kromatografáljuk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, majd éterrel eldörzsöljük a maradékot. így 850 mg cím szerinti anyagot kapunk.

Móltömeg: 875.

R^¹ =0,3.

Aminosav-analízis: Ser = 0,90; Glu = 1 j05; His =0,99; Trp = 1,00. A Dbt-t nem határoztuk meg.

d) Glp-Ms-Trp-Ser-Dbt-N₂H₃

280 mg Glp— His—Trp— Ser— Dbt-OMe pentapeptidet feloldunk 5 ml dimetil-formamidban, 0,8 ml hidrazin-hidrátot adunk hozzá, majd 24 órán át 60 °C-on keverjük. A kivált anyagot kiszűrjük, vízzel mossuk, majd all. számú oldószerelegyben oldva Sephadex G—25 töltetű oszlopon (98 x 2 cm) kromatografáljuk. A fő komponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, a bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük, szárítjuk. így 205 mg(70%) dm szerinti vegyületet kapunk.

Móltömeg: 875.

R_f* =0,25.

e) Glp-His-Trp- Ser-Dbt— Asp(OMe)—Leu- ArgPto-e til amid- diacetát mg Glp-His-Trp—Ser-Dbt-N₂H₃ pentapeptid-hidrazidot feloldunk 1 ml dimetil-formamidban, az oldatot -20 °C-ra hűtjük, majd keverés közben 0,035 ml 6 mól/1 vizes sósav-oldatot és 33 mg nátrium-nitrit tömény, vizes oldatát adjuk hozzá. 15 perc elteltével 31 mg H—Asp(OMe)—Leu—Arg—Pro-etilamid-diacetát só 0,5 ml dimetil-formamiddal készített oldatát, majd 5 perc elteltével 0,3 ml 10%-os, dimetil-formamidos trietil-amin-oldatot adunk a —10 °C-on kevert reakcióelegyhez. A keverést 30 percen át -10 C-on, 1 órán át 0 °C-on, végül 48 órán át 24 °C-on folytatjuk.

Ezt követően a dimetil-formamidot vákuumban lepároljuk, a maradékot 10%-os vizes ecetsav-oldatban oldva Sephadex G-25 töltetű oszlopon (60 x 2 cm) kromatografáljuk. A fő komponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. így 35 mg cím szerinti peptidet kapunk.

Móltömeg: 1502.

R_f‘ = 0,2.

5. példa

Glp-His-Trp—Ser-Tyr-Asu-Leu—Arg-Pro-e tűami d-diacetát mg Glp-His—Trp-^Sér-Tyr-Leu-Arg-AspOMe— Pro-etilamid-diacetátot (előállítva a 187503 sz. magyar szabadalmi leírás 1. példája szerint) feloldunk ml vízmentes dimetil-formamidban és 2,4 ml vízmentes trietil-amint adunk hozzá, majd az oldatot 50 órán át szobahőmérsékleten keveijük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot 30 ml ecetsavban oldjuk, majd újra bepároljuk. A visszamaradó olajos anyagot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk, majd híg ecetsavban oldjuk és lipfllizáljuk. így 48,2 mg (98%) cím szerinti vegyületet kapunk, [aj. “ = -50,3 (c » 1,0; 1%-os ecetsav-oldatban). Rf = O,57;R_f ¹⁰ =0,58.

6. példa

Glp—His-Trp—Ser—Tyr—Asu—Leu—Arg-Pro-e tilamid-bisz(trifluor-acetát)

a) Z—Asu— Leu— Arg(NO₂)— Pro-etílamid

300 mg, az 1. példa a) része szerint előállított Z~Asp(OMe)-Leu- Arg(NO₂ )-Pro-etilamid tetrapeptidet feloldunk 100 ml vízmentes dimetil-formamidban, 5,7 ml vízmentes trietil-amint adunk hozzá, majd 60 órán át szobahőmérsékleten keveijük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot ecetsavban oldjuk és újra bepároljuk. Az így kapott olajos maradékot éterrel eldöizsöljük, szűrjük, szárítjuk. így 282 mg (98%) cím szerinti vegyületet kapunk.

Móltömeg: 687.

Op : 112-115 °C.

Rf =0,34; R_f ^J =0,84.

b) Η-Asu-Leu-Arg-Pro-e tilamid-diacetát

280 mg Z— Asu— Leu— Arg(NO₂)— Pro-e tilamidot 3 ml metanol és 3 ml ecetsav elegyében feloldunk és keverés közben 140 mg 10%-os palládiumos csontszén katalizátor jelenlétében 7 órán keresztül hidro gén gázt áramoltatunk át rajta. Ezután a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. így 226 mg (88%) szilárd, enyhén higroszkópos anyag formájában kapjuk a cím szerinti vegyületet. Móltömeg: 628.

[akf^s = -45,2 ° (c = 1,0 metanol).

Rf = 0,29; Rf = 0,60; R_f ¹³ = 0,50.

c) Glp-His-Trp—Ser-Tyr—Asu—Leu—Arg-Pro-etllamid-bisz(trifluor-acetát)

Mindenben az 1. példa c) része szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy kiindulási anyagokként 217 mg Glp-His-Trp—Ser—Tyr-N₂H₃ pentapeptid-hidrazidot és 171 mg Η-Asu-Leu-Arg-Pro-etilamiddiacetátot alkalmazunk.

7. példa

Glp-His-Trp-Ser-Tyr(3,5-³ H)-Asp(OMe)-LeuArg-Pro-etllamid mg Glp-His-Ser-Dbt-Asp(OMe)-Leu-ArgPro-etilamid-diacetátot feloldunk 0,5 ml 1 mól/1 ecetsav-oldatban, majd az oldatot lefagyasztjuk, A befagyott oldat tetejére 10 mg 10%-os palládiumos alumínium-oxid katalizátort (Fluka gyártmány) szórunk, majd triciumgázt vezetünk hozzá. Ezután a reakcióelegyet 0 °C-ra melegítjük és 30 percig keverés közben triciáljuk. Ezután a felesleges triclumgáz elvezetjük, a reakcióelegyet 10 ml 0,1 mól/1 ecetsav-oldattal hígítjuk, szűrjük, végül az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A terméket analitikai nagynyomású kromatográfiás oszlopon (5 gm szemcseméretű Shandon ODS—Hypersyl töltet, 25 x 0,5 cm-es oszlop) 43 tf% metanol és előzőleg 4,0 pH-ra beállított 57 tf% 0,1 mól/1 ammónium-acetát/ecetsav puffer elegyével tisztítjuk. így mintegy 1-2 Ci/mM fajlagos radioaktivitású jelzett anyagot kapunk, amelynek a radioaktivitáson kívül minden fizikai és kémiai jellemzője megegyezik a nem radioaktív termékével (1. példa c. rész terméke).

8. p é 1 d a

Glp—His—Trp—Ser— Tyr—Asp(OMe)—Leu—Arg—Pro— Gly-NH₂ -bisz(trifluor-acetát)

a) Z—Asp(OMe)—Leu - Arg(NO₂ )—Pro -Gly—NH₂

1,26 g (2,8 mmól) Z—Asp(OMe)—OPFP 20 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 0 °C-ra hűtjük, majd keverés közben 1,37 g (2,3 mmól) H—Leu— Arg(NOj)-Pro—Gly—NH₂-trifluor-acetatot és 0,39 ml (2,8 mmól) trietil-amint adunk a reakcióelegyhez. Két óra múlva lassan hozzácsepegtetünk még 0,39 ml (2,8 mmól) trietil-amint és a keverést még egy éjszakán át folytatjuk 0 °C-on. Ezután a kivált sót kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékként kapott olajszerű anyagot 80 ml etil-acetát és 25 ml 1 mól/1 vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldat keverékében oldjuk. A szerves fázist elválasztjuk és kétszer 20 ml 1 mól/1 vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd háromszor 20 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal kirázzuk, vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk, szűrjük és szárazra pároljuk.

Az így kapott olajos anyagot 20 ml etil-acetátban oldjuk és lassú ütemben 200 ml petrolétert csepegtetünk hozzá. A kivált anyagról a petrolétert dekantáljuk, majd a maradékot éterrel eldörzsöljük. Szárítás után 1,27 g(74%) cím szerinti terméket kapunk. Móltömeg: 748.

R_f ² = 0,61; Rf⁹ = 0,20; R_f ¹² - 0,66.

b) H-Asp(OMe)-Leu—Arg—Pro—Gly-NH₂ -diacetát

1,1 g (1,47 mmól) Z—Asp(OMe)—Leu—Arg(NO₂)

-Pro-Gly-NH₂ védett pentapeptid-amidot feloldunk 18 ml ecetsavban, majd 5 ml vizet és 200 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátort adunk hozzá és ezután 6 órán át hidrogéngázt áramoltatunk keresztül a reakcióé legyen. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szárítjuk. így 0,91 g (90%) cím szerinti anyagot kapunk.

Móltömeg: 689.

R_f* = 0,07; R/ « 0,20; R_f ⁶ -- 0,49; R?³ = 0,41.

c) Glp-His—Trp-Ser—Tyr—Asp(OMe)—Leu—ArgPra—Gly-NH₂ -bisz(trifluor-acetát) mg (0,45 mmól) Glp-His-Trp-Ser-TyrN₂H₃ pentapeptid-hidrazidot feloldunk 3 ml dimetilformamídban, az oldatot —15 °C-ra hűtjük és keverés közben 0,30 ml 6 mól/1 dióxános hidrogén-klorid-oldatot (1,8 mmól) adunk hozzá. A reakcióelegy hőmérsékletét továbbra is —15 °C-on tartva keverés közben 31,2 mg (0,45 mmól) nátrium-nitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá, majd a reakcióelegyet további 15 percen át —15 és —20 °C közötti hőmérsékleten keverjük. Ezután 278 mg (0,41) mmól) H—Asp(OMe) —Leu—Arg—Pro—Gly—NH₂-diacetát 3 ml dimetilformamiddal készített és —15 °C-ra hűtött oldatát adjuk a fentiek szerint elkészített azid-oldathoz, majd rögtön ezután 0,25 ml (1,8 mmól) trietil-amint adunk hozzá. Ezt követően fél órán át —10 és —15 °C közötti hőmérsékleten, majd 48 órán át 0 °C-on keverjük a reakcióelegyet. Ezután a kivált csapadékot kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a bepárlási maradékként kapott olajos anyagot Sephadex G-25 töltetű (2,6 x 113 cm-es) oszlopon 0%-os, vizes ecetsav-oldattal tisztítjuk. Az elúciót az UV abszorpció mérésével (287 nmen), illetve vékonyréteg-kromatográfiásan követjük. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat bepároljuk, a maradékot liofilizáljuk. így 520 mg nyers, cím szerinti peptidet kapunk. Ezt a fentiekben megadott módon tovább tisztíthatjuk Sephadex G—25 tölteten. Ennek során a cím szerinti peptidet tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, majd a maradékot liofilizáljuk. 314 mg terméket kapunk, amit középnyomású folyadékkromatográfiával tovább tisztítunk. Fordított fázisú, 18 szénatomos alkil-csoportokat tartalmazó, Whatman LRP—1 jelű, 13—24 μτη szemcseméretű töltetet és 2,5 x 40 cm méretű oszlopot használunk. Oldószerként i-propanol és 0,1 %-os, vizes trifluor-ecetsav-oldat elegyét használjuk. A szerves komponens arányát 2%-ról 23%-ra növeljük a gradiens-alúció folyamán. 400—400 mlaluens térfogatot használunk. A tiszta frakciókat egyesítjük, bepároljuk, majd liofilizáljuk. így 240 mg (39%) tiszta, cím szerinti peptidet kapunk.

Móltömeg: 1483.

Rf⁶ = 0,554; Rf¹⁰ = 0,62; R_f ¹³ = 0,57.

9. példa

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asu-Leu-Arg-Pro-Gly— NH₂ -dihidroklorid mg 8. példa szerint előállított Glp-His-TrpSer—Tyr—Asp(OMe)—Leu—Arg-Pro—Gly— NH₂-bisz(trifluor-acetát) sót feloldunk 8 ml dimetil-formamidban és 1,2 ml trietil-amint adunk hozzá, majd az oldatot 20 °C-on 72 órán át állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet bepároljuk, majd rögtön ezután 30 ml ecetsavat adunk hozzá és ezt is lepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, az étert dekantáljuk és a kapott szilárd anyagot megszárítjuk. A kapott száraz anyagot 5 ml desztillált vízben feloldjuk, majd az oldatot liofilizáljuk, a liofilizátumot 5 ml 0,01 mól/1 vizes sósavoldatban oldjuk és az oldatot ismét liofilizáljuk. így 22 mg cím szerinti peptidet kapunk. Móltömeg: 1296.

=0,5;R_f ¹⁰ =0,5.

Claims

1. Eljárás az új (1) általános képle tű 5

Glp-His-Trp-Ser-X-W-Leu—Arg-Pro-Y (I) gonadoliberin -analógok savaddíciós sói - ahol

X Tyr- vagy 3,5-dibróm-tirozil-csoportot,

W Asu- vagy egy Asp(OR)- általános képletű csoportot jelent, amelyben az R egy 1 —4 szénato- 10 mos alkil-csoportot, vagy egy fenil-(l —4 szénatomos)-alkil-csoportot képvisel és.

Y jelentése glicinamid- vagy egy 1—4 szénatomos alkilamino-csoport — előállítására, azzal jellemezve, hogy 15

a) egy (II) általános képletű védett pepiidet

V-W—Leu-Arg-Pro-Y (II) — ahol W és Y jelentése a fenti és V terc-butil-oxikarbonil-, benzil-oxi-karbonil- vagy 9-fluorenil-metiloxi-karbonil- védőcsopórtot jelent - a V védőcsoport gO eltávolítása után egy (V) általános képletű

Glp—His—Trp—Ser—X—NH—NH₂ (V) pentapeptid-hidrazidból in situ képzett pentapeptidaziddal reagáltatunk, majd kívánt esetben egy kapott, a W helyén Asp(OR)— csoportot tartalmazó (I) álta- __ lános képletű GnRH-analógot - ahol X, R és Y jelen- *5 tése a fenti — W helyén Asu-csoportot tartalmazó (I) általános képletű GnRH-analógok előállítására — ahol X, Y és R jelentése a fenti — vízmentes szerves oldószerben valamely szerves tercier nitrogén bázissal kezelünk, vagy 30

b) W helyén Asu-csoportot tartalmazó (I) általános képletű GnRH-analógok előállítására egy (IV) általános képletű pepiidet

Glp-His-Trp—Ser—X—Asp-OR Leu-Arg-Pro-Y (IV) 35 — ahol Y, Y és R jelentése a fenti — vízmentes szerves oldószerben valamely szerves tercier nitrogénbázissal kezelünk, majd a kapott (I) általános képletű GnRHanalógot valamely savval kezelve savaddíciós sóvá alakítjuk, majd kívánt esetben a kapott (I) általános kép- 4Q letű GnRH-analógok savaddíciós sóját — ahol X, W és

Y jelentése a fentiekben megadott — valamely más, gyógyászatilag elfogadható savval kezelve egy, a kapottól eltérő savaddíciós sóvá alakítjuk.

2. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás Glp—His- ic

Trp-Ser~Tyr-Asp(OMe)-Leu-Arg-Pro-etilamid savaddíciós sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy Glp—His—Trp-Ser-Tyr-N₂H₃ pentapeptid-hidrazidból in situ képzett pentapeptid-azidót reagáltatunk H—Asp(OMe)-Leu-Arg-Pro-etilamiddal, és a kapott vegyületet savaddíciós sóvá alaki tjük.

3. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás Glp-HisTrp—Ser—Tyr—Asp(OBzl)—Leu—Arg—Pro-etilamid savaddíciós sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy Glp—His—Trp—Ser—Tyr—N₂Hj pentapeptid-hidrazidból in sitü képzett pentapeptid-azldot reagáltatunk H-Asp(OBzl)-Leu-Arg-Pro-etiiamiddal, és a kapott vegyületet savaddíciós sóvá alakítjuk.

4. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás Glp-HisTrp—Ser-Dbt-Asp(OMe)—Leu-Arg-Pro-etilamid savaddíciós sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy Glp-His-Trp—Ser-Dbt-N₂H₃ pentapeptid-hidrazidból in situ képzett pentapeptid-azidot reagáltatunk H—Asp(OMe)—Leu—Arg—Pro-etilamiddal, és a kapott vegyületet savaddíciós sóvá alakítjuk.

5. Az 1 igénypont szerinti a) eljárás Glp-HisTrp-Ser-Tyr-Asu-Leu-Arg-Pro-etilamid savaddíciós sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy Glp—His—Trp—Ser—Tyr—N₂H₃ pentapeptidhidrazidból in situ képezett pentapeptid-azidot reagáltatunk H—Asu—Leu-Arg—Pro-etilamiddal, és a kapott vegyületet savaddíciós sóvá alakítjuk.

6. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy V helyén benzil-oxi-karbonilcsoportot tartalmazó (II) általános képletű pepiidből - ahol W, R és Y jelentése a fenti - indulunk ki.

7. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás Glp-His— Trp-Ser-Tyr—Asu-Leu—Arg—Pro-etilamid savaddíciós sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy a kpott Glp-His— Trp-Ser—Tyr—Asp(OMe)— Leu-Arg-Pro-etilamidot vízmentes szerves oldószerben valamely szerves tercier nitrogénbázissal reagáltatjuk, és a kapott vegyületet savaddíciós sóvá alakítjuk.

8. Az 1. igénypont szerinti b) eljárás Glp-HisTrp—Ser—Tyr—Asu-Leu—Arg—Pro-etilamid savaddíciós sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy (IV) általános képletű pepiidként Glp-HisTrp-Ser-Tyr-Asp-OMe-Leu-Arg-Pro-etüamidból indulunk ki, és a kapott vegyületet savaddíciós sóvá alakítjuk.

9. Az 1. igénypont szerinti a), b) vagy a 7. vagy 8. igénypont bármelyike szerinti eljárás, azzal jelle m e z v e, hogy vízmentes szerves oldószerként dimetil-formamidot, szerves tercier nitrogénbázisként pedig trietil-amint alkalmazunk.

10. Eljárás szexuális folyamatokat befolyásoló hatású gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy vagy több (I) általános képletű gonadoliberin-analóg- ahol X, W és Y jelentése az 1. igénypont tárgyi körében megadott — valamely gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóját a gyógyászati készítmények előállításánál szokásos segéd-, töltő-, hígító-, stabilizáló-, pH- és ozmózis nyomás beállító segédanyagokkal összekeverünk és gyógyászati készítménnyé kiszereljük.