GR1008931B - Reference and callibration grid for improved real time detection of biological entities in microscopy diagnostic techniques - Google Patents
Reference and callibration grid for improved real time detection of biological entities in microscopy diagnostic techniques Download PDFInfo
- Publication number
- GR1008931B GR1008931B GR20150100315A GR20150100315A GR1008931B GR 1008931 B GR1008931 B GR 1008931B GR 20150100315 A GR20150100315 A GR 20150100315A GR 20150100315 A GR20150100315 A GR 20150100315A GR 1008931 B GR1008931 B GR 1008931B
- Authority
- GR
- Greece
- Prior art keywords
- grid
- spatial
- calibration
- techniques
- microscopy
- Prior art date
Links
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 title description 4
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 title description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 66
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 10
- 238000005459 micromachining Methods 0.000 claims description 7
- 238000005530 etching Methods 0.000 claims description 6
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 238000002508 contact lithography Methods 0.000 claims description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 abstract description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 abstract description 2
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract 1
- 229920005570 flexible polymer Polymers 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 15
- 238000009595 pap smear Methods 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 9
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 8
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 208000007879 Atypical Squamous Cells of the Cervix Diseases 0.000 description 4
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000007435 diagnostic evaluation Methods 0.000 description 2
- 206010013395 disorientation Diseases 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102100032218 Cytokine-inducible SH2-containing protein Human genes 0.000 description 1
- 101000943420 Homo sapiens Cytokine-inducible SH2-containing protein Proteins 0.000 description 1
- 102100026066 Phosphoprotein associated with glycosphingolipid-enriched microdomains 1 Human genes 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000003486 chemical etching Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 208000004209 confusion Diseases 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 238000010252 digital analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011496 digital image analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013070 direct material Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004049 embossing Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007687 exposure technique Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 208000027124 goblet cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000010329 laser etching Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001531 micro-dissection Methods 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000000075 oxide glass Substances 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004621 scanning probe microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/56—Labware specially adapted for transferring fluids
- B01L3/565—Seals
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B41—PRINTING; LINING MACHINES; TYPEWRITERS; STAMPS
- B41F—PRINTING MACHINES OR PRESSES
- B41F17/00—Printing apparatus or machines of special types or for particular purposes, not otherwise provided for
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B44—DECORATIVE ARTS
- B44C—PRODUCING DECORATIVE EFFECTS; MOSAICS; TARSIA WORK; PAPERHANGING
- B44C1/00—Processes, not specifically provided for elsewhere, for producing decorative surface effects
- B44C1/22—Removing surface-material, e.g. by engraving, by etching
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/34—Microscope slides, e.g. mounting specimens on microscope slides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
- G01N2001/282—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on with mapping; Identification of areas; Spatial correlated pattern
Abstract
Description
ΠΛΕΓΜΑ ΑΝΑΦΟΡΑΣ ΚΑΙ ΒΑΘΜΟΝΟΜΗΣΗΣ ΓΙΑ ΒΕΤΙΩΜΕΝΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΣΕ ΠΡΑΓΜΑΤΙΚΟ ΧΡΟΝΟ ΒΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΟΝΤΟΤΗΤΩΝ ΣΕ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗΣ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΑΣ REFERENCE AND CALIBRATION GRID FOR IMPROVED REAL-TIME DETECTION OF BIOLOGICAL ENTITIES IN DIAGNOSTIC MICROSCOPE TECHNIQUES
ΤΕΧΝΙΚΟ ΠΕΔΙΟ ΤΗΣ ΕΦΕΥΡΕΣΗΣ TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
Η εφεύρεση σχετίζεται με διαγνωστική ερευνητική μικροσκοπία για αναβαθμισμένη, σε πραγματικό χρόνο, ανίχνευση βιολογικών οντοτήτων - όπως κυττάρων, γονιδίων σημάτων χρωμοσωμάτων - στην κυτταρολογία, παθολογική ανατομική και σε διαγνωστικές τεχνικές μοριακής βιολογίας. The invention relates to diagnostic research microscopy for upscaled, real-time detection of biological entities - such as cells, chromosomes signal genes - in cytology, pathological anatomy and molecular biology diagnostic techniques.
ΕΠΙΣΤΗΜΟΝΙΚΟ ΥΠΟΒΑΘΡΟ & ΠΡΟΗΓΟΥΜΕΝΗ ΤΕΧΝΙΚΗ ΣΤΑΘΜΗ SCIENTIFIC BACKGROUND & PRIOR TECHNICAL LEVEL
Η ανάπτυξη προγραμμάτων προληπτικού ελέγχου στο γενικό πληθυσμό, βασισμένων στην εφαρμογή του τεστ Παπανικολάου (ΤΕΣΤ ΠΑΠ - PAP Test), έχει αποδειχθεί ότι είναι μια αποτελεσματική πρακτική στην αποτροπή της εκδήλωσης του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας στις γυναίκες που έχουν προσβληθεί από υψηλού κινδύνου για καρκινογένεση στελέχη του ιού του ανθρώπινου θηλώματος (HPV) [1]. Τις τελευταίες δεκαετίες, έχει συντελεστεί εξέλιξη στην προαγωγή τεχνικών και μεθόδων στο ΤΕΣΤ ΠΑΠ. Η εισαγωγή της διαδικασίας υγρής φάσης σε συνδυασμό με την αυτοματοποίηση [2] και τις τεχνικές ψηφιακής ανάλυσης εικόνας έχει οδηγήσει σε περισσότερο αξιόπιστη διάγνωση συγκρινόμενη με τη συμβατική διαχείριση των πλακιδίων. Παρά το γεγονός αυτό, το αναλογούν κόστος στη χρήση της ψηφιακής μικροσκοπικής τεχνικής παραμένει ακόμη υψηλό και δυσβάστακτο στην καθημερινή πρακτική στην πλειονότητα των κυτταρολογικών εργαστηρίων παγκοσμίως. Κατά τη διάρκεια της μικροσκοπικής παρατήρησης, η κυτταρολογία υγρής φάσης παρέχει μια απαλή εμφάνιση των κυττάρων, καλύτερη διατήρηση της μορφολογίας τους και καθαρότερο υπόστρωμα [3]. Επιπρόσθετα, η εισαγωγή και η αναβάθμιση (2001) του συστήματος κατά BETHESDA [4] για την έκδοση της διάγνωσης των κολποτραχηλικών επιχρισμάτων, προήγαγε την ταξινόμηση των κυτταρικών ανωμαλιών μέσω συστηματικής ορολογίας των αλλοιώσεων. Η οριοθέτηση των διαγνωστικών αναφορών όσον αφορά το ΤΕΣΤ ΠΑΠ εξάλειψε μερικώς τα μη ικανοποιητικά και οριακά αποτελέσματα ειδικά στις υπό τους όρους Άτυπα Πλακώδη Κύτταρα μη Προσδιορισμένης Σημαντικότητας / Άτυπα Αδενικά Κύτταρα (ASCUS/AGC) κατηγορίες. The development of screening programs in the general population, based on the application of the Pap test (PAP Test), has been shown to be an effective practice in preventing the occurrence of cervical cancer in women affected by a high risk of carcinogenesis human papillomavirus (HPV) strains [1]. In recent decades, progress has been made in the advancement of techniques and methods in PAP TEST. The introduction of the liquid phase procedure combined with automation [2] and digital image analysis techniques has led to a more reliable diagnosis compared to conventional plate management. Despite this fact, the relative cost of using the digital microscopy technique still remains high and unaffordable in daily practice in the majority of cytological laboratories worldwide. During microscopic observation, liquid phase cytology provides a smooth appearance of cells, better preservation of their morphology and a cleaner substrate [3]. In addition, the introduction and upgrade (2001) of the BETHESDA system [4] for issuing the diagnosis of cervical smears promoted the classification of cellular abnormalities through a systematic terminology of lesions. Delineation of diagnostic reports in terms of PAP TEST partially eliminated unsatisfactory and borderline results especially in the conditional Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance / Atypical Glandular Cells (ASCUS/AGC) categories.
Παρά την αξιοσημείωτη πρόοδο που έχει επιτευχθεί, υπάρχουν ορισμένοι τεχνικής και ανθρώπινης φύσεως παράγοντες που επηρεάζουν σε κρίσιμο βαθμό και δύνανται να αποδυναμώσουν σημαντικά τη διαγνωστική αξιοπιστία στο ΤΕΣΤ ΠΑΠ [3,5], Ζητήματα ποσοτικής και ποιοτικής υφής που αφορούν στην επάρκεια των συλλεγόμενων δειγμάτων, της ποιότητας της χρωστικής διαδικασίας και της εμπειρίας του μικροσκόπου στη διαγνωστική αποτελούν σημαντικούς παράγοντες που καθορίζουν αποφασιστικά την επιτυχή έκβαση της εφαρμογής και αξιολόγησης ενός αξιόπιστου διαγνωστικά ΤΕΣΤ ΠΑΠ. Despite the remarkable progress that has been achieved, there are some technical and human factors that critically influence and can significantly weaken the diagnostic reliability of the Pap test [3,5], Quantitative and qualitative issues related to the adequacy of the collected samples, the quality of the staining procedure and the experience of the microscope in the diagnosis are important factors that decisively determine the successful outcome of the application and evaluation of a diagnostically reliable Pap test.
Επιπρόσθετα, το πρόβλημα που σχετίζεται με την έλλειψη ομοιογένειας και συνέχειας στην κυτταρική πυκνότητα κατά την εξέταση των κυτταρολογικών επιχρισμάτων φαίνεται να αποτελεί παράμετρο που επηρεάζει δραστικά την αξιοπιστία της μικροσκοπικής διαδικασίας. Αυτή είναι μια σαφώς αναγνωρισμένη διαφορά και αποτελεί ένα σημαντικό επιπρόσθετο πρόβλημα σε σύγκριση με την περίπτωση της διαγνωστικής μικροσκόπησης στην Παθολογική Ανατομική. In addition, the problem related to the lack of homogeneity and continuity in cell density when examining cytological smears appears to be a parameter that drastically affects the reliability of the microscopic procedure. This is a clearly recognized difference and constitutes an important additional problem compared to the case of diagnostic microscopy in Pathological Anatomy.
Η διαδικασία μικροσκόπησης στην Παθολογική Ανατομική χρησιμοποιεί την ιστική συνέχεια ώστε να επιτύχει αξιόπιστη παρατήρηση στα αντίστοιχα πλακίδια. Σε αντίθεση με αυτά τα πλακίδια τα οποία παράγονται από ιστική μικροτόμηση, τα κυτταρολογικά πλακίδια χαρακτηρίζονται από μία διφασική χωρική δομή εναλλασσόμενων κενών χώρων και κυτταρικών περιοχών λόγω της απόξεσης, των υγρικών συλλογών και της διαδικασίας της παρακέντησης δια λεπτής βελόνης. Μικρά έως μεσαίου μεγέθους συσσωματώματα κυττάρων και μεμονωμένα κύτταρα αποτελούν συχνά ευρήματα κατά τη μικροσκόπηση με συμβατικό μικροσκόπιο φωτεινού πεδίου. Αυτό οδηγεί ακολούθως στην ύπαρξη μικρού έως μεγάλου μεγέθους κενών χώρων μεταξύ των συσσωματωμάτων και των μεμονωμένων κυττάρων. Κατά τη διάρκεια της μικροσκόπησης αυτοί οι κενοί χώροι μειώνουν το επίπεδο του σχετικού προσανατολισμού του Κυτταρολόγου επί της εξεταζόμενης επιφάνειας του πλακιδίου. Το γεγονός ότι δεν υπάρχουν ειδικές/συνεχείς ιστικές περιοχές που δύνανται να δράσουν ως θέσεις χωρικής αναφοράς, υποβοηθώντας την προσανατολιστική ενίσχυση του κυτταρολόγου ή κυτταροτεχνολόγου συντείνει στην αυξημένη δυσχέρεια της αξιόπιστης κάλυψης της επιφάνειας του πλακιδίου. Λαμβάνοντας υπ' όψιν δε, τον περιορισμένο χρόνο που διατίθεται για τη μικροσκόπηση των πλακιδίων αυτό οδηγεί κατά συνέπεια σε καταστάσεις όπου τα πλακίδια δεν σαρώνονται μικροσκοπικά πλήρως σε όλη την έκτασή τους και έτσι δεν εξετάζονται πλήρως. Η μερική μόνο κάλυψη κατά τη μικροσκόπηση αυξάνει το επίπεδο της αβεβαιότητας όσον αφορά στη συνολική σάρωση των αντίστοιχων πλακιδίων με αποτέλεσμα την έκδοση εμφανώς λανθασμένων εκτιμήσεων και σχετιζόμενων σοβαρών επιπλοκών στη διάγνωση των ΤΕΣΤ ΠΑΠ. The microscopic procedure in Pathological Anatomy uses tissue continuity to achieve reliable observation on corresponding slides. In contrast to these slides produced by tissue microdissection, cytological slides are characterized by a biphasic spatial structure of alternating voids and cellular regions due to scraping, fluid collections, and the fine needle aspiration process. Small to medium-sized cell aggregates and single cells are frequent findings on microscopy with a conventional bright-field microscope. This subsequently leads to the existence of small to large sized void spaces between aggregates and individual cells. During microscopy these voids reduce the level of relative orientation of the Cytologist on the examined surface of the slide. The fact that there are no specific/contiguous tissue regions that can act as spatial reference sites, aiding in the orientational enhancement of the cytologist or cytotechnologist, adds to the increased difficulty of reliably covering the surface of the slide. Given the limited time available for microscopy of the tiles this consequently leads to situations where the tiles are not fully microscopically scanned over their entire extent and thus not fully examined. Only partial coverage during microscopy increases the level of uncertainty with respect to the overall scan of the respective slides resulting in grossly incorrect estimates and associated serious complications in the diagnosis of PAP TESTS.
Αυτό το καλά αναγνωρισμένο πρόβλημα στην Κυτταρολογική επαγγελματική κοινότητα απαιτείται να λυθεί επαρκώς με σκοπό την ενίσχυση της αξιοπιστίας των χρησιμοποιούμενων διαγνωστικών διαδικασιών στις σχετιζόμενες διαγνωστικές εφαρμογές. This well-recognized problem in the Cytology professional community needs to be adequately resolved in order to enhance the reliability of the diagnostic procedures used in the related diagnostic applications.
Η λύση που διαπιστώνεται και προτείνεται στη παρούσα εφεύρεση είναι η παροχή μιας αποτελεσματικής χωρικής δομής διαμερισματοποίησης / κατάτμησης και οργάνωσης της επιφάνειας των πλακιδίων μέσω κατάλληλα ορισμένων γεωμετρικών δομών ή προτύπων, όπως τα πλέγματα τα οποία θα δύνανται να δράσουν ως βοηθήματα προσανατολισμού και χωρικής βαθμονόμησης της επιφάνειας των πλακιδίων. The solution identified and proposed in the present invention is the provision of an effective spatial structure of compartmentalization / partitioning and organization of the surface of the tiles through suitably certain geometric structures or patterns, such as grids which will be able to act as aids for orientation and spatial calibration of the surface of the tiles.
ΠΕΡΙΓΡΑΓΗ ΤΗΣ ΕΦΕΥΡΕΣΗΣ SCOPE OF THE INVENTION
Η παρούσα εφεύρεση παρέχει και περιγράφει ένα χωρικό πλέγμα με ακολουθιακά διατεταγμένους και δεικτοδοτημένους υποχώρους/τμήματα (τετράγωνα, τρίγωνα, ή άλλου σχήματος) τα οποία μπορούν να προσαρμοστούν με διάφορους δυνατούς τρόπους πάνω στις πλατφόρμες μεταφοράς (π.χ. αντικειμενοφόρα πλακίδια μικροσκοπίου) των βιολογικών δειγμάτων προς εξέταση, και λειτουργούν ως πλέγματα βαθμονόμησης και βοηθήματα παροχής αναφοράς στον διαγνώστη Κυτταρολόγο ή Παθολογοανατόμο / Ιστοπαθολόγο. The present invention provides and describes a spatial grid with sequentially arranged and indexed subspaces/parts (squares, triangles, or other shapes) that can be adapted in various possible ways on the transfer platforms (e.g., microscope slides) of the biological of samples for examination, and act as calibration grids and reference aids to the diagnostic Cytologist or Pathologist / Histopathologist.
Στο Σχήμα 1 απεικονίζεται σχηματικά η χωρική διαμερισματοποίηση ολόκληρης της επιφάνειας ενός αντικειμενοφόρου πλακιδίου με φερόμενο κυτταρολογικό δείγμα/επίχρισμα, μέσω της χρήσης ενός υπερκείμενου σε αυτό χωρικού πλέγματος. Το πλέγμα διαχωρίζει όλη την επιφάνεια του πλακιδίου σε ανεξάρτητα τμήματα / υποχώρους τα οποία αποτελούν πλέον ανεξάρτητα παράθυρα παρατήρησης κάτω από το μικροσκόπιο. Οι γραμμές του πλέγματος στο Σχήμα 1, αναπαριστώνται σκοπίμως από έντονες γραμμές διακριτού πάχους έτσι ώστε να αναπαρασταθεί ευκρινώς το πλέγμα στο παράδειγμα αυτό. Στην εικόνα αυτή γίνεται επίδειξη των χαρακτηριστικών και της τοπολογίας ενός ενδεικτικού κυτταρολογικού δείγματος, όπου μικρά προς μεσαία συσσωματώματα κυττάρων καθώς και μεμονωμένα κύτταρα οδηγούν με τη σειρά τους στη δημιουργία μικρών προς μεγάλων κενών χώρων μεταξύ αυτών των συσσωματωμάτων και των κυττάρων. Figure 1 schematically illustrates the spatial partitioning of the entire surface of a slide with a loaded cytological specimen/smear, through the use of a superimposed spatial grid. The grid separates the entire surface of the tile into independent sections / subspaces which are now independent observation windows under the microscope. The grid lines in Figure 1 are intentionally represented by bold lines of discrete thickness so as to clearly represent the grid in this example. This image demonstrates the characteristics and topology of an indicative cytological sample, where small to medium aggregates of cells as well as single cells in turn lead to the creation of small to large voids between these aggregates and cells.
Το προτεινόμενο χωρικό πλέγμα μπορεί να έχει διάφορα προσαρμόσιμα σχήματα και μεγέθη με αντίστοιχη διαφορετική επιφάνεια των σχετιζόμενων υποχώρων / τμημάτων έτσι ώστε να ικανοποιούνται οι απαιτήσεις του μικροσκόπου / διαγνώστη για την επίτευξη πιο αποδοτική διαγνωστικής λειτουργίας. Αυτό το πλέγμα αναφοράς και βαθμονόμησης (ΠΑΒ) λειτουργεί σαν ένα βοήθημα αναφοράς και βαθμονόμησης και δύναται να ενσωματωθεί με διαφορετικούς τρόπους σε ήδη υπάρχουσες πλατφόρμες και σχετικά υλικά που χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις πλατφόρμες μεταφοράς/φορέων βιολογικών δειγμάτων όπως αντικειμενοφόρα πλακίδια μικροσκοπίου. The proposed spatial grid can have various customizable shapes and sizes with correspondingly different surface area of the related subspaces/sections so as to meet the requirements of the microscope/diagnoser to achieve more efficient diagnostic operation. This reference and calibration grid (RPG) functions as a reference and calibration aid and can be incorporated in different ways into already existing platforms and related materials used in conjunction with biological sample transfer/carrier platforms such as microscope slides.
Το πλέγμα ΠΑΒ επιτρέπει την ελεγχόμενη διαδοχική κάλυψη του συνόλου του υπό εξέταση βιολογικού δείγματος στο συνημμένο αντικειμενοφόρο πλακίδιο, μέσω της διαδοχικής μικροσκόπησης και εξέτασης των διαδοχικών και διατεταγμένων ή δεικτοδοτημένων παραθύρων παρατήρησης. Αυτός ο οργανωμένος τρόπος κάλυψης της υπό εξέτασης επιφάνειας συνιστά μια νέα μέθοδο σάρωσης και εξέτασης που έρχεται σε αντίθεση με τις τρέχουσες τεχνικές εξέτασης όπου ο έλεγχος και η κάλυψη του πλακιδίου και του δείγματος γίνεται τυχαία, δεδομένου ότι ο μικροσκόπος διαγνώστης δεν έχει ενδεικτικές πληροφορίες για τη σχετική θέση της περιοχής εξέτασης που ερευνά κάθε φορά. The PAB grid allows for controlled sequential coverage of the entire biological sample under examination on the attached slide, through the sequential microscopy and examination of consecutive and ordered or indexed viewing windows. This organized way of covering the surface under examination constitutes a new method of scanning and examination that contrasts with current examination techniques where the examination and coverage of the slide and specimen is done randomly, since the microscopic diagnostician has no indicative information about the relative position of the examination area it surveys each time.
Λόγω της υψηλής μεγέθυνσης του αντικειμενικού φακού του μικροσκοπίου που χρησιμοποιείται, κάθε περιοχή εξέτασης του πλακιδίου αποτελεί ένα πολύ μικρό ποσοστό της επιφάνειας ολόκληρου του πλακιδίου, καθιστώντας δύσκολο τον προσδιορισμό της σχετική θέσης του. Ως εκ τούτου, στις τρέχουσες μεθόδους και τεχνικές εξέτασης των πλακιδίων ο μικροσκόπος / διαγνώστης εκτιμά προσεγγιστικά και μόνο από τη μνήμη του τη σχετική θέση της υπό εξέταση περιοχής / τομέα σε σύγκριση με το σύνολο της επιφάνειας του πλακιδίου. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε χωροταξική απώλεια κατεύθυνσης -οπτική παραπλάνησηκατά την εξέταση του πλακιδίου και στην απώλειας οπτικής εξέτασης χωρικών τομέων διαγνωστικού ενδιαφέροντος. Το πρόβλημα αυτό μπορεί να αποφευχθεί με τη χρήση της νέας προτεινόμενης μεθόδου σάρωσης με τη βοήθεια της χρήσης του πλέγματος αναφοράς και βαθμονόμησης ΠΑΒ. Due to the high magnification of the microscope objective used, each area of examination of the slide constitutes a very small percentage of the surface of the entire slide, making it difficult to determine its relative position. Therefore, in current methods and techniques of examination of the slides the microscopist/diagnoser approximates and only from his memory the relative position of the examined area/domain compared to the whole surface of the slide. This can lead to spatial disorientation - optical disorientation when viewing the tile and to the loss of visual examination of spatial areas of diagnostic interest. This problem can be avoided by using the new proposed scanning method with the help of using the PAB reference and calibration grid.
Οι δομές πλέγματος μπορούν να αποτυπωθούν από συνδυασμό χωρικών γραμμών και άλλων δομών με προσαρμόσιμες (πολύ μικρές) πλευρικές διαστάσεις (πάχος γραμμής) και κατάλληλου βαθμού οπτικής διαφάνειας. Οι δομές αυτές είναι ορατές στο μικροσκόπιο και επιπλέον δε διαταράσσουν ή εμποδίζουν οπτικά μέσω φαινομένων μη-επιθυμητής αλληλοεπικάλυψης, τα υπό εξέταση δείγματα. Grid structures can be captured by a combination of spatial lines and other structures with adjustable (very small) lateral dimensions (line thickness) and an appropriate degree of optical transparency. These structures are visible under the microscope and, moreover, do not disturb or obstruct optically, through undesirable overlapping phenomena, the samples under examination.
Τα πλέγματα αναφοράς και βαθμονόμησης με παροχή δεικτών σχετικής θέσης παρέχουν έναν τρόπο διαμερισματοποίησης / διαίρεσης της περιοχής του δείγματος σε αντίστοιχα διατεταγμένα τμήματα παρέχοντας κατ' επέκταση πληροφορία σχετικού προσανατολισμού και χωροταξικών συντεταγμένων εύρεσης. Μία τυπική ενδεικτική διαμερισματοποίηση οργανωμένη από ένα πλέγμα, παρουσιάζεται σχηματικά στο Σχήμα 2, όπου κάθε ορθογώνιο (1) αντιπροσωπεύει ένα παράθυρο παρατήρησης. Όλα αυτά τα παράθυρα παρατήρησης είναι διαδοχικά διατεταγμένα με κατάλληλους δείκτες, ενώ στο συγκεκριμένο αυτό παράδειγμα αυτά είναι αριθμημένα. Reference and calibration grids with relative position markers provide a way to compartmentalize / divide the sample area into correspondingly ordered sections, thereby providing relative orientation information and spatial finding coordinates. A typical indicative partitioning organized by a grid is shown schematically in Figure 2, where each rectangle (1) represents an observation window. All these viewing windows are sequentially arranged with appropriate markers, while in this particular example they are numbered.
Τα τμήματα μπορούν να δεικτοδοτούνται με δείκτες από ένα οποιοδήποτε κατάλληλο συμβολικό κώδικα όπως για παράδειγμα μέσω συνδυασμού αριθμών, γραμμάτων αλφαβήτου και συμβόλων. Sections may be indexed with indices from any suitable symbolic code such as by a combination of numbers, letters of the alphabet and symbols.
Τα τμήματα του πλέγματος μπορούν επίσης να δεικτοδοτούνται εναλλακτικά μέσω της χρήσης κατάλληλης κωδικοποίησης γραμμής στις γραμμές πλέγματος αντί να παρέχεται άμεση πληροφόρηση του δείκτη θέσης μέσα στα τμήματα. Σε αυτή την περίπτωση δεν υπάρχει ανάγκη για επιπλέον στοιχείο ένδειξης θέσης μέσα στα τμήματα, ελαχιστοποιώντας έτσι κάθε πιθανή χωρική αλληλοεπικάλυψη με το υποκείμενο βιολογικό δείγμα. Η γραμμή κωδικοποίησης θα μπορούσε να είναι μια κατάλληλη αλληλουχία ή συνδυασμός από διακεκομμένες γραμμές, τελείες ή γραμμών διαφορετικού πάχους έτσι ώστε να αντιπροσωπεύσει μοναδικά τη θέση ενός συγκεκριμένου παραθύρου παρατήρησης / τμήματος σε ολόκληρο το πλέγμα. Grid segments can also be indexed alternatively through the use of appropriate line coding on the grid lines instead of providing direct location marker information within the segments. In this case there is no need for an additional positioning element within the sections, thus minimizing any potential spatial overlap with the underlying biological sample. The encoding line could be a suitable sequence or combination of dashed lines, dots, or lines of varying thickness so as to uniquely represent the position of a particular observation window / segment in the entire grid.
Καθώς το χωρικό πλέγμα ΠΑΒ δημιουργείται με τρόπο ώστε να είναι μόνιμα εγγεγραμμένο και να είναι ορατό από το μικροσκόπο / διαγνώστη κατά τη διάρκεια της εξέτασης αποτελεί ένα βοήθημα πραγματικού χρόνου για τον προσανατολισμό, την τμη ματοποίησης και την ταξινόμηση των τμημάτων. Αυτή η εγγενής σε πραγματικό χρόνο δυνατότητα είναι σε αντίθεση και αντιδιαστολή με τις ψηφιακές τεχνικές μικροσκοπίας όπου μόνο η ψηφιακή ανάλυση και μετα-επεξεργασία της εικόνας επιτρέπει την παροχή πληροφορίας χωρικής χαρτογράφησης του πλακιδίου. As the PAB spatial grid is generated in such a way that it is permanently recorded and visible to the microscope/diagnosist during examination it is a real-time aid for section orientation, sectioning and classification. This inherent real-time capability is in contrast and contrast to digital microscopy techniques where only digital analysis and post-processing of the image allows providing spatial mapping information of the wafer.
Η χρήση του χωρικού πλέγματος ΠΑΒ μπορεί να εφαρμοστεί σε τεχνικές διαγνωστικής μικροσκοπίας στην Κυτταρολογία καθώς παρέχει τα μέσα για να βοηθήσει τον μικροσκόπο / διαγνώστη να καλύψει οπτικά με ένα ελεγχόμενο, ασφαλή και οργανωμένο τρόπο ολόκληρη την περιοχή του πλακιδίου μικροσκοπίου με το συνημμένο βιολογικό δείγμα, χωρίς την απώλεια κάλυψης περιοχών πληροφορίας εξαιτίας της έλλειψης σχετικής κατεύθυνσης και προσανατολισμού στην επιφάνεια του πλακιδίου ή δείγματος, όπως αποτυπώνεται ενδεικτικά στο επίχρισμα/δείγμα του Σχήματος 1. The use of the PAB spatial grid can be applied to diagnostic microscopy techniques in Cytology as it provides the means to assist the microscopist/diagnosist to visually cover in a controlled, safe and organized manner the entire area of the microscope slide with the attached biological specimen, without the loss of coverage of information areas due to the lack of relative direction and orientation on the surface of the tile or sample, as illustrated indicatively in the smear/sample of Figure 1.
Η χρήση των χωρικών πλεγμάτων ΠΑΒ μπορεί επίσης να εφαρμοστεί στη διαγνωστική μικροσκοπία στην Ιστοπαθολογία- Παθολογική Ανατομική για την ενίσχυση αναβάθμιση της εξέτασης δείγματος ιστοπαθολογίας με τον ίδιο τρόπο όπως στη εφαρμογή σε διαγνωστική μικροσκοπίας στην Κυτταρολογία, παρέχοντας τα μέσα για την επίτευξη προσανατολισμού και πλαισίου αναφοράς για μια ασφαλή, πλήρη και οργανωμένη κάλυψη ολόκληρης της περιοχής του πλακιδίου. The use of PAB spatial grids can also be applied to diagnostic microscopy in Histopathology-Pathologic Anatomy to enhance histopathology specimen examination in the same way as applied to diagnostic microscopy in Cytology, providing the means to achieve orientation and a frame of reference for a safe, complete and organized coverage of the entire tile area.
Η χρήση του χωρικού πλέγματος αναφοράς και βαθμονόμησης (ΠΑΒ) προτείνεται για εφαρμογές in situ υβριδισμού ("In Situ Hybridization -ISH Techniques) όπως του χρωμογόνου (CISH), φθορίζοντος (FISH) και σήμανσης με άργυρο (SISH) [6], καθώς η παρεχόμενη διαμερισματοποίηση της επιφάνειας του πλακιδίου με το επίχρισμα /βιολογικό δείγμα παρέχει τα μέσα για μία πιο αποδοτική μικροσκοπική παρατήρηση. Ο καθορισμός των γονιδιακών/χρωμοσωμιακών αριθμητικών ασταθειών με πρωτοκόλλα FISH and CISH-SISH αποτελεί κρίσιμο βήμα στην εφαρμογή στοχευμένων θεραπειών στους συμπαγείς κακοήθεις όγκους. Οι μοριακές αυτές τεχνικές είναι ευαίσθητες και ειδικές στην ταυτοποίηση των γονιδιακών/χρωμοσωμιακών αριθμητικών ασταθειών. Η εφαρμογή μιας διαδικασίας διαγνωστικής μικροσκόπησης με τη χρήση του προτεινόμενου χωρικού πλέγματος (ΠΑΒ) για τη διαγνωστική αξιολόγηση των γονιδιακών/χρωμοσωμιακών σημάτων παρέχει διαγνωστική ακρίβεια στην εντόπιση και στον υπολογισμό της ακριβούς αναλογίας ([αριθμός αντιγράφων γονιδίου] / [αριθμός αντιγράφων κεντρομέρους]) σε όλη την έκταση του πλακιδίου ή σε επιλεγμένες ιστικές περιοχές. Η χρήση του χωρικού πλέγματος (ΠΑΒ) παρέχει τα απαραίτητα μέσα προσανατολισμού και παροχής χωρικής αναφοράς στους ακολουθιακά διατεταγμένους και δεικτοδοτημένους υποχώρους παρατήρησης έτσι ώστε να επιτρέπει την αποδοτική μικροσκόπηση όλης της έκτασης του πλακιδίου που φέρει το βιολογικό δείγμα. The use of the spatial reference and calibration grid (SG) is recommended for in situ hybridization applications ("In Situ Hybridization -ISH Techniques") such as chromogenic (CISH), fluorescent (FISH) and silver labeling (SISH) [6], as the provided compartmentalization of the slide surface with the smear/biological specimen provides the means for a more efficient microscopic observation. Determination of gene/chromosomal numerical instabilities by FISH and CISH-SISH protocols is a critical step in the application of targeted therapies to solid malignancies. these molecular techniques are sensitive and specific in the identification of gene/chromosomal numerical instabilities.The application of a diagnostic microscopy procedure using the proposed spatial grid (PAG) for the diagnostic evaluation of gene/chromosomal signals provides diagnostic accuracy in the detection and calculation of exact ratio ([gene copy number] / [centromere copy number]) throughout the slice or in selected tissue regions. The use of the spatial grid (SG) provides the necessary means of orienting and providing spatial reference to the sequentially arranged and indexed observation subspaces so as to allow efficient microscopy of the entire extent of the slide bearing the biological sample.
Η χρήση του πλέγματος ΠΑΒ προτείνεται επίσης και για εφαρμογή σε πρωτόκολλα Ανοσοκυτταρο-Ιστοχημείας (Immunocytochemistry-Immunohistochemistry ICC-IHC) [7] καθώς η χωρική διαμερισματοποίηση της υπό μικροσκόπηση περιοχής του πλακιδίου με το υπερκείμενο βιολογικό δείγμα / επίχρισμα επιτρέπει την διενέργεια πιo αποδοτικής μικροσκόπησης. Ο καθορισμός ανοσοχρωσμένων κυτταρικών χαρακτηριστικών (π.χ. ο αριθμός των χρωσμένων πυρήνων σε εδικές περιοχές επί των πλακιδίων) μέσω πρωτοκόλλων ανοσοκυτταρο-ιστοχημείας αποτελεί ένα σημαντικό βήμα για εφαρμογή στοχευμένων Θεραπειών σε συμπαγείς κακοήθεις όγκους. Αυτές οι τεχνικές είναι ευαίσθητες και ειδικές στην αναγνώριση διαφορετικών πρωτεϊνικών προτύπων σε ασθενείς που πάσχουν από τον ίδιο τύπο καρκίνου (πχ καρκίνος μαστού) και διαχωρίζοντάς τους (πχ θετικοί για HER2 καρκίνο). Η υλοποίηση /εφαρμογή μιας διαδικασίας για διαγνωστική μικροσκόπηση με τη χρήση του προτεινόμενου χωρικού πλέγματος ΠΑΒ για τη διαγνωστική αξιολόγηση όσον αφορά στον αριθμό των ανοσοχρωσμένων πυρήνων ή μεμβρανικής / κυτταροπλασματικής έκφρασης προάγει τη διαγνωστική ακρίβεια στην εντόπιση και υπολογισμό των βαθμών έκφρασης ειδικών δεικτών (όπως του ki 67 ως παράγοντα κυτταρικού πολλαπλασιασμού ή της ογκογόνου δραστικότητας του HER2) σε όλη την έκταση του πλακιδίου υπό μικροσκόπηση ή σε ειδικές περιοχές του πλακιδίου και συνεπώς και στις αντίστοιχες ιστικές περιοχές. The use of the PAB grid is also suggested for application in Immunocytochemistry-Immunohistochemistry ICC-IHC protocols [7] as the spatial compartmentalization of the area under microscopy of the slide with the overlying biological sample/smear allows more efficient microscopy to be performed. Determining immunostained cell characteristics (eg, the number of stained nuclei in specific areas on slides) through immunocyto-histochemistry protocols is an important step for applying targeted therapies to solid malignancies. These techniques are sensitive and specific in identifying different protein patterns in patients suffering from the same type of cancer (eg breast cancer) and separating them (eg HER2 positive cancer). The realization/application of a procedure for diagnostic microscopy using the proposed PAB spatial grid for the diagnostic evaluation in terms of the number of immunostained nuclei or membrane/cytoplasmic expression promotes the diagnostic accuracy in the detection and calculation of the expression levels of specific markers (such as ki 67 as a factor of cell proliferation or of the oncogenic activity of HER2) over the entire extent of the slide under microscopy or in specific areas of the slide and therefore also in the corresponding tissue areas.
Πέραν της παροχής ενός οργανωμένου τρόπου πλήρους κάλυψης ολόκληρου του δείγματος το πλέγμα ΠΑΒ και η αντίστοιχη προτεινόμενη μέθοδος διαδοχικής σάρωσης, εξασφαλίζουν την ταχύτερη και χρονικά αποτελεσματικότερη εξέταση του δείγματος με αποτέλεσμα την βελτίωση όσον αφορά τον χρόνο και το συνδεόμενο χρονικά κόστος της εξέτασης. In addition to providing an organized way to fully cover the entire sample, the PAB grid and the corresponding proposed sequential scanning method ensure the fastest and most time-efficient examination of the sample, resulting in an improvement in terms of time and the time-related cost of the examination.
Η χωρική κατάτμηση με τη χρήση του πλέγματος επιτρέπει τη χαρτογράφηση του δείγματος καθώς και του φορέα του (π.χ. πλακίδιο μικροσκοπίου) παρέχοντας επιπλέον τη λειτουργικότητα της χωρικής σήμανσης και την ταξινόμηση των περιοχών του δείγματος που έχουν διαγνωστικό ενδιαφέρον για τον μικροσκόπο / διαγνώστη. Spatial segmentation using the grid allows mapping of the specimen as well as its carrier (eg microscope slide) additionally providing the functionality of spatial marking and classification of areas of the specimen of diagnostic interest to the microscopist / diagnostician.
Αυτή η λειτουργία χωρικής σήμανσης μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον καθορισμό ενός χάρτη οδήγησης όταν απαιτείται μια αναδρομική ανασκόπηση στο δείγμα από τον μικροσκόπο / διαγνώστη, προκειμένου να επανεξεταστεί το συγκεκριμένο χωρικό τμήμα και να επαναξιολογηθούν τα διαγνωστικά ευρήματα. Το χωρίο / τμήμα ενδιαφέροντος περιγράφεται πλέον από μοναδικές χωρικές συντεταγμένες μέσω κατάλληλων δεικτών, και παρέχεται έτσι η δυνατότητα άμεσης και ταχείας πρόσβασης. This spatial marking function can also be used to define a driving map when a retrospective review of the specimen is required by the microscopist/diagnosist in order to review the specific spatial section and re-evaluate the diagnostic findings. The village / segment of interest is now described by unique spatial coordinates through appropriate markers, thus providing the possibility of direct and rapid access.
Το πλέγμα αναφοράς και βαθμονόμησης είναι ένα στοιχείο που μπορεί να κατασκευαστεί με διάφορους τρόπους, ανάλογα με την περιοχή εφαρμογής και την προτίμηση του τελικού το χρήστη δηλαδή του μικροσκόπου / διαγνώστη. The reference and calibration grid is an element that can be constructed in a number of ways, depending on the application area and the preference of the end user, i.e. the microscopist / diagnostician.
Η τεχνική που χρησιμοποιείται σήμερα αποκλειστικά και διεθνώς στη κλινική κυτταρολογία και ιστοπαθολογία για τεχνικές διαγνωστικής μικροσκοπίας βασίζεται στη χρήση των στερεών υάλινων καλυπτρίδων οι οποίες προσκολλώνται επάνω στα αντικειμενοφόρα πλακίδια μικροσκοπίου με το βιολογικό δείγμα παρέχοντας έτσι έναν τρόπο για τη σταθεροποίηση, τη σφράγιση, και την διασφάλιση του υπό εξέταση δείγματος. The technique used today exclusively and internationally in clinical cytology and histopathology for diagnostic microscopy techniques is based on the use of solid glass coverslips which adhere onto microscope slides with the biological sample thus providing a way to stabilize, seal, and secure of the sample under consideration.
Το προτεινόμενο πλέγμα δύναται να αναπτυχθεί / κατασκευαστεί σε οποιοδήποτε είδος και υλικό των εν' λόγω στερεών γυάλινων καλυπτρίδων ή εναλλακτικά σε ήδη εμπορικά διαθέσιμες υάλινες καλυπτρίδες (Σχήμα 2). Αυτές οι καλυπτρίδες προσκολλώνται -με μια συγκεκριμένη πιστοποιημένη μέθοδο- πάνω στο αντικειμενοφόρο πλακίδιο που φέρει το βιολογικό δείγμα. The proposed grid can be developed / manufactured in any type and material of the said solid glass coverslips or alternatively in already commercially available glass coverslips (Figure 2). These coverslips are adhered - by a specific certified method - to the slide bearing the biological sample.
Οι τροποποιημένες αυτές καλυπτρίδες, ολοκληρωμένες με το διαμορφωμένο πλέγμα ΠΑΒ μπορούν να προσφέρουν την επιπρόσθετη λειτουργικότητα ενός ενσωματωμένου πλέγματος το οποίο θα διευκολύνει στην ευκολότερη ασφαλέστερη και ταχύτερη εξέταση του δείγματος. These modified coverslips, complete with the shaped PAB grid can offer the additional functionality of an integrated grid which will facilitate easier safer and faster examination of the sample.
Εναλλακτικά, το προτεινόμενο πλέγμα δύναται να αναπτυχθεί / κατασκευαστεί πάνω σε διαφανείς και εύκαμπτες καλυπτρίδες από χημικά αδρανές πλαστικό ή πολυμερές υλικό και οι οποίες μπορούν να προσαρμοστούν πάνω στη επιφάνεια του φορέα του δείγματος (π.χ. αντικειμενοφόρο πλακίδιο) σε άμεση επαφή με το βιολογικό δείγμα/ επίχρισμα. Alternatively, the proposed grid can be developed / manufactured on transparent and flexible coverslips made of chemically inert plastic or polymer material and which can be adapted to the surface of the sample carrier (e.g. slide) in direct contact with the biological specimen/smear.
Οι εν λόγω διαφανείς εύκαμπτες καλυπτρίδες μπορούν να είναι ελαστικές ή ελαστικά παραμορφώσιμες λωρίδες προκαθορισμένου κατάλληλου μήκους συμβατό με το μέγεθος του χρησιμοποιούμενου φορέα δειγμάτων όπως τα πλακίδια. Τα μηχανικά χαρακτηριστικά τους παρέχουν υψηλότερα "κατώτερα όρια" ζημιών/καταστροφής σε σχέση με τις συμβατικές εύθραυστες γυάλινες καλυπτρίδες αποτρέποντας έτσι την πιθανή καταστροφή τους από τυχαία θραύση κατά τη διάρκεια συνήθων χειρισμών. Το Σχήμα 3 απεικονίζει σχηματικά μία τέτοια εύκαμπτη λωρίδα με ένα ολοκληρωμένο σε αυτή πλέγμα η οποία λειτουργεί πλέον ως καλυπτρίδα με ενσωματωμένο πλέγμα. Said transparent flexible covers can be elastic or elastically deformable strips of a predetermined suitable length compatible with the size of the used sample carrier such as slides. Their mechanical characteristics provide higher "lower limits" of damage/destruction than conventional frangible glass coverslips thus preventing their possible destruction by accidental breakage during normal handling. Figure 3 schematically illustrates such a flexible strip with a grid integrated therein which now functions as a cover with an integrated grid.
Εναλλακτικά, το πλέγμα μπορεί να αποτυπωθεί/ κατασκευαστεί σε κατάλληλα υψηλά διαφανείς πλαστικές ή πολυμερείς ταινίες που στη συνέχεια μπορούν να προσκολληθούν / τοποθετηθούν απευθείας είτε πάνω από το πλακίδιο μικροσκοπίου είτε πάνω σε μία τυπική /παραδοσιακή καλυπτρίδα. Στο Σχήμα 4 απεικονίζεται σχηματικά η ελαστική διαφανής ταινία που θα μπορούσε να είναι για παράδειγμα μία λεπτή αυτοκόλλητη ταινία η οποία να επιτρέπει την περιέλιξή της με κυκλικό επαναληπτικό τρόπο (1) διευκολύνοντας έτσι την αποτελεσματική χρήση μετά την ταχεία και εύκολη κοπή της σε κομμάτια με το απαιτούμενο μήκος (2). Alternatively, the grid can be printed/fabricated on suitable highly transparent plastic or polymer tapes which can then be adhered/placed directly over either the microscope slide or a standard/traditional coverslip. Figure 4 shows schematically the elastic transparent tape which could be for example a thin self-adhesive tape which allows it to be wound in a circular repetitive manner (1) thus facilitating efficient use after being quickly and easily cut into pieces with the required length (2).
Το χωρικό πλέγμα, δύναται να κατασκευαστεί με διάφορους τεχνολογικούς τρόπους ανάλογα με το υλικό επιλογής στο οποίο θα πραγματοποιηθεί η αποτύπωση του πλέγματος. Οι υάλινες καλυπτρίδες μπορούν να μορφοποιηθούν με τη χρήση τεχνικών μηχανικής εγχάραξης, τεχνικών χημικής εγχάραξης ή τεχνικών εγχάραξης με τη χρήση Laser. Η τελευταία, γνωστή επίσης ως τεχνικής άμεσης μικρομηχανικής με χρήση Laser (Laser direct micromachining) είναι μία γνωστή τεχνική [8,9,11], που μπορεί να εφαρμοστεί τόσο σε βασισμένα σε γυαλιά οξειδίου [9,13], μαλακά γυαλιά [12] ή σε πολυμερή ή πλαστικά υλικά [8, 10]. The spatial grid can be constructed in various technological ways depending on the selection material on which the grid will be imprinted. Glass coverslips can be patterned using mechanical etching techniques, chemical etching techniques, or laser etching techniques. The latter, also known as direct micromachining technique using Laser (Laser direct micromachining) is a well-known technique [8,9,11], which can be applied both to oxide glasses [9,13], soft glasses [12] or in polymer or plastic materials [8, 10].
Γραμμές πλέγματος και λοιπές συναφείς γεωμετρικές δομές οι οποίες θα μπορούν να είναι ορατές και ευκρινείς υπό σάρωση μικροσκόπησης μπορούν να αποτυπωθούν με τεχνικές άμεσης εγγραφής Laser με ένα αριθμό διαφορετικών τεχνικών. Τέτοιες ορατές δομές μπορούν επίσης να αποτυπωθούν σε φωτοευαίσθητα υλικά, γυαλιά [12] ή πολυμερή [10] με την προσαρμογή κατάλληλων παραμέτρων σε τεχνικές εγγραφής με Laser ή τεχνικών φωτεινής έκθεσης δια μέσου πρότυπων μασκών, σε τρόπο ώστε να δημιουργούνται φωτοδιαθλαστικές δομές με το μηχανισμό της τροποποίησης του δείκτη διάθλασης των υλικών που εκτίθενται σε κατάλληλο φως. Οι εκτεθειμένες/ φωτισμένες περιοχές και κατά γενίκευση οι εκτεθειμένες γεωμετρικές δομές αυξάνουν τοπικά την πυκνότητα τους και τον δείκτη διάθλασής τους, τροποποιώντας έτσι τα οπτικά χαρακτηριστικά τους και την οπτική αντίθεση με τις γύρω περιοχές, καθιστώντας τες συνεπώς ορατές υπό κατάλληλες συνθήκες. Αυτή η προσέγγιση αποτύπωσης επιτρέπει την ομαλή αποτύπωση και εγγραφή δομών ακόμη και κάτω από την επιφάνεια του υλικού περιορίζοντάς τις έτσι στο εσωτερικό του σώματός του και αποτρέποντας έτσι την δημιουργία τυχόν υπολειμμάτων και ατελειών στην επιφάνεια του υλικού. Το χαρακτηριστικό αυτό αποτρέπει με τη σειρά του την μετέπειτα επιρύπανση και αλλοίωση των χαρακτηριστικών του πλέγματος σε περίπτωση επαφής με τυχόν ρυπαντικές ουσίες και σκόνη από το εξωτερικό περιβάλλον. Grid lines and other related geometric structures that will be visible and sharp under scanning microscopy can be imprinted with direct laser recording techniques by a number of different techniques. Such visible structures can also be imprinted on photosensitive materials, glasses [12] or polymers [10] by adjusting appropriate parameters in laser recording techniques or light exposure techniques through patterned masks, in such a way as to create photorefractive structures by the mechanism of modifying the refractive index of materials exposed to appropriate light. Exposed/illuminated areas and in general exposed geometric structures locally increase their density and refractive index, thus modifying their optical characteristics and optical contrast with surrounding areas, thus making them visible under appropriate conditions. This imprinting approach allows smooth imprinting and recording of structures even below the surface of the material thus limiting them to the interior of its body and thus preventing the creation of any residues and imperfections on the surface of the material. This characteristic in turn prevents the subsequent contamination and alteration of the characteristics of the mesh in case of contact with any polluting substances and dust from the external environment.
Μια εναλλακτική προσέγγιση κατασκευής είναι η ελεγχόμενη εγχάραξη της επιφάνειας του υλικού όπου θα αποτυπωθεί το πλέγμα. Με τη χρήση τεχνικών μικρομηχανικής Laser μπορεί να πραγματοποιηθεί επιλεκτική απευθείας/άμεση εγχάραξη της επιφάνειας μέσω του μηχανισμού εκτομής του υλικού από εστιασμένη δέσμη Laser. Συγκεκριμένα διάφοροι τύπου πηγών Laser όπως Laser υπεριώδους φωτός με υψηλή ενέργεια φωτονίων ή εναλλακτικά Lasers με χαρακτηριστικά πολύ μικρής διάρκειας παλμών (femtosecond ή picoseconds) μπορούν να χρησιμοποιηθούν για απευθείας εκτομή υλικού ή άμεση εγχάραξη επιφάνειας υποβοηθούμενη από Laser. An alternative fabrication approach is to control-etch the surface of the material where the mesh will be imprinted. Using Laser micromachining techniques, selective direct/direct etching of the surface can be performed through the mechanism of ablation of the material by a focused Laser beam. In particular, various types of laser sources such as UV light lasers with high photon energy or alternatively lasers with very short pulse duration characteristics (femtosecond or picoseconds) can be used for direct material excision or direct laser-assisted surface engraving.
Άλλες απλουστευμένες εναλλακτικές μέθοδοι για την εγχάραξη και την άμεση αποτύπωση δομών σε σκληρά υλικά όπως καλυπτρίδες βασισμένες σε υαλώδη υλικά, είναι επίσης δυνατές όπως για παράδειγμα με την εφαρμογή μεθόδων της άμεσης μηχανικής χάραξης πάνω σε τέτοια γυάλινα υποστρώματα. Με τη χρήση εξαιρετικά λεπτών και σκληρών κεφαλών εγχάραξης, όπως για παράδειγμα με κεφαλές διαμαντιών, είναι δυνατή η αποτύπωση αυθαίρετων επίπεδων δομών και στη ειδικότερη περίπτωση πλεγμάτων οιονδήποτε σχημάτων και διατάσεων, με την εφαρμογή ελεγχόμενης πίεσης στο υπόστρωμα. Other simplified alternative methods for etching and direct imprinting of structures on hard materials such as coverslips based on glassy materials are also possible as for example by applying direct mechanical etching methods on such glassy substrates. By using extremely thin and hard engraving heads, as for example with diamond heads, it is possible to imprint arbitrary planar structures and in the most special case meshes of any shape and stretch, by applying controlled pressure to the substrate.
Εύκαμπτες λωρίδες και καλυπτρίδες καθώς και λεπτές ή πολυμερικές ταινίες μπορούν επίσης να διαμορφωθούν για την αποτύπωση πλεγμάτων μέσω πρότυπων μασκών, με διάφορες τεχνολογικές μεθόδους όπως για παράδειγμα με τεχνικές Laser ή κατά δεύτερο μέσω τεχνικών άμεσης μεταφοράς προτύπου (direct pattern transfer) με τη χρήση μηχανικών μέσων. Flexible strips and coverslips as well as thin or polymeric tapes can also be formed to imprint grids through patterned masks, by various technological methods such as for example by Laser techniques or secondly by direct pattern transfer techniques using mechanical means .
Στην πρώτη περίπτωση της τεχνικής Laser, λόγω της υψηλής ευαισθησίας και του χαμηλού "κατώτατου ορίου καταστροφής" του πολυμερικού υλικού από την ακτινοβολία απαιτείται [10] μια πολύ χαμηλή πυκνότητα ισχύος και ροής ακτινοβολίας Laser που θα εναποτεθεί αθροιστικά στην ακτινοβολούμενη επιφάνεια της πολυμερικής ταινίας, προκειμένου να αποτυπωθούν μόνιμα γεωμετρικές δομές προσαρμόσιμης και κατάλληλης οπτικής διαφάνειας, γεγονός που σημαίνει ότι η ταχύτητα εγγραφής θα είναι πολύ υψηλότερη από ό, τι σε υαλώδη υλικά. In the first case of the Laser technique, due to the high sensitivity and the low "threshold destruction threshold" of the polymeric material by radiation, a very low power and flux density of Laser radiation is required [10] to be cumulatively deposited on the irradiated surface of the polymeric film, in order to permanently imprint geometric structures of adaptable and suitable optical transparency, which means that the recording speed will be much higher than in glassy materials.
Στη δεύτερη μέθοδο το πλέγμα μπορεί να αποτυπωθεί με την εφαρμογή κατάλληλης μηχανικής πίεσης μέσω της άμεσης επαφής με τις κατάλληλες εύκαμπτες λωρίδες ή ελαστικές ταινίες, από μία προδιαμορφωμένη επιφάνεια που φέρει κατάλληλο επιφανειακό ανάγλυφο που αντιπροσωπεύει το χωρικό πλέγμα προς αποτύπωση. In the second method the mesh can be imprinted by applying appropriate mechanical pressure through direct contact with appropriate flexible strips or elastic bands, from a preformed surface bearing a suitable surface relief representing the spatial mesh to be imprinted.
Αυτή η μέθοδος αποτύπωσης /εκτύπωσης με επαφή (contact printing method) μπορεί να θεωρηθεί ιδανικά συμβατή για τη μεταφορά και αποτύπωση δομών με συνεχή τρόπο, απευθείας από το φυσικό ανάγλυφο πρότυπο στην εύκαμπτη λωρίδα ή ελαστική ταινία. Η αποτύπωση αυτή μπορεί να επιτευχθεί στην πράξη, μετακινώντας κατάλληλα μία περιστρεφόμενη επιφάνεια με το πρότυπο ανάγλυφο, πάνω στην κινούμενη εύκαμπτη λωρίδα ή λεπτή ελαστική ταινία, σε ένα συνεχή τρόπο. This contact printing method can be considered ideally suited for the transfer and printing of structures in a continuous manner, directly from the physical relief template to the flexible strip or elastic band. This imprinting can be achieved in practice by suitably moving a rotating surface with the relief pattern, over the moving flexible strip or thin elastic band, in a continuous manner.
Το Σχήμα 5 απεικονίζει σχηματικά αυτή την τεχνική άμεσης μηχανικής αποτύπωσης και η οποία συνίσταται ενδεικτικά από ένα κυλινδρικό τύμπανο από σκληρό υλικό (κατασκευασμένο από μέταλλο, κεραμικό, σκληρό πλαστικό ή άλλο σκληρό υλικό) το οποίο φέρει μόνιμα αποτυπωμένο στην επιφάνειά του το πρότυπο ανάγλυφο του πλέγματος προς μεταφορά. Το τύμπανο (1) περιστρέφεται προς και σε επαφή είτε με με την λεπτή ταινία ή την εύκαμπτη λωρίδα (2), και οι οποίες θα μπορούσαν να είναι είτε σταθερές είτε να κινούνται με κατάλληλη ταχύτητα γραμμικά προς το τύμπανο όπως ενδεικτικά αναπαριστάται στο σχήμα. Η εφαρμογή κατάλληλης πίεσης από την επιφάνεια του τυμπάνου προς την επιφάνεια της ταινίας δύναται να προκαλέσει την μόνιμη αποτύπωση ενός ορατού πλέγματος μέσω της επαγωγής μιας μόνιμης πλαστικής παραμόρφωσης στην επιφάνεια του υλικού που δέχεται τη πίεση. Τόσο τα χωρικά γεωμετρικά χαρακτηριστικά όσο και τα χαρακτηριστικά οπτικής διαφάνειας του πλέγματος δύναται να προσαρμοστούν με την κατάλληλη ρύθμιση της εφαρμοζόμενης δύναμης επαφής και της μηχανική πίεσης στην επιφάνεια. Figure 5 schematically illustrates this direct embossing technique, which typically consists of a cylindrical drum of hard material (made of metal, ceramic, hard plastic, or other hard material) which has the grid pattern pattern permanently imprinted on its surface. to transport. The drum (1) rotates towards and in contact with either the thin film or the flexible strip (2), which could either be stationary or move at a suitable speed linearly towards the drum as illustratively represented in the figure. Applying appropriate pressure from the surface of the drum to the surface of the tape can cause a visible web to be permanently imprinted by inducing a permanent plastic deformation in the surface of the material receiving the pressure. Both the spatial geometric characteristics and the optical transparency characteristics of the mesh can be adjusted by appropriate adjustment of the applied contact force and mechanical pressure on the surface.
ΕΙΔΙΚΗ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ - ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ SPECIAL APPLICATION CASE - EVALUATION
Προκειμένου να επιδειχθεί η ανάπτυξη, η χρήση και η λειτουργικότητα του προτεινόμενου πλέγματος ΠΑΒ επελέγη ως περίπτωση εφαρμογής η χρήση συγκεκριμένων εμπορικά διαθέσιμων γυάλινων καλυπτρίδων ως μια πλατφόρμα υλικού για την αποτύπωση πλεγμάτων ΠΑΒ. In order to demonstrate the development, use and functionality of the proposed PAB grid, the use of specific commercially available glass coverslips as a material platform for imprinting PAB grids was chosen as an application case.
Για την αποτύπωση του πλέγματος ΠΑΒ χρησιμοποιήθηκε η νέα τεχνική μικρομηχανικής με χρήση Laser στενών χρονικά παλμών διάρκειας της τάξης femtosecond (Femtosecond Laser Micromachining) σε συνδυασμό με υψηλής ακρίβειας συστημάτων μικρομετακίνησης. Η χρήση τεχνικών Laser δύναται να επιτρέψει την άμεση εγγραφή, εγχάραξη και αποτύπωση προκαθορισμένων προτύπων σχεδίων μέσω της μικρομηχανικής τεχνικής σε επιφάνειες [8,9,10,11], σε μια ποικιλία υλικών που κυμαίνονται από γυαλιά έως μαλακά πολυμερή υλικά. To print the PAB mesh, the new micromechanics technique was used using lasers with narrow temporal pulses of the order of femtosecond (Femtosecond Laser Micromachining) in combination with high-precision micro-movement systems. The use of Laser techniques can allow the direct recording, engraving and imprinting of pre-defined pattern patterns through micro-machining on surfaces [8,9,10,11], in a variety of materials ranging from glass to soft polymeric materials.
Η τεχνική της μικρομηχανικής με χρήση femtosecond Laser έχει εφαρμοστεί στη για πρώτη φορά στη παρούσα παρουσιαζόμενη εφεύρεση με σκοπό την κατασκευή ενός ορατού ορθογώνιου πλέγματος σε μία καλυπτρίδα αντικειμενοφόρου πλακιδίου για ιατρικούς διαγνωστικούς σκοπούς. The micromachining technique using a femtosecond laser has been applied to the present invention for the first time in order to fabricate a visible rectangular grid on a slide cover for medical diagnostic purposes.
Το σύστημα εγγραφής με femtosecond Laser απεικονίζεται σχηματικά στο Σχήμα 6. Η πηγή Laser (1) αποτελείται από μία συμπαγή μονάδα Laser Οπτικής Ίνας που παράγει παλμούς χρονικής διάρκειας ~350fs σε μήκος κύματος ~1064nm στην υπέρυθρη περιοχή του φάσματος. Ο ρυθμός επανάληψης παλμών του Laser μπορεί να ρυθμιστεί από μονό παλμό έως συχνότητα 1MHz ανάλογα με τις απαιτήσεις των χρηστών. Η ακτίνα Laser (3) περνά μέσα από ένα σύστημα ελέγχου ισχύος (2), το οποίο δύναται να είναι ένας ρυθμιζόμενος οπτικός εξασθενητής προκειμένου να ρυθμίζεται το επίπεδο ισχύος της δέσμης Laser στο απαιτούμενο επίπεδο. Η ακτίνα Laser (3) ανακλάται από ένα οπτικό κάτοπτρο (4), προκειμένου να κατευθυνθεί προς την επιθυμητή θέση στόχευσης όπου βρίσκεται η καλυπτρίδα προς εγγραφή του πλέγματος. Η δέσμη Laser εστιάζεται κατάλληλα μέσω ενός οπτικού φακού υψηλού βαθμού μεγέθυνσης ή ενός κατάλληλου αντικειμενικού φακού μικροσκοπίου (5), που μπορεί να μετακινηθεί κατά μήκος του άξονα της δέσμης (Ζ- διεύθυνση), ώστε να παρέχει ρυθμιζόμενη εστίαση και να ελέγχεται έτσι το μέγεθος της διαμέτρου της δέσμης Laser, και κατά συνέπεια, η φυσική διάσταση / πάχος των γραμμών του πλέγματος. Η καλυπτρίδα (7) τοποθετείτε σε ένα κατάλληλο σύστημα στήριξης και συγκράτησης και προσαρμόζεται ακολούθως πάνω σε μία τράπεζα κίνησης (6) τριών ανεξάρτητων αξόνων ΧΥΖ, η κίνηση της οποίας ελέγχεται από ηλεκτρονικό υπολογιστή. The femtosecond laser recording system is schematically illustrated in Figure 6. The laser source (1) consists of a compact Fiber Optic Laser unit that produces pulses of ~350fs duration at ~1064nm wavelength in the infrared region of the spectrum. The pulse repetition rate of the Laser can be adjusted from a single pulse to a frequency of 1MHz according to users' requirements. The Laser beam (3) passes through a power control system (2), which may be an adjustable optical attenuator in order to adjust the power level of the Laser beam to the required level. The Laser beam (3) is reflected by an optical mirror (4) in order to direct it to the desired aiming position where the cover to be written on the grid is located. The laser beam is properly focused by means of a high-magnification optical lens or a suitable microscope objective lens (5), which can be moved along the beam axis (Z-direction) to provide adjustable focus and thereby control the size of the laser beam. diameter of the Laser beam, and consequently, the physical dimension / thickness of the grid lines. The cover (7) is placed in a suitable support and retention system and is then adjusted on a motion table (6) of three independent XYZ axes, the movement of which is controlled by a computer.
Η κίνηση της τράπεζας (6) οδηγείται από ηλεκτρονικό υπολογιστή ελεγχόμενο από κατάλληλα προσαρμοσμένο λογισμικό που επιτρέπει τη δημιουργία αυθαίρετων γεωμετρικών δομών. Με βάση τον ανεπτυγμένο κώδικα, είναι δυνατόν ο έλεγχος της ταχύτητας και της κίνησης της τράπεζας χρησιμοποιώντας κατάλληλες εξισώσεις μοντελοποίησης. The movement of the bank (6) is driven by an electronic computer controlled by suitably adapted software that allows the creation of arbitrary geometric structures. Based on the developed code, it is possible to control the speed and motion of the bank using appropriate modeling equations.
Ο ακριβής έλεγχος των χαρακτηριστικών και παραμέτρων της άμεσης εγγραφής με Laser, όπως η ενέργεια παλμού, συχνότητα επανάληψης παλμών, χρόνος έκθεσης, η εστίαση της δέσμης Laser, η πυκνότητα οπτικής ισχύος και συνολική παρεχόμενη οπτική ενέργεια Laser, μπορεί να επιτευχθεί τόσο με τον έλεγχο οπτικής ισχύος / εξασθένησης της δέσμης, το βάθος εστίασης δέσμης καθώς και την ταχύτητα μετακίνησης του στόχου σε σχέση με τη στάσιμη δέσμη εγγραφής Laser. Precise control of direct laser recording characteristics and parameters, such as pulse energy, pulse repetition rate, exposure time, laser beam focus, optical power density, and total delivered laser optical energy, can be achieved both by optical control beam power / attenuation, beam focus depth as well as target movement speed relative to the stationary laser recording beam.
Οι προαναφερθείσες παράμετροι ελέγχου των συνθηκών εγγραφής Laser επιτρέπουν τον έλεγχο των εγγεγραμμένων δομών, και οι οποίες στην παρούσα περίπτωση είναι πλέγματα, όσον αφορά στα γεωμετρικά, οπτικά χαρακτηριστικά καθώς και στα χαρακτηριστικά που περιγράφουν την ποιότητα της τροποποιημένης επιφάνειας. Αυτό επιτυγχάνεται με τη δυνατότητα πλήρους προσαρμογής του πάχους, του βάθος, και του πλάτους των γραμμών του πλέγματος επιτρέποντας έτσι την επίτευξη των βέλτιστων επιθυμητών χαρακτηριστικών των γραμμών του πλέγματος όσο αφορά στα κύρια χαρακτηριστικά διαστάσεων και οπτικής διαφάνειας. The aforementioned control parameters of the Laser recording conditions allow control of the recorded structures, which in the present case are grids, in terms of geometrical, optical characteristics as well as characteristics describing the quality of the modified surface. This is achieved by being able to fully adjust the thickness, depth, and width of the grid lines thus allowing the achievement of the optimal desired characteristics of the grid lines as far as the main characteristics of dimensions and optical transparency are concerned.
Η επιτευχθείσα προσαρμόσιμη ποιότητα, το πλάτος και τη διαφάνεια των γραμμών του αποτυπωμένου πλέγματος διασφαλίζουν ότι οι εν λόγω γραμμές διαμερισματοποιούν το χώρο του πλακιδίου χωρίς ωστόσο να καλύπτουν και να αποκρύπτουν λόγω του αλληλοεπικαλυπτόμενου, με το επίχρισμα, φυσικού πλάτους τους, οποιαδήποτε ζωτικής σημασίας κυτταρολογική ή γενικότερα βιολογικής φύσης πληροφορία. The achieved customizable quality, width and transparency of the lines of the imprinted grid ensure that said lines compartmentalize the space of the slide without, however, covering and obscuring, due to their overlapping physical width with the smear, any vital cytological or information of a biological nature in general.
Κατασκευάζοντας στην πράξη ένα μεγάλο αριθμό ορθογώνιων πλεγμάτων με ευρέως διαφορετικά χαρακτηριστικά επετράπη η επίδειξη ενός ενδεικτικού, αν και όχι εξαντλητικού και πλήρους, συνόλου πλεγμάτων παρέχοντας χρήσιμες κατευθύνσεις για την παραγωγή βελτιστοποιημένων πλεγμάτων. Κατά τη διαδικασία κατασκευής η ταχύτητα μετακίνησης της τράπεζας στους οριζόντιους X και Υ άξονες κυμαινόταν από 50μm/sec έως 1 cm/sec. Η παρεχόμενη στο στόχο προς εγγραφή ροή οπτικής ενέργειας κυμαινόταν από 5J/cm<2>έως 500J/cm<2>. Ρυθμίζοντας τα χαρακτηριστικά εγγραφής, το πάχος των αποτυπωμένων γραμμών του πλέγματος κυμαινόταν ενδεικτικά από 5μm έως 500μm. Constructing in practice a large number of orthogonal meshes with widely different characteristics allowed the demonstration of an indicative, although not exhaustive and complete, set of meshes providing useful directions for the production of optimized meshes. During the manufacturing process, the speed of moving the table in the horizontal X and Y axes varied from 50μm/sec to 1 cm/sec. The optical energy flux supplied to the recording target ranged from 5J/cm<2> to 500J/cm<2>. By adjusting the recording characteristics, the thickness of the imprinted grid lines ranged from 5μm to 500μm indicatively.
Οι χρησιμοποιούμενες καλυπτρίδες για το παράδειγμα επίδειξης κατασκευής πλεγμάτων, απεικονίζονται σχηματικά στο Σχήμα 2. Είναι εμπορικά διαθέσιμες καλυπτρίδες μήκους (1), 50mm, πλάτους (2) 24mm και πάχους 0,5mm και είναι κατασκευασμένες από γυαλί βόριο-πυριτικής (borosilicate glass) σύνθεσης. The coverslips used for the mesh fabrication demonstration example are schematically illustrated in Figure 2. They are commercially available coverslips of length (1), 50mm, width (2) 24mm and thickness 0.5mm and are made of borosilicate glass composition .
Στο Σχήμα 1 παρουσιάζεται η σχηματική διάταξη του παραγόμενου πρωτότυπου πλέγματος σε αυτές τις συμβατικές καλυπτρίδες. Αυτό το πρωτότυπο πλέγμα αποτελείται από εβδομήντα δύο (n=72) τετραγωνικές περιοχές κατανεμημένα σε 12 στήλες και 6 σειρές. Κάθε τετράγωνο τμήμα (3) έχει μια τυπική επιφάνειας 4mm x 4mm που ισούται με 16mm . Figure 1 shows the schematic layout of the produced prototype grid on these conventional coverslips. This prototype grid consists of seventy two (n=72) square areas distributed in 12 columns and 6 rows. Each square section (3) has a standard area of 4mm x 4mm which equals 16mm.
Στο τέλος της τεχνικής διαδικασίας αποτύπωσης ένα σύνολο είκοσι (n=20), καλυπτρίδων με ενσωματωμένα πλέγματα αναφοράς και βαθμονόμησης (ΠΑΒ) κατασκευάστηκαν επιτυχώς. At the end of the technical process of imprinting a set of twenty (n=20), coverslips with built-in reference and calibration grids (PAGs) were successfully fabricated.
Η προσαρμογή και η χρήση αυτών των καλυπτρίδων με τα ενσωματωμένα πλέγματα ΠΑΒ υλοποιήθηκε σε τυπικά ΠΑΠ ΤΕΣΤ καθώς και σε ΠΑΠ ΤΕΣΤ υγρής φάσης και ακολούθως τα αποτελέσματα αξιολογήθηκαν μέσω εκτεταμένης στατιστικής ανάλυσης. Με βάση τα αποτελέσματα αυτά επεδείχθη η αξιοπιστία και η αποτελεσματικότητα της προτεινόμενης τεχνικής. Adaptation and use of these coverslips with embedded PAB grids was implemented in standard PAB TEST as well as liquid phase PAB TEST and then the results were evaluated through extensive statistical analysis. Based on these results, the reliability and effectiveness of the proposed technique was demonstrated.
Για τους σκοπούς επίδειξης της εφεύρεσης, χρησιμοποιήθηκαν εκατό (n=100) πλακίδια κολποτραχηλικών επιχρισμάτων (ΤΕΣΤ ΠΑΠ), χρωσμένα με τη χρώση κατά Παπανικολάου - ΠΑΠ. Αυτές οι περιπτώσεις κάλυψαν ένα ευρύ φάσμα παθολογικών κολπο-τραχηλικών αλλοιώσεων με βάση το σύστημα ταξινόμησης ορολογίας κατά BETHESDA 2001 (TBS) [4] περιλαμβάνοντας τις κυτταρολογικές διαγνώσεις ASCUS/ASC-H/LGSIL/HGSIL/AGC/INSITU ADENOCA/ADENOCA. For the purposes of demonstrating the invention, one hundred (n=100) pap smears (PAP TEST) were used, stained with the Papanicolaou stain - PAP. These cases covered a wide range of pathological cervical lesions based on the BETHESDA 2001 serology classification system (TBS) [4] including the cytological diagnoses ASCUS/ASC-H/LGSIL/HGSIL/AGC/INSITU ADENOCA/ADENOCA.
Η διαδικασία της σάρωσης των πλακιδίων διενεργήθηκε μέσω συμβατικού μικροσκοπίου φωτεινού πεδίου με βαθμό μεγέθυνσης 10Χ, ή 40Χ, χρησιμοποιώντας τόσο τυπικές συμβατικές καλυπτρίδες (ΤΚ) όσο και καλυπτρίδες ολοκληρωμένες με αποτυπωμένα τετραγωνικά πλέγματα (ΠΚ) έτσι ώστε να είναι δυνατή η διενέργεια μία συγκριτικής μελέτης που θα επέτρεπε την επίδειξη και την επικύρωση των αναμενόμενων βελτιωμένων αποτελεσμάτων στην διαδικασία σάρωσης με τη χρήση των νέων προτεινόμενων καλυπτρίδων με πλέγματα (ΠΚ). The process of scanning the slides was carried out through a conventional bright field microscope with a magnification of 10X, or 40X, using both standard conventional coverslips (TC) and coverslips integrated with imprinted square grids (PC) so that a comparative study could be carried out that would allow the demonstration and validation of the expected improved results in the scanning process using the new proposed grid coverslips (GCCs).
Τα Σχήματα 7 και 8 αποτυπώνουν δύο χαρακτηριστικές εικόνες μικροσκοπίου (σε διαφορετικές μεγεθύνσεις) όταν γίνεται χρήση μιας καλυπτρίδας με πλέγμα (ΠΚ), απεικονίζοντας έτσι τον τρόπο χωρικής διαμερισματοποίησης της εικόνας του επιχρίσματος όταν ο μικροσκόπος εστιάζει σε μία περιορισμένη περιοχή του πλακιδίου. Figures 7 and 8 capture two typical microscope images (at different magnifications) when using a grid coverslip (PC), thus illustrating how the smear image is spatially compartmentalized when the microscope is focused on a limited area of the slide.
ΕΙΔΙΚΗ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ - ΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ ΤΗΣ ΕΦΕΥΡΕΣΗΣ SPECIAL CASE OF APPLICATION - ADVANTAGES OF THE INVENTION
Το σύνολο των περιπτώσεων (n=100) εξετάστηκε από έναν υψηλής επιδεξιότητας και πιστοποιημένο ειδικό Κυτταρολόγο μέσω χρήσης συμβατικής τεχνικής με τυπικές καλυπτρίδες (ΤΚ) καθώς επίσης και με χρήση καλυπτρίδων με πλέγμα (ΠΚ). Η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε καθορισμένες συνθήκες ενός περιορισμένου χρονικά πλαισίου διαθέσιμου για την αξιολόγηση του κάθε δείγματος με σκοπό να εξομοιωθεί η "πίεση" / φόρτος της εργασίας και η σχετιζόμενη παραγωγικότητα κάτω από αυτό το συγκεκριμένο χρονικό περιορισμό. Στην περίπτωση αυτή επιλέχθηκε ένα διαφορετικό χρονικό πλαίσιο εξέτασης και ειδικότερα τέθηκε ως πέντε (5) λεπτά της ώρας (5min) ανά πλακίδιο με συμβατική καλυπτρίδα (ΤΚ) και τέσσερα (4) λεπτά της ώρας (4min) ανά πλακίδιο με χρήση καλυπτρίδας με πλέγμα (ΠΚ) . All cases (n=100) were examined by a highly skilled and certified specialist Cytologist using conventional technique with standard coverslips (TC) as well as using mesh coverslips (PC). The study was conducted under defined conditions of a limited time frame available for the evaluation of each sample in order to simulate the "pressure" / workload and related productivity under this specific time constraint. In this case a different examination time frame was chosen and in particular it was set as five (5) minutes per hour (5min) per tile with a conventional coverslip (TC) and four (4) minutes per hour (4min) per tile using a mesh coverslip ( PK).
Επιλέχθηκε να ακολουθηθεί αυτή η μέθοδος (ένα λεπτό της ώρας λιγότερο για την περίπτωση χρήσης καλυπτρίδας με πλέγμα) διότι ο συνδυασμός της αξιόπιστης διάγνωσης και του μικρότερου χρόνου μικροσκόπησης χαρακτηρίζει τον ιδανικό, επιθυμητό συνδυασμό της κυτταρολογικής μικροσκόπησης παγκοσμίως όσον αφορά τη διαχείριση διαγνωστικών τεχνικών ΤΕΣΤ ΠΑΠ. It was chosen to follow this method (one minute of an hour less for the case of using a mesh coverslip) because the combination of reliable diagnosis and shorter microscopy time characterizes the ideal, desirable combination of cytological microscopy worldwide in the management of Pap smear diagnostic techniques.
Μέσω της επακόλουθης εκτενούς στατιστικής ανάλυσης και της ποσοτικοποίησης των αποτελεσμάτων με τη χρήση του συντελεστή ελέγχου συνάφειας k (Cohen's "kappa" coefficient) αξιολογήθηκε το επίπεδο της συμφωνίας των αποτελεσμάτων των δύο διαφορετικών μεθόδων σε σχέση με τα αποτελέσματα των βιοπτικών μελετών. Through the subsequent extensive statistical analysis and the quantification of the results using the correlation control coefficient k (Cohen's "kappa" coefficient) the level of agreement of the results of the two different methods in relation to the results of biopsy studies was evaluated.
Σύμφωνα με τα διαγνωστικά ευρήματα, στην ομάδα των ASCUS περιστατικών (n=Τ2), η χρήση της πλατφόρμας πλεγμάτων αναφοράς και βαθμονόμησης (ΠΑΒ) μέσω της χρήσης καλυπτρίδων ΠΚ, οδήγησε σε αύξηση του αριθμού των παθολογικών κυττάρων τα οποία ανιχνεύθηκαν από το μικροσκόπιο (34 vs 54) και επίσης οδήγησε σε μία αναβαθμισμένη, περισσότερο αξιόπιστη διάγνωση σε τέσσερα από αυτά (LGSIL σε 3/12 και HGSIL σε 1/12, αντίστοιχα). Η βιοψία επιβεβαίωσε απόλυτα τα βελτιωμένα αυτά αποτελέσματα (kappa=l). According to the diagnostic findings, in the group of ASCUS cases (n=T2), the use of the reference and calibration grid (PAB) platform through the use of PK coverslips, led to an increase in the number of pathological cells detected by the microscope (34 vs 54) and also led to an upgraded, more reliable diagnosis in four of them (LGSIL in 3/12 and HGSIL in 1/12, respectively). Biopsy completely confirmed these improved results (kappa=l).
Όσον αφορά τις ομάδες παθολογικών περιστατικών ASC-H (n=4) και AGC (n=4), η χρήση των καλυπτρίδων με πλέγμα (ΠΚ) οδήγησε επίσης σε αύξηση του αριθμού των εντοπιζόμενων παθολογικών κυττάρων (33 vs 45) και επίσης οδήγησε σε τελική διάγνωση τα 3/4 HGSIL και 2/4 in situ / AdenoCa, όπως κατέδειξε και η βιοψία. Regarding the ASC-H (n=4) and AGC (n=4) pathological case groups, the use of mesh coverslips (PC) also led to an increase in the number of detectable pathological cells (33 vs 45) and also resulted in final diagnosis 3/4 HGSIL and 2/4 in situ / AdenoCa, as demonstrated by the biopsy.
Στην ομάδα των περιστατικών LGSIL (n=70), η χρήση της πλατφόρμας πλεγμάτων ΠΑΒ (δηλαδή καλυπτρίδων με πλέγμα -ΠΚ) παρείχε μια βελτιωμένη κυτταρολογική διάγνωση σε 7/70 πλακίδια ενισχυοντας την ικανότητα του μικροσκόπου να αναγνωρίζει ειδικά κύτταρα τύπου HGSIL συνδυασμένα με τα άλλα τύπου LGSIL (241 vs 325). In the LGSIL case group (n=70), the use of the PAB grid platform (i.e. -PC grid coverslips) provided an improved cytologic diagnosis in 7/70 slides by enhancing the microscope's ability to identify specific HGSIL-type cells combined with the other type LGSIL (241 vs 325).
Επίσης, όσον αφορά στην ομάδα της διάγνωσης HGSIL, επιτεύχθηκε μια απόλυτη ταύτιση συσχετίζοντας τη περίπτωση χρήσης συμβατικών καλυπτρίδων (ΤΚ) με καλυπτρίδες με πλέγμα -ΠΚ (kappa=1), αλλά ο αριθμός των διαγνωστικών κυττάρων υπήρξε ξανά στατιστικά σημαντικά αυξημένος (p=0.015) στην τελευταία (30 vs 63). Also, with regard to the HGSIL diagnosis group, an absolute match was achieved by associating the case of using conventional coverslips (TC) with -PC mesh covers (kappa=1), but the number of diagnostic cells was again statistically significantly increased (p=0.015 ) in the latter (30 vs 63).
Τα αποτελέσματα της στατιστικής ανάλυσης καταδεικνύουν ότι η μικροσκόπηση διάρκειας 4-λεπτών ανά πλακίδιο με τη χρήση της πλατφόρμας πλέγματος ΠΑΒ (καλυπτρίδες ΠΚ) είναι σαφώς περισσότερο αποδοτική στην ανίχνευση ενός μεγαλύτερου αριθμού παθολογικών κυττάρων σε σχέση με τη συμβατική διάρκειας 5- λεπτών μικροσκόπηση με συμβατικές καλυπτρίδες ΤΚ, επιδεικνύοντας επίσης ένα εξαίρετο αποτέλεσμα στατιστικής συνάφειας σε σχέση με τα αποτελέσματα της βιοψίας (p=0.015). The results of the statistical analysis demonstrate that 4-min microscopy per slide using the PAB grid platform (PK coverslips) is clearly more efficient in detecting a greater number of pathological cells than conventional 5-min microscopy with conventional coverslips TK, also demonstrating an excellent statistical correlation result with respect to biopsy results (p=0.015).
Επιπρόσθετα, η μέση τιμή του πλήθους των νεοπλασματικών / καρκινικών κυττάρων που εντοπίζονται με τη χρήση της πλατφόρμας πλέγματος ΠΑΒ ήταν στατιστικά σημαντικά μεγαλύτερη συγκρινόμενη με τα αντίστοιχα αξιολογηθέντα με τη συμβατική τεχνική μικροσκόπησης με χρήση συμβατικών καλυπτρίδων - ΤΚ (4.87 vs 3.38), με p=0.001. Additionally, the mean value of the number of neoplastic/tumor cells detected using the PAB grid platform was statistically significantly greater compared to the corresponding ones assessed by the conventional microscopy technique using conventional coverslips - TC (4.87 vs 3.38), with p= 0.001.
Τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι η χρήση των τροποποιημένων/αναβαθμισμένων καλυπτρίδων (ΠΚ) με ενσωματωμένο το πλέγμα αναφοράς και βαθμονόμησης (ΠΑΒ) ενισχύει σημαντικά την αξιοπιστία της μικροσκόπησης στις τεχνικές ΤΕΣΤ ΠΑΠ βελτιώνοντας την ανιχνευτική ικανότητα και επιτρέποντας ταυτόχρονα τη μείωση του απαιτούμενου χρόνου εξέτασης ανά πλακίδιο. Αυτή τη νέα τεχνική με τη χρήση των πλεγμάτων αναφοράς και βαθμονόμησης ΠΑΒ, η οποία παρέχει μία βελτιωμένη δυνατότητα ανίχνευσης που επικυρώθηκε και αποδείχθηκε και μέσω εκτεταμένης στατιστικής ανάλυσης, θα μπορούσε να έχει μία ισχυρή και ανεκτίμητη απήχηση σε συγκεκριμένες διαγνωστικές τεχνικές. Η βελτίωση της αξιοπιστίας ανίχνευσης καρκινικών κυττάρων σε τεχνικές ΤΕΣΤ ΠΑΠ θα μπορούσε να μεταφρασθεί σε μια επιτυχημένη πρώιμη διάγνωση και κατά συνέπεια με ανάλογο συνεπαγόμενο αντίκτυπο σε ανθρώπινες ζωές. The results demonstrate that the use of the modified/upgraded coverslips (PC) with integrated reference and calibration grid (CRG) significantly enhances the reliability of microscopy in CAP TEST techniques by improving the detection capability while allowing a reduction in the required examination time per slide. This new technique using PAB reference and calibration grids, which provides an improved detection capability validated and demonstrated through extensive statistical analysis, could have a strong and invaluable impact on specific diagnostic techniques. Improving the reliability of cancer cell detection in Pap test techniques could translate into a successful early diagnosis and thus a corresponding consequential impact on human lives.
ΑΝΑΦΟΡΕΣ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑΣ BIBLIOGRAPHY REFERENCES
[1] F. Lopez- Alegria, D.R. Lorenzi, O.Q. Poblete, "Follow-up of women with inadequate Pap smears: a prospective cohort study", Sao Paulo Med J. 133, 20 (2015). [1] F. Lopez-Alegria, D.R. Lorenzi, O.Q. Poblete, "Follow-up of women with inadequate Pap smears: a prospective cohort study", Sao Paulo Med J. 133, 20 (2015).
[2] T. Chankong, N. Theera-Umpon, S. Auephanwiriyakul, "Automatic cervical cell segmentation and classification in Pap smears", Comput Methods Programs Biomed. 113, 539 (2014). [2] T. Chankong, N. Theera-Umpon, S. Auephanwiriyakul, "Automatic cervical cell segmentation and classification in Pap smears", Comput Methods Programs Biomed. 113, 539 (2014).
[3] M. Rosa, P. Pragasam, J. Saremian, A. Aoalin, W. Graf, A. Mohammadi, "The unsatisfactory ThinPrep® Pap Test™: analysis of technical aspects, most common causes, and recommendations for improvement", Diagn Cytopathol. 41, 588 (2013). [3] M. Rosa, P. Pragasam, J. Saremian, A. Aoalin, W. Graf, A. Mohammadi, "The unsatisfactory ThinPrep® Pap Test™: analysis of technical aspects, most common causes, and recommendations for improvement" , Diagn Cytopathol. 41, 588 (2013).
[4] D. Solomon, D. Davey, R. Kurman, A. Moriarty, D. O’Connor, M. Prey et al. [4] D. Solomon, D. Davey, R. Kurman, A. Moriarty, D. O’Connor, M. Prey et al.
"The 2001 Bethesda System: terminology for reporting results of cervical cytology", JAMA 287, 2114 (2002). "The 2001 Bethesda System: terminology for reporting results of cervical cytology", JAMA 287, 2114 (2002).
[5] L. Zhao, N. Wentzensen, R.R. Zhang, S.T. Dunn, M.A. Gold, S.S. Wang, M. [5] L. Zhao, N. Wentzensen, R.R. Zhang, S.T. Dunn, M.A. Gold, S.S. Wang, M.
Schifinan, J.L. Walker, R.E. Zuna, "Factors associated with reduced accuracy in Papanicolaou tests for patients with invasive cervical cancer", Cancer Cytopathol. 122, 694 (2014). Schiffinan, J.L. Walker, R.E. Zuna, "Factors associated with reduced accuracy in Papanicolaou tests for patients with invasive cervical cancer", Cancer Cytopathol. 122, 694 (2014).
[6] E. Tsiambas, D.N. Rigopoulos, C. Krawaritis, A.C. Lazaris, N. Kavantzas, A. [6] E. Tsiambas, D.N. Rigopoulos, C. Krawaritis, A.C. Lazaris, N. Kavantzas, A.
Niotis, T.H. Niotis, D. Tsounis, A. Karameris, E.J. Patsouris, "Chromogenic in situ hybridization analysis of EGFR gene copies in colon adenocarcinoma based on intra-operative imprints and tissue microarrays", Gastrointestin Liver Dis. 2009 18, 293 (2009). Niotis, T.H. Niotis, D. Tsounis, A. Karameris, E.J. Patsouris, "Chromogenic in situ hybridization analysis of EGFR gene copies in colon adenocarcinoma based on intra-operative imprints and tissue microarrays", Gastrointestinal Liver Dis. 2009 18, 293 (2009).
[7] E. Tsiambas, A. Karameris, C. Dervenis, A.C. Lazaris, N. Giannakou, K. [7] E. Tsiambas, A. Karameris, C. Dervenis, A.C. Lazaris, N. Giannakou, K.
Gerontopoulos, E. Patsouris, "HER2/neu expression and gene alterations in pancreatic ductal adenocarcinoma: a comparative immunohistochemistry and chromogenic in situ hybridization study based on tissue microarrays and computerized image analysis", JOP. 7, 283 (2006). Gerontopoulos, E. Patsouris, "HER2/neu expression and gene alterations in pancreatic ductal adenocarcinoma: a comparative immunohistochemistry and chromogenic in situ hybridization study based on tissue microarrays and computerized image analysis", JOP. 7, 283 (2006).
[8] L. Athanasekos, M. Vasileiadis, A. El Sachat, N.A. Vainos, and C. Riziotis, “ArF excimer laser microprocessing of polymer optical fibers for photonic sensor applications", Journal of Optics 17, 015402 (2015) [8] L. Athanasekos, M. Vasileiadis, A. El Sachat, N.A. Vainos, and C. Riziotis, "ArF excimer laser microprocessing of polymer optical fibers for photonic sensor applications", Journal of Optics 17, 015402 (2015)
[9] K. Kalli, C. Riziotis, A. Posporis, C. Markos, C. Koutsides, S. Ambran, A.S.Webb, C. Holmes, J.C. Gates, J.K. Sahu, P.G.R. Smith, "Flat fibre and femtosecond laser technology as a novel photonic integration platform for optofluidic based biosensing devices and lab-on-chip applications: current results and future perspectives", Sensors and Actuators B. Chemical 209, 1030 (2015). [9] K. Kalli, C. Riziotis, A. Posporis, C. Markos, C. Koutsides, S. Ambran, A.S. Webb, C. Holmes, J.C. Gates, J.K. Sahu, P.G.R. Smith, "Flat fiber and femtosecond laser technology as a novel photonic integration platform for optofluidic based biosensing devices and lab-on-chip applications: current results and future perspectives", Sensors and Actuators B. Chemical 209, 1030 (2015).
[10] J. Koo, P.G.R. Smith, R.B. Williams, C. Riziotis, M.C. Grossel, “UV Written waveguides using crosslinkable PMMA-based copolymers”, Optical Materials, 23, 583 (2003) [10] J. Koo, P.G.R. Smith, R.B. Williams, C. Riziotis, M.C. Grossel, “UV Written waveguides using crosslinkable PMMA-based copolymers”, Optical Materials, 23, 583 (2003)
[11] R.W. Eason S. Mailis, and C. Riziotis, “Optically Induced Refractive Index Modification in Optical Materials”, Patent Application No. W02004/010181A1 PCT/GB03/03242, GB 0217047, (International filling date 23/06/2003). [11] R.W. Eason S. Mailis, and C. Riziotis, “Optically Induced Refractive Index Modification in Optical Materials”, Patent Application No. W02004/010181A1 PCT/GB03/03242, GB 0217047, (International filing date 06/23/2003).
[12] A.K. Mairaj, C. Riziotis, A.M. Chardon, P.G.R. Smith, D.P. Sepherd, D.W. [12] A.K. Mairaj, C. Riziotis, A.M. Chardon, P.G.R. Smith, D.P. Shepherd, D.W.
Hewak, "Development of channel waveguide lasers in Nd3+-doped chalcogenide (Ga:La:S) glass through photoinduced material modification”, Applied Physics Letters 81, 3708, (2002). Hewak, "Development of channel waveguide lasers in Nd3+-doped chalcogenide (Ga:La:S) glass through photoinduced material modification", Applied Physics Letters 81, 3708, (2002).
[13] H. Ebendorff-Heidepriem, C. Riziotis, E. Taylor, "Novel photosensitive glasses", International Journal of Glass Science and Technology (Glastechnische Berichte), 75 C2, 54 (2002). [13] H. Ebendorff-Heidepriem, C. Riziotis, E. Taylor, "Novel photosensitive glasses", International Journal of Glass Science and Technology (Glastechnische Berichte), 75 C2, 54 (2002).
Claims (11)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GR20150100315A GR1008931B (en) | 2015-07-16 | 2015-07-16 | Reference and callibration grid for improved real time detection of biological entities in microscopy diagnostic techniques |
| PCT/GR2016/000032 WO2017009673A1 (en) | 2015-07-16 | 2016-07-15 | Reference and calibration grid for medical diagnostic microscopy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GR20150100315A GR1008931B (en) | 2015-07-16 | 2015-07-16 | Reference and callibration grid for improved real time detection of biological entities in microscopy diagnostic techniques |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| GR1008931B true GR1008931B (en) | 2017-01-24 |
Family
ID=56694187
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| GR20150100315A GR1008931B (en) | 2015-07-16 | 2015-07-16 | Reference and callibration grid for improved real time detection of biological entities in microscopy diagnostic techniques |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| GR (1) | GR1008931B (en) |
| WO (1) | WO2017009673A1 (en) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4415405A (en) * | 1981-08-19 | 1983-11-15 | Yale University | Method for engraving a grid pattern on microscope slides and slips |
| US5766677A (en) * | 1996-09-16 | 1998-06-16 | Dimou; George | Process for manufacturing a cover glass with a viewing field |
| US5786130A (en) * | 1995-10-20 | 1998-07-28 | Hause; Lawrence L. | Mapping method for a microscope slide |
| US20040180397A1 (en) * | 2003-03-14 | 2004-09-16 | Mao-Kuei Chang | Quantitative cell-counting slide for simultaneously satisfying multiple volumetric units |
| US20050079517A1 (en) * | 2003-06-19 | 2005-04-14 | Michael Goncharko | Controlled evaporation, temperature control and packaging for optical inspection of biological samples |
| CN203672880U (en) * | 2014-01-08 | 2014-06-25 | 陈樱 | Blood counting chamber |
| US20140255274A1 (en) * | 2013-03-08 | 2014-09-11 | Mimi J. Yao | Method of printing location markings on surfaces for microscopic research |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4190314A (en) * | 1973-07-13 | 1980-02-26 | Stephen Goldsmith | Microscope and microscope slide for cytological analysis |
| DE19952139C1 (en) * | 1999-10-28 | 2000-12-21 | Sibyll Weiner | Transparent object carrier for optical microscope has adhered transparent plastics foil providing line grid used as coordinate refernece grid for examination of microscope object |
| GB0217047D0 (en) | 2002-07-23 | 2002-08-28 | Univ Southampton | Optically induced refractive index modification in optical materials |
| US20100091364A1 (en) * | 2005-01-04 | 2010-04-15 | Pure Air Control Services, Inc. | Apparatus and method of conveying constituents |
| US20100073766A1 (en) * | 2005-10-26 | 2010-03-25 | Angros Lee H | Microscope slide testing and identification assembly |
| JP5878490B2 (en) * | 2013-02-08 | 2016-03-08 | 日本ゼオン株式会社 | Microscope observation container |
-
2015
- 2015-07-16 GR GR20150100315A patent/GR1008931B/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-07-15 WO PCT/GR2016/000032 patent/WO2017009673A1/en active Application Filing
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4415405A (en) * | 1981-08-19 | 1983-11-15 | Yale University | Method for engraving a grid pattern on microscope slides and slips |
| US5786130A (en) * | 1995-10-20 | 1998-07-28 | Hause; Lawrence L. | Mapping method for a microscope slide |
| US5766677A (en) * | 1996-09-16 | 1998-06-16 | Dimou; George | Process for manufacturing a cover glass with a viewing field |
| US20040180397A1 (en) * | 2003-03-14 | 2004-09-16 | Mao-Kuei Chang | Quantitative cell-counting slide for simultaneously satisfying multiple volumetric units |
| US20050079517A1 (en) * | 2003-06-19 | 2005-04-14 | Michael Goncharko | Controlled evaporation, temperature control and packaging for optical inspection of biological samples |
| US20140255274A1 (en) * | 2013-03-08 | 2014-09-11 | Mimi J. Yao | Method of printing location markings on surfaces for microscopic research |
| CN203672880U (en) * | 2014-01-08 | 2014-06-25 | 陈樱 | Blood counting chamber |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2017009673A1 (en) | 2017-01-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11333587B2 (en) | Analytic plates with markable portions and methods of use | |
| JP6961603B2 (en) | Methods and equipment for imaging uncut tissue specimens | |
| EP1787101B1 (en) | Laser microdissection apparatus and method | |
| CN107624159B (en) | Method and inspection system for inspecting and processing microscopic samples | |
| US8722357B2 (en) | Automated microdissection instrument | |
| CA3053009A1 (en) | Optics, device, and system for assaying | |
| US20150021496A1 (en) | Method to assist gel analysis and processing and apparatus for the same | |
| CN105358971B (en) | Laser microdissection system and inspection method for the sample containing nucleic acid | |
| EP3094404B1 (en) | Procedure for the provision of a transparent object holder with label | |
| US20190120734A1 (en) | Automated microdissection instrument | |
| EP1347284B1 (en) | Sample holder with integrated optics | |
| CN109313352A (en) | The analysis based on image of sample | |
| JP2024028276A (en) | Optical microscope system based on ergonomic field of view | |
| DE102014202860B4 (en) | Providing sample information with a laser microdissection system | |
| GR1008931B (en) | Reference and callibration grid for improved real time detection of biological entities in microscopy diagnostic techniques | |
| US20100279338A1 (en) | Cell carrier coding | |
| Tsiambas et al. | Implementation of a real‐time reference and calibration grid platform for improved screening–mapping in Pap test slides | |
| US20150370060A1 (en) | Microscope slide with etched shapes | |
| US20240077712A1 (en) | Microscope Slide and Method for Selecting the Same | |
| Riziotis et al. | Grid-based visual aid for enhanced microscopy screening in diagnostic cytopathology | |
| US11874207B2 (en) | Method for laser microdissection, laser microdissection system and computer program | |
| Nocera | Microfluidic Cryofixation for Time-correlated Live-imaging Cryo-fluorescence Microscopy and Electron Microscopy of (Caenorhabditis Elegans) | |
| Goyal et al. | Tissue Microarrays-A Review | |
| JP2003215124A (en) | Chip for gene test and method of managing chip | |
| JP2015230377A (en) | Microcavity preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PG | Patent granted |
Effective date: 20170222 |