FR3049472A1 - Method glycolipids extraction and glycolipids obtained - Google Patents

Method glycolipids extraction and glycolipids obtained Download PDF

Info

Publication number
FR3049472A1
FR3049472A1 FR1652772A FR1652772A FR3049472A1 FR 3049472 A1 FR3049472 A1 FR 3049472A1 FR 1652772 A FR1652772 A FR 1652772A FR 1652772 A FR1652772 A FR 1652772A FR 3049472 A1 FR3049472 A1 FR 3049472A1
Authority
FR
Grant status
Application
Patent type
Prior art keywords
glycolipids
phase
polar
characterized
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
FR1652772A
Other languages
French (fr)
Inventor
Clement Cellier
Jean-Baptiste Delafosse
Romain Koenig
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Oleon NV
Original Assignee
Oleon NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date

Links

Classifications

    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01DSEPARATION
    • B01D11/00Solvent extraction
    • B01D11/04Solvent extraction of solutions which are liquid
    • B01D11/0426Counter-current multistage extraction towers in a vertical or sloping position
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23DEDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A23D9/007Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils characterised by ingredients other than fatty acid triglycerides
    • A23D9/013Other fatty acid esters, e.g. phosphatides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C11ANIMAL AND VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES AND WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11BPRODUCING (PRESSING, EXTRACTION), REFINING AND PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES (e.g. LANOLIN), FATTY OILS AND WAXES, INCLUDING EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B11/00Recovery or refining of other fatty substances, e.g. lanolin, waxes

Abstract

La présente invention concerne un nouveau procédé de purification de glycolipides par extraction liquide/liquide dans lequel la première phase liquide, dite polaire, est une solution constituée principalement d'un alcool et d'eau dans lequel la matière première a été préalablement dissoute, et la seconde phase liquide, dite apolaire, est un solvant organique de faible constante diélectrique, par exemple un alcane. The present invention relates to a novel glycolipid purification process by liquid / liquid extraction in which the first liquid phase, said polar, is a solution consisting mainly of an alcohol and water wherein the raw material has been beforehand dissolved, and the second liquid phase, said apolar solvent is an organic low dielectric constant, for example an alkane. L'invention concerne également un mélange de glycolipides obtenus par ce procédé. The invention also relates to a mixture of glycolipids obtained by this process.

Description

PROCÉDÉ D'EXTRACTION DE GLYCOLIPIDES ET GLYCOLIPIDES OBTENUS GLYCOLIPIDS OF EXTRACTION PROCESS AND OBTAINED GLYCOLIPIDS

DOMAINE DE L'INVENTION FIELD OF INVENTION

La présente invention concerne un nouveau procédé de purification de glycolipides par extraction liquide/liquide dans lequel la première phase liquide, dite polaire, est une solution constituée principalement d'un alcool et d'eau dans lequel la matière première a été préalablement dissoute, et la seconde phase liquide, dite apolaire, est un solvant organique de faible constante diélectrique, par exemple un alcane. The present invention relates to a novel glycolipid purification process by liquid / liquid extraction in which the first liquid phase, said polar, is a solution consisting mainly of an alcohol and water wherein the raw material has been beforehand dissolved, and the second liquid phase, said apolar solvent is an organic low dielectric constant, for example an alkane. L'invention concerne également un mélange de glycolipides obtenus par ce procédé. The invention also relates to a mixture of glycolipids obtained by this process.

ETAT DE LA TECHNIQUE L'essor des biotechnologies blanches présente de nombreuses opportunités pour le développement d'une nouvelle chimie et de nouvelles applications basées sur la transformation de matières premières renouvelables. STATE OF THE ART The development of white biotechnology offers many opportunities for the development of a new chemistry and new applications based on the transformation of renewable raw materials. Les biotensioactifs formés à partir de matières premières simples telles qu'huiles végétales ou sucres offrent des performances similaires voire supérieures à celles des tensio-actifs d'origine fossile, tout en présentant un impact environnemental et une toxicité plus faibles, et une meilleure biodégradabilité. The biosurfactants formed from simple raw materials like vegetable oils or sugars offer performance similar or better than surfactants fossil while presenting an environmental impact and lower toxicity and better biodegradability. C'est donc tout naturellement que les acteurs du domaine présentent depuis plusieurs années de nouveaux résultats sur la synthèse de ces biotensioactifs par voie fermentaire ou enzymatique, et sur la caractérisation de leurs performances à l'état purifié, que ce soit pour des applications en cosmétique, agriculture, environnement, ou pharmaceutiques. It is therefore natural that the field players present for several years new results on the synthesis of these biosurfactants by fermentation or enzymatically, and the characterization of their performance in the purified state, either for applications in cosmetics, agriculture, environment, or pharmaceutical.

Entre ces deux aspects relatifs à la synthèse d'une part et à l'application d'autre part, la purification des biotensioactifs est un maillon indispensable mais paradoxalement négligé à date. Between these two aspects of the synthesis of a hand and the other application, purification of biosurfactants is a necessary but paradoxically neglected Date link. Les travaux connus rappelés ci-après ne font état d'aucun procédé de purification applicable à une échelle industrielle, qui offre à la fois un rendement et une qualité élevés, qui soit associé à des solvants dont les contraintes d'utilisation sont acceptables par les réglementations sanitaires et environnementales, et qui soit basé sur l'utilisation de technologies de séparation capacitives et robustes. The work known summarized below do not indicate any purification process applicable on an industrial scale, which offers both a high yield and quality, which is associated with solvent whose use constraints are acceptable to health and environmental regulations, which is based on the use of capacitive and robust separation technologies. Cela est pourtant le résultat indispensable pour permettre le développement économique de ces biotensioactifs. This is however the essential result to enable the economic development of these biosurfactants.

La purification des glycolipides est d'une complexité technique élevée, du fait de la présence d'autres lipides à séparer, tels que acides gras, triglycérides, esters d'acides gras, avec une faible différence entre les propriétés physico-chimiques des impuretés lipidiques et des glycolipides. Purification of glycolipids is of high technical complexity, due to the presence of other lipids to be separated, such as fatty acids, triglycerides, fatty acid esters with a small difference between the physicochemical properties of the lipid impurities and glycolipids. Cette complexité est d'autant plus grande que le procédé de synthèse de la matière première brute riche en glycolipides est le résultat d'un procédé de transformation enzymatique ou de fermentation, ce qui occasionne la formation de nombreux co-produits, notamment responsables de couleur, et nécessite la présence de sels, de divers nutriments, et de biomasse. This complexity is all the greater as the synthesis method of the first raw material rich in glycolipids is the result of an enzymatic conversion process or fermentation, which causes the formation of many by-products, including color charge and requires the presence of salts, various nutrients, and biomass. Les techniques disponibles pour le fractionnement des lipides comptent notamment l'évaporation et en particulier l'évaporation sous très grand vide, comme la distillation court trajet, les procédés membranaires tels que la nanofiltration, la cristallisation ou la précipitation, les techniques basées sur la chromatographie et l'extraction liquide-liquide. Available techniques for the fractionation of lipids have particular evaporation and in particular evaporated under great void, such as short-path distillation, membrane processes such as nanofiltration, crystallization or precipitation techniques based upon chromatography and liquid-liquid extraction. L'exploitation de l'extraction liquide-liquide est compliquée par les propriétés tensio-actives des glycolipides, et par le caractère hydrophobe de la molécule. The operation of the liquid-liquid extraction is complicated by the surfactant properties glycolipids, and the hydrophobic character of the molecule. Dans ces conditions un simple mélange d'eau et de solvant organique ne peut pas être utilisé, car il ne mènerait à aucun fractionnement visible entre les différentes classes de lipides, voire en fonction des quantités impliquées pourrait aboutir à la formation de deux phases liquides émulsionnées difficilement séparables. Under these conditions a simple mixture of water and organic solvent can not be used because it would lead to no visible fractionation between the various lipid classes, or even depending on the quantities involved could lead to the formation of two liquid phases emulsified difficult to separate. Il est donc nécessaire de définir un mélange de deux solvants organiques qui ne soient pas totalement miscibles entre eux dans les conditions du procédé, pour assurer une séparation sélective entre les lipides et garantir l'absence d'émulsion stable. It is therefore necessary to define a mixture of two organic solvents which are not completely miscible with each other under the conditions of the process for selective separation of lipids and guarantee the absence of stable emulsion. L'extraction des lipides par deux solvants organiques est décrite à l'échelle du laboratoire notamment pour la caractérisation d'échantillons de tissus ou produits naturels, notamment la méthode dite de Foich (Foich J. et al., A simple method forthe isolation and purification of total lipids from animal tissues). Lipid extraction by two organic solvents is described in the laboratory scale especially for the characterization of tissue samples or natural products, in particular the method called Foich (Foich J. et al., A Simple method forthe isolation and purification of total lipids from animal tissue). Mais la complexité du procédé qui comporte de nombreuses étapes d'extraction et la nature et les quantités de solvants employés (plus de 20 fois la masse de lipides à extraire) ne permet pas d'envisager une exploitation industrielle. But the complexity of the process that has many steps of extraction and the nature and amounts of solvents used (more than 20 times the mass of lipid extract) does not consider industrial exploitation. L'extraction de lipides polaires par séparation liquide/liquide avec un mélange éthanol/eau (ratio massique éthanol/eau supérieur à 6) et de l'éther de pétrole est également connue (Galanos DS et al. Isolation of polar lipids from triglycéride mixtures). The extraction of polar lipids by liquid / liquid separation with ethanol / water (mass ratio of ethanol / water greater than 6) and petroleum ether is also known (DS Galanos et al. Isolation of polar lipids from triglyceride mixtures ). Toutefois, ce procédé décrit à l'échelle du laboratoire ne permet pas une purification des lipides polaires acceptable pour une exploitation industrielle, avec une pureté de 50 à 75 % environ (Hartman L., Comparison oftwo methods forthe séparation of polar from nonpolar lipids). However, the process described in laboratory scale does not allow an acceptable purification of polar lipids for industrial exploitation, with a purity of 50 to about 75% (Hartman L. Comparison oftwo methods forthe separation of polar from nonpolar lipids) .

Plus spécifiquement pour la purification des glycolipides, l'extraction liquide-liquide a été décrite dans la plupart des cas avec un solvant de polarité intermédiaire, tel l'acétate d'éthyle ou le Methyl-ter-Butyl Ether (MTBE), pour extraire les glycolipides du moût de fermentation. More specifically for the purification of the glycolipids, the liquid-liquid extraction has been described in most cases with an intermediate polarity solvent, such as ethyl acetate or Methyl-t-Butyl Ether (MTBE) to extract glycolipids of the fermentation broth. Des exemples sont donnés par U. Rau et al. Examples are provided by U. Rau et al. (« Downstream Processing of Mannosylerythritol lipids produced by Pseudozyma aphidis »), Smyth TJP et al. ( "Downstream Processing of Mannosylerythritol lipids produced by Pseudozyma aphidis") TJP Smyth et al. (« Isolation and Analysis of Low Molecular Weight Microbial Glycolipids), et Hubert J. et al. ( "Isolation and Analysis of Low Molecular Weight Microbial Glycolipids) and Hubert J. et al. (« New perspectives for microbial glycolipid fractionation and purification processes »). ( "New prospects for microbial glycolipid fractionation and purification processes"). Ces procédés de laboratoire restent complexes, nécessitant de nombreuses étapes, avec notamment l'élimination nécessaire du solvant d'extraction avant de pouvoir procéder à la purification, voire l'emploi de technologies trop complexes pour un procédé industriel, comme la chromatographie de partage centrifuge (Hubert J. et al.). These laboratory procedures remain complex, requiring numerous steps, including the removal of the extraction solvent required before you can proceed to the purification or the use of too complex technologies for an industrial process, such as centrifugal partition chromatography (Hubert, J. et al.). En outre, les rendements obtenus sont très faibles, limité à 8% pour Rau & Furthermore, the yields are very low, limited to 8% for Rau & amp; al. al. (2005a), ce qui exclut toute extrapolation à échelle industrielle. (2005a), which excludes any extrapolation to industrial scale.

La demande WO 2004/020647 décrit un procédé de préparation de mannosylérythritol lipides (MELs) dans lequel l'isolation du produit à partir de la biomasse se fait par simple dissolution dans l'éthanol à partir des fractions solides et liquides susceptibles de contenir les MELs, puis évaporation de l'éthanol, c'est à dire sans purification particulière pour éliminer des impuretés hydrophobes résiduelles comme les triglycérides ou les acides gras. WO 2004/020647 discloses a mannosylérythritol lipid preparation process (MELs) wherein the isolation of the product from the biomass is done by simple dissolution in ethanol from the solid and liquid fractions may contain the MELs and evaporation of the ethanol, ie without specific purification to remove residual hydrophobic impurities such as triglycerides or fatty acids. De même, la demande JP 2007-252280 décrit un procédé d'isolation de MELs sous formes de billes solides à partir du moût de fermentation et une teneur en acides gras élevée dans le produit récupéré. Likewise, JP 2007-252280 discloses a method for isolating MELs in the form of solid beads from the fermentation broth and a high fatty acid content in the recovered product. Un procédé d'extraction de glycolipides à partir d'une huile végétale est décrit dans la demande EP 1 027 413. Là aussi, la teneur en lipides polaires dans l'extrait obtenu ne dépasse pas 50%, dont moins de 80% de glycolipides. An extraction process of glycolipids from a vegetable oil is disclosed in EP 1 027 413. Again, the polar lipid content in the extract obtained does not exceed 50%, including less than 80% glycolipids . Enfin les techniques de fractionnement de glycolipides par extraction au dioxyde de carbone dans des conditions supercritiques sont décrites dans la demande EP 1 222 009. La méthode comprend toutefois un nombre d'étapes trop important pour la purification industrielle de biosurfactants purifiés, et la phase extraite est très diluée, à moins de 1% de solutés, malgré une pression opératoire extrêmement élevée de 250 bar. Finally, the extraction of glycolipids fractionation techniques with carbon dioxide under supercritical conditions are described in EP 1 222 009. However, the method comprises a number of steps too large for industrial purification purified biosurfactants, and the extract phase is very dilute, less than 1% of solutes, despite an extremely high operating pressure of 250 bar.

Il existe un besoin de pouvoir disposer d'un procédé robuste et efficace pour l'obtention de glycolipides de haute pureté, susceptible d'être exploité industriellement. There is a need to have a robust and efficient method for obtaining high purity glycolipids, which can be exploited industrially.

EXPOSE DE L'INVENTION DISCLOSURE OF INVENTION

La présente invention un nouveau procédé de purification de glycolipides par extraction liquide/liquide à partir d'une matière première comprenant les glycolipides à purifier et des impuretés hydrophobes de type triglycérides et acides gras ou dérivés d'acides gras, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives de i. The present invention a new glycolipid purification process by liquid / liquid extraction from a raw material comprising purifying glycolipids and hydrophobic impurities type triglycerides and fatty acids or fatty acid derivatives, characterized in that comprises the sequential steps of i. dissoudre la matière première dans une phase polaire comprenant au moins un alcool en C2-C3 et de l'eau pour dissoudre les glycolipides et les impuretés hydrophobes, puis ii. dissolving the raw material in a polar phase comprising at least one C2-C3 alcohol and water to dissolve the glycolipid and hydrophobic impurities and then ii. mise en contact de la phase polaire avec une phase apolaire comprenant un solvant organique apolaire non miscible à la phase polaire pour permettre le transfert des impuretés hydrophobes dans la phase apolaire, puis iii. contacting the polar phase with an apolar phase comprising an apolar organic solvent immiscible with the polar phase to allow the transfer of hydrophobic impurities in the apolar phase, and then iii. séparation des phases polaires et apolaires et récupération de la phase polaire purifiée, puis iv. separation of the polar and apolar phases and recovering the purified polar phase, then iv. isolation des glycolipides de la phase polaire purifiée. glycolipids isolation of the purified polar phase.

La méthode selon l'invention est particulièrement appropriée pour la purification de mannosylérythritol lipides (MELs) comme glycolipides, en particulier obtenus par fermentation, plus particulièrement obtenus par fermentation d'huiles végétales, par exemple huile d'arachide, huile de coco, huile de colza, huile d'olive, huile de palme, huile de soja ou huile de tournesol. The method according to the invention is particularly suitable for the purification of mannosylérythritol lipids (MELs) as glycolipids, in particular obtained by fermentation, especially by fermentation of vegetable oils, for example peanut oil, coconut oil, oil of rapeseed, olive oil, palm oil, soybean oil or sunflower oil. L'invention concerne également un mélange de glycolipides obtenus par ce procédé, en particulier dont les caractéristiques sont les suivantes, les teneurs étant exprimées en masse et hors eau : au moins 90 %, de préférence au moins 95% de glycolipides moins de 1%, de préférence moins de 0.2%, de triglycérides moins de 5%, de préférence moins de 3%, d'acides gras libres moins de 1000 ppm, de préférence moins de 100 ppm d'alcool en C2-C3 moins de 50 ppm, de préférence moins de 1 ppm, de solvant organique apolaire. The invention also relates to a mixture of glycolipids obtained by this process, in particular the characteristics of which are as follows, the contents being expressed by weight and out water: at least 90%, preferably at least 95% of glycolipids less than 1% , preferably less than 0.2%, triglycerides less than 5%, preferably less than 3%, free fatty acids less than 1000 ppm, preferably less than 100 ppm C2-C3 alcohol of less than 50 ppm, preferably less than 1 ppm, apolar organic solvent.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

La présente invention concerne un nouveau procédé de purification de glycolipides par extraction liquide/liquide à partir d'une matière première comprenant les glycolipides à purifier et des impuretés hydrophobes de type triglycérides et acides gras caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives de i. The present invention relates to a novel glycolipid purification process by liquid / liquid extraction from a raw material comprising purifying glycolipids and hydrophobic impurities type triglycerides and fatty acids characterized in that it comprises the successive steps of i . dissoudre la matière première dans une phase polaire comprenant au moins un alcool en C2-C3 et de l'eau pour dissoudre les glycolipides et des impuretés hydrophobes, puis il. dissolving the raw material in a polar phase comprising at least one C2-C3 alcohol and water to dissolve the glycolipid and hydrophobic impurities and then. mise en contact de la phase polaire avec une phase apolaire comprenant un solvant organique apolaire non miscible à la phase polaire pour permettre le transfert des impuretés hydrophobes dans la phase apolaire, puis iii. contacting the polar phase with an apolar phase comprising an apolar organic solvent immiscible with the polar phase to allow the transfer of hydrophobic impurities in the apolar phase, and then iii. séparation des phases polaires et apolaires et récupération de la phase polaire purifiée, puis iv. separation of the polar and apolar phases and recovering the purified polar phase, then iv. isolation des glycolipides de la phase polaire purifiée. glycolipids isolation of the purified polar phase.

De manière préférentielle, l'alcool en C2-C3 est choisi parmi l'éthanol, l'isopropanol et leurs mélanges en toutes proportions, avantageusement l'éthanol étant majoritaire dans le mélange éthanol/isopropanol, plus préférentiellement un mélange éthanol/isopropanol comprenant plus de 70% d'éthanol, avantageusement plus de 80 % d'éthanol, préférentiellement plus de 90 % d'éthanol. Preferably, the alcohol C2-C3 is selected from ethanol, isopropanol and mixtures thereof in all proportions, preferably ethanol being predominant in the mixture ethanol / isopropanol, more preferably an ethanol / isopropanol mixture comprising more 70% ethanol, advantageously more than 80% ethanol, preferably more than 90% ethanol. Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, l'alcool est de l'éthanol pur. According to a particular embodiment of the invention, alcohol is pure ethanol.

Sauf indication contraire, les pourcentages sont exprimés en poids. Unless otherwise indicated, percentages are by weight.

De préférence, le rapport pondéral alcool/eau dans la phase polaire va de 2/1 à 5/1, en particulier de 2,5/1 à 4/1. Preferably, the weight ratio alcohol / water ratio in the polar phase ranges from 2/1 to 5/1, especially 2.5 / 1 to 4/1. L'homme du métier saura déterminer la teneur en eau dans la phase polaire employée dans l'étape i. The skilled artisan will determine the water content in the polar phase used in step i. pour permettre à la fois une bonne dissolution des glycolipides, puis pour favoriser un bon transfert des impuretés hydrophobes dans la phase apolaire. to allow both good dissolution glycolipids, and to promote good transfer of hydrophobic impurities in the non-polar phase. Il tiendra compte notamment de la présence éventuelle d'eau dans la matière première. It will take into account in particular the possible presence of water in the raw material. L'étape I. de dissolution des glycolipides entraîne également la dissolution d'impuretés hydrophobes comme les triglycérides et les acides gras (dits acides gras libres). Step I. of dissolution of the glycolipids also cause the dissolution of hydrophobic impurities such as triglycerides and fatty acids (so-called free fatty acids). Les méthodes de dissolution sont bien connues de l'homme du métier. The dissolution methods are well known in the art. La dissolution peut être réalisée de façon continue ou de façon discontinue, par ajout du solvant de dilution à la matière première à dissoudre, ou inversement. The dissolution may be carried out continuously or batchwise, by addition of dilution solvent to the raw material to dissolve, or vice versa. Le mélange des deux flux sera mis en oeuvre par exemple dans une cuve agitée équipée de mobiles d'agitation assurant un écoulement axial ou radial, mais de préférence axial ou encore plus préférentiellement un écoulement mixte grâce à l'utilisation de mobiles adaptés, par exemple pales inclinées à 45°, ou par l'utilisation de deux mobiles superposés, l'un axial et l'autre radial. The mixture of the two flows will be implemented for example in a stirred vessel equipped with agitator impellers providing an axial or radial flow, but preferably axially or even more preferably a mixed flow through the use of suitable mobile, e.g. blades inclined at 45 °, or by the use of two superposed movable, one axial and the other radial. La durée sous agitation doit être suffisante pour obtenir en sortie une phase liquide d'apparence homogène, un étagement de l'agitation dans deux cuves successives peut également être considéré pour assurer l'homogénéité et disposer d'une capacité tampon. The duration stirring should be sufficient to obtain at the output an apparently homogeneous liquid phase, a stirring tiering in two successive tanks may also be considered to ensure homogeneity and have a buffer capacity. De façon avantageuse, la matière première à dissoudre est alimentée dans le solvant de dilution sous agitation. Advantageously, the raw material to be dissolved is fed into the stirred dilution solvent. De façon encore plus avantageuse si la matière première est présente sous une forme équivalente à un solide, par exemple une pâte visqueuse, elle sera alimentée sous la forme de particules dont la taille moyenne sera réduite par l'une des méthodes connues par l'homme du métier, telle qu'extrusion ou pompage â travers une conduite de dimension réduite. Even more advantageous if the first material is present in an equivalent form to a solid, for example a viscous paste, it will be supplied in the form of particles whose mean size is reduced by one of the methods known to those skilled the art, such as extrusion or pumping through a pipe reduced in size. De préférence, le procédé de synthèse de la matière première riche en glycolipides est conduit de telle manière que la matière première riche en glycolipides soit assimilable à un liquide. Preferably, the method of synthesizing the first rich in glycolipids material is conducted so that the first rich in glycolipids material is comparable to a liquid. De façon encore plus avantageuse, la dissolution de la matière première dans le solvant de dilution est réalisée de façon continue grâce à une technologie de mélange continu en conduite, par exemple la technologie commercialisée par la société SULZER CHEMTECH sous le nom SMI. Even more advantageously, the dissolution of the raw material in the diluting solvent is carried out continuously with a continuous mixture in pipe technology, such technology marketed by Sulzer Chemtech under the name SMI.

La matière première riche en glycolipides et en lipides est diluée dans le solvant polaire plutôt que dans le solvant apolaire avant l'étape d'extraction liquide-liquide, ce qui limite l'exposition au solvant apolaire et les risques de rejets de ce solvant. The first rich in glycolipids and fat material is diluted in the polar solvent rather than in the non-polar solvent prior to the liquid-liquid extraction step, thereby limiting exposure to non-polar solvent and the risk of releases of this solvent. De manière avantageuse, la quantité de solvant polaire ajouté ne dépasse pas cinq fois la quantité de matière première à traiter, et de préférence ne dépasse pas deux fois la quantité de matière première à traiter. Advantageously, the amount of polar solvent added does not exceed five times the amount of raw material to be treated, and preferably does not exceed twice the amount of raw material to be treated. Eventuellement le solvant polaire est saturé en solvant apolaire, notamment lorsqu'il est recyclé et a déjà été utilisé pour l'étape d'extraction. Optionally the polar solvent is saturated with apolar solvent, in particular when it is recycled and has been used for the extraction step. Si nécessaire la charge polaire constituée par la matière première diluée dans le solvant polaire peut être traitée par centrifugation, filtration, floculation, coagulation ou adsorption, ou toute combinaison de ces techniques, pour éliminer les traces de biomasse résiduelle issue du procédé de synthèse de la matière première, ainsi que si nécessaire tout trouble protéique résiduel dans la solution. If necessary the polar load constituted by the raw material diluted in the polar solvent can be treated by centrifuging, filtration, flocculation, coagulation, or adsorption, or any combination of these techniques, to remove traces of residual biomass from the synthesis process of the raw material, and if necessary any residual protein haze in the solution. Un mode avantageux de mise en oeuvre de l'invention consiste à traiter une matière première exempte de biomasse et de protéines grâce à un mode de récolte adapté en fin de synthèse. An advantageous implementation of the invention involves treating a first free biomass material and proteins through a harvesting method adapted at the end of synthesis.

Le solvant apolaire est avantageusement choisi parmi les alcanes d'une part, ou les hydrocarbures d'origine végétale tels que les terpènes d'autre part. The apolar solvent is advantageously chosen from alkanes on the one hand, or of plant origin, such as hydrocarbons on the other terpenes. Parmi les alcanes, le solvant apolaire est avantageusement choisi parmi le cyclohexane, le n-heptane, le butane ou le pentane sous pression. From alkanes, the apolar solvent is advantageously chosen from cyclohexane, n-heptane, butane or pentane under pressure. Parmi les hydrocarbures d'origine végétale, le solvant apolaire peut être choisi parmi les terpènes, tels que les isomères du limonène, du pinène, ou tout mélange naturel constitué majoritairement par ces solvants. Among the vegetable oil, the apolar solvent can be selected from terpenes, such as isomers of limonene, pinene, or natural mixture mainly consisting of these solvents. Un mode avantageux de mise en oeuvre de l'invention consiste également à utiliser le produit de l'hydrogénation de ces terpènes, par exemple les fractions riches en para-menthane obtenu par hydrogénation de fractions riches en limonène, comme solvant d'extraction apolaire. An advantageous implementation of the invention also is to use the product of the hydrogenation of these terpenes, e.g. fractions rich in para-menthane obtained by hydrogenation of fractions rich in limonene, as apolar solvent extraction. Les solvants utilisés dans le cadre de l'invention sont recyclés et réutilisés pour leur majeure partie pour le fractionnement de la charge suivante de matière première, le dit fractionnement étant de préférence réalisé de façon continue. The solvents used in the context of the invention are recycled and reused for the most part for splitting the next charge of raw material, said split preferably being carried out continuously. Ainsi la consommation de solvant sur le procédé est limitée, de sorte que la quantité de solvant consommé soit au moins inférieure à la masse de glycolipides purifiée, de préférence inférieure à un dixième de la masse de glycolipides purifiée. And solvent consumption of the method is limited, so that the amount of solvent used is at least less than the mass of purified glycolipids, preferably less than one tenth of the mass of purified glycolipids.

La phase polaire comprenant les glycolipides est mise en contact avec le solvant d'extraction apolaire, dans des conditions telles que le transfert des impuretés hydrophobes de la phase polaire vers la phase apolaire soit facilité (étape ii.). The polar phase comprising the glycolipid is contacted with the extraction solvent apolar, under conditions such that the transfer of hydrophobic impurities in the polar phase to the apolar phase is facilitated (step ii.). L'homme du métier connaît bien les différentes méthodes de mise en contact des solvants pour la mise en oeuvre industrielle de méthodes de séparation liquide/liquide. The skilled artisan is familiar with different methods of contacting the solvents for the industrial application of liquid / liquid separation methods. Ces méthodes peuvent être réalisées de manière discontinue (ou « batch ») ou encore de manière continue. These methods can be carried out discontinuously (or "batch") or continuously.

Les conditions nécessaires à un transfert efficace d'une phase à l'autre incluent en particulier un mélange intime des phases, pour que la surface de contact entre les deux liquides soit augmentée. The conditions necessary for an efficient transfer from one phase to the other include particularly intimate mixing of the phases, so that the contact surface between the two liquids is increased. Ce mélange intime des phases peut être assuré par agitation mécanique notamment, dans une cuve ou une colonne agitée par exemple, ou par circulation à contre-courant dans une colonne garnie de plateaux perforés, ou de divers éléments de garnissage en vrac, par exemple des anneaux de Raschig, de Pall ou de Nutter, ou des selles de Berl, ou Intaiox, ou par des éléments de garnissage structuré constitué d'un assemblage de plaques corruguées aux dimensions de la colonne. This phase intimate mixture may be assured by mechanical stirring in particular, in a tank or a stirred column for example, or by movement against the current in a column packed with perforated trays, or various packing elements in bulk, e.g. Raschig rings, Pall or Nutter, or Berl saddles, or Intaiox, or by structured packing elements formed of a plate assembly corruguées the dimensions of the column. Ces éléments seront par exemple constitués de plastique ou de métal, le choix du matériau devant être gouverné par la nature de la phase continue dans la colonne. These elements will be for example made of plastic or metal, the choice of material to be governed by the nature of the continuous phase in the column. Le choix de la phase dite continue est effectué grâce â des tests préalables d'agitation sur des échantillons de phase polaire et apolaire. The choice of continuous phase known is done through pre â agitation tests on samples of polar and nonpolar. La phase continue est choisie de telle sorte que la vitesse de décantation et de formation d'une interface claire soit minimisée après arrêt de l'agitation. The continuous phase is chosen such that the settling rate and formation of a clear interface is minimized after stopping the stirring. Un descriptif détaillé de ces technologies et de leurs principes de fonctionnement sont décrits par les ouvrages de référence pour l'homme du métier, par exemple par RETreybal (« Liquid Extraction », Seconde édition. Editions Mc-Graw Hill) ou encore par RHPerry, LARobbins and RWCusack (Chapitre 15 du Perry's Chemical Engineering Handbook, Huitième édition, également aux Editions Mc Graw Hill). A detailed description of these technologies and their operating principles are described in reference books for the art, for example by RETreybal ( "Liquid Extraction", Second edition. Mc-Graw Hill Publishing) or by RHPerry, LARobbins and RWCusack (Chapter 15 of Perry's Chemical Engineering Handbook, Eighth edition, also Editions the McGraw-Hill Companies).

Les conditions de mise en oeuvre sont également choisies telles que le volume ou le débit de solvant d'extraction apolaire requis pour atteindre une pureté en glycolipides supérieure à 95% soit minimisé. implementation conditions are also chosen so that the volume or the extraction solvent flow rate apolar required to achieve a purity greater than 95% glycolipids is minimized. C'est-à-dire que l'équipement ou la méthode de séparation mis en oeuvre assure, ou simule dans le cas d'un procédé discontinu dans une cuve agitée par exemple, un écoulement à contre-courant des deux phases liquides. That is to say that the equipment or the separation method used provides or simulates in the case of a batch process in a stirred tank for example, a flow against the current of the two liquid phases. Dans cette configuration, la phase extrait récupérée en sortie de colonne était en contact avec la phase polaire peu appauvrie de sorte que la teneur en impuretés dans la phase extrait est maximisée. In this configuration, the extract phase recovered at the column outlet was in contact with the little depleted polar phase so that the impurity content in the extract phase is maximized. Réciproquement, la phase raffinât récupérée en sortie de colonne était en contact avec la phase apolaire peu enrichie en impuretés, de sorte que la qualité du raffinât est maximisée. Conversely, the raffinate phase recovered at the outlet of column was in contact with the apolar phase slightly enriched with impurities, so that the quality of raffinate is maximized. L'efficacité d'un écoulement à contre-courant dans un dispositif d'extraction liquide-liquide est dépendant de la technologie mise en oeuvre, des conditions opératoires telles que vitesse d'écoulement ou intensité d'agitation, et des propriétés physicochimiques des phases telles que tension interfaciale et viscosité. The efficiency of a flow against the flow in a liquid-liquid extraction device is dependent on the technology used, the operating conditions such as flow velocity or intensity of agitation, and the phases of the physicochemical properties such as interfacial tension and viscosity. L'efficacité d'un équipement donné dans des conditions données est couramment caractérisée par la notion d'étages théoriques de séparation, mesurable par des essais dédiés réalisés sur un système ternaire dont l'équilibre de phases est connu. The effectiveness of a given device under given conditions is commonly characterized by the notion of theoretical plates, measured by dedicated tests on a ternary phase equilibrium of which is known. Dans le cadre de l'invention décrite ici le nombre d'étages théoriques de séparation à mettre en oeuvre est choisi entre 2 et 15, de préférence entre 5 et 10. L'intérêt d'un dispositif à contre-courant avec une efficacité élevée est double puisqu'il diminue le débit de solvant d'extraction requis pour atteindre une pureté donnée, mais aussi de fait augmente le rendement en glycolipides dans la phase raffinât car la teneur en glycolipides dans la phase extrait dépend elle peu de l'efficacité mise en oeuvre. In the context of the invention described herein the number of theoretical plates to be used is selected between 2 and 15, preferably between 5 and 10. The advantage of a against-current with high efficiency device is twofold since it reduces the extraction solvent flow rate required to achieve a given purity, but in fact increases the yield of glycolipids in phase raffinate for the content of glycolipids in phase extracted depends on it little effective implementation implemented. En effet la phase extrait est en contact dans la colonne avec une phase raffinât dont la concentration en glycolipides est relativement constante. Indeed the extract phase is contacted in the column with a raffinate phase, the glycolipids concentration is relatively constant. Le ratio massique de solvant apolaire est de 0.2 à 3 fois la masse de charge polaire à traiter, de préférence de 0.5 à 1 fois. The mass ratio of non-polar solvent is 0.2 to 3 times the polar filler mass to be treated, preferably 0.5 to 1 times. Dans les conditions décrites ci-dessus il est possible d'atteindre une pureté en glycolipides dans la phase raffinât, hors solvants et eau, supérieure à 95%, et ce avec un rendement supérieur à 90%, c'est-à-dire que moins de 10% des glycolipides sont extraits avec les impuretés. Under the conditions described above it is possible to achieve a purity by glycolipids in the raffinate phase excluding solvents and water, more than 95%, and with a 90% yield, that is to say less than 10% glycolipids are extracted with impurities. Ces performances sont suffisamment élevées pour considérer une extrapolation d'un procédé de production de glycolipides par voie fermentaire vers une maille de production industrielle. These performances are sufficiently high to consider an extrapolation of a glycolipid production by fermentation method to industrial production of mesh.

Parallèlement au mélange intime des phases nécessaire au transfert, il est également nécessaire d'autoriser une coalescence des gouttelettes de phase dispersée, de sorte que celle-ci reste séparée de la phase continue par décantation et que l'opération soit stable. Parallel to the intimate mixing of the phases necessary for the transfer, it is also necessary to allow coalescence of the dispersed phase droplets, so that it remains separated from the continuous phase by decantation and the operation is stable. sans engorgement de l'équipement d'extraction par sortie d'une phase avec l'autre. without clogging the extraction equipment by output of a phase with each other. Ce point est essentiel pour assurer un procédé robuste et capacitif. This is essential to ensure a robust and capacitive method. Il s'agit donc de définir le niveau de mélange maximal qui peut être atteint avant que les avantages, à savoir un transfert rapide des solutés d'une phase à l'autre, deviennent inférieurs aux inconvénients, à savoir une diminution du débit maximal qui peut être traité dans un équipement de taille donnée avant engorgement avec sortie d'une phase dans l'autre. So this set the maximum blend level that can be achieved before the benefits, namely the rapid transfer of solutes from one phase to another, become lower than the disadvantages, namely a reduction in the maximum rate that can be treated in a given size equipment before clogging with output of one phase in the other. Ce niveau de mélange optimal se traduit par la définition des conditions opératoires, par exemple vitesse d'agitation dans le cas des technologies agitées, fréquence ou intensité de pulsation sur le débit d'alimentation dans le cas des colonnes pulsées, ou vitesses de passage des fluides dans le cas des technologies fixes, l'objectif étant que la phase dispersée subisse des actions équilibrées de division et coalescence. This optimum level of mixing leads to the definition of the operating conditions, for example stirring rate in the case of agitated technologies, frequency or pulsation intensity on the feed rate in the case of pulsed columns or flow rates of fluids in the case of fixed technologies, the goal being that the dispersed phase undergoes balanced actions division and coalescence. Ces deux actions peuvent être soit successives dans le cas basique d'un procédé discontinu dans une cuve agitée, où la phase de séparation physique des phases par décantation succède à la phase de transfert sous agitation. These two actions can be either cut into the basic case of a batch process in a stirred tank, where the physical phase separation of the phases by settling follows the stirring transfer phase. Ces deux actions peuvent être simultanées mais séparées dans l'espace dans une colonne à plateaux perforés par exemple ou dans une colonne agitée dans une moindre mesure, ou alors elles peuvent être totalement simultanées par exemple dans une colonne à garnissage. These two actions can be simultaneous but spatially separated in a sieve tray column for example or in a stirred column to a lesser extent, or they may be completely simultaneous for example in a packed column. Un dernier exemple pour la mise en oeuvre d'une extraction liquide-liquide est l'utilisation de technologies centrifuges telles que celles commercialisées par les sociétés ALFA-LAVAL, ROUSSELET-ROBATEL ou B&P PROCESS EQUIPMENTS. A final example for the implementation of a liquid-liquid extraction is the use of centrifugal technologies such as those marketed by the ALFA-LAVAL companies ROUSSELET-ROBATEL or B & amp; P PROCESS EQUIPMENTS.

Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, les étapes ii. According to a preferred embodiment of the invention, steps ii. et iii. and iii. de mise en contact puis de séparation des phases apolaire et polaire sont réalisées de façon simultanée sur une colonne d'extraction agitée à contre-courant, ou sur un extracteur centrifuge. contacting and separating polar and apolar phases are performed simultaneously on a stirred extraction column against the current, or a centrifugal extractor. À noter qu'il est possible de considérer l'ajout d'une section de lavage de la phase extrait par contre-extraction des glycolipides qu'elle contient, par du solvant polaire vierge. Note that it is possible to consider adding a washing section of the extract phase by extraction against glycolipids contained therein by virgin polar solvent. Ainsi il est possible de maximiser à la fois le niveau de pureté atteint dans la phase raffinât, et le taux de récupération des glycolipides dans cette même phase. Thus it is possible to maximize both the level of purity achieved in the raffinate phase and the glycolipid recovery rates in this same phase. Une telle section de lavage peut être mise en oeuvre suivant les mêmes principes généraux de l'extraction liquide-liquide décrits précédemment, et de façon avantageuse sont mis en oeuvre dans le même équipement que l'étape principale d'extraction des impuretés hydrophobes. Such washing section can be implemented following the same general principles of liquid-liquid extraction described above, and advantageously are used in the same equipment as the main extraction stage hydrophobic impurities. Dans ce cas deux alimentations de phase polaire sont considérées, l'une en tête de colonne est constituée de solvant polaire vierge, et l'autre en un point intermédiaire de la colonne est l'alimentation principale, constituée des glycolipides et des impuretés dissoutes dans du solvant polaire. In this case two polar live feeds are considered, one at the column top is made of virgin polar solvent, and the other at an intermediate point of the column is the main power supply, consisting of glycolipids and impurities dissolved in the polar solvent.

La phase apolaire collectée après l'étape iii. The apolar phase collected after step iii. est ensuite avantageusement concentrée notamment par évaporation ou distillation, ou encore par des procédés membranaires tels que nanofiltration et particulièrement nanofiltration avec une membrane dont le matériau résiste aux solvants utilisés. is then advantageously concentrated in particular by evaporation or distillation, or by membrane methods such as nanofiltration and particularly with a nanofiltration membrane, the material is resistant to solvents used. Une telle étape de concentration vise à obtenir d'une part un résidu concentré en impuretés hydrophobes qui peut être éliminé du procédé, et d'autre part un solvant apolaire régénéré et débarrassé des impuretés, qui peut être recyclé. Such a concentration step is to obtain firstly a concentrated residue of hydrophobic impurities which can be removed from the process, and secondly a regenerated apolar solvent and free of impurities which can be recycled. De manière avantageuse cette concentration est réalisée par évaporation sous une pression supérieure à la pression atmosphérique pour faciliter la condensation des vapeurs de solvants, ou sous une pression inférieure à la pression atmosphérique pour assurer de canaliser toute fuite éventuelle de solvant sur le procédé, tout en limitant le risque de dégradation thermique des produits qui constituent le résidu après évaporation. Advantageously this concentration is effected by evaporation under greater than atmospheric pressure to facilitate the condensation of solvent vapors, or a pressure lower than atmospheric pressure to ensure to channel any leaks of solvent on the process, while limiting the risk of thermal degradation products which constitute the residue after evaporation. De préférence, la récupération du solvant apolaire par évaporation est réalisée sous pression réduite. Preferably, the recovery of non-polar solvent by evaporation is carried out under reduced pressure. La pression est choisie de préférence entre 900 et 50 mbar absolus, et de préférence entre 500 et 200 mbar absolus. The pressure is preferably chosen between 900 and 50 mbar absolute, preferably between 500 and 200 mbar absolute. De façon avantageuse, le rendement de récupération du solvant apolaire est supérieur à 95%, et de façon encore plus avantageuse la teneur résiduelle en solvant apolaire dans le résidu est inférieure à 5 000 ppm. Advantageously, the apolar solvent recovery efficiency greater than 95%, and even more advantageously the residual content of non-polar solvent in the residue was less than 5000 ppm. Il est possible que deux phases liquides soient obtenues par la condensation des vapeurs générées. It is possible that two liquid phases are obtained by condensing the generated vapor. Dans ce cas, les deux phases sont séparées, par exemple par décantation, et seule la phase la plus riche en solvant apolaire est recyclée en tant que solvant d'extraction. In this case, the two phases are separated, for example by decantation, and only the most apolar solvent rich phase is recycled as extraction solvent. La phase la moins riche en solvant apolaire est recyclée en tant qu'appoint pour la dilution de la matière première dans la phase polaire. The least rich in non-polar solvent phase is recycled as an adjunct to the dilution of the raw material in the polar phase. Si nécessaire tout ou partie du flux recyclé peut également être traité par une étape supplémentaire de purification, par exemple distillation ou filtration membranaire telle que nanofiltration et particulièrement nanofiltration avec une membrane dont le matériau résiste aux solvants utilisés, voire une fraction du flux peut être purgée, pour éliminer du procédé tout contaminant à l'état de trace susceptible de s'accumuler. If necessary all or part of the recycled stream can also be treated by an additional step of purification, for example distillation or membrane filtration, such as nanofiltration and particularly nanofiltration using a membrane whose material is resistant to solvents used, even a fraction of the stream may be purged to remove process contaminants to trace likely to accumulate. La solution retenue pouvant être appliquée de façon continue ou périodique, quelle qu'elle soit. The chosen solution can be applied continuously or periodically whatsoever.

La phase polaire collectée après l'étape iii. The collected polar phase after step iii. peut éventuellement être traitée par des étapes supplémentaires de purification avant l'étape iv. may optionally be treated with additional purification steps prior to step iv. d'isolation des glycolipides de la phase polaire. insulation glycolipids of the polar phase. Par exemple, la phase polaire peut être soumise à une étape d'adsorption sur des adsorbants tels que résines polymères, greffées ou non, charbons actifs, gels de silice, zéolites, ou terres décolorantes telles que bentonites, ou encore filtration membranaire telle que nanofiltration et particulièrement nanofiltration avec une membrane dont le matériau résiste aux solvants utilisés. For example, the polar phase may be subjected to an adsorption step on adsorbents such as polymeric resins, grafted or non-activated carbons, silica gels, zeolites or bleaching clays such as bentonites, or membrane filtration, such as nanofiltration and especially with a nanofiltration membrane, the material is resistant to solvents used. L'objectif de cette étape facultative est d'éliminer sélectivement une impureté non extraite par le solvant apolaire ou encore présente à l'état de trace. The objective of this optional step is to selectively remove a non-extracted impurity by the apolar solvent or present in trace amounts. Toute purification supplémentaire envisagée à ce stade n'influe pas de façon significative sur la teneur massique en glycolipides vis-à-vis des autres impuretés organiques de type lipides. Any additional purification envisaged at this stage does not influence significantly the mass content of glycolipids vis-à-vis other organic impurities like lipids. Elle n'impacte que des teneurs inférieures à 1000 ppm en impuretés et ne vise qu'à améliorer les caractéristiques telles que couleur, odeur, ou teneurs en sels, du produit fini. It only impacts contents of less than 1000 ppm of impurities and is only intended to improve characteristics such as color, odor, or salt content, the finished product. Une telle étape d'adsorption peut être réalisée en continu sur un filtre constitué d'un lit fixe de particules d'adsorbants, ou en discontinu suivant une première étape de mélange de la phase polaire avec l'adsorbant, puis une seconde étape de séparation de la phase polaire purifiée et de l'adsorbant solide. Such adsorption step can be carried out continuously on a filter consisting of a fixed bed of adsorbent particles, or discontinuously in a first mixing step of the polar phase with the adsorbent, and then a second separation step of the purified polar phase and the solid adsorbent. De manière avantageuse, la phase polaire collectée après l'étape iii. Advantageously, the collected polar phase after step iii. est passée sur un lit fixe de résine polymère adsorbante ou de charbon actif. is passed over a fixed bed of adsorbent polymeric resin or activated carbon. L'étape iv. Step iv. consiste à isoler les glycolipides de la phase polaire, ce qui signifie que les solvants et l'eau qui constituent la phase polaire sont récupérés. involves isolating the glycolipids of the polar phase, which means that the solvents and water which constitute the polar phase are recovered. L'homme du métier connaît les méthodes industrielles permettant d'isoler les glycolipides de la phase polaire, notamment évaporation ou distillation, ou encore des procédés membranaires tels que nanofiltration et particulièrement nanofiltration avec une membrane dont le matériau résiste aux solvants utilisés. Those skilled in the art knows the industrial methods for isolating the glycolipids of the polar phase, particularly evaporation or distillation, or membrane methods such as nanofiltration and particularly with a nanofiltration membrane, the material is resistant to solvents used. De manière avantageuse, les glycolipides sont isolés de la phase apolaire par distillation des solvants et d'une fraction de l'eau, puis par évaporation de l'eau résiduelle. Advantageously, glycolipids are isolated from the apolar phase by distillation of the solvents and of a fraction of water, followed by evaporation of residual water. L'évaporation ou la distillation sont réalisées de préférence à une pression réduite pour éviter la dégradation des glycolipides et la formation de produits secondaires notamment responsables de couleur. Evaporation or distillation are carried out preferably at a reduced pressure to avoid degradation of glycolipids and the formation of byproducts including responsible for color. De manière avantageuse l'évaporation ou la distillation des solvants est réalisée à une pression comprise entre 900 et 50 mbar absolus, de préférence à une pression comprise entre 500 et 100 mbar absolus. Advantageously evaporation or distillation of the solvents is carried out at a pressure between 900 and 50 mbar absolute, preferably at a pressure between 500 and 100 mbar absolute. De même l'évaporation des solvants et de l'eau est réalisée à une température comprise entre 40 et 200°C, de préférence à une température comprise entre 50 et 120°C. Also the evaporation of solvents and water is conducted at a temperature between 40 and 200 ° C, preferably at a temperature between 50 and 120 ° C.

La distillation consiste à alimenter la phase polaire dont les glycolipides doivent être isolés sur une colonne garnie d'éléments de garnissage vrac ou structuré identiques à ceux qui ont été décrits pour l'étape d'extraction liquide-liquide, la dite colonne étant équipée d'un évaporateur à son pied et d'un condenseur à sa tête, et l'alimentation étant réalisée de façon homogène sur la section. Distillation involves feeding the polar phase which glycolipids must be isolated on a column packed with random packing or structured elements identical to those described for the step of liquid-liquid extraction, said column being equipped with an evaporator at its foot and with a condenser at its head, and feeding being carried out homogeneously over the section. La colonne et notamment la section basse peut également être équipée de plateaux équipés de cloches, de perforations ou de clapets mobiles ou fixes. Column and in particular the lower section can also be equipped with plates equipped with bells, perforations or mobile or fixed valves. De manière avantageuse la section basse est équipée de plateaux dont la conception minimise les risques de moussage, par exemple les technologies commercialisées par les sociétés KOCH-GLITSCH ou UOP, sous les noms ULTRA-TRAY ou MD, respectivement. Advantageously the lower section is equipped with plates whose design minimizes the risk of foaming, such technologies marketed by KOCH-GLITSCH or UOP companies under the ULTRA-TRAY names or MD, respectively. Le taux de reflux en tête de colonne est réglé pour atteindre une composition cible dans le distillât, et notamment sur le ratio entre eau et alcools. The column head reflux ratio is set to achieve a target composition in the distillate, and in particular on the ratio between water and alcohols. De manière avantageuse, l'étape iv. Advantageously, step iv. d'isolation des glycolipides de la phase polaire est réalisée en deux étapes, la première étape consistant à éliminer les solvants par distillation puis la seconde étape, facultative, consistant à éliminer l'eau résiduelle par décantation ou évaporation. insulation glycolipids of the polar phase is carried out in two steps, the first step of removing the solvent by distillation and then the second optional step of removing residual water by decanting or evaporation. À l'issue de la première étape de distillation un distillât riche en solvant polaire est obtenu et est recyclé pour la dilution de la matière première riche en glycolipides et en impuretés, en vue de sa purification par extraction liquide-liquide dans les conditions décrites dans l'invention. At the end of the first distillation step a polar solvent-rich distillate is obtained and is recycled for diluting the first material rich in glycolipids and impurities, for purification by liquid-liquid extraction in the conditions described in the invention. Si nécessaire tout ou partie du flux recyclé peut également être traité par une étape supplémentaire de purification, par exemple distillation ou filtration membranaire, voire une fraction du flux peut être purgée, pour éliminer du procédé tout contaminant à l'état de trace susceptible de s'accumuler. If necessary all or part of the recycled stream can also be treated by an additional step of purification, for example distillation or membrane filtration, or a fraction of the stream can be purged to remove process contaminants to trace might s 'accumulate. La solution retenue pouvant être appliquée de façon continue ou périodique, quelle qu'elle soit. The chosen solution can be applied continuously or periodically whatsoever. L'évaporation éventuelle de l'eau résiduelle pour obtenir les glycolipides déshydratés est réalisée dans les mêmes gammes de pression et de température que la distillation. The eventual evaporation of the residual water to obtain dehydrated glycolipids is performed under the same pressure and temperature ranges as distillation. Elle est cependant réalisée avantageusement sur une technologie d'évaporation qui minimise le temps de séjour du produit, par exemple sur un évaporateur à film tombant ou à couche mince. However, it is advantageously carried out on an evaporation technology that minimizes the residence time of the product, for example a falling film evaporator or thin film. De façon encore plus avantageuse, l'évaporation de l'eau résiduelle est réalisée sur une technologie résistante à la présence de mousse, et qui tolère les produits dont la viscosité est élevée. Even more advantageously, the evaporation of residual water is performed on a resistant technology to the presence of foam, and which tolerates products whose viscosity is high. Le terme de viscosité élevée désigne ici une gamme de viscosité qui peut atteindre de 10 à 1 000 Pa.s, dans les conditions de travail notamment température et taux de cisaillement. The term high viscosity here refers to a range of viscosity which can reach 10 to 1000 Pa.s, in working conditions including temperature and shear rate. De telles technologies d'évaporation indiquées pour la déshydratation des glycolipides sont les évaporateurs à couche mince ou à film raclé, ou les technologies telles que la technologie commercialisée par APV sous le nom PARAVAP. Such evaporation technologies identified for dehydration glycolipids are the thin-film evaporators or wiped film or technology such as technology marketed by APV as the PARAVAP. De manière avantageuse, l'étape finale de déshydratation est réalisée sur un évaporateur à couche mince. Advantageously, the final dehydration step is performed on a thin film evaporator. L'eau récupérée par condensation des vapeurs peut être recyclée sur le procédé si besoin, en remplaçant avantageusement une consommation d'eau extérieure, ou purgée en tant qu'effluent aqueux. The water recovered by condensation of the vapors can be recycled to the process if needed, advantageously replacing an external water consumption, or served as an effluent aqueous. L'étape iv. Step iv. d'isolation des glycolipides peut également inclure une étape de décantation en fonction de la teneur en eau, en solvants et en glycolipides. glycolipids of insulation may also include a treatment stage according to the water content in solvents and glycolipids. Une phase aqueuse pauvre en glycolipides peut être formée sous des conditions précises de teneur en solvant, en eau et en glycolipides. A poor aqueous phase glycolipid can be formed under specific conditions of solvent content, water and glycolipids. Dans ce scénario, la phase aqueuse pauvre en glycolipides est préférentiellement séparée par une technique telle que décantation, hydrocyclone ou centrifugation, et purgée. In this scenario, the poor aqueous phase glycolipid is preferably separated by a technique such as decantation, centrifugation or hydrocyclone, and vented. Si nécessaire, une quantité supplémentaire d'eau peut être ajoutée à tout moment de la séquence d'isolation des glycolipides, mais avant cette étape de décantation de préférence et au plus tard pendant cette étape. If necessary, additional water can be added at any time of the isolation sequence glycolipids, but before that preferably settling stage and at the latest during this step. Ainsi la quantité de phase aqueuse pauvre en glycolipides à éliminer est augmentée, mais cet effluent peut éliminer des traces de contaminants hydrophiles tels que des sels. Thus the amount of poor aqueous phase glycolipid to be removed is increased, but this effluent can remove traces of hydrophilic contaminants such as salts.

Les glycolipides susceptibles d'être extraits par le procédé selon l'invention sont des produits d'origine naturelle, généralement des produits de fermentation d'huiles végétales ou obtenus par conversion enzymatique d'huiles végétales. Glycolipids can be extracted by the method according to the invention are products of natural origin, generally of fermentation products of vegetable oils or obtained by enzymatic conversion of vegetable oils. On citera en particulier les rhamnolipides, les sophorolipides, les cellobiolipides, les tréhalose lipides, et les mannosylerythritol lipides. Particular examples rhamnolipids, sophorolipids, the cellobiolipides, the trehalose lipids and mannosylerythritol lipids.

De manière avantageuse, la matière première est un produit de fermentation d'huiles végétales, par exemple huile d'arachide, huile de coco, huile de colza, huile d'olive, huile de palme, huile de soja ou huile de tournesol. Advantageously, the raw material is a product of fermentation of vegetable oils, for example peanut oil, coconut oil, rapeseed oil, olive oil, palm oil, soybean oil or sunflower oil.

La méthode selon l'invention est particulièrement appropriée pour la purification de mannosylerythritol lipides (MELs) comme glycolipides. The method according to the invention is particularly suitable for the purification of mannosylerythritol lipids (MELs) as glycolipids. Les MELs sont bien connus de l'homme du métier, et comprennent plusieurs molécules identifiées notamment comme MEL-A, MEL-B et MEL-C, suivant leur degré d'acétylation. The MELs are well known in the art, and include several molecules identified as including MEL-A, MEL-B and MEL-C, according to their degree of acetylation.

La préparation de MELs par fermentation est bien connue de l'homme du métier, en particulier les procédés fermentaires discontinus et les procédés fermentaires semi continus. Preparing MELs by fermentation is well known to those skilled in the art, in particular batch fermentation processes and semi continuous fermentation processes. On peut citer Kitamoto et al. Kitamoto et al can be cited. (1990) qui produisent des MELs à partir d'huile de soja comme substrat principal, on peut citer Accorsini et al. (1990) that produce MELs from soybean oil as the main substrate, there may be mentioned Accorsini et al. (2012) qui produisent des Mels par fermentation d'huile de soja et de glycérol comme substrats principaux, on peut citer Kitamoto et al. (2012) that produce Mels by fermentation of soybean oil and glycerol as main substrates include Kitamoto et al. (2001) qui produisent des MELs à partir d'alcanes comme substrats principaux. (2001) that produce MELs from alkanes as main substrates. On peut encore citer la demande de brevet WO 2014/185805 qui décrit la production de MELs à partir d'une biomasse lignocellulosique. patent application may also be mentioned WO 2014/185805 describes the production of MELs from lignocellulosic biomass. Les procédés discontinus, utilisés par les auteurs précédents, consistent à mélanger la totalité ou la quasi-totalité des éléments du milieu de fermentation dans le réacteur et à fermenter ces éléments avec le microorganisme inoculé. Batch processes, used by previous authors, involve mixing all or substantially all of the fermentation medium components in the reactor and to ferment these items with the inoculated microorganism.

Les procédés semi continus ou discontinus alimentés consistent en l'ajout au cours de la fermentation de certains des éléments du milieu de fermentation. Semi continuous or fed batch processes consist in the addition during the fermentation of some of the fermentation medium elements. On peut citer le travail de Rau et al. These include work Rau et al. (2005b) qui réalisent des apports d'huile de soja, de glucose et de nutriments au cours de la production des MELs. (2005b) who make soybean oil intake, glucose and nutrients during production MELs.

Dans la présente invention, le mode de fermentation utilisé, les sources de carbone utilisées, les conditions de fermentation utilisées, la souche du microorganisme utilisé importent peu. In the present invention, the fermentation method used, the carbon sources used, the fermentation conditions used, the strain of the microorganism used are not important. Par exemple, la souche utilisée peut être la souche Pseudozyma aphidis DSMZ 70725, une souche des espèces Pseudozyma aphidis, Pseudozyma antartica, Pseudozyma tsukubaiensis, une souche du genre Pseudozyma ou tout autre souche apte à produire des MELs. For example, the strain used may be the Pseudozyma aphidis strain DSMZ 70725, a strain of the species Pseudozyma aphidis, Pseudozyma antarctica, Pseudozyma tsukubaiensis, a strain of the genus Pseudozyma or any other strain capable of producing MELs. De même, le milieu de fermentation pour produire les surfactants peut être un milieu de fermentation dont la composition aura été ajustée pour produire les MELs. Similarly, the fermentation medium to produce the surfactant may be a fermentation medium whose composition has been adjusted to produce the MELs. Ce milieu contiendra une ou plusieurs sources d'azote dont des sources organiques telles que l'extrait de levure et des sources minérales telles que des sels de nitrate, des sels d'ammonium, de l'urée. This medium will contain one or more nitrogen sources including organic sources such as yeast extract and mineral sources such as nitrate salts, ammonium salts, urea. Le milieu contiendra des sources de carbone telles que des graisses et des huiles telles que huile d'arachide, huile de coco, huile de colza, huile d'olive, huile de palme, huile de soja ou huile de tournesol, d'autres sources de carbone insolubles autres tel que la paraffine ou les alcanes, des sources de carbone solubles tels que le glucose, le fructose, le glycérol, ou toute combinaison de ces sources de carbone. The media contain carbon sources such as fats and oils such as peanut oil, coconut oil, rapeseed oil, olive oil, palm oil, soybean oil or sunflower oil, other sources of other insoluble carbon such as paraffin or alkane soluble carbon sources such as glucose, fructose, glycerol, or any combination of these carbon sources. Le milieu contient également des sources de vitamines et minéraux. The medium also contains sources of vitamins and minerals.

De même le pH et la température peuvent être ajustés par l'homme du métier de façon à favoriser la production des MELs. Similarly the pH and temperature can be adjusted by the skilled person in order to promote the production of MELs. De même, l'agitation et l'aération peuvent être ajustés par l'homme du métier de façon à favoriser la production des MELs. Similarly, agitation and aeration can be adjusted by the skilled person in order to promote the production of MELs. De même, le mode de fermentation peut être un procédé discontinu ou discontinu alimenté, voire un procédé continu. Likewise, the fermentation mode may be a batch or fed batch process or a continuous process.

En fin de fermentation, la phase riche en glycolipides, tels que les rhamnolipides, les sophorolipides, les tréhaloses lipides ou les MELs, en particulier les MELs peut être isolée par tout procédé de séparation solide/liquide, tel que tamisage ou filtration, ou par tout procédé de séparation liquide/liquide, tel que décantation ou centrifugation, selon l'état physique de la phase riche en MELs. At the end of fermentation, the rich glycolipids phase such as rhamnolipids, sophorolipids, the trehaloses lipids or MELs, especially MELs can be isolated by any method of solid / liquid separation, such as screening or filtration, or by any method of liquid / liquid separation, such as decantation or centrifugation, according to the physical state of the phase rich in MELs. L'état physique de la phase riche en MELs dépend notamment du ratio pondéral entre MELs et impuretés telles que les acides gras, mais également d'autres conditions opératoires telles que température et pH, conformément à ce qui est décrit dans la littérature notamment par Rau et al. The physical state of the phase rich in MELs depends notably on the weight ratio between MELs and impurities such as fatty acids, but other operating conditions such as temperature and pH, according to what is described in the literature including by Rau et al. (2005a) ou dans la demande JP 2007-252280 La phase riche en MELs ainsi isolée constitue la matière première qui peut être traité par le procédé selon l'invention. (2005a) or in JP 2007-252280 The rich MELs thus isolated phase constitutes the raw material which can be treated by the process according to the invention.

Les glycolipides isolés par le procédé selon l'invention ont de manière avantageuse les caractéristiques suivantes, les teneurs étant exprimées en masse et hors eau : - au moins 90 %, de préférence au moins 95% de glycolipides - moins de 1%, de préférence moins de 0.2%, de triglycérides - moins de 5%, de préférence moins de 3%, d'acides gras libres - moins de 1000 ppm, de préférence moins de 100 ppm d'alcool en C2-C3 - moins de 50 ppm, de préférence moins de 1 ppm, de solvant organique apolaire. Glycolipids isolated by the method according to the invention advantageously have the following characteristics, the contents being expressed by weight and out water: - at least 90%, preferably at least 95% of glycolipids - less than 1%, preferably less than 0.2%, triglyceride - less than 5%, preferably less than 3%, free fatty acids, - less than 1000 ppm, preferably less than 100 ppm alcohol C 2 -C 3 - less than 50 ppm, preferably less than 1 ppm, apolar organic solvent.

En particulier, les glycolipides sont des MELs. Specifically, glycolipids are MELs. La proportion relative en MELs (A, B ou C) dépendra en particulier de la méthode de fermentation, du substrat de départ et de la souche employée. The relative proportion by MELs (A, B or C) depend in particular on the method of fermentation, the starting substrate and the strain used. Ainsi, la composition ci-dessus peut comprendre essentiellement du Mal-A ou du Mel-B ou du Mel-C comme glucolipides. Thus, the above composition may comprise essentially of Mal-A or B or Mel-Mel-C as glycolipids. Selon un mode particulier de réalisation de l'invention la composition ci-dessus comprend une teneur en MELs de 50% à 60 % de MEL-A, 10% à 40 % de MEL-B et 5% à 35% de MEL-C, le pourcentage étant exprimé par rapport au total des MELs dans la composition. According to a particular embodiment of the invention the above composition comprises a MELs content of 50% to 60% of MEL-A, 10% to 40% of MEL-B and 5% to 35% of MEL-C , the percentage being expressed relative to total MELs in the composition. L'invention concerne également un mélange de glycolipides, en particulier de MELs, susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention, caractérisé en ce qu'il a la composition telle que précisée précédemment. The invention also relates to a mixture of glycolipids, particularly MELs, obtainable by the process according to the invention, characterized in that it has the composition as specified above.

DESCRIPTION DES FIGURES DESCRIPTION OF FIGURES

La figure 1 représente le schéma de principe de l'étape d'extraction liquide-liquide, dans le cas le plus courant où le solvant apolaire a une densité inférieure à celle de la phase polaire. 1 shows the block diagram of the step of liquid-liquid extraction, in the most common case where the apolar solvent has a density less than that of the polar phase. Le flux (1) représente la matière première riche en glycolipides et en impuretés. The stream (1) represents the raw material rich in glycolipids and impurities. dissoute et diluée dans le solvant polaire, et constitue la phase polaire alimentée. dissolved and diluted in the polar solvent, and is fed the polar phase. Le flux (1) est ainsi alimenté sur une colonne d'extraction liquide-liquide (2) qui assure un écoulement à contre-courant des deux phases liquides, et une séparation des deux phases après transfert des solutés, le schéma indiqué ne préjugeant pas du type de contacteur utilisé ni du mode de séparation des phases ainsi que cela a été décrit dans la description détaillée de l'invention. The stream (1) is thus supplied to a liquid-liquid extraction column (2) which provides a flow against the current of the two liquid phases, and a separation of the two phases after transfer of solutes, the scheme shown without prejudicing the type of switch used or the phase separation method as described in the detailed description of the invention. La seconde alimentation liquide (3) est constituée par le solvant apolaire. The second liquid feed (3) is constituted by the non-polar solvent. Plus précisément elle est constituée par le mélange du solvant apolaire recyclé (4) et d'un appoint en solvant apolaire pur (5). More specifically, it is formed by mixing the recycled apolar solvent (4) and a pure non-polar solvent in the booster (5). De façon avantageuse, le débit du flux recyclé (4) est très supérieur au débit requis pour le flux d'appoint (5). Advantageously, the flow of the recycled stream (4) is much higher than the rate required for the extra flow (5). Dans le cas le plus courant où le solvant apolaire a une densité inférieure à celle de la phase polaire, il remonte dans la colonne (2) par gravité, à contre-courant de la phase polaire, plus lourde. In the most common case where the apolar solvent has a density less than that of the polar phase, it rises in the column (2) by gravity against the flow of the polar phase, heavier. La phase raffinât (6) constitue la phase polaire purifiée car appauvrie en impuretés hydrophobes, elle est récupérée en pied de la colonne (2) après un temps de décantation suffisant pour prévenir tout entraînement de solvant d'extraction (3). The raffinate phase (6) constitutes the purified polar phase for depleted hydrophobic impurities, is recovered at the bottom of the column (2) after a time sufficient to prevent settling extractant drive (3). La phase extrait (7) est constituée par le solvant d'extraction saturé par les solvants qui constituent la phase polaire, et enrichi par les solutés extraits. The extract phase (7) consists of the extraction solvent saturated with solvents which constitute the polar phase and enriched extracts solutes. De façon avantageuse dans les conditions de l'invention, les solutés extraits sont très majoritairement des impuretés hydrophobes, et de façon minoritaire des glycolipides. Advantageously under the conditions of the invention, the extracts solutes are mostly hydrophobic impurities, and to a minor extent glycolipids. Dans l'une des configurations de l'invention, la phase extrait (7) est alimentée sur un évaporateur (8), qui génère des vapeurs riches en solvant (9) qui sont récupérées dans un état liquide après condensation et refroidissement sur le condenseur (10). In one embodiment of the invention, the extract phase (7) is fed to an evaporator (8) which generates rich solvent vapors (9) which are recovered in a liquid state after cooling and condensation on the condenser (10). Les vapeurs condensées (4) constituent alors le flux de recyclage en solvant apolaire. The condensed vapors (4) then constitutes the recycle stream in apolar solvent. La fraction non évaporée (11) de la phase extrait (7) constitue le résidu de l'opération, il est riche en impuretés hydrophobes et est éliminé du procédé. The unevaporated fraction (11) of the extract phase (7) is the operation of residue, it is rich in hydrophobic impurities and is removed from the process. De façon avantageuse, le rendement de récupération du solvant apolaire du flux (7) vers le flux (4) est supérieur à 95%. Advantageously, the solvent recovery yield apolar of the stream (7) to the flow (4) is greater than 95%.

La figure 2 représente une version améliorée de l'étape d'extraction liquide-liquide, où une étape de lavage de la phase extrait par le solvant polaire est mise en oeuvre pour maximiser le taux de récupération des glycolipides. 2 shows an improved version of the step of liquid-liquid extraction where one phase washing step is extracted with the polar solvent is carried out to maximize the glycolipids recovery. Cette figure 2 est également réalisée pour le cas le plus courant où le solvant apolaire a une densité inférieure à celle de la phase polaire. This figure 2 is also performed for the most common case where the apolar solvent has a density less than that of the polar phase. Le descriptif et les références données pour la figure 1 restent valables pour cette figure 2, mais la colonne d'extraction liquide-liquide (2) est également alimentée dans le cas de la figure 2 par un flux supplémentaire de solvant polaire pur (12) en tête de colonne. The description and references to Figure 1 are also valid for this Figure 2, but the liquid-liquid extraction column (2) is also fed in the case of Figure 2 with an additional stream of pure polar solvent (12) in the column heading. L'alimentation polaire globale est donc constituée d'une part par le flux (1) qui représente la matière première riche en glycolipides et en impuretés, dissoute et diluée dans le solvant polaire, et par le flux (12) qui est constitué de solvant polaire sans glycolipides ni impuretés. The overall polar supply is constituted firstly by the flow (1) which is the raw material rich in glycolipids and impurities, dissolved and diluted in the polar solvent, and the stream (12) consisting of solvent without glycolipids or polar impurities. Ainsi la principale étape d'extraction des impuretés est réalisée sur la section basse (13) de façon analogue au cas général décrit par la figure 1, mais une seconde étape de séparation est réalisée sur la section haute (14) qui constitue à laver la phase apolaire avant sa récupération en tête de colonne. And the main impurities extraction step is performed on the bottom section (13) analogously to the general case described by Figure 1, but a second separation step is performed on the top section (14) which constitutes washing nonpolar stage before recovery column. Sur cette section haute (14) les glycolipides éventuellement présents dans la phase apolaire ascendante au niveau de l'alimentation principale (1) sont à nouveau extraits dans la phase polaire de lavage (12), ce qui assure une teneur minimale en glycolipides dans l'extrait (7) qui est récupéré en tête de colonne (2). This top section (14) glycolipids may be present in the ascending apolar phase at the main supply (1) is again extracted into the polar wash phase (12), which ensures a minimum glycolipid content in extract (7) is recovered at the column head (2). Dans cette configuration optimisée il est possible d'atteindre un rendement et une qualité supérieurs à 98%. In this optimized configuration it is possible to achieve superior performance and quality to 98%. La phase polaire de lavage issue de (12) et l'alimentation polaire principale (1) se mélangent spontanément au niveau de l'alimentation principale (1), et une phase raffinât unique (6) est récupérée en pied de colonne (2). The polar phase after washing (12) and the main pole supply (1) spontaneously mix at the main supply (1), and a single raffinate phase (6) is recovered at the bottom of column (2) .

La figure 3 représente le principe général de mise en œuvre de l'invention. Figure 3 shows the general principle of implementation of the invention. La matière première (1) riche en glycolipides et en impuretés est dissoute lors de l'étape i. The raw material (1) rich in glycolipids and impurities is dissolved in step i. par mélange avec un solvant polaire (2). by mixing with a polar solvent (2). La solution obtenue est alors éventuellement mais non obligatoirement clarifiée lors d'une étape A, avant d'être mise en contact avec le solvant d'extraction apolaire (3) lors de l'étape ii. The solution obtained is then optionally but not necessarily clarified in a step A, before being contacted with the extraction solvent apolar (3) in step ii. Les deux phases liquides, l'une polaire et l'autre apolaire, sont séparées lors de l'étape iii. The two liquid phases, a polar and the other apolar, are separated in step iii. La phase apolaire récupérée (4) est alors éventuellement concentrée lors d'une étape B, pour obtenir un solvant d'extraction régénéré qui peut être recyclé en (3). The recovered apolar phase (4) is then optionally concentrated in a step B, to obtain a regenerated extractant that can be recycled in (3). Le résidu (5) constitue un déchet pour le procédé, où sont éliminées les impuretés avec une teneur réduite en glycolipides. The residue (5) constitutes a waste to the process, which are removed with reduced impurities glycolipid content. La phase polaire purifiée (6) récupérée à l'issue de l'étape iii. Purified polar phase (6) recovered at the end of step iii. est alors éventuellement traitée par des étapes complémentaires mais non obligatoires de purification, lors d'une étape C. Les glycolipides purifiés (7) sont alors isolés de la phase polaire purifiée lors de l'étape iv., à l'issue de laquelle sont également récupérés le solvant polaire (8) qui peut être recyclé en (2), et éventuellement de l'eau excédentaire (9) qui peut être purgée. is then optionally treated with additional steps but not mandatory purification, in a step C. The purified glycolipids (7) are then isolated from the purified polar phase in step iv., at the end of which are also recovered polar solvent (8) which can be recycled in (2), and optionally of the excess water (9) that may be served. La figure 8 représente le mode de mise en œuvre privilégié de l'étape iv. Figure 8 shows the preferred mode of implementation of step iv. d'isolation des glycolipides à partir de la phase polaire, c'est-à-dire la succession d'une étape de distillation des solvants, d'élimination après décantation de la phase d'eau excédentaire, et d'évaporation de l'eau résiduelle. insulation glycolipids from the polar phase, that is to say the succession of a solvent distillation step, disposal after decanting the excess water phase, and evaporation of the residual water.

La figure 4 représente un exemple de procédé mis en œuvre pour l'étape iv. 4 shows an exemplary method implemented for step iv. d'isolation des glycolipides. Insulation glycolipids. La phase polaire purifiée (1) est alimentée sur une colonne de distillation (2), éventuellement avec une quantité d'appoint d'eau pure (3). Purified polar phase (1) is fed to a distillation column (2), optionally with an amount of extra pure water (3). De l'énergie est apportée au procédé au niveau du rebouilleur (4) et des vapeurs riches en solvant sont récupérées en tête de colonne et condensées sur le condenseur (5). Energy is supplied to the process at the reboiler (4) and the solvent-rich vapors are recovered at the column top and condensed on the condenser (5). Le distillât obtenu est réparti entre un reflux (6) vers la colonne, et une collecte (7) de solvant polaire purifié qui peut être recyclé pour l'étape i. The distillate obtained was partitioned between reflux (6) to the column, and collecting (7) of purified polar solvent which may be recycled to step i. du procédé. of the process. Le résidu liquide (8) est collecté au niveau du rebouilleur (4), et éventuellement refroidi et décanté sur l'équipement (9). The liquid residue (8) is collected in the reboiler (4), and optionally cooled and decanted on the equipment (9). L'eau excédentaire éventuelle (10) est séparée, et est soit recyclée vers l'alimentation (1) soit purgée du procédé pouraboutir à l'effluent aqueux (11). The possible excess water (10) is separated, and is either recycled to the feed (1) is purged from the process pouraboutir in the aqueous effluent (11). La phase riche en glycolipides (12) est alors alimentée sur un évaporateur (13). The glycolipids rich phase (12) is then fed to an evaporator (13). Les vapeurs (14) sont essentiellement constituées d'eau mais contiennent encore des traces de solvant. The vapors (14) consist essentially of water but still contain traces of solvent. Elles sont condensées sur (15) pour produire un distillât (16), qui est soit recyclé sur la colonne (2) soit purgé pour aboutir à un second effluent aqueux (17). They are condensed on (15) to produce a distillate (16), which is either recycled to the column (2) is purged to achieve a second aqueous effluent (17).

La figure 5A présente le chromatogramme HPLC obtenu lors de l'analyse de la matière première riche en glycolipides et en impuretés, utilisée comme produit de départ pour l'invention. FIG 5A shows the HPLC chromatogram obtained upon analysis of the raw material rich in glycolipids and impurity, used as starting material for the invention. L'abscisse représente le temps d'élution en minutes. The abscissa represents the elution time in minutes. L'ordonnée est masquée et indiquée en unités arbitraires spécifiques à l'appareil d'analyse utilisé, les quantifications sont réalisées avec l'aide d'un étalonnage externe. The ordinate is hidden and shown in arbitrary units specific to the analysis apparatus used, the quantifications are made with the help of an external calibration. Les pics sont identifiés par les acronymes TAG, FFA, Ul, et MELs qui renvoient respectivement aux triglycérides (Tri Acyl Glycerides), aux acides gras (Free Fatty Acids), à d'autres impuretés non identifiées, et aux glycolipides (Mannosyl Erythritol Lipids dans le cadre de cet exemple). The peaks are identified by the acronyms TAG, FFA, Ul, and MELs which respectively refer to triglycerides (Tri Acyl glycerides), fatty acids (Free Fatty Acids), to other unidentified impurities, and glycolipids (mannosyl Erythritol Lipids in the context of this example). La teneur totale en glycolipides quantifiée à partir de ce chromatogramme est 43 % en masse. Total glycolipid content quantified using the chromatogram is 43% by mass. La pureté en glycolipides par rapport aux lipides totaux est de 65% en masse, sans compter les impuretés non identifiées. The purity glycolipid relative to total fat is 65 wt%, excluding the unidentified impurities.

La figure 5B présente le chromatogramme HPLC obtenu lors de l'analyse d'un échantillon de glycolipides purifiés selon l'invention. Figure 5B shows the HPLC chromatogram obtained upon analysis of a sample of purified glycolipids of the invention. Les conditions d'analyse ainsi que les références d'affichage sont rigoureusement identiques à celles de la figure 5A. The analysis conditions and the display references are strictly identical to those in Figure 5A. e la matière première riche en glycolipides et en impuretés, utilisée comme produit de départ pour l'invention. e the first rich in glycolipids and impurity material used as starting material for the invention. Les pics sont identifiés par les acronymes TAG, FFA, Ul, et MELs qui renvoient respectivement aux triglycérides (Tri Acyl Glycerides), aux acides gras (Free Fatty Acids), à d'autres impuretés non identifiées, et aux glycolipides (Mannosyl Erythritol Lipids dans le cadre de cet exemple). The peaks are identified by the acronyms TAG, FFA, Ul, and MELs which respectively refer to triglycerides (Tri Acyl glycerides), fatty acids (Free Fatty Acids), to other unidentified impurities, and glycolipids (mannosyl Erythritol Lipids in the context of this example). La teneur totale en glycolipides quantifiée à partir de ce chromatogramme est 96.5 % en masse. Total glycolipid content quantified using the chromatogram is 96.5 mass%. La pureté en glycolipides par rapport aux lipides totaux est également de 96.5% en masse, la principale impureté résiduelle quantifiable étant les acides gras. The purity glycolipids compared to total lipids is 96.5 wt%, the main impurity being measurable residual fatty acids.

EXEMPLES EXAMPLES

Exemple 1 - Production de MELs par fermentation Example 1 - Production by fermentation MELs

La souche Pseudozyma aphidis DSM 70725 est conservée sur un milieu gélosé PDA (Potatoe Dextrose Agar). The Pseudozyma aphidis DSM 70725 strain was maintained on an agar medium PDA (Potatoe Dextrose Agar). Elle a été transférée à l'oese dans un milieu de préculture et cultivée stérilement pendant 2 jours à 30°C et 200 rpm dans une fiole d'erlenmeyer remplie au 1/5. It was transferred to the oese in a preculture medium and cultured under sterile conditions for 2 days at 30 ° C and 200 rpm in an Erlenmeyer flask filled to 1/5. Cette première étape de propagation a ensuite été transférée stérilement dans une seconde étape de propagation avec un taux de transfert de 10% vol/vol. This first stage of propagation was then transferred under sterile conditions in a second stage of propagation with a transfer rate of 10% vol / vol. Cette seconde étape de propagation a été ensuite transférée dans une troisième étape de propagation avec un taux de transfert de 10% vol/vol. This second propagation step was then transferred to a third step of propagation with a transfer rate of 10% vol / vol. La composition du milieu de préculture est donnée dans le tableau suivant : The composition of the preculture medium is given in the following table:

Le tout est dissout dans de l'eau distillée et est stérilisé à 121 °C pendant 20 minutes. The whole is dissolved in distilled water and sterilized at 121 ° C for 20 minutes. Le volume du milieu liquide est limité à 1/5 du volume total de la fiole pour une oxygénation optimale. The volume of the liquid medium is limited to 1/5 of the total volume of the vial for optimum oxygenation. La culture de propagation a été incubée pendant 2 jours à 30 °C et 200 rpm. Culture propagation was incubated for 2 days at 30 ° C and 200 rpm. Elle a ensuite été transférée dans un fermenteur instrumenté de 7L total équipé de sondes température, pH, p02 et mousse préalablement calibrées selon les règles habituelles pour l'homme du métier. It was then transferred into a fermenter equipped instrumented 7L total probes temperature, pH, p02 and foam previously calibrated according to the usual rules for the skilled person.

La composition du milieu de fermentation est donnée dans le tableau suivant : The composition of the fermentation medium is given in the following table:

Les ingrédients du milieu ont été dissouts dans de l'eau désionisée et le milieu a été stérilisé dans le fermenteur à 121 °C pendant 30-40 minutes. The medium ingredients were dissolved in deionized water and the medium was sterilized in the fermenter at 121 ° C for 30-40 minutes. Le volume de milieu préparé a été de 4.32L. The volume of medium prepared was 4.32L. Le volume de transfert du milieu de propagation a été de 10% vol/vol. The transfer volume of the propagation medium was 10% vol / vol. La fermentation a été régulée à 37°C, la p02 a été régulée de façon à être supérieure à 0 par l'agitation et l'aération. The fermentation was controlled at 37 ° C, the p02 was controlled to be greater than 0 with stirring and aeration.

Au cours de la fermentation, la phase organique contenant l'huile de soja, les acides gras issus de l'hydrolyse des triglycérides de l'huile et les MELs ont été séparés de la phase aqueuse. During the fermentation, the organic phase containing soybean oil, fatty acids derived from the hydrolysis of the triglyceride oil and MELs were separated from the aqueous phase. Cette séparation a été réalisée par centrifugation discontinue et la phase organique a été récupérée pour séparation des MELs et des autres composés. This separation was performed by discontinuous centrifugation and the organic phase was collected for separation of MELs and other compounds.

En fin de fermentation, des billes de gel contenant l'huile de soja, les acides gras issus de l'hydrolyse des triglycérides de l'huile et les MELs ont été séparés de la phase aqueuse par séparation solide/liquide sur un tamis de 200 pm. At the end of fermentation, gel beads containing soybean oil, fatty acids derived from the hydrolysis of triglyceride oil and MELs were separated from the aqueous phase by solid / liquid separation on a sieve of 200 pm.

Des matières premières enrichies en MELs peuvent être obtenues de manière similaire par la fermentation d'autres huiles végétales, comme les huiles d'arachide, de coco, de colza, d'olive, de palme ou de tournesol ou des mélanges d'huile et d'autres substrats carbonés tels que du glucose ou du glycérol. Raw material enriched MELs can be obtained similarly by the fermentation of other vegetable oils, like peanut oil, coconut oil, rapeseed oil, olive, palm or sunflower oil or mixtures of oil and other carbon substrates such as glucose or glycerol.

Exemple 2 - Extraction sélective de lipides neutres avec le cyclohexane Example 2 - Selective extraction of neutral lipids with cyclohexane

Un produit brut riche en MELs a été produit dans des conditions similaires à celles décrites dans l'exemple 1. La composition du produit brut telle que mesurée par HPLC était de 43 w% en MELs (dont 22.7 w% de MEL-A, 5.1 w% de MEL-B, 15.2 w% de MEL-C), 35 w% en eau et le complément constitué d'impuretés hydrophobes, acides gras pour la majeure partie. A rich crude product MELs was produced under similar conditions to those described in Example 1. The composition of the crude product as measured by HPLC was 43% by w MELs (including 22.7% w of MEL-A, 5.1 w% of MEL-B, 15.2 w% of MEL-C), 35 w% water and the balance consisting of hydrophobic impurities, fatty acids for the most part. Ce produit brut est dilué dans une solution d'eau et d'éthanol dans les proportions décrites dans le tableau ci-dessous. This crude product is diluted in water and ethanol solution in the proportions shown in the table below. La solution obtenue est filtrée sur papier filtre WHATMAN™ GF/F (0.7 pm) pour éliminer le trouble. The solution obtained is filtered on filter paper Whatman ™ GF / F (0.7 pm) to remove the disorder. Elle est ensuite mise en contact avec du cyclohexane dans les proportions décrites dans le tableau ci-dessous. It is then contacted with cyclohexane in the proportions shown in the table below.

Pour chaque essai, la cellule contenant les deux phases liquides est agitée pendant 8 heures à l'aide d'un barreau aimanté pour assurer un temps de contact suffisant pour les phases et l'atteinte des concentrations en solutés à l'équilibre dans chacune des phases. For each test, the cell containing the two liquid phases was stirred for 8 hours using a magnetic stirrer to ensure a sufficient contact time for the phases and the achievement of concentrations of solute equilibrium in each of the phases. La cellule est également double-enveloppée et thermostatée à 25°C pour assurer une température constante et maîtrisée sur toute la durée de l'essai. The cell is also double-wrapped and thermostatted at 25 ° C to ensure a constant and controlled temperature throughout the duration of the test. Après arrêt de l'agitation, un temps de repos de 5 heures est appliqué pour assurer une séparation parfaite des phases liquides par décantation. After stopping the stirring, a 5-hour rest period is applied to ensure complete separation of the liquid phases by decantation. Chacune des deux phases est alors prélevée et analysée par HPLC, pour la quantification des teneurs massiques en MEL A et en impuretés. Each of the two phases is then removed and analyzed by HPLC for quantification of the contents by weight of A and MEL impurities. Seuls les MEL A sont quantifiés car il s'agit de la forme avec le degré d'acétylation le plus élevé parmi les formes de MELs, donc la plus susceptible d'être extraite dans la phase apolaire. Only MEL A are quantified because it is the form with the highest degree of acetylation among the forms of MELs, so the most likely to be extracted in the nonpolar phase. Les résultats présentés dans le tableau ci-dessous indiquent clairement un coefficient de partage, c'est-à-dire un ratio de la concentration en phase apolaire par la concentration en phase polaire, nettement supérieur pour les acides gras que pour les MELs. The results presented in the table below clearly indicate a partition coefficient, that is to say, a ratio of the concentration of non-polar phase with the polar phase concentration, significantly higher than for fatty acids and for MELs. Surtout, les teneurs en triglycérides ne sont pas indiquées car les teneurs résiduelles en triglycérides dans la phase polaire étaient systématiquement sous la limite requise pour une quantification fiable, et notamment non détectés pour les essais 5 et 6 ce qui signifie que la teneur en triglycérides était inférieure à 100 ppm environ pour ces essais. Importantly, the triglyceride levels are not indicated as triglyceride residual contents in the polar phase were consistently below the required limit for reliable quantification, including undetected for tests 5 and 6, which means that the triglyceride content was less than 100 ppm for these tests.

Exemple 3 - Extraction sélective de lipides neutres avec les terpènes Example 3 - Selective extraction of neutral lipids with terpenes

Les essais d'extraction liquide-liquide décrits dans l'exemple 2 ont été reproduits strictement à l'identique pour les essais 1, 2 et 3, la seule différence étant que le solvant apolaire utilisé a été du Dipentene 38, mélange de terpènes commercialisé par la société DRT, à la place du cyclohexane. The liquid-liquid extraction tests described in Example 2 were repeated strictly identical to trials 1, 2 and 3, the only difference being that the apolar solvent used was Dipentene 38, terpene blend marketed by DRT, instead of cyclohexane. Le Dipentene 38 contient notamment 40% de dipentène, mélange racémique des isomères d-limonène et l-limonène, 20% de alpha-terpinène, 10% de gamma-terpinène, et 20% de terpinolène. Dipentene 38 contains in particular 40% dipentene, the racemic mixture of the d-limonene and limonene, 20% of alpha-terpinene, 10% gamma-terpinene, terpinolene and 20%. Les conditions des essais sont décrites dans le tableau ci-dessous. The test conditions are described in the table below.

Les résultats présentés dans le tableau ci-dessous confirment que des performances similaires au cyclohexane sont obtenues avec le mélange de terpènes. The results presented in the table below confirm that performance similar to the cyclohexane are obtained with the mixture of terpenes. Le coefficient de partage des MELs est très nettement en faveur de la phase polaire, tandis que le coefficient de partage des acides gras est très nettement en faveur de la phase apolaire. The MELs partition coefficient is very clearly in favor of the polar phase, while the coefficient of distribution of fatty acids is very much in favor of the non-polar phase.

Exemple 4 - Purification de MELs par extraction liquide-liquide continue -1 Example 4 - Purification of MELs by liquid-liquid extraction continues -1

Un produit brut riche en MELs a été produit dans des conditions similaires à celles décrites dans l'exemple 1. La composition du produit brut telle que mesurée par HPLC était de 39.3 w% en MELs, et de 21.5 w% en impuretés de type lipides, acides gras ou triglycérides (figure 5A). A rich crude product MELs was produced under similar conditions to those described in Example 1. The composition of the crude product as measured by HPLC was 39.3% w mel, and 21.5 w% lipid impurities , fatty acids or triglycerides (Figure 5A). La teneur en eau est de l'ordre de 35% en masse. The water content is of the order of 35% by mass. Ce produit brut a l'apparence d'une pâte visqueuse, et est dilué par un solvant polaire constitué de 85% d'éthanol et 15% d'eau, dans un premier temps avec un ratio de 0.5 masse de solvant par masse de produit de départ. This crude product has the appearance of a viscous paste, and is diluted with a polar solvent consisting of 85% ethanol and 15% water, initially with a ratio of 0.5 mass of solvent per mass of product departure. Le ratio ethanol/eau est proche de 1 dans la solution liquide obtenue à l'issue de cette première dilution. The ratio of ethanol / water is close to 1 in the liquid solution obtained at the end of this first dilution. La solution est centrifugée à 4000 G pendant 30 min sur une centrifugeuse ROTI NA 380R. The solution is centrifuged at 4000 G for 30 minutes on a centrifuge Roti NA 380R. Le liquide surnageant est récupéré par surverse et filtré sur papier filtre WHATMAN™ GF/F (0.7 pm) pour éliminer le trouble. The supernatant is recovered by overflow and filtered through filter paper Whatman ™ GF / F (0.7 pm) to remove the disorder. Une seconde dilution par la même solution à 85% d'éthanol et 15% d'eau est alors réalisée, avec un ratio de 2.35 masses de solvant par masse de solution clarifiée. A second dilution with the same solution in 85% ethanol and 15% water is then carried out with a ratio of 2.35 mass solvent mass clarified solution. À l'issue de cette seconde dilution le ratio massique éthanol/eau dans la solution liquide est donc de 3.6. Following this second dilution mass ratio of ethanol / water in the liquid solution is 3.6. La seconde solution obtenue est utilisée comme alimentation polaire pour l'étape d'extraction liquide-liquide continue à suivre. The second solution is used as feed for the polar liquid-liquid extraction step continues to follow. Une colonne d'extraction mécaniquement agitée, de technologie KÜHNI commercialisée par la société SULZER, de diamètre interne 32 mm et de hauteur agitée 900 mm, est alimentée d'une part en tant que phase lourde la phase polaire décrite précédemment, et d'autre part en tant que phase légère par du cyclohexane pur à 99.9%. An extraction column mechanically stirred, Kuhni technology marketed by Sulzer, internal diameter 32 mm and of 900 mm height stirred, is fed partly as a heavy phase the polar phase described above, and other part as light phase with pure cyclohexane 99.9%. Les débits d'alimentation de chaque phase sont réglés à 4.5 kg/h pour la phase polaire et à 2.6 kg/h pour le solvant d'extraction, de sorte que le ratio massique des deux débits soit de 0.58. Each phase of the feed rates are set to 4.5 kg / h for the polar phase and 2.6 kg / h to the extraction solvent, so that the mass ratio of the two speeds is 0.58. La vitesse d'agitation est réglée à 100 tours par minute, et après une durée de stabilisation d'une heure les débits et compositions des flux de sortie sont mesurés. The stirring speed is set at 100 revolutions per minute, and after a period of stabilization of one hour the flow rates and compositions of the outlet streams are measured. Le point de fonctionnement obtenu est décrit par le tableau suivant. The resulting operating point is described by the following table. Ce point de fonctionnement est encore maintenu pendant plus de deux heures de façon stable, et n'a été interrompu que pour cause d'épuisement des produits à alimenter. This operating point is still maintained for more than two hours stably, and was interrupted only for exhaustion of the products to be supplied.

Le bouclage du bilan massique est proche de 100% pour les MELs et pour les triglycérides et esters gras. The closure of the mass balance is close to 100% for MELs and triglycerides and fatty esters. Un écart de 15% non négligeable est relevé pour les acides gras, mais reste dans la marge d'incertitude cumulée des analyses et des mesures de débits. A difference of 15% is raised to significant fatty acids, but remains in the cumulative margin of uncertainty analysis and flow measurements. Le rendement de récupération des MELs dans la phase raffinât est supérieur à 95%. The MELs recovery performance in the raffinate phase is greater than 95%. Une masse de 1 066 grammes de raffinât est concentrée par évaporation sur un évaporateur rotatif, référence R-200 commercialisé par la société Büchi, à une pression de 250 mbar et à une température de chauffe de 75°C, jusqu'à obtenir une concentration par un facteur 5. À ce stade 213 grammes d'eau déminéralisée sont ajoutés et l'évaporation est reprise. A mass of 1066 grams of raffinate is concentrated by evaporation on a rotary evaporator, reference R-200 sold by the company Büchi, at a pressure of 250 mbar and at a heating temperature of 75 ° C until a concentration by a factor 5. At this point 213 grams of deionized water was added and evaporation was resumed. La pression est descendue jusqu'à 1 mbar en fin d'opération, avec une température de chauffage de 90°C, pour limiter le temps de l'opération réalisée en batch. The pressure is lowered to 1 mbar at the end of operation, with a heating temperature of 90 ° C, to limit the time of the operation performed in batch. Une masse de 89 grammes de résidu est obtenue. A mass of 89 grams of residue is obtained. Le résidu est fortement visqueux, de couleur orange et limpide. The residue is highly viscous, orange and clear color. Il contient une concentration totale en MELs de 95.6 w%. It contains a total concentration of 95.6 w% MELs. Les teneurs résiduelles en acides gras et en triglycérides ou esters gras sont quantifiées à 3.35 w% et à 0.35 w% respectivement (figure 5B). The residual fatty acids and triglycerides or fatty esters contents are quantified at 3.35% w and 0.35 w%, respectively (Figure 5B). La teneur totale en eau est mesurée par analyse Karl-Fischer à 2 w%, tandis que les teneurs résiduelles en solvants sont confirmées à moins de 1000 ppm en éthanol et moins de 1 ppm en cyclohexane par analyse GC-MS. The total water content is measured by Karl-Fischer analysis to 2 w% while the solvent residual contents are confirmed to less than 1000 ppm ethanol and less than 1 ppm in cyclohexane by GC-MS analysis.

Exemple 5 - Purification de MELs par extraction iiquide-iiquide et adsorption Example 5 - Purification of MELs by Iiquid-Iiquid extraction and adsorption

Cet exemple décrit une façon avantageuse de mettre en oeuvre l'invention, en incluant également une étape de décoloration sur charbon actif. This example describes an advantageous way to implement the invention, also including a bleaching step on activated charcoal. Une masse totale de 7.57 kg de la phase raffinât produite dans les conditions de l'exemple 4, sont passés sur une colonne de 25 mm de diamètre intérieur, et 25 cm de haut, garnie de charbon actif fourni par la société CECA CARBON sous la référence ECA 14 076. Plusieurs essais sont réalisés avec des vitesses superficielles comprises entre 1 et 4 m/h pour la phase liquide. A total mass of 7.57 kg of raffinate phase produced under the conditions of Example 4, are passed over a column of 25 mm inner diameter and 25 cm high, packed with activated carbon supplied by CECA company under the CARBON reference ECA 14 076. Several tests were conducted at surface speeds of between 1 and 4 m / h for the liquid phase. La masse totale de charbon actif utilisée est de 123 grammes. The total weight of activated carbon used is 123 grams. Le liquide récupéré après passage sur charbon est ensuite fractionné par distillation discontinue à 250 mbar sur une colonne de distillation de 25 mm de diamètre intérieure, garnie sur une hauteur de 1 m par du garnissage métallique vrac Pro-Pak™. The liquid recovered after passage over carbon is then fractionated by discontinuous distillation at 250 mbar on a distillation column 25 mm in inner diameter, packed to a height of 1 m from the bulk metal packing Pro-Pak ™. Une masse de 1.25 kg de solution est traitée à chaque opération alimentée en continu pendant l'essai pour garder un colume constant d'environ 300 à 400 g dans le bouilleur, et 250 g d'eau déminéralisée sont ajoutés en fin d'essai jusqu'à élimination des solvants en tête de colonne. A mass of 1.25 kg of solution is treated in each operation continuously fed during the test to maintain a constant colume of about 300 to 400 g in the boiler, and 250 g of demineralized water are added at the end of test until 'to eliminate column head solvents. Le résidu de la distillation est refroidi et décanté, une masse de 445 grammes d'eau excédentaire est séparée. The distillation residue was cooled and decanted, a mass of 445 grams of excess water is separated. La teneur en MEL dans cette eau excédentaire est inférieure à 1%. MEL content in this excess water is less than 1%. Une masse de 1.07 kg de phase inférieure riche en MEL et en eau est concentrée sur évaporateur rotatif dans les mêmes conditions que décrites dans l'exemple 4. Une masse de 393 grammes de résidu est obtenue. A mass of 1.07 kg rich lower phase MEL and water is concentrated on a rotary evaporator under the same conditions as described in Example 4. A mass of 393 grams of residue was obtained. Le résidu est fortement visqueux, de couleur jaune à jaune orangé et limpide. The residue is highly viscous, yellow to orange and clear yellow. Il contient une concentration totale en MELs mesurée à 100.8 w%. It contains a total concentration of MELs measured at 100.8 w%. Mais compte tenu de l'incertitude analytique ce résultat peut être normalisé avec les teneurs résiduelles en acides gras et en triglycérides ou esters gras qui sont quantifiées à 3.35 w% et à 0.35 w% respectivement, pour aboutir à une pureté relative en glycolipides par rapport aux lipides totaux de 96.5%, identique à l'échantillon obtenu en fin d'exemple 4. La teneur totale en eau est mesurée par analyse Karl-Fischer à 0.14 w%, tandis que les analyses des teneurs résiduelles en solvants par GC-MS donnent un résultat comparable pour l'éthanol et proche de 0.1 ppm pour le cyclohexane. But given the analytical uncertainty this can be normalized with the residual contents of fatty acids and triglycerides or fatty esters which are quantified at 3.35% w and w to 0.35% respectively, leading to a relative purity compared glycolipids the total lipids 96.5%, identical to the sample obtained at the end of example 4. the total water content is measured by Karl-Fischer analysis to 0.14 w%, while analyzes of solvent residual levels by GC-MS give a comparable result for ethanol and close to 0.1 ppm cyclohexane.

Exemple 6 - Purification de MELs par extraction liquide-liquide continue - 2 Example 6 - Purification of MELs by continuous liquid-liquid extraction - 2

Les conditions de l'exemple 4 ont été reproduites à l'identique jusqu'à l'étape d'extraction liquide-liquide. The conditions of Example 4 were reproduced identically to the liquid-liquid extraction step. Un second point de fonctionnement a été réalisé en ajustant les débits d'alimentation de chaque phase à 4.1 kg/h pour la phase polaire et à 2.8 kg/h pour le cyclohexane, de sorte que le ratio massique des deux débits soit de 0.68. A second operating point has been achieved by adjusting the feed rates of each phase at 4.1 kg / h for the polar phase and 2.8 kg / h cyclohexane, so that the mass ratio of the two speeds is 0.68. La vitesse d'agitation est réglée à 100 tours par minute, et après une durée de stabilisation d'une heure les débits et compositions des flux de sortie sont mesurés. The stirring speed is set at 100 revolutions per minute, and after a period of stabilization of one hour the flow rates and compositions of the outlet streams are measured. Le point de fonctionnement obtenu est décrit par le tableau suivant The resulting operating point is described by the following table

Le bouclage du bilan massique est proche de 100% pour les MELs. The closure of the mass balance is close to 100% for MELs. Des écarts de 5 et 10% sont relevés pour les acides gras et pour les triglycérides ou esters gras respectivement, mais restent dans la marge d'incertitude cumulée des analyses et des mesures de débits. Deviations from 5 to 10% are raised for fatty acids and triglycerides or fatty esters respectively, but remain in the cumulative margin of uncertainty analysis and flow measurements. Le rendement de récupération des MELs dans la phase raffinât reste supérieur à 95% quoique légèrement dégradé par rapport aux résultats de l'exemple 4. La pureté des MELs en revanche dans le raffinât est augmentée puisque les glycolipides représentent 97.5% du total des lipides quantifiés. MELs recovery performance in the raffinate phase remains above 95% although slightly degraded compared with the results of Example 4. The purity of MELs however in the raffinate is increased as glycolipids represent 97.5% of total lipids quantified . Augmenter le débit de solvant d'extraction sur un équipement donné permet donc d'augmenter le niveau de pureté atteint, avec une diminution acceptable du rendement dans les conditions décrites. Increase the extraction solvent rate on a given device therefore increases the purity level achieved with acceptable yield reduction under the conditions described.

REFERENCES - Accorsini, FR, Mutton, MJR, Lemos, EGM, & REFERENCES - Accorsini, FR, Mutton, MJR, Lemos, EGM & amp; Benincasa, M. (2012). Benincasa, M. (2012). Biosurfactants production by yeasts using soybean oil and glycerol as low cost substrate. Biosurfactants producing yeasts by using soybean oil and glycerin as low cost substrate. Brazilian Journal of Microbiology, 43(1), 116-125. Brazilian Journal of Microbiology, 43 (1), 116-125. - Eberhagen, D., & - Eberhagen, D., & amp; Betzing, H. “An improved technique for dialysis of lipids.” {^962). Betzing H. "An Improved technology for dialysis of lipids." {^ 962). Journal of Lipid Research, 3(3), 382-383. Journal of Lipid Research, 3 (3), 382-383. - Foich, J., Lees, M., & - Foich, J., Lees, M., & amp; Sloane-Stanley, GH “A simple method forthe isolation and purification of total lipids from animal tissues” {^957). Sloane-Stanley, GH "A simpler method forthe isolation and purification of total lipids from animal tissues" {^ 957). J biol chem, 226(1), 497-509 - McCracken, JR, & J Biol Chem, 226 (1), 497-509 - McCracken, Jr., & amp; Datyner, A. “The purification of polyoxyethylated alkylphenol surfactants”{^974). Datyner, A. "The purification of polyoxyethylated alkylphenol surfactants" {^ 974). Colloid and Polymer Science, 252(11), 971-977. Colloid and Polymer Science, 252 (11), 971-977. - Galanos, DS, & - Galanos, DS, & amp; Kapoulas, VM “Isolation of polar lipids from triglycéride mixtures” (1962). Kapoulas VM "Isolation of polar lipids from triglyceride mixtures" (1962). Journal of Lipid Research, 3(1), 134-136. Journal of Lipid Research, 3 (1), 134-136. - Hartman, L. “Comparison of two methods for the séparation of polar from nonpolar lipids.”{^967). - Hartman, L. "Comparison of two methods for the separation of polar from nonpolar lipids." {^ 967). Journal of lipid research, 8(3), 285-287. Journal of Lipid Research, 8 (3), 285-287. - Hubert, J., Plé, K., Hamzaoui, M., Huissier, G., Hadef, I., Reynaud, R. & - Hubert J., Ple, K., Hamzaoui, M. Usher, G., Hadef, I., Reynaud, R. & amp; Renault, JH “New perspectives for microbial glycolipid fractionation and purification processes” (2012). Renault, JH "New prospects for microbial glycolipid fractionation and purification processes" (2012). Comptes Rendus Chimie, 15(1), 18-28. Comptes Rendus Chimie, 15 (1), 18-28. - Kitamoto, D., Akiba, S., Hioki, C., & - Kitamoto, D., Akiba, S., Hioki, C., & amp; Tabuchi, T. “Extracellular accumulation of mannosylerythritol lipids by a strain of Candida antarctica.” (1990). Tabuchi, T. "Extracellular accumulation of lipids mannosylerythritol by a strain of Candida antarctica." (1990). Agricultural and Biological Chemistry, 54(1), 31-36. Agricultural and Biological Chemistry, 54 (1), 31-36. - Kitamoto D., Ikegami T., Suzuki GT, Sasaki A., Takeyama Yl, Idemoto Y., Koura N., Yanagishita H. “Microbial conversion of n-alkanes into glycolipid biosurfactants, mannosylerythritol lipids, by Pseudozyma (Candida antarctica).'' (2001). - D. Kitamoto, Ikegami T., Suzuki GT, A. Sasaki, Takeyama YI, Idemoto Y., N. Koura, Yanagishita H. "Microbial conversion of n-alkanes into glycolipid biosurfactants, mannosylerythritol lipids, by Pseudozyma (Candida antarctica) . '' (2001). Biotechnology Letters 23, 1709-1714 - Rau, U., Nguyen, LA, Roeper, H., Koch, H., & Biotechnology Letters 23, 1709-1714 - Rau, U. Nguyen, LA, Roeper, H., Koch, H., & amp; Lang, S. “Downstream Processing of mannosylerythritol lipids produced by Pseudozyma aphidis” (2005a). Lang, S. "Downstream Processing of mannosylerythritol lipids produced by Pseudozyma aphidis" (2005a). European journal of lipid science and technology, 107(6), 373-380. European journal of lipid science and technology, 107 (6), 373-380. - Rau U., Nguyen LA, Roeper H., Koch H., Lang S. “Fed-batch bioreactorproduction of mannosylerythritol lipids secreted by Pseudozyma aphidis.” (2005b). - Rau U. Nguyen LA, Roeper H. Koch H. Lang S. "Fed-batch bioreactorproduction mannosylerythritol of lipids secreted by Pseudozyma aphidis." (2005b). Appl Microbiol Biotechnol, 68, 607-613 - Smyth, TJP, Perfumo, A., Marchant, R., & Appl Microbiol Biotechnol 68, 607-613 - Smyth, TJP, Perfumo, A. Marchant, R., & amp; Banat, IM “Isolation and analysis oflow molecular weight microbial glycolipids. Banat, IM "Isolation and molecular weight analysis Oflow microbial Glycolipids. In Handbook of hydrocarbon and lipid microbiology”{20^0) pp. In Handbook of hydrocarbon and Lipid Microbiology "{20 ^ 0) p. 3705-3723. 3705-3723. Springer Berlin Heidelberg. Springer Berlin Heidelberg. - WO 2004/020647 - JP 2007-252280 - EPI 027 413 - EP 1 222 009 - WO 2004/020647 - JP 2007-252280 - EPI 027 413 - EP 1222009

Claims (14)

  1. REVENDICATIONS
    1. Procédé de purification de glycolipides par extraction liquide/liquide à partir d'une matière première comprenant les glycolipides à purifier et des impuretés hydrophobes de type triglycérides et acides gras caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives de 1. dissoudre la matière première dans une phase polaire comprenant au moins un alcool en C2-C3 et de l'eau pour dissoudre les glycolipides, puis ii. 1. A process for purifying glycolipids by liquid / liquid extraction from a raw material comprising purifying glycolipids and hydrophobic impurities type triglycerides and fatty acids characterized in that it comprises the successive steps of 1. dissolving the material first in a polar phase comprising at least one C2-C3 alcohol and water to dissolve the glycolipid, and ii. mise en contact de la phase polaire avec une phase apolaire comprenant un solvant organique apolaire non miscible à la phase polaire pour permettre le transfert des impuretés hydrophobes dans la phase apolaire, puis iii. contacting the polar phase with an apolar phase comprising an apolar organic solvent immiscible with the polar phase to allow the transfer of hydrophobic impurities in the apolar phase, and then iii. séparation des phases polaires et apolaires et récupération de la phase polaire purifiée, puis iv. separation of the polar and apolar phases and recovering the purified polar phase, then iv. isoiation des glycolipides de la phase polaire purifiée. isoiation glycolipids of the purified polar phase.
  2. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'alcool en C2-C3 est choisi parmi l'éthanol, l'isopropanol et leurs mélanges en toutes proportions. 2. Method according to claim 1, characterized in that the alcohol C2-C3 is selected from ethanol, isopropanol and mixtures thereof in all proportions.
  3. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que le rapport pondéral alcool/eau va de 2/1 à 5/1. 3. A method according to one of claims 1 or 2, characterized in that the weight ratio of alcohol / water ratio is from 2/1 to 5/1.
  4. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le solvant organique de la phase apolaire est choisi parmi le cyclohexane, l'heptane, le butane ou le pentane à l'état liquide ou un hydrocarbure insaturé d'origine végétale tel que les terpènes, limonène, ou pinène, ou leurs dérivés hydrogénés, tel que le paramenthane. 4. A method according to one of claims 1 to 3, characterized in that the organic solvent from the apolar phase is selected from cyclohexane, heptane, butane or pentane in the liquid state or an unsaturated hydrocarbon of vegetable origin such as the terpenes, limonene or pinene, or their hydrogenated derivatives, such as para-menthane.
  5. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'étape ii. 5. A method according to one of claims 1 to 4, characterized in that step ii. de mise en contact des phases apolaire et polaire et l'étape iii. contacting of the polar and apolar phases and step iii. De séparation de ces phases sont réalisées conjointement sur un dispositif d'extraction à contre-courant avec circulation continue des deux flux liquides. Separation of these phases are carried out jointly in a retrieval device against the current with continuous circulation of the two liquid streams.
  6. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la phase polaire obtenue à l'étape iii. 6. A method according to one of claims 1 to 5, characterized in that the polar phase obtained in step iii. est soumise à une étape de décoloration, par exemple adsorption sur charbon actif, avant d'isoler les glycolipides. is subjected to a bleaching step, for example activated carbon adsorption, before isolating the glycolipids.
  7. 7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les glycolipides sont isolés de la phase polaire par distillation ou évaporation de l'éthanol et de l'eau, 7. A method according to one of claims 1 to 6, characterized in that the glycolipids are isolated from the polar phase by distillation or evaporation of the ethanol and water,
  8. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les glycolipides sont isolés de la phase polaire suivant une première phase de distillation pour éliminer les solvants, puis une seconde phase d'évaporation pour éliminer l'eau. 8. A method according to one of claims 1 to 6, characterized in that the glycolipids are isolated from the polar phase in a first distillation step to remove solvents, and then a second phase evaporation to remove water.
  9. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'une quantité supplémentaire d'eau est ajoutée à la phase polaire après extraction pour faciliter l'isolation des glycolipides, l'éventuel excédent d'eau étant éliminé par décantation avant évaporation. 9. A method according to one of claims 1 to 8, characterized in that an additional amount of water is added to the polar phase after extraction to facilitate isolation of the glycolipids, the possible excess water being removed by settling before evaporation.
  10. 10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que les glycolipides sont des MELs. 10. A method according to one of claims 1 to 9, characterized in that the glycolipids are MELs.
  11. 11. Procédé selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que la matière première est un produit de fermentation d'huile végétale. 11. A method according to one of claims 1 to 10, characterized in that the raw material is a vegetable oil fermentation product.
  12. 12. Procédé selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que les glycolipides isolés ont les caractéristiques suivantes, les teneurs étant exprimées en masse et hors eau : - au moins 90% de glycolipides - moins de 1%, de préférence moins de 0.2%, de triglycérides - moins de 5%, de préférence moins de 3%, d'acides gras libres - moins de 1000 ppm, de préférence moins de 100 ppm, d'alcools en C2-C3, - moins de 50 ppm, de préférence moins de 1 ppm, de solvant apolaire. 12. A method according to one of claims 1 to 11, characterized in that the isolated glycolipids have the following characteristics, the contents being expressed by weight and out water: - at least 90% of glycolipids - less than 1%, preferably less than 0.2%, triglyceride - less than 5%, preferably less than 3%, free fatty acids, - less than 1000 ppm, preferably less than 100 ppm, alcohols, C2-C3, - less than 50 ppm, preferably less than 1 ppm, of non-polar solvent.
  13. 13. Mélange de glycolipides susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il a la composition suivante les teneurs étant exprimées en masse et hors eau : - au moins 90% de glycolipides - moins de 1%, de préférence moins de 0.2%, de triglycérides - moins de 5%, de préférence moins de 3%, d'acides gras libres - moins de 1000 ppm, de préférence moins de 100 ppm d'alcool en C2-C3 - moins de 50 ppm, de préférence moins de 1 ppm, de solvant organique apolaire. 13. glycolipid mixture obtainable by the method according to one of claims 1 to 11, characterized in that it has the following composition the contents being expressed by weight and out water: - at least 90% of glycolipids - less than 1%, preferably less than 0.2%, triglyceride - less than 5%, preferably less than 3%, free fatty acids, - less than 1000 ppm, preferably less than 100 ppm C2 alcohol -C 3 - less than 50 ppm, preferably less than 1 ppm, apolar organic solvent.
  14. 14. Mélange selon la revendication 13, caractérisé en ce que les glycolipides sont des mannosylerythritol lipides (MELs) comprenant un mélange de MEL-A, MEL-B et MEL-C. 14. A mixture according to claim 13, characterized in that the glycolipids are lipids mannosylerythritol (MELs) comprising a mixture of MEL-A, MEL and MEL-B-C.
FR1652772A 2016-03-31 2016-03-31 Method glycolipids extraction and glycolipids obtained Pending FR3049472A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1652772A FR3049472A1 (en) 2016-03-31 2016-03-31 Method glycolipids extraction and glycolipids obtained

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1652772A FR3049472A1 (en) 2016-03-31 2016-03-31 Method glycolipids extraction and glycolipids obtained
PCT/EP2017/057601 WO2017167914A1 (en) 2016-03-31 2017-03-30 Glycolipid-extraction method and glycolipids obtained

Publications (1)

Publication Number Publication Date
FR3049472A1 true true FR3049472A1 (en) 2017-10-06

Family

ID=56896643

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR1652772A Pending FR3049472A1 (en) 2016-03-31 2016-03-31 Method glycolipids extraction and glycolipids obtained

Country Status (2)

Country Link
FR (1) FR3049472A1 (en)
WO (1) WO2017167914A1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004020647A1 (en) * 2002-08-24 2004-03-11 Cerestar Holding B.V. Process for producing and recovering mannosylerythritol lipids from culture medium containing the same
EP1813664A1 (en) * 2004-09-30 2007-08-01 Sapporo Breweries Limited Process for producing oil containing vegetable glycosphingolipid
US20110192073A1 (en) * 2010-04-06 2011-08-11 Heliae Development, Llc Extraction with fractionation of oil and proteinaceous material from oleaginous material

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6355693B1 (en) 1995-09-22 2002-03-12 Scotia Lipidteknik Ab Fractionated vegetable oil
FR2799984B1 (en) 1999-10-21 2002-05-03 Lavipharm Method for fractionating a material composed of several components with the aid of a solvent at supercritical pressure
JP4654415B2 (en) 2006-03-23 2011-03-23 独立行政法人産業技術総合研究所 The method of separating and recovering mannosylerythritol lipid
FR2948192B1 (en) 2009-07-20 2011-07-22 Commissariat Energie Atomique Process for optical characterization
US8531590B2 (en) 2009-07-22 2013-09-10 University Of Southern California Camera with precise visual indicator to subject when within camera view
WO2014185805A1 (en) 2013-05-17 2014-11-20 Instituto Superior Tecnico Enzymatic process for the production of mannosylerythritol lipids from lignocellulosic materials

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004020647A1 (en) * 2002-08-24 2004-03-11 Cerestar Holding B.V. Process for producing and recovering mannosylerythritol lipids from culture medium containing the same
EP1813664A1 (en) * 2004-09-30 2007-08-01 Sapporo Breweries Limited Process for producing oil containing vegetable glycosphingolipid
US20110192073A1 (en) * 2010-04-06 2011-08-11 Heliae Development, Llc Extraction with fractionation of oil and proteinaceous material from oleaginous material

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
UDO RAU ET AL: "Downstream processing of mannosylerythritol lipids produced byPseudozyma aphidis", EUROPEAN JOURNAL OF LIPID SCIENCE AND TECHNOLOGY., vol. 107, no. 6, 1 June 2005 (2005-06-01), DE, pages 373 - 380, XP055330947, ISSN: 1438-7697, DOI: 10.1002/ejlt.200401122 *

Also Published As

Publication number Publication date Type
WO2017167914A1 (en) 2017-10-05 application

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bhosle et al. New approaches in deacidification of edible oils––a review
US3652397A (en) Preparation of phosphatides
US6180376B1 (en) Extraction of triglycerides from microorganisms
US4062882A (en) Process for refining crude glyceride oils by membrane filtration
US2530809A (en) Fractionation of tall oil
Samorì et al. Effective lipid extraction from algae cultures using switchable solvents
FR2913683A1 (en) Crude glycerol-based product useful for producing dichloropropanol which is useful for producing epichlorohydrin and epoxy resins comprises glycerol alkyl ethers in specified amounts
US6610831B1 (en) Methods and apparatus for recovering zein from corn
FR2678632A1 (en) Process for the preparation of the unsaponifiable material from avocado which makes it possible to improve its content of one of its fractions known as H
US6166231A (en) Two phase extraction of oil from biomass
WO2011127127A2 (en) Extraction with fractionation of oil and co-products from oleaginous material
WO2010104444A1 (en) Method for separating neutral and polar lipids and an oil rich in polar lipids
WO2000014052A1 (en) Microbial process for the preparation of acetic acid as well as solvent for its extraction from the fermentation broth
US8962059B1 (en) Bio-based oil composition and method for producing the same
EP0139177A1 (en) Process for the production of edible fractions of fatty material, and their use
FR2678614A1 (en) Compound having activity as a collagenase inhibitor and medicament containing it
JPH0873396A (en) Lipid having high natural menaquinone-7 content
FR2798667A1 (en) Method for extraction of furan compounds and polyhydroxylated fatty alcohols of avocado, based composition and use of these compounds in therapeutic, cosmetic and food
Wang et al. Production of extremely pure diacylglycerol from soybean oil by lipase-catalyzed glycerolysis
JP2000175696A (en) Extraction of dunaliella alga body
Lee et al. Fractionation of chicken fat triacylglycerols: synthesis of structured lipids with immobilized lipases
EP0047204A2 (en) Process for the production of dehydrated alcohols for use as components in a motor fuel
US2349269A (en) Recovery of tocopherol
Harris et al. Isopropanol as a solvent for extraction of cottonseed oil: I. Preliminary investigations
US20070077635A1 (en) Obtaining fatty acid esters from native oils and fats

Legal Events

Date Code Title Description
PLFP Fee payment

Year of fee payment: 2

PLSC Search report ready

Effective date: 20171006

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 3