FR3025437A1 - CONDUCTIVE MEMBRANE CAPSULES - Google Patents

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Abstract

La présente invention concerne une capsule étant formée d'un cœur liquide et d'au moins une enveloppe gélifiée encapsulant totalement le cœur liquide à sa périphérie, ladite enveloppe gélifiée comprenant un matériau conducteur électrique ; l'utilisation d'une telle capsule pour la production de bioréacteurs, le criblage de micro-organismes ou la réalisation d'une anode et/ou cathode de piles à bactéries ainsi qu'une méthode de criblage de bactéries électro-actives utilisant ladite capsule et un dispositif comprenant une telle capsule.The present invention relates to a capsule being formed of a liquid core and at least one gelled envelope completely encapsulating the liquid core at its periphery, said gelled envelope comprising an electrically conductive material; the use of such a capsule for the production of bioreactors, the screening of microorganisms or the production of an anode and / or cathode of bacterial cells and a method for screening electroactive bacteria using said capsule and a device comprising such a capsule.

Description

1 Capsules à membrane conductrice La présente invention concerne une capsule formée d'un coeur liquide et d'au moins une enveloppe gélifiée encapsulant totalement le coeur liquide à sa périphérie, ladite enveloppe gélifiée comprenant un matériau conducteur électrique ; l'utilisation d'une telle capsule pour la production de bioréacteurs, le criblage de micro-organismes ou la réalisation d'une anode et/ou cathode de pile à bactéries ainsi qu'une méthode de criblage de bactéries électro-actives utilisant ladite capsule et un dispositif comprenant une telle capsule.The present invention relates to a capsule formed of a liquid core and at least one gelled envelope completely encapsulating the liquid core at its periphery, said gelled envelope comprising an electrically conductive material; the use of such a capsule for the production of bioreactors, the screening of microorganisms or the production of an anode and / or cathode of a bacterial cell and a method for screening electroactive bacteria using said capsule and a device comprising such a capsule.

La limitation de la production de déchets ainsi que la question de leur valorisation, et plus particulièrement celle de la valorisation de leur énergie, est aujourd'hui une préoccupation majeure. A l'heure actuelle, l'Union Européenne investit beaucoup dans le traitement des déchets. Par ailleurs, le traitement des eaux usées aux États-Unis permet de générer 15 GW d'énergie (25 milliards de dollars) ce qui représente 3% de la puissance électrique des États-Unis. Les déchets domestiques, industriels, ou d'origine animale représentent ainsi une puissance énergétique potentielle de 17 GW et une énergie de 1, 5.1011 kWh. Les piles microbiennes encore appelées piles à bactéries sont des dispositifs d'énergie verte remarquables qui exploitent les microorganismes afin de produire de l'électricité à partir de composés organiques comme les déchets. La bactérie se nourrit de déchets et en même temps, relargue des électrons.The limitation of the production of waste and the question of their valorization, and more particularly that of the valorization of their energy, is today a major concern. At present, the European Union is investing heavily in waste treatment. In addition, wastewater treatment in the United States generates 15 GW of energy ($ 25 billion), which represents 3% of US electrical power. Household, industrial or animal waste thus represents a potential energy output of 17 GW and an energy of 1, 5.1011 kWh. Microbial cells, also known as bacteria cells, are remarkable green energy devices that exploit microorganisms to produce electricity from organic compounds such as waste. The bacterium feeds on waste and at the same time releases electrons.

Cependant, les piles à bactéries actuelles présentent certains inconvénients, et il existe un besoin d'amélioration de la production d'énergie par les piles bactériennes existantes, notamment par la recherche de micro-organismes plus électrochimiquement actifs. La sélection d'organismes électro-actifs se fait actuellement en parallélisant des cultures dans des micro-puits muni d'une électrode (Hou, Han, & al PlosOne August 2009). Dans un domaine proche, la sélection à haut débit d'enzymes est faite grâce à des plaques de 96 puits (Song, O'Donohue Bioresource Technology 2010). Les inventeurs de la présente invention ont mis au point une capsule pouvant encapsuler un objet électro-actif qui présente de nombreux avantages par rapport aux techniques de l'art antérieur de sélection de micro-organismes électro-actifs.However, current bacterial cells have certain drawbacks, and there is a need for improvement of energy production by existing bacterial cells, particularly by the search for more electrochemically active microorganisms. The selection of electroactive organisms is currently done by parallelizing cultures in micro-wells with an electrode (Hou, Han, & al PlosOne August 2009). In a near field, high-throughput enzyme selection is done through 96-well plates (Song, O'Donohue Bioresource Technology 2010). The inventors of the present invention have developed a capsule that can encapsulate an electro-active object that has many advantages over the prior art techniques for selecting electroactive microorganisms.

3025437 2 La capsule selon l'invention permet de compartimenter la culture donc de décorréler le bioréacteur du système de lecture de l'activité électrochimique des microorganismes. Elle permet également une culture sur un temps plus long car la membrane de la capsule protège la culture des contaminations. De plus, et contrairement à ce qu'il 5 est observé avec les cultures en micro-puit, la culture en capsule permet le renouvellement du milieu sans manipulations complexes telles que des centrifugations ou des pipetages multiples. Le renouvellement facilité du milieu élimine les problèmes liés à l'évaporation. Par ailleurs, la capsule selon l'invention permet de connecter la culture à un 10 système de lecture pour connaître les performances électrochimiques de l'organisme encapsulé. Ainsi, la capsule selon l'invention apporte un outil nouveau à la culture de micro- organismes dans des capsules à coeur liquide en permettant d'agir de manière électrique sur l'organisme encapsulé.The capsule according to the invention makes it possible to compartmentalize the culture and therefore to decorrelate the bioreactor from the reading system of the electrochemical activity of the microorganisms. It also allows a culture over a longer time because the membrane of the capsule protects the culture from contaminations. In addition, and contrary to what is observed with microwell cultures, the capsule culture allows the renewal of the medium without complex manipulations such as centrifugations or multiple pipetting. The easy renewal of the environment eliminates the problems related to evaporation. Furthermore, the capsule according to the invention makes it possible to connect the culture to a reading system to know the electrochemical performances of the encapsulated organism. Thus, the capsule according to the invention provides a new tool for the culture of microorganisms in liquid heart capsules by allowing to act electrically on the encapsulated organism.

15 La présente invention a donc pour objet une capsule comprenant un coeur liquide, une enveloppe gélifiée encapsulant totalement le coeur liquide à sa périphérie, l'enveloppe gélifiée étant propre à retenir le coeur liquide lorsque la capsule est plongée dans un gaz, une solution aqueuse ou une huile, l'enveloppe gélifiée comprenant au 20 moins un polyélectrolyte gélifié et au moins un agent tensioactif, caractérisée en ce que l'enveloppe gélifiée comprend en outre un matériau conducteur électrique. Par « matériau conducteur électrique », on entend un matériau capable de laisser passer un courant électrique, c'est-à-dire des électrons, et de véhiculer le courant, donc des électrons, d'un point à un autre.The subject of the present invention is therefore a capsule comprising a liquid core, a gelled envelope completely encapsulating the liquid core at its periphery, the gelled envelope being adapted to retain the liquid core when the capsule is immersed in a gas, an aqueous solution. or an oil, the gelled envelope comprising at least one gelled polyelectrolyte and at least one surfactant, characterized in that the gelled envelope further comprises an electrically conductive material. By "electrically conductive material" is meant a material capable of passing an electric current, that is to say electrons, and convey the current, so electrons, from one point to another.

25 En particulier, le matériau conducteur électrique consiste en des particules solides électriquement conductrices, plus particulièrement en des nanotubes de carbone, du noir de carbone ou du graphène. Encore plus particulièrement, ledit matériau conducteur électrique est biocompatible.In particular, the electrically conductive material consists of electrically conductive solid particles, more particularly carbon nanotubes, carbon black or graphene. Even more particularly, said electrically conductive material is biocompatible.

30 Par « matériau biocompatible », on entend un matériau qui n'interfère pas, ni ne dégrade, le milieu biologique dans lequel il est utilisé. Le coeur liquide de la capsule selon l'invention est constitué d'un liquide aqueux ou huileux pouvant contenir des molécules, microorganismes, ou autres objets de taille supérieure à la taille maximale des pores de la membrane (environ 20 nm).By "biocompatible material" is meant a material which does not interfere with or degrade the biological medium in which it is used. The liquid heart of the capsule according to the invention consists of an aqueous or oily liquid that may contain molecules, microorganisms, or other objects larger than the maximum pore size of the membrane (about 20 nm).

35 Selon un aspect de la présente invention, le coeur liquide comprend au moins un objet électro-actif.According to one aspect of the present invention, the liquid core comprises at least one electro-active object.

3025437 3 Par « objet électro-actif », on entend un objet électriquement actif ou réactif, capable d'échanger, de générer ou de capter des électrons ou encore de générer ou de capter un autre objet électro-actif. En particulier, l'objet électro-actif est choisi parmi les micro-organismes, les 5 cellules, les macromolécules et les molécules. Encore plus particulièrement, l'objet électro-actif est choisi parmi les bactéries du genre Escherichia Coli, Geobacter, Shewanella, Rhodopseudomonas, Ochrobactrum, Enterobacter. Dans le cadre de la présente invention, le coeur liquide de la capsule peut comprendre au moment de l'encapsulation des quantités variables de molécules, 10 microorganismes, macromolécules et cellules qui seront adaptées en fonction de type d'objet encapsulé. Par exemple, le coeur liquide de la capsule peut comprendre au moment de l'encapsulation une quantité de cellules supérieure ou égale à 1 cellule/capsule. Il peut également comprendre au moment de l'encapsulation une quantité de 15 microorganismes supérieure ou égale à 1microorganismes/capsule, de préférence supérieure à l'inoculum minimal. Pour chaque bactérie, il existe en effet un inoculum minimal qui correspond à la concentration minimale en bactérie qui permet à la culture de croître. De préférence, le liquide contenu dans le coeur liquide est physiologiquement 20 acceptable. Il peut notamment comprendre une solution saline, des macromolécules ou molécules, un viscosifiant physiologiquement acceptable et/ou un milieu de culture destiné à la croissance et/ou à la culture des micro-organismes ou des cellules. Par « milieu de culture », on entend tout milieu, en particulier tout milieu liquide, susceptible de soutenir la croissance des cellules ou microorganismes. Pour 25 l'encapsulation de bactéries, on utilise par exemple un coeur composé de 15% de PEG3500 et de 0.45% de NaCI, cette solution saline permettant de maintenir une osmolarité acceptable pour le microorganisme durant l'encapsulation, cette osmolarité étant similaire à celle du milieu de culture de la bactérie. Le coeur liquide peut aussi comprendre des excipients physiologiquement 30 acceptables, tels que des épaississants, ou des modificateurs de rhéologie. Ces épaississants sont par exemple des polymères, des cross-polymères, des microgels, des gommes ou des protéines, dont des polysaccharides, des celluloses, des polyosides, des polymères et co-polymères à base de silicone, des particules colloïdales (silice, argiles, latex, nanotubes de carbones biocompatibles...).By "electro-active object" is meant an electrically active or reactive object capable of exchanging, generating or capturing electrons or generating or sensing another electro-active object. In particular, the electroactive object is selected from microorganisms, cells, macromolecules and molecules. Even more particularly, the electro-active object is selected from bacteria of the genus Escherichia Coli, Geobacter, Shewanella, Rhodopseudomonas, Ochrobactrum, Enterobacter. In the context of the present invention, the liquid core of the capsule may comprise, at the time of encapsulation, varying amounts of molecules, microorganisms, macromolecules and cells which will be adapted according to the type of encapsulated object. For example, the liquid heart of the capsule may comprise at the time of encapsulation an amount of cells greater than or equal to 1 cell / capsule. It may also comprise at the time of encapsulation an amount of microorganisms greater than or equal to 1 microorganisms / capsule, preferably greater than the minimum inoculum. For each bacterium, there is indeed a minimal inoculum that corresponds to the minimum concentration of bacteria that allows the crop to grow. Preferably, the liquid contained in the liquid heart is physiologically acceptable. It can in particular comprise a saline solution, macromolecules or molecules, a physiologically acceptable viscosifier and / or a culture medium intended for the growth and / or culture of microorganisms or cells. By "culture medium" is meant any medium, in particular any liquid medium, capable of supporting the growth of cells or microorganisms. For the encapsulation of bacteria, use is made, for example, of a core composed of 15% of PEG3500 and 0.45% of NaCl, this saline solution making it possible to maintain an acceptable osmolarity for the microorganism during the encapsulation, this osmolarity being similar to that from the culture medium of the bacteria. The liquid heart may also include physiologically acceptable excipients, such as thickeners, or rheology modifiers. These thickeners are, for example, polymers, cross-polymers, microgels, gums or proteins, including polysaccharides, celluloses, polysaccharides, silicone polymers and co-polymers, colloidal particles (silica, clays). , latex, biocompatible carbon nanotubes ...).

35 L'enveloppe gélifiée des capsules selon l'invention comprend un gel contenant de l'eau, au moins un polyélectrolyte réactif aux ions multivalents et le matériau conducteur 3025437 4 électrique. Selon l'invention, l'enveloppe contient en outre un agent tensioactif résultant de son procédé de fabrication, comme décrit par la suite. Tout particulièrement, la capsule selon l'invention est obtenue à partir d'un procédé comprenant les étapes suivantes de : 5 a) convoyage séparé dans une double enveloppe d'une première solution liquide aqueuse ou huileuse et d'une deuxième solution liquide contenant un polyélectrolyte liquide propre à gélifier et le matériau conducteur électrique; b) formation, à la sortie de la double enveloppe, d'une série de gouttes, 10 chaque goutte comprenant un noyau central formé de ladite première solution et une pellicule périphérique formée de ladite deuxième solution et recouvrant totalement le noyau central; c) immersion de chaque goutte dans une solution gélifiante contenant un réactif propre à réagir avec le polyélectrolyte de la pellicule pour le faire 15 passer d'un état liquide à un état gélifié et former l'enveloppe gélifiée comprenant le matériau conducteur électrique, le noyau central formant le coeur liquide; d) récupération des capsules formées; la deuxième solution contenant au moins un agent tensioactif avant son contact avec 20 la première solution et donc avant son contact avec la solution gélifiante. Plus particulièrement, ladite deuxième solution liquide contenant un polyélectrolyte liquide propre à gélifier et le matériau conducteur mentionnée à l'étape a) du procédé est formée par la mise en contact du matériau conducteur électrique sous forme dispersée et du polyélectrolyte propre à gélifier.The gelled casing of the capsules according to the invention comprises a gel containing water, at least one multivalent ion reactive polyelectrolyte and the electrically conductive material. According to the invention, the envelope further contains a surfactant resulting from its manufacturing process, as described below. More particularly, the capsule according to the invention is obtained from a process comprising the following steps of: a) separate conveying in a double jacket of a first aqueous or oily liquid solution and a second liquid solution containing a liquid polyelectrolyte suitable for gelation and the electrically conductive material; b) forming, at the exit of the jacket, a series of drops, each drop comprising a central core formed of said first solution and a peripheral film formed of said second solution and completely covering the central core; c) immersing each drop in a gelling solution containing a reagent capable of reacting with the polyelectrolyte of the film to change it from a liquid state to a gelled state and forming the gelled envelope comprising the electrically conductive material, the core central forming the liquid heart; d) recovery of formed capsules; the second solution containing at least one surfactant prior to contact with the first solution and thus before contact with the gelling solution. More particularly, said second liquid solution containing a liquid polyelectrolyte suitable for gelling and the conductive material mentioned in step a) of the process is formed by contacting the electrically conductive material in dispersed form and the polyelectrolyte suitable for gelling.

25 Encore plus particulièrement, l'enveloppe gélifiée est formée par un hydrogel de polysaccharide gélifié par ions divalents comprenant des particules solides électriquement conductrices sous forme dispersées et connectées formant ainsi un réseau électriquement conducteur. Selon un des aspects de ce procédé, le rapport du débit de la première solution au 30 débit de la deuxième solution à la sortie de la double enveloppe est compris entre 0.1 et 20, avantageusement entre 1 et 5, l'enveloppe gélifiée présentant une épaisseur comprise entre 1.6% et 55%, avantageusement entre 6% et 20% du diamètre de la capsule, après récupération des capsules formées. Selon un autre aspect du procédé, les gouttes formées par coextrusion dans la 35 double enveloppe tombent par gravité à travers un volume d'air dans la solution gélifiante.Even more particularly, the gelled envelope is formed by a divalent ion gelled polysaccharide hydrogel comprising electrically conductive solid particles in dispersed and connected form thereby forming an electrically conductive network. According to one aspect of this process, the ratio of the flow rate of the first solution to the flow rate of the second solution at the outlet of the jacket is between 0.1 and 20, advantageously between 1 and 5, the gelled envelope having a thickness between 1.6% and 55%, advantageously between 6% and 20% of the diameter of the capsule, after recovery of the capsules formed. In another aspect of the process, drops formed by coextrusion in the jacket fall by gravity through a volume of air into the gelling solution.

3025437 5 Dans le cadre de la présente description, on entend par « tensioactif » une molécule amphiphile présentant deux parties de polarité différente, l'une lipophile et apolaire, l'autre hydrophile et polaire. Un tensioactif peut être de type ionique (cationique ou anionique), zwitterionique ou non ionique.In the context of the present description, the term "surfactant" means an amphiphilic molecule having two parts of different polarity, one lipophilic and apolar, the other hydrophilic and polar. A surfactant may be of ionic type (cationic or anionic), zwitterionic or nonionic.

5 L'agent tensioactif est avantageusement un tensioactif anionique, un tensioactif non ionique, un tensioactif cationique ou un mélange de ceux-ci. La masse moléculaire de l'agent tensioactif est comprise entre 150 g/mol et 10000 g/mol, avantageusement entre 250 g/mol et 1500 g/mol. Dans le cas où le tensioactif est un tensioactif anionique, il est par exemple choisi 10 parmi un alkylsulfate, un alkyle sulfonate, un alkylarylsulfonate, un alkylphosphate alcalin, un dialkylsulfosuccinate, un sel d'alcalino-terreux d'acides gras saturés ou non. Ces tensioactifs présentent avantageusement au moins une chaîne hydrocarbonée hydrophobe présentant un nombre de carbones supérieur à 5, voire 10 et au moins un groupement anionique hydrophile, tel qu'un sulfate, un sulfonate ou un carboxylate lié à 15 une extrémité de la chaîne hydrophobe. Dans le cas où le tensioactif est un tensioactif cationique, il est par exemple choisi parmi un sel d'halogénure d'alkylpyridium ou d'alkylammonium comme le chlorure ou le bromure de n-éthyldodecylammonium, le chlorure ou le bromure de cétylammonium (CTAB). Ces tensioactifs présentent avantageusement au moins une chaîne 20 hydrocarbonée hydrophobe présentant un nombre de carbones supérieur à 5, voire 10 et au moins un groupement cationique hydrophile, tel qu'un cation d'ammonium quaternaire. Dans le cas où le tensioactif est un tensioactif non ionique, il est par exemple choisi parmi des dérivés polyoxyéthylénés et/ou polyoxypropylénés des alcools gras, des acides gras, ou des alkylphénols, des arylphénols, ou parmi des alkyls glucosides, des 25 polysorbates, des cocamides. En particulier, l'agent tensioactif sera choisi dans la liste suivante : un alkylsulfate, un alkyle sulfonate, un alkylarylsulfonate, un alkylphosphate alcalin, un dialkylsulfosuccinate, un sel d'alcalino-terreux d'acides gras saturés ou non, un sel d'halogénure d'alkylpyridium ou d'alkylammonium comme le chlorure ou le bromure de n- 30 éthyldodecylammonium, le chlorure ou le bromure de cétylamonium, des dérivés polyoxyéthylénés et/ou polyoxypropylénés des alcools gras, des acides gras ou des alkylphénols, ou parmi des arylphénols, des alkyls glucosides, des polysorbates, des cocamides ou leurs mélanges. Plus particulièrement, le pourcentage massique total en agent tensioactif dans la 35 deuxième solution sera supérieur à 0,01% et est avantageusement compris entre 0,01% et 0,5% en masse.The surfactant is preferably an anionic surfactant, a nonionic surfactant, a cationic surfactant, or a mixture thereof. The molecular weight of the surfactant is between 150 g / mol and 10,000 g / mol, advantageously between 250 g / mol and 1500 g / mol. In the case where the surfactant is an anionic surfactant, it is for example chosen from an alkyl sulphate, an alkyl sulphonate, an alkyl aryl sulphonate, an alkaline alkyl phosphate, a dialkyl sulphosuccinate, an alkaline earth salt of saturated or unsaturated fatty acids. These surfactants advantageously have at least one hydrophobic hydrocarbon chain having a number of carbons greater than 5 or even 10 and at least one hydrophilic anionic group, such as a sulfate, a sulphonate or a carboxylate linked to one end of the hydrophobic chain. In the case where the surfactant is a cationic surfactant, it is for example chosen from an alkylpyridium or alkylammonium halide salt such as n-ethyldodecylammonium chloride or bromide, cetylammonium chloride or bromide (CTAB) . These surfactants advantageously have at least one hydrophobic hydrocarbon chain having a number of carbons greater than 5 or even 10 and at least one hydrophilic cationic group, such as a quaternary ammonium cation. In the case where the surfactant is a nonionic surfactant, it is for example chosen from polyoxyethylenated and / or polyoxypropylenated derivatives of fatty alcohols, fatty acids, or alkylphenols, arylphenols, or from alkyl glucosides, polysorbates, cocamids. In particular, the surfactant will be chosen from the following list: an alkyl sulphate, an alkyl sulphonate, an alkyl aryl sulphonate, an alkaline alkyl phosphate, a dialkyl sulphosuccinate, an alkaline earth salt of saturated or unsaturated fatty acids, a salt of alkylpyridium or alkylammonium halide such as n-ethyldodecylammonium chloride or bromide, cetylammonium chloride or bromide, polyoxyethylenated and / or polyoxypropylenated derivatives of fatty alcohols, fatty acids or alkylphenols, or from arylphenols , alkyl glucosides, polysorbates, cocamides or mixtures thereof. More particularly, the total weight percent of surfactant in the second solution will be greater than 0.01% and is advantageously between 0.01% and 0.5% by weight.

3025437 6 Par « polyélectrolyte réactif aux ions polyvalents », on entend, au sens de la présente invention, un polyélectrolyte susceptible de passer d'un état liquide dans une solution aqueuse à un état gélifié sous l'effet d'un contact avec une solution gélifiante contenant des ions multivalents tels que des ions d'un métal alcalino-terreux choisis par 5 exemple parmi les ions calcium, les ions baryum, les ions magnésium. Dans l'état liquide, les chaînes individuelles de polyélectrolyte sont sensiblement libres de s'écouler les unes par rapport aux autres. Une solution aqueuse de 2% en masse de polyélectrolyte présente alors un comportement purement visqueux aux gradients de cisaillement caractéristiques du procédé de mise en forme. La viscosité de 10 cette solution à cisaillement nul est entre 50 mPa.s et 10000 mPa.s, avantageusement entre 1000 mPa.s et 7000 mPa.s. Les chaînes individuelles de polyélectrolyte dans l'état liquide présentent avantageusement une masse molaire supérieure à 65000 g/mole. Dans l'état gélifié, les chaînes individuelles de polyélectrolyte forment, avec les 15 ions multivalents, un réseau tridimensionnel cohésif qui retient le coeur liquide et empêche son écoulement. Les chaînes individuelles sont retenues les unes par rapport aux autres et ne peuvent pas s'écouler librement les unes par rapport aux autres. Dans cet état, la viscosité du gel formé est infinie. De plus, le gel a un seuil de contrainte à l'écoulement. Ce seuil de contrainte est supérieur à 0,05 Pa. Le gel possède également un module 20 d'élasticité non nul et supérieur à 35 kPa. Le gel tridimensionnel de polyélectrolyte contenu dans l'enveloppe emprisonne de l'eau et l'agent tensioactif. Le polyélectrolyte est de préférence un polymère biocompatible inoffensif pour le corps humain. Il est par exemple produit biologiquement.For the purposes of the present invention, the term "polyelectrolyte reactive with polyvalent ions" means a polyelectrolyte capable of passing from a liquid state in an aqueous solution to a gelled state under the effect of contact with a solution. gelling agent containing multivalent ions such as alkaline earth metal ions selected for example from calcium ions, barium ions, magnesium ions. In the liquid state, the individual polyelectrolyte chains are substantially free to flow relative to one another. An aqueous solution of 2% by weight of polyelectrolyte then exhibits a purely viscous behavior at the shear gradients characteristic of the forming process. The viscosity of this zero shear solution is between 50 mPa.s and 10,000 mPa.s, advantageously between 1000 mPa.s and 7000 mPa.s. The individual polyelectrolyte chains in the liquid state advantageously have a molar mass greater than 65000 g / mol. In the gelled state, the individual polyelectrolyte chains together with the multivalent ions form a cohesive three-dimensional network which retains the liquid core and prevents its flow. The individual chains are held together and can not flow freely relative to each other. In this state, the viscosity of the formed gel is infinite. In addition, the gel has a threshold of stress to the flow. This stress threshold is greater than 0.05 Pa. The gel also has a modulus of elasticity that is non-zero and greater than 35 kPa. The three-dimensional gel of polyelectrolyte contained in the envelope traps water and the surfactant. The polyelectrolyte is preferably a biocompatible polymer that is harmless to the human body. It is for example produced biologically.

25 Avantageusement, il est choisi parmi les polysaccharides, polyélectrolytes de synthèse à base d'acrylates (polyacrylate de sodium, de lithium, de potassium ou d'ammonium, ou polyacrylamide), de polyélectrolytes de synthèse à base de sulfonates (poly(styrène sulfonate) de sodium, par exemple). Plus particulièrement, le polyélectrolyte est choisi parmi un alginate d'alcalino-terreux, tel qu'un alginate de sodium ou un alginate 30 de potassium, une gellane ou une pectine. Les alginates sont produits à partir d'algues brunes appelées «laminaires», désignées par le terme anglais « sea weed ». De tels alginates présentent avantageusement une teneur en a-L-guluronate supérieure à environ 50%, de préférence supérieure à 55%, voire supérieure à 60%.Advantageously, it is chosen from polysaccharides, synthetic polyelectrolytes based on acrylates (sodium, lithium, potassium or ammonium polyacrylate, or polyacrylamide), synthetic polyelectrolytes based on sulfonates (poly (styrene sulfonate) ) of sodium, for example). More particularly, the polyelectrolyte is selected from alkaline earth alginate, such as sodium alginate or potassium alginate, gellan or pectin. Alginates are produced from brown algae called "laminar", referred to as "sea weed". Such alginates advantageously have a content of α-L-guluronate greater than about 50%, preferably greater than 55%, or even greater than 60%.

35 En particulier, le ou chaque poyélectrolyte sera un polyélectrolyte réactif aux ions multivalents, notamment un polysaccharide réactif aux ions multivalents tel qu'un alginate 3025437 7 d'alcalin, une géllane ou une pectine, de préférence un alginate d'alcalin ayant avantageusement une teneur en bloc a-L-guluronate supérieure à 50%, notamment supérieure à 55%. Plus particulièrement, la teneur massique en polyélectrolyte dans la deuxième 5 solution peut être inférieure à 5% en masse et est avantageusement comprise entre 0,5 et 3% en masse. Selon un aspect de la présente invention, la capsule pourra comprendre en outre une enveloppe intermédiaire encapsulant totalement à sa périphérie le coeur liquide, ladite enveloppe intermédiaire étant elle-même encapsulée totalement à sa périphérie par 10 l'enveloppe gélifiée. Cette enveloppe intermédiaire liquide sera formée d'une composition intermédiaire comprenant un tampon ou un milieu de culture, et/ou un viscosifiant. En particulier, le viscosifiant sera un polymère hydrosoluble, tel que du Polyéthylène glycol (PEG), du dextran, de l'alginate en solution plus dilué que dans l'enveloppe extérieure ou encore de 15 l'alginate plus dilué que dans l'enveloppe extérieure mélangé à un matériau conducteur électrique. L'enveloppe intermédiaire est au contact du coeur et de l'enveloppe externe et maintient le coeur hors de contact de l'enveloppe externe. La phase intermédiaire est utile pour stabiliser la capsule lors de sa formation, par 20 exemple dans le cas où le coeur liquide contient du calcium susceptible d'induire trop tôt la gélification de la phase externe. En effet, selon leur composition, les milieux de culture peuvent interférer avec la polymérisation. Elle permet ainsi de séparer le coeur liquide de la phase externe à gélifier. Elle permet aussi de protéger le coeur liquide pendant la formation des gouttes, de l'alginate de la couche externe qui n'est pas encore polymérisé.In particular, the or each polyelectrolyte will be a polyelectrolyte reactive with multivalent ions, in particular a multivalent ion-reactive polysaccharide such as an alkali alginate, a gelane or a pectin, preferably an alkaline alginate advantageously having an alkali metal alginate. α-guluronate block content greater than 50%, especially greater than 55%. More particularly, the mass content of polyelectrolyte in the second solution may be less than 5% by weight and is advantageously between 0.5 and 3% by weight. According to one aspect of the present invention, the capsule may further comprise an intermediate envelope encapsulating completely at its periphery the liquid core, said intermediate envelope itself being encapsulated completely at its periphery by the gelled envelope. This liquid intermediate envelope will be formed of an intermediate composition comprising a buffer or a culture medium, and / or a viscosifier. In particular, the viscosifier will be a water-soluble polymer, such as polyethylene glycol (PEG), dextran, alginate in solution more diluted than in the outer casing or even more diluted alginate than in the casing exterior mixed with an electrically conductive material. The intermediate envelope is in contact with the core and the outer envelope and keeps the core out of contact with the outer envelope. The intermediate phase is useful for stabilizing the capsule during its formation, for example in the case where the liquid core contains calcium capable of inducing gelation of the external phase too early. Indeed, depending on their composition, the culture media can interfere with the polymerization. It thus makes it possible to separate the liquid core from the external phase to be gelated. It also protects the liquid core during the formation of drops, alginate of the outer layer which is not yet polymerized.

25 En particulier, le coeur liquide et la phase intermédiaire étant toutes deux liquides, celles-ci se mélangent à terme pour former le coeur liquide de la capsule. La présence d'une telle enveloppe intermédiaire est notamment décrite dans l'article scientifique « Formation of liquid-core capsules having a thin hydrogel membrane : liquid pearls », Bremond et al, Soft Matter, 2010, 2484-2488.In particular, the liquid core and the intermediate phase being both liquid, they are eventually mixed to form the liquid core of the capsule. The presence of such an intermediate envelope is described in particular in the scientific article "Formation of liquid-core capsules having a thin hydrogel membrane: liquid pearls", Bremond et al, Soft Matter, 2010, 2484-2488.

30 Production des gouttes La production des gouttes selon le procédé selon l'invention mentionné précédemment est effectuée par convoyage séparé dans une double enveloppe d'une première solution liquide contenant la solution aqueuse ou huileuse dans laquelle est préférentiellement comprise un ou plusieurs micro-organismes, cellules, macromolécules 35 ou molécules et d'une deuxième solution liquide contenant un polyélectrolyte liquide 3025437 8 propre à gélifier, le matériau conducteur électrique et au moins un agent tensioactif, le convoyage étant tel que décrit dans W02010/063937. Dans le cas de la présence supplémentaire d'une enveloppe intermédiaire, le convoyage séparé s'effectue dans une triple enveloppe, avec une troisième solution 5 comprenant la solution intermédiaire. A la sortie de la double (ou triple) enveloppe, les différents flux entrent en contact et se forme alors une goutte multi-composante, selon un mode hydrodynamique dit de « dripping » (goutte-à-goutte, décrit notamment dans WO 2010/063937) ou un mode dit de « jetting » (avec une instabilité de jet, décrit notamment dans FR 2012/2964017), selon 10 la taille des capsules souhaitées. Le premier flux constitue le coeur liquide et le deuxième flux constitue l'enveloppe externe liquide. Dans le cas de la présence de l'enveloppe intermédiaire, le deuxième flux constitue l'enveloppe intermédiaire liquide et le troisième flux l'enveloppe externe liquide. Selon le mode de production, chaque goutte multi-composante se détache de la 15 double (ou triple) enveloppe et chute dans un volume d'air, avant d'être immergée dans une solution gélifiante contenant un réactif propre à gélifier le polyélectrolyte de l'enveloppe externe liquide, pour former l'enveloppe externe gélifiée des capsules selon l'invention. Selon certaines variantes, les gouttes multi-composantes peuvent comprendre des 20 couches supplémentaires entre l'enveloppe externe et le coeur liquide, autre que l'enveloppe intermédiaire. Ce type de goutte peut être préparé par convoyage séparé de multiples compositions dans des dispositifs à multiples enveloppes. Etape de gélification Lorsque la goutte multi-composante entre en contact de la solution gélifiante, le 25 réactif propre à gélifier le polyélectrolyte présent dans la solution gélifiante forme alors des liaisons entre les différentes chaînes de polyélectrolyte présentes dans l'enveloppe externe liquide, passant alors à l'état gélifié, provoquant ainsi la gélification de l'enveloppe externe liquide. Sans vouloir être lié à une théorie particulière, lors du passage à l'état gélifié du 30 polyélectrolyte, les chaînes individuelles de polyélectrolyte présentes dans l'enveloppe externe liquide se raccordent les unes aux autres pour former un réseau réticulé, aussi appelé hydrogel. Dans le cadre de la présente description, le polyélectrolyte présent dans l'enveloppe externe gélifiée est à l'état gélifié et est également appelé polyélectrolyte à 35 l'état gélifié ou encore polyélectrolyte gélifié.Drop Production The production of drops according to the process according to the invention mentioned above is carried out by separate conveying in a double jacket of a first liquid solution containing the aqueous or oily solution in which is preferably included one or more microorganisms, cells, macromolecules or molecules and a second liquid solution containing a liquid polyelectrolyte 30, suitable for gelling, the electrically conductive material and at least one surfactant, the conveying being as described in WO2010 / 063937. In the case of the additional presence of an intermediate envelope, the separated conveying takes place in a triple envelope, with a third solution comprising the intermediate solution. At the exit of the double (or triple) envelope, the different flows come into contact and then form a multi-component drop, according to a hydrodynamic mode called "dripping" (drop-by-drop, described in particular in WO 2010 / 063937) or a mode called "jetting" (with a jet instability, described in particular in FR 2012/2964017), depending on the size of the desired capsules. The first flow constitutes the liquid core and the second flow constitutes the liquid outer envelope. In the case of the presence of the intermediate envelope, the second flux constitutes the liquid intermediate envelope and the third flux the external liquid envelope. Depending on the mode of production, each multi-component drop is detached from the double (or triple) casing and falls into a volume of air, before being immersed in a gelling solution containing a reagent capable of gelling the polyelectrolyte of the external liquid envelope, to form the gelled outer shell of the capsules according to the invention. In some embodiments, the multi-component drops may comprise additional layers between the outer shell and the liquid core, other than the intermediate shell. This type of drop may be prepared by separate conveying of multiple compositions into multi-envelope devices. Gel step When the multi-component drop comes into contact with the gelling solution, the reagent capable of gelling the polyelectrolyte present in the gelling solution then forms bonds between the different polyelectrolyte chains present in the liquid outer envelope, then passing in the gelled state, thus causing the gelling of the liquid outer shell. Without wishing to be bound to a particular theory, during the transition to the gelled state of the polyelectrolyte, the individual polyelectrolyte chains present in the liquid outer envelope are connected to each other to form a crosslinked network, also called hydrogel. In the context of the present description, the polyelectrolyte present in the gelled outer shell is in the gelled state and is also called gelled polyelectrolyte or gelled polyelectrolyte.

3025437 9 Une enveloppe externe gélifiée, propre à retenir l'ensemble constitué par le coeur ou le coeur et l'enveloppe intermédiaire, est ainsi formée. Cette enveloppe externe gélifiée présente une tenue mécanique propre, c'est-à-dire qu'elle est capable retenir le coeur liquide et, en cas de présence d'une enveloppe intermédiaire, d'entourer totalement 5 l'enveloppe intermédiaire. Ceci a pour effet de maintenir la structure interne du coeur liquide et le cas échéant, de l'enveloppe intermédiaire. Les capsules selon l'invention séjournent dans la solution gélifiante le temps que l'enveloppe externe soit complètement gélifiée, de préférence sans excéder 60 minutes, encore plus préférentiellement sans excéder 10 minutes.An outer gelled envelope adapted to retain the assembly constituted by the heart or the core and the intermediate envelope is thus formed. This gelled outer shell has a clean mechanical strength, that is to say, it is capable of retaining the liquid core and, in case of presence of an intermediate envelope, to completely surround the intermediate envelope. This has the effect of maintaining the internal structure of the liquid core and, where appropriate, the intermediate envelope. The capsules according to the invention remain in the gelling solution until the outer shell is completely gelled, preferably without exceeding 60 minutes, even more preferably without exceeding 10 minutes.

10 On peut ensuite éventuellement éliminer la solution gélifiante et les capsules gélifiées peuvent ensuite éventuellement être collectées et plongées dans une solution aqueuse de rinçage, généralement essentiellement constituée d'eau, en particulier de l'eau physiologique, afin de rincer les capsules gélifiées formées. Cette étape de rinçage permet d'extraire de l'enveloppe externe gélifiée un éventuel excès du réactif propre à 15 gélifier de la solution gélifiante, et tout ou partie du tensioactif (ou d'autres espèces) contenu initialement dans la deuxième solution liquide. La présence d'un tensioactif dans la deuxième solution liquide permet d'améliorer la formation et la gélification des gouttes multi-composantes selon le procédé tel que décrit précédemment.The gelling solution can then optionally be removed and the gelled capsules can then optionally be collected and immersed in an aqueous rinsing solution, generally consisting essentially of water, in particular physiological saline, in order to rinse the gelled capsules formed. This rinsing step makes it possible to extract from the gelled outer envelope any excess of the reagent suitable for gelling the gelling solution, and all or part of the surfactant (or other species) initially contained in the second liquid solution. The presence of a surfactant in the second liquid solution makes it possible to improve the formation and gelation of the multi-component drops according to the process as described above.

20 Caractéristiques des capsules gélifiées Avantageusement, la capsule est de forme sphérique et présente un diamètre extérieur inférieur à 5 mm et compris notamment entre 0.3 mm et 4 mm. De préférence, l'enveloppe externe gélifiée des capsules selon l'invention possède une épaisseur comprise de 32 lm à 1000 um, de préférence de 120 lm à 400 um, et 25 avantageusement de 100 lm à 350 Les capsules selon l'invention présentent généralement un rapport volumique entre le coeur et l'ensemble des enveloppes intermédiaire et externe supérieur à 1, et de préférence inférieur à 5. Selon un mode de réalisation particulier, les capsules selon l'invention présentent 30 généralement un rapport volumique entre le coeur et l'ensemble des enveloppes intermédiaire et externe compris entre 1 et 5. Ainsi, les capsules selon la présente invention sont utiles dans de nombreux secteurs d'activités comme par exemple celui des bioénergies, des piles bactériennes, 35 enzymatiques ou encore dans celui de la fabrication d'électrodes.Characteristics of gelled capsules Advantageously, the capsule is spherical in shape and has an outside diameter of less than 5 mm and in particular between 0.3 mm and 4 mm. Preferably, the gelled outer shell of the capsules according to the invention has a thickness of from 32 μm to 1000 μm, preferably from 120 μm to 400 μm, and advantageously from 100 μm to 350 μm. The capsules according to the invention generally have a volume ratio between the core and all of the intermediate and outer shells greater than 1, and preferably less than 5. According to a particular embodiment, the capsules according to the invention generally have a volume ratio between the core and the intermediate and outer envelopes between 1 and 5. Thus, the capsules according to the present invention are useful in many sectors of activity such as for example bioenergy, bacterial, enzymatic or manufacturing cells. electrode.

3025437 10 Elles trouvent de nombreuses applications telles que la sélection de microorganismes électro-actifs ou la création d'énergie électrique à partir de déchets. Ainsi, une capsule selon l'invention permet: - la production à grande cadence de bio-réacteurs (1 bio-réacteur/seconde) ; 5 - le criblage de micro-organismes en permettant l'encapsulation d'une seule cellule qui donnera une colonie mono-clonale, les réservoirs et donc les cellules d'intérêts pouvant être ensuite choisis selon l'électro-activité ; - la digitalisation, parallélisation et miniaturisation de la culture ; - la récupération d'électrons et donc de l'énergie produite par une population de 10 micro-organismes ; - l'encapsulation d'espèces électrochimiques et le déclenchement de réactions internes à la capsule via le contact d'une électrode avec la membrane. - la polarisation du réacteur pour permettre la croissance de micro-organismes sous un potentiel donné et ajustable 15 Selon un de ces aspects, la présente invention concerne donc également l'utilisation d'au moins une capsule selon l'invention, pour la production de bioréacteurs. Elle concerne également l'utilisation d'au moins une capsule selon l'invention, pour le criblage de micro-organismes, en particulier de microorganismes électro-actifs, encore plus particulièrement de ceux choisi parmi : Escherichia Coli, Geobacter, 20 Rhodopseudomonas, Ochrobactrum et Enterobacter. La capsule selon l'invention peut donc constituer un outil de sélection d'organismes électro-actifs via l'encapsulation d'une cellule unique. Par ailleurs, la conductivité de sa membrane permet le passage d'une électrode de l'intérieur vers l'extérieur de la capsule et inversement. La membrane permet donc la 25 récupération d'électrons relargués dans le milieu extérieur par les organismes en culture. Ainsi, la présente invention concerne également l'utilisation d'au moins une capsule selon l'invention, pour la récupération d'électrons produits par des microorganismes, en particulier ceux choisi parmi : Escherichia Coli, Geobacter, Rhodopseudomonas, Ochrobactrum et Enterobacter.They find many applications such as the selection of electroactive microorganisms or the creation of electrical energy from waste. Thus, a capsule according to the invention allows: - high-speed production of bio-reactors (1 bio-reactor / second); 5 - the screening of microorganisms by allowing the encapsulation of a single cell which will give a mono-clonal colony, the reservoirs and therefore the cells of interest which can then be chosen according to the electro-activity; - digitalization, parallelization and miniaturization of culture; the recovery of electrons and therefore of the energy produced by a population of 10 microorganisms; encapsulation of electrochemical species and triggering of internal reactions in the capsule via the contact of an electrode with the membrane. the polarization of the reactor to allow the growth of microorganisms under a given and adjustable potential According to one of these aspects, the present invention thus also relates to the use of at least one capsule according to the invention, for the production of bioreactors. It also relates to the use of at least one capsule according to the invention for the screening of microorganisms, in particular electroactive microorganisms, more particularly those selected from: Escherichia Coli, Geobacter, Rhodopseudomonas, Ochrobactrum and Enterobacter. The capsule according to the invention can therefore be a tool for selecting electroactive organisms via the encapsulation of a single cell. Moreover, the conductivity of its membrane allows the passage of an electrode from the inside to the outside of the capsule and vice versa. The membrane thus allows the recovery of electrons released into the external environment by the organisms in culture. Thus, the present invention also relates to the use of at least one capsule according to the invention, for the recovery of electrons produced by microorganisms, in particular those chosen from: Escherichia Coli, Geobacter, Rhodopseudomonas, Ochrobactrum and Enterobacter.

30 La présente invention concerne également l'utilisation d'une capsule selon l'invention, pour la réalisation d'une anode et/ou d'une cathode de pile à bactéries. Selon un de ces aspects, la présente invention concerne également une méthode de criblage de bactéries électro-actives comprenant la culture de bactéries contenues dans au moins une capsule selon l'invention telle que définie précédemment.The present invention also relates to the use of a capsule according to the invention for the production of an anode and / or a bacterial cell cathode. According to one of these aspects, the present invention also relates to a method for screening electroactive bacteria comprising culturing bacteria contained in at least one capsule according to the invention as defined above.

35 Les conditions de culture sont déterminées par l'homme du métier en fonction de chaque bactérie sur la base de ses connaissances générales.The culture conditions are determined by one skilled in the art according to each bacterium on the basis of his general knowledge.

3025437 11 Dans le cadre de la présente invention, les bactéries sont cultivées dans un milieu de culture comprenant un milieu de culture de base, celui-ci ayant pour caractéristique d'être capable de soutenir la croissance et le développement desdites bactéries, en particulier pour l'obtention d'une lignée monoclonale. Ce type de milieu de culture de base 5 est bien connu de l'homme du métier. On peut citer par exemple le milieu LB Broth ou le milieu 826 de DMSZ. Dans le cadre de la présente invention, lorsque la capsule doit comprendre une population monoclonale de bactéries, l'homme du métier pourra utiliser la loi de Poisson pour déterminer la concentration de bactéries à encapsuler pour obtenir une bactérie par 10 capsule: p(k) = P(X = k) = -e - , dans laquelle : - À est le nombre moyen de bactérie par volume de capsule ; et - P(k) est la probabilité qu'il y ait k bactéries dans une capsule connaissant la 15 valeur de À. La valeur de X dépend de la concentration C de cellules de la première solution exprimée en nombre de cellules par unité de volume, du diamètre D de la capsule et du rapport rq des débits de la façon suivante : = nD3xrqxC/6. Selon un autre de ces aspects, la présente invention concerne également un 20 dispositif comprenant au moins une capsule selon l'invention et au moins une électrode, ladite au moins une électrode étant en contact avec l'enveloppe gélifiée de ladite au moins une capsule. La présente invention sera illustrée plus en détail par les figures et exemples ci-dessous 25 qui n'en limitent pas la portée. FIGURES Figure 1 : Gauche : Montage de formation de la bi-goutte composée de A au coeur et de B autour. Droite : Extrémité de l'injecteur permettant la formation de la bi-goutte. (A) Sortie 30 pour le mélange A constituant le coeur de la capsule, (B) sortie pour le mélange B constituant la membrane de la future capsule. Figure 2: Schéma du montage de fabrication des capsules à coeur liquide et à membrane conductrice (D=3mm, h=350pm, R=1,7mm, H=Scm) Figure 3 : Capsules à coeur liquide et à membrane conductrice 3025437 12 Figure 4 : Evolution de la conductivité d'une capsule selon l'invention en fonction du pourcentage massique en nanotubes Figure 5 : Schéma du montage d'encapsulation de bactéries avec une concentration de la solution de coeur réglée pour avoir une bactérie par capsule (D=3mm, h=350pm, 5 R=1,7mm, H=5cm) EXEMPLES Protocole de fabrication des capsules à coeur liquide et à membrane conductrice semi-perméable 10 Création du mélange gélifiable : Le mélange : 10 mL d'eau milliQ, 150 mg de nanotubes de carbone et 200 mg de SDS est dispersé sous ultrasons pendant 1h15 avec un sonicateur Vibracell 75042 Bioblock Scientific selon les paramètres suivant : Puissance = 35`)oPmax ; Pulse : 3s on,1s off. La poudre d'alginate LF200FTS, 1% en masse, est ensuite ajoutée à la dispersion puis le 15 tout est mis sous agitation magnétique pendant 12h afin d'obtenir la solution gélifiable. Création du mélange à encapsuler : Le mélange : 25 mL d'eau milliQ, 5,1g de polyéthylène glycol de masse molaire moyenne 3350 (PEG 3350 CAS 25322-68-3 Sigma Aldrich) et 135mg de NaCI sont mélangés sous agitation magnétique pendant 3h.In the context of the present invention, the bacteria are cultured in a culture medium comprising a basic culture medium, the latter having the characteristic of being able to support the growth and development of said bacteria, in particular to obtaining a monoclonal line. This type of basic culture medium is well known to those skilled in the art. There may be mentioned, for example, LB Broth medium or 822 medium of DMSZ. In the context of the present invention, when the capsule must comprise a monoclonal population of bacteria, a person skilled in the art can use the Poisson's law to determine the concentration of bacteria to be encapsulated in order to obtain a bacterium per capsule: p (k) = P (X = k) = -e -, in which: - A is the average number of bacteria per capsule volume; and - P (k) is the probability that there are k bacteria in a capsule knowing the value of λ. The value of X depends on the concentration C of cells of the first solution expressed in number of cells per unit volume, the diameter D of the capsule and the ratio rq flow rates as follows: = nD3xrqxC / 6. According to another of these aspects, the present invention also relates to a device comprising at least one capsule according to the invention and at least one electrode, said at least one electrode being in contact with the gelled envelope of said at least one capsule. The present invention will be further illustrated by the following figures and examples which do not limit the scope thereof. FIGURES Figure 1: Left: Formation of the bead formation composed of A in the heart and B around. Right: Extremity of the injector allowing the formation of the bead drop. (A) Exit 30 for the mixture A constituting the heart of the capsule, (B) outlet for the mixture B constituting the membrane of the future capsule. Figure 2: Diagram of the manufacturing assembly of the liquid core capsules and conductive membrane (D = 3mm, h = 350pm, R = 1.7mm, H = Scm) Figure 3: Capsules with a liquid heart and a conductive membrane 3025437 12 Figure 4: Evolution of the conductivity of a capsule according to the invention as a function of the mass percentage of nanotubes Figure 5: Diagram of the assembly of encapsulation of bacteria with a concentration of the core solution set to have a bacterium per capsule (D = 3mm, h = 350pm, 5 R = 1.7mm, H = 5cm) EXAMPLES Protocol for manufacturing the liquid-core capsules and semipermeable conductive membrane 10 Creation of the gelling mixture: The mixture: 10 mL of water milliQ, 150 mg of carbon nanotubes and 200 mg of SDS are dispersed under ultrasound for 1h15 with a Vibracell 75042 Bioblock Scientific sonicator according to the following parameters: Power = 35`) oPmax; Pulse: 3s on, 1s off. The alginate powder LF200FTS, 1% by weight, is then added to the dispersion and then the whole is stirred magnetically for 12 hours in order to obtain the gelling solution. Creation of the mixture to be encapsulated: The mixture: 25 mL of milliQ water, 5.1 g of polyethylene glycol of average molecular weight 3350 (PEG 3350 CAS 25322-68-3 Sigma Aldrich) and 135 mg of NaCl are mixed with magnetic stirring for 3 hours. .

20 Création du bain de gélification : 1L d'eau milliQ, 10g de CaCl2, 501..1L de tween20 à 10% en masse sont mélangés sous agitation magnétique pendant 3h. Création de la capsule : Une bi-goutte est créée avec le dispositif présenté en figures 1 et 2 selon la méthode 25 décrite dans W02010/063937. Le mélange à encapsuler est placé dans la seringue A, il sortira du centre de l'injecteur (A) pour constituer le coeur de la future capsule. Le mélange gélifiable est placé dans la seringue B, il sortira du bord de l'injecteur (B) pour constituer la membrane de la future capsule.Creation of the gelling bath: 1L of milliQ water, 10 g of CaCl 2, 50 l of 10% by weight tween 20 are mixed with magnetic stirring for 3 h. Creation of the capsule: A two-dropper is created with the device presented in FIGS. 1 and 2 according to the method described in WO2010 / 063937. The mixture to be encapsulated is placed in the syringe A, it will leave the center of the injector (A) to form the heart of the future capsule. The gélifiable mixture is placed in the syringe B, it will leave the edge of the injector (B) to form the membrane of the future capsule.

30 La création de la bi-goutte et ses paramètres sont contrôlés en contrôlant les débits des deux solutions (coeur et extérieur) via des pousses-seringues. Le débit de la seringue A est de 5mL/h, le débit de la seringue B est 5mL/h. La bi-goutte est ensuite gélifiée en la faisant tomber dans le bain de gélification. La solution extérieure gélifie (l'alginate gélifie) et enferme le coeur liquide de la bi-goutte. La 35 capsule est créée telle qu'illustrée en figure 3. La capsule est laissée dans le bain de gélification pendant 1 h.The creation of the drip and its parameters are controlled by controlling the flow rates of the two solutions (heart and exterior) via syringe shoots. The flow rate of the syringe A is 5 ml / h, the flow rate of the syringe B is 5 ml / h. The bead drop is then gelled by dropping it into the gelling bath. The outer solution gels (alginate gels) and encloses the liquid heart of the bead. The capsule is created as illustrated in Figure 3. The capsule is left in the gel bath for 1 h.

3025437 13 Description de la capsule : Les débits pour la formation de la capsule sont de 5mL/h pour la solution extérieure (membrane) et de 5mL/h pour la solution intérieure (coeur). L'injecteur a un diamètre de 3mm (D), il est placé à 5cm au-dessus du bain de gélification 5 (H). Pour ces débits, la capsule finale à un diamètre de 1,7mm (R), avec une membrane de 350um d'épaisseur moyenne (h). Le coeur de la capsule a un volume de 11pL. Caractérisation de la conductivité du mélange gélifiable 10 L'évolution de la conductivité du mélange gélifiable est mesurée à l'aide d'un impédancemètre (Materials Mate 7260) sur des billes de gels pleines à 10kHz, en fonction du pourcentage massique en nanotubes. Création des mélanges gélifiable : Le protocole de création des mélanges à différents pourcentages massique en nanotubes 15 de carbone est le même que celui du protocole de création du mélange gélifiable de la création des capsules. Seule la masse de nanotubes change. 5 mélanges différents sont réalisés avec les masses de nanotubes suivantes : 0 ; 50 ; 100 ; 150 ; 200 mg correspondant respectivement aux pourcentages suivants : 0 ; 0,5 ;1 ; 1,5 ; 2% en masse. Création des billes de gels : 20 A l'aide d'une pipette pasteur plastique VWR de 7mL, les mélanges gélifiables sont faits goutter d'une hauteur de 5 cm dans le bain de gélification (identique à celui décrit précédemment). Les billes sont laissées à gélifier pendant 24h dans le bain. Les billes sont ensuite équilibrées dans une solution de CaCl2 à 1mM pendant 48h pour dialyser le SDS présent dans le mélange gélifiable.3025437 13 Description of the capsule: The flow rates for capsule formation are 5mL / h for the outer solution (membrane) and 5mL / h for the inner solution (core). The injector has a diameter of 3mm (D), it is placed at 5cm above the gelation bath 5 (H). For these flow rates, the final capsule has a diameter of 1.7mm (R), with a membrane of 350um average thickness (h). The heart of the capsule has a volume of 11pL. Characterization of the Conductivity of the Gélifiable Mixture The evolution of the conductivity of the gélifiable mixture is measured using an impedance meter (Materials Mate 7260) on solid gel beads at 10 kHz, as a function of the mass percentage of nanotubes. Creation of gelifiable mixtures: The protocol for creating mixtures with different mass percentages of carbon nanotubes is the same as that of the protocol for creating the gelling mixture of the creation of the capsules. Only the mass of nanotubes changes. 5 different mixtures are made with the following masses of nanotubes: 0; 50; 100; 150; 200 mg corresponding respectively to the following percentages: 0; 0.5; 1; 1.5; 2% by mass. Creation of gel beads: With the aid of a VWR plastic pasteur pipette of 7 ml, the gellable mixtures are dripped from a height of 5 cm into the gelling bath (identical to that described previously). The beads are allowed to gel for 24 hours in the bath. The beads are then equilibrated in a 1 mM CaCl 2 solution for 48 hours to dialyze the SDS present in the gellable mixture.

25 Des billes pleines de 3 mm de diamètre composées de 1% en masse d'alginate et de pourcentages massique de nanotubes de carbones variables sont ainsi obtenues. Protocole de mesure : Pour mesurer la conductivité, une bille est placée entre deux vis de 3mm de diamètres distantes de 2,7mm, connectée à l'impédancemètre. La conductivité à 10 kHz est 30 mesurée. Les résultats sont présentés en figure 4. Les résultats montrent une augmentation de la conductivité du gel avec l'ajout des nanotubes. L'ajout de nanotubes de carbones permet d'augmenter jusqu'à 100 fois la conductivité de l'hydrogel.Solid beads 3 mm in diameter composed of 1% by weight of alginate and mass percentages of variable carbon nanotubes are thus obtained. Measurement protocol: To measure the conductivity, a ball is placed between two screws of 3mm diameter 2.7mm apart, connected to the impedance meter. The conductivity at 10 kHz is measured. The results are shown in FIG. 4. The results show an increase in the conductivity of the gel with the addition of the nanotubes. The addition of carbon nanotubes makes it possible to increase the conductivity of the hydrogel up to 100 times.

35 Protocole de fabrication de capsules comprenant des bactéries pour cultures monoclonales.Capsule manufacturing protocol comprising bacteria for monoclonal cultures.

3025437 14 Pour l'encapsulation des bactéries, l'ensemble des solutions utilisées sont stérilisés par filtration à 0,211m. Le dispositif d'encapsulation est stérilisé thermiquement à 121 °C pendant 20 minutes par une autoclave (JSM tabe top sterilizer). Création du mélange gélifiable : 5 1.7% en masse d'alginate LF200FTS et 5mM de SDS sont dissous dans 10 mL d'eau milliQ puis mis sous agitation magnétique pendant 12h pour obtenir le mélange gélifiable. Création du bain de gélification : 1L d'eau milliQ, 10g de CaCl2, 501..1L de tween20 à 10% en masse sont mélangés sous agitation magnétique pendant 3h.For the encapsulation of bacteria, all the solutions used are sterilized by filtration at 0.211m. The encapsulation device is thermally sterilized at 121 ° C. for 20 minutes by an autoclave (JSM tabe top sterilizer). Creation of the gelifiable mixture: 1.7% by weight of LF200FTS alginate and 5mM of SDS are dissolved in 10 ml of milliQ water and then stirred magnetically for 12 hours to obtain the gellable mixture. Creation of the gelling bath: 1L of milliQ water, 10 g of CaCl2, 501..1L of tween 20 to 10% by mass are mixed with magnetic stirring for 3 hours.

10 Encapsulation monoclonale : Détermination de la concentration monoclonale permettant d'avoir une (ou moins) bactérie par capsule. Pour préparer la solution de bactéries à la concentration monoclonale, la loi de Poisson est utilisée: p(k) P(X)= - k! e - X, dans laquelle : 15 À est le nombre moyen de bactérie par volume de capsule ; P(k) est la probabilité qu'il y ait k bactéries dans une capsule connaissant la valeur de À ; et le volume du coeur d'une capsule est de 111.11_ Ainsi, en appliquant cette loi avec 0,1 bactérie par capsule (9 bactéries/mL), 90% des 20 capsules sont sans bactérie (p(0)), 9% des capsules obtenues sont monoclonales, c'est à dire avec une bactérie (p(1)), moins de 0.5% des capsules obtenues sont avec deux bactéries (p(2)) et moins 0.02% des capsules obtenues sont avec 3 bactéries, etc. Ce protocole permet ainsi d'obtenir des capsules monoclonales avec un risque faible d'avoir des capsules contenant des bactéries issues d'une encapsulation non 25 monoclonale (5% des capsules contenant des bactéries). Création du mélange bactérien à encapsuler : Le mélange : 8,3mL d'eau milliQ, 1,7g de polyéthylène glycol de masse molaire moyenne 3500 (PEG 3350 CAS 25322-68-3 Sigma Aldrich) et 45mg de NaCI sont mélangés sous agitation magnétique pendant 3h. On y ajoute ensuite 1mL de solution bactérienne 30 composée de la bactérie à la concentration de 84 bactéries par millilitre dans son milieu de culture (voir ci-dessous). Ainsi, une solution bactérienne comprenant des bactéries E.coli est préparée de la façon suivante : 21..11_ d'une souche de bactéries E.coli MC4100 YFP conservé à -80°C est ajouté à 10mL de LB Broth (Sigma). Le mélange est mis en culture sous agitation circulaire 35 pendant 12h à 37°C. A 12h, la concentration en bactérie est évaluée par une mesure 3025437 15 d'absorbance à 600nm. La différence de densité optique observée à 600nm entre le milieu LB Broth et la culture bactérienne (Delta.D.O en unité de densité optique) permet d'obtenir la concentration en bactérie par millilitre via la formule : Concentration= Delta.D.O * 4.108 bactéries/mL. Cette culture est ensuite diluée par dilutions successives 5 dans du LB Broth pour atteindre la concentration de 84 bactéries/mL. Ainsi, une solution bactérienne comprenant des bactéries Geobacter est préparée de la façon suivante : 1mL d'une souche de bactéries Geobacter Sulfurreducens fournie par DMSZ est ajouté à 9mL de son milieu spécifique (milieu 826 DMSZ) dans un tube hungate de 12 mL sous anaérobie à 30°C pendant 4 jours. A 4 jours, la concentration en 10 bactérie est évaluée par une mesure d'absorbance à 600nm. La différence de densité optique observée à 600nm entre le milieu de culture 826 et la culture bactérienne (Delta.D.O en unité de densité optique) permet d'obtenir la concentration en bactérie par millilitre via la formule : Concentration = Delta.D.O * 4.108 bactéries/mL. Cette culture est ensuite diluée par dilutions successives dans du milieu 826 pour atteindre la 15 concentration de 84 bactéries/mL. Création de la capsule de culture monoclonale : Une bi-goutte est créée avec le dispositif présenté dans les figures 1 et 5 selon la méthode décrite dans W02010/063937. Le mélange bactérien à encapsuler (préparé au choix avec des bactéries E.Coli ou 20 Geobacter comme indiqué dans le paragraphe précédent) est placé dans la seringue A, il sortira du centre de l'injecteur (A) pour constituer le coeur de la future capsule. Le mélange gélifiable est placé dans la seringue B, il sortira du bord de l'injecteur (B) pour constituer la membrane de la future capsule. La création de la bi-goutte et ses paramètres sont contrôlés en contrôlant les débits des 25 deux solutions (coeur et extérieur) via des pousses-seringues. Le débit de la seringue A est de 5mL/h, le débit de la seringue B est 5mL/h. La bi-goutte est ensuite gélifiée en la faisant tomber dans le bain de gélification. La solution extérieure gélifie (l'alginate gélifie) et enferme le coeur liquide de la bi-goutte. La capsule est créée. La capsule est laissée dans le bain de gélification pendant 15min.Monoclonal Encapsulation: Determination of the monoclonal concentration allowing to have one (or less) bacterium per capsule. To prepare the bacteria solution at the monoclonal concentration, the Poisson's law is used: p (k) P (X) = - k! e - X, wherein: λ is the average number of bacteria per capsule volume; P (k) is the probability that there are k bacteria in a capsule knowing the value of λ; and the volume of the heart of a capsule is 111.11_ Thus, by applying this law with 0.1 bacteria per capsule (9 bacteria / ml), 90% of the capsules are without bacteria (p (0)), 9% obtained capsules are monoclonal, ie with a bacterium (p (1)), less than 0.5% of the capsules obtained are with two bacteria (p (2)) and less 0.02% of the capsules obtained are with 3 bacteria, etc. This protocol thus makes it possible to obtain monoclonal capsules with a low risk of having capsules containing bacteria resulting from a non-monoclonal encapsulation (5% of the capsules containing bacteria). Creation of the bacterial mixture to be encapsulated: The mixture: 8.3 ml of milliQ water, 1.7 g of polyethylene glycol of average molecular weight 3500 (PEG 3350 CAS 25322-68-3 Sigma Aldrich) and 45 mg of NaCl are mixed with magnetic stirring during 3h. 1mL of bacterial solution composed of the bacteria is then added to the concentration of 84 bacteria per milliliter in its culture medium (see below). Thus, a bacterial solution comprising E.coli bacteria is prepared as follows: 21..11_ of an E. coli strain MC4100 YFP stored at -80 ° C is added to 10 ml of LB Broth (Sigma). The mixture is cultured with circular stirring for 12 h at 37 ° C. At 12h, the bacterial concentration is evaluated by absorbance measurement at 600nm. The difference in optical density observed at 600 nm between the LB Broth medium and the bacterial culture (Delta.DO in optical density unit) makes it possible to obtain the bacteria concentration per milliliter via the formula: Concentration = Delta.DO * 4.108 bacteria / mL. This culture is then diluted by successive dilution in LB Broth to reach the concentration of 84 bacteria / ml. Thus, a bacterial solution comprising Geobacter bacteria is prepared in the following manner: 1 ml of a strain of Geobacter Sulfurreducens bacteria supplied by DMSZ is added to 9 ml of its specific medium (826 DMSZ medium) in a 12 ml hungate tube under anaerobic conditions. at 30 ° C for 4 days. At 4 days, the bacteria concentration is evaluated by an absorbance measurement at 600 nm. The difference in optical density observed at 600nm between the culture medium 826 and the bacterial culture (Delta.DO in optical density unit) makes it possible to obtain the concentration of bacteria per milliliter via the formula: Concentration = Delta.DO * 4.108 bacteria / mL. This culture is then diluted by serial dilutions in medium 826 to reach the concentration of 84 bacteria / ml. Creation of the monoclonal culture capsule: A two-dropper is created with the device presented in FIGS. 1 and 5 according to the method described in WO2010 / 063937. The bacterial mixture to be encapsulated (optionally prepared with E. coli or Geobacter bacteria as indicated in the preceding paragraph) is placed in the syringe A, it will leave the center of the injector (A) to constitute the heart of the future capsule. The gélifiable mixture is placed in the syringe B, it will leave the edge of the injector (B) to form the membrane of the future capsule. The creation of the drip and its parameters are controlled by controlling the flow rates of the two solutions (heart and exterior) via syringe shoots. The flow rate of the syringe A is 5 ml / h, the flow rate of the syringe B is 5 ml / h. The bead drop is then gelled by dropping it into the gelling bath. The outer solution gels (alginate gels) and encloses the liquid heart of the bead. The capsule is created. The capsule is left in the gel bath for 15min.

30 Les capsules sont ensuite mises en culture dans le milieu de culture de la bactérie encapsulée (cf paragraphe précédent) additionné de 5mM de Cacl2, et dans les conditions de culture applicables à la bactérie encapsulée. Après l'incubation, on obtient des capsules remplies de bactéries. Les résultats de l'encapsulation monoclonale sont présentés dans le tableau 1 ci- 35 dessous.The capsules are then cultured in the culture medium of the encapsulated bacterium (cf preceding paragraph) supplemented with 5 mM of Cacl2, and under the culture conditions applicable to the encapsulated bacterium. After the incubation, capsules filled with bacteria are obtained. The results of the monoclonal encapsulation are shown in Table 1 below.

3025437 16 Tableau 1 : Encapsulation monoclonale Bactérie encapsulée Concentration moyenne % théorique de capsules occupées %expérimental de capsules Nombre bactéries/capsule à occupées après total de l'encapsulation (À) mise en culture capsules E.coli MC4100 0,25 22 17 195 YFP Geobacter Sulfurreducens 3 86 90 39 Ainsi, la capsule selon l'invention présente de nombreux avantages : 5 - Parallélisation possible et non limitée ; - Croissance au temps long ; - Récupération simplifiée de la totalité de la population cultivée (pas de centrifugation) ; - Encapsulation possible d'un seul micro-organisme ; 10 - Possibilité d'actions de type électrique sur l'organisme encapsulé ; - Manipulation simplifiée de la culture ; et - bioréacteur dissocié du système de mesure courant.Table 1: Monoclonal Encapsulation Encapsulated Bacteria Mean Concentration% Theoretical of Busy Capsules Experimental% of Capsules Number of Bacteria / Capsule Busy After Total Encapsulation (A) Culture Capsules E.coli MC4100 0.25 22 17 195 YFP Geobacter Sulfurreducens 3 86 90 39 Thus, the capsule according to the invention has many advantages: 5 - Parallelization possible and not limited; - Growth at long time; - Simplified recovery of the entire cultivated population (no centrifugation); - possible encapsulation of a single microorganism; 10 - Possibility of actions of electrical type on the encapsulated organism; - Simplified manipulation of the culture; and - bioreactor dissociated from the current measurement system.

Claims (16)

REVENDICATIONS1. Capsule comprenant un coeur liquide, une enveloppe gélifiée encapsulant totalement le coeur liquide à sa périphérie, l'enveloppe gélifiée étant propre à retenir le coeur liquide lorsque la capsule est plongée dans un gaz, une solution aqueuse ou une huile, l'enveloppe gélifiée comprenant au moins un polyélectrolyte gélifié et au moins un agent tensioactif, caractérisée en ce que l'enveloppe gélifiée comprend en outre un matériau conducteur électrique.REVENDICATIONS1. Capsule comprising a liquid core, a gelled envelope completely encapsulating the liquid core at its periphery, the gelled envelope being adapted to retain the liquid core when the capsule is immersed in a gas, an aqueous solution or an oil, the gelled envelope comprising at least one gelled polyelectrolyte and at least one surfactant, characterized in that the gelled envelope further comprises an electrically conductive material. 2. Capsule selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant les étapes suivantes de : a) convoyage séparé dans une double enveloppe d'une première solution liquide aqueuse ou huileuse et d'une deuxième solution liquide contenant un polyélectrolyte liquide propre à gélifier et le matériau conducteur électrique; b) formation, à la sortie de la double enveloppe, d'une série de gouttes, chaque goutte comprenant un noyau central formé de ladite première solution et une pellicule périphérique formée de ladite deuxième solution et recouvrant totalement le noyau central; c) immersion de chaque goutte dans une solution gélifiante contenant un réactif propre à réagir avec le polyélectrolyte de la pellicule pour le faire passer d'un état liquide à un état gélifié et former l'enveloppe gélifiée comprenant le matériau conducteur électrique, le noyau central formant le coeur liquide; d) récupération des capsules formées; la deuxième solution contenant au moins un agent tensioactif avant son contact avec la première solution et donc avant son contact avec la solution gélifiante.2. Capsule according to claim 1, characterized in that it is obtained by the implementation of a process comprising the following steps of: a) separate conveying in a double jacket of a first aqueous or oily liquid solution and a second liquid solution containing a liquid polyelectrolyte suitable for gelling and the electrically conductive material; b) forming, at the exit of the jacket, a series of drops, each drop comprising a central core formed of said first solution and a peripheral film formed of said second solution and completely covering the central core; c) immersing each drop in a gelling solution containing a reagent capable of reacting with the polyelectrolyte of the film to change it from a liquid state to a gelled state and form the gelled envelope comprising the electrically conductive material, the central core forming the liquid heart; d) recovery of formed capsules; the second solution containing at least one surfactant prior to contact with the first solution and therefore before contact with the gelling solution. 3. Capsule selon la revendication 2, dans laquelle ladite deuxième solution liquide contenant un polyélectrolyte liquide propre à gélifier et le matériau conducteur mentionnée à l'étape a) du procédé est formée par la mise en contact du matériau conducteur électrique sous forme dispersée et du polyélectrolyte propre à gélifier.The capsule according to claim 2, wherein said second liquid solution containing a clean liquid polyelectrolyte to be gelated and the conductive material mentioned in step a) of the process is formed by contacting the electrically conductive material in dispersed form and the polyelectrolyte clean to gel. 4. Capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une enveloppe intermédiaire encapsulant totalement à sa périphérie le coeur liquide, ladite enveloppe intermédiaire étant elle-même encapsulée totalement à sa périphérie par l'enveloppe gélifiée. 3025437 184. Capsule according to any one of claims 1 to 3, characterized in that it further comprises an intermediate envelope completely encapsulating at its periphery the liquid core, said intermediate envelope itself being encapsulated completely at its periphery by the gelled envelope. 3025437 18 5. Capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle le coeur liquide comprend au moins un objet électro-actif.5. Capsule according to any one of claims 1 to 4, wherein the liquid core comprises at least one electro-active object. 6. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le matériau conducteur électrique consiste en des particules solides électriquement conductrices.6. Capsule according to any one of the preceding claims, wherein the electrically conductive material consists of electrically conductive solid particles. 7. Capsule selon la revendication 6, dans laquelle lesdites particules solides électriquement conductrices sont choisies parmi les nanotubes de carbone, le noir de 10 carbone, le graphène.7. Capsule according to claim 6, wherein said electrically conductive solid particles are selected from carbon nanotubes, carbon black, graphene. 8. Capsule selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, dans laquelle l'enveloppe gélifiée est formée par un hydrogel de polysaccharide gélifié par ions divalents comprenant lesdites particules solides électriquement conductrices sous forme 15 dispersées et connectées formant ainsi un réseau électriquement conducteur.The capsule of any one of claims 6 or 7, wherein the gelled envelope is formed by a divalent ion gelled polysaccharide hydrogel comprising said electrically conductive solid particles in dispersed and connected form thereby forming an electrically conductive network. 9. Capsule selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit matériau conducteur électrique est biocompatible. 20The capsule of any preceding claim, wherein said electrically conductive material is biocompatible. 20 10. Capsule selon la revendication 5, dans laquelle ledit objet électroactif est choisi parmi les micro-organismes, les cellules, les macromolécules et les molécules.10. Capsule according to claim 5, wherein said electroactive object is selected from microorganisms, cells, macromolecules and molecules. 11. Capsule selon la revendication 10, dans laquelle ledit micro-organisme est choisi parmi les bactéries du genre Escherichia Coli, Geobacter, Shewanella, 25 Rhodopseudomonas, Ochrobactrum, Enterobacter.The capsule of claim 10, wherein said microorganism is selected from bacteria of the genus Escherichia Coli, Geobacter, Shewanella, Rhodopseudomonas, Ochrobactrum, Enterobacter. 12. Utilisation d'au moins une capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, pour la production de bioréacteurs. 3012. Use of at least one capsule according to any one of claims 1 to 11, for the production of bioreactors. 30 13. Utilisation d'au moins une capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, pour le criblage de micro-organismes, en particulier de microorganismes électroactifs.13. Use of at least one capsule according to any one of claims 1 to 11 for the screening of microorganisms, in particular electroactive microorganisms. 14. Utilisation d'au moins une capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, 35 pour la récupération d'électrons produits par des micro-organismes. 3025437 1914. Use of at least one capsule according to any one of claims 1 to 11, for the recovery of electrons produced by microorganisms. 3025437 19 15. Utilisation d'au moins une capsule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, pour la réalisation d'une anode et/ou d'une cathode de pile à bactéries.15. Use of at least one capsule according to any one of claims 1 to 11 for the production of an anode and / or a cathode of a bacterial cell. 16. Dispositif comprenant au moins une capsule selon l'une quelconque des 5 revendications 1 à 11 et au moins une électrode, ladite au moins une électrode étant en contact avec l'enveloppe gélifiée de ladite au moins une capsule.16. Device comprising at least one capsule according to any one of claims 1 to 11 and at least one electrode, said at least one electrode being in contact with the gelled envelope of said at least one capsule.
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