FR2796640A1

FR2796640A1 - Nouveaux inhibiteurs de farnesyle transferase, leur preparation, les compositions pharmaceutiques qui les contiennent et leur utilisation pour la preparation de medicaments

Info

Publication number: FR2796640A1
Application number: FR9909507A
Authority: FR
Inventors: Patrick Mailliet; Christophe Salagnad
Original assignee: Aventis Pharma SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 1999-07-22
Filing date: 1999-07-22
Publication date: 2001-01-26

Abstract

Nouveaux produits de formule générale (I), leur préparation, les compositions pharmaceutiques qui les contiennent et leur utilisation pour la préparation de médicaments. (CF DESSIN DANS BOPI) Les produits de formule (I) sont des inhibiteurs de farnésyle transférase qui présentent des propriétés antitumorales et antileucémiques remarquables.

Description

NOUVEAUX INHIBITEURS DE FARNESYLE TRANSFERASE. LEUR
PREPARATION, LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES OUI LES
CONTIENNENT ET LEUR UTILISATION POUR LA PREPARATION DE
MEDICAMENTS La présente invention concerne de nouveaux dérivés de benzoperhydroisoindole, qui inhibent la farnésyle transférase, leur préparation, les compositions pharmaceutiques qui les contiennent et leur utilisation pour la préparation de médicaments.

La protéine farnésyle transférase est une enzyme qui catalyse le transfert du groupement farnésyle du pyrophosphate de famésyle (FPP) au résidu cystéine terminal de la séquence tétrapeptidique CAAX d'un certain nombre de protéines et en particulier de la protéine p21Ras, exprimant l'oncogène ras.

L'oncogène ras (H-, N- ou K-ras) est connu pour jouer un rôle clé dans les voies de signalisation cellulaire et les processus de division cellulaire. La mutation de l'oncogène ras ou sa surexpression est souvent associée au cancer humain : protéine p21Ras mutée se retrouve dans de nombreux cancers humains et notamment dans plus de 50% des cancers du colon et 90% des cancers du pancréas (Kohl et al., Science, 260,1834-1837, 1993).

L'inhibition de la farnésyle transférase et par conséquent de la farnésylation de la protéine p21Ras bloque la capacité de la protéine p21Ras mutée à induire une prolifération cellulaire et à transformer les cellules normales en cellules cancéreuses.

D'autre part, il a été démontré que les inhibiteurs de farnésyle transférase sont également actifs sur des lignées cellulaires tumorales n'exprimant pas de ras muté ou surexprimé, mais présentant la mutation d'un oncogène ou la surexpression d'une oncoprotéine dont la voie de signalisation utilise la farnésylation d'une protéine, telle qu'un ras normal (Nagasu et al., Cancer Research 55, 5310-5314, 1995 ; SeppLorenzino et al., Cancer Research 55, 5302-5309, 1995), ou telle que rhoB (Wei et al, Molecular and Cellular Biology, 19,1831-1840, 1999).

Les inhibiteurs de la protéine famésyle transférase sont des inhibiteurs de la prolifération cellulaire et par conséquent des agents anti-tumoraux et antileucémiques.

La demande internationale WO 98/29390 décrit une large famille d'inhibiteurs de famésyle transférase de structure :

Un objet de la présente invention est la sélection parmi cette large famille des composés spécifiques de formule générale (I) :

pour lesquels la nature du présent radical Ar n'est pas décrit dans la demande WO 98/29390 précédemment citée.

Or du fait de la présence de ces radicaux Ar spécifiques, les présents composés de formule générale (I) présentent des effets pharmacologiques inattendus, tant en terme d'activité biologique que de toxicité, de propriétés pharmacocinétiques ou la biodisponibilité, comparativement aux composés de la demande WO 98/29390.

En particulier, l'efficacité des produits de formule générale (I) se trouve très nettement améliorée du fait de ce nouveau substituant Ar.

Ces propriétés pharmacologiques ressortent des exemples décrits plus loin.

D'autre part, un procédé de préparation amélioré, et c'est un autre objet de la présente invention, permet de préparer les nouveaux produits de formule générale (I)

avec des rendements bien supérieurs à ceux résultant du procédé de préparation décrit dans la demande WO 98/29390.

Les nouveaux composés de formule générale (I) se révèlent donc être des agents antitumoraux et anti-leucémiques particulièrement remarquables.

La présente invention concerne les nouveaux composés de formule générale I

dans laquelle: - Ar représente # un radical phényle dihalogéné de formule générale :

dont l'un quelconque des atomes de carbone est attaché par une simple liaison au noyau benzoperhydroisoindole, ou # un radical phényle dihalogéné de formule :

attaché en a par une simple liaison au noyau benzoperhydroisoindole,

pour lesquels X et Y représentent indépendamment un atome d'halogène, choisi parmi les atomes de chlore, fluor ou brome. Avantageusement, le radical aryle représente un radical phényle dichloré en position 2,4. ou # un radical benzothiényle

attaché par une simple liaison au noyau benzoperhydroisoindole par l'un quelconque des atomes de carbone ; de préférence par un atome de carbone en position 2 ou en position 5 ; avantageusement le radical benzothiényle est attaché au noyau benzoperhydroisoindole par le carbone en position 2 ; R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle contenant 1 à 4 atome de carbone, en chaîne droite ou ramifiée, représentant de préférence le radical méthyle ; de préférence R représente un atome d'hydrogène ; sous forme racémique ou leurs isomères optiques, ainsi que leurs sels.

Parmi les composés de formule générale (I), on préfère ceux pour lesquels Ar représente un radical :

attaché par l'atome de carbone * au noyau benzoperhydroisoindole par une simple liaison, pour lequel X et Y représentent indépendamment un atome d'halogène, et encore plus avantageusement X et Y représentent chacun un atome de chlore un radical

attaché par l'atome de carbone en position 2 au noyau benzoperhydroisoindole par une simple liaison, et / ou R représente un atome d'hydrogène ; sous forme racémique ou leurs isomères optiques, ainsi que leurs sels.

Selon l'invention, les composés de formule générale (I) se présentent de préférence sous forme dextrogyre.

Tout particulièrement, on préfère les composés de formule générale (I) choisis parmi : l'acide 9-(benzothién-2-yl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo [f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme racémique ou leurs isomères optiques, ainsi que leurs sels.

Et plus particulièrement : l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]-

2,3 ,3a,4, 9, 9a -hexah ydro-lH -benzo [f] isoindole- 3a -carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme racémique ou ses isomères optiques, ainsi que ses sels.

Et de façon encore plus préférentielle, les composés de formule générale (I) choisis parmi : l'acide 9-(benzothién-2-yl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), énantiomère dextrogyre l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS, 4SR,9SR,9aRS), énantiomère dextrogyre ; ainsi que leurs sels.

Et plus particulièrement : l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo [f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS, 4SR,9SR,9aRS), énantiomère dextrogyre ; ainsi que ses sels.

La demanderesse propose en outre ci-après à titre non limitatif de la présente invention, divers protocoles opératoires ainsi que des intermédiaires réactionnels susceptibles d'être mis en oeuvre pour préparer les composés de formule générale (I).

Bien entendu, il est à la portée de l'homme de l'art de s'inspirer de ces protocoles et ou produits intermédiaires pour mettre au point des procédés analogues en vue de conduire à ces mêmes composés.

Selon l'invention, les nouveaux produits de formule générale (I) revendiqués peuvent être obtenus par action d'un acide de formule générale (II) :

de son ester méthylique ou d'un dérivé de cet acide tel qu'un halogénure ou un anhydride, sur un produit de formule générale (III) :

dans laquelle: # Ar est défini selon la formule générale I, # R représente un radical alkyle, de préférence méthyle, et # G1 représente un atome d'hydrogène (qui peut être obtenu à partir d'un produit de formule générale (III) dans laquelle G1 représente un groupement protecteur d'une fonction amino tel qu'un radical benzyle, benzyloxycarbonyle, tert- butoxycarbonyle, vinyloxycarbonyle, éthoxycarbonyle, 2-chloroéthylecarbonyle ou
2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle ou par hydrogénolyse en présence d'un catalyseur tel que le palladium sur charbon, lorsque G1 représente un radical benzyle ou benzyloxycarbonyle, ou par hydrolyse en milieu acide, lorsque G1 représente un radical tert-butoxycarbonyle, vinyloxycarbonyle ou benzyloxycarbonyle).

Généralement, la réaction du produit de formule générale (II) sous forme acide sur le produit de formule générale (III), dans laquelle G1 représente un atome d'hydrogène, est effectuée en opérant dans un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle ou un hydrocarbure aliphatique halogéné tel que le dichlorométhane ou le chloroforme en présence d'un agent de condensation tel que le chlorhydrate de 1-éthyl-3-[3- (diméthylamino)propyl]carbodiimide, le 1,3-dicyclohexylcarbodiimide ou l'hexafluorophosphate de benzotriazol-1-yloxytris(diméthylamino)phosphonium et

éventuellement d'un agent d'activation tel que l'hydroxybenzotriazole à une température comprise entre 0 C et la température de reflux du mélange réactionnel. Généralement, la réaction du produit de formule générale (II) sous forme d'ester méthylique sur un produit de formule générale (ni), dans laquelle G1 représente un atome d'hydrogène, est effectuée en opérant dans un solvant organique tel que le dioxane ou un hydrocarbure aliphatique halogéné tel que le dichlorométhane à une température comprise entre 0 C et la température de reflux du mélange réactionnel.

Généralement, la réaction du produit de formule générale (II) sous forme d'halogénure sur le produit de formule générale (III), dans laquelle G1 représente un atome d'hydrogène, est effectuée en opérant dans un solvant organique tel qu'un hydrocarbure aliphatique halogéné tel que le dichlorométhane en présence d'une base (amine aliphatique tertiaire) à une température comprise entre 0 C et la température de reflux du mélange réactionnel.

Généralement, la réaction du produit de formule générale (II) sous forme d'anhydride sur le produit de fcrmule générale (III) est effectuée en opérant dans un solvant organique tel qu'un hydrocarbure aliphatique halogéné comme le dichlorométhane en présence d'une base (amine aliphatique tertiaire, pyridine ou 4diméthylaminopyridine) à une température comprise entre 0 C et le reflux.

En outre, à l'issue de la réaction de II sur III, on peut éventuellement, lorsque R représente un radical alcoyle, procéder à une saponification du produit obtenu pour obtenir un produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène.

Généralement la saponification d'un produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un radical alkyle en produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène est effectuée au moyen d'une base minérale, en solution aqueuse, telle que la soude ou la potasse ou le carbonate de sodium dans un solvant organique tel qu'un alcool comme le méthanol ou l'éthanol ou tel qu'un éther comme le dioxane, à une température comprise entre 20 C et le reflux du solvant.

En ce qui concerne les produits intermédiaires décrits ci-dessus, nous proposons ci-après également des protocoles opératoires et des composés utiles pour les obtenir.

Classiquement, les produits de formule générale (III) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle peuvent être obtenus par action de l'acide trifluorométhanesulfonique sur un produit de formule générale (IV) :

dans laquelle : - Ar est défini comme précédemment, - G1 représente un radical benzyle, - R représente un radical alcoyle contenant 1 à 3 atomes de carbone suivie du remplacement du groupe G1 par un atome d'hydrogène - soit par hydrogénolyse dans les conditions décrites ci-dessus puis éventuellement selon le cas du remplacement de l'atome d'hydrogène par un radical tert-butoxycarbonyle, par action de l'anhydride tert-butoxycarbonyle dans un solvant organique, ou par un radical benzyloxycarbonyle, par action du chlorure de benzyloxycarbonyle dans un solvant organique - soit par action d'un chloroformiate d'alcoyle, tel que le chloroformiate de vinyle ou le chloroformiate d'éthyle ou le chloroformiate de 2-chloroéthyle ou le chloroformiate de 2,2,2-trichloroéthyle, dans un solvant organique tel que le dichlorométhane à une température comprise entre 0 C et l' ambiante, suivie de l'hydrolyse acide du carbamate intermédiairement formé, généralement à l'aide d'une solution aqueuse 1 à 6 M d'acide chlorhydrique, éventuellement dans un solvant organique tel qu'un alcool, comme le méthanol ou l'éthanol, ou un éther comme le tétrahydrofurane ou le dioxane.

Généralement la cyclisation intramoléculaire de type Friedel-Crafts du produit de formule générale (IV) en produit de formule générale (III) peut être effectuée par l'action d'un excès, de 3 à 20 équivalents molaires, d'un acide fort tel que l'acide trifluorométhanesulfonique, éventuellement en présence d'anhydride trifluorométhanesulfonique en quantité catalytique ou éventuellement ajouté en ajouts successifs, en opérant dans un solvant organique tel que le dichlorométhane à une température comprise entre 0 C et le reflux de quelques minutes à plusieurs jours. Il est également possible d'effectuer la cyclisation intramoléculaire de type FriedelCrafts par action d'un acide de Lewis, tel que le trichlorure d'aluminium ou le tétrachlorure de titane ou le trifluorure de bore, éventuellement sous forme de complexe avec l'oxyde de diéthyle, dans un solvant organique tel que le dichlorométhane ou le nitrométhane ou le nitrobenzène.

Cette réaction peut éventuellement être suivie de la saponification du produit obtenu, et suivie éventuellement selon le cas du remplacement du radical benzyle par un atome d'hydrogène.

Le produit de formule générale (IV) peut être obtenu quant à lui de manière classique par action d'un dérivé organomagnésien de formule générale Ar-Mg-X dans laquelle Ar est défini comme précédemment et X représente un atome d'halogène, ou d'un organolithien de formule générale Ar-Li dans laquelle Ar est défini comme précédemment sur un produit de formule générale (V) :

dans laquelle R et G1 sont définis comme précédemment, dans les conditions habituelles.

Généralement la réaction d'un arylmagnésien, obtenu classiquement et éventuellement en présence de chlorure de cérium (III) anhydre dans les conditions décrites par Imamoto (Tetrahedron Lett., 1985 p. 4763), sur le dérivé cétonique de formule générale (V) est effectuée dans un solvant organique comme l'oxyde de diéthyle ou le tétrahydrofurane, en opérant à une température comprise entre 0 C et le reflux du mélange réactionnel de quelques minutes à 24 heures. Cependant il a été trouvé particulièrement avantageux d'opérer dans le toluène, éventuellement en mélange avec de l'oxyde de diéthyle ou du tétrahydrofurane.

Généralement la réaction d'un aryllithien, obtenu classiquement, sur le dérivé cétonique de formule générale (V) est effectuée dans un solvant organique comme l'oxyde de diéthyle ou le tétrahydrofurane, en opérant à une température comprise entre -78 et -20 C de quelques minutes à 4 heures. Cependant il a été trouvé particulièrement avantageux d'opérer dans le toluène, éventuellement en mélange avec de l'oxyde de diéthyle ou du tétrahydrofurane.

Avantageusement, il a été développé dans le cadre de la présente invention, un procédé de préparation permettant d'obtenir les composés de formule générale (III) à partir des composés de formule générale (V) via la formation d'un intermédiaire stable et caractérisable de formule générale (IX) caractérisé par la présence d'une fonction aryléthylénique en position 6,7.

Plus précisément, les composés de formule générale III

dans laquelle Ar et R sont tels que définis en formule générale I et Gl représente un radical benzyle peuvent être obtenus à partir de composés de formule générale (V) :

dans laquelle R et G1 sont tels que définis précédemment via la formation d'un intermédiaire de formule générale (IX)

dans laquelle R, Ar et G1 sont tels que définis précédemment.

Le protocole opératoire mis au point, implique successivement : - soit la condensation, en position 7, d'un dérivé cétonique de formule générale (V) avec de l'hydrazine, pour conduire à une hydrazone, suivie de l'action de l'iode pour conduire, selon la réaction de Barton (J. Chem. Soc., 1962 p. 470), à un dérivé iodoéthylènique ; d'une réaction de couplage au palladium avec un acide arylboronique, réaction de Suzuki (Tetrahedron Lett., 1979 p. 3437), de formule générale Ar-B(OH)2, ou éventuellement avec l' anhydride trimérique de l'acide arylboronique, dans laquelle Ar est défini comme précédemment, ou avec un arylstannane, réaction de Stille (Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1986 p.508), de formule générale Ar-SnMe3 dans laquelle Ar est défini comme précédemment, pour conduire à cet intermédiaire aryléthylénique de formule générale (IX) dont la transformation par cyclisation intramoléculaire de type Friedel-Crafts conduit au produit (III) attendu,

- soit la réaction d'un dérivé cétonique de formule générale (V) avec de l'anhydride trifluorométhanesulfonique, pour conduire à un triflate d'énol en position 6-7 (Org. Synth., 1990 p. 116) ; puis d'une réaction de couplage au palladium avec un acide arylboronique, ou éventuellement avec l'anhydride trimérique de l'acide arylboronique, réaction de Suzuki (Tetrahedron Lett., 1979 p. 3437), de formule générale Ar-B(OH)2 dans laquelle Ar est défini comme précédemment, ou avec un arylstannane, réaction de Stille (Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1986 p.508), de formule générale Ar-SnMe3 dans laquelle Ar est défini comme précédemment, pour conduire à cet intermédiaire aryléthylénique de formule générale (IX) dont la transformation par cyclisation intramoléculaire de type Friedel-Crafts conduit au produit (III) attendu.

Généralement le dérivé cétonique de formule générale (V) est traité par un excès d'hydrate d'hydrazine, de 3 à 20 équivalents molaires, au reflux dans un solvant, tel que l'éthanol, de quelques minutes à quelques heures. L'hydrazone ainsi obtenue est alors agitée avec un excès d'iode, en présence d'une amine tertiaire aliphatique telle que la triéthylamine, à une température voisine de 20 C pendant quelques heures pour conduire à un dérivé iodoéthylénique.

Généralement le dérivé cétonique de formule générale (V) est traité : - soit par de l'anhydride trifluorométhanesulfonique en présence d'une base organique, telle que la 2,6-di-tert-butyl-4-méthylpyridine, dans un solvant organique tel que le dichlorométhane à une température voisine de l'ambiante pendant quelques heures , selon Stang (Synthesis, 1980 p283), - soit par un bis(trifluorosulfonyl)amide, comme la N,N-bis(trifluorosulfonyl)aniline selon Mac Murry (Tetrahedron Lett., 1983 p979) ou la 2-[N,N-bis(trifluorosulfonyl)amino]pyridine selon Comins (Tetrahedron Lett., 1992 p 979), en présence d'une base comme le diisopropylamidure de lithium dans un solvant organique comme le dichlorométhane ou le 1,2-diméthoxyéthane,

pour conduire à un triflate d'énol.

Généralement le couplage entre le dérivé iodoéthylènique, ou le triflate d'énol, obtenu précédemment et un acide arylboronique, obtenu classiquement et éventuellement isolé sous forme d'anhydride trimérique, est effectué par agitation dans un système biphasique constitué d'un solvant organique, préférentiellement le 1,2-diméthoxyéthane ou un mélange de toluène et de méthanol, et d'une solution aqueuse basique, préférentiellement une solution 2N de carbonate de sodium, en présence d'une quantité catalytique de dérivé de palladium(O), préférentiellement du tétrakis(triphénylphosphine)palladium, à une température voisine du reflux pendant quelques heures pour conduire au composé aryléthylènique de formule générale (IX).

Généralement le couplage entre le dérivé iodoéthylènique, ou le triflate d'énol, obtenu précédemment avec un arylstannane, obtenu classiquement, est effectué par agitation dans un solvant organique aprotique polaire, préférentiellement le diméthylformamide ou la N-méthyl-pyrrolidone, en présence d'une quantité catalytique de dérivé de palladium(0), préférentiellement du tétrakis (triphénylphosphine) palladium, à une température comprise entre 50 et 100 C pendant quelques heures pour conduire au composé aryléthylènique de formule générale (IX).

Généralement la cyclisation intramoléculaire de type Friedel-Crafts du composé de formule générale (IX) en produit de formule générale (III) est effectuée dans les conditions décrites précédemment pour la cyclisation intramoléculaire des produits de formule générale (IV).

Avantageusement, il a en outre été développé, dans le cadre de la présente invention, un second procédé de préparation permettant d'obtenir les composés de formule générale (III) tels que définis précédemment à partir des composés de formule générale (V) via la formation de l'intermédiaire de formule générale (IX) éventuellement isolable. Ce second procédé est tout particulièrement avantageux lorsque le radical aryle Ar représente un noyau phényle convenablement substitué par

des groupements donneurs d'électrons, ou un radical hétérocyclique naturellement riche en électrons ou un radical hétérocyclique convenablement substitué par des groupements donneurs d'électrons, par exemple tels que ceux définis en formule générale (I) ; ce second procédé consiste à faire réagir directement, selon des réactions tandem de cyclisations intermoléculaire puis intramoléculaire de type Friedel-Crafts, un hydrocarbure aromatique ou hétérocyclique Ar-H avec un composé de formule générale (V) dans un solvant organique en présence d'un excès d'acide fort, tel que l'acide trifluorométhanesulfonique, ou éventuellement d'un acide de Lewis, tel que le trichlorure d'aluminium.

Le mode opératoire mis au point consiste à condenser le produit de formule générale (V) avec un excès d'acide trifluorométhanesulfonique (de 5 à 20 équivalents molaires) dans un solvant organique tel que le dichlorométhane à une température voisine de l'ambiante de quelques heures à plusieurs jours. Selon le nombre d'équivalents molaires et la concentration de l'acide trifluorométhanesulfonique ainsi que la nature du radical Ar et des substituants qu'il porte, cette réaction conduit soit directement aux composés de formule générale (III) soit intermédiairement aux composés de formule générale (IX) qui sont alors cyclisés comme décrit précédemment en composés de formule générale (III).

Un autre objet de la présente invention se rapporte également à ces composés de formule générale (IX) :

dans laquelle Ar est tel que défini en formule générale (I), G1 représente un radical benzyle et R représente un radical alcoyle sous forme racémique ainsi que leurs isomères optiques.

Le produit de formule générale (V) dans laquelle R et Ar sont tels que définis en formule générale (I), G1 représente un radical benzyle peut être obtenu par action d'une N-trialcoylsilylméthyl-N-alcoxyméthyl-amine portant un groupement protecteur de la fonction amine tel qu'un radical benzyle, comme la N- triméthylsilylméthyl-N-(n-butoxyméthyl)benzylamine qui peut être préparée dans les conditions décrites dans Chem. Pharm. Bull., 276 (1985), sur un dérivé de cyclohexènone de formule générale :

dans laquelle R est défini comme ci-dessus.

Généralement, la réaction est effectuée dans un solvant organique tel qu'un hydrocarbure aliphatique halogéné comme le dichlorométhane en présence d'un acide fort tel que l'acide trifluoroacétique à une température comprise entre 0 C et le reflux du mélange réactionnel.

Les composés de formule générale (V) sous forme racémique peuvent être obtenus à partir des composés de formule générale (VI) sous forme racémique et les isomères optiques des composés de formule générale (V) peuvent être obtenus à partir des isomères optiques de formule générale (VI') ou leurs énantiomères

dans laquelle R est défini comme précédemment.

Il est entendu que les autres étapes ultérieures du procédé décrites ci-avant et ci-après restent inchangées et peuvent être conduites de la même façon sur le mélange racémique ou les isomères optiques des composés de formule générale (V).

Le procédé de préparation mettant en oeuvre la résolution énantiomérique du composé (VI') est plus simple et plus performant que celui mettant en oeuvre le mélange racémique du composé (VI) : en effet, cette voie permet d'éviter l'étape finale de séparation des énantiomères du mélange racémique et permet également d'augmenter le rendement global tout en économisant la quantité de réactifs mis en oeuvre dans les étapes ultérieures à l'étape enzymatique.

Ce procédé fait également partie de la présente invention.

Les isomères optiques de formule générale (V#) peuvent être obtenus à partir des composés de formule générale (VI) de la façon suivante : La séparation des isomères optiques de formule générale (VI') des composés de formule générale (VI) peut être effectuée à partir des composés de formule générale (VI) sous forme de mélange racémique, de façon avantageuse par dédoublement enzymatique.

Très avantageusement, il a été découvert selon l'invention que la résolution énantiomérique pouvait être obtenue en effectuant une réaction enzymatique énantiospécif ique.

Comme enzyme peut être utilisée de préférence une enzyme permettant de séparer les énantiomères de formule générale (VI') de stéréochimie désirée, tels que lévogyres des autres énantiomères, tels que dextrogyres ou leurs dérivés.

De préférence, il a été découvert selon l'invention, que le dédoublement enzymatique désiré pouvait être effectué par la réaction suivante conduisant aux isomères optiques dessinés ci-dessous ou leurs énantiomères respectifs :

où R est défini comme précédemment.

Généralement, la réaction est effectuée à partir d'un mélange d'une solution contenant le produit de formule générale (VI) sous forme racémique, dans un solvant organique hydrocarboné tel que le cyclohexane, et d'une solution aqueuse de dipotassium hydrogenophosphate, de préférence ajustée à pH compris entre 6 et 8, par exemple à l' aide d'acide phosphorique, auquel est ajoutée une solution aqueuse de l'enzyme appropriée.

Généralement, la concentration du produit de formule générale (VI) dans le mélange réctionnel est comprise entre 5 et 50 g/l.

De préférence, le volume de la solution organique représente 10 à 30 % du volume total de la solution aqueuse.

De préférence, la quantité d'enzyme mise en oeuvre dans le mélange réactionnel est comprise entre 0. 4 et 4 MU/1 (1 MU : unité d'activité enzymatique).

Généralement, la réaction est mise en oeuvre à température comprise entre 20 et 40 C, sous agitation et son avancement peut être suivi par HPLC chirale. La phase organique peut ensuite éventuellement être séparée de la phase aqueuse puis clarifiée

par addition d'un solvant ou un mélange de solvants appropriés, comme par exemple les alcools aliphatiques tel que l'éthanol.

Très avantageusement, il a été découvert selon l'invention, que la lipase de Candida Antartica " fraction B ", comme par exemple l'enzyme Chirazyme L2 commercialisée par Boerhringer Mannheim, peut effectuer la réaction conduisant au composé de formule générale (VI') dessiné ci-dessus, permettant ainsi d'accéder aux formes dextrogyres des composés de formule générale (I) selon l'invention.

Les produits de formule générale (VI) peuvent être obtenus par estérification des acides 3-oxo-6-phényl-cyclohex-l-ène-l-carboxyliques au moyen d'un alcool aliphatique contenant 1 à 3 atomes de carbone en présence d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique à une température comprise entre 0 C et la température de reflux du mélange réactionnel, ou au moyen d'un halogénure d'alcoyle (iodure), en présence d'une base organique, telle que le 1,8diazabicyclo[5.4.0]undéc-7-ène, ou minérale, telle que le carbonate de césium, en opérant dans un solvant choisi parmi le tétrahydrofurane, le diméthylformamide, l'acétone ou le dioxane.

Les acides 3-oxo-6-phényl-cyclohex-1-ène-1-carboxyliques peuvent être obtenus à partir des acides 3-oxo-6-phényl-cyclohexane-l-ol-l-carboxyliques, soit par deshydratation thermique, par chauffage à une température voisine de 190 C (selon J.

Org. Chem., 1971 p. 3707) ou par chauffage au reflux du toluène en présence d'acide p.toluènesulfonique, soit par action d'une base minérale telle que la soude à une température comprise entre 0 et 50 C.

Les acides 3-oxo-6-phényl-cyclohexane-l-ol-l-carboxyliques peuvent être obtenus par action des acides phénylpyruviques, ou éventuellement des esters correspondants, sur la méthylvinylcétone en opérant généralement en milieu hydro-alcoolique tel qu'un mélange méthanol-eau en présence d'une base minérale telle que la soude (selon J. Org. Chem., 1971 p. 3707).

Les acides phénylpyruviques peuvent être obtenus soit par hydrolyse des acides aacétamidocinnamiques correspondants, par chauffage dans l'acide chlorhydrique selon Org. Synth. 1943 p. 519, soit par hydrolyse des benzalhydantoines correspondantes, par chauffage dans la soude à 20 % selon Org. Synth. Coll. Vol. V p. 627.

Les acides a-acétamidocinnamiques peuvent être obtenus, à partir des benzaldéhydes correspondants selon Org. Synth. 1939 pl, par action de la N-acétylglycine au reflux de l'anhydride acétique en présence d'acétate de sodium. Les azlactones intermédiaires ainsi obtenues sont ensuite hydrolysées en acides a-acétamidocinnamiques par chauffage au reflux dans l'acétone aqueux.

Les benzalhydantoines peuvent être obtenues par chauffage des benzaldéhydes correspondants, selon Org. Synth. Coll. Vol V p. 267, avec de l'hydantoine en présence d'une base organique telle que la pipéridine à une température voisine de 130 C.

Selon l'invention, les produits de formule générale (I) dans laquelle Ar est défini comme précédemment et R est défini comme précédemment peuvent être également obtenus à partir d'un produit de formule générale (IX) dans laquelle R est défini comme précédemment et G1 représente un atome d'hydrogène.

Selon l'invention, le produit de formule générale (V)

dans laquelle R est défini comme précédemment et G1 représente un atome d'hydrogène est obtenu à partir du produit de formule générale (V) dans laquelle G1

représente un groupement protecteur de la fonction amino, dans les conditions décrites précédemment pour la préparation d'un produit de formule générale (III) dans laquelle G1 représente un atome d'hydrogène.

Le produit de formule générale (V) dans laquelle G1 représente un atome d'hydrogène est transformé en produit de formule générale :

dans laquelle R est défini comme précédemment, en opérant de la manière suivante : - les produits de formule générale (VII) peuvent être obtenus par action d'un acide de formule générale (II), ou de son chlorure, ou de son anhydride sur un produit de formule générale (V) dans laquelle G1 représente un atome d'hydrogène en opérant dans les conditions décrites précédemment pour l'action d'un produit de formule générale (II) sur un produit de formule générale (m) dans laquelle G1 représente un atome d'hydrogène, Le produit de formule générale (VII) est transformé en produit de formule générale :

dans laquelle Ar, R sont définis comme précédemment, par action d'un dérivé métallique de formule générale Ar-Mg-X ou Ar-Li dans laquelle X représente un atome d'halogène sur un produit de formule générale (VII) en opérant dans les conditions décrites précédemment pour l'action d'un dérivé organomagnésien ou organolithien de formule générale Ar-Mg-X ou Ar-Li sur un produit de formule générale (V).

Le produit de formule générale (VIII) est transformé en produit de formule générale (I) dans laquelle Ar, R sont définis comme précédemment, par action de l'acide trifluorométhanesulfonique, ou d'un acide de Lewis, sur le produit de formule générale (VTII) en opérant dans les conditions décrites précédemment pour l'action de l'acide trifluorométhanesulfonique, ou d'un acide de Lewis, sur un produit de formule générale (IV).

L'action d'un hydrocarbure aromatique ou d'un hétérocycle aromatique Ar-H, tel que défini précédemment, en présence d'acide trifluorométhanesulfonique ou d'un acide de Lewis, sur un produit de formule générale (VII) dans laquelle R est défini comme précédemment, conduit à un produit de formule générale (I) dans laquelle Ar est défini comme précédemment et R représente un radical alcoyle.

Les mélanges réactionnels obtenus par les divers procédés décrits précédemment sont traités suivant des méthodes classiques physiques (évaporation, extraction, distillation, chromatographie, cristallisation par exemple) ou chimiques (formation de sels par exemple).

Les composés de formule (I) peuvent être éventuellement transformés en sels d'addition avec un acide minéral ou organique par action d'un tel acide au sein d'un solvant organique tel qu'un alcool, une cétone, un éther ou un solvant chloré. Ces sels font également partie de l'invention.

Lorsque le procédé de préparation ne met pas en oeuvre d'étape de résolution énantiomérique (par exemple mettant en oeuvre l'énantiomère de formule générale

VI'), les produits finaux sont obtenus sous forme racémique. Les isomères optiques des produits de formule générale (I) peuvent être obtenus selon les méthodes habituelles de séparation à partir du produit racémique correspondant. ll est particulièrement avantageux d'effectuer la séparation par chromatographie en phase liquide à haute performance en utilisant une phase stationnaire chirale de type Pirkle modifiée en éluant avec un solvant convenable.

Comme phase stationnaire chirale peut être utilisée de préférence une phase dont le sélecteur chiral, qui est de préférence la 3,5-dinitro-phénylalanine, est éloigné de la silice par un bras aminoalcoyle contenant 4 à 14 atomes de carbone fixé sur les fonctions amines d'une silice aminopropyle et dont les fonctions silanols libres sont bloquées par des radicaux trialcoylsilyles.

Cette phase chirale peut être définie par la structure suivante :

dans laquelle les symboles R', identiques ou différents, et R", identiques ou différents, représentent des radicaux alcoyles contenant 1 à 10 atomes de carbone, G3 représente un groupe électro-attracteur et n représente un nombre entier compris entre 4 et 13 inclusivement, dont la porosité est voisine de 100 Â La phase chirale peut être préparée par action sur une silice aminopropyle de l'anhydride d'un acide aminoalcanoïque contenant 4 à 14 atomes de carbone dont la fonction amine est protégée par un groupement protecteur tel que le radical tert- butoxycarbonyle, suivie du blocage d'une partie des fonctions silanols par des radicaux Si(R')3 tels que définis précédemment, puis, après élimination des

groupements protecteurs de la fonction amine, de l'amidification au moyen d'un aminoacide de formule générale :

dans laquelle G3 est défini comme précédemment, et enfin blocage des fonctions silanols résiduelles par des radicaux Si(R")3 tels que définis précédemment.

Généralement, l'action de l'anhydride d'un acide aminoalcanoïque protégé sur la silice aminopropyle est effectuée en opérant dans un solvant organique anhydre tel que le diméthylformamide à une température voisine de 20 C.

Le blocage des fonctions silanols par des groupements -Si(R'3) tels que définis précédemment est effectuée par action d'un halogénotrialkylsilane sur la silice aminopropyle greffée par des restes aminoalcanoyles en opérant dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène en présence d'un agent basique tel que la pyridine.

L'élimination des groupements protecteurs des restes aminoalcanoyles s'effectue généralement, lorsque le groupement protecteur est un radical tert-butoxycarbonyle, par action de l'acide trifluoroacétique dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène.

L'amidification au moyen de phénylalanine dont la fonction amine est protégée est effectuée en présence d'un agent de condensation tel que la N-éthoxycarbonyl-2- éthoxy-l,2-dihydro-quinoléine en opérant dans un solvant organique anhydre tel que le diméthylformamide.

Le blocage des fonctions silanols résiduelles par des radicaux-Si(R")3 tels que définis précédemment est généralement effectué au moyen de trialkylsilyl-imidazole en opérant dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène.

La silice aminopropyle peut être préparée par action de l'aminopropyl-triéthoxysilane sur une silice dont la porosité est voisine de 100 Â en opérant en présence d'imidazole dans un solvant organique anhydre tel qu'un hydrocarbure aromatique comme le toluène.

Comme le montrent les exemples ci-après, les nouveaux produits de formule générale (I), qui inhibent la farnésyle transférase et la farnésylation de la protéine Ras, présentent des propriétés antitumorales et antileucémiques remarquables.

La présente invention a également pour objet toute composition pharmaceutique contenant au moins un produit de formule générale en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants pharmaceutiquement acceptables qu'ils soient inertes ou biologiquement actifs.

Les nouveaux produits de formule générale (I) peuvent se présenter sous forme de sels non toxiques et pharmaceutiquement acceptables. Ces sels non toxiques comprennent les sels avec les acides minéraux (acides chlorhydrique, propionique, succinique, maléique, hydroxymaléique, benzoïque, fumarique, méthanesulfonique, trifluoroacétique ou oxalique) ou avec les bases minérales (soude, potasse, lithine, chaux) ou organiques (amines tertiaires comme la triéthylamine, la pipéridine, la benzylamine) selon la nature des composés de formule générale (I).

La présente invention concerne également l'utilisation des composés de formule générale (I) selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques utiles pour inhiber la protéine farnésyle transférase, et plus particulièrement pour inhiber la farnésylation de l'oncogène ras.

Notamment, la présente invention concerne l'utilisation des composés de formule générale (I) selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques utiles pour le traitement des maladies liées à des proliférations cellulaires par inhibition de la farnésyle transférase et en particulier pour le traitement des maladies liées à des proliférations cellulaires, surexprimant l'une quelconque des oncoprotéines

H-Ras, N-Ras ou K-Ras, ou présentant une mutation de l'un quelconque des oncogènes ras correspondants.

L'invention concerne en particulier l'utilisation des composés de formule générale (I) selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques utiles pour le traitement des maladies liées à des proliférations cellulaires, malignes ou bénignes, des cellules de divers tissus et/ou organes, comprenant les tissus musculaires, osseux ou conjonctifs, la peau, le cerveau, les poumons, les organes sexuels, les systèmes lymphatiques ou rénaux, les cellules mammaires ou sanguines, le foie, l'appareil digestif, le colon, le pancréas et les glandes thyroïdes ou adrénales, et incluant les pathologies suivantes :le psoriasis, la resténose, les tumeurs solides, le sarcome de Kaposi, les carcinomes, le cholangiocarcinome, le choriocarcinome, le neuroblastome, la tumeur de Wilms, la maladie de Hodgkin, les mélanomes, les tératocarcinomes, les gliomes, les myélomes multiples, les leucémies lymphocytaires chroniques, les lymphomes granulocytaires aigus ou chroniques, et les cancers tels que les cancers du pancréas, du colon, du poumon, de l'ovaire, du sein, du cerveau, de la prostate, du foie, de l'estomac, de la vessie ou des testicules.

L'invention concerne tout particulièrement l'utilisation des composés de formule générale (I) selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques utiles pour le traitement des cancers tels que les cancers du pancréas, du colon, du poumon, de l'ovaire, du sein, du cerveau, de la prostate, du foie, de l'estomac, de la vessie ou des testicules, et plus avantageusement le cancer du colon et du pancréas, en particulier du colon.

Le dit traitement peut être notamment effectué par inhibition de la croissance tumorale, notamment par inhibition de la protéine farnésyle transférase, ou encore par inhibition de la croissance de tumeurs exprimant l'oncogène ras activé.

Le traitement thérapeutique peut aussi être effectué concuremment avec d'autres traitements thérapeutiques incluant des médicaments antinéoplastiques, des anticorps monoclonaux, des thérapies immunologiques ou des radiothérapies ou des

modificateurs des réponses biologiques. Les modificateurs des réponses incluent, de manière non limitative, les lymphokines et les cytokines telles que les interleukines, les interférons (a, ss ou #) et le TNF. D'autres agents chimiothérapeutiques utiles dans le traitement des désordres dus à la prolifération anormale des cellules incluent, de manière non limitative, les agents alkylants tels que les moutardes à l'azote comme la mechloretamine, le cyclophosphamide, le melphalan et le chlorambucil, des sulfonates d'alkyle comme le busulfan, les nitrosourées comme la carmustine, la lomustine, la sémustine et la streptozocine, les triazènes comme la dacarbazine, les antimétabolites comme les analogues de l'acide folique tel que le méthotrexate, les analogues de pyrimidine comme le fluorouracil et la cytarabine, des analogues de purines comme la mercaptopurine et la thioguanine, des produits naturels tels que les taxoides, tels que le taxol, taxotère, les alcaloïdes de vinca comme la vinblastine, la vincristine et la vendésine, des inhibiteurs de topoisomérases, tels que la camptothécine ou ses dérivés, tels que l'irinotcan, le topotécan, des épipodophyllotoxines comme l'étoposide et le teniposide, des antibiotiques comme la dactinomycine, la daunorubicine, la doxorubicine, la bléomycine, la plicamycine et la mitomycine, des enzymes comme la L-asparaginase, des agents divers comme les complexes de coordination du platine tel que le cisplatine, les urées substituées telles que l'hydroxyurée, les dérivés de méthylhydrazine comme la procarbazine, les suppresseurs adrénocoticoïques comme le mitotane et l'aminoglutéthymide, les hormones et les antagonistes comme les adrénocorticostéroïdes comme la prednisone, les progestines comme le caproate d'hydroxyprogestérone, l'acétate de méthoxyprogestérone et l'acétate de megestrol, les oestrogènes comme le diéthylstilbestrol et l'éthynylestradiol, les antioestrogènes comme le tamoxifène, les androgènes comme le propionate de testostérone et la fluoxymesterone.

Un autre objet de la présente invention est toute association d'un produit de formule générale (I) avec un ou plusieurs composés compatibles et pharmacologiquement actifs et/ou un traitement radiothérapique afin d'obtenir un effet thérapeutique synergique, lesdits composés étant préférentiellement des principes actifs connus

pour leur activité inhibitrice de la prolifération cellulaire et particulièrement pour leur activité dans le traitement du cancer ; peuvent être préférentiellement des composés antiprolifératifs agissant à l'un quelconque des stades de la voie de signalisation de l'oncogène ras comme un inhibiteur de protéine tyrosine kinase, ou un autre inhibiteur de farnésyle transférase, ou un inhibiteur de HMG-Co-réductase, ou les composés cytotoxiques utilisés habituellement dans le traitement du cancer.

Les produits selon l'invention peuvent être utilisés pour prévenir ou retarder l'apparition ou la réapparition des conditions pathologiques ou pour traiter ces conditions pathologiques.

Les produits selon l'invention peuvent être administrés par voie orale, parentérale, comprenant notamment la voie intra-veineuse, ou intrapéritonéale ou rectale. Les produits de l'invention peuvent être administrés de manière particulièrement avantageuse par voie orale.

Les compositions pour administration orale comprennent des comprimés, des pilules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions le produit actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants inertes tels que saccharose, lactose ou amidon. Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium.

Comme compositions liquides pour administration orale peuvent être utilisées des émulsions pharmaceutiquement acceptables, des solutions, des suspensions, des sirops, des élixirs contenant des diluants inertes tel que l'eau ou l'huile de paraffine.

Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants.

Les compositions selon l'invention pour administration parentérale peuvent être des solutions stériles aqueuses ou non aqueuses, des suspensions ou des émulsions.

Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive ou des esters organiques injectables par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, émulsifiants et

dispersants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants ou par chauffage. Elles peuvent être également préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable.

Les compositions pour administration rectale sont des suppositoires qui peuvent contenir, outre le produit actif, des excipients tels que le beurre de cacao.

Les doses utilisées pour mettre en oeuvre les méthodes selon l'invention sont celles qui permettent un traitement prophylactique ou un maximum de réponse thérapeutique. Les doses varient selon la forme d'administration, le produit particulier sélectionné et les caractéristiques propres du sujet à traiter. En général, les doses sont celles qui sont thérapeutiquement efficaces pour le traitement des désordres dus à une prolifération cellulaire anormale, et notamment un traitement cytostatique. Les produits selon l'invention peuvent être administrés aussi souvent et aussi longtemps que nécessaire pour obtenir l'effet thérapeutique désiré.

Généralement, les doses sont comprises, chez l'homme, entre 0,1 et 10000 mg/kg par jour, préférentiellement comprises entre 100 et 2000 mg/kg par jour. Il est entendu que, pour choisir le dosage le plus approprié, devront être pris en compte la voie d'administration, le poids du malade, son état de santé général, son âge et tous les facteurs qui peuvent influer sur l'efficacité du traitement.

D'une façon générale, le médecin déterminera la posologie appropriée en fonction de l'âge, du poids et de tous les autres facteurs propres au sujet à traiter.

L'exemple 8 illustre des compositions selon l'invention.

Les exemples suivants sont présentés à titre illustratif et non limitatif de la présente invention.

EXEMPLE 1

Préparation de l'acide 9-(benzothién-2-yl)-4.9-éthano-2-[2-(2- méthoxyphényl)propènoyl)]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo [f]isoindole-3a- carboxylique-(3RS,4SR,9SR,9aRS), énantiomère dextrogyre Etape A A une solution de 428 g (1,98 mol) d'acide 3-oxo-6-phénylcyclohex-l-ène-l- carboxylique-(RS), qui peut être obtenu selon J. Org. Chem., 1971,36, 3707, dans 4,5 cm3 d'acétone, on ajoute successivement 358 g (2,52 mol) d'iodure de méthyle et 361 g (2,38 mol) de 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undéc-7-ène, puis on porte au reflux pendant cinq heures. L'acétone est ensuite distillée, puis le résidu est agité avec 2,5 dm3 d'eau. Après refroidissement à 10 C, le précipité formé est essoré, lavé à l'eau glacée, puis séché à 30 C. On obtient ainsi 423 g (93 %) de 3-oxo-6- phénylcyclohex-1-ène-l-carboxylate de méthyle-(RS), sous forme d'une poudre jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion = 66 C - spectre de R. M.N. (300 MHz, CDC13, d en ppm) : (mt, 4H : en 4 et en 5), 3,72 (s, 3H: CH3) ; 4,25 (dt, 1H: H en 6) ; (s, 1H: H en 2) ; 7,2-7,52 (mt, 5H: aromatiques).

Etape B Préparation du 3-oxo-6-phenyl-cyclohex-1-ène-carboxylate de méthyle-(R,S) sous forme lévogyre résolue
202 g de 3-oxo-6-phenyl-cyclohex-l-ène-carboxylate de méthyle-(R,S) sous forme racémique sont dissous sous agitation vigoureuse dans 7,75 dm3de cyclohexane à
30 C et les particules insolubles sont extraites par décantation (solution 1). 513. 6 g de
K2HPO4 est dissous dans 29.43 dm3d'eau distillée dans un réacteur agité de 50 dm3 (solution 2). La solution 2 est ajustée à pH 7. 2 avec 85 % (w/w) H3P04, chauffé à
30 C and mélangé avec la solution 1.2.8 dm3d'une solution de lipase Candida antartica " fraction B " (e.g. Chirazyme L2, sol. Commercialisée par Boehringer
Mannheim) est ensuite ajoutée au réacteur. La réaction est effectuée sous forte

agitation à 30 C. La résolution énantiosélective est suivie par de la HPLC chirale, sur colonne : Chiralpak# AD (Daicel Chemical Industries Ltd), phase mobile : heptane/ethanol 90/10 (V/V), détection UV : 220 nm, débit : 1 mL/mn. Après 342 h la phase organique sous forme d'émulsion (Solution 3) est séparée de la phase aqueuse par décantation. 7.75 dm3de cyclohexane et 1.25 dm3 d'éthanol sont mélangés avec la solution 3.15.5 dm3de la phase supérieure sont séparés de la phase inférieures contenant 2.4 dm3 d'eau et d'éthanol. La phase supérieure est concentrée et séchée sous vide à 40 C, conduisant à 53. 5 g d'un solide jaune : 3-oxo-6-phényl-cyclohex-1- ène-carboxylate de méthyle-(R,S) sous forme lévogyre résolue à 93% d'excès énantiomérique, dont les caractéristiques sont les suivantes : - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= -183,3 +/- 2,2 (c = 0,5 / méthanol).

- HPLC (colonne : Chiralpak' AD commercialisée par Daicel Chemical Industries Ltd, phase mobile: Heptane/Ethanol 90/10 (V/V), detection UV : 220 nm, débit : 1 mL/mn) : -Temps de rétention : 3-oxo-6-phényl-cyclohex-1-ène-carboxylate de méthyle-(R,S) sous forme lévogyre résolue : min Etape C Une solution de 120 g (0,522 mol) de l'énantiomère lévogyre du 6-phényl-3-oxocyclohexène-1-carboxylate de méthyle-(R,S), d'excès énantiomérique supérieur à 90%, et de 7 cm3 d'acide trifluoroacétique dans 650 cm3 de dichlorométhane est portée au reflux. On ajoute alors, goutte à goutte en quinze minutes, 176 g (0,626 mol) de N-n.butoxyméthyl-N-triméthylsilylméthyl-benzylamine, qui peut être obtenue selon Chem. Pharm. Bull., 1985,276, on maintient le reflux pendant dix minutes. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 20 C. Après agitation pendant une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, la phase organique est concentrée et l'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (230-400 Mesh), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (90-10 puis
80-20 en volumes). L'huile ainsi obtenue est reprise par 530 cm3 de cyclohexane, la phase organique est lavée successivement par une solution aqueuse N d'acide

méthanesulfonique puis de l'eau distillée. On obtient alors 159 g (88 %) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-4-phényl-7-oxo-perhydroisoindole-3acarboxylate de méthyle-(3aRS,4RS,7aSR), sous forme d'une huile viqueuse jaune, dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 363 (M+) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= -58,7 +/- 1 (c = 0,5 / méthanol) Etape D Une solution de 100 g (0,275 mol) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-4-phényl-7oxo-perhydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4RS,7aSR) et de 50 g (lmol) d'hydrate d'hydrazine dans 750 cm3 d'éthanol est portée au reflux pendant une heure et demie. Après concentration de l'éthanol sous pression réduite, le résidu est repris par 400 cm3 de dichlorométhane, et la phase organique est lavée avec de l'eau distillée puis avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée sous pression réduite. On obtient ainsi 100 g (96 %) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-7-hydrazono-4-phényl-perhydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,7aRS) sous forme d'une huile jaune utilisée telle quelle à l'étape suivante.

Etape E A une solution de 100 g (0,265 mol) de %) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-7hydrazono-4-phényl-perhydro-isoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,7aRS) et de 110 cm3 (0,795 mol) de triéthylamine dans 1,4 dm3 de tétrahydrofurane, on ajoute goutte à goutte une solution de 134,5 g (0,53 mol) d'iode dans 600 cm3 de tétrahydrofurane. Après une heure d'agitation à température ambiante, on cencentre sous pression réduite le milieu réactionnel à environ 500 cm3 puis on ajoute 1 dm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec deux fois 800 cm3 d'une solution aqueuse saturée en hydrogénocarbonate de sodium puis avec deux fois 500 cm3 d'une solution aqueuse saturée en thiosulfate de sodium, séchée sur sulfate

de magnésium et concentrée sous pression réduite. Après purification par chromatographie sur gel de silice (230-400 Mesh), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (95-5 en volumes), on obtient 56 g (45 %) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-7-iodo-4-phényl-1,2,3,4,5,7a-hexahydro- isoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,7aRS) sous forme d'une huile visqueuse brune dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 473 (M*) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= -51,8 +/- 1 (c = 0,5 / méthanol) Etape F On ajoute, goutte à goutte à - 40 C, 10,43 cm3 (0,069 mol) de N,N,N',N'- tétraméthyléthylènediamine à une solution de 13,41 g (0,063 mol) de 5-bromobenzothiophène, qui peut être obtenu selon J. Het Chem. 1988, 25,1271-2, dans 100 cm3 de tétrahydrofurane. Après 15 minutes d'agitation à -40 C, on ajoute goutte à goutte, 43,3 cm3 d'une solution 1,6M (0,069 mol) de n-butyllithium dans l'hexane et on agite deux heures entre - 30 et - 40 C. On ajoute ensuite à -30 C 7,86 cm3 (0,069 mol) de triméthylborate et on maintient l'agitation pendant deux heures tout en laissant la température revenir entre 0 et -5 C. La solution rouge obtenue est hydrolysée par addition de 80 cm3 d'une solution aqueuse 5N d'acide chlorhydrique, puis on ajoute 200 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est décantée, lavée par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée sous pression réduite. On obtient ainsi 9,3 g (76 %) d'une poudre jaune contenant très majoritairement l'acide benzothiophène-2boronique sous forme d'anydride trimérique, utilisé tel quel dans la suite de la synthèse, dont les caractéristiques sont les suivantes : - spectre de masse (IE) : M/Z = 480 (M*) - point de fusion = 260-63 C.

Etape G

A une solution de 22,36 g (47 mmol) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-7-iodo- 4-phényl-1,2,3,4,5,7a-hexahydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle- (3aRS, 4SR,7aRS) et de 6,03 g (5,2 mmol) de tétrakis(triphénylphosphine)palladium dans 250 cm3 de 1,2-diméthoxyéthane, on ajoute successivement une solution de 9,3 g (17,3 mmol) d'anhydride trimérique de l'acide benzothiophène-2-boronique dans 100 cm3 de méthanol et 400 cm3 d'une solution aqueuse 2 N de carbonate de sodium, puis on porte au reflux pendant deux heures, et on maintient l'agitation pendant la nuit à température ambiante. Après retour à température voisine de 20 C, le mélange réactionnel est extrait avec 800 cm3 d'acétate d'éthyle, puis la phase organique est lavée avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée sous pression réduite. Le résidu marron obtenu est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (230-400 mesh), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (80-20 en volumes). On obtient ainsi 11,04 g (50 %) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-4-phényl-7-(2- benzothiényl)-1,2,3,4,5,7a-hexahydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle- (3aRS, 4SR,7aRS) sous forme d'une meringue jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : - spectre de masse (IE) : M/Z = 479 (M+) - spectre de R.M.N. 1H (400 MHz, CDC13, d en ppm) : 2,53 (dt, J = 18 et 5 Hz : 1H) ; de 2,80 à 2,95 (mt : 1H) ; 2,84 (AB, J = 10 Hz : 2H) ; 3,17 (t, J = 10 Hz : 1H) ; 3,48 (dd, J = 9,5 et 5 Hz :1H) ; de 3,55 à 3,70 (mt : 4H) ; 3,56 (s : 3H) ; 6,44 (mt : 1H) ; de 7,05 à 7,40 (mt : 13H) ; 6,67 (dd, J = 6,5 et 2 Hz : 1H) ; 7,75 (d large, J = 7Hz : 1H).

- pouvoir rotatoire : la] 31 1 20 = -28,1 +/- 0,7 (c = 0,5 / dichlorométhane) Etape H A une solution de 11 g (23 mmol) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-4-phényl-7- (2-benzothiényl)-1,2,3,4,5,7a-hexahydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle- (3aRS, 4SR,7aRS) dans 100 cm3 de dichlorométhane, maintenue à une température voisine de 0 C, on ajoute goutte à goutte 15 cm3 d'acide trifluorométhanesulfonique.

Le mélange réactionnel est agité pendant deux heures à une température voisine de

20 C puis refroidi à une température voisine de 0 C. On ajoute alors 80 cm3 d'une solution aqueuse saturée en carbonate de potassium. La phase organique est séparée par décantation, lavée par deux fois 50 cm3 d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée sous pression réduite. On obtient ainsi, après lavage à l'oxyde de diisopropyle, 7,96 g (72 %) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2-benzothiényl)-2-benzyl-4,9-éthano-2,3,3a,4,9,9ahexahydro-1H-benzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS) sous forme d'une huile jaune visqueuse, utilisée telle quelle dans la suite de la synthèse, dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 479 (M+) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +22,7 +/- 0,7 (c = 0,5 dichlorométhane).

Etape 1 Une solution de 4,80 g (10 mmol) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2-benzothiényl)- 2-benzyl-4,9-éthano-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyIe-(3aRS,4SR,9SR,9aRS) et de 3,37 cm3 (50 mmol) de chloroformiate de vinyle dans 100 cm3 de dichlorométhane est agitée pendant une nuit à température ambiante. Après concentration sous pression réduite, le résidu est dissout dans 60 cm3 d'une solution N d'acide chlorhydrique dans le méthanol et porté à reflux pendant deux heures. Après refroidissement, on ajoute 100 cm3 d'eau distillée, on amène à pH= 8 par addition d'une solution aqueuse N d'hydroxyde de sodium et on extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium puis concentrée sous pression réduite, on obtient alors 3,84 g (99 %) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2-benzothiényl)-4,9-éthano-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f] isoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme d'une meringue blanche utilisée telle quelle dans la suite de la synthèse, dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 389 (M+) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +21,5 +/- 0,5 (c = 0,5 / dichlorométhane).

Etape J A une solution de 1,93 g (11 mmol) d'acide 2-(2-méthoxyphényl)propènoïque, qui peut être obtenu selon le brevet W098/29390 (exemple 1, étape F), dans 50 cm3 de dichlorométhane contenant 1 cm3 de N,N-diméthylformamide, on ajoute goutte à goutte une solution de 0,96 cm3 (11 mmol) de chlorure d'oxalyle dans 5 cm3 de dichlorométhane. Le mélange réactionnel est encore agité pendant deux heures à une température voisine de 20 C, puis refroidi à une température voisine de 0 C et coulé goutte à goutte dans une solution de 3,84 g (9,9 mmol) de l'énantiomère dextrogyre

du 9-(2-benzothiényl)-4,9-éthano-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo[f]isoindole-3a- carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS) dans 50 cm3 de dichlorométhane et 3,39 cm3 (24 mmol) de triéthylamine en maintenant la température au voisinage de 0 C. Le mélange réactionnel est encore agité pendant une heure à température voisine de 0 C puis pendant soixante dix heures à 20 C et versé dans 100 cm3 d'eau distillée. La phase organique est séparée par décantation, lavée par deux fois 100 cm3 d'eau distillée puis 100 cm3 d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée sous pression réduite. Après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (230-400 mesh), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (60-40 en volumes), on obtient 3,26 g (60 %) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2-benzothiényl)-4,9-éthano-2-[2-(2méthoxyphényl) propènoyl]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo[f]isoindole-3acarboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme d'une meringue blanche dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 549 (M+) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +43,2 +/- 0,8 (c = 0,5 / dichlorométhane).

Etape K Une solution de 4,49 g (8 mmol) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2-benzothiényl)- 4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f] isoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS) est chauffée à reflux,

pendant deux heures, dans 100 cm3 d'éthanol en présence de 20 cm3 d'une solution aqueuse N d'hydroxyde de sodium. Le mélange réactionnel est ensuite concentré sous pression réduite et le résidu dissout dans 50 cm3 d'eau distillée. La phase aqueuse est lavée par 25 cm3d'oxyde de diéthyle, acidifiée par une solution aqueuse N d'acide chlorhydrique jusqu'à un pH voisin de 2, puis extraite par deux fois 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec de l'eau distillée, séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite. La meringue obtenue est purifiée par recristallisations successives dans de l'éthanol aqueux à 50 % puis dans un mélange d'hexane et d'isopropanol (50-50 en volumes). On obtient ainsi 2,55 g (58 %) de l'énantiomère dextrogyre de l'acide 9-(2-benzothiényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-

méthoxyphényl) propènoyl]-2, 3,3 a,4,9,9a-hexahydro-1 H-benzo [f] isoindole-3a- carboxylique-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme de cristaux blancs dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion = 170 C -spectre de masse (IE) : M/Z = 535 (M+) - spectre de RMN1 H (250 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de 373 K, d en ppm) : 1,40 (mt : 1H) ; 1,64 (mt : 1H) ; 1,98 (mt : 1H) ; 2,13 (mt : 1H) ; 3,24 (mt : 3H) ; 3,46 (t large, J = 2,5 Hz : 1H) ; 3,59 (d, J = 13 Hz : 1H) ; 3,72 (s : 3H) ; 4,07 (d large, J = 13 Hz : 1H) ; 5,54 (s : 1H) ; (s : 1H) ; (d large, J = 7,5 Hz : 1H) ; de 6,90 à 7,45 (mt : 9H) ; 7,52 (d large, J = 8,5 Hz : 2H).

- pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +43,5 +/- 1 (c = 0,5 / dichlorométhane).

EXEMPLE 2 Préparation de l'acide 9-(2-benzothiényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl) propènoyl)]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo [f]isoindole-3a-carboxylique-3 (aRS.4SR.9SR.9aRS) En opérant comme à l'exemple 1, mais à partir de 6-phényl-3-oxo-cyclohexène-1carboxylate de méthyle-(R,S), on obtient l'acide 9-(2-benzothiényl)-4,9-éthano-2-[2-

(2-méthoxyphényl) propènoyl] -2, 3, 3 a,4, 9,9 a-hexahydro-1 H-benzo [f] isoindole-3 a-

carboxylique-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme de cristaux blancs dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion = 183 C - spectre de masse (IE) : M/Z = 535 (M+) EXEMPLE3 Préparation de l'énantiomère dextrogyre de l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4.9-

éthano-2-r2-(2-méthoxvphényl)propènovl)l-2.3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f1 isoindole-3a-carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS) Etape A En opérant comme à l'étape G de l'exemple 1, mais à partir de 22,5 g (47,6 mmol) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-7-iodo-4-phényl-1,2,3,4,5,7a-hexahydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,7aRS) et de 2,43 g (2,1 mmol) de tétrakis(triphénylphosphine)palladium dans 400 cm3 de toluène, puis de 10g (52,4 mmol) d'acide 2,4-dichlorophénylboronique dans 200 cm3 de méthanol et de 400 cm3 d'une solution aqueuse 2 N de carbonate de sodium, au reflux pendant deux heures, on obtient, après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (230-400 mesh), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (90-10 en volumes), 20,3 g (87 %) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-4-phényl-7-(2,4- dichlorophényl)-1,2,3,4,5,7a-hexahydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle- (3aRS,4SR,7aRS), sous forme d'une huile jaune très visqueuse dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 492 (M+) - spectre de RMN - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= -41,6 +/-1 (c = 0,5/ méthanol) Etape B En opérant comme à l'étape H de l'exemple 1, mais à partir de 20,15 g (40,9 mmol) de l'énantiomère lévogyre du 2-benzyl-4-phényl-7-(2,4-dichlorophényl)-1,2,3,4,5,7a-

hexahydroisoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,7aRS) dans 30 cm3 de dichlorométhane et 73 cm3 (0,82 mol) d'acide trifluorométhanesulfonique pendant quatre heures au reflux, on obtient, après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (230-400 mesh), en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (60-40 en volumes), 8,8 g (44 %) de l'énantiomère dextrogyre du 2-benzyl-9-(2,4- dichlorophényl)-4,9-éthano-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f]isoindole-3a- carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS) sous forme d'une meringue blanche, dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 492 (M+) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +86,5 +/- 1,5 (c = 0,5/ dichlorométhane).

Etape C En opérant comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de 8,8 g (17,9 mmol) de l'énantiomère dextrogyre du 2-benzyl-9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyle- (3aRS,4SR,9SR,9aRS) et de 2,9 cm3 (44,8 mmol) de chloroformiate de vinyle dans 150 cm3 de dichlorométhane pendant 24 heures à température ambiante, puis en reprenant le concentrat au reflux pendant huit heures dans 180 cm3 d'une solution 4N d'acide chlorhydrique dans le dioxane, on obtient 5,44 g (66 %) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lHbenzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme d'une meringue jaune pâle utilisée telle quelle dans la suite de la synthèse, dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 438 (M+) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +103 +/- 1,7 (c = 0,5 / dichlorométhane).

Etape D En opérant comme à l'étape J de l'exemple 1, mais à partir de 2,4 g (13,5 mmol) d'acide 2-(2-méthoxyphényl)propènoïque et de 1,2 cm3 (13,7 mmol) de chlorure

d'oxalyle dans 25 cm3 de dichlorométhane contenant 1 cm3 de N,Ndiméthylformamide, puis de 5,44 g (12,3 mmol) de l'énantiomère dextrogyre du

9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1 H-benzo[f] isoindole-3a- carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS) dans 50 cm3 de dichlorométhane et 4,2 cm3 (30 mmol) de triéthylamine pendant dix-huit heures à température ambiante, on obtient, après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (230-400 mesh) en éluant avec un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (60-40 en volumes), 5,4 g (67 %) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-

(2-méthoxyphényl)propènoyl]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo[f]isoindole-3a- carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme d'une meringue blanche dont les caractéristiques sont les suivantes : -spectre de masse (IE) : M/Z = 562 (M+) - pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +106,3 +/- 1,7 (c = 0,5 / méthanol).

Etape E En opérant comme à l'étape K de l'exemple 1, mais à partir de 5,4 g (9,6 mmol) de l'énantiomère dextrogyre du 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxy-

phényl)propènoyl]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo[f]isoindole-3a-carboxylate de méthyle-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), au reflux pendant trois heures et demie dans 130 cm 3 d'éthanol et 20 cm3 d'une solution aqueuse normale d'hydroxyde de sodium, on obtient, après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (230-400 mesh) en éluant avec un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (99-1 en volumes) puis recristallisation dans l'acétate d'isopropyle 1,94 g (36 %) de l'énantiomère dextrogyre de l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2- méthoxyphényl)propènoyl]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f]isoindole-3a- carboxylique-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme de cristaux blancs dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion = 194 C -spectre de masse (IE) : M/Z = 548 (M+)

- pouvoir rotatoire : [[alpha]]36520= +126,6 +/- 1,8 (c = 0,5 / méthanol).

EXEMPLE 4 Préparation de l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2méthoxyphényl)propènoyl)]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo [f]isoindole-3acarboxylique- (3aRS,4SE,9SR,9aRS) En opérant comme à l'exemple 3, mais à partir de 6-phényl-3-oxo-cyclohexène-1- carboxylate de méthyle-(R,S), on obtient l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-

2- [2- (2-méthoxyphényl) propènoyl]-2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1 H-benzo[f]isoindole- 3a-carboxylique-(3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme de cristaux blancs dont les caractéristiques sont les suivantes : - point de fusion = 228 C -spectre de masse (IE) : M/Z = 535 (M*) EXEMPLE 5 Evaluation de l'activité farnésyl transférase de composés selon l'invention
L'activité farnésyl transférase est mesurée par la quantité farnésylée de substrat K-ras ou de substrat dérivé du peptide correspondant à sa partie C-terminale, le groupement famésyl étant apporté par le pyrophosphate de farnésyle (FPP).

Précisément, le substrat biotinylé utilisé, représentatif de K-ras : BIOT-((3A)3 -S-K-D-G-(K)6 -S-K-T-K-C-V-I-M, est [3H] farnésylé sur sa cystéine C, par la famésyl transférase en présence de [3H]FPP. Il est ensuite mis en contact de billes PVT*-streptavidine (AMERSHAM), et est quantifié par scintillation de proximité (dosage SPA) entre le tritium et les billes PVT, grâce à l' interaction streptavidine/biotine.

Expérimentalement, la farnésyl transférase purifiée selon le protocole ci-joint, est diluée pour ce dosage à une concentration telle qu'on obtienne une consommation en substrats inférieure à 30 %. Les concentrations molaires finales de chaque substrat sont ajustées à leur Km respectif : 50 nM pour le peptide K ras biotinylé et 120 nM

pour le FPP, amenés sous 20 l dans un volume final de 100 l du mélange réactionnel à base de tampon HEPES 50 mM pH 7.5, MgCl2 5 mM, KC1 40 mM, dithiothréitol 5 mM, Triton X100 0.01 %.

Les inhibiteurs à tester, dissous initialement à 1 mM dans un solvant adéquat (DMF ou DMSO) sont dilués dans le tampon de dosage et sont ajoutés sous forme de 10 l, en triplicate, dans le mélange réactionnel à une concentration 10 fois supérieure à leur concentration finale.

La réaction, effectuée dans des plaques de microtitrations OPTIPLATES 96, est initiée par l'enzyme et dure soixante minutes à 37 C. Elle est stoppée par addition de 150 l de mélange d'un tampon d'arrêt à pH 4 constitué de H3P04 0,2 M, MgCl2 1. 5 mM, BSA 0. 5 % (p/v), azoture de sodium 0,05 % (p/v) contenant 200 g de billes PVT-streptavidine.

Après agitation lente de trente minutes (pour éliminer de la chemiluminescence), les plaques sont lues en [3H]CPM dans un compteur à scintillation pour microplaques TOP COUNT (PACKARD) où elles sont transformées en [3H]DPM à partir d'une gamme d'agent coloré atténuant la scintillation ( quenching ).

Les pourcentages d'inhibition sont calculés par rapport à un témoin sans inhibiteur après soustraction de toutes les valeurs de celle d'un blanc ne contenant que les substrats et le tampon.

Les CI50 sont calculées ou mesurées à partir des inhibitions obtenues à neuf concentrations différentes avec les logiciels Enzfitter ou Grafit#.Les CI.50 figurant dans les résultats, sont la moyenne de mesures et calculs de deux CI50.

Les produits selon l'invention inhibent de 50 % la farnésylation de la protéine Ras à des concentrations comprises entre 0,1 nM et 100 M.

EXEMPLE 6
L'activité des composés selon l'invention peut également être évaluée par la capacité desdits composés à inhiber la croissance en agar de clones issus de lignées tumorales

humaines. Par exemple des cellules de la lignée de carcinome colique humain HCT116, fournies par l'ATCC, sont mises à pousser en monocouche dans un milieu de culture, Dubelcco modifié Eagle, contenant 2 mM de L-glutamine, 200 U/ml de pénicilline, 200 g/ml de streptomycine complémenté par 10 % en volumes de sérum de veau foetal inactivé à la chaleur. Les cellules en croissance exponentielle sont trypsinisées, lavées au PBS et diluées à une concentration finale de 5000 cellules/ml dans du milieu de culture complet. Les inhibiteurs à tester, ou le solvant de contrôle sont alors ajoutés, sous un volume de 50 l, à 2,5 ml de suspension de cellules, préparée précédemment, on ajoute ensuite 0,4 ml d'une solution d'agar, Noble Difco, maintenue à 45 C puis on mélange. Le milieu ainsi obtenu est immédiatement jeté dans des boites de Pétri, maintenu cinq minutes à 4 C puis mis à incuber à 37 C sous une atmosphère de 5 % de COz. Les nombre de clones cellulaires (> 50 cellules) est compté après douze jours d'incubation à 37 C sous une atmosphère de 5 % de CO2.

Chaque inhibiteur est testé en duplicate aux concentrations finales en agar de 10, 1, 0,1 0,01 et 0,001 g/ml. Les résultats sont exprimésen pourcentage d'inhibition de clonogénicité par rapport aux contrôles non traités. Les doses inhibitrices IC50 sont déterminées graphiquement à partir des moyennes semi-logarithmiques des valeurs obtenues pour chaque concentration.

Les produits selon l'invention inhibent de 50 % la croissance des cellules HCT116, porteuses d'une mutation de la protéine Ki-Ras à des concentrations comprises entre
0,1 nM et 10 M.

A titre comparatif, le tableau II ci-dessous indique des résultats obtenus avec des composés de la présente demande et ceux, de structure la plus proche respectivement, décrits dans la demande WO 98/29390.

TABLEAU II

Activité inhibitrice vitro Produit (HCT116) CI ( Présente demande 4 Exemple 1 0.04 bzz0 Exemple 2 0.08 (rac) JL Exemple 3 (+) 0.09 CI ? 1 0'"OH ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Exemple 4 0.1 (rac) WO 98/29390 ckJL ni Exemple 51 (rac) 0.55 1 N 0 CH ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 4fS!#\ Exemple 48 0.58 4-S-1 (rac) ~~~~~O'"0~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ De façon surprenante, les composés des exemples 1 et 2 d'une part et 3 et 4 d'autre part de la présente demande présentent donc des activités cellulaires bien supérieures aux composés structurellement comparables, respectivement les composés des exemples 48 et 51 décrits dans la demande W098/29390.

EXEMPLE 7 L'activité anti-tumorale des composés selon l'invention peut également être mise en évidence par essai in vivo chez la souris, selon les tests et méthodologies 7habituellement utilisées (Corbett et al. Cancer Research, 42,1707-1715 (1982) ; Corbett et al. Cancer Treatment report, 66,1187-1200 (1982) ; Corbett et al. 40, 2660-2680, (1977) ).

On étudie l'influence des composés selon l'invention administrés chez des souris sur la croissance de carcinomes d'origine humaine greffés en sous-cutané chez ces souris.

Au jour 0 de l'expérience, les souris reçoivent un fragment tumoral (30-60 mg) sous la peau en bilatéral à l'aide d'un trocart. L'implantation bilatérale des tumeurs assure un poids tumoral par souris plus uniforme et permet ainsi de réduire le nombre d'animaux par groupe. Les souris sont ensuite réparties dans les différents groupes traités et non traités.

Le produit est mis en suspension dans une solution aqueuse à des concentrations allant de 0,01 à 1200 mg/ml, correspondant à des doses de 0,1 à 10000 mg/kg.

Les traitements ou leur excipient éventuel sont administrés tous les jours par voie orale, sous un volume maximal de 0. 2 ml, la durée d'administration dépendant du temps de doublement de la tumeur.

Les tumeurs sont mesurées 2 à 3 fois par semaine, à l'aide d'un pied à coulisse, selon deux mesures en mm qui sont ensuite converties en poids tumoral selon la formule suivante : poids tumoral (mg) = Longueur (mm) x largeur (mm2)
2
Un produit actif est un produit qui permet de limiter la croissance de la tumeur après son administration.

EXEMPLE 8 EXEMPLE A On prépare, selon la technique habituelle, des gélules dosées à 50 mg de produit actif ayant la composition suivante : - Produit actif ........................................................................ 50 mg - Cellulose............................................................................... 18 mg - Lactose.................................................................................. 55 mg - Silice colloïdale ...................................................................... 1 mg - Carboxyméthylamidon sodique............................................. 10 mg - Talc....................................................................................... 10 mg - Stéarate de magnésium........................................................ 1 mg EXEMPLE B On prépare selon la technique habituelle des comprimés dosés à 50 mg de produit actif ayant la composition suivante : - Produit actif....................................................................... 50 mg - Lactose.................................................................................. 104 mg - Cellulose............................................................................... 40 mg - Polyvidone............................................................................. 10 mg - Carboxyméthylamidon sodique............................................. 22 mg - Talc...................................................................................... 10 mg - Stéarate de magnésium........................................................ 2 mg - Silice colloïdale...................................................................... 2 mg - Mélange d'hydroxyméthylcellulose, glycérine, oxyde de titane (72-3,5-24,5) q. s.p. 1 comprimé pelliculé terminé à 245 mg

EXEMPLE C On prépare une solution injectable contenant 50 mg de produit actif ayant la composition suivante : - Produit actif........................................................................ 50 mg - Acide benzoïque.................................................................... 80 mg
Alcool benzylique.................................................................. 0,06 ml - Benzoate de sodium............................................................. 80 mg - Ethanol à 95 %...................................................................... 0,4 ml - Hydroxyde de sodium............................................................ 24 mg - Propylène glycol.................................................................... 1,6 ml

- Eau..........................................................................q.s.p. 4 ml

Claims

REVENDICATIONS 1 - Composés de formule générale 1 dans laquelle: - Ar représente # un radical phényle dihalogéné de formule générale : dont l'un quelconque des atomes de carbone est attaché par une simple liaison au noyau benzoperhydroisoindole, ou # un radical phényle dihalogéné de formule : attaché en a par une simple liaison au noyau benzoperhydroisoindole, pour lesquels X et Y représentent indépendamment un atome d'halogène, choisi parmi les atomes de chlore, fluor ou brome, ou # un radical benzothiényle <Desc/Clms Page number 49> attaché par une simple liaison au noyau benzoperhydroisoindole par l'un quelconque des atomes de carbone ; R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone, en chaîne droite ou ramifiée, sous forme racémique ou leurs isomères optiques, ainsi que leurs sels.

2 - Composés selon la revendication 1 pour lesquels Ar représente un radical :

attaché par l'atome de carbone * au noyau benzoperhydroisoindole par une simple liaison, et X et Y représentent indépendamment un atome d'halogène, ou un radical

attaché par l'atome de carbone en position 2 au noyau benzoperhydroisoindole par une simple liaison,

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et R représente un atome d'hydrogène ; sous forme racémique ou leurs isomères optiques, ainsi que leurs sels.
3 - Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes pour lesquels X et Y représentent chacun un atome de chlore.
4 - Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes choisis individuellement parmi : l'acide 9-(benzothién-2-yl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-lH-benzo[f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), l'acide 9-(2,4-dichlorophényl)-4,9-éthano-2-[2-(2-méthoxyphényl)propènoyl)]- 2,3,3a,4,9,9a-hexahydro-1H-benzo [f]isoindole-3a-carboxylique- (3aRS,4SR,9SR,9aRS), sous forme racémique ou leurs isomères optiques, ainsi que leurs sels.
5 - Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes pour lesquels lesdits composés se présentent sous forme dextrogyre.
6 - Procédé de préparation d'un composé de formule générale (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 par action d'un acide de formule générale :

de son ester méthylique ou d'un dérivé de cet acide tel qu'un halogénure ou l'anhydride, sur un produit de formule générale :

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dans laquelle : # Ar est défini selon la formule générale I, # R représente un radical alkyle, de préférence méthyle, et G, représente un atome d'hydrogène 7 - Procédé de préparation d'un composé de formule générale (III) selon la revendication 6

dans laquelle : # Ar est défini selon la formule générale I, R représente un radical alkyle, et G, représente un radical benzyle, à partir de composés de formule générale (V) :

dans laquelle R et G1 sont tels que définis précédemment via la formation d'un intermédiaire de formule générale (IX)

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dans laquelle R, Ar et G, sont tels que définis précédemment dont la transformation par cyclisation intramoléculaire de type Friedl-Crafts conduit au produit (III).
8 - Composé intermédiaire selon la revendication 7 caractérisé en ce qu'il est représenté par la formule générale (IX)

dans laquelle R et Ar sont tels que définis en revendication 1, G, représente un radical benzyle sous forme racémique ainsi que leurs isomères optiques.
9 - Procédé de préparation d'un composé de formule générale (IX) selon la revendication 7 caractérisé en ce que l'on procède sur un composé de formule générale (V)

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dans laquelle R et G, sont définis comme précédemment, à sa transformation, en position 7, soit en dérivé iodoéthylènique, par une réaction de Barton, soit en triflate d'énol puis à une réaction de couplage au palladium, dite réaction de Suzuki avec un acide aryle boronique ou avec l'anhydride trimérique de l'acide arylboronique, dite réaction de Stille avec un arylstannane.
10 - Procédé de préparation d'un composé de formule générale (III) selon la revendication 7, dans lequel Ar est défini comme en revendication I, par action d'un hydrocarbure aromatique ou hétérocyclique Ar-H, selon des réactions de cyclisation intermoléculaire puis intramoléculaire de type Friedel-Crafts, sur un composé de formule générale (V) dans laquelle G1 représente un radical benzyle et R représente un radical alcoyle contenant t à 3 atomes de carbone dans un solvant organique en présence d'un excès d'acide fort ou d'un acide de Lewis.

11 - Procédé de préparation d'un produit de formule générale (III) selon les revendications 7 et 10

dans laquelle Ar est tel que défini en revendication I, GI représente un radical benzyle et R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle contenant 1à 3 atomes de carbone, par cyclisation intramoléculaire de type Friedel-Crafts par action de l'acide trifluorométhanesulfonique sur un produit de formule générale (IV) :

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dans laquelle : - Ar est défini comme précédemment, - G, représente un radical benzyle, - R représente un radical alcoyle contenant 1à3 atomes de carbone suivie du remplacement du groupe G1 par un atome d'hydrogène soit par hydrogénolyse puis éventuellement du remplacement de l'atome d'hydrogène par un radical tert-butoxycarbonyle, par action de l'anhydride tert-butoxycarbonyle dans un solvant organique, ou par un radical benzyloxycarbonyle, par action du chlorure de benzyloxycarbonyle, soit par action d'un chloroformiate d'alcoyle, suivie de l'hydrolyse acide du carbamate intermédiairement formé, éventuellement suivie de la saponification du produit obtenu.
12 - Procédé de préparation du composé de formule générale (IV) selon la revendication II à partir d'un composé de formule générale (V)

dans laquelle R et G, sont définis comme en revendication II soit par action d'un dérivé organomagnésien de formule générale Ar-Mg-X dans laquelle Ar est tel que défini précédemment et X représente un atome d'halogène, en

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présence de chlorure de cérium (III) anhydre dans un solvant organique à une température comprise entre 0 C et le reflux du mélange réactionnel, soit par action d'un organolithien de formule générale Ar-Li dans laquelle Ar est tel que défini comme précédemment en opérant dans un solvant organique, à une température comprise entre -78 et -20 C.
13 - Procédé de préparation d'un composé de formule générale (V) selon la revendication 12 dans laquelle G, représente un radical benzyle et R représente un radical alcoyle contenant 1 à 3 atomes de carbone, par action d'une N-trialcoylsilylméthyl-N-alcoxyméthyl- amine portant un groupement protecteur de la fonction amine sur un dérivé d'une cyclohexènone de formule générale (VI) :

dans laquelle R représente un radical alcoyle contenant 1 à 3 atomes de carbone.
14 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient au moins un produit selon l'une des revendications précédentes 1 à 5 en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants pharmaceutiquement acceptables qu'ils soient inertes ou biologiquement actifs.
15 - Utilisation des composés selon l'une des revendications précédentes 1 à 5 pour la préparation de compositions pharmaceutiques utiles pour inhiber la protéine farnésyle transférase.

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16 - Utilisation des composés selon l'une des revendications 1 à 5 pour la préparation de compositions pharmaceutiques pour le traitement des maladies liées à des proliférations cellulaires malignes ou bégnines, des cellules de divers tissus et/ou organes, comprenant les tissus musculaires, osseux ou conjonctifs, la peau, le cerveau, les poumons, les organes sexuels, les systèmes lymhatiques ou rénaux, les cellules mammaires ou sanguines, le foie, l'appareil digestif, le pancréas et les glandes thyroïdes ou adrénales et incluant les pathologies suivantes : le psoriasis, la résténose, les tumeurs solides, le sarcome de Kaposi, les carcinomes, le cholangiocarcinome, le choriocarcinome, le neuroblastome, la tumeur de Wilms, la maladie de Hodgkin, les mélanomes, les tératocarcinomes, les gliomes, les myélomes multiples, les leucémies lymphocitaires chroniques, les lymphomes granulocitaires aigus ou chroniques, et les cancers tels que les cancers du pancréas, du colon, du poumon, de l'ovaire, du sein, du cerveau, de la prostate, du foie, de l'estomac, de la vessie ou des testicules.

17 - Utilisation des composés de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 5 pour la préparation de compositions pharmaceutiques utiles pour le traitement des maladies liées à des proliférations cellulaires par inhibition de la farnésyle transférase 18 - Utilisation des composés de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 5 pour la préparation de compositions pharmaceutiques pour le traitement de cancers.
19 - Utilisation des composés de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 5 pour la préparation de compositions pharmaceutiques pour le traitement du cancer du colon.
20 - Utilisation des composés de formule générale (I) selon l'une des revendications 1 à 5 pour la préparation de compositions pharmaceutiques pour le traitement du cancer du pancréas.

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21 - Associations d'un produit selon l'une des revendications précédentes 1 à 5 avec un ou plusieurs composés compatibles et pharmacologiquement actifs et/ou avec un traitement radiothérapique.
22 - Associations selon la revendication 21 caractérisées en ce que lesdits composés actifs sont des dérivés des taxoides.
23 - Associations selon la revendication 21 caractérisées en ce que lesdits composés actifs sont des dérivés des inhibiteurs de topoisomérases.