FR2778527A1 - Producing tomato, cereal or oilseed plants, especially maize, oilseed rape, soya or sunflower plants, from which tocopherols can be extracted and purified - Google Patents

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Abstract

Production of tocopherols in genetically modified plants comprises cultivating plants that have been genetically modified to overexpress hydroxyphenyl pyruvate dioxygenase (HPPD) in their chloroplasts

Description

l 2778527 Nouvelle méthode de production de tocophérols dans les plantes, 2778527 the new method of production of tocopherols in plants

et plantes obtenues La présente invention concerne une nouvelle méthode de production de tocophérols and plants obtained The present invention relates to a novel method for producing tocopherols

dans les plantes, et les plantes obtenues à forte teneur en tocophérols. in plants, and the plants obtained high tocopherol content.

) La vitamine E et les tocophérols sont des composants essentiels dans les organismes vivants, en particulier végétaux ou animaux, notamment par leurs propriétés antioxydantes. ) Vitamin E and tocopherols are essential components in living organisms, particularly plants or animals, including their antioxidant properties. Ils sont d'ailleurs couramment employés en alimentation humaine ou animale, de même qu'en cosmétique. They are also widely used in food or feed, as well as in cosmetics. Il est aujourd'hui connu que le niveau d'expression de tocophérols, en particulier de vitamine E dans les plantes, peut être modulé et contrôle err contrôlant l'expression d'une enzyme impliquée dans la biosynthèse des tocophérols, la para hydroxyphényl pyruvatc It is now known that the expression level of tocopherols, in particular vitamin E in plants, can be modulated and control err controlling the expression of an enzyme involved in the biosynthesis of Tocopherols, para hydroxyphenyl pyruvatc

dioxygénase, ci-après HPPD (WO 97/27285). dioxygenase, hereinafter HPPD (WO 97/27285).

Cette HPPD se trouve dans de nombreux organismes vivants, unicellulaires, en particulier bactériens, ou pluricellulaires, en particulier dans les plantes o elle est exprimée dans le cytoplasme cellulaire pour produire de l'homogentisate à partir de l'acide para hydroxyphényl pyruvique (WO 96/38567). This HPPD is in many living, single-celled organisms, in particular bacterial or multicellular, particularly in plants where it is expressed in the cell cytoplasm to produce homogentisate from para-hydroxyphenyl pyruvic acid (WO 96 / 38567). Il a d'ailleurs été constaté que les enzymes de plantes étaient des enzymes cytoplasmiques, ne comprenant pas de séquence de type " peptide de transit >> susceptibles de conduire à l'expression d'une protéine mature dans les It has also been found that plant enzymes were cytoplasmic enzymes, not including type sequence "transit peptide >> likely to lead to the expression of a mature protein in

chloroplastes (Garcia I. & al. (1997) Biochem. J. 325:761-769). chloroplasts (Garcia I. et al (1997) Biochem J. 325:.. 761-769).

L'HPPD est par ailleurs la cible de nombreux herbicides, et il a été constaté que sa surexpression dans des plantes généticalement modifiées par l'intégration dans le génome desdites plantes de gènes codant pour une HPPD sous le contrôle d'éléments de régulation appropriés pour l'expression de ladite HPPD, permettait d'obtenir une tolérance améliorée The HPPD is also the target of many herbicides, and it was found that its overexpression in plants généticalement modified by integration into the genome of said plant gene encoding an HPPD under the appropriate regulatory elements for control expression of said HPPD possible to obtain improved tolerance

aux herbicides inhibiteurs de cette cnzyme (WO 96/38567). to herbicides that inhibit this cnzyme (WO 96/38567).

Dans les cellules végétales transformées avec les gènes ci-dessus, il va y avoir une activité HPPD supérieure à cclle normalement trouvée dans une ccllulc végétale du même type non transformée. In plant cells transformed with the genes above, there will be an HPPD activity than cclle normally found in a plant of the same type ccllulc untransformed. Cette activité supplémentaire va entraîner la production d'une plus grande quantité d'homogentisatc dans la cellule. This additional activity will result in the production of a greater amount of homogentisatc in the cell. Cet homogentisate a deux devenir possibles dans une cellule végétale. This Homogentisate two become possible in a plant cell. Il peut soit être dégradé dans le cytoplasme, soit être transporté dans le chloroplaste pour être utilisé comme précurseur de molécules indispensables au bon fonctionnement de l'appareil chloroplastiquc. It can either be degraded in the cytoplasm or be transported into the chloroplast to be used as precursor molecules essential to the proper functioning of the chloroplastiquc device. Toutefois, si cette surproduction d'homogentisate a lieu dans le cytoplasme une grande quantité de cet homogentisate supplémentaire sera dégradé via l'homogentisate dioxygénase, limitant fortement la possilité d'augmenter de manière substantielle la quantité de tocophérols et de vitamine E produits However, if the overproduction of Homogentisate takes place in the cytoplasm a large amount of this additional Homogentisate will be degraded via Homogentisate dioxygenase, greatly limiting the possilité to substantially increase the amount of tocopherols and vitamin E products

dans la plante transformée. in the transformed plant.

Bien que l'enzyme naturelle soit une enzyme cytoplasmique, on a maintenant trouvé que le fait d'exprimer une HPPD dans les chloroplastes des plantes permettaient d'augmenter substanticllemcnt la teneur en tocophèrols et en vitamine E desdites plantes transformées, tant vis à vis des plantes non transformées (IIPPD native uniquement) que vis à vis des plantes transformées assurant une surexpression d'"HPPD dans le cytoplasme uniquement, décrites Although the natural enzyme is a cytoplasmic enzyme, it has now been found that the fact of expressing HPPD in chloroplast of plants allowed to increase substanticllemcnt the content of tocopherols and vitamin E of said transformed plants, both with respect to non-transformed plants (native IIPPD only) as with respect to the transformed plants ensuring overexpression of "HPPD in the cytoplasm only, described

dans l'état de la technique (WO 97/27285). in the prior art (WO 97/27285).

La présente invention concerne donc nouveau procédé de production de tocophérols dans des plantes génétiquement modifiées, lequel procédé consiste à cultiver une plante génétiquement modifiée appropriée pour effectuer la surexpression d'une HPPD dans les The present invention therefore relates to new tocopherols production process in genetically modified plants, which method comprises culturing a genetically modified plant suitable for performing the overexpression of an HPPD in

chloroplastes des cellules végétales des dites plantes génétiquement modifiées. chloroplasts of plant cells of said genetically modified plants.

L'HPPD sureprmimée dans les chloroplastes selon l'invention peut être de différentes origines, notamment d'origine bactérienne ou de plantes, en particulier de Pseudomonas sp, d'Arahidopsis, de carotte, de blé, etc. The HPPD sureprmimée in chloroplasts of the invention can be of various origins, including bacterial or plants, especially Pseudomonas sp, of Arahidopsis, carrot, wheat, etc. Plusieurs séquences protéiques d'HPPD et les séquences nucléotidiques codant pour lesdites séquences protéiques, les moyens de les isoler sont décrites dans la littérature, notamment dans la demande de brevet WO 96//38567, dont le contenu est incorporé ici par référence. Several protein sequence of HPPD and the nucleotide sequences encoding said protein sequence, the means for isolating are described in the literature, in particular in patent application WO 96 // 38567, whose contents are incorporated herein by reference. Il peut également s'agir d'HPPD ayant subi au moins une mutation dans leur région C-terminale, telles que décrites dans la demande de brevet FR It can also be HPPD having undergone at least one mutation in their C-terminal region, as described in the patent application FR

97 14264, dont le contenu est incorporé ici par référence. 97 14264, which is incorporated herein by reference.

Selon un mode préférentiel de réalisation de l'invention, I'HPPD peut être surexprimée dans les chloroplastes par la surexpression dans le cytoplasme d'une protéine de fusion comprenant un peptide de transit lié à l'HPPD à son extrémité N-terminale (peptidc dc According to a preferred embodiment of the invention, I'HPPD can be overexpressed in chloroplasts by overexpression in the cytoplasm of a fusion protein comprising a transit peptide linked to the HPPD at its N-terminus (peptidc dc

transit/HPPD). Transit / HPPD).

Les peptides de transit utiles selon l'invention et leurs séquences codantes comprennent tous Ics peptides de transit de précurseurs cytoplasmiques de protéines ou de polypeptides à localisation plastidiale de plantes, préférentiellement chloroplastiques. Useful transit peptides according to the invention and their coding sequences include all Ics cytoplasmic precursors transit peptides of proteins or polypeptides of plastid localization in plants, preferably chloroplast. Il s'agit notamment du peptide de transit dc la petite sous unité de la ribulose-l, 5-bisphosphate carboxylase/oxigénase ou de la protéine de liaison chlorophyllienne a/b décrits avec leurs séquences codantes dans le brevets UIS 5,728,925, dont le contenu est incorporé ici par refércnce. These include transit peptide dc the small subunit of ribulose-l, 5-bisphosphate carboxylase / oxigenase or binding protein chlorophyll a / b with their coding sequences described in the UIS Patent 5,728,925, the contents of is incorporated herein by refércnce. Il s'agit également du peptide de transit de l'EPSPS de plante décrit dans le brevet It is also the transit peptide of the plant EPSPS described in patent

US 4,940,835, dont le contenu est incorporé ici par référence. US 4,940,835, which is incorporated herein by reference.

Selon un mode préférentiel de réalisation de l'invention, le peptide de transit est un peptide de transit multiple constitué par un premier peptide de transit un d'un précurseur cytoplasmique d'une protéine ou d'un polypeptide à localisation plastidiale, une partie de la partie mature N terminale d'une protéine ou d'un polypeptide à localisation plastidiale, puis un deuxième peptide de transit d'un précurseur cytoplasmique d'une protéine ou d'un polypeptide à localisation plastidiale. According to a preferred embodiment of the invention, the transit peptide is a multiple transit peptide constituted by a first transit peptide of a cytoplasmic precursor of a protein or polypeptide is located in plastids, a portion of the N-terminal mature part of a protein or polypeptide is located in plastids, and then a second transit peptide of a cytoplasmic precursor of a protein or polypeptide is located in plastids. De manière préférentielle, le premier et deuxième peptide de transit sont différents. Preferably, the first and second transit peptide are different. Par ditffrent, on entend selon l'invention des peptides de transit provenant de précurseurs cytoplasmiques de protéines ou polypeptides à localisation lo plastidiale différents, ou des peptides de transit provenant de mêmes précurseurs de protéines ou polypeptides, mais de plantes différentes. Ditffrent by means of the invention transit peptides from cytoplasmic precursors of proteins or polypeptides plastid localization lo different, or transit peptides from the same precursor proteins or polypeptides, but different plant. Les peptides de transit multiples selon l'invention sont notamment décrits dans le brevet US 5, 633,448 dont le contenu est incorporé ici par référence. Peptides multiple transit according to the invention are described in US Patent No. 5, 633.448 of which is incorporated herein by reference. De manière préférentielle, le peptide de transit multiple est le peptide de transit optimisé décrit avec sa séquence codante dans le brevet US 5,633,448, comprenant le peptide de transit de la petite sous unité RuBisCO de tournesol, une séquence de 22 acides aminés de la petite sous unité de la RuBisCO de maiïs et le peptide de transit de la petite sous unité de la RuBisCO de maïs. Preferably, the multiple transit peptide is the optimized transit peptide described with its coding sequence in patent 5,633,448, comprising the transit peptide of small subunit RUBISCO unit sunflower, a sequence of 22 amino acids of the small subunit unit RuBisCO mAIIS and the transit peptide of the small subunit of maize RuBisCO. La séquence d'ADN codant pour le peptide de transit optimisé associée à la séquence codant pour une HPPD de Pxeudomonas est représentée par l'identificateur de séquence nl (SEQ ID NO 1), et notamment décrite dans la demande de brevet WO 96/38567. The DNA sequence encoding the optimized transit peptide associated with the sequence encoding an HPPD Pxeudomonas nl is represented by the sequence identifier (SEQ ID NO 1) and in particular described in patent application WO 96/38567 . Les gènes chimères comprenant unetelle séquence, les vecteurs de transformation des plantes, les cellules végétales transformées les contenant et les plantes régénérées à partir de ces cellules transformées sont décrits dans la demande de brevet WO 96/38567. Chimeric genes comprising Doe sequence, plant transformation vectors, transformed plant cells containing them and plants regenerated from such transformed cells are described in the patent application WO 96/38567. Il est entendu que la transformation et la régénération des plantes selon un mode particulier préférentiel dépendra de la plante sélectionnée dans laquelle on souhaite surexprimmer l'HPPD dans les chloroplastes. It is understood that the transformation and regeneration of plants according to a preferred particular embodiment will depend on the plant selected in which it is desired surexprimmer HPPD in chloroplast. Il est entendu que les techniques de transformation et de régénération des plantes est maintenant bien connue de l'homme du métier. It is understood that the techniques of transformation and regeneration of plants is now well known to those skilled in the art. Ces transformations sont effectuées en particulier par l'introduction de particules accélérées enrobées d'ADN dans les cellules végétales, par l'introduction de l'ADN dans les cellules végétales au moyen d'une agitation du milieu contenant les deux en présence d'aiguilles, par les techniques d'électroporation ou encore au moyen de cellules d'Agrobactérium appropriées. These transformations are carried out in particular by the introduction of accelerated particles coated with DNA into plant cells, by introducing the DNA into plant cells using a medium containing the two stirring in the presence of needles , by electroporation techniques or by means of appropriate Agrobacterium cells. Ces techniques sont notamment décrites dans les brevets et demandes de brevet suivants: US 4,459,355, US 4,536,475, US 5,464,763, US 5,177,010, US These techniques are in particular described in the following patents and patent applications: US 4,459,355, US 4,536,475, US 5,464,763, US 5,177,010, US

,187,073, EP 267,159, EP 604 662, EP 672 752, US 4,945,050, US 5,036,006, US , 187.073, EP 267.159, EP 604 662, EP 672 752, US 4,945,050, US 5,036,006, US

,100,792, US 5,371,014, US 5,478,744, US 5,179,022, US 5,565,346, US 5, 484,956, US , 100.792, US 5,371,014, US 5,478,744, US 5,179,022, US 5,565,346, US 5, 484.956, US

,508,468, US 5,538,877, US 5,554,798, US 5,489,520, US 5,510,318, US 5, 204,253, US , 508.468, US 5,538,877, US 5,554,798, US 5,489,520, US 5,510,318, US 5, 204.253, US

,405,765, EP 270 615. EP 442 174, EP 486 233, EP 486 234, EP 539 563, EP 674 725, WO , 405.765, EP 270 615. EP 442 174, EP 486 233, EP 486 234, EP 539 563, EP 674 725, WO

91/02071 et WO 95/06128. 91/02071 and WO 95/06128.

Les plantes génétiquement modifiées appropriées pour effectuer une surcxpression de l'HPPD dans les chloroplastes sont en particulier décrites dans la demande de brevet WO Genetically modified plants suitable for performing surcxpression HPPD in chloroplast are in particular described in patent application WO

96/38567, dont le contenu est incorporé ici par référence. 96/38567, which is incorporated herein by reference.

Sclon un autre mode préférentiel de réalisation de l'invention, I'HPPD peut être 0o surexprimée dans les chloroplastes en introduisant dans le génome chloroplastique desdites plantes un gène codant pour une HPPD sous le contrôle d'éléments de régulation fonctionnels dans les chloroplastes. Sclon another preferred embodiment of the invention, can be I'HPPD 0o overexpressed in chloroplasts by introducing into the chloroplast genome of said plant a gene encoding an HPPD under the control of regulatory elements functional in chloroplasts. Les techniques d'insertion de gènes dans les chloroplastes, comme les éléments de régulations appropriés à l'expression desdits gènes dans les chloroplastes sont bien connus de l'homme du métier, et notamment décrits dans les brevets et demandes de The techniques of inserting genes into chloroplasts, as appropriate regulatory elements for the expression of said genes in chloroplasts are well known in the art, and are described in the patents and patent applications

brevet suivants: US 5,693,507, US 5,451,513 et WO 97/32977. following patent: US 5,693,507, US 5,451,513 and WO 97/32977.

Selon un mode de réalisation préférentiel de l'invention, les plantes appropriées pour le procédé selon l'invention sont choisies parmi les plantes monocotylédones ou dicotylédones, en particulier potagères ou de grande culture, notamment choisies parmi les tomates, les céréales, les plantes oléagineuses, et plus particulièrement parmi le maïs, le colza, According to a preferred embodiment of the invention, the appropriate plants for the process according to the invention are selected from monocotyledonous or dicotyledonous plants, in particular vegetables or field crops, in particular chosen from tomatoes, cereals, oilseeds , and more particularly from corn, rapeseed,

le soja, le tournesol. soybean, sunflower.

Certaines plantes peuvent être modifiées de manière à avoir une teneur en huiles spécifiques différentes de celle trouvées naturellement dans les plantes, de manière à obtenir des plantes à plus haute valeur ajoutée ct à modifier leurs qualités nutritionnelles. Some plants can be modified to have a different oil content specific to that found naturally in plants, to obtain plants with higher added value ct to change their nutritional qualities. Il s'agit notamment de produire des maïs à plus forte teneur en huiles, ou encore des tournesols, des sojas ou des colzas enrichis en acides gras essentiels à santé humaine ou animale. These include the production of corn with higher oil content, or sunflowers, soybeans or rapeseed rich in essential fatty acids to human or animal health. Ces plantes à teneur en huiles modifiées peuvent être obtenues par des méthodes conventionnelles de croisement et de sélection, ou encore par introduction dans le génome desdites plantes d'un ou plusieurs gênes hétérologues dont l'expression permet de modifier le contenu en huiles tant qualitatif que quantitatif. These plants with modified oil content can be obtained by conventional methods of breeding and selection, or by introducing into the genome of said plants one or more heterologous genes whose expression can change the content as qualitative oils quantitative. De telles plantes transformées sont notamment décrites dans les brevets suivants: US 5,378,758, US 5,434,283, US5,476,524, US 5,545,821, US 5,602,311, US 5,625,130, US 5,638,637, US 5,668,299 ou US 5,710,366. Such transformed plants are especially described in the following patents: US 5,378,758, US 5,434,283, US5,476,524, US 5,545,821, US 5,602,311, US 5,625,130, US 5,638,637, US 5,668,299 and US 5,710,366. Les gènes codants pour des protéines susceptibles de modifier le contenu en huiles des plantes, et les plantes transformées les contenant sont notamment décrits dans les brevets et demandes de brevet suivants: WO The genes coding for proteins that may affect the content of plant oils, and containing the transformed plants are described in the following patents and patent applications: WO

98/06862, WO 98/05758, WO 97/48793, WO 97/16559, JP 9 065 882, WO 97/12047, WO 98/06862, WO 98/05758, WO 97/48793, WO 97/16559, JP 9065882, WO 97/12047, WO

97/07222, WO 96/31609, WO 96/24674, WO 96/02652, JP 6 090 766, WO 93/11245, WO 97/07222, WO 96/31609, WO 96/24674, WO 96/02652, JP 6090766, WO 93/11245, WO

91/18985, WO 91/13972, US 5,706,603, US 5,704,160, US 5,689,050, US 5, 663,068, US 91/18985, WO 91/13972, US 5,706,603, US 5,704,160, US 5,689,050, US 5, 663.068, US

5,639,790, US 5,614,393, US 5,589,619, US 5,530,186, US 5,512,482, US 5, 500,361, US 5,639,790, US 5,614,393, US 5,589,619, US 5,530,186, US 5,512,482, US 5, 500.361, US

5.498,544 ou US 5,254,801. 5498.544 or US 5,254,801.

Pour des plantes modifiées de manière à produire des teneurs en huiles à haute valeur ajoutée (tant par la qualité que par la quantité des huiles produites) il cst nécessaire de protéger efficacement les huiles produites, en particulier contre leur oxydation qui les rendraient inexploitatbles ct/ou leur ferait pedre toute valeur. For plants modified to produce contents with high added value oils (for the quality that the amount of oil produced) it cst necessary to effectively protect the produced oils, particularly against their oxidation that would make inexploitatbles ct / or would their pedre any value. Il a été ainsi constaté pour certains maïs modifiés de manière à produire de grandes quantités d'huiles, tels que ceux décrits dans le brevet US 5,704,160, un phénomène d'oxydation accéléré desdites huiles et de rancissement, qui rendaient les grains de ces maïs inexploitables, en particulier pour l'alimentation animale. It has been well recognized for some corn modified to produce large amounts of oils, such as those described in US patent 5,704,160, an oxidation phenomenon accelerated and said oils from rancidity, which made the grains of these unusable corn , in particular for animal feed. En augmentant la production de tocophérols et de vitamine E dans de telles plantes modifiées, il est possible de protéger lesdites huiles produites contre les By increasing the production of tocopherols and vitamin E in such modified plants, it is possible to protect said oils produced against the

phénomènes d'oxydation. oxidation phenomena.

Selon un mode préférentiel de réalisation de l'invention, la plante dans laquelle IHPPD est surexprimée dans les chloroplastes est une plante à teneur en huiles modifiée telle que According to a preferred embodiment of the invention, the plant in which IHPPD is overexpressed in chloroplasts is a plant with altered oil content as

décrite ci-dessus. described above.

Le gène codant pour une protéine de fusion peptide de transit/HPPD, ou pour l'expression directe d'HPPD dans les chloroplastes peut être introduit dans les dites plantes soit directement en employant les techniques usuelles du génie génétique, notamment décrites The gene encoding a fusion protein transit peptide / HPPD, or for direct expression of HPPD in chloroplast can be introduced into the said plants either directly using the usual techniques of genetic engineering, especially described

ci-dessus, soit par croisement et sélection avec une plante mère comprenant ledit gène. above, or by crossing and selection with a parent plant comprising said gene.

Dans le cas de plantes modifiées par les techniques de génie génétique de manière à exprimer une ou plusieurs protéines modifiant son contenu cn huiles, tant qualitatif que quantitatif, le ou les gènes codant pour lesdites protéines modifiant le contenu en huiles peuvent être introduits dans le génome de ladite plante simultanément avec le gène codant pour une protéine de fusion peptide de transit/HPPD. In the case of plants modified by genetic engineering techniques so as to express one or more proteins amending its contents cn oils, both qualitatively and quantitatively, the gene or genes encoding said proteins modifying the content of oils can be introduced into the genome said plant simultaneously with the gene encoding a fusion protein transit peptide / HPPD. Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, les gènes seront introduits simultanément et associés dans un même vecteur, en particulier un même plasmide, de manière que les gènes soient toujours associés dans le génomc de la plante transformée. According to a particular embodiment of the invention, genes will be introduced simultaneously and combined in the same vector, in particular a same plasmid, so that the genes are always associated in the génomc of the transformed plant. Dans ce cas, non seulement le gène codant pour la protéine de fusion peptide de transit/HPPD permettra de préserver de l'oxydation les huiles de la plante obtenue, et donc sa valeur, mais également du fait de ses propriétés de tolérance à certains herbicides décrites dans la demande de brevet WO 96/38567, il facilitera la sélection des In this case, not only the gene encoding the fusion protein transit peptide / HPPD will preserve the oxidation oils from the plant obtained, and therefore its value, but also because of its tolerance properties to certain herbicides described in the patent application WO 96/38567, it will facilitate the selection of

plantes à haute valeur ajoutée dans les programmes de sélection des semenciers. plants with high added value in seed breeding programs.

Après culture des dites plantes génétiquement modifiées de manière à surexprimer HPPD dans les chloroplastes, les tocophérols et la vitamine E peuvent être extraits et purifiés, totalcment ou en partie, selon les méthodes usuelles, tant des feuilles que des graines des plantes cultivées. After growing said genetically modified plants overexpress to HPPD in chloroplast, tocopherols and vitamin E may be extracted and purified, totalcment or in part, according to the usual methods, both sheets as seeds of crop plants. Dans le cas des plantes modifiées de manière à modifier leur teneur en huiles, les tocophérols et la vitamine E peuvent être extraits simultanément avec les huiles des dites plantes cultivées, assurant simultanément la préservation des dites huiles contre les phénomènes d'oxydation et l'enrichissement des dites huiles avec des molécules à hautes For plants modified to change their oil content, tocopherols and vitamin E can be extracted simultaneously with the oils of the said crop, simultaneously ensuring the preservation of the said oil against oxidation and enrichment of said oils with molecules high

valeur ajoutée essentielles à la santé animale et humaine, et à leur alimentation. value essential to animal and human health, and their diet.

Selon un mode de réalisation de l'invention, les plantes cultivées ou leurs graines peuvent être employées telles quelles, sans extraction préalable de la vitamine E et des tocophérols comme élément alimentaire, seul ou en mélange destiné à l'alimentation humaine According to one embodiment of the invention, the cultivated plants or their seeds may be used as is, without prior extraction of vitamin E and tocopherols as food element, alone or in mixture for human consumption

ou animale. or animal.

Les exemples ci-après permettent d'illustrer l'invention, sans toutefois en limiter la portée. The following examples illustrate the invention without limiting its scope. Exemple 1: Teneur en vitamine E de tabacs modifiés Les tabacs modifiés CY et CO décrits dans les exemples 2 à 5 de la demande de brevet WO 96/38567 ont été cultivés. Example 1: Content of vitamin E modified tobacco The tobacco modified CY CO and described in Examples 2 to 5 of WO 96/38567 patent application were grown. La teneur en vitamine E dans les feuilles des tabacs cultivés est mesurée après extraction de la vitamine E. Les analyses montrent une teneur en vitamine Vitamin E content in the leaves of the cultivated tobacco is measured after extraction of vitamin E. The analyzes showed a content of vitamin

supérieure pour le tabac CO avec localisation de l'HPPD dans les chloroplastes. greater for CO tobacco with localization of the HPPD in chloroplast.

L'analyse a été faite de la manière suivante: extraction qualitative non altérante mence à l'aide d'un système de solvant type hexane:isopropanol 3:2 (v/v), mais d'autres mélange sont utilisables. The analysis was made as follows: qualitative extraction non alterative begins using a hexane solvent system type: isopropanol 3: 2 (v / v), but other mixture can be used. Puis dosage des tocophérols par CLHP selon divers protocoles comme entre Then determination of tocopherols by HPLC according to various protocols such as between

autre celui référencé IUPAC 2.432. another one referenced IUPAC 2.432.

Exemple 2: Tencur en vitamine E d'un soja modifié Des tissus soja, variété Jack et variété Chapman ont été transformés comme suit Les tissus de soja sont transformés par la technique de bombardement de particules (Finer et Example 2: Tencur vitamin E a modified soybeans The soy fabrics, variety and variety Jack Chapman were processed as follows Soy tissues are transformed by particle bombardment technique (Finer et

Mc Mullen, 1991, In vitro Cell. Mc Mullen, 1991 In Vitro Cell. Dev. Dev. Biol. Biol. 27P: 175-182.). 27P: 175-182)..

La régénération du soja est obtenue selon le protocole décrit par Finer et Mc Mullen, 1991. Des suspensions embryogènes sont initiées à partir de cotylédons zygotiques immatures; Regeneration of soy is obtained according to the protocol described by Finer and Mc Mullen, 1991. embryogenic suspensions were initiated from immature zygotic cotyledons; ces suspensions sont rendues compétentes à la transformation par repiquages successifs sur un milieu contenant du 2.4 D. Les tissus de soja sont alors transformés par la technique de bombardement de particules. these suspensions are made competent to transformation by successive subcultures on a medium containing 2.4 D. soybean tissues are then processed by the technique of particle bombardment. La sélection des tissus se fait sur un milieu contenant l'hygromycine comme agent de sélection à la dose de 30 ppm. Fabric selection is done on a medium containing hygromycin as a selective agent at a dose of 30 ppm. La régénération des cals embryogènes en plantes fertiles est obtenue par une conversion des cals en embryons par The embryogenic callus regeneration into fertile plants is obtained by a conversion of callus embryos by

retrait du 2,4 D. Ces embryons sont ensuite enracinés et mis à germer sur un milieu approprié. withdrawal of 2,4 D. These embryos are then planted and germinated on a suitable medium.

Les leunes plantes sont transférées en serre. The leunes plants are transferred to the greenhouse.

Nous avons obtenu selon ce procédé des sojas Jack et Chapman. We obtained by this process soybeans and Jack Chapman. Ils comprenent un gène codant pour une protéine de fusion OTP/HPPD, décrite par l'identificateur de séquence n 1, sous le contrôle d'éléments de régulation comprenant un promoteur Double histone et de l'activateur de transcription TEV et un terminateur Nos (construit identique à celle introduite dans les tabacs modifiés CO de l'exemple 1 et représenté schématiquement dans la figure suivante). They comprenent a gene encoding a fusion protein OTP / HPPD described by the sequence identifier No. 1, under the regulatory control of elements comprising a double histone promoter and the TEV transcription activator and a Nos terminator ( constructed identical to that introduced in the modified tobacco CO of example 1 and schematically represented in the following figure). Représentation schématique du gane de l'OTP/HPPD Promoteur double histone Activateur de transcription (TEV) Peptide de transit optimisé Region codante de I'HPPD * Terminateur nos Ces sojas modifiés, avec une forte activité HPPD dans les plastes, ont montré une tolérance à de très fortes teneurs en isoxaflutole (herbicide inhibiteur d'HPPD). Schematic representation of the gane OTP / HPPD double histone promoter transcription activator (VTE) peptide optimized transit coding Region I'HPPD * our Terminator These modified soybeans, with strong HPPD activity in plastids showed tolerance very high levels of isoxaflutole (HPPD-inhibiting herbicide). La teneur en vitamine E dans les feuilles et les graines de ces sojas transformés est très nettement Vitamin E content in leaves and seeds of such processed soybeans is considerably

supérieure à la teneur en vitamine E des sojas non transformés correspondants. greater than the vitamin E content of corresponding non-transformed soybeans.

LISTE DE SEQUENCES SEQUENCE LISTING

(iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 1 (Iii) NUMBER OF SEQUENCES: 1

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1: (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 1:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1449 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (ix) CARACTERISTIQUE: (I) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 1449 base pairs (B) TYPE: nucleotide (C) STRANDEDNESS: double (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: cDNA (ix) FEATURE:

(A) NOM/CLE: OTP (A) NAME / KEY: OTP

(B) EMPLACEMENT:1..372 (B) LOCATION: 1..372

(ix) CARACTERISTIQUE: (Ix) FEATURE:

(A) NOM/CLE: HPPD (A) NAME / KEY: HPPD

(B) EMPLACEMENT:373..1446 (B) LOCATION: 373..1446

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 1:

ATG GCT TCG ATC TCC TCC TCA GTC GCG ACC GTT AGC CGG ACC GCC CCT 48 ATG TCG TCG TCC TCA GTC ATC TCC GCG CCA GTT AGC CGG ACC GCC CTC 48

Met Ala Ser Ile Ser Ser Ser Val Ala Thr Val Ser Arg Thr Ala Pro Met Ala Ile Ser Ser Ser Ser Val Thr Ala Val Arg Ser Thr Ala Pro

1 5 10 15 January 5 10 15

GCT CAG GCC AAC ATG GTG GCT CCG TTC ACC GGC CTT AAG TCC AAC GCC 96 TAG CAG GCC AAC ATG GCT GTG GCC TTC CCA GGC TCC AAG CTT GCC AAC 96

Ala Gln Ala Asn Met Val Ala Pro Phe Thr Gly Leu Lys Ser Asn Ala Ala Gln Asn Ala Met Ala Pro Val Phe Thr Gly Leu Lys Asn Ser Ala

25 30 25 30

GCC TTC CCC ACC ACC AAG AAG GCT AAC GAC TTC TCC ACC CTT CCC AGC 144 TTC GCC ACC CCC AAG ACC AAG AAC GAC GCT TTC CTT TCC ACC CCC AGC 144

Ala Phe Pro Thr Thr Lys Lys Ala Asn Asp Phe Ser Thr Leu Pro Ser Ala Phe Thr Pro Lys Thr Lys Ala Phe Asp Asn Ser Thr Ser Leu Pro

40 45 40 45

AAC GGT GGA AGA GTT CAA TAT ATG CAG GTG TGG CCG GCC TAC GGC AAC 192 AAC GGT GTT GGA AGA CAA TAT TGG TGA CAG GTG GCC GCC TAC GGC AAC 192

Asn Gly Gly Arg Val Gln Tyr Met Gln Val Trp Pro Ala Tyr Gly Asn Asn Gly Gly Arg Val Gln Tyr Met Gln Trp Val Ala Pro Tyr Gly Asn

55 60 55 60

AAG AAG TTC GAG ACG CTG TCG TAC CTG CCG CCG CTG TCA ATG GCG CCC 240 AAG AAG GAG ACG TTC CTG TAC TCG CTG CTG GCC GCC TCA ATG GCG CCC 240

Lys Lys Phe Glu Thr Leu Ser Tyr Leu Pro Pro Leu Ser Met Ala Pro Lys Glu Lys Thr Phe Leu Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Leu Ala Met Pro

70 75 80 70 75 80

ACC GTG ATG ATG GCC TCG TCG GCC ACC GCC GTC GCT CCG TTC CAG GGG 288 ACC GTG ATG ATG TCG TCG CCG CCG CCG GTC ACC GCT GCC TTC CAG GGG 288

Thr Val Met Met Ala Ser Ser Ala Thr Ala Val Ala Pro Phe Gln Gly Val Thr Met Met Ala Ser Ala Ser Thr Ala Val Ala Phe Pro Gln Gly

90 95 90 95

CTC AAG TCC ACC GCC AGC CTC CCC GTC GCC CGC CGC TCC TCC AGA AGC 336 CTC AAG TCC ACC GCC AGC CAC CTC GTC CCG CGC CGC TCC TCC AGA AGC 336

Leu Lys Ser Thr Ala Ser Leu Pro Val Ala Arg Arg Ser Ser Arg Ser Leu Lys Ser Thr Ala Pro Ser Leu Ala Val Arg Arg Arg Ser Ser Ser

105 110 105 110

CTC GGC AAC GTC AGC AAC GGC GGA AGG ATC CGG TGC ATG GCA GAT CTA 384 CTC GGC AAC AAC GTC AGC GGC GGA AGG ATC CGG TGC ATG GCA GAT CTA 384

Leu Gly Asn Val Ser Asn Gly Gly Arg Ile Arg Cys Met Ala Asp Leu Leu Gly Asn Val Ser Asn Gly Gly Arg Arg Ile Cys Ala Asp Leu Met

120 1 120 1

TAC GAA AAC CCA ATG GGC CTG ATG GGC TTT GAA TTC ATC GAA TTC GCG 432 TAC GAA AAC CCA GGC CTG ATG ATG GGC TTT GAA ATC GAA TTC TTC GCG 432

Tyr Glu Asn Pro Met Gly Leu Met Gly Phe Glu Phe Ile Glu Phe Ala Tyr Glu Asn Pro Met Gly Leu Met Gly Phe Glu Phe Ile Glu Phe Ala

10 15 20 October 15, 20

TCG CCG ACG CCG GGT ACC CTG GAG CCG ATC TTC GAG ATC ATG GGC TTC 480 TCG ACG GCC GCC ACC GGT CTG GAG GAG TTC GCC ATC ATC ATG GGC TTC 480

Ser Pro Thr Pro Gly Thr Leu Glu Pro Ile Phe Glu Ile Met Gly Phe Pro Ser Thr Leu Thr Pro Gly Glu Pro Ile Glu Ile Phe Met Gly Phe

30 35 30 35

ACC AAA GTC GCG ACC CAC CGT TCC AAG AAC GTG CAC CTG TAC CGC CAG 528 GTC AAA ACC ACC ACC GCG CGT TCC AAG AAC ACC GTG TAC CTG CGC CAG 528

Thr Lys Val Ala Thr His Arg Ser Lys Asn Val His Leu Tyr Arg Gln Thr Lys Val Ala Thr His Arg Ser Lys Asn Val His Leu Tyr Arg Gln

45 50 45 50

GGC GAG ATC AAC CTG ATC CTC AAC AAC GAG CCC AAC AGC ATC GCC TCC 576 GGC GAG TAC AAC CTG AAC AAC ATC CTC GAG CCC AAC AGC ATC GCC TCC 576

Gly Glu Ile Asn Leu Ile Leu Asn Asn Glu Pro Asn Ser Ile Ala Ser Gly Glu Ile Asn Leu Ile Leu Asn Glu Asn Pro Asn Ala Ser Ile Ser

60 65 60 65

TAC TTT GCG GCC GAA CAC GGC CCG TCG GTG TGC GGC ATG GCG TTC CGC 624 TAC TTT GAA GCG GCC GCC TCG ACC GGC TGC GTG GGC ATG GCG CGC TTC 624

Tyr Phe Ala Ala Glu His Gly Pro Ser Val Cys Gly Met Ala Phe Arg Tyr Phe Ala Ala Glu His Gly Pro Ser Val Cys Gly Met Ala Phe Arg

75 80 75 80

GTG AAG GAC TCG CAA AAG GCC TAC AAC CGC GCC CTG GAA CTC GGC GCC 672 GTG AAG AAG CAA GAC TCG CCG CGC CCG TAC AAC CTG GAA CTC GGC GCC 672

Val Lys Asp Ser Gln Lys Ala Tyr Asn Arg Ala Leu Glu Leu Gly Ala Val Lys Asp Ser Gln Lys Ala Tyr Asn Arg Ala Leu Glu Leu Gly Ala

90 95 100 90 95 100

CAG CCG ATC CAT ATT GAC ACC GGG CCG ATG GAA TTG AAC CTG CCG GCG 720 CGC CAG ATC ATT CAT GAC ACC GGG CGC ATG GAA AAC CTG TTG CGC GCG 720

Gln Pro Ile His Ile Asp Thr Gly Pro Met Glu Leu Asn Leu Pro Ala Pro Gln Ile His Asp Ile Thr Gly Pro Met Glu Leu Asn Leu Pro Ala

110 115 110115

ATC AAG GGC ATC GGC GGC GCG CCG TTG TAC CTG ATC GAC CGT TTC GGC 768 ATC GGC AAG ATC GGC GGC GCG CGC TTG TAC CTG CGT ATC GAC TTC GGC 768

Ile Lys Gly Ile Gly Gly Ala Pro Leu Tyr Leu Ile Asp Arg Phe Gly Ile Lys Gly Ile Gly Gly Ala Pro Leu Tyr Leu Ile Asp Arg Phe Gly

125 130 125 130

GAA GGC AGC TCG ATC TAC GAC ATC GAC TTC GTG TAC CTC GAA GGT GTG 816 GAA GGC AGC TCG GAC TAC TAC TAC TAC GAC TTC GTG CTC GAA GGT GTG 816

Glu Gly Ser Ser Ile Tyr Asp Ile Asp Phe Val Tyr Leu Glu Gly Val Glu Gly Ser Ser Ile Tyr Asp Ile Asp Phe Val Tyr Leu Glu Gly Val

140 145 140 145

GAG CGC AAT CCG GTC GGT GCA GGT CTC AAA GTC ATC GAC CAC CTG ACC 864 CGC GAG AAT GCC GTC GGT GCA GGT CTC AAA GTC ATC GAC CAC CTG ACC 864

Glu Arg Asn Pro Val Gly Ala Gly Leu Lys Val Ile Asp His Leu Thr Glu Arg Asn Pro Val Gly Ala Gly Leu Lys Val Ile Asp His Leu Thr

155 160 155 160

CAC AAC GTC TAT CGC GGC CGC ATG GTC TAC TGG GCC AAC TTC TAC GAG 912 CAC AAC GTC TAT GGC CGC CGC ATG GTC TAC CCG TGG AAC TTC TAC GAG 912

His Asn Val Tyr Arg Gly Arg Met Val Tyr Trp Ala Asn Phe Tyr Glu His Asn Val Tyr Arg Gly Arg Met Val Tyr Trp Ala Asn Phe Tyr Glu

170 175 180 170 175 180

AAA TTG TTC AAC TTC CGT GAA GCG CGT TAC TTC GAT ATC AAG GGC GAG 960 AAA TTG TTC AAC TTC CGT GAA GCG CGT TAC TTC GAT ATC AAG GGC GAG 960

Lys Leu Phe Asn Phe Arg Glu Ala Arg Tyr Phe Asp Ile Lys Gly Glu Lys Leu Phe Asn Phe Arg Glu Ala Arg Tyr Phe Asp Ile Lys Gly Glu

190 195 190195

TAC ACC GGC CTG ACT TCC AAG GCC ATG AGT GCG CCG GAC GGC ATG ATC 1008 TAC CTG ACC GGC ACT TCC AAG GCC ATG GCG AGT GCC GAC GGC ATG ATC 1008

Tyr Thr Gly Leu Thr Ser Lys Ala Met Ser Ala Pro Asp Gly Met Ile Tyr Thr Thr Gly Leu Ser Lys Ala Met Ser Ala Pro Asp Gly Met Ile

205 210 205210

CGC ATC CCG CTG AAC GAA GAG TCG TCC AAG GGC GCG GGG CAG ATC GAA 1056 ATC CGC GCC CTG AAC GAA GAG TCG TCC AAG GGC GCG GGG CAG GAA ATC 1056

Arg Ile Pro Leu Asn Glu Glu Ser Ser Lys Gly Ala Gly Gln Ile Glu Arg Ile Pro Leu Asn Glu Glu Ser Lys Ser Gly Ala Gly Gln Ile Glu

215 220 225 215 220 225

GAG TTC CTG ATG CAG TTC AAC GGC GAA GGC ATC CAG CAC GTG GCG TTC 1104 GAG TTC CTG ATG CAG AAC TTC GGC GAA GGC CAC ATC CAG GTG GCG TTC 1104

Glu Phe Leu Met Gln Phe Asn Gly Glu Gly Ile Gln His Val Ala Phe Glu Phe Leu Met Gln Phe Asn Gly Glu Gly Ile Gln His Val Ala Phe

230 235 240 230235240

CTC ACC GAC GAC CTG GTC AAG ACC TGG GAC GCG TTG AAG AAA ATC GGC 1152 GAC GAC ACC CTG GTC AAG CTC ACC TGG GAC GCG TTG ATC GGC AAG AAA 1152

Leu Thr Asp Asp Leu Val Lys Thr Trp Asp Ala Leu Lys Lys Ile Gly Leu Thr Asp Asp Leu Val Thr Lys Trp Asp Ala Leu Lys Lys Ile Gly

245 250 255 260 245 250 255 260

ATG CGC TTC ATG ACC GCG CCG CCA GAC ACT TAT TAC GAA ATG CTC GAA 1200 ATG CGC TTC ACC ATG GCG GCC CCA GAC ACT TAT TAC GAA ATG CTC GAA 1200

Met Arg Phe Met Thr Ala Pro Pro Asp Thr Tyr Tyr Glu Met Leu Glu Met Arg Met Phe Thr Pro Pro Ala Asp Thr Tyr Tyr Leu Glu Glu Met

265 270 275 265270275

GGC CGC CTG CCT GAC CAC GGC GAG CCG GTG GAT CAA CTG CAG GCA CGC 1248 CGC GGC CTG TAC CAC GAC GGC GCC GAG GTG GAT CAA CTG CAG GCA GSC 1248

Gly Arg Leu Pro Asp His Giy Glu Pro Val Asp Gln Leu Gln Ala Arg Gly Arg Leu Pro Asp His Gly Glu Pro Val Asp Gln Leu Gln Ala Arg

280 285 290 280285290

GGT ATC CTG CTG GAC GGA TCT TCC GTG GAA GGC GAC AAA CGC CTG CTG 1296 ATC GGT CTG CTG GAC GGA TCT TCC GTG GAA GGC GAC AAA CGC CTG CTG 1296

Giy Ile Leu Leu Asp Gly Ser Ser Val Glu Gly Asp Lys Arg Leu Leu Gly Leu Ile Leu Asp Gly Ser Ser Val Glu Gly Asp Lys Arg Leu Leu

295 300 305 295300305

CTG CAG ATC TTC TCG GAA ACC CTG ATG GGC CCG GTG TTC TTC GAA TTC 1344 CTG CAG ATC TTC TCG ACC GAA CTG ATG GGC GCC GTG GAA TTC TTC TTC 1344

Leu Gln Ile Phe Ser Glu Thr Leu Met Gly Pro Val Phe Phe Glu Phe Leu Gln Ile Phe Thr Ser Leu Glu Met Gly Phe Pro Val Glu Phe Phe

310 315 320 310 315 320

ATC CAG CGC AAG GGC GAC GAT GGG TTT GGC GAG GGC AAC TTC AAG GCG 1392 CAG ATC CGC AAG GGC GAT GGG GAC TTT GGC GAG GGC AAC TTC AAG GCG 1392

Ile Gln Arg Lys Gly Asp Asp Gly Phe Gly Glu Gly Asn Phe Lys Ala Ile Gln Arg Lys Gly Asp Asp Gly Phe Gly Glu Gly Asn Phe Lys Ala

325 330 335 340 325 330 335 340

CTG TTC GAG TCC ATC GAA CGT GAC CAG GTG CGT CGT GGT GTA TTG ACC 1440 CTG TTC GAG TCC ATC GAA CGT CAG GAC GTG CGT CGT GGT GTA TTG ACC 1440

Leu Phe Glu Ser Ile Glu Arg Asp Gln Val Arg Arg Gly Val Leu Thr Leu Phe Glu Ser Ile Glu Arg Asp Gln Val Arg Arg Gly Val Leu Thr

345 350 355 345350355

GCC GAT TAA 1449 CCG GAT TAA 1449

Ala Asp i1 Ala Asp i1

Claims (8)

REVENDICATIONS
1. Procédé de production de tocophérols dans des plantes génétiquemlent modifiées, caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver une plante génétiquement modiflée appropriée pour effectuer la surexpression d'une hvdroxvphényl pyruvate dioxvygénasc (I IPPD) dans les chloroplastes des cellules végétales desdites plantes génétiquement modifiées. 1. tocopherols production method in génétiquemlent modified plants, characterized in that it comprises culturing a genetically modiflée plant suitable for performing the overexpression of a pyruvate hydroxyphenyl dioxvygénasc (I IPPD) in the chloroplasts of plant cells of said genetically plants changed. P. rocédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que I'HPPD est surexprimée dans les chloroplastcs par la production dans le cytoplasme d'une protéine de fusion comprenant un pcptidc de transit lié à I'HPPD à son extrémité N-terminale (peptide de transit/HPPD). P. rocédé according to claim 1, characterized in that I'HPPD is overexpressed in chloroplastcs by production in the cytoplasm of a fusion protein comprising a transit pcptidc I'HPPD linked at its N-terminus (peptide transit / HPPD). 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le peptide de transit comprend un peptide de transit d'un précurseur cytoplasmique d'une protéine ou d'un 3. A method according to claim 2, characterized in that the transit peptide comprises a transit peptide of a cytoplasmic precursor of a protein or
polypeptide à localisation plastidiale de plantes, préférentiellement chloroplastiques. polypeptide is located in plastids of plants, preferably chloroplast.
4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le peptide de transit comprend le peptide de transit de la petite sous unité de la ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygénase ou de la protéine de liaison chlorophyllienne a/b ou lc peptide de 4. The method of claim 3, characterized in that the transit peptide comprises the transit peptide of the small subunit of the ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase / oxygenase or binding protein chlorophyll a / b or lc peptide
transit de l'EPSPS de plante. transit of plant EPSPS.
5. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le peptide de transit est un peptide de transit multiple constitué par un premier peptide de transit d'un précurseur cytoplasmique d'une protéine ou d'un polypeptide à localisation plastidiale, une partie de la partie mature N terminale d'une protéine ou d'un polypcptide à localisation plastidiale, puis un deuxième peptide de transit d'un précurseur cytoplasmique d'une protéine ou d'un 5. A method according to claim 2, characterized in that the transit peptide is a multiple transit peptide constituted by a first transit peptide of a cytoplasmic precursor of a protein or polypeptide is located in plastids, a portion of the N-terminal mature part of a protein or a polypcptide located in plastids, and then a second transit peptide of a cytoplasmic precursor of a protein or
polypeptide à localisation plastidiale. polypeptide plastid localization.
6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le peptide de transit 6. A method according to claim 5, characterized in that the transit peptide
multiple est le peptide de transit optimisé comprenant le peptide de transit de la petite sous- multiple is the optimized transit peptide comprising the transit peptide of the small sub
unité de la RuBisCO de tournesol, unc séquence de 22 acides aminés de la petite sous unité de unit of sunflower RuBisCO, unc sequence of 22 amino acids of the small subunit of
la RuBisCO de maïs et le peptide de transit de la petite sous-unité de la RuBisCO de maïs. RuBisCO of maize and the transit peptide of the small subunit of maize RuBisCO.
7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que la protéine de fusion peptide de transit/HPPD a la séquence décrite par l'identificateur de séquence n I (SEQ ID 7. A method according to claim 6, characterized in that the peptide fusion protein transit / HPPD has the sequence described by the sequence identifier No. I (SEQ ID
NO 1). NO 1).
8. Procédé selon l'une des revendications I à 7, caractérisé en ce que la plante est 8. Method according to one of claims I to 7, characterized in that the plant is
1n choisie parmi les tomates, les céréales, les plantes oléagineuses, et plus particulièrement parmi 1n selected from tomatoes, grains, oilseeds, particularly among
le maïs, le colza, le soja, le tournesol. corn, rapeseed, soybean, sunflower.
9. Procédé selon l'unc decs revendications I à 8, caractérisé cn ce que la plante est 9. Method according unc DECS claims I to 8, characterized cn that the plant is
une plante à teneur en huile modifiée. a plant with altered oil content.
10. Procédé selon l'unc des revendications 1 à 9, caractérisé eCll cc quc les 10. The method according unc of claims 1 to 9, characterized eCll cc QUC the
tocophlrols sont extraits et purifiés, totalement ou en partie. tocophlrols are extracted and purified, totally or in part.
1 1. Procédé selon l'une des rcvcndications 1 à 10, caractérisé en ce quc les plantcs cultivécs ou leurs graines sont employées telles quclles, sans extraction préalable dc la vitaminc E ct des tocophérols comme éléments alimentaircs, seuls ou en mélanges destinés à 1 1. Process according to one of rcvcndications 1 to 10, characterized in that the QUC plantcs cultivécs or their seeds are used such quclles without prior extraction dc VitaminC the E ct tocopherols as alimentaircs elements, singly or in mixtures for
l'alimentation humaine ou animale. the food or feed.
FR9806475A 1998-05-18 1998-05-18 Producing tomato, cereal or oilseed plants, especially maize, oilseed rape, soya or sunflower plants, from which tocopherols can be extracted and purified Pending FR2778527A1 (en)

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