FR2656307A1

FR2656307A1 - Derives du (n-methyl-n-alcoyl)amino-3 methoxymethylene-2 propane 1-ol, ainsi que leur procede de preparation.

Info

Publication number: FR2656307A1
Application number: FR9015901A
Authority: FR
Inventors: Braquet Pierre; Broquet Colette; Principe-Nicolas Paola; Vandamme Benedicte
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1989-12-19
Filing date: 1990-12-19
Publication date: 1991-06-28
Anticipated expiration: 2010-12-19
Also published as: FI906162A0; SE469383B; GB8928580D0; TNSN90152A1; HK118093A; AU6814290A; FR2656797B1; IE904567A1; DK171298B1; DK299590D0; FI906162A; NZ236213A; GR1000893B; IT9022438A1; NO905373D0; OA09475A; NO177146C; IN173969B; DK299590A; PT96265A

Abstract

L'invention concerne les dérivés du (N-méthyl-N-alcoyl) amino-3 méthoxyméthylène-2 propane 1-ol de formule générale (CF DESSIN DANS BOPI) dans laquelle R représente une chaîne alcoyle, A repré (CF DESSIN DANS BOPI) Y représente un ammonium quaternaire, ainsi qu'un procédé de préparation desdits composés.

Description

La présente invention concerne de nouveaux dérivés des phospholipides et,

plus particulièrement, de nouveaux dérivés du (N-méthyl-N-alcoyl)amino-3 méthoxyméthylene-2 propane 1-ol, de formule: CH 3 N-R

-CH 20 CH 3

-O-A-Y

I. dans laquelle: R représente un groupement alcoyle de 10 carbone; M A représente: -P-O-(CH 2)2-, -C-(CH 2), O n

O O

à 20 atomes de

-C-NH (C Hz) n-

o pour lesquels N est un entier de 2 à 10; Y représente les ammoniums quaternaires suivants:

ammonium, alcoylammonium, dialcoylammonium, trialcoylam-

monium, pyridinium, piperidinium, pyrrolium ou pyrroli-

dinium, chaque groupement alcoyle ayant de 1 à 6 atomes

de carbone.

2 - Les composés sont plus particulièrement intéressants pour leur activité anti-tumorale, que l'on a montrée comme étant beaucoup plus intéressante de celle des composés précédemment évoqués dans l'état de l'art, comme, par exemple, ceux décrits dans "Synthesis of Thioether Phosphocholine Analogues" (Eimar BOSIES, Dieter B J.

HERRMANN, Uwe BICKER, Rudi GALL and Wulf PAHIKE LIPIDS.

Vol 22 No 11, 1987, p 947-951).

L'invention concerne également un procédé de préparation des composés de formule générale I, le dit procédé comprenant la réaction, dans un solvant aprotique, en présence de triéthylamine, à une température comprise entre 0 et 80 C et sous circulation d'azote, du composé CH 3 -N- R

-CHEOCH 3

-OH II.

dans lequel R est défini comme ci-dessus, avec un excès stoechiométrique de 10 à 100 % d'un composé o- sélectionné parmi: C l-P, Br-(CH 2)n-C-Cl ou O=C=N(CH 2)n Br o (n étant défini comme ci-dessus), et un excès stnchiométrique de 30 à 50 % d'un composé Z

sélectionné parmi l'amine associée aux ammoniums quater-

naires de formule Y définis ci-dessus, c'est-à-dire l'am-

moniac, la N-alcoyl-amine, la N,N-dialcoylamine, la N,N,N-

trialcoylamine, la pyridine, la piperidine, le pyrrole ou la pyrrolidine Bien sûr, dans certains cas, le réactif Z peut aussi être le solvant de la réaction Alors, la

définition "un excès stmchiométrique" n'a plus de sens.

Le procédé peut être illustré par le schéma réactionnel I.

XÀ (ZHD) HNDO -

c HDOZHD -

I-N - HD

X (ZHD) O -

1 H 30 ZH O -

a-N - ú 10 j Z + ag (ZHD) N = D = O Z + 1330 (ZH 3) au o -I

A' ( ZHD) CIO

o HOHO H-N 0 r t HD z + d TD O HO - H-N - t Z t H O I 1 WNNO Il DV-F v LHDS r, ( 9 ui * II 4 - Le produit de départ II peut être préparé selon le schéma réactionnel II et décrit en détail dans les exemples préparatifs 1 à 9 pour lesquels R représente C 12 H 25, C 16 H 33

et C 18 H 37.

EXEMPLES PREPARATIFS

1 Phényl-2 bis(éthoxycarbonyl)-5,5 dioxane-1,3 1 Un mélange de bis(hydroxyméthyl)-malonate de diéthyl ( 27 g, 0,12 mole), de benzaldéhyde fra Ichement distillé ( 12,5 ml, 0,12 mole) et d'acide ptoluènesulfonique ( 0,2 g), dans 250 ml de toluène anhydre, est porté au reflux pendant 3 heures dans un appareil de Dean Stark Le

toluène est éliminé sous vide et le résidu est distillé.

E 0.5: 170 C ( 29,5 g, rendement 78 %) Poids moléculaire = 308 -1 IR: 1 740 cm 1 (C= 0) RMN-1 H 60 M Hz CD C 13, TMS 6: 7,35 (s, 5 H, y); 5,4 (s, 1 H, CH 0); 4,8 (d, 2 H); 4,2 (m, 6 H, 2 H + OCH 2 CH 3); 1,2 (m, 6 H, OCH 2 CH 3) 2 Phényl-2 éthoxycarbonyl-5 carboxy-5 dioxane-l,3 2 25 g du composé 1 ( 0,08 mol) sont ajoutés à une solution de 6,6 g de KOH ( 0,11 mol) dans 140 ml d'éthanol Après une agitation de 4 heures à température ambiante, l'éthanol est évaporé et le résidu est traité avec H Cl 1 N ( 125 ml) à

0 C Le précipité est filtré, lavé et séché.

-

SCHEMA REACTIONNEL II

HOH 2 C Co 2 C 2 H C

HOH 2 C / \ CO 2 C 2 H 5

1) KOH >

2) HC 1

O O <

0 CH O

C 02-C 2 H 5

x CO 2 H

0 -< D C 02-C 2 H 5

Co 2-c 2 H 5 -K:X C Oz-C 2 H$ Pyridine > 0, CO Li Al H 4 > O O CH 2 OH A S S o 9 co 2-CZH 5 > O D _

A 0 O

1) H Na, THF

> O -<) CH 20 CH 3

2) CH 3 I

r OH r S 2 CH 3 BH 3/THF > CH 20 CH 3 so 23 2 3 >-C Hz OCH 3 Et 3 N

L-OCH 20 -OCH 20

CH 3 1 H HN-R

N (C 2 H 5) 3, DMSO

CH 3 I N-R -CH 2 z OCH 3

-OCH 20

CH 3 I N-R HI Pd/C>-CH 2 OCH 3 OH 6 - 21,6 gr du composé 2 sont ainsi obtenus ( 95 %) P f 108 C Poids moléculaire = 280 IR (cm -1): 3400 (OH); 3100 3040 ( 0); 1740 (COO Et);

1690 (COOH); 1100 (C-O-)

RMN-'H 60 M Hz, CD C 13, TMS. 6: 7,4 (s, 5 H, 0); 5,5 (s, 1 H, CHO); 4,9 (d, 2 H, CH 2); 4,25 (m, 4 H, 2 H and OCH 2 CH 3); 1,3 (t, 3 H, OCH 2 CH 3) 3 Phényl-2 éthoxycarbonyl-5 dioxane-l,3 3 9,2 g ( 33 mmol) du composé 2 dans 20 ml de pyridine anhydre sont portés au reflux pendant 5 heures La pyridine est éliminée sous vide, et le résidu obtenu est dissout dans CH 2 Cl 2, lavé avec de l'eau, puis avec de l'eau salée, séché et évaporé, pour donner le composé 3 ( 6,8 g, 88 %) P.f 690 o C. Poids moléculaire = 236 -1 IR: 1 740 cm (C= 0) RMN-'H 60 M Hz, CD Cl 3, TMS 6: 7,4 (s, 5 H, y) ; 5,4 (d, 1 H, CHO); 3,8 4,8 (m, 6 H);

3,2 (m, 1 H, H-C-CO 2 Et); 1,3 (m, 3 H, OCH 2 CH 3).

4 Hydroxyméthylène-5 phényl-2 dioxane-l,3 4 A un mélange de 0,62 g de Li Al H 4 ( 16 mmol) dans de l'éther absolu ( 80 ml), on ajoute, doucement, une solution de 6,8 g du composé 3 ( 29 mmol) dans 60 ml d'éther absolu Le mélange est alors agité pendant 4 heures à température ambiante Puis, à O C, on ajoute de l'acétate d'éthyle ( 8 ml), de l'eau ( 4 ml) et une solution de soude à 15 % ( 4 ml) La phase éthérée est décantée, séchée et évaporée pour former 5,12 g ( 92 %) du composé 4, sous l'aspect d'une huile jaune Poids moléculaire = 194

CCM rf: 0,5 (CH 2 C 112) sur alumine.

IR: 3430 cm (OH) RMN-1 H 60 M Hz, CD C 13, TMS 6: 7,4 (s, 5 H, y); 5,3 (d, 1 H, CHO); 4,3 3,2 (m, 6 H); 2,2 (m, 1 H, CH CH 20 H); 1,3 ( 1 H, OH) 7 Méthoxyméthylène-5 phényl-2 dioxane-1,3 5 A un mélange de H Na ( 50 %, 1, 06 g) dans 40 ml de THF anhydre, sous agitation et à O C, on ajoute goutte à goutte

une solution de 5,12 g du composé 4 dans 40 ml de THF.

Après 30 minutes, on ajoute CH 3 I ( 6,6 ml) et le mélange est agité à O C pendant 6 heures, puis toute la nuit à température ambiante Après avoir ajouté de l'eau, le mélange est extrait avec de l'éther et la couche organique obtenue est lavée avec de l'eau jusqu'à neutralité, puis avec de l'eau salée, séchée puis évaporée Le résidu est purifié sur colonne d'alumine (éluant CH 2 C 12) pour former

4,8 g du composé 5 ( 86 %).

Poids moléculaire = 208

CCM rf: 0,86 (CH 2 C 12) alumine.

IR (cm-1): 3100 3040 (q), 1100 (C-O-) RMN-IH 60 M Hz, CD C 13, TMS 6: 7,4 (s, 5 H, y); 5,5 (d, 1 H, H-C-0); 4,8 3,2 (m,

9 H); 2,3 (m, 1 H, CH CH 2 O Me).

6 Méthoxyméthylène-2 benzyl-0-1 propane diol-l,3 6 On ajoute goutte à goutte, au composé 5 ( 5,4 g, 26 mmol) sous agitation et à O C, une solution de BH 3 dans du THF (M, 52 ml) Le mélange est agité à température ambiante pendant 48 heures, puis plongé brusquement dans de l'eau glacée et extrait avec de l'éther Après élimination du solvant, le produit brut est chromatographie sur silicagel (éluant CH 2 C 12 puis CH 2 C 12/Me OH 99:1) pour former le composé

6 ( 4 g, 73 %), sous l'aspect d'une huile visqueuse.

Poids moléculaire = 210 CCM rf: 0,24 (CH 2 Cl 2) alumine IR (cm-): 3450 (OH); 3100 3040 (); 1100 (C-O-) -8 - RMN-'H 60 M Hz, CD C 13, TMS 6: 7,3 (s, 5 H,0); 4,5 (s, 2 H, CH 2 ); 3,1 3,7 (m, H); 2,1 (m, 1 H, CH CH 2 O-) ; 2,6 ( 1 H, OH) 7 Méthylènesulfonyl-0-3 méthoxyméthylène-2 benzyl-0-1 propane diol-1,3 7 A une solution du composé 6 ( 4 g, 19 mmol) dans un mélange de 60 ml d'éther anhydre et de 40 ml de CH 2 Cl 2 anhydre, on ajoute goutte à goutte Cl SO 2 Me ( 2,24 ml, 29 mmol) Le

mélange est agité à température ambiante pendant 24 heures.

Après extraction avec du CH 2 Cl 2, la phase organique est lavée avec de l'eau salée jusqu'au p H 7 et séchée Le solvant est évaporé et le résidu obtenu est chromatographié sur silicagel (éluant CH 2 C 12/Me OH 99:1) pour obtenir le composé 7 ( 4,6 g, 84 %), sous l'aspect d'une huile

visqueuse.

Poids moléculaire = 288 CCM rf: 0,7 (CH 2 Cl 2/Me OH: 95:5) silicagel IR (cm): 1350 (SO 2); 1170 (SO 2); 1100 (C-O-C) RMN-1 H 60 M Hz, CD C 13, TMS ( 6) 4,35 (d, 2 H, CHO 52); 3,3 3,6 (m, 7 H); 3,0 (s, 3 H,

S Oz CH 3); 2,3 (m, 1 H, CH CH 2 O).

Les différentes N,N-(méthyl alcoyl)amines, à l'exclusion de la N,N(octadécyl méthyl) amine (Aldrich), sont obtenues à partir de l'halogénure d'alcoyle correspondant et de la N-(méthyl)amine selon I G Farbening A G Fr 784,599,

22 Juillet, 1935.

8 N,N-(méthyl alcoyl)amino-1 méthoxyméthylène-2 benzyloxy-

0-3 propane 8 Une solution du composé 7 ( 16 mmol) dans du DMSO ( 15 ml) est ajoutée à une solution de N,N-(méthyl alcoyl)amine ( 16 mmol) et Et 3 N ( 1,4 ml) dans du DMSO ( 60 ml) Le mélange

est agité à 80 C pendant 24 heures.

9 - Après élimination du DMSO sous pression réduite, le résidu est dissout dans CH 2 C 12, et la phase organique obtenue est lavée avec de l'eau puis séchée Le produit brut est chromatographié (éluant CH 2 C 12/Me OH 98:2) pour donner le composé 8. 8 a R = C 02 H 25 (rendement 50 % huile visqueuse) CCM rf: 0,16 (CH 2 Cl 2/Me OH 95:5) 8 b R = C 16 H 33 (rendement 61 % huile visqueuse) CCM rf: 0,18 (CH 2 Cl 2/Me OH 95:5) 8 c R = C 18 H 37 (rendement 58 % huile visqueuse) CCM rf: 0,18 (CH 2 C 12/Me OH 95:5) -1 IR: 1100 (C-O-) cm RMN-'H 60 M Hz, CD C 13, TMS 6: 7,3 (s, 5 H,); 4,5 (s, 2 H, CH 2 "); 3,3 3,6 (m, 7 H, CH 3 I OCH 3, 2 CH 20); 2,15 2,4 (m, 7 H, CH 2 N CH 2); 1,8 (m, 1 H, CH CH 2 O); 1,25 llarge sing, 2 n H, NCH 2 (CH 2)n CH 3 l; 0,9 (t, 3 H, CH 3)

9 N,N-(méthyl alcoyl)amino-3 méthoxyméthylène-2 pro-

pane 1-ol 9 Le composé 9 est obtenu par hydrogénolyse du composé 8

dans du CHC 13 avec Pd/C 10 % ( 40 psi, 5 heures à 40 C).

9 a R = C 12 H 2 S (rendement 79 %) CCM rf: 0,36 (CH 2 C 12/Me OH 90:10) 9 b R = C 16 H 33 (rendement 87 %) CCM rf: 0,39 (CH 2 C 12/Me OH 90:10) 9 c R = C 18 H 37 (rendement 85 %) CCM rf: 0,39 (CH 2 Cl 2/Me OH 90:10) Poids moléculaire = 385 IR (cm): 3450 (OH); 1100 (C-O-C) - RMN-'H 60 M Hz, CD C 13, TMS 6: 5,3 ( 1 H, OH); 3,3 3,8 (m, 7 H, OCH 3, 2 CH 20) 2,7 (m, 7 H, NCH 3 and CH 2-N-CH 2); 2,2 (m, 1 H, CH-CH 2 O); 1,25 llarge sing, 2 n H, NCH 2 (CH 2)n CH 3 l; 0,9 (t, 3 H, CH 3)

L'invention sera mieux comprise à travers la description

des exemples suivants.

Exemple 10:

N,N-(méthyl alcoyl)amino-3 méthoxyméthylène-2 propan 1-0 phosphocholine L'alcoyle représente -C 12 H 25, -C 16 H 33 et -C 18 H 37 l +

A = -P -O(CH 2)2, Y = -N(CH 3)3

I_- O On ajoute, sous circulation d'azote, du chloro-2 oxo-2 dioxaphospholane-l,3,2 ( 2 g, 14 mmol) dans 4 ml de benzene, à une solution refroidie ( 5 C) et agitée du composé 9

( 7 mmol) et de N Et 3 ( 3 ml) dans du benzene anhydre ( 20 ml).

Le mélange est agité à température ambiante pendant 8 heures, puis filtré Le filtrat est évaporé sous pression réduite Le résidu obtenu est dissout dans CH 3 CN anhydre ( 50 ml) et transvasé dans un réacteur 30 ml de CH 3 CN saturé de N Me 3 gazeux sont ajoutés, et le mélange est ainsi chauffé à 65 C pendant 24 heures Le solvant est ensuite évaporé et le résidu obtenu est chromatographié sur silicagel (éluant CH Cl 3/Me OH 90:10; 70:30; 30:70 puis

Me OH) pour obtenir le composé souhaité.

10 a R = C 12 H 2 S (rendement 40 %) MH = 467 CCM rf: 0,25 (CH C 13/Me OH/NH 4 OH 70:30:7) b R = C 16 H 33 (rendement 44 %) MH = 523 CCM rf: 0, 26 (CH C 13/Me OH/NH 4 OH 70:30:7) c R = C 18 H 37 (rendement 45 %) MH = 551 CCM rf: 0,26 (CHC 13/Me OH/NH 4 OH 70:30:7) il - -1 IR (cm): 1240 (P=O); 1100 (C-O-C); 1040 (P-O) RMN-'H 500 M Hz, CH 30 D, TMS 6: 0,85 (t, 3 H, CH 3); 1,2 llarge sing, 2 n H, (CH 2)nl; 1,45 (m, 2 H, NCH 2 CH 2); 2,0 (m, 1 H, CH-CH 2 O); 2,15 (s, 3 H, + NCH 3); 2,3 (m, 4 H, CH 2-N-CH 2) ; 3,15 ls, 9 H, N (CH 3)3 l; 3,35 (s, 3 H, OCH 3); 3,4 (d, 2 H, CH 2-OCH 3); 3,55 (m, 2 H, +

CH 2 N); 3,85 (m, 2 H, CH 2 OP); 4,25 (m, 2 H, POCH 2).

Exemple 11:

Bromure de N,N-(méthyl alcoyl)amino-3 méthoxyméthylène-2 l(N-pyridinium)6 ' pentylcarboxyl-l propane L'alcoyle représente -C 12 H 25 s, -C 16 H 33 et -C 18 H 37

A = -C (CH 2)5, n= 5, Y =-

o Une solution du composé 9 ( 9 mmol) et de triéthylamine ( 25 mmol) dans 15 ml de trichlorométhane sans éthanol, est ajoutée goutte à goutte à une solution de 10 mmol de chlorure de bromohexanoyl-5 dans 10 ml du même solvant, à 0 C et sous circulation d'azote Le mélange est agité pendant environ 15 heures à température ambiante Après évaporation du solvent, 30 ml de pyridine anhydre sont ainsi ajoutés au résidu obtenu, et le mélange est alors agité à 80 C sous circulation d'azote pendant 24 heures La pyridine est éliminée sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur colonne (éluant CH C 13,puis

CH C 13/Me OH 90:10) pour former le composé souhaité.

lla R = C 12 H 25 (rendement 68 %) llb R = C 16 H 33 (rendement 60 %) llc R = C 18 H 37 (rendement 71 %) IR (cm-1): 1100 (C-O-C); 1740 (C=O); 1640 (pyridine) RMN-'H 500 M Hz, CD Cl 3, TMS 6: 0,85 (t, 3 H, CH 3); 1,2 llarge sing, 2 n H, (CH 2)nl; 2,2 (s, 3 H, NCH 3); 2,35 lt, 2 H, C(O)CH 2 l; 3,35 (s, 3 H, OCH 3); 3,45 (d, 2 H, CH 2-OCH 3) 12 -

Exemple 12:

Bromure de N,N-(méthyl alcoyl)amino-3 méthoxymnéthylène-2 lN-(pyridinium)6 ' pentylcarbamoyloxyl-l propane bromide L'alcoyle représente -C 12 H 25, -C 16 H 33 et -C 8 H 37 A = -C-NH(CH 2)5-, n= 5, Y =- o

Un mélange du composé 9 ( 9 mmol), d'isocyanate de bromo-

-pentyle ( 12 mmol) dans du benzene et de 30 ml de pyridine, est chauffé pendant 2 jours à 800 C sous circulation d'azote La pyridine est éliminée sous vide et le résidu obtenu est dissout dans CHC 13, lavé et séché Le solvant est évaporé et le résidu est chromatographié (CHC 13 puis CH C 13/Me OH, 95:5, 90:10) pour obtenir le composé souhaité. 12 a R = C 2 H 2, 5 (rendement 49 %) 12 b R = C 16 H 33 (rendement 52 %) 12 c R = C 18 H 37 (rendement 62 %) IR (cm-1): 1100 (C-O-C); 1640 (pyridine); 1720 (CONH);

3350 (NH)

RMN-1 H 500 M Hz, CD C 13, TMS 6: 0,90 (t, 3 H, CH 3); 1,2 llarg sing, 2 n H, (CH 2)nl; 2,15 (s, 3 H, NCH 3); 3,25 lt, 2 H, C(O)NHCH 2 l; 3,35 (s, 3 H, + OCH 3); 3,4 (d, 2 H, CH 2-OCH 3); 5,1 (t, 2 H, CH 2 N); 5,6 (d,

1 H, NH)

Exemple 13:

Bromure de N,N-(méthyl alcoyl)amino-3 méthoxyméthylène-2 lN-(piperidinium) -6 ' pentylcarbamoyloxyl-l propane L'alcoyle représente -C 12 H 35, -C 16 H 33 et -C 18 H 37

A = -C-NH(CH 2)5-, n= 5, Y =-

O 13 - Ce composé est préparé par le même procédé décrit à l'exemple 12, mais en remplaçant la pyridine par la piperidine. 13 a R = C 12 H 25 (rendement 49 %) 13 b R = C 16 H 33 (rendement 42 %) 13 c R = C 18 H 37 (rendement 53 %) IR (cm 1): 1100 (C-O-C); 1720 (CONH); 3350 (NH) RMN-'H 500 M Hz, CD C 13, TMS 6: 0,85 (t, 3 H, CH 3); 1,2 llarg sing, 2 n H, (CH 2)nl; 2,15 (s, 3 H, NCH 3); 3,25 lt, 2 H, C(O)NHCH 2 l; 3,35 (s, 3 H, + OCH 3); 3,4 (d, 2 H, CH 2-O-CH 3); 5 (t, 2 H, CH 2 N); 5,6 (d, lh, NH)

Exemple 14:

Bromure de N,N-(méthyl alcoyl)amino-3 méthoxyméthylène-2 lN-(pyrrolium)-6 ' pentylcarbamoyloxyl-l propane L'alcoyle représente -Cz 12 H 35, -C 16 H 33 et -C 18 H 37

A = -C-NH(C Hz)5-, n= 5, Y =-

I C

Ce composé est préparé par le meme procédé décrit à l'exemple 12, mais en remplaçant la pyridine par du

pyrrole.

14 a R = C 12 H 25 (rendement 53 %) 14 b R = C 16 H 33 (rendement 61 %) 14 c R = C 18 H 37 (rendement 48 %) IR (cm 1): 1100 (C-O-C); 1720 (CONH); 3350 (NH) RMN-'H 500 M Hz, CD C 13, TMS 6: 0,85 (t, 3 H, CH 3); 1,2 llarg sing, 2 n H, (C Hz)nl; 2,2 (s, 3 H, NCH 3); 3,25 lt, 2 H, C(O)NHCH 2 l; 3, 35 (s, 3 H, + OCH 3); 3,4 (d, 2 H, CH 2-O-CH 3); 5 (t, 2 H, C Hz N); 5,6 (d,

1 H, NH)

14 -

Exemple 15:

Bromure de N,N-(méthyl alcoyl)amino-3 méthoxyméthylène-2 lN(pyrrolidinium)-6 ' pentylcarbamoyloxyl-1 propane L'alcoyle représente -C 16 H 33, -C 17 H 3 S et -C 18 H 37 A = -C-NH(CH 2)5-, n= 5, Y =-+ O Ce composé est préparé par le même procédé que celui décrit à l'exemple 12, mais en remplaçant la pyridine par la pyrrolidine. a R = C 12 H 2 S (rendement 49 %) 15 b R = C 16 H 33 (rendement 45 %) c R = C 18 H 37 (rendement 56 %) IR (cm 1): 1100 (C-O-C); 1720 (CONH); 3350 (NH) RMN-'H 500 M Hz, CDC 13, TMS 6: 0,85 (t, 3 H, CH 3); 1,2 llarg sing, 2 n H, (CH 2)nl; 2,15 (s, 3 H, NCH 3); 3,25 lt, 2 H, C(O)NHCH 2 l; 3,35 (s, 3 H, + OCH 3); 3,4 (d, 2 H, CH 2-O-CH 3); 5 (t, 2 H, CH 2 N); 5,6 (d,

1 H, NH)

TOXICITE

La toxicité des composés de l'invention, a été déterminée per os sur la souris, par des méthodes usuelles Leurs DL 50

sont supérieures à 650 mg/kg.

PHARMACOLOGIE

Les composés selon l'invention, ont été étudiés pour leur habilité à inhiber la prolifération de cellules tumorales

in vitro.

- Ils inhibent la prolifération des cellules tumorales HL 60

et A 427 après 24 heures.

HL.60: cellule de leucémie promyélocytique A.427: cellule de carcinome pulmonaire Ils montrent un effet cytostatique à la dose de 0,02 m M qui n'est pas une dose toxique pour les deux lignées de cellules tumorales humaines La lignée de cellules de carcinome pulmonaire semble plus sensible que la lignée de

cellule de leucémie promyélocytique.

L'effet des composés selon l'invention, sur la prolifération à long terme, est décrit plus précisément

comme suit.

Tous les exemples de l'invention ont été testés et comparés avec l'un des premiers composés voisins, découverts comme

inhibant la croissance cellulaire néoplastique: l'octa-

décyl-0-1 méthylglycéro-0-2 phosphocholine-3 (Etl 8 OCH 3 ou

méthoxy-PAF, Andreesen, 1988).

Pour cette étude, une lignée de cellules de carcinome pulmonaire, appelée aussi A 427, a été utilisée; ce sont des cellules capables d'adhérer à un substrat Les cellules A.427 sont cultivées dans un milieu EMEM contenant du pyruvate de sodium et des amino-acides non essentiels (Flow Labs), complété avec du sérum bovin foetal 10 % (SBF; Gibco) Le milieu de croissance contient 100 U/ml de

pénicilline et 100 gg/ml de streptomycine (Flow Labs).

Les composés de l'invention et le composé de référence Et 18 OCH 3 (Bachem, Suisse) sont dissouts dans une solution contenant 60 % d'éthanol et 40 % de tampon salin de phosphate Les dilutions en série sont préparées dans le

même tampon phosphate.

16 - La dose testée est de 0,02 m M Le temps de traitement dure 24 heures à 370 C. L'effet des composés de l'invention sur la prolifération des cellules à long terme et sur leur survie, a été évalué en étudiant l'efficacité de clonage et la morphologie des colonies de cellules A 427 Pour mener cette étude, 1 103 cellules A 427, préalablement traitées avec les composés de l'invention pendant 24 heures, sont déposées dans des

fioles de culture tissulaire de 25 cm 2.

Ces cultures cellulaires sont alors incubées à 370 C pendant jours A la fin de ce temps d'incubation, les cultures cellulaires sont rinsées deux fois avec le tampon phosphate, fixées avec de l'éthanol à 70 % pendant minutes et teintées pendant le même temps avec du Giemsa

10 % (Sigma Chemicals).

Les résultats correspondent à la valeur de l"'efficacité de clonage relative", calculée comme suit: Nombre de colonies formées E.C = x 100 Nombre de cellules recouvertes

et sont rassemblés dans les tableaux suivants.

Il a été montré que les colonies formées, après traitement par les composés de l'invention, ont perdu leur profil régulier, ont une réaction plus faible à la tache de Giemsa et leur taille est plus petite que les colonies non traitées. 17 -

COMPOSES E C (%)

Témoin 100 + 2 2

ET 18 OCH 3 33 4 + 1 5

EX 10-a 27 1 + 2 6 ** EX 10b 21 4 + 1 8 * EX 10 c 14 2 + 0 9 *** EX 11-a 23 2 + 2 4 * EX 11 -b 18 5 + 2 1 * EX 12 a 25 6 + 3 1 ** Les symboles statistiques entre chaque exemple et différents symboles: *, résultat est respectivement et hautement significatif.

COMPOSES E C (%)

EX 12 b 20 2 + 2 3 ** EX 13 b 19 1 + 3 6 *** EX 13 c 17 6 + 2 7 * EX 14-a 22 7 + 3 1 * EX 14 b 27 3 + 3 3 * EX 14 c 18 6 + 2 7 ** EX 15 b 21 7 + 3 3 ** EX 15 c 26 4 + 2 6 ** se réfèrent à la comparaison la référence E T 18 OCH 3 Les ** et *** signifient que le significatif, très significatif

POSOLOGIE

En thérapie humaine, les composés de administrés de préférence par voie I V. l'invention La posologie usuelle est de 2,5 à 5 mg/dm 2 par jour, 3 à 6

jours par mois en perfusion lente.

sont 18 -

R E V E N D I CATIONS

1. Dérivés du (N-méthyl-N-alcoyl)-amino-3 méthoxy-

méthylène-2 propane 1-ol de formule générale: ICH 3 N -R

-CH 20 CH 3

-0 -A-y I. dans laquelle: R représente un groupement alcoyle de 10 à 20 atomes de carbone; o O à A représente: O (CH 2) 2 I-

-C (CH 2) -,

m -C-NH-(CH 2) -, N étant un entier de 2 à 10; M n Y représente les ammoniums quaternaires suivants:

ammonium, alcoylammonium, dialcoylammonium, trial-

coylammonium, pyridinium, piperidinium, pyrrolium ou pyrrolidinium, chaque groupement alcoyle ayant de 1 à

6 atomes de carbone.

19 - 2. Procédé de préparation des composés conformément à la revendication 1, comprenant la réaction, dans un solvant aprotique, en présence de triéthylamine, à une température comprise entre O et 80 C et sous circulation d'azote, du composé CH 3 N -R

-CH 20 CH 3

L-OH dans laquelle R est défini comme ci-dessus, avec un excès stoechiométrique de 10 à 100 % d'un o O composé sélectionné parmi: Cl-P<, B (CH 2) C-Cl I o ou O=C=N(CH 2)n Br (n étant défini comme ci-dessus), et un excès stoechiométrique de 30 à 50 % d'un composé Z sélectionné parmi l'amine associée aux ammoniums quaternaires de formule Y, c'est-à- dire l'ammoniac, la

N-alcoylamine, la N,N-dialcoylamine, la N,N,N-tri-

alcoylamine, la pyridine, la piperidine, le pyrrole ou

la pyrrolidine.