FI98864B - Menetelmä ja testiväline asetonin määrittämiseksi - Google Patents

Description

98864

Menetelmä ja testiväline asetonin määrittämiseksi

Keksinnön ala z f

Keksinnön kohteena on menetelmä ja testiväline ase- »1 5 tönin määrittämiseksi kaasudiffuusiomenetelmällä, jolloin näytteestä haihtuva asetoni johdetaan absorptionesteeseen, jossa se aiheuttaa värimuutoksen, joka todetaan.

Tekniikan tausta

Asetoni on aineenvaihdunnan metaboliitti, jonka ‘ 10 konsentraatio kohoaa metaboliatasapainon häiriintyessä, | kuten sokeritaudin tai nälän seurauksena, jolloin asetonin määrä nousee esim. kehonesteissä ja uloshengityksessä.

Myös märehtijöillä ruokinnan muutokset heijastuvat kehon asetonipitoisuuteen ja asetonin määritys onkin arvo- 15 kas väline märehtijöiden ruokinnan seurannassa ja ketoosin ehkäisemisessä. Märehtijän oikealla ruokinnalla on myös suuri taloudellinen merkitys, koska sillä voidaan sekä lisätä maitotuotantoa että lyhentää poikimisväliä. Ketoosi määritellään yleensä energian saannin puutteesta johtuvak- 20 si aineenvaihdunnan häiriötilaksi, jossa kehonesteiden . . ketoaineiden pitoisuus on kohonnut epänormaalin korkeaksi.

• ♦ j Ketoaineiksi luetaan asetonin lisäksi B-hydroksivoihappo ja asetetikkahappo. Asetonin merkitys korostuu silloin, ..7 kun tautitila on voimakas.

• 25 Lehmän maidossa esiintyvä ketoaineiden määrä on : vain noin puolet veressä olevasta määrästä. Vastaavasti 7: virtsassa ketoaineiden määrä on noin nelinkertainen veren ketoainepitoisuteen verrattuna. Terveellä lehmällä on ase- ·. töniä maidossa alle 2,5 mg/iooml, kun sen sijaan 5 mg/100 • · ...' 30 ml pidetään selvän asetonitaudin alarajana. Pitoisuusalue *. 2,5 - 5,0 mg/100 ml viittaa piilevään asetonitautiin (Se- ***: tälä, J., Suomen Eläinlääkärilehti, ^5 (1989) 3, 115-117).

’**: Asetonia voidaan määrittää monella tavalla ja seu- raavissa artikkeleissa on esim. kuvattu meijerituotteiden • · 35 ja maidon asetonin määritys kaasukromatograafisesti head- • e 2 98864 - m space-menetelmällä: Hild, J. Determination of some aroma Γ!* compounds in dairy products by headspace analysis. Appi. ’ --35 ... ....... .rjr;r

Headspace Gas Chromatogr., GC Headspace Symp., Meeting Date 1978, 89-94? ja Urbach, G., Journal of Chromato- 5 graphy, 404 (1987) 163-174. Asetonin kaasukromatografinen määritys on kyllä luotettava, mutta se on hidasta ja vaatii kalliita ja monimutkaisia laitteita.

Asetonia voidaan myös määrittää ns. mikrodiffuusio-tekniikalla, joka perustuu haihtuvan yhdisteen selektiivi-10 seen siirtymiseen yleensä kaasufaasin kautta absorptio-liuokseen, josta se määritetään esim. kolorimetrisesti tai volumetrisesti. Tällaisia menetelmiä on kuvattu esim. julkaisussa Lappi, G. R. & Clark, L., Anal. Chem., 23 (1951) 541, jossa asetoni on absorboitu 2,4-dinitrofenylhydrat-15 siniin. Kobayashi, Y. J., Chem. Soc. Jpn. Ind. Chem.

Sect., 56 (1953) 174 ja Chem. Abstr., 48 (1954) 9271 kuvaavat asetonimääritystä, jossa asetoni absorboidaan di-kromaatti-rikkihappoon ja Anger, V. & Ofri, S. Fresenius, Z. Anal. Chem., 206 (1969) 186 kuvaavat mentelmää, jossa 20 käytetään hyväksi asetonin absorptiota salisyyliäldehy-. . diin. Julkaisussa Rahim, S. A. & Bashir, W. A., Microchem.

| J., 26 (1981) 329 on kuvattu asetonin määritysmenetelmä, ** jossa käytetään diatsotoitua sulfaniilihappoa.

..*!* Asetoni voidaan myös selektiivisesti absorboida •*.ί 25 näytteestä hydroksyyliamiiniliuokseen, jossa se reagoi : hydroksyyliamiinin kanssa ja muodostaa aseto-oksiimia ··· ...

• · · . .

• · · • ......

(CHj)2CO + NHjOH -* (CH3)2C=NOH + H20, «· • · • ·· 30 jolloin hydroksyyliammonium/hydroksyyliamiini-tasapaino • · · ’. muuttuu • */ NH3OH+ - NHjOH + H+.

··· : : • · s . *·. pH-muutos voidaan mitata happo/emäi>-indikaattorilla. Ai- · * · 35 koinaan mikrodiffuusiomenetelmä toteutettiin ns. Conway’n • ·· ...

• · 98864 ; 3 kammiossa. Se on kannella peitetty ympyrän muotoinen 10-15 mm korkea lasiastia, jonka halkaisija on 5 - 10 cm. Pohjan keskellä on matalan seinämän erottamana toinen pyöreä tila, johon sijoitetaan absorptioneste. Näyte ja muut tar-5 vittavat reagenssit asetetaan absorptionestettä ympäröivään tilaan, jolloin näyte ja absorptioliuos ovat samassa vaakasuorassa tilassa. Conway'n menetelmä ei sovellu nykyaikaiseen massa-analytiikkaan ja se vaatii paljon näytettä. Tältä pohjalta ei siis ole voitu kehittää mitään yk-10 sinkertaista sarjamittauslaitteistoa.

Mikrodiffuusiomenetelmän nykyinen sovellus haihtuvien yhdisteiden määrityksessä on flow injection analysis eli FIA. Siinä diffuusio ei tapahdu kaasufaasin kautta vaan puoliläpäisevän membraanin läpi, joka samalla estää 15 näytteen ja absorptionesteen sekoittumisen toisiinsa (Marstorp, P., Anfält, T. & Andersson, L., Anal. Chim.

Acta, 149 (1983) 283-289). FIA-menetelmän haittapuolia on, että se vaatii erikoislaitteen ja että se on suhteellisen hidas. Maitonäytteiden kohdalla ongelmaksi muodostuu vielä 20 se, että maito helposti tukkii laitteen letkujärjestelmät . . ja käytännössä membraania joudutaan vaihtamaan ja kali- • · - - :·: · broinitia uusimaan hyvin lyhyin välein.

*'”· yhteenveto keksinnöstä ..*!* Nyt on keksitty yksinkertainen, herkkä ja nopea e e ------- • 25 asetonin määritysmenetelmä, joka soveltuu sekä sarja-ana- : lyyseihin että navetassa suoritettavaan ns. cow-site ana- eee e **·*· lyysiin. Menetelmä perustuu kaasudif fuusioon, jolloin e näytteestä haihtuva asetoni, johdetaan absorptionestee- :% seen, jossa se aiheuttaa värimuutoksen, joka todetaan.

*... 30 Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että ·#· *. näyte ja absorptioneste asetetaan vastakkain siten, että ♦ · · • V niitä erottaa yhteinen suljettu kaasutila* :***: Keksinnön kohteena on edelleen testiväline asetonin • \e määrittämiseksi, jolle on tunnusomaista, että se käsittää • · e Γ*. 35 astian, jossa absorptioneste sijaitsee siten, että absorp- • · · * ·· • · 98864 4 tioneste ja näyte voidaan asettaa vastakkain siten, että niitä erottaa yhteinen suljettu kaasutila. Vastakkain ase- : In tettävät mikrotiitterilevyt muodostavat erityisen sopivan astian. ---- 5 Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus

Keksinnön mukainen menetelmä voidaan toteuttaa seu- j raavasti: Näyte ja absorptioneste, johon on lisätty väri-muutokseen tarvittavat reagenssit esim. pH-indikaattori, asetetaan astiaan vastakkain kaasufaasin erottamana. Aset-10 tamalla vastakkain esim. kaksi mikrotiitterilevyä saadaan näin vaikkapa 96 näytteen sarjamittaus-Convay alle 1 dm2 tilaan. Edullisesti absorptioliuos on alalevyn kuopissa ja näytteet asetetaan ylälevyn kuoppiin. Tämä on mahdollista, jos näytteet esimerkiksi hyytelöidään tiiviisti 15 ylälevyn kuoppiin tai ylälevyn kuopissa on huokoinen ab-sorbentti nestettä sitomassa tai ylälevyn alapinta on tii-viistetty puoliläpäisevällä kalvolla, joka läpäisee asetonin.

Näyte voidaan hyytelöidä esim. polyakrylaatilla, 20 tärkkelyksellä tai CMC:llä. Jos näyte sidotaan kantajaan, . . niin kantaja-aineena voidaan käyttää esim. lasivillaa, 9 · '» · selluloosaa, polyakrylaattia tms. Näytettä erottavana puo- ***’: liläpäisevänä kalvona voidaan käyttää erityyppisiä kalvo- ja, jotka läpäisevät suurimolekyyliset yhdisteet kuten : 25 asetonin. Puoliläpäisevä kalvo voi olla esim. teflonia (ns. teflonteippi tai teflonsuodatinpaperi Millipore ·*:*; HVHP09050, huokoskoko 0,45 μη) tai halvempaa ns. "diffuu- 9 sioteippiä" (Micropore).

;·. Edellä mainituin toimenpitein näytteillä ladattu • *· *...' 30 mikrotiitterilevy voidaan kääntää ylösalaisin alalevyn • · 9 *. kanneksi. Levyjen väliin asetetaan tarkoituksenmukaisesti :V reititetty silikonikumi- tms. tiiviste yhteisen suljetun kaasut!lan saamiseksi kukin kuoppaparille. Levyt puriste-. )·. taan kevyesti yhteen.

• e 9 • 99 9 9 9 9 9 9 99 9 9 5 98864

Reaktio suoritetaan edullisesti huoneen lämpötilassa. Lämpötilan kohottaminen saattaa nopeuttaa reaktiota, mutta lämpötila ei saa kohota yli 40 eC, koska silloin hydroksylammoniumkloridi rupeaa hajoamaan. Absorptioajan 5 jälkeen (yleensä noin 3-5 tuntia) levyt voidaan erottaa toisistaan ja alalevyn absorptioliuos analysoida tavanomaiseen tapaan kolorimetrisesti esim. spektrofotometri-sesti automaattisella levynlukijalla tai visuaalisesti. Visuaalista lukemista varten on käytännöllisempää käyttää 10 levyjä, joissa on 1 - 20 näytepaikkaa. Visuaalisessa pika-menetelmässä saattaa myös olla edullisempaa käyttää käänteistä järjestelmää, jossa näyte on alatilassa ja reagens-sit kiinnitetty ylätilaan.

Keksinnön mukainen menetelmä soveltuu edullisesti 15 maidon asetonin määrittämiseen. Maidon sijasta näytteenä voi myös olla muitakin biologisia nesteitä, kehonesteitä kuten verta tai virtsaa, tai elintarviketeollisuuden, kuten meijeriteollisuuden tuotteita tai muita teknisiä valmisteita. Näytteen säilyvyyttä voidaan parantaa lisäämällä 20 jotakin tavanomaista säilöntäainetta kuten esim. pronopo- . . lia, natriumatsidia tai dikromaattia.

• * | Asetonin absorptionesteinä voidaan käyttää esim.

** *: 2,4-dinitrofenylhydratsinia, dikromaattirikkihappoa, sali- .·*** syylialdehydiä tai diatsotoitua sulfaniilihappoa, johon on ; ’,·* 25 lisätty värireaktioon tarvittavat mahdolliset muut rea- ; genssit. Maitonäytteille sopivimpiin pitoisuusalueisiin s*:*; päästään kuitenkin käyttämällä absorptionesteenä hydrok- syyliamiinia, edullisesti hydroksylammoniumkloridin muo-;·, dossa (NH20H x HCl). Maitonäytteille absorptionesteen hyd- • e· *...( 30 roksylammoniumkloridin konsentraatio on edullisesti noin • · · *. 0,005 - 0,05 M ja erityisesti 0,01 - 0,03 M, mikä on käy- ·· · : tännöllistä laimentaa noin 1-5 %-isesta kantaliuoksesta.

s]”: Asetonin absorptioliuokselle aiheuttaman pH-muutoksen ha- . ]·. vaitseraiseksi hydroksyyliamiiniin lisätään pH-indikaatto- • · 0 V'. 35 ri. Sopivia indikaattoreita tai indikaattoriyhdistelmiä • ·· ...........

• ·

98864 I

6 ovat sellaiset, jotka muuttavat väriä pH-alueella2,8 - 5,4, erityisesti alueella 3,8 -4,6. Esimerkkeinä mainittakoon “ΐ

Indikaattorit: pH-alue Väriä lueet 5 hapan emäs

Metyylikeltainen 2,8 - 4,0 punainen keltainen

Bromfenolsini 3,0 - 4,6 keltainen punainen

Metyy1ioranssi 3,1 - 4,4 punainen keltainen

Bromkresolvihreä 3,8 - 5,4 keltainen sininen - 10 ..................

Edullisesti käytetään bromfenolsiniä. Indikaattorin konsentraatioalue on riippuvainen muiden reagoivien aineiden määrästä mikrotiitterilevyllä, ja sopiva määrä on sellainen, jossa absorbanssialue ei ylitä 1000 yksikköä.

15 Indikaattorin ja hydroksylammoniumkloridin suhde vaikuttaa asetonipitoisuuden määrity sr a joihin ja mitä pienempi hydroksylammoniumkloridikonsentraatio sitä herkempi määritysmenetelmä on.

Keksinnön edulliset suoritusmuodot on myös esitetty 20 epäitsenäisissä vaatimuksissa. Seuraavat esimerkit valai- . . sevat keksintöä.

• » : Esimerkki l 0 .....

* * Määrityksissä käytettiin seuraavia laitteita: ..T Hamilton Microlab 2200 annostelijaa ja 900 lisäannosteli- ; *.· 25 jaa sekä Hamilton HR 7000 mikrotiitterilevylukijaa. Mikro- tiitterilevyt olivat Hunclon/Greiner 96 paikkaset, tasa- tV: pohjaiset ei steriilit levyt.

• .....

Reagenssiliuokset valmistettiin seuraavasti: 100 mg ;·, bromfenolsinin Na-suola (Sigma B-6131) liuotettiin 100 4 »· *···. 30 ml:aan deionisoitua vettä. 2 g hydroksylammoniumkloridia • · · \ (Merck 4616) liuotettiin 100 ml:aan deionisoitua vettä.

; '/ Sitten valmistetiin hydroksylammoniumkloridi/indikaattori-, ϊ.,.ϊ seos ottamalla 7,5 ml edellä mainittua 0,1 %-ista bromfe- . *·. nolsiniliuosta ja 5 ml edellä mainittua 2 %-ista hydrok- e · e V': 35 sylammoniumkloridia 100 ml:aan tislattua tai deionisoitua * ·· • · . S3~ · - —· ---- · ...............-. .. - * :"·' - ..............”"T"“-rr*r-r~"“*m ^1¾¾ 98864 7 vettä. Tätä reagenssiliuosta annosteltiin 50 - 200 μΐ 96 palkkaiselle mikrotiitterilevylle. Levyn päälle pantiin vastaavilla reijillä varustettu silikonitiiviste. m . ... - ···*.· - · - ·· ··':' ' · ':'.r ' .!

Toiselle 96 palkkaiselle mikrotiitterilevylle an-5 nosteltiin 50 - 200 μΐ standardi- tai maitonäytteitä. Standardeina käytettiin 26 %-ista rasvaista maitojauhetta 10 g/100ml vettä, johon lisättiin asetonia 0,5, 1,0 ja 2,0 mg/100 ml. Levy päällystettiin puoliläpäisevällä kalvolla eli ns. "diffuusioteipillä" (Micropore; 75 mm x 9,1 m; 3M 10 1530-3) ja asetettiin reagenssiseosta sisältävän levyn ja tiivisteen päälle ylösalaisin. Levyt inkuboitiin 3-6 tuntia. Värinmuutos indikaattoriseoksessa mitattiin spek-trofotometrisesti mikrotiitterilukijalla aallonpituudella 590 nm tai visuaalisesti.

15 Esimerkki 2

Asetonipitoisuudet määritettiin 166 maitonäytteestä esimerkin 1 mukaisella menetelmällä. Mikrotiitterilevylle annosteltiin 100 μΐ hydroksylammoniumklorldl/lndikaattori- seosta ja toiselle levylle 80 μΐ maitoa. Inkubointiaika 20 oli 3-5 tuntia. Referenssimenetelmänä käytettiin kaasu- . kromatograafista (GC) head-space-menetelmää I (Urbach, G., Journal of Chromatography, 404 (1987) 163- .....

174). Määritysrajat olivat 0,5 - 2,0 mg asetonia/100 ml *·· *· · maitoa. Tulokset on esitetty taulukossa 1.

* V 25 !,· : Taulukko 1. Maitonäytteiden jakautuminen (kpl) eri ί asetonipitoisuusluokkiin

Asetonia <0,5 0,5 - 1,0 1,0 - 2,0 >2,0 Γ·.. mg/100 mi_________ J K: 30 <0,5 144 - - ;·.·, 0,5 - 1,0 2 6 1 .··«. 1,0 - 2,0 - 1 3 >2,0_ . - __1_8_ ***** Ref .menetelmä Λ.Ϊ 35 yht./kpl 146 7 5 8 166 8 98864

Keksinnön mukaisella menetelmällä arvioitiin 97 % näytteistä oikeaan luokkaan referenssimenetelmään verrattuna.

Esimerkki 3 ;...... ..........

5 Keksinnön mukainen menetelmä verrattiin sekä esi merkissä 2 käytettyyn GC-referenssimenetelmään että" ."PIA-menetelmään (Marstorp, P., Anfält, T. & Andersson, L.,

Anal. Chim. Acta, 149 (1983) 281-289). Näytteinä olivat 166 lehmäkohtaista raakamaitonäytettä. Taulukossa 2 näyt-10 teet on luokiteltu viiteen eri luokkaan käyttäen GC-mene-telmää referenssinä.

Taulukko 2· Maitonäytteiden jakautuminen (kpl) eri aseto-nipitoisuusluokkiin 15 Mikrotiitterilevy Fia

Luokka asetonia 123 4 5123 4 5 mg/100 ml 1 >2,0 81 9 2 1,0-2,0 31 31 • .*. 3 0,5 - 1,0 1 6 2 1 6 2 e e e r ··· · 20 4 0,25 - 0,5 35 17 37 is 5 <0,25 30 61 17 74 • e · 9 m · • · · ...

• · .....

• · : .*. Keksinnön mukaisella menetelmällä oikeaan luokkaan e e "e !*:·! osuivat näytteet seuraavasti: Luokka l, 89 %; luokka 2, 75 25 %; luokka 3, 67 %; luokka 4, 67 %; ja luokka 5, 67 %. Käy- .. tännön sovellutuksiin näytteet jaettiin kolmeen tasoon eli • · " taso I, jonka asetonipitoisuus on >1 mg/100 ml; taso II, V : 0,5-1,0 mg/100 ml; ja taso III, <0,5 mg/100 ml. Tällöin 92 ·*·’: % tason I näytteistä; 67 % tason II näytteistä ja 100 % e e 30 tason III näytteistä osuivat oikaan luokkaan keksinnön mu-·. kaisella menetelmällä* Karjantarkkailunäyttei1le, jotka • e · .....

ovat koko karjaa edustavia maitonäytteitä, toimintaraja op 1,0 mg/100 ml asetonia/100 ml maitoa. Jos asetonipitoisuus _ _ . , rv.. -|Ί ,- -,Γ^ιρττ/—i-fj-t J · *-T—^-. >iiWS ι ϊΐίίΓΐ<Α£ί··*ί'ΐ"'·"ί:-**'^ί*' 98864 9 ylittää tämän, otetaan karjasta yksittäiset lehmäkohtaiset maitonäytteet, jolloin pitoisuusalue 2,5 - 5,0 mg/100 ml viittaa piilevään asetonitautiin. . __

Tulokset käsiteltiin myös tilastollisesti seuraavin 5 tuloksin:

Toistettavuus ja recovery XäSaJL Taso 2 Iasg-3 X 0,52 1,22 1,98 haj. 0,097 0,080 0,093 10 CV% 18,5 6,6 4,7 N 8 8 8 vaih.väli 0,4-0,6 1,0-1,4 1,8-2,1

Regressio 15 GC/Fia GC/mikrotiitteri

Korrelaatiokerroin 0,96 0,92

Suoran yhtälö y=l,009x-0,03 y=0,923x+0,02

x =* GC

y = Fia/mikrotiitteri 20 • e e · | Ajallisesti keksinnön mukainen menetelmä oli edul- lisin. GC-menetelmällä pystyttiin analysoimaan noin 90 näytettä/vrk, FIA-menetelmällä noin 100 näytettä/vrk ja j mikrotiitterisovelluksella noin 300 näytettä/vrk.

: 25 Esimerkki 4 ··· · ·*·*; Tutkittiin indikattorin ja hydroksylammoniumklori- din suhteen vaikutus asetonipitoisuuden määrity3rajoihin.

;·. Indikaattorin kanta liuoksena oli 0,01 %-inen bromfenolsini • ·· '...t ...... ja absorbentti 1 iuoksena 2 %-inen hydroksylammoniumkloridi.

*. 30 Tulokset osoittavat mm. että mitä pienempi hydroksylammo- • V niumkloridikonsentraatio sitä herkempi määritysmenetelmä j...; on. Tämä on esitetty taulukossa 3.

e ..... .....

e e e • e 9 • ee • e • · · • ·« • e 10 98864

Taulukko 3. Indikaattorin ja hydroksylaiononiumkloridin subteen vaikutus asetonipitoisuuden aäärityisrajoihin

Hydroksylammonium kloridin konsentraatio 51 0,007M 7,5 ml indikaattoria + 2,5 ml hydrok- sylanmtoniumkloridia / 100 ml HjOj mää-ritysraja >0,3 mg/100 ml asetonia II 0,014K 7,5 ml indikaattoria + 5,0 ml hydrok- sylammoniumkloridia / 100 ml Hp; määrity sra ja >0,5 mg/100 ml asetonia III 0,029M 7,5 ml indikaattoria + 10 ml hydrok- sylammoniumkloridia / 100 mlHp; määri-tysraja >0,8 mg/100 ml asetonia IV 0,043M 7,5 ml indikaattoria + IS ml hydrok- eylammoniumkloridia / 100 ml Hp; mää-ritysraja >1,5 mg/100 ml asetonia m m - e · • e e >·· e e e e e ·»» • e e " ' • e ......

m * e .....

• e • · • '· m e e • · e ··· e····"·.

• e e • · e • »e • e • #· ··♦ · · · s e e ;·.··· • ·· · • e· • e .· e ·»· • · · · .....

• * · • · · ...... - - -.....

··· .....

e e • · e • e · e · il

J

Claims (10)

98864

1. Menetelmä asetonin määrittämiseksi kaasudif-fuusiomenetelmällä, jolloin näytteestä haihtuva asetoni 5 johdetaan absorptionesteeseen, jossa se aiheuttaa värimuu- toksen, joka todetaan, tunnettu siitä, että näyte ja absorptioneste asetetaan vastakkain siten, että niitä erottaa yhteinen suljettu kaasutila.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 10. u n n e t t u siitä, että tutkittava näyte on maito.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että näyte hyytelöidään, sidotaan kantajaan tai erotetaan asetonia läpäisevällä kalvolla.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että määritetään asetonin absorp- '*** tionesteelle aiheuttama pH:n muutos pH-indikaattorin avul la.

5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että absorptionesteenä 20 käytetään hydroksyyliamiiniliuosta, johon on pH-indikaat- • .·. toriksi lisätty bromfenolsiniä. • · · . ’** l

6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen me- ···«· ... » ·· · ' ' . netelmä, t u n n e t t u siitä, että näyte ja absorptio- ··· *11 neste sijoitetaan vastakkain asetettaviin mikrotiitteri- » · » • ·’ 25 levyihin, joiden väliin asetetaan tarkoituksenmukaisesti ·.: : reititetty tiiviste.

··· : 7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että absorptioneste ja siihen li-sättävä pH-indikaattori sijoitetaan alalevyyn ja näyte 30 ylälevyyn. e

8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, :#>·* tunnettu siitä, että absorptionesteen pH-indi- » · *···* kaattorin värinmuutos luetaan automaattisella levynluki- : jalla. ··· • · ...... • · » • ·· • · 98864

9. Testiväline asetonin määrittämiseksi kaasudif-fuusiomenetelmällä, jolloin näytteestä haihtuva asetoni johdetaan absorptionesteeseen, jossa se aiheuttaa värimuutoksen, joka todetaan, t u n n e t t u siitä, että se 5 käsittää astian, jossa absorptioneste sijaitsee siten, että absurptioneste ja näyte voidaan asettaa vastakkain siten, että niitä erottaa yhteinen suljettu kaasutila.

10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen testiväline, tunne t t u siitä, että astia koostuu vastakkain ase- 10 tettavista mikrotiitterilevyistä ja niiden väliin asetettavalta tarkoituksenmukaisesti reititetystä tiivisteestä. • » » · • · » ··· · . ·· · • · · • · · • · • · · • e • · • · * · · • · » ··· · ·1 2 3· • · · * 1 1 •e1.··· ··· • · · ....... • · · ·. . . . · ·· · • « · • · .. • · • •e # - ------- • · ........ . ij-At". ··· 1 · 2 • · · 3 • · * · · • ·1 • » 98864