FI81207B - Reseptorprov av solid fas foer antibiotika av vancomycin-klass. - Google Patents

Claims (13)

1. Förfarande för bestämning av en analyt, som är en antibiot ur vankomycinklassen, en individuell faktor, ett derivat eller aglykon av densamma, en annan glykopeptidisk 5 antibiot eller en icke-glykopeptidisk antibiot, vilka alla som gemensamt drag uppvisar bindning tili "molekylrecep-torn11, vilken är en D-al any 1-D-al ani n-d i pept i d eller en D-alanyl-D-alanin-karboxiterminal oligopeptid, k ä n -netecknat därav, att vid förfarandet adsorberas 10 passivt pä ytan av analytiska bärare en bestämd mängd D-alanyl-D-al ani ηι-karboxi termi nai oligopeptid, vilken är konjugerad med en makromolekylär bärare, som förmär ad-sorbera med nämnda yta, varvid antingen samtidigt eller senare tillsätts testprovet och en känd mängd märkt ana-15 lyt och den mängd märkt analyt utvärderas, som bundits tili det fasta fassystement, genom jämförelse med en standardkurva, vilken erhälles genom att testa kända ana-lytmängder.

2. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck-20 n a t därav, att den D-alany 1-D-alani n-karboxitermi nai a oiigopeptidkonjugatet finnes i en begränsad mängd jämfört med den totala mängden analyt och märkt analyt och testprovet och den kända mängden märkt analyt tillsätts samtidigt tili den adsorberande fasta fasen. 25

3. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck- n a t därav, att det D-alanyl-D-alanin-karboxiterminala oiigopeptidkonjugatets bindningsstäl1 en överskrider mängden av testad analyt, det testade analyten och den märkta ana-lyten tillsättes efter varandra och mängden av märkt analyt 30 är sädan, att den binder alla kvarvarande bindningsstälIen av sagda adsorberade konjugat. 22 81 207

4. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck-n a t därav, att analyten är en antibiot ur vankomycin- klassen vald ur gruppen vankomycin, ristosetin, teikoplanin, aktaplanin, avoparein, aktinoidin, LL-Am-374, A 477, OK 7653, A 35512 B, 5 A 515668, AAD 216, A 41030, A 47934 samt individuella fakto-rer, derivat och aglykoner av dessa, speciellt teikoplanin.

5. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck-n a t därav, att den D-alanyl-D-alanin-karboxitermi nai a peptiden är £-aminokaproyl-D-alanyl-D-alani n. 10

6. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck- n a t därav, att den makromolekylära bäraren är ett protein, speciellt albumin.

7. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck-n a t därav, att den analytiska bäraren är urtag i mikro- 15 titerskivor eller provrör eller plastfilmer, speciellt urtag i polyeten- eller polystyrenmikrotiterskivor.

8. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck-n a t därav, att det märkande ämnet i den "märkta analyten" är ett enzym, speciellt pepparrotsperoxidas. 20

9. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck- n a t därav, att a) en utspädningsbuffer pH 7,0 - 7,5 framställs, som innehäller en fosfatbuffrad saltlösning (PBS), nötserum-albumin (BSA) och ett ytaktivt medel, säsom polyetylen- 25 oxid-sorbitan-mono-laurat (Tween® 20); b) mätstandardutspädningar av antibioten, som skall testas, (nol1standarden medräknad) framställs i fosfat-buffrad saltlösning (PBS) och utspätt serum, pH 7,0 - - 7,5; 23 81 207 c) de testade serumproverna utspäds till Önskad ut-spädning med ovan nämnda utspädningsbuffer; d) en lösning av pepparrotsperoxidas-analytkonjugatet tillsätts tili varje prov, blandas; 5 e) var och en av dessa blandningar förflyttas tili plasturtagen i en mikrotiterskiva, som är belagd med en be-gränsad mängd BSA-^-Aca-D-Ala-D-Ala-konjugat; f) efter inkubation under ungefär 2 timmar vid rums-temperatur i en fuktig läda tvättas urtagen noggrant med

10. Analytiskt medel, kännetecknat därav, 20 att bärare är belagd med en D-alanyl-D-alanin-karboxiter- minal oligopeptid, vilken är konjugerad med en lämplig makromolekylär bärare, som förmär adsorbera vid nämnda yta för att användas i förfarandet enligt patentkrav 1.

10 PBS + 0,05-0,1 % (v/v) Tween® 20, pH 7,0 - 7,5; g) ett med pepparrotsperoxidaset färgframkallande kromogensubstrat tillsätts; h) den optiska tätheten av vart prov mäts spektro-fotometriskt; 15 i) koncentrationen av analyt i de testade proven ut- räknas genom att interpolera konkurrensförhäl1andet för vart prov pä en kaiibreringskurva, vilken erhälles genom standardutspädningen av analyten.

11. Analytiskt medel enligt patentkrav 10, k ä n -25 netecknat därav, att den D-alanyl-D-alanin- -karboxitermi nai a peptiden är £-aminokaproyl-D-alanyl--D-alanin, den makromolekylära bäraren är ett protein, speciellt albumin och bäraren är urtag i en mikrotiter-skiva eller provrör eller plastfilmer, speciellt urtag i 30 polyetylen- eller polystyrenmikrotiterskivor. 24 81207

12. Sammansättningen av en testförpackning (kit) för att utföra förfarandet enligt patentkrav 1, k ä n n e -t e c k n a d därav, att förpackningen innehäller a) bärare, som är belagda med D-alanyl-D-alanin-kar-5 boxitermi nai oligopeptid, vilken är konjugerad med en lampiϊg makromolekylär bärare, som förmär adsorbera vid nämnda yta; b) en märkt analyt och/eller c) ett standardpreparat av analyten.

13. Testförpackning (kit) enligt patentkrav 12, kännetecknad därav, att den D-alanyl-D-alanin-karboxiterminala peptiden är £-ami nokaproyl-D-alanyl-D--alanin, den makromolekylära bäraren är ett protein, spe-ciellt albumin, bärarna är urtag i en mikrotiterskiva 15 eller provrör eller plastfilmer, speciellt urtag i poly-etylen- eller polystyrenmikrotiterskivor. li