ES2956258T3

ES2956258T3 - Terapia combinada contra CD70

Info

Publication number: ES2956258T3
Application number: ES19702014T
Authority: ES
Inventors: Rompaey Luc Van; Tim Delahaye; Mahan Moshir; Piotr Zabrocki
Original assignee: ArgenX BVBA
Current assignee: ArgenX BVBA
Priority date: 2018-01-16
Filing date: 2019-01-16
Publication date: 2023-12-18
Anticipated expiration: 2039-01-16
Also published as: EP3740504A1; US20240002523A1; JP7511479B2; US20190241668A1; LT3740504T; US11530271B2; SG11202006007YA; PT3740504T; CA3086448A1; GB201800649D0; KR20200110658A; EP4275702A2; DK3740504T3; MX2020007606A; HUE063783T2; JP2024037765A; EA202091714A1; FI3740504T3; IL276103A; WO2019141732A1

Abstract

La presente divulgación se refiere a terapias combinadas para el tratamiento de enfermedades malignas, particularmente enfermedades mieloides como la leucemia mieloide aguda (AML). Las terapias combinadas pueden incluir una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica objetivo. Las dianas de células madre leucémicas preferidas son TIM-3, IL1 R3/IL1 RAP y CD47. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Terapia combinada contra CD70

Campo de la invención

La presente invención se refiere a terapias combinadas para el tratamiento de neoplasias malignas, en particular de neoplasias malignas mieloides, tales como la leucemia mieloide aguda (LMA).

Antecedentes de la invención

En los últimos años, el desarrollo de nuevos tratamientos contra el cáncer se ha centrado en dianas moleculares, en particular proteínas, implicadas en la progresión del cáncer. La lista de dianas moleculares implicadas en el crecimiento, la invasión y la metástasis de los tumores continúa ampliándose e incluye proteínas expresadas en exceso por células tumorales, así como dianas asociadas con sistemas que apoyan el crecimiento de los tumores, tales como la vasculatura y el sistema inmunológico. La cantidad de agentes terapéuticos o anticancerígenos diseñados para interactuar con estas dianas moleculares también continúa aumentando, y una gran cantidad de medicamentos contra el cáncer dirigidos ahora están aprobados para uso clínico y hay muchos más en proceso de desarrollo.

La inmunoterapia es un enfoque particularmente interesante para el tratamiento del cáncer. Esta forma de terapia busca aprovechar el poder del propio sistema inmunológico del organismo para controlar el crecimiento del tumor. El sistema inmunológico es muy complejo e incluye una multitud de tipos de células diferentes y, en individuos sanos, estas diferentes poblaciones de células están sujetas a un estricto control. Durante el desarrollo del cáncer, los tumores generalmente desarrollan formas de evadir la detección y eliminación por parte del sistema inmunológico del anfitrión, por ejemplo, mediante la regulación por disminución de los activadores de las células asesinas naturales (NK), la reducción de la expresión de las proteínas del MHC de clase I por parte de las células tumorales, la anergia de las células T y/o la regulación por incremento de las células T reguladoras inmunosupresoras (o Treg). La inmunoterapia tiene como objetivo revertir el entorno tumoral inmunosupresor, ayudando así al organismo a generar una respuesta antitumoral eficaz.

CD70 ha sido identificado como una diana molecular de particular interés debido a su expresión constitutiva en muchos tipos de neoplasias malignas hematológicas y carcinomas sólidos. Junker et al. (2005) J Urol. 173:2150-3; Sloan et al. (2004) Soy J Pathol. 164:315-23; Held-Feindt y Mentlein (2002) Int J Cancer 98:352-6; Hishima et al. (2000) Soy J Surg Pathol. 24:742-6; Lens et al. (1999) Br J. Haematol. 106:491-503; Boursalian et al. (2009) Adv Exp Med Biol. 647:108-119; Wajant H. (2016) ExpertOpin Ther Targets 20(8):959-973). CD70 es una glicoproteína transmembrana de tipo II que pertenece a la superfamilia del factor de necrosis tumoral (TNF), que media sus efectos mediante la unión a su receptor de superficie celular cognado, CD27. Tanto CD70 como CD27 se expresan en múltiples tipos de células del sistema inmunológico y la vía de señalización CD70-CD27 se ha implicado en la regulación de varios aspectos diferentes de la respuesta inmunitaria. Esto se refleja en el hecho de que la expresión en exceso de CD70 ocurre en varias enfermedades autoinmunitarias, incluyendo la artritis reumatoide y psoriásica y el lupus (Boursalian et al. (2009) Adv Exp Med Biol. 647:108-119; Han et al. (2005) Lupus 14(8):598-606; Lee et al. (2007) J Immunol. 179(4):2609-2615; Oelke et al. (2004) Arthritis Rheum. 50(6):1850-1860).

La expresión de CD70 se ha relacionado con un mal pronóstico para varios cánceres, incluido el linfoma de células B, el carcinoma de células renales y el cáncer de mama (Bertrand et al. (2013) Genes Chromosomes Cancer 52(8):764-774; Jilaveanu et al. (2012) Hum Pathol. 43(9):1394-1399; Petrau et al. (2014) J Cáncer 5(9):761-764). La expresión de CD70 también se ha encontrado en tejido metastásico en un alto porcentaje de casos, lo que indica un papel clave de esta molécula en la progresión del cáncer. Jacobs et al. (2015) Oncotarget 6(15):13462-13475). La expresión constitutiva de CD70 y su receptor CD27 en células tumorales de linaje hematopoyético se ha relacionado con el papel del eje de señalización CD70-CD27 en la regulación directa de la proliferación y supervivencia de las células tumorales (Goto et al. (2012) Leuk Lymphoma 53(8):1494-1500; Lens et al. (1999) Br. J. Haematol. 106(2); 491-503; Nilsson et al. (2005) Exp. Hematol. 33(12):1500-1507; van Doorn et al (2004) Cancer Res. 64(16):5578-5586).

La expresión de CD70 regulada por incremento en tumores, particularmente en tumores sólidos que no expresan conjuntamente CD27, también contribuye a la inmunosupresión en el microambiente tumoral de diversas maneras. Por ejemplo, se ha demostrado que la unión de CD70 a CD27 en las células T reguladoras aumenta la frecuencia de Treg, reduce las respuestas de las células T específicas de tumores y promueve el crecimiento tumoral en ratones (Claus et al. (2012) Cancer Res. 72(14):3664-3676). La señalización CD70-CD27 también puede amortiguar la respuesta inmunitaria mediante la apoptosis de los linfocitos T inducida por tumores, como se demuestra en el carcinoma de células renales, el glioma y las células de glioblastoma (Chahlavi et al. (2005) Cancer Res.

65(12):5428-5438; Diegman et al. (2006) Neoplasia 8(11):933-938); Wischusen et al. (2002) Cancer Res 62(9):2592-2599). Finalmente, la expresión de CD70 también se ha relacionado con el agotamiento de las células T, por lo que los linfocitos adoptan un fenotipo más diferenciado y no logran destruir las células tumorales. Wang et al. (2012) Cancer Res 72(23):6119-6129; Yang et al. (2014) Leukemia 28(9):1872-1884).

Dada la importancia de CD70 en el desarrollo del cáncer, CD70 es una diana atractiva para la terapia contra el cáncer y los anticuerpos dirigidos a esta proteína de la superficie celular se encuentran en desarrollo clínico (Jacob et al. (2015) Pharmacol Ther. 155:1-10; Silence et al. (2014) MAbs 6(2):523-532).

El documento WO2017/079116 se refiere a anticuerpos que se unen específicamente a PD-1 y TIM-3 y sus usos. El documento WO2015/138600 se refiere a anticuerpos anti-SIRPa y anticuerpos potenciadores de macrófagos biespecíficos.

El documento WO2017/021354 se refiere a una construcción de anticuerpo biespecífico que se une a CD70 y CD3 humanos.

El documento US2008/025989 se refiere a anticuerpos anti-CD70 y derivados de los mismos conjugados con agentes citotóxicos, inmunosupresores u otros agentes terapéuticos.

El documento WO2017/134140 se refiere a construcciones de anticuerpos biespecíficos de una modalidad de Fc específica caracterizadas por comprender un primer dominio que se une a un antígeno de superficie celular diana, un segundo dominio que se une a un epítopo extracelular de la cadena CD3^ehumana y/o de macaco y un tercer dominio, que es la modalidad de Fc específica.

El documento WO2007/146968 se refiere a péptidos de unión multivalentes, incluidos péptidos de unión biespecíficos, que tienen función efectora de inmunoglobulina.

Ring et al. (2017) Proc. Natl. Acad. Scie. USA: 1-8 se refieren a un anticuerpo monoclonal anti-SIRPa, "KWAR23", una combinación de KWAR23 y rituximab, y una forma biespecífica de KWAR23 que se une a CD70 y SIRPa.

Shao et al. (2011) Inmunol. Lett. 138(2):122-128 se refieren a una combinación de anticuerpos anti-CD44 y anti-CD70, y los efectos de los mismos sobre las células T de memoria alorreactivas.

Compendio de la invención

La invención está definida por las reivindicaciones adjuntas.

Se ha descubierto que los anticuerpos anti-CD70 son eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas mieloides, en particular de la leucemia mieloide aguda (LMA) y el síndrome mielodisplásico (SMD). La presente invención se basa en el uso de moléculas de anticuerpos que se unen a CD70 combinadas con agentes adicionales que se dirigen a células mieloides malignas, particularmente células madre leucémicas.

En un primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; y CD47 en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5,

en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor severidad de las células de LMA; o una combinación de los mismos, y

en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-^kB; señalización Wnt reducida/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones.

En otro aspecto, la invención proporciona un kit que comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, y en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL), en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5,

en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones, y

en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones.

En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95% idéntica a SEQ ID NO:4 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95% idéntica a SEQ ID NO:8.

En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 es ARGX-110.

En ciertas realizaciones, las composiciones o kits comprenden una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a una primera de célula madre leucémica diana en donde la primera célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, y una molécula de anticuerpo que se une a una segunda célula madre leucémica diana, en donde la primera y segunda células madre leucémicas dianas son diferentes. La segunda células madre leucémicas diana se puede seleccionar del grupo que consiste en: TIM-3; Galectina-9; CD47; IL1RAP; LILRB2; LLC-1; CD123; CD33; SAIL; GPR56; CD44; E-selectina; CXCR4; CD25; CD32; PR1; WT1; ADGRE2; CCR1; TNFRSF1B y CD96, preferiblemente del grupo que consiste en: TIM-3; Galectina-9; CD47; IL1RAP y LILRB2. En realizaciones preferidas, la primera célula madre leucémica diana es TIM-3 y la segunda célula madre leucémica diana es CD47. En realizaciones preferidas adicionales, la primera célula madre leucémica diana es TIM-3 y la segunda célula madre leucémica diana es IL1RAP.

Para las composiciones o kits de la invención que comprenden una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 o una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, esta molécula de anticuerpo da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones. Además, la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 puede inhibir la interacción de TIM-3 con una o más proteínas que interactúan con TIM-3, opcionalmente proteínas que interactúan con TIM-3 seleccionadas entre: CEACAM-1; HMGB-1; fosfatidilserina; Galectina-9; LILRB2; y sus combinaciones.

En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo o las moléculas de anticuerpo que se unen a la diana o CML diana se obtienen de camélido. Por ejemplo, las moléculas de anticuerpo se pueden seleccionar de una o más bibliotecas inmunologicas obtenidas mediante un método que comprende la etapa de inmunizar un camélido, preferiblemente una llama, con la célula o las células madre leucémicas. Las moléculas de anticuerpo se pueden obtener de camélido inmunizando un animal de una especie de camélido con la proteína CML diana o un fragmento polipeptídico de la misma o inmunizando una especie de camélido con una molécula de ARNm o ADNc que expresa la proteína CML diana o un fragmento polipeptídico de la misma.

En ciertas realizaciones, las composiciones o kits de la invención comprenden una molécula de anticuerpo que se une a CD47. En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo que se une a CD47 inhibe la interacción entre CD47 en las células madre leucémicas y SIRPa en las células fagocíticas. La molécula de anticuerpo que se une a CD47 puede, alternativamente o además, aumentar la fagocitosis de las células tumorales.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo de la composición o kit se seleccionan independientemente del grupo que consiste en: un anticuerpo IgG; un dominio variable de cadena ligera (VL) de anticuerpo; un dominio variable de cadena pesada (VH) de anticuerpo; un anticuerpo de cadena sencilla (scFv); un fragmento F(ab')₂; un fragmento Fab; un fragmento Fd; un fragmento Fv; un anticuerpo de un solo brazo (monovalente); dianticuerpos, trianticuerpos, tetraanticuerpos o cualquier molécula de unión a antígeno formada por combinación, ensamblaje o conjugación de tales fragmentos de unión a antígeno, con la condición de que la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprenda un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) de acuerdo con las reivindicaciones. Con respecto a la formulación de la composición en ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo de la combinación se combinan en un formato de anticuerpo único, por ejemplo, como un anticuerpo multiespecífico, preferiblemente un anticuerpo biespecífico. Alternativamente, las moléculas de anticuerpo pueden estar separadas pero formuladas conjuntamente en una única composición. Para moléculas de anticuerpo formuladas conjuntamente como una composición única, la proporción de las diferentes moléculas de anticuerpo puede ser 1:1. Alternativamente, las moléculas de anticuerpo pueden estar presentes en diferentes cantidades relativas. Por ejemplo, la proporción de una primera molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones con respecto a una segunda molécula de anticuerpo que se une a una CML diana seleccionada del grupo que consiste en: T ⁱM-3; e IL1RAP puede ser 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, etc.

En realizaciones alternativas, las moléculas de anticuerpo se proporcionan por separado.

Las moléculas de anticuerpos de la invención según las reivindicaciones pueden poseer una o más funciones efectoras. En ciertas realizaciones, al menos una de las moléculas de anticuerpo: bloquea completa o parcialmente la función de su diana; y/o tiene actividad ADCC; y/o comprende un dominio de anticuerpo desfucosilado; y/o tiene actividad CDC; y/o tiene actividad ADCP.

Las composiciones o kits de la invención pueden comprender uno o más agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo, uno o más agentes anticancerosos adicionales. En ciertas realizaciones, la composición o kit comprenden un agente que inhibe la señalización de SIRPa. El agente que inhibe la señalización de SIRPa puede ser una molécula de anticuerpo que se une a SIRPa e inhibe la interacción entre CD47 y SIRPa o, alternativamente, puede ser una proteína de fusión de SIRPa-molécula de anticuerpo, por ejemplo, una fusión SIRPa-Fc. En ciertas realizaciones, la proteína de fusión SIRPa-molécula de anticuerpo comprende al menos una de las moléculas de anticuerpo de la composición o kit. En realizaciones particulares, la proteína de fusión SIRPa-molécula de anticuerpo comprende la molécula de anticuerpo de la invención que se une a CD70.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona composiciones según el primer aspecto de la invención para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano.

En otro aspecto, la invención proporciona una molécula de anticuerpo que se une a CD70 para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 se administra combinada con al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

En otro aspecto, la invención proporciona una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 se administra combinada con una molécula de anticuerpo que se une a CD70, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

En otro aspecto, la invención proporciona una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP se administra combinada con una molécula de anticuerpo que se une a CD70, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

En todos los aspectos de la invención, en ciertas realizaciones está comprendido al menos un agente anticanceroso adicional, por ejemplo, al menos un agente para tratar la neoplasia maligna mieloide. En ciertas realizaciones, está comprendido un agente adicional para tratar la LMA. En realizaciones preferidas, está comprendido un agente hipometilante, preferiblemente azacitidina. Alternativamente o, además, tales realizaciones pueden comprender un inhibidor de PD-1 y/o un inhibidor de PD-L1.

Con respecto a las neoplasias malignas que se van a tratar utilizando composiciones para su uso de acuerdo con las reivindicaciones, o anticuerpos para su uso de acuerdo con las reivindicaciones, dichas neoplasias malignas pueden ser (i) neoplasias malignas que comprenden la producción de células madre o progenitoras del cáncer que expresan CD70, CD27 o ambos; (ii) neoplasias malignas que comprenden la producción de células madre o progenitoras del cáncer que expresan la CML diana a la que se une al menos una de las moléculas de anticuerpo; (iii) neoplasias malignas mieloides; (iv) neoplasias malignas mieloides recién diagnosticadas; (v) neoplasias malignas mieloides en recaída o refractarias; (vi) neoplasias malignas mieloides seleccionadas entre: leucemia mieloide aguda (LMA); síndromes mielodisplásicos (SMD); neoplasias mieloproliferativas (NMP); leucemia mieloide crónica (LMC); y leucemia mielomonocítica (LMMC). En realizaciones particularmente preferidas, las composiciones y los anticuerpos son para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA).

En ciertas realizaciones, los métodos en los que se utilizan las composiciones y los anticuerpos comprenden adicionalmente la monitorización del recuento de blastos del paciente. El recuento de sangre periférica y/o de médula ósea del paciente puede reducirse, por ejemplo, reducirse a menos de 25%, por ejemplo, reducirse a 5%, por ejemplo, reducirse a menos de 5%, por ejemplo, reducirse a niveles indetectables. En ciertas realizaciones, el recuento de blastos en la médula ósea se reduce entre 5% y 25% y el porcentaje de blastos en la médula ósea se reduce en más de 50% en comparación con el pretratamiento.

En ciertas realizaciones, los métodos en los que se utilizan las composiciones y los anticuerpos inducen una respuesta parcial. En ciertas realizaciones, los métodos inducen una respuesta completa, opcionalmente con recuperación de plaquetas y/o recuperación de neutrófilos. Los métodos pueden inducir la independencia transfusional de glóbulos rojos o plaquetas, o de ambos, durante 8 semanas o más, 10 semanas o más, 12 semanas o más. En ciertas realizaciones, los métodos reducen la tasa de mortalidad después de un período de 30 días o después de un período de 60 días.

En ciertas realizaciones, los métodos en los que se utilizan las composiciones y los anticuerpos aumentan la supervivencia. Por ejemplo, los métodos pueden aumentar la supervivencia con respecto al agente o agentes de tratamiento convencionales utilizados para tratar la neoplasia maligna mieloide particular que se está tratando con las composiciones o anticuerpos. Los métodos pueden inducir un estado de enfermedad residual mínimo que sea negativo.

En ciertas realizaciones, los métodos en los que se utilizan las composiciones y los anticuerpos comprenden adicionalmente una etapa de someter al sujeto a un trasplante de médula ósea.

Alternativamente o, además, los métodos en los que se utilizan las composiciones y los anticuerpos pueden comprender adicionalmente una etapa de administración de uno o más agentes anticancerosos adicionales. Los uno o más agentes cancerosos adicionales se pueden seleccionar entre cualquier agente adecuado para el tratamiento de neoplasias malignas mieloides, preferiblemente LMA. Los agentes preferidos se pueden seleccionar entre Venetoclax; Vyxeos; Idhifa (Enasidenib); y Rydapt (midostaurina).

Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y anticuerpos anti-TIM-3 (1A11 y 2B10) para mediar la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) contra una línea celular de LMA(BDCM).

La Fig. 2 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y anticuerpos anti-IL1RAP (1F10, 1C1, 7E4G1E8 y 89412) para mediar la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) contra líneas celulares de LMA (MV4-11, THP1 y U937).

La Fig. 3 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y anticuerpos anti-CD47 (B6H12, CC2C6 y BRIC126) para mediar la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) contra líneas celulares de LMA (MV4-11, THP1, GDM1 y U937).

La Fig. 4 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y anticuerpos anti-TIM-3 (1A11 y 2B10) para mediar la citotoxicidad mediada por el complemento (CDC).

La Fig. 5 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y anticuerpos anti-IL1RAP (1F10 y 1C1) para mediar la citotoxicidad mediada por el complemento (CDC). A CDC medida utilizando células de LMA MV4-11; B CDC medida utilizando células de LmA NOMO-1.

La Fig. 6 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y un anticuerpo anti-CD47 (BRIC126) para mediar la citotoxicidad mediada por el complemento (CDC). A CDC medida utilizando células de LMA MV4-11; B CDC medida utilizando células de LMA NOMO-1.

La Fig. 7 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y un anticuerpo anti-TIM-3 (2B10) para mediar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) contra una línea celular de LMA(BDCM).

La Fig. 8 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y un anticuerpo anti-IL1RAP (1F10) para mediar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) contra una línea celular de LMA (NOMO-1).

La Fig. 9 muestra la eficacia combinada de un anticuerpo anti-CD70 (ARGX-110) y un anticuerpo anti-CD47 (CC2C6) para mediar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) contra una línea celular de LMA (NOMO-1).

Descripción detallada

A. Definiciones

A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la técnica en el campo técnico de la invención.

"Terapia combinada" - Como se emplea en el presente documento, el término "terapia combinada" se refiere a un tratamiento en el que, a un sujeto, por ejemplo, un sujeto humano, se le administran dos o más agentes terapéuticos. Las "combinaciones" descritas en el presente documento están destinadas a su uso en terapia combinada. Los dos o más agentes terapéuticos típicamente se administran para tratar una única enfermedad, en el presente documento una neoplasia maligna. Las terapias combinadas de la presente invención utilizan moléculas de anticuerpos que se unen a diferentes dianas, específicamente CD70 y una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3, CD47 o IL1RAP. Como se describe en otra parte del presente documento, las moléculas de anticuerpo incluidas en las terapias combinadas pueden estar comprendidas dentro de un único anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo multiespecífico), se pueden formular conjuntamente o se pueden proporcionar por separado, por ejemplo, como composiciones separadas, para administración a un sujeto o paciente que lo necesite.

"Molécula de anticuerpo" - Como se emplea en el presente documento, se pretende que el término "molécula de anticuerpo" abarque anticuerpos de longitud completa y fragmentos de unión a antígeno de los mismos, incluidas variantes tales como anticuerpos modificados, anticuerpos humanizados, anticuerpos sometidos a mutación inversa a secuencias de la línea germinal "germlined" y fragmentos de unión a antígeno de los mismos. El término "anticuerpo" típicamente se refiere a un polipéptido de inmunoglobulina que tiene una combinación de dos cadenas pesadas y dos ligeras, en donde el polipéptido tiene una actividad inmunorreactiva específica significativa para un antígeno de interés (en el presente documento CD70 o una célula madre leucémica diana, por ejemplo, TIM-3, CD47, IL1RAP). Para los anticuerpos de la clase IgG, los anticuerpos comprenden dos cadenas polipeptídicas ligeras idénticas con un peso molecular de aproximadamente 23.000 Dalton y dos cadenas pesadas idénticas con un peso molecular de 53.000 a 70.000. Las cuatro cadenas están unidas por enlaces disulfuro en una configuración "Y" en donde las cadenas ligeras rodean las cadenas pesadas comenzando en la boca de la "Y" y continuando a través de la región variable. Las cadenas ligeras de un anticuerpo se clasifican como kappa o lambda (k, A). Cada clase de cadena pesada puede estar unida con una cadena ligera kappa o lambda. En general, las cadenas ligera y pesada están unidas covalentemente entre sí, y las porciones de "cola" de las dos cadenas pesadas están unidas entre sí mediante enlaces disulfuro covalentes o enlaces no covalentes cuando las inmunoglobulinas se generan mediante hibridomas, células B o células anfitrionas modificadas genéticamente. En la cadena pesada, las secuencias de aminoácidos van desde un extremo N terminal en los extremos bifurcados de la configuración Y hasta el extremo C terminal en la parte inferior de cada cadena.

Los expertos en la técnica apreciarán que las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta o épsilon (Y, ^m, a, 8, £) con algunas subclases entre ellas (p. ej., ^y1-Y4). Es la naturaleza de esta cadena la que determina la "clase" del anticuerpo como IgG, IgM, IgA, IgD o IgE, respectivamente. Las subclases (isotipos) de inmunoglobulinas, p. ej., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, etc., están bien caracterizadas y se sabe que confieren especialización funcional. El término "molécula de anticuerpo", como se emplea en el presente documento, abarca anticuerpos de longitud completa o fragmentos de unión a antígeno de los mismos de cualquier clase o subclase de anticuerpo.

Con respecto a los fragmentos de unión a antígeno abarcados dentro del término genérico "molécula de anticuerpo", estos fragmentos son partes o porciones de un anticuerpo o cadena de anticuerpo de longitud completa que comprende menos residuos de aminoácidos que un anticuerpo intacto o completo, si bien conserva la actividad de unión a antígeno. Se pretende que el término "molécula de anticuerpo", como se emplea en el presente documento, abarque fragmentos de unión a antígeno seleccionados entre: un dominio variable de cadena ligera (VL) de anticuerpo; un dominio variable de cadena pesada (VH) de anticuerpo; un anticuerpo de cadena sencilla (scFv); un fragmento F(ab')₂; un fragmento Fab; un fragmento Fd; un fragmento Fv; un anticuerpo de un solo brazo (monovalente); dianticuerpos, trianticuerpos, tetraanticuerpos o cualquier molécula de unión a antígeno formada por combinación, ensamblaje o conjugación de tales fragmentos de unión a antígeno. Se pretende adicionalmente que el término "molécula de anticuerpo", como se emplea en el presente documento, abarque fragmentos de anticuerpo seleccionados del grupo que consiste en: monoanticuerpos; anticuerpos de dominio; y nanoanticuerpos. Los fragmentos se pueden obtener, por ejemplo, mediante tratamiento químico o enzimático de un anticuerpo o cadena de anticuerpo intacta o completa o mediante medios recombinantes.

"Especificidad" y "Anticuerpos multiespecíficos"- Las moléculas de anticuerpo para su uso en las terapias combinadas descritas en el presente documento se unen a antígenos diana particulares. Se prefiere que las moléculas de anticuerpo "se unan específicamente" a su antígeno diana, en donde el término "se unen específicamente" se refiere a la capacidad de cualquier molécula de anticuerpo para inmunorreaccionar preferentemente con una diana determinada, p. ej., CD70, TIM-3, CD47, IL1RAP, LILRB2. Las moléculas de anticuerpo de las presentes composiciones, kits y métodos pueden ser monoespecíficas y contener uno o más sitios de unión que se unen específicamente a una diana particular. Las moléculas de anticuerpo de las presentes composiciones, kits y métodos pueden incorporarse en formatos de "anticuerpos multiespecíficos", por ejemplo, anticuerpos biespecíficos, en donde el anticuerpo multiespecífico se une a dos o más antígenos diana. Por ejemplo, en una realización, la composición o kit de la presente invención comprende un anticuerpo biespecífico que comprende una primera molécula de anticuerpo que se une específicamente a CD70 y una segunda molécula de anticuerpo que se une específicamente a TIM-3. En una realización alternativa, la composición o kit de la presente invención comprenden un anticuerpo biespecífico que comprende una primera molécula de anticuerpo que se une específicamente a CD70 y una segunda molécula de anticuerpo que se une específicamente a CD47. En una realización alternativa adicional, la composición o kit de la presente invención comprenden un anticuerpo biespecífico que comprende una primera molécula de anticuerpo que se une específicamente a CD70 y una segunda molécula de anticuerpo que se une específicamente a IL1RAP. Para lograr múltiples especificidades, los "anticuerpos multiespecíficos" típicamente se modifican genéticamente para incluir diferentes combinaciones o emparejamientos de polipéptidos de cadena pesada y ligera con diferentes pares VH-VL. Los anticuerpos multiespecíficos, en particular biespecíficos, se pueden diseñar para adoptar la conformación general de un anticuerpo nativo, por ejemplo, un anticuerpo en forma de Y que tiene brazos Fab de diferentes especificidades conjugados con una región Fc. Alternativamente, se pueden modificar genéticamente anticuerpos multiespecíficos, por ejemplo, anticuerpos biespecíficos, para que adopten una conformación no nativa, por ejemplo, en donde los dominios variables o los pares de dominios variables que tienen diferentes especificidades se colocan en extremos opuestos de la región Fc.

Los anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos pueden tener una estructura de IgG nativa con dos brazos Fab en forma de Y que tienen especificidad de unión para la primera diana, y uno o más dominios de unión a antígeno adicionales colocados en el extremo C terminal del dominio Fc que tienen especificidad de unión para la segunda diana. Alternativamente, los anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos pueden tener una estructura de IgG nativa con dos brazos Fab en forma de Y que tienen especificidad de unión para la primera diana y uno o más fragmentos scFv que tienen especificidad de unión para la segunda diana ubicada en el extremo C terminal del dominio Fc. Los anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos pueden ser anticuerpos IgG asimétricos, de modo que una región Fab se reemplaza por un dominio de unión a antígeno diferente, por ejemplo, un dominio VHH. En estos anticuerpos asimétricos, la región o fragmento Fab pueden unirse a CD70 y el dominio VHH puede unirse a la CML diana o viceversa.

"Anticuerpo modificado" - Como se emplea en el presente documento, el término "anticuerpo modificado" incluye formas sintéticas de anticuerpos que están alterados de modo que no se produzcan de forma natural, por ejemplo, anticuerpos que comprenden al menos dos porciones de cadena pesada pero no dos cadenas pesadas completas (tales como, anticuerpos o minianticuerpos de dominio eliminado); formas multiespecíficas de anticuerpos (p. ej., biespecíficos, triespecíficos, etc.) alterados para unirse a dos o más antígenos diferentes o a diferentes epítopos en un único antígeno; moléculas de cadena pesada unidas a moléculas scFv y similares. Las moléculas scFv son conocidas en la técnica y se describen, p. ej., en la Patente de Estados Unidos Núm. 5.892.019. Además, el término "anticuerpo modificado" incluye formas multivalentes de anticuerpos (p. ej., trivalentes, tetravalentes, etc., anticuerpos que se unen a tres o más copias del mismo antígeno). En otra realización, un anticuerpo modificado de la invención es una proteína de fusión que comprende al menos una porción de cadena pesada que carece de un dominio CH₂y que comprende un dominio de unión de un polipéptido que comprende la porción de unión de un miembro de un par ligando -receptor.

"Sustituciones humanizantes" - Como se emplea en el presente documento, el término "sustituciones humanizantes" se refiere a sustituciones de aminoácidos en las que el resto de aminoácido presente en una posición particular en el dominio VH o VL de un anticuerpo se reemplaza por un resto de aminoácido que aparece en una posición equivalente en un dominio VH o VL humano de referencia. El dominio VH o VL humano de referencia puede ser un dominio VH o VL codificado por la línea germinal humana. Se pueden realizar sustituciones humanizantes en las regiones marco y/o las CDR de los anticuerpos, definidos en el presente documento.

"Variantes humanizadas" - Como se emplea en el presente documento, los términos "variante humanizada" o "anticuerpo humanizado" se refieren a un anticuerpo variante que contiene una o más "sustituciones humanizantes" en comparación con un anticuerpo de referencia, en donde una porción del anticuerpo de referencia (p. ej., el dominio VH y/o el dominio VL o partes de los mismos que contienen al menos una CDR) tiene un aminoácido derivado de una especie no humana, y las "sustituciones humanizantes" aparecen dentro de la secuencia de aminoácidos derivada de una especie no humana.

"Variantes obtenidas mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal" - Los términos "variante obtenida mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal " o "anticuerpo obtenido mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal" se utilizan en el presente documento para referirse específicamente a "variantes humanizadas" en las que las "sustituciones humanizantes" dan como resultado el reemplazo de uno o más restos de aminoácidos presentes en una varias posiciones particulares en el dominio VH o VL de un anticuerpo por un resto de aminoácido que se encuentra en una posición equivalente en un dominio VH o VL humano de referencia codificado por la línea germinal humana. Es típico que para cualquier "variante obtenida mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal" dada, los restos de aminoácidos de reemplazo sustituidos en la variante de la línea germinal se tomen exclusiva, o predominantemente, de un único dominio VH o VL codificado por la línea germinal humana. Los términos "variante humanizada" y "variante obtenida mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal" se utilizan a menudo indistintamente. La introducción de una o más "sustituciones humanizantes" en un dominio VH o VL derivado de camélido (p. ej., derivado de llama) da como resultado la producción de una "variante humanizada" del dominio VH o VL derivado de camélido (llama). Si los restos de aminoácidos sustituidos derivan predominante o exclusivamente de una única secuencia de dominio VH o VL codificada por la línea germinal humana, el resultado puede ser una "variante obtenida mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal humana" del dominio VH o VL derivado de camélido (llama).

"CD70" - Como se emplean en el presente documento, los términos "CD70" o "proteína CD70" o "antígeno CD70" se utilizan indistintamente y se refieren a un miembro de la familia de ligandos de TNF que es un ligando para TNFRSFHCD27. CD70 también se conoce como CD27L o TNFSF7. Los términos "proteína CD70 humana" o "antígeno CD70 humano" o "CD70 humano" se utilizan indistintamente para referirse específicamente al homólogo humano, incluyendo la proteína CD70 humana nativa expresada naturalmente en el cuerpo humano y/o en la superficie de líneas celulares humanas cultivadas, así como formas recombinantes y fragmentos de las mismas. Los ejemplos específicos de CD70 humano incluyen el polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en el Número de Acceso a la Secuencia de Referencia del NCBI NP_001243, o su dominio extracelular.

"Célula madre leucémica diana" - Como se emplea en el presente documento, el término "célula madre leucémica diana" se refiere a un antígeno expresado por células madre leucémicas. Las células madre leucémicas o "CML" son una subpoblación de células leucémicas de baja frecuencia que poseen propiedades de células madre distintas de las células leucémicas en masa, incluida la capacidad de autorrenovación, véase Wang et al. (2017) Molecular Cancer 16:2. Las CML generalmente aparecen con una frecuencia en el rango de 1 en 10.000 a 1 en 1 millón como proporción de células blásticas primarias en la leucemia mieloide aguda - LMA (Pollyea y Jordan (2017) Blood 129:1627-1635). Las CML, si se trasplantan a un receptor inmunodeficiente, son capaces de iniciar una enfermedad leucémica y, dado que estas células madre leucémicas parecen impulsar el crecimiento del cáncer, representan una diana atractiva para nuevos agentes terapéuticos. Las CML producen una variedad de moléculas, incluidas antígenos de la superficie celular, que sirven como marcadores de las CML. Estos marcadores pueden, en algunos casos, permitir que las CML se distingan de las células leucémicas en masa, véase, por ejemplo, Hanekamp et al. (2017) Int. J Hematol. 105:549-557. El término "célula madre leucémica diana", como se utiliza en el presente documento, se refiere a marcadores de CML, particularmente a su población de superficie celular.

"TIM-3" - Como se emplea en el presente documento, los términos "TIM-3" o "TIMD-3" se refieren a la proteína "3 de células T que contiene los dominios de inmunoglobulina y mucina". TIM-3 también se conoce como receptor celular 2 del virus de la Hepatitis A (HAVCR2). TIM-3 es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas que tiene una estructura transmembrana que comprende un dominio extracelular que consiste en un dominio de inmunoglobulina N-terminal distal a la membrana y un dominio de mucina proximal a la membrana que contiene sitios potenciales para la glicosilación ligada a O. Se conocen diferentes variantes polimórficas de la proteína TIM-3, véanse, por ejemplo, las variantes de TIM-3 humana de 301 y 272 aminoácidos: http://www.uniprot.org/uniprot/Q8TDQ0; y http://www.uniprot.org/uniprot/E5RHN3. Se pretende que el término "TIM-3", como se emplea en el presente documento, cubra todas las variantes polimórficas de TIM-3 codificadas por transcritos del locus genómico TIM-3/HAVCR2 que dan como resultado TIM-3 expresada en la superficie celular.

"Galectina-9" - Como se emplea en el presente documento, el término "Galectina-9" se refiere a la proteína asociada a la membrana extracelular que sirve como ligando o compañero de unión de TIM-3. Galectina-9 es una proteína soluble que contiene dos dominios de reconocimiento de carbohidratos unidos en tándem, que reconocen específicamente la estructura de las cadenas de azúcar ligadas a N en el dominio de inmunoglobulina de TIM-3. El homólogo humano de Galectina-9 consiste en 355 restos de aminoácidos representados por Acceso GenBank BAB83625.

"CD47" - Como se emplea en el presente documento, el término "CD47" se refiere al antígeno de superficie celular CD47, que es una proteína transmembrana expresada de forma ubicua en una variedad de células normales y células tumorales. CD47 es un ligando para el receptor de la superfamilia de inmunoglobulinas SIRPa. CD47 también se conoce como "proteína determinante de superficie antigénica OA3", "proteína asociada a integrina (IAP)" y "proteína MER6". El homólogo humano de CD47 codificado por el locus genómico de CD47 tiene una longitud de 323 aminoácidos (http://www.uniprot.org/uniprot/Q08722). Se pretende que el término CD47, como se emplea en el presente documento, abarque todas las variantes polimórficas de la proteína CD47.

"SIRPa" - Como se emplea en el presente documento, el término "SIRPa" se refiere a "Proteína alfa reguladora de señales", que también se conoce como sustrato 1 de SHP (SHPS-1), molécula similar a Ig cerebral con motivos de activación basados en tirosina (Bit), miembro A de la familia similar al antígeno CD172, receptor inhibidor SHPS-1, receptor de fusión de macrófagos, antígeno MyD-1, SIRPal, SIRPa2, SIRPa3, p84 y CD172a. SIRPa es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas y es una proteína transmembrana expresada en células fagocíticas, incluidos macrófagos y células dendríticas. Es un receptor de CD47. El homólogo humano de SIRPa codificado por el locus genómico de SIRPA tiene una longitud de 504 aminoácidos (//www.uniprot.org/uniprot/P78324). Se pretende que el término SIRPa como se emplea en el presente documento abarque todas las variantes polimórficas de la proteína SIRPa.

"Proteína de fusión de molécula de anticuerpo SIRPa" - Como se emplea en el presente documento, se pretende que el término "proteína de fusión de molécula de anticuerpo SIRPa" signifique una proteína de fusión que comprende la proteína SIRPa o un fragmento de la misma y una molécula de anticuerpo. La molécula de anticuerpo puede ser una molécula de anticuerpo de longitud completa como se define en otra parte del presente documento, por ejemplo, un anticuerpo IgG de longitud completa. Alternativamente, la molécula de anticuerpo puede ser un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo como se define en otra parte del presente documento. La proteína SIRPa o fragmento de la misma se pueden fusionar a la molécula de anticuerpo en cualquier ubicación adecuada en la molécula de anticuerpo. Por ejemplo, la proteína SIRPa o fragmento de la misma pueden fusionarse al extremo N terminal o al extremo C terminal de la cadena pesada o la cadena ligera de la molécula de anticuerpo. En ciertas realizaciones, la proteína de fusión de la molécula de anticuerpo SIRPa no incluirá la proteína SIRPa de longitud completa, sino que incluirá un fragmento de la misma, particularmente un fragmento capaz de unirse a CD47. Por ejemplo, la proteína de fusión de la molécula de anticuerpo SIRPa puede incluir una o más copias del dominio similar a V de inmunoglobulina SIRPa, en donde el dominio similar a V de inmunoglobulina se define por las posiciones de aminoácidos 32-137 de la proteína SIRPa humana de longitud completa de 504 aminoácidos.

"IL1RAP" - Como se emplea en el presente documento, el término "IL1RAP" o "IL-1RAP" o "IL1 RAcP" o "IL-1 RAcP" se refiere a "proteína accesoria del receptor de interleucina 1". IL1RAP también se conoce como "receptor 3 de interleucina 1" o "IL-1R3" o "IL1R3". IL1RAP es un co-receptor del receptor de interleucina 1 tipo I (IL1R1) y es necesario para la señalización mediada por la citocina IL-1. También sirve como correceptor de IL1R4 e IL1R3 para mediar la señalización a través de IL-33 e IL-36 respectivamente. La IL-1, por ejemplo, media sus efectos aguas abajo del complejo receptor de IL-1 de la superficie celular (IL-1+IL1R1+IL1RAP) mediante la activación de diferentes vías de señalización intracelular, incluida la vía NF-kB. El homólogo humano de IL1RAP codificado por el locus genómico IL1RAP tiene una longitud de 570 aminoácidos (http://www.uniprot.org/uniprot/Q9NPH3).

"LILRB2" - Como se emplea en el presente documento, el término "LILRB2" se refiere al "miembro 2 de la subfamilia B del receptor similar a inmunoglobulina leucocitaria". LILRB2 también se conoce como "receptor 2 similar a inmunoglobulina leucocitaria" o "LIR-2", "miembro D de la familia similar al antígeno CD85" o "CD85d", "transcrito 4 similar a inmunoglobulina" o "ILT-4" y "Receptor 10 similar a inmunoglobulina de monocitos/macrófagos" o "MIR-10". LILRB2 participa en la regulación por disminución de la respuesta inmunitaria y el desarrollo de tolerancia. El homólogo humano de LILRB2 codificado por el locus genómico de LILRB2 tiene una longitud de 598 aminoácidos (http://www.uniprot.org/uniprot/Q8N423).

"Neoplasia maligna mieloide" - Como se emplea en el presente documento, el término "neoplasia maligna mieloide" se refiere a cualquier enfermedad clonal de células madre o progenitoras hematopoyéticas. Las neoplasias malignas mieloides o enfermedades malignas mieloides incluyen afecciones crónicas y agudas. Las afecciones crónicas incluyen síndromes mielodisplásicos (SMD), neoplasias mieloproliferativas (NMP) y leucemia mielomonocítica crónica (LMMC), y las afecciones agudas incluyen la leucemia mieloide aguda (LMA).

"Leucemia mieloide aguda" - Como se emplea en el presente documento, "leucemia mieloide aguda" o "LMA" se refiere a neoplasias hematopoyéticas que involucran células mieloides. La LMA se caracteriza por la proliferación clonal de precursores mieloides con capacidad de diferenciación reducida. Los pacientes con LMA presentan una acumulación de células blásticas en la médula ósea. "Células blásticas", o simplemente "blastos", como se emplean en el presente documento se refieren a células progenitoras mieloides clonales que exhiben un potencial de diferenciación alterado. Las células blásticas también suelen acumularse en la sangre periférica de los pacientes con LMA. Típicamente, la LMA se diagnostica si el paciente presenta 20% o más de células blásticas en la médula ósea o en la sangre periférica.

"Agente anticanceroso" - Como se emplea en el presente documento, un agente anticanceroso se refiere a cualquier agente que sea capaz de prevenir, inhibir o tratar el crecimiento del cáncer directa o indirectamente. Tales agentes incluyen agentes quimioterapéuticos, agentes inmunoterapéuticos, agentes antiangiogénicos, radionúclidos, etc., muchos ejemplos de los cuales son conocidos por los expertos en la técnica.

B. Terapia combinada con anticuerpos anti-CD70 y anti-CML diana

La presente invención se refiere a terapias combinadas y a su uso en el tratamiento de neoplasias malignas, en particular neoplasias malignas mieloides, preferiblemente leucemia mieloide aguda (LMA).

Las composiciones, kits o terapias combinadas descritos en el presente documento se basan en el uso de moléculas de anticuerpos que se unen a CD70 combinadas con otros agentes.

En un primer aspecto, las composiciones de acuerdo con las reivindicaciones, los kits de acuerdo con las reivindicaciones y tales composiciones para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones y al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP,

Todas las composiciones y kits de acuerdo con la presente invención comprenden una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones. Como se describe en otra parte del presente documento, CD70 es un miembro de la superfamilia de proteínas de la familia de necrosis tumoral (t Nf ) y es una glicoproteína transmembrana de tipo II. Es un ligando para el receptor de TNF CD27. CD70 se expresa transitoriamente en células T y B activadas por antígeno y en células dendríticas maduras, y la vía de señalización CD70-CD27 desempeña un papel importante en la regulación de la respuesta inmunitaria.

La expresión constitutiva de CD70 se ha observado en muchos tipos de neoplasias malignas hematológicas y carcinomas sólidos, lo que convierte a esta proteína en una diana atractiva para el desarrollo de terapias contra el cáncer. CD70 ha sido identificado como una diana particularmente interesante para el desarrollo de tratamientos para neoplasias malignas mieloides, específicamente leucemia mieloide aguda (LMA), véanse por ejemplo Perna et al. (2017) Cancer Cell 32: 506-519 y Riether et al. (2017) J Exp Med. 214(2):359-380.

Se cree que CD70 promueve la progresión del cáncer de varias maneras, incluidos efectos directos en la promoción de la proliferación y supervivencia de las células tumorales. También se cree que la expresión de CD70 regulada por incremento desempeña un papel en la inmunosupresión en el microambiente tumoral al activar las células T reguladoras y amortiguar la actividad de los linfocitos infiltrantes de tumores (LIT). Según esta actividad inmunosupresora del tumor, CD70 se puede clasificar como una diana de punto de control inmunológico. En la LMA, la expresión de CD70 y su receptor CD27 se ha detectado en blastos de LMA, y la señalización a través de la vía CD70-CD27 se ha relacionado con el comportamiento de las células madre de las poblaciones de blastos de LMA (Riether et al. (2017) ídem).

En el primer aspecto de la presente invención, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones se combina con al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones, y en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-^kB; menor señalización de Wnt/señalización de pcatenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones.

Las composiciones o kits pueden comprender o consistir en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones junto con moléculas de anticuerpo que se unen a al menos dos células madre leucémicas diana diferentes, al menos tres células madre leucémicas diana diferentes, al menos cuatro células madre leucémicas diana diferentes, o al menos cinco células madre leucémicas diana diferentes, en donde al menos una molécula de anticuerpo se une a una célula madre leucémica diana seleccionada del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-^kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones, y en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de pcatenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones.

Las células madre leucémicas o "CML" son una población distinta de células leucémicas que poseen propiedades similares a las de las células madre, por ejemplo, capacidad de autorrenovación. Las CML diana pueden incluir: TIM-3; Galectina-9; CD47; IL1RAP; LILRB2; LLC-1; CD123; CD33; SAIL; GPR56; CD44; E-selectina; CXCR4; CD25; CD32; PR1; WT1; ADGRE2; CCR1; TNFRSF1B y CD96 (Al-Mawali. (2013) J Stem Cell Res Ther. 3(4):1-8; Daria et al. (2016) Leukemia 30:1734-1741; Rashildi y Walter (2016) Expert Review of Hematology 9(4):335-350; Cho et al. (2017) Kotrsn J Intern Med. 32(2):248-257). Al menos una molécula de anticuerpo de la composición o kit de la invención se une a una célula madre leucémica diana seleccionada del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP. En ciertas realizaciones, la composición o kit comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones y una molécula de anticuerpo que se une a la CML diana TIM-3 de acuerdo con las reivindicaciones.

TIM-3 es un receptor expresado en células T productoras de IFN-y, células Treg FoxP3+ y células inmunitarias innatas (macrófagos y células dendríticas). Al igual que CD70, TIM-3 también se ha clasificado como una diana de punto de control inmunológico en el cáncer, ya que la interacción de TIM-3 con sus ligandos juega un papel importante en la inhibición de las respuestas Th1 (Das et al. (2017) Immunol Rev. 276(1): 97-111). En el desarrollo del cáncer, se ha descubierto que los niveles elevados de expresión de TIM-3 se correlacionan con la supresión de las respuestas de las células T y la disfunción de las células T, lo que indica un papel importante de TIM-3 en la amortiguación de la respuesta inmunitaria antitumoral del organismo (Japp et al. (2015) Cancer Immunol Immunother. 64:1487-1494). En apoyo de esto, se ha descubierto que la inhibición de la señalización de TIM-3 en modelos tumorales preclínicos restablece la inmunidad antitumoral (Sakuishi et al. (2010) J Exp Med. 207:2187-2194). TIM-3 también ha sido identificado como una diana terapéutica prometedora expresada directamente sobre la superficie de las células madre leucémicas, particularmente las células madre de LMA (Jan et al. (2011) Proc Natl Acad Sci. 108:5009-5014; Kikushige et al. (2010) Cell Stem Cell. 7:708-717; Kikushige y Miyamoto (2013) Int J Hematol. 98:627-633; Gongalves Silva et al. (2015) Oncotarget 6:33823-33833; Kikushige et al. (2015) Cell Stem Cell 17:341-352;.

Sin desear vincularse a ninguna teoría, se cree que las terapias combinadas de la presente invención que incluyen moléculas de anticuerpos que se unen a CD70 y moléculas de anticuerpos que se unen a TIM-3 son particularmente eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas, particularmente neoplasias malignas mieloides en virtud del efecto combinado a nivel de las células madre leucémicas. Una gran cantidad de evidencia sugiere que las CML son fundamentales para el inicio y el mantenimiento de la leucemia. Por lo tanto, se cree que dirigirse a esta población celular mediante anticuerpos contra CD70 y anticuerpos que se unen específicamente a una segunda CML diana, tal como TIM-3, es una forma eficaz de dirigirse a una población crítica de células tumorales. CD70 y las CML diana descritas en el presente documento, particularmente TIM-3, también sirven como reguladores importantes de la respuesta antitumoral, es decir, representan proteínas de puntos de control inmunológico que se pueden elegir como diana para estimular la respuesta antitumoral del organismo. De ello se deduce que las terapias combinadas descritas en el presente documento son capaces de mediar efectos terapéuticos directos a nivel de células tumorales, particularmente células de leucemia mieloide, y también efectos indirectos mediante la estimulación de una respuesta inmunitaria antitumoral.

En ciertas realizaciones, la composición o kit según las reivindicaciones comprenden adicionalmente una molécula de anticuerpo que se une a la c Ml diana CD47.

CD47 es una proteína transmembrana que muestra un patrón de expresión relativamente ubicuo. CD47 se une a su receptor SIRPa expresado en células fagocíticas, y esta interacción de unión transmite una señal de "no me comas" que inhibe la fagocitosis de la célula que expresa CD47. Al igual que CD70 y TIM-3, CD47 se ha clasificado como una importante diana de punto de control inmunológico en el cáncer desde que se identificó la interacción entre CD47 en células tumorales y su receptor SIRPa en células fagocíticas como un medio por el cual las células tumorales evaden la fagocitosis mediada por macrófagos, neutrófilos y células dendríticas presentes en el entorno tumoral. Se ha descubierto que CD47 se expresa altamente en una variedad de diferentes tipos de células tumorales, incluidas las células de LMA (Ponce et al. (2017) Oncotarget 8(7): 11284-11301) y se descubrió que la interrupción de la señalización CD47-SIRPa utilizando una fusión SIRPa-Fc elimina las células madre de LMA en un modelo de xenoinjerto (Teocarides et al. (2012) J. Exp. Med. 209(10): 1883-1899).

Sin desear vincularse a ninguna teoría, se cree que las terapias combinadas de la presente invención que incluyen moléculas de anticuerpos que se unen a CD70 y moléculas de anticuerpos que se unen a CD47 son particularmente eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas, particularmente neoplasias malignas mieloides en virtud del efecto combinado a nivel de las células madre leucémicas y el sistema inmunológico innato. La molécula de anticuerpo que se une a CD70 puede servir como anticuerpo opsonizante y la molécula de anticuerpo que se une a CD47 puede mejorar la fagocitosis de las células tumorales que expresan CD70 al bloquear la interacción entre CD47 y SIRPa.

En ciertas realizaciones, la composición o kit comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones y una molécula de anticuerpo que se une a la CML diana IL1RAP de acuerdo con las reivindicaciones.

IL1RAP es un receptor de la superfamilia de inmunoglobulinas expresado en hígado, piel, placenta, timo y pulmón. Sirve como co-receptor de IL1R1 para mediar la señalización a través de la citocina IL-1, y como correceptor de IL1R4 e IL1R3 para mediar la señalización a través de IL-33 e IL-36 respectivamente. Se ha detectado expresión en exceso de IL1RAP en células madre de leucemia mieloide crónica candidatas y en células mononucleares de pacientes con leucemia mieloide aguda. Además, se ha informado de que los anticuerpos dirigidos a IL1RAP tienen efectos terapéuticos beneficiosos en modelos de xenoinjerto de LMC y LMA (Agerstam et al. (2015) Proc Natl Acad Sci USA 112(34): 10786-91; Agerstam et al. (2016) Blood 128(23): 2683-2693).

Sin desear vincularse a ninguna teoría, se cree que las terapias combinadas de la presente invención que incluyen moléculas de anticuerpos que se unen a CD70 y moléculas de anticuerpos que se unen a IL1RAP son particularmente eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas, particularmente neoplasias malignas mieloides en virtud del efecto combinado en el nivel de células madre leucémicas. Se ha descubierto que los anticuerpos dirigidos a IL1RAP son particularmente eficaces para la destrucción de células madre de LMC y LMA (Jaras et al. (2010) Proc Natl Acad Sci USA 107(37): 16280-16285; Askmyr et al. (2013) Blood 121(18):3709-3713). Además, se sabe que el complejo receptor de IL-1 envía señales a través de la vía de señalización NF-^kB y esta vía ya ha sido identificada como una diana atractiva en el tratamiento de la LMA (véase Bosman et al. (2016) Crit Rev Oncol Hematol. 98: 35-44). De ello se deduce que la combinación de una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP puede ser particularmente eficaz basándose en el doble direccionamiento/inhibición de la vía de señalización de NF-^kB en las CML.

En ciertas realizaciones, la composición o kit según las reivindicaciones comprenden adicionalmente una molécula de anticuerpo que se une a la ^cM^ldiana LILRB2.

LILRB2 es un receptor de la superfamilia de inmunoglobulinas expresado en una variedad de tipos de células inmunitarias, incluidas células madre hematopoyéticas, monocitos, macrófagos y células dendríticas. LILRB2 ha estado implicado en el desarrollo del cáncer y se ha informado de su expresión en varias células cancerosas, incluidas las células de LMA y LMC (Kang et al. (2015) Nat Cell Biol. 17:665-677; Colovai et al. (2007) Citometry B Clin Cytom. 72:354-62).

Sin desear vincularse a ninguna teoría, se cree que las terapias combinadas de la presente invención que incluyen moléculas de anticuerpos que se unen a ^cD70 y moléculas de anticuerpos que se unen a LILRB2 son particularmente eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas, particularmente neoplasias malignas mieloides en virtud del efecto combinado en el nivel de células madre leucémicas. Dado que LILRB2 también se ha identificado como una proteína que interactúa con TIM-3, el efecto de los anticuerpos contra LILRB2 también puede estar mediado a través de la vía de señalización de TIM-3.

En ciertas realizaciones, la composición o kit comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a una primera célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones, y en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de pcatenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones, y una molécula de anticuerpo que se une a una segunda célula madre leucémica diana, en donde la primera y segunda células madre leucémicas diana son diferentes. La segunda célula madre leucémica diana puede seleccionarse del grupo que consiste en: TIM-3; Galectina-9; CD47; IL1RAP; LILRB2; LLC-1; CD123; CD33; SAIL; GPR56; CD44; E-selectina; CXCR4; CD25; CD32; PR1; WT1; ADGRE2; CCR1; TNFRSF1B y CD96. En realizaciones preferidas, la segunda célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; Galectina-9; CD47; IL1RAP y LILRB2.

En realizaciones preferidas, la composición o kit comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 de acuerdo con las reivindicaciones y una molécula de anticuerpo que se une a CD47. En realizaciones preferidas adicionales, la composición o kit comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 de acuerdo con las reivindicaciones y una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP de acuerdo con las reivindicaciones. En realizaciones preferidas adicionales, la composición o kit comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a CD47 y una molécula de anticuerpo que une IL1RAP de acuerdo con las reivindicaciones.

Las moléculas de anticuerpo que se unen a una o más CML diana se pueden seleccionar entre cualquier molécula de anticuerpo adecuada que muestre inmunorreactividad para su diana respectiva, en donde al menos una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones, y donde al menos una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-^kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones.

Como se señaló anteriormente, el término "molécula de anticuerpo" se utiliza en el presente documento para referirse a anticuerpos de longitud completa además de sus fragmentos de unión a antígeno.

Los anticuerpos de la invención descritos en el presente documento están destinados al uso terapéutico humano y, por lo tanto, típicamente serán del tipo IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, a menudo del tipo IgG, en cuyo caso pueden pertenecer a cualquiera de las cuatro sub-clases IgG1, IgG2a y b, IgG3 o IgG4. En realizaciones preferidas, los anticuerpos de la invención descritos en el presente documento son anticuerpos IgG, preferiblemente anticuerpos igGi.

Los anticuerpos pueden ser anticuerpos monoclonales, policlonales, multiespecíficos (p. ej., anticuerpos biespecíficos), siempre que presenten la especificidad inmunológica apropiada para su diana. Se prefieren los anticuerpos monoclonales porque son muy específicos y se dirigen contra un único sitio antigénico.

Los fragmentos de unión a antígeno de la invención descritos en el presente documento típicamente comprenderán una porción de un anticuerpo de longitud completa, generalmente el dominio de unión a antígeno o variable del mismo. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen Fab, Fab', F(ab')₂, fragmentos Fab' y Fv biespecíficos, anticuerpos lineales, moléculas de anticuerpos monocatenarios, un fragmento variable monocatenario (scFv) y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. (véase Holliger y Hudson (2005) Nature Biotechnol. 23:1126-36).

Las moléculas de anticuerpo de la invención descritas en el presente documento pueden exhibir una alta homología humana. Tales moléculas de anticuerpo que tienen una alta homología humana pueden incluir anticuerpos que comprenden dominios VH y VL de anticuerpos no humanos nativos que exhiben un % de identidad de secuencia suficientemente alto con respecto a las secuencias de la línea germinal humana. En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo son variantes humanizadas u obtenidas mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal de anticuerpos no humanos, por ejemplo, anticuerpos que comprenden dominios VH y VL de anticuerpos convencionales de camélido modificados genéticamente para ser humanizados, o variantes obtenidas mediante mutación inversa a secuencias de la línea germinal de los anticuerpos originales.

En realizaciones no limitantes, las moléculas de anticuerpo de la invención pueden comprender dominios CH1 y/o dominios CL (de la cadena pesada y la cadena ligera, respectivamente), cuya secuencia de aminoácidos es total o sustancialmente humana. Para moléculas de anticuerpo destinadas a uso terapéutico humano, es típico que toda la región constante del anticuerpo, o al menos una parte de la misma, tenga una secuencia de aminoácidos total o sustancialmente humana. Por lo tanto, uno o más o cualquier combinación del dominio CH1, la región bisagra, el dominio CH₂, el dominio CH3 y el dominio CL (y el dominio CH4 si está presente) pueden ser total o sustancialmente humanos con respecto a su secuencia de aminoácidos.

Ventajosamente, el dominio CH1, la región bisagra, el dominio CH₂, el dominio CH3 y el dominio CL (y el dominio CH4 si está presente) pueden tener todos una secuencia de aminoácidos total o sustancialmente humana. En el contexto de la región constante de un anticuerpo humanizado o quimérico, o un fragmento de anticuerpo, el término "sustancialmente humano" se refiere a una identidad de secuencia de aminoácidos de al menos 90%, o al menos 92%, o al menos 95%. o al menos 97%, o al menos 99% con una región constante humana. El término "secuencia de aminoácidos humana" en este contexto se refiere a una secuencia de aminoácidos que está codificada por un gen de inmunoglobulina humana, que incluye genes de la línea germinal, reordenados y mutados somáticamente. La invención también contempla polipéptidos que comprenden dominios constantes de secuencia "humana" que han sido alterados, mediante una o más adiciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos con respecto a la secuencia humana, excepto aquellas realizaciones en las que la presencia de una región bisagra "completamente humana" se requiera expresamente.

Las moléculas de anticuerpo de la invención pueden tener una o más sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos dentro de la región constante de la cadena pesada y/o ligera, particularmente dentro de la región Fc. Las sustituciones de aminoácidos pueden dar como resultado el reemplazo del aminoácido sustituido por un aminoácido natural diferente, o por un aminoácido no natural o modificado. También se permiten otras modificaciones estructurales, tales como por ejemplo cambios en el patrón de glicosilación (p. ej., mediante adición o deleción de sitios de glicosilación ligados a N u O).

Las moléculas de anticuerpo de la invención pueden modificarse con respecto a sus propiedades de unión a receptores de Fc, por ejemplo, para modular la función efectora. Por ejemplo, se pueden introducir restos de cisteína en la región Fc, permitiendo de este modo la formación de enlaces disulfuro entre cadenas en esta región. El anticuerpo homodimérico así generado puede tener una capacidad de internalización mejorada y/o una mayor destrucción celular mediada por complemento y citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Véanse Carón et al. (1992) J. Exp. Med. 176:1191 - 1195 y Shopes, B(1992)J. Immunol. 148:2918-2922.

Las moléculas de anticuerpo también pueden modificarse para formar productos inmunoconjugados que comprenden un anticuerpo conjugado con un agente citotóxico tal como un agente quimioterapéutico, una toxina (p. ej., una toxina enzimáticamente activa de origen bacteriano, fúngico, vegetal o animal, o fragmentos de la misma), o un isótopo radiactivo (es decir, un producto radioconjugado). Las regiones Fc también pueden modificarse genéticamente para prolongar la semivida, como describen Chan y Carter (2010) en Nature Reviews: Immunology 10:301-316.

En realización más, la región Fc se modifica para aumentar la capacidad de la molécula de anticuerpo para mediar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o para aumentar la afinidad del anticuerpo por un receptor Fc y modificando uno o más aminoácidos.

En realizaciones particulares, la región Fc puede modificarse genéticamente de modo que no exista función efectora. En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo de la invención pueden tener una región Fc derivada de isotipos de IgG naturales que tienen una función efectora reducida, por ejemplo, IgG4. Las regiones Fc derivadas de IgG4 pueden modificarse adicionalmente para aumentar la utilidad terapéutica, por ejemplo, mediante la introducción de modificaciones que minimicen el intercambio de brazos entre moléculas de IgG4 in vivo. Las regiones Fc derivadas de IgG4 pueden modificarse para incluir la sustitución S228P.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo de la invención se modifican con respecto a la glicosilación. Por ejemplo, se puede producir un anticuerpo aglicoslado (es decir, el anticuerpo carece de glicosilación). La glicosilación se puede alterar para, por ejemplo, aumentar la afinidad del anticuerpo por el antígeno diana. Tales modificaciones de carbohidratos se pueden lograr mediante: por ejemplo, alteración de uno o más sitios de glicosilación dentro de la secuencia del anticuerpo. Por ejemplo, se pueden realizar una o más sustituciones de aminoácidos que den como resultado la eliminación de uno o más sitios de glicosilación del marco de la región variable para eliminar de ese modo la glicosilación en ese sitio. Tal aglicosilación puede aumentar la afinidad del anticuerpo por el antígeno.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo de la invención se alteran para que estén hipofucosiladas, es decir, que tengan cantidades reducidas de restos fucosilo, o para que estén total o parcialmente desfucosiladas (como describen Natsume et al. (2009) en Drug design development and therapy 3:7-16) o tengan mayores estructuras GlcNac bisectantes. Se ha demostrado que tales patrones de glicosilación alterados aumentan la actividad ADCC de los anticuerpos, produciendo típicamente una mejora de 10 veces la ADCC con respecto a un anticuerpo equivalente que comprende un dominio Fc humano "nativo". Tales modificaciones de carbohidratos se pueden lograr, por ejemplo, expresando el anticuerpo en una célula anfitriona con la maquinaria enzimática de glicosilación alterada (como describen por Yamane-Ohnuki y Satoh (2009) en mAbs 1(3):230-236). Los ejemplos de anticuerpos no fucosilados con función ADCC mejorada son los producidos utilizando la tecnología Potelligent™ de BioWa Inc.

Las moléculas de anticuerpo de la invención descritas en el presente documento pueden poseer una función efectora de anticuerpo, por ejemplo, una o más de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC), citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP). Las moléculas de anticuerpo de la invención pueden modificarse dentro de la región Fc para aumentar la afinidad de unión por el receptor neonatal FcRn. El aumento de la afinidad de unión puede medirse a pH ácido (por ejemplo, de aproximadamente pH 5,5 a aproximadamente pH 6,0). El aumento de la afinidad de unión también puede medirse a pH neutro (por ejemplo, de aproximadamente pH 6,9 a aproximadamente pH 7,4). Por "aumento de la afinidad de unión" se entiende un aumento de la afinidad de unión a FcRn con respecto a la región Fc no modificada. Típicamente, la región Fc no modificada poseerá la secuencia de aminoácidos de tipo salvaje de IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 humana. En tales realizaciones, el aumento de la afinidad de unión a FcRn de la molécula de anticuerpo que tiene la región Fc modificada se medirá con respecto a la afinidad de unión de IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 de tipo salvaje por FcRn.

En realizaciones preferidas, uno o más restos de aminoácidos dentro de la región Fc pueden sustituirse por un aminoácido diferente para aumentar la unión a FcRn. Se ha informado sobre varias sustituciones de Fc que aumentan la unión a FcRn y, por lo tanto, mejoran la farmacocinética de los anticuerpos. Tales sustituciones son referidas, por ejemplo, por Zalevsky et al. (2010) en Nat. Biotecnol. 28(2):157-9; Hinton et al. (2006) J Immunol.

176:346-356; Yeung et al. (2009) J Immunol. 182:7663-7671; Presta LG. (2008) Curr. Op. Inmunol. 20:460-470; y Vaccaro et al. (2005) Nat. Biotecnol. 23(10):1283-88.

En realizaciones preferidas, una o más de las moléculas de anticuerpo de la invención descritas en el presente documento comprenden un dominio Fc de IgG humana modificado que comprende o consiste en las sustituciones de aminoácidos H433Ky N434F, en donde la numeración del dominio Fc está de acuerdo con la numeración de EU. En una realización preferida adicional, una o más de las moléculas de anticuerpo de la invención descritas en el presente documento comprenden un dominio Fc de IgG humana modificado que comprende o consiste en las sustituciones de aminoácidos M252Y, S254T, T256E, H433Ky N434F, en donde la numeración del dominio Fc está en de acuerdo con la numeración de EU.

Anticuerpos contra CD70

Los ejemplos de anticuerpos contra CD70 incluyen ARGX-110 descrito en el documento WO2012/123586, SGN-70 (documento WO2006/113909, y McEarChern et al. (2008) Clin Cancer Res. 14(23):7763) y los anticuerpos contra CD70 descritos en los documentos WO2006/044643 y WO2007/038637.

El documento WO2006/044643 describe anticuerpos contra CD70 que contienen un dominio efector de anticuerpo que puede mediar una o más de ADCC, ADCP, CDC o ADC y ejercer un efecto citostático o citotóxico sobre un cáncer que expresa CD70 o ejercer un efecto inmunosupresor sobre un trastorno inmunológico que expresa CD70 en ausencia de conjugación con un agente citostático o citotóxico. Los anticuerpos ilustrados allí se basan en las regiones de unión a antígeno de dos anticuerpos monoclonales, denominados 1F6 y 2F2.

El documento WO2007/038637 describe anticuerpos monoclonales completamente humanos que se unen a CD70. Estos anticuerpos se caracterizan por unirse al CD70 humano con una KD de 1*10-7 M o menos. Los anticuerpos también se unen a líneas celulares tumorales de carcinoma de células renales que expresan CD70, tales como 786-O, y son internalizados por ellas.

ARGX-110 es un anticuerpo IgG1 anti-CD70 que se ha demostrado que inhibe la interacción de CD70 con su receptor CD27 (Silence et al. (2014) MAbs. Mar-Abr;6(2):523-32). En particular, se ha demostrado que ARGX-110 inhibe la señalización de CD27 inducida por CD70. Los niveles de señalización de CD27 pueden determinarse, por ejemplo, midiendo la CD27 soluble en suero como describen Riether et al. (ídem) o de los de la expresión de IL-8 como se describen Silence et al. (ídem). Sin vincularse a ninguna teoría, se cree que la inhibición de la señalización de CD27 reduce la activación y/o la proliferación de células Treg, reduciendo así la inhibición de las células T efectoras antitumorales. También se ha demostrado que AGRX-110 agota las células tumorales que expresan CD70. En particular, se ha demostrado que ARGX-110 lisa células tumorales que expresan CD70 mediante citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), y también aumenta la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) de células que expresan CD70 (Silence et al., ídem).

Las secuencias de aminoácidos de CDR, VH y VL de ARGX-110 se muestran en la siguiente tabla.

Tabla 1

La molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden o consisten en las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (dominio VH) que comprende o consiste en una secuencia al menos 70%, al menos 80%, al menos 90% o al menos 95% idéntica a SEQ ID. NO: 4 y un dominio de cadena ligera variable (dominio VL) que comprende o consiste en una secuencia al menos 70%, al menos 80%, al menos 90% o al menos 95% idéntica a la SEQ ID NO: 8. En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (dominio VH) que comprende o que consiste en SEQ ID NO: 4 y un dominio de cadena ligera variable (dominio VL) que comprende o que consiste en SEQ ID NO: 8.

Las moléculas de anticuerpo contra CD70 que pueden incorporarse a la invención incluyen productos conjugados de fármaco-anticuerpo (ADC). Los ADC son anticuerpos anclados a agentes activos, por ejemplo, auristatinas y maitansinas u otros agentes citotóxicos. Ciertos ADC mantienen el bloqueo de anticuerpos y/o la función efectora (p. ej., ADCC, CDC, ADCP) al mismo tiempo que suministran el agente activo conjugado a las células que expresan la diana (p. ej., CD70). Los ejemplos de ADC anti-CD70 incluyen vorsetuzumab mafodotin (también conocido como SGN-75, Seattle Genetics), SGN-70A (Seattle Genetics) y MDX-1203/BMS936561 (Bristol-Myers Squibb). Los ADC anti-CD70 también se describen en los documentos WO2008074004 y WO2004073656.

Las moléculas de anticuerpo contra CD70 que pueden incorporarse a la invención también incluyen proteínas de fusión SIRPa-molécula de anticuerpo o "licMAB" (anticuerpos monoclonales de punto de control inhibidor local), como describen por ejemplo Ponce et al. (2017) ibídem. Estas proteínas de fusión SIRPa-molécula de anticuerpo o licMAB comprenden un anticuerpo o una molécula de anticuerpo (en este caso una molécula de anticuerpo contra CD70 según las reivindicaciones) fusionada a un dominio de la proteína SIRPa, en particular, el dominio extracelular tipo V de inmunoglobulina.

Anticuerpos contra CML diana

Anticuerpos contra TIM-3 y Galectina-9

De acuerdo con las reivindicaciones, las moléculas de anticuerpo que se unen a CML diana que pueden incorporarse a la invención descrita en el presente documento incluyen moléculas de anticuerpo que median sus efectos a través de TIM-3. Estos efectos pueden estar mediados mediante la unión directa a TIM-3 o mediante la unión a una CML diana asociada con la señalización de TIM-3. En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo contra CML diana de la invención inhiben la interacción de TIM-3 con una o más proteínas que interactúan con TIM-3. Las proteínas que interactúan con TIM-3 pueden seleccionarse entre: CEACAM-1; HMGB-1; fosfatidilserina; Galectina-9; LILRB2; y sus combinaciones. En una realización, la molécula de anticuerpo contra CML diana de la invención inhibe la interacción de TIM-3 con su ligando, Galectina-9. En una realización, la molécula de anticuerpo contra CML diana de la invención inhibe la interacción de TIM-3 con su ligando, LILRB2.

En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo contra CML diana de la invención se une a TIM-3. Para realizaciones en donde la CML diana es TIM-3, la molécula de anticuerpo puede lograr uno o más de los siguientes efectos: menor señalización de NF-^kB; menor señalización de Wnt/p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones. Para las moléculas de anticuerpo que se unen a TIM3, las moléculas de anticuerpo pueden inhibir la interacción de TIM-3 con una o más proteínas que interactúan con TIM-3. Las proteínas que interactúan con TIM-3 pueden seleccionarse entre: CEACAM-1; HMGB-1; fosfatidilserina; Galectina-9; y sus combinaciones. En una realización, la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 inhibe la interacción de TIM-3 con su ligando, Galectina-9.

En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo contra CML diana de la invención inhibe la interacción de TIM-3 y LILRB2. En tales realizaciones, la molécula de anticuerpo se une preferiblemente a TIM-3 e inhibe la unión de TIM-3 a LILRB2.

Las moléculas de anticuerpo que se unen a TIM-3 y que pueden incorporarse a la invención descrita en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, los anticuerpos contra TIM-3 descritos en cualquiera de los siguientes: documentos US8.647.623; US8.552.156; US9.605.070; US8.841.418; US9.631.026; US9.556.270; WO2016/111947. Las moléculas de anticuerpo que se unen a TIM-3 y que pueden incorporarse a la invención también incluyen, pero no se limitan a: clon F38-2E2; MBG453 (Novartis); ATIK₂a (Kyowa Kirin).

Las moléculas de anticuerpo que se unen a Galectina-9 y que pueden incorporarse a la invención incluyen, pero no se limita a, el clon 9M1-3.

Anticuerpos contra CD47

En ciertas realizaciones, la invención comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD47. Las moléculas de anticuerpo contra CD47 para su uso en la invención son moléculas de anticuerpo que inhiben la interacción entre CD47 y SIRPa. Como se indica en otra parte del presente documento, la interacción entre el ligando CD47 expresado por la CML y el receptor SIRPa expresado por las células fagocíticas transmite una señal de "no me comas" aguas abajo del receptor SIRPa. Por lo tanto, las moléculas de anticuerpo contra CD47 de la invención pueden aumentar la fagocitosis de células tumorales, particularmente de CML.

Se encuentra disponible una variedad de anticuerpos contra CD47, incluidos anticuerpos contra CD47 en diferentes etapas de desarrollo clínico. El experto apreciará que se puede incorporar a la invención cualquier anticuerpo contra CD47 adecuado para uso terapéutico humano. Los anticuerpos contra CD47 ilustrativos incluyen, pero no se limitan a, Hu5F9-G4; CC-90002; ALX148 y clon B6H12.2.

Anticuerpos contra IL1RAP

En ciertas realizaciones, la invención comprende una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP. Las moléculas de anticuerpo contra IL1RAP para su uso en la invención son preferiblemente moléculas de anticuerpo que se unen a IL1RAP e inhiben la señalización a través del complejo receptor de IL-1 en la superficie celular.

Se han descrito anticuerpos contra IL1RAP, véase Agerstam et al. (2015) ídem, y también los documentos WO2012/098407 y WO2014/100772. El experto apreciará que se puede incorporar a la invención cualquier anticuerpo contra IL1RAP adecuado para uso terapéutico humano.

Anticuerpos contra CML diana derivados de camélidos

Las moléculas de anticuerpo que se unen específicamente a CML diana, particularmente moléculas de anticuerpo que se unen específicamente a TIM-3, Galectina-9, CD47, IL1RAP y/o LILRB2, pueden derivar de camélidos.

Por ejemplo, las moléculas de anticuerpo se pueden seleccionar entre bibliotecas inmunológicas obtenidas mediante un método que comprende la etapa de inmunizar un camélido con la CML diana de interés. El camélido puede inmunizarse con una proteína CML diana o un fragmento polipeptídico de la misma, o con una molécula de ARNm o una molécula de ADNc que expresa la proteína o un fragmento polipeptídico de la misma. Los métodos para producir anticuerpos en especies de camélidos y seleccionar anticuerpos contra dianas preferidas de bibliotecas inmunológicas de camélido se describen, por ejemplo, en el documento WO2010/001251.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo pueden derivarse de camélidos ya que comprenden al menos un bucle hipervariable o una región determinante de complementariedad obtenida de un dominio VH o un dominio VL de una especie de la familia Camelidae. En particular, la molécula de anticuerpo puede comprender dominios VH y/o VL, o CDR de los mismos, obtenidos mediante inmunización activa de camélidos no consanguíneos, p. ej. llamas, con TIM-3, Galectina-9, CD47 o IL1 RAP, por ejemplo.

El término "obtenido de" en este contexto implica una relación estructural, en el sentido de que los HV o CDR de la molécula de anticuerpo incorporan una secuencia de aminoácidos (o variantes menores de la misma) que fue codificada originalmente por un gen de inmunoglobulina de Camelidae. Sin embargo, esto no implica necesariamente una relación particular en términos del procedimiento de producción utilizado para preparar la molécula de anticuerpo.

Las moléculas de anticuerpos derivadas de camélidos pueden derivarse de cualquier especie de camélido, incluyendo, entre otros, llama, dromedario, alpaca, vicuña, guanaco o camello.

Las moléculas de anticuerpo que comprenden dominios VH y VL derivados de camélidos, o CDR de los mismos, normalmente son polipéptidos expresados de forma recombinante y pueden ser polipéptidos quiméricos. El término "polipéptido quimérico" se refiere a un polipéptido artificial (que no se produce de forma natural) que se crea mediante yuxtaposición de dos o más fragmentos peptídicos que de otro modo no se producirían de forma contigua. En esta definición se incluyen polipéptidos quiméricos de "especies" creados mediante yuxtaposición de fragmentos de péptidos codificados por dos o más especies, p. ej. camélido y humano.

En ciertas realizaciones, el dominio VH completo y/o el dominio VL completo se pueden obtener de una especie de la familia Camelidae. En realizaciones específicas, el dominio VH derivado de camélido puede comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 121 y 123, mientras que el dominio VL derivado de camélido puede comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 122 y 124. El dominio VH derivado de camélido y/o el dominio VL derivado de camélido pueden someterse a continuación a modificación de proteínas mediante ingeniería genética, en la que se introducen una o más sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de camélido. Estos cambios realizados por modificación mediante ingeniería genética incluyen preferiblemente sustituciones de aminoácidos con respecto a la secuencia del camélido. Tales cambios incluyen "humanización" o "mutación inversa a secuencias de la línea germinal" en donde uno o más restos de aminoácidos en un dominio VH o VL codificado por camélido se reemplazan por restos equivalentes de un dominio VH o VL homólogo codificado por un ser humano. En ciertas realizaciones, el dominio VH derivado de camélido puede exhibir al menos 90%, 95%, 97%, 98% o 99% de identidad con la secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ ID NO: 9, 11, 13, 15, 17. 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 121 y 123. Alternativamente, o, además, el dominio VL derivado de camélido puede exhibir al menos 90%, 95%, 97%, 98% o 99% de identidad con la secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ ID NO: 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 122 y 124.

Los dominios VH y VL de camélido aislados obtenidos mediante inmunización activa de un camélido (p. ej., llama) con un antígeno de CML diana (por ejemplo) se pueden utilizar como base para modificar genéticamente moléculas de anticuerpos para su uso en la invención descrita en el presente documento. A partir de dominios VH y VL de camélido intactos, es posible modificar genéticamente una o más sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos que se aparten de la secuencia inicial de camélido. En ciertas realizaciones, tales sustituciones, inserciones o deleciones pueden estar presentes en las regiones marco del dominio VH y/o el dominio VL.

En otras realizaciones, se proporcionan moléculas de anticuerpo "quiméricas" que comprenden dominios VH y VL derivados de camélido (o variantes modificadas genéticamente de los mismos) y uno o más dominios constantes de un anticuerpo no de camélido, por ejemplo, dominios constantes codificados por seres humanos (o variantes modificadas genéticamente de los mismos). En tales realizaciones se prefiere que tanto el dominio VH como el dominio VL se obtengan de la misma especie de camélido, por ejemplo, tanto VH como VL pueden ser de Lama glama o tanto VH como VL pueden ser de Lama pacos (antes de la introducción de variación de secuencia de aminoácidos modificada genéticamente). En tales realizaciones, tanto el dominio VH como el VL pueden derivar de un único animal, particularmente de un único animal que haya sido inmunizado activamente con el antígeno de interés.

Como alternativa a los cambios producidos mediante ingeniería genética en la secuencia primaria de aminoácidos de los dominios VH y/o VL de Camelidae, se pueden aislar bucles hipervariables o CDR individuales derivados de camélidos, o combinaciones de los mismos, a partir de dominios v H/VL de camélidos y transferirlos a un marco alternativo (es decir, no de Camelidae), p. ej. un marco VH/VL humana, mediante injerto de CDR.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo que se unen a TIM-3 se seleccionan entre moléculas de anticuerpo que comprenden una combinación de CDR3 de cadena pesada variable (HCDR3), CDR2 de cadena pesada variable (HCDR2) y CDR1 de cadena pesada variable (HCDR1), CDR3 de cadena ligera variable (LCDR3), CDR2 de cadena ligera variable (LCDR2) y CDR1 de cadena ligera variable (LCDR1) seleccionadas entre las siguientes:

(i) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 41; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 40; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 39; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 80; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 79; y L^cDR1 que comprende SEQ ID NO: 78;

(ii) HCd R3 que comprende SEQ ID NO: 43; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 42; HCDR1 que comprende ^sE^qID NO: 39; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 83; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 82; y L^cDR1 que comprende SEQ ID NO: 81;

(iii) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 46; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 45; HCDR1 que comprende ^sE^qID ⁿO: 44; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 86; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 85; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 84;

(iv) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 49; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 48; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 47; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 88; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 82; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 87;

(v) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 52; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 51; HCDR1 que comprende ^sE^qID NO: 50; L^cD^r3 que comprende SEQ ID NO: 91; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 90; y L^cDR1 que comprende SEQ ID NO: 89;

(vi) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 55; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 54; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 53; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 94; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 93; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 92;

(vii) HC^dR3 que comprende SEQ ID NO: 58; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 57; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 56; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 97; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 96; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 95;

(viii) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 60; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 59; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 50; LCDR3 que comprende SEQ iD NO: 100; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 99; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 98;

(ix) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 63; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 62; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 61; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 103; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 102; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 101;

(x) hCd R3 que comprende SEQ ID NO: 65; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 64; HCDR1 que comprende s Eq ID NO: 39; lCd R3 que comprende SEQ ID No : 106; LCDR2 que comprende SEQ Id NO: 105; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 104;

(xi) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 67; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 66; HCDR1 que comprende s Eq ID nO: 50; LCDR3 que comprende SEQ iD NO: 109; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 108; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 107;

(xii) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 69; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 68; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 50; LCDR3 que comprende SEQ iD NO: 112; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 111; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 110;

(xiii) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 72; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 71; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 70; LCDR3 que comprende SEQ iD NO: 115; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 114; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 113;

(xiv) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 74; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 73; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 50; LCDR3 que comprende SEQ iD NO: 117; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 111; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 116; y

(xv) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 77; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 76; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 75; LCDR3 que comprende SEQ iD NO: 120; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 119; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 118.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo que se unen a TIM-3 se seleccionan entre moléculas de anticuerpo que comprenden o consisten en un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) seleccionados entre los siguientes:

(i) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (ii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (iii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (iv) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (v) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (vi) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 20 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (vii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 21 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (viii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (ix) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 26 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (x) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 27 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 28 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma;

(xi) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 29 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 30 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma;

(xii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 31 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 32 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma;

(xiii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 34 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma;

(xiv) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 35 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 36 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma;

(xv) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 37 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo que se unen a IL1RAP se seleccionan entre moléculas de anticuerpo que comprenden una combinación de CDR3 de cadena pesada variable (HCDR3), CDR2 de cadena pesada variable (HCDR2) y CDR1 de cadena pesada variable (HCDR1), CDR3 de cadena ligera variable (LCDR3), cadena ligera variable CDR2 (LCDR2) y cadena ligera variable CDR1 (LCDR1) seleccionadas entre las siguientes:

(i) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 127; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 126; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 125; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 133; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 132; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 131; y

(ii) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 130; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 129; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 128; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 136; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 135; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 134.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo que se unen a IL1RAP se seleccionan entre moléculas de anticuerpo que comprenden o consisten en un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) seleccionados entre los siguiente:

(i) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 121 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 122 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; y (ii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 123 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 124 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma. Para realizaciones en donde los dominios de los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno se definen mediante un porcentaje de identidad de secuencia particular con respecto a una secuencia de referencia, los dominios VH y/o VL pueden conservar secuencias CDR idénticas a las presentes en la secuencia de referencia de modo que la variación esté presente sólo dentro de las regiones marco.

Las moléculas de anticuerpo que comprenden dominios VH y VL derivados de camélidos, o CDR de los mismos, pueden adoptar diversas formas de anticuerpos diferentes en las que están presentes tanto un dominio VH como un dominio VL. Los anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno dentro de la definición de "molécula de anticuerpo" como se emplean en el contexto de las composiciones, kits y anticuerpos reivindicados para su uso se describen en otra parte del presente documento.

Formulación

Las diferentes moléculas de anticuerpo de la invención se pueden combinar o formular de cualquier manera que permita administrar la terapia combinada a un sujeto o paciente que la necesite, preferiblemente un sujeto o paciente humano. Las moléculas de anticuerpo de la invención se pueden formular para administración de dosis única o para administración de dosis múltiples.

Para realizaciones en donde las moléculas de anticuerpo son fragmentos de unión a antígeno, las moléculas de anticuerpo se pueden combinar como un anticuerpo multiespecífico, por ejemplo, un anticuerpo biespecífico. Por ejemplo, si la invención comprende un fragmento Fab que se une a CD70 y un fragmento Fab que se une a una CML diana, los dos fragmentos Fab se pueden incorporar a una única molécula de anticuerpo biespecífico que tiene las dos regiones Fab conjugadas con una porción Fc de IgG. En ciertas realizaciones, la invención comprende o consiste en un anticuerpo multiespecífico, preferiblemente un anticuerpo biespecífico, que comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3. En ciertas realizaciones, la invención comprende o consiste en un anticuerpo multiespecífico, preferiblemente un anticuerpo biespecífico, que comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y una molécula de anticuerpo que se une a CD47. En ciertas realizaciones, la invención comprende o consiste en un anticuerpo multiespecífico, preferiblemente un anticuerpo biespecífico, que comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP.

Los anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos de acuerdo con la presente invención se pueden configurar de acuerdo con cualquier formato de anticuerpo biespecífico/multiespecífico adecuado como se describe en otra parte del presente documento. Por ejemplo, las moléculas de anticuerpo de la invención se pueden incorporar a un formato de anticuerpo biespecífico o multiespecífico de modo que el anticuerpo se una a las diferentes dianas en "trans", por ejemplo, la situación en la que cada brazo Fab del anticuerpo en forma de Y tiene una diferente especificidad de unión. En realizaciones alternativas, las moléculas de anticuerpo se pueden incorporar a un formato de anticuerpo biespecífico o multiespecífico de manera que las dianas estén unidas en la posición "cis". Por ejemplo, las regiones Fab o dominios variables de las mismas pueden ubicarse en extremos opuestos de una porción Fc de IgG. En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo se pueden incorporar en un formato de anticuerpo IgG biespecífico asimétrico en donde la primera molécula de anticuerpo es un fragmento Fab que forma un brazo del anticuerpo en forma de "Y" y la segunda molécula de anticuerpo es un dominio VHH.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo de la invención son moléculas separadas que se formulan conjuntamente, es decir, se formulan como una única composición farmacéutica. Para realizaciones en donde las moléculas de anticuerpo se formulan conjuntamente, la composición es adecuada para la administración simultánea de los dos componentes. La composición se puede formular para administración de dosis única o administración de dosis múltiples. Para realizaciones en las que las moléculas de anticuerpo se formulan conjuntamente, las moléculas de anticuerpo se pueden formular en cantidades equivalentes, por ejemplo, según una razón 1:1 para una composición que comprende la primera y segunda moléculas de anticuerpo que se unen a diferentes dianas. Alternativamente, las moléculas de anticuerpo se pueden formular de manera que la razón de las diferentes moléculas de anticuerpo no sea 1:1. Por ejemplo, para realizaciones en las que la composición comprende o consiste en la primera y segunda moléculas de anticuerpo que se unen a diferentes dianas, la razón de la primera y segunda moléculas de anticuerpo puede ser 2:1, opcionalmente 3:1, opcionalmente 4:1. Alternativamente, las moléculas de anticuerpo se pueden formular según una razón de 1:2, opcionalmente 1:3, opcionalmente 1:4.

En ciertas realizaciones, las moléculas de anticuerpo de la invención se formulan por separado, por ejemplo, como composiciones individuales. Para realizaciones en donde las moléculas de anticuerpo se formulan por separado, existe la posibilidad de administración simultánea o separada de los diferentes componentes o composiciones. Si las moléculas de anticuerpo o las composiciones separadas que las contienen se administran por separado, puede haber una administración secuencial de las moléculas o composiciones de anticuerpo en cualquier orden. Por ejemplo, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 puede administrarse primero seguida de la molécula de anticuerpo que se une a la célula madre leucémica diana o viceversa. El intervalo entre la administración de las moléculas o composiciones de anticuerpos puede ser cualquier intervalo de tiempo adecuado. La administración de las diferentes composiciones puede realizarse una vez (para una administración de dosis única) o repetidamente (para una administración de dosis múltiples).

Para realizaciones en donde las moléculas de anticuerpo se formulan conjuntamente y/o para realizaciones en donde las moléculas de anticuerpo se proporcionan como composiciones separadas, las moléculas de anticuerpo se pueden formular utilizando cualquier portador o excipiente farmacéutico adecuado. Los mecanismos para formular anticuerpos para uso terapéutico humano son bien conocidos en la técnica y son revisan, por ejemplo, por Wang et al. (2007) en Journal of Pharmaceutical Sciences, 96:1-26. Para realizaciones en donde las moléculas de anticuerpo se formulan por separado, los portadores o excipientes farmacéuticos pueden ser diferentes para las diferentes composiciones o los mismos.

Los excipientes farmacéuticamente aceptables que se pueden utilizar para formular las composiciones incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina sérica humana, sustancias tampón tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato de disodio, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa (por ejemplo carboximetilcelulosa sódica), polietilenglicol, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana.

En ciertas realizaciones, las composiciones se formulan para la administración a un sujeto a través de cualquier vía de administración adecuada que incluye, pero no se limita a, inyección intramuscular, intravenosa, intradérmica, intraperitoneal, administración subcutánea, epidural, nasal, oral, rectal, tópica, inhalatoria, bucal (p. ej., sublingual) y transdérmica. Para realizaciones en donde las moléculas de anticuerpo se formulan por separado, cada composición se puede formular para administración a través de una ruta diferente.

Para realizaciones de la invención que comprenden o consisten en agentes además de la molécula de anticuerpo contra CD70 de acuerdo con las reivindicaciones y la molécula de anticuerpo contra CML diana de acuerdo con las reivindicaciones, los uno o más agentes adicionales se pueden formular para administración a través de la misma ruta o a través de una ruta diferente en comparación con la primera y segunda moléculas de anticuerpo. Por ejemplo, en realizaciones que comprenden una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a una CML diana de acuerdo con las reivindicaciones y azacitidina, las moléculas de anticuerpo se pueden administrar por vía intravenosa mientras que la azacitidina se puede administrar por vía subcutánea mediante inyección.

C. Terapia combinada con anticuerpos anti-CD70 e inhibidores de SIRPa

Aunque no forman parte de la presente invención, también se describen en el presente documento combinaciones o terapias combinadas que consisten en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y un agente que inhibe la señalización de SIRPa.

Como se explica en otra parte del presente documento, SIRPa es un receptor expresado en la superficie de células fagocíticas, incluidos en particular macrófagos, neutrófilos y células dendríticas. SIRPa es un receptor del ligando CD47, y este ligando se expresa en la superficie de una variedad de tipos de células diferentes. La unión de CD47 a SIRPa desencadena una vía de señalización intracelular aguas abajo de SIRPa dentro del fagocito que sirve para regular por disminución la actividad fagocítica. La consecuencia de esto es que el eje de señalización CD47-SIRPa promueve la supervivencia de las células que expresan CD47 al impedir la eliminación de estas células por parte de las células fagocíticas del sistema inmunológico.

Como se emplea en el presente documento, se pretende que el término "agente que inhibe la señalización de SIRPa" signifique cualquier agente que interfiera en el eje de señalización CD47-SIRPa de manera que se suprima la señal de "no me comas" generada por esta vía. En algunos ejemplos, el agente que inhibe la señalización de SIRPa es una molécula de anticuerpo que se une a CD47 e inhibe la interacción entre CD47 y SIRPa. En algunos ejemplos, el agente que inhibe la señalización de SIRPa es una molécula de anticuerpo que se une a SIRPa e inhibe la interacción entre CD47 y SIRPa. Los anticuerpos que se unen a CD47 y SIRPa, respectivamente, se conocen en la técnica y podrían incluirse en las combinaciones descritas en el presente documento. Los anticuerpos contra SIRPa ilustrativos adecuados para su uso en las combinaciones descritas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: el clon KWAR23; el clon B4B6; y el clon OX-119.

En algunos ejemplos, el agente que inhibe la señalización de SIRPa es una proteína de fusión de SIRPa-molécula de anticuerpo. Como se define en otra parte del presente documento, las proteínas de fusión de SIRPa-molécula de anticuerpo comprenden SIRPa o un fragmento del mismo junto con un anticuerpo o fragmento del mismo. En algunos ejemplos, la proteína de fusión de SIRPa-molécula de anticuerpo comprende al menos una copia del dominio similar a V de inmunoglobulina de SIRPa, opcionalmente múltiples copias de este dominio similar a V de inmunoglobulina de SIRPa.

En algunos ejemplos, el agente que inhibe la señalización de SIRPa comprende SIRPa o el dominio similar a V de inmunoglobulina del mismo conectado covalentemente a la región Fc de un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo IgG1. En un ejemplo, el agente que inhibe la señalización de SIRPa es TTI-621 (Trillium Therapeutics Inc).

En algunos ejemplos, el agente que inhibe la señalización de SIRPa comprende SIRPa o el dominio similar a V de inmunoglobulina del mismo conectado covalentemente a un anticuerpo IgG de longitud completa, por ejemplo, un anticuerpo IgG1 de longitud completa.

En algunos ejemplos de la combinación, la combinación consiste en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 en donde la molécula de anticuerpo está conectada a SIRPa o está conectada a al menos una copia del dominio similar a V de inmunoglobulina de SIRPa. La conexión es preferiblemente covalente. La molécula de anticuerpo contra CD70 puede estar conectada a múltiples copias del dominio similar a V de inmunoglobulina de SIRPa, por ejemplo, dos, tres, cuatro o más copias. La molécula de anticuerpo contra CD70 se puede conectar al dominio SIRPa directa o indirectamente mediante un conector, por ejemplo, un conector de poliglicina-serina.

De acuerdo con las reivindicaciones, en ejemplos en los que la molécula de anticuerpo contra CD70 está conectada, preferiblemente conectada covalentemente, a al menos una copia del dominio similar a V de inmunoglobulina de SIRPa, la molécula de anticuerpo contra CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

En algunos ejemplos, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 y que está conectada a al menos una copia del dominio similar a V de inmunoglobulina de SIRPa comprende un dominio de cadena pesada variable (dominio VH) que comprende o consiste en una secuencia al menos 70%, al menos 80%, al menos 90% o al menos 95% idéntica a SEQ ID NO: 4 y un dominio de cadena ligera variable (dominio VL) que comprende o consiste en una secuencia al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%% o al menos 95% idéntica a SEQ ID NO: 8. En algunos ejemplos, la molécula de anticuerpo que se une a CD70 y que está conectada a al menos una copia del dominio similar a V de inmunoglobulina de SIRPa comprende un dominio de cadena pesada variable (dominio VH) que comprende o consiste en SEQ ID NO: 4 y un dominio de cadena ligera variable (dominio VL) que comprende o consiste en SEQ ID NO: 8.

D. Agentes adicionales

Las realizaciones según el primer aspecto de la invención pueden incluir, además de las moléculas de anticuerpos y los agentes descritos anteriormente, uno o más agentes anticancerosos adicionales. Tales realizaciones pueden comprender al menos un agente adicional para el tratamiento de tumores malignos mieloides, particularmente para el tratamiento de la LMA.

En ciertas realizaciones, la invención descrita en el presente documento comprende un inhibidor metabólico de nucleósidos (o NMI). Tales realizaciones pueden comprender un agente hipometilante, por ejemplo, azacitidina (también denominada en el presente documento azacitidina, AZA o aza) o decitabina. La azacitidina es un análogo de la citidina y la decitabina es su derivado desoxi. La AZA y la decitabina son inhibidores de las ADN metiltransferasas (DNMT) que se sabe que regulan por incremento la expresión genética mediante la hipometilación del promotor. Esta hipometilación altera la función celular, lo que produce efectos citotóxicos.

En realizaciones particulares, la invención descrita en el presente documento comprende o consiste en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 de acuerdo con las reivindicaciones y azacitidina. En realizaciones particulares, la invención descrita en el presente documento comprende o consiste en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 de acuerdo con las reivindicaciones y decitabina. En realizaciones particulares, la invención descrita en el presente documento comprende o consiste en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP de acuerdo con las reivindicaciones y azacitidina. En realizaciones particulares, la invención descrita en el presente documento comprende o consiste en una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones, una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP de acuerdo con las reivindicaciones y decitabina. Sin desear vincularse a ninguna teoría, se cree que las combinaciones que incorporan una molécula de anticuerpo contra CD70, una molécula de anticuerpo que se une a una CML diana y un agente hipometilante, por ejemplo, azacitidina o decitabina, son particularmente eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas, particularmente de neoplasias malignas mieloides debido a las acciones combinadas de los agentes activos. Como se describe en otra parte del presente documento, CD70, TIM-3, CD47 e IL1RAP se han identificado como dianas regulados por incremento en células madre leucémicas. También se ha descubierto que la expresión de CD70 está regulada por incremento en la superficie de los blastos y linfocitos de LMA de pacientes tratados con el inhibidor metabólico de nucleósidos azacitidina (véanse Richardson y Patel (2014) Nat Rev Rheumatol. 10:72-74; Riether et al. (2015) Science Transl Med. 7:1-12; Zhou et al. (2011) Lupus 20:1365-1371). De ello se deduce que la azacitidina añadida a la invención descrita en el presente documento, por ejemplo, como una estrategia de combinación triple, puede servir para regular por incremento la expresión de CD70 en las CML diana, mejorando así la eficacia de la terapia combinada doble contra CD70-CML diana.

En ciertas realizaciones, la invención descrita en el presente documento comprende un inhibidor de PD-1 (también conocido como "proteína 1 de muerte celular programada" o "CD279"). Alternativamente o, además, la invención descrita en el presente documento puede comprender un inhibidor de PD-L1 o PD-L2 (ligandos de PD-1).

PD-1 y sus ligandos, en particular PD-L1, se han caracterizado relativamente bien como reguladores de puntos de control inmunitarios, y se ha identificado la desregulación de la vía de señalización PD-1-PD-L1 en el microambiente del cáncer como un medio importante por el cual los tumores suprimen la respuesta inmunitaria. El receptor PD-1 se expresa típicamente en una variedad de células inmunitarias, incluidos monocitos, células T, células B, células dendríticas y linfocitos infiltrantes de tumores, y se ha descubierto que el ligando PD-L1 está regulado por incremento en varios tipos diferentes de células tumorales (ver Ohaegbulam et al. (2015) Trends Mol Med. 21(1):24 33). La interacción entre PD-L1 en células tumorales y PD-1 en células inmunitarias, particularmente células T, crea un microambiente tumoral inmunosupresor a través de efectos a nivel de células T citotóxicas CD8+ y también a través de la generación de células Treg (véase Alsaab et al. (2017) Front Pharmacol. 23 de agosto (8):561).

Sin desear vincularse a ninguna teoría, se cree que las combinaciones que comprenden o consisten en una molécula de anticuerpo contra CD70, una molécula de anticuerpo contra TIM-3 y un inhibidor de PD-1 o inhibidor de PD-L1 son particularmente eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas, particularmente de neoplasias malignas mieloides debido a las acciones combinadas de los agentes activos. Como se señaló anteriormente, CD70 y TIM-3 son dianas de puntos de control inmunológico y, por lo tanto, la combinación de moléculas de anticuerpos que se unen específicamente a estas dianas con uno o varios agentes que inhiben una tercera diana de puntos de control inmunológico puede ser particularmente eficaz para el tratamiento de las neoplasias malignas. También se ha demostrado, en un modelo de tumor sólido, que el direccionamiento combinado a TIM-3 y PD-1 es un enfoque terapéutico particularmente eficaz (Sakushi et al. 2010. J Exp Med. 207(10):2187-2194). De ello se deduce que los inhibidores de PD-1 y/o PD-L1 añadidos a la invención descrita en el presente documento, por ejemplo, como una estrategia de combinación triple, pueden mejorar aún más la eficacia de la terapia combinada doble contra CD70-TIM3.

El agente capaz de inhibir PD-1 o PD-L1 puede ser cualquier agente anticanceroso o inhibidor adecuado que tenga especificidad por PD-1, PD-L1 o el eje de señalización PD1-PD-L1. Se han desarrollado muchos agentes capaces de inhibir la actividad de PD-1, PD-L1 o el eje de señalización PD1-PD-L1 como informan, por ejemplo, Alsaab et al. ídem, y cualquiera de estos agentes se puede incorporar a las realizaciones de la presente invención. En ciertas realizaciones, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 puede ser una molécula de anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal.

Los inhibidores de PD-1 para su inclusión en la invención descrita en el presente documento se pueden seleccionar del grupo que incluye, pero sin limitarse a: nivolumab; pembrolizumab; pidilizumab, REGN2810; AMP-224; MEDI0680; y PDR001. Los inhibidores de PD-L1 para su inclusión en la invención descrita en el presente documento pueden seleccionarse del grupo que incluye, pero sin limitarse a: atezolizumab; y avelumab.

En ciertas realizaciones, la invención comprende o consiste en cuatro agentes activos: (i) una primera molécula de anticuerpo que se une específicamente a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones; (ii) una segunda molécula de anticuerpo que se une específicamente a TIM-3 de acuerdo con las reivindicaciones; (iii) un agente hipometilante; y (iv) un agente capaz de inhibir PD-1 o PD-L1. El agente hipometilante es preferiblemente azacitidina. Se entenderá que cada uno de los cuatro agentes activos se puede seleccionar entre cualquiera de las realizaciones específicas descritas en el presente documento para cada agente activo.

La invención descrita en el presente documento puede comprender adicionalmente uno o más agentes anticancerosos adicionales. En ciertas realizaciones, los uno o más agentes anticancerosos adicionales son inhibidores de dianas de puntos de control inmunológico adicionales.

Ciertas realizaciones del primer aspecto de la invención pueden comprender adicionalmente un agente que inhibe la señalización de SIRPa. Los agentes capaces de inhibir la señalización de SIRPa se describen anteriormente. Cualquiera de estos agentes se puede incluir como componente adicional en las realizaciones descritas de acuerdo con el primer aspecto de la invención. Para realizaciones en donde el agente que inhibe la señalización de SIRPa es una proteína de fusión de SIRPa-molécula de anticuerpo, la molécula de anticuerpo a la que está unida la proteína SIRPa o su dominio es preferiblemente una molécula de anticuerpo de la invención, es decir, una molécula de anticuerpo que se une a CD70 de acuerdo con las reivindicaciones o una molécula de anticuerpo que se une a una CML diana de acuerdo con las reivindicaciones. En ciertas realizaciones, el agente que inhibe la señalización de SIRPa es el dominio similar a V de inmunoglobulina de la proteína SIRPa y al menos una copia de este dominio está fusionada a la molécula de anticuerpo contra CD70 de la invención.

Ciertas realizaciones del primer aspecto de la invención pueden comprender uno o más agentes anticancerosos para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas mieloides, por ejemplo, uno o más agentes adecuados para su uso en el tratamiento de la LMA. Los agentes que se pueden incorporar a la invención descrita en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: Venetoclax; Vyxeos; Idhifa (o Enasidenib, un inhibidor de IDH); y Rydapt (midostaurina, un inhibidor de FLT3). En ciertas realizaciones se incluye adicionalmente Venetoclax. En ciertas realizaciones, se incluye adicionalmente Vyxeos.

Cualquier realización de la invención descrita en el presente documento puede envasarse como un kit y, opcionalmente, incluir instrucciones de uso.

E. Métodos de tratamiento

Los métodos para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante cirugía o terapia excluidos por el Artículo 53(c) del EPC no están incluidos en la invención. Las referencias en el presente documento a tales métodos se deben interpretar como métodos en los que se utilizan las composiciones y anticuerpos de la invención.

Las composiciones y anticuerpos descritos en el presente documento son para su uso en métodos de tratamiento de una enfermedad maligna en un sujeto humano.

La presente invención proporciona una molécula de anticuerpo que se une a CD70 para su uso en el tratamiento de una neoplasia maligna en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo se administra combinada con una segunda molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; CD47; e IL1RAP, y en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL), en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

La presente invención también proporciona una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana para su uso en el tratamiento de una neoplasia maligna en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo se administra combinada con una segunda molécula de anticuerpo que se une a CD70, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; CD47; e IL1RAP, y en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL), en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

La presente invención proporciona adicionalmente composiciones según el primer aspecto de la invención para su uso en el tratamiento de una neoplasia maligna en un sujeto humano. Todas las realizaciones descritas anteriormente con relación al primer aspecto de la invención son igualmente aplicables a los métodos descritos en el presente documento.

El término "neoplasia maligna" engloba enfermedades en las que células anormales proliferan de forma descontrolada e invaden los tejidos circundantes. Las células malignas que han ingresado a los sistemas sanguíneo y linfático del organismo son capaces de viajar a sitios distales del organismo y sembrarse en lugares secundarios. En ciertas realizaciones, los métodos descritos en el presente documento son para tratar neoplasias malignas que comprenden la producción de células madre o progenitoras de cáncer que expresan CD70, CD27 o ambos. Como se indica en otra parte del presente documento, se ha detectado una regulación por incremento de la expresión de CD70 en diferentes tipos de cánceres, incluidos carcinomas de células renales, cánceres de mama metastásicos, tumores cerebrales, leucemias, linfomas y carcinomas nasofaríngeos. También se ha detectado la expresión conjunta de CD70 y CD27 en neoplasias malignas del linaje hematopoyético, incluido el linfoma linfoblástico agudo y el linfoma de células T. En ciertas realizaciones, los métodos descritos en el presente documento son para el tratamiento de cualquiera de las neoplasias malignas antes mencionadas asociadas con la expresión de CD70, la expresión de CD27 o ambas.

En ciertas realizaciones, los métodos descritos en el presente documento son para tratar neoplasias malignas que comprenden la producción de células madre o progenitoras de cáncer que expresan una o más CML diana a las que se une una molécula de anticuerpo de la invención. Por ejemplo, se pueden utilizar realizaciones que comprenden una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 para tratar neoplasias malignas que expresan TIM-3. Se pueden utilizar realizaciones que comprenden una molécula de anticuerpo que se une a CD47 para tratar neoplasias malignas que expresan CD47. Se pueden utilizar realizaciones que comprenden una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP para tratar neoplasias malignas que expresan IL1RAP.

En realizaciones particulares, los métodos descritos en el presente documento son para tratar neoplasias malignas mieloides, en donde una neoplasia maligna mieloide se refiere a cualquier enfermedad clonal de células madre o progenitoras hematopoyéticas. La neoplasia maligna mieloide tratada de acuerdo con los métodos de la invención puede ser una neoplasia maligna mieloide recién diagnosticada o una neoplasia maligna mieloide en recaída/refractaria.

Como se describe en otra parte del presente documento, se cree que las composiciones para uso y los anticuerpos para uso según la presente invención son particularmente eficaces para el tratamiento de neoplasias malignas mieloides, por la razón de que CD70, TIM-3 e IL1RAP se han identificado como dianas terapéuticas clave en las neoplasias malignas mieloides, particularmente leucemia mieloide aguda, véanse Kikushige et al. (2015) ídem, Riether et al. (2017) ídem, Theocharides et al. (2012) ídem, Ponce et al. (2017) ídem, Agerstam et al. (2015) ídem. En ciertas realizaciones, la neoplasia maligna mieloide se selecciona entre: leucemia mieloide aguda (LMA); síndromes mielodisplásicos (SMD); neoplasias mieloproliferativas (NMP); leucemia mieloide crónica (LMC); y leucemias mielomonocíticas crónicas (LMMC). En realizaciones preferidas, la neoplasia mieloide es leucemia mieloide aguda (LMA).

Las neoplasias malignas mieloides se pueden categorizar y diagnosticar según la clasificación de la OMS de 2008, en combinación con la actualización de 2016 de esta clasificación, véase en particular Arber et al. (2016) Blood 127(20):2391-2405.

La leucemia mieloide aguda (LMA) se refiere a neoplasias hematopoyéticas que involucran células mieloides. La LMA se caracteriza por la proliferación clonal de precursores mieloides con capacidad de diferenciación reducida. Los pacientes con LMA presentan una acumulación de células blásticas en la médula ósea. Las células blásticas también se acumulan en la sangre periférica de los pacientes con LMA. Típicamente, la LMA se diagnostica si el paciente presenta 20% o más de células blásticas en la médula ósea o en la sangre periférica.

Según la clasificación de la OMS, la LMA en general abarca los siguientes subtipos: LMA con anomalías genéticas recurrentes; LMA con cambios relacionados con mielodisplasia; neoplasias mieloides relacionadas con la terapia; sarcoma mieloide; proliferaciones mieloides relacionadas con el síndrome de Down; neoplasia de células dendríticas plasmocitoides blásticas; y LMA no clasificada de otra manera (p. ej., leucemia megacarioblástica aguda, leucemia basófila aguda).

La LMA también se puede categorizar según la clasificación franco-estadounidense-británica (FAB), que abarca los subtipos: M0 (leucemia mieloblástica aguda, mínimamente diferenciada); M1 (leucemia mieloblástica aguda, sin maduración); M2 (leucemia mieloblástica aguda, con maduración granulocítica); M3 (leucemia promielocítica o promielocítica aguda (LPA)); M4 (leucemia mielomonocítica aguda); M4eo (mielomonocítica junto con eosinofilia de médula ósea); M5 (leucemia monoblástica aguda (M5a) o leucemia monocítica aguda (M5b)); M6 (leucemias eritroides agudas, incluida la eritroleucemia (M6a) y, muy raramente, leucemia eritroide pura (M6b)); o M7 (leucemia megacarioblástica aguda).

Como se emplea en el presente documento, "LMA" se refiere a cualquiera de las afecciones abarcadas por las clasificaciones de la OMS y/o FAB, a menos que se especifique lo contrario. Se considera que ciertos subtipos de LMA tienen un pronóstico más favorable, algunos de pronóstico intermedio y otros de mal pronóstico. El experto sabe qué subtipos entrarían en cada categoría de riesgo.

El síndrome mielodisplásico (SMD) se caracteriza por displasia, citopenia y/o cambios anormales en la celularidad de la médula ósea y/o la diferenciación mieloide, por ejemplo, aumento de la infiltración de células blásticas. Según la clasificación de la OMS, los SMD en general abarcan los siguientes subtipos: SMD con displasia de linaje único (anteriormente denominado "citopenia refractaria con displasia de linaje único", que incluye anemia refractaria, neutropenia refractaria y trombocitopenia refractaria); SMD con sideroblastos en anillo, que incluye subgrupos con displasia de linaje único y displasia de linaje múltiple (anteriormente denominado "anemia refractaria con sideroblastos en anillo"); SMD con displasia de linaje múltiple (anteriormente denominado "citopenia refractaria con displasia de linaje múltiple"); SMD con exceso de blastos (SMD-EB, anteriormente denominado "anemia refractaria con exceso de blastos"), que se puede subclasificar adicionalmente en SMD-EB-1 y SMD-EB-2 según los porcentajes de blastos; SMD con del(5q) aislado; y SMD, sin clasificar.

Los SMD también se pueden clasificar según la clasificación franco-estadounidense-británica (FAB), que abarca los subtipos: M9980/3 (anemia refractaria (AR)); M9982/3 (anemia refractaria con sideroblastos en anillo (ARSA)); M9983/3 (anemia refractaria con exceso de blastos (AREB)); M9984/3 (anemia refractaria con exceso de blastos en transformación (AREB-T)); y M9945/3 (leucemia mielomonocítica crónica (LMMC)).

Como se emplea en el presente documento, "SMD" se refiere a cualquiera de las afecciones abarcadas por las clasificaciones de la OMS y/o FAB, a menos que se especifique lo contrario. Tanto para la LMA como para los SMD, en el presente documento se prefiere la categorización de la OMS.

Las neoplasias mieloproliferativas (NMP) son similares a los SMD, pero según la clasificación de la OMS, las NMP en general abarcan los siguientes subtipos: leucemia mieloide crónica (LMC); leucemia neutrofílica crónica (LNC); policitemia vera (PV); mielofibrosis primaria (MFP); Trombocitemia esencial (TE); leucemia eosinofílica crónica, no especificada de otra manera; y NMP inclasificable.

La leucemia mielomonocítica crónica (LMMC) y la leucemia mieloide crónica atípica (LMCa) entran dentro de la categoría de trastornos de SMD/NMP según la clasificación de la OMS, debido a que representan neoplasias mieloides con características clínicas, de laboratorio y morfológicas que se superponen entre SMD y NMP.

En ciertas realizaciones, los métodos descritos en el presente documento implican controlar el recuento de blastos del paciente, es decir, el número de células blásticas. Como se emplea en el presente documento, "células blásticas" o "blastos" se refieren a mieloblastos o blastos mieloides que son las células progenitoras mieloides dentro de la médula ósea. En individuos sanos, los blastos no se encuentran en la circulación sanguínea periférica y debe haber menos de 5% de células blásticas en la médula ósea. En sujetos con neoplasias malignas mieloides, particularmente LMA y SMD, hay una mayor producción de blastos anormales con potencial de diferenciación alterado, y la producción en exceso de estos blastos anormales puede detectarse realizando el seguimiento del recuento de blastos del paciente en la circulación sanguínea periférica o en la médula ósea o en ambas.

La proporción de células blásticas en la médula ósea o en la sangre periférica se puede evaluar mediante métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, evaluación citométrica de flujo o morfológica celular de células obtenidas de una biopsia de médula ósea del sujeto, o un frotis de sangre periférica. La proporción de blastos se determina frente al total de células en la muestra. Por ejemplo, la citometría de flujo se puede utilizar para determinar la proporción de células blásticas utilizando el número de células CD45dim, SSClow con respecto al número total de células. A modo de ejemplo adicional, se puede utilizar la evaluación morfológica celular para determinar el número de blastos identificados morfológicamente con respecto al número total de células en el campo de visión que se examina. En ciertas realizaciones, se proporcionan métodos para reducir la proporción de células blásticas en la médula ósea a menos de 25%, menos de 20%, por ejemplo, menos de 10%. En ciertas realizaciones se proporcionan métodos para reducir la proporción de células básticas en la médula ósea a menos de 5%. En ciertas realizaciones, se proporcionan métodos para reducir la proporción de células blásticas en la médula ósea entre aproximadamente 5% y aproximadamente 25%, en donde el porcentaje de células blásticas de la médula ósea también se reduce en más de 50% en comparación con el porcentaje de células blásticas de la médula ósea antes de llevar a cabo el método (o pretratamiento).

En ciertas realizaciones, se proporcionan métodos para reducir la proporción de células blásticas en la sangre periférica a menos de 25%, menos de 20%, por ejemplo, menos de 10%. En ciertas realizaciones se proporcionan métodos para reducir la proporción de células básticas en la sangre periférica a menos de 5%. En ciertas realizaciones, se proporcionan métodos para reducir la proporción de células blásticas en la sangre periférica entre aproximadamente 5% y aproximadamente 25%, en donde el porcentaje de células blásticas de la sangre periférica también se reduce en más de 50% en comparación con el porcentaje de células blásticas periféricas antes de llevar a cabo el método (o pretratamiento).

Para la determinación clínica del porcentaje de células blásticas, típicamente se prefiere la evaluación morfológica celular (también conocida como citomorfología).

En realizaciones particulares, los métodos descritos en el presente documento inducen una respuesta completa. En el contexto del tratamiento de la LMA, una respuesta completa o "remisión completa" se define como: blastos de médula ósea <5%; ausencia de blastos circulantes y blastos con varillas de Auer; ausencia de enfermedad extramedular; RAN >1, 0 * 109/L (1000 j L); recuento de plaquetas > 100 * 109/L (100.000 μl), véase Dohner et al. (2017) Blood 129(4): 424-447.

Los métodos pueden lograr una respuesta completa con recuperación de plaquetas, es decir, una respuesta en donde el recuento de plaquetas es > 100 * 109/L (100.000/j L). Los métodos pueden lograr una respuesta completa con recuperación de neutrófilos, es decir, una respuesta en donde el recuento de neutrófilos es > 1,0 * 109/L (1000/|^j L). Alternativamente o, además, los métodos pueden inducir una transfusión independiente de glóbulos rojos o plaquetas, o ambos, durante 8 semanas o más, 10 semanas o más, 12 semanas o más.

En realizaciones particulares, los métodos descritos en el presente documento inducen un estado de enfermedad residual mínima (o ERM) que es negativo.

En ciertas realizaciones, los métodos descritos en el presente documento inducen una respuesta completa sin enfermedad residual mínima (RC^erm-), véase Dohner et al. ídem.

El método puede lograr una respuesta parcial o inducir una remisión parcial. En el contexto del tratamiento de la LMA, una respuesta parcial o una remisión parcial incluyen una disminución del porcentaje de blastos en la médula ósea de 5% a 25% y una disminución del porcentaje de blastos en la médula ósea antes del tratamiento en al menos 50%, véase Dohner et al. ídem.

Los métodos descritos en el presente documento pueden aumentar la supervivencia. El término "supervivencia", como se emplea en el presente documento, se puede referir a supervivencia general, supervivencia a 1 año, supervivencia a 2 años, supervivencia a 5 años, supervivencia libre de eventos, supervivencia libre de progresión. Los métodos descritos en el presente documento pueden aumentar la supervivencia en comparación con el tratamiento de referencia para la enfermedad o afección particular que se vaya a tratar. El tratamiento de referencia también se puede identificar como la mejor práctica, la atención de referencia, la atención médica de referencia o la terapia de referencia. Para cualquier enfermedad determinada, puede haber uno o más tratamientos de referencia dependiendo de las diferentes prácticas clínicas, por ejemplo, en diferentes países. Los tratamientos que ya están disponibles para las neoplasias malignas mieloides son variados e incluyen quimioterapia, radioterapia, trasplante de células madre y ciertas terapias dirigidas. Además, las directrices clínicas tanto en EE. UU. como en Europa rigen el tratamiento convencional de las neoplasias malignas mieloides, por ejemplo, la LMA, véanse O'Donnell et al. (2017) Journal of the National Comprehensive Cancer Network 15(7):926-957 y Dohner et al. (2017) Blood_129(4):424-447. Los métodos de la presente invención pueden aumentar o mejorar la supervivencia con respecto a los pacientes que se someten a cualquiera de los tratamientos convencionales para las neoplasias malignas mieloides.

Los pacientes o sujetos tratados de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento, particularmente aquellos que tienen LMA, pueden tener una enfermedad recién diagnosticada, una enfermedad recidivante o una enfermedad refractaria primaria. Un enfoque convencional de tratamiento para pacientes con LMA recién diagnosticada es el enfoque de "quimioterapia intensiva convencional 7+3", caracterizado por 7 días de dosis altas de citarabina seguidos de 3 días de administración de antraciclina (p. ej., daunorrubicina o idarrubicina). La quimioterapia intensiva se administra con el objetivo de inducir la remisión completa de la LMA, generalmente con la intención de que el paciente se someta a un trasplante de células madre después de una quimioterapia exitosa. La quimioterapia intensiva convencional se asocia con una toxicidad y efectos secundarios importantes, lo que significa que no es adecuada para pacientes que no pueden tolerar estos efectos. Estos pacientes se denominan "no elegibles para la quimioterapia intensiva convencional". Un paciente puede no ser elegible para la quimioterapia intensiva convencional debido a que, por ejemplo, presenta una o más comorbilidades que indican que no toleraría la toxicidad, o los factores pronósticos que caracterizan su enfermedad indican un resultado desfavorable de la quimioterapia intensiva convencional. La determinación de la elegibilidad de un paciente individual para la quimioterapia intensiva convencional la realizaría un médico teniendo en cuenta el historial médico y las pautas clínicas del paciente individual (p. ej., las pautas de la National Comprehensive Cancer Network (NCCN)). Los pacientes con LMA mayores de 60 años a menudo se consideran no elegibles para la quimioterapia intensiva convencional, y se deben considerar otros factores, tales como la citogenética y/o las anomalías moleculares de la LMA que se está tratando.

Un paciente que no es elegible para la quimioterapia intensiva convencional puede recibir quimioterapia de intensidad reducida, tal como citarabina a dosis bajas (CDB). Los pacientes que no son elegibles para la quimioterapia intensiva convencional y para quienes la CDB no es apropiada pueden recibir la mejor atención de apoyo (MAA), incluida hidroxiurea (HU) y soporte de transfusión.

Los pacientes o sujetos tratados de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento pueden ser aquellos clasificados como "no elegibles para quimioterapia intensiva convencional". Las composiciones para uso y anticuerpos para uso según la invención comprenden terapias dirigidas que se puede predecir que tendrán menos efectos secundarios. Como tales, los pacientes considerados no elegibles para quimioterapia intensiva convencional, por cualquiera de los motivos identificados anteriormente, pueden ser tratados con las composiciones para uso y anticuerpos para uso según la presente invención.

Los métodos descritos en el presente documento pueden incluir una etapa adicional de someter al paciente o al sujeto a un trasplante de médula ósea. Los métodos descritos en el presente documento también se pueden utilizar para preparar a un paciente o sujeto que tiene una neoplasia maligna mieloide para un trasplante de médula ósea. Como se describió anteriormente, los métodos de la presente invención se pueden llevar a cabo para reducir el número absoluto o relativo de células blásticas en la médula ósea o la sangre periférica. En ciertas realizaciones, los métodos se llevan a cabo para reducir el recuento de células blásticas en la médula ósea y/o la sangre periférica antes del trasplante. Los métodos se pueden utilizar para reducir el recuento de células blásticas a menos de 5% para preparar al paciente o sujeto para un trasplante de médula ósea.

Los métodos descritos en el presente documento pueden incluir la administración de agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo, agentes anticancerosos adicionales. En ciertas realizaciones, los métodos comprenden la administración de uno o más agentes para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas mieloides, por ejemplo, agentes adecuados para su uso en el tratamiento de la LMA. Tales agentes incluyen, pero no se limitan a: Venetoclax; Vyxeos; Idhifa (o Enasidenib, un inhibidor de IDH); y Rydapt (midostaurina, un inhibidor de FLT3).

Ejemplos

La invención se entenderá mejor con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes.

Ejemplo 1

Los anticuerpos que se unen específicamente a TIM-3 se generaron inmunizando llama con quimera de TIM-3 y Fc humano recombinante (R&D Systems; Human TIM-3 Ser22 - Arg200; 2365-TM; lote HKG081212A) en dosis de 80 |jg (1a y 2a inyecciones) y 40 |jg (inyecciones 3-6) y creando bibliotecas Fab para el escrutinio, como se describe, por ejemplo, en el documento WO2010/001251.

Las secuencias de CDR, VH y VL de los clones Fab seleccionados de las bibliotecas se muestran en las Tablas 2, 3 y 4 a continuación.

Ċ

Ċ

Ċ

Tabla 3 Secuencias CDR de cadena pesada de Fab que se unen a TIM-3

Tabla 4 Secuencias CDR de cadena ligera de Fab que se unen a TIM-3

Los Fab mostrados en las tablas anteriores se caracterizaron con respecto a su unión a TIM-3 mediante análisis Biacore y mediante ELISA. Los resultados se muestran en la Tabla 5 a continuación.

Tabla 5 Unión de clones Fab a TIM-3 medida por Biacore o ELISA.

Ejemplo 2

Los anticuerpos que se unen específicamente a IL1RAP se generaron inmunizando llama con la Proteína Quimera de IL-1RAP/IL-1 R3 y Fc humano recombinante (R&D Systems: Ser21 Glu359/extremo C-terminal etiquetado con HIS; Núm. Cat. 676-CP) y creando bibliotecas Fab para el escrutinio, como se describe, por ejemplo, en el documento WO2010/001251.

Las secuencias de CDR, VH y VL de los clones Fab seleccionados de las bibliotecas se muestran en las Tablas 6, 7 y 8 a continuación.

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Tabla 7 Secuencias de CDR de cadena pesada de Fab que se unen a IL1 RAP

Tabla 8 Secuencias de CDR de cadena pesada de Fab que se unen a IL1RAP

Ejemplo 3 Eficacia combinada de anticuerpos anti-TIM-3 y anti-CD70 medida mediante la actividad ADCP La eficacia combinada de los anticuerpos anti-TIM-3 y anti-CD70 se evaluó midiendo la destrucción mediada por fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) de la línea celular BDCM derivada de LMA. Se trataron células BDCM con membranas celulares marcadas con PKH26 con diferentes concentraciones del anticuerpo dirigido a CD70 ARGX-110 solo o combinado con 10 μg/ml de los clones de anticuerpos anti-TIM-3 1A11 y 2B10 (IgG1 humana) - véase el Ejemplo 1. Los macrófagos con capacidad de fagocitosis se diferenciaron de la línea celular monocítica THP-1 mediante tratamiento con PMA. Se añadieron macrófagos activados a las células BDCM pretratadas con anticuerpos y se incubaron conjuntamente con las células cancerosas durante una hora a 37°C. Después del lavado, los macrófagos se tiñeron con anticuerpos anti-CD11b-FITC y se realizó un análisis de citometría de flujo para estimar el número de macrófagos con células cancerosas engullidas (macrófagos doblemente positivos para PKH26+/CD11b+).

Como se muestra en Fig. 1, el pretratamiento de células BDCM que expresan CD70 y TIM-3 con ARGX-110 y anticuerpos anti-TIM3 provocó un aumento significativo en la fagocitosis de las células cancerosas por parte de los macrófagos. Este aumento se observó en comparación con el tratamiento de células con ARGX-110 solo. La eficacia combinada de los anticuerpos anti-TIM3 y anti-CD70 en la destrucción de células de LMA mediada por ADCP se demostró de manera dependiente de la dosis.

Ejemplo 4 Eficacia combinada de anticuerpos anti-IL1RAP y anti-CD70 medida mediante la actividad ADCP La eficacia combinada de los anticuerpos anti-IL1RAP y anti-CD70 se evaluó midiendo la destrucción mediada por fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) de líneas celulares de LMA (MV4-11, U937 y THP-1). Se trataron líneas celulares de LMA teñidas con PKH126 (MV4-11, U937, THP-1) con diferentes concentraciones de ARGX-110 solo o combinado con 10 μg/ml o 1 μg/ml de anticuerpos anti-IL1RAP (IgG1 de ratón clon 89412; mAb IgG2a clon 7E4G1E8 y anticuerpos IgG1 monoclonales humanos - clones 1C1 y 1F10, véase el Ejemplo 2). El ensayo se realizó como se describe en el Ejemplo 3 anterior. Los resultados se muestran en la Figura 2. Se han restado los valores de fondo de fagocitosis, medidos en ausencia de cualquier tratamiento.

Como se muestra en la Fig. 2, El tratamiento previo de líneas celulares de LMA que expresan CD70 e IL1RAP con ARGX-110 y anticuerpos anti-IL1RAP provocó aumentos significativos en la fagocitosis de células cancerosas por parte de macrófagos. Estos aumentos se observaron en comparación con condiciones en las que las células cancerosas solo fueron tratadas con ARGX-110. Los efectos combinados del tratamiento conjunto se mostraron de una manera dependiente de la dosis. Además, se observó eficacia sinérgica cuando las células MV4-11 se trataron con combinaciones de 1 o 10 μg/ml de ARGX-110 más anticuerpos 1C1 o 1F10.

Ejemplo 5 Eficacia combinada de anticuerpos anti-CD47 y anti-CD70 medida mediante la actividad ADCP La eficacia combinada de los anticuerpos anti-CD47 y anti-CD70 se evaluó de manera similar a la descrita anteriormente en los Ejemplos 3 y 4. Las líneas celulares de LMA teñidas con PKH126 (MV4-11, THP-1, GDM-1, U937 y MC -1010) se trataron con diferentes concentraciones de ARGX-110 solo o combinado con 10 μg/ml o 1 μg/ml de anticuerpos anti-CD47 (IgG1 de ratón clon B6H12 y clon CC2C6, e IgG2b de ratón clon BRIC126). El ensayo de ADCP se realizó como se describe anteriormente.

Como se muestra en Fig. 3A, el tratamiento previo de células de LMA que expresan CD70 y CD47 con ARGX-110 y anticuerpos anti-CD47 provocó aumentos en la fagocitosis de las células cancerosas por parte de los macrófagos en el caso de varias de las líneas celulares de LMA. El efecto del tratamiento conjunto con ARGX-110 y el anticuerpo bloqueador B6H12 (que bloquea la interacción entre CD47 y SIRPa promoviendo así la fagocitosis) también se demostró de una manera dependiente de la dosis utilizando células MC-1010 (Fig. 3B).

Ejemplo 6 Eficacia combinada de anticuerpos anti-TIM-3 y anti-CD70 medida mediante la actividad CDC La eficacia combinada de los anticuerpos anti-TIM-3 y anti-CD70 se evaluó midiendo la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Se trataron células BDCM con diferentes concentraciones de ARGX-110 solo o combinado con 10 |jg/ml de anticuerpos anti-TIM-3 (clones 1A11 y 2B10; véase el Ejemplo 1). Las células pretratadas se incubaron con complemento de cría de conejo (COM) al 10% durante una hora a temperatura ambiente. Se añadió un volumen de PBS con yoduro de propidio (Pl) y las muestras se incubaron en la oscuridad durante quince minutos para teñir las células muertas. La determinación del número de células y de las células positivas para yoduro de propidio se realizó mediante citometría de flujo (FACS Canto II). Los resultados se muestran en la Figura 4.

El tratamiento conjunto de células BDCM con ARGX-110 y anticuerpos anti-TIM3 provocó un aumento en la muerte celular dependiente del complemento. Se observaron efectos sinérgicos de las combinaciones de ARGX-110 y anticuerpos anti-TIM-3 a concentraciones de ARGX-110 entre 0,37 y 0,125 jg/ml, mientras que ARGX-110 solo fue capaz de inducir la muerte celular a partir de una concentración de 1,11 jg/ml. Estos efectos sinérgicos del tratamiento conjunto se demostraron de una manera dependiente de la dosis. Ninguno de los anticuerpos anti-TIM-3 pudo provocar una lisis dependiente del complemento cuando se utilizó solo en el ensayo.

Ejemplo 7 Eficacia combinada de anticuerpos anti-IL1RAP y anti-CD70 medida mediante actividad CDC La eficacia combinada de los anticuerpos anti-IL1RAP y anti-CD70 se evaluó midiendo la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Se trataron líneas celulares de LMA (MV4-11 y NOMO-1) con diferentes concentraciones de ARGX-110 solo o en combinación con 10 jg/ml de anticuerpos anti-IL1RAP (clones 1C1 y 1F10) y se realizó el ensayo de CDC como se describe en el Ejemplo. 6. Los resultados se muestran en la Figura 5.

El tratamiento conjunto con ARGX-110 y anticuerpos anti-IL1RAP aumentó la muerte celular dependiente del complemento (Fig. 5, barras oscuras) de ambas líneas celulares. La línea celular MV4-11 fue resistente al tratamiento con ARGX-110 y anti-IL1RAP solo. Sin embargo, se observó un efecto sinérgico con el tratamiento conjunto, provocando la lisis de las células MV4-11 de una manera dependiente de la dosis. La línea celular NOMO-1 sensible a ARGX-110 mostró un efecto dependiente de la dosis después del tratamiento conjunto con ARGX-110 y anticuerpos anti-IL1RAP en comparación con el tratamiento con ARGX-110 solo. En el caso de las células NOMO-1, la monoterapia con anticuerpos anti-IL1RAP indujo una citotoxicidad dependiente del complemento limitada cuando los anticuerpos se utilizaron a una concentración de 10 jg/ml.

Ejemplo 8 Eficacia combinada de anticuerpos anti-CD47 y anti-CD70 medida mediante actividad CDC

La eficacia combinada de los anticuerpos anti-CD47 y anti-CD70 se evaluó midiendo la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Las líneas celulares MV4-11 y NOMO-1 se trataron con diferentes concentraciones de ARGX-110 y anticuerpo anti-CD47 susceptible de CDC BRIC126 (IgG2b de ratón) solo o combinado. El ensayo CDC se realizó como se describe anteriormente. Los resultados se muestran en la Figura 6.

El tratamiento conjunto de las líneas celulares de LMA con ARGX-110 y BRIC126 aumentó la muerte celular dependiente del complemento en ambas líneas celulares, mientras que un anticuerpo IgG1 de ratón bloqueador antic D47 no fue capaz de inducir la respuesta del complemento (clon B6H12) (datos no mostrados). El efecto del tratamiento conjunto con ARGX-110 y BRIC126 se observó de una manera dependiente de la dosis con una concentración óptima de BRIC126 entre 0,041 y 0,123 jg/ml. La línea celular MV4-11 responde sólo débilmente a ARGX-110 y, por lo tanto, se necesitó una concentración tan alta como 10 jg/ml para obtener un efecto combinado. En la línea celular sensible a ARGX-110, NOMO-1, las células fueron lisadas por el complemento a una concentración diez veces menor de ARGX-110 solo. Además, la adición de BRIC126, a aproximadamente 0,1 jg/ml, aumentó aún más la lisis celular por el complemento. La monoterapia con BRIC126 a concentraciones más altas también pudo inducir citotoxicidad dependiente del complemento.

Ejemplo 9 Eficacia combinada de anticuerpos anti-TIM-3, anti-IL1RAP o anti-CD47 y anticuerpos anti-CD70 medida mediante actividad ADCC

La eficacia del anticuerpo anti-CD70 ARGX-110 combinado con anticuerpos anti-TIM-3, anticuerpos anti-IL1RAP o anticuerpos anti-CD47 se midió mediante citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Se investigó la actividad ADCC de las siguientes combinaciones de anticuerpos:

1. ARGX-110 (anti-CD70) y 2B10 (anti-TIM-3)

2. ARGX-110 (anti-CD70) y 1F10 (anti-IL1RAP)

3. ARGX-110 (anti-CD70) y CC2C6 (anti-CD47)

Para todas las combinaciones probadas, la ADCC se midió según el siguiente protocolo. Se trataron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) sanas con IL-2 recombinante (200 UI/ml) durante 15 horas. Se utilizaron las líneas celulares BDCM y NOMO-1 como células diana positivas para CD70, que también expresan CD47 y TIM-3 o IL1RAP1 respectivamente. Se cultivaron conjuntamente células diana (células 3E4) con PBMC (células 3E5) en presencia de anticuerpos en medio RPMI 1640 con FCS al 10% (placa de 96 pocillos). La razón diana/efector (D/E) fue 1/1. Se aplicó una serie de diluciones de ARGX-110 (0-10 μg/mL) solo o combinado con los anticuerpos 2B10 (anti-TIM-3), 1F10 (anti-IL1RAP) o CC2C6 (anti-CD47) a una concentración de 10 y 1 μg/mL. Todos los anticuerpos excepto CC2C6 (IgG1 de ratón) eran de isotipo IgG1 humano. Después de 48 horas de incubación, las células se analizaron mediante citometría de flujo y se midió el % de lisis en función del número de células diana (CD33+ CD3- CD16-) restante. Los resultados se muestran en las Figuras 7 (anti-CD70 anti-TIM-3), 8 (anti-CD70 anti-IL1RAP) y 9 (anti-CD70 anti-CD47).

Como se muestra en la Fig. 7, los anticuerpos tanto anti-CD70 como anti-TIM-3 mostraron una fuerte actividad ADCC solos y alcanzaron una lisis celular máxima de 50-70% a una concentración de 1 μg/ml o superior. Se observó una actividad combinada a una concentración más baja de ARGX-110 (<0,1 μg/ml).

Como se muestra en la Fig. 8, se logró una actividad ADCC combinada en todo el rango de dosis de ARGX-110 cuando se combinó con el anticuerpo anti-IL1RAP 1F10 a 1 μg/ml. Esta combinación alcanzó una lisis celular máxima de 70% a la concentración más alta de ARGX-110 probada (10 μg/ml). El anticuerpo anti-IL1RAP 1F10 mostró una fuerte actividad ADCC solo a 10 μg/ml que dio como resultado una lisis celular de 60-70%.

Como se muestra en la Fig. 9, la actividad ADCC combinada se logró en todo el rango de dosis de ARGX-110 cuando se combinó con el anticuerpo anti-CD47 CC2C6 a 1 o 10 μg/ml. Esta combinación alcanzó una lisis celular máxima de 80% con concentraciones de 0,1 μg/ml o superiores de ARGX-110.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5,

2. La composición de la reivindicación 1, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 70% idéntica a SEQ ID NO: 4 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 70% idéntica a SEQ ID NO: 8.

3. La composición de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la célula madre leucémica diana es TIM-3.

4. La composición de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la célula madre leucémica diana es IL1RAP.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-3 que comprende una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, en donde dicha molécula de anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en moléculas de anticuerpo que comprenden una combinación de CDR3 de cadena pesada variable (HCDR3), CDR2 de cadena pesada variable (HCDR2) y CDR1 de cadena pesada variable (HCd R1), CDR3 de cadena ligera variable (LCDR3), c Dr2 de cadena ligera variable (LCDR2) y CDR1 de cadena ligera variable (LCDR1) seleccionadas entre las siguientes:

(ii) HC^dR3 que comprende SEQ ID NO: 43; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 42; HCDR1 que comprende ^sE^qID NO: 39; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 83; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 82; y L^cDR1 que comprende SEQ ID NO: 81;

(iii) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 46; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 45; HCDR1 que comprende s Eq ID nO: 44; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 86; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 85; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 84;

(v) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 52; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 51; HCDR1 que comprende s Eq ID NO: 50; Lc Dr3 que comprende SEQ ID NO: 91; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 90; y Lc DR1 que comprende SEQ ID NO: 89;

(vii) HCd R3 que comprende SEQ ID NO: 58; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 57; HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 56; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 97; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 96; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 95;

(ix) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 63; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 62; HCDR1 que comprende s Eq ID nO: 61; LCDR3 que comprende SEQ iD NO: 103; LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 102; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 101;

(x) ^hC^dR3 que comprende SEQ ID NO: 65; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 64; HCDR1 que comprende ^sE^qID NO: 39; ^lC^dR3 que comprende SEQ ID N^o: 106; LCDR2 que comprende SEQ I^dNO: 105; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 104;

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5 que comprende una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, en donde dicha molécula de anticuerpo se selecciona entre una molécula de anticuerpo que comprende o consiste en un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) seleccionado entre los siguientes:

(i) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (ii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (iii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (iv) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (v) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (vi) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 20 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (vii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 21 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (viii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (ix) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 26 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (x) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 27 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 28 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (xi) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 29 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 30 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (xii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 31 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 32 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (xiii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 33 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 34 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (xiv) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 35 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 36 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; (xv) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 37 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma.

7. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 4 que comprende una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, en donde dicha molécula de anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en moléculas de anticuerpo que comprenden una combinación de CDR3 de cadena pesada variable (HCDR3), CDR2 de cadena pesada variable (HCDR2) y CDR1 de cadena pesada variable (HCDR1), CDR3 de cadena ligera variable (LCDR3), CDR2 de cadena ligera variable (LCDR2) y CDR1 de cadena ligera variable (LCDR1) seleccionadas entre las siguientes:

(i) HCDR3 que comprende SEQ ID NO: 127; HCDR2 que comprende SEQ ID NO: 126;

HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 125; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 133;

LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 132; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 131; y

(ii) HCd R3 que comprende SEQ ID NO: 130; HCDr2 que comprende SEQ ID NO: 129;

HCDR1 que comprende SEQ ID NO: 128; LCDR3 que comprende SEQ ID NO: 136;

LCDR2 que comprende SEQ ID NO: 135; y LCDR1 que comprende SEQ ID NO: 134.

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4 o 7 que comprende una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, en donde dicha molécula de anticuerpo se selecciona entre una molécula de anticuerpo que comprende o consiste en un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) seleccionado entre los siguientes:

(i) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 121 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 122 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma; y (ii) un dominio VH que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 123 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma, y un dominio VL que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 124 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80%, 90%, 95%, 98% 99% de identidad con la misma.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde al menos una de las moléculas de anticuerpo tiene actividad ADCC, y/o en donde al menos una de las moléculas de anticuerpo tiene actividad CDC, y/o en donde al menos una de las moléculas de anticuerpo tiene actividad ADCP.

10. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano.

11. Una molécula de anticuerpo que se une a CD70 para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 se administra combinada con al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

12. Una molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3 se administra combinada con una molécula de anticuerpo que se une a CD70, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

13. Una molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP para uso en el tratamiento de neoplasias malignas en un sujeto humano, en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP se administra combinada con una molécula de anticuerpo que se une a CD70, en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL) en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5.

14. Un kit que comprende una molécula de anticuerpo que se une a CD70 y al menos una molécula de anticuerpo que se une a una célula madre leucémica diana, en donde la célula madre leucémica diana se selecciona del grupo que consiste en: TIM-3; e IL1RAP, y en donde la molécula de anticuerpo que se une a CD70 comprende un dominio de cadena pesada variable (VH) y un dominio de cadena ligera variable (VL), en donde los dominios VH y VL comprenden las secuencias de CDR:

HCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 3;

HCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 2;

HCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 1;

LCDR3 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 7;

LCDR2 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 6; y

LCDR1 que comprende o consiste en SEQ ID NO: 5,

en donde la molécula de anticuerpo que se une a TIM-3, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-^kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones, y

en donde la molécula de anticuerpo que se une a IL1RAP, cuando está presente, da como resultado una menor señalización de NF-^kB; menor señalización de Wnt/señalización de p-catenina; menor troncalidad de las células de LMA; o una de sus combinaciones.

15. El kit de la reivindicación 14, en donde las moléculas de anticuerpo se definen como en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 9.