ES2926373T3 - Derivados sustituidos de quinazolina y piridopirimidina útiles como agentes anticancerígenos - Google Patents

Derivados sustituidos de quinazolina y piridopirimidina útiles como agentes anticancerígenos Download PDF

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Ping Chen
Hengmiao Cheng
Michael Raymond Collins
Maria Angelica Linton
Andreas Maderna
Asako Nagata
Cynthia Palmer
Simon Planken
Jillian Elyse Spangler
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Abstract

Compuestos de fórmula general (I): procesos para la preparación de estos compuestos, composiciones que contienen estos compuestos y compuestos (I) para uso como inhibidores de la proteína KRAS para el tratamiento del cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados sustituidos de quinazolina y piridopirimidina útiles como agentes anticancerígenos
Campo de la invención
Esta invención se refiere a nuevos derivados de quinazolina y piridopirimidina útiles como inhibidores de la proteína KRAS. Esta invención también se refiere a tales compuestos para uso en el tratamiento del crecimiento celular anormal en mamíferos, especialmente humanos, y a composiciones farmacéuticas como agentes anticancerígenos.
Antecedentes de la invención
El Homólogo del Sarcoma de Rata de Kirsten (KRAS) es una pequeña GTPasa que integra las señales del exterior de la célula a las señales de proliferación y supervivencia dentro de la misma. Esto ocurre a través de la activación mediada por el factor de crecimiento de los Factores de Intercambio de Guanina (GEFs) que eliminan el GDP de Ras y permiten la entrada de GTP que reside en altas concentraciones en el citoplasma. Tras la unión del nucleótido GTP, dos regiones de conmutación desordenadas (conmutador I y conmutador II) interactúan con el fosfato gamma del nucleótido, lo que permite a Ras interactuar con enzimas efectoras a través de un dominio de unión a Ras (RBD) que inicia cascadas de señalización que alteran la expresión génica. La unión de una proteína activadora de GTPasas (GAP) acelera la conversión intrínseca de GTP a GDP y deja a la proteína en un estado inactivo, terminando así la señal (Rajalingam, K., R. Schreck, U. R. Rapp y S. Albert (2007). "Ras oncogenes and their downstream targets." Biochim Biophys Acta 1773(8): 1177-1195.)
Ras está mutado hasta en 20 % de los tumores humanos en las posiciones del codón 12, 13 y 61 que sirven para promover la forma de la proteína unida a GTP. Entre ellos se encuentran los tumores de colon, páncreas y pulmón, estos últimos muestran una mutación KRAS en hasta 25-30 % de todos los tumores, y 40 % de ellos albergan una mutación G12C que se cree que es promovida por los carcinógenos del humo del cigarrillo. El KRAS con mutaciones G12C activa la vía Mapk y promueve el crecimiento y la supervivencia del Cáncer de Pulmón de Células No Pequeñas (CPNM). (Prior, I. A., P. D. Lewis y C. Mattos (2012). "A comprehensive survey of Ras mutations in cancer." Cancer Res 72(10): 2457-2467.)
Desde que se descubrieron las mutaciones de KRAS en los tumores humanos y que la inhibición de la señalización por parte de estas proteínas provocaba la inhibición del fenotipo del cáncer, ha habido un fuerte deseo, tanto por parte de los grupos académicos como de la industria, de encontrar inhibidores de Ras (Feramisco, J. R., R. Clark, G. Wong, N. Arnheim, R. Milley y F. McCormick (1985). "Transient reversion of ras oncogene-induced cell transformation by antibodies specific for amino acid 12 of ras protein." Nature 314(6012): 639-642.) y (McCormick, F. (2015). "KRAS as a Therapeutic Target." Clin Cancer Res 21(8): 1797-1801. Los inhibidores específicos del efector BRaf de KRAS, solos o combinados con otros inhibidores de la vía Mapk, han mostrado respuestas espectaculares en el melanoma, donde este BRaf se activa con frecuencia a través de una mutación (Flaherty, K. T., I. Puzanov, K. B. Kim, A. Ribas, G. A. McArthur, J. A. Sosman, P. J. O'Dwyer, R. J. Lee, J. F. Grippo, K. Nolop y P. B. Chapman (2010). "Inhibition of mutated, activated BRAF in metastatic melanoma." N Engl J Med 363(9): 809-819.) Por el contrario, los inhibidores generales de Mapk no han mostrado respuestas dramáticas en cánceres con KRAS mutante, potencialmente debido a la falta de un índice terapéutico apropiado sobre los tejidos normales o la señalización compensatoria por otras vías de Ras (Turk Turke, A. B., Y. Song, C. Costa, R. Cook, C. L. Arteaga, J. M. Asara y J. A. Engelman (2012). "MEK inhibition leads to PI3K/AKT activation by relieving a negative feedback on ERBB receptors." Cancer Res 72(13): 3228-3237.e, Song et al. 2012) y (Janne, P. A., M. M. van den Heuvel, F. Barlesi, M. Cobo, J. Mazieres, L. Crino, S. Orlov, F. Blackhall, J. Wolf, P. Garrido, A. Poltoratskiy, G. Mariani, D. Ghiorghiu, E. Kilgour, P. Smith, A. Kohlmann, D. J. Carlile, D. Lawrence, K. Bowen y J. Vansteenkiste (2017). "Selumetinib Plus Docetaxel Compared With Docetaxel Alone and Progression-Free Survival in Patients With KRAS-Mutant Advanced Non-Small Cell Lung Cancer: The SELECT-1 Randomized Clinical Trial." Jama 317(18): 1844­ 1853.)
Los compuestos que se unen selectivamente al KRAS mutante son altamente deseables, ya que evitarían el impacto en los tejidos normales y para la inhibición adecuada de la señalización de Ras dentro del tumor para provocar la actividad antitumoral. Recientemente se ha demostrado que G12C retiene el ciclo tanto bioquímicamente como en las células cancerosas creando una oportunidad para interrumpir la activación (Hunter, J. C., A. Manandhar, M. A. Carrasco, D. Gurbani, S. Gondi y K. D. Westover (2015). "Biochemical and Structural Analysis of Common Cancer-Associated KRAS Mutations." Mol Cancer Res 13(9): 1325-1335.) Se describieron compuestos que utilizan la sustitución de cisteína en G12C y para la unión e impiden el intercambio de GDP a GTP (Ostrem, J. M., U. Peters, M. L. Sos, J. A. Wells y K. M. Shokat (2013). "K-Ras(G12C) inhibitors allosterically control GTP affinity and effector interactions." Nature 503(7477): 548­ 551.) Esto hace que la utilización de compuestos de unión a G12C que bloquean KRAS en el estado inactivo sea una oportunidad atractiva para el tratamiento del cáncer.
Sumario de la invención
Dada su función en la regulación de diversos procedimientos biológicos, KRAS es un objetivo atractivo para la modulación con inhibidores de moléculas pequeñas. Hasta la fecha, se conocen algunos moduladores de la proteína KRAS mutante G12C del documento WO 2015/054572, el documento WO 2016/164675, el documento WO 2017/201161 y el documento WO 2017/087528 pero se han desarrollado pocos inhibidores de KRAS eficaces, y ningún inhibidor de KRAS ha entrado en la clínica.
Cada una de las realizaciones de los compuestos de la presente invención descritas a continuación se puede combinar con cualquier otra realización de los compuestos de la presente invención descrita en el presente documento que no sea incompatible con la realización con la que se combina. Además, cada una de las realizaciones que se describen a continuación de la invención contempla dentro de su ámbito sales aceptables para uso farmacéutico de los compuestos de la invención. Por lo tanto, la frase "o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo" está implícita en la descripción de todos los compuestos descritos en la presente memoria.
La invención incluye realizaciones en las que se proporciona un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
o una sal aceptable farmacéuticamente de la misma, en la que
A es -C(H)- o nitrógeno;
B es oxígeno o C(R6)2;
J es:
Figure imgf000003_0002
donde W*' representa el punto de unión a W, y donde J está opcionalmente sustituido con 1 R2;
K es:
o
Figure imgf000003_0003
donde K está opcionalmente sustituido con 1 o 2 R3;
W se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000004_0001
cada R1 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , halógeno, haloalquilo Ci-C6, ciano y N(R6)2 ;
cada R2 es un alquilo C1-C6;
cada R3 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , hidroxi, halógeno y haloalquilo C1-C6 ;
R4 es -X-Y-Z donde:
X está ausente o es oxígeno,
Y está ausente o es un alquilenilo C1-C6, y
Z se selecciona entre H, heterociclo con 3-12 átomos de anillo y cicloalquilo C3-C6,
donde R4 está opcionalmente sustituido por R7;
cada R6 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo, alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 , o dos R6 se unen opcionalmente para formar un heterociclo con 3-12 átomos de anillo o un cicloalquilo C3-C6;
cada R7 es independientemente R7' o C1-C6 alquilo-R7', donde cada R7'se selecciona independientemente del grupo que consiste en: alquilo C1-C6 y -N(R6)2; y
m es 0, 1,2 o 3.
También es el caso que las realizaciones incluyen compuestos de Fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en los que K es:
Figure imgf000004_0002
compuestos de Fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que K se selecciona entre:
Figure imgf000005_0001
los compuestos de Fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, en los que K es:
Figure imgf000005_0002
compuestos de Fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en los que W es:
Figure imgf000005_0003
compuestos de Fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que J se selecciona entre:
Figure imgf000005_0004
Figure imgf000006_0001
y/o compuestos de Fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en los que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000006_0002
preferentemente en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000007_0001
La invención incluye además una realización tal como los compuestos descritos en la Fórmula (II):
Figure imgf000007_0002
o una sal aceptable farmacéuticamente de la misma, en la que
n es 0, 1 o 2;
A es -C(H)- o nitrógeno;
J es:
Figure imgf000007_0003
donde W* representa el punto de unión a W, y donde J está opcionalmente sustituido por 1 R2; W es:
Figure imgf000007_0004
cada R1 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo Ci-C6 , halógeno, haloalquilo Ci-C 6, ciano y N(R6)2 ;
R2 es alquilo C1-C6 ;
cada R3 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , hidroxi, halógeno y haloalquilo C1-C6 ;
R4 es -X-Y-Z donde:
X está ausente o es oxígeno,
Y está ausente o es un alquilenilo C1-C6, y
Z se selecciona entre H, heterociclo con 3-12 átomos de anillo y cicloalquilo C3-C6,
donde R4 está opcionalmente sustituido por R7;
cada R6 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo, alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 , o dos R6 se unen opcionalmente para formar un heterociclo que tiene 3-12 átomos de anillo o un cicloalquilo C3-C6 ;
cada R7 es independientemente R7' o C1-C6 alquilo-R7', donde cada R7'se selecciona independientemente del grupo que consiste en: alquilo C1-C6 y -N(R6)2 ; y
cada m es independientemente 0, 1,2 o 3.
Los compuestos o sales de Fórmula (II) incluyen aquellos en los que
Figure imgf000008_0001
se selecciona del grupo que consiste en
Figure imgf000008_0002
Los compuestos o sales de Fórmula (II) también incluyen aquellos en los que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000008_0003
Figure imgf000009_0001
preferentemente en la que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000009_0002
La invención incluye ademas una realización tal como los compuestos descritos en la Formula (III):
Figure imgf000010_0001
aceptable farmacéuticamente de la misma, en la que
n es 0, 1 o 2;
J es:
Figure imgf000010_0002
donde W* representa el punto de unión a W, y donde J está opcionalmente sustituido por 1 R2;
W se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000010_0003
cada R1 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo Ci-C6 , halógeno, haloalquilo Ci-C6, ciano y N(R6)2 ;
R2 es alquilo C1-C6 ;
cada R3 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , hidroxi, halógeno y haloalquilo C1-C6 ;
R4 es -X-Y-Z donde:
X está ausente o es oxígeno,
Y está ausente o es un alquilenilo C1-C6, y
Z se selecciona entre H, heterociclo con 3-12 átomos de anillo y cicloalquilo C3-C6,
donde R4 está opcionalmente sustituido por R7;
cada R6 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo, alcoxi Ci-C6y alquilo Ci-C6, o dos R6 se unen opcionalmente para formar un heterociclo que tiene 3-12 átomos de anillo o un cicloalquilo C3-C6;
cada R7 es independientemente R7' o C1-C6 alquilo-R7', donde cada R7'se selecciona independientemente del grupo que consiste en: alquilo C1-C6 y -N(R6)2; y
cada m es independientemente 0, 1,2 o 3.
Los compuestos o sales de Fórmula (III) incluyen aquellos en los que
Figure imgf000011_0001
se selecciona del grupo que consiste en
Figure imgf000011_0002
Los compuestos o sales de Fórmula (III) también incluyen aquellos en los que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000011_0003
Figure imgf000012_0001
preferentemente en la que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000012_0002
La invención incluye aún más la realización tal como los compuestos descritos en la Fórmula (IV):
Figure imgf000013_0001
aceptable farmacéuticamente de la misma, en la que
n es 0, 1 o 2;
J es:
Figure imgf000013_0002
donde W* representa el punto de unión a W, y donde J está opcionalmente sustituido por 1 R2;
W se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000013_0003
cada R1 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , halógeno, haloalquilo C1-C6, ciano y N(R6)2 ;
R2 es alquilo C1-C6 ;
cada R3 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo Ci-C6 , hidroxi, halógeno y haloalquilo C1-C6 ;
R4 es -X-Y-Z donde:
X está ausente o es oxígeno,
Y está ausente o es un alquilenilo C1-C6, y
Z se selecciona entre H, heterociclo con 3-12 átomos de anillo y cicloalquilo C3-C6,
donde R4 está opcionalmente sustituido por R7;
cada R6 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo, alcoxi C1-C6y alquilo C1-C6, o dos R6 se unen opcionalmente para formar un heterociclo que tiene 3-12 átomos de anillo o un cicloalquilo C3-C6 ;
cada R7 es independientemente R7' o Ci-C6 alquilo-R7', donde cada R7'se selecciona independientemente del grupo que consiste en: alquilo C1-C6 y -N(R6)2; y
cada m es independientemente 0, 1,2 o 3.
Estos compuestos o sales de Fórmula (IV) incluyen aquellos en los que
Figure imgf000014_0001
Estos compuestos o sales de Fórmula (IV) también incluyen aquellos en los que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000014_0002
Figure imgf000015_0001
preferentemente aquellos en los que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000015_0002
Además, las realizaciones de la invención incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste en:
Figure imgf000015_0003
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Las realizaciones de la invención incluyen preferentemente compuestos seleccionados del grupo que consiste en:
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
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Las realizaciones adicionales de la invención incluyen una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Otras realizaciones de la invención también incluyen un compuesto tal como el descrito en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que contiene dicho compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la actividad de KRAS en una célula.
Otras realizaciones de la invención también incluyen un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se describe en el presente documento, solo, solo o en combinación con uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables para su uso en el tratamiento del cáncer.
El compuesto descrito en el presente documento o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede administrarse en una cantidad comprendida entre aproximadamente 0,01 y 300 mg/kg por día; o entre aproximadamente 0,1 y 100 mg/kg por día.
Otras realizaciones de la invención también incluyen un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se describe en el presente documento para su uso en el tratamiento del crecimiento celular anormal en un mamífero. En ciertas realizaciones de este tipo, el crecimiento celular anormal es cáncer, y en ciertas de esas realizaciones el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de huesos, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de recto, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cuello uterino, carcinoma de vagina, carcinoma de vulva, enfermedad de Hodgkin , cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de tejido blando, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o de uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de pelvis renal, neoplasias del sistema nervioso central (SNC), linfoma del SNC primario, tumores del eje espinal, glioma del tronco encefálico o adenoma hipofisario. Estos cánceres pueden ser cánceres asociados a KRAS. Son de especial interés cánceres tales como cancer de pulmón, cancer de colon, cancer de páncreas y cancer de ovarios.
El tratamiento del cáncer puede incluir: (a) determinar que el cáncer está asociado a una mutación de KRAS; y (b) administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable como se describe en el presente documento, o una composición farmacéutica del mismo. La mutación de KRAS puede ser o incorporar una mutación de G12C. La mutación de KRAS también puede ser o puede incorporar una mutación Ras en los codones 12, 13 y/o 61.
Definiciones
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos utilizados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones tienen los significados que se comentan a continuación. Las variables definidas en esta sección, tales como R, X, n y similares, son sólo para referencia dentro de esta sección, y no tienen el mismo significado que puedan tener fuera de esta sección de definiciones. Además, muchos de los grupos en la presente memoria definidos pueden ser opcionalmente sustituidos.
El término "Alquenilo" se refiere a un grupo alquilo, como se define en la presente memoria, que consiste en al menos dos átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1-, 2- o 3-butenilo, y similares. El término "alquenileno" se refiere a una forma divalente de alquenilo.
El término "alcoxi" se refiere a -O-alquilo donde el alquilo es preferentemente alquilo C1-C8, C1-C7, C1-C6, C1-C5, C1-C4 , C1-C3 , C1-C2 o C1.
El término "alquilo" se refiere a un radical hidrocarburo alifático saturado que incluye grupos de cadena recta y cadena ramificada de 1 a 20 átomos de carbono ("alquilo(C1-C20)"), preferentemente de 1 a 12 átomos de carbono ("alquilo(Cr C12)"), más preferentemente de 1 a 8 átomos de carbono ("alquilo(C1-C8)"), o de 1 a 6 átomos de carbono ("alquilo(Cr Ca)"), o de 1 a 4 átomos de carbono ("alquilo(C1-C4)"). Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n-butilo, /so-butilo, ferf-butilo, pentilo, neopentilo y similares. El término "Haloalquilo", por ejemplo, haloalquilo (C1-Ca) , se refiere a un alquilo que tiene de uno a seis carbonos y uno o más sustituyentes halógenos, por ejemplo -CF3 y -CHF2. El término "alquileno" se refiere a una forma divalente de alquilo.
El término "alquinilo" se refiere a un grupo alquilo, como se define en la presente memoria, que consiste en al menos dos átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, etilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-, 2-, o 3-butinilo, y similares. El término "alquinileno" se refiere a una forma divalente de alquinilo.
El término "amino" se refiere a un grupo -NRxRy, en el que Rx y Ry son ambos hidrógenos.
El término "arilo (Ca-C12)" se refiere a un grupo monocíclico o policíclico de anillos fusionados de 6 a 12 átomos de carbono que tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado. Del mismo modo, "arilo (C5-C12)" se refiere a un grupo monocíclico o policíclico de anillos fusionados de 5 a 12 átomos de carbono que tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado. Ejemplos, sin limitación, de grupos arilo son fenilo, naftalenilo y antracenilo.
El término "arilo (Ca-C12)" también incluye anillos de arilo y sistemas de anillos como los descritos anteriormente que incluyen adicionalmente fusionados a ellos un carbociclo o heterociclo, por ejemplo:
Figure imgf000039_0001
El término "ciano" se refiere a un grupo -C=N. El ciano se puede expresar como CN.
El término "cicloalquilo (C3-C10)" se refiere a un anillo monocíclico de 3 a 10 miembros, a un anillo bicíclico de 3 a 10 miembros, a un anillo bicíclico fusionado de 5 o 6 miembros, un anillo multicíclico fusionado (un sistema de anillos "fusionados" significa que cada anillo del sistema comparte un par adyacente de átomos de carbono con cada uno de los otros anillos del sistema) grupo en el que uno o más de los anillos puede contener uno o más dobles enlaces, pero ninguno de los anillos tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado, y un sistema de anillos todo carbono con puente. Ejemplos, sin limitación, de grupos cicloalquilos son ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopenteno, ciclohexano, ciclohexadieno, adamantano, cicloheptano, cicloheptatrieno y similares.
El término "G12C" se refiere a una mutación en la que el aminoácido en la posición 12 en el KRAS de tipo silvestre ha mutado de una glicina a un residuo de cisteína.
El término "halógeno" o el prefijo "halo" se refiere a fluoruro, a cloro, a bromo y a yodo. Preferentemente, el halógeno se refiere al flúor o al cloro.
"Heteroalquilo" se refiere a un grupo alquilo de cadena recta o cadena ramificada de 1 a 20 átomos de carbono, preferentemente de 1 a 12 átomos de carbono, más preferentemente de 1 a 8 átomos de carbono, o de 1 a 6 átomos de carbono, o de 1 a 4 átomos de carbono, en el que uno, dos o tres de esos átomos de carbono están sustituidos por un heteroátomo seleccionado de entre NRx, N, O, y S(O)n (donde n es 0, 1 o 2). Normalmente los heteroátomos, si hay más de uno, no son adyacentes entre sí. Los heteroalquilos ejemplares incluyen éteres de alquilo, aminas de alquilo secundarias y terciarias, amidas, sulfuros de alquilo y similares. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puente. Tal y como se utiliza en el presente documento, la referencia a la cadena normal cuando se utiliza en el contexto de un grupo puente se refiere a la cadena directa de átomos que une las dos posiciones terminales del grupo puente. El término "Heteroalquileno" se refiere a una forma divalente de heteroalquilo. El término "Heteroalquenileno" se refiere a una forma divalente de heteroalquenilo.
El término "Heteroarilo" se refiere a un grupo monocíclico o de anillo condensado de 5 a 12 átomos en el anillo que contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos en el anillo seleccionados entre NRx, N, O y S(O)n (donde n es 0, 1 o 2 ) y, además, que tiene un sistema de electrones pi completamente conjugado. Los grupos heteroarilo preferidos incluyen heteroarilo (C2-C7) de acuerdo con la definición anterior. Ejemplos, sin limitación, de grupos heteroarilo no sustituidos son pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirimidina, quinoleína, isoquinolina, purina, tetrazol, triazina y carbazol. Un heteroarilo farmacéuticamente aceptable es aquel que es suficientemente estable para ser unido a un compuesto de la invención, formulado en una composición farmacéutica y posteriormente administrado a un paciente que necesite el mismo. Los ejemplos de grupos heteroarilo monocíclicos típicos incluyen, pero no se limitan a:
Figure imgf000041_0001
pirrol furano tiofeno pirazol ¡midazol (pirrolilo) (furanilo) (tiofenilo) (pirazolilo) (¡midazolilo)
Figure imgf000041_0002
isoxazol oxazol isotiazol tiazol 1,2,3-triazol (isoxazolilo) (oxazolilo) (isotiazolilo) (tiazolilo) (1,2,3-triazolilo)
Figure imgf000041_0003
1,3,4-triazol 1-oxa-2,3-diazol 1-oxa-2,4-d¡azol 1-oxa-2,5-d¡azol (1,3,4-triazolilo) (1-oxa-2,3-d¡azol¡lo) (1-oxa-2,4-diazol¡lo) (1-oxa-2,5-d¡azol¡lo)
Figure imgf000041_0004
1-oxa-3,4-diazol 1-tia-2,3-diazol 1-tia-2,4-d¡azol 1-t¡a-2,5-diazol (1-oxa-3,4-d¡azolilo) (1-tia-2,3-diazol¡lo) (1-t¡a-2,4-diazolilo) (1-t¡a-2,5-d¡azolilo)
Figure imgf000041_0005
1-t¡a-3,4-d¡azol tetrazol piridina plradizina pirimidina (1 -tia-3,4-diazol¡lo) (tetrazolilo) (pirídinilo) (piradizinilo) (pirimidinilo)
Figure imgf000041_0006
pirazina
(pirazinilo)
Los ejemplos de grupos heteroarilo de anillos fusionados adecuados incluyen, pero no se limitan a:
Figure imgf000042_0001
benzofuran benzotiofeno indol benzimidazol indazol (benzofuranilo) (benzotiofenilo) (¡ndolilo) (benzimidazolilo) (¡ndazolilo)
Figure imgf000042_0002
benzotriazol pirrólo 2,3-c piridina pirrólo 2,3-c]piridina pirrólo 3,2-clpiridina (benzotriazolilo) (pirrolo[2,3-c]piridinilo) (pirrolo[2,3-c]piridinilo) (pirrolo[3,2-c piridinilo)
Figure imgf000042_0003
pirrolo[3,2-b)piridina imidazol[4,5-c]piridina imidazol(4,5-c]piridina pirazolo[4,3-d]piridina (pirrolo[3,2-b]piridinilo) (imidazo[4,5-c]piridinilo) (imidazo[4,5-c]piridinilo) (P'raz° l° [4,3-d]piridinilo)
Figure imgf000042_0004
pirazolo(4,3-c]pirid¡na pirazolo[3,4-b]piridina pirazolo[3,4-b piridina isoindol (pirazolo [4,3-c]piridinilo) (pirazolo [3,4-b]piridinilo) (pirazolo [3,4-bjpiridinilo) (isomdolilo)
Figure imgf000042_0005
indazol purma indolizino imidazol[1,2-a piridina imidazol[1,5-a]piridina (¡ndazolilo) (punnilo) (¡ndolimnilo) (imidazol[1,2-a]piridinilo) (im idazolfl ,5-a|piridinilo)
Figure imgf000042_0006
pirazolo(1,5-a]piridina pirrolo(1,2-b]piridazina imidazol[1,2-c]pirimidina (pirazolo[1,5-a]piridinilo) (pirrolo[1,2-b]piridazinilo) (imidazol(1,2-c)pirimidinilo)
Figure imgf000043_0001
//-pirrolo[3,2-6]pirazina l//-pirazolo[4,3-¿>]pirazina l//-pirazolo[3,4-</]p¡rimidina 7//-pirrolo[2,3-</]pirimidina
Figure imgf000043_0002
qumohna isoquinolina cinolina quinazolma (quinolinilo) (isoquinolinilo) (cinolinilo) (azaquinazolino)
Figure imgf000043_0003
qumoxalma ftalazina 1,6-nafttiridina 1,7-nafttiridina (quinoxahnilo) (ftalazinilo) (1.6-nafttiridinilo) (1,7-nantiridinilo)
Figure imgf000043_0004
1,8-nantiridina 1,5-nafttiridina 2,6-nafttiridina 2.7-naftt¡r¡d¡na (1,8-nafttiridinilo) (1,5-naftt¡r¡d¡n¡lo) (2,6-namiridinilo) (2,7-nafUiridmilo)
Figure imgf000043_0005
pirido 3,2-d pirimidina p¡r¡do[4,3-d]pírim¡dina pirido 3,4-d pirimidina (p¡r¡do[3,2-d]pirim¡d¡nilo) (p¡rido[4,3-d]pirimid¡n¡lo) (p¡r¡do[3,4-d]p¡rim¡d¡n¡lo)
Figure imgf000043_0006
p¡r¡do[2,3-d]pirimidina pirido[2,3-b]pirazina p¡r¡do[3,4-b]pirazina (p¡r¡do[2,3-d]pirimid¡nilo) (p¡r¡do[2,3-b]p¡raz¡nilo) (p¡rido[3,4-b]piraz¡nilo)
Figure imgf000043_0007
pirim¡do[5,4-d]pirimidina p¡raz¡no[2,3-b]piraz¡na pirimido[4,5-d]pirimidina (pirim¡do[5,4-d]p¡r¡m¡dinilo) (p¡raz¡no[2,3-b]pirazinilo) (p¡rim¡do[4,5-d]pirimidinilo) El término "heterociclilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos o fusionados que tienen de 3 a 12 átomos de anillo que contienen uno, dos, tres o cuatro heteroátomos de anillo seleccionados entre N, O y S(O)n (donde n es 0, 1 o 2), y 1 a 9 átomos de carbono. Los anillos también pueden tener uno o más dobles enlaces. Sin embargo, los anillos no tienen un sistema de electrones pi completamente conjugado. Los heterociclos preferidos incluyen los heterociclos (C2-C6)de acuerdo con la definición anterior.
Ejemplos de grupos heterocíclicos saturados adecuados incluyen, pero no se limitan a:
Figure imgf000044_0001
oxxiirrano tiarano az aizrid riidniono ox oexteatnaono tia titaatnaono az aezteidtiidniana tetrahidrofurano (oxiranilo) (tiaranilo) (aziridinilo) (oxetanilo) (tiatanilo) (azetidinilo) (tetrahidrofuranilo)
Figure imgf000044_0002
tetrahidrotiofeno pirrolidina tetrahidropirano tetrahidrotiopirano (tetrahidrotiofenilo) (pirrolidinilo) (tetrahidropiranilo) (tetrahidrotiopiramlo)
Figure imgf000044_0003
piperidina 1,4-dioxano 1,4-oxatiano morfilina 1,4-ditiano (piperidinilo) (1,4-dioxanilo) (1,4-oxatiamlo) (morfilinilo) (1,4-ditianilo)
Figure imgf000044_0004
piperazina 1,4-azatiano oxepano tiepano azepano (piperazinilo) (1,4-azatianilo) (oxepanilo) (tiepanilo) (azepanilo)
Figure imgf000044_0005
1,4-dioxepano 1,4-oxatiepano 1,4-oxaazepano 1,4-ditiepano
(1,4-dioxepanilo) (1,4-oxatiepanilo) (1,4-oxaazepamlo) (1,4-ditiepanilo)
Figure imgf000044_0006
1,4-tieazepano 1,4-diazepano
(1,4-tieazepanilo) (1,4-diazepanilo)
Ejemplos de grupos heterocíclicos parcialmente insaturados adecuados incluyen, pero no se limitan a:
Figure imgf000045_0001
1,2,3,4-tetrahidropiridina 1,2,5,6-tetrahidropiridina
(1,2,3,4-tetrahidropiridinilo) (1.2,5,6-tetrahidropiridinilo)
Ejemplos de grupos heterocíclicos fusionados adecuados incluyen, pero no se limitan a:
Figure imgf000045_0002
Ejemplos de grupos heterocíclicos condensados semisaturados adecuados incluyen, pero no se limitan a:
Figure imgf000045_0003
Ejemplos de grupos heterocíclicos espirocíclicos adecuados incluyen, pero no se limitan a:
Figure imgf000046_0001
Además, el heterociclo puede contener puentes, incluyendo puentes entre carbonos no adyacentes en el heterociclo, con el puente conteniendo 1-2 carbonos y 0-1 heteroátomos seleccionados de entre NRx, O, y S(O)n (donde n es 0, 1 o 2). El término "hidroxi" o "hidroxilo" se refiere a un grupo -OH.
El término "in vito" se refiere a los procedimientos llevados a cabo en un entorno artificial tal como, por ejemplo, sin limitación, en un tubo de ensayo o medio de cultivo.
El término "in vivo" se refiere a los procedimientos llevados a cabo dentro de un organismo vivo tal como, sin limitación, un ratón, una rata, un conejo y/o un humano.
El término "opcional" u "opcionalmente" significa que el evento o la circunstancia descritos posteriormente pueden ocurrir, pero no necesariamente, y que la descripción incluye casos en los que el evento o la circunstancia ocurren y casos en los que no. Por ejemplo, un "grupo heterociclo opcionalmente sustituido con un grupo alquilo" significa que el alquilo puede estar presente pero no es necesario, y la descripción incluye situaciones en las que el grupo heterociclo está sustituido con un grupo alquilo y situaciones en las que el grupo heterociclo no está sustituido con el grupo alquilo.
El término "Organismo" se refiere a cualquier entidad viva compuesta por al menos una célula. Un organismo vivo puede ser tan simple como, por ejemplo, una sola célula eucariota o tan complejo como un mamífero, incluido el ser humano. Un "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sustancia inerte añadida a una composición farmacéutica para facilitar aún más la administración de un compuesto.
Los ejemplos, sin limitación, de excipientes incluyen carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares y tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles.
Como se utiliza en el presente documento, el término "sal aceptable para uso farmacéutico" se refiere a aquellas sales que conservan la eficacia y las propiedades biológicas del compuesto original. Dichas sales incluyen: (i) sales de adición de ácido, que pueden obtenerse por reacción de la base libre del compuesto original con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico y similares, o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido (D) o (L) málico, ácido maleico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico y similares; o (ii) sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto original se reemplaza por un ión metálico, por ejemplo, un ión de metal alcalino, un ión alcalinotérreo o un ión de aluminio; o se coordina con una base orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina y similares.
Una "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de uno o más de los compuestos descritos en el presente documento, o sales, solvatos, hidratos o profármacos de los mismos fisiológicamente/farmacéuticamente aceptables, con otros componentes químicos, tales como vehículos y excipientes fisiológicamente/farmacéuticamente aceptables. El propósito de una composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo.
Como se utiliza en el presente documento, un "portador aceptable para uso fisiológico/farmacéutico" se refiere a un portador o diluyente que no causa una irritación significativa a un organismo y que no anula la actividad biológica y las propiedades del compuesto administrado.
La "cantidad efectiva para uso terapéutico" se refiere a la cantidad del compuesto que se administra que aliviará en cierta medida uno o más de los síntomas del trastorno que se está tratando. En referencia al tratamiento del cáncer, una cantidad terapéuticamente eficaz se refiere a aquella cantidad que tiene al menos uno de los siguientes efectos: reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, ralentizar hasta cierto punto, preferentemente detener) la metástasis del tumor; inhibir hasta cierto punto (es decir, ralentizar hasta cierto punto, preferentemente detener) el crecimiento del tumor, y aliviar hasta cierto punto (o, preferentemente, eliminar) uno o más síntomas asociados al cáncer.
"Tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a un procedimiento para aliviar o anular un trastorno celular mediado por metiltransferasa y/o sus síntomas concomitantes. En lo que respecta al cáncer en particular, estos términos significan simplemente que la esperanza de vida de un individuo afectado por un cáncer aumentará o que uno o más de los síntomas de la enfermedad se reducirán.
Descripción detallada
Los esquemas generales para sintetizar los compuestos de la invención se pueden encontrar en la sección de Ejemplos en el presente documento.
A menos que se indique lo contrario, todas las referencias en la presente memoria a los compuestos inventivos incluyen referencias a sales, solvatos, hidratos y complejos de los mismos, y a solvatos, hidratos y complejos de sales de los mismos, que incluyen polimorfos, estereoisómeros y versiones isotópicamente etiquetadas de los mismos.
Las sales aceptables para uso farmacéutico incluyen sales de adición de ácidos y de bases (que incluyen disaltos). Las sales de adición de ácido adecuadas se forman a partir de ácidos que forman sales no tóxicas. Ejemplos incluyen el acetato, el aspartato, el benzoato, el besilato, el bicarbonato/carbonato, el bisulfato/sulfato, el borato, el camsilato, el citrato, el edisilato, el esilato, el formiato, el fumarato, el glucepato, el gluconato, el glucuronato, el hexafluorofosfato, el hibenzato, el clorhidrato/cloruro, el bromhidrato/bromuro, el yodidrato/yoduro, el isetionato, el lactato, el malato, el maleato, el malonato, el mesilato, el metilsulfato, el naftilato, el 2-napsilato, el nicotinato, el nitrato, el orotato, el oxalato, el palmitato, el pamoato, el fosfato/fosfato de hidrógeno/fosfato de dihidrógeno, el sacarato, el estearato, el succinato, el tartrato, el tosilato y sales de trifluoroacetato.
Las sales básicas adecuadas se forman a partir de bases que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen las sales de aluminio, arginina, benzatina, calcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnesio, meglumina, olamina, potasio, sodio, trometamina y zinc. Para obtener una revisión de las sales adecuadas, véase "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).
Se puede preparar fácilmente una sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos de la invención mezclando soluciones del compuesto y el ácido o la base deseados, según corresponda. La sal puede precipitar de la solución y recolectarse por filtración o se puede recuperar por evaporación del disolvente. El grado de ionización de la sal puede variar desde completamente ionizado hasta casi no ionizado.
Los compuestos de la invención pueden existir tanto en forma solvatada como no solvatada. El término "solvato" se utiliza en la presente memoria para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas de disolvente aceptables para uso farmacéutico, por ejemplo, el etanol. El término "hidrato" se emplea cuando el disolvente es el agua. Los solvatos aceptables para uso farmacéutico de acuerdo con la invención incluyen hidratos y solvatos en los que el disolvente de cristalización puede estar isotópicamente sustituido, por ejemplo, D2O, cfe-acetona, cfe-DMSO.
También se incluyen en el ámbito de la invención los complejos tales como clatratos, complejos de inclusión fármacohuésped en los que, a diferencia de los solvatos mencionados, el fármaco y el huésped están presentes en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. También se incluyen los complejos del fármaco que contienen dos o más componentes orgánicos y/o inorgánicos que pueden estar en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. Los complejos resultantes pueden ser ionizados, parcialmente ionizados o no ionizados. Para una revisión de tales complejos, véase J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 por Haleblian (agosto 1975)
También están dentro del alcance de la invención polimorfos e isómeros (incluyendo los isómeros ópticos, geométricos y tautoméricos) de los compuestos inventivos.
Los derivados de los compuestos de la invención que pueden tener poca o ninguna actividad farmacológica en sí mismos pueden, cuando se administran a un paciente, convertirse en los compuestos de la invención, por ejemplo, mediante escisión hidrolítica. Estos derivados se denominan "profármacos". Se puede encontrar más información sobre el uso de profármacos en 'Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella) and 'Bioreversible Carriers in Drug Design', Pergamon Press, 1987 (ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association).
Los profármacos se pueden producir, por ejemplo, reemplazando las funcionalidades apropiadas presentes en los compuestos inventivos con ciertas fracciones conocidas por los expertos en la técnica como "profracciones" como se describe, por ejemplo, en "Design of Prodrugs" por H Bundgaard (Elsevier, 1985).
Algunos ejemplos de profármacos incluyen: (i) cuando el compuesto contenga una funcionalidad de ácido carboxílico -(COOH), un éster de la misma, por ejemplo, sustitución del hidrógeno por alquilo (C-i-Ce); ii) cuando el compuesto contenga una funcionalidad de alcohol (-OH), un éter de la misma, por ejemplo, sustitución del hidrógeno por alcanoiloximetilo (Ci­ Ca); y iii) cuando el compuesto contenga una funcionalidad de amino primario o secundario (-NH2 o -NHR donde R t H), una amida del mismo, por ejemplo, sustitución de uno o ambos hidrógenos por alcanoilo (C1-C10) . En las referencias antes mencionadas se pueden encontrar más ejemplos de grupos de reemplazo de acuerdo con los ejemplos anteriores y ejemplos de otros tipos de profármacos.
Finalmente, ciertos compuestos de la presente invención pueden actuar como profármacos de otros compuestos de la presente invención.
Los compuestos de la invención que contienen uno o más átomos de carbono asimétricos pueden existir como dos o más estereoisómeros. Cuando los compuestos de acuerdo con esta invención tienen al menos un centro quiral, pueden existir, por lo tanto, como enantiómeros. Cuando los compuestos poseen dos o más centros quirales, pueden existir además como diastereómeros. Del mismo modo, cuando un compuesto de la invención contiene un grupo ciclopropilo u otro grupo cíclico donde existe quiralidad, y un grupo alquenilo o alquenileno, son posibles los isómeros geométricos cis/trans (o Z/E). Cuando el compuesto contiene, por ejemplo, un grupo ceto u oxima o una fracción aromática, se puede producir isomerismo tautomérico ("tautomerismo"). Un mismo compuesto puede presentar más de un tipo de isomería.
Se incluyen dentro del alcance de la invención todos los estereoisómeros, isómeros geométricos y formas tautoméricas de los compuestos de la invención, incluyendo los compuestos que exhiben más de un tipo de isomería, y mezclas de uno o más de los mismos. También se incluyen las sales de adición de ácido o de base en las que el contraión es ópticamente activo, por ejemplo, D-lactato o L-lisina, o racémico, por ejemplo, DL-tartrato o DL-arginina.
Los isómeros cis/trans pueden separarse mediante técnicas convencionales bien conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, cromatografía y cristalización fraccionada.
Las técnicas convencionales para la preparación/aislamiento de enantiómeros individuales incluyen la síntesis quiral a partir de un precursor ópticamente puro adecuado o la resolución del racemato (o el racemato de una sal o derivado) mediante el uso de, por ejemplo, cromatografía líquida de alta presión (HPLC) quiral o cromatografía de fluidos supercríticos (SFC).
Alternativamente, el racemato (o un precursor racémico) puede reaccionar con un compuesto ópticamente activo adecuado, por ejemplo, un alcohol, o, en el caso de que el compuesto contenga una fracción ácida o básica, un ácido o una base tal como el ácido tartárico o la 1 -feniletilamina. La mezcla diastereomérica resultante se puede separar por cromatografía y/o cristalización fraccionada y uno o ambos diastereoisómeros se convierten en el(los) correspondiente(s) enantiómero(s) puro(s) por medios muy conocidos por los expertos en la técnica.
Los conglomerados estereoisoméricos se pueden separar por medio de técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica; véase, por ejemplo, "Stereochemistry of Organic Compounds" by E L Eliel (Wiley, New York, 1994).
La invención también incluye compuestos de la invención etiquetados isotópicamente, en los que uno o más átomos se sustituyen por un átomo que tiene el mismo número atómico, pero una masa atómica o número de masa diferente de la masa atómica o número de masa que se encuentra habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos adecuados para su inclusión en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, tales como 2H y 3H, carbono, tales como 11C, 13C y 14C, cloro, tal como 3aCl, flúor, tal como 1eF, yodo, tal como 123I y 125I, nitrógeno, tal como 13N y 15N, oxígeno, tal como 15O, 17O y 1eO, fósforo, tal como 32P, y azufre, tal como 35S. Ciertos compuestos de la invención marcados isotópicamente, por ejemplo, los que incorporan un isótopo radiactivo, son útiles en los estudios de distribución tisular de fármacos y/o sustratos. Los isótopos radiactivos tritio, 3H, y carbono-14, 14C, son particularmente útiles para este propósito en vista de su facilidad de incorporación y medios de detección. La sustitución por isótopos más pesados, tal como el deuterio, 2H, puede ofrecer ciertas ventajas terapéuticas derivadas de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una mayor vida media in vivo o una reducción de las necesidades de dosificación, por lo que puede ser preferente en algunas circunstancias. La sustitución con isótopos emisores de positrones, tales como 11C, 1eF, 15O y 13N, puede ser útil en los Estudios de Topografía por Emisión de Positrones (PET) para examinar la ocupación de los receptores del sustrato.
Los compuestos de la invención marcados isotópicamente se pueden preparar generalmente por medio de técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o por medio de procedimientos análogos a los descritos en el presente documento, mediante el uso de un reactivo apropiado marcado isotópicamente en lugar del reactivo no marcado empleado de otro modo.
Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquellos en los que el disolvente de cristalización puede estar isotópicamente sustituido, por ejemplo, D2O, da-acetona, da-DMSO.
Los compuestos de la invención destinados para su uso farmacéutico se pueden administrar como productos cristalinos o amorfos, o mezclas de los mismos. Se pueden obtener, por ejemplo, como tapones sólidos, polvos o películas por procedimientos tales como la precipitación, la cristalización, la liofilización, el secado por aspersión o el secado por evaporación. Para ello se puede utilizar el secado por microondas o por radiofrecuencia.
Los compuestos se pueden administrar solos o en combinación con uno o más compuestos de la invención. Generalmente, se administrarán como una formulación en asociación con uno o más excipientes aceptables para uso farmacéutico. El término "excipiente" se utiliza en la presente memoria para describir cualquier ingrediente que no sea el o los compuestos de la invención. La elección del excipiente dependerá en gran medida de factores tales como el modo particular de administración, el efecto del excipiente sobre la solubilidad y la estabilidad, y la naturaleza de la forma farmacéutica.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración de los compuestos de la invención y los procedimientos para su preparación serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica. Tales composiciones y procedimientos para su preparación se pueden encontrar, por ejemplo, en 'Remington's Pharmaceutical Sciences', 19va edición (Mack Publishing Company, 1995).
Administración oral: Los compuestos de la invención pueden administrarse por vía oral. La administración oral puede implicar la deglución, de modo que el compuesto entra en el tracto gastrointestinal, o puede emplearse la administración bucal o sublingual, por la que el compuesto entra en el torrente sanguíneo directamente desde la boca.
Las formulaciones adecuadas para la administración oral incluyen formulaciones sólidas tales como comprimidos, cápsulas que contienen partículas, líquidos o polvos, pastillas (incluyendo las llenas de líquido), masticables, multi y nanopartículas, geles, soluciones sólidas, liposomas, películas (incluyendo las mucoadhesivas), óvulos, aerosoles y formulaciones líquidas.
Las formulaciones líquidas incluyen suspensiones, soluciones, jarabes y elixires. Dichas formulaciones pueden utilizarse como relleno en cápsulas blandas o duras y suelen incluir un portador, por ejemplo, agua, etanol, polietilenglicol, propilenglicol, metilcelulosa o un aceite adecuado, y uno o más agentes emulsionantes y/o agentes de suspensión. Las formulaciones líquidas también pueden prepararse mediante la reconstitución de un sólido, por ejemplo, a partir de una bolsita.
Los compuestos de la invención también pueden utilizarse en formas de dosificación de disolución y desintegración rápidas, tales como las descritas en Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986 de Liang y Chen (2001).
Para las formas de dosificación en comprimidos, dependiendo de la dosis, el fármaco puede constituir desde 1 % en peso hasta 80 % en peso de la forma de dosificación, más típicamente desde 5 % en peso hasta 60 % en peso de la forma de dosificación. Además del fármaco, los comprimidos suelen contener un desintegrante. Entre los ejemplos de desintegrantes se encuentran almidón glicolato de sodio, carboximetilcelulosa de sodio, carboximetilcelulosa de calcio, croscarmelosa de sodio, crospovidona, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilcelulosa de bajo contenido en alquilo, almidón, almidón pregelatinizado y alginato de sodio.
Generalmente, el desintegrante comprenderá de 1 % en peso a 25 % en peso, preferentemente de 5 % en peso a 20 % en peso de la forma de dosificación.
Los aglutinantes se utilizan generalmente para impartir cualidades cohesivas a una formulación de comprimidos. Entre los aglutinantes adecuados se encuentran celulosa microcristalina, gelatina, azúcares, polietilenglicol, gomas naturales y sintéticas, polivinilpirrolidona, almidón pregelatinizado, hidroxipropilcelulosa y hidroxipropilmetilcelulosa. Los comprimidos también pueden contener diluyentes, tales como lactosa (monohidratada, monohidratada atomizada, anhidra y similares), manitol, xilitol, dextrosa, sacarosa, sorbitol, celulosa microcristalina, almidón y fosfato cálcico dibásico dihidratado.
Los comprimidos también pueden incluir opcionalmente agentes tensioactivos, tales como lauril sulfato de sodio y polisorbato 80, y deslizantes tales como dióxido de silicio y talco. Cuando están presentes, los agentes tensioactivos suelen estar en cantidades desde 0,2 % en peso a5 % en peso del comprimido, y los deslizantes suelen estar desde 0,2 % en peso a 1 % en peso del comprimido.
Los comprimidos también suelen contener lubricantes tales como estearato de magnesio, estearato de calcio, estearato de zinc, estearil fumarato de sodio y mezclas de estearato de magnesio con lauril sulfato de sodio. Los lubricantes generalmente están presentes en cantidades de 0,25 % en peso a 10 % en peso, preferentemente de 0,5 % en peso a 3 % en peso del comprimido.
Otros ingredientes convencionales incluyen antioxidantes, colorantes, los agentes aromatizantes, conservantes y agentes enmascaradores del sabor.
Los comprimidos ejemplares contienen hasta aproximadamente 80 % en peso de fármaco, desde aproximadamente 10 % en peso hasta aproximadamente 90 % en peso de aglutinante, desde aproximadamente 0 % en peso hasta aproximadamente 85 % en peso de diluyente, desde aproximadamente 2 % en peso hasta aproximadamente 10 % en peso de desintegrante y desde aproximadamente 0,25 % en peso hasta aproximadamente 10 % en peso de lubricante.
Las mezclas de comprimidos pueden comprimirse directamente o mediante un rodillo para formar comprimidos. Las mezclas de comprimidos o las porciones de las mezclas pueden ser granuladas en húmedo, en seco o en fundido, o extrudidas antes de su presentación en comprimidos. La formulación final puede incluir una o más capas y puede estar recubierta o sin recubrir; o encapsulada.
La formulación de los comprimidos se discute en detalle en "Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1", por H. Lieberman y L. Lachman, Marcel Dekker, N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X).
Las formulaciones sólidas para administración oral se pueden formular para que sean de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen la liberación retardada, sostenida, pulsada, controlada, dirigida y programada.
Las formulaciones de liberación modificada adecuadas se describen en Patente de EE. UU. No 6,106,864. Los detalles de otras tecnologías de liberación adecuadas, tales como las dispersiones de alta energía y las partículas osmóticas y recubiertas, pueden encontrarse en Verma et al, Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001). El uso de la goma de mascar para lograr la liberación controlada se describe en el documento WO 00/35298.
Administración parenteral
Los compuestos de la invención también se pueden administrar directamente en el torrente sanguíneo, en el músculo o en un órgano interno. Los medios adecuados para la administración parenteral incluyen por vía intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraneal, intramuscular y subcutánea. Los dispositivos adecuados para la administración parenteral incluyen inyectores con aguja (que incluyen microagujas), inyectores sin aguja y técnicas de infusión.
Las formulaciones parenterales son típicamente soluciones acuosas que pueden contener excipientes tales como sales, carbohidratos y agentes amortiguadores (preferentemente a un pH de 3 a 9), pero, para algunas aplicaciones, pueden ser formuladas más adecuadamente como una solución estéril no acuosa o como una forma seca para ser usada en conjunto con un vehículo adecuado tal como agua estéril y libre de pirógenos.
La preparación de formulaciones parenterales bajo condiciones estériles, por ejemplo, por medio de liofilización, se puede llevar a cabo fácilmente mediante el uso de técnicas farmacéuticas estándar muy conocidas por los expertos en la técnica.
La solubilidad de los compuestos de la invención utilizados en la preparación de soluciones parenterales se puede aumentar mediante el uso de técnicas de formulación apropiadas, tales como la incorporación de agentes potenciadores de la solubilidad. Las formulaciones para la administración parenteral pueden ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen la liberación retardada, sostenida, pulsada, controlada, dirigida y programada. Así, los compuestos de la invención se pueden formular como un sólido, un semisólido o un líquido tixotrópico para su administración como depósito implantado que proporciona una liberación modificada del compuesto activo. Algunos ejemplos de estas formulaciones son las mallas extensibles recubiertas de fármacos y las microesferas de PGLA.
Administración tópica
Los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía tópica sobre la piel o las mucosas, es decir, por vía dérmica o transdérmica. Las formulaciones típicas para este fin incluyen geles, hidrogeles, lociones, soluciones, cremas, ungüentos, polvos, apósitos, espumas, películas, parches cutáneos, obleas, implantes, esponjas, fibras, vendajes y microemulsiones. También se pueden utilizar liposomas. Los portadores típicos son alcohol, agua, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, glicerina, polietilenglicol y propilenglicol. Pueden incorporarse potenciadores de la penetración; véase, por ejemplo, J Pharm Sci, 88 (10), 955-958 de Finnin y Morgan (octubre de 1999). Otros medios de administración tópica incluyen electroporación, iontoforesis, fonoforesis, a sonoforesis e inyección con microagujas o sin ellas (por ejemplo , Powderject™, Bioject™, etc.).
Las formulaciones para administración tópica pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen la liberación retardada, sostenida, pulsada, controlada, dirigida y programada.
Administración Inhalada/Intranasal
Los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía intranasal o por inhalación, típicamente en forma de polvo seco (ya sea solo, como una mezcla, por ejemplo, en una mezcla seca con lactosa, o como una partícula de componente mixto, por ejemplo, mezclada con fosfolípidos tal como fosfatidilcolina) de un inhalador de polvo seco o como un aerosol de un contenedor presurizado, bomba, pulverizador, atomizador (preferentemente un atomizador que utiliza electrohidrodinámica para producir una niebla fina) o nebulizador, con o sin el uso de un propulsor adecuado, tales como 1,1,1,2-tetrafluoroetano o 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano. Para el uso intranasal, el polvo puede incluir un agente bioadhesivo, por ejemplo, quitosano o ciclodextrina.
El recipiente presurizado, la bomba, el pulverizador, el atomizador o el nebulizador contienen una solución o una suspensión de los compuestos de la invención que comprende, por ejemplo, etanol, etanol acuoso o un agente alternativo adecuado para dispersar, solubilizar o prolongar la liberación del activo, un propulsor tal como disolvente y un tensioactivo opcional, tal como trioleato de sorbitán, ácido oleico o un ácido oligoláctico.
Antes de su uso en una formulación de polvo seco o de suspensión, el producto farmacéutico se microniza hasta un tamaño adecuado para su administración por inhalación (normalmente menos de 5 micrómetros). Esto puede lograrse mediante cualquier procedimiento de trituración apropiado, tal como molienda por chorro en espiral, molienda por chorro en lecho fluido, procesamiento de fluidos supercríticos para formar nanopartículas, homogeneización a alta presión o secado por aspersión.
Las cápsulas (hechas, por ejemplo, de gelatina o HPMC), las ampolletas y los cartuchos para su uso en un inhalador o insuflador pueden formularse para contener una mezcla de polvo del compuesto de la invención, una base de polvo adecuada tal como la lactosa o el almidón y un modificador del rendimiento tal como l-leucina, manitol o estearato de magnesio. La lactosa puede ser anhidra o en forma de monohidrato, preferentemente esta última. Otros excipientes adecuados son dextrano, glucosa, maltosa, sorbitol, xilitol, fructosa, sacarosa y la trehalosa.
Una formulación de solución adecuada para su uso en un atomizador que utiliza la electrohidrodinámica para producir una niebla fina puede contener de 1 |jg a 20 mg del compuesto de la invención por actuación y el volumen de actuación puede variar de 1 j l a 100 jl. Una formulación típica incluye un compuesto de la invención, propilenglicol, agua estéril, etanol y cloruro de sodio. Los disolventes alternativos que pueden utilizarse en lugar del propilenglicol son glicerol y polietilenglicol.
A las formulaciones de la invención destinadas a la administración inhalada/intranasal pueden añadirse sabores adecuados, tales como mentol y levomentol, o edulcorantes, tales como sacarina o sacarina sódica.
Las formulaciones para la administración inhalada/intranasal pueden formularse para que sean de liberación inmediata y/o modificada utilizando, por ejemplo, ácido poli(DL-láctico-coglicólico (PGLA). Las formulaciones de liberación modificada incluyen la liberación retardada, sostenida, pulsada, controlada, dirigida y programada.
En el caso de los inhaladores de polvo seco y los aerosoles, la unidad de dosificación se determina mediante una válvula que suministra una cantidad medida. Las unidades de acuerdo con la invención están típicamente dispuestas para administrar una dosis medida o "puff" que contiene un montaje deseado del compuesto de la invención. La dosis diaria total puede administrarse en una sola dosis o, más habitualmente, en dosis divididas a lo largo del día.
Administración rectal/intravaginal
Los compuestos de la invención pueden administrarse por vía rectal o vaginal, por ejemplo, en forma de supositorio, pesario o enema. La manteca de cacao es la base tradicional de los supositorios, pero se pueden utilizar varias alternativas según convenga. Las formulaciones para administración rectal/vaginal pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada.
Las formulaciones de liberación modificada incluyen la liberación retardada, sostenida, pulsada, controlada, dirigida y programada.
Administración ocular
Los compuestos de la invención también pueden administrarse directamente en el ojo o el oído, típicamente en forma de gotas de una suspensión o solución micronizada en solución salina estéril isotónica de pH ajustado. Otras formulaciones adecuadas para la administración ocular y auditiva incluyen pomadas, implantes biodegradables (por ejemplo, esponjas de gel absorbibles, colágeno) y no biodegradables (por ejemplo, silicona), obleas, lentes y sistemas particulados o vesiculares, tales como niosomas o liposomas. Un polímero tal como ácido poliacrílico reticulado, polivinilalcohol, ácido hialurónico, un polímero celulósico, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa o metilcelulosa, o un polímero heteropolisacárido, por ejemplo, goma gelana, puede incorporarse junto con un conservante, tal como cloruro de benzalconio. Dichas formulaciones también pueden administrarse por iontoforesis.
Las formulaciones para la administración ocular/aural pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificada incluyen liberación retardada, sostenida, pulsada, controlada, dirigida o programada.
Otras tecnologías
Los compuestos de la invención se pueden combinar con entidades macromoleculares solubles, tales como ciclodextrina y derivados de los mismos adecuados o polímeros que contienen polietilenglicol, para mejorar su solubilidad, velocidad de disolución, enmascaramiento del sabor, biodisponibilidad y/o estabilidad para su uso en cualquiera de los modos de administración mencionados.
Los complejos fármaco-ciclodextrina, por ejemplo, resultan generalmente útiles para la mayoría de las formas de dosificación y vías de administración. Se pueden utilizar tanto complejos de inclusión como de no inclusión. Como una alternativa a la complejación directa con el fármaco, la ciclodextrina se puede utilizar como aditivo auxiliar, es decir, como portador, diluyente o solubilizador. Las más utilizadas para estos fines son las ciclodextrinas alfa, beta y gamma, cuyos ejemplos se pueden encontrar en Publicación PCT Nos. WO 91/11172, WO 94/02518 y WO 98/55148.
Dosificación
La cantidad del compuesto activo que se administre dependerá del sujeto que se esté tratando, de la gravedad del trastorno o la afección, de la tasa de administración, de la disposición del compuesto y de la discreción del médico que lo prescriba. Sin embargo, una dosificación efectiva se encuentra típicamente en el intervalo de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal por día, preferentemente aproximadamente 0,01 a aproximadamente 35 mg/kg/día, en dosis únicas o divididas. Para un ser humano de 70 kg, esto supondría aproximadamente 0,07 y 7000 mg/día, preferentemente aproximadamente 0,7 y 2500 mg/día. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos se pueden utilizar dosis aún mayores sin causar ningún efecto secundario perjudicial, y estas dosis mayores suelen dividirse en diversas dosis más pequeñas para su administración a lo largo del día.
Kit de piezas
En la medida en que sea deseable administrar una combinación de compuestos activos, por ejemplo, con el fin de tratar una enfermedad o afección particular, dos o más composiciones farmacéuticas, de las cuales al menos una contiene un compuesto de acuerdo con la invención, pueden combinarse convenientemente en forma de un kit adecuado para la coadministración de las composiciones. Por lo tanto, el kit incluye dos o más composiciones farmacéuticas separadas, al menos una de las cuales contiene un compuesto de la invención, y medios para retener dichas composiciones por separado, tal como un recipiente, una botella dividida o un paquete de aluminio dividido. Un ejemplo de este tipo de kit es el conocido blíster utilizado para el envasado de comprimidos, cápsulas y similares.
Dicho kit es particularmente adecuado para administrar diferentes formas de dosificación, por ejemplo, oral y parenteral, para administrar las composiciones separadas en diferentes intervalos de dosificación, o para valorar las composiciones separadas entre sí. Para facilitar el cumplimiento, el kit suele incluir instrucciones de administración y puede estar provisto de una ayudamemoria.
Se pueden usar las siguientes abreviaturas en el presente documento: Ac (acetilo); AcCI (cloruro de acetilo); AcOH o HOAc (ácido acético); Ac2O (anhídrido acético); ac. (acuoso); Boc o boc(tert-butoxicarbonilo); BOP ((benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio hexafluorofosfato); B2pin2(bis(pinacolato)diborón); ca. (aproximadamente); CDCh (cloroformo deuterado); CH2Ch y/o DCM (diclorometano); Da Bc O (1,4-diazabiciclo[2,2,2]pctano); DAST (trifluoruro de dietilaminosulfuro); DBU (1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno); DCE (dicloroetano); DEA (dietilamina); DIBAL o DIBAL-H (hidruro de diisobutilaluminio); DIC (diisopropilcarbodiimida); DIPEA o base de Hunig(N,N-diisopropiletilamina); DHP (dihidropirano); DMA (dimetilacetamida); DMF (dimetilformamida);DME (etilenglicol); DMP (Dess-Martin Periodinane); DMAP (4-dimetilaminopiridina); DMSO (dimetilsulfóxido); DMSO-d6 (dimetilsulfóxido deuterado); EDC o EDCI (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida); Et (etilo); Et3N o TEA (trietilamina); EtOH (etanol); EtOAc (acetato de etilo); Et2O (éter dietílico); g o gm (gramo o gramos); HATU (2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluro hexafluorofosfato); HBTU (o-(benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluro hexafluorofosfato); HFIP (1,1,1,3,3-hexafluoro-2-propanol); HMPT (Tris(dimetilamino)fosfina); HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento); HOBT (1-hidroxi-benzotriazol); h o hr (hora u horas, según corresponda); iBu (isobutilo); IPA (alcoholisopropílico); iPr (isopropilo); iPrOAc (acetato de isopropilo); KHMDS (bis(trimetilsilil)amida de potasio); KOAc (acetato de potasio); LAH (hidruro de aluminio y litio); LCMS (cromatografía líquida-espectrometría de masas); LDA (diisopropilamida de litio); LiHMDS (bis(trimetilsilil)amida de litio); mCPBA (ácido metacloroperoxibenzoico); Me (metilo); MeOH (metanol); MeOD (metanol deuterado); MeCN (acetonitrilo); m o min (minuto o minutos, según corresponda); mg (miligramo o miligramos); Ms (metilsulfonilo); MsCI (cloruro de metanosulfonilo); N (normal); NBS (N-bromosuccinimida); NCS (N-clorosuccinimida); NFSI(N-fluorodibenesulfonimida); RMN (resonancia magnética nuclear); nBu (n-butil); nBuLi (n-butil-litio); nPr (n-propil); Pd/C (paladio sobre carbono); Pd2(dba)3 (tris(dibencilideneacetona)dipaladio(0)); Pd(dppf)Ch ([1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II)); Pd[P(o-tol)a]2 (bis[tris(2-metilfenil)fosfina]paladio); Ph (fenilo); PTSA o pTSA (ácido p-Tolueno sulfónico); PPTS: (ptoluenosulfonato de piridio); Rt (tiempo de retención); ta(temperatura ambiente); RuCI(p-cimeno)[(R,R)-Ts-DPEN] ([N-[(1R,2R)-2-(Amino-KN)-1,2-difeniletil]-4-metilbencenosulfonamidato-KN]cloro[(1,2,3,4,5,6-n)-1-metil-4-(1-metiletil)benceno]-rutenio); s o seg (segundo o segundos, según corresponda); Selectfluor (bis(tetrafluoroborato) de N-clorometil-N'-fluorotrietilendiamonio); SEM (2-Trimetilsililetoximetoxi); SFC (cromatografía de fluidos supercríticos); Si-hiol (sílice 1-propanethiol); SK-CCO2-A (cloruro de 2-(dimetilaminometil)ferroceno-1-il-paladio(II) dinorbornilfosfina); T3P (anhídrido propilfosfónico); TBAF (fluoruro de tetrabutil amonio); TBDMSCI (cloruro de t-butildimetilsililo); TBME o MTBE(tert-butilmetil éter); t-BuOH (2-metil-2-propanol, tert-butanol o alcohol tert-butílico); tBu-Xfos (2-di-tert-butilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo); TDA-1 (Tris[2-(2-metoxietoxi)etil]amina o Tris(3,6-dioxaheptil) amina); TEA, NEt3 o Et3N (trietilamina); TFA (ácido trifluoroacético); THF (tetrahidrofurano); THP (tetrahidropirano); TLC (cromatografía en capa fina); TMS (trimetilsililo); TMSCI (cloruro de trimetilsililo); TMSCF3 (trimetil(trifluorometil)silano); Tos o tosil (4-toluenesulfonilo); TOSMIC (p-Toluenesulfonilmetilisocianuro); UV (ultravioleta).
EJEMPLOS
Todas las reacciones en el presente documento y las preparaciones de materiales de partida novedosos utilizados en el presente documento son reactivos convencionales y apropiados y las condiciones de reacción para su realización o preparación, así como los procedimientos para aislar los productos deseados serán bien conocidos por los expertos en la técnica con referencia a los precedentes de la literatura y los ejemplos y preparaciones aquí.
Esquemas sintéticos generales
En un procedimiento sintético general, los compuestos de la estructura general representada por el compuesto IX se preparan de acuerdo con el Procedimiento A:
Figure imgf000053_0001
El compuesto I puede convertirse en la amida primaria utilizando amoníaco en metanol y condensarse con ortoformato de trietilo para proporcionar el compuesto MI. El compuesto III puede convertirse en el compuesto V utilizando la amina IV en presencia del reactivo BOP y DBU, o utilizando POCh en lugar del reactivo BOP y DBU. La sustitución aromática nucleofílica del compuesto V puede llevarse a cabo utilizando un nucleófilo competente, tal como el compuesto VI, en presencia de una base, tal como Cs2CO3 y un disolvente, tal como DMA o DMSO para proporcionar el compuesto VII. Pueden utilizarse aditivos tales como KF si el compuesto VI es un nucleófilo débil. Los grupos protectores pueden eliminarse utilizando un ácido, tal como TFA, seguido de una acilación con un cloruro de ácido en condiciones de Schotten-Baumann para proporcionar el compuesto IX. R, R' y R" son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones que se proporcionan en el presente documento.
En un procedimiento sintético general, los compuestos de la estructura general representada por el compuesto XIX y XX se preparan de acuerdo con el Procedimiento B:
Figure imgf000054_0001
Una amida primaria II puede convertirse en una diona X utilizando trifosgeno. La diona X puede convertirse en un dicloruro utilizando POCh y convertirse secuencialmente en el compuesto XII utilizando la amina IV bajo condiciones básicas. El compuesto XI puede convertirse en el compuesto XIII o XIV utilizando un nucleófilo de oxígeno o nitrógeno bajo condiciones básicas. El compuesto XIII o XIV puede convertirse en el compuesto XV o XVI utilizando un nucleófilo VI bajo condiciones básicas. A continuación, los grupos protectores pueden eliminarse utilizando un ácido, tal como TFA, para dar el compuesto XVII o XVIII, seguido de una acilación con un cloruro de ácido bajo condiciones de Schotten-Baumann para proporcionar el compuesto XIX o XX. R, R', y R", R™, R"", y R™' son como se definen en las realizaciones, los esquemas, los ejemplos y las reivindicaciones proporcionadas en el presente documento.
En un p ro ce d im ie n to s in té tico gene ra l, los co m p u e s to s de la e s truc tu ra g e ne ra l re p re se n ta d a po r los co m p u e s to s XXXIII y XXXIV se p repa ran de acu e rd o con el Procedimiento C:
Figure imgf000055_0001
Los compuestos XXI o XXII pueden convertirse en el compuesto XXIII o XXIV utilizando el nucleófilo VI bajo condiciones básicas. El grupo nitro puede reducirse para proporcionar el compuesto XXV o XXVI, respectivamente. Los compuestos XXV y XXVI pueden convertirse en la amida primaria y condensarse con ortoformato de trietilo para dar el compuesto XXVII o XXVIII. El compuesto XXVII o XXVIII puede convertirse en el compuesto XXIX o XXX utilizando la amina IV en presencia de BOP y DBU. Los grupos protectores pueden eliminarse utilizando un ácido, tal como TFA, para dar el compuesto XXXI o XXXII, seguido de una acilación con un cloruro de ácido bajo condiciones de Schotten-Baumann para proporcionar el compuesto XXXIII o XXXIV. R, R', y R", R™, R"", y R™' son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones proporcionadas en el presente documento.
En un p ro ce d im ie n to s in té tico gene ra l, los co m p u e s to s de la e s truc tu ra g e ne ra l re p re se n ta d a po r los co m p u e s to s LIII y LIV se p repa ran de acu e rd o con el Procedimiento D:
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000056_0002
hidrogenación
Figure imgf000056_0003
Los compuestos XXXV o XXXVI pueden convertirse en el compuesto XXXVIII o XXXIX utilizando la amina XXXVII bajo condiciones básicas. El compuesto XXXVIII o XXXIX puede convertirse en alqueno XL o XLI utilizando acrilato de t-butilo, y un catalizador de paladio, bajo condiciones básicas. El compuesto XL o XLI puede convertirse en el aldehído XLI o XLII mediante el uso de ozono. La adición de la especie aril-litio XLIV al aldehído XLII o XLIII proporciona el alcohol secundario XLV o XLVI. El compuesto XLV o XLVI puede convertirse en el compuesto XLVII o XLVIII utilizando anhídrido acético en piridina. La hidrogenólisis del compuesto XLVII o XLVIII utilizando un catalizador de Pd bajo una atmósfera de hidrógeno proporciona el compuesto XLIX o L. Los grupos protectores pueden eliminarse utilizando un ácido, tal como TFA, para dar el compuesto LI o LII, seguido de una acilación con un cloruro de ácido bajo condiciones de Schotten-Baumann para proporcionar el compuesto LIII o LIV.
En un p ro ce d im ie n to s in té tico genera l, los com p ue s to s de la es truc tu ra ge ne ra l rep rese n tad a po r los com p ue s to s XIX, XX, LXVII y LXVIII se p repa ran de a cu e rd o con el Procedimiento E
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despr
Figure imgf000057_0002
El compuesto XXIII o XXIV puede convertirse en el compuesto LV o LVI utilizando cianato de potasio en presencia de ácido acético. Alternativamente, el éster puede hidrolizarse utilizando KOH en metanol, y el ácido carboxílico resultante se convierte en la amida primaria utilizando HATU y cloruro de amonio, seguido de una ciclización utilizando trifosgeno para dar el compuesto LV o LVI. La diona LV o LVI puede convertirse en el dicloruro LVII o LVIII utilizando POCh. El cloruro de arilo LVII o LVIII puede sustituirse con una amina IV en presencia de DIEA para dar el compuesto LIX o LX. La sustitución aromática nucleófila utilizando un nucleófilo de nitrógeno u oxígeno en presencia de KF y DIEA, en un disolvente polar tal como DMSO, puede proporcionar los compuestos XV, XVI, LXIII o LXIV. Los grupos protectores pueden eliminarse bajo condiciones ácidas y la amina resultante puede convertirse en los compuestos XIX, XX, LXVII o LXVIII utilizando un cloruro ácido bajo condiciones básicas. R, R', y R", R™, R"", y R™" son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones proporcionadas en el presente documento.
En un p ro ce d im ie n to s in té tico gene ra l, los co m p u e s to s de la e s truc tu ra g e ne ra l re p re se n ta d a po r los co m p u e s to s LXXVIII y LXXIX se p repa ran de acu e rd o con el Procedimiento G:
Figure imgf000058_0001
Figure imgf000058_0002
El compuesto LXIX puede convertirse en el compuesto LXX en presencia del reactivo BOP y DBU, o utilizando POCI3 en lugar del reactivo b Op y DBU. La sustitución aromática nucleófila con un compuesto tal como VI puede llevarse a cabo en presencia de una base tal como Cs2CO3 y un disolvente tal como DMA para proporcionar un compuesto tal como LXXl. El compuesto LXXI puede oxidarse a la correspondiente sulfona LXXII o al sulfóxido LXXIII utilizando m-CPBA en un disolvente tal como DCM. La sustitución aromática nucleofica con un alcohol puede llevarse a cabo en presencia de una base tal como LHMDS en un disolvente apropiado tal como THF para proporcionar el compuesto LXXIV. Los grupos protectores pueden eliminarse bajo condiciones ácidas y la amina resultante puede convertirse en el compuesto LXXVIII utilizando un cloruro de ácido bajo condiciones básicas. Alternativamente, la sustitución aromática nucleofica de la sulfona LXXII o del sulfóxido LXXIII con una amina puede lograrse en presencia de una base tal como DIPEA en un disolvente tal como tBuOH. Los grupos protectores pueden eliminarse bajo condiciones ácidas y la amina resultante puede convertirse en el compuesto LXXIX en presencia de un cloruro de ácido bajo condiciones básicas. R, R', y R", R™, R"", y R™" son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones proporcionadas en el presente documento.
En un procedimiento sintético general, los compuestos de la estructura general representada por los compuestos LXXXIV y LXXX se preparan de acuedo con el Procedimiento H:
Figure imgf000059_0001
Los compuestos LXXIV y LXXV pueden reducirse en presencia de un catalizador tal como paladio sobre carbono bajo una atmósfera de hidrógeno para proporcionar los compuestos LXXX y LXXXI, respectivamente. Los compuestos LXXX y LXXXI pueden desprotegerse bajo condiciones ácidas y las aminas resultantes pueden convertirse en las correspondientes acrilamidas LXXXIV y LXXXV en presencia de un cloruro de ácido bajo condiciones básicas. R, R' y R", Rm, R"", y R"" son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones que se proporcionan en el presente documento.
En un procedimiento sintético general, los compuestos de la estructura general representada por el compuesto (VII) se preparan de acuerdo con el Procedimiento I:
Figure imgf000060_0002
O R -0 (R"')(R"*)
Figure imgf000060_0001
base
Figure imgf000060_0003
El compuesto LXXI puede hidrogenarse en presencia de un catalizador tal como PdCl(dppf) y un reductor tal como NaBH4 para proporcionar el compuesto LXXXVI. El compuesto LXXXVI puede oxidarse a una sulfona tal como LXXXVII o a un sulfóxido tal como LXXXVIII en presencia de un oxidante tal como m-CPBA en un disolvente tal como DCM. La sustitución aromática nucleofica de la sulfona LXXXVII o del sulfóxido LXXXVIII con un alcohol puede llevarse a cabo en presencia de una base adecuada, tal como LHMDS, en un disolvente tal como THF para proporcionar el compuesto LXXX. Los grupos protectores pueden eliminarse bajo condiciones ácidas y la amina resultante puede convertirse en el compuesto LXXXIV utilizando un cloruro de ácido bajo condiciones básicas. Alternativamente, la sustitución aromática nucleofica de la sulfona LXXXVII o del sulfóxido LXXXVIII con una amina puede lograrse en presencia de una base tal como DIPEA en un disolvente tal como tBuOH para proporcionar el compuesto LXXXI. Los grupos protectores pueden eliminarse bajo condiciones ácidas y la amina resultante puede convertirse en el compuesto LXXXV en presencia de un cloruro de ácido bajo condiciones básicas. R, R', y R", Rm, R"", y R"" son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones que se proporcionan en el presente documento.
En un procedimiento sintético general, los compuestos de la estructura general representada por el compuesto (XCIII) se preparan de acuerdo con el Procedimiento K:
Figure imgf000061_0001
Un compuesto tal como LXXI puede convertirse en un compuesto tal como LXXXIX bajo condiciones estándar de acoplamiento de Suzuki. Un compuesto tal como LXXXIX puede oxidarse a un sulfóxido tal como XC con un oxidante tal como m-CPBA en un disolvente tal como DCM. El compuesto XC puede convertirse en el compuesto XCI a través de una sustitución aromática nucleófila con un alcohol en presencia de una base apropiada tal como LHMDS en un disolvente tal como THF. Los grupos protectores pueden eliminarse bajo condiciones ácidas y la amina puede convertirse en el compuesto XCIII en la presencia de un cloruro de ácido bajo condiciones básicas. R, R', y R", R'" son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones proporcionadas en el presente documento.
En un procedimiento sintético general, los compuestos de la estructura general representada por el compuesto (LXVI) se preparan de acuerdo con el Procedimiento L:
Figure imgf000062_0001
Figure imgf000062_0002
Figure imgf000062_0003
acilación
Figure imgf000062_0004
Los compuestos XCIV se convierten en el compuesto XCV utilizando el nucleófilo VI bajo condiciones básicas. El grupo nitro puede reducirse para proporcionar el compuesto XCVI. Los compuestos XCVI pueden convertirse en ditión XCVIII con CS2 en presencia de una base tal como K2CO3. La ditiona XCVIII puede alquilarse con yoduro de metilo en presencia de una base tal como NaOH. La sustitución aromática nucleófila con una amina tal como IV puede lograrse a temperaturas elevadas en presencia de una base tal como K2CO3 en un disolvente tal como DMA para proporcionar el compuesto C. Un compuesto tal como C puede oxidarse a un sulfóxido tal como CI con un oxidante tal como m-CPBA en un disolvente tal como DCM. El compuesto CI puede convertirse en el compuesto LXIII a través de una sustitución aromática nucleófila con un alcohol en presencia de una base apropiada tal como LHMDS en un disolvente tal como THF. Los grupos protectores pueden eliminarse y la amina puede convertirse en el compuesto LXVI en presencia de un cloruro de ácido bajo condiciones básicas. R, R', y R", R'" son como se definen en las realizaciones, esquemas, ejemplos y reivindicaciones proporcionadas en el presente documento.
Preparación de intermedios sintéticos clave:
Preparación de 4-(8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de fert-butilo ( 4) .
Paso 1:
Figure imgf000063_0001
Una mezcla de 3-amino-2-cloroisonicotinato de metilo (1) (180 g, 0,96 mol) y metanol (1,2 L) en un autoclave se purgó con gas amoníaco hasta la saturación. La mezcla se agitó a 30 °C durante 48 horas. Una alícuota de la mezcla de reacción cruda se analizó por LC-MS y mostró que la reacción había terminado. La mezcla se concentró y dio el producto bruto que se trituró con EtOAc (200 ml), se filtró y la torta se recogió y se secó al vacío para obtener 3-amino-2-cloropiridin-4-carboxamida (2) tal como un sólido blanco (142 g, 8 6 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 58,19 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,62 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,77 (s, 2H). LCMS (ESI) m/z 172, 174 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000063_0002
Una mezcla de 3-amino-2-cloroisonicotinamida (2) (140 g, 0,816 mol) en ortoformato de trietilo (1,5 L) se calentó a reflujo durante 16 h. La mezcla se enfrió a 25 °C y se filtró. La torta se lavó con EtOAc (2x100 ml) y se secó, lo que dio 8 -cloropirido[3,4-d]pirimidin-4(3H)-ona (3) como un sólido blanquecino (110 g, 74 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 512,86 (s, 1H), 8,44 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,97 (d, J = 5,1 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z182, 184 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000064_0001
A una suspensión agitada de 8-cloropmdo[3,4-d]pmmidin-4(3H)-ona (3) (110 g, 0,61 mol) en DMF (1,6 L) se anadio piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (135 g, 0,73 mol) y BOP (402 g, 0,91 mol), seguido de DBU (184 g, 1,2 mol). La solución resultante se agitó a 25 °C durante 6 horas. La mezcla de reacción cruda se monitorizó por LCMS y mostró que la mayor parte del material de partida se había consumido. La mezcla se diluyó con agua helada (7 L) y se extrajo con EtOAc (4x1,5 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (3x3 L), salmuera (2 L), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron, lo que dio el producto crudo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice y se eludió con metanol al 5 %/DCM y dio 4-(8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (4) como un sólido amarillo claro (101 g, 47 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,89 (s, 1H), 8,34 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,13 -3,79 (m, 4H), 3,66 (dd, J = 6,2, 4,1 Hz, 4H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z350, 352 (M+H).
Preparación de 4-(8-cloro-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (7).
Paso 1:
Figure imgf000064_0002
Se preparó 8-cloro-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4(3H)-ona (6) (1,7 g, rendimiento del 95%) o de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4(3H)-ona (3). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 12,73 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 2,57 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z196 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000064_0003
Se preparó 4-(8-cloro-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (7) (1,7 g, 61% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1 carboxilato de íerí-butilo (4). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 58,84 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 3,90 -3,77 (m, 4H), 3,65 (dd, J = 6,2, 4,0 Hz, 4H), 2,68 (s, 3H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z364, 366 (M+H).
Preparación de 8-doro-6-(trifluorometN)pirido[3,4-d]pirimidm-4(3H)-ona (12).
Paso 1:
Figure imgf000065_0001
A una solución de 2-doro-6-(trifluorometil)piridin-3-amina (8) (5,0 g, 25 mmol) en acetonitrilo (60 ml) se añadió NBS (5,0 g, 28 mmol). La mezcla se agitó a reflujo durante 3 horas, se concentró y se purificó por cromatografía en gel de sílice y se eludió con éter de petróleo, lo que dio 4-bromo-2-cloro-6-(trifluorometil)piridin-3-amina (9) como un semisólido rojo (6,0 g, rendimiento del 86 %). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 57,68 (s, 1H), 4,93 (s, 2H). LCMS (ESI) m/z275, 277 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000065_0002
A una solución de 4-bromo-2-cloro-6-(trifluorometil)piridin-3-amina (9) (17,7 g, 64,2 mmol) en THF (500 ml) se añadió BuLi (2,5 M en hexano, 116 ml, 289 mmol, 4,5 eq) a -78 °C bajo nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a -75 °C durante 30 horas. A continuación, se burbujeó gas de dióxido de carbono en la mezcla de reacción durante 3 horas. La reacción se apagó con una solución saturada de NH4Cl (100 ml), se ajustó a pH 5 con HCI 2 N y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x200 ml). Las capas combinadas de EtOAc se lavaron con agua (300 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron, lo que dio el producto crudo. Una mezcla de EtOAc y éter de petróleo (éter de petróleo: EtOAc = 15:1, 20 ml) se añadió al producto crudo y la mezcla se dejó reposar durante la noche. Se recogió un sólido amarillo que dio ácido 3-amino-2-cloro-6-(trifluorometil)piridin-4-carboxílico (10) como un sólido amarillo (3,0 g, 20 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 514,08 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,53 (s, 2H). LCMS (ESI) m/z241,243 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000065_0003
Una mezcla de ácido 3-amino-2-cloro-6-(trifluorometil)piridin-4-carboxílico (10) (2,5 g, 10 mmol), NH4Cl (723 mg, 13,5 mmol), HATU (5,1 g, 13 mmol) y DIPEA (4,0 g, 31 mmol) en DMF (10 ml) se agitó a 25 °C bajo nitrógeno durante 3 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba completa. La reacción se apagó con una solución acuosa de LiCI y se extrajo con EtOAc (2x100 ml). Las capas combinadas de EtOAc se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía instantánea (EtOAc en éter de petróleos) que dio 3-amino-2-cloro-6-(trifluorometil)piridin-4-carboxamida (11) como un sólido amarillo (2,3 g, 92 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,41 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,55 (s, 2H). LCMS (ESI) m/z240, 242 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000066_0001
Se preparó 8-doro-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidin-4(3H)-ona (12) (1,8g, rendimiento del 70 %) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4(3H)-ona (3). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 8,41 (s, 1H), 8,29 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z250, 252 (M+H).
Preparación de 4-(6,8-didoropirido[3,4-d]pirimidm-4-il)piperazma-1-carboxilato de ferí-butilo (16).
Paso 1:
Figure imgf000066_0002
En un tubo sellado, se añadió 3-amino-2, 6-dicloropiridin-4-carboxamida (13) (5 g, 0,024 mol) a N, N-dimetilformamidadimetil acetal (3,5 g, 0,03 mol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 15 minutos. LCMS y la 1H RMN mostraron que el material de partida se consumió y se formó 3-amino-2,6-dicloro-N-((dimetilamino)metileno)isonicotinamida. A la mezcla de reacción cruda se le añadió 1,4-dioxano (30 ml) seguido de la adición de carbonato de cesio (15,8 g, 0,05 mol). La mezcla de reacción resultante se calentó a 100 °C durante 4 horas. TLC (40 % EtOAc/hexano) y 1H RMN mostraron que la reacción estaba hecha. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua helada (15 ml) y se acidificó con HCI 1 N (pH = 2-3). El sólido obtenido se filtró con un embudo Buchner y se secó en una estufa de vacío a 60 °C durante 4 horas. El sólido amarillo claro obtenido se trituró con THF (30 ml), se filtró al vacío y se secó en estufa de vacío a 60 °C y dio 6,8-dicloropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (14) como sólido amarillo claro (3,5 g, 66 % de rendimiento). 1H RMN (400 m Hz , DMSO-d6) 5 12,96 (s, 1 H), 8,32 (s, 1H), 7,99 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z216 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000066_0003
Al 6, 8-dicloropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (14) (1,0 g, 4,0 mmol) se añadió POCl3 (13 ml). La mezcla se colocó en un baño de aceite a 105 °C que finalmente dio una solución marrón al agitar durante la noche. LCMS dio el producto como éter metílico (la matriz de disolventes de LCMS era metanol). La mezcla de reacción cruda se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. Se añadió tolueno (10 ml) y se eliminó el disolvente bajo presión reducida. Se repitió el procedimiento y se obtuvo la 4,6,8-tricloropirido[3,4-d]pirimidina (15) como un sólido negro que se utilizó inmediatamente en el siguiente paso.
Paso 3:
Figure imgf000067_0001
Se disolvió4,6,8-Tridoropirido[3,4-d]pirimidina (15) (1,1 g, 4,0 mmol) en THF (13 ml) y se trató secuencialmente con piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (1,6 g, 8,7 mmol) y DIEA (3,5 ml, 20 mmol). La solución marrón resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. LCMS sólo dio producto. La reacción se añadió a 200 ml de H2O y se extrajo con EtOAc (2x150 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NH4Cl al 10% (200 ml), salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron, dando un aceite marrón. TLC (50 % EtOAc/heptano) Rf 0,7. El producto bruto se disolvió en DCM y se cargó en una columna de sílice de 25 g (Biotage) y se eludió con 10-50 % de EtOAc/heptano. Se aisló la mancha Rf 0,7 y se obtuvo 4-(6,8-dicloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (16) como un sólido amarillo (1,3 g, 85 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 81,43 (s, 9H), 3,54 (br. s, 4H), 3,81 - 3,98 (m, 4H), 7,98 (s, 1H), 8,74 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z384 (M+H).
Preparación de 4-(2,8-dicloropirido[3,4-d]pirim idin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (20).
Paso 1:
Figure imgf000067_0002
A un matraz de 2 L cargado con una barra de agitación magnética se añadió 3-amino-2-cloroisonicotinamida (17) (50 g, 292 mmol), THF (1 L) y trifosgeno (43 g, 146 mmol). Se colocó un condensador de reflujo en el matraz y la reacción se calentó a 70 °C durante 4 horas. Se formó un precipitado blanco. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y THF se eliminó bajo presión reducida. Se añadió acetato de etilo (1 L) y el precipitado se recogió por filtración para obtener un sólido blanco y espeso. La torta de filtración se lavó con EtOAc caliente (3x1 L) y se secó para dar 8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (18) como un sólido blanco (55 g, 95% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, d Ms O-q^ ) 8 11,76 (s, 1H), 10,98 (s, 1H), 8,19 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 5,0 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z198, 200 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000067_0003
A un matraz de 1 L cargado con una barra de agitación magnética se añadió 8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (18) (45 g, 228 mmol), dietilfenilamina (34,1 g, 228 mmol) y POCh (600 ml). La mezcla se calentó a 120 °C durante 16 hora. La mezcla se concentró y el residuo se diluyó con DCM (500 ml) y se vertió cuidadosamente en agua helada. El producto se extrajo con DCM (3x500 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron, con lo que se obtuvo 2,4,8-tricloropirido[3,4-d]pirimidina (19) (55 g en crudo). 1H RMN (400 MHz, CDCls) 58,62 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 5,6 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z234, 236 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000068_0001
A un fondo redondo de 500 ml cargado con una barra de agitación magnética se añadió 2,4,8-tricloropirido[3,4-d]pirimidina (19) (crudo 55 g, 228 mmol), dioxano (400 ml), DIPEA (58,9 g, 457 mmol) y piperazina-1-carboxilato de tertbutilo(38,2 g, 206 mmol). La mezcla se calentó a 80 °C durante 3 hora. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró y el residuo se lavó con DCM y dio 4-(2,8-dicloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert- butilo (20) (50 g, 57 % de rendimiento, dos pasos). 1H RMN (400 MHz, CDCls) 58,32 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,96 - 3,94 (m, 4H), 3,68 - 3,61 (m, 1H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z384, 386 (M+H).
Preparación de 4-[8-doro-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de terí-butilo (22).
Paso 1:
Figure imgf000068_0002
A una mezcla de 8-cloro-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidin-4(3H)-ona (12) (500 mg, 2 mmol) en POCl3 (6 ml) se añadió N,N-dimetilanilina(0,5 ml), y la mezcla resultante se agitó a 110 °C durante 1 hora. TLC mostró que se consumía 8-cloro-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidin-4(3H)-ona (12 ) . El POCl3 se eliminó a presión reducida y el crudo de 4,8-dicloro-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidina (21) se utilizó en el siguiente paso.
Paso 2:
Figure imgf000068_0003
A una solución de 4,8-dicloro-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidina (21) (537 mg, 2 mmol) en DMA (2,5 ml) se añadió piperazina-1-carboxilato de terí-butilo (933 mg, 5,0 mmol) a temperatura ambiente, y la mezcla resultante se agitó a 60 °C durante 1 hora. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba completa. La mezcla de reacción cruda se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó cuidadosamente con una solución acuosa saturada de NaHCO3. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x50 ml), y las capas combinadas de EtOAc se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice y se eludieron con EtOAc al 30% en éter de petróleo, lo que dio 4-[8-doro-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de íerí-butilo (22) como un sólido amarillo (700 mg, rendimiento del 84%). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 8 8,94 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 3,95 (m, 4H), 3,67 (m, 4H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z418, 420 (M+H).
Preparación del 5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (25).
Paso 1:
Figure imgf000069_0001
Esta reacción se llevó a cabo en dos lotes paralelos. A una solución agitada de 4-bromo-5-metil-1H-indazol (23) (100 g, 474 mmol) en DCM (1 L) se añadió PPTS (12 g, 47 mmol) a 28 °C, luego se añadió DHP (120 g, 1,4 mol) en una porción a 28 °C. Tras la adición, la mezcla resultante se agitó a 30 °C durante 18 horas. TLC (EtOAc/éter de petróleo, 1:5) mostró que el material de partida se había consumido. Los dos lotes se combinaron para su elaboración. La reacción se apagó con H2O (1,5 L), se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con DCM (1 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (1L), salmuera (1L), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron hasta sequedad. El residuo se trituró con éter de petróleo (300 ml) y dio 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (24) como un sólido blanquecino (223 g, 80 % de rendimiento). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 8,00 (s, 1H), 7,68 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,84 (dd, J = 9,6, 2,5 Hz, 1H), 3,87 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3.73 (ddd, J = 11,5, 7,7, 6,0 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,43 - 2,31 (m, 1H), 2,09 - 1,90 (m, 2H), 1,83 - 1,66 (m, 1H), 1,57 (dt, J = 9,3, 3,9 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z295, 297 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000069_0002
Se añadió una solución de KOH (85,5 g, 1525 mmol) en H2O (450 ml) a dioxano (1,8 L) a 29 °C, seguida de 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (24) (150 g, 508 mmol), Pd2 (dba)3 (18,6 g, 20,3 mmol) y t-Bu-Xfos(17,3 g, 40,6 mmol). La mezcla resultante se desgasificó y se rellenó con nitrógeno tres veces. La mezcla resultante se calentó a 95 °C durante 18 horas. TLC (éter de petróleo/ EtOAc = 4:1) no dio material de partida. La mezcla de reacción se enfrió a 30 °C y se evaporó hasta sequedad. El residuo se repartió entre MTBE (500 ml) y H2O. La capa acuosa se extrajo con MTBE (500 ml) y las capas orgánicas combinadas se desecharon. La fase acuosa se acidificó a pH = 2-3 con HCI 2 N y se extrajo con EtOAc (2*1 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (0,8 L) y salmuera (1 L), se secaron sobre Na2SO4 y se evaporaron hasta sequedad. El residuo se trituró con éter de petróleo (500 ml) que dio 5-metiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-mdazol-4-ol (25) como un sólido blanquecino (95 g, 80 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 8,02 (s, 1H), 7,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,65 (dd, J = 9,6, 2,6 Hz, 1H), 4,11 - 3,98 (m, 1H), 3,73 (td, J = 11.1,2,7 Hz, 1H), 2,55 (dddd, J = 13,6, 11,8, 9,8, 4,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,19 -2,09 (m, 1H), 2,08 - 1,95 (m, 1H), 1,81 -1,67 (m, 2H), 1,66 - 1,55 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z233 (M+H).
Preparación del 3-metoxinaftaleno-1-ol (27).
Paso 1:
Figure imgf000070_0001
A una solución de naftaleno-1,3-diol (26) (25 g, 156 mmol) en metanol (200 ml), se añadió una solución de HCI en dioxano (100 ml de HCI 4M) y la solución resultante se agitó a 20 °C durante 70 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba completa, y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía instantánea utilizando gel de sílice y eludiendo con 10% de EtOAc en heptano, lo que dio 3-metoxinaftaleno-1-ol (27) como un sólido amarillo (13 g, 48 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,45 (ddd, J = 8,2, 6,9, 1.2 Hz, 1H), 7,33 (ddd, J = 8,1,6,9, 1,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H). LCMS (ESI) m/Z175 (M+H).
Preparación del 5-cloro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (30).
Paso 1:
Figure imgf000070_0002
A una solución de 4-bromo-5-cloro-1H-indazol (28) (950 mg, 4,10 mmol) en THF (50 ml) se añadió DHP (518 mg, 6,16 mmol) y PPTS (103 mg, 0,410 mmol). La mezcla se agitó a 50 °C durante 20 horas. Otro 0,5 eq. Se añadió DHP (173 mg, 2,05 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 50 °C durante 16 horas. LCMS indicó que el material de partida se consumió y se formaron dos regioisómeros. El disolvente se eliminó bajo presión reducida. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de sílice (20 g, 10 % EtOAc/éter de petróleo) y dio 4-bromo-5-cloro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (29) como sólido blanco (850 mg, 66 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 88,11 (s, 1H), 7,84 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 5,93 -5,88 (m, 1H), 3,87 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 3,77 -3,72 (m, 1H), 2,37 -2,32 (m, 1H), 2,01 (t, J = 14,0 Hz, 2H), 1,73 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 1,58 (t, J = 6,4 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/Z315, 317 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000070_0003
Se preparó 5-doro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-N)-1H-indazol-4-ol (30) (590 mg, rendimiento del 92%) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (25). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 810,72 (s, 1H), 8,23 (d, J = 0,5 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 8,8, 0,8 Hz, 1H), 5,76 (dd, J = 9,7, 2,5 Hz, 1H), 3,91 - 3,83 (m, 1H), 3,76 -3,69 (m, 1H), 2,42 -2,29 (m, 1H), 2,05 - 1,99 (m, 1H), 1,94 (ddd, J = 9,7, 6,1, 3,2 Hz, 1H), 1,74 (ddd, J = 12,7, 10,6, 4,0 Hz, 1H), 1,61 -1,52 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z253, 255 (M+H).
Preparación del 5-etil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (38).
Paso 1:
Figure imgf000071_0001
A una solución de 1-bromo-4-fluoro-2-metoxibenceno (31) (24 g, 2,44 mmol) en THF (200 ml) se añadió LDA (64,4 ml, 129 mmol, 2 M) gota a gota a -78 °C y la mezcla se agitó durante 1 hora. Se añadió DMF (10,3 g, 140 mmol) gota a gota durante 5 minutos, y la mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante otros 45 minutos. La reacción se apagó con la adición de HCI (200 ml, 1 M), y la mezcla se dejó calentar hasta 20 °C y luego se diluyó con EtOAc (400 ml). La capa orgánica se lavó con H2O (200 ml) y salmuera (200 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (1:10 EtOAc / éter de petróleo) y dio 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzaldehído (32) como un sólido amarillo (18 g, 66 % de rendimiento). 1H r Mn (400 MHz, CDCh) 810,35 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 8,8, 4,0 Hz, 1H), 6,89 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z233, 235 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000071_0002
Una mezcla de 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzaldehído (32) (5 g, 22 mmol) e hidrato de hidracina (7 ml) en DMSO (150 ml) se calentó a 130 °C durante 16 horas. El análisis LCMS mostró principalmente el producto. La mezcla se diluyó con EtOAc (400 ml) y se lavó con H2O (3x200 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc = 10/3) y dio 5-bromo-4-metoxi-1H-indazol (33) como un sólido amarillo (2,0 g, 41 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 88,23 (s, 1H), 7,50 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,25 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z227, 229 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000071_0003
A una mezcla de 5-bromo-4-metoxi-1H-indazol (33) (2 g, 8,8 mmol) y 3,4-dihidro-2H-pirano (1,5 g, 17,6 mmol) en DCM (40 ml) se añadió tolueno-4-sulfonato de piridinio (221 mg, 0,88 mmol) y la mezcla se agitó a 40 °C durante 4 horas. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice y se eludió con éter de petróleo/EtOAc (10/1) y dio 5-bromo-4-metoxi-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (34) como aceite amarillo (2,2 g, 80 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,29 (s, 1H), 7,37 -7,30 (m, 2H), 5,67 (dd, J = 8,0, 4,0 Hz, 1H), 4,17 -4.15 (m, 1H), 3,82 - 3,76 (m, 1H), 2,29 - 2,25 (m, 1H), 2,20 - 2,15 (m, 1H), 2,08 - 2,05 (m, 1H), 1,78 - 1,69 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z331, 335 (M+Na).
Paso 4:
Figure imgf000072_0001
A una mezcla de 5-bromo-4-metoxi-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (34) (2,2 g, 7,1 mmol), K2CO3 (1,95 g, 14,1 mmol) y viniltrifluoroborato de potasio (1.4 g, 11 mmol) en DMF (30 ml) se añadió Pd(dppf)Cl2 (complejo DCM) (577 mg, 0,71 mmol) y la mezcla se agitó a 90 °C durante 16 horas bajo nitrógeno. LCMS dio principalmente el producto. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice y se eludió con éter de petróleo/EtOAc (1/5) y dio 5-etil-4-metoxi-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (35) como sólido amarillo (1,3 g, rendimiento del 71 %). 1H Rm N (400 MHz, CDCla) 88,25 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 16,0, 12,0 Hz, 1H), 5,70 - 5.63 (m, 2H), 5,22 (dd, J = 12,0, 1,2 Hz, 1H), 4,17 -4,12 (m, 1H), 3,82 - 3,75 (m, 1H), 2,26 -2,14 (m, 2H), 2,08 - 2,03 (m, 1H), 1,79 - 1,66 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z259 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000072_0002
A una mezcla de 5-etil-4-metoxi-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (35) (1,3 g, 5,0 mmol) en metanol (40 ml) se añadió 10% de Pd/C (130 mg) y la mezcla se agitó a 20 °C durante 4 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. Tras la filtración y la concentración, se obtuvo 5-etil-4-metoxi-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (36) como aceite amarillo (1,1 g, 84 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 88,20 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 8,8, 0,9 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,66 (dd, J = 8,0, 4,0 Hz, 1H), 4.17 -4,12 (m, 1H), 3,81 -3,73 (m, 1H), 2,73 -2,67 (m, 2H), 2,24 -2,21 (m, 2H), 2,08 - 2,03 (m, 1H), 1,78 - 1,67 (m, 3H), 1,21 (t, J = 8,0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z261 (M+H).
Paso 6:
Figure imgf000072_0003
A una solución de 5-etil-4-metox¡-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (36) (1,1 g, 4,2 mmol) en DCM (5 ml) se añadió BBr3 (10 ml, 1 M) a -78 °C y la mezcla se agitó a 20 °C durante 4 horas. A la mezcla se añadió NaHCO3 (sat. 30 ml) y la capa acuosa se extrajo con DCM (3x30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice y se eludió con éter de petróleo/EtOAc (2/1) y dio 5-etil-1H-indazol-4-ol (37) como aceite amarillo (450 mg, 66 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,11 (s, 1H), 7,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 2,76 -2,68 (m, 2H), 1,26 (t, J = 8,0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z163 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000073_0001
A una mezcla de 5-etil-1H-indazol-4-ol (37) (440 mg, 2,7 mmol) y DHP (456 mg, 5,4 mmol) en THF (20 ml) se añadió PPTS (69 mg, 0,27 mmol) y la mezcla se agitó a 70 °C durante 16 horas. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice y se eludió con éter de petróleo/EtOAc (7/3) y dio 5-etil-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-il)-1H-indazol-4-ol (38) como aceite amarillo (320 mg, rendimiento del 48%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó) 89,67 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,70 (dd, J = 8,0, 4,0 Hz, 1H), 3,86 - 3,85 (m, 1H), 3,73 - 3,66 (m, 1H), 2,63 (q, J = 8,0 Hz, 2H), 2,43 -2,33 (m, 1H), 2,03 -2,00 (m, 1H), 1,93 - 1,89 (m, 1H), 1,80 -1,69 (m, 1H), 1,58 -1,53 (m, 2H), 1,13 (t, J = 8,0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 247 (M+H).
Preparación del 5-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (41).
Paso 1:
Figure imgf000073_0002
Se preparó 4-bromo-5-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-¡l)-1H-¡ndazol (40) (651 mg, 47 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-metil-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (24). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,02 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,52 (ddd, J = 9,0, 3,7, 0,9 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 5,70 (dd, J = 9,0, 2.8 Hz, 1H), 3,99 (ddt, J = 11,8, 3,7, 1,6 Hz, 1H), 3,74 (ddd, J = 11,6, 9,7, 3,3 Hz, 1H), 2,66 - 2,38 (m, 1H), 2,28 - 1,97 (m, 2H), 1,85 -1,61 (m, 3H).
Paso 2:
Figure imgf000074_0001
Se preparó 5-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (41) (461 mg, 90 % de rendimiento) se preparó de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar el 5-met¡l-1-(tetral^¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (25). LCMS (ESI) m/z 267 (M+H).
Preparación del 5-cloro-6-metiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (47).
Paso 1:
Figure imgf000074_0002
Se añadió 2-bromo-4-fluoro-6-metilanilina (42) (5 g, 24,5 mmol) a la solución de HCI concentrado (30 ml) y H2O (30 ml), que se agitó a 60-70 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción cruda se enfrió a 0-5 °C y se añadió NaNO2 (2,0 g, 29 mmol) en H2O (10 ml) y la reacción se agitó durante 15 minutos. A continuación, la mezcla se añadió a una solución de HCI (50 ml) y CuCI (3,6 g, 36,8 mmol) a 70-80 °C durante 30 min. La mezcla de reacción cruda se enfrió a temperatura ambiente y se extrajo con DCM (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron, lo que dio 1-bromo-2-cloro-5-fluoro-3-metilbenceno (43) como un líquido marrón (4,5 g, 80 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,23 (dd, J = 7,8, 2,9 Hz, 1H), 6,97 -6,91 (m, 1H), 2,43 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 216 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000074_0003
Se preparó 2-bromo-3-cloro-6-fluoro-4-metilbenzaldehído (44) (8,3 g, 57% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzaldehído (32). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 810,29 (s, 1H), 7,09 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 2,51 (s, 3H).
Paso 3:
Figure imgf000075_0001
Se preparó 4-bromo-5-cloro-6-met¡MH-¡ndazol (45) (108 mg, 50% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-bromo-4-metoxi-1H-indazol (33). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,02 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 2,56 (d, J = 0,6 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 245, 247 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000075_0002
Se preparó 4-bromo-5-doro-6-met¡l-1-(tetral^¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (46) (2,4 g, rendimiento del 59%) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-met¡l-1-(tetral^¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (24 ) , donde la reacción se realizó en THF a 50 °C. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 87,94 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 5,66 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 3,80 -3.64 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,54 -2,46 (m, 1H), 2,15 (dd, J = 8,1, 4,4 Hz, 1H), 2,11 -2,03 (m, 1H), 1,79 - 1,64 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 329, 331 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000075_0003
Se preparó 5-doro-6-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (47) (373 mg, 50% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (25). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,07 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 5,64 (dd, J = 9,3, 2,7 Hz, 1H), 4,08 -3,96 (m, 1H), 3,74 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 2.52 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 2,49 (d, J = 0,5 Hz, 3H), 2,19 -2,13 (m, 1H), 2,09 -2,04 (m, 1H), 1,76 (t, J = 9, 4 Hz, 2H), 1,66 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z 267, 269 (M+H).
Preparación de 5-bromo-6-metiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (52).
Paso 1:
Figure imgf000076_0001
Se preparó 1,2-Dibromo-5-fluoro-3-metilbenceno (49) (13 g, 88 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 1-bromo-2-cloro-5-fluoro-3-metilbenceno (43 ), excepto que se utilizaron HBr y CuBr en lugar de HCl y CuCl, respectivamente. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 87,60 (dd, J = 8,2, 2,9 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 9,3, 2,9 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H).
Paso 2:
Figure imgf000076_0002
Se preparó 2,3-dibromo-6-fluoro-4-metilbenzaldehído (50) (13,5 g, 96 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 3-bromo-6-fluoro-2-metoxibenzaldehído (32). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 810,11 (s, 1H), 7,55 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 2,52 (s, 3H).
Paso 3:
Figure imgf000076_0003
Se preparó 4,5-dibromo-6-metil-1H-indazol (51) (11,8 g, 98 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-bromo-4-metoxi-1H-indazol (33). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812,93 (s, 1H), 7,98 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 2,55 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 289, 291 (M+H).
Paso 4
Figure imgf000076_0004
Se preparó 4,5-d¡bromo-6-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (52) (8,2 g, 54 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (24), excepto que la reacdón se realizó en dioxano a 90 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 88,02 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,82 (s, 1H), 5,83 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,78 -3.70 (m, 1H), 2,58 (d, J = 0,9 Hz, 3H), 2,36 (ddd, J = 13,2, 10,9, 6,6 Hz, 1H), 2,07 - 1,93 (m, 2H), 1,78 - 1,68 (m, 1H), 1,62 - 1,55 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 372, 374 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000077_0001
Se preparó 5-bromo-6-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-pirano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (53) (2,2 g, 33 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-met¡l-1-(tetrahidro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (25). 1H Rm N (400 MHz, DMSO-cfe) 810,73 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 5,71 (dd, J = 9,7, 2,4 Hz, 1H), 3,87 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 3,75 -3,65 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,39 - 2,32 (m, 1H), 2,06 - 1,98 (m, 1H), 1,92 (dd, J = 13,1, 2,8 Hz, 1H), 1,78 - 1,67 (m, 1H), 1,56 (dd, J = 10,2, 6,5 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 311, 313 (M+H).
Preparación de 6-cloro-5-metiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (61).
Paso 1:
Figure imgf000077_0002
A una solución de 1-cloro-5-fluoro-2-metil-4-nitrobenceno (54) (23,0 g, 121 mmol) en EtOH/H2O (200 ml, 1:1) se añadió HCl 12 M (10,1 ml, 121 mmol). La mezcla se calentó a 80 °C y se añadió lentamente Fe (23,7 g, 425 mmol) durante 30 minutos. La mezcla se agitó a la misma temperatura durante 1 hora. LCMS indicó que el material de partida se consumió y se formó el producto deseado. A continuación, la mezcla se enfrió a 25 °C, se diluyó con EtOAc (300 ml) y se acidificó a pH = 8~9 con NaHCO3 acuoso saturado. Las capas se filtraron, separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 300 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida y dieron 4-cloro-2-fluoro-5-metilanil¡na (55) como un sólido amarillo (18,0 g, 93 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 87,08 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 2,15 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 160, 162 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000078_0001
A una solución de 4-cloro-2-fluoro-5-metilanilina (55) (18,7 g, 117 mmol) en DMF (150 ml) se añadió lentamente NBS (20,9 g, 117 mmol) a 0 °C. A continuación, la mezcla se calentó hasta 25 °C y se agitó durante 1 hora. LCMS indicó que el material de partida se consumió y se formó el producto deseado. La mezcla se apagó con NaHCO3 acuoso saturado y se extrajo con EtOAc (2 * 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (120 g, éter de petróleo / EtOAc = 98 : 2) y dio 2-bromo-4-cloro-6-fluoro-3-metilanilina (56) como un sólido amarillo (22,1 g, 79 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 87,30 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 5,45 (s, 2H), 2,36 (d, J = 1,0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 238, 240 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000078_0002
A una solución de H2SO4 concentrado (62 ml) en H2O (250 ml) se añadió 2-bromo-4-cloro-6-fluoro-3-metilanilina (56) (22,1 g, 93 mmol), y la mezcla se agitó a 25 °C durante 10 minutos y se enfrió a 5 °C. A continuación, se añadió gota a gota NaNO2 (7,1 g, 102 mmol) en H2O (20 ml). La mezcla resultante se agitó a 5 °C durante 20 minutos y se añadió a una solución de KI (62 g, 370 mmol) en H2O (50 ml), que se agitó a 5 °C durante 20 minutos y luego se calentó a 25 °C durante 18 horas. TLC (éter de petróleo) indicó que el material de partida se había consumido. La mezcla se apagó con agua (150 ml) y se extrajo con EtOAc (2x500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con Na2SO3 acuoso saturado, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (120 g, éter de petróleo) y dio 3-bromo-1-cloro-5-fluoro-4-yodo-2-metilbenceno (57) como un sólido amarillo claro (18 g, 56 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 87,60 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 2,56 (d, J = 1,1 Hz, 3H).
Paso 4:
Figure imgf000078_0003
A una solución de 3-bromo-1-cloro-5-fluoro-4-yodo-2-metilbenceno (57) (17,5 g, 50,1 mmol) en THF (100 ml) se añadió gota a gota 2,5 M BuLi (20 ml, 50 mmol) a -100 °C. La mezcla se agitó a la misma temperatura durante 30 minutos. A continuación, se añadió DMF seco (4,0 g, 55 mmol) y la mezcla se agitó a -100 °C durante 20 minutos. TLC (éter de petróleo) indicó que se consumió casi todo el material de partida y se formó el producto deseado. La mezcla de reacción cruda se apagó con HCl 1 N. Se añadió agua a la mezcla y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x150 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (120 g, éter de petróleo / EtOAc = 97:3) y dio 2-bromo-4-cloro-6-fluoro-3-metilbenzaldehído (58) como un sólido amarillo (8,6 g, 68 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 810,18 (s, 1H), 7,75 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 2,52 -2,50 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 251,253 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000079_0001
Se preparó 4-bromo-6-cloro-5-metil-1 H-indazol (59) (6,7 g, 80% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-bromo-4-metoxi-1H-indazol (33), excepto que la reacción se realizó a 90 °C durante 21 horas. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 813,43 (s, 1H), 8,00 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 2,53 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 245, 247 (M+H).
Paso 6:
Figure imgf000079_0002
Se preparó 4-bromo-6-cloro-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (60) (5,7 g, 73 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (24), excepto que la reacción se realizó en THF a 80 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 88,05 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 5,88 (dd, J = 9,6, 2,4 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 3,80 -3.73 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,38 -2,31 (m, 1H), 2,05 - 1,94 (m, 2H), 1,71 (dd, J = 9,1, 3,3 Hz, 1H), 1,57 (dt, J = 9,1, 4,6 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 329, 331 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000079_0003
Se preparó 6-cloro-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (61) (5,2 g, 97 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (25).1 Rm N (400 MHz, DMSO-cfe) 810,37 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 5,73 (dd, J = 9,7, 2,4 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 3,76 -3,69 (m, 1H), 2.34 (dd, J = 9,1, 3,0 Hz, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,01 (dd, J = 8,6, 4,4 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 13,1,2,8 Hz, 1H), 1,72 (s, 1H), 1,59 - 1,52 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 267, 269 (M+H).
Preparación de 5,6-dimetiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (67).
Paso 1:
Figure imgf000080_0001
A una solución de 1,2,4-trimetil-5-nitrobenceno (62) (2,0 g, 12,1 mmol) en ácido trifluoroacético (24 ml) se añadió NBS (1,2 g, 6,7 mmol) y hierro (20 mg, 0,4 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 75 °C durante 3 días, se dejó enfriar a temperatura ambiente y luego se eliminó el disolvente bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en EtOAc y se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo crudo se purificó sobre gel de sílice y se eludió con 0-5 % de EtOAc/heptano y dio 3-bromo-1,2,4-trimetil-5-nitrobenceno (63) como un sólido blanco (1,4 g, 83 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 87,55 (s, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,39 (s, 3H).
Paso 2:
Figure imgf000080_0002
Una suspensión de 3-bromo-1,2,4-trimetil-5-nitrobenceno (63) (3,0 g, 12,5 mmol), polvo de zinc (3,7 g, 56,1 mmol) y HCl de trietilamina (9,4 g, 68,5 mmol) en DMF (42 ml) se calentó a 105 °C durante la noche. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite. El filtrado se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con salmuera (dos veces), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (ISCO 24 g de sílice) y se eludió con EtOAc/heptano (0-40%) y dio 3-bromo-2,4,5-trimetilanilina (64) como aceite marrón que dio un sólido marrón al reposar (1,8 g, 66 % de rendimiento). LCMS (ESI) m/z 214, 216 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000080_0003
A un matraz con barra de agitación se añadió 3-bromo-2,4,5-trimetilanilina (64) (1,8 g, 8,3 mmol), acetato de potasio (974 mg, 9,9 mmol) y cloroformo (36 ml). Esta mezcla se enfrió a 0 °C con agitación. A la mezcla enfriada se le añadió anhídrido acético (2,5 g, 25 mmol) gota a gota durante 2 minutos. La mezcla de reacción se calentó a 25 °C y se agitó durante 1 hora. En este punto, la reacción se calentó a 60 °C. Se añadió isoamilnitrito (1,9 g, 2,2 ml, 16 mmol) y la reacción se agitó durante la noche a 60 °C. La mezcla de reacción cruda se lavó con NaHCO3 saturado. El disolvente se eliminó bajo presión reducida y el producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice (ISCO 40 g de sílice) y se eludió con EtOAc/heptano (0-30 %) y dio N-acetil indazol como un sólido naranja (1,5 g). El sólido se disolvió en THF (8 ml) y agua (5 ml) y se enfrió a 0 °C. A continuación, se añadió NaOH 2 M (8,3 ml) y la reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción cruda se diluyó con EtOAc y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró bajo presión reducida y se secó durante la noche al vacío de la casa y dio 4-bromo-5,6-dimetil-1H-indazol (65) como un sólido marrón (1,1 g, 59% de rendimiento). LCMS (APCI) m/z 225 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000081_0001
Se preparó 4-bromo-5,6-d¡met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-indazol (66) (1,1 g, 76 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-indazol (24) donde la reacción se realizó en THF a 50 °C.
Paso 5:
Figure imgf000081_0002
Se preparó 5,6-d¡met¡l-1-(tetramdro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (67) (463 mg, 51 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-pirano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (25). LCMS (ESI) m/z 247 (M+H).
Preparación de 5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (72).
Paso 1:
Figure imgf000081_0003
A una solución de 3-bromo-5-fluoro-2-metilbenamina (68) (10 g, 49 mmol) en IPA (70 ml) se añadió NCS (7,2 g, 54 mmol) y se agitó la solución oscura a 80 °C durante 2 horas. La mezcla se concentró bajo presión reducida y el producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando un cartucho ISCO (220 g) y eludiendo con EtOAc/heptano (15:85) y dio 3-bromo-4-cloro-5-fluoro-2-metilan¡l¡na (69) como sólido amarillo (5,7 g, rendimiento del 49%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 6,62 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,66 (br. s, 2H), 2,18 (d, J = 0,9 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 237.
Paso 2:
Figure imgf000082_0001
A una solución de 3-bromo-4-cloro-5-fluoro-2-metilanilina (69) (4 g, 16,8 mmol) en AcOH (20 ml), se añadió NaNO2 (1,5 g, 22 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba completa. La mezcla se concentró bajo presión reducida y el producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice y se eludió con EtOAc/éter de petróleo (20:80) y dio 4-bromo-5-cloro-6-fluoro-1H-indazol (70) como sólido amarillo (2,4 g, rendimiento del 57 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) ppm 13,68 (br. s., 1 H), 8 , 10 (s, 1H), 7,69 (dd, J = 0,9, 9,1 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 249 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000082_0002
Se preparó 4-bromo-5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (71) (819 mg, 88 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (24), excepto que se utilizó acetonitrilo como disolvente. 1H RMN (400 MHz, CDCÍ3) 8 7,98 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 0,9, 8 , 6 Hz, 1H), 5,65 (dd, J = 2,6, 8,9 Hz, 1H), 4,06 - 3,94 (m, 1H), 3,85 - 3,65 (m, 1H), 2,57 - 2,35 (m, 1H), 2,23 - 1,99 (m, 2H), 1,86 - 1,62 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 333 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000082_0003
Se preparó 5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (72) (612 mg, 92 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (25). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,07 (s, 1H), 6,99 (dd, J = 0,7, 8 , 8 Hz, 1H), 5,60 (dd, J = 2,6, 9,2 Hz, 1H), 4,08 - 3,98 (m, 1H), 3,81 - 3,68 (m, 1H), 2,58 -2,43 (m, 1H), 2,21 -2,07 (m, 2H), 1,85 - 1,60 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 187 [M - THP H].
Preparación de 3,5-dimetiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (76).
Paso 1:
Figure imgf000083_0001
A una solución de 3,5-d¡met¡l-1-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-4-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)-1H-¡ndazol (73) (450 mg, 1,1 mmol) en EtOH (12 ml) se añad¡ó mCPBA (273 mg, 1,6 mmol) y agua ( 6 ml). La reacc¡ón se agitó a 20 °C durante 3 horas. El anál¡s¡s LCMS mostró que la reacc¡ón había term¡nado. La mezcla de reacc¡ón cruda se d¡luyó con EtOAc (30 ml), se lavó con NaHCO3 saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se f¡ltró y se concentró. El producto crudo se pur¡f¡có sobre gel de síl¡ce que se elud¡ó con 0-90 % de EtOAc/éter de petróleo y d¡o 3,5-d¡met¡l-1-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-1H-¡ndazol-4-ol (74) como un sól¡do amar¡llo (370 mg, 100 % de rend¡m¡ento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 59,45 (s, 1H), 7,71 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,23 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 317 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000083_0002
Una mezcla de 3,5-d¡met¡l-1-[(4-met¡lfen¡l)sulfon¡l]-1H-¡ndazol-4-ol (74) (400 mg, 1,3 mmol) en H2SO4 (70 %, 10 ml) se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 48 horas. El anál¡s¡s de LCMS mostró que se observaba el compuesto deseado y que quedaba algo de mater¡al de part¡da. La mezcla de reacc¡ón cruda se d¡luyó con agua helada y se ajustó a pH 6 con una soluc¡ón de NaOH. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (5x30 ml), y las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con agua, se secaron sobre Na2SO4, se f¡ltraron y se concentraron. El producto crudo se pur¡f¡có sobre gel de síl¡ce y se elud¡ó con 0-55 % EtOAc/éter de petróleo y d¡o 3,5-d¡met¡l-1H-¡ndazol-4-ol (75) como un sól¡do amar¡llo (90 mg, 40 % de rend¡m¡ento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 12,23 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 163 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000083_0003
Se preparó 3,5-d¡met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (76) (80 mg, 61% de rend¡m¡ento) de acuerdo con el proced¡m¡ento ut¡l¡zado para preparar 4-bromo-5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (24), excepto que la reacc¡ón se real¡zó en THF a reflujo. LCMS (ESI) m/z 247 (M+H).
Preparación de 5,7-difluoro-6-metiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (84).
Paso 1:
Figure imgf000084_0001
Se agitó una mezcla de ácido 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzoico (77) (2,0 g, 9,6 mmol) en SOCI2 (10 ml) a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción cruda se concentró y el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El producto bruto se disolvió en metanol (30 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción cruda se concentró y el producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice y se eludió con EtOAc/éter de petróleo al 5%, lo que dio 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzoato de metilo (78) como un aceite incoloro (1,8 g, rendimiento del 84 %). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 83,97 (s, 3H), 2,32 (t, J = 2,1 Hz, 3H).
Paso 2:
Figure imgf000084_0002
A una solución de sodio (146 mg, 6,4 mmol) en metanol seco (2 ml) se añadió metil 2,3,5,6-tetrafluoro-4-metilbenzoato (78) (940 mg, 4,2 mmol) y DMF (5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. TLC mostró que el material de partida se había consumido. La reacción se apagó con HCl 1 N a 0 °C, y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron y dieron 2,3,5-trifluoro-6-metoxi-4-metilbenzoato de metilo (79) como un aceite incoloro (991 mg, rendimiento del 100%). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 83,95 (s, 3H), 3,93 (d, J = 1,4 Hz, 3H), 2,26 (t, J = 2,2 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 235 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000084_0003
A una solución de 2,3,5-trifluoro-6-metoxi-4-metilbenzoato de metilo (79) (996 mg, 4,2 mmol) en THF seco (10 ml) se añadió LiAlH4 (323 mg, 8,5 mmol) a -10 °C. La mezcla resultante se agitó a -10 °C durante 30 minutos. TLC mostró que todo el material de partida se había consumido. La reacción se apagó con HCl 1 N a 0 °C, y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x20 ml).
Las capas combinadas de EtOAc se concentraron y el producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice que se eludió con 12 % de EtOAc/éter de petróleo y dio (2,3,5-trifluoro-6-metoxi-4-metilfenil)metanol (80) como un sólido blanco (680 mg, 78 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 84,75 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 3,97 (d, J = 1,8 Hz, 3H), 2,24 (t, J = 2,2 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 189 (M - OH).
Paso 4:
Figure imgf000085_0001
A una mezcla de (2,3,5-trifluoro-6-metoxi-4-metilfenil)metanol (80) (680 mg, 3,3 mmol) en THF (30 ml) se añadió MnO2 ( 2,9 g, 33 mmol), y la mezcla resultante se agitó a 48 °C durante la noche. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite, y el filtrado se concentró y purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice y se eludió con EtOAc/éter de petróleo al 2% y dio 2,3,5-trifluoro-6-metoxi-4-metilbenzaldehído (81) como un sólido blanco (180 mg, rendimiento del 27 %). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 810,31 (s, 1H), 4,02 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 2,31 (t, J = 2,3 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 205 (M+H).
Paso 5:
hidracina-H20
Figure imgf000085_0002
DMSO, 29%
Figure imgf000085_0003
de rendimiento
81 82
Se preparó 5,7-difluoro-4-metoxi-6-metil-1H-indazol (82) (512 mg, 29 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 5-bromo-4-metoxi-H-indazol (33). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 13,62 (s, 1H), 8,32 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 4,09 (s, 3H), 2,27 (t, J = 2,2 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 199 (M+H).
Paso 6:
Figure imgf000085_0004
A 5,7-difluoro-4-metoxi-6-metil-1H-indazol (82) (650 mg, 3,3 mmol) se añadió BBr3 en DCM (5 ml) a - 40 °C. La mezcla de reacción cruda se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. TLC mostró que todo el material de partida se había consumido. La reacción se apagó con una solución saturada de NaHCO3 a 0 °C. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x50 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice y se eludió con EtOAc/éter de petróleo al 30 % y dio 5,7-difluoro-6-metil-1H-indazol-4-ol (83) como un sólido rojo (279 mg, 46 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 13,40 (s, 1H), 10,13 (s, 1H), 8,20 - 8,15 (m, 1H), 2,26 (t, J = 2,1 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 185 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000085_0005
Se preparó 5,7-difluoro-6-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (84) (160 mg, 41 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (24), excepto que la reacción se realizó en THF a reflujo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cf6y) 5 10,31 (s, 1H), 8,20 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 9,8, 1,8 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,62 (ddd, J = 11.5, 8,3, 4,6 Hz, 1H), 2,38 (dt, J = 14,4, 6,4 Hz, 1H), 2,26 (t, J = 2,4 Hz, 3H), 2,01 (m, 2H), 1,71 (m, 1H), 1,54 (dd, J = 11,0, 7,3 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 291 (M+Na).
Preparación de los ejemplos:
En lo que sigue, los ejemplos que no entran en el alcance de las reivindicaciones adjuntas se incluyen sólo como ejemplos de referencia.
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el Procedimiento A:
Preparación de 1-(4-(8-[(5-metiMH-indazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pirim idin-4-il}piperazin-1-il)prop-2- en-1-ona (Ejemplo-1A).
Paso 1:
Figure imgf000086_0001
A un vial se añadió fenol 5-metiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (25) (398 mg, 1.74 mmol), 4-(8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (4) (500 mg, 1,43 mmol), carbonato de cesio (931 mg, 2,86 mmol) y DMA (3,6 ml). La mezcla se desgasificó, se purgó con nitrógeno y se colocó en un baño de arena a 90 °C. Tras 4,5 horas, LCMS dio mayoritariamente producto y ningún cloruro de arilo. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió gota a gota al agua (50 ml). Se recogió 4-(8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (85) como un sólido blanco (720 mg, rendimiento del 92%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 51,37 - 1,49 (m, 9H), 1,53 - 1,64 (m, 2H), 1,68 - 1,83 (m, 1H), 1,88 - 2,09 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,29 - 2,44 (m, 1H), 3,57 (br. s, 4H), 3,69 - 3.80 (m, 1H), 3,80 - 3,87 (m, 4H), 3,89 - 3,91 (m, 1H), 5,83 - 5,86 (m, 1H), 7,38 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,50 - 7,61 (m, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,87 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 8,82 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z 545 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000086_0002
A una solución de 4-(8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (85) (1,1 g, 2,0 mmol) en d Cm (10 ml) se añadió TFA (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. LCMS indicó que el material de partida se consumió y se formó el producto deseado. El disolvente se eliminó bajo presión reducida y dio 8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (86) como un aceite marrón (730 mg, rendimiento del 100%). LCMS (ESI) m/z 362 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000087_0001
A una solución agitada de 8-[(5-metil-1 H-indazol-4-il)oxi]-4-(piperazin-1 -il)pirido[3,4-d]pirimidina (86) (500 mg, 1,38 mmol) en NaHCO3 acuoso saturado (50 ml) y EtOAc (50 ml) se añadió una solución de cloruro de acriloilo (125 mg, 1,38 mmol) en EtOAc (20 ml). Tras la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. LCMS indicó que el material de partida se consumió y se formó el producto deseado. Se separó la capa orgánica. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2*80 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando una columna Biotage C18 (30 g) y eludiendo con un gradiente 25-40 % de acetonitrilo/H2O (01 % de NH3) a 25 ml/min, y dio 1-(4-{8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]pmdo[3,4-d]pinmidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IA) como un sólido amarillo (202 mg, 35 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 88,98 (s, 1H), 7,96 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,34 (s, 2H), 7,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 6,62 (dd, J = 16.8, 10,5 Hz, 1H), 6,39 (dd, J = 16,8, 1,7 Hz, 1H), 5,80 (dd, J = 10,5, 1,7 Hz, 1H), 3,90 (s, 4H), 3,80 (s, 4H), 2,31 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 416 (M+H).
Los intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener los Ejemplos-18A, -19A, -27A, -28A, -32A y -33A de acuerdo con el Procedimiento A. Sin embargo, estos ejemplos quedan fuera del alcance sintético de los ejemplos precedentes debido a la inclusión de nitrilos y, por lo tanto, esta preparación se incluye aquí por exhaustividad. La química posterior para obtener los ejemplos finales es similar a los ejemplos del Procedimiento A, con mínimas adiciones o cambios que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 4-(6-ciano-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (88).
Paso 1:
Figure imgf000087_0002
Una mezcla de 4-(6-cloro-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pmdo[3,4-d]pinmidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (87) (100 mg, 0,17 mmol, preparado por el procedimiento A), Zn(cN )2 (40 mg, 0,34 mmol), dppf (19 mg, 0,034 mmol) y Pd2(dba)3 (16 mg, 0,017 mmol) en n Mp (10 ml) se calentó a 150 °C en microondas durante 1,5 horas bajo nitrógeno. LCMS de la mezcla de reacción cruda indicó que el material de partida se consumió y se formó el producto deseado. Tras enfriar, se añadió agua (50 ml) y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3*60 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó utilizando gel de sílice (4 g) y se eludió con metanol al 4 %/DCM y dio 4-(6-ciano-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pmdo[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tertbutilo (88) como un sólido amarillo (95 mg, 97% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 88,89 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,63 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,87 (dd, J = 9,7, 2,0 Hz, 1H), 4,01 -3,93 (m, 4H), 3.89 (s, 1H), 3,77 (dd, J = 12,4, 5,8 Hz, 1H), 3,57 (m, 4H), 2,42 - 2,35 (m, 1H), 2,16 (s, 3H), 2,01 (d, J = 13,8 Hz, 2H), 1,74 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 1,59 (s, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 571 (M+H).
Los intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el ejemplo 38A de acuerdo con el procedimiento A. Sin embargo, este ejemplo queda fuera del ámbito sintético de los ejemplos anteriores debido a la etapa de desprotección y, por lo tanto, esta preparación se incluye aquí para completarla. La química posterior para obtener los ejemplos finales es sim ilar a los ejemplos del Procedimiento A, con mínimas adiciones o cambios que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 1-[(3R)-4-(6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pirimidin-4-il}-3-(hidroximetil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo de Referencia-38A)
Figure imgf000088_0001
A una solución de 1 -[(3R)-3-({[tert-butil(dimetil)silM]oxi}metilo)-4-{8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1 -il]prop-2-en-1-ona (144) (300 mg, 0.474 mmol) en THF (20 ml) se añadió una solución de TBAF (1,0 M en THF, 0,95 ml, 0,95 mmol) lentamente a 0 °C. Tras la adición, la reacción se agitó durante otras 2 h a 0-5 °C. El análisis LCMS mostró la finalización de la reacción . Se añadió NaHCO3 ac. saturado (50 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (50 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo crudo se purificó por HPLC preparado utilizando una columna Xbridge 150*19 mm, 5 pm y eludiendo con 28-33 % de acetonitrilo/H2O (0,05 % de NH4OH), a 20 ml/min para proporcionar 1-[(3R)-4-{6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]pmdo[3,4-d]pirimidin-4-il}-3-(hidroximetil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-38A) (45 mg, rendimiento del 18%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 813,62 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,12 -7,86 (m, 2H), 7,65 (dd, J = 8,8, 1,1 Hz, 1H), 6,82 (ddd, J = 26,0, 16,5, 10,7 Hz, 1H), 6,17 (d, J = 17,8 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,3 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 31,4 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 23,6 Hz, 1H), 4,39 (t, J = 15,8 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 4,14 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 3,75 (ddd, J = 11,2, 8,5, 4,9 Hz, 1H), 3,67 -3,48 (m, 2H), 3,12 (d, J = 14,2 Hz, 1H), 2,97 (t, J = 11,6 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 518 (M+H).
Los productos intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el Ejemplo 41A de acuerdo con el procedimiento A. Sin embargo, este ejemplo queda fuera del alcance sintético de los ejemplos anteriores debido a la amininación y, por tanto, esta preparación se incluye aquí por completitud. La química posterior para obtener los ejemplos finales es sim ilar a los ejemplos del Procedimiento A, con mínimas adiciones o cambios que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 4-(6-amino-8-{[5-metiM-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirim idin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo(146)
Figure imgf000088_0002
, e
80% de rendimiento 2. n h 2o h
h2o /t h f
Figure imgf000088_0003
39% de rendimiento
Figure imgf000088_0004
Paso 1:
Al 4-(6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pindo[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (145) (300 mg, 0485 mmol), Cs2CO3 (484 mg, 1,46 mmol), (+/-) BINAp (31,5 mg, 0,0485 mmol), y Pd(OAc)2 (5,73 mg, 0,0243 mmol) en tolueno (9,7 ml) se añadió ¡mina de benzofenona (237 mg, 1,31 mmol). La solución marrón resultante se desgasificó y se purgó con nitrógeno (3x) y se colocó en un baño de aceite precalentado a 100 °C.
La mezcla de reacción bruta se calentó a 100 °C durante 24 h. La reacción se analizó por LCMS, que mostró conversión al producto. La mezcla de reacción cruda se diluyó con EtOAc (20 ml) y salmuera al 50 %. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x20 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron. El producto crudo se purificó por cromatografía (25 g de SiO2, Biotage, 10-50 % EtOAc/heptano) para proporcionar 4-(6-[(difenilmetilideno)amino]-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de íerí-butilo (295 mg, rendimiento del 80%). 1H RMN (400 MHz, DMs O-cí6) 1,43 (s, 9H), 1,58 (br. s, 2H), 1,66 - 1,79 (m, 1H), 1,95 - 2,06 (m, 2H), 2,29 - 2,41 (m, 1H), 3,41 (s, 8H), 3,72 - 3,81 (m, 1H), 3,88 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 5.88 (dd, J = 9,6, 2,1 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,99 (dd, J = 7,7, 1,6 Hz, 2H), 7,24 - 7,35 (m, 3H), 7,39 -7,47 (m, 2H), 7,50 - 7,61 (m, 3H), 7,88 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 8,65 (s, 1H).
Paso 2:
A una solución de 4-(6-[(difenilmetilideno)amino]-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (275 mg, 0,36 mmol) en MeOH (1,8 ml) y THF (1,8 ml) se añadió NH2OH al 50% en H2O (0,21 ml, 3,6 mmol). Tras 24 h, la reacción se analizó por LCMS, que mostró una conversión limpia al producto. La mezcla de reacción cruda se añadió gota a gota a 60 ml de H2O. Se formó una goma amarilla. La mezcla se diluyó con EtOAc (40 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (40 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron. El producto bruto se purificó sobre (Biotage, 10 g de SiO2, 5-60 % de EtOAc/heptano) para proporcionar 4-(6-amino-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de íerí-butilo (146) (84 mg, 39% de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 1,44 (s, 9H), 1,58 (br. s, 2H), 1,68 - 1,79 (m, 1H), 1,99 - 2,09 (m, 2H), 2,27 - 2,41 (m, 1H), 3,55 (br. s, 4H), 3,62 (d, J = 3.7 Hz, 4H), 3,72 - 3,82 (m, 1H), 3,85 - 3,93 (m, 1H), 5,86 (dd, J = 9,8, 1,9 Hz, 1H), 6,11 (s, 2H), 6,45 (s, 1H), 7,84 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 8,44 (s, 1H). Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon de acuerdo con el procedimiento A y el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IA), 4-(6-ciano-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazina-1-carboxilato (88) de tert-butilo, y 4-(6-amino-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (146). Los siguientes ejemplos se hicieron con cambios o sustituciones no críticos al procedimiento ejemplificado utilizado para prepararlos Ejemplos 1A, 88 y 146 que un experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000089_0001
(continuación)
Figure imgf000090_0001
(continuación)
Figure imgf000091_0001
(continuación)
Figure imgf000092_0001
(continuación)
Figure imgf000093_0001
(continuación)
Figure imgf000094_0001
(continuación)
Figure imgf000095_0001
(continuación)
Figure imgf000096_0001
(continuación)
Figure imgf000097_0001
(continuación)
Figure imgf000098_0001
(continuación)
Figure imgf000099_0001
Los productos intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener los Ejemplos-1, -2 y - 6 de acuerdo con el Procedimiento A. Sin embargo, estos ejemplos quedan fuera del alcance sintético de los ejemplos anteriores debido a la desprotección del fenol y, por lo tanto, la preparación se incluye aquí para completarla. La química posterior para obtener los ejemplos finales es similar a los ejemplos del procedimiento A, con mínimas adiciones o cambios que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 1-(4-{8-[(3-hidroxinaftaleno-1-il)oxi]-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirim idin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1).
Paso 1:
Figure imgf000100_0001
Se preparó 4-{8-[(3-metaxinaftaleno-1-il)oxi]-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (89) (400 mg, 75 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (85), excepto que el disolvente se sustituyó por DMSO y la reacción se calentó a 60 °C durante 1 hora. LCMS ESI m/z 556 (M+H). Paso 2:
Figure imgf000100_0002
Se preparó 8-[(3-metaxinaftaleno-1-il)oxi]-4-(piperazin-1-il)-6-(trifluorometil)pirido[3,4-d]pirimidina (90) (328 mg, 100 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 8-[(5-metiMH-indazol-4-il)oxi]-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (8 6 ). LCMS ESI m/z 456 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000100_0003
Se preparó 1 -(4 -{8 -[(3 -metox¡naftalen-1 -¡l)ox¡]-6 -(trmuoromet¡l)p¡r¡do[3 ,4 -d]p¡r¡m¡d¡n-4 -¡l}p¡peraz¡n-1 -¡l)prop-2 -en-1 -ona (91) (316 mg, 86 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IA). El producto se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice que se eludió con metanol al 3 % en Dc M. 1H RMN (400 m Hz , CDCh) 6 9,06 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,46 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 6,60 (dd, J = 16,8, 10,5 Hz, 1H), 6,42 (m, 1H), 5,85 (m, 1H), 4,09 (s, 4H), 3,96 - 3,87 (m, 7H). LCMS (ESI) m/z 510 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000101_0001
A una solución de BBr3 en DCM (5 mi) se añadió 1-(4-(8-((3-metox¡naftaleno-1-¡l)ox¡)-6-(tr¡fluoromet¡l)p¡rido[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (91) (100 mg, 0,20 mmol) a -60 °C, y la mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 1 hora. La reacción se apagó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 y se extrajo con EtOAc (2x50 ml). Las capas de EtOAc combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El crudo se purificó por HPLC preparado utilizando una columna Gemini-C18 (100x21,2 mm, 5 pm) y se eludió con un gradiente 40­ 50 % de acetonitrilo/H2O (0,1 % de ácido fórmico) y se obtuvo 1-(4-{8-[(3-hidroxinaftaleno-1-il)oxi]-6-(trifluorometil)pirido[3,4-cf]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1) como un sólido amarillo claro (42 mg, rendimiento del 42%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 10,09 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 29,0, 8,3 Hz, 2H), 7,44 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,24 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,11 (s, 1H), 7.02 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,1 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,5, 2,0 Hz, 1H), 4,03 (s, 4H), 3,81 (d, J = 32,9 Hz, 4H). LCMS (ESI) m/z 496 (M+H).
Se preparó 1-(4-{8-[(3-hidroxinafta)en-1-il)oxi]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-2) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(3-hidroxmafta)en-1-N))oxi]-6-(trif)uorometM))pirido[3,4-d]pirimidm-4-M}piperazm-1-M)prop-2-en-1-ona (Example-1).
Figure imgf000101_0002
(continuación)
Figure imgf000102_0002
[0302] Los intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el Ejemplo-3 de acuerdo con el Procedimiento A. Sin embargo, el Ejemplo-3 se sintetizó en un formato de biblioteca paralela y, por lo tanto, se incluye su preparación para que sea completa.
Preparación de 1-(4-[8-(2-cloro-6-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il}prop-2-en-1-ona (Ejemplo de Referencia-3).
Figure imgf000102_0001
Se añadió una solución de 4-(8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo en acetonitrilo (4) (1,0 ml, 0,15 M) al 2-cloro-6-metilfenol (180 pmol) seguido de la adición de K2CO3 (300 pmol). El recipiente de reacción se selló y se calentó a 100 °C durante 16 horas. Se eliminó el disolvente y el producto crudo (92) se purificó mediante TLC preparatoria.
Paso 2:
Se añadió una solución de DCM y TFA (7:1 V/V, 1,6 ml) al 4-[8-(2-cloro-6-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (92) (100 |jmol) y la reacción se agitó durante 2 horas. El disolvente se eliminó bajo presión reducida.
Paso 3:
Se preparó una solución 0,1 M de cloruro de acriloilo en DCM y se añadió 1,0 ml de la solución a una solución de 8-(2-cloro-6-metilfenoxi)-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (93) (100 jm ol) y DIEA (300 jm ol) en DCM (1,0 ml) a 0 °C. La reacción se calentó durante 1 hora a 30 °C y se monitorizó por LCMS hasta que la reacción terminó. El disolvente se eliminó bajo presión reducida y el producto crudo se purificó por HPLC preparado utilizando una columna Agela Durashell C18 (150x25 mm, 5 jm ) y se eludió con un gradiente de acetonitrilo/agua al 26-66 % (NH4OH 0,05 M) a 35 ml/minuto y dio 1-{4-[8-(2-cloro-6-metilfenoxi)pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-il}prop-2-en-1-ona (Ejemplo-3). LCMS (ESI) m/z 410 (M+H).
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el Procedimiento general B:
Preparación de 1-(4-{2-metoxi-8-[(5-metiMH-mdazol-4-N)oxi]pindo[3,4-d]pmmidm-4-N}piperazm-1-N) prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1B).
Paso 1:
Figure imgf000103_0001
A una mezcla de NaH (60 % en aceite, 48 mg, 1,2 mmol) en THF ( 6 ml) se le añadió metanol (70 mg, 2,2 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y a continuación se añadió 4-(2,8-dicloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (20) (421 mg, 1,1 mmol). La mezcla de reacción cruda se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. LCMS dio ~80 % del producto deseado. El disolvente se eliminó bajo presión reducida y el producto crudo se diluyó con EtOAc (5 ml) y agua (4 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x8 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron. El producto crudo se purificó mediante TLC preparado que se eludió con éter de petróleo/EtOAc (2:1) y dio 4-(8-cloro-2-metoxipirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (94) como un sólido amarillo (244 mg, rendimiento del 58 %). LCMS (ESI) m/z 380 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000103_0002
Se preparó 4-(2-metox¡-8-{[5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l) p¡peraz¡na-1-carboxilato de terf-but¡lo (95) (138 mg, 37 % de rend¡m¡ento)de acuerdo con el proced¡m¡ento ut¡l¡zado para preparar 4-(8-{[5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡lp¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato (85), excepto que la reacc¡ón se h¡zo en DMSO a 135 °C durante 2 horas. LCMS (ESI) m/z 576 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000104_0001
Se preparó 2-metox¡-8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na (95) de acuerdo con el proced¡m¡ento ut¡l¡zado para preparar 8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na (8 6 ). Se el¡m¡nó el d¡solvente y el producto bruto se ut¡l¡zó en el s¡gu¡ente paso. LCMS (ESI) m/z 392 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000104_0002
Se preparó 1-(4-{2-metox¡-8-[(5-met¡l-7H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IB) (32 mg, 30% de rend¡m¡ento) de acuerdo con el proced¡m¡ento ut¡l¡zado para preparar 1-{4-[8-(2-cloro-6-met¡lfenox¡)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡n-1-¡l}prop-2-en-1-ona (Ejemplo-3). El producto crudo se pur¡f¡có por HPLC preparado ut¡l¡zando una columna YMC-Actus Tr¡art C18 (150x30 mm, 5 pm) y se elud¡ó con 30-50 % de aceton¡tr¡lo/agua (0,05 % de amoníaco). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 6 13,10 (s, 1H), 7,73 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,49 -7,63 (m, 2H), 7,24 -7,43 (m, 2H), 6,84 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,6, 2,3 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,3, 2,3 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,72 - 3,94 (m, 8 H), 2,12 - 2,25 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 446 (M+H).
Preparación de 1-(4-(2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pirimidina-4-il}piperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona (Ejemplo-2B).
Paso 1:
Figure imgf000105_0001
Se preparó 4-{8-doro-2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (97) (224 mg, 71 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-cloro-2-metoxipirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (94), excepto que la base se sustituyó por Cs2CO3. LCMS (ESI) m/z 450 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000105_0002
Se preparó 4-(2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (98) (163 mg, 51 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-{[5 -metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato (85) excepto que la reacción se realizó en DMSO a 135 °C durante 2 horas en un microondas. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7,71 (s, 1H), 7,55 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,33 - 7,39 (m, 1H), 7,27 - 7,31 (m, 1H), 7,09 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,68 (dd, J = 9,4, 2,6 Hz, 1H), 4,20 -4,32 (m, 2H), 3,99 -4,11 (m, 3H), 3,56 - 3,80 (m, 9H), 3,12 -3,27 (m, 1H), 2,44 -2,66 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 6 H), 2,11 -2,19 (m, 1H), 2,01 -2,10 (m, 1H), 1,70 - 1,80 (m, 2H), 1,64 -1,69 (m, 1H), 1,46 -1,54 (m, 9H). LCMS (ESI) m/z 644 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000105_0003
Se preparó N,N-D¡met¡l-1-{8-[(5-met¡l-/H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l}azet¡d¡n-3-amina (99) se de acuerdo con el proced¡m¡ento ut¡l¡zado para preparar 8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na (8 6 ). LCMS (ESI) m/z 460 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000106_0001
Se preparó 1-(4-{2-[3-(D¡met¡lam¡no)azet¡d¡n-1-]-8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-2B) (24 mg, 26% de rend¡m¡ento) de acuerdo con el proced¡m¡ento ut¡l¡zado para preparar 1-{4-[8-(2-doro-6-met¡lfenox¡)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡n-1-¡l}prop-2-en-1-ona ( Ejemplo-3). 1H r Mn (400 MHz, DMSO-da) 5 13,09 (s, 1H), 7,48 - 7,62 (m, 2H), 7,24 - 7,41 (m, 3H), 6,85 (dd, J = 16,8, 10,5 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,76 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 5,70 - 5,79 (m, 1H), 5,73 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,14 (dd, J = 8,9, 7,4 Hz, 2H), 3,90 (dd, J = 9,2, 5,1 Hz, 2H), 3,68 - 3,86 (m, 8 H), 3,08 - 3,22 (m, 1H), 2,08-2,20 (m, 9H). LCMS (ESI) m/z 514 (M+H).
Los ejemplos de la s¡gu¡ente tabla se prepararon ut¡l¡zando el proced¡m¡ento B y los proced¡m¡entos ut¡l¡zados para preparar 1-(4-{2-metox¡-8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona Ejemplo 1B (éteres) o 1-(4-{2-[3-(d¡met¡lam¡no)azet¡d¡n-1-¡l]-8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3, 4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona Ejemplo-2B (aminas). Los s¡gu¡entes ejemplos se real¡zaron con camb¡os o sust¡tuc¡ones no crít¡cos en el proced¡m¡ento ejempl¡f¡cado ut¡l¡zado para preparar el Ejemplo-1B o el Ejemplo-2B que algu¡en experto en la técn¡ca podría real¡zar.
Figure imgf000106_0002
(continuación)
Figure imgf000107_0001
(continuación)
Figure imgf000108_0001
(continuación)
Figure imgf000109_0001
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el Procedimiento C general:
Preparación de 3-nitro-2-{[1-(tetrahidro-2tf-pirano-2-N)-5-(trifluorometN)-1tf-mdazol-4-N]oxi}pmdm-4-carboxNato de metilo (1 0 2 ).
Paso 1:
Figure imgf000110_0001
A un recipiente a presión de 100 mi cargado con una barra de agitación magnética se añadió 2-cloro-3-nitropiridin-4-carboxilato de metilo (100) (605 mg, 2,8 mmol), 1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-il)-5-(tnfluoromet¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (101) (800 mg, 2,8 mmol), DMAP (854 mg, 7,0 mmol) y THF (11,2 ml). El matraz se selló y se calentó a 70 °C. Al cabo de 3 horas se comprobó la reacción por LCMS, que mostró una buena conversión al producto deseado. La mezcla de reacción cruda se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró. El producto crudo se purificó sobre 10 g de gel de sílice (columna Biotage) que se eludió con EtOAc/heptanos al 25% y dio 3-n¡tro-2-{[1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}pmd¡n-4-carboxilato de metilo (102) como un sólido rosado (764 mg, rendimiento del 59%). 1H RMN (400 MHz, CDCh) ó 8,22 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5,76 (dd, J = 9,0, 2,7 Hz, 1H), 4,16 -3,88 (m, 4H), 3,87 -3,64 (m, 1H), 2,63 -2,33 (m, 1H), 2,26 -2,04 (m, 2H), 1,90 -1,66 (m, 3H).
Preparación de 2-{[5-cloro-6-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-N]oxi}-6-metM-3-mtropmdm-4-carboxilato de metilo (104).
Paso 1:
Figure imgf000110_0002
Una mezcla de 2-cloro-6-met¡l-3-n¡trop¡r¡d¡n-4-carbox¡lato de metilo (103) (340 mg, 1,5 mmol), 5-cloro-6-metil-1-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (47) (393 mg, 1,47 mmol) y DMAP (450 mg, 3,7 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) se agitó a 70 °C durante la noche. La mezcla de reacción cruda se diluyó con EtOAc y se lavó secuencialmente con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice (cartucho ISCO 40 g) y se eludió con 0-100 % de EtOAc/heptano y dio 2-{[5-cloro-6-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-6-met¡l-3-n¡trop¡^d¡n-4-carbox¡lato de metilo (104) como un sólido de color crema (627 mg, 92 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) ó 7,78 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,39 -7,32 (m, 1H), 5,70 (dd, J = 2,6, 9,4 Hz, 1H), 4.10 - 4,03 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,86 - 3,71 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,21 - 2,07 (m, 2H), 1,85 -1,63 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 461 (M+H).
Preparación de 1-(4-(8-[(5-metiMH-mdazol-4-il)oxi]qumazolm-4-N}piperazm-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1C).
Paso 1:
Figure imgf000110_0003
A una solución de 3-fluoro-2-nitrobenzoato de metilo (105) (2 g, 10 mmol) en DMF (60 ml) se añadió 5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-ol (25) (2,33 g, 10 mmol) y K2CO3 (2,78 g, 20,1 mmol). La reacción se agitó a 60 °C durante 16 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba hecha. Se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (2x100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y evaporaron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice y se eludió con éter de petróleo/EtOAc (1/1) y dio 3-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-nitrobenzoato de metilo (106) (3,9 g, 90 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 7,77 - 7,64 (m, 2H), 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,38 - 7,24 (m, 2H), 6,83 - 6,75 (m, 1H), 5,70 (dd, J = 9,5, 2,5 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,77 (dd, J = 14,7, 6,9 Hz, 1H), 2,52 (td, J = 13,3, 3,9 Hz, 1H), 2,32 -2,24 (m, 3H), 2,20 -2,04 (m, 2H), 1,83 -1,61 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 412 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000111_0001
A una solución de 3-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-nitrobenzoato de metilo (106) (4 g, 9,7 mmol) en metanol (60 ml) se añadió Pd/C al 10% (500 mg) bajo una atmósfera de hidrógeno. La reacción se agitó a 25 °C durante 16 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba hecha. La mezcla de reacción cruda se filtró y el filtrado se concentró y dio 8-((5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il)oxi)quinazolina-4(3H)-ona (107) (3,5 g, 94% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7,64 -7,50 (m, 2H), 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 6,52 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,40 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 5,68 (dd, J = 9,4, 2,6 Hz, 1H), 4.08 -4,00 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,74 (td, J = 11,0, 2,9 Hz, 1H), 2,61 - 2,47 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,19 - 2,10 (m, 1H), 2,10 - 2,05 (m, 1H), 1,83 -1,60 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 382 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000111_0002
A una solución de 8-((5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il)oxi)quinazolin-4(3H)-ona (107) (1,5 g, 3,9 mmol) en trietoximetano (30 ml) se añadió NH4OAc (3,0 g, 39 mmol) en un tubo sellado. La reacción se calentó a reflujo y se agitó durante 2 días. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba hecha. La mezcla de reacción cruda se concentró hasta sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice y se eludió con DCM/metanol (4/1) y dio 8-((5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il)oxi)quinazolin-4(3H)-ona (108) (1,4g, 95 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 8,40 (s, 1H), 7,96 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 14,5, 8,3 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5,70 (dd, J = 9,5, 2,3 Hz, 1H), 4,11 -4,01 (m, 1H), 3,77 (dd, J = 15,1, 6,7 Hz, 1H), 2,61 -2,45 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,11 (m, 2H), 1,84 - 1,57 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 377 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000112_0001
A una solución de 8-((5-met¡l-1-(tetrahidro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡)qu¡nazol¡n-4(3H)-ona (108) (400 mg, 1,06 mmol) en DMF (30 ml) se añadió piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (396 mg, 2,1 mmol), DBU (485 mg, 3,2 mmol) y BOP (705 mg, 1,6 mmol). La mezcla de reacción cruda se agitó a 25 °C durante 4 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba hecha. La mezcla de reacción cruda se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (2x50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y evaporaron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice y se eludió con éter de petróleo/EtOAc (1/1) y dio 4-(8-((5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-il)ox¡)qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato (109) (480 mg, 83 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,93 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8 , 6 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5,70 (dd, J = 9,6, 2,4 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,77 (m, 5H), 3,67 (m, 4H), 2,63 -2,47 (m, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,20 -2,06 (m, 2H), 1,74 (m, 3H), 1,51 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 545 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000112_0002
Una solución de 4-(8-((5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-indazol-4-¡l)ox¡)qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (109) (480 mg, 0,88 mmol) en TFA/DCM al 25% (30 ml) se agitó a 25 °C durante 3 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba hecha. La mezcla de reacción cruda se concentró hasta sequedad y dio 8-((5-metil-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡)-4-(p¡perazin-1-¡l)qu¡nazol¡na (110) (390 mg, rendimiento del 100 %). LCMS (ESI) m/z 361 (M+H).
Paso 6 :
Cloruro oe acnloiio
NaHCOj ac., EtOAc
53% de rendimiento
Figure imgf000113_0002
Figure imgf000113_0001
lo-1C
A una solución de 8-((5-met¡l-1H-indazol-4-¡l)ox¡)-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)qu¡nazol¡na (110) (300 mg, 0,83 mmol) en EtOAc (20 ml) se añadió una solución saturada de NaHCO3 (20 ml). Se añadió gota a gota una solución de cloruro de acriloilo (113 mg, 1,25 mmol) en EtOAc (5 ml). Tras la adición, la reacción se agitó durante otros 30 minutos. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba hecha. La mezcla de reacción cruda se extrajo con EtOAc (2x50 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se evaporaron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice y se eludió con EtOAc/metanol (9/1) y dio 1-(4-{8-[(5-metil-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]qu¡nazol¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IC) (184 mg, 53 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 13,15 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 7,74 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,52 - 7,23 (m, 4H), 6,85 (dd, J = 16,4, 9,7 Hz, 2H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,3 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,3 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 5,4 Hz, 8 H), 2,25 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 415 (M+H).
Los productos intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el Ejemplo 12C de acuerdo con el procedimiento C. Sin embargo, este ejemplo queda fuera del alcance sintético de los ejemplos anteriores debido a la halogenación, por lo que la preparación se incluye aquí por exhaustividad. La química posterior para obtener los ejemplos finales es sim ilar a los ejemplos del Procedimiento C, con mínimas adiciones o cambios que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 2-amino-5-cloro-3-{[1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}benzoato de metilo (111).
Figure imgf000113_0003
A una solución de 8-((5-met¡l-1-(tetrahidro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡)qu¡nazol¡n-4(3H)-ona (107) (300 mg, 0,79 mmol) en DMF (1,5 ml) se añadió NCS (110 mg, 0,83 mmol). La mezcla de reacción cruda se agitó a 50 °C durante 3 horas. El disolvente se eliminó bajo presión reducida y el producto crudo se trituró con acetonitrilo y dio un sólido blanco (212 mg). El filtrado se concentró y se purificó por HPLc preparado utilizando una columna Xbridge 150x30 mm, 10 pm y eludiendo con 58-100 % acetonitrilo/H2O (0,05 % NH4OH), a 25 ml/min y se recogieron otros 53 mg de producto. En conjunto, se recogió 2-amino-5-cloro-3-{[1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}benzoato de metilo (111) s como un sólido blanco (265 mg, 82 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7,64 (s, 1H), 7,56 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 6,43 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,24 (br. s, 2H), 5.71 (dd, J = 2,6, 9,4 Hz, 1H), 4,06 (br. d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,82 -3,72 (m, 1H), 2,62 -2,47 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,22 -2,06 (m, 2H), 1,82 -1,64 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 416 (M+H).
Los productos intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el Ejemplo 13C de acuerdo con el procedimiento C. Sin embargo, este ejemplo queda fuera del alcance sintético de los ejemplos anteriores debido a la halogenación, por lo que la preparación se incluye aquí por exhaustividad.
La química posterior para obtener los ejemplos finales es s im ilar a los ejemplos del Procedimiento C, con adiciones o cambios mínimos que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 2-amino-5-bromo-3-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}benzoato de metilo
Figure imgf000114_0001
Se preparó 2-am¡no-5-bromo-3-{[5-metil-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}benzoato de metilo (112) (690 mg, 95 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 2-amino-5-cloro-3-{[1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}benzoato de metilo (111). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 7,71 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,27 (br. s, 2H), 5,71 (dd, J = 2,6, 9,4 Hz, 1H), 4,10 - 4,02 (m, 1H), 3,94 - 3,90 (m, 3H), 3,81 - 3,72 (m, 1H), 2,63 - 2,48 (m, 1H), 2,32 - 2,25 (m, 3H), 2,22 -2,06 (m, 2H), 1,84 - 1,63 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 460, 462 (M+H).
Los productos intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el Ejemplo 14C de acuerdo con el procedimiento C. Sin embargo, este ejemplo queda fuera del alcance sintético de los ejemplos anteriores debido a la cianación, por lo que la preparación se incluye aquí por completitud. La química posterior para obtener los ejemplos finales es sim ilar a los ejemplos del Procedimiento C, con mínimas adiciones o cambios que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 4-(6-ciano-8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}quinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (114).
Figure imgf000114_0002
Una mezcla de 4-(6-bromo-8-{[5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-il)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carboxilato de ferf-butilo (113, preparado de acuerdo con el procedimiento C) (217 mg, 0,35 mmol), Zn(CN)2 (65 mg, 0,56 mmol), Pd(PPh3 )4 (40 mg, 0,035 mmol) en DMF ( 6 ml), bajo nitrógeno, se agitó a 120 °C bajo microondas durante 5 horas. LCMS dio una conversión completa al producto deseado. La mezcla de reacción cruda se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con agua (20 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x10 ml) y las capas orgánicas combinadas se concentraron y el producto crudo se purificó sobre gel de sílice que se eludió con 10-50 % de EtOAc y dio 4-(6-ciano-8-{[5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-indazol-4-¡l]ox¡}qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de terf-butilo (114) como sólido blanco (214 mg, 88 % de rendimiento). TLC (50 % EtOAc/éter de petróleo) Rf 0,4; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,96 (s, 1H), 7,85 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,50 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 2,4, 9.4 Hz, 1H), 4,09 (br. d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,87 (br. d, J = 5,3 Hz, 4H), 3,82 - 3,75 (m, 1H), 3,73 -3,64 (m, 4H), 2.64 - 2,48 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,21 - 2,10 (m, 2H), 1,85 - 1,74 (m, 2H), 1,73 - 1,65 (m, 1H), 1,52 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 570 (M+H).
Los siguientes ejemplos se prepararon utilizando el procedimiento C y el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-il)ox¡]qu¡nazol¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1C). Los siguientes ejemplos se hicieron con cambios o sustituciones no críticos al procedimiento ejemplificado utilizado para preparar el Ejemplo-1C que alguien experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000115_0001
(continuación)
Figure imgf000116_0001
(continuación)
Figure imgf000117_0001
(continuación)
Figure imgf000118_0001
(continuación)
Figure imgf000119_0001
(continuación)
Figure imgf000120_0002
Los intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el Ejemplo-4 de acuerdo con el Procedimiento A. Sin embargo, este ejemplo queda fuera del ámbito sintético de los ejemplos anteriores debido a la formación de sulfona, por lo que la preparación se incluye aquí por completitud. La química posterior para obtener los ejemplos finales es sim ilar a los ejemplos del Procedimiento A, con mínimas adiciones o cambios que un experto en la técnica puede apreciar.
Preparación de 8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-4-[4-(etilsulfonil)piperazin-1-il]pirido[3,4-d]pirimidina (Ejemplo-4).
Figure imgf000120_0001
A una solución agitada de 8-[(5-cloro-6-metil-1 /-/-indazol-4-il)oxi]-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (115) (145 mg, 0,37 mmol) en THF (50 ml) y Et3N (432 mg, 4,27 mmol) se añadió una solución de cloruro de etenosulfonilo (46,4 mg, 0,37 mmol) en THF (20 ml) a 0-5 °C. Tras la adición, la mezcla se agitó a la misma temperatura durante 15 minutos. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba completa. La mezcla de reacción cruda se vertió en agua (60 ml) y se extrajo con EtOAc (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron, lo que dio el producto bruto. El producto bruto se purificó por HPLC preparado utilizando una columna Gemini-C18, 100 x 21,2 mm, 5 gm y se eludió utilizando un gradiente de 40-50 % de acetonitrilo-H2O (0.05% de NH3), y dio 8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-4-[4-(etilsulfonil)piperazin-1-il]pirido[3,4-d]pirimidina (Ejemplo-4) como polvo blanco (32 mg, rendimiento del 18%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 513,30 (s, 1H), 8 , 8 6 (s, 1H), 7,91 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,56 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 6 , 8 8 (dd, J = 16,5, 10,0 Hz, 1H), 6,20 (dd, J = 22,4, 13,3 Hz, 2H), 3,95 - 3,90 (m, 4H), 3,30 - 3,26 (m, 4H), 2,51 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 486, 488 (M+H).
Los productos intermedios detallados en la siguiente preparación permiten obtener el Ejemplo-5 mediante una ruta análoga al procedimiento A. Sin embargo, este ejemplo queda fuera del alcance sintético de los ejemplos anteriores debido a la formación de barilamina, por lo que esta preparación se incluye aquí por completitud Preparación de 1-(4-(8-[(5-metil-1tf-indazol-4-il)amino]pirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo de Referencia-5).
Paso 1:
Figure imgf000121_0001
Se añadió una solución madre 2,5*10 ' 3 M del catalizador (4,1 ml) que contenía Pd[P(o-tol)3]2( 7,3 mg) y CyPF-t-Bu (1-didohexilfosfino-2-di-t-butilfosfinoetilferroceno) (5,6 mg) se añadió a una mezcla de NaO-t-Bu (300 mg, 1,0 mmol) en THF (2,0 M) y 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (24) (300 mg, 1,0 mmol) en un vial de microondas bajo nitrógeno. Se añadió amoníaco (10,2 ml de una solución 0,5 M en dioxano) mediante una jeringa estanca. El vial se cerró con un tapón de teflón y se mantuvo a 100 °C durante la noche. La mezcla de reacción cruda se diluyó con EtOAc y agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó utilizando gel de sílice (columna ISCO 12 g) que se eludió con un gradiente de 0-65 % de EtoAc/heptano y dio 5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-amina (116) como sólido marrón claro (209 mg, 89 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 8,14 (s, 1H), 6,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,62 (dd, J = 9,7, 2,4 Hz, 1H), 5,50 (s, 2H), 3,87 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 3,68 (ddd, J = 11,4, 7,7, 6,0 Hz, 1H), 2,30 -2,45 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 1,95 -2,07 (m, 1H), 1,84 - 1,95 (m, 1H), 1,64 - 1,79 (m, 1H), 1,50 - 1,60 (m, 2H). LCMS (APCI) m/z 232 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000121_0002
A un matraz con 5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-amina (116) (195 mg, 0,6 mmol), 4-(8-cloropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (4) (129 mg, 0,6 mmol) y SK-CCO2-A (24 mg, 0,04 mmol, cas 614753-51-4) en tolueno (10 ml) bajo nitrógeno se añadió una solución de LiO-tBu (134 mg, 1,7 mmol) en THF (1,0 M). La solución marrón se purgó con nitrógeno durante tres minutos y se agitó a 100 °C durante 18 horas y a 115 °C durante dos horas más. La mezcla de reacción cruda se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc y NH4Cl acuoso. La capa acuosa se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó utilizando gel de sílice (columna ISCO de 24 g) que se eludió con un gradiente de isopropanol/EtOAc del 5 - 10% y dio 4-(8-((5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il)amino)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (117) (145 mg, rendimiento del 48%). LCMS (ESI) m/z 545 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000121_0003
Se preparó W-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidin-8-amina (118) (97 mg, 100 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-4-(piperazin-1-il)pirimidina (8 6 ). LCMS (ESI) m/z 361 (M+H).
Paso 4:
Cloruro de acriloilo
NaHC03 ac., EtOAc
Figure imgf000122_0001
29% de rendimiento
Figure imgf000122_0002
lo-5
Se preparó 1-(4-{8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)am¡no]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡llp¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona (Example-5) (32 mg, el 29% de rend¡m¡ento) de acuerdo con el proced¡m¡ento ut¡l¡zado para preparar 1-(4-{8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona ( Ejemplo-IA). El producto crudo se pur¡f¡có med¡ante SFC (columna ZymorSPHER HADP con metanol). 1H RMN (700 MHz, DMSO-da) 8 12,89 (br. s, 1H), 9,16 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 7,82 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,33 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 5,72 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,3 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,2 Hz, 1H), 5,71 -5,75 (m, 1H), 3,86 (br. s, 4H), 3,81 (br. s, 2H), 3,76 (br. s, 2H), 2,28 (s, 3H). LCMS (APCI) m/z 415 (M+H).
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el procedimiento general D:
Preparación de 1-(4-(8-[(5-metiMH-mdazol-4-N)metil]qumazolma-4-N}piperazm-1-N)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1D).
Paso 1:
Figure imgf000122_0003
Una mezcla de 8-bromo-4-cloroqu¡nazol¡na (119) (2 g, 8 mmol), p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-but¡lo (1,7 g, 90 mmol) y DIPEA (2,0 g, 16 mmol) en 25 ml de BuOH se calentó a 90 °C durante 6 horas. El d¡solvente se el¡m¡nó bajo pres¡ón reduc¡da y el producto bruto se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ¡nstantánea en gel de síl¡ce, que se eludió con 0-30 % de EtOAc/éter de petróleo y d¡o 4-(8-bromoqu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo(120) como un sól¡do blanco (3,0 g, 90 % de rend¡m¡ento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,87 (s, 1H), 8,07 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,34 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,80 - 3,72 (m, 4H), 3,68 - 3,62 (m, 4H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 393, 395 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000122_0004
Una mezcla de 4-(8-bromoquinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (120) (1,0 g, 2,5 mmol), acrilato de tert-butilo (489 mg, 3,81 mmol), Pd(OAc)2 (57 mg, 0,25 mmol), DABCO (57 mg, 0,51 mmol) y K2CO3 (351 mg, 2,54 mmol) en DMF seco (12 ml) se calentó a 120 °C durante 16 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba completa. La mezcla de reacción cruda se concentró y se diluyó con H2O (50 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x40 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (2 x50 ml), salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice y se eludió con 0-35 % de EtOAc/éter de petróleo y dio 4-{8-[(1E) -3-tert-butoxi-3-oxoprop-1-en-1-/7]quinazolin-4-il}piperazina-1-carboxilato (121) como un sólido blanquecino (850 mg, 77 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,82 (s, 1H), 8,61 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6 , 6 8 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 3,83 - 3,71 (m, 4H), 3,70 - 3,58 (m, 4H), 1,57 (s, 9H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 441 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000123_0001
A una solución agitada de 4-{8-[(1E)-3-tert-butoxi-3-oxoprop-1-en-1-il]quinazolin-4-il}piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (121) (700 mg, 1,59 m m ol) en DCM (35 ml) y metanol (35 ml) se burbujeó gas ozono a -50 °C. Después de unos 30 minutos, la traza de LCMS mostró que el material de partida se había consumido. Se burbujeó gas nitrógeno en la mezcla de reacción cruda con agitación durante aproximadamente 20 minutos, seguido de la adición de PPh3 (625 mg, 2,4 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 horas a temperatura ambiente (23 °C). La mezcla de reacción cruda se concentró y el producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice, que se eludió con 0-40 % de EtOAc/éter de petróleo, y dio 4-(8-formilquinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (122) como un sólido blanco (448 mg, 82 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 11,26 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,35 (dd, J = 7,3, 1,3 Hz, 1H), 8,13 (dd, J = 8.3, 1,3 Hz, 1H), 7,59 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,91 - 3,75 (m, 4H), 3,73 - 3,55 (m, 4H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 343 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000123_0002
A una solución agitada de 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1 H-indazol (24) (940 mg, 3,2 mmol) en THF seco (28 ml) se añadió 2,4 M BuLi (1,6 ml, 3,8 mmol) gota a gota a -80 °C. La mezcla resultante se agitó a -80 °C durante 40 minutos. A continuación, se añadió gota a gota una solución de 4-(8-formilquinazolina-4-il)piperazina-1-carboxilato de tertbutilo (122) (436 mg, 1,27 mmol) en THF seco (5 ml). La mezcla resultante se agitó a -80 °C durante 3 horas. El análisis LCMS mostró que se formó aproximadamente 50 % del compuesto objetivo. La reacción se apagó con NH4Cl acuoso (20 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice, que se eludió con 0-60 % de EtOAc/éter de petróleo, y dio 4-(8-{hidroxi[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]metil}quinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tertbutilo (123) como sólido blanco (330 mg, rendimiento del 18 %). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 8,83 (s, 1H), 8,18 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,58 - 7,45 (m, 1H), 7,28 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,17 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,90 -6.75 (m, 1H), 6,37 (br. s, 1H), 5,80 -5,62 (m, 1H), 4,17 -3,96 (m, 2H), 3,90 -3,70 (m, 5H), 3,69 -3,56 (m, 4H), 2,66 - 2,48 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,20 - 2,05 (m, 2H), 1,82 - 1,73 (m, 2H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 559 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000124_0001
Una solución de 4-(8-(h¡drox¡(5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l)met¡l)qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carboxilato de íerí-butílo (123) (120 mg, 0,22 mmol) y AC2O (84 mg, 1,1 mmol) en p¡r¡d¡na ( 8 ml) se ag¡tó a 80 °C durante 5 horas. El análisis de LCMS mostró que la reacdón estaba completa. El d¡solvente se el¡m¡nó a pres¡ón reduc¡da y d¡o 4-(8-{(acet¡l)[5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]met¡l}qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-but¡lo (124) como un ace¡te que se ut¡l¡zó en el s¡gu¡ente paso s¡n más pur¡f¡cac¡ón (129 mg, rend¡m¡ento del 100 %). LCMS (ESI) m/z 601 (M+H).
Paso 6 :
Figure imgf000124_0002
Una mezcla de 4-(8-{(acet¡lox¡)[5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]met¡l}qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (124) (129 mg, 0 , 2 2 mmol), Et3N (65 mg, 0,64 mmol) y 1 0 % de Pd/C (30 mg) en metanol (25 ml) se ag¡tó bajo una atmósfera de h¡drógeno durante 5 horas. El anál¡s¡s de LCMS mostró que la reacc¡ón estaba completa. La mezcla de reacc¡ón cruda se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró y el producto bruto se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ¡nstantánea en gel de síl¡ce, que se elud¡ó con 0-30 % de EtoAc/éter de petróleo y d¡o 4-(8-{[5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]met¡l}qu¡nazol¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (125) como una goma ¡ncolora (90 mg, 77 % de rend¡m¡ento). LCMS (ESI) m/z 543 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000124_0003
Se preparó 8-[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-il)met¡l]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)qu¡nazol¡na (126) (59 mg, rendimiento del 100%) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 8-[(5-metil-1 W-¡ndazol-4-¡l)oxi]-4-(p¡perazin-1-¡l)p¡rido[3,4-d]pir¡m¡dina (8 6 ).
Paso 8 :
Cloruro de acriloilo
NaHC03 ac., EtOAc 61% de rendimiento
Figure imgf000125_0001
Figure imgf000125_0002
-1D
Se preparó 1-(4-{8-[(5-met¡l-1H-indazol-4-¡l)met¡l]qu¡nazol¡na-4-¡l}p¡peraz¡n-1-¡l)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-ID) (40 mg, 61 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-metil-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡rido[3,4-d]pir¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡n-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IA). El producto crudo se purificó por pre-HPLC utilizando una columna Gemini-C18, 100x2l,2 mm, 5 |jm y se eludió con 15-25 % de acetonitrilo/H2O (0,1 % de ácido fórmico). 1H RMN (400 MHz, MeOD) 6 8,79 (s, 1H), 7,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,03 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 16,8, 10,7 Hz, 1H), 6,26 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,80 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 4,84 (s, 2H), 3,89 (s, 8 H), 2,31 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 413 (M+H).
Preparación de 1-(4-{8-[(5-met¡l)-1H-mdazol-4-¡l)met¡l]pmdo[3,4-d]pmm¡dm-4-¡l}p¡perazm-1-¡l)prop-2 -en-1-ona (Ejemplo-2D).
Paso 1:
Figure imgf000125_0003
Se preparó 4-{8-[(1E)-3-tert-butox¡-3-oxoprop-1-en-1-¡l]p¡rido[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (127) (880 mg, 14 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-{8-[(1E)-3-tertbutoxi-3-oxoprop-1-en-1-¡l]qu¡nazol¡n-4-¡l}p¡peraz¡na-1-carboxilato de tert-butilo (121). 1H RMN (400 MHz, cD ch) 6 8,83 (s, 1H), 8,74 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 3,84 (m, 4H), 3,66 (m, 4H), 1,56 (s, 9H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 442 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000126_0001
Se preparó 4-(8-formilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (128) (630 mg, 64% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-formilquinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (122). 1H RMN (400 MHz, DMSO-daj 8 11,05 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,77 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 3,95 (m, 4H), 3,57 (m, 4H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 344 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000126_0002
Se preparó 4-(8-{hidroxi[5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]metil}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (129) ( 2 0 0 mg, 10 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-{hidroxi[5-metil-1-(tetrahidro-2H- piran-2-il)-1H-indazol-4-il]metil}quinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (123). LCMS (ESI) m/z 560 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000126_0003
Se preparó 4-(8-{(acetiloxi)[5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]metil}pirido[3,4-d]pirimidina-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (130) (130 mg, 70 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-{(acetiloxi)[5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]metil}quinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tertbutilo (124). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,72 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 8,57 (m, 1H), 8,45 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 8,31 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 7,52 - 7,46 (m, 1H), 7,41 - 7,34 (m, 1H), 7,22 (d, J = 8 .6 Hz, 1H), 5,60 (m, 1H), 3,74 (m, 10H), 2,86 (d, J = 10,3 Hz, 3H), 2,60 - 2,52 (m, 1H), 2,21 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 2,17 -2,13 (m, 2H), 1,73 - 1,64 (m, 3H), 1,48 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 602 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000127_0001
Se preparó 4-(8-{[5-metil-1-(tetrahidro-2W-piran-2-il)-1 H-indazol-4-il]metil}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (131) (28 mg, 26 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-(8-{[5-metN-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]metil}quinazoNn-4-il)piperazina-1-carboxNato de ferf-butilo (125). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,87 (s, 1H), 8,42 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,63 (dd, J = 9,4, 2,2 Hz, 1H), 5,10 (m, 2H), 4,00 - 3,98 (m, 1H), 3,82 (m, 4H), 3,70 (m, 5H), 2,60 -2,47 (m, 4H), 2,13 -2,09 (m, 1H), 172 - 1,63 (m, 4H), 1,47 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 544 (M+H).
Paso 6 :
Figure imgf000127_0002
Se preparó 8-[(5-metN-1H-indazol-4-il)metil]-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (132) (19 mg, 100 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (8 6 ). LCMS (ESI) m/z 360 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000127_0003
Se preparo 1-(4-{8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)metil]pmdo[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-2D) ( 6 mg, el 19% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-metil-1H-indazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3,4-d]pirimid¡n-4-ií}piperazin-1-¡l)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1A). 1H RMN (400 MHz, MeOD) 8 8,80 (s, 1H), 8,35 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 5,6, 3,1 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 25,2, 8,5 Hz, 2H), 680 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,26 (dd, J = 16,8, 1,8 Hz, 1H), 5,79 (dd, J = 10,6, 1,8 Hz, 1H), 5,06 (s, 2H), 3,90 (m, 8 H), 2,46 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 413 (M+H).
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el procedimiento general E:
Preparación de 1-(4-(8-[(5-cloro-6-metiMH-mdazol-4-N)oxi]-2-[3-(dimetNammo)azetidm-1-y)]-6-metNpindo [3,4-d]pirim idin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-oneol (Ejemplo-IE).
Paso 1:
Figure imgf000128_0001
A una solución de 3-amino-2-{[5-cloro-6-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-6-metilpiridin-4-carboxilato de metilo (133) (424 mg, 0,98 mmol) en AcOH (15 ml) a 80 °C se añadió KOCN (904 mg, 11,1 mmol) en agua (1 ml) y la solución amarilla se agitó a 80 °C durante 30 minutos. Después de 30 minutos, LCMS dio el material de partida y el producto. Se añadió más KOCN sólido, en alícuotas de 11 mmol, cada 30 minutos hasta que se consumió todo el material de partida. La mezcla de reacción se enfrió y se diluyó con agua para dar una suspensión. El sólido se filtró, se lavó con agua y se secó. El sólido se disolvió en una mezcla de éter dietílico y DCM, se concentró y se pasó por agua. La mezcla se filtró y se secó para dar 8-{[5-cloro-6-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (134) como sólido de color crema (426 mg, 98 % de rendimiento). Lc Ms (ESI) m/z 442 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000128_0002
Una solución de 8-{[5-cloro-6-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (134) (426 mg, 0,96 mmol) en POCh ( 6 ml) y dimetilanilina (0,05 ml) se agitó a 100 °C durante 6 horas. La mezcla de reacción cruda se concentró y se azeotró con tolueno. Se añadió hielo al producto bruto y se basificó la mezcla con bicarbonato sódico. El producto bruto se extrajo en DCM, se secó sobre sulfato sódico y se concentró, lo que dio 2,4-dicloro-8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidina (135) como una espuma marrón (278 mg, 73 % de rendimiento). LCMS (ESI) m/z 393 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000128_0003
Una solución de 2,4-dicloro-8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidina (278 mg, 0,70 mmol), piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (135) (157 mg, 0,84 mmol) y diisoproiletilamina (273 mg, 2,11 mmol ) en DCM (10 ml) se agitó durante la noche. La mezcla de reacción cruda se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (cartucho ISCO de 12 g) y se eludió con EtOAc/heptano (0-100 %) y dio 4-{2-cloro-8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazina-1 -carboxilato de ferf-butilo (136) como sólido marrón (57 mg, rendimiento del 15 %). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 57,81 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 3,91 (br. s, 4H), 3,75 - 3,62 (m, 4H), 2,53 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 1,49 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 544 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000129_0001
Una mezcla de 4-{2-cloro-8-[(5-cloro-6-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-6-met¡lp¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (136) (57 mg, 0,10 mmol), d¡h¡drocloruro de A/,W-d¡met¡lazet¡d¡n-3-am¡na (109 mg, 0,63 mmol), DIEA (0,13 ml, 0,73 mmol) y KF (12 mg, 0,21 mmol) en DMSO (2 ml) se agitó a 115 °C durante 5 horas. La mezcla de reacc¡ón cruda se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se d¡luyó con EtOAc y se lavó con agua (2X) y salmuera. La capa orgán¡ca se secó sobre sulfato sód¡co y se concentró, lo que d¡o 4-{8-[(5-cloro-6-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-[3-(d¡met¡lam¡no)azet¡d¡n-1-¡l]-6-met¡lp¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (137) como espuma marrón (49 mg, 77 % de rend¡m¡ento). LCMS (ESI) m/z 608 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000129_0002
Se preparó 1-{8-[(5-doro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-6-metil-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidin-2-il}-N,N-d¡met¡lazet¡d¡n-3-am¡na (138) (87 mg, 100% de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 8 -[(5-met¡l-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na (8 6 ). LCMS (ESI) m/z 508 (M+H).
Paso 6 :
Figure imgf000130_0001
Se preparó 1 -(4-{8-[(5-cloro-6-metil-1 /-/-indazol-4-il)oxi]-2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IE) (7 mg, 15 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-metil-1H-indazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1A). LCMS (ESI) m/z 562 (M+H).
Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon utilizando el Procedimiento E y el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IE). Los siguientes ejemplos se hicieron con cambios o sustituciones no críticos al procedimiento ejemplificado utilizado para preparar el Ejemplo-IE que alguien experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000130_0002
(continuación)
Figure imgf000131_0001
(continuación)
Figure imgf000132_0001
(continuación)
Figure imgf000133_0001
(continuación)
Figure imgf000134_0001
(continuación)
Figure imgf000135_0001
Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon en formato de biblioteca paralela utilizando el procedimiento E y el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il) prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IE). Los siguientes ejemplos se hicieron con cambios o sustituciones no críticos al procedimiento ejemplificado utilizado para preparar el Ejemplo-IE que alguien experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000136_0001
Figure imgf000137_0001
Figure imgf000138_0001
Figure imgf000139_0001
Preparación de productos intermedios adicionales:
Preparación del 3-cloro-5-metiM-(tetrahidro-2W-pirano-2-il)-1W-mdazol-4-ol (139). Paso 1:
Figure imgf000140_0001
A una solución de 4-bromo-5-metil-1H-indazol (140) (3,0 g, 14,2 mmol) en acetonitrilo (50 ml) se añadió NCS (2,1 g, 15,6 mmol) en pequeñas porciones. Después de la adición, la reacción se calentó a 65 °C durante 6 hora. LCMS sólo dio producto. La mezcla de reacción cruda se enfrió a temperatura ambiente y se añadió EtOAc (100 ml). La capa orgánica se lavó con una solución de NaOH 1 N (20 ml) y salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró bajo presión reducida, lo que dio 4-bromo-3-cloro-5-metil-1H-indazol (141) (3,3 g, 90 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 513,56 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 2,57 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 245 / 247 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000140_0002
Se preparó 4-bromo-3-cloro-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (142) (2,5 g, 56 % de rendimiento) de acuerdo con el procedimiento utilizado para preparar 4-bromo-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (24). 1H RMN (400 MHz, CDCls) 57,43 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,63 (dd, J = 8,9, 2,9 Hz, 1H), 4,01 - 3.96 (m, 1H), 3,77 -3,66 (m, 1H), 2,56 -2,47 (m, 1H), 2,19 -2,13 (m, 1H), 2,08 -2,02 (m, 1H), 1,81 -1,62 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 352 / 354 (M+Na).
Paso 3:
Figure imgf000140_0003
A una solución agitada de 4-bromo-3-cloro-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (142) (1,9 g, 5.8 mmol) en DMF (60 ml) se añadió 4,4,4',4',5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,2 g, 8,6 mmol), kOAc (1,7 g, 17,3 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (422 mg, 0,58 mmol) bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción cruda se agitó a 105 °C durante 6 horas. El análisis LCMS mostró la conversión a producto. Tras enfriar, se añadió agua (50 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (2x50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice y se eludió con EtOAc/petróleo (1 /9 ) y dio 3-cloro-5-metil-1-(tetrahidro-2w-pirano-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-indazol (143) (1,3 g, rendimiento del 60%). LCMS (ESI) m/z 377 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000141_0001
A una solución de 3-cloro-5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-4-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)-1H-indazol (143) (1,3 g, 3,4 mmol) en EtOH (30 ml) se añad¡ó mCPBA (893 mg, 5,2 mmol) y H2O (15 ml). La reacc¡ón se agitó a 20 °C durante 16 horas. LCMS dio principalmente el producto. La mezcla de reacc¡ón cruda se diluyó con una soluc¡ón al 10% de NaHCO3 (10 ml) y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x50 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sód¡co y se concentraron bajo pres¡ón reduc¡da. El producto crudo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna de gel de sílice que se eludió con EtOAc/éter de petróleo (1/5) y d¡o 3-cloro-5-metil-1-(tetrahidro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (139) (180 mg, 80 % de pureza, 20% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 9,18 (s, 1H), 7,18 (d, J = 8 , 6 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,69 (dd, J = 9,7, 2,5 Hz, 1H), 3,92 - 3,81 (m, 1H), 3,76 -3,63 (m, 1H), 2,35 -2,26 (m, 1H), 2,25 (d, J = 9,9 Hz, 3H), 2,03 - 1,96 (m, 1H), 1,96 - 1,88 (m, 1H), 1,79 -1,65 (m, 1H), 1,60 - 1,49 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 267 (M+H) y 289 (M+Na).
Figure imgf000141_0002
A una mezcla de 3-bromo-1,2-dicloro-5-fluoro-4-met¡lbenceno (147) (4,7 g, 18,3 mmol) en 1:1 agua-tBuOH (45 ml), se añadió KMnO4 (8,7 g, 54,8 mmol) a 80 °C. La mezcla se calentó a 90 °C durante la noche. Se añadieron otros 4,5 g de KMnO4 y se agitó a 105 °C durante la noche. La mezcla se diluyó con EtOH y se filtró a través de una almohadilla de celita. El filtrado se concentró al vacío para dar un sólido blanco que se diluyó con éter/agua. La capa acuosa se secó con un liofilizador y dio un sólido blanco (4,9 g). El sólido blanco se suspendió en EtOAc/EtOH y el material insoluble se eliminó por filtración. El filtrado dio 3,7 g (70 % de rendimiento) de ácido 2-bromo-3,4-dicloro-6-fluorobenzoico (148) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 7,53 (d, J = 7,8 Hz, 1H).
Paso 2:
Figure imgf000141_0003
Una solución de ácido 2-bromo-3,4-dicloro-6-fluorobenzoico (148) (2,2 g, 7,8 mmol) en THF (11 ml) bajo N2 se enfrió a 0 °C. La mezcla se trató gota a gota con una solución de BH3.SMe2 en THF (2,0 M en THF, 112 ml, 24,1 mmol). Se observó la generación de gas. Una vez completada la adición, la mezcla se agitó a 0 °C durante 1,5 h adicionales y luego se calentó a 70 °C durante 18 h. La mezcla de reacción cruda se analizó por LCMS, que indicó la formación del producto deseado. La reacción se enfrió con un baño de hielo y luego se apagó cuidadosamente con EtOH. La mezcla se filtró para eliminar el material insoluble y se concentró. El residuo se repartió entre EtOAc (130 ml) y agua ácida (130 ml). La capa orgánica se lavó con NH4Cl sat., se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar un sólido pálido, que se purificó por cromatografía en columna (S¡O2, ISCO, 0-30 % EtOAc/heptano) para proporcionar 1,5 g de (2-bromo-3,4-dicloro-6-fluorofenil)metanol (149) (71 % de rendimiento) como sólido pálido. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 7,29 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,87 (d, J = 2,3 Hz, 2H).
Paso 3:
Figure imgf000142_0001
A una solución de (2-bromo-3,4-dicloro-6-fluorofenil)metanol (149) (315 mg, 1,15 mmol) en CHCI3 (12 ml) se añadió MnO2 (700 mg, 8,05 mmol) en porciones. A continuación, la mezcla se calentó a reflujo durante 20 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida. La mezcla se filtró a través de celita. El filtrado negro se concentró para obtener un residuo crudo, que se purificó por cromatografía en columna (SO 2, ISCO, 0-10% EtOAc/heptano) para proporcionar 215 mg de 2-bromo-3,4-dicloro-6-fluorobenzaldehído (150) ( 68 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 10,27 (s, 1H), 7,38 (d, J = 9,7 Hz, 1H).
Paso 4:
Figure imgf000142_0002
A un vial que contenía 2-bromo-3,4-dicloro-6-fluorobenzaldehído (150) (761 mg, 2,80 mmol) se añadió hidracina anhidra (628 mg, 19,6 mmol) y sulfolano (14 ml). La solución se calentó a 130 °C durante 20 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. La mezcla se lavó con agua (2x). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía (SO 2, ISCO, 5-50 % EtOAc/heptano) para proporcionar 448 mg de 4-bromo-5,6-dicloro-1H-indazol (151) (56 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfó) 8 13,72 (br. s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,95 (d, J = 0,9 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 265 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000142_0003
A una solución de 4-bromo-5,6-dicloro-1H-indazol (151) (123 mg, 0,46 mmol) en THF (5 ml) se añadió PPTS (8,1 mg, 0,03 mmol) y DHP (156 mg, 1,85 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 5 h. El análisis de LCMS mostró el consumo completo del material de partida con la conversión al producto. La mezcla se concentró y el residuo se repartió entre EtOAc y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, ISCO, 0-25% EtOAc/heptano) para dar 150 mg de 4-bromo-5,6-dicloro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (152) (93 % de rendimiento) como sólido blanco. LCMS (ESI) m/z 265 (M-THP).
Paso 6 :
Figure imgf000143_0001
Se disolvieron 4-bromo-5,6-didoro-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-indazol (152) (423 mg, 1,21 mmol) y CsOH (543 mg, 3,63 mmol) en dioxano/agua y se añadieron al catalizador Pd2(dba)3 (55,3 mg) y al ligando tBu-XFhos (51,3 mg). La mezcla de reacción se desgasificó con una corriente de N2 y se calentó a 80 °C durante 2,5 h. El análisis de LCMS mostró que el material de partida se consumió con la formación del producto deseado. La mezcla de reacción se dividió entre EtOAc y una solución acuosa de NH4CL La fase acuosa se ajustó a una ligera acidez con HCl 2N y luego se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía (SO 2, ISCO, 10-90 % EtOAc/heptano) y dio 307 mg de 5,6-d¡cloro-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (153) (8 8 % de rendimiento, ~80% de pureza) como sólido marrón, que se tomó sin más purificación. LCMS (ESI) m/z 203 (M-THP).
Preparación del 6-cloro-5-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-M)-1H-mdazol-4-ol (157)
Paso 1:
Figure imgf000143_0002
A una mezcla de 6-cloro-4-fluoro-1H-indazol (154) (606 mg, 3,55 mmol) y monohidrato de PTSA (67,6 mg, 0,36 mmol) en THF se añadió DHP (359 mg, 0,39 ml, 4,26 mmol) y la mezcla se agitó a reflujo durante 2 h. El análisis de LCMS mostró la conversión al producto deseado. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El aceite crudo se purificó por cromatografía (ISCO, SO 2 , 0-100 % DCM/heptanos) para proporcionar 816 mg de 6-cloro-4-fluoro-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (155) (90 % de rendimiento) como un aceite incoloro que cristalizó lentamente. LCMS (ESI) m/z 171 (M-THP).
Paso 2:
Figure imgf000143_0003
Se añadió una solución de LDA (1,0 M en THF, 1,5 ml, 1,5 mmol) a una solución de 6-cloro-4-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (155) (273 mg, 1,07 mmol) en THF (10,7 ml) a -70 °C. La mezcla de reacción resultante, de color amarillo claro, se agitó a la misma temperatura durante una hora. La mezcla de reacción resultante, de color amarillo claro, se agitó a la misma temperatura durante 1 h. Se añadió gota a gota una solución de NFSI (473 mg, 1,5 mmol) en THF (1,5 ml). El análisis de LCMS indicó la formación del producto deseado con algo de material de partida restante. La mezcla se apagó con NH4Cl acuoso saturado y la mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía (SO 2, ISCO, 0-20% EtOAc/heptano) para proporcionar 6-cloro-4,5-d¡fluoro-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol (156) (152 mg, 52 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8,07 - 8,11 (m, 1H), 7,49 (dt, J = 4,9, 1,2 Hz, 1H), 5,66 (dd, J = 8,9, 2,6 Hz, 1H), 3,97 - 4,02 (m, 1H), 3,73 - 3,79 (m, 1H), 2,42 - 2,52 (m, 1H), 2,07 - 2,17 (m, 2H), 1,68 - 1,79 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 189 (M-THP).
Paso 3:
Figure imgf000144_0001
Una mezcla de 6-doro-4,5-difluoro-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-il)-1H-¡ndazol (156) (151 mg, 0,554 mmol), agua (40 pl, 2,22 mmol) y KOH (124 mg, 2,22 mmol) en DMSO (1,85 ml) se agitó a 100 °C durante 3,5 h. El análisis de LCm S mostró el consumo del material de partida y la formación del producto deseado. Se añadió EtOAc y agua y se separaron las capas. La fase acuosa se ajustó a una ligera acidez con HCl 2 N. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía (SO 2, ISCO, 5-65 % EtOAc/heptano) para proporcionar 6-cloro-5-fluoro-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (157) (110 mg, 73% de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 6 11,06 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,40 (d, J = 4,77 Hz, 1H), 5,76 (dd, J = 9,66, 2,45 Hz, 1H), 3,79 - 3,89 (m, 1H), 3,67 - 3,78 (m, 1H), 2,26 - 2,40 (m, 1H), 2,01 (d, J = 5,01 Hz, 1H), 1,88 - 1,96 (m, 1H), 1,63 - 1,77 (m, 1H), 1,50 - 1,60 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 187 (M-THP).
Preparación de [(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (161)
Paso 1:
Figure imgf000144_0002
Al (4S)-4-hidroxi-L-prolinato de metilo (19 g, 10 mmol) y TEA (17,2 g, 170 mmol) en THF (400 ml) se añadió (Boc)2O (31,4 g, 7,58 mmol ) a 0 °C durante 0,5 h. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La mezcla se transfirió a un embudo de separación, se diluyó con 500 ml de EtOAc y se lavó con H2O (3x300 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar 2-metil (2S,4S)-4-h¡drox¡p¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato de 1 -ferf-butilo(159) (21 g, 65% de rendimiento), que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 6 4,98 (dd, J = 18,7, 3,5 Hz, 1H), 4,21 (ddd, J = 13,9, 8,9, 4,6 Hz, 2H), 3,62 (d, J = 12,4 Hz, 3H), 3,53 - 3,42 (m, 1H), 3,10 (dd, J = 10,5, 4,3 Hz, 1H), 2,40 - 2,25 (m, 1H), 1,82 (dt, J = 12,8, 4,7 Hz, 1H), 1,36 (d, J = 26,6 Hz, 9H). LCMS (ESI) m/z 190 (M-tBu).
Paso 2:
Figure imgf000144_0003
A una solución de 2-metil (2S,4S)-4-h¡drox¡p¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato de 1 -ferr-butilo (159) (16,4 g, 20 mmol) en DCM (400 ml) se añadió DAST (32,3 g, 201 mmol) a -78 °C . La reacción se agitó durante 1 h y luego se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 24 h más. El análisis de LCMS mostró la conversión al producto deseado. La reacción se apagó añadiendo NaHCO3 acuoso saturado (300 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (3x300 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. Se purificó por cromatografía instantánea (SiO2, 0-10 % EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar 2-metil (2S,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato de 1-ferf-butilo (160) (10 g, 70 % de rendimiento) como un aceite incoloro. LCMS (ESl) m/z 192 (M-tBu).
Paso 3:
Figure imgf000145_0001
A una solución de 2-metil (2S,4R)-4-fluoropirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1 -ferf-butilo (160) (6,92 g, 28 mmol) en THF (100 ml) se añadió LiAlH4 (3,19 mg, 84 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El análisis LCMS mostró la formación del producto deseado. La mezcla se secó sobre Na2SO4 -1 0 H2O y se agitó durante 1 h. La mezcla se filtró y se concentró para proporcionar [(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (161) como un aceite incoloro (3,7 g, 99% de rendimiento), que se asumió sin más purificación. LCMS (ESI) m/z 134 (M+H).
Preparación de [(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (163)
Figure imgf000145_0002
A una solución de 2-metil (2S,4S)-4-fluoropirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1 -ferf-butilo (162) (8 , 8 g, 36 mmol) en THF (400 ml) se añadió LiAlH4 (4,05 g, 107 mmol) en porciones a 20°C bajo una atmósfera de N2. Tras agitar durante 2 h, se añadieron gota a gota H2O (4,1 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (8,2 ml) para inactivar la reacción. Se añadió EtOAc (500 ml) y se filtró la mezcla. El filtrado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 9:1 DCM/MeOH) para proporcionar [(2S,4S)-4-fluoro-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (163) (3,1 g, 65% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 5,20 - 4,98 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,38 - 3,27 (m, 1H), 3,10 (m, 1H), 2,34 -2,27 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,25 -2,19 (m, 1H), 1,77 - 1,61 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z 134 (M+H).
Preparación de [(2S,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (166)
Paso 1:
Figure imgf000145_0003
A una solución de 2-metil (2S,4R)-4-hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxilato 1 -ferf-butilo (164) ( 6 g, 24,5 mmol) en CH3CN (120 ml) se añadió Ag2O (17,0 g, 73,4 mmol) y CH3 I (27,76 g, 196 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 16 h. El análisis de LCMS mostró la formación del producto deseado con algo de material de partida restante. Se añadió CH3 I adicional (6,94 g, 49 mmol) y la reacción se agitó a 20 °C durante 16 h más. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La mezcla se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad y se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 8 :1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener 2 -metil (2S,4R)-4-hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-ferf-butilo(165) como aceite incoloro (4,6 g, 73 % de rendimiento). LCMS (ESI) m/z 282 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000146_0001
A una solución de 2-metil (2S,4R)-4-hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1- ferf-butilo (165) (1,6 g, 6,2 mmol) en THF (30 ml) se añadió LiAlH4 (703 mg, 18,5 mmol) y la mezcla se agitó a 80 °C durante 3 h. El análisis LCMS mostró la formación del producto deseado. La reacción se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió Na2SO4^1 0 H2O y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se filtró para obtener [(2S,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (166) (0,85 g, 95 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 4,38 (s, 1H), 3,81 - 3,74 (m, 1H), 3,40 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,27 - 3,21 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 2,38 - 2,30 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,08 (dd, J = 9,5, 6,0 Hz, 1H), 1,73 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 146 (M+H).
Preparación de [(2S,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (169)
Paso 1:
Figure imgf000146_0002
A una solución de 2-metil (2R,4S)-4-hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1 -ferf-butilo (167) (3 g, 12,23 mmol) en CH3CN (80 ml) se añadió Ag2O (8,5 g, 36,7 mmol) y CH3 I (17,4 g, 122 mmol) y la mezcla se agitó a 20 °C durante 16 h. El análisis de LCMS mostró el material de partida restante. Se añadió más Ag2O (4 g) y CH3 I (9 g) y la reacción se agitó a 20 °C durante 16 h más. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La mezcla se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó por cromatografía instantánea (SO 2, 1:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener 2-metil (2R,4S)-4-metoxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1 -ferf-butilo (168) como aceite incoloro (2,5 g, 79 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 4,21 (dd, J = 9,2, 4,0 Hz, 1H), 3,92 - 3,86 (m, 1H), 3,59 (d, J = 11,5 Hz, 3H), 3,48 (dd, J = 11,4, 5,6 Hz, 1H), 3.21 (dd, J = 11,4, 3,1 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 3,8 Hz, 3H), 2,33 (d, J = 14,0 Hz, 1H), 1,98 (dd, J = 13,8, 4,1 Hz, 1H), 1,34 (d, J = 26,9 Hz, 9H). LCMS (ESI) m/z 282 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000146_0003
A una solución de (2R,4S)-4-metoxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1 -ferf-butilo (168) (2 g, 7,71 mmol) en THF (80 ml) se añadió LiAlH4 (879 mg, 23,1 mmol) y la mezcla se agitó a 80 °C durante 3 h. El análisis LCMS mostró la conversión del producto. Tras enfriar a 20 °C, se añadió Na2SO4^1 0 H2O y la mezcla se agitó durante 10 min. La mezcla se filtró y se concentró para obtener [(2R,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-2-il]metanol (169) como un aceite incoloro (1,1 g, 79 % de rendimiento), que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 Mh z , DMSO-cfe) 8 4,40 - 4,32 (m, 1H), 3,75 (dt, J = 9,3, 4,7 Hz, 1H), 3,44 (td, J = 6,0, 2,9 Hz, 1H), 3,35 -3.23 (m, 1H), 3,13 (s, 3H), 2,98 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,21 (s, 3H), 2,19 -2,09 (m, 3H), 1,47 (dd, J = 6,2, 2,4 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 146 (M+H).
Preparación de (3R,5S)-5-(hidroximetil)-1-metilpirrolidin-3-carbonitrilo (173)
Paso 1:
Figure imgf000147_0001
ml) se añadió TFA (5 ml) y la mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. El análisis LCMS mostró la formación del producto. La mezcla se concentró para obtener el (4R)-4-ciano-L-prolinato de metilo (171) como un aceite incoloro (2,11 g, 100 % de rendimiento). LCMS (ESI) m/z 155 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000147_0002
A una mezcla de (4R)-4-ciano-L-prolinato de metilo (171) (2,11 g, 7,86 mmol) y HCHO (4 ml) en DCM (15 ml) y THF (5 ml) se añadió NaBH3CN (990 mg, 15,7 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró la formación del producto. Se añadió H2O (50 ml) y la mezcla se extrajo con DCM (3x100 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron para proporcionar (4R)-4-ciano-1-metil-L-prolinato de metilo (l72) como aceite amarillo (1,32 g, 1 0 0 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 53,66 (s, 3H), 3,32 -3,21 (m, 3H), 2,58 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,34 -2,27 (m, 5H). LCMS (ESI) m/z 169 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000147_0003
A una solución de (4R)-4-ciano-1-metil-L-prolinato de metilo (172) (1,32 g, 8,56 mmol) en THF (20 ml) se añadió LiBH4 (377 mg, 17,1 mmol) y la mezcla se agitó a 50 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. Se añadió H2O (10 ml) y la mezcla resultante se agitó durante 10 min. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar (3R,5S)-5-(hidroximetil)-1-metilpirrolidin-3-carbonitrilo (173) como aceite incoloro (472 mg, 39 % de rendimiento), que se tomó sin más purificación. LCMS (ESI) m/z 141 (M+H).
Preparación de [(3S)-3-fluoro-1-metilpirrolidin-3-il]metanol (177)
Paso 1:
Figure imgf000147_0004
Una solución del ácido (3S)-1-(ferf-butoxicarbonilo)-3-fluoropirrolidin-3-carboxílico (174) (WO2013072813) (1,25 g, 5,38 mmol) en THF seco (18 ml) se trató gota a gota con una solución de BH3 (1,0 M en THF, 17,2 ml) bajo una atmósfera de N2. Tras la adición, la mezcla se calentó a reflujo durante 16 h. El análisis de LCMS mostró la formación del producto deseado con el consumo completo del material de partida. La reacción se enfrió a 25 °C y se añadió gota a gota MeOH (10 ml). La mezcla se agitó durante 2 h, se enfrió a 0 °C y se trató con HCl 0,5 M (3 ml). La solución se agitó durante 0,5 h. Se añadió NaHCO3 acuoso saturado para ajustar la mezcla de reacción a un pH > 7. La mezcla se concentró para eliminar MeOH. El residuo se diluyó con H2O (30 ml) y luego se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (30 ml x 2), se secaron (Na2SO4), y se concentraron. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, 10-70% EtOAc/éter de petróleo) para obtener (3S)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidin-1 -carboxilato de tert-butilo (175) (1 ,1 g, 93% de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMsO-cfe) 55,19 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,67 - 3,51 (m, 2H), 3,50 - 3,40 (m, 2H), 3,39 - 3,25 (m, 2H), 2,12 - 1,90 (m, 2H), 1,40 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 242 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000148_0001
A una solución agitada de (3S)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidin-1-carboxilato (175) (1,09 g, 5,0 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) se añadió HCl (4 M en 1,4-dioxano, 8 ml) a 0-10 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 16 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida. El disolvente se eliminó bajo presión reducida para obtener cloruro de (3S)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidinio (176) (740 mg, 95% de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 59,75 (s, 2H), 5,47 (s, 1H), 3,78 - 3,55 (m, 2H), 3,47 - 3,18 (m, 4H), 2,21 -1,98 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 120 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000148_0002
e ren m en o
Una mezcla de cloruro de (3S)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidinio (176) (740 mg, 4,76 mmol), formaldehído acuoso (5 ml) y ácido fórmico (10 ml) en un tubo sellado se calentó a 100 °C durante 48 h. El análisis de LCMS mostró el consumo completo del material de partida con la formación del producto deseado. La reacción se concentró en seco. Se añadió HCl concentrado (5 ml) al residuo. La mezcla resultante se agitó durante 2 h y luego se concentró hasta sequedad. Se añadió H2O (15 ml) al residuo. La mezcla se basificó cuidadosamente con K2CO3 sólido y luego se extrajo con EtOAc (3x30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 0-15% MeOH/DCM) para obtener [(3S)-3-fluoro-1-metilpirrolidin-3-il]metanol (177) (630 mg, rendimiento del 100 %) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 55,09 (s, 1H), 3,52-3,25 (m, 2H), 2,67 -2,62 (m, 1H), 2,62 -2,59 (m, 1H), 2,58 -2,51 (m, 1H), 2,41 -2,28 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,98­ 1,73 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 134 (M+H).
Preparación de [(3R)-3-fluoro-1-metilpirrolidin-3-il]metanol (181)
Paso 1:
Figure imgf000148_0003
Una solución del ácido (3R)-1-('tert-butoxicarbonilo)-3-fluoropirrolidin-3-carboxílico (178) (WO2013072813) (1,79 g, 7,65 mmol) en THF seco (24 ml) se trató gota a gota con una solución de BH3 (1,0 M en THF, 30 ml) bajo una atmósfera de N2. Tras la adición, la mezcla se calentó a reflujo durante 16 h. El análisis de LCMS mostró la formación del producto deseado con el consumo completo del material de partida. La reacción se enfrió a 25 °C y se añadió gota a gota MeOH (10 ml). La mezcla se agitó durante 2 h, se enfrió a 0 °C y se trató con HCl 0,5 M (3 ml). La solución se agitó durante 0,5 h. Se añadió NaHCO3 acuoso saturado para ajustar la mezcla de reacción a un pH > 7. La mezcla se concentró para eliminar MeOH. El residuo se diluyó con H2O (30 ml) y luego se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (30 ml x 2), se secaron (Na2SO4), y se concentraron. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 10-70% EtOAc/éter de petróleo) para obtener (3R)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo (179) (1,33 g, 79% de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 5,19 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,64 -3,52 (m, 2H), 3,50-3,40 (m, 2H), 3,38-3,34 (m, 1H), 3,32 -3,10 (m, 1H), 2,11-1,90 (m, 2H), 1,40 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 242 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000149_0001
95% de rendimiento
A una solución agitada de (3R)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidin-1-carboxilato(179) (1,33 g, 6,061 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) se añadió HCl (4 M en 1,4-dioxano, 10 ml) a 0-10 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. El disolvente se eliminó bajo presión reducida para obtener cloruro de (3R)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidinio(180) (892 mg, 95% de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 59,63 (s, 2H), 5,45 (s, 1H), 3,74 - 3,53 (m, 2H), 3,42 - 3,24 (m, 4H), 2,18 -1,99 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 120 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000149_0002
Una mezcla de cloruro de (3R)-3-fluoro-3-(hidroximetil)pirrolidinio (180) (892 mg, 5,73 mmol), formaldehído acuoso (5 ml) y ácido fórmico (10 ml) en un tubo sellado se calentó a 100 °C durante 48 h. El análisis de LCMS mostró el consumo completo del material de partida con la formación del producto deseado. La reacción se concentró hasta sequedad. Se añadió HCl concentrado (5 ml) al residuo. La mezcla resultante se agitó durante 2 h, se concentró hasta sequedad y se añadió H2O (15 ml) al residuo. La mezcla se basificó cuidadosamente con K2CO3 sólido y luego se extrajo con EtOAc (3x30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 0-15% MeOH/DCM) para obtener [(3R)-3-fluoro-1-metilpirrolidin-3-il]metanol(181) (630 mg, 100% de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 55,09 (s, 1H), 3,57 - 3,28 (m, 2H), 2,84-2,52 (m, 3H), 2,42-2,30 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,99 - 1,66 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 134 (M+H).
Preparación de [(3R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metanol (184)
Paso 1:
Figure imgf000149_0003
183
100% de rendimiento
A una solución agitada de (3R)-3-fluoro-3-(hidroximetil)piperidin-1-carboxilato de tert-butilo(182) (500 mg, 2,14 mmol) en DCM (3 ml) se añadió HCl (4M 1,4-dioxano, 3 ml) y la mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 2 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. El disolvente se eliminó bajo presión reducida para proporcionar cloruro de (3R)-3-fluoro-3-(hidroximetil)piperidinio(183) (360 mg, 99% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-Ó6) 58 , 6 8 (s, 1H), 5,31 (s, 1H), 3,59 - 3,39 (m, 3H), 3,19 - 2,97 (m, 2H), 2,82 (m, 1H), 1,86 - 1,55 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 134 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000150_0001
Una mezcla de cloruro de (3R)-3-fluoro-3-(h¡drox¡met¡l)p¡perid¡n¡o(183) (360 mg, 2,12 mmol), formaldehído acuoso (3 mi) y ácido fórmico ( 6 ml) en un tubo sellado se calentó a 100 °C durante 23 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La reacción se concentró hasta sequedad. Se añadió HCl concentrado (5 ml) al residuo y se agitó durante 2 h y luego se concentró la mezcla. Al residuo se le añadió H2O (30 ml). La mezcla se basificó cuidadosamente con K2CO3 sólido y luego se extrajo con DCM/MeOH 10:1 (3x30 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar [(3R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metanol(184) (220 mg, 70 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 4,89 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,43 (m, 2H), 2,47 -2,31 (m, 2H), 2,23 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,13 -2,06 (m, 1H), 1,67 - 1,44 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 148 (M+H).
Preparación de [(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metanol (187)
Paso 1:
Figure imgf000150_0002
A una solución agitada de (3S)-3-fluoro-3-(hidroximetil)piperidin-1-carboxilato de tert-butilo(185) (500 mg, 2,14 mmol) en DCM (3 ml) se añadió HCl (4 M en 1,4-dioxano, 3 ml). La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 2 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. El disolvente se eliminó bajo presión reducida para proporcionar cloruro de (3S)-3-fluoro-3-(hidroximetil)piperidinio(186) (360 mg, 99 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 8,61 (s, 1H), 5,28 (s, 1H), 3,57 - 3,36 (m, 3H), 3,21 - 2,96 (m, 2H), 2,82 (m, 1H), 1,86 - 1,56 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 134 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000150_0003
186 187
Una mezcla de cloruro de (3S)-3-fluoro-3-(hidroximetil)piperidinio(186) (230 mg, 0,75 mmol), formaldehído acuoso (2 ml) y ácido fórmico (4 ml) en un tubo sellado se calentó a 100 °C durante 23 horas. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La reacción se concentró hasta sequedad. Se añadió HCl concentrado (5 ml) al residuo y se agitó durante 2 h y luego se concentró la mezcla. Al residuo se le añadió H2O (30 ml). La mezcla se basificó cuidadosamente con K2CO3 sólido y luego se extrajo con DCM/MeOH 10:1 (3x30 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar [(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metanol(187) (160 mg, 80 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 4,90 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,44 (dt, J = 22,9, 6,7 Hz, 2H), 2,47 -2.31 (m, 2H), 2,23 (dd, J = 22,0, 11,7 Hz, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 1,66 - 1,40 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 148 (M+H).
Preparación de [(3S,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]metanol (190)
Paso 1:
Figure imgf000151_0001
A una solución agitada de (3S,4S)-3-(hidroximetil)-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo (188) (J. Med. Chem.
2016, 59, 2005-2024) (1,85 g, 8,0 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) se añadió HCl (4 M en 1,4-dioxano, 10 ml) a 0-10 °C. Tras la adición, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. El disolvente se eliminó a presión reducida para obtener cloruro de (3S,4S)-3-(hidroximetil)-4-metoxipirrolidinio(189) (1,34 g, 100% de rendimiento) como un aceite marrón, que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 8 9,54 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 5,50-4,50 (br s, 1H), 3,94-3,80 (m, 1H), 3,41 (s, 1H), 3,39 (s, 1H), 3,32 -3,06 (m, 6 H), 3,03-2,92 (m, 1H), 2,43-2,29 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z 132 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000151_0002
Una mezcla de cloruro de (3S,4S)-3-(hidroximetil)-4-metoxipirrolidinio(189) (1,34 g, 8,0 mmol), formaldehído acuoso (7 ml) y ácido fórmico (14 ml) en un tubo sellado se calentó a 100 °C durante 4 días. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. La reacción se enfrió a 25 °C. El disolvente se eliminó bajo presión reducida. Se añadió HCl concentrado (10 ml) al residuo y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró hasta sequedad. El residuo se basificó cuidadosamente con K2CO3 acuoso y luego se extrajo con DCM (3x50 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar [(3S,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]metanol (190) (1,12 g, 96% de rendimiento) como un aceite marrón. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 4,64 (m, 1H), 3,53 - 3,47 (m, 1H), 3,39 - 3,34 (m, 1H), 3,32 - 3,28 (m, 1H), 3.16 (s, 3H), 2,60 - 2,53 (m, 2H), 2,38 (dd, J = 9,8, 3,7 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H), 2,14 -2,10 (m, 1H), 2,04 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z 146 (M+H).
Preparación de [(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]metanol (193)
Paso 1:
Figure imgf000151_0003
A una solución agitada de (3R,4R)-3-(hidroximetil)-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo (191) (J. Med. Chem.
2016, 59, 2005-2024) (1,90 g, 8,22 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) se añadió HCl (4 M en 1,4-dioxano, 10 ml) a 0-10 °C. Tras la adición, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. El disolvente se eliminó bajo presión reducida para obtener cloruro de (3R,4R)-3-(hidroximetil)-4-metoxipirrolidinio crudo(182) (1,38 g, rendimiento del 100%) como un aceite marrón, que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 9,54 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 5,70-4,20 (br, s, 1H), 3,94-3,80 (m, 1H), 3,41 (s, 1H), 3,39 (s, 1H), 3,32 - 3,06 (m, 6 H), 3,03-2,92 (m, 1H), 2,43-2,29 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z 132 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000152_0001
Una mezcla de cloruro de (3R,4R)-3-(hidroximetil)-4-metoxipirrolidinio(192) (1,38 g, 8,2 mmol), formaldehído acuoso (7 ml) y ácido fórmico (14 ml) en un tubo sellado se calentó a 100 °C durante 4 días. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. La reacción se enfrió a 25 °C. El disolvente se eliminó bajo presión reducida. Se añadió HCl concentrado (10 ml) al residuo y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró hasta sequedad. El residuo se basificó cuidadosamente con K2CO3 acuoso y luego se extrajo con DCM (3x50 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron para proporcionar [(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]metanol (193) (1,12 g, 96% de rendimiento) como un aceite marrón. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 54,64 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,33 - 3,28 (m, 1H), 3,16 (s, 3H), 2.60 -2,53 (m, 1H), 2,38 (dd, J = 9,8, 3,7 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H), 2,15 -2,11 (m, 1H), 2,05 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z 146 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (196)
Paso 1:
Figure imgf000152_0002
A una mezcla de (3R,4R)-3,4-dihidroxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo (194) (400 mg, 1,97 mmol) y CH3 I (838 mg, 5,90 mmol) en Th F (10 ml) se añadió lHm DS (2,95 ml, 2,95 mmol, 1,0 M en THF) y la mezcla se agitó a 20 °C. El análisis LCMS mostró aproximadamente 50 % del producto deseado con 30 % restante de material de partida y trazas del subproducto de dimetilo. Se añadió H2O (10 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (10 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 1:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo(195) como un aceite incoloro (140 mg, 33 % de rendimiento). 1H Rm N (400 MHz, DMSO-cfe) 5 5,19 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,06 (s, 1H), 3,60 (s, 1H), 3,35 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,30 -3,21 (m, 5H), 3,14 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 240 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000152_0003
A una solución de (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo (195) (140 mg, 0,64 mmol) en THF (10 ml) se añadió LiAlH4 (49 mg, 1,29 mmol) y la mezcla se agitó a 70 °C durante 2 h. El análisis LCMS mostró la formación del producto. Tras enfriar a 20 °C, se añadió Na2SO4^1 0 H2O y la mezcla se agitó durante 10 min. La mezcla se filtró para obtener (3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (196) como aceite incoloro (70 mg, 83% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 55,00 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,96 - 3,90 (m, 1H), 3,53 (ddd, J = 6,3, 3,9, 2,3 Hz, 1H), 3,22 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 2,72 - 2,63 (m, 2H), 2,34 (dd, J = 9,9, 4,0 Hz, 1H), 2,21 (dd, J = 9,5, 4,7 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 132 (M+H).
Preparación de (3S,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (199)
Paso 1:
Figure imgf000153_0001
A una mezcla de (3S,4S)-3,4-dihidroxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo (197) (500 mg, 2,46 mmol) y CH3 I (1,05 mg, 7,38 mmol) en Th F (10 ml) se añadió LHMDS (3,69 ml, 3,69 mmol, 1,0 M en Th F) y la mezcla se agitó a 20 °C. El análisis LCMS mostró aproximadamente 50 % del producto deseado con 30 % restante de material de partida y trazas del subproducto de dimetilo. Se añadió H2O (10 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (10 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 1:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener el (3S,4S)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo(198) como un aceite incoloro (240 mg, 45 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 5,19 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,06 (s, 1H), 3,60 (s, 1H), 3,35 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,29 - 3,22 (m, 5H), 3,13 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 240 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000153_0002
A una solución de (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de tert-butilo (199) (240 mg, 1,10 mmol) en THF (10 ml) se añadió LiAlH4 (84 mg, 2,21 mmol) y la mezcla se agitó a 70 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró la formación del producto. Tras enfriar a 20 °C, se añadió Na2SO4^1 0 H2O y se agitó la mezcla durante 10 min. La mezcla se filtró para obtener (3S,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol(199) como aceite incoloro (120 mg, 83 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 5,00 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,57 - 3,50 (m, 1H), 3,24 (d, J = 13.8 Hz, 3H), 2,68 (dd, J = 16,0, 8,4 Hz, 2H), 2,34 (dd, J = 9,9, 4,0 Hz, 1H), 2,21 (dd, J = 9,4, 4,6 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 132 (M+H).
Preparación de 6-fluoro-5-metil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-ol (202)
Paso 1:
Figure imgf000153_0003
A una solución de diisopropilamina (3,18 g, 31,5 mmol) en THF (100 ml) se añadió n-BuLi (2,5 M, 10,5 ml, 26,25 mmol) gota a gota a -70 °C bajo una atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 30 min a la misma temperatura y después se añadió gota a gota una solución de 4,6-difluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (200) (5 g, 21 mmol) en THF (3 ml) a -78 °C. Después de 0,5 h se añadió CH3 I (5,96 g, 42 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se apagó con NH4Cl acuoso saturado y luego se extrajo con EtOAc (3x200 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 10:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener 4,6-difluoro-5-metil-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol (201) como un sólido blanco (2 g, 38 % de rendimiento). Se recogieron otros 2 g de fracciones mixtas que contenían 30 % de material de partida (200). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 8,19 (s, 1H), 7,51 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 5,83 -5,79 (m, 1H), 3,91 -3,83 (m, 1H), 3,81 - 3,71 (m, 1H), 2.36 (tdd, J = 13,2, 9,6, 3,8 Hz, 1H), 2,22 (t, J = 1,9 Hz, 3H), 2,07 - 1,92 (m, 2H), 1,79 - 1,67 (m, 1H), 1,63 - 1,53 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 253 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000154_0001
A una solución de 4,6-d¡fluoro-5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol(201) (2 g, 7,93 mmol) en DMSO (24 ml) se añadió KOH (1,78 g, 31,7 mmol) y H2O (571 mg, 31,7 mmol). La mezcla se ag¡tó a 100 °C durante 6 h. El anál¡s¡s LCMS mostró la formac¡ón del producto. La mezcla de reacc¡ón se apagó con H2O (30 ml) y se transf¡r¡ó a un embudo de separac¡ón con EtOAc. Los extractos orgán¡cos se lavaron con salmuera (30 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se f¡ltraron y se concentraron al vacío. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ¡nstantánea (SO 2 , 2:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener un sól¡do, que se trituró con 5:1 éter de petróleo/EtOAc para obtener 6-fluoro-5-met¡l-1-(tetrah¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol(202) (730 mg, 37% de rend¡m¡ento) como sól¡do blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 10,33 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 6,97 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,67 (dd, J = 9,7, 2,5 Hz, 1H), 3,91 -3,81 (m, 1H), 3,77 -3,64 (m, 1H), 2,44 -2,27 (m, 1H), 2,10 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 2,06 - 1,97 (m, 1H), 1,97 - 1,87 (m, 1H), 1,79 - 1,64 (m, 1H), 1,55 (dt, J = 9,8, 4,0 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 251,253 (M+H).
Preparación de (3S,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (207)
Paso 1:
Figure imgf000154_0002
A una mezcla ag¡tada de ác¡do 2,6-d¡cloro-3-fluorop¡r¡d¡n-4-carboxíl¡co(203) (21,6 g, 103 mmol) en SOCh (75 ml) se añad¡eron tres gotas de DMF. La mezcla se calentó a 80 °C y se ag¡tó a esta temperatura durante 3 h. El anál¡s¡s LCMS en MeOH ¡nd¡ca la formac¡ón de ésteres metíl¡cos. La mezcla se concentró y se azeotró con tolueno para proporc¡onar cloruro de 2,6-d¡cloro-3-fluorop¡r¡d¡n-4-carbon¡lo crudo (204) (23,5 g, 100 % de rend¡m¡ento) como un ace¡te, que se llevó ¡nmed¡atamente a la s¡gu¡ente transformac¡ón.
Paso 2:
Figure imgf000154_0003
A una soluc¡ón de NaOH (18,5 g, 463 mmol) en H2O (400 ml) se añad¡ó sulfato de 2-met¡l-2-t¡opseudourea (51,5 g, 185 mmol) porc¡ones a 0 °C. La mezcla se agitó durante 10 m¡nutos y después se añad¡ó gota a gota una soluc¡ón de cloruro de 2,6-d¡cloro-3-fluorop¡r¡d¡n-4-carbon¡lo (204) (23,5 g, 103 mmol) en Et2O seco (300 ml). Después de la ad¡c¡ón, la reacc¡ón se ag¡tó a 0-5 °C durante 30 m¡n. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da y la formac¡ón del producto deseado. La mezcla se separó. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x300 ml). Los orgán¡cos comb¡nados se lavaron con H2O (2x200 ml) y salmuera (200 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporc¡onar N-[(2,6-d¡cloro-3-fluorop¡r¡d¡n-4-¡l)carbon¡lo]carbam¡dot¡oato (206) en bruto (25,0 g, 86 % de rend¡m¡ento) como un sólido amar¡llo, que se tomó directamente sin purificación.1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 6 9,25 (s, 2H), 7,85 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 2,46 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 282, 284 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000155_0001
Una mezcla de W-[(2,6-d¡cloro-3-fluorop¡r¡d¡n-4-¡l)carbon¡lo]carbam¡dot¡oato de metilo (206) (28,9 g, 102 mmol) y Cs2CO3 (46,7 g, 143 mmol) en DMF seco (150 ml) se agitó a 90 °C durante 5 h. El anál¡s¡s de LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da y la formac¡ón del producto deseado. La mezcla se enfr¡ó a 25 °C, se d¡luyó con H2O (800 ml) y se ac¡d¡f¡có a pH<7 med¡ante la ad¡c¡ón de HOAc acuoso 3 M. El sólido resultante se recog¡ó por f¡ltrac¡ón. La torta de f¡ltrac¡ón se lavó con H2O (3x100 ml) y luego se secó al vacío. El producto crudo se sumerg¡ó en EtOAc (60 ml) durante 30 m¡nutos y se f¡ltró. El sól¡do se recog¡ó por f¡ltrac¡ón y se secó para obtener 6,8-d¡cloro-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4(3h)-ona(207) (19,8 g, 74% de rend¡m¡ento) como un sól¡do amar¡llo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSo-cfe) 6 13,27 (s, 1H), 7,94 - 7,83 (m, 1H), 2,62 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 262, 264 (M+H).
Preparación de los ejemplos:
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el procedimiento general G:
Preparación de 1-[4-(6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-ilo ]metoxi}pirido[3,4-d]pirim idin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo 1G).
Paso 1:
Figure imgf000155_0002
Una mezcla de 6,8-d¡cloro-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4(3H)-ona (207) (10,0 g, 38 mmol) en POCh (70 ml) se calentó a 130 °C durante 3 h. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da. La mezcla se enfr¡ó a 25 °C y el d¡solvente se el¡m¡nó bajo pres¡ón reduc¡da para obtener 4,6,8-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na (208) cruda (11,0 g, 10 0 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do amar¡llo, que se ut¡l¡zó en el s¡gu¡ente paso s¡n más pur¡f¡cac¡ón.
Paso 2:
Figure imgf000155_0003
A una suspens¡ón ag¡tada de 4,6,8-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na(208) (10,7 g, 38,1 mmol) en DMF seca (60 ml) se añad¡ó DIPEA (246 mg, 1,91 mmol) a 0 °C, segu¡da de p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (8,52 g, 45,8 mmol). La mezcla resultante se ag¡tó a 20-25 °C durante 2 h. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da. La mezcla se diluyó con H2O (500 ml), se ag¡tó durante 30 m¡nutos y se f¡ltró. La torta del f¡ltro se d¡solv¡ó en DCM (500 ml). La mezcla se lavó con H2O (2x400 ml) y salmuera (400 ml), se secó sobre Na2SO4, se f¡ltró y se concentró hasta sequedad. El res¡duo se mezcló con EtOAc (50 ml) durante 1 h y luego se enfr¡ó a 0 °C. El sól¡do se recog¡ó por f¡ltrac¡ón y se secó al vacío para obtener 4-[6,8-d¡cloro-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (209) (12,6 g, 76 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do amar¡llo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 6 7,90 (s, 1H), 3,94 - 3,81 (m, 4H), 3,63 - 3,45 (m, 4H), 2,57 (s, 3H), 1,43 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 430, 432 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000156_0001
Una mezcla de 5-doro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-ol (72) (4,19 g, 15,5 mmol), 4-[6,8-dicloro-2-(metilsulfanil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato (209) (6,99 g, 16,3 mmol) y CS2CO3 (7,57 g, 23,2 mmol) en DMA seco (50 ml) se calentó a 95 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La reacción se enfrió a 25 °C, se diluyó con H2O (300 ml) y se extrajo con EtOAc (3x200 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con TEAB 0,5M (500 ml), salmuera (500 ml), se secaron sobre Na2SO4 (35,0 g), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 0-50 % EtOAc/éter de petróleo) para obtener 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetral^¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de ferf-butilo( 210) (8.37 g, 81 % de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 7,99 (s, 1H), 7,93 (dd, J = 9,2, 0,7 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 5,89 (dd, J = 9,7, 2,2 Hz, 1H), 3,97 - 3,85 (m, 5H), 3.83 - 3,73 (m, 1H), 3,65 - 3,46 (m, 4H), 2,53 (s, 3H), 2,43 - 2,28 (m, 1H), 2,08 - 1,98 (m, 2H), 1,81 -1,66 (m, 1H), 1,65 - 1,53 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 664, 6 6 6 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000156_0002
A una solución agitada de 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetral^¡dro-2H-p¡rano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡l-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de ted-butilo (210) (9,33 g, 14 mmol) en DCM (100 ml) se añadió m-CPBA (7,7 mg, 37,9 mmol) en porciones a 25 °C. La reacción se agitó a la misma temperatura durante 5 h. El análisis de LCMS mostró que la reacción estaba completa. La mezcla se diluyó con DCM (100 ml) y se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado (200 ml), Na2SO3 acuoso (100 ml) y salmuera (100 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron hasta sequedad. El producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 10-80% EtOAc/éter de petróleo) para obtener 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(met¡lsulfon¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡^m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de íerí-butilo(211) (7,5 g, 77 % de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 8,04 (s, 1H), 7,98 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 5,91 (dd, J = 9,7, 2,0 Hz, 1H), 4,14 - 3,98 (m, 4H), 3,95 - 3,86 (m, 1H), 3,85 - 3,74 (m, 1H), 3,68 - 3,50 (m, 4H), 3,42 (s, 3H), 2,44 -2,28 (m, 1H), 2,10 - 1,96 (m, 2H), 1,80 - 1,66 (m, 1H), 1,64 - 1,53 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 696, 698 (M+H).
Paso 6 :
Figure imgf000157_0001
A una solución de 4-[6-doro-8-{[5-doro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-N)-1H-indazol-4-N]oxi}-2-(metilsulfonil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (211) (20o mg, 0,287 mmol) y (S)-(1-metilpirrolidin-2-il)metanol (165 mg, 1,44 mmol) en THF (3 ml) se añadió LiHMDS (1,0 M en THF, 0,373 ml, 0,373 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó a ta durante 1 h. El análisis LCMS mostró que la reacción estaba completa. La reacción se apagó mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x30 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron hasta sequedad. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 0-10 % MeOH/DCM) para proporcionar 4-( 6-cloro-8-{[5-doro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(2S)-1-metilpirroNdin-2-il]metoxi}pmdo[3,4-d]pinmidin-4-il)piperazina-1-carboxNato(212) (200 mg, 95% de rendimiento) como un sólido amarillo. LCMS (ESl) m/z 731, 733 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000157_0002
A una mezcla de 4-(6-doro-8-{[5-doro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(2S)-1-metilpirroNdin-2-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (2 l2) (200 mg, 0237 mmol) en DCM (2 ml) se añadió una solución de HCl (2 ml, 4,0 M en 1,4-dioxano). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El análisis LCMS mostró el consumo completo del material de partida. La mezcla se concentró hasta sequedad para proporcionar 6-doro-8-[(5-doro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(2S)-1-metilpirroNdin-2-il]metoxil-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (213) (150 mg, rendimiento del 100%) como un sólido amarillo, que se tomó sin más purificación. LCMS (ESl) m/z 547, 549 (M+H).
Paso 8 :
Figure imgf000157_0003
A una solución de 6-doro-8-[(5-doro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(2S)-1-metilpirroNdin-2-il]metoxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina(213) (150 mg, 0,274 mmol) en EtOAc (20 ml) y NaHcOa acuoso saturado (20 ml) se añadió cloruro de acriloilo (37,2 mg, 0,41 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 30 min. El análisis de LCMS mostró la conversión del producto. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x20 ml) y los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por HPLC preparado (columna: Gemini-C 18; 100 * 21,2 mm, 5 pm; fase móvil: ACN - H2O (0,1% FA); gradiente: 15-25 % ACN; caudal: 25 ml/min) para obtener 6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxil-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina(Ejemplo-1G) (23 mg, 14 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO- de) 8 13,63 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,64 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,76 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,86 - 4,43 (m, 2H), 4,07 - 3,90 (m, 4H), 3,90 - 3,69 (m, 5H), 3,16 - 3,05 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 2,58 - 2,47 (m, 1H), 2,24 (s, 1H), 2,09 - 1,78 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 601,603 (M+H).
Preparación de 1-(4-(4-acrMoMpiperazm-1-M)-6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-mdazol-4-il)oxi]pirido[3,4-d]pmmidm-2-il)-3-metilazetidin-3-carbonitrilo (Ejemplo de referencia 2G).
Paso 1:
Figure imgf000158_0001
Una mezcla de 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metilsulfonil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (211) (900 mg, 1.29 mmol), cloruro de 3-ciano-3-metilazetidinio (343 mg, 2,58 mmol) y DIPEA ( 6 6 8 mg, 5,17 mmol, 0,900 ml) en t-BuOH(12,9 ml, c=0,1 M) se calentó a 75 °C en un vial sellado de 20 dramas durante 1 hora. El análisis de LCMS mostró la formación del producto. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (ISCO, 24 g de SO 2 , 20-60 % de EtOAc/heptano) para proporcionar 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(3-ciano-3-metilazetidin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato(214) (519 mg, 56 % de rendimiento) como un sólido pálido. LCMS (ApCI) m/z 712 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000158_0002
A una solución de 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(3-ciano-3-metilazetidin-1 -il)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1 -carboxilato (214) (100 mg, 0140 mmol) en DCM (0,52 ml) se añadió TFA (708 mg, 6,31 mmol, 0,475 ml) para obtener una solución marrón, que se agitó a temperatura ambiente durante 40 min. El análisis de LCMS mostró la conversión del producto. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad. El sólido resultante se mezcló con MTBE y se centrifugó. El disolvente se decantó y el sólido se secó para obtener 1-{6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidin-2-il}-3-metilazetidin-3-carbonitrilo (215) (131 mg, 100 % de rendimiento) como sólido pálido. LCMS (APCI) m/z 561 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000159_0001
A una solución de 1-{6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l}-3-metilazetidin-3-carbonitrilo(215) (74,0 mg, 0140 mmol) y tr¡et¡lam¡na (46,8 mg, 0,46 mmol, 64 pL) en DCM (1 ml) se añad¡ó una soluc¡ón de cloruro de acr¡lo¡lo (12,7 mg, 0,140 mmol, 11,4 pL) en DCM (0,3 ml) a -65 °C. La temperatura se elevó a -10 °C durante 1,5 h. El anál¡s¡s de LCMS mostró la convers¡ón al producto deseado con trazas de mater¡al de part¡da restante. La reacc¡ón se concentró hasta sequedad. El res¡duo se pur¡f¡có por HPLC preparator¡a de fase ¡nversa en un s¡stema ISCO ACCQPrep HP-125 con una columna Phenomenex Luna Omega Polar C18 (21x250 mm, tamaño de partícula de 5 pm) con un flujo de 35 ml/m¡n y un grad¡ente de 25 m¡n de 30-75 % MeCN/agua (+1 % AcOH). Las fracc¡ones recog¡das se secaron en un l¡of¡l¡zador para proporc¡onar 1-{4-(4-acr¡lo¡lp¡peraz¡na-1-¡l)-6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l}-3-met¡lazet¡d¡n-3-carbon¡tr¡lo (Ejemplo-2G) como un algodón pálido (32,1 mg, 46 % de rend¡m¡ento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 13,55 (br. s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,59 (dd, J = 8,9, 0,9 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H), 6,82 (dd, J = 16,7, 10,45 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,69 - 5,77 (m, 1H), 4,41 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 4,09 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 3,79 - 3,90 (m, 5H), 3,75 (d, J = 5,0 Hz, 3H), 1,67 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 582 (M+H).
Preparación de 1-[4-(6-doro-8-[(5,6-didoro-1H-mdazol-4-N)oxi]-2-([(3R,4R)-4-metoxi-1-metNpirroNdma -3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirim idin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo de referencia 29G)
Paso 1:
Figure imgf000159_0002
A un v¡al se añad¡ó 4-[6,8-d¡cloro-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (209), 5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-oi(153), Cs2CO3 (2,18 g, 6,69 mmol) y DmA (12,1 ml). La mezcla se desgas¡f¡có con n¡trógeno y se ag¡tó durante la noche a 90 °C. El análisis LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da con la formac¡ón del producto. La mezcla de reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se añad¡ó agua. El prec¡p¡tado resultante se recog¡ó por f¡ltrac¡ón. La torta de f¡ltrac¡ón se lavó a fondo con agua y luego se secó durante la noche a 50 °C al vacío para proporc¡onar 4-[6-cloro-8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (216) (2,33 g, 77% de rend¡m¡ento) como un sól¡do blanquec¡no que se llevó d¡rectamente al s¡gu¡ente paso s¡n más pur¡f¡cac¡ón. LCMS (ESI) m/z 680 (M H).
Paso 2:
Figure imgf000160_0001
A una solución de 4-[6-cloro-8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-il]piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (216) (700 mg, 1,03 mmol) en DCM (20,6 ml) se añad¡ó m-CPBA(622 mg, 2,78 mmol). La mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 2,5 h. El anál¡s¡s de LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da con la formadón del producto deseado. La mezcla se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron sobre Na2SO4, se f¡ltraron y se concentraron. La pur¡f¡cac¡ón por cromatografía ¡nstantánea (ISCO, 12 g de S¡O2, 40-80 % de EtOAc/heptanos) proporc¡onó 4-[6-cloro-8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metanosulfon¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo(217) (480 mg, 6 6 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do pálido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 8,23 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 5,97 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,03 -4,12 (m, 4H), 3,87 - 3,95 (m, 1H), 3,77 -3.86 (m, 1H), 3,59 (br. s, 4H), 3,42 (s, 3H), 2,28 -2,43 (m, 1H), 2,03 (d, J = 11,0 Hz, 2H), 1,66 -1,81 (m, 1H), 1,54 - 1,63 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 712 (M H).
Paso 3:
Figure imgf000160_0002
A una soluc¡ón de 4-[6-cloro-8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metanosulfon¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (217) (157 g, 2,2 mmol) y (3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-ol(199) (491 mg, 3,74 mmol) en THF se añad¡ó LHMDS (3,74 ml, 3,74 mmol, 1,0 M en THF). La soluc¡ón roja resultante se ag¡tó a 40 °C durante 20 m¡n. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del producto. La reacc¡ón se d¡luyó con EtOAc (40 ml) y agua (15 ml). Las capas fueron separadas. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (40 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron sobre Na2SO4, se f¡ltraron y se concentraron. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ¡nstantánea (ISCO, 40 g S¡O2 ,10 % EtOH/EtOAc) para proporc¡onar 4-(6-cloro-8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-{[(3R,4R )-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato (218) (1,24 g, 72 % de rend¡m¡ento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 8,18 (s, 1H), 7,94 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 5,95 (dd, J = 9,7, 2,1 Hz, 1H), 5,18 -5,25 (m, 1H), 3,93 - 3,98 (m, 1H), 3,88 (br. s, 5H), 3,75 - 3,84 (m, 1H), 3,56 (br. s, 4H), 3,33 (s, 3H), 3,01 (dd, J = 9,7, 6,5 Hz, 1H), 2,78 - 2,88 (m, 1H), 2,59 - 2,66 (m, 1H), 2,25 - 2,41 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,01 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 1,66 - 1,80 (m, 1H), 1,59 (d, J = 4,0 Hz, 2H) 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 763 (M H).
Paso 4:
Figure imgf000161_0001
Una solución de l4-(6-cloro-8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡l-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-il]oxy}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato(218) en HFIP se enfr¡ó a 0 °C con un baño de h¡elo y se agregó una soluc¡ón de HCl (0,33 ml, 1,31 mmol, 4,0 N en 1,4-d¡oxano). La soluc¡ón se agitó durante otros 10 m¡nutos a 0 °C para obtener una soluc¡ón naranja, que se dejó calentar hasta la temperatura amb¡ente. Después de 1 h, el anál¡s¡s LCMS mostró la convers¡ón al producto. La mezcla de reacc¡ón cruda se enfr¡ó a 0 °C. Se añad¡ó lentamente MTBE (5 ml) para dar un prec¡p¡tado blanco. El d¡solvente se el¡m¡nó bajo pres¡ón reduc¡da. Se añad¡ó MTBE ad¡c¡onal (5 ml) y la mezcla se concentró para proporc¡onar 6-cloro-8-[(5,6-d¡cloro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na(219) (90 mg, rend¡m¡ento del 100%) como un sól¡do naranja, que se tomó s¡n más pur¡f¡cac¡ón. lCm S (ESI) m/z 579 (M H).
Paso 5:
A una susp
Figure imgf000161_0002
(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na(219) (89,6 mg, 0,13 mmol) en HFIP (1,3 ml) se añad¡ó NaHCO3 (109 mg, 1,3 mmol). La suspens¡ón resultante se ag¡tó durante 15 horas durante la noche para obtener una soluc¡ón marrón. Se añad¡ó cloruro de acr¡lo¡lo (11 pl, 0,13 mmol). Después de 5 m¡nutos el anál¡s¡s LCMS mostró la convers¡ón al producto. La mezcla de reacc¡ón se f¡ltró para el¡m¡nar los ¡nsolubles. La torta de f¡ltrac¡ón se lavó con EtOAc. Los extractos orgán¡cos comb¡nados se concentraron al vacío. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ¡nstantánea (B¡otage, 10 g de SO 2, 2-10% de MeOH/DCM 01 % NH3) para proporc¡onar 1-[4-(6-cloro-8-[(5,6-d¡cloro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-29G) (37 mg, 45 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 813,63 (br. s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,82 (dd, J = 16,6, 10,4 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 17,1, 1,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,0, 2,1 Hz, 1H), 5,12 -5,26 (m, 1H), 3,95 (br. s, 5H), 3,69 - 3,87 (m, 4H), 3,33 (s, 3H), 2,93 - 3,05 (m, 1H), 2,81 - 2,84 (m, 1H), 2,58 - 2,71 (m, 1H), 2,25 - 2,34 (m, 1H), 2,15 -2,24 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 633 (M+H).
Preparación de 1-[4-(6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-mdazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metoxM -metilpirrolid in-3-N]ox¡}p¡r¡do[3,4-d]pmm¡dm-4-N)p¡perazm-1-N]prop-2-en-1-ona (Ejemplo de Referencia 24G)
Paso 1:
Figure imgf000162_0001
Una solución de (3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (199) (3,2 g, 24,4 mmol) en THF (25 ml) se enfrió a 0 °C con un baño de hielo. Se añadió gota a gota una solución de LHMDS (1,0 M en THF, 24,4 ml, 24,4 mmol) para obtener una solución de color amarillo claro. Tras 30 min a 0 °C, la solución se añadió gota a gota a una solución de 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metanosulfonil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato (211) (12,8 g, 18,8 mmol) en THF (50 ml) a 0 °C bajo nitrógeno. La solución roja resultante se agitó durante 15 minutos a la misma temperatura. El análisis LCMS indicó el consumo completo del material de partida. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con agua y salmuera. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (ISCO, 300 g SiO2,100:0:0 - 95:5:2 DCM:MeOH:TEA) para proporcionar 4-(6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(3R ,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato (220) (6,9 g, 38% de rendimiento) como un aceite amarillo que se azeotropó con Et2O para proporcionar un blanquecino sólido.1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 6 7,96 - 7,87 (m, 2H), 7,70 - 7,57 (m, 1H), 5,89 (dd, J = 2,2, 9,7 Hz, 1H), 5,28 - 5,08 (m, 1H), 4,01 - 3,92 (m, 1H), 3,88 (t, J = 4,8 Hz, 5H), 3,82 -3,74 (m, 1H), 3,61 -3,50 (m, 4H), 3,33 (s, 3H), 3,00 (dd, J = 6,5, 9,7 Hz, 1H), 2,88 -2,79 (m, 1H), 2,67 -2,57 (m, 1H), 2,41 -2,26 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,10 -1,94 (m, 2H), 1,81 -1,66 (m, 1H), 1,64 - 1,54 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 747 (M H).
Paso 2:
Figure imgf000162_0002
Una solución de 4-(6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (220) (50 mg, 0,07 mmol) en HFIP (0,7 ml) se enfrió a 0 °C. Se añadió una solución de HCl (4 M en 1,4-dioxano, 0,1 ml, 0,4 mmol) para proporcionar una solución amarilla. Tras 10 minutos a 0 °C, se dejó que la solución naranja se calentara hasta alcanzar la temperatura ambiente. Después de 1 h, el análisis LCMS mostró material de partida residual. Se añadió más HCl (4 M en 1,4-dioxano, 0,05 ml). Después de agitar otros 30 minutos, el análisis LCMS indicó el consumo del material de partida. Se añadió NaHCO3 sólido (70,6 mg, 12 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 h durante la noche. Se añadió cloruro de acriloilo (0,006 ml, 0,07 mmol). Tras 5 min, la reacción se diluyó con EtOAc (20 ml) y agua (20 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Biotage, 10 g S¡O2 , 2-10 % MeOH/DCM 0,1 % NH4OH) para proporcionar 1-[4-(6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo 24G) (20 mg, rendimiento del 50%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 62,17 - 2,27 (m, 3H), 2,27 - 2,34 (m, 1H), 2,63 (dd, J = 10,6, 2.9 Hz, 1H), 2,81 -2,86 (m, 1H), 2,99 -3,03 (m, 1H), 3,33 (s, 3H), 3,75 (br. s, 2H), 3,84 (br. s, 2H), 3,95 (br. s, 5H), 5,11 -5,32 (m, 1H), 5,75 (dd, J = 10,5, 2,5 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 13,59 (br. s, 1H). LCMS (ESI) m/z 617 (M H).
Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon utilizando el Procedimiento G y el procedimiento utilizado para preparar 6-cloro-8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (Ejemplo-1G), 1-{4-(4-acr¡lo¡lp¡peraz¡n-1-¡l)-6-doro-8-[(5-doro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l}-3-metilazetidin-3-carbonitrilo (Ejemplo-2G), 1-[4-(6-doro-8-[(5-doro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]oxy}p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-24G), y 1-[4-(6-cloro-8-[(5,6-d¡doro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡lp¡r¡do[3,4-cf]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]prop-2-en--ona (Ejemplo-29G). Los s¡gu¡entes ejemplos se real¡zaron con camb¡os o sust¡tuc¡ones no crít¡cos en el proced¡m¡ento ejempl¡f¡cado ut¡l¡zado para preparar el Ejemplo-1 G, el Ejemplo-2G, el Ejemplo-24G y el Ejemplo-29G que algu¡en experto en la técn¡ca podría real¡zar.
Figure imgf000163_0001
(continuación)
Figure imgf000164_0001
(continuación)
Figure imgf000165_0001
(continuación)
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(continuación)
Figure imgf000167_0001
(continuación)
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(continuación)
Figure imgf000169_0001
(continuación)
Figure imgf000170_0001
(continuación)
Figure imgf000171_0002
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el procedimiento general H:
Preparación de 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1W-mdazol-4-il)oxi]-2-([(2S)-1-metilpirrolidm-2-il)]metoxi} pirido[3,4-d]pirimidin-4-y))piperazin-1 -y)]prop-2-en-1 -ona (Ejemplo-1H)
Paso 1:
Figure imgf000171_0001
A una mezcla de 4-(6-doro-8-{[5-doro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-N)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (212) (437 mg, 0,597 mmol) en EtOH (10 ml) se añadió Pd/C (10% de carga en peso, 100 mg). Se añadió un globo de H2 y la mezcla se agitó durante la noche. El análisis de LCMS mostró 60 % de conversión en el producto. Se añadió DIPEA (0,21 ml, 1,19 mmol) y la mezcla se agitó bajo un globo de H2 durante la noche. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. La reacción se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo crudo se purificó por cromatografía instantánea (ISCO, 40 g SiO2 , 100:0:0-95:5:2 DCM/MeOH/TEA) para proporcionar 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (222) (130 mg, 31 % de rendimiento) como una espuma blanquecina. LCMS (ESI) m/z 697 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000172_0001
A una solución de 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (222) (130 mg, 0,186 mmol) en DCM (2,0 ml) se añadió TFA (213 mg, 0,139 ml, 1,86 mmol). La reacción se agitó durante la noche. El análisis de LCMS mostró la formación del producto deseado. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad para proporcionar 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (223) (159 mg, rendimiento del 100%) como una goma marrón, que se asumió sin más purificación. LCMS (ESI) m/z 513 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000172_0002
A una suspensión de 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (223) (236 mg, 0,265 mmol) en DCM (2,0 ml) se añadió DIPEA (192 mg, 0,258 ml, 1,48 mmol). La mezcla se enfrió a -50 °C y luego se trató gota a gota con una solución de cloruro de acriloilo (19,6 mg, 0,212 mmol, 20 |jl) en DCM (0,3 ml). Se dejó que la mezcla se calentara lentamente hasta alcanzar la temperatura ambiente. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La mezcla se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró. Purificación por SFC preparatoria con un sistema Waters SFC 200 Glacier en una columna Princeton HA-Morpholine (150x21,1 mm, tamaño de partícula de 5jm), que se eludió con MeCN/H2O al 12%-60 a 35 °C para proporcionar 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(2S)-1-metilpirrolidin-2-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IH) (13,9 mg, 12 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN 400 MHz, DMSO-de) 87,77 - 7,74 (m, 1H), 7,79 - 7,69 (m, 1H), 7,73 - 7,68 (m, 1H), 7,66 - 7,60 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,87 -6,72 (m, 1H), 6,16 (td, J = 1,9, 16,8 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 2,1, 10,5 Hz, 1H), 4,40 -4,28 (m, 1H), 4,18 (dd, J = 6,4, 10,7 Hz, 1H), 3,96 - 3,87 (m, 4H), 3,86 - 3,70 (m, 4H), 2,93 (dd, J = 3,6, 9,0 Hz, 1H), 2,63 -2,55 (m, 1H), 2,37 -2,29 (m, 3H), 2,21 -2,11 (m, 1H), 2,01 -1,86 (m, 1H), 1,73 - 1,57 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z 566 (M+H).
Preparación de 1-[4-(8-[(5,6-didoro-1H-mdazol-4-N)oxi]-2-([(3R,4R)-4-metoxi-1 - metilpirrolidin-3-ilo ]oxi}pirido[3,4-d]pirim idin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo de Referencia 19H)
Paso 1:
Figure imgf000173_0001
A una solución de 4-(6-cloro-8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-{(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1 -carboxilato (218) en THF (7.3 ml) bajo nitrógeno se añad¡ó NaBH4 (47,1 mg, 1,25 mmol), PdCh(dppf) (53,6 mg, 0,0733 mmol) y TMEDA (0,187 ml, 1,25 mmol). La solución púrpura oscura resultante se agitó a temperatura ambiente durante 33 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La reacción se filtró a través de celita y se concentró hasta sequedad. La purificación por cromatografía instantánea (ISCO, 24 g SO 2, 15 % IPA/EtOAc) proporcionó 300 mg de material. El material se repurificó mediante HPLC preparativa (sistema ISCO ACCQ Prep HP-125, Phenomenex Luna Omega Polar C18, 21*250 mm, tamaño de partícula de 5 pm, caudal de 35 ml/min, volumen de inyección de 1 ml) para proporcionar 4-(8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-indazol-4-¡l]ox¡}-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}p¡rido[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato (224) como un algodón blanco (105 mg, rendimiento del 39 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 88,12 (s, 1H), 7,82 (d, J = 6,48 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 5,8, 1,5 Hz, 1H), 7,59 -7,63 (m, 1H), 5,93 (dd, J = 9,6, 2,1 Hz, 1H), 5,22 -5,27 (m, 1H), 3,93 - 3,99 (m, 1H), 3,75 - 3,92 (m, 6H), 3,57 (br. s, 4H), 3.34 (s, 3H), 3,01 (dd, J = 9,8, 6,6 Hz, 1H), 2,81 -2,89 (m, 1H), 2,58 -2,66 (m, 1H), 2,27 -2,38 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,95 - 2,07 (m, 2H), 1,71 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 1,58 (br. s, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 729 (M H).
Paso 2:
Figure imgf000173_0002
Una solución de 4-(8-{[5,6-d¡cloro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}pir¡do[3,4-d]p¡rimid¡n-4-il)piperazina-1 -carboxilato de ferf-butilo (224) (101 mg, 0,138 mmol) en HFIP (1,48 ml) se enfrió a 0 °C. Se añadió gota a gota una solución de HCl (0,346 ml, 1,38 mmol, 4,0 M en 1,4-dioxano). La mezcla se agitó otros 10 m¡nutos a 0 °C y luego 45 m¡nutos a temperatura amb¡ente. El anál¡s¡s por LCMS de la soluc¡ón de color marrón claro mostró la formación del producto deseado. La mezcla de reacción cruda se enfrió a 0 °C y se añadió lentamente MTBE (5 ml) para dar un precipitado blanco. El disolvente se eliminó bajo presión reducida. Se añadió MTBE adicional (5 ml) y se concentró para proporcionar 8-[(5,6-d¡cloro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}-4-(piperaz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]pirim¡dina(225) (75,3 mg, 99% de rendimiento) como un aceite marrón que se tomó sin más purificación. lCm S (ESI) m/z 545 (M H).
Paso 3:
Figure imgf000174_0001
Se disolvió 8-[(5,6-dicloro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (225) (75,3 mg, 0,138 mmol) en HFIP (1,38 ml). Se añadió NaHCO3 sólido (116 mg, 1,38 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A la pasta marrón se le añadió cloruro de acrilolilo (11,2 pl, 0,138 mmol). El análisis de LCMS mostró la conversión al producto. La mezcla de reacción cruda se filtró para eliminar un sólido blanco. La torta del filtro se lavó con EtOAc y el filtrado se concentró bajo presión reducida. La purificación por cromatografía instantánea (ISCO, 12 g SiO2 , 2-10 % MeOH/DCM 0,1% NH3) proporcionó 1-[4-(8-[(5,6-dicloro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1 -metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1 -ona (Ejemplo-19H) (26,3 mg, 32 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 513,57 (br. s, 1H), 7,81 - 7,85 (m, 1H), 7,78 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,63 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 16,6, 10,5 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,3 Hz, 1H), 5,71 - 5,77 (m, 1H), 5,20 - 5,29 (m, 1H), 3,89 - 3,98 (m, 5H), 3,84 (br. s, 2H), 3,77 (br. s, 2H), 3,35 (s, 3H), 3,01 (dd, J = 9,8, 6,5 Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 10,6, 5,9 Hz, 1H), 2,63 (dd, J = 10,5, 2,7 Hz, 1H), 2,30 (dd, J = 9,8, 4,9 Hz, 1H), 2,23 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 599 (M+H).
Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon utilizando el Procedimiento H y el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IH) y 1-[4-(8-[(5,6-dicloro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3^,4^)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-djpirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-19H). Los siguientes ejemplos se realizaron con cambios o sustituciones no críticas al procedimiento ejemplificado utilizado para preparar el Ejemplo-IH, y el Ejemplo-19H que alguien experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000174_0002
(continuación)
Figure imgf000175_0001
(continuación)
Figure imgf000176_0001
(continuación)
Figure imgf000177_0001
(continuación)
Figure imgf000178_0002
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el Procedimiento general I:
Preparación de (3R,5S)-5-[({8-[(5-cloro-6-fluoro-1W-mdazol-4-il)oxi]-4-[4-(prop-2-enoil)piperazm-1-il]pirido[3,4-d]pirim idin-2-il}oxi)metil]-1-metilpirrolid in-3-carbonitrilo (Ejemplo de Referencia-1I).
Paso 1:
Figure imgf000178_0001
Una mezcla de 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metilsulfanil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato fe/f-butilo (210) (350 g, 52,8 mmol) en THF seco (595 ml) se desgasificó burbujeando con nitrógeno durante 20 min. Se añadieron secuencialmente Pd(dppf)Cl2 (3,86 g, 5,28 mmol), TMEDA (12,0 g, 14,8 ml, 100 mmol) y NaBH4 (3,51 g, 92,4 mmol). La mezcla se agitó en un baño de aceite a 50 °C (temperatura interna de 40 °C) durante 1,2 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y luego se añadieron 600 ml de salmuera y 595 ml de EtOAc. Las capas se separaron y los orgánicos combinados se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo crudo se purificó por cromatografía instantánea (3:5:2 EtOAc/éter de petróleo/DCM) para proporcionar 4-[8-{[5-doro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-¡ndazol-4-il]ox¡}-2-(metilsulfanil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (226) (34 g, rendimiento del 100 %) como sólido amarillo pálido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 87,88 (t, J = 4,3 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,88 (dd, J = 9,7, 2,1 Hz, 1H), 3,92 - 3,73 (m, 6H), 3,57 (s, 4H), 2,54 (s, 3H), 2,34 (dt, J = 10,3, 6,7 Hz, 1H), 2,02 (dd, J = 13,6, 4,3 Hz, 2H), 1,71 (dd, J = 15,8, 8,7 Hz, 1H), 1,59 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 630 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000179_0001
Una solución de 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡l-2-(met¡lsulfan¡l)pmdo[3,4-d]p¡^m¡d¡n-4-ilpperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (226) en DCM (30 ml) se enfrió a 0 °C con un baño de hielo. Se añadió m-CPBa (1,92 g, 8,57 mmol), lo que dio lugar a una exotermia. La suspensión resultante se agitó durante la noche. El análisis LCMS mostró la persistencia del intermedio sulfóxido. Se añadió m-CPBA (100 mg, 4,29 mmol). Después de 3 h, el análisis LCMS mostró una conversión completa al producto deseado. La mezcla de reacción se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo con DCM. Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación por cromatografía instantánea (ISCO, 80 g de SO 2 , 0-100 EtOAc/heptanos) proporcionó 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metanosulfon¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de ferf-butilo (227) (900 mg, rendimiento del 48 %) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 88,06 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,91 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,89 (dd, J = 2,3, 9,6 Hz, 1H), 4,10 -4,01 (m, 4H), 3,94 -3,87 (m, 1H), 3,84 -3,74 (m, 1H), 3,60 (br. s, 4H), 3,41 (s, 3H), 2,43 -2,29 (m, 1H), 2,09 - 1,96 (m, 2H), 1,72 (br. s, 1H), 1,59 (d, J = 3,8 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 662 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000179_0002
A una mezcla de 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metanosulfon¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-i^piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (227) (400 mg, 0604 mmol) y (3R,5S)-5-(h¡drox¡met¡l)-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-carbonitrilo(173) (169 mg, 1,21 mmol) en t Hf (10 ml) se añadió LHMDS (0,785 ml, 0 , 7 85 mmol, 1,0 M en THF). La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. El análisis de LCMS mostró la conversión del producto. Se añadió H2O (5 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía instantánea (SO 2, 2:3 éter de petróleo/EtOAc) para proporcionar 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-{[(2S,4R)-4-c¡ano-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-2-¡l]metox¡}p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de ferf-butilo (228) (120 mg, 28 % de rendimiento) como aceite amarillo. LCMS (ESI) m/z 722, 724 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000180_0001
A una solución de 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-{(2S,4R)-4-c¡ano-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-2-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de terf-but¡lo (228) (120 mg, 0,166 mmol) en DCM (3 ml) se añad¡ó TFA (1,5 ml) y la mezcla se ag¡tó a 25 °C durante 2 h. La mezcla se concentró para obtener (3R,5S)-5-[({8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l}ox¡)met¡l]-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-carbon¡tr¡lo (229) (108 mg, 100% de rend¡m¡ento) como ace¡te amar¡llo, que se ut¡l¡zó en el s¡gu¡ente paso s¡n pur¡f¡cac¡ón. LCMS (ESI) m/z 538, 540 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000180_0002
A una soluc¡ón de (3R,5S)-5-[({8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l}ox¡)met¡l]-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-carbon¡tr¡lo (229) (90 mg, 0,166 mmol) en EtOAc (40 ml) y NaHCOa acuoso saturado (40 ml, sat.) se añad¡ó cloruro de acr¡lo¡lo (15 mg, 0,166 mmol) y la mezcla se ag¡tó a 20 °C durante 30 m¡n. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x40 ml). Los orgán¡cos comb¡nados se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El res¡duo se pur¡f¡có por HPLC preparat¡va en una columna C-18 que se elud¡ó con MeCN/H2O (+0,05 % de ác¡do fórm¡co) para obtener (3R,5S)-5-[({8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-4-[4-(prop-2-eno¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-2-¡l}ox¡)met¡l]-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-carbon¡tr¡lo(Ejemplo-1I) (5,5 mg, 6% de rend¡m¡ento) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, MeOD) 88,52 (s, 1H), 7,76 (s, 2H), 7,62 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,28 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 5,81 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 4,05 (s, 4H), 3,92 (s, 4H), 3,41 - 3,36 (m, 1H), 3,24 (dd, J = 17,1, 7,8 Hz, 1H), 2,99 (s, 1H), 2,58 (t, J = 9,5 Hz, 1H), 2,52 (s, 3H), 2,38 - 2,27 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 592, 594 (M+H).
Preparación de (3R,5S)-5-[({8-[(5-doro-6-fluoro-1H-mdazol-4-N)oxi]-4-[4-(prop-2-enoN)piperazm-1-N]pirido[3,4-d]pirim idin-2-il}oxi)m etil]-1-m etilpirro lid in-3-carbonitrilo (Ejemplo de Referencia-2I).
Paso 1:
Figure imgf000181_0001
A una solución agitada de 4-[8-{[5-doro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metilsulfanil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de íerí-butilo (226) (10,0 g, 15,9 mmol) en DCM (l0o ml) se añadió m-CPBA (85% de pureza, 9,67 g, 47,6 mmol) en porciones a 5 °C. La reacción se agitó a la misma temperatura durante 2 h. El análisis de LCMS mostró la formación del producto deseado. La mezcla se diluyó con DCM (100 ml), se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado (100 ml), Na2SO3 acuoso saturado (100 ml) y salmuera (100 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metanosulfinil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato terf-butilo (230) (9,04 g, 86% de rendimiento,) como un sólido amarillo pálido, que se utilizó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 8,00 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,96 - 7,89 (m, 2H), 7,73 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,89 (dd, J = 9,7, 2,2 Hz, 1H), 4,00 (dd, J = 9,0, 4,9 Hz, 4H), 3,90 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 3,83 - 3,75 (m, 1H), 3,59 (s, 4H), 2,95 (s, 3H), 2,38 (s, 1H), 2,02 (s, 2H), 1,80 - 1,69 (m, 1H), 1,59 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 646 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000181_0002
A una solución agitada de [(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metanol(187) (50 mg, 0,34 mmol) en THF (5 ml) se añadió 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metanosulfinil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de fert-butilo (230) (146 mg, 0,226 mmol) y LHMDS (56,8 mg, 0,340 mmol, 1,0 M en THF). La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 1,5 horas. El análisis LCMs mostró el consumo del material de partida. La reacción se apagó mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado. La mezcla de reacción cruda se vertió en H2O (30 ml) y se extrajo con EtOAc (3x30 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El residuo crudo se purificó por cromatografía instantánea de fase inversa (0-10 0% MeCN/H2O (+0,05 %FA) para proporcionar 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de ferf-butiio(231) (50 mg, 20 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 87,87 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,78 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,87 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 22,6, 12,1 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 22,3, 12,2 Hz, 1H), 3,93 - 3,75 (m, 6H), 3,57 (m, 4H), 2,57 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,35 (m, 2H), 2,24 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 1,99 (m, 2H), 1,71 (m, 4H), 1,58 (m, 3H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 729, 731 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000182_0001
A una solución agitada de 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metoxipirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (231) (50 mg, 0069 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (1 ml) y la mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 2 h. El análisis de LCMS mostró una conversión completa del producto. El disolvente se eliminó bajo presión reducida para proporcionar 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metoxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina(232) (37 mg, rendimiento del 100 %) como una goma marrón. LCMS (ESI) m/z 545, 547 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000182_0002
A una solución de 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metoxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina(232) (37 mg, 0,068 mmol) en EtOAc (30 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (30 ml) se añadió una solución de cloruro de acriloilo (6,14 mg, 0,0679 mmol) en EtOAc (5 ml) gota a gota a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 10 min. El análisis LCMS mostró el consumo completo del material de partida. La reacción se apagó mediante la adición de varias gotas de MeOH. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x30 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El producto crudo se purificó por HPLC preparativa en una columna Kromasil-C18 (100x21,2 mm, tamaño de partícula de 5 pm), que se eludió con 20-30 % de MeCN/H2O (+0,05% de NH3) para proporcionar 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metoxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-2I) (15,2 mg, 37 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 13,53 (s, 1H), 7,80 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,65 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,2 Hz, 1H), 5,79 -5,71 (m, 1H), 4,55 (dd, J = 22,8, 12,2 Hz, 1H), 4,40 (dd, J = 22,4, 12,2 Hz, 1H), 3,93 (m, 4H), 3,81 (m, 4H), 2,43 (m, 1H), 2,33 (m, 2H), 2,24 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 1,62 (m, 4H). LCMS (ESI) m/z 599, 601 (M+H).
Preparación de 1-[4-(8-[(5-doro-6-fluoro-1H-mdazol-4-N)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metNpirroNdm-3 -il]oxi}pirido[3,4-d]pirim idin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo de Referencia-10I)
Paso 1:
Figure imgf000183_0001
A una mezcla de 4-[8-{[5-doro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metanosulfonil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (227) (236 mg, 0,356 mmol) y (3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (199) (70 mg, 0,536 mmol) se añadió LHMDS (1,0 M en THF, 0,462 ml, 0,462 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La mezcla se añadió a H2O (5 ml) y se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía instantánea (SO 2 , 20:1 DCM/MeOH) para proporcionar 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1 -carboxilato de ferf-butilo (233) (l2ü mg, 47 % de rendimiento) como sólido marrón. LCMS (ESI) m/z 713, 715 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000183_0002
A una solución de 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1 -carboxilato de ferf-butilo (233) (120 mg, 0,168 mmol) en DCM (4 ml) se añadió TFA ( 2 ml). La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La mezcla se concentró hasta sequedad para proporcionar 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina(234) (108 mg, 100 % de rendimiento) como un aceite amarillo, que se llevó al siguiente paso sin más purificación. LCMS (ESI) m/z 529, 531 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000183_0003
A una solución de 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi }-4-(piperazin-1-il)pirido[3,4-d]pirimidina (234) (89 mg, 0,15 mmol) y NaHCO3 acuoso saturado (40 ml) se añadió cloruro de acriloílo (17 mg, 0,186 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 30 min. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x40 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (20 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparatoria en una columna C18, que se eludió con 20-30 % de MeCN/H2O (+0,05 % de ácido fórmico) para proporcionar 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-10I) (6 mg, 6% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H Rm N (400 MHz, DMSO-da) 513,52 (br, s, 1 H), 7,79 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 7,71 (s, 1 H), 7,64 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 7,55 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1 H), 6,18 (dd, J = 16,8, 2,3 Hz, 1 H), 5,75 (dd, J = 10,3, 2,2 Hz, 1 H), 5,11 - 5,35 (m, 1 H), 3,88 -4,01 (m, 5 H), 3,70 -3,86 (m, 4 H), 3,34 (s, 3 H), 2,98 -3,02 (m, 1 H), 2,83 -2,87 (m, 1 H), 2,62 (dd, J = 10,8, 2,8 Hz, 1 H), 2,28 - 2,32 (m, 1 H), 2,23 (s, 3 H). LCMS (ESI) m/z 583 (M H).
Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon utilizando el Procedimiento I y el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-1I), 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metoxi}pirido[3,4-djpirimidin-4-il)piperazin-1-iljprop-2-en-1-ona (Ejemplo-2I), y 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxy}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-10I). Los siguientes ejemplos se realizaron con cambios o sustituciones no críticos en el procedimiento ejemplificado utilizado para preparar el Ejemplo-1I y el Ejemplo-2I que alguien experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000184_0001
(continuación)
Figure imgf000185_0001
(continuación)
Figure imgf000186_0001
(continuación)
Figure imgf000187_0001
(continuación)
Figure imgf000188_0001
(continuación)
Figure imgf000189_0001
(continuación)
Figure imgf000190_0001
(continuación)
Figure imgf000191_0001
(continuación)
Figure imgf000192_0001
(continuación)
Figure imgf000193_0001
(continuación)
Figure imgf000194_0001
(continuación)
Figure imgf000195_0001
(continuación)
Figure imgf000196_0001
Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon utilizando el Procedimiento I en formato de biblioteca paralela y el procedimiento utilizado para preparar 1-(4-{8-[(5-cloro-6-metil-1H-indazol-4-il)oxi]-2-[3-(dimetilamino)azetidin-1-il]-6-metilpirido[3,4-cf]pirimidin-4-il}piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Ejemplo-11) y 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3s)-3-fluoro-1-metilpiperidin-3-il]metoxi}pirido[3,4-c(]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona(Ejemplo-2I), y 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-10I). Los siguientes ejemplos se realizaron con cambios o sustituciones no críticos en el procedimiento ejemplificado utilizado para preparar el Ejemplo-1I, el Ejemplo-2I y el Ejemplo-10I que alguien experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000196_0002
(continuación)
Figure imgf000197_0002
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el Procedimiento general K:
Preparación de 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-([(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3 il]oxi}-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo de Referencia- 1K).
Paso 1:
Figure imgf000197_0001
Una mezcla de 4-[6-cloro-8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metilsulfanil)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina-1-carboxilato de fe/t-butilo (235) (500 mg, 0,752 mmol), trimetilboroxina (236 mg, 1,88 mmol), K2CO3 (311 mg, 2,26 mmol) y Pd(PPh3)4 (86,9 mg, 0,0752 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) y H2O (1 ml) se desgasificó con N2 durante 2 min. La reacción se calentó a 100 °C con irradiación de MW durante 3 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto deseado. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, 0-60 % EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar 4-[8 {[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-6-met¡l-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carboxilato íerí-butílo (236) (340 mg, rend¡m¡ento del 70 %) como sól¡do amar¡llo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 87,85 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 5,87 (dd, J = 9,7, 2,0 Hz, 1H), 3,95 - 3,74 (m, 6H), 3.62 - 3,50 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,42 -2,32 (m, 1H) 2,28 (s, 3H), 2,06 - 1,94 (m, 2H), 1,82 - 1,65 (m, 1H), 1,63 - 1,53 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 644, 646 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000198_0001
A una soluc¡ón ag¡tada de 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-6-met¡l-2-(met¡lsulfan¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-but¡lo (236) (430 mg, 0528 mmol) en DCM (5 ml) se añad¡ó m-CPBA(80%, 114 mg, 0,528 mmol) en porc¡ones. Después de 4 h, el anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da con la formadón del producto. La mezcla se apago con Na2SO3 acuoso saturado (10 ml) y se diluyó con H2O (20 ml). La mezcla b¡fás¡ca se separó. La capa acuosa se extrajo con DCM (2x20 ml). Los orgán¡cos comb¡nados se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se f¡ltraron y se concentraron. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ¡nstantánea (SO 2 , 0-100 % EtOAc/éter de petróleo) para proporc¡onar 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metanosulf¡n¡l)-6-met¡lp¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato(237) (275 mg, 79 % de rend¡m¡ento) como un ace¡te amar¡llo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 87,94 - 7,87 (m, 2H), 7,56 (s, 1H), 5,89 (dd, J = 9,7, 2,1 Hz, 1H), 4,03 - 3,86 (m, 5H), 3,84 - 3,73 (m, 1H), 3,65 - 3,50 (m, 4H), 2,93 (s, 3H), 2,43 - 2,34 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,10 -1,95 (m, 2H), 1,81 -1,66 (m, 1H), 1,65 - 1,53 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 660, 662 (M+H).
Paso 3:
Figure imgf000198_0002
A una soluc¡ón ag¡tada de 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metanosulf¡n¡l)-6-met¡lp¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-butilo (237) (267 mg, 0,404 mmol) y (3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-ol (199) (79,6 mg, 0,607 mmol) en THF seco (4 ml) se añad¡ó gota a gota LHMDS (1,0 M en THF, 0,607 ml, 0,607 mmol) a temperatura amb¡ente. La mezcla resultante se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 3 h. El anál¡s¡s de LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da con la formac¡ón del producto deseado. La mezcla se apagó con NH4Cl acuoso saturado (10 ml), y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron sobre Na2SO4, se f¡ltraron y se concentraron. El res¡duo crudo se pur¡f¡có por cromatografía ¡nstantánea de fase ¡nversa (0-100 % MeCN/H2O 0,05% de ác¡do fórm¡co) para proporc¡onar 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}-6-met¡lp¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡na-1-carbox¡lato de tert-but¡lo (238) (120 mg, 41 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do amar¡llo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 87,84 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 5,92 -5,83 (m, 1H), 5,15 (s, 1H), 3,95 -3,70 (m, 7H), 3,56 (s. br,, 4H), 3,31 (s, 3H), 3,05 -2.92 (m, 1H), 2,84 -2,71 (m, 1H), 2,60 -2,52 (m, 1H), 2,39 -2,32 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,28 -2,24 (m, 1H), 2,23 -2,17 (m, 3H), 2,05 - 1,95 (m, 2H), 1,79 - 1,66 (m, 1H), 1,62 - 1,54 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 727, 729 (M+H).
Paso 4:
Figure imgf000199_0001
A una solución agitada de 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-{(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-il]oxil-6-metilpirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de terf-but¡lo (238) (120 mg, 0,165 mmol) en DCM (4 ml) se añad¡ó TFA (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura amb¡ente durante 5 h. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da. La reacc¡ón se concentró hasta sequedad para proporc¡onar 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}-6-met¡l-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na(239) (89,6 mg, rend¡m¡ento del 100%) como un ace¡te marrón. LCm S (ESI) m/z 543, 545 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000199_0002
A una soluc¡ón ag¡tada de 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡l-6-met¡l-4-(p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na (239) (89,6 mg, 0,165 mg) en d Cm (4 ml) se añad¡ó DIPEA (213 mg, 1,65 mmol). La mezcla se enfr¡ó a - 40 °C y se añad¡ó gota a gota una soluc¡ón de cloruro de acr¡lo¡lo (17,9 mg, 0,198 mmol) en DCM (1 ml). Tras la ad¡c¡ón, la mezcla se ag¡tó a la misma temperatura durante otros 20 m¡nutos. El anál¡s¡s de LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da con la formac¡ón del producto deseado. La mezcla se apagó con NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y se extrajo con DCM (3x10 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron sobre Na2SO4 , se f¡ltraron y se concentraron. El res¡duo crudo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía ¡nstantánea de fase ¡nversa (0-100 % MeCN/H2O 0,05 % de ác¡do fórm¡co) para proporc¡onar 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-¡ndazol-4-¡l)ox¡]-2-{[(3R,4R)-4-metox¡-1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l]ox¡}-6-met¡lp¡r¡do[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IK) (11 mg, 11% de rend¡m¡ento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 613,50 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,53 (dd, J = 8,9, 1,0 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 5,17 (dt, J = 5,5, 2,6 Hz, 1H), 3,98 - 3,87 (m, 5H), 3,80 (d, J = 29,2 Hz, 4H), 3,32 (s, 3H), 3,00 (dd, J = 9,9, 6,4 Hz, 1H), 2,80 (dd, J = 10,7, 6,0 Hz, 1H), 2,58 (dd, J = 10,6, 3,0 Hz, 1H), 2,33 - 2,25 (m, 4H), 2,22 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 597, 599 (M+H).
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con el Procedimiento general L:
Preparación de 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-mdazol-4-N)oxi]-2-([(3R,4R)-4-metoxi-1-metNpirroNdm-3-il]oxi}quinazolin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo de referencia 1L).
Paso 1:
Figure imgf000200_0001
Una mezcla de 3-fluoro-2-nitrobenzonitrilo (240) (4,0 g, 24,1 mmol) y 5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-indazol-4-ol (72) (6,5 g, 24,1 mmol) en DMA (20 ml) se agitó a 100 °C durante 1 h bajo N2. La mezcla se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 7:3 éter de petróleo/EtOAc) para obtener 3-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazoM-i^oxi^-mtrobenzomtnlo (241) (8,7 g, 87 % de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, d Ms O-de) 8 8,02 - 7,92 (m, 3H), 7,80 - 7,67 (m, 1H), 7,40 (dd, J = 8 ,6 , 0,8 Hz, 1H), 5,89 (dd, J = 9,6, 2,2 Hz, 1H), 3.89 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,84 - 3,70 (m, 1H), 2,41 - 2,26 (m, 1H), 2,04 - 1,95 (m, 2H), 1,77 - 1,66 (m, 1H), 1,58 (t, J = 6,2 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 439, 441 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000200_0002
A una solución de 3-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-n¡trobenzon¡t^lo (241) (8,5 g, 20,4 mmol) en EtOAc (200 ml) se añadió Pd/C (10 % en peso, 850 mg) y la mezcla se agitó a 50 °C durante 6 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 1:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener 2-am¡no-3-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}benzon¡tr¡lo como sólido blanco (242) (6 , 6 g, 84 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 7,79 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,30 (dd, J = 7,9, 1,2 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 8,0, 1,2 Hz, 1H), 6,52 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6.22 (s, 2H), 5,83 (dd, J = 9,7, 2,4 Hz, 1H), 3,88 - 3,85 (m, 1H), 3,82 -3,71 (m, 1H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,08 - 1,89 (m, 2H), 1,79 - 1,65 (m, 1H), 1,58 - 1,54 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 409, 411 (M+Na).
Paso 3:
Figure imgf000200_0003
A una mezcla de 2-am¡no-3-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}benzon¡t^lo (242) (6 , 6 g, 17,2 mmol) y K2CO3 (7,1 g, 51.2 mmol) en d Ms O (40 ml) se añadió CS2 (13 g, 171 mmol) y la mezcla se agitó a 50 °C durante 2 h. La mezcla se vertió en agua (300 ml), se agitó a 25 °C durante 30 min y se filtró. La torta de filtración se lavó con H2O (50 ml) y se secó para obtener 8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}qu¡nazol¡na-2,4(1H,3H)-d¡t¡ón (243) (6,0 g, 76 % de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 13,80 (s, 1H), 13,02 (s, 1H), 8,12 (dd, J = 8,1, 1,3 Hz, 1H), 7,84 (dd, J = 8 ,6 , 4,7 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,21 - 7,14 (m, 1H), 7,12 -7,07 (m, 1H), 5,87 - 5,86 (m, 1H), 3,89 - 3,86 (m, 1H), 3,80 - 3,72 (m, 1H), 2,38 - 2,26 (m, 1H), 2,05 -1,91 (m, 2H), 1,77 - 1,65 (m, 1H), 1,60 - 1,54 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 485, 487 (M+Na).
Paso 4:
Figure imgf000201_0001
A una solución de 8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-indazol-4-¡l]ox¡}qu¡nazol¡na-2,4(1H,3H)-d¡t¡ón (243) (6,0 g, 13,0 mmol) en NaOH acuoso (15 ml, 1 M) se añadió H2O (20 ml) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 10 min. Se añadió yoduro de metilo (3,7 g, 1,6 ml, 25,9 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. Se formó un sólido amarillo. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3x200 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (S¡O2 , 4:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener 8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-il]ox¡}-2,4-b¡s(met¡lsulfan¡l)qu¡nazol¡na (244) (4,7 g, 74 % de rendimiento) como sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 7,94 (dd, J = 8,3, 1,2 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,70 (dd, J = 9,3, 0,7 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 5,78 (dd, J = 9,7, 2,5 Hz, 1H), 3,85 -3,83 (m, 1H), 3,77 -3,67 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,27 -2,18 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 1,99 - 1,92 (m, 1H), 1,90 - 1,85 (m, 1H), 1,73 -1,60 (m, 1H), 1,56 - 1,50 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 491,493 (M+H).
Paso 5:
Figure imgf000201_0002
A una mezcla de 8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-il]ox¡}-2,4-b¡s(met¡lsulfan¡l)qu¡nazol¡na (244) (2,0 g, 4,1 mmol) y piperazina-1-carboxilato de terf-butilo(1,5 g, 8,2 mmol) en DMA (15 ml) se añadió K2CO3 (562 mg, 4,1 mmol) y la mezcla se agitó a 120 °C durante 16 h. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por cromatografía instantánea (SO 2, 3:2 éter de petróleo/EtOAc) para obtener 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metilsulfan¡l)qu¡nazol¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carboxilato de terf-butilo (245) (1 ,1 g, 41 % de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 7,92 -7,85 (m, 1H), 7,73 (dd, J = 7,7, 0,9 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,48 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 6 , 8 8 (s, 1H), 5,80 - 5.74 (m, 1H), 3,83 - 3,67 (m, 6 H), 3,55 (br. s, 4H), 2,28 - 2,16 (m, 1H), 2,03 - 1,92 (m, 4H), 1,89 - 1,85 (m, 1H), 1,73 - 1,60 (m, 1H), 1,59 - 1,49 (m, 2H), 1,43 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 629, 631 (M+H).
Paso 6:
Figure imgf000201_0003
A una solución de 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-¡l)-1H-¡ndazol-4-¡l]ox¡}-2-(metilsulfan¡l)qu¡nazol¡n-4-¡l]p¡peraz¡na-1-carboxilato de terf-butilo (245) (1.0 g, 1,6 mmol) en DCM (10 ml) se añadió m-CPBA(274 mg, 1,6 mmol) y la mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. El análisis LCMS mostró la conversión al producto deseado. La mezcla se diluyó con DCM (20 ml) y se lavó con Na2SO3 acuoso saturado (2x20 ml), NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y salmuera (20 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron para obtener 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metanosulfinil)quinazolin-4-il]piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (246) (960 mg, 94 % de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 87,95 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,46 - 7,39 (m, 1H), 7,22 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 9,7, 2,3 Hz, 1H), 3,93 - 3,84 (m, 5H), 3,79 - 3,69 (m, 1H), 3,59 (br. s, 4H), 2,68 (d, J = 5,7 Hz, 3H), 2,34 - 2,26 (m, 1H), 2,00 - 1,89 (m, 2H), 1,73 - 1,66 (m, 1H), 1,60 - 1,52 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 645, 647 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000202_0001
A una mezcla de 4-[8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-(metanosulfinil)quinazolin-4-il]piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (246) (250 mg, 0388 mmol) y (3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (199) (67 mg, 0,504 mmol) en THF (5 ml) se añadió LiHMDS (0,5 ml, 0,5 mmol, 1 M) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. La mezcla se diluyó con agua (2 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea de fase inversa (C18, 40 g, 50 % MeCN/H2O 0,1 % de ácido fórmico) para obtener 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}quinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (247) (130 mg, 47 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 87,95 (dd, J = 8,1, 3,6 Hz, 1H), 7,76 (t, J = 6,7 Hz, 1H), 7,63 (dd, J = 9,0, 5.8 Hz, 1H), 7,45 (dd, J = 8,1, 2,9 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 27,6 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 9,7, 2,1 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 3,82 -3,71 (m, 7H), 3,56 -3,50 (m, 5H), 3,10 (d, J = 9,3 Hz, 3H), 2,96 -2,93 (m, 1H), 2,25 -2.13 (m, 1H), 2,07 -2,04 (m, 4H), 1,94 -1,84 (m, 3H), 1,70 -1,61 (m, 1H), 1,54 -1,48 (m, 2H), 1,42 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 712, 714 (M+H).
Paso 8:
Figure imgf000202_0002
A una solución de 4-(8-{[5-cloro-6-fluoro-1-(oxan-2-il)-1H-indazol-4-il]oxi}-2-{(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}quinazolin-4-il)piperazina-1-carboxilato de ferf-butilo (247) (130 mg, 0,18 mmol) en DCM (4 ml) se añadió TFA (2 ml) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La mezcla se concentró para obtener 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}-4-(piperazin-1-il)quinazolina (248) (117 mg, rendimiento del 100 %) como un aceite amarillo, que se utilizó en el siguiente paso sin purificación. LCMS (ESI) m/z 528, 530 (M+H).
Paso 9 :
Figure imgf000203_0002
A una solución de 8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}-4-(piperazin-1-il)quinazolina (248) (117 mg, 0,18 mmol) en EtOAc (40 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (40 ml) se añadió cloruro de acriloilo (33 mg, 0,36 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 30 min. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x40 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía instantánea de fase inversa (C18, 0-25 % MeCN/H2O 0,1% de ácido fórmico) para obtener 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}quinazolina-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Ejemplo-IL) (16 mg, 15 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, Dm So -cÍ6) 513,35 (s, 1H), 7,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,3 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,3 Hz, 1H), 4,57 -4,51 (m, 1H), 3,82 -3,76 (m, 9H), 3,10 (s, 3H), 2,93 (s, 1H), 2,15 (dd, J = 10,5, 6,0 Hz, 1H), 2,11 - 2,04 (m, 4H), 1,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 582, 584 (M+H).
Los ejemplos de la siguiente tabla se prepararon utilizando el Procedimiento L y el procedimiento utilizado para preparar 1-[4-(8-[(5-cloro-6-fluoro-1H-indazol-4-il)oxi]-2-{[(3R,4R)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-il]oxi}quinazolina-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (E jem plo-1L). Los siguientes ejemplos se hicieron con cambios o sustituciones no críticos al procedimiento ejemplificado utilizado para preparar el E jem plo-IL que alguien experto en la técnica podría realizar.
Figure imgf000203_0003
Preparación de productos intermedios adicionales:
Preparación de (3R,4R)-1-etil-4-metoxipirrolidin-3-ol (250)
Paso 1:
Figure imgf000203_0001
A una solución de (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de terf-butilo (198) (1,3 g, 5,98 mmol) en DCM (20 ml) se añadió HCl (10 ml, 4 M en 1,4-dioxano) y la mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. El análisis LCMS mostró la conversión del producto. La mezcla se concentró hasta sequedad para obtener clorhidrato de (3R,4R)-4-metoxipirrolidin-3-ol (249) (919 mg, 100 % de rendimiento) como un sólido blanco, que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMs O-cí6) 5 9,59 (s, 2H), 5,77 (s, 1H), 4,26 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 3,29 (s, 3H), 3,26 - 3,11 (m, 3H), 3,09 - 3,02 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z 118 (M+H).
Paso 2:
acetaldehído N a H C 03 , N a B H 3C N
M e O H
Figure imgf000204_0002
69% de rendimiento
Figure imgf000204_0001
Una solución de clorhidrato de (3R,4R)-4-metox¡p¡rrolid¡n-3-ol (249) (100 mg, 0,651 mmol) en MeOH (1,5 ml) se añadió acetaldehído (40 % en peso) (0,754 ml) y NaB^CN (115 mg, 1,82 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla se agitó 5 minutos más a 0 °C y luego se agitó a 20 °C durante 2 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. Se añadió una solución acuosa de KOH 1,0 M para ajustar la mezcla a un pH = 9. La mezcla se extrajo con DCM (5*40 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar (3R,4R)-1-et¡l-4-metox¡p¡rrol¡d¡n-3-ol (250) ( 68 mg, 72 % de rendimiento) como un aceite amarillo, que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 6 5,02 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,00 - 3,85 (m, 1H), 3,54 (ddd, J = 6,5, 3,9, 2,5 Hz, 1H), 3,23 (s, 3H), 2,73 (ddd, J = 11,9, 9,8, 6,4 Hz, 2H), 2,45 - 2,17 (m, 4H), 0,98 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 146 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-4-metoxi-1-(propan-2-il)pirrolidin-3-ol (251)
Figure imgf000204_0003
A una solución de clorhidrato de ^R ^R ^-m e tox ip irro lid in^-o l (249) (100 mg, 0,651 mmol) en MeOH (1,5 ml) y acetona (0,25 ml) se añadió NaBHaCN (115 mg, 1,82 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla se agitó otros 5 min a 0 °C y luego se agitó a 20 °C durante 2 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. Se añadió una solución acuosa de KOH 1,0 M para ajustar la mezcla a un pH = 9. La mezcla se extrajo con DCM (5*40 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar (3R,4R)-4-metox¡-1-(propan-2-¡l)p¡rrol¡d¡n-3-ol (251) (254 mg, 82 % de rendimiento) como un aceite amarillo, que se utilizó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, d Ms O-q^ ) 6 5,02 (s, 1H), 3,94 (s, 1H), 3,53 (dt, J = 6,2, 3,2 Hz, 1H), 3,23 (s, 3H), 2,81 (dd, J = 15,6, 6 , 6 Hz, 2H), 2,46 (s, 1H), 2,33 (s, 2H), 0,98 (t, J = 6,1 Hz, 6 H). LCMS (ESI) m/z 160 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-4-metoxi-1-(2-metoxietil)pirrolidin-3-ol (252)
Figure imgf000204_0004
Una solución de clorhidrato de ^R ^R ^-m e tox ip irro lid in^-o l (249) (100 mg, 0,651 mmol) y 1-bromo-2-metoxietano (113 mg, 0,814 mmol) en MeCN (2 ml) se añadió K2CO3 (180 mg, 1,3 mmol) a 20 °C. La mezcla se agitó a 65 °C durante 7 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. A la mezcla se le añadió MeCN (10 ml) y DCM (10 ml). La mezcla se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar (3R,4R)-4-metoxM-^-metoxietiOpirrolidin^-ol (252) (102 mg, 90 % de rendimiento, 75 % de pureza) como un aceite amarillo, que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-Ó6) 6 4,99 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 3,94 -3,89 (m, 1H), 3,55 -3,47 (m, 1H), 3,37 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,28 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3,22 (s, 5H), 2,75 (ddd, J = 13,8, 9,8, 6,5 Hz, 2H), 2,53 (s, 1H), 2,49 - 2,39 (m, 2H), 2,29 (dd, J = 9,5, 4,8 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 176 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-4-etoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (253)
Paso 1:
LHMDS
yodoetano
Figure imgf000205_0001
THF, 50 °C
197 38% de rendimiento
Figure imgf000205_0002
A una mezcla de (3R,4R)-3,4-dihidroxipirrolidin-1 -carboxilato de ferf-butilo (197) (1 g, 4,92 mmol) y yodoetano (2,3 g, 14,8 mmol) en THF (30 ml) se añadió LHMDS (7,38 ml, 7,38 mmol, 1,0 M en THF). La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. El análisis LCMS mostró principalmente material de partida. La mezcla se agitó durante 48 h a 50 °C. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. La reacción se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se lavó con agua. Los orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, 2:3 éter de petróleo/EtOAc) para proporcionar (3R,4R)-3-etoxi-4-hidroxipirrolidin-1-carboxilato de ferf-butilo (253) (435 mg, 38 % de rendimiento) como aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 85,17 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,04 (s, 1H), 3,69 (s, 1H), 3,47 (dd, J = 7,0, 1,8 Hz, 2H), 3,41 -3,25 (m, 2H), 3,20 (d, J= 11,8 Hz, 1H), 3,13 (d, J= 11,5 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,08 (t, J= 7,0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 254 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000205_0003
A una solución de (3R,4R)-3-etoxi-4-hidroxipirrolidin-1-carboxilato de ferf-butilo (253) (435 mg, 1,88 mmol) en THF (15 ml) se añadió LAH (143 mg, 3,76 mmol), y la mezcla se agitó a 70 °C durante 3 h. El análisis LCMS mostró la formación del producto. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y luego se añadió Na2SO4^10H2O (2 g). La mezcla se agitó durante 30 minutos y luego se filtró a través de celita. El filtrado se concentró para obtener (3R,4R)-4-etoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (254) como aceite incoloro (215 mg, 79 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 84,99 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,63 (ddd, J = 6,5, 4,1, 2,4 Hz, 1H), 3,53 -3,35 (m, 2H), 2,72 -2,62 (m, 2H), 2,31 (dd, J = 9,8, 4,1 Hz, 1H), 2,22 (dd, J = 9,5, 4,6 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H), 1,09 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 146 (M+H).
Preparación de rac-(3R,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (257)
Paso 1:
Figure imgf000205_0004
A una mezcla de (3R,4S)-3,4-dihidroxipirrolidin-1-carboxilato de rac-ferf-butilo (255) (500 mg, 2,46 mmol) y CH3 I (1,05 g, 7,38 mmol) en THF (10 ml) se añadió Lh MDS (3,69 ml, 3,69 mmol, 1 M en THF) y la mezcla se agitó a 20 °C durante 16 h. El análisis por LCMS mostró ~50 % de producto con ~ 30% de material de partida restante y trazas del subproducto dimetilado. A la reacción se añadió H2O (10ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (10 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 1:1 éter de petróleo/EtOAc) para obtener (3R,4S)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de rac-ferf-butilo (256) (260 mg, 49% de rendimiento) como aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 4,14 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 3,74 - 3,65 (m, 1H), 3,44 - 3,32 (m, 3H), 3,30 (s, 3H), 3,11 (ddd, J = 12,2, 10,9, 5,2 Hz, 2H), 1,38 (s, 9H). LCMS (ESI) m/z 240 (M+Na).
Paso 2:
Figure imgf000206_0001
A una solución agitada de 3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de rac-tert-butilo (256) (256 mg, 1,18 mmol) en THF seco (5 ml) se añadió LAH (157 mg, 4,12 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 70 °C durante 3 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto deseado. La mezcla se enfrió a 10 °C y luego se añadió Na2SO4^1 0 H2O (2 g). La mezcla se agitó durante 20 minutos y luego se filtró a través de celita. El filtrado se concentró para proporcionar rac-(3R,4S)-4-metoxi-1-metilpirrolidin-3-ol (257) (130 mg, 84 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 4,41 (d, J = 6 , 6 Hz, 1H), 4,09 - 4,00 (m, 1H), 3,61 (q, J = 6,1 Hz, 1H), 3.28 (s, 3H), 2,83 (dt, J = 9,5, 6,2 Hz, 2H), 2,29 (dd, J = 9,5, 6,0 Hz, 1H), 2,26 -2,21 (dd, 1H), 2,20 (s, 3H). LC-MS (ESI) m/z 132 (M+H).
Preparación de rac-(3S,4R)-4-etil-1-metilpirrolidin-3-ol (259)
formaldehído
ácido fórmico
Figure imgf000206_0003
100 °C
Figure imgf000206_0002
93% de rendimiento
Una mezcla de rac-(3S,4R)-4-etilpirrolidia-3-ol (258) (50 mg, 0,43 mmol) (J. Med. Chem. 2010, 53, 6730-6746), formaldehído acuoso (3 ml) y ácido fórmico ( 6 ml) se agitó a 100 °C en un tubo sellado durante 60 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. La reacción se concentró hasta sequedad. Se añadió HCl concentrado (5 ml) al residuo. La mezcla se agitó durante 2 h y luego se concentró hasta sequedad. Al residuo se le añadió H2O (30 ml) y la mezcla se hizo cuidadosamente básica con K2CO3 sólido. La mezcla se extrajo con DCM/MeOH 10:1 (3x30 ml). Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron para proporcionar rac-(3S,4R)-4-etil-1-metilpirrolidin-3-ol (259) (505 mg, 93 % de rendimiento) como un aceite amarillo pálido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-Ó6) 8 4,72 (s, 1H), 3,71 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 2,71 -2,75 (m, 1H), 2,50 -2,53 (m, 1H), 2,36 -2,39 (m, 1H), 2,17 (s, 3H), 1,91 - 1,98 (m, 1H), 1,69 - 1,75 (m, 1H), 1,39 - 1,49 (m, 1H), 1,20 - 1,34 (m, 1H), 0,86 (d, J = 14,7 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 130 (M+H).
Preparación de rac-(3S,4R)-4-ciclopropil-1-metilpirrolidin-3-ol (261)
formaldehído
N a B H 3C N
Figure imgf000206_0004
M e C N
Figure imgf000206_0005
260 66% de rendimiento
A una solución agitada de rac-(3S,4R)-4-ciclopropilpirrolidin-3-ol (260) (532 mg, 4,18 mmol) (J. Med. Chem. 2010, 53, 6730-6746), en MeOH seco (10 ml) se añadió formaldehído (628 mg, 20,9 mmol) y NaBHaCN (736 mg, 11,7 mmol) a 10 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 6 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto deseado. Se añadió a la reacción NaHCO3 acuoso saturado (10 ml). La mezcla se extrajo con DCM (3x15 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (15 ml), se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron para proporcionar rac-(3S,4R)-4-ciclopropil-1 -metilpirrolidin-3-ol (261) (591 mg, 100 % de rendimiento), que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-Ó6) 8 4,75 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 3,90 (dd, J = 6,2, 4,8 Hz, 1H), 2,75 - 2,68 (m, 1H), 2,64 (dd, J = 9,7, 6,4 Hz, 1H), 2.36 (dd, J = 9,7, 3,8 Hz, 1H), 2,26 - 2,07 (m, 4H), 1,35 - 1,27 (m, 1H), 0,78 -0,67 (m, 1H), 0,38 -0,35 (m, 1H), 0,23 -0,15 (m, 1H), 0,05 (ddd, J = 9,2, 4,9, 1,8 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 142 (M+H).
Preparación de rac-(3S,4R)-1,4-dimetilpirrolidin-3-ol (263)
Figure imgf000207_0001
A una solución agitada de (3S,4R)-3-hidroxi-4-metilpirrolidin-1-carboxilato de rac-tert-butilo (262) (469 mg, 2,33 mmol) en THF seco (5 ml) se añadió LAH (310 mg, 8,16 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 70 °C durante 3 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. La mezcla se enfrió a 10 °C y luego se añadió Na2SO^10H2O (2 g). La mezcla se agitó durante 20 minutos y luego se filtró a través de celita. El filtrado se concentró para obtener rac-(3S,4R)-1,4-dimetilpirrolidin-3-ol (263) (225 mg, 84 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 64,73 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 3,64 (td, J = 9,0, 4,4 Hz, 1H), 2,70 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 256 (dd, J = 9,5, 6,6 Hz, 1H), 2,34 (dd, J = 9,5, 4,1 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H), 1,96 - 1,84 (m, 2H), 0,97 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LC-MS (ESI) m/z 116 (M+H).
Preparación de rac-(3S,4S)-1,4-dimetilpirrolidin-3-ol (265)
Figure imgf000207_0002
A una solución agitada de (3S,4S)-3-hidroxi-4-metilpirrolidin-1-carboxilato de rac-tert-butilo (264) (500 mg, 2,48 mmol) en THF seco (8 ml) se añadió LAH (236 mg, 6,21 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. La mezcla se enfrió a 10 °C y luego se añadió Na2SO4^10H2O (2 g). La mezcla se agitó durante 20 minutos y luego se filtró a través de celita. El filtrado se concentró para obtener rac-(3S,4S)-1,4-dimetilpirrolidin-3-ol (265) (230 mg, 80 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 64,46 (s, 1H), 3,98 -4,08 (m, 1H), 2,94 -2,98 (m, 1H), 2,69 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,11 - 1,94 (m, 3H), 0,88 (d, J = 6,9 Hz, 3H). LC-MS (ESI) m/z 116 (M+H).
Figure imgf000207_0003
A una solución de rac-(4R)-4-(2,2-difluoroetoxi)pirrolidin-3-ol (266) (595 mg, 3,56 mmol) en MeOH (10 ml) se añadió formaldehído acuoso (2 ml) y NaBHaCN (626 mg, 9,97 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó 5 min más a 0 °C y luego 1 h a 20 °C. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. Se añadió H2O (10 ml) y la mezcla se extrajo con DCM (3x20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (20 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2 , 0-10 % DCM/MeOH) para obtener rac-(4R)-4-(2,2-difluoroetoxi)-1-metilpirrolidin-3-ol (267) (425 mg, 66 % de rendimiento) como aceite marrón. 1H RMN (400 MHz, DMSO-Ó6) 6 = 6,14 (dd, J = 54,8, 3,6, 1H), 5,71 (d, J = 3,5, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,08 -3,95 (m, 1H), 3,87 - 3,68 (m, 2H), 3,30 (dd, J = 22,2, 5,0, 2H), 3,15 (d, J = 12,1, 1H), 2,97 (dd, J = 11,6, 1,9, 1H), 2,68 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 182 (M+H).
Preparación de rac-(3R,4R)-1,3-dimetilpiperidin-4-ol (269)
Figure imgf000208_0001
A una solución de clorhidrato de rac-(3R,4R)-3-metilpiperidin-4-ol (268) (200 mg, 1,32 mmol) en MeOH (1,5 ml) y acetaldehído (37-40 % en peso) (0,781 ml) se añadió NaBHaCN (233 mg, 3,70 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla se agitó durante otros 5 min a 0 °C y luego 2 h a 20 °C. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. Se añadió una solución acuosa de KOH 1,0 M para ajustar la mezcla a un pH = 9. La mezcla se extrajo con DCM (5 x 40 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar rac-(3R,4R)-1,3-dimetilpiperidin-4-ol (269) (150 mg, 90 % de rendimiento) como un aceite amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 4,50 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 2,98 -2,77 (m, 1H), 2,77 -2,57 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,83 (ddd, J = 14,3, 8,2, 2,3 Hz, 1H), 1,70 (ddt, J = 12,5, 4,6, 2,9 Hz, 1H), 1,52 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 1,47 -1,31 (m, 2H), 0,85 (d, J = 6,4 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 130 (M+H).
Preparación de rac-(3R,4R)-1-(2-metoxietil)-3-metilpiperidin-4-ol (270)
Figure imgf000208_0002
A una solución de clorhidrato de rac-(3R,4R)-3-metilpiperidin-4-ol (269) (100 mg, 0,659 mmol) y 1-bromo-2-metoxietano (110 mg, 0,791 mmol) en MeCN (2 ml) se añadió K2CO3 (164 mg, 1,19 mmol) a 20 °C. La mezcla se agitó a continuación a 50 °C durante 7 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió MeCN (10 ml) y DCM (10 ml). La mezcla se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró para proporcionar rac-(3R,4R)-1-(2-metoxietil)-3-metilpiperidin-4-ol (270) (114 mg, 100 % de rendimiento) como un aceite amarillo, que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 4,50 (s, 1H), 3,38 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,38 - 3,30 (m, 1H), 3,20 (s, 3H), 2,97 -2,47 (m, 3H), 2,39 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,92 (td, J = 12,0, 2,5 Hz, 1H), 1,76 -1,65 (m, 1H), 1,37 (qdd, J = 12,3, 8,7, 6,1 Hz, 2H), 0,85 (d, J = 6,5 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 174 (M+H).
Preparación
Figure imgf000208_0003
Figure imgf000208_0004
A una solución de 5-azaspiro[2.4]heptan-7-ol (271) (200 mg, 1,77 mmol) en MeOH (1,5 ml), acetaldehído (37-40% p/p) (1,13 ml) y ácido acético (0,1 ml) se añadió NaBHaCN (311 mg, 4,95 mmol) en porciones a 0 °C. La reacción se agitó durante 5 minutos más a 0 °C y luego durante 2 h a 20 °C. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. Se añadió una solución acuosa de KOH 1,0 M para ajustar la mezcla a un pH = 9. La mezcla se extrajo con DCM (5 x 40 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar 5-metil-5-azaspiro[2.4]heptano-7-ol (272) (200 mg, 89% de rendimiento) como un aceite amarillo, que se tomó sin más purificación. LCMS (ESI) m/z 128 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-1-metilpirrolidin-3,4-diol (273)
Figure imgf000209_0001
A una solución de (3R,4R)-3,4-dihidroxipirrolidin-1-carboxilato de ferf-butilo (197) (922 mg, 4,24 mmol) en THF (15 ml, c = 0,28 M) a temperatura ambiente bajo N2 se añadió LAH (2,0 M en THF, 8,5 ml, 17,0 mmol). Se observó la evolución del gas. A continuación, la mezcla se agitó a 60 °C durante 9 h. Tras enfriar a 0 °C, se añadió H2O (0,65 ml) en THF (10 ml), lo que dio lugar a una ligera exotermia y evolución de gas. Se añadió NaOH acuoso al 15 % (0,65 ml) y H2O (1,95 ml). Después de 15 minutos, la mezcla se filtró a través de celita. La torta de filtración se lavó a fondo con t Hf . El filtrado se concentró para proporcionar (3R,4R)-1-metilpirrolidin-3,4-diol (273) (481 mg, 97 % de rendimiento) como un sólido blanquecino, que se tomó sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMsO-cfe) 64,78 (d, J = 4,8 Hz, 2 H), 3,84 - 3,77 (m, 2H), 2,69 (dd, J = 5,9, 9,2 Hz, 2H), 2,27 - 2,20 (m, 2H), 2,17 (s, 3H).
Preparación de 2-metil-2,3-dihidro-1H-isomdol-4-ol (275)
Figure imgf000209_0002
A una solución de clorhidrato de 2,3-dihidro-1H-isoindol-4-ol (274) (100 mg, 0,583 mmol) en MeOH (5 ml) se añadió formaldehído acuoso (0,3 ml) y N aB^C N (293 mg, 4,66 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó otros 5 min a 0 °C y luego 1 h a 20 °C. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto deseado. La mezcla se añadió a H2O (10 ml) y se extrajo con DCM (3x20 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (20 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó por cromatografía instantánea (SO 2, 0-10 % MeOH/DCM) para proporcionar 2-metil-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-ol (275) (80 mg, 98 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 68,37 (s, 1H), 6,97 (t, J = 7,7, 1H), 6,64 -6,59 (m, 1H), 3,75 (d, J = 15,6 Hz, 4H), 2,46 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 150,151 (M+H).
Figure imgf000209_0003
A una solución de 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-8-ol (276) (150 mg, 1,01 mmol) en MeOH (3 ml) se añadió formaldehído (151 mg, 5,03 mmol), NaBHaCN (177 mg, 2,82 mmol) y ácido acético (1 ml) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 5 min a 0 °C y luego 1 h a 20 °C. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. La mezcla se vertió en H2O (5 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (2 ml) y se extrajo con DCM (3x20 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (5 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar 2-metil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-8-ol (277) (143 mg, 87 % de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 69,23 (s, 1H), 6,90 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,59 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,47 (dd, J = 7,7, 3,2 Hz, 1H), 3,38 (s, 2H), 2,62 - 2,57 (m, 2H), 2,55 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 164 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-4-metoxi-l-(prop-2-in-1-il)pirrolidin-3-ol (278)
Figure imgf000210_0001
A una solución agitada de trifluoroacetato de (3R,4R)-4-metoxipirrolidin-3-ol (249) (200 mg, 0,23 mmol) y K2CO3 (236 mg, 1,71 mmol) en MeCN (3 ml) se añadió 3-cloroprop-1-ino (127 mg, 1,71 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 16 h. El análisis de LCMS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto. La reacción se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 0-8 % MeOH/DCM) para proporcionar (3R,4R)-4-metoxi-1-(prop-2-in-1-il)pirrolidin-3-ol (278) (85 mg, 32 % de rendimiento) como un aceite amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 5,05 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 3,98 -3,90 (m, 1H), 3,58 -3,51 (m, 1H), 3,30 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 3,23 (s, 3H), 3,13 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 2,80 (td, J = 9,3, 6,7 Hz, 2H), 2,45 (dd, J = 9,8, 3,9 Hz, 1H), 2,35 (dd, J = 9,4, 4,7 Hz, 1H).
Figure imgf000210_0002
A una mezcla de trifluoroacetato de (3R,4R)-4-metoxipirrolidin-3-ol (249) (550 mg, 2,38 mmol), KI (790 mg, 4,76 mmol) y K2CO3 (1,31 g, 9,52 mmol) en acetona (15 ml) se añadió 4-bromobut-1-ino (475 mg, 3,57 mmol). La mezcla se agitó a 80 °C durante 5 h. El análisis de LCMS mostró la formación del producto deseado. La reacción se filtró y se concentró hasta sequedad. La purificación por cromatografía instantánea de fase inversa (40 g de C18, 5% de MeCN/H2O 0,1 % de ácido fórmico) proporcionó (3R,4R)-1-(but-3-In-1-il)-4-metoxipirrolidin-3-ol (279) (360 mg, 70 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 8 3,98 - 3,94 (m, 1H), 3,58 - 3,52 (m, 1H), 3,23 (s, 3H), 2,88 - 2,76 (m, 3H), 2,62 - 2,52 (m, 3H), 2,37 (dd, J = 9,8, 4,5 Hz, 1H), 2,30 (td, J = 7,5, 2,6 Hz, 2H).
Preparación de (3R,4R)-1-(2-(/ferf-butil(dimetil)silil]oxi)etil)-4-metoxipirrolidin-3-ol (280)
Figure imgf000210_0003
A una solución de trifluoroacetato de (3R,4R)-4-metoxipirrolidin-3-ol (249) (196 mg, 1,67 mmol) en MeCN (15 ml) se añadió (2-bromoetoxi)(tert-butil)dimetilsilano (2,0 g, 8,37 mmol) y Et3N (847 mg, 8,37 mmol). La mezcla se agitó a 70 °C durante 6 h. El análisis de LCMS mostró la conversión al producto deseado. Se eliminó el disolvente y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea de fase inversa (40 g de C18, 20-50 % de MeCN/H2O 0,1 % de ácido fórmico) para proporcionar (3R,4R)-1-(2-{/ferf-butil(dimetil)silil]oxi}etil)-4-metoxipirrolidin-3-ol (280) 164 mg, 36 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 4,10 - 4,06 (m, 1H), 3,71 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,69 - 3,65 (m, 1H), 3,32 - 3,30 (m, 3H), 3,26 (dd, J = 10.6, 6,3 Hz, 1H), 2,83 -2,74 (m, 2H), 2,64 (td, J = 6,0, 1,0 Hz, 2H), 2,41 (dd, J = 10,7, 3,9 Hz, 1H), 0,83 (s, 9H), 0,00 (s, 6 H). LCMS (ESI) m/z 276 (M+H).
Preparación de 1,6-dimetN-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-c]pmdm-3-ol (282)
Figure imgf000211_0001
Una mezcla de hidrobromuro de 1-metil-4,5,6,7-tetrah¡dro-1H-p¡razolo[3,4-c]pind¡n-3-ol (281) (Albany Molecular) (130 mg, 0,555 mmol), formaldehído acuoso (1 ml) y ácido fórmico (3 ml) en un tubo sellado se calentó a 90 °C durante 19 h. El análisis LCMS mostró el consumo del material de partida. La reacción se concentró. Se añadió HCl concentrado (3 ml). La mezcla se agitó durante 2 h y luego se concentró. Se añadió H2O (30 ml) y la mezcla se basificó cuidadosamente con K2CO3 sólido. La mezcla se extrajo con DCM/MeOH 10:1 (3x30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo crudo se purificó por HPLC preparativa en una columna Kromasil-C18 (100 x 21,2 mm, tamaño de partícula de 5 |jm), que se eludió con MeCN/H2O (+0,1 % de ácido fórmico) para proporcionar 1,6-d¡met¡l-4,5,6,7-tetrah¡dro-1H-p¡razolo[3,4-c]p¡^d¡n-3-ol (282) (80 mg, 8 6 % de rendimiento) como sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 3,15 (s, 3H), 3,08 (s, 2H), 2,99 (s, 1H), 2,34 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (t, J = 5,8 Hz, 2H). LCMS (ESI) m/z 168 (M H).
Preparación de rac-(3S,4R)-4-(difluorometil)-1-metilpirrolidin-3-ol (290)
Paso 1:
Figure imgf000211_0002
A una suspensión de rac-tert-butil (1R,5S)-6-oxa-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-3-carbox¡lato de rac-tert-butilo (283) (7,6 g, 41 mmol) y Cul (1,56 g, 8,2 mmol) en THF seco (100 ml) bajo N2 se añadió bromuro de vinilmagnesio (1,0 M en THF, 82,1 mmol, 82,1 ml) gota a gota a -30 °C. Después de 3 h, el análisis por TLC (3:1 éter de petróleo/EtOAc) indicó el consumo del material de partida. La reacción se apagó añadiendo NH4Cl acuoso saturado (100 ml) y se filtró. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (200 ml X 2). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (100 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía instantánea (Biotage, SO 2 , 3:1 éter de petróleo/EtOAc) para dar un aceite amarillo (10 g), que se repurificó por cromatografía instantánea (Biotage, SO 2 , 3:1 éter de petróleo/EtOAc) para proporcionar (3R,4S)-3-et¡l-4-h¡drox¡p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de rac-tertbutilo (284) (7,2 g, 82 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 5,73 (ddd, J = 7,9, 10,0, 17,4 Hz, 1H), 5,26 - 5,14 (m, 2H), 4,18 - 4,08 (m, 1H), 3.77 - 3,62 (m, 2H), 3,32 - 3,18 (m, 2H), 2,71 (td, J = 6 ,8 , 13,5 Hz, 1H), 1,96 (br s, 1H), 1,48 (s, 9H).
Paso 2:
Figure imgf000211_0003
A una solución de (3R,4S)-3-et¡l-4-h¡drox¡p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de rac-tert-butilo (284) (7,2 g, 33,8 mmol) en THF (100 ml) se añadió NaH (60 % en aceite mineral, 2,7 g, 67,5 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 h y después se añadió BnBr (6,9 g, 40,5 mmol). Tras la adición, la mezcla de reacción se calentó a 25 °C y se agitó a esta temperatura durante 16 h. El análisis por TLC (4:1 éter de petróleo/EtOAc) indicó el consumo del material de partida. La mezcla se diluyó con H2O (100 ml) y se extrajo con EtOAc (2x200 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Biotage, SiO2, 10-25 % EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar (3S,4R)-3-(benzoxi)-4 etilpirrolidin-1-carboxilato de rac-tert-butilo (285) (7,55 g, 74 % de rendimiento) como un aceite amarillo. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7,42 - 7,30 (m, 5H), 5,82 - 5,69 (m, 1H), 5,24 - 5,10 (m, 2H), 4,65 - 4,54 (m, 2H), 3.87 (br dd, J = 5,0, 8,0 Hz, 1H), 3,70 - 3,55 (m, 2H), 3,44 - 3,20 (m, 2H), 2,91 (quin, J = 6,3 Hz, 1H), 1,48 (s, 9H).
Paso 3:
Figure imgf000212_0001
A una solución de (3S,4R)-3-(benzoxi)-4-etenilpirrolidin-1-carboxilato de rac-tert-butilo (285) y NaIO4 (11,7 g, 54,7 mmol) en MeOH (90 ml) y H2O (30 ml) a 0-5 °C se añadió OSO4 (63,3 mg, 0,25 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0-5 °C durante 2 h más y luego se calentó lentamente hasta 25 °C. Tras 16 h a 25 °C, el análisis por TLC (3:1 éter de petróleo/EtOAc) mostró el consumo del material de partida. La mezcla de reacción se filtró y la torta del filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró en un rotovap para eliminar MeOH y EtOAc. La solución acuosa se diluyó con salmuera (100 ml) y se extrajo con EtOAc (45 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (2 x 100 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 3:1 -10:1 éter de petróleo/EtOAc) para proporcionar (3S,4R)-3-(benzoxi)-4-formilpirrolidin-1-carboxilato derac-ferf-butilo (286) (5,9 g, 78 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 9,68 (d, J= 1,0 Hz, 1H), 7,41 - 7,28 (m, 5H), 4,64 -4,49 (m, 2H), 4,36 (br. s, 1H), 3,85 -3,57 (m, 2H), 3,56 -3,40, (m, 2H), 3,18 (b.rs, 1H), 1,46 (s, 9H). Paso 4:
Figure imgf000212_0002
A una solución de (3S,4R)-3-(benciloxi)-4-formilpirrolidin-1-carboxilato rac-tert-butilo (286) (5,9 g, 19,3 mmol) en DCM (120 ml) se añadió DAST (9,34 g, 58 mmol) gota a gota mientras se mantenía la temperatura interna de reacción por debajo de 5 °C. Tras la adición, la mezcla de reacción se agitó otras 2 h a 0-5 °C. La reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 17 h. El análisis por TLC (4:1 éter de petróleo/EtOAc) mostró el consumo del material de partida. La reacción se apagó con MeOH (40 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se ajustó a un pH ~ 8 mediante la adición de Na2CO3 acuoso saturado. La mezcla acuosa se extrajo con DCM (2x60 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con Na2CO3 acuoso saturado (40 ml) y salmuera (40 ml), se secaron sobre Na2SO4 , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Biotage, SiO2 , 10-25 % EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar (3S,4R)-3-(benzoxi)-4-(difluorometil)pirrolidin-1-carboxilato de rac-tert-butilo (287) (5,0 g, 79 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 Mh z , CDCh) 8 7,40 - 7,27 (m, 5H), 5,80 (td, J = 56,0, 4,1 Hz, 1H), 4,58 - 4,48 (m, 2H), 4.20 - 4,08 (m, 1H), 3,63 (br. s, 2H), 3,45 (br. s, 2H), 2,73 (br dd, J = 4,4, 7,9 Hz, 1H), 1,50 -1,42 (m, 9H).
Paso 5:
Figure imgf000212_0003
Una mezcla de (3S,4R)-3-(benzoxi)-4-(difluorometil)pirrolidin-1-carboxilato derac-tert-butilo (287) (4,6 g, 15 mmol) y Pd(OH)2/C( 10 % de carga en peso, 1,97 g) en MeOH (80 ml) se agitó a 50 °C bajo H2 a 50 psi durante 17 h. El análisis de TLC (2:1 éter de petróleo/EtOAc) mostró el consumo del material de partida. La mezcla de reacción se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, 7:1 - 4:1 éter de petróleo/EtOAc) para proporcionar (3R,4S)-3-(difluorometil)-4-hidroxipirrolidin-1-carboxilato derac-tert-butilo (288) (2,4 g, 72 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 55,79 (td, J = 56,0, 4,1 Hz, 1H), 5,32 (s, 1H), 4,48 (br. s, 1H), 3,70 (br. s, 2H), 3,51 - 3,27 (m, 2H), 2,64 (br. s, 1H), 1,52 - 1,44 (m, 9H). LCMS (ESI) m/z 182 (M-tBu).
Paso 6:
Figure imgf000213_0001
A una solución de(3R,4S)-3-(difluorometil)-4-hidroxipirrolidin-1-carboxilato rac-tert-butilo (288) (920 mg, 3,88 mmol) en DCM (10 ml) se añadió TFA (4 ml) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 2 h. El análisis LMCS mostró el consumo del material de partida con la formación del producto deseado. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad para proporcionar rac-(3S,4R)-4-(difluorometil)pirrolidin-3-ol (289) (532 mg, rendimiento del 100%). LCMS (ESI) m/z 138 (M+H).
Paso 7:
Figure imgf000213_0002
A una solución de rac-(3S,4R)-4-(difluorometil)pirrolidin-3-ol (289) (532 mg, 3,88 mmol) en MeOH (10 ml) se añadió formaldehído (582 mg, 19,4 mmol) y NaBHaCN (683 mg, 10,9 mmol) a 10 °C. La mezcla se agitó durante 3 h a 25 °C. El análisis por LCMS mostró el consumo del material de partida y la formación del producto. Se añadió NaHCO3 acuoso saturado (10 ml) y la mezcla se extrajo con DCM (3x15 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (15 ml x 2), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (SO 2, 0-10 % DCM/MeOH) para obtener rac-(4R)-4-(2,2-difluoroetoxi)-1-metilpirrolidin-3-ol (290) (472 mg, 81 % de rendimiento) como aceite amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 56,07 - 6,01 (m, 1H), 5,13 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 6 , 6 Hz, 1H), 4,13 -4,06 (m, 1H), 2,64 (dt, J = 9,5, 7,3 Hz, 2H), 2,37 -2,31 (m, 2H), 2,19 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 125 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-1-íerf-butN-4-metoxipirroNdm-3-ol (292)
Paso 1:
Figure imgf000213_0003
A una solución de clorhidrato de (3R,4R)-4-metoxipirrolidin-3-ol (249) (617 mg, 2,67 mmol) en acetona seca (20 ml) se añadió tamiz molecular 4Á (1,0 g) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. El análisis por LCMS mostró la formación del producto deseado. La mezcla se filtró a través de un tapón de celita y se concentró para obtener cloruro de (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxi-1-(propan-2-ilideno)pirrolidin-1-io (291) (700 mg, 96 % de rendimiento) como una goma marrón. LCMS (ESI) m/z 158 (M+H).
Paso 2:
Figure imgf000214_0001
A una solución de cloruro de (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxi-1-(propan-2-ilideno)pirrolidin-1-io (291) (800 mg, 5,1 mmol) en THF seco (12 ml) a -20 °C bajo N2 se añadió MeMgCl (3,0 M en THF, 11,8 ml, 35,4 mmol). La solución resultante se agitó a 18-20 °C durante 18 h. El análisis de LCMS mostró la formación del producto deseado con una traza de material de partida restante. La reacción se apagó mediante la adición de NH4Cl acuoso saturado (6 ml) y luego se ajustó a pH ~ 9 mediante la adición de Na2CO3 acuoso saturado. La mezcla se extrajo con EtOAc (4 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Biotage, 10-45 % MeOH/DCM 0,1 % NH4OH) para proporcionar (3R,4R)-1-tertbutil-4-metoxipirrolidin-3-ol (292) (150 mg, 17 % de rendimiento) como un aceite amarillo. 1H RMN (400 Mh z , CDCh) 8 4,32 (br.s, 1H), 3,90 - 3,92 (m, 1H), 3,55 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,36 (s, 1H), 3,24 (dd, J = 11,7, 4,3 Hz, 1H), 3,06 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 2,08 -2,00 (m, 1H), 1,47 - 1,38 (m, 9H). LCMS (ESI) m/z 174 (M+H).
Figure imgf000214_0002
A una solución de (3S,4R)-3-hidroxi-4-metilpiperidin-1-carboxilato de rac-tert-butilo (293) (500 mg, 2,32 mmol) en THF (7 ml) se añadió LAH (177 mg, 4,64 mmol). La mezcla se calentó a 80 °C y se agitó durante 2 h a esta temperatura. El análisis de LCMS indicó que el material de partida se consumió con la formación del producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (20 ml). Se añadió Na2SO4^10H2 y la mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La mezcla se filtró y la torta del filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró para proporcionar rac-(3S,4R)-1,4-dimetilpiperidin-3-ol (294) (201 mg, 70 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 84,55 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 3,01 -2,95 (m, 1H), 2,81 -2,75 (m, 1H), 2,65 -2,56 (m, 1H), 2,14 (d, J = 12,8 Hz, 3H), 1,72 (td, J = 11,5, 2,6 Hz, 1H), 1,60 -1,51 (m, 2H), 1,18 -1,04 (m, 2H), 0,92 (d, J = 6,1 Hz, 3H). LCMS (ESI) m/z 130 (M+H).
Preparación de (3R,4R)-4-metoxi-1-(2H3)metilpirrolidin-3-ol (295)
Figure imgf000214_0003
93% de rendimiento
249 295
Una solución agitada de (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de ferf-butilo (249) (1,0 g, 4,6 mmol) en THF (15 ml) se calentó a 70 °C y se añadió en porciones de LiAlD4 (386 mg, 9,2 mmol). La mezcla se agitó otros 30 minutos a 70 °C. El análisis de LCMS indicó el consumo del material de partida con la formación del producto deseado. Tras enfriar a temperatura ambiente, la reacción se combinó con una reacción paralela con 200 mg de (3R,4R)-3-hidroxi-4-metoxipirrolidin-1-carboxilato de terf-butilo. La mezcla se apagó con NaOH acuoso al 15 % y se filtró. La torta de filtración se lavó con EtOAc. El filtrado combinado se concentró para proporcionar (3R,4R)-4-metoxi-1-(2H3)metilpirrolidin-3-ol (295) (690 mg, 93 % de rendimiento) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 85,00 (s, 1H), 3,96 - 3,90 (m, 1H), 3,56 - 3,50 (m, 1H), 3,22 (s, 3H), 2,72 - 2,63 (m, 2H), 2,34 (dd, J = 9,9, 3,9 Hz, 1H), 2,21 (dd, J = 9,5, 4,7 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z 135 (M+H).
Preparación de rac-(3S,4R)-1-metil-4-(trifluorometil)pirrolidin-3-ol (300)
Paso 1:
Figure imgf000215_0001
A un matraz de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se añadió ({[(1E)-3,3,3-tr¡fluoroprop-1-en-1-il]oxi}metil)benceno (296) (2,0 g, 9,9 mmol) y A/-benc¡l-1-metox¡-A/-[(tr¡met¡ls¡l¡l)met¡l]metanam¡na (297) (12,2 g, 51,4 mmol). La mezcla se calentó a 150 °C y luego se añad¡ó TFA gota a gota a través del condensador de reflujo durante un per¡odo de 3 h. Tras la ad¡c¡ón, la mezcla de reacc¡ón oscura se calentó a 150 °C durante 1 h más. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo completo del mater¡al de part¡da. La mezcla de reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se pur¡f¡có por cromatografía ¡nstantánea (B¡otage, 10 % EtOAc/éter de petróleo) para proporc¡onar rac-(3S,4R)-1-benc¡l-3-(benzox¡)-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡rrol¡d¡na (298) (3,1 g, 93 % de rend¡m¡ento) como un ace¡te ¡ncoloro. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 82,49 - 2,60 (m, 1H), 2,70 (dd, J = 10,0, 6,03 Hz, 1H), 2,80 (dd, J= 10,1, 3.5 Hz, 1H), 2,92 - 3,05 (m, 2H), 3,55 - 3,73 (m, 2H), 4,13 -4,25 (m, 1H), 4,44 -4,62 (m, 2H), 7,27 -7,39 (m, 10H). 19F RMN (282 MHz, CDCh) 8 -69,42.
Paso 2:
Figure imgf000215_0002
A una soluc¡ón de rac-(3S,4R)-1-benc¡l-3-(benzox¡)-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡rrol¡d¡na (3,6 g, 10,7 mmol) (298) en MeOH (85 ml) se añad¡ó Pd(OH)2/C(2,26 g, 16,1 mmol) y Boc2O (2,47 g, 11,3 mmol). La mezcla se ag¡tó bajo una atmósfera de H2 durante 16 h. El anál¡s¡s LCMS mostró una convers¡ón del ~50 % al producto deseado. Se añad¡ó una tanda ad¡c¡onal de Pd(OH)2/C (2,26 g, 16,1 mmol) y la mezcla se ag¡tó bajo H2 a 5 atm durante 16 h. Análisis LCMS ~65 % de convers¡ón al producto deseado. La reacc¡ón se f¡ltró a través de cel¡ta y se concentró. Se pur¡f¡có por cromatografía ¡nstantánea (ISCO, 20-50 % EtOAc/éter de petróleo) para proporc¡onar (3S,4R)-3-h¡drox¡-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato rac-tert-but¡lo (299) (1,6 g, 58% de rend¡m¡ento) como un ace¡te ¡ncoloro, que se sol¡d¡f¡có hasta convert¡rse en un sól¡do blanco al reposar. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 84,55 (d, J = 1,9 Hz, 2H), 4,23 (s, 1H), 3,82 -3,51 (m, 4H), 2,98 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 1,46 (s, 9H). 19F RMN (376 MHz, CDCh) 8 -70,24. LCMS (ESI) m/z 246 (M-Boc). Véase j¡ll¡an - el recuento de protones tabulado es demas¡ado alto - los protones a 7 ppm no deberían ex¡st¡r.
Paso 3:
Figure imgf000215_0003
A una soluc¡ón ag¡tada de (3S,4R)-3-h¡drox¡-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato rac-tert-but¡lo(299) en THF (10 ml) se añad¡ó L¡AlH4 (149 mg, 3,92 mmol) en porc¡ones a 20-25 °C (se observó una v¡gorosa em¡s¡ón de gases y exoterm¡a). Tras la ad¡c¡ón, la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante 5 m¡nutos a 20-25 °C y, a cont¡nuac¡ón, se calentó a 80 °C y se ag¡tó a esta temperatura durante 2 h. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo completo del mater¡al de part¡da. La reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente. Se añad¡ó Na2SO4^10H2O (300 mg) y la mezcla se ag¡tó durante 10 m¡n. La mezcla se f¡ltró para proporc¡onar rac-(3S,4R)-1-met¡l-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡rrol¡d¡n-3-ol (300) (285 mg, 86 % de rend¡m¡ento) como un ace¡te ¡ncoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 84,39 (dt, J= 5,4, 2,7 Hz, 1H), 3,29 (s, 1H), 3,10 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 280 (dd, J = 21,9, 10,4 Hz, 2H), 2,54 (dd, J = 10,2, 5,6 Hz, 1H), 2,38 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 170 (M+H).
Preparación de 5-fluoro-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-8-ol (302)
Figure imgf000216_0001
A una solución de 5-fluoro-8-h¡drox¡-3,4-d¡h¡dro¡soqu¡nol¡na-2(1H)-carbox¡lato de tert-but¡lo(301) (200 mg, 0,75 mmol) (US20170348313) en THF (5 ml) se añad¡ó L¡AlH4 (57 mg, 1,5 mmol). La mezcla se ag¡tó a 80 °C durante 2 h. El anál¡s¡s de LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da con la formac¡ón del producto deseado. La mezcla se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se añad¡ó Na2SO4^10H2O (8 g). La mezcla se agitó durante 10 m¡n y luego se f¡ltró y se concentró hasta sequedad para proporc¡onar 5-fluoro-2-met¡l-1,2,3,4-tetrah¡dro¡soqu¡nol¡n-8-ol (302) (136 mg, 100 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 89,30 (s, 1H), 6,75 (t, J = 9,0, 1H), 6,55 (dd, J = 8,7, 4,6, 1H), 3,29 (s, 2H), 2,65 (t, J = 5,7, 2H), 2,51 (t, J = 5,9, 2H), 2,32 (s, 3H). LCMS (ESI) m/z 182 (M+H).
Figure imgf000216_0002
A una mezcla de clorh¡drato de 1,2,3,4-tetrah¡dro¡soqu¡nol¡na-5-ol (303) (186 mg, 1,0 mmol) y [(1-etoc¡cloprop¡l)ox¡](tr¡met¡l)s¡lano (210 mg, 1,2 mmol) en MeOH (8 ml) se añad¡ó NaBHaCN (76 mg, 1,2 mmol) y AcOh (73 mg, 1,2 mmol). La mezcla se ag¡tó a 60 °C durante 4 horas bajo N2. El anál¡s¡s LCMS mostró el consumo del mater¡al de part¡da con la formac¡ón del producto. La mezcla se concentró. El res¡duo se diluyó con DCM (80 ml) y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (2x20 ml) y salmuera (20 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron sobre Na2SO4 , se f¡ltraron y se concentraron. La pur¡f¡cac¡ón por cromatografía ¡nstantánea (S¡O2, 1/15 DCM/éter de petróleo) proporc¡onó (304) (200 mg, 71 % de rend¡m¡ento) como un sól¡do amar¡llo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 89,20 (s, 1H), 6,89 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,57 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3.62 (s, 2H), 2,79 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,55 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,78 - 1,67 (m, 1H), 0,53 - 0,43 (m, 2H), 0,42 - 0,33 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z 190 (M+H).
Ejemplos biológicos y procedimientos de ensayo bioquímicos
Ensayo de react¡v¡dad por espectrometría de masas (MSRA)
Los compuestos presentados en la presente ¡nvenc¡ón se unen covalentemente a KRAS G12C ut¡l¡zando MSRA para detectar un aducto covalente del compuesto ejemplar y KRAS G12C.
Los KRAS (1-169) G12C, C51S, C80L, C118S cargados con GDP se d¡luyeron en el tampón de ensayo de proteínas 25mM Hepes pH7,5, NaCl 200mM , 5 % gl¡cerol hasta una concentrac¡ón de 5 pM y se transf¡r¡eron 20 pl de proteína a una placa de 96 poc¡llos. Los l¡cores madre ¡n¡c¡ales de compuestos se generaron a concentrac¡ones 100 veces super¡ores a las concentrac¡ones deseadas para el ensayo. Véase que los inhibidores de K-Ras(G12C) controlan alostéricamente la afinidad por el GTP y las interacciones efectoras Ostrem JM, Peters U, Sos ML, Wells JA, Shokat KM; Nature. 2013, Nov 28; 503(7477):548-51.
Los compuestos ejemplares d¡sueltos en DMSO se d¡luyeron 100 veces en una soluc¡ón que contenía 20 pl de 5 pM de proteína KRAS en la placa de 96 poc¡llos para ¡n¡c¡ar la reacc¡ón. Se ut¡l¡zó el robot de man¡pulac¡ón de líqu¡dos Mosqu¡to (TPP Lab tech) para añad¡r los compuestos a la soluc¡ón de proteínas. La concentrac¡ón f¡nal típ¡ca de los compuestos era de 5 pM o 10 pM. Las placas se colocaron en un ag¡tador durante 1 m¡nuto a TA, se sellaron y se ¡ncubaron a temperatura amb¡ente durante el per¡odo de t¡empo espec¡f¡cado. Se añad¡eron 5 pl de mezcla de reacc¡ón a 10 pl de soluc¡ón de parada de ác¡do fórm¡co al 0,2 % y se mezclaron b¡en. Los puntos f¡nales típ¡cos fueron 1, 15, 30 y 60 m¡nutos.
Los datos se recog¡eron ut¡l¡zando el s¡stema UPLC clase H de Waters/espectrómetro de masas Xevo G2-XS TOF. La proteína se ¡nyectó en su fase líquida en una columna de proteínas Bruker M¡crotrap TR1/15109/03. Se ut¡l¡zaron los s¡gu¡entes tampones para establecer el grad¡ente de LC: Tampón A: 0,2 % de ác¡do fórm¡co H20 ; B: 0,2 % de ác¡do fórm¡co CAN. La proteína se elud¡ó de la columna ut¡l¡zando el s¡gu¡ente grad¡ente de LC: 0-0,4 m¡n, 10 % B a 30 % B; 0,4 m¡n 2,4 min, a 90 % B, 2,5 min, 10 % B, 3 min, 10 % B. El análisis inicial de los datos se realizó con el software MaxEnt justo después de la adquisición de datos.
La función estándar de auto procesamiento fue utilizada para definir el porcentaje de proteína KRAS no modificada y modificada utilizando el software MexEnt justo después de la adquisición de datos. El pico más alto se definió como el 100%, mientras que al pico más pequeño se le asignó el número definido por la función de autoprocesamiento. El porcentaje de modificación correspondiente a KRAS modificado con el compuesto ejemplar y KRAS no modificado cargado con GDP (1-169) G12C, C51S, C80L, C118S se exportó al software de análisis de datos Xcel.
El porcentaje de proteína modificada a la concentración definida del compuesto ejemplar se calculó mediante la siguiente fórmula: %mod =Número de picos modificados/ Suma de modificados+ no modificados. El valor resultante se define como Porcentaje de Modificación (PM) y un aumento en el PM refleja que el compuesto específico es mejor que otros compuestos a una concentración específica del compuesto en un punto de tiempo determinado.
Ensayo de actividad celular
Los compuestos presentados en la presente invención conducen a la acumulación del Ras unido a GDP tras el tratamiento de la línea celular de cáncer humano.
La acumulación del KRAS G12C unido a GDP en el entorno celular se midió basándose en el principio de que el KRAS G12C sólo se une a su quinasa descendente; Raf-1 (MAP Kinase Kinase), cuando está en su estado activo unido a GTP. En este estado, Ras se unía a un dominio de la quinasa Raf-1 denominado dominio de unión a Ras (RBD).
Las células MIAPaCa-2 se cultivaron en medio RPMI 1640 (Gibco 11875) suplementado con 10 % de suero bovino fetal y 1% de penicilina/estreptomicina. Las células se sembraron en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos a una densidad de 30.000 células/pocillo y se dejaron fijar durante 16-24 horas. Los compuestos de prueba se prepararon como un lico madre de 10mM en DMSO y se diluyeron en serie en 100 % DMSO utilizando un esquema de dilución triple. Se hizo una placa intermedia concentrada 5X en medio de crecimiento completo y se añadieron 25 pl/pocillo a los 100 pl de células para una concentración final de 0,3% de DMSO. Cada concentración del compuesto ejemplar se probó por duplicado. Los pocillos de control negativo eran células con inhibidor de control a 10 pM, y los pocillos de control positivo eran células sin fármacos, sólo DMSO. Las placas se incubaron durante 6 horas a 37°C, 5% de CO2. Tras el tratamiento, las células se lavaron 3 veces con PBS frío y 115 pl/pocillo de ensayo/lisis 1X frío. Se añadió un tampón con inhibidores de la proteasa (HEPES 25mM , pH 7,5, NaCl 150mM , NP-40 1 % , MgCh 10mM , EDTA 1mM , Glicerol 2 % ). Tras la lisis, las muestras se congelaron a -80 °C.
El Raf-1 RBD (LJIC-1988A1) se diluyó a 100 ng/pocillo en PBS y se recubrió con 5 pl/pocillo en placas MSD SECTOR de alta fijación (L15XB). Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora en un agitador orbital. Las placas se lavaron con PBS/Tween-200,05 % de y se añadieron 50 pl/pocillo de muestras de lisado descongeladas, seguidas de 50 pl de bloqueador A de MSD al 1 % en PBS/Tween-200,05 % (R93BA). Las placas se incubaron durante 1 hora en un agitador orbital y se lavaron con PBS/Tween-200,05 %. Se añadieron 25 pl/pocillo de anticuerpo antipan-Ras (Cell Biolabs 244003) diluido 1:3000 en una solución de MSD Blocker A al 1 % y las placas se incubaron durante 1 hora en un agitador orbital y se lavaron con PBS/Tween-20 0,05 %. El anticuerpo secundario antiratón de cabra SULFO-TAG (MSD R32AC) se diluyó 1:500 en la solución MSD Blocker A y se añadió a 25 pl/pocillo. Las placas se incubaron durante 1 hora en un agitador orbital y se lavaron con PBS/Tween-200,05 %. Se añadieron 150 pl/pocillo de tampón de lectura T (MSD R92TC) diluido 1:3 en H2O y las placas se leyeron en un Meso Scale Discovery Sector Imager S600.
La señal de KRAS se normalizó a los valores de inhibición máxima y de control de DMSO, y los valores de IC50 se generaron utilizando un ajuste de 4 parámetros de la curva de respuesta a la dosis. La disminución del IC50 refleja que el compuesto ejemplar conduce a un mayor nivel de acumulación de KRAS G12C unido a GDP que otros compuestos ejemplares en el punto de tiempo específico del tratamiento de la línea celular de cáncer.
Datos de la MSRA y del ensayo de actividad celular
Figure imgf000217_0001
(continuación)
Figure imgf000218_0001
(continuación)
Figure imgf000219_0001
(continuación)
Figure imgf000220_0001
(continuación)
Figure imgf000221_0001
(continuación)
Figure imgf000222_0001
(continuación)
Figure imgf000223_0001
(continuación)
Figure imgf000224_0001

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de la Fórmula (I):
    Figure imgf000225_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma en la que:
    A es -C(H)- o nitrógeno;
    B es oxígeno o C(R6)2;
    J es:
    Figure imgf000225_0002
    donde W* representa el punto de unión a W, y donde J está opcionalmente sustituido por 1 R2; K es:
    Figure imgf000225_0003
    o
    K es:
    donde K está opcionalmente sustituido con
    Figure imgf000225_0004
    W se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000226_0001
    cada R1 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , halógeno, haloalquilo C1-C6 , ciano y N(R6)2 ;
    R2 es alquilo C1-C6 ;
    cada R3 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , hidroxi, halógeno y haloalquilo C1-C6 ;
    R4 es -X-Y-Z donde:
    X está ausente o es oxígeno,
    Y está ausente o es un alquilenilo C1-C6, y
    Z se selecciona entre H, heterociclo con 3-12 átomos de anillo y cicloalquilo C3-C6,
    donde R4 está opcionalmente sustituido por R7;
    cada R6 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, hidroxilo, alcoxi C-i-Cay alquilo C1-C6 , o dos R6 se unen opcionalmente para formar un heterociclo que tiene 3-12 átomos de anillo o un cicloalquilo C3-C6 ;
    cada R7 es independientemente R7' o C1-C6 alquilo-R7', donde cada R7'se selecciona independientemente del grupo que consiste en: alquilo C1-C6 y -N(R6)2; y
    m es 0, 1,2 o 3.
    2. El compuesto o sal de la reivindicación 1, en el que K es:
    Figure imgf000226_0002
    3. El compuesto o sal de la reivindicación 1, en el que K se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000226_0003
    4. El compuesto o sal de la reivindicación 1, en el que K es:
    Figure imgf000227_0001
    5. El compuesto o la sal de la reivindicación 1,2 o 3, en el que W es:
    Figure imgf000227_0002
    6. El compuesto o sal de la reivindicación 1,2, 3, 4 o 5, en el que J se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000227_0003
    7. El compuesto o la sal de la reivindicación 1,2, 3, 4 o 5, en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000227_0004
    Figure imgf000228_0001
    9. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 que es de Fórmula (II):
    Figure imgf000229_0001
    en la que:
    n es 0, 1 o 2 y
    W es:
    Figure imgf000229_0002
    10. El compuesto o sal de la reivindicación 9, en el que:
    Figure imgf000229_0003
    se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000229_0004
    11. El co m p u e s to o sa l de la re iv ind ica c ión 9 o 10, en el que R4 se se le cc io n a de l g ru p o que co n s is te en:
    Figure imgf000230_0001
    12. El compuesto o sal de la reivindicación 10 u 11, en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000230_0002
    13. Un com p ue s to o una sal fa rm a cé u tica m e n te ace p tab le de l m ism o de acuerdo con la re iv ind icac ión 1 que es de Fórm ula (III):
    Figure imgf000231_0001
    en la que:
    n es 0, 1 o 2 y
    W es:
    Figure imgf000231_0002
    14. El compuesto o sal de la reivindicación 13, en el que
    Figure imgf000231_0003
    se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000231_0004
    15. El co m p u e s to o sa l de la re iv in d ica c ió n 13 o 14, en el que R4 se se le cc io n a de l g ru p o que con s is te en:
    Figure imgf000232_0001
    16. El compuesto o sal de la reivindicación 15, en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000232_0002
    17. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 que es de Fórmula (IV):
    Figure imgf000233_0001
    en la que:
    n es 0 , 1 o 2 y
    W es:
    Figure imgf000233_0002
    18. El compuesto o sal de la reivindicación 17, en el que:
    Figure imgf000233_0003
    se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000233_0004
    19. El co m p u e s to o sa l de la re iv ind ica c ión 17 o 18, en el que R4 se se le cc io n a de l g ru p o que con s is te en:
    Figure imgf000234_0001
    20. El compuesto o sal de la reivindicación 19, en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000234_0002
    21. Un co m p u e s to o una sal fa rm a cé u tica m e n te a ce p tab le de l m ism o de a cu e rd o con la re iv ind ica c ión 1 se le cc io n a d o de l g ru po que co n s is te en:
    Figure imgf000235_0001
    
    Figure imgf000236_0001
    
    Figure imgf000237_0001
    
    Figure imgf000238_0001
    
    Figure imgf000239_0001
    
    Figure imgf000240_0001
    Figure imgf000241_0001
    Figure imgf000242_0001
    Figure imgf000243_0001
    IJ43
    Figure imgf000244_0001
    IJ44
    Figure imgf000245_0001
    
    Figure imgf000246_0001
    
    Figure imgf000247_0001
    
    Figure imgf000248_0001
    
    Figure imgf000249_0001
    
    Figure imgf000250_0001
    Figure imgf000251_0001
    Figure imgf000252_0001
    Figure imgf000253_0001
    IJ53
    Figure imgf000254_0001
    22. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado del grupo que consiste en:
    Figure imgf000254_0002
    Figure imgf000255_0001
    IJ55
    Figure imgf000256_0001
    23. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-22, en el que uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen por átomos de deuterio.
    24. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-23 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
    25. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-23 o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, o composiciones farmacéuticas que contienen dicho compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la inhibición de la actividad de KRAS en una célula.
    26. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-23 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para usar en el tratamiento del crecimiento celular anormal en un mamífero.
    27. El compuesto para su uso de la reivindicación 26, en el que el crecimiento celular anormal es cáncer.
    28. El compuesto para su uso de la reivindicación 27, en el que el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de huesos, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de recto, cáncer de la región anal , cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cuello uterino, carcinoma de vagina, carcinoma de vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de pelvis renal, neoplasias del sistema nervioso central (SNC), linfoma primario del SNC, tumores del eje espinal, glioma del tronco encefálico, o adenoma hipofisario.
    29. El compuesto para su uso de la reivindicación 27, en el que el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas y cáncer de ovario.
    30. El compuesto para su uso de la reivindicación 27, en el que el cáncer está asociado a una mutación KRAS.
    31. El compuesto para su uso de la reivindicación 30, en el que dicha mutación es una mutación G12C.
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