ES2869703T3 - Method for extracting nucleic acid and extraction cassette thereof. - Google Patents
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Abstract
Casete (C) de extracción para extraer ácido nucleico de un líquido (286) mixto que incluye una muestra (285), que comprende: un módulo (2) de recepción de líquido para recibir la muestra (285) y alcohol (281) y para mezclar la muestra (285) con el alcohol (281) para generar el líquido (286) mixto; y un módulo (1) de extracción para capturar el ácido nucleico del líquido (286) mixto; en el que el módulo (2) de recepción de líquido se comunica con el módulo (1) de extracción, y el módulo (2) de recepción de líquido comprende un cuerpo (29) de módulo de recepción que tiene un primer lado (291), un segundo lado (292) opuesto al primer lado (291) y un orificio (212) de alimentación de muestra formado en el primer lado (291); en el que el cuerpo (29) de módulo de recepción comprende: un compartimento (21) de muestra formado en el cuerpo (29) de módulo de recepción y configurado para recibir la muestra (285), en el que el compartimento (21) de muestra se comunica con el orificio (212) de alimentación de muestra, y un compartimento (22) de alcohol, formado en el cuerpo (29) de módulo de recepción y configurado para recibir el alcohol (281), en el que el compartimento (22) de alcohol se comunica con el primer compartimento (21) de muestra a través de una primera trayectoria (221); caracterizado porque el módulo (2) de recepción de líquido comprende además un elemento (211) de sellado adaptado para sellar el orificio (212) de alimentación de muestra, en el que el compartimento (21) de muestra comprende un primer orificio (213) de conexión de compartimento de muestra y un segundo orificio (214) de conexión de compartimento de muestra para conectar el módulo (1) de extracción, el primer orificio (213) de conexión de compartimento de muestra está próximo al primer lado (291) en relación con el segundo lado (292), el compartimento (22) de alcohol comprende un orificio (222) de conexión de compartimento de alcohol que está próximo al segundo lado (292) en relación con el primer lado (291), la primera trayectoria (221) conecta el orificio (222) de conexión de compartimento de alcohol al primer orificio (213) de conexión de compartimento de muestra para transferir el alcohol (281) desde el compartimento (22) de alcohol hacia el compartimento (21) de muestra, y al menos una parte de la primera trayectoria (221) está ubicada entre el compartimento (22) de alcohol y el segundo lado (292).Extraction cassette (C) for extracting nucleic acid from a mixed liquid (286) including a sample (285), comprising: a liquid receiving module (2) for receiving the sample (285) and alcohol (281) and to mix the sample (285) with the alcohol (281) to generate the mixed liquid (286); and an extraction module (1) for capturing nucleic acid from the mixed liquid (286); wherein the liquid receiving module (2) communicates with the extraction module (1), and the liquid receiving module (2) comprises a receiving module body (29) having a first side (291 ), a second side (292) opposite the first side (291), and a sample feed port (212) formed in the first side (291); wherein the receiving module body (29) comprises: a sample compartment (21) formed in the receiving module body (29) and configured to receive the sample (285), wherein the compartment (21) The sample compartment communicates with the sample feed port (212), and an alcohol compartment (22), formed in the receiving module body (29) and configured to receive the alcohol (281), in which the compartment alcohol (22) communicates with the first sample compartment (21) through a first path (221); characterized in that the liquid receiving module (2) further comprises a sealing element (211) adapted to seal the sample feed port (212), wherein the sample compartment (21) comprises a first port (213) compartment connection hole and a second sample compartment connection hole (214) for connecting the extraction module (1), the first sample compartment connection hole (213) is close to the first side (291) in relative to the second side (292), the alcohol compartment (22) comprises an alcohol compartment connection port (222) that is proximate to the second side (292) relative to the first side (291), the first path (221) connects the alcohol compartment connection port (222) to the first sample compartment connection port (213) to transfer the alcohol (281) from the alcohol compartment (22) to the sample compartment (21) , and at least s a part of the first path (221) is located between the alcohol compartment (22) and the second side (292).
Description
DESCRIPCIÓNDESCRIPTION
Método para extraer ácido nucleico y casete de extracción del mismoMethod for extracting nucleic acid and extraction cassette from it
Antecedentes de la invenciónBackground of the invention
Campo de la invenciónField of the invention
La presente invención se refiere a un casete de extracción con un módulo de recepción de líquido, y a un método para extraer ácido nucleico de una muestra.The present invention relates to an extraction cassette with a liquid receiving module, and to a method for extracting nucleic acid from a sample.
Descripción de la técnica relacionadaDescription of Related Art
En un módulo de recepción de líquido convencional, el compartimento de muestra normalmente tiene una abertura de suministro de presión conectada a una fuente de presión. El movimiento del líquido dentro del compartimento de muestra puede controlarse por la presión suministrada a través de la abertura de suministro de presión. Sin embargo, la muestra a menudo contiene virus, bacterias u otros contaminantes, y los contaminantes pueden desplazarse al analizador o al entorno exterior a través de la abertura de suministro de presión. Tales contaminantes no solo producen resultados de prueba inexactos, sino que también ponen en peligro la salud del operario.In a conventional liquid receiving module, the sample compartment typically has a pressure supply port connected to a pressure source. The movement of the liquid within the sample compartment can be controlled by the pressure supplied through the pressure supply port. However, the sample often contains viruses, bacteria, or other contaminants, and contaminants can travel to the analyzer or to the outside environment through the pressure supply port. Such contaminants not only produce inaccurate test results, but also endanger the health of the operator.
El documento US 2017/015993 A1 da a conocer un casete de extracción para extraer ácido nucleico de un líquido mixto que incluye una muestra según el preámbulo de la reivindicación 1. El casete de extracción comprende un módulo de recepción de líquido con varios compartimentos para recibir la muestra y líquidos y un módulo de conexión para establecer determinadas rutas de flujo de líquido para conducir la muestra que va a someterse a prueba y los líquidos. La muestra se carga en el depósito de muestra proporcionado en un módulo inferior. Para extraer el ácido nucleico, se introduce aire externo en el módulo inferior a través de orificios de aire en una membrana inferior mediante una bomba de aire. Los canales en el módulo inferior se comunican con canales correspondientes en un módulo superior, y por tanto los líquidos, incluyendo el material de muestra, se transfieren a través de los canales proporcionados en la superficie superior del módulo superior. La muestra debe cargarse en el depósito de muestra en el módulo inferior, mientras que el módulo inferior y el módulo superior aún no están ensamblados entre sí. No se proporciona ningún sellante que selle un orificio de llenado del depósito de muestra. Más bien, el depósito de muestra está abierto en su extremo superior. La comunicación entre las cámaras de recepción de líquido/muestra en el módulo inferior se logra solo a través de los canales en el módulo superior. No se proporcionan orificios de conexión ni rutas de fluido en el módulo inferior.Document US 2017/015993 A1 discloses an extraction cassette for extracting nucleic acid from a mixed liquid including a sample according to the preamble of claim 1. The extraction cassette comprises a liquid receiving module with several compartments for receiving the sample and liquids and a connection module to establish certain liquid flow paths to lead the sample to be tested and the liquids. The sample is loaded into the sample tank provided in a lower module. To extract nucleic acid, external air is introduced into the lower module through air holes in a lower membrane by an air pump. Channels in the lower module communicate with corresponding channels in an upper module, and therefore liquids, including sample material, are transferred through channels provided on the upper surface of the upper module. The sample needs to be loaded into the sample reservoir in the lower module, while the lower module and the upper module are not yet assembled together. No sealant is provided that will seal a fill hole of the sample reservoir. Rather, the sample reservoir is open at its upper end. Communication between the liquid / sample receiving chambers in the lower module is achieved only through the channels in the upper module. No connection holes or fluid paths are provided in the lower module.
El documento US 2015/024436 A1 da a conocer un sistema integrado y automatizado de muestra-respuesta que, partiendo de una muestra que comprende material biológico, genera un perfil genético en un tiempo corto. El dispositivo puede usarse para extraer ácido nucleico y comprende varios módulos integrados, incluyendo un módulo de preparación de analito; un módulo de detección y análisis y un módulo de control. El módulo de preparación de analito tiene una configuración diferente.Document US 2015/024436 A1 discloses an integrated and automated sample-response system that, starting from a sample comprising biological material, generates a genetic profile in a short time. The device can be used to extract nucleic acid and comprises several integrated modules, including an analyte preparation module; a detection and analysis module and a control module. The analyte preparation module has a different configuration.
Los documentos US 2006/019379 A1 y WO 2005/121963 A2 dan a conocer dispositivos similares para extraer ácido nucleico de configuración diferente.US 2006/019379 A1 and WO 2005/121963 A2 disclose similar devices for extracting nucleic acid of different configuration.
Breve sumario de la invenciónBrief summary of the invention
Un objeto de la presente invención es proporcionar un casete de extracción potenciado, particularmente para su uso en un método para extraer ácidos nucleicos, que permita en particular restringir el área contaminada por la muestra al entorno dentro de o alrededor del analizador, mejorar la precisión del resultado del análisis y/o proteger la salud del operario. Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un método potenciado correspondiente para extraer ácido nucleico.An object of the present invention is to provide an enhanced extraction cassette, particularly for use in a method for extracting nucleic acids, which allows in particular to restrict the area contaminated by the sample to the environment within or around the analyzer, improve the precision of the result of the analysis and / or protect the health of the operator. A further object of the present invention is to provide a corresponding enhanced method for extracting nucleic acid.
Estos problemas se resuelven mediante un casete de extracción según la reivindicación 1, y mediante un método para extraer ácidos nucleicos según la reivindicación 6. Realizaciones ventajosas adicionales constituyen el contenido de las reivindicaciones dependientes.These problems are solved by an extraction cassette according to claim 1, and by a method for extracting nucleic acids according to claim 6. Further advantageous embodiments constitute the content of the dependent claims.
Utilizando el casete de extracción de la realización de la presente invención, el orificio de alimentación de muestra del compartimento de muestra se sella mediante el elemento de sellado. El líquido mixto dentro del compartimento de muestra se desplaza hacia el primer compartimento de mezclado mediante la presión aplicada al compartimento de alcohol. Por tanto, se impide que el virus, las bacterias y otros contaminantes de la muestra en el compartimento de muestra se escapen del módulo de recepción de líquido. Aunque los contaminantes de la muestra entren en el compartimento de alcohol a través del primer orificio de conexión del compartimento de muestra (por encima del compartimento de muestra) y la primera trayectoria, los contaminantes se desinfectan mediante el compartimento de alcohol y no pueden producir contaminación. El casete de extracción de la realización de la presente invención puede restringir el área contaminada por la muestra al entorno dentro de o alrededor del analizador, mejorar la precisión del resultado del análisis y proteger la salud del operario.Using the extraction cassette of the embodiment of the present invention, the sample feed port of the sample compartment is sealed by the sealing member. The mixed liquid within the sample compartment is moved into the first mixing compartment by pressure applied to the alcohol compartment. Thus, virus, bacteria and other contaminants in the sample in the sample compartment are prevented from escaping from the liquid receiving module. Although contaminants in the sample enter the alcohol compartment through the first connection hole of the sample compartment (above the sample compartment) and the first path, the contaminants are disinfected by the alcohol compartment and cannot cause contamination . The extraction cassette of the embodiment of the present invention can restrict the area contaminated by the sample to the environment in or around the analyzer, improve the accuracy of the analysis result, and protect the health of the operator.
En las siguientes realizaciones se facilita una descripción detallada con referencia a los dibujos adjuntos. In the following embodiments, a detailed description is given with reference to the accompanying drawings.
Breve descripción de los dibujosBrief description of the drawings
La presente invención puede entenderse más completamente leyendo la descripción detallada posterior y ejemplos con referencias realizadas a los dibujos adjuntos, en los que:The present invention can be more fully understood by reading the following detailed description and examples with references made to the accompanying drawings, in which:
la figura 1A es una vista ensamblada de un casete de extracción de una realización de la presente invención;Figure 1A is an assembled view of an extraction cassette of one embodiment of the present invention;
la figura 1B es una vista en despiece ordenado del casete de extracción de la realización de la presente invención; la figura 2A es un detalle del módulo de recepción de líquido de la realización de la presente invención;Figure 1B is an exploded view of the extraction cassette of the embodiment of the present invention; Figure 2A is a detail of the liquid receiving module of the embodiment of the present invention;
la figura 2B es un detalle de la tercera trayectoria de la realización de la presente invención;Figure 2B is a detail of the third path of the embodiment of the present invention;
las figuras 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, 3F, 3G, 3H y 3I muestran el funcionamiento del módulo de recepción de líquido de la realización de la presente invención; yFigures 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, 3F, 3G, 3H and 3I show the operation of the liquid receiving module of the embodiment of the present invention; and
las figuras 4A, 4B y 4C muestran un método para extraer ácido nucleico de la realización de la presente invención. Descripción detallada de la invención Figures 4A, 4B and 4C show a method for extracting nucleic acid of the embodiment of the present invention. Detailed description of the invention
La siguiente descripción es del modo mejor contemplado de llevar a cabo la presente invención. Esta descripción se realiza para el fin de ilustrar los principios generales de la presente invención y no debe considerarse en un sentido limitativo. El alcance de la presente invención se determina mejor haciendo referencia a las reivindicaciones adjuntas. La figura 1A es una vista ensamblada de un casete C de extracción de una realización de la presente invención. La figura 1B es una vista en despiece ordenado del casete C de extracción de la realización de la presente invención. Con referencia a las figuras 1A y 1B, el casete C de extracción incluye un módulo 1 de extracción, un módulo 2 de recepción de líquido, un módulo 3 de toma de muestras y un módulo 4 de conexión. El casete C de extracción está adaptado para disponerse en un analizador. El analizador incluye un primer módulo de suministro de presión, un módulo de análisis y un segundo módulo de suministro de presión. El primer módulo de suministro de presión y el segundo módulo de suministro de presión proporcionan presión hacia el casete C de extracción para controlar el movimiento del líquido dentro del casete C de extracción. El módulo de análisis calienta y enfría el casete C de extracción, y analiza la muestra dentro del casete C de extracción.The following description is of the best contemplated mode of carrying out the present invention. This description is made for the purpose of illustrating the general principles of the present invention and should not be considered in a limiting sense. The scope of the present invention is best determined by reference to the appended claims. Figure 1A is an assembled view of an extraction cassette C of one embodiment of the present invention. Fig. 1B is an exploded view of the extraction cassette C of the embodiment of the present invention. With reference to Figures 1A and 1B, the extraction cassette C includes an extraction module 1, a liquid receiving module 2, a sampling module 3 and a connection module 4. The extraction cassette C is adapted to be arranged in an analyzer. The analyzer includes a first pressure supply module, an analysis module, and a second pressure supply module. The first pressure supply module and the second pressure supply module provide pressure to the extraction cassette C to control the movement of the liquid within the extraction cassette C. The analysis module heats and cools the extraction cassette C, and analyzes the sample within the extraction cassette C.
Con referencia a la figura 1B, el módulo 2 de recepción de líquido se comunica con el módulo 1 de extracción a través del módulo 4 de conexión. Los compartimentos del módulo 2 de recepción de líquido se comunican entre sí a través del módulo 4 de conexión. La figura 2A es un detalle del módulo 2 de recepción de líquido. Con referencia a la figura 2A, el módulo 2 de recepción de líquido incluye un cuerpo 29 de módulo de recepción, un compartimento 21 de muestra, un elemento 211 de sellado, un compartimento 22 de alcohol y una primera trayectoria 221. El cuerpo 29 de módulo de recepción incluye un primer lado 291, un segundo lado 292 y un orificio 212 de alimentación de muestra. El primer lado 291 es opuesto al segundo lado 292. El orificio 212 de alimentación de muestra está formado en el primer lado 291. El compartimento 21 de muestra está formado en el cuerpo 29 de módulo de recepción. El compartimento 21 de muestra se comunica con el orificio 212 de alimentación de muestra. El compartimento 21 de muestra incluye un primer orificio 213 de conexión de compartimento de muestra y un segundo orificio 214 de conexión de compartimento de muestra. El primer orificio 213 de conexión de compartimento de muestra está próximo al primer lado 291 en relación con el segundo lado 292. El elemento 211 de sellado está adaptado para sellar el orificio 212 de alimentación de muestra. El compartimento 22 de alcohol está formado en el cuerpo 29 de módulo de recepción. El compartimento 22 de alcohol se comunica con el primer orificio 213 de conexión de compartimento de muestra del primer compartimento 21 de muestra a través de la primera trayectoria 221. En una realización, al menos una parte de la primera trayectoria 221 está ubicada entre el compartimento 22 de alcohol y el segundo lado 292.With reference to Figure 1B, the liquid receiving module 2 communicates with the extraction module 1 through the connection module 4. The compartments of the liquid receiving module 2 communicate with each other through the connection module 4. Figure 2A is a detail of the liquid receiving module 2. Referring to FIG. 2A, the liquid receiving module 2 includes a receiving module body 29, a sample compartment 21, a sealing element 211, an alcohol compartment 22, and a first path 221. The body 29 of Receiving module includes a first side 291, a second side 292, and a sample feed port 212. The first side 291 is opposite the second side 292. The sample feeding port 212 is formed in the first side 291. The sample compartment 21 is formed in the receiving module body 29. Sample compartment 21 communicates with sample feed port 212. The sample compartment 21 includes a first sample compartment connection hole 213 and a second sample compartment connection hole 214. The first sample compartment connection hole 213 is proximal to the first side 291 relative to the second side 292. The sealing element 211 is adapted to seal the sample feed hole 212. The alcohol compartment 22 is formed in the receiving module body 29. The alcohol compartment 22 communicates with the first sample compartment connection hole 213 of the first sample compartment 21 through the first path 221. In one embodiment, at least a portion of the first path 221 is located between the compartment. 22 alcohol and the second side 292.
Con referencia a la figura 2A, en una realización, el compartimento 22 de alcohol incluye un orificio 222 de conexión de compartimento de alcohol. El orificio 222 de conexión de compartimento de alcohol está próximo al segundo lado 292 en relación con el primer lado 291. La primera trayectoria 221 conecta el orificio 222 de conexión de compartimento de alcohol al primer orificio 213 de conexión de compartimento de muestra.Referring to FIG. 2A, in one embodiment, the alcohol compartment 22 includes an alcohol compartment connection port 222. The alcohol compartment connection hole 222 is proximate to the second side 292 relative to the first side 291. The first path 221 connects the alcohol compartment connection hole 222 to the first sample compartment connection hole 213.
Con referencia a la figura 2A, en una realización, el módulo 2 de recepción de líquido incluye además un primer compartimento 23 de mezclado y una segunda trayectoria 231. El primer compartimento 23 de mezclado está formado en el cuerpo 29 de módulo de recepción. El segundo orificio 214 de conexión de compartimento de muestra está próximo al segundo lado 292 en relación con el primer lado 291. La segunda trayectoria 231 conecta el segundo orificio 214 de conexión de compartimento de muestra al primer compartimento 23 de mezclado.Referring to Figure 2A, in one embodiment, the liquid receiving module 2 further includes a first mixing compartment 23 and a second path 231. The first mixing compartment 23 is formed in the receiving module body 29. The second sample compartment connection hole 214 is proximate to the second side 292 relative to the first side 291. The second path 231 connects the second sample compartment connection hole 214 to the first mixing compartment 23.
Con referencia a las figuras 2A y 2B, en una realización, el módulo 2 de recepción de líquido incluye además un segundo compartimento 24 de mezclado, una tercera trayectoria 241 y una cuarta trayectoria 242. El segundo compartimento 24 de mezclado está formado en el cuerpo 29 de módulo de recepción. La tercera trayectoria 241 conecta el primer compartimento 23 de mezclado al segundo compartimento 24 de mezclado. La cuarta trayectoria 242 conecta el segundo compartimento 24 de mezclado al módulo 1 de extracción. En una realización, la tercera trayectoria 241 conecta el primer compartimento 23 de mezclado al fondo del segundo compartimento 24 de mezclado. Referring to Figures 2A and 2B, in one embodiment, the liquid receiving module 2 further includes a second mixing compartment 24, a third path 241, and a fourth path 242. The second mixing compartment 24 is formed in the body. 29 of reception module. The third path 241 connects the first mixing compartment 23 to the second mixing compartment 24. The fourth path 242 connects the second mixing compartment 24 to the extraction module 1. In one embodiment, the third path 241 connects the first mixing compartment 23 to the bottom of the second mixing compartment 24.
Con referencia a la figura 2A, en una realización, el módulo 2 de recepción de líquido incluye además un primer compartimento 25 de detergente, un segundo compartimento 26 de detergente, una quinta trayectoria 251 y una sexta trayectoria 261. El primer compartimento 25 de detergente y el segundo compartimento 26 de detergente están formados en el cuerpo 29 de módulo de recepción. La quinta trayectoria 251 conecta el primer compartimento 25 de detergente al primer compartimento 23 de mezclado. La sexta trayectoria 261 conecta el segundo compartimento 26 de detergente al primer compartimento 23 de mezclado.Referring to Figure 2A, in one embodiment, the liquid receiving module 2 further includes a first detergent compartment 25, a second detergent compartment 26, a fifth path 251, and a sixth path 261. The first detergent compartment 25 and the second detergent compartment 26 are formed in the receiving module body 29. The fifth path 251 connects the first detergent compartment 25 to the first mixing compartment 23. The sixth path 261 connects the second detergent compartment 26 to the first mixing compartment 23.
Con referencia a la figura 2A, en una realización, el módulo de recepción de líquido incluye además un compartimento 27 de eluyente y una séptima trayectoria 271. El compartimento 27 de eluyente está formado en el cuerpo 29 de módulo de recepción, y la séptima trayectoria 271 conecta el compartimento 27 de eluyente al módulo 1 de extracción.Referring to Figure 2A, in one embodiment, the liquid receiving module further includes an eluent compartment 27 and a seventh path 271. The eluent compartment 27 is formed in the receiving module body 29, and the seventh path 271 connects eluent compartment 27 to extraction module 1.
Las figuras 3A-3I muestran el funcionamiento del módulo 2 de recepción de líquido de la realización de la presente invención. Con referencia a la figura 3A, en primer lugar, el módulo 2 de recepción de líquido recibe cuatro líquidos, que son el alcohol 281 (en el compartimento 22 de alcohol), el primer detergente 282 (en el primer compartimento 25 de detergente), el segundo detergente 283 (en el segundo compartimento 26 de detergente) y el eluyente 284 (en el compartimento 27 de eluyente). A continuación, con referencia a la figura 3B, se llena con la muestra 285 el compartimento 21 de muestra. Una vez que el casete C de extracción está dispuesto en el módulo de análisis del analizador, la temperatura de la muestra 285 en el compartimento 21 de muestra se eleva hasta 60 grados Celsius (60°C). Entonces, con referencia a la figura 3C, una vez que la temperatura de la muestra 285 en el compartimento 21 de muestra se eleva hasta 60 grados Celsius (60°C), el alcohol 281 se desplaza desde el compartimento 22 de alcohol hacia el compartimento 21 de muestra, en el que la muestra 285 y el alcohol 281 se mezclan para dar un líquido 286 mixto en el compartimento 21 de muestra. A continuación, con referencia a las figuras 3D y 3E, el líquido 286 mixto con la muestra 285 y el alcohol 281 se desplaza desde el compartimento 21 de muestra hacia el primer compartimento 23 de mezclado (figura 3D). Entonces, el líquido 286 mixto se desplaza entre el primer compartimento 23 de mezclado y el segundo compartimento 24 de mezclado repetidamente para mezclar la muestra 285 y el alcohol 281 (figura 3E).Figures 3A-3I show the operation of the liquid receiving module 2 of the embodiment of the present invention. With reference to Figure 3A, firstly, the liquid receiving module 2 receives four liquids, which are the alcohol 281 (in the alcohol compartment 22), the first detergent 282 (in the first detergent compartment 25), the second detergent 283 (in the second detergent compartment 26) and the eluent 284 (in the eluent compartment 27). Next, referring to FIG. 3B, the sample compartment 21 is filled with sample 285. Once the extraction cassette C is arranged in the analysis module of the analyzer, the temperature of sample 285 in sample compartment 21 rises to 60 degrees Celsius (60 ° C). Then, referring to Figure 3C, once the temperature of sample 285 in sample compartment 21 rises to 60 degrees Celsius (60 ° C), alcohol 281 moves from alcohol compartment 22 into compartment Sample 21, wherein sample 285 and alcohol 281 are mixed to give a mixed liquid 286 in sample compartment 21. Next, referring to Figures 3D and 3E, liquid 286 mixed with sample 285 and alcohol 281 moves from sample compartment 21 into first mixing compartment 23 (Figure 3D). Then, the mixed liquid 286 moves between the first mixing compartment 23 and the second mixing compartment 24 repeatedly to mix the sample 285 and the alcohol 281 (FIG. 3E).
En una realización, el líquido 286 mixto con la muestra 285 y el alcohol 281 se desplazan hacia el módulo 1 de extracción y el ácido nucleico se captura del líquido 286 mixto por el módulo 1 de extracción. Entonces, el líquido 286 mixto se desplaza hacia un primer compartimento de líquido de desecho del módulo 1 de extracción.In one embodiment, liquid 286 mixed with sample 285 and alcohol 281 is moved into extraction module 1 and nucleic acid is captured from mixed liquid 286 by extraction module 1. Then, the mixed liquid 286 moves into a first waste liquid compartment of the extraction module 1.
Con referencia a las figuras 3F y 3G, a continuación, el primer detergente 282 se desplaza progresivamente desde el primer compartimento 25 de detergente hacia el primer compartimento 23 de mezclado y el segundo compartimento 24 de mezclado para limpiar el primer compartimento 23 de mezclado y el segundo compartimento 24 de mezclado. Entonces, el primer detergente 282 se desplaza hacia el módulo 1 de extracción para limpiar el módulo 1 de extracción. A continuación, el primer detergente 282 se desplaza hacia el primer compartimento de líquido de desecho del módulo 1 de extracción.Referring to Figures 3F and 3G, below, the first detergent 282 progressively moves from the first detergent compartment 25 towards the first mixing compartment 23 and the second mixing compartment 24 to clean the first mixing compartment 23 and the second mixing compartment 24. Then, the first detergent 282 moves towards the extraction module 1 to clean the extraction module 1. Next, the first detergent 282 moves into the first waste liquid compartment of the extraction module 1.
Entonces, con referencia a las figuras 3H y 3I, el segundo detergente 283 se desplaza progresivamente desde el segundo compartimento 26 de detergente hacia el primer compartimento 23 de mezclado y el segundo compartimento 24 de mezclado para limpiar el primer compartimento 23 de mezclado y el segundo compartimento 24 de mezclado. Entonces, el segundo detergente 283 se desplaza hacia el módulo 1 de extracción para limpiar el módulo 1 de extracción. A continuación, al menos una parte del segundo detergente 283 se desplaza hacia un segundo compartimento de líquido de desecho del módulo 1 de extracción.Then, referring to Figures 3H and 3I, the second detergent 283 progressively moves from the second detergent compartment 26 towards the first mixing compartment 23 and the second mixing compartment 24 to clean the first mixing compartment 23 and the second mixing compartment 24. Then, the second detergent 283 moves towards the extraction module 1 to clean the extraction module 1. Next, at least a portion of the second detergent 283 moves into a second waste liquid compartment of the extraction module 1.
Finalmente, el eluyente 284 va desde el compartimento 27 de eluyente hacia el módulo 1 de extracción para extraer el ácido nucleico del módulo 1 de extracción. El eluyente 284 con el ácido nucleico se desplaza entonces hacia el módulo 3 de toma de muestras para que se tomen muestras cuantitativamente.Finally, eluent 284 goes from eluent compartment 27 to extraction module 1 to extract nucleic acid from extraction module 1. The eluent 284 with the nucleic acid is then moved to the sampling module 3 for quantitative samples to be taken.
Utilizando el casete de extracción de la realización de la presente invención, con referencia a las figuras 2A y 3B, el orificio 212 de alimentación de muestra del compartimento 21 de muestra se sella mediante el elemento 211 de sellado. El líquido 286 mixto dentro del compartimento 21 de muestra se desplaza hacia el primer compartimento 23 de mezclado por la presión aplicada al compartimento 22 de alcohol. Por tanto, se impide que el virus, las bacterias y otros contaminantes de la muestra 285 en el compartimento 21 de muestra se escapen del módulo de recepción de líquido. Aunque los contaminantes de la muestra 285 entren en el compartimento 22 de alcohol a través del primer orificio de conexión de compartimento de muestra (por encima del compartimento 21 de muestra) y la primera trayectoria 221, los contaminantes se desinfectan mediante el compartimento 22 de alcohol y no pueden producir contaminación. El casete de extracción de la realización de la presente invención puede restringir el área contaminada por la muestra 285 al entorno dentro de o alrededor del analizador, mejorar la precisión del resultado del análisis y proteger la salud del operario.Using the extraction cassette of the embodiment of the present invention, referring to Figures 2A and 3B, the sample feed port 212 of the sample compartment 21 is sealed by the sealing element 211. Mixed liquid 286 within sample compartment 21 is displaced into first mixing compartment 23 by pressure applied to alcohol compartment 22. Thus, virus, bacteria, and other contaminants from sample 285 in sample compartment 21 are prevented from escaping from the liquid receiving module. Although contaminants from sample 285 enter alcohol compartment 22 through the first sample compartment connection hole (above sample compartment 21) and first path 221, the contaminants are disinfected by alcohol compartment 22 and they cannot produce contamination. The extraction cassette of the embodiment of the present invention can restrict the area contaminated by the sample 285 to the environment within or around the analyzer, improve the accuracy of the analysis result, and protect the health of the operator.
Con referencia a las figuras 2A, 3D y 3E, utilizando los casetes de extracción de la realización de la presente invención, el líquido 286 mixto puede desplazarse hacia delante y hacia atrás entre la primera cámara 23 de mezclado y la segunda cámara 24 de mezclado a través de la tercera trayectoria 241. El líquido 286 mixto se mezcla completamente, por lo que puede lograrse el efecto de mezclar suficientemente el líquido 286 mixto con un espacio mínimo. En una realización, la cuarta trayectoria 242 tiene una salida 242A de cuarta trayectoria que está más alta que la parte superior de la primera cámara 23 de mezclado y la segunda cámara 24 de mezclado. La salida 242A de cuarta trayectoria está más alta que el nivel de líquido del líquido 286 mixto. Por tanto, se impide que el líquido 286 mixto entre en el módulo 1 de extracción involuntariamente a través de la salida 242A de cuarta trayectoria.Referring to Figures 2A, 3D, and 3E, using the extraction cassettes of the embodiment of the present invention, the mixed liquid 286 can travel back and forth between the first mixing chamber 23 and the second mixing chamber 24 to through the third path 241. The mixed liquid 286 is thoroughly mixed, whereby the effect of sufficiently mixing the mixed liquid 286 with minimal space can be achieved. In one embodiment, the fourth path 242 has a fourth path outlet 242A that is higher than the top of the first mixing chamber 23 and the second mixing chamber 24. Fourth path output 242A is higher than the liquid level of mixed liquid 286. Therefore, the mixed liquid 286 is prevented from entering the extraction module 1 unintentionally through the fourth path outlet 242A.
Con referencia a la figura 2A, el módulo 2 de recepción de líquido puede estar formado de manera solidaria, excepto el elemento 211 de sellado.With reference to Figure 2A, the liquid receiving module 2 may be integrally formed, except for the sealing element 211.
Las figuras 4A-4C muestran un método para extraer ácido nucleico de una realización de la presente invención. Con referencia a la figura 4A, el método para extraer ácido nucleico de la realización de la presente invención incluye las siguientes etapas. En primer lugar, se proporciona un casete de extracción en el que el casete de extracción incluye un módulo de recepción de líquido y un módulo de extracción, el módulo de extracción se comunica con el módulo de recepción de líquido, el módulo de recepción de líquido incluye un compartimento de muestra, un compartimento de alcohol, un primer compartimento de mezclado, un segundo compartimento de mezclado, un primer compartimento de detergente, un segundo compartimento de detergente y un compartimento de eluyente (S11). Entonces, se llena con un alcohol el compartimento de alcohol, se llena con un primer detergente el primer compartimento de detergente, se llena con un segundo detergente el segundo compartimento de detergente y se llena con un eluyente el compartimento de eluyente (S12). A continuación, se llena con una muestra el compartimento de muestra (S13). Entonces, se calienta la muestra dentro del compartimento de muestra (S14).Figures 4A-4C show a method for extracting nucleic acid of one embodiment of the present invention. Referring to Figure 4A, the method for extracting nucleic acid in the embodiment of the present invention includes the following steps. First, an extraction cassette is provided in which the extraction cassette includes a liquid receiving module and an extraction module, the extraction module communicates with the liquid receiving module, the liquid receiving module includes a sample compartment, an alcohol compartment, a first mixing compartment, a second mixing compartment, a first detergent compartment, a second detergent compartment, and an eluent compartment (S11). Then, the alcohol compartment is filled with an alcohol, the first detergent compartment is filled with a first detergent, the second detergent compartment is filled with a second detergent, and the eluent compartment (S12) is filled with an eluent. Next, the sample compartment (S13) is filled with a sample. Then, the sample is heated inside the sample compartment (S14).
Con referencia a la figura 4B, en una realización, el método incluye además las siguientes etapas. El alcohol se desplaza desde el compartimento de alcohol hacia el compartimento de muestra, en el que la muestra y el alcohol se mezclan para dar un líquido mixto (S15). A continuación, el líquido mixto se desplaza hacia el primer compartimento de mezclado, y entonces el líquido mixto se desplaza entre el primer compartimento de mezclado y el segundo compartimento de mezclado repetidamente para mezclar la muestra y el alcohol (S16). A continuación, el líquido mixto se desplaza hacia el módulo de extracción y el ácido nucleico se captura del líquido mixto por el módulo de extracción (S17). Entonces, el líquido mixto se desplaza hacia un primer compartimento de líquido de desecho del módulo de extracción (S18).Referring to Figure 4B, in one embodiment, the method further includes the following steps. Alcohol travels from the alcohol compartment to the sample compartment, where the sample and alcohol are mixed to give a mixed liquid (S15). Next, the mixed liquid moves into the first mixing compartment, and then the mixed liquid moves between the first mixing compartment and the second mixing compartment repeatedly to mix the sample and the alcohol (S16). The mixed liquid is then moved to the extraction module and the nucleic acid is captured from the mixed liquid by the extraction module (S17). Then, the mixed liquid moves into a first waste liquid compartment of the extraction module (S18).
Con referencia a la figura 4C, en una realización, el método incluye además las siguientes etapas. El primer detergente se desplaza progresivamente desde el primer compartimento de detergente hacia el primer compartimento de mezclado y el segundo compartimento de mezclado para limpiar el primer compartimento de mezclado y el segundo compartimento de mezclado (S21). Entonces, el primer detergente se desplaza hacia el módulo de extracción para limpiar el módulo de extracción (S22). A continuación, el primer detergente se desplaza hacia el primer compartimento de líquido de desecho del módulo de extracción (S23). Entonces, el segundo detergente se desplaza progresivamente desde el segundo compartimento de detergente hacia el primer compartimento de mezclado y el segundo compartimento de mezclado para limpiar el primer compartimento de mezclado y el segundo compartimento de mezclado (S24). Entonces, el segundo detergente se desplaza hacia el módulo de extracción para limpiar el módulo de extracción (S25). A continuación, al menos una parte del segundo detergente se desplaza hacia un segundo compartimento de líquido de desecho del módulo de extracción (S26). Entonces, el eluyente se desplaza desde el compartimento de eluyente hacia el módulo de extracción para extraer el ácido nucleico del módulo de extracción (S27). En un experimento, el solicitante usó como muestra positiva una disolución de conservación celular oral que contenía una alta concentración del ácido nucleico que iba a someterse a prueba (plásmido de Mh: 106 copias/ml, plásmido de CytB), y como muestra negativa una disolución de conservación celular oral que no contenía el ácido nucleico que iba a someterse a prueba, y realizó pruebas intercaladas de muestras positivas y negativas. Se desea confirmar que el resultado de prueba de la muestra negativa tras el resultado de prueba de la muestra positiva no tiene ácido nucleico detectado. Se ha verificado experimentalmente que el casete de extracción de la realización de la presente invención puede impedir eficazmente la contaminación cruzada.Referring to Figure 4C, in one embodiment, the method further includes the following steps. The first detergent progressively moves from the first detergent compartment to the first mixing compartment and the second mixing compartment to clean the first mixing compartment and the second mixing compartment (S21). Then, the first detergent moves to the extraction module to clean the extraction module (S22). Next, the first detergent moves into the first waste liquid compartment of the extraction module (S23). Then, the second detergent progressively moves from the second detergent compartment to the first mixing compartment and the second mixing compartment to clean the first mixing compartment and the second mixing compartment (S24). Then, the second detergent moves to the extraction module to clean the extraction module (S25). Then, at least a part of the second detergent moves into a second waste liquid compartment of the extraction module (S26). The eluent is then moved from the eluent compartment to the extraction module to extract the nucleic acid from the extraction module (S27). In one experiment, the applicant used as a positive sample an oral cell preservation solution containing a high concentration of the nucleic acid to be tested (Mh plasmid: 106 copies / ml, CytB plasmid), and as a negative sample a oral cell preservation solution that did not contain the nucleic acid to be tested, and performed interleaved tests of positive and negative samples. You want to confirm that the negative sample test result after the positive sample test result has no nucleic acid detected. It has been experimentally verified that the extraction cassette of the embodiment of the present invention can effectively prevent cross-contamination.
Prueba 1: Se someten a prueba alternativamente cuatro veces muestras positivas y negativas de alta concentración (secuencia de pruebas: positiva ^ negativa ^ positiva ^ negativa)Test 1: High concentration positive and negative samples are tested alternately four times (test sequence: positive ^ negative ^ positive ^ negative)
Resultado: no se detectó ácido nucleico en las muestras negativasResult: no nucleic acid was detected in negative samples
Prueba 2: Prueba de muestra negativa después de cinco pruebas de muestra positiva de alta consecución (secuencia de prueba: positiva ^ positiva ^ positiva ^ positiva ^ negativa)Test 2: Negative sample test after five high attainment positive sample tests (test sequence: positive ^ positive ^ positive ^ positive ^ negative)
Resultado: no se detectó ácido nucleico en las muestras negativas Result: no nucleic acid was detected in negative samples
El uso de términos ordinales tales como “primero”, “segundo”, “tercero”, etc., en las reivindicaciones para modificar un elemento de reivindicación no connota por sí mismo ninguna prioridad, precedencia u orden de un elemento de reivindicación sobre otro ni el orden temporal en que se realizan los actos de un método, sino que se usan simplemente como etiquetas para distinguir un elemento de reivindicación que tiene un nombre determinado de otro elemento que tiene el mismo nombre (pero por el uso del término ordinal).The use of ordinal terms such as "first", "second", "third", etc., in claims to modify an element of claim does not in itself connote any priority, precedence or order of one element of claim over another or the temporal order in which the acts of a method are performed, but are simply used as labels to distinguish a claim element that has a given name from another element that has the same name (but by the use of the ordinal term).
Aunque la presente invención se ha descrito a modo de ejemplo y en lo que se refiere a las realizaciones preferidas, debe entenderse que la presente invención no se limita a las realizaciones dadas a conocer. Por el contrario, se pretende cubrir diversas modificaciones y disposiciones similares (tal como resultará evidente para los expertos en la técnica), siempre que estén dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Although the present invention has been described by way of example and with respect to preferred embodiments, it should be understood that the present invention is not limited to the disclosed embodiments. Rather, it is intended to cover various modifications and similar arrangements (as will be apparent to those skilled in the art), provided they are within the scope of the appended claims.
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