ES2842225T3

ES2842225T3 - Cristales de derivado de diazabiciclooctano y método de producción para cristales de derivado de diazabiciclooctano

Info

Publication number: ES2842225T3
Application number: ES14852849T
Authority: ES
Inventors: Takao Abe; Takeshi Furuuchi; Yoshiaki Sakamaki; Nakako Mitsuhashi; Yumiko Saito
Original assignee: Meiji Seika Pharma Co Ltd
Current assignee: Meiji Seika Pharma Co Ltd
Priority date: 2013-10-08
Filing date: 2014-10-08
Publication date: 2021-07-13
Anticipated expiration: 2034-10-08
Also published as: NZ757220A; AU2014332960A1; IL289275B2; AU2014332960B2; IL289275B; TWI673269B; IL289275A; HK1219479A1; EP3613740A1; AR097971A1; KR102388529B1; JP7182677B2; US10604522B2; CN105612159A; CA3110803C; BR112016006266B1; RU2019115119A3; MX361659B; NZ757221A; NZ743374A

Abstract

Procedimiento para producir un compuesto de fórmula (VII) **(Ver fórmula)** en la que R3 es alquilo C1-6 o heterociclilo, R3 puede modificarse con 0-5 grupos R4 seleccionados de alquilo C1-6, heterociclilo, R5(R6)N- y un grupo protector; y R4 puede sustituirse de manera consecutiva; R5 y R6 son cada uno independientemente H o alquilo C1-6 o juntos forman un heterociclilo; y además, R3, R5 y R6 pueden experimentar un cierre de anillo en una posición arbitraria; a partir de un compuesto de fórmula (VI) **(Ver fórmula)** que comprende (iii) si la cadena lateral de R3ONHC(=O)- tiene un grupo protector, retirar el grupo protector con un ácido, seguido por (iv) precipitar un producto bruto, añadiendo un disolvente deficiente seleccionado de acetato de etilo, acetato de isopropilo y acetato de butilo a la disolución de reacción, para obtener un compuesto bruto de fórmula (VII).

Description

DESCRIPCIÓN

Cristales de derivado de diazabiciclooctano y método de producción para cristales de derivado de diazabiciclooctano Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para producir formas cristalinas de un derivado de diazabiciclooctano de fórmula (VII), particularmente fórmula (VII-1).

Antecedentes de la técnica

El documento JP-B-4515704 indica un nuevo compuesto heterocíclico, un procedimiento de producción del mismo y el uso del mismo como un agente farmacéutico, y divulga como ejemplo de un compuesto típico del mismo trans-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo [3.2.1]octane-2-carboxamida de sodio (NXL 104). Los procedimientos de producción de un derivado de piperidina específico como producto intermedio también se indican en los documentos J^p-A-2010-138206 y JP-A-2010-539147, mientras que un procedimiento de producción de NXL104 y formas cristalinas del mismo se divulga en el documento WO 2011/042560.

Además, el documento JP-B-5038509 indica (2S,5R)-7-oxo-N-(piperidin-4-il)-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (MK7655), mientras que un procedimiento de producción de un derivado de piperidina específico y MK7655 se divulgan en los documentos JP-A-2011-207900 y w O 2010/126820.

Los inventores de la presente invención también divulgaron un nuevo derivado de diazabiciclooctano de fórmula (VII) en el documento JP-A-2012-122603 (en el que R3 es el mismo que se describirá posteriormente):

Sumario de la invención

Problemas que van a resolverse mediante la invención

En las fórmulas anteriores, R3 es el mismo que se describirá posteriormente, OBn es benciloxilo y Boc es tercbutoxicarbonilo.

Durante el transcurso del examen de industrialización de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida de fórmula (VII) mencionada anteriormente, particularmente fórmula (VII-1), se indicaron diversos problemas que se relacionan con la producción, tal como 1) la necesidad de proporcionar el compuesto en una forma cristalina estable debido a la dificultad de manejo durante la producción del principio activo farmacéutico (API) amorfo, particularmente el producto liofilizado, y la dificultad para asegurar su estabilidad; 2) la necesidad de aislar el principio activo farmacéutico bruto que contiene un ácido obtenido después de desproteger el grupo protector en el grupo R3ONHC(=O)- de la cadena lateral y establecer un procedimiento para ajustar un intervalo de pH estable; 3) la necesidad de mejorar el rendimiento y evitar la contaminación con subproducto controlando la sobrerreacción que provoca el grupo R3ONHC(=O)- de la cadena lateral que también se sulfata durante la sulfatación de un compuesto de fórmula (V); 4) no pudiendo ignorar la pérdida de aislamiento además de la inestabilidad en estado de disolución, particularmente la inestabilidad durante la evaporación del disolvente de reacción para concentrar el compuesto de fórmula (V) mencionada anteriormente; y 5) el rendimiento insatisfactorio del compuesto de fórmula (IV) mencionada anteriormente. En particular, la etapa de aislamiento y ajuste del pH del compuesto bruto de fórmula (VII-1-CR) que contiene ácido para la cristalización del compuesto de fórmula (VII-1) era extremadamente difícil debido a factores complejos en los efectos de la inestabilidad y la alta solubilidad del compuesto, productos de descomposición y contaminantes.

Medios para resolver los problemas

Los inventores realizaron estudios detallados sobre el procedimiento para producir el compuesto de fórmula (VII) mencionada anteriormente y establecieron una serie de procedimientos de producción para proporcionar una disolución muy pura del compuesto de fórmula (VII) que no afecta a la cristalización del compuesto de fórmula (VII), así como un procedimiento para producir formas cristalinas muy estables.

Concretamente, la presente invención se refiere a

(1) Un procedimiento para producir un compuesto de fórmula (VII):

en la que R3 es alquilo C i-6 o heterociclilo, R3 puede modificarse con 0-5 grupos R4 seleccionados de alquilo C i-6, heterociclilo, R5(R6)N- y un grupo protector; y R4 puede sustituirse de manera consecutiva ; R5 y R6 son cada uno independientemente H o alquilo C i-6 o juntos forman un heterociclilo; y además, R3, R5y R6 pueden experimentar cierre de anillo en una posición arbitraria;

a partir de un compuesto de fórmula (VI)

que comprende

(iii) si la cadena lateral de R3ONHC(=O)- tiene un grupo protector, retirar el grupo protector con un ácido, seguido por (iv) precipitar un producto bruto, añadiendo un disolvente deficiente seleccionado de acetato de etilo, acetato de isopropilo y acetato de butilo a la disolución de reacción, para obtener un compuesto bruto de fórmula (VII).

En realizaciones preferidas la invención proporciona lo siguiente:

(2) El procedimiento tal como se define en (1), que comprende además la etapa posterior de

(v) añadir de manera alternante el compuesto bruto de fórmula (VII) y tampón helado para obtener una disolución que tiene un pH de 4-5,5, concentrar después de la desalación con un adsorbente sintético según sea necesario, ajustar la temperatura, sembrar según sea necesario y cristalizar añadiendo un disolvente deficiente seleccionado de metanol, etanol e isopropanol para producir el compuesto de fórmula (VII).

(3) El procedimiento tal como se define en (1) o (2), que comprende además, antes de las etapas (iii) y (iv), las etapas de

(i) hacer reaccionar compuesto de fórmula (III):

en la queOBn es benciloxilo, y R1 es 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo, 1,3-dioxo-3a,4,7,7a-tetrahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo, 1,3-dioxohexahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo o 3,5-dioxo-4-azatricido[5.2.1.026]dec-8-en-4-ilo,

con un compuesto R3ONH2 en el que R3 es tal como se define en la reivindicación 1, para obtener un compuesto de fórmula (IV):

(ii) tratar con un catalizador de paladio/carbono bajo una atmósfera de hidrógeno, sometiendo simultánea o consecutivamente a una reacción de sulfatación usando un complejo de trióxido de azufre-trimetilamina en presencia de una cantidad catalítica de base en un disolvente acuoso y tratar con hidrogenosulfato de tetrabutilamonio para obtener un compuesto de fórmula (VI):

(4) El procedimiento tal como se define en cualquiera de (1)-(3), en el que R3 se selecciona de:

2-(terc-butoxicarbonilamino)etilo; 2-aminoetilo;

2-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)etilo; 2-(metilamino)etilo;

2-((terc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)etilo; 2-(isopropilamino)etilo;

2- (dimetilamino)etilo; (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)propilo;

(2S)-2-(amino)propilo; (2R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)propilo; (2R)-2-(amino)propilo;

3- ((terc-butoxicarbonil)amino)propilo; 3-(amino)propilo;

(2S)-terc-butoxicarbonilazetidin-2-ilmetilo; (2S)-azetidin-2-ilmetilo;

(2R)-terc-butoxicarbonilpirrolidin-2-ilmetilo; (2R)-pirrolidin-2-ilmetilo;

(3R)-terc-butoxicarbonilpiperidin-3-ilmetilo; (3R)-piperidin-3-ilmetilo;

(3S)-terc-butoxicarbonilpirrolidin-3-ilo; (3S)-pirrolidin-3-ilo;

1-(terc-butoxicarbonil)azetidin-3-ilo; y azetidin-3-ilo.

(5) El procedimiento tal como se define en (3), en el que el compuesto de fórmula (VII) es un compuesto de fórmula (VII-1)

y en el que

• en la etapa (i) el compuesto de fórmula (III) se hace reaccionar con 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo en presencia de una base para obtener un compuesto de fórmula (IV-1) en la que Boc es terc-butoxicarbonilo:

• en la etapa (iii) el grupo protector Boc se retira con ácido acético trifluoroacético,

• en la etapa (iv) se usa acetato de etilo como disolvente deficiente, y

• en la etapa (v) el tampón helado es un tampón fosfato helado, y se usa isopropanol como disolvente deficiente.

(6) El procedimiento tal como se define (1), en el que R3 es 2-(terc-butoxicarbonilamino)etilo, y

• en la etapa (iii) el grupo protector terc-butoxicarbonilo (Boc) se retira con ácido trifluoroacético, y

• en la etapa (iv) el disolvente deficiente es acetato de etilo.

(7) El procedimiento tal como se define en (2), en el que R3 es 2-(amino)etilo, el tampón helado es un tampón fosfato helado, y se usa isopropanol como disolvente deficiente.

Efectos de la invención

Según la serie de procedimientos de producción de la presente invención, las formas cristalinas de un compuesto de fórmula (VII), particularmente un compuesto de fórmula (VII-1) y formas cristalinas del mismo que tienen una estabilidad favorable, pueden producirse con buena reproducibilidad y alto rendimiento.

Aunque existían factores que alteraron directamente la cristalización del compuesto de fórmula (VII) y que se produjeron a partir de la descomposición del compuesto de fórmula (VII) durante el ajuste de pH y de trasladar los productos degradados en una serie de etapas a la siguiente etapa, la descomposición del compuesto de fórmula (VII) se controla completamente, y puede obtenerse una disolución con alta pureza del compuesto de fórmula (VII) que puede cristalizarse con alto rendimiento empleando procedimientos para producir un compuesto de fórmula (VI) y un compuesto de fórmula (VII-CR) establecidos en la presente invención, y empleando adicionalmente una serie de etapas para el aislamiento, neutralización y desalación del compuesto de fórmula (VII-CR) que contiene un ácido. Un compuesto de fórmula (III), particularmente un compuesto en el que R1 es 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo, 1,3-dioxo-3a,4,7,7a-tetrahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo, 1,3-dioxohexahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo o 3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.1.026]dec-8-en-4-ilo, proporciona un compuesto de fórmula (IV) con mayor pureza y mayor rendimiento en comparación con el sintetizado a partir de la fórmula (1) mencionada anteriormente.

Aunque el rendimiento de un compuesto de fórmula (V) que es inestable en una disolución tendió a disminuir acompañando a un aumento de la escala de producción, la formación de productos descompuestos durante la concentración de un compuesto de fórmula (V), disminuye en el rendimiento provocado por la pérdida de aislamiento, y la contaminación por productos sobrerreaccionados en la etapa de sulfatación se evitaron derivando un compuesto de fórmula (VI) de un compuesto de fórmula (IV) mediante o bien una reacción en una sola etapa o bien secuencial. Aunque un disolvente a base de alcohol es superior al de la reacción de desbencilación del compuesto de fórmula (IV), el complejo trióxido de azufre-piridina, que se usa normalmente en la etapa de sulfatación posterior, se desactiva en disolventes a base de alcohol y, por tanto, no puede aplicarse. El complejo trióxido de azufre-piridina encontrado en la presente invención presenta una estabilidad superior en disolventes a base de alcohol y permite que la reacción de sulfatación se lleve a cabo en una sola etapa o secuencialmente.

En la etapa para producir el compuesto de fórmula (VII-CR), puede producirse un compuesto de fórmula (VII-CR) con reproducibilidad favorable en forma de un sólido de fácil manejo que tiene baja higroscopicidad y pocos productos descompuestos que precipitan con un disolvente deficiente tal como un disolvente a base de éster o un disolvente a base de éter que tiene baja higroscopicidad, acetato de etilo particularmente versátil, a la disolución de reacción. La razón de contaminación de los componentes de ácido que tiene un efecto sobre la etapa de neutralización pueden controlarse dentro del intervalo admisible para etapa posterior del 10-30% en moles lavando un sólido húmedo, haciendo posible así mantener un alto nivel de pureza y demostrar una razón de área de HPLC de >99%.

La transformación de los cristales en el polimorfismo del compuesto de fórmula (VII-1) obtenido en la presente invención no se observa en una prueba de estabilidad llevada a cabo a 40°C en estado sólido o en la agitación de la suspensión en un disolvente acuoso durante mucho tiempo. Cuando la forma cristalina III del compuesto de fórmula (VII-1) se sometió a un experimento de DRX-DSC, se calentó hasta 160°C al 60% de HR, y luego se dejó enfriar reposando hasta 63°C, la forma cristalina cambió a forma cristalina anhidra desde por encima de aproximadamente 145°C, y luego volvió a la forma cristalina III por debajo de aproximadamente 90°C después de enfriarse. Basándose en estos hallazgos, una forma cristalina de un compuesto de fórmula (VII-1), particularmente la forma cristalina III constituye una forma estable en condiciones habituales.

Cuando los cambios a lo largo del tiempo del contenido de agua, se compararon simultáneamente cantidades totales de sustancias relacionadas y contenido de la forma amorfa y las formas cristalinas I, II, III y IV del compuesto de fórmula (VII-1) en condiciones de 40°C (75% de HR), tal como se muestra en la siguiente tabla 1, al contrario que la cantidad total de sustancias relacionadas de la forma amorfa que es del 0,5% al comienzo del experimento, la cantidad aumentó posteriormente de manera considerable al, 6 ,6% después de 1 mes y al 12,3% después de 3 meses, y también al contrario que el contenido que es del 99,4% al comienzo, disminuyó al 93,3% después de 1 mes y al 87,5% después de 3 meses. Por otro lado, al contrario que las cantidades totales de sustancias relacionadas de las formas cristalinas I, II, III y IV que son del 0,0-0,1% al comienzo del experimento, las cantidades no cambian demostrando el 0. 0% después de 1 mes y el 0,0-0,5% después 3 meses, y también al contrario que el contenido que es del 99,8-99,9% al comienzo del experimento, permanecieron sin cambios y estables, demostrando el 99,8-100,0% después de 1 mes y el 99,3-99,9% después de 3 meses, y también al contrario que el contenido de agua de las formas cristalinas 1, II, III y IV que es del 5,3-5,7% y el 0,1% al comienzo del experimento, permaneció sin cambios y estable, demostrando el 5,5-5,9% y el 0 ,1% después de 3 meses y 1 mes.

[Tabla 1]

Condiciones de almacenamiento: 40°C/75% de HR, recipiente hermético

Además, cuando se observó la estabilidad de contacto de la forma cristalina III en un recipiente de envasado de fármacos a granel a lo largo del tiempo, tal como se muestra en la tabla 2 y la tabla 3, al contrario que el contenido, la cantidad total de sustancias relacionadas y el contenido de agua al comienzo del experimento que es del 99,9%, el 0,09% y el 5,20%, respectivamente, después de 3 meses a 40°C (75% de HR), los valores fueron del 99,9%, el 0,06% y el 5,29%, respectivamente, y después de 1 mes a 60°C, los valores fueron del 99,9%, el 0,04% y el 5,08%, respectivamente, lo que demuestra que los cristales no cambiaron y permanecieron estables.

[Tabla 2]

Envase interior: una bolsa de polietileno de baja densidad, abrazadera de nailon

Envase exterior: una bolsa laminada de aluminio, termosellada

Condiciones de almacenamiento: 40°C/75% de HR

[Tabla 3]

Envase exterior: una bolsa laminada de aluminio, termosellada

Condiciones de almacenamiento: 60°C

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo de la forma cristalina I.

La figura 2 muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo de la forma cristalina II.

La figura 3 muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo de la forma cristalina III.

La figura 4 muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo de la forma cristalina IV.

Modo para llevar a cabo la invención

Tal como se ha descrito previamente, la presente invención proporciona un procedimiento para producir formas cristalinas muy estables de un compuesto de fórmula (VII), particularmente un compuesto de fórmula (VII-1) (también denominado “el presente procedimiento” a continuación en el presente documento).

en la que R3 es alquilo C1-6 o heterociclilo, R3 puede modificarse con 0-5 grupos R4 seleccionados de alquilo C1-6, heterociclilo, R5(R6)N- y un grupo protector; y R4 puede sustituirse de manera consecutiva; R5 y R6 son cada uno independientemente H o alquilo C1-6 o juntos forman un heterociclilo; y además, R3, R5 y R6 pueden experimentar un cierre de anillo en una posición arbitraria. En la fórmula (VII-1) R3 = -CH2CH2NH2.

A continuación se proporciona una explicación detallada del presente procedimiento.

“Alquilo C1-6” se refiere a un grupo alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1-6 átomos de carbono.

“Heterociclilo” se refiere a un anillo no aromático o anillo saturado heterocíclico monocíclico de 3 a 7 miembros que tiene un total de 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O y S como constituyentes de anillo del mismo.

“R5(R6)N-” se refiere a un amino, concretamente un amino, mono-alquil C1-6-amino o di-alquil C1-6-amino sustituido con R5 y R6, o un heterociclilo formado por R5 y R6 junto con un átomo de nitrógeno.

“Modificado” se refiere a un hidrógeno en R3 que está sustituido con o conectado a R4.

“R3 puede modificarse con 0-5 R4, R4 puede sustituirse de manera consecutiva” significa que R4 que modifica R3 puede modificarse aún más con R4, y los ejemplos del mismo incluyen R3-(R4)o-5, R3-(R4-R4o-4), R3-(R4-R4o-3)2, R3-(R4-R4o-2)3 y R3-(R4-R4^o-ⁱ)4.

Los ejemplos específicos de un “grupo protector” incluyen grupos protectores de tipo carbamato y grupos trialquilsililo que son grupos protectores de grupos amino y grupos hidroxilo tal como se describe en Protective Groups in Organic Synthesis (T. W. Greene et al., Wiley, Nueva York (1999)), y sus ejemplos preferibles incluyen triisopropilsililo (TIPS), terc-butildimetilsililo (TBDMS o TBS), terc-butoxicarbonilo (Boc), trimetilsililetoxicarbonilo (Teoc), 4-metoxibenciloxicarbonilo (PMZ, Moz) y difenilmetoxicarbonilo.

Los ejemplos específicos de “alquilo C W incluyen alquilo C1-6 lineal o ramificado tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, terc-butilo, s-butilo, isobutilo, pentilo, 1,1 -dimetilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, neopentilo, 1 -metilbutilo, 2-metilbutilo, isopentilo o hexilo; cicloalquilo C3-6 tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo; y cicloalquilo C3-5 sustituido con metilo tal como ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo o ciclopentilmetilo, y preferiblemente incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, terc-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopropilmetilo y ciclobutilmetilo.

Los ejemplos específicos de grupos “heterociclilo” incluyen aziridina, oxirano, tiirano, azetidina, oxetano, tietano, pirrolidina, tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, imidazolidina, oxazolidina, tiazolidina, pirazolidina, piperidina, tetrahidro-2H-pirano, tetrahidro-2H-tiopirano, hexahidropiridazina, piperazina, morforina, tiomorforina, 1,2-oxazolidina, 1,3-oxazolidina, 1,2-oxazinano, 1,3-oxazinano, 1,4-dioxano, 1,2-tiazolidina, 1,3-tiazolidina, 1,2-tiazinano, 1,3-tiazinano, azepano, oxepano, tiepano, 1,4-diazepano, 1,4-oxazepano, 1,4-tiazepano, 1,2,5-triazepano, 1,4,5-oxadiazepano, 1,2,5-oxadiazepano, 1,4,5-tiadiazepano, 1,5,2-dioxazepano, 1,5,2-oxatiazepano, 3,4-dihidro-2H-pirrol, 4,5-dihidro-1H-pirazol, 4,5-dihidro-1H-imidazol, 4,5-dihidro-1,2-oxazol, 4,5-dihidro-1,3-oxazol, 4,5-dihidro-1,3-tiazol, 2,3,4,5-tetrahidropiridina, 1,2,3,6-tetrahidropirazina, 5,6-dihidro-4H-1,2-oxazina y 3,6-dihidro-2-H-1,4-oxazina y preferiblemente incluyen azetidina, pirrolidina, tetrahidrofurano, piperidina, tetrahidro-2H-pirano, imidazolidina, 1,3-oxazolidina, 1,3-tiazolidina, hexahidropiridazina, piperazina, morforina, 1,2-oxazinano, azepano, 1,4-diazepano y 1,2-oxazepano. Los ejemplos específicos mencionados anteriormente incluyen los conectados con un grupo protector tal como un grupo terc-butoxicarbonilo (Boc).

Los ejemplos específicos de “R5(R6)N-” incluyen amino, metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, butilamino, terc-butilamino, s-butilamino, isobutilamino, pentilamino, 1,1-dimetilpropilamino, 1,2-dimetilpropilamino, neopentilamino, 1-metilbutilamino, 2-metilbutilamino , isopentilamino, hexilamino, N,N-dimetilamino, N,N-dietilamino, N,N-dipropilamino, N,N-di(isopropil)amino, N,N-dibutilamino, N,N-di(terc-butil)amino, N,N-di(s-butil)amino, N,N-di(isobutil)amino, N,N-dipentilamino, N,N-di(1,1-dimetilpropil)amino, N,N-di(1,2-dimetilpropil)amino, N,N-di(neopentil)amino, N,N-di(1-metilbutil)amino, N,N-di(2-metilbutil)amino, N,N-di(isopentil) amino y N,N-di(hexil)amino y preferiblemente incluyen amino, metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, N,N-dimetilamino y N,N-dietilamino. Los ejemplos específicos mencionados anteriormente incluyen los conectados con un grupo protector tal como un grupo terc-butoxicarbonilo (Boc).

Los ejemplos específicos de grupos formados en el caso de R5 y R6 de R5(R6)N- que se conectan para formar un grupo heterociclilo incluyen azetidin-1 -ilo, pirrolidin-1 -ilo, piperidin-1-ilo y azepan-1-ilo. Los ejemplos específicos mencionados anteriormente incluyen los conectados con un grupo protector tal como un terc-butoxicarbonilo (Boc).

“R3, R5 y R6 pueden someterse al cierre del anillo en una posición arbitraria” significa que, en el caso de que R3 sea alquilo C1-6 y R4 que modifica R3, a saber, R5 o R6 contenido en R5(R6)N-, es alquilo C1-6, R3 y R5 o R6 juntos pueden formar un anillo saturado de 3 a 7 miembros.

Los ejemplos específicos de compuestos formados en el caso de un sustituyente definido por R4 que modifica un alquilo C1-6 o heterociclilo que forma R3O- se explican enumerando ejemplos típicos incluso más específicos de los mismos.

Los ejemplos específicos de un grupo amino (H2N-) de un ejemplo típico de R5(R6)N- que modifica un “alquilo C W incluyen 2-aminoetilo, 2-aminopropilo, 3-aminopropilo, 2-amino-1-metiletilo, 2-aminobutilo, 3-aminobutilo, 4-aminobutilo, 2-amino-1,1-dimetiletilo, 2-amino-1-metilpropilo o 3-amino-2-metilpropilo. Los ejemplos específicos mencionados anteriormente incluyen los conectados con un grupo protector tal como un grupo terc-butoxicarbonilo (Boc) contenido en R5OCO-.

Los ejemplos específicos de un grupo metilo de un ejemplo típico de alquilo C1-6 que modifica un heterociclilo incluyen 1-metilazetidina, 3-metilazetidina, 1 -metilpirrolidina, 3-metilpirrolidina, 1-metilimidazolidina, 3-metiloxazolidina, 1-metilpirazolidina, 1 -metilpiperidina, 4-metilpiperidina, 2-metiltetrahidro-2H-pirano, 4-metiltetrahidro-2H-pirano, 1-metilpiperazina, 1,4-dimetilpiperazina, 4-metilmorfolina, 4-metiltiomorfolina, 1-metilazepano, 1-metil-1,4-diazepano y 1,4-dimetil-1,4-diazepano. Los ejemplos específicos mencionados anteriormente incluyen los conectados con un grupo protector tal como un grupo terc-butoxicarbonilo (Boc).

Los ejemplos específicos de un grupo amino (H2N-) de un ejemplo típico de R5(R6)N- que modifica un heterociclilo incluyen 3-aminoazetidina, 3-aminopirrolidina, 3-amino-tetrahidrofurano, 3-amino-tetrahidrotiofeno, 4-aminopirazolidina, 4-aminopiperidina, 4-amino-tetrahidro-2H-pirano, 4-amino-tetrahidro-2H-tiopirano, 4-aminohexahidropiridazina, 4-amino-1,2-oxazolidina, 4-amino-1,2-oxazinano, 4-aminoazepano, 4-aminooxepano y 6-amino1,4-diazepano. Los ejemplos específicos mencionados anteriormente incluyen los conectados con un grupo protector tal como un grupo terc-butoxicarbonilo (Boc).

Los ejemplos específicos de un heterociclilo que modifica un metilo o etilo de un ejemplo típico de un alquilo C1-6 incluyen azetidin-2-ilmetilo, azetidin-3-ilmetilo, pirrolidin-2-ilmetilo, pirrolidin-3-ilmetilo, tetrahidrofuran-3-ilmetilo, tetrahidrotiofen-3-ilmetilo, pirazolidin-4-ilmetilo, 1,2-oxarolidin-3-ilmetilo, piperidin-2-ilmetilo, piperidin-3-ilmetilo, piperidin-4-ilmetilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilmetilo, tetrahidro-2H-tiopiran-4-ilmetilo, hexahidropiridazin-4-ilmetilo, piperazin-2-ilmetilo, 1,2-oxazinan-3-ilmetilo, morforin-2-ilmetilo, morforin-3-ilmetilo, tiomorforin-2-ilmetilo, tiomorforin-3-ilmetilo, azepan-2-ilmetilo, azepan-4-ilmetilo, oxepan-2-ilmetilo, oxepan-4-ilmetilo, 1,4-diazepan-2-ilmetilo, 1,4-diazepan-6-ilmetilo, 2-(azetidin-1-il)etilo, 2-(pirrolidin-1-il) etilo, 2-(pirazolidin-1-il)etilo, 2-(piperidin-1-il)etilo, 2-(hexahidropiridazin-1 -il)etilo, 2-(piperazin-1-il)etilo, 2-(morfolin-4-il)etilo, 2-(tiomorfolin-4-il) etilo, 2-(1,2-oxazolidin-2-il)etilo, 2-(1,2-oxazinan-2-il)etilo, 2-(azepan-1-il)etilo o 2-(1,4-diazepan-1-il)etilo. Los ejemplos específicos mencionados anteriormente incluyen los conectados con un grupo protector tal como un grupo terc-butoxicarbonilo (Boc).

Los ejemplos específicos de compuestos de fórmulas (IV), (VI), (VII-CR) y (VII) son compuestos seleccionados de {2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo;

{2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(suliboxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

{2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(metil)carbamato de terc-butilo; {2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(su|fooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(metil)carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-N-[2-(metilamino)etoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

{2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(propan-2-il)carbamato de tercbutilo;

{2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(propan-2-il)carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-7-oxo-N-[2-(propan-2-ilamino)etoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

(2S,5R)-6-benciloxi-N-[2-(dimetilamino)etoxi]-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

(2S,5R)-N-[2-(dimetilamino)etoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida de tetrabutilamonio; (2S,5R)-N-[2-(dimetilamino)etoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

{(2S)-1-[({[(2S,5R)-6-benzy|oxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tercbutilo;

{(2S)-1-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-N-{[(2S)-2-aminopropil]oxi}-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

{(2R)-1-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tercbutilo;

{(2R)-1-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-N-{[(2R)-2-aminopropil]oxi}-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

{3-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propil}carbamato de terc-butilo; {3-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propil}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-N-(3-aminopropoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida;

(2S)-2-{[([(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiddo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de terc-butilo;

(2S)-2-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-N-[(2S)-azetidin-2-ilmetoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida;

(2R)-2-{[([(2S,5R)-6-bendloxi-7-oxo-1,6-diazabiddo[3.2.1]od-2-il]carbonil}amino)oxi]metN}-carboxNato de terc-butilo; (2R)-2-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}pirrolidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-7-oxo-N-[(2R)-pirrolidin-2-ilmetoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

(3R)-3-{[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo;

(3R)-3-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}piperidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-7-oxo-N-[(3R)-piperidin-3-ilmetoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3,2 .1]octano-2-carboxamida;

(3S)-3-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]pirrolidin-1-carboxilato de tercbutilo;

(3S)-3-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]pirrolidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo;

(2S,5R)-7-oxo-N-[(3S)-pirrolidin-3-iloxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]o ctane-2-carboxamida;

3-{[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de tercbutilo;

3-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo; y

(2S,5R)-N-(azetidin-3-ilmetoxi)-7-oxo-6-(suliboxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct ane-2-carboxamida,

e incluyen el siguiente grupo de compuestos:

(en las que P2 es un grupo protector tal como terc-butoxicarbonilo (Boc) o hidrógeno, y P3 es benciloxilo (OBn), tetrabutilamoniosulfooxilo o sulfooxilo).

Lo más preferiblemente, los ejemplos específicos incluyen {2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo;

(2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida;

y se representan por las fórmulas (IV-1), (VI-1), (VII-1-CR) y (VII-1) mencionadas anteriormente.

El compuesto proporcionado por el presente procedimiento es un inhibidor de la p-lactamasa y demuestra una acción que inhibe la descomposición de los agentes antimicrobianos p-lactámicos por esta enzima. Por tanto, un producto farmacéutico proporcionado por el procedimiento de la presente invención se basa en el uso concomitante con un agente antimicrobiano p-lactámico.

El fármaco se caracteriza por contener como principios activos del mismo un compuesto de fórmula (VII), una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un hidrato o solvato del mismo, y aunque puede administrarse por vía oral o parenteral, se administra preferiblemente por vía parenteral. Un compuesto (VII) elaborado mediante el presente procedimiento y un antibiótico p-lactámico pueden administrarse produciendo una composición farmacéutica mediante un método que consiste en usar de manera concomitante cada agente farmacéutico preparado individualmente en el momento de su uso y administrarlo simultáneamente o por separado, o mezclando ambos agentes farmacéuticos de antemano y usando normalmente uno o dos o más aditivos de preparación (portadores).

Los ejemplos específicos de composiciones farmacéuticas para administración oral incluyen comprimidos, cápsulas, gránulos, polvos, píldoras, disoluciones y suspensiones orales acuosas y no acuosas.

Los ejemplos de vías de administración para administración parenteral incluyen administración intranasal, colirios, gotas para los oídos, administración percutánea, administración intratraqueal, administración intrarrectal, administración intraurológica, administración subcutánea, administración intramuscular y administración intravenosa. Los ejemplos específicos de composiciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen disoluciones para inyección intravenosa usando una composición farmacéutica en forma de polvo con un disolvente aceptable para administración intravenosa. Los ejemplos de disolventes aceptables incluyen agua estéril para inyección, solución salina fisiológica, disolución de glucosa, solución de Ringer, agua estéril para inyección que contiene parahidroxibenzoato de metilo o parahidroxibenzoato de propilo y agua estéril para inyección que contiene alcohol bencílico.

Se produce una forma en polvo de una composición farmacéutica para administración intravenosa dispensando un principio activo farmacéutico en forma de un compuesto de la presente invención y un antibiótico p-lactámico en un vial sellado después de pasar por una etapa de esterilización.

En este caso, los ejemplos de antibióticos p-lactámicos que pueden usarse de manera concomitante con un compuesto de la presente invención incluyen antibióticos de penicilina, cefémicos y carbapenémicos.

Los ejemplos específicos de penicilina incluyen bencilpenicilina, feneticilina, cloxacilina, dicloxacilina, ampicilina, ciclacilina, amoxicilina, talampicilina, becampicilina, lenampicilina, aspoxicilina, piperacilina, sulbenicilina, pivmecilinam, sultamicilina, fenoximetilpenicila, carbenicilina, azidocilina, propicilina, epicilina, ticarcilina, pirbenicilina, azlocilina, mezlocilina y otras penicilinas conocidas.

Los ejemplos específicos de cefem incluyen cefaclor, cefazolina, cefatrizina, cefadroxilo, cefapirina, nafato de cefamandol, cefradina, cefalexina, cefalotina, cefepima, cefoxitina, cefixima, Cefzidime, cefditoren, cefdinir, cefsulodina, cefselis, cefzopran, Ceftaxime, ceftazidima, ceftarolina, ceftiam, ceftizoxima, ceftibuteno, ceftezol, ceftetam, ceftriaxona, cefnicid, cefpiramida, cefpiroma, cefbuperazona, cefprozil, cefperazona, cefpodoxima, cefminox, cefmetazol, cefmenoxima, cefradina, cefroxadina, ceftolozano (CXA101; sal de hidrogenosulfato del ácido (6R,7R)-3

[5-amino-4-[3-(2-aminoetil)ureida]-1-metil-1H-pirazol-2-io-2-ilmetil]-7-[2-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-[(Z)-1-carboxi-1-metiletoxiimino]acetamida]-3-cefem-4-carboxíco), y otros cefem conocidos.

Los ejemplos de antibióticos carbapenémicos incluyen imipenem, panipenem, meropenem, biapenem, doripenem, ertapenem y tebipenem, y estos pueden usarse de manera concomitante con inhibidores de DHP-1 tales como cilastatina sodio según sea necesario.

Los ejemplos de antibióticos p-lactámicos distintos del carbepenem, penicilina y cefem incluyen aztreonam, carumonam, latamoxef, loracarbef, faropenem y ritipenem.

Los ejemplos de penicilina que son particularmente preferibles para la administración concomitante con un compuesto de la presente fórmula (VII) incluyen ampicilina, amoxicilina, carbenicilina, piperacilina, azlocilina, mezlocilina y ticarcilina. Estas penicilinas pueden usarse en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, en forma de sal sódica. En otra forma, puede usarse ampicilina o amoxicilina de manera concomitante con un compuesto de fórmula (VII) en forma de suspensión para inyección o gránulos finos de iones zwitteriónicos (ampicilina trihidratada o amoxicilina trihidratada) para su uso en una suspensión para inyección. Los ejemplos de antibióticos basados en cefem particularmente preferibles para la administración concomitante con un compuesto de fórmula (VII) incluyen cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima y cefepima, y estos pueden usarse en forma de una sal farmacéuticamente aceptable en forma de sal de sodio. Los ejemplos de antibióticos carbapenémicos particularmente preferidos para la administración concomitante con un compuesto de fórmula (VII) incluyen imipenem, meropenem, biapenem, doripenem y ertapenem.

Un ejemplo de un antibiótico p-lactámico distinto de los antibióticos carbepenémicos, penicilinas y cefémicos que es particularmente preferible para la administración concomitante con un compuesto de fórmula (VII) es aztreonam. Lo siguiente proporciona explicaciones secuenciales de procedimientos para producir un compuesto de fórmula (VII) y cristales del mismo proporcionado por la presente invención.

En las anteriores fórmulas (III), (IV), (VI), (VII-CR) y (VII), OBn, R1 y R3 son los mismos tal como se describieron anteriormente.

La etapa para obtener compuesto de fórmula (IV) a partir de un compuesto de fórmula (III):

(en las que OBn, R1 y R3 son los mismos tal como se describieron) se lleva a cabo de la manera descrita a continuación. Los ejemplos de disolvente usados incluyen agua, metanol, etanol, isopropanol, acetato de etilo, tetrahidrofurano, dioxano, diclorometano, cloroformo, 1,2-dicloroetano y 2 ,2 ,2-trifluoroetanol; los ejemplos preferibles incluyen acetato de etilo, dioxano, diclorometano, cloroformo y dicloroetano, y estos disolventes se usan solos o como una mezcla. El compuesto: R3ONH2 usado en la reacción se selecciona de los enumerados como ejemplos específicos de R3, y se usa dentro del intervalo de 1-2 equivalentes, y preferiblemente de 1-1,3 equivalentes, basándose en el compuesto de fórmula (III).

Los ejemplos de bases usadas en la reacción incluyen hidrogenocarbonato de sodio, hidrogenocarbonato de potasio, carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, trietilamina, diisopropiletilamina, dimetilbutilamina, tributilamina, N-metilmorfolina, piridina, N-metilimidazol, 4-dimetilaminopiridina y trietilamina y se usa preferiblemente trietilamina, y la base puede usarse en forma de disolución acuosa en el caso de usar una base inorgánica. La base se usa dentro del intervalo de 0-2 equivalentes, y preferiblemente de 0-1,5 equivalentes, basándose en el compuesto de fórmula (III). La temperatura de reacción es de -25 a 50°C y preferiblemente de -10 a 10°C. El tiempo de reacción es de 1-24 horas y preferiblemente de 1-16 horas.

El compuesto de fórmula (IV) puede aislarse una vez completada la reacción diluyendo la disolución de reacción con un disolvente adecuado y lavando secuencialmente con agua, ácido diluido y una disolución básica acuosa (tal como ácido clorhídrico diluido, hidrogenosulfato de potasio, ácido cítrico y bicarbonato de sodio acuoso o salmuera saturada) seguido por concentración por evaporación del disolvente. Los ejemplos de disolventes orgánicos usados para la dilución incluyen dietil éter, acetato de etilo, acetato de butilo, tolueno, diclorometano y cloroformo, y es preferible el acetato de etilo. Aunque el producto se aísla mediante procedimientos habituales de tratamiento y purificación, solo puede usarse en la siguiente etapa después del tratamiento.

La etapa para convertir un compuesto de fórmula (IV):

en un compuesto de fórmula (VI) anterior se lleva a cabo de la manera descrita a continuación.

Los ejemplos de disolventes usados en la reacción incluyen agua, metanol, etanol, isopropanol y acetonitrilo, y estos disolventes se usan solos o como una mezcla. En el caso de llevar a cabo la reacción de desbencilación y la reacción de sulfatación simultáneamente, es preferible un disolvente acuosos, y en el caso de realizarla de manera continua, se añade agua preferiblemente durante la sulfatación. La cantidad de agua añadida es del 50 al 200% en volumen, y preferiblemente del 75 al 125% en volumen, del disolvente.

La cantidad de paladio/carbono usada es del 5 al 100% en peso, y preferiblemente del 5 al 30% en peso, basándose en el compuesto de fórmula (IV).

La fuente de suministro de hidrógeno usada en la hidrogenólisis es gas de hidrógeno, y la presión de hidrógeno se selecciona dentro de un intervalo de presión atmosférica a 1 MPa y preferiblemente de presión atmosférica a 0,5 MPa. La cantidad de hidrógeno suministrada es al menos la usada en una cantidad igual o mayor que la cantidad estequiométrica.

La temperatura de reacción de la hidrogenólisis es de 10-50°C y preferiblemente de 20-30°C. El tiempo de reacción es de 0,5-3 horas y preferiblemente de 0,5-2 horas.

El complejo de trióxido de azufre-trimetilamina usado como reactivo de sulfatación se usa dentro del intervalo de 1-2 equivalentes, y preferiblemente de 1-1,3 equivalentes, basándose en el compuesto de fórmula (IV).

Los ejemplos de base usada en la sulfatación incluyen trietilamina, tributilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina e hidrogenofosfato de disodio, y se usa preferiblemente trietilamina, y la base puede usarse dentro del intervalo de 0,1-1 equivalente, y preferiblemente de 0,1-0,3 equivalentes, basándose en el compuesto de fórmula (IV).

La temperatura de reacción de sulfatación es de 0-50°C y preferiblemente de 15-30°C. El tiempo de reacción es de 12-48 horas y preferiblemente de 12-24 horas.

Después de completarse la reacción, el compuesto de fórmula (VI) puede obtenerse separando por filtración impurezas tales como el catalizador y añadiendo un concentrado obtenido por evaporación del disolvente a una disolución acuosa de dihidrogenofosfato de sodio, seguido por la adición de 1-3 equivalentes molares de hidrogenosulfato de tetrabutilamonio, extrayendo con un disolvente orgánico tal como acetato de etilo y concentrando por evaporación del disolvente. El compuesto resultante de fórmula (VI) puede usarse como una disolución concentrada para la siguiente etapa sin aislar ni purificar.

La etapa para convertir un compuesto de fórmula (VI):

en un compuesto de fórmula (VII-CR) anterior se lleva a cabo de la manera descrita a continuación.

Los ejemplos de disolventes usados en la etapa para desproteger un grupo protector contenido opcionalmente en R3O-NHC(=O)-, particularmente un grupo terc-butoxicarbonilo (Boc), incluyen acetato de etilo, tetrahidrofurano, dioxano, diclorometano, cloroformo, 1,2-dicloroetano y 2 ,2 ,2-trifluoroetanol y se usa preferiblemente diclorometano o acetato de etilo, y el disolvente se usa solo o como una mezcla. La cantidad de disolvente usada es de 2-10 vol/p, y preferiblemente de 2-6 vol/p, basándose en el peso neto del compuesto representado de fórmula (VI).

Los ejemplos de ácidos usados en la desprotección incluyen ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido fórmico, ácido trifluoroacético, ácido metanosulfónico, ácido trifluorometanosulfónico, ácido clorometanosulfónico y ácido tetrafluorobórico, y es preferible el ácido trifluoroacético. El ácido se usa dentro del intervalo de 2-10 vol/p, y preferiblemente de 2-6 vol/p basándose en el peso neto del compuesto de fórmula (VI). El ácido se añade a de -50 a 0°C y preferiblemente de -20 a 0°C. La temperatura de reacción es de -5 a 20°C y preferiblemente de -5 a 5°C. El tiempo de reacción es de 0,5-5 horas y preferiblemente de 0,5-3 horas.

Después de completarse la desprotección, la etapa para obtener un compuesto de fórmula (VII-CR) enfriando la disolución de reacción y añadiendo un disolvente deficiente se lleva a cabo de la manera que se describe a continuación. Los ejemplos del disolvente deficiente usado incluyen disolventes deficientes basados en éter y disolventes deficientes basados en éster, los ejemplos preferibles incluyen disolventes deficientes basados en éster tales como acetato de etilo, acetato de isopropilo o acetato de butilo, y el acetato de etilo es incluso más preferible. La cantidad de disolvente deficiente usada es de 1-3 veces, y preferiblemente de 1,5-2 veces, el volumen de la disolución de reacción. El disolvente deficiente, previamente enfriado hasta de -5 a 5°C, se añade a la disolución de reacción dividiéndolo o goteando. Después de completarse la adición del disolvente deficiente, se agita adicionalmente la disolución de reacción. Se filtra el material precipitado y se lava varias veces según sea necesario, se somete a secado a vacío el sólido húmedo resultante y se seca durante 10 horas o más hasta que la temperatura del material alcanza la temperatura ambiente para obtener el compuesto de fórmula (VII-CR).

La etapa para convertir un compuesto de fórmula (VII-CR):

en un compuesto de fórmula (VII) anterior se lleva a cabo de la manera descrita a continuación.

Es preferible un tampón fosfato que tenga un pH de 6,5 para el tampón usado para ajustar el pH del compuesto de fórmula (VII-CR). La concentración del tampón es de 0,1-0,5 M y es preferiblemente 0,2 M, aunque varía según el resto del ácido trifluoroacético en el compuesto de fórmula (VII-CR). La cantidad total de tampón usado es de 10 50 vol/p basándose en el peso neto del compuesto de fórmula (VII-CR).

Después de enfriar preliminarmente 5-7 vol/p de tampón fosfato hasta 0-10°C, el pH se ajusta añadiendo y disolviendo alternativamente una pequeña porción del compuesto de fórmula (VII-CR) y el tampón fosfato enfriado para que el pH sea de 4-5,5 y preferiblemente de 4,2-4,8 y finalmente se ajusta a pH 4,6, seguido por la dilución añadiendo agua a 25 vol/p en el caso de que la cantidad total sea inferior a 25 vol/p basándose en el peso neto del compuesto de fórmula (VII-CR) y concentrando a presión reducida a 20 vol/p a una temperatura de disolución de < 15°C. Además, el pH de la disolución acuosa se ajusta a 5,4 con tampón fosfato seguido por dilución con agua para obtener una disolución acuosa que tiene una concentración de 36 vol/p.

La desalación de la disolución acuosa después del ajuste de pH mencionado anteriormente se lleva a cabo según sea necesario mediante purificación en columna usando un adsorbente sintético. Los ejemplos de adsorbentes sintéticos usados incluyen Diaion HP-20 y SepaBeads SP-207, Mitsubishi Chemical, y se usa preferiblemente SepaBeads SP-207. El adsorbente sintético se usa dentro de un intervalo de 55 a 65 vol/p basándose en el peso neto del compuesto de fórmula (VII-CR). La desalación se lleva a cabo adsorbiendo la disolución acuosa mencionada anteriormente en adsorbente sintético, desalando con 65-70 vol/p de agua y eluyendo con 150-200 vol/p de isopropanol al 10%. La fracción activa está contenida a 20-25 vol/p. La cristalización se lleva a cabo usando un concentrado obtenido concentrando la fracción activa resultante a presión reducida a 5-7 vol/p a una temperatura de disolución de < 20°C. Los polimorfos cristalinos pueden estar solvatados o ser anhidros (tal como anhídrido, monohidratado o dihidratado). Las formas cristalinas I, II, III y IV existen como polimorfos cristalinos de un compuesto de fórmula (VII-1). Las formas cristalinas I y III cristalizan a 0-35°C y preferiblemente a temperatura ambiente de 20-25°C, más preferiblemente como resultado de la siembra con un cristal de siembra, mientras que la forma cristalina II puede cristalizar en ausencia de cristal de siembra en condiciones sobresaturadas. enfriando a < 15°C y añadiendo un disolvente deficiente. La forma cristalina IV puede cristalizar a temperatura ambiente usando disolventes a base de alcohol tales como metanol que disuelven un compuesto de fórmula (VII-1) así como un disolvente deficiente o pueden obtenerse recristalizando las formas cristalinas I a III en un disolvente alcohólico en condiciones de deshidratación.

Las formas cristalinas I, II y III se distinguen mediante DSC, solubilidad en isopropanol acuoso y espaciado reticular en patrones de difracción de rayos X de polvo. La forma cristalina I tiene la solubilidad más baja en isopropanol acuoso, mientras que las formas cristalinas II y III tienen una solubilidad similar.

La cristalización del compuesto de fórmula (VII) se lleva a cabo de la manera descrita a continuación. La cantidad inicial de disolución química se ajusta a una concentración que permite que la forma cristalina que tiene la menor solubilidad se disuelva de manera adecuada. En el caso del compuesto de fórmula (VII-1), la cantidad inicial es del 10-30% y preferiblemente del 10-20%. En el caso de una forma cristalina para la que se prefiere la siembra, el cristal de siembra se prepara de antemano. Los cristales de siembra de la forma cristalina I se adquieren a temperatura ambiente, mientras que los cristales de siembra de la forma cristalina III pueden obtenerse libres de contaminación mediante cristalización sucesiva dentro del intervalo del 15-25%. La cantidad de cristal de siembra usada es del 0,01-20% y preferiblemente del 0 ,01-2%.

Los ejemplos de disolventes deficientes usados incluyen metanol, etanol, isopropanol, acetona, acetonitrilo y tetrahidrofurano, y preferiblemente incluyen disolventes deficientes a base alcohol tales como metanol, etanol o isopropanol. La cantidad de disolvente deficiente se ajusta basándose en la solubilidad de modo que la pérdida de aislamiento sea < 1%. En el caso del compuesto de fórmula (VII-1), el disolvente deficiente se usa a 1-10 veces, y preferiblemente 6-7 veces, el volumen inicial de la disolución. El momento de la adición de disolvente deficiente es tal que el disolvente deficiente se hace gotear después de que la mezcla haya formado una suspensión después de la siembra en el caso de la forma cristalina I, inmediatamente después de la siembra en el caso de las formas cristalinas II y III, y sin siembra en el caso de la forma cristalina IV.

La forma cristalina IV también puede obtenerse suspendiendo y agitando la forma cristalina I, II o III en metanol, etanol o isopropanol en vez de preparar una disolución acuosa de los mismos.

El control de la temperatura de la disolución es un factor importante en cuanto al control del polimorfismo cristalino deseado y se determina haciendo referencia a la velocidad de precipitación de los polimorfos cristalinos a una temperatura establecida. En el caso de un compuesto de fórmula (VII-1), las formas cristalinas I, III y IV se controlan a 20-25°C, mientras que la forma cristalina II se controla a una temperatura de < 15°C. Además, en el caso de una forma cristalina IV obtenida suspendiendo y agitando la forma cristalina I, II o III en un disolvente en vez de preparar una disolución acuosa del mismo, junto con la solubilidad de la forma cristalina I, II o III en el disolvente, se controla a una temperatura de 20-100°C y preferiblemente de 20-65°C.

El tiempo de agitación depende de la velocidad de precipitación y la agitación se lleva a cabo durante 1-24 horas y preferiblemente 1-15 horas.

La forma cristalina del compuesto de fórmula (VII) puede obtenerse mediante filtración, lavado y secado a vacío habituales o secado por flujo continuo de los cristales precipitados. En el caso de los cristales solvatados, se evita un secado excesivo mediante el uso de medios para controlar la temperatura del material, la pérdida por secado, el secado a vacío humidificado y limitado o el secado por flujo continuo humidificado.

Ejemplos

La presente invención se describirá a continuación con más detalle por medio de los ejemplos.

Ejemplo de referencia 1

Diclorhidrato de (2S,5R)-5-(benciloxiamino)piperidin-2-carboxilato de metilo

Etapa 1

(2S,5S)-5-Hidroxipiperidin-2-carboxilato de metilo

A una disolución de cloruro de hidrógeno 2 M en metanol (12,8 l) se le añadió ácido (2S,5S)-5-hidroxipiperidin-2-carboxílico disponible comercialmente (contenido por HPLC de preetiqueta del 84%, neto 912,22 g, lavado con 3,1 l de cloruro de hidrógeno 2 M en metanol), seguido por reflujo durante 3 horas (temperaturas internas de 63-67°C). Después de enfriarse la disolución de reacción, se añadió 1,4-dioxano (12,8 l), y se eliminó por destilación el disolvente a presión reducida. Al residuo (4,1 kg) se le añadieron acetato de etilo (18,3 l) y una disolución acuosa de carbonato de potasio al 44% helada (23,7 l) para separar la fase orgánica, y se extrajo adicionalmente la fase acuosa con acetato de etilo (3 x 18,3 l). Se lavó cada una de las fases orgánicas con una disolución acuosa de carbonato de potasio al 50% (7,3 l). Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre carbonato de potasio anhidro (2,37 kg) y se filtraron, y se eliminó por destilación el disolvente a presión reducida. Se disolvió el residuo en tolueno (9,1 l), y se añadieron 9,2 g de carbón activado, seguido por agitación durante 30 minutos y filtración. Luego se eliminó por destilación el disolvente a presión reducida. Se cambió el disolvente del residuo a acetato de etilo (9,1 l) para proporcionar 1130 g del compuesto del título como un aceite de color amarillo pálido (contenido por HPLC de preetiqueta del 78,9%, neto 891,57 g, rendimiento del 89%).

Etapa 2

(2S,5S)-5-Hidroxi-1-(2,2,2-trifluoroacetil)piperidin-2-carboxilato de metilo

Se enfrió una disolución de acetato de etilo deshidratado (7,4 l) de (2S,5S)-5-hidroxipiperidin-2-carboxilato de metilo (contenido por HPLC de preetiqueta del 78,8%, neto 459,48 g) hasta -40°C, seguido por adición de trietilamina (1300 g), y luego adición gota a gota de anhídrido del ácido trifluoroacético (1349 g, lavado con 100 ml de acetato de etilo deshidratado) a de -40 a -12°C durante 30 minutos. Después de completarse la adición gota a gota, se elevó la temperatura hasta -2°C en 15 minutos, y se agitó la mezcla durante 75 minutos, y a la mezcla se le añadió adicionalmente agua (1277 ml), seguido por agitación a 25°C durante 1 hora. Se introdujo la mezcla en agua (8,4 l) (lavada con 4,5 l de acetato de etilo) y se extrajo adicionalmente con acetato de etilo (2 x 9,8 l), y se lavó secuencialmente la fase orgánica combinada con ácido clorhídrico 1 M (8,5 l), bicarbonato de sodio saturado (8,5 l), y salmuera saturada (8,5 l), se secó sobre sulfato de sodio anhidro (1,8 kg), y se filtró. Se eliminó por destilación el disolvente de la fase orgánica a presión reducida, y se le añadió al residuo acetato de etilo (3,6 l), seguido por concentración por sustitución. Luego se secó el residuo a vacío para proporcionar 793,4 g del compuesto del título (contenido por HPLC del 81,5%, neto 648,66 g, rendimiento del 88%).

Etapa 3

(2S,5R)-5-(Benciloxiamino)-1-(2,2,2-trifluoroacetil)piperidin-2-carboxilato de metilo

Se enfriaron 4,0 l de una disolución de (2S,5S)-5-hidroxi-1-(2,2,2-trifluoroacetil)piperidin-2-carboxilato de metilo (contenido por HPLC del 81,5%, neto 556,23 g) en acetonitrilo deshidratado hasta -40°C, y se añadió 2,6-lutidina (259,24 g) (lavada con 100 ml de acetonitrilo), seguido por adición gota a gota de anhídrido trifluorometanosulfónico (645,72 g) a de -43 a -37°C a lo largo de 1 hora y 10 minutos (lavado con 100 ml de acetonitrilo). Se agitó la disolución de reacción a -35°C durante 50 minutos, y luego se añadió gota a gota benciloxiamina (550,27 g) a -35°C o menos, seguido por lavado con acetonitrilo (500 ml). Después de elevar gradualmente la disolución de reacción hasta -5°C, se añadió 2,6-lutidina (259,24 g), seguido por agitación a 5°C durante 40 horas. Después de la concentración hasta 1,8 l, se diluyó la mezcla con acetato de etilo (12,4 l) y se lavó secuencialmente con agua (12,4 l), ácido cítrico al 10% (4 x 8 l 4,7 l), bicarbonato de sodio saturado (6,3 l), y salmuera saturada (7,2 l). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y luego se concentró a presión reducida. Se secó el residuo a vacío para proporcionar 867,73 g del compuesto del título (contenido por HPLC del 71,56%, rendimiento del 79%).

Etapa 4

Clorhidrato de (2S,5R)-5-(benciloxiamino)-1-(2,2,2-trifluoroacetil)piperidin-2-carboxilato de metilo

Se diluyó (2S,5R)-5-(benciloxiamino)-1-(2,2,2-trifluoroacetil)piperidin-2-carboxilato de metilo (contenido por HPLC del 70,13%, neto 673,20 g) con acetato de etilo (4,8 l), y se añadieron 48 g de carbón activado, seguido por agitación durante 1 hora. Se filtró la mezcla y se lavó con 2 l de acetato de etilo. Se diluyó el filtrado con 4,7 l de acetato de etilo, y se añadió una disolución de cloruro de hidrógeno 1 M en acetato de etilo (2,7 l) a temperatura ambiente, seguido por agitación durante 15 minutos, y luego se añadieron 28,6 l de hexano, seguido por enfriamiento hasta 0°C. Después de agitar durante 3 horas, se filtró el sólido cristalino, se lavó con hexano/acetato de etilo = 4/1 (3 l), y se secó a vacío para proporcionar 724,0 g del compuesto del título (contenido por HPLC del 91,72%, rendimiento del 90%).

Etapa 5

Diclorhidrato de (2S,5R)-5-(benciloxiamino)piperidin-2-carboxilato de metilo

Se disolvió clorhidrato de (2S,5R)-5-(benciloxiamino)-1-(2,2,2-trifluoroacetil)piperidin-2-carboxilato de metilo (contenido por HPLC del 92,01%, neto 732,25 g) en una disolución de cloruro de hidrógeno 2 M en metanol (15 l), seguido por calentamiento a reflujo durante 27 horas. Se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida hasta 3 l. Se diluyó la mezcla con 2,7 l de metanol, y luego se añadieron 16,3 l de acetato de etilo, seguido por agitación durante 1 hora. Se filtró el sólido cristalino precipitado, se lavó con acetato de etilo (3 x 1,1 l), y se secó a vacío para proporcionar 572,0 g del compuesto del título (contenido por HPLC del 98,06%, rendimiento del 92%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 81,40-1,51 (m, 1H), 1,61-1,72 (m, 1H), 1,90-1,94 (m, 1H), 2,25-2,30 (m, 1H), 2,80 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 3,19-3,27 (m, 1H), 3,51-3,55 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,87-3,91 (m, 1H), 4,68 (s, 2H), 7,27 (s, 5H); EM m/z 265 [M-2HCl+H]+.

Ejemplo de referencia 2

Ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico

Etapa 1

(2S,5R)-5-(Benciloxiamino)piperidin-2-carboxilato de metilo

A diclorhidrato de (2S,5R)-5-(benciloxiamino)piperidin-2-carboxilato de metilo (ejemplo de referencia 1, 1,319 g) se le añadieron acetato de etilo (20 ml) y carbonato de potasio al 50% (20 ml) para separar las fases. Se extrajo la fase acuosa tres veces con acetato de etilo (15 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró a presión reducida y luego se secó a vacío durante la noche para proporcionar 975 mg del compuesto del título (rendimiento del 94%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,25-1,35 (m, 1H), 1,49-1,59 (m, 1H), 1,89-2,11 (m, 2H), 2,45 (t, J = 11,7 Hz, 1H), 2,96 3,03 (m, 1H), 3,28-3,39 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 4,68 (s, 2H), 7,26-7,35 (m, 5H); EM m/z 265 [M+H]+.

Etapa 2

(2S,5R)-6-(Benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de metilo

A (2S,5R)-5-(benciloxiamino)piperidin-2-carboxilato de metilo (1,154 g, 4,37 mmol) se le añadió acetonitrilo deshidratado (198 ml), seguido por enfriamiento en hielo. A 5°C o menos, se añadieron secuencialmente gota a gota trietilamina (1,60 ml) y difosgeno (0,389 ml), seguido por agitación a 2°C durante 20 minutos. A la disolución de reacción se le añadió luego 4-dimetilaminopiridina (70,0 mg), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 10 horas. Se concentró la disolución de reacción a presión reducida y se cambió el disolvente tres veces a acetato de etilo, y se concentró la disolución hasta 30 ml. A esto se le añadieron acetato de etilo (20 ml) y agua (40 ml) para separar las fases. Se extrajo la fase acuosa separada dos veces con acetato de etilo (30 ml). Se lavó secuencialmente la fase orgánica combinada con ácido cítrico al 5% (40 ml), bicarbonato de sodio al 6,5% (30 ml), y salmuera al 5% (30 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y luego se concentró a presión reducida. Se diluyeron 1,16 g del residuo resultante con acetato de etilo (5,5 ml), se añadió n-hexano (11 ml), y se sembraron cristales de siembra y se cristalizaron. Se añadió adicionalmente n-hexano (49 ml) y se agitó a 0°C durante 1 hora, y luego se filtró el sólido cristalino, se lavó con n-hexano (60 ml), y se secó a vacío para proporcionar 882,3 mg del compuesto del título como un polvo cristalino incoloro (rendimiento del 71%).

1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 1,65-1,70 (m, 1H), 2,03-2,12 (m, 3H), 2,90 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,07 (m, 1H), 3,32 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 4,6&4,4 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,35-7,44 (m, 5H); EM m/z 291 [M+H]+.

Etapa 3

Ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico

A (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de metilo (809,0 mg, 2,79 mmol) se le añadieron tetrahidrofurano (8 ml) y agua (3,6 ml), seguido por adición gota a gota de hidróxido de litio 0,5 M (6,41 ml) a 4,9°C o menos a lo largo de 10 minutos. Después de agitar la disolución de reacción a 2°C durante 2 horas, se añadió agua (30 ml), seguido por lavado con acetato de etilo (25 ml). A la fase acuosa separada se le añadió acetato de etilo (15 ml), y se ajustó el pH a 4,0 con ácido clorhídrico 1 M, seguido por extracción dos veces con acetato de etilo (acetato de etilo: 65 ml en total). Se ajustó la fase acuosa separada a un pH de 3,4 con ácido clorhídrico 1 M, se extrajo una vez con acetato de etilo, y luego se ajustó la fase acuosa a un pH de 2,4 y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Se extrajo el extracto de acetato de etilo cinco veces en total (175 ml), se lavó con salmuera saturada (40 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y luego se concentró a presión reducida. Se diluyeron 759,1 mg del residuo resultante con acetato de etilo (5 ml), se añadió n-hexano (3 ml), y se sembraron cristales de siembra y se cristalizaron. Se añadió adicionalmente una disolución de acetato de etilo/n-hexano (5/3) (8 ml) y se agitó, y luego se añadió n-hexano (20 ml), seguido por agitación a 4°C durante 14 horas. Se filtró el sólido cristalino, se lavó con nhexano (55 ml), y luego se secó a vacío para proporcionar 633,6 mg del compuesto del título como un polvo cristalino incoloro (rendimiento del 82%).

1H-RMN (400 MHz, CDCh) 81,67 (m, 1H), 2,04-2,26 (m, 3H), 2,85 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,13 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 4,12 (m, 1H), 4,91 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 7,37-7,44 (m, 5H); EM m/z 277 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 3

(2S,5R)-6-(Benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo

Etapa 1

Ácido (2S,5R)-5-((benciloxi)amino)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-2-carboxílico

Se disolvió diclorhidrato de (2S,5R)-5-(benciloxiamino)piperidin-2-carboxilato de metilo (ejemplo de referencia 1, 65,4 g, 200 mmol) en agua (400 ml) y 1,4-dioxano (270 ml), y se enfrió en hielo la disolución. Luego se añadió hidróxido de sodio 5 M (132 ml), seguido por agitación durante 1 hora. A la disolución de reacción se le añadió ácido clorhídrico 5 M (12 ml), carbonato de potasio (27,6 g), y dicarbonato de di-terc-butilo (48 g), y se elevó la temperatura de la mezcla hasta temperatura ambiente, seguido por agitación durante la noche. Se lavó la disolución acuosa concentrada de la disolución de reacción con acetato de etilo, se ajustó a pH 3,3 con ácido cítrico monohidratado, se extrajo dos veces con acetato de etilo (500 ml), se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se filtró, y se concentró el disolvente a presión reducida y se cambió el disolvente adicionalmente a acetato de etilo para proporcionar 68,7 g del compuesto del título (cuantitativo). Se usó el compuesto en la siguiente etapa sin purificación. Se cristalizó una porción del mismo con acetato de etilo/hexano para confirmar la estructura del mismo.

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,46 (s, 9H), 1,50-1,72 (m, 2H), 1,98-2,10 (m, 2H), 3,12-3,19 (m, 2H), 4,13-4,20 (m, 1H), 4,76 (d, J = 11,5 Hz), 4,70 (d, J = 11,5 Hz), 4,85-4,92 (m, 1H), 7,26-7,35 (m, 5H); EM m/z 351 [M+H]+.

Etapa 2

Se disolvió ácido (2S,5R)-5-((benciloxi)amino)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-2-carboxílico (ejemplo de referencia 3, etapa 1,700 mg, 2 mmol) en tetrahidrofurano deshidratado (10 ml), y se enfrió hasta -20°C. A la mezcla se le añadieron secuencialmente gota a gota cloroformiato de isobutilo (300 mg) y trietilamina (444 mg), seguido por agitación durante 15 minutos. A la disolución de reacción se le añadió 1-hidroxipirrolidin-2,5-diona (253 mg), seguido por agitación durante 30 minutos y agitación adicional a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (35 ml), se lavó secuencialmente con ácido cítrico al 10% (10 ml), bicarbonato de sodio saturado (10 ml), y salmuera saturada (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se filtró, y se eliminó por destilación el disolvente a presión reducida para proporcionar 985 mg de un residuo. Se disolvió la cantidad total del residuo en cloroformo deshidratado (10 ml), y a la disolución se le añadió trietilamina (303 mg), seguido por enfriamiento en hielo. A la mezcla se le añadió trifosgeno (237 mg), seguido por agitación durante 30 minutos. A esto se le añadió luego metanol (0,1 ml), seguido por agitación durante 30 minutos. Luego se añadió gota a gota una disolución de ácido metanosulfónico (1,3 ml) en diclorometano (4,0 ml) y se agitó adicionalmente durante 30 minutos. Se añadió gota a gota la mezcla a hidrogenocarbonato de potasio 1 M helado (2,4 g/20 ml), seguido por agitación durante 30 minutos. Luego se añadió cloroformo (10 ml) para separar las fases. Se lavó secuencialmente la fase orgánica con ácido clorhídrico 1 M (10 ml), bicarbonato de sodio saturado (10 ml), y salmuera saturada (10 ml). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sembró el residuo con cristales, y al sólido se le añadió hexano/acetato de etilo (1/2, 3 ml). Luego se agitó la mezcla, se filtró, y se lavó secuencialmente con hexano/acetato de etilo (1/1, 3 ml) y hexano (3 ml) para proporcionar 556 mg del compuesto del título como cristales (rendimiento del 75%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 1,70-1,77 (m, 1H), 2,04-2,27 (m, 3H), 2,80-2,90 (m, 4H), 3,09-3,19 (m, 2H), 3,35 (s.a., 1H), 4,48 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 7,35-7,45 (m, 5H); EM m/z 374 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 4

(2S,5R)-6-(Benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (1R,2S,6R,7S)-3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.1.026]dec-8-en-4-ilo

Se disolvió ácido (2S,5R)-5-((benciloxi)amino)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-2-carboxílico (ejemplo de referencia 3, etapa 1, 14,0 g, 41,09 mmol) en tetrahidrofurano deshidratado (200 ml), seguido por enfriamiento hasta alrededor de -20°C. A la mezcla se le añadió gota a gota cloroformiato de isobutilo (6,11 g) y luego trietilamina (8,86 g), seguido por agitación a la misma temperatura durante 15 minutos. A la disolución de reacción se le añadió luego (1R,2S,6R,7S)-4-hidroxi-4-azatriciclo[5.2.1.026]dec-8-en-3,5-diona (7,87 g), seguido por agitación a la misma temperatura durante 30 minutos y agitación adicional a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (700 ml), se lavó secuencialmente con ácido cítrico al 10% helado (200 ml), bicarbonato de sodio saturado (200 ml), y salmuera saturada (200 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se filtró. Se eliminó por destilación el disolvente a presión reducida, y de nuevo se concentró por sustitución con acetato de etilo. Se disolvió la cantidad total del residuo resultante (25,1 g) (rendimiento del 92%) en cloroformo deshidratado (180 ml), y a la disolución se le añadió trietilamina (5,5 g), seguido por enfriamiento en hielo. A la mezcla se le añadió trifosgeno (4,29 g), seguido por agitación durante 30 minutos. A esto se le añadió luego metanol (1 ml), seguido por agitación durante 30 minutos. A la disolución de reacción se le añadió gota a gota una disolución de ácido metanosulfónico (23,5 ml) en diclorometano (30 ml), seguido por agitación adicional durante 30 minutos. Se añadió gota a gota la mezcla a hidrogenocarbonato de potasio 1 M helado (43,5 g/200 ml), seguido por agitación durante 30 minutos. Luego se añadió cloroformo (100 ml) para separar las fases. Se lavó secuencialmente la fase orgánica con ácido clorhídrico 1 M (200 ml), bicarbonato de sodio saturado (200 ml), y salmuera saturada (200 ml). Se volvió a extraer secuencialmente cada una de las fases acuosas con cloroformo (100 ml). Se combinaron las fases orgánicas, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se filtró. Se concentró el disolvente a presión reducida, y se disolvió el residuo resultante en cloroformo (70 ml). A la disolución se le añadió hexano (100 ml), seguido por agitación durante 30 minutos para la cristalización. A esto se le añadió secuencialmente hexano (100 ml), seguido por agitación durante 1 hora. Se filtró el material cristalino y se secó para proporcionar 15,4 g del compuesto del título (contenido del 100%, rendimiento del 88%).

HPLC: COSMOSIL 5C18 EM-II 4,6 X 150 mm, 35°C, TFA0,02 M/CH3CN = 50/50, 1,0ml/min, UV 210 nm, TR7,1 min; exceso enantiomérico > 99,9 % de e.e.: CHIRALPAK AD-H, 4,6 x 150 mm, 40°C, hexano/EtOH = 1/1, UV 210 nm, 1 ml/min, TR37,3min (cp. enantiómero 16,5 min); Pf 196°C; [a]26D+12,686° (c 0,885, CHCla); 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 1,52 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 1,70 (m, 1H), 1,78 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 2,01-2,26 (m, 3H), 3,04-3,17 (m, 2H), 3,32 (m, 3H), 3,45 (s.a., 2H), 4,41 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 6,19 (s.a., 2H), 7,33-7,46 (m, 5H); EM m/z 438 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 5

(2S,5R)-N-(2-Aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Etapa 1

{2-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (IV-1)

Se enfrió una disolución de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (4,30 g, 15,56 mmol) en acetato de etilo deshidratado (47 ml) hasta -30°C, y se añadieron secuencialmente gota a gota cloroformiato de isobutilo (2,17 g, lavado con acetato de etilo deshidratado 1 ml) y trietilamina (1,61 g, lavada con 1 ml de acetato de etilo deshidratado) a -30°C, seguido por agitación durante 1 hora. A la disolución de reacción se le añadió un disolución de 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo (3,21 g) en acetato de etilo deshidratado (4 ml) (lavado con 1 ml de acetato de etilo deshidratado), y se elevó la temperatura de la mezcla hasta 0°C a lo largo 1,5 horas, seguido por agitación durante la noche. Se lavó secuencialmente la mezcla con ácido cítrico acuoso al 8% (56 ml), bicarbonato de sodio saturado (40 ml), y salmuera saturada (40 ml), y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Luego se filtró la mezcla, se concentró hasta 5 ml, y se concentró por sustitución adicionalmente con etanol (10 ml) hasta 6 ml. A la disolución resultante se le añadió etanol (3 ml) y hexano (8 ml), y se enfrió en hielo la mezcla y se sembró con cristales, seguido por agitación durante 15 minutos. A la mezcla se le añadió gota a gota hexano (75 ml) a lo largo de 2 horas, seguido por agitación durante la noche. Se filtró el material cristalino, se lavó con hexano, y se secó a vacío para proporcionar 5,49 g del compuesto del título (neto 4,98 g, rendimiento del 74%).

HPLC: COSMOSIL 5C18 EM-II 4,6 X 150 mm, tampón fosfato 33,3 mM/MeCN = 50/50, 1,0 ml/min, UV 210 nm, TR 4,4 min; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,44 (s, 9H), 1,56-1,70 (m, 1H), 1,90-2,09 (m, 2H), 2,25-2,38 (m, 1H), 2,76 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,03 (d. a., J = 11,6 Hz, 1H), 3,24-3,47 (m, 3H), 3,84-4,01 (m, 3H), 4,90 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,44 (s.a., 1H), 7,34-7,48 (m, 5H), 9,37 (s.a., 1H); EM m/z 435 [M+H]+.

Etapa 2

{2-[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il] carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (V-1) A una disolución de {2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (3,91 g, 9,01 mmol) en metanol (80 ml) se le añadió un catalizador de paladio al 10%/carbono (húmedo al 50%, 803 mg), seguido por agitación durante 45 minutos bajo una atmósfera de hidrógeno. Se filtró la disolución de reacción a través de un lecho de Celite y se concentró a presión reducida para proporcionar 3,11 g del compuesto del título (cuantitativo).

HPLC: COSMOSIL 5C18 EM-II 4,6 X 150 mm, tampón fosfato 33,3 mM/MeCN = 75/25, 1,0 ml/min, UV 210 nm, TR 3,9 min; 1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,44 (s, 9H), 1,73-1,83 (m, 1H), 1,86-1,99 (m, 1H), 2,01-2,12 (m, 1H), 2,22 (dd. a., J = 15,0, 7,0 Hz, 1H), 3,03 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,12 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,25-3,35 (m, 2H), 3,68-3,71 (m, 1H), 3,82-3,91 (m, 3H); EM m/z 345 [M+H]+.

Etapa 3

{2-[({[(2S,5R)-7-Oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo (VI-1)

A una disolución de {2-[({[(2S,5R)-6-hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (3,09 g, 8,97 mmol) en diclorometano (80 ml), se le añadieron 2,6-lutidina (3,20 ml) y complejo de trióxido de azufre-piridina (3,58 g), seguido por agitación a temperatura ambiente durante la noche. Se vertió la disolución de reacción en bicarbonato de sodio semisaturado, y se lavó la fase acuosa con cloroformo. A la fase acuosa se le añadió hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (3,47 g) y cloroformo (30 ml), seguido por agitación durante 10 minutos. Después de extraerse la fase acuosa con cloroformo, se secó la fase orgánica resultante sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y luego se concentró a presión reducida para proporcionar 5,46 g del compuesto del título (rendimiento del 91%). HPLC: COSMOSIL 5C18 EM-II 4,6 X 150 mm, tampón fosfato 33,3 mM/MeCN = 80/20, 1,0 ml/min, UV 210 nm, TR 2,0 min; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 1,01 (t, J = 7,4 Hz, 12H), 1,37-1,54 (m, 8H), 1,45 (s, 9H), 1,57-1,80 (m, 9H), 1,85-1,98 (m, 1H), 2,14-2,24 (m, 1H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,83 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,20-3,50 (m, 11H), 3,85-3,99 (m, 3H), 4,33-4,38 (m, 1H), 5,51 (s a, 1H), 9,44 (s.a., 1H); EM m/z 425 [M-Bu4N+2H]+.

Etapa 4

A una disolución de {2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo (5,20 g, 7,82 mmol) en diclorometano (25 ml), se añadió ácido trifluoroacético (25 ml) bajo enfriamiento en hielo, seguido por agitación a 0°C durante 1 hora. Se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se lavó el residuo resultante con dietil éter, se ajustó a pH 7 con una disolución acuosa de bicarbonato de sodio, se purificó mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice (agua) y se liofilizó para proporcionar 1,44 g del compuesto del título (rendimiento del 57%).

HPLC: COSMOSIL 5C18 EM-II 4,6 X 150 mm, tampón fosfato 33,3 mM/MeCN = 99/1, 1,0 ml/min, UV 210 nm, TR 3,1 min; 1H-RMN (400 MHz, D2O) 81,66-1,76 (m, 1H), 1,76-1,88 (m, 1H), 1,91-2,00 (m, 1H), 2,00-2,08 (m, 1H), 3,02 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,15 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 3,18 (d a, J = 12,0 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 7,8, 2,2 Hz,1H), 4,04 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 4,07 (dd, J = 6,4 & 3,2 Hz, 1H); EM m/z 325 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 6

(2S,5R)-N-[2-(Metilamino)etoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-2)

{2-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(metil)carbamato de terc-butilo (IV-2)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo un producto bruto a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxílico (390 mg, 1,41 mmol) y (2-(aminooxi)etil)(metil)carbamato de tercbutilo (436 mg) y luego se sometió a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 347,8 mg del compuesto del título (rendimiento del 55%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,46 (s, 9H), 1,58-1,70 (m, 1H), 1,88-2,07 (m, 2H), 2,25-2,36 (m, 1H), 2,70-3,08 (m, 2H), 2,88 (s, 3H), 3,23-3,41 (m, 2H), 3,51-3,68 (m, 1H), 3,83-4,10 (m, 3H), 4,90 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 7,32-7,47 (m, 5H), 10,11 (s a, 1H); EM m/z 449 [M+H]+.

Etapa 2

{2-[({[(2S,5R)-6-hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(metil)carbamato de terc-butilo (V-2)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo el compuesto del título a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 1 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,46 (s, 9H), 1,73-1,83 (m, 1H), 1,86-2,00 (m, 1H), 2,01-2,13 (m, 1H), 2,14-2,28 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,04 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,08-3,18 (m, 1H), 3,43-3,55 (m, 2H), 3,65-3,72 (m, 1H), 3,79-3,88 (m, 1H), 3,92-4,05 (m, 2H); EM m/z 359 [M+H]+.

Etapa 3

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo {2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(metil)carbamato tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 1,01 (t, J = 7,2 Hz, 12H), 1,36-1,53 (m, 8H), 1,47 (s, 9H), 1,57-1,77 (m, 9H), 1,83-1,98 (m, 1H), 2,13-2,25 (m, 1H), 2,28-2,40 (m, 1H), 2,82-2,96 (m, 4H), 3,22-3,42 (m, 11H), 3,60-4,08 (m, 3H), 4,34 (s.a., 1H), 10,15 (s.a., 1H); EM m/z 437 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 149,4 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 57%).

1H-RMN (500 MHz, D2O) 81,73-1,97 (m, 2H), 1,98-2,07 (m, 1H), 2,08-2,18 (m, 1H), 2,74 (s, 3H), 3,09 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,21-3,32 (m, 3H), 4,04 (dd, J = 7,5, 2,0 Hz, 1H), 4,10-4,23 (m, 3H); EM m/z 337 [M-H]-.

Ejemplo de referencia 7

(2S,5R)-7-Oxo-N-[2-(propan-2-ilamino)etoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-3)

Etapa 1

{2-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il] carbonil}amino)oxi]etil}(propan-2-il)carbamato de tercbutilo (IV-3)

Se enfrió una disolución de ácido (2S,SR)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (414 mg, 1,50 mmol) en diclorometano deshidratado (14,1 ml) bajo una atmósfera de argón hasta 0°C, y a esto se le añadieron secuencialmente cloroformiato de isobutilo (245,9 mg) y luego trietilamina (197 mg), seguido por agitación durante 30 minutos. A esta mezcla de reacción se le añadió gota a gota (2-(aminooxi)etil)(isopropil)carbamato de terc-butilo (596 mg). Después de completarse la adición, se elevó la temperatura hasta temperatura ambiente, y se agitó la mezcla durante 1 hora. Se lavó secuencialmente la mezcla de reacción con ácido clorhídrico 0,5 M y salmuera saturada, y se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo resultante a cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 578,4 mg del compuesto del título (rendimiento del 81%).

1H-RMN (400 MHz, CDCla) 81,15 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 1,46 (s, 9H), 1,55-1,70 (m, 1H), 1,89-2,07 (m, 2H), 2,25-2,37 (m, 1H), 2,73-2,90 (m, 1H), 2,98-3,08 (m, 1H), 3,22-3,38 (m, 2H), 3,40-3,60 (m, 1H), 3,83-4,06 (m, 4H), 4,90 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,35-7,46 (m, 5H), 10,29 (s.a., 1H); EMm/z 477 [M+H]+.

Etapa 2

{2-[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(propan-2-il)carbamato de tercbutilo (V-3)

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,09-1,23 (m, 6 H), 1,46 (s, 9H), 1,73-2,27 (m, 4H), 3,06 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,08-3,50 (m, 4H), 3,64-3,73 (m, 1H), 3,79-3,98 (m, 3H); EM m/z 387 [M+H]+.

Etapa 3

(2S,5R)-7-Oxo-N-[2-(propan-2-ilamino)etoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-3) De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo {2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}(propan-2-il)carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCh) 81,01 (d, J = 7,4 Hz, 12H), 1,10-1,20 (m, 6H), 1,33-1,77 (m, 17H), 1,46 (s, 9H), 1,84-1,97 (m, 1H), 2,12-2,25 (m, 1H), 2,28-2,40 (m, 1H), 2,79-2,95 (m, 1H), 3,17-3,45 (m, 9H), 3,50-3,67 (m, 1H), 3,80-4,07 (m, 5H), 4,34 (s.a., 1H), 10,36 (s.a., 1H); EM m/z 465 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 252,1 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 57%).

1H-RMN (500 MHz, D2O) 81,28 (d, J = 6,5 Hz, 6H),1,74-1,83 (m, 1H), 1,85-1,96 (m, 1H), 1,98-2,14 (m, 2H), 3,11 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 3,22-3,30 (m, 3H), 3,40 (quint, J = 6,5 Hz, 1H), 4,01 (d a, J = 5,5 Hz, 1H), 4,09-4,18 (m, 3H); EM m/z 367 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 8

(2S,5R)-N-[2-(Dimetilamino)etoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-4)

(2S,5R)-6-Benciloxi-N-[2-(dimetilamino)etoxi]-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (IV-4)

Se enfrió una disolución de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (553 mg, 2,00 mmol) en diclorometano deshidratado (10 ml) hasta 0°C bajo una atmósfera de argón, y se añadió gota a gota cloroformiato de isobutilo (289 |l, 2,20 mmol). Luego se añadió trietilamina (293 |l), y se agitó la mezcla durante 30 minutos para preparar un anhídrido de ácido mixto en el sistema de reacción. A esta mezcla de reacción se le añadieron lentamente diclorhidrato de 2-(aminooxi)-N,N-dimetiletanamina (591 mg) y trietilamina (930 | l) mientras que se lavaba con diclorometano deshidratado (7,0 ml), seguido por agitación durante 1 hora a la misma temperatura. Después de filtrar esta mezcla de reacción, se lavó el residuo con metanol, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se disolvió el residuo resultante en diclorometano y agua, y se extrajo la fase orgánica con diclorometano, se secó sobre sulfato de magnesio y luego se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo resultante a cromatografía en columna de gel de sílice (aminosílice, cloroformo/metanol=10/1) para proporcionar 291,1 mg del compuesto del título como un aceite incoloro (rendimiento del 40%).

1H-RMN (400 MHz, CDCh) 81,45-1,85 (m, 4H), 2,29 (s, 6 H), 2,60 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,81 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 2,97 (d. a., J = 11,6 Hz, 1H), 3,28-3,34 (m, 1H), 3,92-4,07 (m, 3H), 4,90 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 7,35 7,48 (m, 5H); EM m/z 363 [M+H]+.

Etapa 2

(2S,5R)-N-[2-(Dimetilamino)etoxi]-6-hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (V-4)

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,74-1,84 (m, 1H), 1,87-1,98 (m, 1H), 2,03-2,12 (m, 1H), 2,15-2,24 (m, 1H), 2,36 (s, 6H), 2,67-2,74 (m, 2H), 3,07 (d. a., J = 11,6 Hz, 1H), 3,12 (d. a., J = 11,6 Hz, 1H), 3,67-3,72 (m, 1H), 3,83 (d. a., J = 6,4 Hz, 1H), 3,96-4,06 (m, 2H); EM m/z 273 [M+H]+.

Etapa 3

(2S,5R)-N-[2-(Dimetilamino)etoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-4)

Se diluyó la mezcla de reacción obtenida de una manera similar al ejemplo de referencia 5 con cloroformo y se lavó con agua para obtener (2S,5R)-N-[2-(dimetilamino)etoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida de piridinio. Esto se neutralizó con bicarbonato de sodio saturado acuoso y luego se purificó mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice para proporcionar 130,7 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 2 del 43%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 81,68-1,84 (m, 2H), 1,86-2,04 (m, 2H), 2,80 (s, 6H), 3,09-3,17 (m, 2H), 3,17-3,29 (m, 2H), 3,80-3,90 (m, 1H), 4,02-4,13 (m, 3H); EM m/z 353 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 9

(2S,5R)-N-{[(2S)-2-Aminopropil]oxi}-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-5)

Etapa 1

{(2S)-1-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tercbutilo (IV-5)

De una manera similar al ejemplo de referencia 7, se obtuvo un producto bruto a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (414 mg, 1,50 mmol) y (S)-(1-(aminooxi)propan-2-il)carbamato de terc-butilo (550 mg) y luego se sometió a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 585,6 mg del compuesto del título (rendimiento del 87%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,17 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,55-1,70 (m, 1H), 1,90-2,10 (m, 2H), 2,26-2,34 (m, 1H), 2,80 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,06 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,27-3,34 (m, 1H), 3,64-3,74 (m, 1H), 3,86-3,98 (m, 3H), 4,81 (d. a., J = 7,6 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 7,34-7,45 (m, 5H), 9,68 (s.a., 1H); EM m/z 449 [M+H]+.

Etapa 2

{(2S)-1-[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tercbutilo (V-5)

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,16 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,74-1,84 (m, 1H), 1,86-1,98 (m, 1H), 2,03-2,12 (m, 1H), 2,21 (dd. a., J = 15,2, 6,8 Hz, 1H), 3,06 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,14 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,68-3,72 (m, 1H), 3,74-3,87 (m, 4H); EM m/z 359 [M+H]+.

Etapa 3

(2S,5R)-N-{[(2S)-2-aminopropN]oxi}-7-oxo-6-(sulfboxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-5)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo {(2S)-1-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo). EM m/z 437[M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 117,1 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 26%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 81,17 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,66-1,89 (m, 2H), 1,91-2,08 (m, 2H), 3,02 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,18 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,47-3,58 (m, 1H), 3,82 (dd, J = 11,8, 9,4 Hz, 1H), 3,92-4,02 (m, 2H), 4,05-4,10 (m, 1H); EM m/z 339 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 10

(2S,5R)-N-{[(2R)-2-Aminopropil]oxi}-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-6)

Etapa 1

{(2R)-1-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tercbutilo (IV-6)

De una manera similar al ejemplo de referencia 7, se obtuvo un producto bruto a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (414 mg, 1,50 mmol) y (R)-(1-(aminooxi)propan-2-il)carbamato de terc-butilo (569 mg) y luego se sometió a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 625 mg del compuesto del título (rendimiento del 93%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,14 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,53-1,70 (m, 1H), 1,90-2,06 (m, 2H), 2,28-2,36 (m, 1H), 2,79 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,02 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,28-3,33 (m, 1H), 3,56-3,68 (m, 1H), 3,84 (dd, J = 11,2, 3,6 Hz, 1H), 3,92-4,04 (m, 2H), 4,66 (d a, J = 8,0 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,35 7,45 (m, 5H), 9,94 (s.a., 1H); EM m/z 449 [M+H]+.

Etapa 2

{(2R)-1-[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tercbutilo (V-6)

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,15 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,73-1,84 (m, 1H), 1,86-2,00 (m, 1H), 2,01-2,12 (m, 1H), 2,19-2,29 (m, 1H), 3,06 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,10-3,20 (m, 1H), 3,67-3,72 (m, 1H), 3,73-3,92 (m, 4H); EM m/z 359 [M+H]+.

Etapa 3

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo {(2R)-1-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propan-2-il}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo). EM m/z 437 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 212,6 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 45%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 81,17 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,66-1,78 (m, 1H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,90-2,06 (m, 2H), 3,02 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,18 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,48-3,58 (m, 1H), 3,83 (dd, J = 11,8, 9,0 Hz, 1H), 3,94 (d. a., J = 7,2 Hz, 1H), 3,98 (dd, J = 11,8, 3,4 Hz, 1H), 4,06-4,10 (m, 1H); EM m/z 339 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 11

(2S,5R)-N-(3-Aminopropoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-7)

{3-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propil}carbamato de terc-butilo (IV-7) De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo un producto bruto a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (390 mg, 1,41 mmol) y (3-(aminooxi)propil)carbamato de terc-butilo (730 mg) y luego se sometió a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 398,1 mg del compuesto del título (rendimiento del 63%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,44 (s, 9H), 1,50-1,67 (m, 1H), 1,75-1,86 (m, 2H), 1,88-2,07 (m, 2H), 2,28-2,37 (m, 2H), 2,77 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,01 (d. a., J = 11,0 Hz, 1H), 3,20-3,38 (m, 3H), 3,89-4,04 (m, 3H), 4,90 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 5,17 (s.a., 1H), 7,36-7,45 (m, 5H), 9,21 (s.a., 1H); EM m/z 449 [M+H]+.

Etapa 2

{3-[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il] carbonil}amino)oxi]propil}carbamato de terc-butilo (V-7) De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo el compuesto del título a partir del compuesto de la etapa 1 mencionada anteriormente (392,8 mg, 876 |amol) (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,43 (s, 9H), 1,73-1,99 (m, 4H), 2,01-2,12 (m, 1H), 2,13-2,24 (m, 1H), 3,07 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,09-3,21 (m, 3H), 3,69 (s.a., 1H), 3,80-3,96 (m, 3H); EM m/z 359 [M+H]+.

Etapa 3

(2S,5R)-N-(3-Aminopropoxi)-7-oxo-6-(sulfboxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-7)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo {3-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propil}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,01 (t, J = 7,4 Hz, 12H), 1,33-1,53 (m, 8H), 1,47 (s, 9H), 1,55-1,96 (m, 12H), 2,14-2,23 (m, 1H), 2,31-2,41 (m, 1H), 2,85 (d. a., J= 11,2 Hz, 1H), 3,15-3,42 (m, 11H), 3,88-4,07 (m, 3H), 4,35 (s.a., 1H), 5,27 (s a, 1H), 9,26 (s.a., 1H); EM m/z 437 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 138,4 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 47%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 8 1,67-2,05 (m, 6H), 3,00-3,19 (m, 4H), 3,82-3,94 (m, 3H), 4,05-4,10 (m, 1H); EM m/z 337 [M-H]-.

Ejemplo de referencia 12

(2S,5R)-N-[(2S)-Azetidin-2-ilmetoxi]-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-8)

Etapa 1

(2S)-2-{[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabicido[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (lV-8)

De una manera similar al ejemplo de referencia 8 , se obtuvo un producto bruto a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (553 mg, 2,00 mmol) y (S)-2-((aminooxi)metil)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (578 mg) y luego se sometió a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 760,1 mg del compuesto del título (rendimiento del 83%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,46 (s, 9H), 1,56-1,70 (m, 1H), 1,88-2,07 (m, 3H), 2,23-2,34 (m, 2H), 2,84 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,02 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,28 (s a, 1H), 3,77-4,03 (m, 4H), 4,06-4,15 (m, 1H), 4,37-4,48 (m, 1H), 4,89 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 7,34-7,44 (m, 5H), 10,63 (s.a., 1H); EM m/z 461 [M+H]+.

Etapa 2

(2S)-2-{[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (^v-8)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo el compuesto del título a partir del compuesto de la etapa 1 mencionada anteriormente (699 mg, 1,52 mmol) (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,44 (s, 9H), 1,74-1,85 (m, 1H), 1,86-1,99 (m, 1H), 2,02-2,14 (m, 1H), 2,16-2,40 (m, 3H), 3,06 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,10-3,17 (m, 1H), 3,67-3,74 (m, 1H), 3,75-3,93 (m, 3H), 4,01 (dd, J = 10,6, 10,6 Hz, 1H), 4,14 (dd, J = 10,6, 10,6 Hz, 1H), 4,37-4,47 (m, 1H); EM m/z 371 [M+H]+.

Etapa 3

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo (2S)-2-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,01 (t, J = 7,2 Hz, 12H), 1,30-2,10 (m, 19H), 1,46 (s, 9H), 2,12-2,39 (m, 3H), 2,89 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,23-3,39 (m, 9H), 3,76-3,93 (m, 3H), 3,95-4,06 (m, 1H), 4,08-4,18 (m, 1H), 4,33 (s.a., 1H), 4,37-4,50 (m, 1H); EM m/z 449 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 172,3 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 32%).

1H-RMN (500 MHz, D2O) 8 1,71-1,83 (m, 1H), 1,84-1,97 (m, 1H), 1,98-2,16 (m, 2H), 2,36-2,49 (m, 1H), 2,50-2,61 (m, 1H), 3,10 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,22-3,30 (m, 1H), 3,92-4,12 (m, 5H), 4,25-4,36 (m, 1H), 4,68-4,77 (m, 1H); EM m/z 351 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 13

(2S,5R)-7-Oxo-N-[(2R)-pirrolidin-2-ilmetoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-9) Etapa 1

(2R)-2-{[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabicido[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (IV-9)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo un producto bruto a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (390 mg, 1,41 mmol) y (R)-2-((aminooxi)metil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (796 mg) y luego se sometió a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 336 mg del compuesto del título (rendimiento del 50%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,45 (s, 9H), 1,52-1,72 (m, 1H), 1,80-2,09 (m, 6H), 2,27-2,39 (m, 1H), 2,84 (d. a., J = 12,4 Hz, 1H), 2,96-3,08 (m, 1H), 3,28-3,44 (m, 3H), 3,60-3,86 (m, 2H), 3,89-4,06 (m, 1H), 4,14-4,29 (m, 1H), 4,90 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,32-7,47 (m, 5H), 10,56 (s, 1H); EM m/z 475 [M+H]+.

Etapa 2

(2R)-2-{[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (V-9)

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,46 (s, 9H), 1,73-2,27 (m, 8H), 3,06 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,09-3,18 (m, 1H), 3,24-3,40 (m, 2H), 3,67-3,71 (m, 1H), 3,73-4,12 (m, 4H); EM m/z 385 [M+H]+.

Etapa 3

(2S,5R)-7-Oxo-N-[(2R)-pirrolidin-2-ilmetoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-9) De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo (2R)-2-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfboxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}pirrolidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,01 (t, J = 7,4 Hz, 12H), 1,34-1,51 (m, 8H), 1,46 (s, 9H), 1,55-1,78 (m, 10H), 1,80-2,01 (m, 4H), 2,11-2,23 (m, 1H), 2,29-2,42 (m, 1H), 2,88 (d. a., J = 11,2 Hz, 1H), 3,21-3,43 (m, 10H), 3,60-3,86 (m, 2H), 3,88-4,07 (m, 2H), 4,16-4,28 (m, 1H), 4,34 (s.a., 1H), 10,62 (s a, 1H); EM m/z 463 [M-Bu4N+2H]+.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 77,4 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 30%).

1H-RMN (500 MHz, D2O) 81,66-2,18 (m, 8H), 3,14 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,23 (d. a., J = 12,8 Hz, 1H), 3,30 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,89 (ddd, J = 8,2, 8,2, 3,4 Hz, 1H), 3,92-4,01 (m, 2H), 4,09-4,18 (m, 2H); EM m/z 365 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 14

(2S,5R)-7-Oxo-N-[(3R)-piperidin-3-ilmetoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-10)

Etapa 1

(3R)-3-{[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (IV-10)

De una manera similar al ejemplo de referencia 8 , se obtuvo un producto bruto a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (390 mg, 1,41 mmol) y (R)-3-((aminooxi)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (527 mg) y luego se sometió a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 333 mg del compuesto del título (rendimiento del 48%).

1H-RMN (400 MHz, CDCla) 81,15-2,10 (m, 8H), 1,45 (s, 9H), 2,25-2,40 (m, 1H), 2,70-3,08 (m, 4H), 3,27-3,37 (m, 1H), 3,65-4,00 (m, 5H), 4,90 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,34-7,46 (m, 5H), 9,22 (s.a., 1H); EM m/z 489 [M+H]+.

Etapa 2

(3R)-3-{[({[(2S,5R)-6-hidroxi-7-oxo-1,6-diazabicido[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (V-10)

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,24-1,37 (m, 1H), 1,40-1,56 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,64-1,73 (m, 1H), 1,75-2,00 (m, 4H), 2,03-2,13 (m, 1H), 2,15-2,26 (m, 1H), 2,65-2,95 (m, 2H), 3,06 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,13 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,67 3,91 (m, 5H), 4,01-4,08 (m, 1H); EM m/z 399 [M+H]+.

Etapa 3

(2S,5R)-7-Oxo-N-[(3R)-piperidin-3-ilmetoxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo [3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-10) De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo (3R)-2-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}piperidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCh) 81,01 (dd, J = 7,6&6,8 Hz, 12H), 1,11-1,99 (m, 23H), 1,46 (s, 9H), 2,12-2,24 (m, 1H), 2,30 2,42 (m, 1H), 2,67-2,96 (m, 3H), 3,19-3,38 (m, 9H), 3,70-3,99 (m, 5H), 4,35 (s.a., 1H), 9,16 (s.a., 1H); EM m/z 477 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 106 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 41%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 8 1,16-1,28 (m, 1H), 1,54-1,88 (m, 5H), 1,92-2,16 (m, 3H), 2,72 (t, J = 12,2 Hz, 1H), 2,81 (ddd, J = 12,8&12,8&3,5 Hz, 1H), 3,02 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,15-3,28 (m, 2H), 3,37-3,44 (m, 1H), 3,70 (dd, J = 10,3&7,6 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 10,3&5,0 Hz, 1H), 3,88-3,94 (m, 1H), 4,06-4,10 (m, 1H); EM m/z 377 [M-H]-.

Ejemplo de referencia 15

(2S,5R)-7-Oxo-N-[(3S)-pirrolidin-3-iloxi]-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-11)

Etapa 1

(3S)-3-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]pirrolidin-1-carboxilato de tercbutilo (IV-11)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se sometió un producto bruto obtenido a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (553 mg, 2,00 mmol) y (S)-3-(aminooxi)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (606 mg) a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 920,4 mg del compuesto del título (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCh) 81,46 (s, 9H), 1,61-1,68 (m, 1H), 1,89-2,09 (m, 3H), 2,15-2,19 (m, 1H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,75 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 2,95-3,06 (m, 1H), 3,31 (s a, 1H), 3,35-3,68 (m, 4H), 3,97 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,60 (d. a., J= 23,2 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 7,26-7,43 (m, 5H), 9,08 (d. a., J = 23,2 Hz, 1H); EM m/z 461 [M+H]+.

Etapa 2

(3S)-3-[({[(2S,5R)-6-hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]pirrolidin-1-carboxilato de tercbutilo (V-11)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo el compuesto del título a partir del compuesto de la etapa 1 mencionada anteriormente (869 mg, 1,89 mmol) (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,47 (s, 9H), 1,75-2,12 (m, 4H), 2,13-2,25 (m, 2H), 3,05 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,13 (d. a., J = 12,0 Hz, 1H), 3,25-3,50 (m, 2H), 3,61 (d. a., J = 13,2 Hz, 1H), 3,70 (s.a., 1H), 3,86 (d a, J = 7,2 Hz, 1H), 4,32-4,38 (m, 1H), 4,54-4,62 (m, 1H); EM m/z 371 [M+H]+.

Etapa 3

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo (3S)-3-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]pirrolidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo (cuantitativo) a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2. EM m/z 449 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 170,7 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 26%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 81,71-1,92 (m, 2H), 1,95-2,18 (m, 3H), 2,21-2,30 (m, 1H), 3,07 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 3,24 (d. a., J = 12,2 Hz, 1H), 3,31-3,45 (m, 3H), 3,51 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,99 (d. a., J = 6,0 Hz, 1H), 4,10-4,14 (m, 1H), 4,72 4,77 (m, 1H); EM m/z 349 [M-H]-.

Ejemplo de referencia 16

(2S,5R)-N-(Azetidin-3-ilo metoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-12)

3-{[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de tercbutilo (IV-12)

De una manera similar al ejemplo de referencia 8 , se sometió un producto bruto obtenido a partir de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxílico (553 mg, 2,00 mmol) y 3-((aminooxi)metil)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (564 mg) a purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 699,7 mg del compuesto del título (rendimiento del 76%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,43 (s, 9H), 1,54-1,70 (m, 1H), 1,87-2,06 (m, 2H), 2,27-2,35 (m, 1H), 2,75 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 2,80-2,90 (m, 1H), 3,01 (d. a., J = 11,6 Hz, 1H), 3,32 (s.a., 1H), 3,68-3,76 (m, 2H), 3,94 (d. a., J = 7,6 Hz, 1H), 4,00-4,15 (m, 4H), 4,90 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 7,35-7,44 (m, 5H), 9,08 (s a, 1H); EM m/z 461 [M+H]+.

Etapa 2

3-{[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de tercbutilo (V-12)

De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo el compuesto del título a partir del compuesto de la etapa 1 mencionada anteriormente (642 mg, 1,39 mmol) (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 81,43 (s, 9H), 1,74-1,85 (m, 1H), 1,86-1,97 (m, 1H), 2,04-2,13 (m, 1H), 2,16-2,24 (m, 1H), 2,84-2,94 (m, 1H), 3,05 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,13 (d. a., J = 11,6 Hz, 1H), 3,68-3,82 (m, 3H), 3,83 (d. a., J = 6,8 Hz, 1H), 3,97-4,06 (m, 4H); EM m/z 371 [M+H]+.

Etapa 3

(2S,5R)-N-(Azetidin-3-ilmetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-12) De una manera similar al ejemplo de referencia 5, se obtuvo 3-{[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de tetrabutilamonio y terc-butilo a partir de la cantidad total del compuesto de la etapa 2 (cuantitativo).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 1,01 (t, J = 7,2 Hz, 12H), 1,37-1,51 (m, 8H), 1,46 (s, 9H), 1,54-1,75 (m, 9H), 1,82-1,97 (m, 1H), 2,13-2,25 (m, 1H), 2,29-2,40 (m, 1H), 2,77-2,95 (m, 2H), 3,24-3,40 (m, 9H), 3,64-4,16 (m, 7H), 4,36 (s.a., 1H), 9,16 (s.a., 1H); EM m/z 449 [M-Bu4N]-.

Se desprotegió la cantidad total de la sal de tetrabutilamonio mencionada anteriormente con ácido trifluoroacético, y después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de octadecil-sílice, se obtuvieron 164,7 mg del compuesto del título (rendimiento de la etapa 3 del 34%).

1H-RMN (400 MHz, D2O) 8 1,65-1,89 (m, 2H), 1,92-2,06 (m, 2H), 3,06 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,10-3,22 (m, 2H), 3,90 4,00 (m, 5H), 4,07-4,14 (m, 3H); EM m/z 351 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 17

(3aR,7aS)-2-Hidroxi-3a,4,7,7a-tetrahidro-1H-isoindol-1,3(2H)-diona

Se disolvió sulfato de hidroxilamina (24,975 g, 0,152 mol) en agua (100 ml), y se añadió (3aR,7aS)-3a,4,7,7atetrahidroisobenzofuran-1,3-diona (45,228 g). A la mezcla se le añadió una disolución acuosa de hidróxido de sodio al 25% (50 g) en pequeñas porciones a lo largo de 15 minutos, seguido por agitación a 90°C durante 2 horas. Se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente. Se filtró por succión el sólido cristalino precipitado, seguido por deslicuar durante 30 minutos. Se secaron a vacío los cristales húmedos a 50°C durante 2 días para proporcionar 42,87 g del compuesto del título (rendimiento del 87%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 82,20-2,31 (m, 2H), 2,56-2,65 (m, 2H), 3,08-3,14 (m, 2H), 5,91 (dt, J = 0,9, 2,7 Hz, 2H); EM m/z 166 [M-H]-.

Ejemplo de referencia 18

(2S,5R)-6-(Benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (3aR,7aS)-1,3-dioxo-3a,4,7,7a-tetrahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo

(2S,5R)-5-((Benciloxi)amino)piperidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-((3aR,7aS)-1,3-dioxo-3a,4,7,7a-tetrahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo)

Se disolvió ácido (2S,5R)-5-((Benciloxi)amino)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-2-carboxílico (ejemplo de referencia 3, etapa 1,3,504 g, 10 mmol) en tetrahidrofurano deshidratado (50 ml), seguido por enfriamiento hasta-20°C. A la mezcla se le añadió gota a gota cloroformiato de isobutilo (1,51 g) y luego trietilamina (2,17 g), seguido por agitación a la misma temperatura durante 15 minutos. Luego, a la disolución de reacción se le añadió (3aR,7aS)-2-hidroxi-3a,4,7,7atetrahidro-1H-isoindol-1,3(2H)-diona (ejemplo de referencia 17, 1,84 g), seguido por agitación a la misma temperatura durante 30 minutos y luego a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (200 ml), se lavó secuencialmente con ácido cítrico al 10% helado (60 ml), bicarbonato de sodio saturado (60 ml), y salmuera saturada (60 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se filtró. Se sometió el residuo obtenido concentrando el filtrado a presión reducida a cromatografía en columna de gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 2/1) para proporcionar 4,689 g del compuesto del título como un sólido esponjoso incoloro (rendimiento del 94%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,47 (sa, 9H), 1,59-1,75 (m, 2H), 2,04-2,32 (m, 2H), 2,16-2,35 (m, 2H), 2,61 (d, J = 15,2 Hz, 2H), 3,14-3,24 (m, 4H), 4,15-4,22 (m, 1H), 4,71 (q, J=11,6 Hz, 2H), 5,03 (sa, 1H), 5,97 (sa, 2H), 7,26-7,38 (m, 5H); EM m/z 500 [M+H]+.

Etapa 2

Se disolvió compuesto de la etapa 1 mencionada anteriormente (4,689 g, 9,386 mmol) en cloroformo deshidratado (50 ml), y se añadió trietilamina (1,40 g), seguido por enfriamiento en hielo. A la mezcla se le añadió trifosgeno (1,09 g), seguido por agitación durante 0,5 horas, y se confirmó la finalización de la reacción para el compuesto del título mediante CCF. A la mezcla se le añadió metanol (0,255 ml) bajo enfriamiento en hielo, seguido por agitación durante 30 minutos. Posteriormente, se añadió ácido metanosulfónico (8,89 g), seguido por agitación durante 30 minutos. Se confirmó la finalización de la reacción para el compuesto del título mediante CCF. Se añadió gota a gota la mezcla a una disolución acuosa de hidrogenocarbonato de potasio 1 M helada (11,1 g/100 ml), seguido por agitación durante 0,5 horas. Luego se añadió cloroformo (30 ml) para separar las fases. Se lavó secuencialmente la fase orgánica con ácido clorhídrico 1 M (70 ml), bicarbonato de sodio saturado (70 ml) y salmuera saturada (70 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Se disolvió el residuo en cloroformo (16 ml), y se añadió hexano (24 ml), seguido por agitación durante 15minutos. Además, se añadió hexano (8 ml), seguido por agitación y envejecimiento durante 15minutos. Se separó por filtración el sólido precipitado, se lavó con una mezcla de cloroformo/hexano (2/3), y se secó a presión reducida para proporcionar 3,51 g del compuesto del título como un polvo cristalino incoloro (rendimiento del 88%).

1H-RMN (400 MHz, CDCla) 81,67-1,77 (m, 1H), 2,08 (d, J = 14,2 Hz, 1H), 2,14-2,26 (m, 2H), 2,30 (d, J = 13,8 Hz, 2H), 2,55-2,66 (m, 2H), 3,10-3,24 (m, 4H), 3,34 (sa, 1H), 4,45 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 5,97 (sa, 2H), 7,34-7,45 (m, 5H); EM m/z 426 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 19

(3aR,7aS)-2-Hidroxihexahidro-1H-isoindol-1,3(2H)-diona

Se disolvió sulfato de hidroxilamina (24,975 g, 0,152 mol) en agua (75 ml), y se añadió (3aR,7aS)-hexahidroisobenzofuran-1,3-diona (48,000 g). A la mezcla se le añadió una disolución acuosa de hidróxido de sodio al 25% (50 g) en pequeñas porciones a lo largo de 15 minutos, seguido por agitación a 90°C durante 1 hora. Se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se extrajo dos veces con cloroformo 50 ml, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró. Se concentró el filtrado a presión reducida, se disolvió el residuo en cloroformo, se separaron por filtración las impurezas, y se concentró el disolvente a presión reducida. Se disolvió el residuo añadiendo acetato de etilo, se concentró la disolución a presión reducida y se secó a vacío durante 2 días adicionales para proporcionar 49,35 g del compuesto del título como un sólido incoloro (rendimiento del 94%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 1,45 (dt, J = 3,0, 5,9 Hz, 4H), 1,71-1,90 (m, 4H), 2,84-2,92 (m, 2H), 6,01 (sa, 1H); EM m/z 168 [M-H]-.

Ejemplo de referencia 20

(2S,5R)-6-(Benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (3aR,7aS)-1,3-dioxohexahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo

(2S,5R)-5-((Benciloxi)amino)piperidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-((3aR,7aS)-1,3-dioxohexahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo)

Se disolvió ácido (2S,5R)-5-((benciloxi)amino)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-2-carboxílico (ejemplo de referencia 3, etapa 1,3,504 g, 10 mmol) en tetrahidrofurano deshidratado (50 ml), seguido por enfriamiento hasta-20°C. A la mezcla se le añadió gota a gota cloroformiato de isobutilo (1,51 g) y luego trietilamina (2,17 g), seguido por agitación a la misma temperatura durante 15 minutos. Luego, a la disolución de reacción se le añadió (3aR,7aS)-2-hidroxihexahidro-1H-isoindol-1,3(2H)-diona (ejemplo de referencia 19, 1,86 g), seguido por agitación a la misma temperatura durante 30 minutos y luego a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (200 ml), se lavó secuencialmente con ácido cítrico al 10% helado (60 ml), bicarbonato de sodio saturado (60 ml), y salmuera saturada (60 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se filtró. Se sometió el residuo obtenido concentrando el filtrado a presión reducida a cromatografía en columna de gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 2/1) para proporcionar 4,521 g del compuesto del título como un sólido esponjoso incoloro (rendimiento del 90%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 1,35-1,58 (m, 13H), 1,62 (sa, 1H), 1,76 (sa, 2H), 1,90 (sa, 4H), 1,95-2,15 (m, 2H), 3,00 (sa, 2H), 3,15-3,30 (m, 2H), 4,16-4,25 (m, 1H), 4,72 (q, J = 11,6 Hz, 2H), 5,30-5,53 (m, 1H), 7,26-7,38 (m, 5H); EM m/z 502 [M+H]+.

Etapa 2

Se disolvió el compuesto de la etapa 1 mencionada anteriormente (4,521 g, 9,01 mmol) en cloroformo deshidratado (50 ml), y trietilamina (1,350 g), seguido por enfriamiento en hielo. A la mezcla se le añadió trifosgeno (1,043 g), seguido por agitación durante 0,5 horas, y se confirmó la finalización de la reacción para el compuesto del título mediante CCF. A la mezcla se le añadió metanol (0,245 ml) bajo enfriamiento en hielo, seguido por agitación durante 30 minutos. Posteriormente, se añadió ácido metanosulfónico (8,53 g), seguido por agitación durante 30 minutos. Se confirmó la finalización de la reacción para el compuesto del título mediante CCF. Se añadió gota a gota la mezcla a una disolución acuosa de hidrogenocarbonato de potasio 1 M helada (10,668 g/90 ml), seguido por agitación durante 0,5 horas. Luego se añadió cloroformo (33 ml) para separar las fases. Se lavó secuencialmente la fase orgánica con ácido clorhídrico 1 M (70 ml), bicarbonato de sodio saturado (70 ml), y salmuera saturada (70 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía en columna de gel de sílice (cloroformo/acetato de etilo = 6/1) para proporcionar 3,106 g del compuesto del título como un sólido incoloro (rendimiento del 81%).

1H-RMN (400 MHz, CDCls) 81,50 (sa, 4H), 1,62 (sa, 1H), 1,68-1,84 (m, 1H), 1,91 (sa, 4H), 2,04-2,27 (m, 2H), 3,02 (sa, 2H), 3,15 (s, 2H), 3,35 (sa, 1H), 4,47 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 7,34-7,45 (m, 5H); EM m/z 428 [M+H]+.

Ejemplo de referencia 21

{2-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (IV-1) Ejemplo de referencia 21a

Se enfrió una disolución de ácido (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxflico (4,80 kg, 17,373 mol) en acetato de etilo deshidratado (62 l) hasta -30°C, se añadieron secuencialmente gota a gota cloroformiato de isobutilo (2,52 kg) y trietilamina (l,85 kg), seguido por agitación a -30°C durante 15 minutos. A la disolución de reacción se le añadió una disolución de 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo en acetato de etilo deshidratado (15% en peso, 23,45 kg) a lo largo de 30 minutos (lavado con 2 l de acetato de etilo deshidratado), y se elevó la temperatura hasta 0°C a lo largo de 1 hora. Se lavó secuencialmente la mezcla con ácido cítrico al 8% (65 l), bicarbonato de sodio al 5% (60 l), y agua (60 l), y se concentró hasta 24 l. Al concentrado se le añadió acetato de etilo (24 l), y se concentró por sustitución la mezcla dos veces hasta 24 l. Al concentrado resultante se le añadió acetato de etilo (29 l) y hexano (72 l), seguido por agitación durante la noche. A la mezcla se le añadió gota a gota hexano (82 l), seguido por agitación durante 2 horas. Se filtraron los cristales precipitados, se lavaron con hexano, y se secaron a vacío para proporcionar 5,51 kg del compuesto del título (rendimiento del 76%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del ejemplo de referencia 5, etapa 1.

Ejemplo de referencia 21b

Se disolvió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo (ejemplo de referencia 3, 373 mg, 1 mmol) en diclorometano deshidratado (5 ml), y a esto se le añadió una disolución de 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo (194 mg) en diclorometano deshidratado (2 ml, lavado con 1 ml) bajo enfriamiento en hielo, seguido por agitación durante 1 hora. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (65 ml), se lavó secuencialmente con ácido cítrico al 10% (20 ml), bicarbonato de sodio saturado (20 ml), y salmuera saturada (20 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró, y se concentró a presión reducida para proporcionar 362 mg del compuesto del título (rendimiento del 83%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del ejemplo de referencia 5, etapa 1.

Ejemplo de referencia 21c

Se suspendió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (1R,2S,6R,7S)-3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.1.026]dec-8-en-4-ilo (ejemplo de referencia 4, 49,7 g, 113,6 mmol) en acetato de etilo deshidratado (650 ml). A la suspensión se le añadieron una disolución de 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo (24,2 g) en acetato de etilo deshidratado (134 ml) y trietilamina (13,8 g) a temperatura ambiente, seguido por agitación durante 2,5 horas. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (0,8 l), se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 0,25 M helado (1 l), bicarbonato de sodio saturado (1 l), y agua (1 l), y se concentró a presión reducida para proporcionar 48,08 g del compuesto del título (rendimiento del 98%, razón de área del HPLC 99% o más). Los datos instrumentales eran coherentes con los del ejemplo de referencia 5, etapa 1.

Ejemplo de referencia 21d

Se disolvió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxilato de (3aR,7aS)-1,3-dioxo-3a,4,7,7atetrahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo (ejemplo de referencia 18, 425 mg, 1 mmol) en cloroformo deshidratado (5 ml), y se añadieron una disolución de 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo (211 mg) en acetato de etilo deshidratado (1,41g) y trietilamina (121 mg) bajo enfriamiento en hielo, seguido por agitación durante 30 minutos. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (75 ml), se lavó secuencialmente con ácido cítrico al 10% (35 ml), bicarbonato de sodio saturado (35 ml), y salmuera saturada (35 ml), y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía en columna de gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 1/2) para proporcionar 481 mg del compuesto del título (cuantitativo). Los datos instrumentales eran coherentes con los del ejemplo de referencia 5, etapa 1.

Ejemplo de referencia 21e

Se disolvió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (3aR,7aS)-1,3-dioxohexahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo (ejemplo de referencia 20, 427 mg, 1 mmol) en cloroformo deshidratado (5 ml), y se añadieron una disolución de 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo (211 mg) en acetato de etilo deshidratado (1,41 g) y trietilamina (121 mg) bajo enfriamiento en hielo, seguido por agitación durante 30 minutos. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (75 ml), se lavó secuencialmente con ácido cítrico al 10% (35 ml), bicarbonato de sodio saturado (35 ml), y salmuera saturada (35 ml), y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía en columna de gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 1/2) para proporcionar 418 mg del compuesto del título (rendimiento del 96%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del ejemplo de referencia 5, etapa 1.

Ejemplo de referencia 22

{2-[({[(2S,5R)-6-Hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (V-1)

A una disolución de {2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (IV-1, 5,52 kg, 12,705 mol) en metanol (85 l), se le añadió catalizador de paladio al 10%/carbono (húmedo al 50%, 0,55 kg), seguido por agitación durante 1 hora bajo presión de hidrógeno (0,1 MPa). Se filtró el catalizador, y se lavó el sólido con metanol (25 l). Se combinaron los filtrados y se concentraron a presión reducida hasta 39 l a una temperatura del líquido de < 10°C. Al concentrado se le añadió acetonitrilo (44 l), y se concentró por sustitución la mezcla hasta 39 l a una temperatura del líquido de < 10°C. Se realizó esta operación dos veces. Se enfrió la mezcla hasta 0°C, seguido por agitación durante la noche. Se filtraron los cristales precipitados, se lavaron con acetonitrilo (24 l), y se secaron a vacío para proporcionar 3,63 kg del compuesto del título (rendimiento del 83%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del compuesto del ejemplo de referencia 5, etapa 2.

Ejemplo de referencia 23

Ejemplo de referencia 23a

A acetonitrilo (51 l) se le añadieron secuencialmente agua (51 ml), {2-[({[(2S,5R)-6-hidroxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (V-1, 3,53 kg, 10,251 mol), complejo de trióxido de azufre-piridina (3,95 kg), y 2,6-lutidina (2,21 kg), seguido por agitación a 35-45°C durante la noche. Se filtró la mezcla para retirar los compuestos insolubles, y se lavó el sólido con acetonitrilo (11 l). Se combinaron los filtrados y se concentraron hasta 17 l. Se enfrió el concentrado hasta < 10°C, y se separaron las fases con dihidrogenofosfato de sodio al 9% (60 l) y acetato de etilo (113 l). Se volvió a extraer la fase orgánica con dihidrogenofosfato de sodio al 9% (11 l). A la fase acuosa resultante se le añadieron acetato de etilo (113 l), una disolución acuosa de hidrogenosulfato de tetrabutilamonio al 30% (12,87 kg), y dihidrogenofosfato de sodio al 37% (56,5 kg), seguido por agitación durante 15 minutos. Se separó la fase orgánica, se lavó con dihidrogenofosfato de sodio al 20% (60 l), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro (2,5 kg), se filtró, y luego se concentró a presión reducida. Se precipitaron los cristales del compuesto del título en las disoluciones concentradas, y se disolvieron en acetato de etilo, y se ajustó el volumen total de líquido hasta 20 l para proporcionar 32,55 kg de una disolución del compuesto del título en acetato de etilo (neto 6,25 kg, rendimiento del 92%). Se sometió la disolución a la siguiente etapa sin purificación adicional.

Ejemplo de referencia 23b:

Síntesis en una etapa a partir de {2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (IV-1)

A una disolución de{2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (IV-1, 515 mg, 1,16 mmol) en isopropanol (7 ml) se le añadieron agua (5 ml), complejo de trióxido de azufretrimetilamina (196 mg), trietilamina (0,0407 ml), y catalizador de paladio al 10%/carbono (húmero al 53,3%, 95,0 mg) bajo una atmósfera de hidrógeno, seguido por agitación a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió adicionalmente un catalizador de paladio al 10%/carbono (húmedo al 53,3%, 63,5 mg), y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas bajo una atmósfera de hidrógeno y luego se sustituyó con gas argón, seguido por agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró el catalizador en la disolución de reacción a través de un lecho de Celite y se lavó con isopropanol/agua (1/1,40 ml), y luego se filtró a través de MF (Millipore) y se lavó con isopropanol/agua (1/1, 15 ml). Luego se eliminó por destilación el isopropanol a presión reducida. A la disolución acuosa resultante se le añadieron dihidrogenofosfato de sodio (5,29 g), acetato de etilo (20 ml), e hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (476 mg), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 10 minutos. Luego se extrajo la mezcla dos veces con acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró, y se concentró para proporcionar 702 mg del compuesto del título (rendimiento del 91%).

Ejemplo de referencia 23c: síntesis secuencial a partir de {2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (IV-1)

A una disolución de{2-[({[(2S,5R)-6-benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de terc-butilo (IV-1, 5,0 g, 11,51 mmol) en isopropanol (80 ml) se le añadió catalizador de paladio al 10%/carbono (húmedo al 50%, 0,5 g), seguido por agitación durante 2 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. Se filtró el catalizador en la disolución de reacción a través de un lecho de Celite, y se lavó el sólido con isopropanol (15 ml). Luego se combinaron los filtrados, y a esto se le añadieron agua (47,5 ml), complejo de trióxido de azufre-trimetilamina (1,8 g) y trietilamina (0,237 g), seguido por agitación a 25-30°C durante 24 horas. Se concentró la mezcla hasta 47 ml a presión reducida. A esto se le añadieron dihidrogenofosfato de sodio (11,87 g), acetato de etilo (200 ml) e hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (4,688 g), seguido por agitación durante 10 minutos. Se separó la fase orgánica, y se extrajo adicionalmente la fase acuosa con acetato de etilo (2 x 100 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de magnesio y se filtró. Se concentró el disolvente orgánico del filtrado a presión reducida para proporcionar una disolución del compuesto del título en acetato de etilo (neto 6,522 g, rendimiento del 85%)

Ejemplo 1

(2S,5R)-N-(2-Aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1-CR)

Ejemplo 1a

Se enfrió una disolución de {2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo (VI-1, 788 g, neto 467,1 g, 0,701 mol) en diclorometano (934 ml) hasta -20°C bajo una corriente de nitrógeno, se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (934 ml) a lo largo 15 minutos, y se elevó la temperatura hasta 0°C, seguido por agitación durante 1 hora. Se enfrió la disolución de reacción hasta -20°C, y a esto se le añadió gota a gota diisopropil éter (4,17 l), y se elevó la temperatura de la mezcla hasta -6°C, y se agitó la mezcla durante 1 hora. Se filtraron los precipitados y se lavaron con diisopropil éter (2 x 1 l), y se secó el sólido húmedo a vacío para proporcionar 342,08 g del compuesto del título (neto 222,35 g, rendimiento del 98%, razón de área del HPLC 96,1%, Ce/TFA 27% en moles).

Ejemplo 1b

Se enfrió {2-[({[(2S,5R)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]etil}carbamato de tetrabutilamonio y terc-butilo (VI-1, disolución de acetato de etilo de 15,60 kg, neto 2,98 kg) hasta una temperatura del líquido de < 0°C y se concentró hasta 9 l. Al concentrado se le añadió diclorometano (9 l), y se enfrió la mezcla hasta -20°C bajo una corriente de nitrógeno. A la mezcla se le añadió gota a gota ácido trifluoroacético (16,5 l) a < -5°C a lo largo de aproximadamente 1 hora, seguido por agitación a de -5 a 0°C durante 1 hora. A la disolución de reacción se le añadió acetato de etilo enfriado hasta 0°C en porciones a 7°C o menos (4 x 8,3 l, 24,6 l, 57,8 l en total), seguido por agitación a 0°C durante la noche. Se filtraron los precipitados, se lavaron con acetato de etilo (13,5 l, 9 l) y se secaron a vacío para proporcionar 1,74 kg del compuesto del título (neto 1,43 kg, rendimiento del 99%, razón de área de1HPLC 99,1%, CE/TFA 10% en moles, GC/EtOAc 14%).

Ejemplo 2

Forma cristalina I de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1) Ejemplo 2a

Se enfrió en hielo un tampón ácido acético 0,5 M (pH 5,5, 35 ml), y a esto se le añadieron (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VlI-1-CR, 36 g) e hidróxido de sodio 5 M enfriado sodio de manera alternada para ajustar el a 5,5. Se sometió la mezcla a cromatografía en columna de gel de octadecilsílice (3,6 l) y se eluyó con agua. Se recogieron las fracciones activas y se concentraron a presión reducida con un baño de agua de 35°C. Se secaron los cristales precipitados a vacío durante la noche. Se pulverizaron 2,10 g de los cristales resultantes, y luego se añadió isopropanol/agua (19/1, 13 ml) bajo enfriamiento en hielo, seguido por trituración a 0°C durante 1 hora. Se filtró la suspensión, seguido por lavado con isopropanol/agua enfriados (19/1, 80 ml). Se secaron los cristales resultantes a vacío para proporcionar 1,68 g del compuesto del título (rendimiento del 80%). Pico endotérmico de DSC: 111°C. Solubilidad en una disolución acuosa de isopropanol al 60%: 0,44% (10°C), 0,48% (20°C). El compuesto del título mostró un patrón de picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo tal como se muestra en la tabla 4 y la figura 1 a continuación. Los parámetros del instrumento y del ensayo fueron de la siguiente manera: el difractómetro de rayos X de polvo: RINT2100 de Rigaku Corporation; fuente de rayos X: CuKal, voltaje del tubo: 40 kV, corriente del tubo: 40 mA, velocidad de barrido 4°/min, intervalo de barrido: 20 = 3 40°.

[Tabla 4]

Ejemplo 2b

Se disolvió (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1-CR, neto 4,253 g) en un tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5, 73 ml) y se ajustó el pH a 5,5, seguido por dilución con agua (20 ml). Se concentró la mezcla hasta 130 ml, se sometió a purificación con resina (SP207, 260 ml), y se eluyó con agua (238 ml) y una disolución acuosa de isopropanol al 10% (780 ml). Se recogieron las fracciones activas y se concentraron hasta 30 ml a presión reducida. A esto se le introdujo carbón activado (Seisei Shirasagi, 87 mg), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se separó por filtración el carbón activado con un filtro de membrana, y se sometió el filtrado a liofilización para proporcionar 4,07 g de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1) en una forma amorfa (rendimiento del 95,7%). Se disolvió este compuesto amorfo (0,2 g) en agua (0,8 ml), y se le añadió a la disolución isopropanol (1,2 ml) y se sembró con la forma cristalina I (ejemplo 52, 1 mg) a temperatura ambiente, seguido por agitación con una barra de agitación durante 3 horas. Se filtraron los cristales precipitados y se secaron para proporcionar 0,1 g del compuesto del título (rendimiento del 50%). Los cristales mostraron el mismo patrón de picos que los cristales del ejemplo 2a en el patrón de difracción de rayos X de polvo.

Ejemplo 2c

Se añadieron de manera alternada (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1-CR, neto 2,113 g) y un tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5, 73 ml), y se ajustó el pH a 4,6, seguido por dilución con agua (27 ml). Se concentró la mezcla hasta 80 ml a presión reducida, y luego se ajustó el pH a 5,4 con un tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5, 16 ml), seguido por dilución con agua (48 ml). Se sometió la mezcla a purificación con resina (SP207, 240 ml), y se eluyó con agua (276 ml) y una disolución acuosa de isopropanol al 10% (720 ml). Se recogieron las fracciones activas y se concentraron a presión reducida hasta 12 ml. A esto se le añadió carbón activado (Seisei Shirasagi, 40 mg), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se separó por filtración el carbón activado a través de un filtro de membrana, seguido por dilución con agua hasta 14 ml. Se sembró la disolución acuosa con la forma cristalina I (ejemplo 2b, 6 mg), se agitó con una barra de agitación a temperatura ambiente. A la suspensión resultante se le añadió gota a gota isopropanol (84 ml) a lo largo 1 hora. Después de completarse la adición gota a gota, se agitó la mezcla durante 3 horas. Se filtraron los cristales precipitados y se secaron para proporcionar 1,834 g del compuesto del título (rendimiento del 86,8%). Contenido de agua: 5,37%, el contenido de producto anhidro: 95,3%, razón de área del HPLC 99,3%. Los cristales mostraron el mismo patrón de picos que los cristales del ejemplo 5a en el patrón de difracción de rayos X de polvo.

Ejemplo 3

Forma cristalina II de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Ejemplo 3a

Se enfrió un tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5, 0,8 l) hasta < 10°C. A esto se le añadieron mientras se agitaba (2S,5R)-N (2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1-CR, neto 49,96 g) y un tampón fosfato 0,2 M enfriado (pH 6,5) de manera alternada en pequeñas porciones para ajustar el pH entre 4,2 y 5,5 y finalmente a pH 5,5. Se diluyó la mezcla con agua (la cantidad total de 1,8 l) y se concentró a presión reducida a una temperatura del líquido de < 18°C hasta 1,6 l. Se diluyó el concentrado con agua hasta 1,8 l (razón de área de1HPLC 96,7%), se sometió a purificación con resina (Sepabeads SP207, 3 l), y se eluyó con agua (0,83 l) y una disolución acuosa de isopropanol al 10% para recoger las fracciones activas. Se combinaron las fracciones activas (1,5 l) y se concentraron a presión reducida a una temperatura del líquido de < 15°C hasta 0,5 l. A esto se le añadió carbón activado (0,88 g), seguido por agitación durante 30 minutos. Se separó por filtración el carbón activado a través de un filtro de membrana y se lavó con agua (0,05 l x 2). Se combinaron los filtrados y se concentraron a presión reducida a una temperatura del líquido de < 15°C hasta 0,2 l, y se ajustó la temperatura del líquido hasta 10-15°C. A la mezcla se le añadió gota a gota isopropanol (0,25 l) a lo largo de 10 minutos. Después de agitar durante 1 hora, se añadió adicionalmente gota a gota isopropanol (0,6 l) a lo largo de 15 minutos. Se agitó la mezcla durante 1 hora, y se filtraron los cristales precipitados, se lavaron con isopropanol (0,2 l), y se secaron a vacío hasta que la temperatura del material alcanzó 20°C para proporcionar 44,69 g del compuesto del título (rendimiento del 85%, contenido de agua 5,9%, razón de área del HPLC 100%). Pico endotérmico de DSC: 92°C. Solubilidad en una disolución acuosa de isopropanol al 60%: 0,67% (10°C), 0,74% (20°C).

El compuesto del título también mostró un patrón de picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo tal como se muestra en la tabla 5 y la figura 2 a continuación. Los parámetros del instrumento y del ensayo fueron de la siguiente manera : difractómetro de rayos X de polvo: RINT2100 de Rigaku Corporation; fuente de rayos X: CuKal, voltaje del tubo: 40 kV, corriente del tubo: 40 mA, velocidad de barrido 4°/min, intervalo de barrido: 20 = 3 40°.

[Tabla 5]

Ejemplo 3b

Experimento sobre la transformación de cristales de la forma cristalina II de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Se tomó una pequeña cantidad de una suspensión de los cristales del ejemplo 3a y se agitó a temperatura ambiente durante un día. Se recogieron los cristales precipitados se sometieron a difracción de cristales de rayos X de polvo. No se observó transformación de cristales a una forma cristalina diferente.

Ejemplo 4

Forma cristalina III de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Ejemplo 4a

Se enfrió un tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5, 3,0 l) hasta < 10°C, y a esto se le añadieron mientras se agitaba (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1-CR, neto 133,334 g) y un tampón fosfato 0,2 M enfriado (pH 6,5, 1,8 l) de manera alternada en pequeñas porciones para ajustar el pH a 5,1-5,5, y finalmente a pH 5,3. Se concentró la mezcla a presión reducida a una temperatura del líquido de < 18°C hasta 3,6 l. Se ajustó el pH del concentrado hasta pH 5,5 con un tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5). Se diluyó el concentrado con agua hasta 4,8 l, se sometió a purificación con resina (Sepabeads SP207, 7L), y se eluyó con agua (7,2 l) y una disolución acuosa de isopropanol al 10% para recoger fracciones activas. Se combinaron las fracciones activas (3,1 l) y se concentraron a presión reducida a una temperatura del líquido de < 15°C hasta 1,8 l. A esto se le añadió carbón activado (2,66 g), seguido por agitación durante 30 minutos. Se separó por filtración el carbón activado a través de un filtro de membrana y se lavó con agua (0,39 l). Se combinaron los filtrados y se concentraron a presión reducida a una temperatura del líquido de < 18°C hasta 0,6 l. Se ajustó la temperatura del líquido del concentrado hasta 20-25°C, y a esto se le añadió gota a gota isopropanol (0,77 l). Luego se sembró la forma cristalina II (ejemplo 3a, 0,63 g), seguido por agitación durante 1 hora. A la mezcla se le añadió adicionalmente gota a gota isopropanol (1,93 l) a lo largo de 1,5 horas, seguido por agitación durante 30 minutos. Se filtraron los cristales precipitados, se lavaron con isopropanol (1 l), y se secaron a vacío hasta que la temperatura del material alcanzó 20°C. Se obtuvieron 127,3 g del compuesto del título que contenía una pequeña cantidad de forma cristalina II (rendimiento del 90%, contenido de agua 5,3%, razón de área del HPLC 99,9%). Se usaron los cristales obtenidos en esta etapa como cristales de siembra, y se repitió una etapa similar. Se usaron adicionalmente los cristales resultantes como cristales de siembra en la siguiente etapa para proporcionar el compuesto del título como forma cristalina III sola en la difracción cristalina de rayos X de polvo. Pico endotérmico de DSC: 102°C. Solubilidad en una disolución acuosa de isopropanol al 60%: 0,76% (10°C), 0,80% (20°C). El compuesto del título mostró un patrón de picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo tal como se muestra en la tabla 6 y la figura 3 a continuación. Los parámetros del instrumento y del ensayo fueron de la siguiente manera : difractómetro de rayos X de polvo: RINT2100 de Rigaku Corporation; fuente de rayos X: CuKal, voltaje del tubo: 40 kV, corriente del tubo: 40 mA, velocidad de barrido 4°/min, intervalo de barrido: 20 = 3-40°.

[Tabla 6]

Ejemplo 4b

Se enfrió un tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5, 7,2 l) hasta < 10°C, y a esto se le añadieron mientras se agitaba (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1-CR, neto 1,2 kg) y un tampón fosfato 0,2 M helado (pH 6,5, 3,5 l) de manera alternada en pequeñas porciones para ajustar el pH a 4,2-4,8, y finalmente a pH 4,6. Se diluyó la mezcla con agua (19,3 l) (la cantidad total de 30 l) y se concentró a presión reducida a una temperatura del líquido de < 18°C a 24 l. Se ajustó el pH del concentrado a pH 5,4 con tampón fosfato 0,2 M (pH 6,5, 2,4 l) (razón de área del HPLC 98,5%). Se diluyó el concentrado con agua hasta 43,2 l, se sometió a purificación con resina (Sepabeads SP207, 75 l) y se eluyó con agua (83 l) y una disolución acuosa de isopropanol al 10% para recoger las fracciones activas. Se combinaron las fracciones activas (33 l) y se concentraron a una temperatura del líquido de < 15°C hasta 7,2 l. A esto se le añadió carbón activado (24 g), seguido por agitación durante 30 minutos. Se separó por filtración el carbón activado a través de un filtro de membrana y se lavó con agua (0,4 l x 2). Se combinaron los filtrados, y se ajustó la temperatura del líquido hasta 20-25°C. Esto se sembró con forma cristalina III (ejemplo 4a, 3,6 g). A la mezcla se le añadió gota a gota isopropanol (50,4 l) a lo largo de 1 hora, seguido por agitación durante la noche. Se filtraron los cristales precipitados, se lavaron con isopropanol (4,8 l), y se secaron a vacío hasta que la temperatura del material alcanzó 20°C para proporcionar 1,17 kg del compuesto del título (rendimiento del 90%, contenido de agua 5,3%, razón de área del HPLC 100%). Los cristales mostraron el mismo patrón de picos que los cristales del ejemplo 4a en el patrón de difracción de rayos X de polvo.

Ejemplo 4c

Experimento sobre la transformación de cristales de la forma cristalina III de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

En la etapa del ejemplo 4a, se tomó una pequeña cantidad de la suspensión inmediatamente después de la siembra y de la suspensión después de la adición gota a gota de isopropanol, y se agitó cada una de las porciones tomadas con una barra de agitación a temperatura ambiente durante un día y cuatro días. Se recogieron los cristales precipitados y se sometieron a difracción de cristales de rayos X de polvo. No se observó transformación de cristales a una forma cristalina diferente.

Ejemplo 4d

Experimento de difracción de rayos X-calorimetría diferencial de barrido (DRX-DSC) en la forma cristalina III de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Se examinó la transformación cristalina mediante calentamiento en polimorfismo de la forma cristalina III del ejemplo 4a usando DRX-DSC. Las condiciones de calentamiento y enfriamiento fueron las siguientes: la temperatura se elevó a una velocidad de 2°C/min desde la temperatura ambiente hasta 160°C y luego se enfrió hasta 63°C bajo una humedad relativa (RH) constante del 60%. Se midieron sucesivamente DSC y DRX de las muestras. Los parámetros del instrumento y del ensayo fueron de la siguiente manera: difractómetro de rayos X de polvo: SmartLab y DRX-DSC de Rigaku Corporation; fuente de rayos X: CuKal, voltaje del tubo: 45 kV, corriente del tubo: 200 mA, velocidad de barrido 80°/min, intervalo de barrido: 20 = 5-35°.

Ejemplo 5

Forma cristalina IV de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Ejemplo 5a

Se disolvieron 0,20 g de forma cristalina III del ejemplo 4a en 2 ml de agua. A esto se le añadió gota a gota mientras se agitaba metanol (30 ml), seguido por dejar reposar a 20-25°C durante la noche. Se filtró la mezcla, se lavó con metanol (2 x 2 ml), y se secó a vacío a temperatura ambiente durante la noche para proporcionar 0,13 g del compuesto del título (rendimiento del 68%).

El compuesto del título mostró un patrón de picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo tal como se muestra en la tabla 7 y la figura 4 a continuación. Los parámetros del instrumento y del ensayo fueron de la siguiente manera: difractómetro de rayos X de polvo: RINT2100 de Rigaku Corporation; fuente de rayos X: CuKal, voltaje del tubo: 40 kV, corriente del tubo: 40 mA, velocidad de barrido 4°/min, intervalo de barrido: 20 = 3-40°.

[Tabla 7]

Ejemplo 5b

A 25 g de forma cristalina III del ejemplo 4a se le añadió metanol (200 ml), seguido por agitación a 20-25°C durante 3,5 horas. Se filtró la mezcla, se lavó con metanol (2 x 20 ml), y se secó a vacío a temperatura ambiente durante la noche para proporcionar 23 g del compuesto del título (rendimiento del 99%). Los cristales mostraron el mismo patrón de picos que los cristales del ejemplo 8a en patrón de difracción de rayos X de polvo.

Ejemplo 5c

A 25 g de forma cristalina III del ejemplo 4a se le añadió etanol (200 ml), seguido por agitación a 20-25°C durante 3,5 horas. Se filtró la mezcla, se lavó con etanol (2 x 20 ml), y se secó a vacío a temperatura ambiente durante la noche para proporcionar 23 g del compuesto del título (rendimiento del 99%). Los cristales mostraron el mismo patrón de picos que los cristales del ejemplo 5a en patrón de difracción de rayos X de polvo.

Ejemplo 5d

Experimento sobre la transformación de cristales de la forma cristalina IV de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Se tomó la forma cristalina IV de los ejemplos 5a-c y se añadió a la misma isopropanol/agua (6/1) y se suspendió y se agitó a 25°C o 40°C durante una semana. Se tomaron muestras después de l2 horas, 24 horas (un día), 48 horas (dos días), 72 horas (tres días), 96 horas (cuatro días) y 168 horas (una semana) y se sometieron a difracción de cristales de rayos X de polvo después del secado de flujo continuo. No se observó transformación de cristales a una forma cristalina con ninguno de los tiempos de agitación.

Ejemplo 6a

Evaluación de la estabilidad de las formas cristalinas I-IV de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1)

Se disolvió la forma cristalina III del ejemplo 4a en agua y se sometió a liofilización para proporcionar (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1) en una forma amorfa. Se pesaron cada uno de los compuestos en una forma amorfa y las formas cristalinas I-IV de los ejemplos 2-5 en un frasco con cierre de rosca, y se realizaron pruebas de estabilidad en cada una de las temperaturas y condiciones de humedad. Los métodos de medición de las sustancias relacionadas, medición del contenido y medición del contenido de agua fueron los siguientes. Los resultados se muestran en la tabla 9.

Medición de sustancias relacionadas y contenido

Se disolvieron las muestras en agua, y se usaron estas disoluciones como disoluciones de muestra. Se sometieron a prueba las disoluciones de muestra cada una en la cantidad de 5 |il en las siguientes condiciones mediante la norma JP16, Cromatografía de líquidos <2.01> para obtener la cantidad de cada sustancia relacionada (%) y la cantidad total de sustancias relacionadas (%), y el contenido.

Condiciones de la prueba:

Columna: Waters Atlantis dc18, 5 |im, 4,6 * 250 mm

Temperatura de la columna: una temperatura constante de aproximadamente 35°C

Cantidad inyectada: 5 |il

Detector: un fotómetro de absorción ultravioleta (longitud de onda: 210 nm)

Fase móvil A: se disolvieron 1,32 g de hidrogenofosfato de diamonio en 900 ml de agua, y se añadió ácido fosfórico para ajustar el pH a 3,0. A esto se le añadió luego agua hasta alcanzar 1000 ml.

Fase móvil B: acetonitrilo para cromatografía de líquidos

Programa de gradiente: la razón de mezclado de la fase móvil A con respecto a la fase móvil B se controló como el siguiente programa de tiempo.

[Tabla 8]

Tiempo después de la inyección Fase móvil A (% en Fase móvil B (% en

(min) volumen) volumen)

0-5 100 0

5-20 100 ^ 90 0 ^ 10

20-30 90 10

Velocidad de flujo: 1,0 ml/min

Tiempo de retención: aproximadamente 6,5 minutos

Tiempo de medición: 30 minutos

Medición de contenido de agua

Se midieron de manera precisa aproximadamente 20 mg del producto y se sometieron a prueba mediante la norma JP16, Determinación de agua <2.48> Titulación coulométrica.

[Tabla 9]

Condiciones de almacenamiento: 40°C/75% de HR, recipiente hermético

Ejemplo 6b

Evaluación de la estabilidad de la forma cristalina III de (2S,5R)-N-(2-aminoetoxi)-7-oxo-6-(sulfooxi)-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxamida (VII-1) en un recipiente de envasado

Se envasó la forma cristalina III en las siguientes condiciones y se realizaron pruebas de estabilidad a cada una de las temperaturas y condiciones de humedad en las condiciones de análisis del ejemplo 6a. Los resultados se muestran en las tablas 10-12.

Recipiente de envasado

Bolsa interior: un polietileno de baja densidad, abrazadera de nailon

Bolsa exterior: una bolsa laminada de aluminio, termosellada

[Tabla 10]

Estabilidad de la forma cristalina III

Bolsa interior: un polietileno de baja densidad, abrazadera de nailon

Bolsa exterior: una bolsa laminada de aluminio, termosellada

Condiciones de almacenamiento: 25°C/60% de HR

[Tabla 11]

Estabilidad de la forma cristalina III

Bolsa interior: un polietileno de baja densidad, abrazadera de nailon

Bolsa exterior: una bolsa laminada de aluminio, termosellada

Condiciones de almacenamiento: 40°C/75% de HR

[Tabla 12]

Estabilidad de la forma cristalina III

Bolsa interior: un polietileno de baja densidad, abrazadera de nailon

Bolsa exterior: una bolsa laminada de aluminio, termosellada

Condiciones de almacenamiento: 60°C

Ejemplo de referencia 24

Se disolvió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (1R,2S,6R,7S)-3,5-dioxo-4-azatricido[5.2.1.02'6]dec-8-en-4-¡lo (ejemplo de referencia 4, 144 mg, 0,329 mmol) en diclorometano deshidratado (2,5 ml), y a esto se le añadió una disolución de (2-(aminooxi)etil)(metil)carbamato de terc-butilo (88,8 mg) en diclorometano deshidratado (0,5 ml), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 18 horas. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (10 ml) y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 0,25 M, bicarbonato de sodio saturado, y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y se concentró a presión reducida para proporcionar 132 mg del compuesto del título (rendimiento del 89%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del compuesto del ejemplo de referencia 6, etapa 1.

Ejemplo de referencia 25

{3-[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]propil}carbamato de terc-butilo (IV-7)

Se disolvió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (1R,2S,6R,7S)-3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.1.02,6]dec-8-en-4-ilo (ejemplo de referencia 4, 148 mg, 0,339 mmol) en diclorometano deshidratado (2,5 ml). A esto se le añadió una disolución de 3-(aminooxi)propilcarbamato de terc-butilo (90,9 mg) en diclorometano deshidratado (0,5 ml), seguido por agitación durante 18 horas a temperatura ambiente. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (10 ml), se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 0,25 M, bicarbonato de sodio saturado, y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y se concentró a presión reducida para proporcionar 134 mg del compuesto del título (rendimiento del 88%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del compuesto del ejemplo de referencia 11, etapa 1.

Ejemplo de referencia 26

(2S)-2-{[({[(2S,5R)-6-Benciloxi-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]oct-2-il]carbonil}amino)oxi]metil}azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (IV-8)

[Fórmula química 73]

Se disolvió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (1R,2S,6R,7S)-3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.1.026]dec-8-en-4-ilo (ejemplo de referencia 4, 145 mg, 0,331 mmol) en diclorometano deshidratado (2,5 ml). A esto se le añadió una disolución de (S)-2-((aminooxi)metil)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (93,2 mg) en diclorometano deshidratado (0,5 ml), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 21 horas. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (10 ml), se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 0,25 M, bicarbonato de sodio saturado agua, y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y se concentró a presión reducida para proporcionar 127 mg del compuesto del título (rendimiento del 83%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del compuesto del ejemplo de referencia 12, etapa 1.

Ejemplo de referencia 27

Se disolvió (2S,5R)-6-(benciloxi)-7-oxo-1,6-diazabiciclo[3.2.1]octano-2-carboxilato de (1R,2S,6R,7S)-3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.1.026]dec-8-en-4-ilo (ejemplo de referencia 4, 145 mg, 0,332 mmol) en diclorometano deshidratado (2,5 ml). A esto se le añadió una disolución de (S)-3-(aminooxi)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (91,6 mg) en diclorometano deshidratado (0,5 ml), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 19 horas. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (10 ml), se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 0,25 M, bicarbonato de sodio saturado, y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y se concentró a presión reducida para proporcionar 145 mg del compuesto del título (rendimiento del 95%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del compuesto del ejemplo de referencia 15, etapa 1.

Ejemplo de referencia 28

[Fórmula química 75]

Se disolvió (2S,5R)-6-(bencNoxi)-7-oxo-1,6-diazabicido[3.2.1]octano-2-carboxNato de (1R,2S,6R,7S)-3,5-dioxo-4-azatridclo[5.2.1.026]dec-8-en-4-ilo (ejemplo 1, 140 mg, 0,320 mmol) en diclorometano deshidratado (2,5 ml). A esto se le añadió una disolución de 3-((aminooxi)metil)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo (91,5 mg) en diclorometano deshidratado (0,5 ml), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 20 horas. Se diluyó la disolución de reacción con acetato de etilo (10 ml), se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 0,25 M, bicarbonato de sodio saturado, y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y se concentró a presión reducida para proporcionar 132 mg del compuesto del título (rendimiento del 90%). Los datos instrumentales eran coherentes con los del compuesto del ejemplo de referencia 16, etapa 1.

Claims

REIVINDICACIONES

Procedimiento para producir un compuesto de fórmula (VII)

en la que

R3 es alquilo C1-6 o heterociclilo,

R3 puede modificarse con 0-5 grupos R4 seleccionados de alquilo C1-6, heterociclilo, R5(R6)N- y un grupo protector; y R4 puede sustituirse de manera consecutiva;

R5 y R6 son cada uno independientemente H o alquilo C1-6 o juntos forman un heterociclilo;

y además, R3, R5 y R6 pueden experimentar un cierre de anillo en una posición arbitraria;

a partir de un compuesto de fórmula (VI)

que comprende

(iii) si la cadena lateral de R3ONHC(=O)- tiene un grupo protector, retirar el grupo protector con un ácido, seguido por

(iv) precipitar un producto bruto, añadiendo un disolvente deficiente seleccionado de acetato de etilo, acetato de isopropilo y acetato de butilo a la disolución de reacción, para obtener un compuesto bruto de fórmula (VII).

Procedimiento según la reivindicación 1, que comprende además la etapa posterior de

(v) añadir de manera alternante el compuesto bruto de fórmula (VII) y tampón helado para obtener una disolución que tiene un pH de 4-5,5, concentrar después de la desalación con un adsorbente sintético según sea necesario, ajustar la temperatura, sembrar según sea necesario y cristalizar añadiendo un disolvente deficiente seleccionado de metanol, etanol e isopropanol para producir el compuesto de fórmula (VII). Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, que comprende además, antes de las etapas (iii) y (iv), las etapas de

(i) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III):

en la que

OBn es benciloxilo, y

R1 es 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo, 1,3-dioxo-3a,4,7,7a-tetrahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo, 1,3-dioxohexahidro-1H-isoindol-2(3H)-ilo o 3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.1.02’6]dec-8-en-4-ilo,

con un compuesto R3ONH2 en el que R3 es tal como se define en la reivindicación 1, para obtener un compuesto de fórmula (IV):

(ii) tratar con un catalizador de paladio/carbono bajo una atmósfera de hidrógeno, someter simultánea o consecutivamente a una reacción de sulfatación usando un complejo de trióxido de azufre-trimetilamina en presencia de una cantidad catalítica de base en un disolvente acuoso y tratar con hidrogenosulfato de tetrabutilamonio para obtener un compuesto de fórmula (VI):

2-(terc-butoxicarbonilamino)etilo;

2-aminoetilo;

2-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)etilo;

2-(metilamino)etilo;

2-((terc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)etilo;

2-(isopropilamino)etilo;

2- (dimetilamino)etilo;

(2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)propilo;

(2S)-2-(amino)propilo;

(2R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)propilo;

(2R)-2-(amino)propilo;

3- ((terc-butoxicarbonil)amino)propilo;

3-(amino)propilo;

(2S)-terc-butoxicarbonilazetidin-2-ilmetilo;

(2S)-azetidin-2-ilmetilo;

(2R)-terc-butoxicarbonilpirrolidin-2-ilmetilo;

(2R)-pirrolidin-2-ilmetilo;

(3R)-terc-butoxicarbonilpiperidin-3-ilmetilo;

(3R)-piperidin-3-ilmetilo;

(3S)-terc-butoxicarbonilpirrolidin-3-ilo;

(3S)-pirrolidin-3-ilo;

1 -(terc-butoxicarbonil)azetidin-3-ilo; y

azetidin-3-ilo.

Procedimiento según la reivindicación 3, en el que el compuesto de fórmula (VII) es un compuesto de fórmula (VII-1)

y en el que

- en la etapa (i) el compuesto de fórmula (III) se hace reaccionar con 2-(aminooxi)etilcarbamato de terc-butilo en presencia de una base para obtener un compuesto de fórmula (IV-1) en el que Boc es terc-butoxicarbonilo:

- en la etapa (iii) el grupo protector Boc se retira con ácido acético trifluoroacético,

- en la etapa (iv) se usa acetato de etilo como disolvente deficiente, y

- en la etapa (v) el tampón helado es un tampón fosfato helado, y se usa isopropanol como disolvente deficiente.

Procedimiento según la reivindicación 1, en el que R3 es 2-(terc-butoxicarbonilamino)etilo, y

- en la etapa (iii) el grupo protector terc-butoxicarbonilo (Boc) se retira con ácido trifluoroacético, y

- en la etapa (iv) el disolvente deficiente es acetato de etilo.

Procedimiento según la reivindicación 2, en el que R3 es 2-(amino)etilo, el tampón helado es un tampón fosfato helado y se usa isopropanol como disolvente deficiente.