ES2824261T3 - Composiciones y procedimientos para el tratamiento de la leucoencefalopatía multifocal progresiva (LMP) - Google Patents

Composiciones y procedimientos para el tratamiento de la leucoencefalopatía multifocal progresiva (LMP) Download PDF

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Abstract

Ácido fusídico, para su uso en la inhibición de la replicación de poliomavirus en un sujeto.

Description

DESCRIPCIÓN
Composiciones y procedimientos para el tratamiento de la leucoencefalopatía multifocal progresiva (LMP)
Campo de la invención
La invención se refiere a composiciones para su uso en el tratamiento de sujetos infectados con un virus de ADN. En particular, los aspectos de la invención se refieren a sujetos infectados con el virus JCV y sujetos que tienen, o están en riesgo de desarrollar, leucoencefalopatía multifocal progresiva (LMP).
Antecedentes de la invención
poliomavirus JC (JCV) es el agente causante de una enfermedad desmielinizante del sistema nervioso central, la leucoencefalopatía multifocal progresiva (LMP). La incidencia de leucoencefalopatía multifocal progresiva puede estar relacionada con un sistema inmunológico debilitado o con un tratamiento con inmunosupresores. Actualmente, no existe una terapia antiviral específica que haya demostrado su eficacia para el tratamiento de la leucoencefalopatía multifocal progresiva.
Resumen de la invención
Los aspectos de la descripción se relacionan con composiciones que inhiben la actividad del virus del ADN, incluida la proliferación viral (por ejemplo, la replicación viral), la tasa de mutación y la infectividad, y el uso de tales composiciones para tratar o suprimir afecciones asociadas con la actividad del virus de ADN en sujetos que están infectados con un virus de ADN, o el uso de tales composiciones para reducir el riesgo de infección con el virus de ADN. En algunos casos, la descripción proporciona una o más composiciones que inhiben la actividad de JCV. En algunos casos, la descripción proporciona una o más composiciones que inhiben la actividad del virus BK (BKV). Tales composiciones pueden usarse para prevenir la infección viral por ADN (por ejemplo, infección por JCV o infección por BKV), para prevenir un aumento en la actividad viral del ADN (por ejemplo, infección activa del cerebro por JCV), para prevenir la proliferación del virus por ADN (por ejemplo, proliferación de JCV o proliferación de BKV) para prevenir los síntomas asociados con la infección viral (por ejemplo, infección por JCV o BKV), para tratar a un sujeto infectado con un virus de ADN (por ejemplo, JCV o BKV), o para tratar a un sujeto en riesgo de infección con un virus de ADN (por ejemplo, JCV o BKV), o para tratar a un sujeto que ha desarrollado una enfermedad o afección asociada con la infección por un virus de ADN (porejemplo, lMp ). Las composiciones de la descripción también se pueden administrar a un sujeto en riesgo de una infección viral o en riesgo de un aumento en la actividad viral (por ejemplo, proliferación viral, por ejemplo, en el cerebro o el SNC), independientemente de si se sabe en realidad que el sujeto ha estado expuesto o ha sido infectado por el virus.
En algunos casos, se pueden administrar una o más composiciones de la descripción a sujetos que tienen un sistema inmunológico comprometido. Debe apreciarse que el sistema inmunológico de un sujeto puede verse comprometido debido al tratamiento con un agente terapéutico inmunosupresor y/o debido a una enfermedad o afección que afecta al sistema inmunológico. En algunos casos, una o más composiciones de la descripción pueden administrarse a un sujeto que está en riesgo de LMP debido a un sistema inmunológico comprometido, independientemente de si se sabe que el sujeto está infectado con JCV o se sabe que ha estado expuesto a JCV. Por consiguiente, las composiciones de la descripción se pueden administrar a sujetos que están recibiendo un tratamiento inmunosupresor para una enfermedad o afección. En algunos casos, las composiciones de la descripción se pueden administrar a pacientes con esclerosis múltiple (EM) que están siendo tratados con uno o más agentes inmunosupresores (por ejemplo, natalizumab). Sin embargo, en algunos casos, las composiciones de la descripción se pueden administrar a sujetos que tienen un sistema inmunológico debilitado causado por una enfermedad o afección en sí misma, en lugar de por un tratamiento inmunosupresor. Por ejemplo, los sujetos infectados con un patógeno inmunocomprometido (por ejemplo, un virus como el VIH) pueden tratarse con una o más composiciones de la descripción.
Debe tenerse en cuenta que, aunque no es necesario conocer el estado JCV de un sujeto, puede ser útil conocer el estado en algunos casos. En algunos casos, la eficacia de tal tratamiento o terapia puede controlarse detectando y/o controlando la presencia de JCV en un sujeto.
En algunos casos, una o más composiciones de la descripción pueden administrarse a un sujeto antes, durante, y/o después de que el sujeto recibe una terapia inmunomoduladora (por ejemplo, un tratamiento que inhibe el sistema inmunológico del sujeto). Por consiguiente, en algunos casos, uno o más compuestos descritos en esta invención como eficaces para inhibir la replicación del virus del ADN pueden administrarse a un sujeto antes del inicio de una terapia inmunomoduladora. Por ejemplo, puede iniciarse un régimen terapéutico de una o más composiciones de la descripción antes de un tratamiento inmunomodulador contra una enfermedad o en preparación para un trasplante para prevenir o reducir cualquier riesgo de replicación o proliferación del virus del ADN asociado con el tratamiento inmunomodulador.
En algunos casos, una o más composiciones de la descripción pueden administrarse solas o en combinación con otras composiciones descritas en esta invención o junto con otros agentes terapéuticos (por ejemplo, uno o más agentes terapéuticos inmunosupresores). Las composiciones de la descripción pueden proporcionarse (por ejemplo, administrarse) en preparaciones farmacéuticas. Las composiciones de la descripción se pueden proporcionar en kits. En algunos aspectos, las composiciones de la descripción pueden usarse para desarrollar tratamientos antivirales adicionales (por ejemplo, como material de partida para un estudio de química médica o como referencias en un ensayo in vitro).
En algunos aspectos, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos de inhibición de la replicación viral, comprendiendo los procedimientos poner en contacto una célula que comprende un virus de ADN con una composición que comprende ácido fusídico.
En algunas realizaciones, la composición comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En algunas realizaciones de cualquiera de los procedimientos descritos en esta invención, el virus de ADN es un virus del herpes, virus de la viruela, parvovirus o poliomavirus. En algunas realizaciones, el virus de ADN es un poliomavirus. En algunas realizaciones, el poliomavirus es JC. En algunas realizaciones, el poliomavirus es BK.
En algunas realizaciones de los procedimientos descritos en esta invención, una composición se pone en contacto con una célula infectada por virus en un sujeto. En algunas realizaciones, la célula es una célula del cerebro, una neurona, una célula de riñón o cualquier otra célula de un sujeto. Por consiguiente, en algunas realizaciones se administra una composición a un sujeto. En algunas realizaciones, se sospecha que el sujeto tiene una infección viral (por ejemplo, en al menos un tipo de célula o tejido). Un sujeto sospechoso de tener una infección viral puede ser un sujeto que ha sido identificado por tener, o se sabe que tiene, una infecciónporvirus de ADN (por ejemplo, una infección por JCV o BKV). Además, o alternativamente, un sujeto sospechoso de tener una infección viral puede ser un sujeto que ha sido identificado como en riesgo de, o se sabe que está en riesgo de, una infecciónporvirus de ADN (por ejemplo, una infección por JCV o BKV). Debe apreciarse que se puede identificar que un sujeto tiene una infección detectando directamente una o más moléculas virales (porejemplo, ARN, ADN, proteína, etc., o cualquier combinación de los mismos). Sin embargo, se puede identificar que un sujeto tiene una infección indirectamente detectando uno o más indicios de una infección (por ejemplo, uno o más síntomas, uno o más anticuerpos séricos contra una molécula viral, etc., o cualquier combinación de los mismos). En algunas realizaciones, se pueden usar uno o más síntomas de una infección viral para identificar a un sujeto con riesgo de infección viral. Un sujeto puede identificarse también como en riesgo de una infección viral si el sujeto tiene un sistema inmunológico reducido o suprimido (por ejemplo, debido a una enfermedad, afección o tratamiento, o una combinación de los mismos como se describe con más detalle en esta invención). En algunas realizaciones, se ha identificado que el sujeto tiene una infección por el virus JC en el SNC. En algunas realizaciones, se ha identificado que el sujeto tiene una infección por el virus BK en el riñón. Debe apreciarse que una o más de las composiciones descritas en esta invención pueden administrarse a un sujeto sobre la base de que se sospecha que el sujeto tiene una infección por virus de ADN. Por ejemplo, se puede administrar una composición a un sujeto, porque se ha identificado que el sujeto tiene, o se sabe que tiene, o se ha identificado como en riesgo de tener, o se sabe que corre riesgo de tener, una infección por virus de ADN. En consecuencia, en algunas realizaciones se evalúa a un sujeto para determinar si el sujeto tiene, o está en riesgo de tener, una infecciónporvirus de ADN (por ejemplo, una infección por JCV o BKV), y una composición descrita en esta invención se administra al sujeto si se ha encontrado que tiene, o corre el riesgo de tener, la infección por el virus del ADN. En algunas realizaciones, una composición descrita en esta invención no se administra a un sujeto que se identifica o se sabe que está libre de virus y/o libre de riesgo.
consiguiente, en algunas realizaciones de la invención se evalúa (por ejemplo, se controla) a un sujeto para determinar si el sujeto tiene un signo o síntoma de, o está en riesgo de, una infección o proliferación de virus de ADN. En algunas realizaciones, esta evaluación implica determinar si el sujeto tiene un síntoma de una enfermedad o afección asociada con la activación del virus del a Dn (por ejemplo, un síntoma de LMP). Si se identifica que el sujeto tiene un signo o síntoma de una infección o proliferación de un virus de ADN (por ejemplo, JCV o BKV), o que tiene riesgo de padecerlo, se trata al sujeto con uno o más compuestos o composiciones de la invención. En algunas realizaciones, una composición que comprende se administra a un sujeto.
En algunas realizaciones, el sujeto (por ejemplo, un sujeto que ha sido identificado y tratado en base a la identificación) se evalúa (por ejemplo, se controla) para uno o más signos o síntomas de infección o proliferación del virus del ADN después de recibir un compuesto o composición de la invención. Por ejemplo, en algunas realizaciones de la invención se puede evaluar a un sujeto para determinar o confirmar la reducción de al menos un síntoma de la infección o proliferación del virus del ADN (por ejemplo, JCV o BKV). En determinadas realizaciones, se puede evaluar a un sujeto para determinar o confirmar que no se han desarrollado en el sujeto signos o síntomas de infección o proliferación del virus del ADN (por ejemplo, JCV o BKV). En algunas realizaciones, un sujeto puede ser evaluado para determinar o confirmar que cualquier signo o síntoma detectable de infección o proliferación del virus del ADN (por ejemplo, JCV o BKV) se ha mantenido a un nivel estable, o que su desarrollo se ha ralentizado o revertido. En algunas realizaciones, un tratamiento o terapia inmunomoduladora se puede alterar (por ejemplo, aumentar, disminuir, sustituir o interrumpir) basándose en la evaluación (por ejemplo, seguimiento) del sujeto. En algunas realizaciones, un tratamiento o terapia con uno o más compuestos o composiciones de la invención se puede alterar (por ejemplo, aumentar, disminuir, sustituir o interrumpir) basándose en la evaluación (por ejemplo, seguimiento) del sujeto antes, después o durante, una terapia inmunomoduladora.
En algunos casos, la descripción proporciona procedimientos para inhibir la replicación viral en un sujeto, comprendiendo los procedimientos la administración de una composición a un sujeto sospechoso de tener una infección por virus de ADN, donde la composición comprende una cantidad suficiente para inhibir la replicación viral de ADN en el sujeto. En algunos aspectos, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos de inhibición de la replicación viral en un sujeto, comprendiendo los procedimientos la administración de una composición a un sujeto sospechoso de tener una infección por virus de ADN, donde la composición comprende ácido fusídico en una cantidad suficiente para inhibir la replicación viral de ADN en el sujeto.
En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, la infección por virus de ADN es una infección por virus del herpes, virus de la viruela, parvovirus o poliomavirus. En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, la infección por virus de ADN es una infección por poliomavirus. En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, el poliomavirus es el virus JC. En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, el poliomavirus es el virus BK.
En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, se ha identificado que el sujeto tiene una infección por el virus JC del SNC. En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, se ha identificado que el sujeto tiene una infección renal por virus BK.
En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, el sujeto se identifica como en riesgo de una infección por virus de ADN. En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, el sujeto está experimentando, o ha estado experimentando, un tratamiento inmunomodulador. En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, el tratamiento inmunomodulador comprende la administración de un anticuerpo VLA-4. En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, el anticuerpo VLA-4 es natalizumab.
En algunos aspectos, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos para reducir el riesgo de una infección por virus de ADN en un sujeto, comprendiendo los procedimientos la administración al sujeto de una composición que comprende una cantidad suficiente para inhibir la infección por virus de ADN.
En algunos casos, la descripción proporciona procedimientos para reducir el riesgo de una infección por virus de ADN en un sujeto, comprendiendo los procedimientos la administración al sujeto de una composición que comprende endosulfán, candesartán cilextil, ácido mefenámico, ácido fusídico, ácido tolfenámico, mefloquina, isotretinona, diclofenaco sódico, hidrocloruro de diltiazem, nitrato de miconazol, flunixina meglumina, propanilo, deshidroabietamida, ácido difráctico, harmano, xantona, metoxivona o combinaciones de los mismos en una cantidad suficiente para inhibir la infección viral por ADN. En algunos aspectos, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos para reducir el riesgo de LMP, comprendiendo los procedimientos la administración a un sujeto que tiene LMP, o con riesgo de LMP, de una composición que comprende una cantidad suficiente para inhibir la infección viral por ADN.
En algunos aspectos, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos para reducir el riesgo de LMP, comprendiendo los procedimientos la administración a un sujeto que tiene LMP, o con riesgo de LMP, de una composición que comprende ácido fusídico en una cantidad suficiente para inhibir la infección viral por ADN.
En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, la composición se administra en una dosis suficiente para reducir el número de células infectadas por JCV en un ensayo in vitro en más del 25 %, más del 40 %, más del 50 %, más del 75 %, o más del 80 %.
En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, la composición comprende un compuesto que tiene un anti-JCV IC 50 < 20 pM y un índice terapéutico IC 50 /TC 50 < 0,5.
En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, los procedimientos comprenden además la administración de un agente antiviral.
En algunas realizaciones de los procedimientos presentados en esta invención, los procedimientos comprenden además realizar un intercambio de plasma.
En algunos aspectos, la invención proporciona una composición farmacéuticay/o un kit que comprende natalizumab y ácido fusídico.
En algunas realizaciones, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos de tratamiento que comprenden la administración a un sujeto que tiene lMp , o con riesgo de LMP, de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende ácido fusídico.
En algunas realizaciones, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos de tratamiento para un sujeto infectado con un virus de ADN, o sospechoso de estar infectado con un virus de ADN, donde el virus de ADN se selecciona del grupo que consiste en virus del herpes, virus de la viruela, parvovirus y poliomavirus. En algunas realizaciones, la invención proporciona procedimientos de tratamiento para un sujeto infectado con el virus JC o sospechoso de estar infectado con el virus JC. En algunas realizaciones, la invención proporciona procedimientos de tratamiento para un sujeto infectado con el virus BK o sospechoso de estar infectado con el virus BK. En algunas realizaciones, la invención proporciona procedimientos de tratamiento para un sujeto infectado con un virus JC, donde la infección por el virus JC se caracteriza por la presencia del virus JC en el sistema nervioso central (SNC). En algunas realizaciones, la invención proporciona procedimientos de tratamiento para un sujeto infectado con un virus BK, donde la infección por el virus BK se caracteriza por la presencia del virus b K en el riñón.
En algunas realizaciones, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos para prevenir o suprimir la LMP, comprendiendo el procedimiento la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende ácido fusídico.
En algunos casos, la descripción proporciona procedimientos de tratamiento de un sujeto que tiene LMP, o se sospecha que tiene LMP, comprendiendo el procedimiento la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende un compuesto en una dosis suficiente para reducir el número de células de j Cv infectadas en un ensayo in vitro en más del 40 %.
En algunos casos, la descripción proporciona procedimientos de tratamiento de un sujeto que tiene LMP, o se sospecha que tiene LMP, que comprenden la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende un compuesto, donde el compuesto tiene una IC50 anti-JCV < 20 pM y un índice terapéutico IC 50 /TC 50 < 0,5.
En algunos casos, la descripción proporciona procedimientos de tratamiento para un sujeto infectado con un virus de ADN, o que se sospecha que está infectado con un virus de ADN, o de un sujeto que tiene LMP o se sospecha que tiene LMP, donde el sujeto está o ha estado en tratamiento inmunomodulador.
En algunas realizaciones, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos para prevenir la infección viral en una persona que se somete a un tratamiento inmunomodulador, comprendiendo el procedimiento la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende ácido fusídico.
En algunas realizaciones, el tratamiento inmunomodulador comprende la administración de un anticuerpo VLA-4. En algunas realizaciones, el tratamiento inmunomodulador comprende la administración de natalizumab.
En algunas realizaciones, la invención proporciona composiciones para su uso en procedimientos de tratamiento para un sujeto infectado con un virus de a Dn , o sospechoso de estar infectado con un virus de ADN, o de un sujeto que tiene LMP o se sospecha que tiene LMP, que comprenden la administración de un compuesto de la Tabla 1 y que realizan un recambio plasmático.
En algunas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende natalizumab y ácido fusídico.
En algunas realizaciones, la invención proporciona un kit que comprende natalizumab y ácido fusídico e instrucciones para administrar los compuestos.
En algunas realizaciones, la invención proporciona composiciones para su uso en un procedimiento de inhibición ( por ejemplo, reducción o supresión) de la replicación de un virus de ADN en una célula que comprende la puesta en contacto de una célula que comprende un virus de ADN con un compuesto, donde la puesta en contacto de la célula con el compuesto da como resultado la reducción o supresión de la replicación del virus ADN, donde el compuesto es ácido fusídico.
En algunas realizaciones, la invención proporciona un procedimiento para suprimir la replicación de un virus de ADN en una célula, donde el virus de ADN se selecciona del grupo que consiste en virus del herpes, virus de la viruela, parvovirus, virus JC y virus BK.
Sobre la base de la descripción contenida en esta invención, la presente invención proporciona ácido fusídico, para su uso en la inhibición de la replicación de poliomavirus en un sujeto.
En otro aspecto, la presente invención proporciona natalizumab, para su uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple en un sujeto, donde el tratamiento comprende la administración de ácido fusídico para inhibir la replicación del poliomavirus.
La presente invención y las realizaciones de la misma se exponen en las reivindicaciones adjuntas. Estos y otros aspectos de la invención se describen con más detalle en esta invención y se ilustran mediante las siguientes figuras y ejemplos no limitativos.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 ilustra una realización no limitativa de una disminución en la cantidad de inhibición con un aumento en la cantidad de anticuerpo neutralizante JCV añadido;
La figura 2 ilustra una realización no limitativa de la correlación entre la tasa de infección y la concentración del virus JCV;
La figura 3 ilustra una realización no limitativa de la detección y medición de la infección celular con JCV, el panel (A) muestra las células infectadas con JCV, el panel (B) muestra el número de células infectadas representado contra el factor de dilución del stock viral utilizado para infectar las células, los paneles (C) y (D) ilustran la inhibición de JCV en presencia de diversas diluciones de antisuero neutralizante de JCV o cidofovir;
La figura 4 ilustra una realización no limitativa de un diagrama de flujo para el cribado de compuesto;
La figura 5 ilustra una realización no limitativa de la eficacia de la mefloquina contra dos cepas virales diferentes, el panel (A) ilustra células SVG-A infectadas con Mad1/SVEA Virus JCV, panel (B) ilustra astrocitos fetales humanos primarios infectados con Mad1/SVEA JCV y el panel (C) ilustra células SVG-A infectadas con la cepa Mad-4 de JCV;
La figura 6 ilustra una realización no limitativa del efecto de la mefloquina sobre la replicación del ADN de JCV; La figura 7 ilustra una realización no limitativa de la eficacia de la mefloquina contra la infección por JCV;
La figura 8 ilustra realizaciones no limitativas de la eficacia de diferentes isómeros de mefloquina;
La figura 9 ilustra realizaciones no limitativas de la eficacia de diferentes isómeros de mefloquina;
La figura 10 muestra que la actividad anti-JCV de la mefloquina no es inhibida por el líquido cefalorraquídeo (LCR); La figura 11 ilustra realizaciones no limitativas de la respuesta a la dosis de fármacos con actividad anti-JCV; La figura 12 ilustra realizaciones no limitativas de AINE de ácido arilalcanoico y su actividad anti-JCV;
La figura 13 ilustra realizaciones no limitativas de AINE de ácido arilalcanoico y su actividad anti-JCV;
La figura 14 ilustra realizaciones no limitativas de estudios de modelado con mefloquina y compuestos relacionados; La figura 15 ilustra realizaciones no limitativas de estructuras de compuestos inhibidores de JCV; y,
La figura 16 ilustra realizaciones no limitativas de estructuras de compuestos inhibidores de JCV.
Descripción detallada de la invención
aspectos de la descripción se relacionan con las composiciones identificadas por tener actividad antiviral y su uso para prevenir o tratar la infección viral en sujetos. En particular, los aspectos de la descripción se refieren a composiciones que inhiben la actividad viral del ADN. Se describen una o más composiciones que inhiben la actividad de JCV y se pueden administrar a sujetos infectados o con riesgo de infección por JCV y/o a sujetos con LMP, o en riesgo de desarrollar LMP.
aspectos de la descripción, incluida la presente invención, se basan, al menos en parte, en el sorprendente descubrimiento de que los compuestos descritos en la Tabla 1 reducen el porcentaje o el número de células infectadas por JCV en un ensayo basado en células. No se conocía previamente que los compuestos descritos en la Tabla 1 tuvieran actividad anti-JCV o alguna actividad anti-viral. Por consiguiente, uno o más compuestos descritos en la Tabla 1 se pueden usar como se describe en esta invención.
TABLA 1.
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En algunas realizaciones, la invención se refiere al ácido fusídico, para su uso en un procedimiento para prevenir o tratar la infección o proliferación viral del ADN (por ejemplo, para reducir el riesgo de infección o proliferación viral del ADN). En algunos casos, la descripción se refiere al tratamiento o prevención de la LMP usando compuestos que están relacionados estructuralmente con el ácido fusídico. En algunos casos, los compuestos que están relacionados estructuralmente con el ácido fusídico son derivados de esteroides. En algunos casos, los compuestos que están estructuralmente relacionados con el ácido fusídico son 4-estren-3-beta 17 beta-diol 17-acetato, 5-beta-pregnan-3-alfa 6-alfa 20-beta-triol 20-acetato y 4 -pregen-3-beta 20-beta-diol 20-acetato.
Debe apreciarse que los compuestos inhibidores o las composiciones descritas en esta invención pueden usarse para reducir o suprimir la replicación del ADN de virus de ADN (por ejemplo, virus JC, virus BK o cualquier otro virus de ADN).
El genoma humano está expuesto y puede adquirir muchos virus durante la vida de un individuo. Un grupo de virus a los que está expuesto el genoma son los virus de ADN. Los virus de ADN incluyen virus de papova y virus de herpes. Los ejemplos de virus de papova incluyen, pero no se limitan a, SV40, virus del papiloma humano o bovino (h Pv o BPV), virus del polioma y virus similares a SV40 humanos tales como BK (BKV) o JC (JCV). Los ejemplos de virus del herpes incluyen, entre otros, virus del herpes simple (HSV), citomegalovirus (CMV), virus de Epstein-Barr (EBV), virus de la varicela o varicela, virus del herpes zóster o del herpes. La exposición a un virus de ADN suele ser asintomática y es posible que un sujeto no sepa que ha estado expuesto a un virus de ADN. La exposición a virus de ADN a menudo conduce a la integración del virus de ADN en el genoma humano. En un sujeto con un sistema inmunológico sano, el sistema inmunológico generalmente suprimirá la proliferación del virus. Sin embargo, en sujetos inmunodeprimidos o en sujetos sometidos a tratamiento inmunológico, los virus de ADN pueden expresarse y proliferar dando como resultado el desarrollo de la enfermedad.
En un aspecto, la presente invención proporciona ácido fusídico para su uso en el tratamiento de sujetos infectados con el poliomavirus JC (JCV). La infección primaria por JCV puede ocurrir de forma asintomática durante la infancia (Padgett y col., 1971 Lancet., 1257-1260). A continuación, el JCV se disemina por todo el cuerpo, probablemente a través de la viremia (Ikegaya y col., 2004, Archives of Virology 149, 1215-1220). Se cree que JCV persiste principalmente en tejido cerebral y renal. Aunque la infección por JCV es asintomática en la mayoría de los sujetos, la infección puede provocar afecciones graves (tales como la LMP) e incluso la muerte. La leucoencefalopatía multifocal progresiva es una enfermedad de desmielinización extremadamente debilitante del sistema nervioso central. La leucoencefalopatía multifocal progresiva se caracteriza generalmente por déficits neurológicos que progresan rápidamente, típicamente sin signos de presión intracraneal, que incluyen hemiparesia, alteraciones cognitivas, déficits del campo visual, ataxia, afasia, déficits de nervios craneales y déficits sensoriales. Los pacientes con leucoencefalopatía multifocal progresiva generalmente se deterioran rápidamente y la muerte suele ocurrir dentro de los 6 meses posteriores al diagnóstico (Demeter LM. JC, BK y otros poliomavirus; leucoencefalopatía multifocal progresiva. En Mandell GL, Bennett JE, Dolin, eds. Mandell, Douglas and Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases, 4a edición, vol. 2. Nueva York, NY: Churchill Livingstone; 1995: 1400-1406). Los sujetos más susceptibles a la leucoencefalopatía multifocal progresiva son sujetos inmunodeprimidos (por ejemplo, pacientes con SIDA) o sujetos que se someten a tratamiento con inmunosupresores (por ejemplo, después de un trasplante de órganos o para tratar una afección relacionada con la inflamación, como esclerosis múltiple o artritis reumatoide).
Se ha informado que la LMP está asociada con ciertas variantes de JCV que han adquirido variaciones de secuencia con respecto a una secuencia de JCV de "tipo salvaje" (Zheng y col., 2004, Microbes Infect., 6, 596-603). en esta invención se utiliza una secuencia de JCV de "tipo salvaje" para hacer referencia a la secuencia de cualquiera de los arquetipos de JCV que se encuentran en sujetos sanos que no tienen LMP y/o que no están en riesgo de tener LMP. En algunas realizaciones, una secuencia de referencia de "tipo salvaje" consenso puede ser un promedio de secuencias encontradas en un grupo de sujetos sanos. Curiosamente, en sujetos que tenían leucoencefalopatía multifocal progresiva, se aisló del cerebro un JCV con una serie de variaciones de secuencia, mientras que se aisló una variante de tipo salvaje de la orina del mismo individuo (Yogo y col., 2004, Rev Med Virol 14, 179-191). En consecuencia, un sujeto puede estar infectado con varias versiones diferentes de JCV al mismo tiempo. En algunas realizaciones de la presente invención, un sujeto infectado con una variante de JCV asociada con LMP es un sujeto en riesgo de desarrollar LMP.
En un aspecto, la presente invención proporciona ácido fusídico, para su uso en el tratamiento de sujetos infectados con el virus BK. Se cree que la infección por el virus BK está muy extendida, pero en su mayoría asintomática. El pulmón, el ojo, el hígado, el cerebro y el riñón son sitios de enfermedad asociada al virus BK. La infección en el riñón puede provocar hemorragia, cistitis no hemorrágica, estenosis ureteral y nefritis. La infección en el SNC se ha asociado con encefalitis y síndrome de Guillian-Barre. Se puede encontrar una descripción general de las enfermedades asociadas con el virus BK, por ejemplo, enReploeg y col. (Enfermedades Clínicas Infecciosas 2001; 33: 191-202). En algunas realizaciones, la presente invención proporciona ácido fusídico, para su uso en el tratamiento de sujetos con riesgo de infección por el virus BK. Los sujetos inmunodeprimidos o que reciben agentes inmunosupresores tienen un mayor riesgo de infección por el virus BK que da lugar a patogénesis. La infección por el virus BK patógeno puede ser especialmente problemática en pacientes que se someten a un trasplante de riñón, que a menudo se acompaña del uso de agentes inmunosupresores.
Debería apreciarse que un agente inmunosupresor puede aumentar la susceptibilidad de un sujeto a la progresión o exacerbación de una infección microbiana latente o a la contracción de una nueva infección microbiana. En algunas realizaciones, la infección microbiana es una infección por un virus de ADN. En algunas realizaciones, la infección microbiana es una infección por JCV, que causa LMP. En algunas realizaciones, la infección microbiana es una infección por virus BK. Los sujetos inmunodeprimidos (porejemplo, pacientes con SIDA) o los sujetos que se someten a tratamiento con inmunosupresores son sujetos con riesgo de LMP. Los sujetos con riesgo de LMP incluyen sujetos que pueden recibir o haber recibido tratamiento con uno o más agentes inmunosupresores (también llamados inmunosupresores). En algunos casos, el agente inmunosupresor se administra al sujeto para el tratamiento de una enfermedad o afección, incluidos uno o más de los siguientes ejemplos no limitativos: cáncer, trasplante de órganos, trasplante de tejidos, una afección o enfermedad inflamatoria, esclerosis múltiple (EM), artritis o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el agente inmunosupresor es un anticuerpo anti-VLA-4 (por ejemplo, natalizumab). En algunos casos, un sujeto en riesgo da positivo por la presencia de un ácido nucleico JCV o un polipéptido JCV. En otros casos, el sujeto en riesgo no da positivo por la presencia de un ácido nucleico de JCV o un polipéptido de JCV.
Actualmente, no existe una terapia antiviral específica que haya demostrado su eficacia para el tratamiento de la infección por JCV, y el tratamiento actual de sujetos inmunodeprimidos infectados con JCV o en riesgo de infección por JCV se centra principalmente en mejorar la función del sistema inmunológico en general. De manera similar, en sujetos infectados con j Cv o en riesgo de infección por JCV que están recibiendo inmunoterapia, los procedimientos de tratamiento actuales de la infección por JCV se limitan a la finalización o disminución de la dosis de la inmunoterapia. Las terapias que se utilizan actualmente para tratar la leucoencefalopatía multifocal progresiva se basan en la mejora de la respuesta inmunitaria, por ejemplo, HAART (terapia antirretroviral altamente activa) en pacientes VIH positivos. (por ejemplo, Marzocchetti y col, 2005, J Clin Microbiología 434: 4175-4177) o disminución en la cantidad de fármacos inmunosupresores en sujetos que reciben esos fármacos (por ejemplo, pacientes trasplantados). Los procedimientos de tratamiento de JCV incluyen, pero no se limitan a, IFN-alfa, citarabina y cidofovir. Los bloqueadores de 5HT2a pueden usarse también como tratamiento y actualmente se encuentran en estudio.
En algunos casos, un sujeto que recibe un agente inmunosupresor puede tratarse con composiciones que comprenden uno o más de los compuestos de la Tabla 1. En algunos casos, el tratamiento es profiláctico, por ejemplo, el sujeto que recibe inmunosupresores puede ser tratado con composiciones que comprenden uno o más más compuestos de la Tabla 1, incluso si no se ha demostrado que el sujeto esté infectado con un virus de ADN, incluidos JCV o BKV, y no muestre ningún síntoma asociado con LMP.
En algunos casos, un sujeto puede tratarse combinando un tratamiento inmunosupresor con un tratamiento contra la infección por virus de a Dn o el desarrollo de enfermedades asociadas con la infección por virus de ADN, incluida la LMP. La descripción comprende procedimientos de tratamiento que comprenden la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1 y un inmunosupresor. En un caso, la descripción comprende procedimientos de tratamiento que comprenden la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1 y natalizumab. En un caso, la descripción comprende procedimientos de tratamiento que comprenden la administración de una composición que comprende uno o más compuestos de la Tabla 1 y un anticuerpo anti-VLA-4 (por ejemplo, natalizumab).
En algunos casos, la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1 se puede combinar con procedimientos para eliminar o eliminar parcialmente un inmunosupresor del torrente sanguíneo de un sujeto. En algunos casos, el inmunosupresor puede eliminarse del torrente sanguíneo antes de la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1. En algunos casos, el uno o más compuestos de la Tabla 1 pueden combinarse con un compuesto que puede unirse a un inmunosupresor dando como resultado una mayor eliminación del inmunosupresor del torrente sanguíneo. En algunos casos, el procedimiento de eliminación o eliminación parcial del inmunosupresor del torrente sanguíneo de un sujeto es el intercambio de plasma (PLEX). En el intercambio de plasma se extrae sangre del cuerpo y el plasma que contiene el inmunosupresor se extrae de la sangre mediante un separador de células. La sangre se puede extraer del cuerpo en lotes o se puede eliminar en un modo de flujo continuo, permitiendo este último la reintroducción de la sangre procesada en el cuerpo. El plasma extraído que comprende los inmunosupresores se descartará y el paciente recibirá a cambio plasma de donante o solución salina con proteínas añadidas. Pueden ser necesarias múltiples rondas de intercambio de plasma para eliminar el inmunosupresor de la sangre o para reducir el nivel del inmunosupresor en la sangre a un nivel aceptable. Los procedimientos de intercambio de plasma son bien conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en el documento US 6.960.178.
El término tratamiento o terapia "inmunomoduladora" se refiere a la administración de uno o más compuestos que modulan (porejemplo, regulan positivamente o regulan negativamente) uno o más aspectos del sistema inmunológico de un sujeto. En algunas realizaciones, un tratamiento o terapia inmunomoduladora implica la administración de uno o más agentes inmunosupresores a un sujeto. En algunas realizaciones, un tratamiento o terapia inmunomoduladora regula negativamente el sistema inmunológico de un sujeto. Por consiguiente, en algunas realizaciones, una terapia inmunomoduladora es una terapia inmunosupresora. En algunas realizaciones, un tratamiento o terapia inmunomoduladora regula negativamente el sistema inmunológico de un sujeto. Debe apreciarse que un tratamiento o terapia inmunomoduladora (por ejemplo, un tratamiento o terapia de inmunosupresores) como se usa en esta invención también puede denominarse inmunoterapia en el contexto de los procedimientos descritos en esta invención.
El término "agente inmunosupresor" como se usa en esta invención se refiere a sustancias que actúan para suprimir o enmascarar el sistema inmunológico de un sujeto que se trata en esta invención. Los agentes inmunosupresores pueden ser sustancias que suprimen la producción de citoquinas, regulan negativamente o suprimen la expresión de autoantígeno o enmascaran los antígenos del MHC. Ejemplos de tales agentes incluyen pirimidinas sustituidas con 2-amino-6-aril-5 (véase por ejemplo, el documento de patente de EE.UU. n. ° 4.665.077); fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE); ganciclovir, tacrolimus, glucocorticoides tales como cortisol o aldosterona, agentes antiinflamatorios tales como un inhibidor de ciclooxigenasa, un inhibidor de 5-lipoxigenasa o un antagonista del receptor de leucotrienos; antagonistas de purina tales como azatioprina o micofenolato de mofetilo (MMF); agentes alquilantes tales como ciclofosfamida; bromocriptina; danazol; dapsona; glutaraldehído (que enmascara los antígenos del MHC, como se describe en el documento de patente de EE.UU. n. ° 4.120.649); anticuerpos antiidiotípicos para antígenos de MHC y fragmentos de MHC; ciclosporina A; esteroides tales como corticosteroides o glucocorticosteroides o análogos de glucocorticoides, por ejemplo, prednisona, metilprednisolona y dexametasona; inhibidores de la dihidrofolato reductasa tales como el metotrexato (oral o subcutáneo); hidroxicloroquina; sulfasalazina; leflunomida; antagonistas de citocinas o receptores de citocinas, incluidos anticuerpos anti-interferón-alfa, -beta o -gamma, anticuerpos factor-alfa de necrosis anti-tumor (infliximab o adalimumab), inmunoahesina anti-TNF-alfa (etanercept), anticuerpos factor-beta de necrosis anti-tumor, anticuerpos anti-interleucina-2 y anticuerpos anti-receptor de IL-2; anticuerpos anti-LFA-1, incluidos anticuerpos anti-CD11a y anti-CD 18; anticuerpos anti-CD20 (por ejemplo, rituximab, por ejemplo disponible bajo la marca registrada RITUXAN); anticuerpos anti-L3T4; anticuerpos anti-VLA-4 (por ejemplo, natalizumab); globulina anti-linfocitos heteróloga; anticuerpos pan-T, por ejemplo anticuerpos anti-CD3 o anti-CD4/CD4a; péptido soluble que contiene un dominio de unión a LFA-3 (documento WO 90/08187 publicado el 26 de julio de 1990); estreptoquinasa; TGF-beta; estreptodornasa; ARN o ADN del huésped; FK506; RS-61443; desoxiespergualina; rapamicina; receptor de células T (Cohen y col., documento de patente de EE.UU. n. ° 5.114.721); fragmentos del receptor de células T (Offner y col., Science, 251: 430432 (1991); documentos WO 90/11294; laneway, Nature, 341: 482 (1989); y WO 91/01133); y anticuerpos del receptor de células T (EP 340.109) tales como T10b9. Sin embargo, los sujetos que reciben otros agentes inmunosupresores también están incluidos en la invención.
Por consiguiente, los agentes inmunosupresores pueden ser fármacos que inhiben o previenen ciertos aspectos del sistema inmunológico. Los agentes inmunosupresores pueden ser fármacos que se utilizan en la terapia inmunomoduladora ( por ejemplo, inmunosupresora), por ejemplo, para prevenir el rechazo de órganos o tejidos trasplantados (por ejemplo, médula ósea, corazón, riñón, hígado), para tratar enfermedades autoinmunes o enfermedades con sospecha de estar asociadas con una reacción autoinmune (por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico, una enfermedad o síndrome inflamatorio del intestino, incluyendo, por ejemplo, la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y pénfigo), o para tratar una enfermedad o afección inflamatoria no autoinmune (por ejemplo, para el control del asma alérgica a término).
Los agentes inmunosupresores se pueden clasificar en cinco categorías generales: glucocorticoides, citostáticos, anticuerpos, fármacos que actúan sobre las inmunofilinas y otros fármacos. Los glucocorticoides pueden incluir fármacos que inhiben la inmunidad mediada por células (porejemplo, al inhibir IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, y/o TNF-y. Sin embargo, los glucocorticoides también pueden inhibir la inmunidad humoral. Los citostáticos pueden incluir fármacos que inhiben la división celular (por ejemplo, agentes que inhiben las células T y/o la proliferación de células B). En algunas realizaciones, los citostáticos pueden ser agentes alquilantes tales como mostazas de nitrógeno (por ejemplo, ciclofosfamida), nitrosureas, compuestos de platino y otros. En determinadas realizaciones, los agentes inmunosupresores pueden ser antimetabolitos tales como análogos del ácido fólico (por ejemplo, metotrexato), análogos de purina (por ejemplo, azatiprina, mercaptopurina), análogos de pirimidina o inhibidores de la síntesis de proteínas. Un agente inmunosupresor puede ser también un antibiótico citotóxico tal como la dactinomicina, una antraciclina, mitomicina C, bleomicina o mitramicina. Los anticuerpos citostáticos pueden ser anticuerpos policlonales o monoclonales que inhiben uno o más aspectos del sistema inmunológico (por ejemplo, que inhiben los linfocitos T). Los ejemplos no limitativos de preparaciones policlonales inmunosupresoras incluyen Atgam®, obtenido a partir de suero de caballo, y Thymoglobuline®, obtenido a partir de suero de conejo. En algunas realizaciones, los anticuerpos monoclonales pueden ser el receptor de IL-2 (CD25) y/o anticuerpos dirigidos contra CD3. Los ejemplos no limitativos de anticuerpos monoclonales inmunosupresores incluyen anticuerpos dirigidos al receptor de células T (por ejemplo, murorab, un anticuerpo anti-CD3), y/o anticuerpos dirigidos al receptor de IL-2 (por ejemplo, basiliximab (Simulect (R)) y daclizumab (Zenapax (R)). Los fármacos citostáticos que actúan sobre las inmunofilinas pueden incluir ciclosporina, tacrolimus(por ejemplo,Prograf), y/o sirolimus (por ejemplo, Rapamune o Rapamicina). Otros fármacos citostáticos pueden incluir interferones, opioides, proteínas de unión a TNF (por ejemplo, infliximab (por ejemplo, Remicade), etanercept (por ejemplo, Embrel) o adalimumab (porejemplo, Humira)), miofenolato, y/o pequeños agentes biológicos (por ejemplo, FTY720 o miriocina).
Los agentes inmunosupresores que pueden usarse para reducir el riesgo de rechazo del trasplante incluyen, pero no se limitan a: inhibidores de calcineurina (por ejemplo, Ciclosporina o Tacrolimus), inhibidores de mTOR ( por ejemplo, Sirolimus o Everolimus), antiproliferativos ( por ejemplo, Azatioprina, ácido micofenólico), corticosteroides (por ejemplo, prednisolona o hidrocortisona), y/o anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos monoclonales de receptor anti-IL-2Ralfa tales como basiliximab o daclizumab o anticuerpos policlonales anti-células T tales como globulina anti-timocitos (ATG) o globulina anti-linfocitos (ALG)).
En algunas realizaciones, el inmunosupresor es un anticuerpo de unión a VLA-4 como natalizumab (también conocido como Tysabri®). En algunas realizaciones, un anticuerpo de unión a VLA-4 es un anticuerpo IgG (por ejemplo, un anticuerpo IgG4). En algunas realizaciones, un anticuerpo de unión a VLA-4 es un anticuerpo monoclonal o policlonal. En algunas realizaciones, un anticuerpo de unión a VLA-4 es una versión humanizada de un anticuerpo murino. Se describen natalizumab y los anticuerpos de unión a VLA-4 relacionados, por ejemplo, en el documento US 5.840.299. mAb 21,6 y HP1/2 son anticuerpos monoclonales murinos ejemplares que se unen a VLA-4. Natalizumab es una versión humanizada de mAb murino 21,6 (véase, por ejemplo, el documento de patente de EE.UU. n. °5.840.299). Se ha descrito también una versión humanizada de HP1/2 (véase, por ejemplo, el documento de patente de EE.UU. n. ° 6.602.503). Se describen varios anticuerpos monoclonales de unión a VLA-4 adicionales, tales como HP2/1, HP2/4, L25 y P4C2 (porejemplo, en el documento de patente de EE.UU. n. ° 6.602.503; Sanchez-Madrid y col., 1986 Eur. J. Immunol., 16:1343-1349; Hemler y col., 1987 J. Biol. Chem. 2:11478-11485; Issekutz and Wykretowicz, 1991, J. Immunol., 147: 109 (TA-2 mab); Pulido y col., 1991 J. Biol. Chem., 266(16):10241-10245; y el documento de patente de EE.UU. n. ° 5.888.507). Muchos anticuerpos de unión a VLA-4 útiles interactúan con VLA-4 en las células,por ejemplo, linfocitos, pero no provocan agregación celular. Sin embargo, se ha observado que otros anticuerpos de unión anti-VLA-4 provocan tal agregación. HP1/2 no causa agregación celular. E1HP1/2 MAb (Sánchez-Madrid y col., 1986 Eur. J. Immunol., 16:1343-1349) tiene una potencia extremadamente alta, bloquea la interacción de VLA-4 con VCAM1 y fibronectina, y tiene la especificidad para el epítopo B en VLA-4. Este anticuerpo y otros anticuerpos específicos del epítopo B (tales como los anticuerpos de unión del epítopo B1 o B2; Pulido y col., 1991 J. Biol. Chem., 266(16):10241-10245) representan una clase de anticuerpos de unión a VLA-4 útiles.
Un anticuerpo de unión a VLA-4 ejemplar tiene una o más CDR, por ejemplo, las tres CDR de la cadena pesada (HC) y/o las tres CDR de la cadena ligera (LC) de un anticuerpo particular descrito en esta invención, o CDR que son, en conjunto, al menos en un 80, 85, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 % idénticas al natalizumab. En una realización, los bucles hipervariables de H1 y H2 tienen la misma estructura canónica que los de natalizumab. En algunas realizaciones, los bucles hipervariables de L1 y L2 tienen la misma estructura canónica que natalizumab. En algunas realizaciones, la secuencia de aminoácidos de la secuencia del dominio variable de la HC y/o LC es al menos en un 70, 80, 85, 90, 92, 95, 97, 98, 99, o 100 % idéntica a la secuencia de aminoácidos del dominio variable de la HC y/o LC de natalizumab. La secuencia de aminoácidos de la secuencia del dominio variable de la HC y/o LC puede diferir en al menos un amino ácido, pero no más de diez, ocho, seis, cinco, cuatro, tres o dos amino ácidos de la secuencia correspondiente de natalizumab. Por ejemplo, las diferencias pueden estar principal o totalmente en las regiones de estructura. Las secuencias de aminoácidos de las secuencias del dominio variable de la HC y LC pueden estar codificadas por una secuencia que se híbrida en condiciones de alta exigencia a una secuencia de ácidos nucleicos descrita en esta invención o una que codifica un dominio variable o a un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos descrita en esta invención. En una realización, las secuencias de aminoácidos de una o más regiones de estructura (por ejemplo, FR1, FR2, FR3 y/o FR4) del dominio variable de la HC y/o LC son al menos en un 70, 80, 85, 90, 92, 95, 97, 98, 99 o 100 % idénticas a las regiones de estructura correspondientes de los dominios variables de la HC y LC de natalizumab. En algunas realizaciones, una o más regiones de estructura de la cadena pesada o ligera (por ejemplo, FR1, FR2 y FR3 de la HC) son al menos en un 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, o 100 % idénticas a la secuencia de las regiones de estructura correspondientes de un anticuerpo de la estirpe germinal humana.
Los cálculos de “homología” o “identidad de secuencia” entre dos secuencias (los términos se usan indistintamente en esta invención) se realizan como se indica a continuación. Las secuencias se alinean a fin de realizar una comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir huecos en una o ambas de una primera y una segunda secuencia de aminoácidos o ácidos nucleicos para realizar un alineamiento óptimo y las secuencias no homólogas se pueden ignorar con fines comparativos). El alineamiento óptimo se determina como la mejor puntuación usando el programa GAP del paquete de software GCG con una matriz de puntuación Blossum 62 con una penalización de los huecos de 12, una penalización de la ampliación de huecos de 4 y una penalización del desplazamiento del marco de lectura de 5. A continuación, se comparan los residuos de aminoácidos o nucleótidos en las correspondientes posiciones de aminoácidos o posiciones de nucleótidos. Cuando una posición de la primera secuencia está ocupada por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la posición correspondiente de la segunda secuencia, entonces las moléculas son idénticas en esa posición (como se emplea en esta solicitud, “identidad” de aminoácidos o ácidos nucleicos es equivalente a “homología” de aminoácidos o ácidos nucleicos. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias. El experto en la materia se dará cuenta de que se pueden realizar sustituciones conservadoras de aminoácidos en anticuerpos de unión a VLA-4 para proporcionar variantes funcionalmente equivalentes de estos anticuerpos. Como se usa en esta invención, una "sustitución de aminoácidos conservadora" se refiere a una sustitución de aminoácidos que no altera la carga relativa o las características de tamaño de la proteína donde se hace la sustitución de aminoácidos. Las variantes se pueden preparar según procedimientos para alterar la secuencia de polipéptidos conocidos por un experto en la materia, como los que se encuentran en las referencias que compilan tales procedimientos,por ejemplo,Molecular Cloning: A Laboratory Manual, J. Sambrook, y col., eds., Segunda edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, 1989oCurrent Protocols in Molecular Biology, FM Ausubel, y col., eds., John Wiley & Sons, Inc., Nueva York. Las variantes funcionalmente equivalentes ejemplares de anticuerpos de unión a VLA-4 incluyen sustituciones de aminoácidos conservadoras en las secuencias de aminoácidos de proteínas descritas en esta invención. Las sustituciones conservadoras de aminoácidos incluyen sustituciones hechas entre aminoácidos dentro de los siguientes grupos: (a) M, I, L, V; (b) F, Y, W; (c) K, R, H; (d) A, G; (e) S, T; (f) Q, N; and (g) E, D.
En algunos casos, los procedimientos de tratamiento o prevención comprenden la administración de una composición que comprende uno o más compuestos de la Tabla 1 y uno o más compuestos antivirales conocidos o putativos o compuestos que muestran actividad antiviral. Los compuestos antivirales conocidos o putativos son compuestos que suprimen o inhiben la infección viral, la proliferación viral y/o el desarrollo de enfermedades asociadas con infecciones virales. Los fármacos antivirales pueden clasificarse como dirigidos a una de las etapas del ciclo de vida del virus. Una categoría de fármacos antivirales se basa en interferir con la entrada del virus. Un virus se une a un receptor específico para infiltrarse en una célula diana. La entrada viral se puede suprimir bloqueando la vía de entrada viral. Los fármacos antivirales que tienen este modo de acción son los anticuerpos anti-receptor, ligandos naturales del receptor y pequeñas moléculas que pueden unirse al receptor. Una segunda categoría de fármacos antivirales son los compuestos que inhiben la síntesis viral. Los fármacos antivirales que tienen este modo de acción son análogos de nucleósidos que son similares a los componentes básicos del ADN y el ARN, pero desactivan la maquinaria proteica (por ejemplo., transcriptasa inversa o ADN polimerasa) que se usa para replicar el virus. Otros fármacos tienen como objetivo bloquear los factores de transcripción del ADN viral, las ribozimas, que pueden interferir con la producción de a Dn viral. Otros fármacos se dirigen al ARN viral para su destrucción, incluidos los ARNip y los ácidos nucleicos antisentido contra las secuencias de ácidos nucleicos virales. Otra clase más de fármacos antivirales son los fármacos que pueden interferir con la función de proteínas específicas del virus. Esta clase incluye los inhibidores de la proteasa del VIH. Los fármacos antivirales incluyen también fármacos dirigidos a la etapa de liberación del virus. Esta categoría de fármacos incluye compuestos que interfieren con las proteínas necesarias para construir las partículas virales. Otra clase de fármacos antivirales son los fármacos que estimulan el sistema inmunológico para atacar la infección viral. Los fármacos que pertenecen a esta clase son los interferones, que inhiben la síntesis viral en las células infectadas y anticuerpos que pueden apuntar a una célula infectada para que el sistema inmunológico los destruya. Otros agentes antivirales se describen en los documentos de patente de e E.UU. n. ° 6.130.326, y 6.440.985, y en la solicitud de patente de EE.UU. publicada 20020095033. Por consiguiente, debe apreciarse que los compuestos identificados en esta invención tienen actividad antiviral y pueden actuar a través de cualquier mecanismo antiviral descrito anteriormente. En algunos casos, los compuestos identificados en esta invención inhiben o suprimen la replicación viral (por ejemplo, la replicación del ADN viral).
La actividad antiviral de un compuesto puede ensayarse en un ensayo basado en células in vitro. La actividad antiviral puede resultar de i) la interacción de un compuesto con el virus para prevenir la infección de una célula o para prevenir la replicación, desarrollo, y/o la proliferación del virus después de la infección, ii) el efecto de un compuesto en una célula para prevenir la infección por el virus o para prevenir la replicación, el desarrollo, y/o la proliferación del virus después de la infección, o iii) cualquier otro mecanismo o cualquier combinación de los mismos. Independientemente del modo de acción, una composición puede tener actividad antiviral si reduce el porcentaje o el número de células infectadas en un ensayo basado en células. Un compuesto (o una combinación de dos o más compuestos) tiene actividad antiviral cuando reduce el porcentaje o el número de células infectadas en al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 40 %, al menos un 50 %, o más (por ejemplo, en un ensayo basado en células). Un compuesto tiene actividad antiviral cuando reduce la cantidad de ácidos nucleicos virales dentro de una célula. En ciertos casos, un compuesto inhibe la replicación de ácidos nucleicos virales dentro de una célula (porejemplo, un compuesto reduce la cantidad de replicación viral en aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, o porcentajes de reducción superiores o inferiores o intermedios). Debe apreciarse que una reducción en la replicación viral puede medirse usando un ensayo celular y midiendo la cantidad de ADN viral o la tasa de replicación del ADN viral a lo largo del tiempo (o cualquier otra medida de replicación viral) en presencia de un compuesto y comparándola con la replicación viral en ausencia del compuesto o en presencia de un compuesto de control.
Debe apreciarse que ciertas composiciones pueden inhibir eficazmente la actividad viral en ciertos tipos celulares y no en otras. Una composición puede ser útil si es eficaz en ciertos tipos celulares independientemente de si está activa en todos los tipos celulares (o incluso en más de un tipo celular). Por ejemplo, las composiciones pueden ser efectivas al menos en una o más células neurales, por ejemplo, una o más células del sistema nervioso central (por ejemplo, células gliales, astrocitos, etc.). Debe apreciarse que, en algunos casos, los compuestos no citotóxicos (o compuestos que matan selectivamente a las células infectadas) se usan en las composiciones y procedimientos de la descripción.
En algunos casos, los procedimientos de tratamiento o prevención comprenden la administración de una composición que comprende uno o más compuestos de la Tabla 1 y la administración de una vacuna contra un virus de a Dn . Una vacuna se define como una composición farmacéutica que, cuando se administra a un sujeto en una cantidad efectiva, estimula la producción de un anticuerpo protector o una respuesta protectora de las células T. En algunos casos, la vacuna es una vacuna proteica que comprende una o más secuencias polipeptídicas codificadas por una secuencia de virus de ADN. En algunos casos, la vacuna es una vacuna de ácido nucleico que comprende ácidos nucleicos virales de ADN. Los regímenes de administración de vacunas son conocidos por los expertos en la materia. En algunos casos, los intervalos de cantidades de vacunas polipeptídicas para la profilaxis de la infección viral por ADN son de 0,01 a 100 microgramos/dosis, por ejemplo, de 0,1 a 50 microgramos/dosis. Pueden ser necesarias varias dosis por sujeto para lograr una respuesta inmune suficiente y la protección posterior contra la infección viral por ADN (por ejemplo, "inmunizar" a un sujeto). El término "inmunizante" se refiere a la capacidad de una sustancia para provocar una reacción humoral y/o respuesta celular en un sujeto, ya sea solo o cuando está unido a un portador, en presencia o ausencia de un adyuvante, y también se refiere a una respuesta inmune que bloquea la infectividad, parcial o totalmente, de un agente infeccioso.
En algunos casos, los procedimientos de tratamiento o prevención comprenden la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1 y la administración de un anticuerpo contra un virus de ADN. En algunos casos, los procedimientos de tratamiento o prevención comprenden la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1 y la administración de un anticuerpo contra JCV. Los anticuerpos se pueden usar en terapia para tratar sujetos con LMP y/o para prevenir la infección y/o suprimir la actividad de JCV y otros virus de ADN. Pueden seleccionarse anticuerpos adecuados o fragmentos de los mismos por la capacidad de unirse a uno o más polipéptidos codificados por un virus de ADN, incluido el JCV. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo puede ser una IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD, IgE o puede tener una constante de inmunoglobulina y/o dominio variable de una IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD o IgE. En algunos casos, el anticuerpo es un anticuerpo biespecífico o multiespecífico. En algunos casos, el anticuerpo es un anticuerpo recombinante, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico, o una mezcla de estos. En algunos casos, el anticuerpo es un anticuerpo humano,por ejemplo, un anticuerpo monoclonal humano, un anticuerpo policlonal o una mezcla de anticuerpos monoclonales y policlonales. Los fragmentos de unión a antígeno pueden incluir un fragmento Fab, un fragmento F(ab ')2, y/o un fragmento FvCDR3. Se pueden producir anticuerpos contra una proteína de virus de ADN de longitud completa o una proteína de JCV o contra variantes de polipéptidos que comprenden una secuencia parcial de una proteína de virus de ADN o una proteína de JCV. Los anticuerpos se pueden generar inyectando a un animal, por ejemplo, un conejo, una cabra o un ratón, con el antígeno (por ejemplo, un polipéptido de una proteína del virus del ADN o una proteína JCV). Para preparar anticuerpos policlonales, se pueden sintetizar proteínas de fusión que contienen un polipéptido de una proteína de virus ADN o proteína JCV en bacterias mediante la expresión de secuencias de ADN correspondientes en un vehículo de clonación adecuado. La proteína de fusión puede a continuación purificarse, acoplarse a una proteína portadora y mezclarse con adyuvante de Freund (para ayudar a estimular la respuesta antigénica de los conejos) e inyectarse en conejos u otros animales de laboratorio. Alternativamente, los polipéptidos pueden aislarse de células cultivadas que expresan la proteína. Después de las inyecciones de recuerdo a intervalos quincenales, se extrae sangre de los conejos u otros animales de laboratorio y se aíslan los sueros. Los sueros pueden usarse directamente o purificarse antes de su uso, por ejemplo, mediante procedimientos tales como cromatografía de afinidad, proteína A-sefarosa, antígeno sefarosa, sefarosa anti-Ig de ratón. A continuación, los sueros pueden usarse para sondar extractos de proteínas que se procesan en un gel de poliacrilamida para identificar el virus del ADN o los polipéptidos de JCV. Alternativamente, se pueden preparar virus de ADN sintético o polipéptidos JCV y usarlos para inocular animales. Para producir virus de ADN monoclonal o anticuerpos JCV, los ratones se inyectan varias veces (véase más arriba), los bazos de los ratones se extraen y se resuspenden en una solución salina tamponada con fosfato (PBS). Las células del bazo sirven como fuente de linfocitos, algunos de los cuales producen anticuerpos de la especificidad adecuada. A continuación, se fusionan con una célula compañera de mieloma en crecimiento permanente, y los productos de la fusión se colocan en placas en varios pocillos de cultivo de tejidos en presencia de un agente selectivo tal como HAT. A continuación, los pocillos se examinan mediante ELISA para identificar aquellos que contienen células que expresan anticuerpos útiles. A continuación, se recubren. Después de un período de crecimiento, estos pocillos se examinan de nuevo para identificar células productoras de anticuerpos. Se llevan a cabo varios procedimientos de clonación hasta que más del 90 % de los pocillos contienen clones únicos que son positivos para la producción de anticuerpos. A partir de este procedimiento se establece una línea estable de clones para producir el anticuerpo. A continuación, se puede purificar un anticuerpo monoclonal mediante cromatografía de afinidad utilizando proteína A Sefarosa, cromatografía de intercambio iónico, así como variaciones y combinaciones de estas técnicas (véase, por ejemplo, el documento de patente de EE.UU.
6.998.467). Para que los anticuerpos se utilicen en terapia en humanos, pueden estar "humanizados". La humanización de anticuerpos implica reemplazar secuencias nativas de ratón con secuencias humanas para reducir la posibilidad de una respuesta inmune una vez que el anticuerpo terapéutico se introduce en humanos. En algunos casos, pueden usarse anticuerpos humanos (por ejemplo, identificados a partir de bibliotecas de anticuerpos humanos).
En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la proliferación o la infección viral por ADN tienen una IC50 < 100 pM, IC50 < 20 pM, una IC50 < l0 pM, una IC50 < 5 pM, o una IC50 incluso inferior. El IC5o(concentración inhibitoria) se define en esta invención como la concentración de inhibidor a la que se inhibe el 50 % de la infección viral JC. En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la infección o la proliferación viral del ADN tienen una TC50 > 5 pM, una TC50 > 20 pM, una TC50 > 50 pM, una TC50 > 100 pM, o una TC50 incluso mayor. La TC50(concentración citotóxica) se define en esta invención como la concentración del inhibidor a la que muere el 50 % de las células. En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la infección o la proliferación viral del ADN tienen una IC50/TC50 < 5, una IC50/TC50 < 1, una IC50/TC50 < 0,5, una IC50/TC50 < 0,2, una IC50/TC50 < 0,2 o una IC50/TC50 incluso inferior. Un compuesto con una IC50/TC50 inferior tiene potencialmente una ventana terapéutica potencial mayor, ya que una IC50/TC50 inferior se correlaciona con una IC50inferior (concentración inhibidora) y una TC50superior (concentración citotóxica).
En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la infección o la proliferación viral del ADN, tras la administración, tienen una concentración en el tejido diana de al menos 0,5 x IC50, al menos 1 x IC50, al menos 2 x IC50, al menos 3 x IC50, al menos 10 x IC50 o superior. En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la infección o la proliferación viral del ADN, tras la administración, tienen una concentración en el tejido diana inferior a 1 x TC50, inferior a 0,5 x TC50, inferior a 0,2 x TC50, inferior a 0,1 x TC50, inferior a 0,01 x TC50 o inferior. En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la infección o proliferación viral del ADN, tras su administración, tienen una tasa de IC50/TC50 en el tejido diana inferior a < 5, a una IC50/TC50 < 1, una IC50/TC50 < 0,5, una IC50</TC50 < 0,2, una IC50/TC50 < 0,2 o una IC50/TC50 incluso inferior.
El tejido diana, como se usa en esta invención, abarca cualquier tejido en un sujeto, incluyendo, pero sin limitarse a, riñón, cerebro, hígado, bazo, médula ósea, intestino, estómago. En algunos casos, el tejido diana es tejido cerebral o SNC. En algunos casos, el tejido diana es el riñón. En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la infección o la proliferación viral del ADN tienen un alto nivel en plasma tras la administración. En algunos casos, los compuestos que previenen o tratan la infección o la proliferación viral de ADN, en los que la infección viral de ADN se localiza en el riñón o se espera que se dirija al riñón, tienen un alto nivel en plasma tras la administración.
En algunas realizaciones, la infección con un virus de ADN se caracteriza por, o tiene el potencial de producir, una infección del cerebro, incluidos el SNC y el LCR. En algunas realizaciones, el ácido fusídico se administra a un sujeto que tiene una infección por virus de ADN del cerebro, está en riesgo de infección del cerebro por un virus de ADN o tiene una enfermedad asociada con una infección por virus de ADN del cerebro (por ejemplo, LMP). En algunas realizaciones, el ácido fusídico se administra junto con un agente que se dirige o facilita el suministro de los compuestos a través de la barrera hematoencefálica.
Como se usa en esta invención, un "agente de diana de la barrera hematoencefálica" es una molécula o compuesto que es capaz de cruzar la barrera hematoencefálica y puede usarse para administrar una composición terapéutica de la descripción a través de la barrera hematoencefálica y en el SNC. Como se usa en esta invención, un "agente diana de células del SNC" es una molécula o compuesto que administra una composición de la descripción a una región del SNC o a, o en, un tipo de célula del SNC una vez que la composición está dentro de la barrera hematoencefálica. Se entenderá que, en algunos casos, una composición terapéutica puede unirse a uno o más agentes diana hematoencefálicos y también puede unirse a uno o más agentes diana de células del SNC. Por tanto, puede haber más de un tipo de agente diana de barrera hematoencefálica y/o más de un agente diana de células del SNC unido a un portador de la descripción. En algunos casos, uno o más de los compuestos de la Tabla 1 pueden empaquetarse en un portador (por ejemplo, un liposoma) para facilitar o dirigir la entrega al cerebro y/o el SNC.
En algunas realizaciones, el ácido fusídico se puede administrar directamente a un tejido infectado por, o sospechoso de estar infectado por, el virus de ADN (por ejemplo, JCV, BCV u otro virus de ADN). En algunas realizaciones, el ácido fusídico se puede administrar directamente al cerebro. En algunas realizaciones, el ácido fusídico se puede administrar mediante inyección intratecal. Una inyección intratecal es una inyección en el canal espinal que facilita el suministro directo de un compuesto al SNC y al cerebro, evitando así la barrera hematoencefálica. En algunas realizaciones, la inyección intratecal se realiza como un procedimiento de administración de compuestos que tienen una baja administración por vía oral.
La frase "cantidad terapéuticamente efectiva", como se usa en esta invención, significa la cantidad de un compuesto, material o composición que comprende uno o más compuestos de la presente descripción que son eficaces para producir algún efecto terapéutico deseado en un sujeto en una tasa de beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento médico. Por consiguiente, en algunos casos, una cantidad terapéuticamente efectiva previene, minimiza o revierte la progresión de la enfermedad asociada con la infección con un virus de ADN (incluyendo JCV, BCV u otro virus de ADN). La progresión de la enfermedad puede controlarse mediante observaciones clínicas, investigaciones de laboratorio e imágenes evidentes para un experto en la materia. Una cantidad terapéuticamente efectiva puede ser una cantidad que sea efectiva en una sola dosis o una cantidad que sea efectiva como parte de una terapia multidosis, por ejemplo, una cantidad que se administra en dos o más dosis o una cantidad que se administra de forma crónica.
La cantidad efectiva de uno o más compuestos puede ser de aproximadamente 10 ng/kg de peso corporal a aproximadamente 1000 mg/kg del peso corporal, y la frecuencia de administración puede variar de una vez al día a una vez al mes. Sin embargo, también se pueden usar otras cantidades y frecuencias de dosificación. A un sujeto se le pueden administrar uno o más compuestos descritos en esta invención en una cantidad efectiva para tratar o prevenir la infección con un virus de ADN. Como se usa en esta invención, un tratamiento puede ser profiláctico y/o terapéutico. Un tratamiento puede incluir prevenir una infección viral y/o proliferación. Un tratamiento puede incluir inhibir o reducir la infección viral y/o proliferación. Debe apreciarse que los términos que impiden y/o inhiben puede usarse para referirse a una prevención parcial y/o inhibición (por ejemplo, una reducción porcentual, por ejemplo aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, o porcentajes de reducción superiores o inferiores o intermedios). Sin embargo, una prevención o inhibición puede ser completa (por ejemplo, una reducción del 100 % o una reducción de aproximadamente el 100 % según un ensayo).
En algunos casos, la cantidad efectiva es específica de tejido. En algunos casos, la cantidad efectiva es una cantidad de uno o más compuestos de la Tabla 1 que da como resultado la prevención o inhibición de la actividad viral en un tejido específico (por ejemplo, la proliferación viral en ese tejido). En algunos casos, la cantidad efectiva es una cantidad de uno o más compuestos de la Tabla 1 que da como resultado la prevención o inhibición de la actividad viral en el cerebro. En algunos casos, la cantidad efectiva es una cantidad de uno o más compuestos de la Tabla 1 que da como resultado aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, o porcentajes superiores, inferiores o intermedios de inhibición de la actividad viral en el cerebro. En algunos casos, la cantidad efectiva es una cantidad de uno o más compuestos de la Tabla 1 que da como resultado aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, o porcentajes superiores o inferiores o intermedios de reducción de la replicación del ADN viral en una célula (por ejemplo, medido en un ensayo celular) en comparación con el porcentaje de reducción de la replicación del ADN viral en ausencia de un compuesto (o cuando la célula está expuesta a un compuesto de control que no tiene actividad antiviral,por ejemplo, solución salina o control de vehículo). En algunos casos, la concentración de la muestra biológica de uno o más compuestos de la Tabla 1 es 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1 pM, 10 pM, 100 pM, 1 mM, 10 mM, 100 mM después de la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1. En algunos casos, la concentración de la muestra biológica de uno o más compuestos de la Tabla 1 es al menos 10 pM después de la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1. En algunos casos, la concentración de uno o más compuestos de La Tabla 1 en un tejido específico es 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1 pM, 10 pM, 100 pM, 1 mM, 10 mM, 100 mM después de la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1. En algunos casos, la concentración de uno o más compuestos de la Tabla 1 en un tejido específico es de al menos 10 pM después de la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1. En algunos casos, la concentración de uno o más compuestos de la Tabla 1 en el cerebro es 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1 pM, 10 pM, 100 pM, 1 mM, 10 mM, 100 mM después de la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1. En en algunos casos, la concentración de uno o más compuestos de la Tabla 1 en el cerebro es de al menos 10 pM después de la administración de uno o más compuestos de la Tabla 1.
Por consiguiente, los procedimientos de tratamiento de la infección por JCV y la LMP pueden evaluarse antes de iniciar el tratamiento con un agente inmunosupresor, durante la administración de un agente inmunosupresor, o evaluarse después de que se haya administrado un agente inmunosupresor o después de que se haya terminado el tratamiento con un tratamiento inmunosupresor.
Como se usa en esta invención, "diagnosticar" y "evaluar el tratamiento de la LMP" comprende determinar la presencia de la infección por JCV. La determinación de la presencia de infección por JCV comprende la detección de JCV en uno o más tejidos o en líquidos (que puede incluir determinar la carga viral en sangre y/o el líquido cefalorraquídeo) y puede incluir la determinación de la secuencia de JCV. Los ensayos de diagnóstico incluyen, pero no se limitan a, histopatología, inmunohistoquímica, citometría de flujo, citología, ensayos patofisiológicos, incluyendo resonancia magnética y tomografía, ensayos neurológicos, ensayos bioquímicos. Los ensayos bioquímicos incluyen, pero no se limitan a, análisis de variantes, análisis del genoma viral, análisis ELISA, incluido el uso de anticuerpos contra una o más proteínas de JCV, análisis de proteínas específicas, recuento de plaquetas, etc. Los expertos en la materia serán conscientes de numerosos protocolos y parámetros de diagnóstico que se utilizan rutinariamente en la materia.
Las pruebas de diagnóstico específicas de la leucoencefalopatía multifocal progresiva (LMP) y los procedimientos de monitorización de los síntomas de la leucoencefalopatía multifocal progresiva se pueden utilizar en relación con la monitorización y el tratamiento de un sujeto con leucoencefalopatía multifocal progresiva, un sujeto sospechoso de tener leucoencefalopatía multifocal progresiva, un sujeto en riesgo de padecer leucoencefalopatía multifocal progresiva, un sujeto que está siendo tratado con inmunosupresores, y/o un sujeto actualmente en tratamiento para la leucoencefalopatía multifocal progresiva. Los criterios de diagnóstico de leucoencefalopatía multifocal progresiva pueden usarse en la evaluación de los sujetos que están siendo tratados (por ejemplo, para monitorear la eficacia del tratamiento) o para ayudar en la decisión de si tratar a un sujeto con un procedimiento o composición de la descripción, incluyendo, pero sin limitarse a, si complementar un tratamiento alternativo con un tratamiento de la descripción. Los criterios de diagnóstico de LMP pueden usarse para ayudar en la decisión con respecto al tratamiento de un sujeto con inmunosupresores,por ejemplo, para terminar, detener temporalmente o disminuir la dosis de regímenes de tratamiento inmunosupresor. Los síntomas de la leucoencefalopatía multifocal progresiva son neurológicos e incluyen problemas con la coordinación ojo-mano, incluida la dificultad para escribir y teclear, así como problemas con el habla, hemiparesia y afasia no fluida. En algunos casos, una resonancia magnética que muestra un aumento en la extensión de las anomalías de la señal ponderada en T2 alta y ponderada en T1 baja en comparación con una referencia normal es indicativa de LMP. La resonancia magnética se puede utilizar para controlar los cambios en el tamaño de la lesión y la progresión de la leucoencefalopatía multifocal progresiva. La detección de ADN de JCV mediante PCR en LCR es una prueba de diagnóstico de lMp ampliamente utilizada, tiene una especificidad del 99 % y una selectividad del 70 %. También se puede realizar una biopsia de cerebro para la detección de ADN de JCV para diagnosticar o evaluar la LMP. En ausencia del resultado de JCV PCR para LCR, se puede realizar una biopsia de cerebro y la detección de ADN de JCV en tejido cerebral se utiliza como diagnóstico positivo deLMP. Kappos y col., Tratamiento con natalizumab para la esclerosis múltiple: recomendaciones para la selección y el monitoreo de pacientes, Lancet Neurol., mayo de 2007, 6 (5): 431-41, describe ejemplos no limitativos de algoritmos de diagnóstico y manejo para monitorear pacientes (por ejemplo, pacientes con esclerosis múltiple) que son tratados con natalizumab. Los pacientes pueden ser monitoreados mediante una combinación de evaluaciones clínicas, de resonancia magnética y de laboratorio.
Como se usa en esta invención, los procedimientos de la invención pueden llevarse a cabo en sujetos. Un sujeto puede ser un ser humano o un animal no humano, incluidos, entre otros, un primate no humano, vaca, caballo, cerdo, oveja, cabra, perro, gato o roedor. En general, todas las realizaciones descritas en esta invención pueden aplicarse a sujetos humanos cuando sea apropiado.
En algunas realizaciones, las composiciones para uso en procedimientos de tratamiento de la invención comprenden la administración de ácido fusídico en combinación con compuestos terapéuticos candidatos identificados en cribados de actividad contra infección viral por ADN o LMP. Los compuestos candidatos que tienen actividad contra la infección viral de ADN o LMP pueden ser identificados a través de una variedad de procedimientos de cribado que incluye ambos cribados in vitro y en pantallas in vivo. Los cribados in vitro abarcan ensayos tanto bioquímicos como biológicos. Los ensayos bioquímicos abarcan ensayos que pueden determinar la unión de compuestos terapéuticos candidatos a una diana específica, por ejemplo, una proteína u otra macromolécula del virus de ADN. Los ensayos biológicos abarcan ensayos celulares, que pueden, por ejemplo, basarse en la captación de un virus en una célula, la liberación de un virus de una célula, la tasa de infección, la replicación del ADN viral (por ejemplo, medidos como una tasa de replicación del ADN viral, una cantidad de ADN viral en una célula, u otra medida de replicación del ADN viral), etc., o cualquier combinación de los mismos. En general, los ensayos tendrán una lectura (como fluorescencia) que permitirá la determinación de la eficacia terapéutica potencial de un compuesto terapéutico candidato para el tratamiento de la infección con un virus de ADN o LMP. En algunas realizaciones, una mezcla de ensayo para probar un agente candidato comprende un agente candidato. Un agente candidato puede ser un anticuerpo, un pequeño compuesto orgánico o un polipéptido y, por consiguiente, puede seleccionarse entre bibliotecas de anticuerpos combinatorios, bibliotecas de proteínas combinatorias o bibliotecas de moléculas orgánicas pequeñas. Típicamente, se ejecutan una pluralidad de mezclas de reacción en paralelo con diferentes concentraciones de agente para obtener una respuesta diferente a las diversas concentraciones. Normalmente, una de estas concentraciones sirve como control negativo, por ejemplo, a una concentración cero de agente o a una concentración de agente por debajo de los límites de detección del ensayo. Cualquier molécula o compuesto puede ser un candidato terapéutico. Los ejemplos no limitantes de agentes terapéuticos candidatos son moléculas pequeñas, ARN que incluye ARNip, ADN que incluye aptámeros y proteínas que incluyen anticuerpos y fragmentos de anticuerpos. La invención abarca también compuestos terapéuticos candidatos con diferentes modos de acción. Los agentes candidatos abarcan numerosas clases químicas, aunque típicamente son compuestos orgánicos, proteínas o anticuerpos (y fragmentos de los mismos que se unen al antígeno). En algunas realizaciones generales, los agentes candidatos son pequeños compuestos orgánicos, por ejemplo, los que tienen un peso molecular de más de 50 pero menos de aproximadamente 2500, por ejemplo, menos de aproximadamente 1000 y, en ciertas realizaciones, menos de aproximadamente 500. Los agentes candidatos comprenden grupos químicos funcionales necesarios para las interacciones estructurales con polipéptidos y/o ácidos nucleicos, y pueden incluir al menos un grupo amina, carbonilo, hidroxilo o carboxilo, opcionalmente al menos dos de los grupos químicos funcionales o al menos tres de los grupos químicos funcionales. Los agentes candidatos pueden comprender carbono cíclico o estructuras heterocíclicas y/o estructuras aromáticas o poliaromáticas sustituidas con uno o más de los grupos funcionales anteriores identificados. Los agentes candidatos pueden ser también biomoléculas tales como ácidos nucleicos, polipéptidos, sacáridos, ácidos grasos, esteroles, isoprenoides, purinas, pirimidinas, derivados o análogos estructurales de los anteriores, o combinaciones de los mismos y similares.
Los agentes candidatos se obtienen de una amplia variedad de fuentes, incluidas bibliotecas de compuestos sintéticos o naturales. Por ejemplo, están disponibles numerosos medios para la síntesis aleatoria y dirigida de una amplia variedad de compuestos orgánicos y biomoléculas, incluida la expresión de oligonucleótidos aleatorios, bibliotecas combinatorias orgánicas sintéticas, bibliotecas de presentación de fagos de polipéptidos aleatorios o no aleatorios, bibliotecas combinatorias de proteínas o anticuerpos y similares. Alternativamente, están disponibles o se producen fácilmente bibliotecas de compuestos naturales en forma de extractos bacterianos, fúngicos, vegetales y animales. Además, las bibliotecas y compuestos naturales y producidos sintéticamente se pueden modificar fácilmente mediante medios químicos, físicos y bioquímicos convencionales. Además, los agentes conocidos pueden someterse a modificaciones químicas directas o aleatorias tales como acilación, alquilación, esterificación, amidificación, etc. para producir análogos estructurales de los agentes.
También se pueden incluir en la mezcla una variedad de otros reactivos. Estos incluyen reactivos tales como sales, tampones, proteínas neutras (por ejemplo, albúmina), detergentes, etc., que pueden usarse para facilitar una proteínaproteína óptima y/o unión proteína-agente. Tal reactivo puede reducir también las interacciones no específicas o de fondo de los componentes de la reacción. También se pueden utilizar otros reactivos que mejoran la eficacia del ensayo, tales como inhibidores de proteasa, inhibidores de nucleasa, agentes antimicrobianos y similares.
En algunos casos, los compuestos terapéuticos candidatos se basan en los compuestos de la Tabla 1 y comprenden versiones modificadas de los compuestos de la Tabla 1 generadas mediante procedimientos de química médica conocidos por el experto en la materia.
En otro aspecto, la presente descripción proporciona "composiciones farmacéuticas" que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos descritos en esta invención, formulados junto con uno o más vehículos (aditivos) y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Como se describe en detalle, las composiciones farmacéuticas de la presente descripción pueden formularse especialmente para la administración en sólido o líquido de, incluyendo las adaptadas a lo siguiente: administración por vía oral, por ejemplo, enjuagues (suspensiones o soluciones acuosas o no acuosas), comprimidos, por ejemplo, los destinados a absorción sistémica, bucal y sublingual, bolos, polvos, gránulos, pastas para aplicación en la lengua; administración parenteral, por ejemplo, por inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o epidural, por ejemplo, como una suspensión o solución estéril, o formulación de liberación sostenida; aplicación tópica, por ejemplo, como crema, ungüento o un aerosol o parche de liberación controlada aplicado sobre la piel, pulmones o cavidad oral; de forma intravaginal o intrarrectal, por ejemplo, como pesario, crema o espuma; por vía sublingual; de forma ocular, de forma transdérmica; o por vía nasal, pulmonar y a otras superficies mucosas.
La frase “ farmacéuticamente aceptable” se emplea en esta invención para referirse a los compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que están, dentro del ámbito de un criterio médico sensato, adecuados para su uso en contacto con tejidos humanos y animales sin provocar una toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, con una relación beneficio/riesgo correspondiente razonable.
La frase "vehículo farmacéuticamente aceptable" según se usa en esta invención significa un material, una composición o un vehículo farmacéuticamente aceptables, tales como un relleno líquido o sólido, diluyente, excipiente, o un material para encapsulado de solvente, involucrado en el traslado o transporte del compuesto objeto de un órgano o parte del cuerpo a otro órgano o parte del cuerpo. Cada excipiente debe ser “aceptable” en el sentido de que sea compatible con los demás ingredientes de la formulación y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sucrosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua exenta de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones de tampón de pH; poliésteres, policarbonatos y/o polianhídridos; y otras sustancias no tóxicas compatibles empleadas en formulaciones farmacéuticas.
Las formulaciones de la presente descripción incluyen las adecuadas para administración por vía oral, nasal, tópica (incluida bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquier procedimiento bien conocido en la técnica de farmacia. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosificación única variará en función del hospedador que se esté tratando y el modo particular de administración. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosificación única será generalmente la cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. Generalmente, esta cantidad oscilará entre el 1 % hasta aproximadamente el 99 % del ingrediente activo, por ejemplo, desde aproximadamente el 5 % a aproximadamente el 70 %, y en algunos casos desde aproximadamente el 10 % hasta aproximadamente el 30 %.
En ciertas realizaciones, una formulación comprende un excipiente seleccionado del grupo que consiste en ciclodextrinas, liposomas, agentes formadores de micelas, por ejemplo, ácidos biliares y vehículos poliméricos, por ejemplo, poliésteres y polianhídridos; y un compuesto de la presente descripción. En ciertas realizaciones, una formulación mencionada anteriormente hace que un compuesto de la presente descripción sea biodisponible por vía oral.
Los procedimientos de preparación de estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de asociar un compuesto de la presente descripción con el vehículo y, opcionalmente, uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan al asociar de manera uniforme e íntima un compuesto de la presente descripción con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y a continuación, si es necesario, dándole forma al producto.
Las formulaciones de la descripción adecuadas para administración por vía oral pueden encontrarse en forma de cápsulas, sellos, píldoras, comprimidos, grageas (usando una base saborizada, normalmente sacarosa y acacia o tragacanto), polvos, gránulos o como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite, como un elíxir o jarabe, o como pastillas (usando una base inerte, tal como gelatina y glicerina o sacarosa y acacia) y/o como enjuagues bucales y similares, cada uno con una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente descripción como un ingrediente activo. Un compuesto de la presente descripción se puede administrar también como bolo, electuario o pasta.
En formas de dosificación sólidas de la descripción para administración por vía oral (cápsulas, comprimidos, píldoras, grageas, polvos, gránulos y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como citrato sódico o fosfato dicálcico, y/o cualquiera de los siguientes: cargas o extensores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o acacia; humectantes, tales como glicerol; agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos, y carbonato de sodio; agentes retardantes de la solución, tales como parafina; aceleradores de absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico, monoestearato de glicerol y tensioactivos no iónicos; absorbentes, tales como caolín y arcilla de bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio, y mezclas de los mismos; y agentes colorantes. En el caso de las cápsulas, comprimidos y pastillas, las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes amortiguadores. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como rellenos en cápsulas de gelatina rellenas duras y blandas usando excipientes tales como lactosa o azúcares de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.
Se puede fabricar un comprimido mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos se pueden preparar usando un aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, desintegrante (por ejemplo, glicolato de almidón de sodio o carboximetilcelulosa de sodio reticulada), agente tensioactivo o de dispersión. Los comprimidos moldeados se pueden fabricar en una máquina adecuada en la cual se moldea una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.
Los comprimidos y otras formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas de la presente descripción, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, opcionalmente se pueden marcar o preparar con revestimientos y conchas, tales como revestimientos entéricos y otros revestimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. También pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo en el mismo utilizando, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices de polímeros, liposomas y/o microesferas. Pueden formularse para una liberación rápida, por ejemplo, liofilizados. Pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias o mediante la incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse en agua en condiciones estériles o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de su uso. Estas composiciones también pueden, opcionalmente, contener agentes opacificantes y pueden ser de una composición tal que libere únicamente el o los ingredientes activos o, preferentemente, en una parte determinada del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden emplear incluyen ceras y sustancias poliméricas. Los ingredientes activos también pueden encontrarse en forma microencapsulada, si corresponde, con uno o más de los excipientes antes mencionados. Las formas de dosificación líquida para administración por vía oral de los compuestos de la invención incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además del ingrediente activo, las formas de dosificación líquida pueden contener diluyentes inertes que se utilizan comúnmente en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceite de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol de tetrahidrofurilo, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de estos.
Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes, colorantes, perfumantes y conservantes.
Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión tales como, por ejemplo, alcoholes isostearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol, y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto y mezclas de los mismos.
Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas de la descripción para administración rectal o vaginal pueden presentarse como un supositorio, que puede prepararse al mezclar uno o más compuestos de la invención con uno o más excipientes o portadores adecuados no irritantes que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, una cera para supositorios o un salicilato y que es sólido a temperatura ambiente, pero líquido a temperatura corporal y, por lo tanto, se derretirá en el recto o cavidad vaginal y liberará el compuesto activo.
Las formulaciones de la presente descripción que son adecuadas para administración vaginal incluyen formulaciones en pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o aerosoles que contienen tales portadores que se consideran adecuados en la técnica.
Las formas de dosificación para administración tópica o transdérmica de un compuesto de la presente invención incluyen polvos, aerosoles, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhaladores. El compuesto activo se puede mezclar en condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable y con cualquier conservante, amortiguador o propelente que sea necesario.
Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener, además de un compuesto activo de esta descripción, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de cinc o mezclas de estos.
Los polvos y aerosoles pueden contener, además de un compuesto de esta invención, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y poliamida en polvo, o mezclas de estas sustancias. Los aerosoles pueden contener adicionalmente propelentes habituales, tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos volátiles no sustituidos, tal como butano y propano.
Los parches transdérmicos tienen la ventaja adicional de proporcionar al cuerpo una administración controlada de un compuesto de la presente descripción. Tales formas de dosificación pueden realizarse al disolver o dispensar el compuesto en el medio apropiado. Los potenciadores de absorción también se pueden usar para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. Es posible controlar la velocidad de tal flujo ya sea proporcionando una membrana de control de velocidad o dispersando el compuesto en un gel o matriz de polímero.
Las formulaciones oftálmicas, pomadas oculares, polvos, soluciones oculares y similares también se encuentran contempladas dentro del alcance de esta invención.
Las composiciones farmacéuticas de esta descripción adecuadas para administración parenteral comprenden uno o más compuestos de la descripción en combinación con una o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotónicas estériles farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles que pueden reconstituirse en soluciones inyectables estériles o dispersiones justo antes de su uso, que pueden contener azúcares, alcoholes, antioxidantes, tampones, bacteriostatos, solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto o agentes de suspensión o espesantes.
Ejemplos de portadores acuosos y convenientes que pueden ser empleados en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares) y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales de revestimiento, como, por ejemplo, lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones y mediante el uso de tensioactivos.
Estas composiciones pueden contener también adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La prevención de la acción de los microorganismos sobre los compuestos objeto se puede asegurar mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenólico sódico y similares. También puede ser deseable incluir en las composiciones agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio y similares. Asimismo, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede provocarse mediante la inclusión de agentes que retrasan la absorción, tales como monostearato de aluminio y gelatina.
En algunos casos, para prolongar el efecto de un fármaco, es conveniente enlentecer la absorción del fármaco de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tenga baja solubilidad en agua. Entonces, la velocidad de absorción del fármaco depende de su velocidad de disolución, la que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. De manera alternativa, la absorción retardada de una forma de fármaco administrado parenteralmente se logra al disolver o suspender el fármaco en un vehículo oleoso.
Las formas de depósito inyectables se preparan formando matrices de microcápsulas de los compuestos en cuestión en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicólido. En función de la relación del fármaco respecto al polímero y de la naturaleza del polímero particular utilizado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones de depósito inyectables también se preparan atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con los tejidos corporales.
En ciertos casos, un compuesto o preparación farmacéutica se administra por vía oral. En otros casos, el compuesto o la preparación farmacéutica se administra por vía intravenosa. Las vías de administración alternativas incluyen las administraciones sublingual, intramuscular y transdérmica.
Cuando los compuestos de la presente descripción se administran como productos farmacéuticos, a humanos y animales, se pueden administrar per se o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, del 0,1 al 99,5 % (en ciertos casos, del 0,5 % al 90 %) de ingrediente activo en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Las preparaciones de la presente descripción pueden administrarse por vía oral, parenteral, tópica o rectal. Por supuesto, se dan en formas adecuadas para cada ruta de administración. Por ejemplo, se administran en forma de comprimido o cápsula, por inyección, inhalación, loción ocular, ungüento, supositorio, etc. administración por inyección, infusión o inhalación; tópica por loción o ungüento y rectal por supositorios. En algunos casos, se utilizan administraciones orales.
Las frases "administración parenteral" y "administrada por vía parenteral" como se usan en esta invención se refieren a modos de administración distintos de la administración enteral y tópica, habitualmente mediante inyección, e incluyen, sin limitación, inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intrastemal.
Las frases "administración sistémica", "administrado sistémicamente", "administración periférica" y "administrado periféricamente" como se usa en esta invención significan la administración de un compuesto, fármaco u otro material que no sea directamente en el sistema nervioso central, de modo que entra en el sistema del paciente y, por lo tanto, está sujeto a metabolismo y otros procedimientos similares, por ejemplo, administración subcutánea.
Estos compuestos pueden administrarse a humanos y otros animales para terapia por cualquier vía de administración adecuada, incluyendo oral, nasal, como, por ejemplo, por aerosol, rectal, intravaginal, parenteral, intracisternal y tópica, como polvos, ungüentos o gotas, incluyendo bucal y sublingualmente.
Independientemente de la ruta de administración seleccionada, los compuestos de la presente descripción, que pueden usarse en una forma hidratada adecuada y/o las composiciones farmacéuticas de la presente descripción, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables por procedimientos convencionales conocidos por expertos en la materia.
Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de esta descripción pueden variar para obtener una cantidad de ingrediente activo efectiva para alcanzar la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición y modo de administración particulares, sin ser tóxica para el paciente.
El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto particular de la presente invención empleado, o el éster, sal o amida del mismo, la ruta de administración, el tiempo de administración, la tasa de excreción o metabolismo del compuesto particular que se está empleando, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, el sexo, el peso, la condición, la salud general y el historial médico anterior del paciente que se está tratando, y factores similares ya conocidos en la técnica médica.
Un médico o veterinario con experiencia en la técnica puede determinar e indicar fácilmente la cantidad efectiva de la composición farmacéutica necesaria. Por ejemplo, el médico o veterinario puede comenzar las dosis de los compuestos de la descripción empleados en la composición farmacéutica en niveles inferiores a los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosificación hasta alcanzar el efecto deseado. En algunos casos, un compuesto o composición farmacéutica de la descripción se proporciona a un sujeto de forma crónica. Los tratamientos crónicos incluyen cualquier forma de administración repetida durante un período de tiempo prolongado, tales como administraciones repetidas durante uno o más meses, entre un mes y un año, uno o más años o más. En muchos casos, un tratamiento crónico implica la administración repetida de un compuesto o composición farmacéutica de la descripción durante la vida del sujeto. En ciertos casos, los tratamientos crónicos implican administraciones regulares, por ejemplo, una o más veces al día, una o más veces a la semana, o una o más veces al mes. En general, una dosis adecuada tal como una dosis diaria adecuada de un compuesto de la descripción será la cantidad del compuesto que es la dosis efectiva más baja para producir un efecto terapéutico. Tal dosis efectiva generalmente dependerá de los factores que se describieron anteriormente. Generalmente, las dosis de los compuestos de esta descripción para un paciente, cuando se usan para los efectos indicados, variarán en un intervalo de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal por día. En algunos casos, la dosis diaria variará de 0,001 a 50 mg de compuesto por kilogramo de peso corporal, por ejemplo, de 0,01 a 10 mg de compuesto por kilogramo de peso corporal. Sin embargo, se pueden usar dosis más bajas o más altas. En algunos casos, la dosis administrada a un sujeto puede modificarse a medida que cambia la fisiología del sujeto debido a la edad, la progresión de la enfermedad, el peso u otros factores.
Si se desea, la dosis diaria efectiva del compuesto activo se puede administrar como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis administradas por separado en intervalos apropiados a lo largo del día, opcionalmente, en formas de dosificación unitaria.
Aunque es posible que uno o más compuestos de la presente descripción se administren solos, en casos generales uno o más compuestos se pueden administrar como una formulación (composición) farmacéutica como se describe en esta invención.
Los compuestos según la descripción se pueden formular para la administración de cualquier manera conveniente para su uso en medicina humana o veterinaria, por analogía con otros productos farmacéuticos.
La descripción se refiere también a un procedimiento de fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento de un sujeto, por ejemplo, para tratar o prevenir una infección por virus de ADN (por ejemplo, JCV o BKV), para inhibir la replicación o proliferación de un virus de ADN. Tales medicamentos pueden usarse para el tratamiento profiláctico de un sujeto en riesgo de tener una infección por el virus del ADN o que se sospecha que tiene (por ejemplo, para el tratamiento de un sujeto antes, durante, y/o después de que el sujeto reciba una terapia inmunomoduladora). Por consiguiente, uno o más compuestos o composiciones descritos en esta invención que modulan la replicación o proliferación del virus de ADN como se describe en esta invención pueden usarse para la preparación de un medicamento para uso en cualquiera de los procedimientos de tratamiento descritos en esta invención. En algunos casos, la descripción proporciona el uso de uno o más compuestos o composiciones de la descripción (por ejemplo, identificados como inhibidores de la replicación del virus del ADN) para la fabricación de un medicamento o producto farmacéutico para tratar a un mamífero (por ejemplo, un humano) que tiene uno o más síntomas de, o en riesgo de, infección por virus de ADN, replicación y/o proliferación (por ejemplo, uno o más síntomas de la actividad de JCV o BKV, o uno o más síntomas de otra actividad de virus de ADN). Por consiguiente, los aspectos de la descripción se refieren al uso de uno o más compuestos o composiciones de la descripción para la preparación de un medicamento para tratar o prevenir la LMP en un sujeto.
Por consiguiente, la invención se refiere también a uno o más compuestos de la invención para su uso como medicamento. La invención se refiere también a uno o más de estos compuestos para su uso en la invención, por ejemplo, en procedimientos para inhibir la replicación del virus del ADN (por ejemplo, JCV o BKV), o para tratar o prevenir una enfermedad asociada con la replicación o proliferación del virus del ADN (por ejemplo, en sujetos que están a punto de ser, están siendo, y/o han sido tratados con al menos una composición inmunomoduladora).
En algunos aspectos, la descripción proporciona kits que comprenden uno o más compuestos de la Tabla 1 e instrucciones para administrar uno o más compuestos de la Tabla 1. En algunos casos, el kit comprende también un inmunosupresor e instrucciones para administrar el uno o más compuestos de la Tabla 1 y los inmunosupresores. En algunos casos, el inmunosupresor es natalizumab. Los componentes de un kit pueden incluirse en un recipiente o paquete que tenga una o más posiciones para cada componente (y cada componente puede empaquetarse por separado en forma seca, líquida, en gel u otra forma).
Los siguientes ejemplos ilustran de forma adicional la presente invención, pero no se debería interpretar que limitan de forma alguna su alcance.
Ejemplos
Ejemplo 1: detección de variantes de JCV y JCV po r PCR
Los ácidos nucleicos se aíslan de una muestra biológica utilizando protocolos establecidos (por ejemplo, lisis celular). Debido a que el ADN viral puede haberse integrado en el ADN genómico o aún puede estar presente como una entidad más pequeña, tanto el ADN genómico como las secuencias de ADN más cortas pueden aislarse y someterse a análisis por PCR. Tras el aislamiento, los ácidos nucleicos se resuspenden en un tampón que facilitará el análisis de PCR. Los expertos en la materia conocen tampones que facilitan el análisis de PCR y también están disponibles comercialmente de los fabricantes de enzimas de PCR (porejemplo, New England Biolabs, Beverly, MA). Los cebadores de nucleótidos están diseñados para dar como resultado la amplificación de un gen JCV. La amplificación por PCR es una técnica de laboratorio establecida y comprende la adición de cebadores de nucleótidos, una polimerasa y nucleótidos simples, y un tampón de polimerasa y someter esta mezcla a ciclos de hibridación, amplificación y disociación que dan como resultado la amplificación de una secuencia de ADN deseada. Tras la amplificación, el gen JCV se separa del ADN residual y del exceso de nucleótidos individuales. El ADN de JCV amplificado se secuencia y la secuencia de nucleótidos resultante se traduce en una secuencia de péptidos para determinar si los polipéptidos de JCV y las variantes de polipéptidos están presentes en la muestra biológica.
Ejemplo 2: detección de variantes de JCV y JCV mediante ELISA
Las proteínas y los péptidos se aíslan de una muestra biológica utilizando técnicas estándar de laboratorio. Tanto las proteínas celulares como las proteínas de componentes no celulares pueden someterse al análisis. En un ensayo, se interroga a la muestra para determinar la presencia de polipéptidos JCV. Los polipéptidos se detectan usando ELISA sándwich que comprende anticuerpos específicos para polipéptidos JCV. Los anticuerpos se generan inoculando animales (por ejemplo, conejos) con los polipéptidos JCV de la descripción que resultan en anticuerpos policlonales. Si se desea, se pueden recolectar células del animal inoculado para generar anticuerpos monoclonales. Los procedimientos para la generación de anticuerpos tanto policlonales como monoclonales son rutinarios en la técnica. Los anticuerpos contra el polipéptido JCV y las variantes del polipéptido JCV se inmovilizan en una superficie sólida (por ejemplo, una placa de 96 pocillos), con un tipo de anticuerpo por pocillo o área de superficie. Las muestras biológicas que comprenden los polipéptidos se añaden a los pocillos y se incuban con los anticuerpos inmovilizados. Los polipéptidos de JCV y las variantes de polipéptidos de JCV presentes en la muestra se unirán a un anticuerpo específico para el polipéptido. Después de la incubación, se retira la muestra y se lavan las superficies sólidas para eliminar cualquier material no unido. Como siguiente etapa, se agrega a los pocillos una solución que contiene anticuerpos adicionales específicos para péptidos JCV. Esta segunda alícuota de anticuerpos creará el "sándwich" (por ejemplo, anticuerpo inmovilizado: polipéptido JCV: segundo anticuerpo). Este segundo anticuerpo puede detectarse utilizando, por ejemplo, un anticuerpo terciario marcado, lo que permite la detección de polipéptidos variantes de JCV. Alternativamente, el propio anticuerpo secundario puede estar marcado.
En un segundo ensayo ELISA, las muestras biológicas se analizan para determinar la presencia de anticuerpos contra uno o más polipéptidos CV o polipéptidos variantes de JCV. Este ensayo se puede utilizar para determinar si un sujeto está actualmente infectado o ha estado expuesto previamente a JCV o una variante de JCV. Incluso si una variante de JCV específica ya no está presente, los anticuerpos contra la variante aún pueden estar presentes en la muestra biológica y pueden detectarse. En este ensayo ELISA, los polipéptidos de JCV se unen a una superficie sólida y las muestras biológicas se incuban con estos polipéptidos. Si están presentes anticuerpos específicos para estos polipéptidos en las muestras biológicas, se unirán a los polipéptidos. Cualquier material no ligado se elimina de nuevo. La presencia de anticuerpo unido se detecta usando un anticuerpo secundario marcado.
Ejemplo 3: tratamiento de infección de JCV
Se sembraron células gliales transformadas con SV40 en medio FBS al 10 %. Las células se sembraron a 2000 células por pocillo en 75 pl de medio por pocillo. El día 2, se retiró el medio y se reemplazó por 35 pl de una alícuota de fármaco concentrado 1x combinado con una alícuota de JCV Turbo diluida 100x en 35 pl del 2 % de medios FBS (JCV Turbo es un virus híbrido Mad-1/SVEA construido por inserción de la región reguladora de SV40 en la región reguladora de la cepa Mad-1 de JCV (Mad-1/SVE), Vacante y col., Virology 1989, 170: 353-361). Las células se incubaron durante una hora, después de lo cual se añadió otra alícuota de 65 uL de fármaco concentrado 1x en 2 % FBS. El día 5, las células se tiñeron con DAPI (para el número total de células) y con un anticuerpo monoclonal de ratón contra SV40 VP1, que reacciona de forma cruzada con la proteína JCV VP1. La proteína JCV VP1 se muestra en la superficie celular cuando una célula es infectada por JVC1. La capacidad del fármaco para suprimir o inhibir la infección por JCV se muestra en la Tabla 2. La información se tabula como % inhibición (medida por el número y porcentaje de células positivas a JCV). La citotoxocidad del fármaco se muestra en la tercera columna.
En un experimento independiente se determinó el IC 50. La figura 1 muestra la curva de inhibición para diferentes siembras de células. El eje y muestra el porcentaje de inhibición en función de la concentración de anticuerpo neutralizante añadido (el anticuerpo neutralizante es un policlonal de conejo procedente de suero neutralizante anti-JCV).
En otro experimento, se determinó la correlación entre la concentración de JCV y el % de infección. La figura 2 muestra que una dilución de JCV de 1:50 resulta en un 6 % de células infectadas, mientras que una dilución de JCV de 1:500 resulta en una infección del 1,5%.
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Ejemplo 4: identificación y caracterización de la eficacia de la mefloquina frente al virus JC
Para identificar los fármacos con actividad anti-JCV, se seleccionó una colección comercialmente disponible de fármacos aprobados y compuestos bioactivos en un ensayo de infección viral por JC in vitro. Como cribado primario, se controló la inhibición de la tasa de infección viral en la línea de células gliales humanas SVG-A (Major, Miller y col.
1985) infectadas con la cepa JCV Mad1/SVEA (Vacante, Traub y col. 1989). La tasa de infección se midió como un porcentaje de células que expresan la proteína de envoltura viral VP1 usando Cellomics ArrayScan (Pittsburgh, PA). De 2000 compuestos de la colección SPECTRUM examinados, se identificaron 14 que habían inhibido el número de células infectadas por >50 % a las concentraciones < 20 pM (IC50<20 pM). Dado que la LMP es el resultado de la replicación viral incontrolada en el SNC, los compuestos se evaluaron para determinar su capacidad para cruzar la barrera hematoencefálica en concentración suficiente para ser terapéuticamente eficaces. Con base en la bibliografía publicada, la mefloquina muestra una penetración en el SNC que podría esperarse para lograr concentraciones eficaces derivadas in vitro en humanos (Jones, Kunsman y col. 1994; Pham, Nosten y col. 1999).
Usando qPCR para cuantificar el número de copias virales en el cultivo, también se demostró que la mefloquina inhibe la replicación del ADN viral. Experimentos adicionales con mefloquina demostraron su capacidad para inhibir la infección por otra cepa de JCV, Mad4 y en un tipo de célula diferente, astrocitos humanos primarios. La mefloquina es igualmente efectiva en la inhibición de la tasa de infección por JCV incluso cuando se añade al sistema de cultivo 24 horas después de la infección de las células con el virus, lo que sugiere que inhibe el virus en células previamente infectadas. Ambos enantiómeros (+) y (-) del racemato de mefloquina fueron igualmente potentes para inhibir la infección por JCV en el ensayo de inhibición de JCV.
El clorhidrato de mefloquina es un agente antipalúdico indicado para el tratamiento y la profilaxis de la malaria aguda leve a moderada causada por cepas de P. falciparum y P. vivax sensibles a la mefloquina y tiene un historial significativo de uso en la población humana, con 11 millones de pacientes tratados desde 1984, cuando se registró por primera vez. Aunque no se dispone de ningún modelo animal de infección por LMP o JCV para probar la mefloquinain vivo, los resultados in vitro y la bibliografía publicada muestran que la mefloquina es una terapia anti-JCV efectiva.
Materiales y procedim ientos
Compuestos: La colección Spectrum de 2.000 compuestos (MicroSource Discovery Inc., Groton, Conn.) consta de ~ 1000 fármacos definidos según las designaciones de nombres que se establecen en el Diccionario de USP de USAN y nombres de fármacos internacionales (2005, Farmacopea de EE.UU.), incluidos los fármacos aprobados por la Administración de alimentos y fármacos (FDA) y otros compuestos bioactivos y productos naturales. Una lista alfabética de los compuestos está disponible en http://www.msdiscovery.com/spectrum.html. Los compuestos se suministran como soluciones 10 mM en dimetilsulfóxido (DMSO). La mefloquina se adquirió de Sigma (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Se separaron dos enantiómeros de mefloquina de una muestra comercial de mefloquina por Chiral Technologies (Chiral Technologies, West Chester, PA) usando HPLC quiral en una columna CHIRALPAK lA.
Líneas celulares:La línea celular glial humana SVG-A (un regalo de Walter Atwood), establecida por transformación de células gliales fetales humanas por un mutante SV40 de origen defectuoso (Major, Miller y col. 1985), se cultivó en 1X Eagle Minimal Essential Media (MEM) suplementado con suero bovino fetal inactivado por calor al 10 %, L-glutamina 4 mM (Mediatech, Holy Hill, Fla). La infección se realizó en 1X Eagle Minimal Essential Media (MEM) complementado con un 2 % de suero bovino fetal inactivado por calor, L-glutamina 4 mM (Mediatech, Inc.). Se aislaron astrocitos humanos (ScienCell Research Laboratories, San Diego, CA) de la corteza cerebral fetal y se cultivaron en medio basal patentado, complementado con un 2 % de suero bovino fetal, un 1 % de crecimiento de astrocitos, y penicilina/estreptomicina (Laboratorios de Investigación ScienCell). La infección de astrocitos se realizó en este medio.
Virus de polioma JC:Híbrido Mad-1/SVEDelta virus (Mad-1/SVEA virus) (un regalo de Walter Atwood) se construyó mediante la inserción de la región reguladora de SV40 en la región reguladora de la cepa Mad-1 de JCV (Mad-1/SVE) (Vacante, Traub y col. 1989). El virus se propagó en células SVG-A y se purificó como se describió previamente (Liu, Hope y col. 1998). Brevemente, las células SVGA sembradas en placas al 50 % de confluencia se infectan con una dilución 1:50 de la cepa delta MAD1-SVE del virus JC durante 1 hora a 37 °C. Se ha demostrado que esa concentración de virus da una tasa máxima de infección de células SVGA. Las células se cultivan durante 3 semanas con cambios semanales de medio. Después de 3 semanas de cultivo, las células se raspan de los matraces, se agrupan, incluidas las células sueltas de cambios de medios anteriores, y se sedimentan. A continuación, el sedimento celular se resuspende en 20 ml de sobrenadante y se rompe en un microfluidizador (Microfluidics inc., Newton, MA). Se añade desoxicolato hasta una concentración final del 0,25 % y se incuba a 37 °C durante 30 minutos. El sobrenadante celular que contiene virus se centrifuga a continuación a 10.000 rpm durante 30 minutos en un rotor SA600. El sobrenadante se divide en alícuotas y se almacena a -80 °C. La cepa no arquetípica de JC, Mad4 (Major, Vacante y col. 1987; Frye, Trebst y col. 1997) se obtuvo de ATCC (Manassas, Va).
Anticuerpos de detección:PAB597 (un regalo de Walter Atwood), un monoclonal de ratón para el antígeno V de SV40, reacciona de forma cruzada con JCV VP1 (Atwood, Wang y col. 1995) y se utilizó para visualizar la infección por JC con detección usando un anticuerpo secundario de cabra anti-ratón marcado con Alexa-Fluor 488 (Sondas moleculares). Los núcleos celulares se tiñeron con 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) (Invitrogen, Carlsbad, CA). Los antisueros de conejo anti-JCV neutralizantes fueron un regalo de Walter Atwood (Atwood 2001).
Ensayo de infectividad de JCV: se sembraron células SVG-A a 2.000 células/pocillo/0,075 ml de medio de cultivo en una placa de 96 pocillos de fondo plano (Corning, NY). Los compuestos del día siguiente se prepararon en medio de ensayo (suero bovino fetal inactivado por calor al 2 %, L-glutamina 4 mM, 1X MEM). Se preparó una placa viral maestra mezclando volúmenes iguales de [2x] compuesto y [2x] virus diluido para la concentración final 1x del compuesto y el virus. La placa que contenía las células se invirtió suavemente y se agitó para eliminar el medio. De la placa maestra, se añadieron 0,035 ml de compuesto/virus a los pocillos designados. Las células se incubaron con la mezcla de compuesto/virus durante 60 minutos en una incubadora de CO2humidificada a 37 °C. En ese momento, se añadió la concentración final del fármaco en el medio a los pocillos designados para llevar el volumen final hasta 0,1 ml/pocillo. Las placas se incubaron durante tres días más, a continuación, las células se lavaron una vez con 1x PBS y se fijaron en 2 % paraformaldehído/1X PBS durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se eliminó el fijador y las células se solubilizaron con Triton X100 al 0,5 % en PBS durante 30 minutos más. La infección por el virus Mad-1 / SVEA se visualizó mediante tinción con PAB597, un anticuerpo monoclonal contra la proteína principal de la cápside VP1, las células se incubaron con 0,05 ml de PAB597 (2 pg / ml en 1X PBS) durante 60 minutos a 37 °C. Después de una etapa de lavado con 1X PBS, se detectó el anticuerpo primario con un anticuerpo secundario de cabra anti-ratón marcado con Alexa-Fluor 488 a una dilución 1:100 en 1X PBS, las células se tiñeron con DAPI a 1 pg/ml (0,05 ml/pocillo) durante 30 minutos a 37 °C. Las células se lavaron con 1X PBS y se añadieron 0,1 ml de 1X PBS a las células. Las imágenes de campo de cada pocillo se adquirieron y analizaron utilizando Cellomics ArrayScan (Thermo Scientific Inc, Waltham, MA) utilizando el software Target Activation. Los astrocitos humanos siguen el mismo protocolo de ensayo básico con algunas excepciones notables. Las células se siembran a 4.000 células/pocillo/0,075 ml de medio de cultivo en una placa de 96 pocillos de fondo plano (Corning). El medio de cultivo se utiliza para la infección. La duración de la infección es de seis a diez días (en lugar de los tres días de las células SVG-A).
PCR en tiempo real: los cebadores directos e inversos de Taqman y las sondas MGB se diseñaron para el virus JC TAg utilizando Primer Express v1.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA) según las recomendaciones del fabricante. Para crear una curva estándar de número de copias para la cuantificación absoluta, se linealizó el plásmido pUC19 que contenía el genoma del virus JC utilizando Smal. La linealización se confirmó mediante electroforesis capilar utilizando un kit Agilent 12000 según las recomendaciones del fabricante. Las concentraciones se determinaron mediante una medición de260nm en un espectrofotómetro de nanogota. Se diluyó el plásmido linealizado 1/10 en TE a partir de 5X108/uL. Se llevaron a cabo reacciones de PCR por cuadruplicado en una placa óptica de 384 pocillos (Applied Biosystems, Foster City, CA). Las reacciones en tiempo real se ciclaron en un termociclador 7900HT (Applied Biosystems, Foster City, CA) en las siguientes condiciones: 50 °C durante 2 minutos (digestión de uracil N-deglucosilasa), 95 °C 10 minutos (activación de la polimerasa termoestable Taq) y 40 ciclos de 95 °C durante 15 segundos y 60 °C durante 60 segundos con cebadores de avance y retroceso de 900 nM, sonda Taqman de 200 nM y mezcla maestra universal 1X (Applied Biosystems, Foster City, CA). La emisión de fluorescencia se recogió cada siete segundos durante la duración del ciclo de cada pocillo de reacción. El número de copias se determinó para cada muestra experimental mediante comparación con la curva estándar absoluta del plásmido JC utilizando el software de detección de secuencias (Applied Biosystems, Foster City, CA). El número de copias ajustado se calculó primero restando la masa determinada experimentalmente de ADN del virus JC de la masa de ADN total que se añadió a cada pocillo de 20 ul rxn. Los valores de p se calcularon mediante una prueba t de Student. El número de copias de JCV se cuantificó mediante comparación con un estándar y se normalizó mediante el ADN total extraído de una muestra. Se detectaron cero copias del virus JC en un control negativo no infectado.
Extracción de ADN y preparación de la muestra:ADN se extrajo con el kit de sangre QlAamp 96 (cat#51161; Qiagen Inc., Valencia, CA) con tratamiento opcional con ARNasa A. El ADN se cuantificó utilizando el ensayo de alta sensibilidad Quant-iT dsDNA según las recomendaciones del fabricante (cat. # Q33120 Molecular Probes Inc., Eugene, Oregón). Se almacenó el ADN purificado a -20 °C hasta su uso.
Cálculos: la tasa de infección por JCV se calculó normalizando el número de células infectadas por JCV por el número total de células nucleadas como % de células JCV+ = ((# total de células VP1+)/(# total de células DAPI+)) * 100 %. El % de inhibición viral por un compuesto se calculó usando una tasa de infección por JCV en lugar de usar el número total de células infectadas por JCV (por ejemplo, células VP1+). Porcentaje de inhibición de JCV = 100 % * (1 - (% de células JCV con un compuesto - % de células JCV en control positivo) / (% de células JCV en control positivo - % de células JCV en control negativo). El control positivo son las células infectadas con el virus en ausencia de cualquier compuesto, el control negativo son las células no infectadas con ningún virus. El número de células JCV+ en las muestras de control negativo cuantificadas por Cellomics ArrayScan siempre fueron < 1 % del número de JCV en el control positivo. El porcentaje de inhibición del ADN de JCV se calculó como 100 %*(1 -(# de copia de JCV con un compuesto - # de copia de JCV en control positivo) / # de copia de JCV en control positivo. Se detectaron cero copias del genoma de JCV en muestras de control negativo no infectadas. Para el cribado de compuestos de alto rendimiento, Z-factor=1-3*((op+on)/|pp-pn|; se calcularon la media (p) y la desviación estándar (o) de los controles positivo (p) y negativo (n) (Zhang, Chung y col. 1999). El CV intraplaca intragrupo siempre estuvo por debajo del 20 % y Z'>0,5. Los valores IC50 se calcularon utilizando el software Prism (Graphpad, San Diego, CA).
Cribado principal: ensayo de infección viral JC
Para identificar los fármacos con actividad anti-JCV, se examinó una colección disponible comercialmente de aproximadamente 2000 fármacos aprobados y compuestos bioactivos denominada colección SPECTRUM para determinar la actividad anti-JCV en un ensayo de infectividad viral in vitro (Pho, Ashok y col. 2000). Como cribado primario, se controló la inhibición de la tasa de infección viral en una línea celular astroglial fetal humana (SVG-A) infectada con la cepa JCV Mad1/SVEA. Se eligió la línea celular SVG-A (Major, Miller y col. 1985) para el ensayo de cribado primario, ya que es una de las pocas líneas celulares disponibles que permiten la replicación viral de JC. La cepa Mad1/SVE'A JCV es un virus Mad-1 de tipo salvaje originalmente aislado del paciente con LMP que tenía su región reguladora no codificante reemplazada por la región reguladora SV40 (Vacante, Traub y col. 1989). Se ha demostrado que esa inserción amplía las especies y el intervalo de huéspedes de tipo celular del virus. La infección de células sVG-A con la cepa Mad1/SVEAJCV permite una replicación viral muy rápida y la detección de células infectadas por virus dentro de los 3 días posteriores a la infección, a diferencia de los 6 y 15 días que se necesitan con otros tipos celulares y cepas virales.
La uniformidad de una línea celular, la tasa de infección constante y el tiempo de ensayo relativamente corto son todos factores importantes para crear un ensayo sólido para el cribado de un gran número de compuestos. Para facilitar el cribado de la gran colección de compuestos, se utilizó este ensayo de infectividad de JCV (Pho, Ashok y col. 2000) en un formato de 96 pocillos y se utilizó un Cellomics ArrayScan para medir la replicación de JCV. La figura 3 muestra la detección y medición de la infección celular con JCV. En la figura 3A las células SVG-A infectadas con la cepa JCV Mad1/SVEA 3 días antes se fijaron y tiñeron con anticuerpos monoclonales murinos específicos para la proteína VP1 (tinción verde). Las células totales presentes en el cultivo se visualizaron con tinción nuclear de ADN DAPI (azul) y se tomó una fotografía con la cámara Cellomics ArrayScan® con un aumento de x20. La figura 3B ilustra el número de células infectadas (por ejemplo, células VP1+) por grupo representado frente al factor de dilución de la reserva viral utilizada para infectar las células (medio ± DE, n=2). El número total de células (barras) es similar para todos los grupos. Las figuras 3C y 3D ilustran los resultados de las células que se infectaron en presencia de diversas diluciones de antisuero neutralizante de JCV o cidofovir. Tres días después se fijaron las células; el teñido y el número total de células VP1 y casos DAPI+ por grupo de tratamiento se enumeró utilizando Cellomics ArrayScan®.
En este sistema, las células infectadas pueden identificarse mediante tinción inmunofluorescente con anticuerpos específicos para la proteína de la cápside VP1 de JCV. Se visualizó el número total de células en cultivo mediante tinción con tinción de ADN DAPI (figura 3A). Se usó ArrayScan® para identificar y contar cada caso en el pocillo de ensayo, contando de manera rutinaria 300-800 células VP1+ y 8.000-16.000 casos DAPI+ por pocillo en una placa de 96 pocillos, minimizando así la variabilidad debido al patrón de crecimiento celular no uniforme y/o diseminación viral intrapocillo y produciendo un resultado muy consistente. Como puede verse en la figura 3B, el número de células infectadas (por ejemplo, células VP1+) al final del período de cultivo es proporcional al número de partículas virales infecciosas utilizadas para infectar el cultivo celular. En estos experimentos, se utilizó la mayor dilución del stock viral que era conveniente para la aplicación. Mediante el uso de suero neutralizante anti-JCV de conejo como control positivo para la inhibición viral, se demostró también que el ensayo responde a la inhibición viral de forma predictiva (figura 3C).
Durante el cribado de la biblioteca en busca de actividad antiviral en dosis única (10 pM), se descubrió que algunos de los compuestos que inhibían de forma más espectacular el número de células infectadas por virus (por ejemplo, células VP1+) también redujeron drásticamente el número total de células (por ejemplo, casos DAPI+) probablemente debido a sus efectos citotóxicos/citostáticos. Para determinar si un compuesto en particular había disminuido el número de células infectadas por virus no solo debido a su efecto citotóxico sino a su efecto antiviral, se calculó el porcentaje de inhibición viral por un compuesto utilizando la tasa de infección por JCV (por ejemplo, % de células JCV+ = ((total # de células VP1+) / (total # de células DAPI+)) * 100 %) en lugar del número total de células infectadas por JCV (por ejemplo, el número total de células VP1+). En este sistema, la infección por JCV conduce a que el 4-7 % de todas las células se infecten en 72 horas. Como puede verse en el ejemplo del tratamiento con cidofovir, un fármaco probado para su eficacia contra la LMP (figura 3D), aunque inhibió el número de células infectadas en cultivo, también inhibió el número total de células en cultivo en el mismo grado por lo que el porcentaje de inhibición de la tasa de infección (por ejemplo, % de células JCV+) no fue significativa. Se observó un efecto similar con otros fármacos con efectos citotóxicos bien informados,por ejemplo, Mitomicina C y citarabina (datos no mostrados).
Selección y cribado del fármaco
Después de cribar la biblioteca a una concentración de compuesto único de 10 pM, se identificaron varios fármacos y compuestos que inhibieron eficazmente la tasa de infección por JCV en >20 % sin toxicidad celular significativa (< 20 % de inhibición del número total de células) (figura 4). Se eligió un nivel del 20 % como punto de corte para el cribado de primera etapa porque el CV del ensayo fue consistentemente < 20 %. 67 compuestos coincidieron con esos criterios (Tabla 1) y posteriormente se probaron en el mismo ensayo a través de una curva de respuesta a la dosis completa para evaluar más a fondo su potencial terapéutico. Según los resultados de las curvas de dosis completas, 14 fármacos demostraron ser eficaces, demostrando >90 % inhibición de las células infectadas por virus (IC50 <20 pM) sin toxicidad celular estadísticamente significativa ( < 20 % de inhibición del número total de células) a esas concentraciones (Tabla 3). Solo se seleccionaron los fármacos que no redujeron el número total de células para disminuir la posibilidad de confundir un efecto antiviral del fármaco con su efecto citotóxico/citostático. Los compuestos que habían reducido el número total de células en >80 % se volvieron a probar a las concentraciones más bajas, pero no se identificó ninguno que demostrara un claro efecto anti-JCV sin efecto citotóxico/citostático concomitante (figura 4). La figura 4 muestra el diagrama de flujo para la selección de la colección SPECTRUM. El ensayo primario empleó una línea celular SVG-A y una cepa viral JCV Mad1/SVEA. El ensayo se realizó como se describe para la figura 3 (*IC50- inhibición del % de células infectadas por JCV en un 50 %; TC50-inhibición del número total de células en un 50 %).
Se revisó la bibliografía publicada para obtener información sobre la farmacocinética y la distribución cerebral de estos fármacos en humanos y en modelos animales. Dado que el virus JC se replica incontrolablemente en los oligodendrocitos y astrocitos de los individuos afectados durante la LMP, pero no todos los fármacos son capaces de atravesar la barrera hematoencefálica, sería ventajoso para cualquier terapia potencial de LMP si el fármaco candidato es capaz de lograr una concentración eficaz en el cerebro. Según la bibliografía publicada (Tabla 3), se ha demostrado que la mefloquina se acumula en los cerebros de los pacientes tratados al nivel de su concentración eficaz in vitro (figura 3A; IC50=3,9 ± 2,1 pM). La concentración cerebral de mefloquina basada en el análisis cerebral post mortem de personas que tomaron el fármaco antes de morir fue de 35-50 nmol por gramo de tejido cerebral, lo que podría aproximarse a 35-50 pM (Jones, Kunsman y col. 1994; Pham, Nosten y col. 1999). Esto indica que se pueden lograr dosis potencialmente eficaces de mefloquina en los pacientes cerebrales que recibirían dosis aprobadas del fármaco.
Caracterización de la actividad de la mefloquina en cultivo celular prim ario
Con el fin de caracterizar aún más el efecto de la mefloquina en la infectividad del virus JC, se realizaron experimentos para evaluar si el efecto inhibidor de la mefloquina sobre el JCV dependía de la línea celular utilizada en el cribado primario. Dado que las células SVG-A son una línea celular propagadain vitrodurante muchas generaciones, y se transforma con el antígeno T grande de SV40 que puede mejorar la replicación de JCV, se realizaron experimentos para evaluar si la mefloquina es capaz de inhibir la replicación viral en células que se parecen más a JCV diana en el cerebro humano y no expresan SV40 TAg. Dado que el cultivo de infecciónin vitrode oligodendrocitos primarios, un JCV diana primario durante la LMP, no está establecido, se utilizó la infección por JCV de astrocitos fetales humanos para probar la capacidad de la mefloquina para inhibir la infección viral en cultivo de células primarias. La figura 5 muestra la eficacia de la mefloquina contra dos cepas virales diferentes (Madl y Mad4) en dos tipos celulares diferentes (SVG-A y astrocitos primarios). La figura 5A ilustra células SVG-A con virus Madl/SVEA JCV (n=12). La figura 5B ilustra astrocitos fetales humanos primarios con Madl/SVEA JCV. La figura 5C ilustra las células SVG-A con la cepa Mad-4 de JCV (n=5). El % de inhibición de JCV se calculó como 100 % *(1 -(% de células JCV+ con un compuesto - % de células JCV+ en control negativo) / (% de células JCV+ en control positivo - % de células JCV+ en control negativo). Inhibición del número total de células (por ejemplo, casos DAPI+) fue inferior al 20 % para todas las concentraciones de fármaco representadas. A menos que se indique lo contrario, se muestra un gráfico representativo del número presentado en el gráfico. IC50se calculan como la media de todos esos experimentos. Como puede verse en la figura 5A, la mefloquina inhibe la infección por JCV de los astrocitos fetales humanos primarios con esencialmente la misma eficacia que inhibe la infección viral en las células SVG-A. Este resultado muestra que el efecto anti-JCV de la mefloquina no depende del tipo de célula infectada por el virus, y que la mefloquina es efectiva para inhibir el virus en su entorno "natural" de infección de células gliales.
Caracterización de la actividad de la mefloquina en diferentes cepas virales de JC
También se realizaron experimentos para determinar si el efecto inhibidor de la mefloquina se observa con otras cepas virales de JC, y no se limita a la cepa Mad1/SVEA de JCV utilizada en el ensayo de cribado primario. El cribado primario se realizó con la cepa Mad1/SVEA JCV debido a su rápida replicación en cultivo de tejidos. Sin embargo, esta cepa viral contiene una región reguladora de la transcripción (no codificante) de su miembro de la familia de poliomavirus SV40. Para garantizar que la actividad antiviral de la mefloquina no se limite únicamente al virus con esta modificación, se probó la capacidad de la mefloquina para inhibir una cepa de JCV no modificada, el virus de tipo salvaje Mad4 que se aisló originalmente de un paciente con LMP (Major, Vacante y col. 1987; Frye, Trebst y col.1997). Como puede verse en la figura 5C, según los resultados de 5 experimentos independientes, la mefloquina inhibe la infección por Mad4 de las células SVG-A con la misma eficacia que la infección Madl/SVEA. Este resultado demuestra que el efecto anti-JCV de la mefloquina no depende de la cepa viral.
Efecto sobre la replicación del ADN viral de JCV
Para comprender mejor el mecanismo de acción de la mefloquina y determinar si este fármaco inhibe la tasa de infección celular por el virus JC mediante la inhibición de la replicación del ADN viral, se cuantificó el ADN viral mediante qPCR y un conjunto de sondas específicas para JCV Antígeno T. Como puede verse en la figura 6, el porcentaje de inhibición del ADN de JCV por la mefloquina casi se superpone al porcentaje de inhibición de la tasa de infección. Se observó una correlación lineal entre el número de copias de ADN viral y varias células infectadas por virus (datos no mostrados). Este resultado demuestra que la mefloquina inhibe la tasa de infección mediante su inhibición de la replicación del ADN viral y no la expresión de la proteína VP1. La figura 6 muestra el efecto de la mefloquina sobre la replicación del ADN de JCV. Las células SVG-A fueron infectadas con Madl/SVEA JCV 3 días antes en presencia de diversas concentraciones de fármaco. El % de inhibición del ADN de JCV (0) se calculó usando números de copias de JCV determinados por qPCR con un conjunto de sondas específicas para TAg. La inhibición de la tasa de infección (x) se midió en una placa replicada como se describe en esta invención.
Efecto de la mefloquina sobre la infección po r JCV establecida
Se realizaron experimentos para demostrar que la mefloquina es efectiva contra la infección por JCV establecida. Aunque es evidente a partir de los experimentos anteriores que la mefloquina es efectiva para inhibir la infección por JCV cuando se agrega al mismo tiempo que el virus, no estaba claro a partir de esos experimentos si la mefloquina inhibía la entrada viral en las células o el ciclo de vida viral en la célula. Dado que durante la LMP muchas células ya están infectadas con el virus JC, en algunas realizaciones se puede seleccionar un fármaco candidato para el tratamiento de la LMP como uno que puede inhibir el ciclo de vida viral en células ya infectadas. Como se ve en la figura 7, cuando se añadió 3 o 24 horas después de la infección, la mefloquina fue tan efectiva para inhibir la infección celular como cuando se añadió a las células junto con el virus. Dado que la mayoría del virus entra en las células dentro de 1 hora, y todo el virus entra en las células dentro de las primeras 24 horas después de la infección (datos no publicados), este resultado muestra que la mefloquina es efectiva para inhibir la replicación viral en células ya infectadas. En la figura 7, se añadieron diversas concentraciones del fármaco al cultivo de astrocitos fetales humanos primarios infectados con el virus JC al mismo tiempo que el virus (círculos; T=0), 3 horas después de la adición del virus (escuderos; T=3 h), o 24 horas después (triángulos; T=24 h). Diez días después de la infección con el virus, se fijaron las células y se enumeró el número de células infectadas por virus. Se muestran los resultados de un experimento representativo de 4 experimentos diferentes con astrocitos primarios o células SVG-A.
Caracterización de los enantiómeros de mefloquina
La mefloquina es una mezcla racémica de enantiómeros (+) y (-) de (R*, S*)-a-2-piperidinil-2,8-bis clorhidrato de (trifluorometil) -4-quinolinmetanol (figura 8). La figura 8 muestra la eficacia de diferentes isómeros de mefloquina. La figura 8A muestra IC5 0 S y la estructura de (R, S) y enantiómeros (S, R) que constituyen racemato fármaco mefloquina comercial. Los enantiómeros (+) y (-) se separaron de un racemato mediante cromatografía quiral y se agregaron a las células SVG-A simultáneamente con la cepa JCV Madl/SVEA 3 días antes. Después de la fijación y tinción, se enumeró el número total de células VP1 y casos DAPI+ por grupo de tratamiento mediante el uso de Cellomics ArrayScan®. Se muestra un experimento representativo de los seis realizados.
Aunque existe una diferencia mínima entre las actividades de los enantiómeros contra la malaria (Basco, Gillotin y col.
1992; Brocks y Mehvar 2003), el enantiómero (-) tiene una actividad antagonista mucho más potente contra el receptor A2a (Weiss, Benwell y col. 2003). Los dos enantiómeros muestran también diferentes propiedades farmacocinéticas y de penetración cerebral (Bourahla, Martin y col. 1996; Baudry, Pham y col. 1997). Para comprender mejor los efectos anti-JCV de estos dos componentes del racemato de mefloquina comercializado, cada enantiómero de un racemato se separó usando cromatografía quiral y se comparó en un ensayo de inhibición de JCV. Como puede verse en la figura 8, ambos enantiómeros tienen una eficacia muy similar en la inhibición del virus JC. La figura 9 muestra la eficacia de diferentes isómeros de mefloquina y 2,8-bis-trifluorometilquinolina. Los compuestos se agregaron a las células SVG-A simultáneamente con la cepa JCV Mad1/SVEA 3 días antes. Después de la fijación y tinción, se enumeró el número total de células VP1+ y casos DAPI+ por grupo de tratamiento mediante el uso de Cellomics ArrayScan®. Se muestra un experimento representativo de los seis realizados. Todos los compuestos ilustrados inhibieron la replicación del virus JC. S, S-mefloquina y R, R-mefloquina tienen similares IC50 similares a R, S-mefloquina y S, R-mefloquina, mientras que un compuesto estructuralmente relacionado que tiene un anillo aromatizado tiene un IC50 ligeramente superior. La figura 10 muestra que la actividad anti-JCV de la mefloquina no es inhibida por el líquido cefalorraquídeo (LCR).
Basado en este resultado y en la concentración cerebral informada para enantiómeros de mefloquina (Baudry, Pham y col. 1997) se puede concluir que la mefloquina puede administrarse en concentraciones eficaces en la inhibición de JCV en el cerebro de pacientes. Además, la falta de diferencias significativas entre las actividades anti-JCV de los enantiómeros implica que este efecto no está mediado por el receptor A2a.
La mefloquina ha sido identificada como un tratamiento potencial para la leucoencefalopatía multifocal progresiva en base a los resultados del cribado de una colección disponible comercialmente de fármacos aprobados y compuestos bioactivos en un ensayo de infección viral por JC in vitro. Los experimentos de seguimiento demostraron que el efecto de la mefloquina no se limita a un tipo de célula o una sola cepa viral. Además, la mefloquina es capaz de inhibir la replicación viral en células ya infectadas con el virus. Ambos enantiómeros (+) y (-) del racemato de mefloquina eran casi equipotentes para inhibir la infección por JCV, lo que indica que el aislamiento de enantiómeros individuales no mejoraría el beneficio del fármaco existente. Además, la bibliografía muestra que la mefloquina atraviesa la barrera hematoencefálica y puede acumularse en el cerebro a la concentración eficaz definida in vitro para la inhibición de la infectividad viral JC. Aunque no se dispone de un modelo animal para la leucoencefalopatía multifocal progresiva, los resultados in vitro y los datos de la bibliografía muestran que la mefloquina es una terapia anti-JCV efectiva.
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000036_0001
Ejemplo 5: identificación y caracterización de compuestos activos frente al virus JC
La figura 11 muestra la respuesta a la dosis de varios compuestos que tienen actividad anti-JCV. Las figuras 12 y 13 muestran AINE del ácido arilalcanoico seleccionados y su actividad anti-JCV. La figura 14 muestra el resultado de modelar estudios con mefloquina y compuestos relacionados y los IC50s de un número de compuestos estructuralmente relacionados con la mefloquina. Un catalizador de procedimiento de alineación basado en farmacóforos (http://www.accelrys.com/products/catalyst/) y procedimiento de alineación basado en formas ROCS (http://www.eyesopen.com/products/applications/rocs.html) se utilizaron para estudiar la similitud entre los compuestos. Las superposiciones posteriores (o anteriores) se derivaron en ROCS utilizando un esquema de puntuación que combina la forma y la superposición de campo de fuerza química ponderada entre moléculas. Se detectaron relaciones similares entre moléculas mediante el emparejamiento de farmacóforos.
Tabla 4 muestra la actividad anti-JCV de varios análogos estructurales de la mefloquina (véase también la figura 15). La Tabla 5 muestra la actividad anti-JCV de varios análogos estructurales del ácido fusídico (véase también la figura 16).
Debe apreciarse que uno o más de los análogos estructurales descritos en esta invención y/o uno o más de los compuestos enumerados en las Tablas 1-5 pueden usarse según los procedimientos de la descripción si tienen propiedades adecuadas como se describe en esta invención.
Figure imgf000038_0001
Tabla 5. Análogos seleccionados del ácido fusídico
Estructura MOLREGNO MDLNUMBER MOLNAME actividad anti-JCV CC(=O)OC1CCC2C3CCC4= 4-ESTREN-3-BETA 17-BETA-CC(O)CCC4C3CCC12C 93067 MFCD00271609 DIOL 17-ACETATO Sí CC(OC(C)=O)C1CCC2C3C 5-BETA-PREGNAN-3-ALFA, 6-C(O)C4CC(O)CCC4(C)C3C ALFA, 20-BETA-TRIOL, 20-CC12C 93343 MFCD00271896 ACETATO Sí CC(OC(C)=O)C1CCC2C3C
CC4=CC(O)CCC4(C)C3CC 4-PREGNEN-3-BETA 20-BETA-C12C 93383 MFCD00271937 DIOL 20-ACETATO Sí CC(OC(C)=O)C1CCC2C3C 5-BETA-PREGNAN-3-ALFA, 6-C(O)C4CC(O)CCC4(C)C3C ALFA, 20-ALFA-TRIOL, 20-CC12C 93342 MFCD00271895 ACETATO No CC(CC(O)=O)C1CCC2C3C( ÁCIDO 23-NOR-5-BETA-CC4CC(O)CCC4(C)C3CC(O COLÁNICO-3-ALFA, 7-ALFA, 12-C(C)=O)C12C)OC(C)=O 234323 MFCD03695615 ALFA-TRIOL 7,12-DIACETATO No
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La especificación escrita anterior se considera suficiente para permitir que un experto en la materia ponga en práctica la invención. El alcance de la presente invención no debe limitarse a los ejemplos proporcionados, ya que los ejemplos pretenden ser una ilustración única de un aspecto de la invención y otras realizaciones funcionalmente equivalentes están dentro del alcance de la invención. De hecho, diversas modificaciones de las realizaciones descritas en esta invención son adicionales a las mostradas y descritas en esta invención resultarán evidentes para los expertos en la materia y se pretende que entren dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Las ventajas y los objetos de la invención no están necesariamente abarcados por cada realización de la invención.
Los casos preferidos de la presente descripción se describen a continuación y se denominan casos E1 a E42.
E1. Un procedimiento para inhibir la replicación viral, comprendiendo el procedimiento:
poner en contacto una célula que comprende un virus de ADN con una composición que comprende cloroacetoxiquinolina, demetilnobiletina, propanil, aminoetoxidifenilborano, ácido 5-nitro-2-fenilpropilaminobenzoico, 3beta-hidroxiisoalospirost-9 (11)-eno, leoidina, picropodopbilotoxina, tiabendazol, harmano, 6,4-dihidroxiflavona, gentiopicrosida, (R) -angolensina, ptaeroxilina, dipiridamol, nabumetona, rosiglitazona, clorhidrato de diltiazem, betametasona, ictinona, amcinonida, riluzol, ácido flufenámico, crisina, dictamnina, piplartina, peucenina, metoxivona, isotretinoína, cloroxilenol, tomatina, primuletina, ácido mefenámico, dietilestilbestrol, palmitato de cloranfenicol, metilxantoxilina, 1 -alaninol, diclofenaco sódico, flunixina, meglumina, deshidroabietamida, paquirricina, dicumarol, ácido difáctico, acemetacina, ácido ginkgólico, xantona, ácido fusídico, sulfato de polimixina b, pamoato de pirantel, 4-(3-butoxi-4-metoxibencil) imidazolidin-2-ona, nitrato de miconazol, candesartán cilextil, endosulfán, dioxibenzona, ácido tolfenámico, mefloquina, 2-metoxixantona, 3-hidroxi-4-(succin-2-il) -cariolan delta-lactona, 5,7-dihidroxiflavona, avocadanofurano, benzo(a)pireno, beta-dihidrogedunol, ácido decahidrogambógico, diosmetina, niloticina, pectolinarina, acetato de totarol, 8-cloroadenosina, 3­ desazaadenosina, O6-ciclohexilmetilguanina, 4-estren-3-beta 17-beta-diol 17-acetato, 5-beta- pregnan-3-alfa 6-alfa 20-beta-triol 20-acetato, o 4-pregnen-3-beta 20-beta-diol 20-acetato, o cualquier combinación de los mismos. E2. Un procedimiento para inhibir la replicación viral, comprendiendo el procedimiento:
poner en contacto una célula que comprende un virus de ADN con una composición que comprende candesartán cilextil, ácido mefenámico, ácido fusídico, ácido tolfenámico, mefloquina, isotretinona, diclofenaco sódico, clorhidrato de diltiazem, nitrato de miconazol, flunixina meglumina, propanilo, deshidroabietamida, ácido difráctico, harmano, xantona o metoxivona, o cualquier combinación de los mismos.
E3. El procedimiento de E2, donde la composición comprende mefloquina.
E4. El procedimiento de E3, donde la mefloquina es R*,S*-mefloquina.

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    I. Ácido fusídico, para su uso en la inhibición de la replicación de poliomavirus en un sujeto.
  2. 2. Uso de ácido fusídico en la fabricación de un fármaco para inhibir la replicación de poliomavirus en un sujeto.
  3. 3. El ácido fusídico para su uso según la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, donde el ácido fusídico se administra al sujeto antes, durante o después de que el sujeto reciba una terapia inmunomoduladora para una enfermedad o afección.
  4. 4. El ácido fusídico para su uso según las reivindicaciones 1 o 3, o el uso de las reivindicaciones 2 o 3, donde el poliomavirus es el virus JC o el virus BK.
  5. 5. El ácido fusídico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-4, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-4, donde el sujeto tiene una infección por poliomavirus.
  6. 6. El ácido fusídico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-5, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-5, donde se sabe que el sujeto ha estado expuesto a un poliomavirus.
  7. 7. El ácido fusídico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-6, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-6, donde se identifica que el sujeto tiene, o se sabe que tiene, una infección por poliomavirus.
  8. 8. El ácido fusídico para su uso según la reivindicación 7, o el uso de la reivindicación 7, donde se identifica que el sujeto tiene una infección por poliomavirus al:
    (a) detectar uno o más anticuerpos séricos contra una molécula de poliomavirus; o
    (b) detectar una o más moléculas de poliomavirus obtenidas del sujeto.
  9. 9. El ácido fusídico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-8, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-8, donde el sujeto tiene un sistema inmunológico debilitado.
  10. 10. El ácido fusídico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3-9, donde la enfermedad o afección es esclerosis múltiple, artritis reumatoide, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico o un síndrome o una enfermedad inflamatoria intestinal, donde opcionalmente la enfermedad o síndrome inflamatorio intestinal es enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa o pénfigo.
  11. I I . Ácido fusídico para uso según cualquiera de las reivindicaciones 3-10, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3-10, donde la terapia inmunomoduladora comprende la administración de un anticuerpo VLA-4 al sujeto.
  12. 12. Ácido fusídico para su uso según la reivindicación 11, o el uso de la reivindicación 11, donde el anticuerpo VLA-4 es natalizumab.
  13. 13. El ácido fusídico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 3-12, o el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3-12, donde se administra al sujeto un agente antiviral.
  14. 14. Natalizumab, para su uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple en un sujeto, donde el tratamiento comprende la administración de ácido fusídico para inhibir la replicación del poliomavirus.
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