ES2705529T3

ES2705529T3 - Tratamiento combinatorio del cáncer

Info

Publication number: ES2705529T3
Application number: ES11815949T
Authority: ES
Inventors: Katherine Borden; Biljana Culjkovic
Original assignee: Universite de Montreal
Current assignee: Universite de Montreal
Priority date: 2010-08-11
Filing date: 2011-08-11
Publication date: 2019-03-25
Anticipated expiration: 2031-08-11
Also published as: EP2603222B1; EP2603222A4; CA2806614C; US20130209578A1; EP2603222A1; CA2712747A1; WO2012019284A1; CA2806614A1

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende una ribavirina, un inhibidor de la metiltransferasa y un vehículo farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de una preneoplasia, una lesión precancerosa, neoplasia o un trastorno proliferativo, en la que el inhibidor de metiltransferasa es azacitidina.

Description

DESCRIPCIÓN

Tratamiento combinatorio del cáncer

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere al tratamiento de neoplasias (es decir, cánceres), enfermedades proliferativas, preneoplasias y lesiones precancerosas, mediante un nuevo tratamiento combinatorio del cáncer, que comprende un inhibidor de eIF4E y un inhibidor de metiltransferasa.

El cáncer es una enfermedad devastadora que afecta a innumerables personas y familias en todo el mundo. Una clase de cáncer es la leucemia que consiste en neoplasias derivadas de células hematopoyéticas (formadoras de sangre). Parte de esta clase de cánceres es la leucemia mieloide aguda (AML), también conocida como leucemia mielógena aguda, que es un cáncer de la línea mieloide de las células sanguíneas, que se caracteriza por el rápido crecimiento de glóbulos blancos anormales que se acumulan en la médula ósea e interfieren con la producción de células sanguíneas normales. La AML es la leucemia aguda más común que afecta a los adultos, y su incidencia aumenta con la edad.

Para tratar pacientes diagnosticados con cáncer, investigadores científicos de todo el mundo han investigado una multitud de células cancerosas mutantes, mutaciones genéticas, mutagénesis de sitio específico, ADN, ARN, ARN y expresión de proteínas, transportadores, secuenciación genética, para mapear las vías bioquímicas en las células cancerosas a nivel molecular y encontrar la "cura" para diversos tipos de cáncer. Uno de los campos de investigación del cáncer más recientes consiste en la investigación de la desregulación del metabolismo del ARN que contribuye a que las células se vuelvan cancerosas, y aún más específicamente, la inhibición de un factor específico, el factor de inicio de la traducción eucariota 4E (eIF4E), por un fármaco antiviral ya conocido, Ribavirina, que impide que eIF4E sea capaz de hacer que las células se vuelvan cancerosas sin afectar significativamente a las células normales.

El factor de inicio de la traducción eucariota, eIF4E, se encuentra en todas las células, es un efector clave de la regulación epigenómica y es importante para producir nuevas proteínas. eIF4E modula de forma coordinada y combinada la expresión de genes implicados en la proliferación y la supervivencia. La cantidad de eIF4E se sobreexpresa en la AML y es anormalmente alta en el 30% de los cánceres, incluyendo de mama, próstata y algunas leucemias, incluidos los subtipos particularmente agresivos de leucemia mieloide denominados M4 y M5. La función del eIF4E para producir nuevas proteínas depende de su capacidad para unirse a la parte frontal del ARN conocida como la caperuza m7G cap (7-metil guanosina) (ubicada en el extremo 5' del ARNm), que después permite que la célula se "traduzca" o se convierta este ARN en proteína. También tiene un papel en la exportación del ARNm al citoplasma, que debe preceder a la etapa de traducción. Los niveles de eIF4E, en pacientes con cáncer, se elevan por muchas razones, concretamente: amplificación génica, desregulación transcripcional, así como alteraciones en la estabilidad del ARNm. En particular, en la mayoría de los cánceres, tanto las funciones de exportación como de traducción de ARNm del eIF4E están desreguladas. En el contexto del cáncer, se puede encontrar un análisis más detallado sobre eIF4E en: Borden et al. "Structural characterization of the Z ring-eIF4E complex reveals a distinct mode of control for eIF4E" PNAS, vol. 107(12), pág. 5441-5446 (23 de marzo de 2010); Borden et al., "Understanding and targeting the eukaryotic translation initiation factor eIF4E in head and neck cancer" Journal of Oncology, 2009 (Epub 2009 Dec. 13, Revisión); Borden, "Tissue targeting in cancer: eIF4E's tale", Clin Cancer Res, 15(13) pág. 4254-4255 (1 de julio de 2009); Borden et al. "Stability of eukaryotic translation initiation factor 4E mRNA is regulated by HuR, and this activity is dysregulated in Cancer", Molecular and Cellular Biology, vol. 29 (5), pág.

1152-1162 (Marzo 2009); Tamburini et al., "Targeting translation in acute myeloid leukemia: a new paradigm for therapy?" Cell Cycle, 8 (23) 3893-3899 (Diciembre 2009); Borden et al., "Controlling gene expression through RNA regulons: the role of the eukaryotic translation initiation factor eIF4E" Cell Cycle, 6; 65-69 (2007); Borden et al., "eIF4E is a central node of an RNA regulon that governs cellular proliferation", The Journal of Cell Biology, 175 (3), pág. 415-426 (Nov 6, 2007); Montanaro et al., "Initiation of mRNA translation in oncogenesis: The role of eIF4E", Cell Cycle, 3:11, 1387-1389 (Nov 2004); Graff et al., "Translational control and metastatic progression: enhanced activity of the mRNA cap-binding protein eIF-4E selectivity enhances translation of metastasis-related mRNAs", Clin Exp Metastasis, 20: 265-273 (2003); y Borden et al. "The emerging roles of translation factor eIF4E in the nucleus", Differentiation, 70: 10-22 (2002); y DeFatta et al., "Antisense RNA to eIF4E suppresses oncogenic properties of a head and neck squamous cell carcinoma cell line", Laryngoscope, 110 (6): 928-933 (Junio 2000). En resumen, se cree que las células cancerosas con niveles elevados de eIF4E parecen haber desarrollado una adicción al oncogénica al eIF4E. Con fines informativos, se puede hacer referencia a los siguientes documentos, concretamente: Publicaciones internacionales abiertas a inspección pública n.° WO 2007/123579 y WO 2008/060369 (Translational Therapeutics); publicación internacional abierta a inspección pública n.° 2010/006291 (Nodality Inc.); y las Patentes de Estados Unidos N.° 7.425.544 y 7.601.700 (expedida a Eli Lilly and Co. e ISIS Pharmaceuticals Inc.), así como la Solicitud de Patente canadiense N.° 2.632.903 (Nabil-Habib Lab y Vianova Labs Inc.).

Por lo tanto, debido a sus propiedades, el factor de inicio de la traducción eucariota, eIF4E, se ha convertido en un objetivo clínico atractivo para tratar pacientes diagnosticados con cáncer, en particular AML. A este respecto, el direccionamiento de la actividad de unión a la caperuza eIF4E-m7G se ha estudiado en un ensayo de fase II, en pacientes con leucemia, y se ha notificado en Assouline et al., "Molecular targeting of the oncogene eIF4E in acute myeloid leukemia (AML): a proof-of-principle clinical trial with ribavirin" Blood, vol. 114, n.° 2 (9 de julio de 2009, Epub 2009 Mayo 11). En este ensayo, se encontró que el fármaco antiviral de uso común, ribavirina, disminuye la función de eIF4E porque imita la caperuza m7G; inhibiendo de este modo la exportación inducida por eIF4E y la traducción de transcritos sensibles. En experimentos de cultivo celular, la ribavirina no moduló los niveles de proteína eIF4E o el ARN. Sin embargo, en los pacientes, la ribavirina no solo inhibe eIF4E, sino que también puede conducir a la regulación descendente de los niveles de proteína eIF4E (y de ARN), como se observó en pacientes en un ensayo clínico de fase II usando monoterapia con ribavirina. Finalmente, en las células vivas, se demuestra que eIF4E se une a 3H ribavirina (figuras 2 y 3), lo que apoya la idea de que eIF4E se une a ribavirina directamente in vitro e in vivo.

Para mayor comodidad, la ribavirina se designa químicamente como: 1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-1/-/-1, 2,4-triazol-3-carboxamida, y tiene la siguiente estructura química:

Su preparación se ha descrito en la Patente de Estados Unidos N.° 3.798.209 (expedida a ICN), así como en Journal of Medicinal Chemistry, 15, 1150 (1972), Witkowski, J.T., et al. Se divulga una revisión de su mecanismo de acción, en el contexto de un tratamiento viral, en Streeter et al., "Mechanism of action of 1-p-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide (Virazole), A new broad-spectrum anti-viral agent", Proc. Nat. Acad. Sci., vol. 70(4), págs. 1174-1178, (Apr 1973), así como la publicación de 1972 Science, titulada "Broad-spectrum antiviral activity of Virazole: 1-beta-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide", escrito por Sidwell.

La farmacología clínica de la ribavirina también se divulga en "The clinical pharmacology of ribavirin" Seminars in liver disease, vol. 19, supl. 1, 1999, pág. 17-24, 1999 by Paul Glue. Se puede encontrar un análisis adicional sobre la interacción de la ribavirina con el eIF4E en: Assouline et al., "Molecular targeting of the oncogene eIF4E in acute myeloid leukemia (AML): a proof-of-principle clinical trial with ribavirin" Blood, vol. 114, n.° 2 (9 de julio de 2009); Borden et al., "Tissue Targeting in Cancer: eIF4E's Tale" Clin Cancer Res, 2009, 15(13): 4254-5 (1 de julio de 2009); Borden et al. "Ribavirin targets eIF4E dependent Akt survival signalling", Biochem Biophys Res Commun, 375(3): 341-345 (24 de octubre de 2008); Borden et al. "Further evidence that ribavirin interactions with eIF4E", ^rNA, 11:1762-1766 (2005); y Borden et al. "Ribavirin suppresses eIF4E-mediated oncogenic transformation by physical mimicry of the 7-methyl guanosine mRNA cap", PⁿAS, vol. 101(52) pág. 18105-18110 (28 de diciembre de 2004). A partir de estas divulgaciones, se puede entender que la imitación física del ligando natural de eIF4E, ribavirina, inhibe preferiblemente el crecimiento de muestras de AML primaria (AML M4/M5) con niveles elevados de eIF4E en relación con especímenes con niveles normales de eIF4E (por ejemplo, AML M1/M2) o controles normales. También se indica que cuando se usa la monoterapia con ribavirina, no se observan efectos tóxicos relacionados con el tratamiento. Además, en Borden et al., "Further evidence that ribavirin interacts with eIF4E" RNA (2005) 11, 1762 1766, los autores confirmaron además que la ribavirina antagonizaba las funciones de eIF4E en el transporte y la traducción de ARNm sensibles a eIF4E a concentraciones micromolares bajas, similares a aquellas a las que se asocia con el eIF4E purificado in vitro (Kd en el rango micromolar bajo; véase Kentsis et al., "Ribavirin suppresses eIF4E-mediated oncogenic transformation by physical mimicry of the 7-methyl guanosine mRNA cap", PNAS, 2004, Vol. 101(52), págs. 18105-18110). Estudios adicionales indican que los inmunoprecipitados (IP) de 3H ribavirina con eIF4E en células vivas respaldan adicionalmente la afirmación de que la ribavirina se une directamente a eIF4E (Figuras 2 y 3).

En la forma de realización de un ensayo clínico n.° NCT00559091, el Solicitante observó que la mayoría, si no todos, los pacientes se volvieron resistentes a la monoterapia con ribavirina. En algunos pacientes, la monoterapia no tuvo impacto. Por lo tanto, un problema asociado con una monoterapia con ribavirina, en el contexto del cáncer y como se señala en Assouline et al. (anteriormente), es que las células de AML se vuelven resistentes a esta terapia. De hecho, las células leucémicas se vuelven resistentes a casi todas las monoterapias en un plazo de dos (2) a cuatro (4) meses; esto se debe a fenómenos naturales tal como la evolución selectiva (Abboud et al., "Induction therapy for elderly patients with acute myeloid leukemia", Blood Reviews (2008) 22: 311-320, y Melnick et al., "MdS and secondary AML display unique patterns and abundance of aberrant DNA methylation", Blood. 2009 Oct 15;114(16):3448-58. Epub 2009 Aug 3). Para superar este problema de resistencia, no es infrecuente en el campo clínico, y en la mayoría de los tratamientos que implican monoterapia, hacer un seguimiento de este tratamiento con quimioterapia, como se enseña en Abboud et al. (anteriormente) y Melnick et al. (anteriormente). Como es bien sabido, el uso de agentes quimioterapéuticos tiene muchos efectos secundarios en los pacientes, incluyendo, y sin limitación, el daño de las células normales, anemia, sangrado, estreñimiento, fatiga, pérdida del cabello, infecciones, cambios de memoria, hinchazón, e incluso la muerte entre muchos otros. La quimioterapia convencional también requiere una estancia en el hospital para administrar el agente o agentes quimioterapéuticos, así como la atención de apoyo para los efectos secundarios. A este respecto, Abboud et al., en Blood Reviews (2008, anteriormente), ^{revisan las estrategias de tratamiento de pacientes mayores de}60 ^{años (que son la mayoría de los pacientes con}AML), diagnosticados con AML, y las morbilidades y mortalidades asociadas con la quimioterapia.

Otro fármaco conocido para tratar el cáncer es la azacitidina (AZA, también conocida como "azacitidina"), que se designa químicamente como 4-amino-1-p-D-ribofuranosil-1,3,5-triazin-2 (1H)-uno y tiene la siguiente estructura química:

AZA es un profármaco con actividad ejercida a través del ARN y ADN. Al unirse al ARN o su incorporación en el mismo, causa la inhibición de la síntesis de proteínas. También es un agente citotóxico específico de la célula y tiene múltiples efectos en el metabolismo del ADN. De hecho, cuando se incorpora AZA en el ADN, se sabe que produce una disminución marcada en la actividad de la ADN metiltransferasa. También se ha demostrado que AZA, un ribonucleósido, tiene un efecto sobre la reducción de la viabilidad celular, en líneas celulares de AML, como se divulga por Hollenback et al., en "A comparison of azacitidine and decitabine activities in acute myeloid leukemia cell lines" PloS ONE, vol. 5, edición 2, Feb 2010. Se puede encontrar un análisis adicional sobre su mecanismo de acción en Borthakur et al., "Report of a phase 1/2 study of azacitidine and cytarabine in acute myelogenous leukemia and high-risk myelodyplastic syndromes" Leukemia and Lymphoma 2010 January; 51(1); 73-78; Raza et al., "Combination of 5-azacytidine and thalidomide for the treatment of myelodysplatic syndromes and acute myeloid leukemia", Cancer, Oct 2008, vol. 113(7), 1596-1604; Sudan et al. en "Treatment of acute myelogenous leukemia with outpatient azacitidine", Cancer, Oct 152006, vol. 107(8), pág. 1839-1843; Keating et al., "Azacitidine: a review of its use in higher-risk myelodysplastic syndromes/acute myeloid leukaemia" Drugs, 2009; 69(17): 2501-18; y Garcia-Manero G. "A pilot pharmacokinetic study of oral azacitidine", Leukemia. 2008 Sep; 22(9): 1680-4. Epub 2008 Jun 12. También se puede hacer referencia a la Patente de Estados Unidos N.° 6.905.669, que divulga, en parte, los inhibidores de metiltransferasa.

Para tratar pacientes diagnosticados con cáncer, incluyendo, por ejemplo, AML, se han desarrollado e informado muchas combinaciones de fármacos en la técnica anterior. Por ejemplo, Zhu et al., "Novel agents and regime for acute myeloid leukemia: 2009 ASH annual meeting highlights" Journal of Hematology & Oncology 2010, 3:17 (Revisión) divulga monoterapias de daunorrubicina, voreloxina, ARRY-520, AZD1152, AZD6244 y terameprocol, así como combinaciones de fármacos tales como: (i) citarabina con daunorrubicina; (ii) fludarabina, citarabina con idarrubicina, (iii) mitoxantrona con citarabina; (iv) clofarabina sola o en combinación con Ara-C en dosis bajas o Ara-C en dosis altas con el anticuerpo monoclonal GO; (v) terapia de combinación con sorafenib; (vi) tipifarnib con bortezomib; (vii) vorinostat en combinación con idarrubicina; (viii) decitabina con GO; (ix) azacitidina con botezomib o GO en dosis bajas; (x) amonafile con Ara-C; (xi) behanoilara-C con idarrubicina; (xii) lenalidomina, Ara-C y daunorrubicina; así como (xiii) ribavirina con Ara-C, en el tratamiento de la AML de edad avanzada o AML recidivante. La combinación de ribavirina y Ara-C en dosis bajas, Ara-C e idarrubicina, y combinaciones de las mismas (es decir, ribavirina, Ara-C e idarrubicina), así como sorafenib con ribavirina, se divulgó específicamente por Assouline et al. en una sesión de póster titulada "Targeting the oncogene eIF4E with ribavirin: a novel therapeutic avenue in acute myeloid leukemia" Blood (ASH Annual Meeting abstracts) 2009, vol. 114: Abstract 2085. La combinación de ribavirina con sorafenib también se conoce y se divulgó por W.H. Miller et al. en una Cancer meeting en febrero de 2010, en una presentación en PowerPoint titulada "Targeting the protein translation factor eIF4E with Ribavirin: A novel therapeutic avenue in Human Cancer". Otras terapias farmacológicas combinatorias incluyen la combinación de inhibidores de la metilación del ADN con otros fármacos, tales como los notificados, por ejemplo, en: Leone et al., "Inhibitors of DNA methylation in the treatment of hematological malignancies and MDS", Clinical Immunology, 109 (1), págs. 89-102 (octubre de 2003); Gore S.D., "Combination therapy with DNA methyltransferase inhibitors in hematologic malignancies", Nature Clinical Practice Oncology (2005) 2, S30-S35, doi:10.1038/ncponc0346 (Aceptado 5 de septiembre de 2005); Brown et al., "Novel targeted drug therapies for the treatment of childhood acute leukemia." Expert Rev Hematol. 2009 Apr 1;2(9):145-158; Sekeres MA., "Treatment of MDS: something old, something new, something borrowed..." Hematology Am Soc Hematol Educ Program.

2009:656-63; y Ma et al., "Novel agents on the horizon for cancer therapy" CA Cancer J Clin. 2009 Mar-Apr;59(2):111-37.

También se han realizado ensayos clínicos con varias combinaciones de fármacos para el tratamiento de la leucemia y/o AML, y están disponibles en: http://clinicaltrials.gov/ct2/home. Los ejemplos de combinaciones de terapia para la AML incluyen, pero sin limitación: ABT-348; ABT-888 y topotecán con o sin carboplatino; alemtuzumab, busulfán, y ciclofosfamida; alemtuzumab, busulfán, y melfalán; alemtuzumab con fosfato de fludarabina; ácido todo-trans retinoico con briostatina 1; amifostina trihidrato, citarabina con clorhidrato de mitoxantrona; trióxido de arsénico; azacitidina con arabinósido de citarabina (también conocida como Ara-C); azacitidina, asparaginasa, citarabina, clorhidrato de daunorrubicina, etopósido, lintuzumab con tioguanina; azacitidina con trióxido de arsénico; azacitidina con belinostat; azacitidina con entinostat; azacitidina con gemtuzumab ozogamicina; azacitidina con lenalidomida; azacitidina con midostaurina; 5-azacitidina (vidaza®) con panobinostat (lbh589); 5-azacitidina (5-aza), ácido valproico con ácido todo trans retinoico (atra); azacitidina con ácido valproico; azacitidina con fenilbutirato; basiliximab; becatecarin; belinostat; bendamustina; bevacizumab, citarabina con clorhidrato de mitoxantrona; bexaroteno y gm-csf; BMS-214662; bortezomib con belinostat; bortezomib con melfalán; bortezomib y vorinostat; briostatina 1; busulfán, filgrastim con etopósido; busulfán con fludarabina; busulfán, ciclofosfamida, micofenolato mofetilo con tacrolimus; carboplatino, docetaxel con ifosfamida; maleato de cediranib; clofarabina; clofarabina con ciclofosfamida; clofarabina, citarabina con idarubicina; clofarabina, filgrastim con citarabina; clofarabina y dosis altas de melfalán; clofarabina, melfalán, y tiotepa; cilengitida; cixutumumab con temsirolimus; CPX-151; CT53518; citarabina y daunorrubicina con o sin gemtuzumab ozogamicina; citarabina y daunorrubicina con o sin triclorhidrato de zosuquidar; citarabina, idarrubicina con tipifarnib; citarabina con 7-hidroxiestaurosporina; citarabina con laromustina; citarabina con tanespimicina; citarabina con triapina; ciclofosfamida; ciclosporina y administración IV con micofenolato mofetilo; ciclosporina, micofenolato mofetilo, y pentostatina; ciclosporina, metotrexato, metoxsalen, micofenolato mofetilo con pentostatina; decitabina; decitabina con lenalidomida; decitabina con romidepsina; decitabina con tretinoína; decitabina con ácido valproico; decitabina con vorinostat (secuencial); deferasirox; dolastatina 10; eltrombopag olamina; entinostat; everolimus; mesilato de exatecán; citrato de fentanilo; flavopiridol y vorinostat; fludarabina y ciclofosfamida, así como la irradiación total del cuerpo, seguida de ciclosporina y micofenolato mofetilo; fosfato de fludarabina con administración IV; fosfato de fludarabina con tretinoína; fludarabina, carboplatino, y topotecán; fludarabina, carboplatino, topotecán con talidomida; fludarabina con melfalán; fludarabina con tiotepa; fludarabina con treosulfán; gimatecán; gimatecan;7-hidroxiestaurosporina con perifosina; hidroxiurea con laromustina; idarrubicina con saha (vorinostat); ipilimumab; mesilato de imatinib; interleucina-12 seguida de interferón alfa; irofulven; itraconazol con midostaurina; ispinesib; JNJ-26481585; KW-2449; laromustina; lintuzumab; lonafarnib; inhibidor de MEK AZD6244; MS-275 y gm-csf; MGCD0103; MLN8237; micofenolato mofetilo, tacrolimus con daclizumab; ON 01910.na; OXI4503; palivizumab con o sin ribavirina; paricalcitol; fenilbutirato y tretinoína; procrit; piroxamida; fluorouracilo, leucovorina cálcica, y clorhidrato de topotecán; rasburicasa; revlimid; romidepsina; sargramostim, amifostina trihidrato, carboplatino con ciclofosfamida; SB1518; SJG-136; STA-9090; sirolimus con tacrolimus; salicilato sódico; tosilato de sorafenib; sorafenib con vorinostat; tacrolimus y micofenolato mofetilo con o sin sirolimus; tacrolimus y micofenolato mofetilo; acetato de tetradecanoilforbol; temsirolimus; tipifarnib; triapina con fosfato de fludarabina; vorinostat; e anticuerpo monoclonal anti-cd45 con itrio y 90 ahn-12, entre otros. Raza et al., en "Combination of 5-azacytidine and thalidomide for the treatment of myelodysplatic syndromes and acute myeloid leukemia", Cancer, Oct 2008, vol.

113(7): 1596-1604, divulga la combinación de 5-azacitidina y talidomida, siendo esta última un fármaco que una vez estuvo prohibido debido a sus efectos teratogénicos.

Como se señala por Borthakur et al. en "Report of a phase 1/2 study of azacitidine and cytarabine in acute myelogenous leukemia and high-risk myelodyplastic syndromes" Leukemia Lymphoma 2010 January; 51(1); 73-78, un problema asociado con la combinación particular de azacitidina y citarabina es que, incluso si se considera factible, solo tiene una actividad limitada en la AML recidivante/refractaria. Señalaron que en la población avanzada de AML, era difícil administrar más de un ciclo de terapia, y se puede observar una actividad anti-leucemia con enfermedad recidivante/refractaria. Según Borthakur et al., otro problema asociado con los tratamientos farmacológicos para la AML es el silenciamiento epigenético; un fenómeno por el cual un aumento de la metilación inducida por fármaco permite la resistencia adquirida al fármaco. La contribución de los mecanismos epigenéticos para la correcta función celular se destaca por los efectos de su desregulación que, en cooperación con las alteraciones genéticas, conducen al establecimiento y progresión de tumores (véase, Fazi et al., "Heterochromatic gene repression of the retinoic acid pathway in acute myeloid leukemia", Blood, May 2007, vol. 109(10), pág. 4432 4440). Otros problemas con la terapia farmacológica concomitante es que los fármacos pueden (i) producir efectos antagónicos, (ii) experimentar sensibilidad/resistencia colateral a otros fármacos, (iii) tener dificultad para determinar el régimen de dosificación correcto, (iv) tener problemas de toxicidad; y (v) crear resistencia a múltiples fármacos. Por último, las células de AML han demostrado ser capaces de auto-renovarse (véase Wang et al. en "Sensitivity to 5-azacytidine blast progenitors in acute myeloblastic leukemia", Blood, vol. 69(2) Feb 1997, pág. 553-559).

A partir de lo anterior, se hace evidente que el tratamiento de los síndromes mielodiplásicos (MDS) y/o AML sigue siendo un desafío para el médico a pesar de los avances recientes. Muchos pacientes no responderán o tendrán respuestas limitadas y/o breves a la terapia con un solo agente o incluso a la terapia concomitante. Por lo tanto, existe la necesidad de superar los inconvenientes mencionados anteriormente mediante una nueva terapia farmacológica combinatoria. A este respecto, la presente invención se dirige a una combinación particular de azacitidina (AZA) y ribavirina, que supera, en su mayor parte, los inconvenientes mencionados anteriormente.

La única pieza de la bibliografía científica que alude a la ribavirina y la azacitidina es una publicación titulada "A single mutation in poliovirus RNA-dependent RNA polymerase confers resistance to mutagenic nucleotide analogs via increased fidelity" PNAS, Jun 10, 2003, vol. 100(12), pág. 7289-7294. En esta publicación, los autores, Pfeiffer y Kirkegaard, describen, en un entorno viral (es decir, en el poliovirus), la generación de poliovirus resistente a la ribavirina por el pase viral en serie en presencia de concentraciones crecientes del fármaco, la ribavirina. Los autores señalaron que la resistencia a la ribavirina puede ser causada por un solo cambio de aminoácido, G54S, en la polimerasa viral en una porción no resuelta del dominio de los dedos. En comparación con el virus de tipo silvestre, los autores observaron que el poliovirus resistente a la ribavirina muestra una fidelidad aumentada de la síntesis de ARN en ausencia de ribavirina y una mayor supervivencia tanto en presencia de ribavirina como de otro mutágeno, 5-azacitidina. Aunque esta publicación alude a la mera presencia de ribavirina y azacitidina, no es relevante por las siguientes razones. En primer lugar, la mayoría de los estudios de virus se han centrado principalmente en los efectos de la ribavirina en el virus, por ejemplo: mutaciones en las polimerasas virales, que no es el caso en el contexto de la presente invención. En el contexto viral, la ribavirina impide el crecimiento del virus y se produce resistencia cuando el virus continúa replicándose incluso en presencia de ribavirina. En el contexto del cáncer, es una medida de células que se vuelven resistentes a los efectos antiproliferativos de la ribavirina, es decir, que eIF4E media en la proliferación, la ribavirina impide este efecto y, finalmente, las células continúan proliferando incluso en presencia de ribavirina. En segundo lugar, podría haber diferentes vías bioquímicas moduladas. Por lo tanto, no se pueden comparar las infecciones virales, tal como el virus de la hepatitis C (VHC) o el poliovirus, con células de tipo canceroso o crecimiento celular, ya que los mecanismos de acción son totalmente diferentes.

Por las mismas razones, la publicación científica titulada "Ribavirin resistance in Hepatitis C virus replicon-containing cell lines conferred by changes in the cell line or mutations in the replicon RNA", Journal of Virology, vol. 79(4) Feb 2005, pág. 2346-2355, no puede considerarse aplicable a la presente invención.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Un aspecto de la presente invención está dirigido a una composición farmacéutica que comprende una ribavirina, un inhibidor de la metiltransferasa y un vehículo farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de una preneoplasia, una lesión precancerosa, neoplasia o un trastorno proliferativo, en la que el inhibidor de metiltransferasa es azacitidina.

Se exponen formas de realización adicionales en las reivindicaciones dependientes.

Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada, los dibujos y las reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 es una tabla que resume los resultados de los ensayos de formación de colonias en metilcelulosa para especímenes de AML primaria (adquiridos en el BLCQ) o especímenes aislados de voluntarios sanos (adquiridos en Stem Cell Technologies). El número de colonias indica el potencial proliferativo de las células que se tratan con los fármacos que figuran en la Tabla. Un experimento de colonias típicamente dura 14 días. Se utilizó un medio especial que soporta el crecimiento de células hematopoyéticas (Methocult adquirido en Stem Cell Technologies). Mutante se refiere a la presencia de una mutación en el gen Flt3 (un marcador de leucemia común) y tipo silvestre se refiere a que Flt3 no se encuentra mutado en este espécimen. Cada experimento se realiza por quintuplicado con el número de colonias más/menos desviaciones estándar dadas. Los tratamientos farmacológicos para el inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) era 1 micromolar de una concentración final repuesta cada 48 horas (debido a la descomposición de la ribavirina) y 3 micromolar de inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina), que no se repuso. Los controles no tratados se realizaron en paralelo para cada experimento individual. Los experimentos se realizaron en especímenes como se describe. Cabe señalar que AML M1-high4E se refiere a un espécimen M1 que tenía niveles elevados de eIF4E (véase la Figura 5).

La Figura 2 es un diagrama que demuestra que un inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, se une directamente a eIF4E en células vivas. Los experimentos biofísicos anteriores demostraron que la ribavirina podría unirse a eIF4E directamente mediante el uso de RMN, espectrometría de masas, fluorescencia, entre otras técnicas (véase, Kentsis et al, 2004 (anteriormente) y Kentsis, et al., "Further evidence that ribavirin interacts with eIF4E", RNA. 2005 Dec;11(12): 1762-6). Para demostrar que este mecanismo está teniendo lugar en células vivas, células FaDu se trataron durante 24 h con una solución 0,66 micromolar de un inhibidor de eIF4E, por ejemplo, 3H Ribavirina, se entrecruzaron con formaldehído y se lisaron en un tampón de inmunoprecipitación. Se usaron cantidades iguales de lisado para la inmunoprecipitación con anticuerpos contra los controles de eIF4E o IgG. Después de 6 lavados (W), las perlas se eluyeron en tampón SDS. Se utilizó 1/5 del volumen para el análisis de transferencia Western y el resto para la medición de 3H. Sn se refiere a sobrenadante (el material que no se unió a las perlas de anticuerpos, es decir, no se inmunoprecipitó). La entrada es un control positivo que muestra que eIF4E está presente en el lisado celular.

La Figura 3 es un control de transferencia Western para la Figura 2. Esta transferencia de western confirma que los anticuerpos para eIF4E inmunoprecipitaron eIF4E y que eIF4E no se encontró en la inmunoprecipitación de control de IgG.

La Figura 4 es una transferencia Western que demuestra que las células THP1 y KG1 tienen niveles elevados de proteína eIF4E. También se muestra el espécimen mencionado en la Figura 1 como M1 high4E. La actina se proporciona como un control de carga. "Norm" se refiere a las células aisladas de un voluntario sano. Vale la pena señalar que la intensidad de la actina es mucho más alta para Norm que para todas las demás barras de especímenes M1 high4E, lo que indica que los niveles de elF4E son mucho más bajos en el control normal que en cualquiera de las líneas celulares o especímenes que se examinan en relación con la actina. Se proporcionan líneas celulares FaDu como un control positivo dado que se ha establecido que tienen eIF4E elevado. M5 BCLQ es un espécimen de AML del Banco de células de leucemia de Quebec (BCLQ), que es otro control positivo. RA paciente 3 (RA Pt3) se refiere al espécimen anterior para uno de los pacientes que participan en el ensayo clínico del Solicitante, que también tiene claramente eIF4E elevado. Se concluye a partir de esta transferencia que las células THP-1 y KG-1a tienen niveles elevados de eIF4E dentro del intervalo de otros especímenes positivos.

La Figura 5 es una transferencia Western que demuestra que las células KG-1 y THP-1 responden al inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, y por lo tanto, es un buen sistema sustituto para estudios paralelos en especímenes primarios de pacientes. Las células se trataron con una concentración de un inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) administrada durante 48 horas. Las células THP-1 representan una línea celular AML M4. Sin embargo, las células KG-1a son una línea celular M2 que tiene eIF4E elevado (véase la Figura 5). Sirven como un paralelo para los especímenes primarios M1-high4E del Solicitante. A pesar de las diferencias de linaje, las células KG-1a y THP-1 responden de manera similar al inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina, véase la Figura 5) y a la combinación del inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) con un inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina, véase a continuación). La diana de exportación de ARNm aguas abajo de eIF4E mdm2 se regula negativamente por el inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, tratamiento en ambas líneas celulares. Los niveles de proteína eIF4E no cambian, excepto que hay una reducción a 50 pM de ribavirina en las células THP-1, pero es probable que esto sea un artefacto de estar en el borde del gel cuando la transferencia Western tuvo lugar. Cabe señalar que Akt también es bajo aquí de forma similar, probablemente por la misma razón.

La Figura 6 es una transferencia Western que demuestra que azacitidina reguló positivamente las dianas aguas abajo de eIF4E que incluyen XIAP, Mdm2 y Mcl-1, todos los genes antiapoptóticos en las células KG1. Además, el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, conduce a la activación de Akt que está asociada con la señalización de la supervivencia, mientras que el inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, reduce la activación de Akt (a través de la reducción de NBS1, véase la Figura 6, así como Tan et al., (2008), "Ribavirin targets elF4E dependent Akt survival signaling". Biochemical and Biophysical Research Communications, Volumen 375, Edición 3, 24 de octubre de 2008, Páginas 341-345) solo o en combinación con el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina. El inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, reduce los niveles de estas dianas por debajo de los del inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina sola, lo que sugiere que el inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, coopera con el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, fisiológicamente al inhibir la actividad de eIF4E (cuya azacitidina aparentemente se estimula en estas células, probablemente debido a algún mecanismo de supervivencia compensatorio). También se muestran en estas transferencias western los marcadores de caspasa 3 y LC3B (mostrado como LC3) para la apoptosis y la autofagia, respectivamente. El aumento en la banda de LC3B de peso molecular inferior indica un aumento de la autofagia y el aumento en las bandas de caspasa 3 escindidas (a 19 kDa, 17 kDa y 16 kDa) indica un aumento de la apoptosis. También parece que el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, la azacitidina, aumenta la cantidad total de proteína LC3B en relación con las células no tratadas o de control, lo que también puede sugerir un aumento de la muerte celular. El aumento de LC3B está presente en el inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, células tratadas solas, pero la composición de acuerdo con la presente invención, por ejemplo, un inhibidor de metiltransferasa con un inhibidor de eIF4E, por ejemplo, azacitidina con ribavirina, las células tratadas combinadas tienen mucho más LC3B escindido que cualquier otro tratamiento. Además, tanto el tratamiento con ribavirina como con AZA en solitario y juntos pueden conducir a la detención del ciclo celular. Por lo tanto, la combinación de agentes terapéuticos de acuerdo con la presente invención reduce preferiblemente las células cancerosas potenciando la muerte celular e impedir la proliferación. La Figura 7 se dirige a una transferencia Western que demuestra que el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, Azacitidina) regulaba positivamente las dianas aguas abajo de eIF4E y los efectos del inhibidor de eIF4E (por ejemplo, Ribavirina), en solitario o en combinación, en dianas eIF4E, marcadores de apoptosis y marcadores de autofagia en células THP-1. El aumento en XIAP no es tan sorprendente en las células THP-1 como en las células KG1-a (véase la Figura 7), pero aún es sustancial en relación con cualquier otro tratamiento. En estas células, Mcl-1 también se regula positivamente por el inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) como en las células KG-1a. En ambos casos, la combinación de estos fármacos conduce a un aumento de la muerte celular. El aumento en la banda de LC3 de peso molecular inferior (y, por tanto, la escisión de LC3) indica un aumento de la autofagia. La escisión es más pronunciada en las células tratadas con la combinación de azacitidina/ribavirina que con cualquiera en solitario. Las células THP1 contienen mucho más LC3 que las células KG1-a, y es por eso que LC3 es detectable en los controles no tratados. También parece que el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) aumenta la cantidad total de proteína LC3 en relación con las células no tratadas, lo que indica un aumento de la muerte celular.

La Figura 8 es una descripción resumida que muestra algunos de los inhibidores pertinentes de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) y las actividades de los inhibidores de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina). Esta figura no es un sustituto de la información en la presente solicitud, sino más bien una descripción gráfica de algunos de los puntos más importantes.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

1. Definiciones

Por "profármaco" se entiende que indica un compuesto que puede convertirse en condiciones fisiológicas o por solvólisis en un compuesto biológicamente activo de la invención. Por lo tanto, el término "profármaco" se refiere a un precursor metabólico de un compuesto de la invención que es farmacéuticamente aceptable. Un profármaco puede estar inactivo cuando se administra a un sujeto que lo necesita, pero se convierte in vivo en un compuesto activo de la invención. Los profármacos típicamente se transforman rápidamente in vivo para producir el compuesto precursor de la invención, por ejemplo, por hidrólisis en sangre. El compuesto profármaco a menudo ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular o liberación retardada en un organismo mamífero (véase, por ejemplo, Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), págs. 7-9, 21-24 (Elsevier, Ámsterdam).

La abreviatura "eIF4E" significa factor de inicio de la traducción eucariota 4E, que es una proteína que en los seres humanos está codificada por el gen eIF4E.

Por un "inhibidor de eIF4E" se entiende cualquier compuesto que inhibe la actividad bioquímica de eIF4E, incluyendo su papel en la traducción de ARNm y la exportación de ARNm o los niveles de elF4E (a Rn o proteína). Los ejemplos de inhibidores de eIF4E incluyen, por ejemplo: ribavirina (1-p,D-ribofuranosil-1H-1,2,4-tiazol-3-carboxamida) y sus derivados. De manera deseable, un "inhibidor de eIF4E" da como resultado una reducción en el cáncer o la diseminación de, por ejemplo, al menos el 10%, 20%, 30% o 50% de las células cancerosas. En formas de realización más deseables, un "inhibidor de eIF4E" reduce la replicación o diseminación, por ejemplo, en al menos el 70%, 80%, 90%, 95%, o incluso el 99%, de células cancerosas.

La "sal farmacéuticamente aceptable" y "sales de los mismos" en los compuestos de la presente invención se refieren a sales de adición de ácidos y sales de adición de bases.

Por "inhibidor de metiltransferasa" o "inhibidor de metiltransferasa de ADN" se entiende compuestos que inhiben la metilación de la citosina de base de ADN en la posición C-5 de esa base por la enzima metiltransferasa de ADN. Los ejemplos de inhibidores de metiltransferasa incluyen aquellos compuestos que pueden inhibir cualquier tipo de metiltransferasa, ya sea uniéndose directamente a, o incorporando ARN o ADN que conduce a una actividad enzimática deficiente. También se incluye en esta definición cualquier compuesto que interrumpa el procesamiento adecuado del ARNr, ARNt o ARNm a través de su incorporación. Los inhibidores específicos de la metiltransferasa del ADN incluyen los citados en Goffin et al., "DNA methyltransferase inhibitors-state of the art", Ann Oncol (2002) 13 (11): 1699-1716. doi: 10.1093/annonc/mdf314, y más particularmente, por ejemplo: 5-Aza-CdR (5-Aza-2-desoxicitidina, también denominada decitabina), 5-Aza-CR (5-azacytidine) y zebularine®, entre otros inhibidores de metiltransferasa conocidos por un experto en la técnica.

El término "dosis baja" significa una cantidad de inhibidor de metiltransferasa suficiente para reprimir la tumorigenicidad de las células.

Por "vehículo farmacéuticamente aceptable" se entiende una carga sólida, semisólida o líquida no tóxica, diluyente, material de encapsulación o formulación auxiliar de cualquier tipo. El uso de vehículos farmacéuticamente aceptables se conoce bien en la técnica. El tipo de vehículo farmacéuticamente aceptable utilizado dependerá del método de administración del agente y la dosis requerida. Se espera que el método y la dosis se determinen de acuerdo con los procedimientos estándar para la administración de la composición de acuerdo con la presente invención.

Por "inyectable" se entiende una composición o formulación que es adecuada para ponerla en una jeringa e inyectarla en el cuerpo de un mamífero. La composición y el vehículo son compatibles con los tejidos y no deben depender de componentes que puedan provocar una respuesta alérgica. Las composiciones inyectables se pueden inyectar en el cuerpo de mamífero sin causar efectos adversos debido a la presencia de materiales sólidos en la composición. Los materiales sólidos incluyen, pero sin limitación, partículas, cristales, una masa gomosa y un gel. Las composiciones inyectables pueden inyectarse por vía intramuscular, intravenosa, subcutánea, intradérmica, intraperitoneal o parenteral, u otros modos adecuados de inyección en el cuerpo de un mamífero.

Los términos "cáncer", "canceroso" o "neoplasia" o "células neoplásicas" incluyen neoplasias, cánceres o células neoplásicas ubicadas en el sitio original de proliferación ("tumor primario o cáncer") y su invasión de otros tejidos u órganos más allá del sitio primario ("metástasis"). También se refieren o describen la afección fisiológica en los mamíferos en los que una población de células se caracteriza por un crecimiento celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen, pero sin limitación: leucemia, leucemia mieloide aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia monocítica aguda, eritroleucemia aguda, leucemia crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, policitemia vera, linfoma, enfermedad de Hodgkin, linfoma de enfermedad no Hodgkin, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de la cadena pesada, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, adenocarcinoma, carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embriónico, tumor de Wilm, cáncer de cuello uterino, cáncer uterino, cáncer testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, schwannoma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, cáncer pulmonar, carcinoma de células escamosas, adenocarinoma, carcinoma de células grandes, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, adenocarcinoma de ovario, cáncer de próstata, síndromes mielodisplásicos (MDS) y mieloma múltiple.

El término "neoplasia" o "neoplásico" también significa una célula o tejido que presenta un crecimiento anormal, incluyendo hiperproliferación o crecimiento celular descontrolado, que puede ser benigno o canceroso. El desarrollo de una célula normal a una célula que presenta un fenotipo neoplásico es un proceso de varios pasos. Las células que desarrollan un fenotipo neoplásico o designadas como de un tipo de célula cancerosa generalmente presentan una alteración del ciclo celular normal y una respuesta apoptótica alterada. En general, los cambios que una célula experimenta al desarrollarse en una célula tumoral pueden controlarse a nivel celular o de ADN. Por lo tanto, los términos "preneoplasia" o fenotipo "preneoplásico" se interpretan para los fines de la presente invención como refiriéndose a una célula o tejido que presenta cambios a nivel de ADN o celular que evidencian la progresión final de la célula o tejido a un fenotipo neoplásico o canceroso. Las afecciones preneoplásicas no muestran evidencia de microinvasión u otras características del comportamiento del cáncer. Al igual que con el desarrollo de la neoplasia, las células preneoplásicas pueden mostrar progresión a través de múltiples etapas. Aunque una célula preneoplásica puede progresar a una etapa neoplásica, pueden permanecer estables durante un período prolongado de tiempo e incluso pueden retroceder. El desarrollo de la preneoplasia se asocia a menudo con factores ambientales. Los ejemplos de afecciones preneoplásicas en el cáncer de vejiga no invasivo incluyen la atipia celular difusa del urotelio.

El término "trastorno proliferativo" se refiere a trastornos que están asociados con algún grado de proliferación celular anormal.

El término "precanceroso" se refiere a células o tejidos que tienen características relacionadas con cambios que pueden conducir a cáncer o neoplasia. Los ejemplos incluyen crecimientos adenomatosos en el colon, ovario, mama, tejidos o afecciones, por ejemplo, síndrome de nevo displásico, un precursor del melanoma maligno de la piel. Los ejemplos también incluyen, síndrome neoplásico anormal, además de síndromes de nevo displásicos, síndromes de poliposis, displasia prostática y otras neoplasias similares, si las lesiones precancerosas son clínicamente identificables o no. Una "lesión o lesiones precancerosas" puede referirse a una lesión precancerosa epitelial, que es una lesión de la piel que tiene una propensión a convertirse en una afección cancerosa. Las lesiones epiteliales precancerosas de la piel también surgen de otros trastornos proliferativos de la piel, tales como hemangiomas, queloides, eccema e infecciones por el virus del papiloma que producen verruga vulbar, verruga plantar y verruga plana. Los síntomas de las lesiones precancerosas epiteliales incluyen mácula o pápula de color piel o marrón rojizo con escamas adherentes secas. La queratosis actínica es la lesión precancerosa epitelial más común entre los individuos de piel clara. Usualmente, está presente como lesiones en la piel que pueden o no ser detectables visualmente. El tamaño y la forma de las lesiones varían. Es un trastorno fotosensible y puede agravarse por la exposición a la luz solar. La queratosis actínica bowenoide es otra forma de lesión precancerosa epitelial. En algunos casos, las lesiones pueden convertirse en una forma invasiva de carcinoma de células escamosas y pueden representar una amenaza importante de metástasis. Otros tipos de lesiones epiteliales precancerosas incluyen queratosis actínica hipertrófica, queratosis por arsénico, queratosis por hidrocarburos, queratosis térmica, queratosis por radiación, queratosis viral, enfermedad de Bowen, eritroplasia de Queyrat, eritroplasia oral, leucoplasia, y epitelioma intraepidérmico.

"Metástasis" como se usa en el presente documento, se refiere al proceso por el cual un cáncer se disemina o se transfiere desde el sitio de origen a otras regiones del cuerpo con el desarrollo de una lesión cancerosa similar en la nueva ubicación. Una célula "metastásica" o "de metástasis" es aquella que pierde los contactos adhesivos con las células vecinas y migra a través del torrente sanguíneo o la linfa desde el sitio primario de la enfermedad para invadir las estructuras corporales vecinas.

La "infiltración", como se usa en el presente documento, se refiere al proceso por el cual la leucemia se disemina o se transfiere desde el sitio de origen a otras regiones del cuerpo con el desarrollo de una lesión leucémica similar en la nueva ubicación. Los sitios de infiltración pueden incluir la piel, el SNC, etc. Una célula "infiltrante" es aquella que sale de la médula ósea o de la sangre periférica e invade otras partes del cuerpo.

Por "inhibe el crecimiento de una neoplasia" se entiende que disminuye, detiene o invierte de forma medible la velocidad de crecimiento de la neoplasia o células neoplásicas in vitro o in vivo. De manera deseable, una ralentización de la velocidad de crecimiento es de al menos el 20%, 30%, 50% o incluso el 70%, durante un periodo de tratamiento de seis meses, como se determina usando un ensayo adecuado para determinar las velocidades de crecimiento celular (por ejemplo, un ensayo de crecimiento celular descrito en el presente documento). Típicamente, una reversión de la velocidad de crecimiento se logra iniciando o acelerando los mecanismos necróticos o apoptóticos de la muerte celular en las células neoplásicas, lo que da como resultado la contracción de la neoplasia.

Por "una cantidad eficaz", "una cantidad de tratamiento de neoplasia", "una cantidad de tratamiento de preneoplasia", "una cantidad de tratamiento proliferativa" o por "una cantidad de tratamiento de lesión precancerosa" se refiere a la cantidad de un compuesto o una combinación de compuestos necesarios para tratar o prevenir una enfermedad de una manera clínicamente relevante. Una cantidad eficaz puede ser inhibitoria, profiláctica y/o terapéutica. Los compuestos de acuerdo con la presente invención son particularmente útiles para proporcionar un cambio favorable en la enfermedad o afección tratada, ya sea que el cambio sea una remisión, una disminución en el crecimiento o el tamaño del cáncer o un tumor u otro efecto de la afección o enfermedad a tratar, un resultado fisiológico favorable o una reducción en los síntomas asociados con la enfermedad o afección tratada. Una cantidad eficaz o una cantidad de tratamiento de un compuesto varía dependiendo de la enfermedad que se esté tratando, la forma de administración, y la edad, el peso corporal y la salud general del paciente. En última instancia, los prescriptores decidirán la cantidad adecuada y el régimen de dosificación de acuerdo con la buena práctica médica. Las expresiones "cantidad terapéutica eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" se usan a lo largo de la descripción para describir concentraciones o cantidades de compuestos de acuerdo con la presente invención que son terapéuticamente eficaces en el tratamiento de neoplasias (es decir, tumores, cánceres, etc.) preneoplasias, trastornos proliferativos y/o lesiones precancerosas o las diversas afecciones o patologías que incluyen crecimiento de células hiperproliferativas, psoriasis y afecciones relacionadas, así como artritis y enfermedades inflamatorias crónicas, incluyendo artritis reumatoide y osteoartritis, entre otras.

La expresión "cantidad eficaz de prevención" se usa a lo largo de la memoria descriptiva para describir concentraciones o cantidades de compuestos de acuerdo con la presente invención que son profilácticamente eficaces para prevenir, reducir la probabilidad de contraer o retrasar la aparición de una o más de las patologías de acuerdo con la presente invención. En el contexto de la presente invención, una cantidad eficaz preventiva es una cantidad, por ejemplo, que puede reducir la probabilidad de que una lesión precancerosa se convierta en un tumor maligno o que un tumor no maligno se vuelva maligno. Este término se incluye en el término "cantidad eficaz". Ciertos compuestos de acuerdo con la presente invención son particularmente útiles como agentes profilácticos debido a la toxicidad reducida que presentan estos compuestos para células no tumorigénicas y/o no cancerosas. El término "administración" o "de administración" se refiere a un método para dar una composición de la invención a un paciente, por una vía tal como inhalación, administración ocular, instilación nasal, administración parenteral, administración dérmica, administración transdérmica, administración bucal, administración rectal, administración sublingual, administración perilingual, administración nasal, administración tópica y administración oral. La administración parenteral incluye administración intratecal, intraarticular, intratumoral, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, e intramuscular. El método óptimo de administración de un fármaco o combinación de fármacos para tratar una enfermedad particular puede variar dependiendo de diversos factores, por ejemplo, la biodisponibilidad oral del fármaco o los fármacos, la ubicación anatómica del tejido de la enfermedad, y la gravedad de la enfermedad. El término "transferencia western" se refiere al análisis de la proteína o proteínas (o polipéptidos) inmovilizadas sobre un soporte tal como nitrocelulosa o una membrana. Las proteínas se ejecutan en geles de poliacrilamida para separar las proteínas, seguido de la transferencia de la proteína del gel a un soporte sólido, tal como nitrocelulosa, fluoruro de polivinilideno (PVDF) o una membrana similar. Las proteínas inmovilizadas se exponen luego a anticuerpos con reactividad contra un antígeno de interés. La unión de los anticuerpos puede detectarse mediante diversos métodos, incluido el uso de anticuerpos radiomarcados o quimioluminiscencia.

2. La combinación preferida: Azacitidina y ribavirina

La ribavirina se usó ampliamente como una terapia antiviral de amplio espectro. Gracias al apoyo de The Leukemia and Lymphoma Society (EE. UU.), el Solicitante probó la eficacia del tratamiento con ribavirina en pacientes en un ensayo clínico en todo Canadá, y observó una notable mejoría en los pacientes, sin embargo, todos eventualmente desarrollaron resistencia a la ribavirina (Assouline et al., Blood, 2009).

Para superar este problema de resistencia a la ribavirina, y de acuerdo con la presente invención, se proporciona una nueva composición farmacéutica para tratar un neoplasia, un preneoplasia, un trastorno proliferativo y una lesión precancerosa. La composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención está formada por ribavirina, un inhibidor de metiltransferasa y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que el inhibidor de metiltransferasa es azacitidina. Esta novedosa terapia farmacológica combinatoria es útil debido a la cooperación entre el inhibidor de la metiltransferasa (azacitidina) y el inhibidor de eIF4E (ribavirina). Para comprender mejor esta interacción dinámica entre estos dos inhibidores en células cancerosas o precancerosas, a continuación, se proporciona una revisión.

3. Cooperación entre el inhibidor de eIF4E y los inhibidores de metiltransferasa

Se ha observado que una vía clave alterada en muchos cánceres, incluidas las leucemias, es la metilación del ADN y el ARN. Un inhibidor de este proceso de metilación es preferiblemente la azacitidina (también conocida como Vidaza®). Dado que la azacitidina puede inhibir las metiltransferasas del ARN y el ADN, es probable que la azacitidina pueda potenciar la actividad de la ribavirina al inhibir o reducir la formación de caperuzas de metil 7-guanosina en el extremo 5' de los ARNm normales. Además, o como alternativa a esto, se sabe que la azacitidina se incorpora a los ARN celulares y, por esta razón, también podría reducir la traducción de los ARN que eran sensibles o insensibles a eIF4E. A continuación, se describen otros modos de colaboración. Por lo tanto, en una forma de realización preferida, la azacitidina podría potenciar las actividades de ribavirina por las siguientes razones:

I. que la azacitidina es citotóxica; mientras que la ribavirina es citostática;

2. que la ribavirina inhibe la transformación oncogénica dependiente de eIF4E (dejando otras vías solas) mientras que la azacitidina a través de sus actividades de metilación y/o incorporación de ARN y ADN puede modular diferentes rutas distintas que también pueden apoyar la transformación oncogénica en estas células;

3. que la azacitidina puede ayudar a la ribavirina a inhibir mejor sus dianas ya sea bloqueando la formación adecuada de la caperuza 5' en estos ARNm y/o incorporándola a los ARN celulares e inhibiendo adicionalmente su traducción (o exportación);

4. que la azacitidina puede bloquear la traducción o exportación de los ARNm que no son particularmente sensibles a eIF4E, aumentando de este modo la población de diferentes ARN (y, por lo tanto, las vías) a los que se dirigen y, por lo tanto, mejorando la respuesta fisiológica;

5. que la azacitidina promueve la producción de p53; mientras que ribavirina reduce mdm2 (por lo que aumenta p53); por lo tanto, la combinación podría sinergizar en esta vía pro-apoptótica y pro-autofágica; 6. existe evidencia de que un inhibidor clave de eIF4E, PML, se une a la metiltransferasa DNMT1 y modula la actividad de PML en cuerpos nucleares de PML y viceversa; la modulación de la actividad DNMT1 puede aumentar la actividad de eIF4E a través de PML;

7. que la azacitidina modula la transcripción de las proteínas reguladoras de eIF4E, modulando de este modo la función de eIF4E;

8. que la ribavirina modula la traducción del ARNm dependiente de eIF4E y la exportación del ARNm y que la azacitidina inhibe la traducción a través de múltiples mecanismos que inducen la degradación del pre-ARNr 45S (Reichman et al., 1973 BBA), interfiriendo con el metabolismo del ARNt (Lu et al., 1976, BBRC; Lu y Randerrath Cancer Research 1979) y que está mal incorporado en el ARNm, ARNt y ARNr (Hollenbach et al., PLOS One 2010, y referencias en el mismo). De hecho, el 65-85% de la azacitidina celular se encuentra incorporada en el ARN (Hollenbach et al, PLOS One 2010). Por lo tanto, la ribavirina y la azacitidina probablemente efectúan dianas distintas y no superpuestas que permiten que la combinación de la presente invención module de manera más eficiente la expresión génica, lo que conduce a un crecimiento reducido y a una mayor muerte celular de las células cancerosas;

9. que la azacitidina coopera con la ribavirina dirigiéndose al metabolismo del ARNm de los genes involucrados en la regulación de eIF4E directamente, de la regulación de los reguladores;

10. La apoptosis inducida por azacitidina es preferible a las células en fase G1 (Murakami 1995 Cancer Res; y Gorzyca, 1993 Cancer Res). La ribavirina induce una detención de G1/S en muchos tipos de células (Kentsis et al., 2004). Por lo tanto, la ribavirina puede potenciar esta actividad de la azacitidina de esta manera; y

I I . que la ribavirina potencia la apoptosis y la autofagia mediadas por azacitidina, lo que significa que estos fármacos pueden cooperar para promover múltiples tipos de muerte celular simultáneamente en la misma población celular.

El solicitante ha examinado los efectos de la combinación de un inhibidor de eIF4E, preferiblemente ribavirina, con un inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina. La azacitidina es un análogo de nucleótido que se incorpora erróneamente en el ADN durante la replicación y en el ARN durante la transcripción que conduce a la desmetilación. Además, la azacitidina se incorpora erróneamente al ARNt y ARNr, así como al ARNm. Por lo tanto, conduce a cambios bruscos en los ribosomas celulares, ARNt modificados incorrectamente y, por lo tanto, generalmente puede realizar el procesamiento y la traducción del ARN. El Solicitante ha examinado si el inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) y el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) cooperaron en especímenes de AML primaria (adquiridas en el BCLQ). Estos estudios analizaron el crecimiento de colonias en metilcelulosa. El Solicitante ha observado que la azacitidina sola conduce a una reducción moderada en el número de colonias, con aproximadamente el 70% de las colonias observadas para el control no tratado, como se observa en la Figura 1. Cabe señalar que, en este estudio, se usaron preferiblemente 3 pM de azacitidina, que se encuentra dentro del intervalo de 3 a 11 pM de la azacitidina utilizada en pacientes.

También se ha demostrado que la combinación preferida de inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) con el inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) condujo a una reducción sorprendente en el número de colonias con respecto a aproximadamente el 10-30% de las células no tratadas. En relación con la azacitidina sola, las respuestas fueron de dos a diez veces mejores que con la azacitidina sola. Además, se observó una inhibición adicional del 10 al 34% frente a las células tratadas con ribavirina sola. Los mejores respondedores a la terapia de combinación de acuerdo con la presente invención fueron los pacientes con AMT-M4 FLT3 de tipo silvestre, con solo el 7% de las colonias en relación con los controles no tratados. En los especímenes de AML M5 que portaban la mutación Flt3, el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) solo tuvo aproximadamente el mismo efecto que en los especímenes de tipo silvestre de Flt3. Además, los efectos del inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) solo, o del inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) solo fueron independientes del estado de Flt3. Por lo tanto, la combinación del inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) con el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) actúa mejor que cualquier fármaco en solitario para inhibir el crecimiento de colonias. El más sensible fue la AML M4 con Flt3 de tipo salvaje, como se muestra en la Figura 1 de este documento.

El Solicitante también ha examinado los efectos de la ribavirina y la azacitidina (en solitario y en combinación) en un espécimen de AML M1 con eIF4E elevado (véanse las Figuras 1 y 4). Los estudios anteriores del Solicitante indicaron que la AML M1 y M2 rara vez tenía niveles elevados de proteína eIF4E (una frecuencia de aproximadamente el 10%) (Culjkovic-Kraljacic B, Borden KL, "Rivabirin as an anti-cancer therapy: actute myeloid leukemia and beyond?", Leuk Lymphoma, 2010 Oct; Vol. 51(10); págs. 1805-15). En el presente caso, el Solicitante examinó si estas células aún serían sensibles al inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, y la combinación, usando ensayos de colonias de metilcelulosa. El Solicitante encontró que M1 -high4E respondía al inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, muy similar a la AML M4 y M5 (con aproximadamente el 40% de las colonias frente a los controles no tratados, es decir, una reducción del 60%) (Figura 1). En contraste, los especímenes de AML M1 y M2 (con niveles normales de eIF4E) solo responden modestamente al inhibidor de elF4E (por ejemplo, ribavirina) con un 70-80% de las colonias frente a las células no tratadas (solo un 25% más o menos). Se puede observar que el espécimen de M1-high4E con un inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) en solitario fue de aproximadamente el 80% del control no tratado, pero la combinación con un inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) condujo a una reducción drástica al 28% del control no tratado. Cuando el inhibidor de eIF4E, es decir, la ribavrina, se usó en solitario, la reducción fue del 43% y, por lo tanto, las células respondieron a la combinación de acuerdo con la presente invención mejor que con cualquier fármaco en solitario. Por lo tanto, el alto eIF4E, no el linaje, predice la respuesta al inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, y a la combinación de la presente invención, preferiblemente ribavirina con azacitidina.

De las Figuras 6 y 7, se puede observar que el inhibidor de eIF4E, más particularmente ribavirina, inhibe la actividad de eIF4E en muestras tratadas con azacitidina, lo que sugiere que el direccionamiento de las vías de eIF4E es eficaz.

Cabe señalar que la caperuza de los ARNm requiere una etapa de metilación específica de la caperuza 5' por la guanina-7-metil transferasa. Esta enzima es dependiente de S-adenosil-metionina (SAM). El inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) también puede revertir la metilación dependiente de SAM en el caso de otras enzimas. Además, los efectos del inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) en la caperuza también podrían ser indirectos, ya que puede afectar a la expresión de la enzima o cofactores. Por ejemplo, la azacitidina interfiere con la metilación del ARNt, ARNm y ARNr.

El Solicitante también observó una relación interesante entre la combinación preferida de azacitidina y ribavirina durante la experimentación. De hecho, parece que el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina), por sí solo, parece estimular la actividad de eIF4E en al menos algunos tipos de células y quizás de una manera específica de tipo celular. Por ejemplo, la azacitidina elevó XIAP, mdm2 y Mcl-1 en las células KG1-a y THP-1 (todas ellas son dianas de eIF4E; véanse las Figuras 6 y 7). También se observó que el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) puede estimular la producción del propio eIF4E (Figura 6), lo que sería consistente con una elevación de las dianas aguas abajo de eIF4E en solitario. También se cree que reduce algunos inhibidores de elF4E, y además promueve activadores a través de los procesos de metilación. El Solicitante también ha descubierto que eIF4E es una diana de transcripción directa de NFKB. Una de las subunidades clave de NFkappaB es p65, y el Solicitante ha señalado que los niveles de esta subunidad son elevados por el tratamiento con azacitidina (Figura 6).

El Solicitante observó, en los análisis de transferencia Western de líneas celulares de cultivo de tejido de AML (véanse las Figuras 5, 6 y 7), que la ribavirina destruyó las dianas de eIF4E que no estaban dirigidas con azacitidina sola. El solicitante señaló, además, bastante sorprendentemente, que las dianas de eIF4E se elevaron en las células tratadas con inhibidores de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) en solitario (XIAP, mdm2 y Mcl-1), pero en la combinación con un inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) podrían reducir sustancialmente los niveles de estas dianas. Por lo tanto, un fallo en la respuesta fisiológica a un inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) en solitario puede ser que active la vía elF4E (o un subconjunto de la vía eIF4E). Dicha activación puede ser un resultado indirecto de sus efectos sobre el metabolismo del ARN y/o sus efectos sobre la transcripción a través de la metilación del ADN. Sin embargo, está claro que el uso de un inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) en combinación con un inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) puede atenuar este efecto, lo que conduce a mejores respuestas fisiológicas.

Como alternativa, el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, también puede iniciar un mecanismo compensatorio en el que las células intentan evadir la apoptosis elevando el nivel y/o la actividad de eIF4E (véase la Figura 6), y en este caso, el inhibidor de eIF4E, preferiblemente ribavirina, inactiva esto inhibiendo la actividad de eIF4E; permitiendo de este modo un efecto cooperativo entre los dos fármacos.

El Solicitante estudió en profundidad la combinación preferida de ribavirina y azacitidina, ya que la azacitidina promueve la producción de p53, mientras que la ribavirina reduce la mdm2 (Figura 5) y aumenta la p53 (véase la Figura 8). Por lo tanto, la combinación preferida podría sinergizar esta vía de muerte celular pro-apoptótica y/o proautofágica. También hay algunas pruebas de que un inhibidor clave de eIF4E, PML, se une a la metiltransferasa DNMT1 (en cuerpos nucleares de PML). Por lo tanto, un inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) podría estar modulando/promoviendo la actividad de PML mediante la inhibición de DNMT1. Es posible que el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) module la transcripción/traducción/exportación de ARNm/procesamiento de ARN de proteínas reguladoras de eIF4E, modulando de este modo la función de eIF4E. Al principio, el Solicitante pensó que el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) estaría promoviendo la producción de un inhibidor. Sin embargo, dados los datos (véanse las Figuras 6 y 7), podría ser que el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) esté promoviendo realmente la producción de un estimulador de eIF4E, tal como HoxA9. HoxA9 es un estimulador que se muestra en Topisirovic 2005 MCB.

En este sentido, el Solicitante también ha observado que el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, la azacitidina, eleva los niveles de proteína HoxA9 (véase la Figura 7). La ribavirina no revierte esto, pero puede inhibir la actividad de eIF4E actuando directamente sobre la proteína eIF4E, lo que da como resultado una disminución de la actividad de eIF4E, como lo ha demostrado previamente el Solicitante. En la bibliografía científica, existe evidencia de que la azacitidina promueve la desmetilación del gen HoxA9 y, por lo tanto, parece ser un mecanismo probable (Milne 2002 Molecular Cell for Hox genes being targets of methyltransferases; Thea Tlsty Genetic and Epigenetic changes in Early Carcinogenesis, 20th Aspen Conference http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2610844/). Por lo tanto, el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, puede estimular la actividad de eIF4E mediante la eliminación de la represión de la transcripción de un estimulador de la actividad de eIF4E, HoxA9. Además, el inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, puede promover una detención del ciclo celular G1/S y la muerte celular mediada por azacitidina es preferible para G1, por lo tanot, esto también podría explicar cómo el inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, puede potenciar la actividad de azacitidina.

3. Otros agentes que pueden usarse junto con la combinación de inhibidor de eIF4E e inhibidor de metiltransferasa.

No es infrecuente que en los tratamientos contra el cáncer se tomen mezclas de tres o más fármacos. A este respecto, se pueden usar otros agentes junto con la combinación de inhibidor de eIF4E e inhibidor de metiltransferasa. Por ejemplo, la composición de acuerdo con la presente invención puede comprender además al menos otra sustancia farmacéuticamente activa. Otras sustancias farmacéuticamente activas incluyen, pero sin limitación, inhibidores de la topoisomerasa, inhibidores de NF ^k B, antraciclinas y cisplatino. Los inhibidores de topoisomerasa adecuados pueden incluir, pero sin limitación: etopósido, topotecán, camptotecán, hipaptamina, irinotecán, rubitecán, 6-etoxipropionil-3',4'-O-exo-bencilideno-cartreusina, 9-metoxi-N,N-dimetil-5-nitropirazolo[3,4,5-kl]acridina-2-(6H)propanamina, 1-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':b,7]-indolizino[1,2b]quinolina-10,13 (9H, 15H)diona, lurtotecán, 7-[2-(N-isopropilamino)etil]-(20S)camptotecina, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, fosfato de etopósido, tenipósido, sobuzoxano, 2'-dimetilamino-2-desoxi-etopósido, GL331, N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidroxi-5,6-dimetil-6H-pirido[4,3-b]carbazol-1 carboxamida, asulacrina, (5a, 5aB, 8aa,9b)-9-[2-[N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil]-5,5a,6,8,8a,9-hexohidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3-d-)-1,3-dioxol-6-ona, 2,3-(metilenedioxi)-5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo[c]-fenantradinio, 6,9-bis[(2-aminoetil)amino]benzo[g]isoquinolin-5,10-diona, 5-(3-aminopropilamino)-7,10-dihidroxi-2-(2-hidroxietilaminometil)-6H-pirazolo[4,5,1-de]acridin-6-ona, N-[1-[2(dietilamino)etilamino]-7-metoxi-9-oxo-9H-tioxanteno-4-ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridin-4-carboxamida, 6-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-3-hidroxi-7H-indeno[2,1-c]quinolin-7-ona, dimesna, y sus derivados. Los inhibidores adecuados de NF ^k B pueden incluir, pero sin limitación, antioxidantes naturales e inhibidores sintéticos de NF ^k B. Por ejemplo, los antioxidantes naturales se seleccionan del grupo que consiste en: isoflavona genisteína, indol-3-carbinol (13C), 3,3'-diindolilmetano (DIM), curcumina, (-)-epigalocatequina-3-galato (EGCG), Resveratrol, licopeno, vitamina E y vitamina C, en solitario o en combinación. Los inhibidores sintéticos de NF ^k B se seleccionan del grupo que consiste en: dehidroximetilpoxiquinomicina, inhibidores de ciclooxigenasa-2, partenolida, sulfasalazina, inhibidores de proteasoma, (E)-3-(4-Metilfenilsulfonil)-2-propenonitrilo (BAY 11-7082), N-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]-5-cloro-2-hidroxibenzamida (IMD-0354) y SAHA, en solitario o en combinación. Parte de la clase de inhibidores del proteasoma, incluyen, por ejemplo: ^pS-341 y MG-132. Un ejemplo particular de PS-341 es bortezomib (disponible comercialmente como velcade®). Las antraciclinas adecuadas incluyen, pero sin limitación, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina e idarrubicina, en solitario o en combinación.

En una forma de realización preferida, los fármacos que inhiben NF ^k B serían de interés, ya que pueden presentar propiedades pK particulares. Dichos fármacos incluirán, pero sin limitación, partenolida y sus derivados. Estos compuestos (o fármacos) permitirán la inhibición de la producción de eIF4E que causa la azacitidina por la elevación de p65. Otros fármacos incluyen:

- velcade® que inhibe muchas cosas, incluyendo NFkB;

- sorafenib porque muchos de los pacientes albergan mutaciones de Flt3;

- cisplatino que coopera con eIF4E antisentido; e

- inhibidores de la topoisomerasa, incluidos los mencionados anteriormente en el presente documento.

4. Indicaciones para el tratamiento

Las composiciones de la presente invención son para el tratamiento de afecciones que implican una proliferación celular no deseada o no controlada, concretamente, neoplasias (es decir, cáncer), pre-neoplasias, trastornos proliferativos y lesiones precancerosas.

En una forma de realización preferida, la neoplasia es cáncer. Preferiblemente, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en leucemia, leucemia mieloide aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia monocítica aguda, eritroleucemia aguda, leucemia crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, policitemia vera, linfoma, enfermedad de Hodgkin, linfoma de enfermedad no Hodgkin, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de la cadena pesada, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, adenocarcinoma, carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embriónico, tumor de Wilm, cáncer de cuello uterino, cáncer uterino, cáncer testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, schwannoma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, cáncer pulmonar, carcinoma de células escamosas, adenocarinoma, carcinoma de células grandes, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, adenocarcinoma de ovario, cáncer de próstata, síndromes mielodisplásicos, y mieloma múltiple.

En una forma de realización preferida, la leucemia mieloide aguda es la leucemia mieloide aguda M4 o la leucemia mieloide aguda M5 u otro subtipo de AML caracterizado por la elevación atípica de eIF4E.

Otros tipos de cánceres que podrían tratarse potencialmente incluyen, pero sin limitación, leucemia, leucemia mieloide aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia monocítica aguda, eritroleucemia aguda, leucemia crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, policitemia vera, linfoma, enfermedad de Hodgkin, linfoma de enfermedad no Hodgkin, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de la cadena pesada, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, adenocarcinoma, carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embriónico, tumor de Wilm, cáncer de cuello uterino, cáncer uterino, cáncer testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, schwannoma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, cáncer pulmonar, carcinoma de células escamosas, adenocarinoma, carcinoma de células grandes, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, adenocarcinoma de ovario, cáncer de próstata, síndromes mielodisplásicos y mieloma múltiple.

En general, las células en un tumor benigno conservan sus características diferenciadas y no se dividen de una manera completamente incontrolada. Un tumor benigno suele ser localizado y no metastásico. Los tipos específicos de tumores benignos que pueden tratarse utilizando la presente invención incluyen hemangiomas, adenoma hepatocelular, hemangioma cavernoso, hiperplasia nodular focal, neuromas acústicos, neurofibroma, adenoma de conductos biliares, cistanoma de conductos biliares, fibroma, lipomas, leiomiomas, mesoteliomas, teratomas, mixomas, hiperplasia nodular regenerativa, tracomas y granulomas piógenos.

En un tumor maligno, las células se vuelven indiferenciadas, no responden a las señales de control de crecimiento del cuerpo y se multiplican de manera incontrolada. El tumor maligno es invasivo y puede propagarse a sitios distantes (metástasis). Los tumores malignos generalmente se dividen en dos categorías: primarios y secundarios. Los tumores primarios surgen directamente del tejido en el que se encuentran. Un tumor secundario, o metástasis, o incluso células de leucemia infiltrantes, es un tumor que se origina en otras partes del cuerpo, pero ahora se ha diseminado a un órgano distante. Las vías comunes para la metástasis son el crecimiento directo en estructuras adyacentes, la diseminación a través de los sistemas vascular o linfático, y el rastreo a lo largo de los planos tisulares y espacios corporales (líquido peritoneal, líquido cefalorraquídeo, etc.). Las células leucémicas malignas pueden infiltrarse en otros tejidos.

Los tipos específicos de cáncer o tumores malignos, ya sea primarios o secundarios, que pueden tratarse potencialmente utilizando la presente invención incluyen leucemia, cáncer de mama, cáncer de piel, cáncer de hueso, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer pulmonar, cáncer de cerebro, cáncer de la laringe, vesícula biliar, páncreas, recto, paratiroides, tiroides, suprarrenal, tejido neural, cabeza y cuello, colon, estómago, bronquios, riñones, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas de tipo tanto ulcerante como papilar, carcinoma metastásico de la piel, osteosarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma de células veticulares, mieloma, tumor de células gigantes, tumor de pulmón de células pequeñas, cálculos biliares, tumor de células de los islotes, tumor cerebral primario, tumores linfocíticos y granulocíticos agudos y crónicos, tumor de células pilosas, adenoma, hiperplasia, carcinoma medular, feocromocitoma, neuromas de la mucosa, gangloneuromas intestinales, tumor del nervio corneal hiperplásico, tumor marfanoide del habitus, tumor de Wilm, seminoma, tumor ovárico, tumor de leiomioma, displasia cervical y carcinoma in situ, neuroblastoma, retinoblastoma, sarcoma de tejidos blandos, carcinoide maligno, lesión tópica de la piel, micosis fungoide, rabdomiosarcoma, sarcoma de Kaposi, osteogénico y otro sarcoma, hipercalcemia maligna, tumor de células renales, policitemia vera, adenocarcinoma, glioblastoma multiforma, leucemias, linfomas, melanomas malignos, carcinomas epidermoides, y otros carcinomas y sarcomas.

Los trastornos hematológicos incluyen el crecimiento anormal de las células sanguíneas, lo que puede conducir a cambios displásicos en las células sanguíneas y neoplasias hematológicas tales como diversas leucemias. Los ejemplos de trastornos hematológicos incluyen, pero sin limitación, leucemia mieloide aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena crónica, los síndromes mielodisplásicos (MDS), mieloma múltiple y anemia de células falciformes.

La leucemia mieloide aguda (AML) es el tipo más común de leucemia aguda que se presenta en adultos. Varios trastornos genéticos hereditarios y estados de inmunodeficiencia se asocian con un mayor riesgo de AML. Estos incluyen trastornos con defectos en la estabilidad del ADN, que conducen a una rotura cromosómica aleatoria, tal como síndrome de Bloom, anemia de Fanconi, síndromes de Li-Fraumeni, ataxia-telangiectasia y agammaglobulinemia ligada al cromosoma X.

La leucemia promielocítica aguda (APML) representa un subgrupo distinto de AML. Este subtipo se caracteriza por blastos promielocíticos que contienen la translocación cromosómica 15; 17. Esta translocación conduce a la generación de la transcripción de fusión que comprende el receptor de ácido retinoico y una secuencia de PML. La leucemia linfoblástica aguda (ALL) es una enfermedad heterogénea con características clínicas distintas mostrada por diversos subtipos. Se han demostrado anomalías citogenéticas recurrentes en la ALL. La anomalía citogenética más común es la translocación cromosómica 9;22 (conocida como el cromosoma Filadelfia). El cromosoma Filadelfia resultante representa un mal pronóstico del paciente.

La leucemia mielógena crónica (CML) es un trastorno mieloproliferativo clonal de una célula madre pluripotente. La CML se caracteriza por una anomalía cromosómica específica que implica la translocación de los cromosomas 9 y 22, creando el cromosoma Filadelfia. La radiación ionizante está asociada con el desarrollo de la CML. La fase crónica de la CML a menudo se trata con éxito con Gleevec®. Sin embargo, cuando esto se convierte en una CML de crisis blástica, Gleevec® no es eficaz. Estudios previos indican que los niveles de eIF4E están elevados en la CML de crisis blástica, pero no en la fase crónica. Esto significa que los pacientes con CML de crisis blástica podrían ser candidatos para la terapia de combinación de acuerdo con la presente invención.

Los síndromes mielodisplásicos (MDS) son trastornos de células madre hematopoyéticas clonales heterogéneas agrupados debido a la presencia de cambios displásicos en uno o más de los linajes hematopoyéticos, incluidos los cambios displásicos en las series mieloide, eritroide y megacariocítica. Estos cambios dan como resultado citopenias en uno o más de los tres linajes. Los pacientes afectados por MDS típicamente desarrollan complicaciones relacionadas con anemia, neutropenia (infecciones) o trombocitopenia (sangrado). Generalmente, entre aproximadamente el 10% y aproximadamente el 70% de los pacientes con MDS desarrollan leucemia aguda. Los pacientes con MDS podrían ser candidatos para esta terapia.

5. Vías de administración y régimen de dosificación

Se pueden usar varias rutas de administración y formulaciones en las terapias de combinación de la presente invención.

La combinación de agentes terapéuticos de acuerdo con la presente invención se puede administrar en combinación con uno o más excipientes farmacéuticos convencionales. Además, las composiciones pueden incluir agentes activos además de la combinación de agentes terapéuticos de acuerdo con la presente invención. Estos agentes activos adicionales pueden incluir compuestos adicionales de acuerdo con la invención, o uno o más agentes farmacéuticamente activos diferentes. En formas de realización preferibles, las composiciones de acuerdo con la presente invención contendrán la combinación de agentes terapéuticos, en una cantidad eficaz para tratar una indicación de interés.

Las composiciones de acuerdo con la presente invención se pueden administrar o coadministrar por vía oral, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, liposomal, por inhalación, vaginal, intraocular, a través de administración local (por ejemplo, por catéter o endoprótesis), subcutánea, intraadiposal, intraarticular, o intratecal. Más particularmente, otras formas de administración incluyen, por ejemplo: inhalación, administración ocular, instilación nasal, administración parenteral, administración dérmica, administración transdérmica, administración bucal, administración rectal, administración sublingual, administración perilingual, administración nasal, administración tópica, y administración oral. Los compuestos de las composiciones de acuerdo con la presente invención también pueden administrarse o coadministrarse, secuencialmente o no, en formas de dosificación de liberación inmediata, liberación retardada o incluso de liberación lenta. En una forma de realización preferida, el inhibidor de eIF4E y el inhibidor de la metiltransferasa, de acuerdo con la presente invención, se administran secuencial o simultáneamente.

Las composiciones de acuerdo con la presente invención pueden administrarse por una variedad de vías, y pueden administrarse o administrarse conjuntamente en cualquier forma de dosificación convencional. En una forma de realización preferida, la composición, según la presente invención, está en una forma de dosificación unitaria. La coadministración en el contexto de esta invención se define como la administración de más de un agente terapéutico en el transcurso de un tratamiento coordinado para lograr un mejor resultado clínico. Dicha coadministración también puede ser coextensiva, es decir, producirse durante periodos de tiempo superpuestos. Por ejemplo, el inhibidor de la metiltransferasa se puede administrar a un paciente antes, concomitantemente, o después de que se administre el inhibidor de eIF4E. En una forma de realización preferida, el paciente puede tratarse previamente con el inhibidor de la metiltransferasa (es decir, azacitidina) y luego tratarse con el inhibidor de eIF4E (es decir, ribavirina).

Las cantidades de los agentes terapéuticos presentes en las composiciones de la presente invención pueden variar, de acuerdo con las determinaciones realizadas por un experto en la técnica, pero preferiblemente son cantidades eficaces para crear un efecto citotóxico o citostático en el sitio deseado. Preferiblemente, estas cantidades totales son menores que la cantidad total que se suma a la dosis máxima tolerada para cada uno de los inhibidores de la metiltransferasa y el inhibidor de eIF4E, y más preferiblemente menos que la cantidad total añadida para la administración individual de cada uno de estos inhibidores. En una forma de realización preferida, la cantidad de agente o agentes terapéuticos, es decir, un inhibidor de eIF4E y/o un inhibidor de metiltransferasa, se considera que es una cantidad eficaz para tratar la indicación, por ejemplo: una neoplasia (es decir, cáncer o, más particularmente, leucemia mieloide aguda), un preneoplasia, un trastorno proliferativo o una lesión precancerosa. Preferiblemente, para la forma de dosificación, los tiempos de liberación apropiados pueden variar, pero preferiblemente deberían durar de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 6 meses, y mucho más preferiblemente de aproximadamente 1 semana a aproximadamente 4 semanas. Las formulaciones que incluyen las composiciones de acuerdo con la presente invención pueden variar, según lo determine un experto en la técnica, de acuerdo con la situación particular, y como se indica en general en el presente documento.

En una forma de realización preferida, el inhibidor de eIF4E y el inhibidor de metiltransferasa están presentes en una relación que varía de aproximadamente 1:5 a aproximadamente 5:1, y más preferiblemente en una relación que varía de aproximadamente 1:3 a aproximadamente 3:1. En otra forma de realización preferida, el inhibidor de eIF4E se administra en una cantidad de aproximadamente 500 a aproximadamente 4400 mg al día, y más preferiblemente, el inhibidor de eIF4E se administra en una cantidad que varía de aproximadamente 1000 a aproximadamente 2800 mg al día, y el inhibidor de metiltransferasa se administra en una cantidad entre 50 mg/m2 a aproximadamente 150 mg/m2, más preferiblemente, en el inhibidor de metiltransferasa se administra a aproximadamente 100 mg/m2. Esta administración puede durar preferiblemente hasta 7 días cada 4 semanas, de manera repetitiva si es necesario. Preferiblemente, el inhibidor de metiltransferasa se administra en una cantidad suficiente para reprimir la tumorigenicidad de las células. Más preferiblemente, el inhibidor de metiltransferasa se administra en una dosis baja. A este respecto, una dosis baja de inhibidor de metiltransferasa puede variar preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 15 nM.

Además, de acuerdo con la presente invención, después del tratamiento con el inhibidor de la metiltransferasa y el inhibidor de eIF4E, el paciente puede ser tratado adicionalmente con diversos agentes anticancerosos descritos anteriormente. Debido a los efectos sensibilizadores de la terapia de combinación en las células para la apoptosis, la dosificación de agentes anticancerosos utilizados para el tratamiento puede ser menor que la utilizada en un régimen de tratamiento de cáncer convencional. Por lo tanto, se puede lograr un mejor resultado clínico utilizando las composiciones de la presente invención.

Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la invención.

EJEMPLOS Y RESULTADOS

Como se ha mencionado anteriormente, la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención comprende un inhibidor de eIF4E y un inhibidor de metiltransferasa. En una forma de realización preferida, y en un entorno de laboratorio, el Solicitante elaboró una composición que contenía 1 pM de un inhibidor de eIF4E y 3 pM de un inhibidor de metiltransferasa. Más particularmente, el Solicitante usó 1 pM de ribavirina y 3 pM de azacitidina en especímenes primarios, e incluso más particularmente 10 pM de ribavirina y 3 pM de azacitidina en líneas de cultivo tisular.

Por lo tanto, en una forma de realización preferida, la relación de un inhibidor de eIF4E e inhibidor de metiltransferasa puede variar de aproximadamente 1:5 a aproximadamente 5:1, e incluso más particularmente, de 1:3 a aproximadamente 3:1. Para los pacientes, podrían tolerar al menos entre aproximadamente 500 mg/día a aproximadamente 4400 mg/día de ribavirina y al menos entre 50 mg/m2 y 150 mg/m2 de azacitidina. Más particularmente, un paciente podría tolerar entre aproximadamente 1000 y 2800 mg/día de ribavirina y hasta aproximadamente 100 mg/m2 de azacitidina. Incluso en una forma de realización más preferida, el inhibidor de elF4E y el inhibidor de metiltransferasa se administra en las cantidades indicadas anteriormente durante hasta 7 días cada 4 semanas. Dicho de otro modo, se proporciona a un paciente, en una forma de realización preferida, al menos entre aproximadamente 10 pM y aproximadamente 20 pM de ribavirina y aproximadamente 3 a aproximadamente 11 pM de azacitidina en el plasma.

Los efectos de cualquiera de los tratamientos farmacológicos en solitario o en combinación, para especímenes de AML, se divulgan anteriormente en el presente documento, así como en la Figura 1. Los especímenes de AML se adquirieron en el BCLQ. En la Figura 1, se observa que se utilizaron especímenes de diferentes individuos con AML para confirmar adicionalmente los resultados. Aquí "a" se refiere al hecho de que se usaron especímenes de 3 individuos diferentes, y "b", se usaron especímenes de 2 individuos diferentes. Todos los experimentos se repitieron al menos 5 veces con la desviación estándar mostrada. Se utilizaron dos normales diferentes. Aquí, las células se aislaron de sangre periférica (PBMC) o de progenitores tempranos (CD34+) de voluntarios sanos (se adquirieron en Stem Cell technologies).

El solicitante también ha examinado los efectos de la combinación de un inhibidor de eIF4E, preferiblemente ribavirina, con un inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina. La azacitidina es un análogo de nucleótido que se incorpora erróneamente en el ADN durante la replicación y en el ARN durante la transcripción que conduce a la desmetilación. Además, la azacitidina se incorpora erróneamente al ARNt y ARNr, así como al ARNm. Por lo tanto, conduce a cambios bruscos en los ribosomas celulares, ARNt modificados incorrectamente y, por lo tanto, generalmente puede realizar el procesamiento y la traducción del ARN. El Solicitante ha examinado si el inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) y el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) cooperaron en especímenes de AML primaria (adquiridas en el BCLQ). Estos estudios observaron el crecimiento de colonias en metilcelulosa como el resultado fisiológico. El Solicitante observó que el inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina sola, conduce a una reducción moderada en el número de colonias, con aproximadamente el 70% de las colonias observadas para el control no tratado, como se observa en la Figura 1. Cabe señalar que en la Figura 1, y en una forma de realización preferida, se usaron 3 pM de azacitidina, lo que concuerda con las concentraciones plasmáticas de azacitidina encontradas en los pacientes (Marucci G., et al., "Bioavailability of azacitidine subcutaneous versus intravenous in patients with myelodysplastic syndromes" 2005 J Clin Pharmacol, Vol. 45(5): 597-602; Cashen AF., et al. "Pharmacokinetics of decitabine administered as a 3-h infusion to patients with acute myeloid leukemia (AML) or myelodysplastic syndrome (MDS)," 2008, Cancer Chemo Pharm 61(5): 759-66; Blum W.

2008 J Clin Oncol.). En una forma de realización preferida, la ribavirina se usa en el intervalo de 10-20 micromolar dentro del intervalo de uso clínico dado que las concentraciones de ribavirina son típicamente 10-20 micromolar en el plasma de los pacientes (Assouline et al, Blood 2009). Se usa 1 pM dado que está cerca de la constante de afinidad para ribavirina para elF4E (Kentsis 2004).

También se ha demostrado que la combinación preferida de inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) con el inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) condujo a una reducción sorprendente con respecto a aproximadamente el 10 al 30% en comparación con las células no tratadas. En relación con la azacitidina sola, las respuestas fueron de dos a diez veces mejores que con la azacitidina sola. Además, se observó una inhibición adicional del 10 al 34% frente a las células tratadas con ribavirina sola. Los mejores respondedores a la combinación fueron los pacientes con AMT-M4 FLT3 de tipo silvestre, con solo el 7% de las colonias en relación con los controles no tratados. En los especímenes de AML M5 que portaban la mutación Flt3, el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) solo tuvo aproximadamente el mismo efecto que en los especímenes de tipo silvestre de Flt3. Además, los efectos del inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) solo, o del inhibidor de metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) solo fueron independientes del estado de Flt3. Por lo tanto, parece que la combinación del inhibidor de eIF4E (por ejemplo, ribavirina) con el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) actúa mejor que cualquier fármaco en solitario. El más sensible fue la AML M4 con Flt3 de tipo salvaje, como se muestra en la Figura 1.

El Solicitante también examinó los efectos de la composición de acuerdo con la presente invención, por ejemplo, ribavirina y azacitidina (en solitario y en combinación), en un espécimen de AML M1 con eIF4E elevado (M1-high4E). Los estudios anteriores del Solicitante indicaron que las AML M1 y M2 solo rara vez tenían niveles elevados de proteína eIF4E (una frecuencia de aproximadamente el 10%). El Solicitante examinó si estas células aún serían sensibles a ribavirina, y la combinación, usando ensayos de colonias de metilcelulosa. El Solicitante encontró que M1-high4E respondía al inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, muy similar a la AML M4 y M5 (con aproximadamente el 40% de las colonias frente a los controles no tratados, es decir, una reducción del 60%). En contraste, los especímenes de AML M1 y M2 (con niveles normales de eIF4E) solo responden modestamente al inhibidor de elF4E (por ejemplo, ribavirina) con un 70-80% de las colonias frente a controles no tratados (solo un 25% más o menos). Aquí, se puede observar que el espécimen de M1-high4E con el inhibidor de la metiltransferasa (por ejemplo, azacitidina) en solitario era aproximadamente el 80% del nivel de células no tratadas, pero la combinación con ribavirina condujo a una reducción drástica al 28% del nivel de las células no tratadas. La ribavirina sola fue del 43% y, por lo tanto, las células responden mejor a la combinación que con cualquier fármaco solo. Estos estudios muestran que la respuesta a la ribavirina y a la combinación de azacitidina más ribavirina no se restringe a linajes específicos (tal como el linaje monocítico generalmente considerado para la AML M4 y M5), sino a si las células son sensibles al eIF4E como se observa típicamente cuando los niveles de eIF4E son elevados. Estos estudios sugieren que cualquier combinación de leucemia u otro tipo de cáncer con eIF4E elevado se beneficiaría de manera similar.

De las Figuras 6 y 7, se puede observar que el inhibidor de eIF4E, más particularmente ribavirina, inhibe la actividad de eIF4E en muestras tratadas con azacitidina, lo que sugiere que el direccionamiento de las vías de eIF4E en este contexto vale la pena.

Para evaluar los efectos moleculares, el Solicitante ha examinado los efectos de un inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, y un inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, un tratamiento relativo a otras combinaciones tanto por ensayo de colonias en especímenes primarios (véase la Figura 1) como en líneas celulares de AML caracterizadas por niveles elevados de eIF4E (véanse las Figuras 4 a 7). Estas líneas celulares se adquirieron de la ATCC y se conocen como células KG-1a y THP-1. El Solicitante pudo demostrar que no solo tenían niveles elevados de elF4E (véase la Figura 4) sino también acumulaciones nucleares de eIF4E típicas de pacientes con AML M4 y M5. Por lo tanto, estas líneas celulares fueron un buen modelo. Por análisis de transferencia Western, el Solicitante observó que el inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, redujo la expresión de muchas dianas de eIF4E conocidas, tal como mdm2 (por lo que aumentó la proteína p53), XIAP y Mcl-1 (todas proteínas antiapoptóticas) (véanse las Figuras 5 a 7). Además, el Solicitante apreció que el inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, la azacitidina sola condujo a un aumento generalizado de estas dianas de eIF4E particularmente en células ^kG1, en relación con cualquier otro tratamiento que se usó o con células no tratadas (véase la Figura 6). La adición de un inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, a un inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, condujo a una reducción sustancial en los niveles de diana de eIF4E, lo que indicó claramente que el inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, estimula las vías de eIF4E (quizás como mecanismo compensatorio en algunas células), y la adición de un inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, a este régimen será clave para el éxito a largo plazo del tratamiento con inhibidor de la metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, en pacientes con niveles elevados de eIF4E. Esto se correlaciona con los efectos fisiológicos que se observan en los especímenes de pacientes.

La combinación de acuerdo con la presente invención también mejora la respuesta con respecto a la ribavirina sola. Como se ha descrito anteriormente, la azacitidina potencia la actividad de la ribavirina probablemente al inhibir las vías paralelas a las que la ribavirina no se dirige, al potenciar la muerte celular mediada por p53 y otras (véase la Figura 8). Por ejemplo, la ribavirina reduce los niveles de proteína mdm2 (Figura 5), y la azacitidina aumenta los niveles de p53 (Weiland 2009, J Pharmacology and Expt Therapeutics). Por lo tanto, el resultado neto es una vía de muerte celular más potente. Además, la ribavirina induce una detención del ciclo celular G1/S, mientras que la muerte celular mediada por azacitidina es preferible preferencial con respecto a G1. En este caso, la actividad de la muerte celular de la azacitidina es clave para el éxito dado que la ribavirina induce la detención del ciclo celular (es citostática) en lugar de ser citotóxica, como la azacitidina. Finalmente, el Solicitante ha observado un aumento en los marcadores de apoptosis y autofagia tras la combinación de estos fármacos en nuestras células de cultivo tisular. Esto se observa mediante el aumento de la escisión de la caspasa 3 para la apoptosis y el aumento de la escisión de LC3B para la autofagia. Curiosamente, el inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, en solitario elevó los niveles de LC3B frente a las células KG-1a de control y la azacitidina lo potenció adicionalmente (como se ve por el aumento de la escisión de LC3B en las células no tratadas frente a las tratadas con ribavirina/azacitidina). Por lo tanto, un inhibidor de eIF4E, por ejemplo, ribavirina, en solitario o en combinación con un inhibidor de metiltransferasa, por ejemplo, azacitidina, conduce a múltiples tipos de muerte celular (no solo muerte apoptótica) y que juntos esto inhibe de manera más eficiente el crecimiento de colonias en los especímenes de ^aM^lprimaria según se observó por el Solicitante en la Figura 1.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende una ribavirina, un inhibidor de la metiltransferasa y un vehículo farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de una preneoplasia, una lesión precancerosa, neoplasia o un trastorno proliferativo, en la que el inhibidor de metiltransferasa es azacitidina.

2. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la ribavirina y el inhibidor de metiltransferasa están presentes en una relación que varía de 1:5 a 5:1.

3. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la ribavirina y el inhibidor de metiltransferasa están presentes en una relación que varía de 1:3 a 3:1.

4. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de la metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la neoplasia es un cáncer.

5. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 4, en la que dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en: leucemia, leucemia mieloide aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia monocítica aguda, eritroleucemia aguda, leucemia crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, policitemia vera, linfoma, enfermedad de Hodgkin, linfoma de enfermedad no Hodgkin, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de la cadena pesada, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, adenocarcinoma, carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embriónico, tumor de Wilm, cáncer de cuello uterino, cáncer uterino, cáncer testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, schwannoma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, cáncer pulmonar, carcinoma de células escamosas, adenocarinoma, carcinoma de células grandes, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, adenocarcinoma de ovario, cáncer de próstata, síndromes mielodisplásicos, y mieloma múltiple.

6. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de la metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en la que la leucemia mieloide aguda es leucemia mieloide aguda M4 o leucemia mieloide aguda M5 u otro subtipo de AML, caracterizada por una elevación atípica de eIF4E.

7. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la lesión preneoplásica o precancerosa es cualquiera de la familia de trastornos proliferativos que conducen al desarrollo de neoplasias sólidas o hematológicas.

8. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicha composición es adecuada para inhalación, administración ocular, instilación nasal, administración parenteral, administración dérmica, administración transdérmica, administración bucal, administración rectal, administración sublingual, administración perilingual, administración nasal, administración tópica, o administración oral.

9. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de la metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicha composición está en una forma de dosificación unitaria.

10. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que la ribavirina y el inhibidor de metiltransferasa se coadministran secuencial o simultáneamente.

11. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de la metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que dicha composición está presente en una cantidad eficaz para tratar un neoplasia, cáncer, leucemia mieloide aguda, preneoplasia o una lesión precancerosa.

12. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la que la ribavirina se administra en una cantidad entre 500 a 4400 mg al día y el inhibidor de metiltransferasa se administra en una cantidad que varía entre 50 a 150 mg/m2, hasta 7 días cada 4 semanas.

13. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de ^{acuerdo con la reivindicación 12, en la que la ribavirina se administra en una cantidad entre 1000 a}2800 ^{mg al día y}el inhibidor de metiltransferasa se administra en una cantidad que varía hasta 100 mg/m2, hasta 7 días cada 4 semanas.

14. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que el inhibidor de metiltransferasa se administra en una cantidad suficiente para reprimir la tumorigenicidad de las células.

15. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que el inhibidor de metiltransferasa se administra en una dosis baja.

16. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 15, en la que la dosis baja varía de 5 a 15 nM.

17. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de la metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, que comprende además al menos otra sustancia farmacéuticamente activa, en la que dicha al menos otra sustancia farmacéuticamente activa se selecciona del grupo que consiste en: inhibidores de topoisomerasa, inhibidores de NF ^k B, antraciclinas y cisplatino.

18. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 17, en la que los inhibidores de topoisomerasa se seleccionan del grupo que consiste en: etopósido, topotecán, camptotecán, hipaptamina, irinotecán, rubitecán, 6-etoxipropionil-3',4'-O-exo-bencilidenocartreusina, 9-metoxi-N,N-dimetil-5-nitropirazolo[3,4,5-kl]acridina-2-(6H)propanamina, 1-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':b,7]-indolizino[1,2b]quinolina-10,13 (9H, 15H)diona, lurtotecán, 7-[2-(N-isopropilamino)etil]-(20S)camptotecina, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, fosfato de etopósido, tenipósido, sobuzoxano, 2'-dimetilamino-2'-desoxi-etopósido, GL331, N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidroxi-5,6-dimetil-6H-pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida, asulacrina, (5a, saB, 8aa,9b)-9-[2-[N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil]-5,5a,6,8,8a,9-hexohidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3-d-)-1,3-dioxol-6-ona, 2,3-(metilendioxi)-5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo[c]-fenantradinio, 6,9-bis[(2-aminoetil)amino]benzo[g]isoquinolin-5,10-diona, 5-(3-aminopropilamino)-7,10-dihidroxi-2-(2-hidroxietilaminometil)-6H-pirazolo[4,5,1-de]acridin-6-ona, N-[1-[2(dietilamino)etilamino]-7-metoxi-9-oxo-9H-tioxanteno-4-ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridin-4-carboxamida, 6-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-3-hidroxi-7H-indeno[2,1-c]quinolin-7-ona, dimesna, y sus derivados.

19. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 17 o 18, en la que el inhibidor de NF ^k B se selecciona del grupo que consiste en: antioxidantes naturales e inhibidores de NF ^k B sintéticos.

20. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de la metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 19, en la que los antioxidantes naturales se seleccionan del grupo que consiste en: genisteína de isoflavona, indol-3-carbinol (13C), 3,3'-diindolilmetano (DIM), curcumina, (-)-epigalocatequina-3-galato (EGCG), resveratrol, licopeno, vitamina E, vitamina C, y combinaciones de los mismos.

21. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 19 o 20, en la que los inhibidores de NF ^k B sintéticos se seleccionan del grupo que consiste en: dehidroximetilpoxiquinomicina, inhibidores de la ciclooxigenasa-2, partenolida, sulfasalazina, inhibidores del proteasoma, (E)-3-(4-Metilfenilsulfonil)-2-propenonitrilo (BAY 11-7082), N-[3,5-Bis(trifluorometil)fenil]-5-cloro-2-hidroxibenzamida (IMD-0354), SAHA y combinaciones de los mismos.

22. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 21, en la que los inhibidores de proteasoma se seleccionan del grupo que consiste en: PS-341 y MG-132.

23. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de metiltransferasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 22, en la que PS-341 es bortezomib.

24. La composición farmacéutica que comprende ribavirina e inhibidor de la metiltransferasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, en la que las antraciclinas se seleccionan del grupo que consiste en: daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y combinaciones de las mismas.