ES2617262T3 - Composición cosmética y farmacéutica que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina y un compuesto de la familia de la vitamina A - Google Patents

Composición cosmética y farmacéutica que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina y un compuesto de la familia de la vitamina A Download PDF

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Abstract

Uso no terapéutico de una composición cosmética que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo cosméticamente aceptable y un compuesto de la familia de la vitamina A seleccionado entre el grupo consistente en retinol o un éster del mismo, retinal o retinaldehído, ácido retinoico, isotretinoína, adapaleno, tretinoína y la mezcla de los mismos, para el tratamiento de pieles secas o para el tratamiento o la prevención del envejecimiento de la piel o de sus faneras, para la mejora de la elasticidad y/o del tono de la piel, para la reafirmación de la piel y/o para la regeneración/refuerzo de la unión epidermodérmica y/o para aumentar la proliferación de fibroblastos y/o para aumentar la síntesis de macromoléculas estructurales seleccionadas entre hialuronato y/o procolágeno 1.

Description

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DESCRIPCION
Composicion cosmetica y farmaceutica que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina y un compuesto de la familia de la vitamina A
Campo de la invencion
La presente invencion hace referencia a los campos cosmeticos y terapeuticos.
Contexto de la invencion
La D-glucosamina (glucosamina) es un aminoazucar que es un precursor importante de la smtesis bioqmmica de protemas y glicoKpidos. Se usa comunmente en el tratamiento de la artrosis, aunque su aceptacion como terapia vana. Se cree que la glucosamina favorece la formacion y reparacion del cartflago. En 2001, un ensayo clmico de tres anos con doble anonimato que implicaba a 212 pacientes aquejados de artrosis (Reginster et al., 2001, Lancet, 357, 251-6) mostro una mejora de los smtomas de 20 a 25 % en el grupo que tomaba glucosamina, mientras que el grupo de placebo mostro un ligero deterioro. El examen con rayos X mostro una grave disminucion del espacio articular de la rodilla (signo de progresion de la enfermedad) para la mitad de los pacientes que tomaban glucosamina.
La D-N-acetilglucosamina (N-acetilglucosamina) es un derivado de glucosamina que presenta una mejor estabilidad. La glucosamina y la N-acetilglucosamina son metabolitos clave de funciones bioqmmicas o estan presentes en polfmeros estructurales humanos y animales. Entre estos polfmeros, los glicosaminoglicanos son polisacaridos largos no ramificados que consisten en una unica unidad disacandica repetida. La unidad repetida es una hexosa (6 atomos de carbono) o un acido hexuronico ligado a una hexosamina (6 atomos de carbono que comprenden un nitrogeno, como N-acetilglucosamina). Son ejemplos de glicosaminoglicanos el sulfato de condroitina (cartflago elastico, cartflago de hialina, hueso, dermis, cornea), el sulfato de dermatano (dermis, tendon, ligamento, cartflago fibroso), el sulfato de queratano (cartflago, cornea), la heparina/sulfato de heparano (tugado, pulmon, aorta) y el hialuronano (piel).
Los glicosaminoglicanos son un componente importante del tejido conectivo y pueden representar hasta un 30 % de la materia organica. Las cadenas de glicosaminoglicanos pueden estar ligadas de manera covalente con una protema formando proteoglicanos. Por su densidad en subunidades de azucar y sus cargas atractoras de iones negativos, el agua se adhiere a los glicosaminoglicanos, procurando asf a los tejidos una resistencia aumentada a la presion. Los ejemplos de usos de glicosaminoglicanos incluyen heparina como anticoagulante, condroitinas que se encuentran en tejidos conjuntivos, cartflago y tendones y hialuronano que es un componente de la estructura extracelular de la piel y lubricante del lfquido sinovial en las articulaciones.
Por sus funciones mecanicas, estructurales y fisiologicas, los glicosaminoglicanos son polfmeros importantes para la vida y la regulacion de su metabolismo es un elemento importante de la salud humana y animal. Asf, existe la necesidad constante de composiciones que permitan modular la produccion de glicosaminoglicanos.
De manera interesante, la N-acetilglucosamina se ha usado para diferentes aplicaciones en el campo de la salud y la cosmetica por su capacidad de estimular la smtesis de hialuronano. La N-acetilglucosamina se produce bien por hidrolisis acida de la quitina contenida en el caparazon de gambas o cangrejos o bien por fermentacion (al menos para la glucosamina, que puede acetilarse a continuacion). Se ha descrito una formulacion topica de N- acetilglucosamina en la solicitud de patente US008/0020997. El documento EP1384482 describe la combinacion de N-acetilglucosamina y un retinoide o provitamina A para aumentar la produccion de acido hialuronico.
El 6-fosfato de N-acetilglucosamina es una forma fosforilada en C6 de N-acetilglucosamina. Se ha demostrado que el 6-fosfato de N-acetilglucosamina es un intermedio en la smtesis de glicosaminoglicanos tales como hialuronano. En esta ruta espedfica, se isomeriza el 6-fosfato de N-acetilglucosamina a 1-fosfato de N-acetilglucosamina antes de activarse en forma de UDP-N-acetilglucosamina e incorporarse al polfmero (vease la Figura 1). El 6-fosfato de N- acetilglucosamina es por tanto un metabolito intermedio que se produce en las celulas (compuesto endogeno) y que no se sintetiza para excretarse en el espacio pericelular. Parece ademas que el 6-fosfato de N-acetilglucosamina no se produce por celulas de mamffero directamente a partir de N-acetilglucosamina.
Los azucares fosforilados son bien conocidos por ser compuestos de alta energfa usados por las celulas en las intersecciones de varias vfas metabolicas. La mayona de los azucares fosforilados son compuestos transitorios reciclados de manera permanente por las celulas, como 6-fosfato de glucosa o 6-fosfato de fructosa. Al ser un metabolito intermedio en las celulas, los azucares fosforilados son diffcilmente aislables en cantidades suficientes a costes razonables para permitir ensayarlos. Ademas, los azucares fosforilados son inestables y se hidrolizan rapidamente por las fosfatasas celulares y bacterianas a sus porciones azucaradas no fosfatadas correspondientes, excluyendo asf su uso directo.
Aunque un solo documento, GB 896940, menciona en 1962 el uso de 6-fosfato de N-acetilglucosamina entre los derivados de N-acetilglucosamina para favorecer la cicatrizacion de heridas (sin proporcionar ningun dato experimental con este compuesto), ningun documento accesible al publico o a la comunidad cientffica describe, a
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nuestro entender, la evaluacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina por estos efectos potenciales terapeuticos o cosmeticos.
As^ sigue siendo una necesidad constante poner a punto composiciones cosmeticas y farmaceuticas que influyan en la produccion de glicosaminoglicanos y su campo de uso es muy amplio.
Resumen de la invencion
Los inventores han demostrado las propiedades sorprendentes e inesperadas del 6-fosfato de N-acetilglucosamina como compuesto exogeno sobre celulas humanas, especialmente en la produccion de glicosaminoglicanos, demostrando asf su utilidad en composiciones farmaceuticas, veterinarias y cosmeticas, solo o en combinacion con otros compuestos, en particular un compuesto de la familia de la vitamina A, con el fin de promover efectos beneficiosos sobre la salud y la estetica. Han demostrado igualmente un efecto sinergico para la combinacion de 6- fosfato de N-acetilglucosamina con un compuesto de la familia de la vitamina A.
El objeto de la presente invencion se define por las reivindicaciones y cualquier informacion no comprendida en las reivindicaciones se proporciona a modo de informacion.
La presente invencion hace referencia por tanto al uso de una composicion cosmetica que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo cosmeticamente aceptable y un compuesto de la familia de la vitamina A para el tratamiento de pieles secas o para el tratamiento o la prevencion del envejecimiento de la piel o las faneras, en particular para el tratamiento o la prevencion de arrugas, en particular arrugas profundas y/o arrugas pequenas, para la mejora de la elasticidad y/o del tono de la piel, para la reafirmacion de la piel y/o para la regeneracion/reforzamiento de la union epidermodermica y/o para aumentar la proliferacion de celulas cutaneas (en particular, queratinocitos y fibroblastos) y/o para aumentar la smtesis de macromoleculas estructurales (en particular hialuronano y/o colageno).
La presente invencion hace referencia muy particularmente a una composicion cosmetica que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo cosmeticamente aceptable y ademas un compuesto de la familia de la vitamina A seleccionado entre el grupo consistente en retinol o un ester del mismo, retinal o retinaldehndo (cis o trans), acido retinoico, isotretinoma, adapaleno, tretinoma y la mezcla de los mismos. En un modo de realizacion aun mas preferido, el compuesto de la familia de la vitamina A es retinol o un ester de mismo. Esta composicion puede adaptarse a una administracion topica, oral o inyectable (en particular, adaptarse a una inyeccion intraepidermica y/o intradermica y/o transdermica y/o subcutanea y/o microinyeccion).
La presente invencion hace referencia igualmente a una composicion farmaceutica o veterinaria que comprende 6- fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable para el uso en el tratamiento de psoriasis, dermatitis atopica, eccema, trastornos articulares, trastornos ligados al deficit de cartflago y derrames de sinovia, para viscosuplementacion y en tratamientos que acompanan a las intervenciones quirurgicas del ojo. Comprende ademas un compuesto de la familia de la vitamina A seleccionado entre el grupo consistente en retinol o un ester del mismo, retinal o retinaldetndo (cis o trans), acido retinoico, isotretinoma, adapaleno, tretinoma y la mezcla de los mismos. En un modo de realizacion aun mas preferido, el compuesto de la familia de la vitamina A es retinol o un ester del mismo. Esta composicion puede adaptarse a una administracion topica, oral o inyectable (en particular, adaptarse a una inyeccion intrapidermica y/o intradermica y/o transdermica y/o subcutanea y/o intramuscular y/o intravenosa y/o microinyeccion y/o intraarticular).
La presente invencion se refiere igualmente a una composicion farmaceutica o veterinaria que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable y un compuesto de la familia de la vitamina A seleccionado entre el grupo consistente en retinol o un ester del mismo, retinal o retinaldehndo (cis o trans), acido retinoico, isotretinoma, adapaleno, tretinoma y la mezcla de los mismos. En un modo de realizacion aun mas preferido, el compuesto de la familia de la vitamina A es retinol o un ester del mismo. Se refiere a una composicion segun este modo de realizacion para la reparacion y/o regeneracion de tejidos danados.
La presente invencion se refiere al uso de 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A para la preparacion de una composicion farmaceutica o veterinaria o un medicamento para uso en el tratamiento de psoriasis, dermatitis atopica, eccema, trastornos articulares, trastornos ligados al deficit de cartflago y derrames de sinovia, para viscosuplementacion y en tratamientos que acompanan a intervenciones quirurgicas del ojo.
La presente invencion hace referencia finalmente a un dispositivo que comprende una composicion farmaceutica, veterinaria o cosmetica segun la presente descripcion, estando adaptado el dispositivo a una inyeccion (preferiblemente intraepidermica y/o intradermica y/o transdermica y/o subcutanea y/o microinyeccion y/o en el espacio articular) o a una administracion topica.
Breve descripcion de las figuras
Figura 1: Esquema de la ruta de smtesis de hialuronano en celulas de mairnferos.
Figura 2: Analisis de la morfolog^a de la piel despues del tratamiento con 6-fosfato de N-acetilglucosamina.
Figura 3: Analisis de la produccion de glicosaminoglicanos en la piel despues del tratamiento con 6-fosfato de N- acetilglucosamina.
Figura 4: Analisis de la expresion del receptor CD44 en la piel despues del tratamiento con 6-fosfato de N- 5 acetilglucosamina.
Descripcion detallada de la invencion
Los inventores han ensayado e identificado por primer vez los efectos del 6-fosfato de N-acetilglucosamina como compuesto exogeno (es decir, obtenido segun un procedimiento tecnico que no emplea ningun constituyente del cuerpo humano) sobre celulas humanas.
10 Han mostrado que, sorprendentemente, esta entidad qmmica puede usarse en composiciones farmaceuticas, dermatologicas, veterinarias y cosmeticas, sola o en combinacion con otros compuestos, en particular aquellos de la familia de la vitamina A, para promover efectos beneficiosos sobre la salud y la estetica a traves de diferentes mecanismos que incluyen:
- la estimulacion de la smtesis celular de macromoleculas estructurales del cuerpo humano, incluyendo
15 glicosaminoglicanos como hialuronano y colagenos, en particular procolageno 1;
- el aumento de la produccion de CD44, receptor de acido hialuronico;
- la estimulacion de la division celular, en particular la de queratinocitos y fibroblastos y
- el reforzamiento de la union dermoepidermica.
Mas precisamente, los inventores han demostrado la capacidad del 6-fosfato de N-acetilglucosamina de aumentar la 20 produccion de hialuronano por queratinocitos o fibroblastos. Ademas, han demostrado la capacidad del 6-fosfato de N-acetilglucosamina de estimular la division celular de fibroblastos. El 6-fosfato de N-acetilglucosamina permite asf aumentar la smtesis de colageno, en particular de procolageno 1, por los fibroblastos, especialmente cuando se tratan con el sobrenadante de queratinocitos tratados por la combinacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina con compuestos de la familia de la vitamina A. Finalmente, en modelos de piel humana, los inventores han mostrado que 25 el tratamiento por 6-fosfato de N-acetilglucosamina permite estimular la smtesis de glicosaminoglicanos, y esto de manera bien distribuida por toda la dermis, estimular la union dermoepidermica y estimular la expresion del receptor CD44 en dermis y epidermis.
Ademas, los inventores han puesto de manifiesto los efectos sinergicos o potenciadores de la combinacion de 6- fosfato de N-acetilglucosamina con los compuestos de la familia de la vitamina A, en particular retinol.
30 Por el contrario, la N-acetilglucosamina, sola o en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A, muestra efectos desfavorables, o no muestra efectos, o muestra efectos que no son comparables con los del 6- fosfato de N-acetilglucosamina.
El colageno representa igualmente un grupo muy importante de polfmeros estructurales en el cuerpo humano. El colageno es la protema mas abundante del organismo, representando un 25-35 % del contenido total de protemas 35 del organismo. Se produce por las celulas del tejido conjuntivo. El procolageno 1 se encuentra en particular en tendones, piel, pared arterial, endomisio de fibras musculares estriadas, fibrocartflago y la parte organica de huesos y dientes. Es un constituyente importante de la matriz extracelular de la dermis, desempenando un papel en la integridad de la piel. El envejecimiento de la epidermis es debido a una atrofia de la epidermis, consecuencia del ralentizamiento de la proliferacion de queratinocitos. Conlleva ademas una disminucion del colageno y por tanto un 40 adelgazamiento de la dermis, teniendo como factor agravante la exposicion al sol o a UV y el tabaquismo. El colageno y el acido hialuronico son conocidos como agentes para luchar contra las arrugas y arrugas pequenas.
La union dermoepidermica es igualmente crucial para la buena nutricion de la epidermis y la elasticidad de la piel.
Esto es por lo que el 6-fosfato de N-acetilglucosamina, en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A, presenta un interes cierto en una composicion cosmetica para prevenir o disminuir los efectos del 45 envejecimiento de la piel o las faneras, en particular de los cabellos. Dicha composicion es por tanto util para prevenir o disminuir las arrugas, en particular las arrugas profundas y/o arrugas pequenas, para mejorar la elasticidad cutanea y para reafirmar la piel. En un modo de realizacion en que la composicion de la invencion se inyecta (en particular microinyeccion), es util para el relleno de arrugas y arrugas pequenas y para aumentar el volumen de los labios. En este modo de realizacion, puede comprender ademas o usarse en combinacion con 50 productos de relleno, especialmente productos reabsorbibles como acido hialuronico, grasas, colageno o protemas no reabsorbibles como geles de poliacrilamida o siliconas. Puede usarse tambien para la regeneracion o el reforzamiento de la union epidermodermica. Puede usarse para la estimulacion de celulas cutaneas (especialmente melanocitos, queratinocitos y/o fibroblastos), por ejemplo aumentando su proliferacion y/o la migracion celular y/o la
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smtesis de macromoleculas estructurales, especialmente colageno y hialuronano. Esta composicion permite por tanto mantener y/o reforzar la dermis y/o epidermis, mantener y/o reforzar su grosor y mantener y/o reforzar la tonicidad y elasticidad de la piel. Esta composicion se adapta para los cuidados del cuerpo y/o de la cara y/o del cuello y/o de los cabellos.
En un primer modo de realizacion particular, el 6-fosfato de N-acetilglucosamina y el compuesto de la familia de la vitamina A pueden ser los unicos principios o agentes activos de la composicion. En otro modo de realizacion particular, el compuesto comprende otros agentes o principios activos. Se detallan mas adelante ejemplos de estos otros agentes o principios activos. Se entiende por principio o agente activo compuestos que presentan un efecto biologico.
En esta aplicacion, la composicion cosmetica puede formularse para adaptarse a una administracion por via oral, por via topica a la piel, el cuero cabelludo o los cabellos, o por inyeccion intraepidermica y/o intradermica y/o transdermica y/o subcutanea y/o microinyeccion.
La composicion cosmetica segun la presente invencion para administracion topica puede estar en forma de soluciones acuosas, hidroalcoholicas, emulsiones (aceite en agua (Ac/Ag), agua en aceite (Ag/Ac) o multiple (por ejemplo, Ac/Ag/Ac o Ag/Ac/Ag triple)), nanoemulsiones, geles acuosos o dispersiones de fase grasa en una fase acuosa. Puede formularse en forma de una crema mas o menos fluida, un gel, un hidrogel, un producto filmogenico (especialmente basado en acido hialuronico de alto peso molecular que tiene la propiedad de capturar el agua y formar un gel al extenderse), una locion, una mascarilla, una leche, un aceite, un unguento, una cera, una espuma, una pasta, un suero, una pomada, un aerosol, una barra, un jabon o un champu.
La composicion cosmetica adaptada a una administracion topica puede emplearse en combinacion con elementos mecanicos tales como dispositivos de palpado y rodado que tienen una accion mecanica y amasadora que hace penetrar el producto y activan la circulacion del producto o sistemas emisores de ondas (luz, bajas frecuencias, frecuencias infrarrojas, etc.) que permiten activar la respuesta de la piel o aumentar directamente el efecto del producto.
La composicion cosmetica segun la presente invencion para administracion oral puede estar en forma de sello, pfldora, gragea, jarabe o comprimido.
La composicion cosmetica segun la presente invencion para administracion inyectable se formula preferiblemente en forma esteril. Puede presentarse tambien en forma de polvo, anadiendose el disolvente extemporaneamente en el momento del uso.
Los componentes de la composicion cosmetica, asf como sus proporciones, pueden elegirse facilmente por el especialista en la materia basandose en sus conocimientos generales. Por ejemplo, la composicion puede incluir, de manera no exhaustiva, agua desionizada, magnesio, silicato de aluminio, goma de xantano, nailon 12, PCA de sodio, propilenglicol, oxidos de hierro rojos, talco, oxidos de hierro amarillos, oxidos de hierro negros, dioxido de titanio, estearato de glicerol, acido estearico, fosfato de DEA-cetilo, metilparabeno, butilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, isopropilparabeno, isobutilparabeno o neopentanoato de isoestearilo, palmitato de isopropilo, etileno/propileno/estireno, copolfmeros, copolfmero de butileno/propileno/estireno, fenoxietanol, acetato de tocoferilo, glicerina, trietilamina, acido estearico, estearato de propilenglicol, aceites minerales, diazolidinilurea, poliisobuteno hidrogenado, palmitato de octilo, neopentanoato de tridecilo, neopentanoato de octildodecilo, perfumes, metoxicinamato de octilo, benzofenona, salicilato de octilo, isoestearato de isopropilo, acetato de isoceteth-3 y combinaciones de los mismos.
La composicion cosmetica puede estar igualmente comprendida en un dispositivo adaptado al modo de administracion considerado.
Dichos dispositivos pueden adaptarse a una administracion topica. Pueden citarse especialmente parches, apositos oclusivos, minicamaras de oclusion, etc. Se entiende por parche cualquier tipo de parche conocido por el especialista en la materia, y especialmente aquellos que generan una ligera corriente al nivel de la piel cuando se pegan sobre la misma, permitiendo favorecer la penetracion del producto en la misma. Se entiende por minicamaras de oclusion un dispositivo de tipo bolsita que se pega a la piel, lleno de composicion cosmetica, y que permite mantener una cantidad alta de esta composicion en contacto con la piel para aumentar la cantidad de producto que se va a difundir en la misma.
Otros dispositivos se adaptaran a una inyeccion, en particular se adaptaran a una inyeccion intraepidermica y/o intradermica y/o transdermica y/o subcutanea y/o microinyeccion. Dichos dispositivos pueden comprender una aguja, microagujas o un dispositivo de inyeccion sin aguja. Dichos dispositivos son bien conocidos en mesoterapia. La invencion hace referencia a kits que comprenden la composicion segun la presente invencion y una jeringa o un dispositivo inyector.
Una composicion que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina, eventualmente en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A, puede ser igualmente util para la produccion de tejidos humanos in vitro o ex vivo, especialmente de piel sintetica, por ejemplo en el contexto de la ingeniena tisular. Asf, la presente invencion
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hace referencia a un metodo para producir un tejido humano, preferiblemente un tejido cutaneo o conjuntivo, que comprende la puesta en contacto de las celulas del tejido, o conducidas a formar el tejido, con una composicion que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A. Preferiblemente, las celulas comprenden queratinocitos y/o fibroblastos.
Por el impacto del 6-fosfato de N-acetilglucosamina en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A sobre la smtesis de glicosaminoglicanos, en particular hialuronano, puede usarse una composicion farmaceutica o veterinaria que comprenda dicho o dichos principios activos en el tratamiento o la prevencion de trastornos articulares o aquellos ligados al deficit de cartflago, por ejemplo como artritis, artrosis, osteoartritis y osteoartrosis, en la estimulacion de la smtesis de lubricante natural, en la viscosuplementacion y/o en el tratamiento del derrame de sinovia en seres humanos y animales. En la presente solicitud, los animales considerados son preferiblemente mairnferos, por ejemplo caballos o animales de comparna como perros y gatos. La presente invencion hace por tanto referencia al uso de 6-fosfato de N-acetilglucosamina en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A para la preparacion de una composicion farmaceutica o veterinaria destinada al tratamiento o la prevencion de trastornos articulares o aquellos ligados al deficit de cartflago, por ejemplo como artritis, artrosis, osteoartritis y osteoartrosis, para la estimulacion de la smtesis de lubricante natural, para la viscosuplementacion y/o destinada al tratamiento del derrame de sinovia en seres humanos y animales.
Hace referencia tambien a un metodo de tratamiento de trastornos articulares o aquellos ligados al deficit de cartflago, por ejemplo como artritis, artrosis, osteoartritis y osteoartrosis, a un metodo de tratamiento del derrame de sinovia, a un metodo de viscosuplementacion o de estimulacion de la smtesis de lubricante natural en un ser humano o un animal que lo necesite, que comprende la administracion de una dosis eficaz de 6-fosfato de N- acetilglucosamina en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A. En las aplicaciones previstas en este modo de realizacion, puede administrarse 6-fosfato de N-acetilglucosamina en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A o formularse en una forma adaptada a administracion topica, oral o por inyeccion. La inyeccion puede hacerse, por ejemplo, mediante inyeccion en el espacio intraarticular, subcutanea o intramuscular.
Por otro lado, en consideracion de los efectos beneficiosos del 6-fosfato de N-acetilglucosamina sobre la piel, puede usarse una composicion farmaceutica, dermatologica o veterinaria que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A para el tratamiento o la prevencion de psoriasis, eccema, dermatitis atopica o pieles secas.
En consideracion del efecto excepcional de la combinacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina con un compuesto de la familia de la vitamina A, especialmente sobre la produccion de hialuronano por queratinocitos y fibroblastos, sobre la division celular de los fibroblastos y sobre la produccion de colageno por los fibroblastos, la presente solicitud considera muy particularmente una composicion farmaceutica, dermatologica o veterinaria que comprenda esta combinacion. Esta composicion es util en la regeneracion de tejidos danados. Asf, la presente invencion hace referencia al uso de 6-fosfato de N-acetilglucosamina y un compuesto de la familia de la vitamina A para la preparacion de una composicion farmaceutica, dermatologica o veterinaria destinada a la regeneracion de tejidos danados o a un metodo para regenerar los tejidos danados en un sujeto que lo necesita, que comprende la administracion de una cantidad eficaz de 6-fosfato de N-acetilglucosamina y un compuesto de la familia de la vitamina A.
En particular, las composiciones farmaceuticas, dermatologicas o veterinarias de la invencion pueden usarse en un tratamiento que acompana o posterior a intervenciones quirurgicas del ojo (por ejemplo, trasplante de cornea, glaucoma, desprendimiento de retina o catarata), intervenciones quirurgicas o dermatologicas de la piel (por ejemplo, estiramiento, inyecciones de productos, en particular productos de relleno, exfoliacion, blanqueamiento, dermoabrasion y tratamiento del acne) e intervenciones quirurgicas del abdomen.
Para todas las aplicaciones descritas en la presente solicitud, ha de considerarse que las formulaciones siguientes son sustituibles entre sf:
- composicion farmaceutica o veterinaria que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del
mismo farmaceuticamente aceptable en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A, para
uso para...
- uso de 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A, para la preparacion de una composicion farmaceutica o veterinaria para.
- producto que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo farmaceuticamente
aceptable y un compuesto de la familia de la vitamina A como producto de combinacion para uso simultaneo, separado o escalonado en el tiempo para.
- metodo para. en un sujeto que lo necesita que comprende la administracion de una cantidad eficaz de 6- fosfato de N-acetilglucosamina farmaceuticamente aceptable en combinacion con un compuesto de la familia de la vitamina A.
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Para todas estas aplicaciones, un modo de realizacion reside en el uso combinado de 6-fosfato de N- acetilglucosamina y un compuesto de la familia de la vitamina A, en particular retinol, o en una composicion que comprenda dicha combinacion.
La composicion farmaceutica o veterinaria puede formularse para adaptarse a una administracion por v^a oral, por inhalacion, topica (especialmente sobre la piel, cuero cabelludo, ojo o una mucosa, por ejemplo bucal, vaginal o nasal), rectal, o por inyeccion parenteral, intraepidermica, intradermica, transdermica, subcutanea, intramuscular, intravenosa, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepatica, intralesional o intracraneal o por tecnicas de infusion. Preferiblemente, la composicion farmaceutica o veterinaria puede formularse para adaptarse a una administracion por via oral, por inhalacion, topica (especialmente sobre la piel, cuero cabelludo, ojo o una mucosa, por ejemplo bucal, vaginal o nasal), rectal o por inyeccion intraepidermica, intrademica, transdermica, subcutanea, intraarticular o intrasinovial. Por ejemplo, la composicion farmaceutica o veterinaria puede formularse en forma de sellos, comprimidos, capsulas, comprimidos, jarabes, cremas, lociones o geles. La composicion puede comprender excipientes cuya lista no exhaustiva incluye talco, lactosa, estearato de magnesio, monoestearato de glicerol, dioxido de silicio coloidal o precipitado, polivinilpirrolidona reticulada, fosfato de calcio dibasico dihidratado, celulosa microcristalina, almidon, povidona, carboximetilcelulosa de sodio, polisorbato 80, acido lactico, carbomero, alcohol cetilico, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, glucosa, dextrosa, trietilamina, glicerina, fructosa, sacarosa, polfmeros y nanoestructuras. La composicion farmaceutica o veterinaria puede estar comprendida igualmente un dispositivo adaptado al modo de administracion considerado. Las formulaciones descritas para la composicion cosmetica pueden aplicarse a la composicion farmaceutica o veterinaria.
En el caso de formulaciones orales, y en particular de comprimidos, el vehnculo comprende a menudo lactosa y almidon. Se anaden igualmente agentes lubricantes como estearato de magnesio. En el caso de capsulas, los diluyentes incluyen lactosa y almidon. Para las suspensiones acuosas, se combina el ingrediente activo con emulsionantes y agentes de suspension. Es igualmente posible incorporar agentes edulcorantes, colorantes o gustativos.
En el caso de formulaciones rectales, como supositorios, estas formulaciones pueden prepararse mezclando el principio activo con excipientes adaptados que son solidos a temperatura ambiente pero lfquidos a la temperatura rectal. Dichos materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja y polietilenglicoles.
Para administracion topica, la composicion puede formularse especialmente en forma de unguento que contiene el principio activo disuelto o suspendido en los vehuculos apropiados. Dichos vehuculos incluyen de manera no exhaustiva aceites minerales, vaselina lfquida, vaselina blanca, propilenglicol, polioxietileno, polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Como alternativa, puede formularse en forma de crema o de locion que contiene el principio activo disuelto o suspendido en vehuculos apropiados. Dichos vehuculos incluyen de manera no exhaustiva aceites minerales, monoestearato de sorbitan, polisorbato 60, cera de esteres de cetilo, alcohol ceteanlico, 2-octildodecanol, alcohol bendlico y agua.
Para aplicacion oftalmica, la composicion puede formularse en forma de suspension micronizada en una solucion salina esteril isotonica a pH ajustado o, preferiblemente, en forma de solucion en una solucion salina esteril isotonica a pH ajustado, sin o con conservante antimicrobiano tal como cloruro de benzalconio. Como alternativa, la composicion puede formularse asf en forma de unguento que contiene un material como vaselina.
En las formas inyectables, la composicion puede ser una suspension acuosa u oleaginosa. Estas suspensiones pueden formularse segun tecnicas bien conocidas por el especialista en la materia usando agentes humectantes o dispersantes y agentes de suspension. Preferiblemente, estara en forma de solucion o suspension esteril. Los disolventes y vehuculos aceptables incluyen de manera no exhaustiva agua, solucion de Ringer y solucion isotonica de cloruro de sodio. Ademas, se usan a menudo aceites esteriles no volatiles en el medio de suspension o el disolvente. Con este objetivo, puede usarse un aceite no volatil cualquiera mezclado, como monogliceridos y digliceridos. Los acidos grasos como acido oleico y sus derivados gliceridos son igualmente utiles en la preparacion de composiciones inyectables, al igual que aceites naturales farmaceuticamente aceptables como aceite de oliva y aceite de ricino, en particular sus versiones polioxietilenadas. Estas soluciones aceitosas pueden comprender agentes de suspension o de dilucion como carboximetilcelulosa para la formulacion de emulsiones y suspensiones. Pueden incluirse tambien tensioactivos como Tween, agentes emulsionantes y agentes que aumenten la biodisponibilidad.
El 6-fosfato de N-acetilglucosamina es un compuesto que no esta disponible en gran cantidad. Se prepara portanto preferiblemente mediante el procedimiento descrito en la solicitud de patente WO08/142155 (en particular en el ejemplo 1).
Especialmente, se mezcla la N-acetilglucosamina de fuente marina (derivada de la quitina de gambas o cangrejos) con fosfato inorganico seleccionado y la enzima fosforilante adaptada en un reactor que contiene agua y sales durante varias horas. Durante esta reaccion, la enzima injerta un fosfato sobre la N-acetilglucosamina para dar 6- fosfato de N-acetilglucosamina. Este compuesto puede purificarse entonces con la ayuda de varias etapas de precipitacion usando diferentes alcoholes (tales como isopropanol y/o etanol). Se purifica la solucion acuosa final sobre una resina intercambiadora de iones para retirar los iones restantes. El 6-fosfato de N-acetilglucosamina
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puede concentrarse en agua y esterilizarse por microfiltracion (filtro de 0,2 pm). La pureza final puede evaluarse mediante metodos analfticos. Este metodo permite preparar 6-fosfato de N-acetilglucosamina que puede usarse directamente a partir de la solucion acuosa concentrada o que puede secarse para obtener un polvo cristalino que se disuelve rapidamente en una formula acuosa cualquiera.
El 6-fosfato de N-acetilglucosamina puede usarse igualmente en las composiciones y productos de la descripcion en forma de sales, en particular una sal farmaceutica o cosmeticamente aceptable. Asf, dichas sales incluyen especialmente sales de adicion de acidos, sales de adicion de bases, sales metalicas y sales de amonio o alquilamonio, en particular aquellas farmaceutica o cosmeticamente aceptables. Las sales de adicion de acidos incluyen las sales inorganicas y las sales organicas. Los ejemplos representativos de acidos inorganicos adaptados comprenden acidos clorhndrico, bromhndrico, yodico, fosforico, etc. Los ejemplos representativos de acidos organicos adaptados comprenden los acidos acetico, formico, propionico, benzoico, maleico, fumarico, succmico, tartarico, cftrico, tricloroacetico, trifluoroacetico, etc. Se proporcionan otros ejemplos de sales de adicion de acidos organicos o inorganicos en J. Pharm Sci., 1977, 66, 2 y en “Handbook of Pharmaceutical Salts: Properies, Selection and Use” editado por P. Heinrich Stahl y Camille G. Wermuth, 2002. Los ejemplos de sales metalicas incluyen las sales de litio, sodio, potasio o magnesio, etc. Los ejemplos de sales de amonio y alquilamonio incluyen las sales de amonio, metilamonio, dimetilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, etilamonio, hidroxietilamonio, dietilamonio, butilamonio, tetrametilamonio, etc. Los ejemplos de bases organicas incluyen lisina, arginina, guanidina, dietanolaminolina, etc.
Las composiciones de la presente invencion, sean cosmeticas, farmaceuticas, dermatologicas o veterinarias, pueden comprender un vehmulo fisiologicamente aceptable, preferiblemente aceptable en el campo cosmetico, farmaceutico, dermatologico o veterinario, respectivamente.
Se entiende por “compuesto de la familia de la vitamina A” en la presente solicitud un compuesto seleccionado entre el grupo consistente en retinol (tambien llamado vitamina A) o un ester del mismo, retinal o retinaldehfdo (cis o trans), acido retinoico (trans), retinaldehndo, isotretinoma (acido cis-retinoico), adapaleno, tretinoma (acido retinoico, trans) y la mezcla de los mismos. Preferiblemente, el compuesto se selecciona entre el grupo consistente en retinol o un ester del mismo, retinal o retinaldehndo (cis o trans), acido retinoico, retinaldehndo, isotretinoma, tretinoma o la mezcla de los mismos.
En un modo de realizacion particular, el compuesto de la familia de la vitamina A es retinol o un ester del mismo.
La cantidad de 6-fosfato de N-acetilglucosamina usada en las composiciones y productos de la invencion depende del efecto cosmetico o terapeutico y puede por tanto variar. En un modo de realizacion particular, una escala de concentracion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina comprendida entre aproximadamente 0,001 g/l o g/kg y aproximadamente 1000 g/l o g/kg de composicion, y preferiblemente comprendida entre aproximadamente 0,01 g/l o g/kg y aproximadamente 100 g/l o g/kg de composicion, y mas preferiblemente comprendida entre aproximadamente 0,1 g/l o g/kg y aproximadamente 10 g/l o g/kg de composicion parece adaptada, muy particularmente, para una administracion topica.
En un modo de realizacion mas preferido, el compuesto de la familia de la vitamina A se combina con 6-fosfato de N- acetilglucosamina en una cantidad sinergica o potenciadora.
En un modo de realizacion particular, el compuesto de la familia de la vitamina A, en particular retinol o un ester del mismo, esta presente en la composicion a una concentracion comprendida entre aproximadamente 3 pg/l o pg/kg y aproximadamente 3 g/l o g/kg de composicion y preferiblemente entre aproximadamente 100 mg/l o mg/kg y aproximadamente 1,5 g/l o g/kg de composicion.
Una de las desventajas del retinol es que genera efectos secundarios indeseable, y especialmente una irritacion de la piel. La sinergia o efecto potenciador se ha demostrado a concentraciones bajas, en particular concentraciones mas bajas que las usadas generalmente en cosmetica y terapia. Asf, en un modo de realizacion preferido, el compuesto de la familia de la vitamina A se combina con 6-fosfato de N-acetilglucosamina en una cantidad no o menos toxica y no o menos irritante que depende de la aplicacion final de la composicion. Asf, en este modo particular de realizacion, el compuesto de la familia de la vitamina A, en particular retinol o un ester de mismo, esta presente en la composicion a una concentracion comprendida entre aproximadamente 3 pg/l o pg/kg y aproximadamente 50 mg/l o mg/kg de composicion y preferiblemente entre aproximadamente 3 pg/l o pg/kg y aproximadamente 10 mg/l o mg/kg de composicion.
Las composiciones y kits de la presente invencion pueden comprender ademas otros componentes, en particular compuestos que presenten un efecto. Especialmente, pueden comprender por ejemplo captadores de radicales libres, preferiblemente polifenoles estabilizados tales como los descritos en la solicitud de patente US 2009/0233876. Por otro lado, pueden comprender tambien inhibidores de fosfatasas para evitar la degradacion del 6-fosfato de N- acetilglucosamina a N-acetilglucosamina, por ejemplo cistema. Pueden comprender tambien inhibidores de hialuronidasa para impedir o disminuir la degradacion de hialuronano neosintetizado producido bajo la estimulacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina, por ejemplo acido 6-palmitoil-L-ascorbico o 6-hexadecanoato de acido ascorbico. Pueden comprender activadores de hialuronano sintasas de manera que aceleren la smtesis de hialuronano estimulada por 6-fosfato de N-acetilglucosamina y tengan una accion sinergica con el mismo, por
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ejemplo, eicosanoides tales como prostaglandina E2 o acidos retinoicos (trans). Pueden comprender derivados de acido glucuronico como, por ejemplo, acido glucuronico, sus sales, esteres y amidas o acido UDP-glucuronico, para permitir acelerar la smtesis de hialuronano estimulada por 6-fosfato de N-acetilglucosamina y tener una accion sinergica con el mismo.
La invencion se comprendera aun mejor con la lectura de los ejemplos siguientes.
Ejemplos
EJEMPLO 1: Estimulacion de la produccion de acido hialuronico por queratinocitos humanos tratados con 6- fosfato de N-acetilglucosamina
1. Principio de la prueba
Se pusieron en cultivo queratinocitos humanos normales hasta la obtencion de celulas confluentes. Se trataron las celulas durante 48 h con los productos para evaluar. Se recogieron los sobrenadantes, que conteman acido hialuronico, y se efectuo la valoracion extemporaneamente. Se efectuo la cuantificacion del acido hialuronico mediante una prueba de microplaca de tipo ELISA.
Se realizo la valoracion proteica para cada pocillo de la microplaca celular.
2. Productos ensayados
Se ensayo 6-fosfato de N-acetilglucosamina (NAG6P) 20, 10 y 5 mM.
3. Preparacion de las celulas
Se obtuvieron los primocultivos de queratinocitos humanos normales (KHN) a partir de celulas aisladas de extracciones cutaneas (cirugfa plastica).
Se sembraron los KHN a una densidad de 130.000 celulas/pocillo en medio de cultivo espedfico KSFM, (Gibco® Invitrogen) en una placa de 24 pocillos. Se dispuso la placa en una estufa humeda (37 °C, 5 % de CO2) durante 24 h.
4. Tratamiento de las celulas
Se pusieron en presencia de las celulas los diferentes productos a las concentraciones respectivas (diluciones en el medio de cultivo KSFM, 600 jl) durante 48 h. Se dejaron las celulas sin tratamiento: condicion de testigo.
Se evaluo cada condicion de tratamiento de las celulas en 3 pocillos de queratinocitos humanos normales.
5. Valoraciones de acido hialuronico
Despues de 24 h de tratamiento, se realizo una extraccion intermedia de 220 jl de los sobrenadantes para cada pocillo. Se volvio a disponer la placa en la estufa a 37 °C, 5 % de CO2.
Despues de 48 h de tratamiento, se extrajeron los sobrenadantes restantes (“350 jl) y se centrifugaron.
Se efectuo la valoracion de los sobrenadantes celulares segun el metodo descrito en el kit Hyaluronan Enzyme- Linked Immunosorbent Assay kit (HA-ELISA, Echelon Biosciences Inc.). Se trata de una valoracion de tipo ELISA, un revelado por espectrofotometna efectuado a 405 nm (Safire, Tecan).
Para cada pocillo celular, se efectuaron duplicados de las medidas.
6. Expresion de resultados
Se resenaron las medidas de densidad optica DO obtenidas para cada muestra sobre una grafica (curva patron espedfica del kit). Se determino la concentracion de acido hialuronico en ng/ml.
7. Smtesis proteica
Se trataba de valorar las protemas presentes en los sedimentos celulares correspondientes a los sobrenadantes para los que se realizo la valoracion de acido hialuronico.
La valoracion se expresaba en jg de protemas por pocillo celular.
El principio del metodo usado, acido bicinconmico o BCA, era similar al del metodo de Lowry.
7.1. Principio
Las protemas reducen el Cu++ a Cu+ de forma dependiente de la dosis. El acido bicinconmico es un cromogeno
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altamente espedfico de los iones Cu+, formando con estos ultimos un complejo coloreado cuya absorbancia se mide a 550 nm.
7.2. Reactivos
Se efectuo la valoracion a partir de dos soluciones: el acido bicinconmico y el sulfato de cobre. Cuando se mezclan estos dos reactivos, forman una solucion verde reducida a violeta en presencia de Cu+.
Se reagrupan estos reactivos en el kit de valoracion BCA-1 de Sigma. Se proporciona igualmente una solucion patron de protemas (BSA 1 mg/ml en NaCl 0,15 M).
7.3. Valoracion de protemas
Despues de 48 h de tratamiento, se extrajeron los sobrenadantes de los pocillos de la microplaca para la valoracion de acido hialuronico. A continuacion, se despego el cesped celular recuperado en una solucion de PBS mediante sonicacion y despues se disolvio con la ayuda de una solucion de NaOH 0,1 M. Se anadio entonces la mezcla de acido bicinconmico + sulfato de cobre. Se dispuso la placa en estufa humeda (37 °C, 5 % de CO2) en la oscuridad. Despues de 30 minutos, se midio la absorbancia a 550 nm (Genios, Tecan).
En paralelo, se realizo una escala patron a partir de una solucion madre de BSA 1 mg/ml (P-0914): 0 a 100 pg/pocillo.
Las medidas de densidad optica de los pocillos se convirtieron en pg de protemas por pocillo de KHN gracias a la escala.
7.4. Expresion de los resultados
Para cada pocillo celular y cada condicion de tratamiento, se obtuvo una valoracion cuantitativa de la liberacion de acido hialuronico. Esta valoracion se ha relacionado con una cantidad de celulas, expresada en pg de protemas.
El resultado final se ha expresado entonces en ng/ml de acido hialuronico/pg de protemas.
Se han promediado los valores cuantitativos de los pocillos tratados con la misma concentracion de producto. Se ha comparado esta media con la media de las medidas obtenidas para los pocillos testigo (prueba t de Student, comparacion de medias, diferencia significativa al 95 %si p< 0,05* y al 99 % si p<0,01**).
Se ha determinado el porcentaje de estimulacion de los productos comparando los valores medios de las condiciones testigo y de tratamiento:
% de estimulacion= (tratado-testigo)/testigo
Se expresan los resultados en las tablas 1 y 2 (abreviatura: NAG6P: 6-fosfato de N-acetilglucosamina).
24 H 00 - NAG6P
Acido hialuronico (ng/ml) % de estimulacion de la smtesis de acido hialuronico
Testigo
789,5 ± 229
NAG6P10 mM
1067,3 ± 111,9 35 %*
*prueba de Student: p<0,05 - resultado significativo al 95 %
Tabla 1: Valoracion a las 24 h 00 del acido hialuronico producido por los queratinocitos
48 h 00- NAG6P
Acido hialuronico (ng/ml) Protemas (pg/pocillo) (ng/ml/pg de protema) % de estimulacion de la smtesis de acido hialuronico
Testigo
1243,4 ± 232,3 17,9 ± 1,4 70,5 ± 18,4
NAG 6P 20 mM
3076 ± 260,8 11,7 ± 1,9 269,6 ± 55,3 282 %**
NAG 6P 10 mM
2503,2 ± 552,8 15,3 ± 2,9 165,7 ± 32,4 135 %**
NAG 6P 5 mM
1817,9 ± 145,1 15,2 ± 2 122,1 ± 25,6 73 %*
* prueba de Student: p<0,05 - resultado significativo al 95 %
** prueba de Student: p<0,01 - resultado significativo al 99 %
Tabla 2: Valoracion a las 48 h 00 del acido hialuronico producido por los queratinocitos
Conclusiones:
La adicion de N-acetilglucosamina a los queratinocitos humanos normales induce la estimulacion de la produccion de acido hialuronico por celulas cutaneas a partir de las 24 h 00, de forma dependiente de la dosis. Este efecto se 5 confirma y refuerza a las 48 h 00 para alcanzar un aumento de la tasa de produccion de +282 % con relacion a las celulas que no han recibido 6-fosfato de N-acetilglucosamina.
El 6-fosfato de N-acetilglucosamina es por tanto un excelente estimulante de la produccion de acido hialuronico por las celulas de la piel. El NAG6P presenta por tanto interes por estimular la renovacion de la matriz extracelular de la piel a nivel epidermico, con el fin de limitar la formacion de arrugas y arrugas pequenas o de promover su 10 atenuacion, y de favorecer y mantener la hidratacion de la piel (gracias a la alta potencia de captura del agua del acido hialuronico).
EJEMPLO 2: Estimulacion de la produccion de acido hialuronico por los queratinocitos humanos tratados con 6-fosfato de N-acetilglucosamina en sinergia con propionato de vitamina A
Se realizo un experimento segun las condiciones descritas en el ejemplo 1, usando propionato de vitamina A en 15 sinergia con 6-fosfato de N-acetilglucosamina. Se disolvio propionato de vitamina A en DmSo.
Para estas condiciones de prueba de propionato de vitamina A ± NAG 6P, se expreso el porcentaje de estimulacion con respecto al control de DmSO (dilucion 1/10000 correspondiente a la cantidad de DMSO efectivamente presente) en sustitucion del testigo.
Se expresan los resultados en las tablas 3 y 4 (abreviatura: NAG6P: 6-fosfato de N-acetilglucosamina).
24 H sinergia
Acido hialuronico (ng/ml) % de estimulacion de la smtesis de acido hialuronico
Testigo
789,5 ± 229
NAG 6P 10 mM
1067,3 ± 111,9 35 %*
Propionato de vit. A 1 jM
1056 ± 186,5 34 %*
NAG 6P 10 mM + propionato de vit. A 1 jM
1569,6 ± 193 99 %**
20 * prueba de Student: p<0,05 - resultado significativo al 95 %
** prueba de Student: p<0,01 - resultado significativo al 99 %
Tabla 3: Valoracion a las 24 h 00 del acido hialuronico producido por los queratinocitos
48 H sinergia
Acido hialuronico (ng/ml) Protemas (jg/pocillo) (ng/ml/jg de protema) % de estimulacion de la smtesis de acido hialuronico
Testigo
1243,4 ±232,3 17,9 ± 1,4 70,5 ± 18,4 /
NAG6P10 mM
2503,2 ± 552,8 15,3 ± 2,9 165,7 ± 32,4 135 %**
Control de DMSOa
1028,9 ± 122,8 15,6 ± 3,3 66,9 ± 7,7 /
Propionato de vit. A 1 jM
1944,8 ± 393,2 14,3 ± 1 137,1 ± 32,2 105 %*
NAG6P 10 mM + propionato de vit. A 1 jM
3833,3 ± 216,3 13,5 ± 2 287,4 ± 35,7 330 %**
acontrol de DMSO: dilucion 1/10000 correspondiente a la cantidad de DMSO presente en el tratamiento con propionato de vitamina A y la asociacion de NAG 10 mM + propionato de vit. A 1 |jM.
25 *prueba de Student: p<0,05 - resultado significativo al 95 %
**prueba de Student: p<0,01 - resultado significativo al 99 %
Tabla 4: Valoracion a las 48 h 00 del acido hialuronico producido por los queratinocitos
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Conclusiones:
Notablemente, se ha observado que, al asociar 6-fosfato de N-acetilglucosamina con propionato de vitamina A, se obtiene un efecto sinergico sobre la estimulacion de la produccion de acido hialuronico por los queratinocitos desde las 24 h 00. De forma aun mas notable, este efecto es superior a la suma de los efectos de cada compuesto tomado individualmente (+99 % de aumento de la tasa de acido hialuronico a las 24 h 00 con los dos compuestos frente a +34 % y +35 % respectivamente para propionato de vitamina A y 6-fosfato de N-acetilglucosamina solos).
Este efecto sinergico se confirma y refuerza al cabo de 48 h 00, ya que la asociacion de 6-fosfato de N- acetilglucosamina con propionato de vitamina A induce un aumento de +330 % de la produccion de acido hialuronico por los queratinocitos, frente a +105 % y +135% respectivamente para propionato de vitamina A y 6-fosfato de N- acetilglucosamina solos.
La asociacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina con un derivado de vitamina A mejora por tanto la eficacia del 6- fosfato de N-acetilglucosamina sobre la estimulacion de la produccion de acido hialuronico por las celulas de la piel. El NAG6P en sinergia con el propionato de vitamina A presenta por tanto interes para estimular la renovacion de la matriz extracelular de la piel a nivel epidermico, con el fin de limitar la formacion de arrugas y arrugas pequenas o de promover su atenuacion, y de favorecer y mantener la hidratacion de la piel (gracias a la alta potencia de captura del agua del acido hialuronico).
EJEMPLO 3: Estimulacion indirecta (mediada por los queratinocitos) de la produccion de acido hialuronico por fibroblastos humanos normales gracias al 6-fosfato de N-acetilglucosamina solo o en asociacion con propionato de vitamina A, comparacion con N-acetilglucosamina
1. Principio de la prueba
Se pusieron en cultivo fibroblastos dermicos humanos normales hasta la obtencion de celulas confluentes. Se trataron las celulas durante 48 h con sobrenadantes de queratinocitos humanos normales cultivados anteriormente en presencia de los productos para evaluar. Se recogieron los sobrenadantes de fibroblastos, que conteman acido hialuronico, y se efectua extemporaneamente la valoracion.
Se efectuo la cuantificacion del acido hialuronico mediante una prueba en microplaca de tipo ELISA. Se realizo una valoracion proteica para cada pocillo de la microplaca celular.
2. Productos ensayados
* Productos de N-acetilglucosamina (NAG) o 6-fosfato de N-acetilglucosamina (NAG6P) aplicados durante 48 H a 10 y 5 mM sobre queratinocitos humanos normales y despues transferencia del sobrenadante sobre fibroblastos humanos normales.
* Propionato de vitamina A aplicado durante 48 H a 1 pM sobre queratinocitos humanos normales y despues transferencia del sobrenadante sobre fibroblastos humanos normales.
* Asociacion de NAG 10 mM + propionato de vitamina A 1 pM aplicada durante 48 h sobre queratinocitos humanos normales y despues transferencia del sobrenadante sobre fibroblastos humanos normales.
* Asociacion de NAG6P 10 mM + propionato de vitamina A 1 pM aplicada durante 48 H sobre queratinocitos humanos normales y despues transferencia del sobrenadante sobre fibroblastos humanos normales.
3. Preparacion de las celulas
Se obtuvieron los primocultivos de queratinocitos humanos normales (KHN) a partir de celulas aisladas de extracciones cutaneas (cirugfa plastica).
Se sembraron los KHN a una densidad de 130.000 celulas/pocillo en medio de cultivo espedfico KSFM, (Gibco® Invitrogen) en una placa de 24 pocillos. Se dispuso la placa en una estufa humeda (37 °C, 5 % de CO2) durante 24 h.
Se obtuvieron los primocultivos de fibroblastos humanos normales (FHN) a partir de celulas aisladas de extracciones cutaneas (cirugfa plastica).
Se sembraron los FHN a una densidad de 90.000 celulas/pocillo en medio de cultivo E-199 + 0,5 % de SVF, (Gibco® Invitrogen) en una placa de 24 pocillos. Se dispuso la placa en una estufa humeda (37 °C, 5 % de CO2) durante 24 h.
Se efectuo la puesta en placa de los 2 tipos celulares KHN y FHN con 48 h de intervalo.
4. Tratamiento de las celulas
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Se pusieron los diferentes productos, a las concentraciones respectivas, en presencia de KHN (diluciones en el medio de cultivo KSFM, 600 jl) durante 48 h. Se dejaron las celulas si tratamiento: condicion testigo. Se usaron 2 placas celulares para evaluar separadamente NAG y NAG en asociacion con propionato de vitamina A por un lado y despues NAG6P y NAG6P en asociacion con propionato de vitamina A por otro lado.
Se evaluo cada condicion de tratamiento de las celulas en 3 pocillos de KHN.
Despues de 48 h, se extrajo una parte de los sobrenadantes celulares de KHN (300 jl/pocillo). Se procedio entonces a la transferencia pocillo a pocillo de los sobrenadantes celulares de KHN a los sobrenadantes celulares de FHN (300 jl de E-199/pocillo, medio reciente sin SVF).
Se obtuvo asf un volumen final de 600 jl/pocillo de tratamiento (contenido en un medio KSFM/E-199 50/50) que permanece aplicado durante 48 h sobre los FHN.
5. Valoraciones del acido hialuronico
Despues de 48 h de tratamiento, se extrajeron los sobrenadantes celulares de FHN y se centrifugaron. Se efectuo la valoracion del acido hialuronico en los sobrenadantes celulares segun el metodo descrito en el ejemplo 1. Para cada pocillo celular, se efectuaron duplicados de medidas.
6. Expresion de los resultados
Se resenaron las medidas de densidad optica DO obtenidas para cada muestra sobre una grafica (curva patron espedfica del kit). Se determino la concentracion de acido hialuronico en ng/ml.
7. Smtesis proteica
Se trata de valorar las protemas presentes en los sedimentos celulares correspondientes a los sobrenadantes para los que se ha realizado la valoracion de acido hialuronico. Se realizo la valoracion segun el metodo descrito en el ejemplo 1, y se expreso el resultado en jg de protemas por pocillo celular.
Para cada pocillo celular y cada condicion de tratamiento, se obtuvo una valoracion cuantitativa de la liberacion de acido hialuronico. Esta valoracion se ha relacionado con una cantidad de celulas expresada en jg de protemas.
Se expreso entonces el resultado final en ng/ml de acido hialuronico/jg de protemas.
Se promediaron los valores cuantitativos de los pocillos tratados con la misma concentracion de producto. Se comparo esta media con la media de las medidas obtenidas para los pocillos testigo (prueba t de Student, comparacion de medias, diferencia significativa al 95 % si p< 0,05* y al 99 % si p< 0,01**).
Se determino el porcentaje de estimulacion de los productos comparando los valores medios de las condiciones de control y tratamiento:
% de estimulacion= (tratado-testigo)/testigo
Para las condiciones de propionato de vitamina A ± NAG o NAG6P (transferidas), se expreso el porcentaje de estimulacion con respecto al control de DMSO (dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO efectivamente presente) en sustitucion del testigo.
Los resultados presentados en las tablas 5 y 6 siguientes corresponden a la media de 3 pocillos.
48 H NAG
Acido hialuronico (ng/ml) Protemas (jg/pocillo) (ng/ml/jg de protema) % de estimulacion de la smtesis de acido hialuronico
Testigo
3559,3 ± 374 8,4 ± 0,8 429,9 ± 78,4 /
NAG 10 mM
4056,1 ± 315,5 15,7 ± 0,6 258,8 ± 8,1 -40 %**
NAG 5 mM
4277,6 ± 488 12,2 ± 2,7 358,9 ± 81,8 -17 %
Control de DMSOa
3001,7 ± 354,6 8 ± 2,3 387,3 ± 73,4 /
Propionato de vit. A 1 jM
3645,6 ± 667,8 12 ± 3,7 316,6 ± 68 -18 %
NAG 10 mM + propionato de vit. A 1 jM
4439,4 ± 445,9 10 ± 1,2 443,4 ± 15,2 15 %
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acontrol de DMSO: dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO presente en el tratamiento con propionato de vitamina A y la asociacion de nAg 10 mM + propionato de vit. A 1 uM,
*prueba de Student: p< 0,05 - resultado significativo al 95 %
**prueba de Student: p< 0,01 - resultado significativo al 99 %
Tabla 5: Valoracion a las 48 h 00 del acido hialuronico producido por los fibroblastos, efecto de NAG sola o en asociacion con propionato de vitamina A
48 H NAG 6P
Acido hialuronico (ng/ml) Protemas (jg/pocillo) (ng/ml/jg de protema) % de estimulacion de la smtesis de acido hialuronico
Testigo
3351 ± 287,4 8,9 ± 0,9 375,9 ± 13,5 /
NAG 6P 10 mM
3507,6 ± 213,3 9,2 ± 0,3 382,9 ± 20,5 2 %
NAG 6P 5 mM
3524,1 ± 198,6 8,8 ± 0,5 410,7 ± 38,3 7 %
Control de DMSOa
3058 ± 552 8,4 ± 0,7 364,3 ± 54,2 /
Propionato de vit. A 1 |jM
3358,8 ± 615,3 8,8 ± 0,9 389,2 ± 108,3 7 %
NAG 6P 10 mM + propionato de vit. A 1 jM
4075,4 ± 433,4 7,9 ± 0,2 517,6 ± 28,2 42%**
acontrol de DMSO: dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO presente en el tratamiento con propionato de vitamina A y la asociacion de NAG6P 10 mM + propionato de vit. A 1 uM,
*prueba de Student: p< 0,05 - resultado significativo al 95 %
**prueba de Student: p< 0,01 - resultado significativo al 99 %
Tabla 6: Valoracion a las 48 h 00 del acido hialuronico producido por los fibroblastos, efecto de NAG6P solo o en asociacion con propionato de vitamina A
Conclusiones:
Despues de haber incubado durante 48 h 00 los queratinocitos en presencia de NAG sola o propionato de vitamina A solo, tras haber transferido el sobrenadante de estas celulas sobre fibroblastos, se observo una disminucion de la smtesis de acido hialuronico por estos fibroblastos (disminucion significativa a NAG 10 mM). El mismo experimento realizado combinando NAG en asociacion con propionato de vitamina A conduce a una baja estimulacion del 15 % de la produccion de acido hialuronico por los fibroblastos que han recibido el sobrenadante de cultivo de los queratinocitos.
De forma sorprendente, incubando en las mismas condiciones los queratinocitos en presencia de NAG6P sola o de propionato de vitamina A solo, y tras haber transferido el sobrenadante de estas celulas sobre fibroblastos, se observo una pequena estimulacion de la smtesis de acido hialuronico por estos fibroblastos. El mismo experimento realizado combinando NAG6P en asociacion con propionato de vitamina A conduce a una alta estimulacion del 42 % de la produccion de acido hialuronico por los fibroblastos que han recibido el sobrenadante de cultivo de los queratinocitos.
Al contrario que la N-acetilglucosamina, que no ha revelado ningun efecto, el 6-fosfato de N-acetilglucosamina en asociacion con propionato de vitamina A es capaz de estimular la produccion de acido hialuronico por las celulas dermicas a traves de los queratinocitos. La asociacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina en asociacion con propionato de vitamina A estimula por tanto la produccion de acido hialuronico al nivel de las celulas situadas naturalmente al nivel de la dermis.
La NAG6P en sinergia con propionato de vitamina A presenta por tanto interes por estimular la renovacion de la matriz extracelular de la piel al nivel dermico, con el fin de limitar la formacion de arrugas y arrugas pequenas o de promover su atenuacion, y de favorecer y mantener la hidratacion de la piel (gracias a la alta potencia de captura del agua del acido hialuronico) en profundidad.
EJEMPLO 4: Estimulacion indirecta (mediada por queratinocitos) de la produccion de procolageno 1 por fibroblastos humanos normales gracias a 6-fosfato de N-acetilglucosamina solo o en asociacion con propionato de vitamina A, comparacion con N-acetilglucosamina
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1. Principio
Se realizo este experimento segun el mismo metodo que se detalla en el ejemplo 3. Se recogen los sobrenadantes de fibroblastos, que contienen procolageno I, y se efectua la valoracion extemporaneamente. Se efectuo la valoracion del procolageno I mediante una prueba en microplaca de tipo EIA.
2. Valoraciones de procolageno I
Despues de 48 h de tratamiento, se extrajeron los sobrenadantes celulares de FHN y se centrifugaron.
Se efectuo la valoracion del procolageno I en los sobrenadantes celulares segun el metodo descrito en el kit Procollagen Type I C-peptide ElA (MK101, Takara). Se trata de una valoracion de tipo EIA, revelado por espectrofotometna efectuado a 450 nm (Safire, Tecan).
Para 2 pocillos celulares, se efectuaron los duplicados de medidas, mientras que el 3° pocillo se evaluo con una sola valoracion.
3. Expresion de los resultados
Se resenaron las medidas de densidad optica DO obtenidas para cada muestra sobre una grafica (curva patron espedfica del kit). Se determino la concentracion de procolageno I en ng/ml.
Como en el ejemplo 3, se realizo una valoracion de las protemas presentes en los sedimentos celulares correspondientes a los sobrenadantes para los que se ha realizado la valoracion de procolageno I.
Se expreso por tanto el resultado final en ng/ml de procolageno I/jjg de protemas.
Se promediaron los valores cuantitativos de los pocillos tratados con la misma concentracion de producto. Se comparo esta media con la media de las medidas obtenidas para los pocillos testigo (prueba t de Student, comparacion de medias, diferencia significativa al 95 % si p< 0,05* y al 99 % si p< 0,01**).
Se determino el porcentaje de estimulacion de los productos comparando los valores medios de las condiciones testigo y de tratamiento:
% de estimulacion= (tratado-testigo)/testigo
Para las condiciones de propionato de vitamina A ± NAG o NAG 6P (transferidas), se expreso el porcentaje de estimulacion con relacion al control de DMSO (dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO efectivamente presente) en sustitucion del control.
Los resultados presentados en las tablas 7 y 8 a continuacion corresponden a la media de 3 pocillos.
48 H NAG
Procolageno I (ng/ml) Protemas (jg/pocillo) (ng/ml/jg de protema) % de estimulacion
Testigo
767,4 ± 94,3 8,4 ± 0,8 91,4 ± 20,6 /
NAG 10 mM
700,9 ± 32,7 15,7 ± 0,6 44,9 ± 1,3 -51 %**
NAG 5 mM
685,9 ± 38,6 12,2 ± 2,7 57,3 ± 10,5 -37 %*
Control de DMSOa
611,7 ± 78,7 8 ± 2,3 75,7 ± 13,7 /
Propionato de vit. A 1 jM
706,1 ± 73,8 12 ± 3,7 64,3 ± 20,1 15 %
NAG 10 mM + propionato de vit. A 1 jM
715 ± 26,3 10 ± 1,2 72,4 ± 9,6 -4 %
acontrol de DMSO: dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO presente en el tratamiento con propionato de vitamina A y la asociacion de nAg 10 mM + propionato de vit. A 1 jM,
*prueba de Student: p< 0,05 - resultado significativo al 95 %
**prueba de Student: p< 0,01 - resultado significativo al 99 %
Tabla 7: Valoracion a las 48 h 00 del procolageno 1 producido por fibroblastos, efecto de NAG sola o en asociacion con propionato de vitamina A
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48 H NAG 6P
Procolageno I (ng/ml) Protemas (jg/pocillo) (ng/ml/jg de protema) % de estimulacion
Testigo
675,5 ± 81,8 8,9 ± 0,9 73,2 ± 4,4 /
NAG 6P 10 mM
677,7 ± 64,6 9,2 ± 0,3 72,7 ± 4,4 -1 %
NAG 6P 5 mM
653,4 ± 36,6 8,8 ± 0,5 74,6 ± 5,3 2 %
Control de DMSOa
672,4 ± 67,5 8,4 ± 0,7 78,0 ± 2,0 /
Propionato de vit. A 1 jM
704,4 ± 38,6 8,8 ± 0,9 81,9 ± 13,0 5 %
NAG 6P 10 mM + propionato de vit. A 1 jM
744,7 ± 74,9 7,9 ± 0,2 94,7 ± 3,5 21 %**
acontrol de DMSO: dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO presente en el tratamiento con propionato de vitamina A y la asociacion de nAg 10 mM + propionato de vit. A 1 jM,
*prueba de Student: p< 0,05 - resultado significativo al 95 %
**prueba de Student: p< 0,01 - resultado significativo al 99 %
Tabla 8: Valoracion a las 48 h 00 del procolageno 1 producido por los fibroblastos, efecto de NAG6P sola o en asociacion con propionato de vitamina A
Conclusiones:
Despues de haber incubado durante 48 h 00 los queratinocitos en presencia de NAG sola o de propionato de vitamina A solo, tras haber transferido el sobrenadante de estas celulas sobre fibroblastos, se observo una disminucion de la smtesis de procolageno 1 por estos fibroblastos (disminucion significativa a NAG 10 mM). El mismo experimento realizado combinando NAG en asociacion con propionato de vitamina A parece inducir una disminucion de la smtesis de procolageno 1 por estos fibroblastos.
De forma sorprendente, al incubar en las mismas condiciones los queratinocitos en presencia de NAG6P en asociacion con propionato de vitamina A, y tras haber transferido el sobrenadante de estas celulas sobre fibroblastos, se observo una estimulacion de la smtesis de procolageno 1 por estos fibroblastos. Este efecto de estimulacion obtenido combinando NAG6P con propionato de vitamina A es superior a la suma de los efectos de estos compuestos tomados individualmente.
Al contrario que la N-acetilglucosamina, que no revelo ningun efecto, el 6-fosfato de N-acetilglucosamina en asociacion con propionato de vitamina A es capaz de estimular la produccion de procolageno 1 por celulas dermicas por mediacion de queratinocitos. La asociacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina en asociacion con propionato de vitamina A estimula por tanto la produccion de procolageno 1 al nivel de las celulas naturalmente presentes en la dermis.
La NAG6P es por tanto capaz de inducir a traves de los queratinocitos la produccion de procolageno 1 por fibroblastos en sinergia con propionato de vitamina A, y esta asociacion presenta por tanto interes para estimular la renovacion de la matriz extracelular de la piel con el fin de limitar la formacion de arrugas y arrugas pequenas o de promover su atenuacion, y de favorecer y mantener la hidratacion de la piel (gracias a la alta potencia de captura del agua del acido hialuronico) en profundidad.
EJEMPLO 5: Estimulacion indirecta (mediada por queratinocitos) de la proliferacion de fibroblastos humanos normales gracias a N-acetilglucosamina sola o en asociacion con propionato de vitamina A
Se trata de evaluar la proliferacion de fibroblastos humanos normales (primocultivos dermicos) despues de tratamiento durante 48 h por sobrenadantes de queratinocitos humanos transferidos.
La prueba “ELISA de proliferacion celular, BrdU” permite cuantificar la proliferacion celular mediante la medida de la incorporacion de bromodesoxiuridina (BrdU) durante la etapa de smtesis de ADN seguida de deteccion de luminiscencia. Es un metodo sensible y no radiactivo (alternativo a la incorporacion de [H3]-timidina).
1. Principio
Se pusieron las celulas en presencia del tratamiento durante un tiempo definido (estufa a 37 °C, 5 % de CO2). A
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continuacion, se anadio el analogo de pirimidina 5-bromo-2'-desoxiuridina (BrdU) a las celulas y se volvieron a poner las mismas en incubacion (estufa a 37 °C, 5 % de CO2) durante un tiempo mmimo de 2 h. Durante este periodo, se incorpora la BrdU al ADN de las celulas proliferativas en lugar de timidina.
Se retiro el medio de cultivo, se fijaron entonces las celulas y se desnaturalizo el ADN al mismo tiempo (accesibilidad del anticuerpo). Se anadio un anticuerpo anti BrdU-POD (peroxidasa). Este se fija a BrdU incorporada al ADN recien sintetizado. Se detecto entonces el complejo inmunitario por adicion del sustrato luminol y despues lectura de la luminiscencia (Genios, Tecan).
2. Productos para ensayar
6-Fosfato de N-acetilglucosamina (NAG6P) aplicado durante 48 h a 10 y 5 mM sobre queratinocitos humanos normales y despues transferencia del sobrenadante sobre fibroblastos humanos normales.
Propionato de vitamina A aplicado durante 48 h a 1 pM sobre queratinocitos humanos normales y despues transferencia del sobrenadante sobre fibroblastos humanos normales.
Asociacion de NAG6P 10 mM + propionato de vitamina A 1 pM aplicada durante 48 h sobre queratinocitos humanos normales y despues transferencia del sobrenadante sobre fibroblastos humanos normales.
3. Preparacion de celulas
Se obtuvieron los primocultivos de queratinocitos humanos normales (KHN) a partir de celulas aisladas de extracciones cutaneas (cirugfa plastica).
Se sembraron los KHN a una densidad de 130.000 celulas/pocillo en medio de cultivo espedfico KSFM, (Gibco® Invitrogen) en una placa de 24 pocillos. Se dispuso la placa en una estufa humeda (37 °C, 5 % de CO2) durante 24 h.
Se obtuvieron los primocultivos de fibroblastos humanos normales (FHN) a partir de celulas aisladas de extracciones cutaneas (cirugfa plastica).
Se sembraron los FHN a una densidad de 5.000 celulas/pocillo en medio de cultivo E-199 (Gibco® Invitrogen) en una placa de 96 pocillos blanca de luminiscencia espedfica (BD Falcon 353947). Se dispuso la placa en una estufa humeda (37 °C, 5 % de CO2) durante 24 h.
Se efectuo la puesta en placa de los 2 tipos celulares KHN y FHN a 48 h de intervalo.
4. Tratamiento de las celulas
Se pusieron los diferentes productos, a las concentraciones respectivas, en presencia de KHN (diluciones en el medio de cultivo KSFM, 600 pl) durante 48 h. Se dejaron las celulas sin tratamiento: condicion testigo. Se evaluo cada condicion de tratamiento de las celulas en 3 pocillos de KHN.
Despues de 48 h, se extrajo una parte de los sobrenadantes celulares de KHN. Se transfirio cada sobrenadante extrafdo (2 veces 100 pl) procedente de un pocillo de la placa de KHN (24 pocillos) a 2 pocillos de la placa de FHN que conteman ya 100 pl de E-199/pocillo.
Se obtuvo asf un volumen final de 200 pl/pocillo de tratamiento (contenido en un medio KSFM/E-199 50/50) que queda aplicado durante 48 h a los FHN.
5. Medida de la proliferacion
Se efectuo la cuantificacion de la proliferacion celular segun el metodo descrito en el kit “ELISA de proliferacion celular, BrdU” (Roche Applied Science n°11669915001). Se trata de una valoracion de tipo inmunologico, revelado por luminiscencia (Genios, Tecan).
6. Expresion de los resultados
Se promediaron las medidas de luminiscencia (ULR/s) de los 6 pocillos tratados con la misma condicion. Se comparo esta media con la medida de las medidas obtenidas para los 6 pocillos testigo (prueba t de Student, comparacion de medias, diferencia significativa al 95 % si p< 0,05* y al 99 % si p< 0,01**).
Se expreso la proliferacion de celulas tratadas en porcentaje con relacion al control (celulas no tratadas) de 100 % (DO de tratado/DO de testigo x 100).
Para las condiciones de propionato de vitamina A ± NAG 6P (transferidas), se expreso el porcentaje de proliferacion con relacion al control de dMsO (dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO efectivamente presente) en sustitucion del control.
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Los resultados presentados en la tabla 9 siguiente corresponden a la media de 6 pocillos que han recibido la transferencia de 6 sobrenadantes de KHN.
ULR % de proliferacion
Testigo
4121± 205 /
NAG 6P 10 mM
4903 ± 377 119 %**
NAG 6P 5 mM
4985±184 121 %**
Control de DMSO*
4240±187 100 %
Propionato de vitamina A, 1 pM
4640 ± 267 109 %**
NAG 6P 10 mM + propionato de vit. A 1 uM
5693 ± 391 134 %**
aControl de DMSO: dilucion 1/10.000 correspondiente a la cantidad de DMSO presente en el tratamiento con propionato de vitamina A y la asociacion NAG 10 mM + propionato de vit. A 1 pM.
*prueba de Student: p< 0,05 - resultado significativo al 95 %
**prueba de Student: p< 0,01- resultado significativo al 99 %
Tabla 9: Valoracion a las 48 h 00 de la proliferacion celular de los fibroblastos, efecto de NAG6P sola o en asociacion con propionato de vitamina A
Conclusiones:
Despues de haber incubado durante 48 h 00 los queratinocitos en presencia de NAG6P sola, tras haber transferido el sobrenadante de estas celulas sobre fibroblastos, se observo de forma sorprendente un aumento significativo de la proliferacion de fibroblastos. De forma aun mas sorprendente, este aumento no esta ligado a la dosis de NAG6P usada en la preincubacion de los queratinocitos, indicando que probablemente no es NAG6P el que podna actuar directamente sobre la proliferacion de fibroblastos. El NAG6P induce por tanto muy ciertamente una respuesta de queratinocitos que, bajo el efecto de este compuesto, producen una o varias moleculas (probablemente acido hialuronico de diferente tamano) en su sobrenadante, que va o van a activar la proliferacion de fibroblastos.
De forma notable, la combinacion de NAG6P con propionato de vitamina A muestra una estimulacion mayor de la proliferacion de fibroblastos que cada uno de estos productos ensayados separadamente.
La NAG6P es por tanto capaz de inducir a traves de los queratinocitos la division de fibroblastos, sola o en sinergia con propionato de vitamina A, y presenta por tanto interes para estimular la renovacion celular de la piel.
EJEMPLO 6: Prueba de los efectos del 6-fosfato de N-acetilglucosamina sobre la piel humana
En este estudio, se evaluo el efecto de la N-acetilglucosamina sobre la piel humana mantenida en condiciones de supervivencia. Se comparo este efecto con el de una crema comercial “RetinOX + Jour” que contema retinol (0,02 a
0. 05.%). Se evaluaron los efectos siguientes mas particularmente a lo largo de este estudio:
• la morfologfa general de la piel despues de coloracion con tricromico de Masson,
• el contenido de glicosaminoglicanos (GAG) acidos despues de coloracion con azul alcian,
• la tasa de expresion del receptor CD44 de acido hialuronico despues de inmunomarcaje de este receptor.
1. Producto probado
Producto probado: 6-fosfato de N-acetilglucosamina (NAG6P) al 1 % (P1); 0,1 % (P2) y 0,01 % (P3) plv.
2. Modelo biologico
A partir de una plastia abdominal de mujer de tipo caucasico de 36 anos (P712AB36), se prepararon 33 explantes (de un diametro de aproximadamente 10 mm) y se pusieron en condiciones de supervivencia en medio espedfico de supervivencia de explantes cutaneos. Se repartieron los explantes en 11 lotes de 3 explantes:
Lote
N° de explantes Tratamiento Extraccion Evaluaciones
T J0
3 Ninguno J0 Morfologfa GAG CD44
T J6
3 Ninguno J6 GAG CD44
R J6
3 Crema RetinOx + jour J6 GAG CD44
P1 J6
3 Principio activo NAG6P al 1 % J6 GAG CD44
P2 J6
3 Principio activo NAG6P al 0,1 % J6 GAG CD44
P3 J6
3 Principio activo NAG6P al 0,01 % J6 GAG CD44
T J10
3 Ninguno J10 Morfologfa GAG CD44
R J10
3 Crema RetinOx + jour J10 Morfologfa GAG CD44
P1 J10
3 Principio activo NAG6P al 1 % J10 Morfologfa GAG CD44
P2 J10
3 Principio activo NAG6P al 0,1 % J10 Morfologfa GAG CD44
P3 J10
3 Principio activo NAG6P al 0,01 % J10 Morfologfa GAG CD44
3. Tratamiento
Los dfas J0, J2, J3, J6 y J8, se aplico la crema RetinOx+ jour sobre los explantes a razon de 1 mg/cm2.
5 A J0, J2, J3, J6 y J8, se depositaron 30 jl de los productos P1, P2 y P3 sobre discos de papel de filtro aplicados sobre los explantes
Los testigos no recibieron ningun tratamiento.
4. Extracciones
5
10
15
20
25
30
35
40
A J0, se extrajeron los 3 explantes del lote T0 y se cortaron en dos. Se fijo una mitad con Uquido de Bouin ordinario y se congelo la otra mitad a -80 °C.
A J6 y a J10, se extrajeron 3 explantes de cada lote y se trataron de la misma manera.
5. Histologia
Despues de 48 horas de fijacion en Kquido de Bouin ordinario, se deshidrataron las extracciones y se impregnaron con parafina con la ayuda de un automata de deshidratacion Leica 1020. Se pusieron en bloque segun el modo operativo MO-H-153 con la ayuda de un centro de inclusion de tejidos Leica EG 1160. Se realizaron cortes de 5 pm segun el modo operativo MO-H-173 con la ayuda de un microtomo de tipo Minot, Leica RM 2125 y se pegaron sobre portaobjetos de vidrio histologicos Superfrost®,
5.1 Examen de la morfologia general
Se efectuo la observacion de la morfologfa general sobre cortes de parafina despues de coloracion con tricromico de Masson, variante de Goldner segun el modo operativo MO-H-157.
5.2 Visualizacion de GAG acidos
Se visualizan los GAG acidos despues de coloracion con azul alcian. Se observan en toda la dermis papilar.
En esta zona, los GAG buscados aparecen en azul y son GAG acidos.
Un analisis de imagenes permite cuantificar la intensidad de la coloracion.
5.3 Inmunomarcaje de CD44
Se marco CD44 sobre cortes congelados con un anticuerpo monoclonal anti-CD44, (Invitrogen MHC D4400), realizado en raton a 1/100, durante una hora a temperatura ambiente con un sistema amplificador de biotina/estreptavidina revelado con FITC con los nucleos contracoloreados con yoduro de propidio.
Resultados
Morfologia general
El dia J0:
El estrato corneo de los explantes era moderadamente grueso, muy moderadamente laminado y claramente queratinizado en superficie y en su base. La epidermis presentaba de 5 a 6 capas celulares con una buena morfologia. El relieve de la union dermoepidermica era moderado. La dermis papilar presentaba colageno con fibras bastante gruesas que formaban una red bastante densa. Estaba bien celularizada.
El dia J10 (vease la figura 2):
La estructura epidermica y dermica de los explantes estaba ligeramente alterada, con una clara queratinizacion en la base del estrato corneo y una ligera paraqueratosis. La espongiosis era baja al nivel de las capas basales.
La aplicacion de la referencia RetinOx+ jour inducfa una reaccion muy clara de tipo retinoico sobre los explantes con una acantosis epidermica muy clara (5 a 6 capas celulares/19 a 20). La dermis papilar era densa.
La aplicacion del producto NAG6P sobre los explantes conllevaba claras modificaciones de la morfologia epidermica. La dermis papilar era bastante densa. En particular, la aplicacion del producto NAG6P al 0,01 % (P3) conllevaba evoluciones de la morfologia general y una reorganizacion/refuerzo netos de la union epidermodermica de los explantes. La dermis papilar era mas o menos densa.
Visualizacion/cuantificacion de GAG acidos
Analisis visual El dia J0:
Los GAG acidos son moderados en el conjunto de la dermis papilar. Son claros en los fibroblastos.
El dia J6 (vease la figura 3):
En los explantes no tratados, se han expresado ligeramente mas que los observados a T0.
Con la crema RetinOx+ jour, eran moderados y bastante densos a lo largo de la union epidermodermica (JDE), asf como en el resto de la dermis papilar.
5
10
15
20
25
30
Con el producto NAG6P, eran moderados a lo largo de la JDE y estaban presentes en toda la dermis papilar, y esto de forma dependiente de la dosis: los GAG acidos eran mas densos con NAG6P al 1 % que al 0,01 %.
El dia J10:
En los explantes no tratados, los GAG eran parecidos a los observados en J6.
Con la referencia RetinOx+ jour, eran claros y bastante densos a lo largo de la JDE, asf como en el resto de la dermis papilar.
Con el producto NAG6P, se confirma el efecto observado en J6: los GAG acidos eran moderados a lo largo de la JDE y estaban presentes en toda la dermis papilar, y esto de forma dependiente de la dosis: los GAG acidos eran mas densos a NAG6P al 1 % que al 0,01 %.
Analisis cuantitativo
Se realizo la cuantificacion de los GAG acidos por analisis de imagenes. Se expresan los resultados de esta cuantificacion en la tabla 10 siguiente, en porcentaje de la superficie analizada.
% de superficie analizada
J0 J10
Media
Desviacion estandar Media Desviacion estandar
Explantes testigo
37,9 11,6 11,4 5,7
Explantes tratados con crema RetinOX+jour
/ / 23,8 8,7
Explantes tratados con NAG6P al 1 %
/ / 21,0 3,4
Explantes tratados con NAG6P al 0,1 %
/ / 16,3 6,3
Explantes tratados con NAG6P al 0,01 %
/ / 14,0 4,0
Tabla 10: Porcentaje de superficie ocupada por GAG acidos en la dermis papilar Expresion del receptor CD44 de acido hialuronico
El dia J0:
La expresion de CD44 era clara y muy regular en los explantes.
En la epidermis, el CD44 era mas o menos puntiforme, bien membranoso y pericelular en todas las capas vivas hasta la granulosa. En la dermis papilar, era muy claro en los fibroblastos y en fibras finas.
El dia J6:
En el lote no tratado, la expresion de CD44 disminrna tanto en la epidermis como en la dermis papilar.
En el lote tratado con la crema RetiOx + Jour, el CD44 se sobreexpresaba moderadamente.
El CD44 estaba ligeramente sobreexpresado en el lote tratado con el producto NAG6P al 1 % y al 0,1 %. Esta sobreexpresion era muy moderada con el producto NAG6P al 0,01 %.
El dia J10 (vease la figura 4):
En el lote no tratado, la expresion de CD44 estaba ligeramente sobreexpresada, sobre todo en la epidermis sobre las capas basales mas que en la dermis papilar.
En el lote tratado con la crema RetiOx + Jour, el CD44 estaba moderadamente sobreexpresado.
Esta sobreexpresion era muy clara con el producto NAG6P al 0,01 % tanto en la epidermis como en la dermis papilar.
Conclusiones
A lo largo de este estudio, se ha observado de forma notable que la aplicacion de 6-fosfato de N-acetilglucosamina sobre la piel humana induce varios fenomenos:
• una reorganizacion observable de la estructura epidermodermica con un refuerzo claro de la union epidermodermica, sin fenomeno de acantosis al contrario que la crema RetinOX + Jour;
5
10
15
20
25
30
35
40
• un aumento de la cantidad de GAG acidos (por tanto principalmente de acido hialuronico, que es el GAG acido principal de la piel), no localizado unicamente al nivel de la union epidermodermica como para la crema RetinOX + Jour, sino bien repartido en toda la dermis papilar;
• un aumento de la tasa de receptor CD44 de acido hialuronico, indicando una actividad de smtesis de acido hialuronico por la piel y una activacion de las celulas cutaneas.
De forma notable, este compuesto solo actua de manera tan o incluso mas eficaz que una crema comercial basada en retinol (por ejemplo, el 6-fosfato de N-acetilglucosamina no provoca el fenomeno de acantosis sobre la piel, al contrario que la crema comercial).
El 6-fosfato de N-acetilglucosamina presenta por tanto interes para estimular varios fenomenos al nivel de la piel:
• voluminizarla a traves de la estimulacion de la smtesis de GAG, componentes de la matriz tridimensional de soporte de la piel,
• reforzar los intercambios de nutrientes entre epidermis y dermis a traves de una mejora de la union epidermodermica,
• alisar la piel y reafirmarla a traves de la mejora de la union epidermodermica y la smtesis de GAG,
• promover su regeneracion a traves de la estimulacion del receptor CD44.
EJEMPLO 7: Ejemplos de composiciones para el cuidado de la piel basadas en 6-fosfato de N- acetilglucosamina (NAG6P)
6.1 Crema regenerativa para pieles envejecidas (fuera de la invencion)
A-Fase acuosa
Glicerina 2,0 %
Hexilenglicol 3,0 %
Goma de xantano 0,5 %
Conservantes cs
Carbomero 0,35 %
NAG6P
Agua
B-Fase grasa Escualano Alcohol cetflico
0,1 %
cs hasta 100 %
15 %
2 %
Alcohol araquidflico/alcohol behemlico/glucosido de araquidilo 1 % Estearato de glicerol 5 %
Agua 1,5 %
NaOH 0,35 %
Conservante + perfume cs
6.2. Emulsion hidratante y emoliente
A-Fase grasa
Ceteareth-2 3,5 %
Ceteareth-21 2 a 4 %
Aceite de germen de trigo 3 %
Ciclometicona 7 %
5
10
15
20
25
30
35
Palmitato de octilo B-Fase acuosa
8 %
Agua
cs hasta 100 %
Glicerina
7,0 %
Hexilenglicol
3,0 %
NAG6P
0,1 %
Conservantes
cs
C-Ingredientes anadidos a la emulsion a una temperatura inferior a 40 °C
Hialuronato de sodio
0,1 %
Agua
5 %
Tocoferol
0,05 %
Palmitato de vitamina A
0,1 %
Fosfolfpidos
0,5 %
Ceramidas 3
0,1 %
Poliacrilamida e isoparafina C14-13 y laureth-7
2 a 3,5 %
6.3 Leche-crema solar para pieles fotoenvejecidas (fuera de la invencion) A -Fase grasa
Monoestearato de glicerol
2 %
Estearato de PEG-100
3 %
Benzoato de alquilo C12-C15
10 %
Dimeticona
5 %
Acetato de tocoferol
1 %
Octiltriazona (Uvinul T150)
1,5 %
Butilmetoxidibenzoilmetano (Eusolex 9020)
2,0 %
Alcohol cetoesteanlico B-Fase acuosa
1 %
Agua
cs hasta 100 %
Conservantes
0,6 %
Glicerina
7 %
Hexilenglicol
3,0 %
Carbomero
0,5 %
EDTA tetrasodico
0,2 %
NAG6P
0,1 %
Hialuronato de sodio HPM
0,1 %
Agua
5 %
NaOH Conservante + perfume
0,5 % cs
cs
5
10
15
20
25
30
6.4. Crema antiarrguas posinveccion “Filler” (relleno)
A -Fase grasa
Escualano
5 %
Alcohol cetflico
2 %
Dimeticona
5%
Palmitato de octilo B-Fase acuosa
5%
Butilenglicol
0,5 -4 %
Agua
cs hasta 100 %
NAG6P
0,1 %
Glicerina
2,0 %
Hexilenglicol
3,0 %
Goma de xantana
0,5 %
Conservantes
cs
C-Ingredientes anadidos a la emulsion a una temperatura inferior a 40 °C
Acetato de tocoferol
0,1 a 1 %
Piridoxina
0,01 a 0,05 %
Palmitato de vitamina A
0,01 a 1 %
d-Pantenol
0,1 a 1 %
Acido cftrico
0,1 a 0,5 %
Gluconato de cinc
0,1 a 1 %
Citrato trisodico
1 a 2,5 %
Agua
5 %
6.5 Locion desmaquilladora para pieles maduras (fuera de la invencion)
Polisorbato 20
1,0 %
Glucosido caprilflico/capnlico (Oramix CG110)
2,0 %
NAG6P
0,1 %
Cocoato de PEG-7-glicerilo
0,5 %
Hexilenglicol
4-5 %
d-Pantenol
0,1 %
Manitol
0,02 %
Conservantes
cs
Agua
cs hasta 100 %

Claims (13)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    REIVINDICACIONES
    1. Uso no terapeutico de una composicion cosmetica que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo cosmeticamente aceptable y un compuesto de la familia de la vitamina A seleccionado entre el grupo consistente en retinol o un ester del mismo, retinal o retinaldetudo, acido retinoico, isotretinoma, adapaleno, tretinoma y la mezcla de los mismos, para el tratamiento de pieles secas o para el tratamiento o la prevencion del envejecimiento de la piel o de sus faneras, para la mejora de la elasticidad y/o del tono de la piel, para la reafirmacion de la piel y/o para la regeneracion/refuerzo de la union epidermodermica y/o para aumentar la proliferacion de fibroblastos y/o para aumentar la smtesis de macromoleculas estructurales seleccionadas entre hialuronato y/o procolageno 1.
  2. 2. Uso segun la reivindicacion 1 para el tratamiento o la prevencion de arrugas.
  3. 3. Uso segun la reivindicacion 1 para el tratamiento o la prevencion de arrugas profundas y/o arrugas pequenas.
  4. 4. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el compuesto de la familia de la vitamina A es retinol o un ester del mismo.
  5. 5. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la composicion esta adaptada para administracion topica, oral o inyectable.
  6. 6. Uso segun la reivindicacion 5, en el que la composicion esta adaptada para administracion topica.
  7. 7. Composicion cosmetica que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo
    cosmeticamente aceptable y un compuesto de la familia de la vitamina A seleccionado entre el grupo consistente en retinol o un ester del mismo, retinal o retinaldetudo, acido retinoico, isotretinoma, adapaleno, tretinoma y la mezcla de los mismos.
  8. 8. Composicion farmaceutica o veterinaria que comprende 6-fosfato de N-acetilglucosamina o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable y un compuesto de la familia de la vitamina A seleccionado entre el grupo consistente en retinol o un ester de mismo, retinal o retinaldetudo, acido retinoico, isotretinoma, adapaleno, tretinoma y la mezcla de los mismos.
  9. 9. Composicion segun la reivindicacion 7 u 8, que comprende retinol o un ester del mismo.
  10. 10. Composicion segun la reivindicacion 8 para uso en el tratamiento de psoriasis, dermatitis atopica, eccema,
    trastornos articulares, trastornos ligados al deficit de cartflago y derrames del sinovio, para viscosuplementacion o en tratamientos que acompanan a intervenciones quirurgicas del ojo.
  11. 11. Composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 7-10, adaptada para administracion topica, oral o inyectable.
  12. 12. Dispositivo que comprende una composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 7-8, estando adaptado el dispositivo a una inyeccion.
  13. 13. Dispositivo segun la reivindicacion 12, que esta adaptado a una inyeccion intraepidermica y/o intradermica y/o transdermica y/o subcutanea y/o microinyeccion y/o en el espacio articular.
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104418866B (zh) 2013-08-23 2018-10-16 青岛黄海制药有限责任公司 Dgat1抑制剂及其制备方法和用途
FR3020570B1 (fr) * 2014-04-30 2017-07-21 Pierre Fabre Dermo-Cosmetique Association d'un acide hyaluronique et d'un polysaccharide sulfate
CN105208434A (zh) * 2014-06-11 2015-12-30 阿里巴巴集团控股有限公司 媒体投影方法、媒体投影设备、控制终端以及云端服务器
KR20170051508A (ko) 2014-09-10 2017-05-11 바스프 에스이 당 기질의 효소적 인산전이반응
CN108883047B (zh) * 2016-04-11 2021-10-01 奇华顿股份有限公司 皮肤修复产品
US11070774B2 (en) 2017-12-22 2021-07-20 Dolby Laboratories Licensing Corporation Temporal modeling of phase modulators in multi-modulation projection
KR102187439B1 (ko) * 2019-01-30 2020-12-07 주식회사 라파스 마이크로니들 패취를 이용한 최소 침습적 피부 생체 검사 방법
US11400043B2 (en) 2019-12-10 2022-08-02 Mary Kay Inc. Cosmetic composition
KR102629903B1 (ko) * 2019-12-18 2024-02-16 주식회사 글로원 N-아세틸글루코사민 유도체를 유효성분으로 함유하는 주입용 필러 조성물
US20230233441A1 (en) * 2022-01-24 2023-07-27 The Procter & Gamble Company Skin care composition containing sodium hyaluronate and method of making the same
KR102420820B1 (ko) * 2022-03-23 2022-07-18 (주)아크에이르 Tretinoin Potassium Salt를 유효성분으로 포함하는 피부염증 억제용 조성물

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB896940A (en) * 1959-02-26 1962-05-23 Pfizer & Co C Healing agent for wounds of the body surface
US5759556A (en) * 1996-09-27 1998-06-02 Chesebrough-Pond's Usa Co., Division Of Conopco, Inc. Skin care compositions containing certain cyclic aliphatic unsaturated compounds and retinol or retinyl ester
US6656925B2 (en) * 1998-09-09 2003-12-02 Advanced Medical Instruments Composition and method of treating arthritis
NL1016398C2 (nl) * 2000-10-13 2002-04-16 Triticum Exploitatie B V Samenstelling op basis van een therapeutisch actieve verbinding, in het bijzonder honing, voor het behandelen van wonden.
JP2002284662A (ja) * 2001-03-27 2002-10-03 Kanebo Ltd 皮膚外用剤組成物
US20030114418A1 (en) * 2001-08-14 2003-06-19 Pharmacia Corporation Method for the treatment and prevention of pain and inflammation with glucosamine and a cyclooxygenase-2 selective inhibitor and compositions therefor
AU2002323946A1 (en) * 2002-07-25 2004-02-16 Lion Corporation External preparation
JP2007532562A (ja) * 2004-04-07 2007-11-15 ザ ユニバーシティ オブ ジョージア リサーチファウンデーション，インコーポレイティド グルコサミン、及びグルコサミン／抗炎症薬の相互プロドラッグ、組成物、及び方法
US8034796B2 (en) * 2004-04-07 2011-10-11 The University Of Georgia Research Foundation, Inc. Glucosamine and glucosamine/anti-inflammatory mutual prodrugs, compositions, and methods
KR100720055B1 (ko) * 2004-07-15 2007-05-18 한국생명공학연구원 육탄당 모노인산을 포함하는 혈당강하용 조성물
KR20060008155A (ko) * 2004-07-23 2006-01-26 최희성 퇴행성 관절염 억제용 글루코사민과 크릴유 배합물
TWI354559B (en) * 2004-12-27 2011-12-21 Yaizu Suisankagaku Ind Co Ltd Oral disintegrative n-acetylglucosamine tablet and
KR20060087817A (ko) * 2005-01-31 2006-08-03 주식회사 태평양 항노화용 화장료 조성물
US20070092469A1 (en) * 2005-10-26 2007-04-26 Eric Jacobs Topically applied Glucosamine Sulfate and all its related, precursor, and derivative compounds significantly increases the skin's natural produciton of hyaluronic acid for the rejuvenation of healthier younger-looking skin; while PhosphatidylCholine is required to replace its deficiency caused by topical Dimethylaminoethanol (DMAE)
EP1867729A1 (en) 2006-06-14 2007-12-19 Libragen Water soluble phenolics derivatives with dermocosmetic and therapeutic applications
EP1995323A1 (en) 2007-05-24 2008-11-26 Libragen Method for preparing C-6 phosphorylated D-aldohexoses and C-6 phosphorylated D-aldohexose derivatives

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Publication number Publication date
US9907760B2 (en) 2018-03-06
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