ES2536416T3

ES2536416T3 - Uso cosmético de proteínas de tipo anexina II para el tratamiento de la sequedad cutánea

Info

Publication number: ES2536416T3
Application number: ES09742231.5T
Authority: ES
Inventors: Dominique Bernard; Lucie Simonetti; Isabelle Castiel
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2008-04-04
Filing date: 2009-04-02
Publication date: 2015-05-25
Anticipated expiration: 2029-04-02
Also published as: US20110098230A1; EP2271357A2; WO2009136033A3; FR2929517A1; WO2009136033A2; EP2271357B1

Abstract

Procedimiento para caracterizar un estado de sequedad de un epitelio que consta al menos de las etapas que consisten en: a) determinar en una muestra de dicho epitelio un contenido de un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de ácidos nucleicos representada por una secuencia representada por SEC ID Nº 1, un análogo de ésta que tiene al menos 85 % de homología de secuencia así como una actividad biológica de la misma naturaleza, o un fragmento de ésta que consta al menos de 6 aminoácidos consecutivos de dicho polipéptido así como una actividad biológica de la misma naturaleza o de una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para dicho polipéptido, y b) comparar dicho contenido determinado en la etapa a) con un valor de referencia.

Description

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[0075] Este compuesto puede ser un agente peptidomimético.

[0076] La homología es de al menos 85 %, y puede ser por ejemplo de al menos 90 %, y por ejemplo de al menos 95 %. La homología se puede determinar por comparación visual o mediante cualquier herramienta informática habitualmente utilizada en el dominio, tal como los programas BLAST disponibles en www.ncbi.nlm.nih.gov y utilizados con los parámetros configurados por defecto.

[0077] La homología de secuencia puede deberse a modificaciones resultantes de mutaciones o de variaciones en las secuencias de los péptidos según la invención a partir bien de la eliminación o de la inserción de uno o varios aminoácidos, bien de la sustitución de uno o varios aminoácidos en las secuencias características de un polipéptido según la invención.

[0078] En el contexto de la invención, se pretende designar por "fragmento de polipéptido" a cualquier parte de un polipéptido conforme a la invención que conste de al menos 6, en particular al menos 8, y particularmente al menos 12 aminoácidos consecutivos de dicho polipéptido, y una actividad biológica sensiblemente similar.

[0079] Por "secuencia característica del polipéptido", se quiere apuntar particularmente con respecto a la anexina II, a la secuencia representada por SEC ID Nº 2.

[0080] De manera general, las análogos polipeptídicos pueden comprender sustituciones conservadoras con respecto a la secuencia de aminoácidos del polipéptido natural.

[0081] Varias de estas modificaciones pueden ser combinadas.

[0082] Como ejemplo de mutaciones que se pueden considerar en la presente invención, se puede mencionar, de manera no exhaustiva, el reemplazo de uno o varios residuos de aminoácidos a través de residuos de aminoácidos que tengan un índice hidropático similar sin que sin embargo afecte de manera sensible a las propiedades biológicas del polipéptido, y particularmente su actividad biológica, tal y como su actividad de estímulo de la proliferación y/o de la migración y/o de la diferenciación terminal de los queratinocitos o del estímulo de la síntesis de los proteoglicanos en un epitelio, y en particular la epidermis.

[0083] El índice hidropático es un índice atribuido a los aminoácidos en función de su hidrofobicidad y de su carga (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157: 105).

[0084] Un polipéptido o análogo igualmente cubierto por la presente invención puede ser un polipéptido que haya sufrido una o varias modificaciones postraduccionales.

[0085] Por "modificaciones postraduccionales" nos referimos al conjunto de las modificaciones que un péptido o una proteína puede sufrir tras su síntesis en una célula, tales como, por ejemplo, una o más fosforilaciones, una o más tiolaciones, una o más acetilaciones, una o más glicosilaciones, una o más lipidaciones, tales como una farnesilación o una palmitoilación, una nueva disposición estructural de tipo formación de puentes disulfuros y/o de tipo división dentro de la secuencia peptídica.

[0086] El análogo presenta, además, sensiblemente la misma actividad biológica que el polipéptido natural.

[0087] Según una forma de realización de un polipéptido según la ejecución de la invención puede también ser un polipéptido natural o sintético, en su caso susceptible de ser obtenido después de lisado enzimático o químico de la anexina II o por síntesis química o biológica o por extracción de un tejido biológico, como por ejemplo la piel, expresando naturalmente este polipéptido o después de la transfección de éste, así como las diferentes formas postraduccionales de éste, o incluso cualquier polipéptido natural o sintético cuya secuencia comprenda totalmente o parcialmente (en todo o en parte) una secuencia de aminoácidos anteriormente mencionada, por ejemplo las variantes y los análogos.

[0088] El experto en la técnica puede obtener un polipéptido conforme a la invención mediante procedimientos a base de ADN recombinante, como por ejemplo, los descritos en el manual "Molecular Cloning -A Laboratory Manual” (Segunda edición), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook )".

[0089] Según otra forma de realización, un polipéptido adecuado para la ejecución de la invención puede ser también un polipéptido tal y como se ha definido previamente en el que un residuo al menos ha sido reemplazado por un residuo de aminoácido de índice hidropático similar, como se ha definido previamente.

[0090] Según otra forma de realización, un polipéptido adecuado para la ejecución de la invención puede ser también un polipéptido tal y como se ha definido previamente, fusionado con otro polipéptido, un agente de focalización hidrófila o hidrófoba, un precursor de bioconversión, un agente de marcaje luminiscente, radioactivo o colorimétrico.

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[0139] La caracterización de un estado de sequedad de una epidermis puede ser indicativa de un eventual trastorno cutáneo que se puede corregir con el uso de compuestos que puedan modular la expresión de un polipéptido de la invención.

[0140] Según una forma de realización, un procedimiento según la invención se puede utilizar en un procedimiento de diagnóstico in vivo, in vitro o ex vivo de sequedad de un epitelio, y particularmente de la epidermis, de un individuo.

[0141] Un polipéptido adecuado para la ejecución de un procedimiento según la invención puede ser ventajosamente la anexina II.

[0142] La determinación de un contenido en polipéptido conforme a la invención o en ácidos nucleicos conforme a la invención en una muestra de epidermis se puede efectuar por cualquier protocolo conocido por el experto en la técnica.

[0143] La expresión de una secuencia de ácido nucleico se puede determinar, por ejemplo, mediante sondas oligonucleótidas, por cualquier protocolo conocido por el experto en la técnica.

[0144] Como ejemplos de métodos de detección de secuencia de ácidos nucleicos, se pueden mencionar la reacción de polimerización en cadena, cuantitativa (Q-PCR) o no (PCR), en presencia (RT-PCR o Q-RT-PCR) o no de la transcriptasa inversa, el Northern blot, del método "ribonuclease protection assay", los métodos con chips de ADN, los métodos con chips transcriptómicos, los métodos con chips de oligonucleótidos, los métodos de hibridación in situ.

[0145] Como ejemplo de agentes convenientes para la detección de una secuencia de ácidos nucleicos, y en particular de ARNm, se pueden mencionar sondas de ácidos nucleicos marcadas que se pueden hibridar con ayuda de dicha secuencia.

[0146] Tal sonda de ácido nucleico se puede obtener fácilmente por cualquier método conocido por el experto en la técnica.

[0147] Así, las secuencias de ácidos nucleicos conforme a la invención se pueden utilizar para realizar los cebadores de oligonucleótidos sentido y/o anti-sentido, que se hibridan en condiciones de fuerte astringencia en la secuencia SEC ID Nº 1 o un análogo de ésta.

[0148] La expresión de una secuencia de ácido nucleico conforme a la invención se puede comparar con un valor de referencia obtenido, por ejemplo, efectuando un procedimiento conforme a la invención en ausencia de compuesto para probar.

[0149] La expresión de una secuencia de ácido nucleico se puede determinar igualmente, de manera indirecta, por la determinación de la expresión del polipéptido codificado por dicha secuencia, mediante cualquier técnica conocida en el dominio, tal como Western-Blot, ELISA, el método de Bradford o de Lowry, o como se indica a continuación.

[0150] Una secuencia de ácido nucleico conveniente para la puesta en práctica de un procedimiento según la invención puede ser ventajosamente una secuencia de ácidos nucleicos que codifique para la anexina II, por ejemplo de tipo ARNm.

[0151] La determinación de un contenido de un polipéptido conforme a la invención se puede efectuar mediante cualquier método conocido por el experto en la técnica.

[0152] Como ejemplos de métodos de detección de un polipéptido, se pueden mencionar el Western-blot, el Slot-blot, el Dot-blot, los métodos ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de tipo singleplex o multiplex, los métodos de protéomico o de glicómico, de coloración de polipéptidos en un gel de poliacrilamida por un colorante a base de plata, por el azul de Coomassie o por el SYPRO, la inmunofluorescencia, la absorción de UV, métodos inmunohistoquímicos en microscopía tradicional, electrónica o confocal, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transferencia de energía por resonancia de fluorescencia), los métodos de TR-FRET (time resolved FRET/FRET con resolución temporal), los métodos de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/microscopía de fluorescencia de tiempo de vida), los métodos de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/microscopía espectal de fluorescencia), los métodos de FRAP (fluorescence recovery after photobleaching/recubrimiento de fluorescencia después de fotoblanqueamiento), los métodos por gen reportero, los métodos de AFM (atomic force microscopy/microscopía por fuerza atómica), los métodos de resonancia plasmónica de superficie, los métodos de microcalorimetría, los métodos de citometría de flujo, los métodos de biosensores, los métodos de radioinmunoensayos (RIA), los métodos de focalización isoeléctrica, y las pruebas enzimáticas, los métodos que utilizan chips a péptidos, los chips de azúcar, los chips de anticuerpos, los métodos de espectrometría de masa, los métodos de espectrometría de tipo SELDI-TOF (Ciphergen).

[0153] Los procedimientos conforme a la invención se pueden efectuar sobre una muestra, por ejemplo aislada, de epitelio, particularmente de epidermis, obtenida a partir de una biopsia cutánea o de un modelo celular epitelial, por ejemplo epidérmico o más ventajosamente de un muestreo de superficie no invasivo, particularmente por adhesivo ("tape stripping") del estrato corneo o por simple lavado.

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[0154] Una toma de una muestra de epidermis se puede hacer por cualquier método conocido por el experto en la técnica.

[0155] Estos métodos se pueden efectuar por técnicas denominadas "stripping".

[0156] Estos strippings son superficies adhesivas aplicadas a la superficie de la epidermis como el Blenderm® de 3M, el D'squam (adhesivo comercial de CuDERM), el pegamento cianoacrilato o el método del esmalte de "stripping". Gracias a estos "stripping", los corneocitos se adhieren y el contenido de sus espacios intercelulares se pueden tomar y someter después a una extracción que permite tener acceso al contenido proteico.

[0157] La toma de una muestra conveniente para el procedimiento se puede efectuar también de manera más directa por "lavados" de la superficie cutánea, mediante por ejemplo accesorios de tipo turbina de aleta, de tipo célula de espiral (como se describe en la patente FR 2 667 778) asociada a un circuito fluídico, o sencillamente por adición/extracción de una gota de tampón en la superficie de la piel.

[0158] A título indicativo, otros métodos de toma adaptados para la realización de la invención se pueden mencionar, tales como los métodos por raspado de la parte superior del estrato corneo a través de un sistema de biláminas. Esta técnica permite recoger las escamas que se pueden analizar a continuación directamente por diferentes técnicas para determinar los índices de minerales, aminoácidos o lípidos.

[0159] Igualmente, se puede considerar detectar la presencia de un polipéptido conforme a la invención a través de un anticuerpo, en su caso bajo una forma marcada.

[0160] Un anticuerpo que se puede utilizar como herramienta de evaluación de un estado de una epidermis se puede obtener por cualquier procedimiento conocido por el experto en la técnica, como se describe en "Antibodies: A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990 )". De manera ventajosa, los anticuerpo utilizados pueden ser anticuerpos recombinantes, tales como los desarrollados por la empresa Antibodies-bydesign.

[0161] La presente invención se refiere también a un procedimiento, no terapéutico, para resaltar un efecto de un tratamiento que puede remitir los signos de sequedad de un epitelio, particularmente las sensaciones de pruritos y/o de tirantez, de un individuo, que comprende al menos las etapas que consisten en:

a) efectuar, antes del tratamiento, al menos una primera determinación, en una primera muestra de un epitelio tomado de dicho individuo, de una actividad biológica y/o de la expresión de un polipéptido conforme a la invención, o de la expresión de una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para dicho polipéptido,

b) efectuar, después del tratamiento, al menos una segunda determinación, en una segunda muestra de un epitelio tomado de dicho individuo, de dicha actividad biológica y/o de dicha expresión de dicho polipéptido o de dicha expresión de dicha secuencia de ácidos nucleicos determinados en la etapa a), y

c) comparar las primera y las segundas determinaciones, particularmente para deducir una información relativa a un efecto al menos del tratamiento.

[0162] Tal tratamiento puede ser en particular un tratamiento cosmético.

[0163] En particular, el tratamiento cuyo efecto se va a evaluar puede ser un tratamiento para aliviar o reducir los signos de sequedad cutánea.

[0164] La actividad biológica de un polipéptido conocido por el experto en la técnica, por ejemplo y de manera no limitativa, se pueden mencionar los métodos de cultivo celular seguidos de una caracterización de marcadores de diferenciación, tales como por ejemplo la queratina 10, la filagrina o marcadores de proliferación tales como por ejemplo KI 67 y PCNA.

[0165] Ventajosamente, un polipéptido utilizado en un procedimiento según la presente invención puede ser la anexina

II.

[0166] La expresión de un polipéptido se puede determinar como se indica anteriormente.

[0167] El presente texto describe un procedimiento de tratamiento cosmético de los signos de sequedad cutánea que consta al menos de una etapa que consiste en aplicar sobre una parte al menos de la piel, las mucosas y/o las fibras queratínicas, al menos una composición cosmética descrita en el presente texto.

[0168] En el sentido de la presente invención, "uno" debe entenderse, excepto si se indica lo contrario, en el sentido de "al menos uno".

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