ES2390063B1 - GLYCOSAMINOGLYCANS WITH VERY LOW METHANOL CONTENT. - Google Patents

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Abstract

Glicosaminoglicanos con muy bajo contenido de metanol.#La presente invención se refiere a un procedimiento para preparar un glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm, en el que se pulveriza agua sobre el glicosaminoglicano con agitación y se irradia con microondas bajo vacío a una temperatura inferior a 70ºC. El procedimiento permite formular dicho glicosaminoglicano, preferentemente sulfato de condroitina o ácido hialurónico, en un producto adecuado para su uso en un complemento alimenticio o en un alimento funcional.Glycosaminoglycans with very low methanol content. # The present invention relates to a process for preparing a glycosaminoglycan with a methanol content of less than or equal to 10 ppm, in which water is sprayed on the glycosaminoglycan with stirring and irradiated with microwave under vacuum at a temperature below 70 ° C. The process allows to formulate said glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate or hyaluronic acid, in a product suitable for use in a food supplement or in a functional food.

Description

Glicosaminoglicanos con muy bajo contenido de metanol. Glycosaminoglycans with very low methanol content.

Sector técnico de la invención Technical sector of the invention

La presente invención se refiere a un procedimiento para preparar un glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. El procedimiento permite formular dicho glicosaminoglicano, preferentemente sulfato de condroitina o ácido hialurónico, en un producto adecuado para su uso en un complemento alimenticio o en un alimento funcional. The present invention relates to a process for preparing a glycosaminoglycan with a methanol content of less than or equal to 10 ppm. The process allows to formulate said glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate or hyaluronic acid, in a product suitable for use in a food supplement or in a functional food.

Antecedentes de la invención Background of the invention

Los glicosaminoglicanos (GAG) son biomoléculas poliméricas de elevado peso molecular que consisten en una estructura dimérica repetida. Se encuentran fundamentalmente en los organismos vivos, donde desarrollan diferentes funciones fisiológicas. Entre los glicosaminoglicanos cabe destacar el sulfato de condroitina, el ácido hialurónico, la heparina, el sulfato de heparano, el sulfato de dermatano y el sulfato de queratano. Excepto el ácido hialurónico, todos los demás contienen grupos sulfato en sus estructuras. Glycosaminoglycans (GAG) are polymeric biomolecules of high molecular weight that consist of a repeated dimeric structure. They are found primarily in living organisms, where they develop different physiological functions. Glycosaminoglycans include chondroitin sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, dermatan sulfate and queratane sulfate. Except for hyaluronic acid, all others contain sulfate groups in their structures.

El sulfato de condroitina tiene una estructura polimérica caracterizada por un disacárido que se repite, constituido por N-acetil-D-galactosamina y ácido D-glucurónico. La mayoría de los residuos de N-acetil-D-galactosamina están sulfatados. Generalmente, tiene un peso molecular entre 10.000 y 70.000 Da, dependiendo de la procedencia y procedimiento de obtención (N. Volpi, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96(12), 3168-3180, (2007)). Se ha descrito la utilidad del sulfato de condroitina en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares (US 3,895,106), de la psoriasis (WO2005/014012) o de la artrosis (M.G. Lequesne, Rev. Rhum. Eng. Ed., 61, 69-73 (1994); G. Verbruggen et al., Osteoarthritis Cart., 6 (Supplement A), 37-38 (1998)). Chondroitin sulfate has a polymeric structure characterized by a repeating disaccharide, consisting of N-acetyl-D-galactosamine and D-glucuronic acid. Most N-acetyl-D-galactosamine residues are sulfated. Generally, it has a molecular weight between 10,000 and 70,000 Da, depending on the source and procedure for obtaining it (N. Volpi, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96 (12), 3168-3180, (2007)). The utility of chondroitin sulfate in the treatment of cardiovascular diseases (US 3,895,106), psoriasis (WO2005 / 014012) or osteoarthritis (MG Lequesne, Rev. Rhum. Eng. Ed., 61, 69-73 has been described (1994); G. Verbruggen et al., Osteoarthritis Cart., 6 (Supplement A), 37-38 (1998)).

El ácido hialurónico es un glicosaminoglicano no sulfatado, con una estructura polimérica caracterizada por un disacárido que se repite, constituido por los monosacáridos N-acetil-D-glucosamina y ácido D-glucurónico. Es uno de los principales componentes del cartílago, de la membrana sinovial y del líquido sinovial. Particularmente importante es su uso en el tratamiento de la artrosis, generalmente por vía intraarticular. También se ha descrito su uso en oftalmología, para acelerar la cicatrización de las heridas, así como en cosmética. Hyaluronic acid is a non-sulfated glycosaminoglycan, with a polymeric structure characterized by a repeating disaccharide, consisting of N-acetyl-D-glucosamine monosaccharides and D-glucuronic acid. It is one of the main components of cartilage, synovial membrane and synovial fluid. Particularly important is its use in the treatment of osteoarthritis, usually intra-articularly. Its use has also been described in ophthalmology, to accelerate wound healing, as well as in cosmetics.

Los glicosaminoglicanos sulfato de condroitina, ácido hialurónico, sulfato de dermatano y sulfato de queratano se emplean tanto en nutrición, en forma de complementos alimenticios o de alimentos funcionales, como en preparaciones farmacéuticas. Chondroitin sulfate glycosaminoglycans, hyaluronic acid, dermatan sulfate and queratane sulfate are used both in nutrition, in the form of food supplements or functional foods, as in pharmaceutical preparations.

En gran parte de los procedimientos de preparación de los glicosaminoglicanos sulfato de condroitina, ácido hialurónico, heparina, sulfato de heparano, sulfato de dermatano y sulfato de queratano, a partir de tejidos de animales (tráquea, mucosa, cresta, etc.), se emplea metanol como solvente, ya que la utilización de etanol sin desnaturalizar tiene un alto coste. La cantidad de metanol residual de los glicosaminoglicanos obtenidos a través de algunos de los procedimientos descritos en la bibliografía es de aproximadamente 50-2.000 ppm. In large part of the preparation procedures for chondroitin sulfate glycosaminoglycans, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, dermatan sulfate and keratane sulfate, from animal tissues (trachea, mucosa, crest, etc.), It uses methanol as a solvent, since the use of undenatured ethanol has a high cost. The amount of residual methanol of the glycosaminoglycans obtained through some of the procedures described in the literature is approximately 50-2,000 ppm.

Las autoridades sanitarias permiten hasta 3.000 ppm de metanol en un principio activo destinado a la preparación de un medicamento (ICH Harmonised Tripartite Guideline. Impurities: Guideline for Residual Solvents Q3C(R5)). Sin embargo, debido a la toxicidad del metanol, y a que es difícil controlar la cantidad de complemento alimenticio o de alimento funcional que podría ingerir un ser vivo, las autoridades son más estrictas cuando el compuesto, en este caso un glicosaminoglicano, se emplea en nutrición, permitiendo sólo una cantidad máxima de metanol de 10 ppm (Directive 2009/32/EC of the European Parliament and of the Council, 23 de abril de 2009). The health authorities allow up to 3,000 ppm of methanol in an active substance intended for the preparation of a medicine (ICH Harmonized Tripartite Guideline. Impurities: Guideline for Residual Solvents Q3C (R5)). However, due to the toxicity of methanol, since it is difficult to control the amount of food supplement or functional food that a living being could ingest, the authorities are stricter when the compound, in this case a glycosaminoglycan, is used in nutrition , allowing only a maximum amount of methanol of 10 ppm (Directive 2009/32 / EC of the European Parliament and of the Council, April 23, 2009).

Las microondas son una forma de energía electromagnética con frecuencias entre 300 MHz y 300 GHz, generadas por magnetrones bajo la fuerza combinada de un campo eléctrico y un campo magnético, perpendicular uno a otro. Las frecuencias más utilizadas son 915 MHz y 2.450 MHz. Microwaves are a form of electromagnetic energy with frequencies between 300 MHz and 300 GHz, generated by magnetrons under the combined force of an electric field and a magnetic field, perpendicular to each other. The most used frequencies are 915 MHz and 2,450 MHz.

Una de las aplicaciones más conocidas de las microondas es el horno de microondas, que usa un magnetrón para producir ondas a una frecuencia de aproximadamente 2.450 MHz. Estas ondas hacen vibrar o rotar las moléculas de agua, generando calor. Debido a que la mayor parte de los alimentos contienen un importante porcentaje de agua, pueden ser fácilmente calentados o cocinados de esta manera. One of the best known applications of microwaves is the microwave oven, which uses a magnetron to produce waves at a frequency of approximately 2,450 MHz. These waves make the water molecules vibrate or rotate, generating heat. Because most foods contain a significant percentage of water, they can be easily heated or cooked in this way.

Las microondas se utilizan en diversos sectores industriales, tales como en el sector de la alimentación, de la cerámica, del caucho, del papel, y en el farmacéutico. Microwaves are used in various industrial sectors, such as in the food, ceramics, rubber, paper, and pharmaceutical industries.

El secado por microondas bajo vacío es el resultado de la combinación de dos tecnologías: las microondas que proporcionan un secado rápido y uniforme, permitiendo que el calor se genere uniformemente en el interior del sólido y el vacío que permite reducir las temperaturas de secado. Se emplea ampliamente en la industria alimentaria, por ejemplo, para deshidratar frutas y verduras (ver, por ejemplo, solicitud de patente WO2009/066259; solicitud de patente US2008/0179318) y en la industria farmacéutica, por ejemplo, para secar y/o granular principios activos (M. Microwave drying under vacuum is the result of the combination of two technologies: microwaves that provide fast and uniform drying, allowing heat to be generated evenly inside the solid and vacuum that allows drying temperatures to be reduced. It is widely used in the food industry, for example, to dehydrate fruits and vegetables (see, for example, patent application WO2009 / 066259; patent application US2008 / 0179318) and in the pharmaceutical industry, for example, to dry and / or granular active ingredients (M.

N. Berteli et al., Braz. J. Chem. Eng., 26 (2), 317-329 (2009); G. Farrel et al., Drying Technology, 23 (9-11), 2131N. Berteli et al., Braz. J. Chem. Eng., 26 (2), 317-329 (2009); G. Farrel et al., Drying Technology, 23 (9-11), 2131

ES 2 390 063 Al ES 2 390 063 Al

2146 (2005); C.M. McLoughlin et al., Drying Technology, 21 (9), 1719-1733 (2003)) o para deshidratar materiales biológicos sensibles a la temperatura (solicitud de patente WO2010/124375). 2146 (2005); C.M. McLoughlin et al., Drying Technology, 21 (9), 1719-1733 (2003)) or to dehydrate temperature sensitive biological materials (patent application WO2010 / 124375).

A la vista de lo anterior, es de gran interés encontrar un procedimiento de preparación de un glicosaminoglicano, preferentemente sulfato de condroitina o ácido hialurónico, con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm, para que pueda ser utilizado para preparar un alimento funcional o un complemento alimenticio, cumpliendo los requisitos de las autoridades competentes. In view of the above, it is of great interest to find a method of preparing a glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate or hyaluronic acid, with a methanol content of 10 ppm or less, so that it can be used to prepare a functional food or a food supplement, complying with the requirements of the competent authorities.

Hasta este momento, no se ha encontrado descrito un procedimiento de preparación de un glicosaminoglicano, por ejemplo sulfato de condroitina o ácido hialurónico, con una cantidad de metanol inferior o igual a 10 ppm, partiendo de un glicosaminoglicano obtenido mediante un procedimiento en el que se haya utilizado metanol como solvente. Until now, a process for preparing a glycosaminoglycan, for example chondroitin sulfate or hyaluronic acid, with an amount of methanol less than or equal to 10 ppm, starting from a glycosaminoglycan obtained by means of a process in which used methanol as a solvent

Explicación de la invención Explanation of the invention.

Los presentes inventores han encontrado que, sorprendentemente, el procedimiento de la presente invención permite preparar un glicosaminoglicano, preferentemente sulfato de condroitina o ácido hialurónico, con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. Cuando en la presente invención se pulveriza agua, bajo agitación, sobre un glicosaminoglicano que contiene una cantidad de metanol superior a 10 ppm y se somete a la acción de microondas bajo vacío, sorprendentemente, se obtiene un glicosaminoglicano con una cantidad de metanol inferior o igual a 10 ppm. Por ello, el glicosaminoglicano así obtenido puede ser utilizado en la preparación de complementos alimenticios o de alimentos funcionales. The present inventors have found that, surprisingly, the process of the present invention allows to prepare a glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate or hyaluronic acid, with a methanol content of less than or equal to 10 ppm. When in the present invention water is sprayed, under stirring, onto a glycosaminoglycan containing an amount of methanol greater than 10 ppm and subjected to the microwave action under vacuum, surprisingly, a glycosaminoglycan with an amount of methanol less than or equal is obtained at 10 ppm. Therefore, the glycosaminoglycan thus obtained can be used in the preparation of food supplements or functional foods.

Así pues, la presente invención se refiere a un procedimiento para preparar un glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm, que comprende las siguientes etapas: Thus, the present invention relates to a process for preparing a glycosaminoglycan with a methanol content of less than or equal to 10 ppm, comprising the following steps:

a) disponer un glicosaminoglicano con un contenido de metanol superior a 10 ppm en un recipiente de un equipo que lleva incorporados un microondas y una bomba de vacío; a) dispose of a glycosaminoglycan with a methanol content greater than 10 ppm in a container of an equipment that incorporates a microwave and a vacuum pump;

b) pulverizar agua sobre el glicosaminoglicano de la etapa a), bajo agitación, y b) spray water on the glycosaminoglycan of step a), under stirring, and

c) someter el glicosaminoglicano de la etapa b) a una radiación de microondas, bajo vacío y agitación, a una temperatura inferior a 70ºC y durante un periodo de tiempo que permita obtener el glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. Para controlar la temperatura durante esta etapa, se puede hacer circular agua por la camisa exterior del recipiente que contiene el glicosaminoglicano. c) subjecting the glycosaminoglycan of step b) to microwave radiation, under vacuum and stirring, at a temperature below 70 ° C and for a period of time that allows obtaining the glycosaminoglycan with a methanol content of 10 ppm or less. To control the temperature during this stage, water can be circulated through the outer jacket of the container containing the glycosaminoglycan.

En una realización preferida, el procedimiento comprende una etapa adicional antes de la etapa b), en la que el glicosaminoglicano de la etapa a) se somete a una radiación de microondas, bajo vacío y agitación, a una temperatura inferior a 70ºC y durante un periodo de tiempo que permita obtener un glicosaminoglicano con un contenido de metanol comprendido entre 10 ppm y 150 ppm, preferentemente de 100 ppm o de 88 ppm. Para controlar la temperatura durante esta etapa adicional, se puede hacer circular agua por la camisa exterior del recipiente que contiene el glicosaminoglicano. In a preferred embodiment, the process comprises an additional stage before step b), in which the glycosaminoglycan of step a) is subjected to microwave radiation, under vacuum and stirring, at a temperature below 70 ° C and during a period of time to obtain a glycosaminoglycan with a methanol content between 10 ppm and 150 ppm, preferably 100 ppm or 88 ppm. To control the temperature during this additional stage, water can be circulated through the outer jacket of the container containing the glycosaminoglycan.

En otra realización igualmente preferida, en la etapa c), cuando la temperatura alcanza 70ºC, (i) se detiene el microondas; (ii) se rompe el vacío; (iii) se enfría el glicosaminoglicano; (iv) se pulveriza agua, y (v) se vuelve a conectar el microondas y el vacío. Este ciclo de etapas (i), (ii), (iii), (iv) y (v) se puede repetir varias veces hasta alcanzar un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. In another equally preferred embodiment, in step c), when the temperature reaches 70 ° C, (i) the microwave is stopped; (ii) the vacuum is broken; (iii) the glycosaminoglycan is cooled; (iv) water is sprayed, and (v) the microwave and vacuum are reconnected. This cycle of stages (i), (ii), (iii), (iv) and (v) can be repeated several times until a methanol content of 10 ppm or less is reached.

En otra realización igualmente preferida, en la etapa c), (i) se detiene el microondas; (ii) se rompe el vacío; In another equally preferred embodiment, in step c), (i) the microwave is stopped; (ii) the vacuum is broken;

(iii) se pulveriza agua, y (iv) se vuelve a conectar el microondas y el vacío. Este ciclo de etapas (i), (ii), (iii) y (iv) se puede repetir varias veces hasta alcanzar un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. (iii) water is sprayed, and (iv) the microwave and vacuum are reconnected. This cycle of stages (i), (ii), (iii) and (iv) can be repeated several times until a methanol content of 10 ppm or less is reached.

En otra realización igualmente preferida, el glicosaminoglicano está en forma de polvo. In another equally preferred embodiment, the glycosaminoglycan is in powder form.

En otra realización igualmente preferida, el contenido de metanol del glicosaminoglicano de la etapa a) es superior a 150 ppm, preferentemente está comprendido entre 151 ppm y 2.000 ppm, más preferentemente es de 198 ppm o de 300 ppm. In another equally preferred embodiment, the methanol content of the glycosaminoglycan of step a) is greater than 150 ppm, preferably between 151 ppm and 2,000 ppm, more preferably 198 ppm or 300 ppm.

En otra realización igualmente preferida, el microondas trabaja a una potencia comprendida entre 10 y 70 vatios por kg de glicosaminioglicano de la etapa a), preferentemente a 40 ó a 42 vatios por kg de glicosaminioglicano de la etapa a). In another equally preferred embodiment, the microwave operates at a power comprised between 10 and 70 watts per kg of glycosaminioglycan of stage a), preferably at 40 or 42 watts per kg of glycosaminioglycan of stage a).

En otra realización igualmente preferida, el vacío o la presión de vacío es de 50 mbar o de 70 mbar. In another equally preferred embodiment, the vacuum or vacuum pressure is 50 mbar or 70 mbar.

En una realización particularmente preferida, cuando se pulveriza agua, la cantidad de agua que se pulveriza está comprendida entre 1% y 3% en peso de agua respecto al peso del glicosaminoglicano de la etapa a), preferentemente, la cantidad de agua que se pulveriza es de 1,5% en peso de agua respecto al peso del glicosaminoglicano de la etapa a). In a particularly preferred embodiment, when water is sprayed, the amount of water that is sprayed is between 1% and 3% by weight of water relative to the weight of the glycosaminoglycan of step a), preferably, the amount of water that is sprayed it is 1.5% by weight of water with respect to the weight of the glycosaminoglycan of step a).

ES 2 390 063 Al ES 2 390 063 Al

En otra realización particularmente preferida, el glicosaminoglicano de la etapa c) se formula en un producto adecuado para su uso en un complemento alimenticio o en un alimento funcional. In another particularly preferred embodiment, the glycosaminoglycan of step c) is formulated in a product suitable for use in a food supplement or in a functional food.

En otra realización particularmente preferida, el glicosaminoglicano se selecciona de entre el grupo formado por sulfato de condroitina, ácido hialurónico, sulfato de dermatano, sulfato de queratano y mezclas de los mismos. Preferentemente el glicosaminoglicano es sulfato de condroitina o ácido hialurónico. In another particularly preferred embodiment, the glycosaminoglycan is selected from the group consisting of chondroitin sulfate, hyaluronic acid, dermatan sulfate, queratane sulfate and mixtures thereof. Preferably the glycosaminoglycan is chondroitin sulfate or hyaluronic acid.

La presente invención también se refiere a un glicosaminoglicano, preferentemente sulfato de condroitina, con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm, obtenible mediante el procedimiento descrito anteriormente. The present invention also relates to a glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate, with a methanol content of less than or equal to 10 ppm, obtainable by the process described above.

La presente invención también se refiere a un glicosaminoglicano, preferentemente sulfato de condroitina, con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm, obtenible mediante el procedimiento descrito anteriormente, adecuado para su uso como complemento alimenticio o alimento funcional. The present invention also relates to a glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate, with a methanol content of less than or equal to 10 ppm, obtainable by the procedure described above, suitable for use as a food supplement or functional food.

Los glicosaminoglicanos que se emplean en el procedimiento de la presente invención como compuestos de partida, se pueden obtener a partir de diversos tejidos animales, como por ejemplo, crestas de gallo, tráquea porcina, tráquea bovina, mucosa porcina, mucosa bovina, piel, esternón de ave o esqueleto de pez elasmobranquio, como el tiburón, a través de procedimientos descritos en la bibliografía, empleando como solvente metanol o etanol desnaturalizado con metanol. Por ejemplo, el sulfato de condroitina se puede obtener mediante digestión enzimática proteolítica de tejidos cartilaginosos de animales, por ejemplo tráqueas de ganado bovino o porcino. El ácido hialurónico se puede obtener a partir de crestas de gallo, las cuales una vez picadas se digieren con un enzima proteolítico. Posteriormente se desactiva el enzima mediante calentamiento, se filtra, se elimina el sulfato de dermatano y se precipita el ácido hialurónico con una mezcla metanol-acetona. Se anhidrifica con metanol y a continuación se seca y se moltura. The glycosaminoglycans that are used in the process of the present invention as starting compounds can be obtained from various animal tissues, such as, for example, crow's crests, swine trachea, bovine trachea, porcine mucosa, bovine mucosa, skin, sternum of a bird or elasmobranch fish skeleton, such as the shark, through procedures described in the literature, using methanol or ethanol denatured with methanol as solvent. For example, chondroitin sulfate can be obtained by proteolytic enzymatic digestion of cartilaginous tissues of animals, for example tracheas of cattle or pigs. Hyaluronic acid can be obtained from rooster crests, which once chopped are digested with a proteolytic enzyme. The enzyme is subsequently deactivated by heating, filtered, the dermatan sulfate is removed and the hyaluronic acid is precipitated with a methanol-acetone mixture. It is anhydrified with methanol and then dried and ground.

Todos los glicosaminoglicanos de partida que se emplean en la presente invención contienen una cantidad de metanol superior a 10 ppm. All starting glycosaminoglycans used in the present invention contain an amount of methanol greater than 10 ppm.

El sulfato de condroitina que procede del tejido cartilaginoso se encuentra principalmente en dos formas isoméricas, que difieren en la posición del grupo sulfato presente en el residuo de N-acetilgalactosamina, el 4-sulfato de condroitina (sulfato de condroitina A; R1=SO3-Na+, R2=H) y el 6-sulfato de condroitina (sulfato de condroitina C; R1=H, R2= SO3-Na+), los cuales se representan por la siguiente estructura: Chondroitin sulfate from cartilaginous tissue is found mainly in two isomeric forms, which differ in the position of the sulfate group present in the N-acetylgalactosamine residue, chondroitin 4-sulfate (chondroitin sulfate A; R1 = SO3- Na +, R2 = H) and chondroitin sulfate (chondroitin sulfate C; R1 = H, R2 = SO3-Na +), which are represented by the following structure:

OR1 OR1

OR2 OR2

NaO 2C NaO 2 C

O OOR OR

HO HO

O OR

OOR

O OR

OH NHAc OH NHAc

n n

R1 =SO3-Na+,R2 =H R1 = SO3-Na +, R2 = H

R2 =SO3-Na+,R1 =H R2 = SO3-Na +, R1 = H

Además, el sulfato de condroitina puede contener los grupos sulfato en las posiciones 4 y 6 del residuo de N-acetilgalactosamina, (sulfato de condroitina E), o en las posiciones 6 del la N-acetilgalactosamina y 2 del ácido Dglucurónico (sulfato de condroitina D). In addition, chondroitin sulfate may contain sulfate groups at positions 4 and 6 of the N-acetylgalactosamine residue, (chondroitin sulfate E), or at positions 6 of N-acetylgalactosamine and 2 of Dglucuronic acid (chondroitin sulfate D).

El ácido hialurónico es un glicosaminoglicano no sulfatado, de peso molecular comprendido entre 100.000 daltons y 3.000.000 daltons. Su estructura polimérica se caracteriza por un disacárido que se repite, constituido por N-acetil-D-glucosamina y ácido D-glucurónico: Hyaluronic acid is a non-sulfated glycosaminoglycan, of molecular weight between 100,000 daltons and 3,000,000 daltons. Its polymeric structure is characterized by a repeating disaccharide, consisting of N-acetyl-D-glucosamine and D-glucuronic acid:

OHOH

NaO 2C NaO 2 C

HOHO

O OOR OR

HO HO

O OR

OOR

O OR

OH NHAc OH NHAc

n n

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Debido a las cargas negativas presentes en la molécula, tanto el sulfato de condroitina como el ácido hialurónico se encuentran en forma de sal, por ejemplo, en preparaciones comerciales, el sulfato de condroitina y el ácido hialurónico están en forma de sal de sodio. Due to the negative charges present in the molecule, both chondroitin sulfate and hyaluronic acid are in salt form, for example, in commercial preparations, chondroitin sulfate and hyaluronic acid are in the form of sodium salt.

Cuando en la presente invención se habla de “ppm”, se hace referencia a “partes por millón”. Es una unidad de medida de concentración, y se refiere a la cantidad de unidades de sustancia, en la presente invención metanol, que hay por cada millón de unidades del conjunto, en la presente invención de glicosaminoglicano de partida. When "ppm" is referred to in the present invention, reference is made to "parts per million." It is a unit of measurement of concentration, and refers to the amount of units of substance, in the present invention, methanol, which are per million units of the set, in the present invention of starting glycosaminoglycan.

El término “pulverizar” de la presente invención tiene el mismo significado que el término “sprayar”. The term "spray" of the present invention has the same meaning as the term "spray."

Cuando en la presente invención se habla de “rpm”, se hace referencia a “revoluciones por minuto”. When "rpm" is referred to in the present invention, reference is made to "revolutions per minute".

Cuando en la presente invención se habla de “bajo agitación”, se hace referencia a una agitación que permita homogeneizar el glicosaminoglicano, especialmente cuando se pulveriza agua. When the present invention refers to "under agitation", reference is made to agitation that allows the glycosaminoglycan to be homogenized, especially when water is sprayed.

Cuando en la presente invención se habla de “impeller”, se hace referencia a una pala impulsoraamasadora que gira, agitando el glicosaminoglicano. When "impeller" is referred to in the present invention, reference is made to a rotating impeller blade, stirring the glycosaminoglycan.

Cuando en la presente invención se habla de “chopper”, se hace referencia a un sistema de cuchillas que gira a gran velocidad, agitando el glicosaminoglicano y evitando la formación de grandes aglomerados. When "chopper" is referred to in the present invention, reference is made to a blade system that rotates at high speed, agitating the glycosaminoglycan and preventing the formation of large agglomerates.

Para llevar a cabo el procedimiento de la presente invención se puede emplear un equipo que contenga un generador de microondas, una cámara con un recipiente para albergar el glicosaminoglicano y que sea capaz de recibir la radiación de microondas producida por el generador, un sistema de vacío capaz de aplicar un vacío a la cámara, una camisa exterior al recipiente que contiene el glicosaminoglicano, por la que puede circular agua u otro medio para mantener el glicosaminoglicano a la temperatura deseada, unos medios de agitación, por ejemplo un impeler y un chopper que puedan ser introducidos dentro del glicosaminoglicano para llevar a cabo una buena agitación y unos medios para pulverizar agua. Por ejemplo, se puede utilizar un mezclador-granulador comercial, como el mezclador-granulador Collette Ultima-Pro 25 L o el Lbb Bohle VMA 300. To carry out the process of the present invention, equipment containing a microwave generator, a chamber with a container to house the glycosaminoglycan and capable of receiving microwave radiation produced by the generator, a vacuum system can be used capable of applying a vacuum to the chamber, an outer jacket to the container containing the glycosaminoglycan, through which water or other means can be circulated to keep the glycosaminoglycan at the desired temperature, stirring means, for example an impeller and a chopper that they can be introduced into the glycosaminoglycan to carry out good agitation and means to spray water. For example, a commercial mixer-granulator can be used, such as the Collette Ultima-Pro 25 L mixer-granulator or the Lbb Bohle VMA 300.

La potencia del microondas puede ser, por ejemplo, de 915 MHz o de 2.450 MHz, aunque se prefiere que sea de 2.450 MHz. The microwave power can be, for example, 915 MHz or 2,450 MHz, although it is preferred to be 2,450 MHz.

En la etapa en la que se irradia, sin pulverizar agua, la velocidad del impeller puede ser, por ejemplo, de 50 rpm y la del chopper de, por ejemplo, 600 rpm. In the stage in which it is irradiated, without spraying water, the speed of the impeller can be, for example, 50 rpm and that of the chopper of, for example, 600 rpm.

Cuando se pulveriza agua, la velocidad del impeller puede ser, por ejemplo, de 200 ó de 220 rpm y la del chopper de, por ejemplo, 1.500 ó 2.500 rpm. When water is sprayed, the speed of the impeller can be, for example, 200 or 220 rpm and that of the chopper, for example, 1,500 or 2,500 rpm.

La bomba de vacío del equipo debe permiter un vacío o presión de vacío de, por ejemplo, 50 mbar ó 70 mbar. Por ejemplo, se puede utilizar una bomba Watson MarloW. The equipment vacuum pump must allow a vacuum or vacuum pressure of, for example, 50 mbar or 70 mbar. For example, a Watson MarloW pump can be used.

El agua que se pulveriza sobre el glicosaminoglicano puede ser agua libre de iones y de microorganismos, y se puede pulverizar con una bomba peristáltica. The water that is sprayed on the glycosaminoglycan can be water free of ions and microorganisms, and can be sprayed with a peristaltic pump.

Las ppm de metanol del glicosaminoglicano de partida y del glicosaminoglicano al final del procedimiento se pueden determinar mediante cromatografía de gases. The ppm of methanol of the starting glycosaminoglycan and glycosaminoglycan at the end of the process can be determined by gas chromatography.

A partir de los procedimientos descritos en la bibliografía, que utilizan como solvente metanol o etanol desnaturalizado con metanol, no se consigue obtener un glicosaminoglicano, por ejemplo sulfato de condroitina o ácido hialurónico, con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. Generalmente, en los procedimientos en los que se utiliza metanol o etanol desnaturalizado con metanol como solvente, el sulfato de condroitina que se obtiene contiene entre 50 ppm y 2.000 ppm de metanol. Los inventores de la presente invención han encontrado que si se procede a eliminar el metanol de dicho sulfato de condroitina con microondas al vacío, sin pulverizar agua, no se consigue reducir el contenido de metanol por debajo de 45 ppm; por el contrario, si previamente a la acción de microondas al vacío se pulveriza agua bajo agitación, se consigue reducir el contenido de metanol a menos de 10 ppm. From the procedures described in the literature, using methanol or ethanol denatured with methanol as solvent, it is not possible to obtain a glycosaminoglycan, for example chondroitin sulfate or hyaluronic acid, with a methanol content of 10 ppm or less. Generally, in the processes in which methanol or ethanol denatured with methanol is used as a solvent, the chondroitin sulfate obtained contains between 50 ppm and 2,000 ppm of methanol. The inventors of the present invention have found that if the methanol is removed from said chondroitin sulfate under vacuum, without spraying water, it is not possible to reduce the methanol content below 45 ppm; On the contrary, if water is stirred under stirring prior to vacuum microwave action, the methanol content is reduced to less than 10 ppm.

Los inventores de la presente invención han observado que en el procedimiento de la presente invención, cuando se pulveriza agua sobre el glicosaminoglicano sin una buena agitación, se disuelve parte del producto formando grumos. The inventors of the present invention have observed that in the process of the present invention, when water is sprayed on the glycosaminoglycan without good stirring, part of the product is dissolved forming lumps.

Los inventores de la presente invención también han encontrado que es importante que durante el procedimiento la temperatura no alcance o supere los 70ºC. The inventors of the present invention have also found that it is important that during the process the temperature does not reach or exceed 70 ° C.

Los presentes inventores han encontrado que la reducción del contenido de metanol de un glicosaminoglicano por debajo de 10 ppm o hasta 10 ppm, tiene lugar con unas condiciones determinadas: microondas bajo vacío, pulverización de agua, agitación y temperatura inferior a 70ºC. The present inventors have found that the reduction of the methanol content of a glycosaminoglycan below 10 ppm or up to 10 ppm takes place under certain conditions: microwave under vacuum, water spray, stirring and temperature below 70 ° C.

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Así pues, el procedimiento de la presente invención permite: (i) preparar un glicosaminoglicano para alimentación con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm, cumpliendo los requisitos establecidos en la Directiva del Parlamento Europeo y (ii) utilizar metanol o etanol desnaturalizado con metanol en el procedimiento de obtención de un glicosaminoglicano para alimentación, preferentemente sulfato de condroitina o ácido hialurónico, a partir de tejidos animales, lo cual conlleva una reducción de los costes de producción. Thus, the process of the present invention allows: (i) to prepare a glycosaminoglycan for food with a methanol content of less than or equal to 10 ppm, complying with the requirements established in the Directive of the European Parliament and (ii) using methanol or denatured ethanol with methanol in the process of obtaining a glycosaminoglycan for food, preferably chondroitin sulfate or hyaluronic acid, from animal tissues, which leads to a reduction in production costs.

Para preparar tanto un complemento alimenticio como un alimento funcional, el glicosaminoglicano, preferentemente el sulfato de condroitina o el ácido hialurónico, se formula con componentes y/o excipientes adecuados empleados en nutrición. El complemento alimenticio puede estar en forma de comprimidos, cápsulas, soluciones, suspensiones o sobres. El alimento funcional puede estar en forma de yogures, leche, leche fermentada, jugos de frutas, jugos de vegetales, sopas, alimentos deshidratados, galletas o alimentos infantiles. To prepare both a food supplement and a functional food, glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate or hyaluronic acid, is formulated with suitable components and / or excipients used in nutrition. The food supplement may be in the form of tablets, capsules, solutions, suspensions or sachets. The functional food may be in the form of yogurts, milk, fermented milk, fruit juices, vegetable juices, soups, dehydrated foods, cookies or baby foods.

Breve descripción de las Figuras Brief Description of the Figures

La Figura 1 representa los ppm de metanol a lo largo del tiempo en minutos, cuando se somete un sulfato de condroitina a una radiación de microondas bajo vacío sin pulverizar agua o pulverizando agua. Se visualiza a partir de los 375 minutos. Figure 1 represents the ppm of methanol over time in minutes, when a chondroitin sulfate is subjected to microwave radiation under vacuum without spraying water or spraying water. It is displayed after 375 minutes.

La Figura 2 representa los ppm de metanol a lo largo del tiempo en minutos, cuando se parte de un sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 43,8 ppm y se somete a una radiación de microondas bajo vacío sin pulverizar agua o pulverizando agua. Figure 2 represents the ppm of methanol over time in minutes, when starting from a chondroitin sulfate with a methanol content of 43.8 ppm and subjected to microwave radiation under vacuum without spraying water or spraying water .

Descripción detallada de las realizaciones preferidas Detailed description of the preferred embodiments

Ejemplos Examples

Los siguientes ejemplos son meramente ilustrativos y no representan una limitación del alcance de la presente invención. The following examples are merely illustrative and do not represent a limitation of the scope of the present invention.

Ejemplo 1: Preparación de sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 8,3 ppm, a partir de un sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 88 ppm, mediante la acción de microondas bajo vacío y pulverización de agua Example 1: Preparation of chondroitin sulfate with a methanol content of 8.3 ppm, from a chondroitin sulfate with a methanol content of 88 ppm, by microwave action under vacuum and water spraying

10 kg de sulfato de condroitina que contenían 88 ppm de metanol, se introdujeron en el recipiente de un equipo de microondas de 2.450 MHz de frecuencia (Mezclador-granulador Collette Ultima-Pro 25 L) que llevaba incorporada una bomba de vacío. Se procedió a agitar el sulfato de condroitina mediante el impeler (a 200 rpm) y el chopper (a 2.500 rpm) del equipo, manteniendo el sulfato de condroitina a una temperatura inferior a 70ºC, mediante una camisa exterior al recipiente por la que circulaba agua. A continuación, y siempre bajo agitación, se pulverizaron 150 g de agua (1,5% de peso de agua respecto al peso del sulfato de condroitina de partida), se hizo el vacío hasta alcanzar los 50 mbar y se irradió con microondas a una potencia de 40 vatios por kg del sulfato de condroitina de partida (en total 400 vatios). Cuando la temperatura alcanzó los 70ºC, se detuvo el microondas, se rompió el vacío, se enfrió el sulfato de condroitina mediante el agua que circulaba por la camisa externa del recipiente que lo contenía, se volvió a pulverizar 150 g de agua, se hizo el vacío hasta los 50 mbar y se irradió con microondas a una potencia de 40 vatios por kg del sulfato de condroitina de partida (en total 400 vatios). Este ciclo con las etapas de detener el microondas, romper el vacío, enfriar el sulfato de condroitina, pulverizar agua, hacer el vacío e irradiar con microondas, se repitió cada vez que la temperatura alcanzó los 70ºC. Al finalizar el ciclo o ciclos, se detuvo el microondas, se rompió el vacío y se recuperó el sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 8,3 ppm. 10 kg of chondroitin sulfate containing 88 ppm of methanol were introduced into the container of a microwave equipment with a frequency of 2,450 MHz (Mixer-granulator Collette Ultima-Pro 25 L) that had a vacuum pump incorporated. The chondroitin sulfate was stirred by means of the impeller (at 200 rpm) and the chopper (at 2,500 rpm) of the equipment, keeping the chondroitin sulfate at a temperature below 70 ° C, by means of a jacket outside the vessel through which water circulated . Then, and always under stirring, 150 g of water were sprayed (1.5% by weight of water with respect to the weight of the starting chondroitin sulfate), the vacuum was made until reaching 50 mbar and it was irradiated with microwave at a power of 40 watts per kg of the starting chondroitin sulfate (in total 400 watts). When the temperature reached 70 ° C, the microwave was stopped, the vacuum was broken, chondroitin sulfate was cooled by the water flowing through the outer jacket of the container containing it, 150 g of water was sprayed again, the vacuum up to 50 mbar and irradiated with microwave at a power of 40 watts per kg of the starting chondroitin sulfate (in total 400 watts). This cycle with the stages of stopping the microwave, breaking the vacuum, cooling the chondroitin sulfate, spraying water, vacuuming and irradiating with microwaves, was repeated every time the temperature reached 70 ° C. At the end of the cycle or cycles, the microwave was stopped, the vacuum was broken and the chondroitin sulfate with a methanol content of 8.3 ppm was recovered.

Las ppm de metanol se determinaron por cromatografía de gases. The ppm of methanol was determined by gas chromatography.

Ejemplo 2: Preparación de sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 6,4 ppm, a partir de un sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 198 ppm, mediante la acción de microondas bajo vacío y pulverización de agua Example 2: Preparation of chondroitin sulfate with a methanol content of 6.4 ppm, from a chondroitin sulfate with a methanol content of 198 ppm, by microwave action under vacuum and water spraying

Se pesaron 112,5 kg de sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 198 ppm y se dispusieron dentro del recipiente de un equipo de microondas de 2.450 MHz de frecuencia (Mezclador-granulador Lbb Bohle VMA 300) que llevaba incorporada una bomba de vacío. Se procedió a agitar el sulfato de condroitina mediante el impeler (a 50 rpm) y el chopper (a 600 rpm) del equipo, manteniendo el sulfato de condroitina a una temperatura inferior a 70ºC mediante una camisa exterior al recipiente, por la que circulaba agua a 20ºC. A continuación, se hizo el vacío hasta alcanzar los 70 mbar y se irradió con microondas durante 7 horas, a una potencia de 42 vatios por kg del sulfato de condroitina de partida. Al cabo de este tiempo, se detuvo el microondas, se rompió el vacío y se aumentó la velocidad del impeler (a 220 rpm) y del chopper (a 1.500 rpm), manteniendo el sulfato de condroitina a una temperatura inferior a 70ºC, mediante la camisa exterior al recipiente por la que circulaba agua. A continuación, y siempre bajo agitación, se pulverizaron 1,68 kg de agua (1,5% de peso de agua respecto al peso del sulfato de condroitina de partida), se hizo el vacío hasta alcanzar los 70 mbar y se irradió con microondas durante 2 horas, a una potencia de 42 vatios por kg del sulfato de condroitina de partida. Al cabo de este tiempo, se detuvo el microondas y se rompió el vacío. A continuación, y siempre bajo agitación, se pulverizaron 1,68 kg de agua, se hizo el vacío hasta alcanzar los 70 mbar y se conectó el microondas, irradiando durante 2 horas, a una potencia de 42 vatios por kg de 112.5 kg of chondroitin sulfate with a methanol content of 198 ppm were weighed and placed inside the vessel of a microwave equipment of 2,450 MHz frequency (Lbb Bohle VMA 300 mixer-granulator) that had a vacuum pump incorporated . Chondroitin sulfate was stirred by means of the impeller (at 50 rpm) and the chopper (at 600 rpm) of the equipment, keeping the chondroitin sulfate at a temperature below 70 ° C by means of a jacket outside the vessel, through which water circulated at 20 ° C. Then, the vacuum was made until it reached 70 mbar and was irradiated with microwave for 7 hours, at a power of 42 watts per kg of the starting chondroitin sulfate. After this time, the microwave was stopped, the vacuum was broken and the speed of the impeller (at 220 rpm) and the chopper (at 1,500 rpm) was increased, keeping the chondroitin sulfate at a temperature below 70 ° C, by means of outer jacket to the vessel through which water circulated. Then, and always under stirring, 1.68 kg of water (1.5% water weight with respect to the weight of the starting chondroitin sulfate) was sprayed, the vacuum was made until reaching 70 mbar and irradiated with microwave for 2 hours, at a power of 42 watts per kg of the starting chondroitin sulfate. After this time, the microwave stopped and the vacuum broke. Then, and always under stirring, 1.68 kg of water was sprayed, the vacuum was made until it reached 70 mbar and the microwave was connected, radiating for 2 hours, at a power of 42 watts per kg of

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sulfato de condroitina de partida. En total se llevaron a cabo seis ciclos con las siguientes etapas consecutivas por ciclo: detener el microondas, romper el vacío, pulverizar agua, hacer el vacío e irradiar durante 2 horas. Al cabo de los seis ciclos se detuvo el microondas, se rompió el vacío y se recuperó el sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 6,4 ppm. starting chondroitin sulfate. In total, six cycles were carried out with the following consecutive stages per cycle: stop the microwave, break the vacuum, spray water, vacuum and radiate for 2 hours. After six cycles the microwave was stopped, the vacuum was broken and the chondroitin sulfate with a methanol content of 6.4 ppm was recovered.

En este Ejemplo se demuestra que el procedimiento se puede aplicar para preparar grandes cantidades de sulfato de condroitina con un contenido de metanol inferior a 10 ppm. This Example demonstrates that the procedure can be applied to prepare large amounts of chondroitin sulfate with a methanol content of less than 10 ppm.

Ejemplo 3: Estudio de la acción de microondas bajo vacío y sin pulverizar agua sobre un sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 198 ppm Example 3: Study of microwave action under vacuum and without spraying water on a chondroitin sulfate with a methanol content of 198 ppm

El presente Ejemplo se llevó a cabo para estudiar el efecto de la irradiación con microondas bajo vacío sin pulverizar agua, con el objetivo de compararlo con el procedimiento de la presente invención, en el que se pulveriza agua. The present Example was carried out to study the effect of microwave irradiation under vacuum without spraying water, in order to compare it with the process of the present invention, in which water is sprayed.

Se pesaron 10 kg de sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 198 ppm y se dispusieron dentro del recipiente de un equipo de microondas de 2.450 MHz de frecuencia (Mezclador-granulador Collette Ultima-Pro 25 L) que llevaba incorporada una bomba de vacío. Se procedió a agitar el sulfato de condroitina mediante el impeler (a 50 rpm) y el chopper (a 600 rpm) del equipo, manteniendo el sulfato de condroitina a una temperatura inferior a 70ºC, mediante una camisa exterior al recipiente por la que circulaba agua a 20ºC. A continuación, se hizo el vacío hasta alcanzar los 50 mbar y se irradió con microondas durante 8 horas, a una potencia de 40 vatios por kg de sulfato de condroitina de partida (en total 400 vatios). La temperatura del sulfato de condroitina contenido en el recipiente del equipo se mantuvo controlada durante todo el procedimiento para que no superara los 70ºC. Al cabo de este tiempo, se detuvo el microondas, se rompió el vacío y se recuperó el sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 88 ppm. 10 kg of chondroitin sulfate with a methanol content of 198 ppm were weighed and placed inside the container of a 2,450 MHz frequency microwave equipment (Collette Ultima-Pro 25 L mixer-granulator) that had a vacuum pump incorporated . Chondroitin sulfate was stirred by means of the impeller (at 50 rpm) and the chopper (at 600 rpm) of the equipment, keeping the chondroitin sulfate at a temperature below 70 ° C, by means of a jacket outside the vessel through which water circulated at 20 ° C. Then, the vacuum was made to reach 50 mbar and irradiated with microwave for 8 hours, at a power of 40 watts per kg of starting chondroitin sulfate (in total 400 watts). The temperature of the chondroitin sulfate contained in the equipment container was controlled throughout the procedure so that it did not exceed 70 ° C. After this time, the microwave was stopped, the vacuum was broken and the chondroitin sulfate with a methanol content of 88 ppm was recovered.

Ejemplo 4: Estudio de la eliminación de metanol de una muestra de sulfato de condroitina, mediante microondas bajo vacío. Efecto de la pulverización de agua en la eliminación de metanol Example 4: Study of the removal of methanol from a sample of chondroitin sulfate, by microwave under vacuum. Effect of water spraying on methanol removal

Se siguió el procedimiento del Ejemplo 3, pero partiendo de 7 kg de sulfato de condroitina que contenían 588 ppm de metanol, y parando varias veces el procedimiento para recoger muestras. Se obtuvo un sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 91,7 ppm. En la Figura 1 se visualiza el procedimiento a partir de los 375 minutos. Como se puede observar, a los 442 minutos se llegó a un valor de ppm de metanol de 98,7. Al irradiar durante 26 minutos más, sólo se consiguió bajar hasta un valor de ppm de metanol de 91,7. The procedure of Example 3 was followed, but starting from 7 kg of chondroitin sulfate containing 588 ppm of methanol, and stopping the procedure for collecting samples several times. A chondroitin sulfate with a methanol content of 91.7 ppm was obtained. Figure 1 shows the procedure after 375 minutes. As can be seen, at 442 minutes a methanol ppm value of 98.7 was reached. By irradiating for an additional 26 minutes, it was only possible to lower to a methanol ppm value of 91.7.

A continuación, y partiendo del sulfato de condroitina anterior que contenía 91,7 ppm de metanol, se aplicó el procedimiento del Ejemplo 1, es decir, se pulverizó agua y se irradió con microondas bajo vacío. Como se puede observar en la Figura 1, a los 524 minutos (56 minutos con las condiciones del Ejemplo 1) se consiguió bajar el contenido de metanol a 33,3 ppm, y a los 1.019 minutos (551 minutos con las condiciones del Ejemplo 1) se consiguió recuperar un sulfato de condroitina con un contenido de metanol de 8,3 ppm. Then, and starting from the above chondroitin sulfate containing 91.7 ppm of methanol, the procedure of Example 1 was applied, that is, water was sprayed and irradiated with microwave under vacuum. As can be seen in Figure 1, at 524 minutes (56 minutes with the conditions of Example 1) the methanol content was reduced to 33.3 ppm, and at 1,019 minutes (551 minutes with the conditions of Example 1) a chondroitin sulfate with a methanol content of 8.3 ppm was recovered.

Se procedió a repetir el estudio, pero esta vez partiendo de 7 kg de sulfato de condroitina que contenía menos cantidad de metanol, concretamente contenía 43,8 ppm de metanol. Al aplicar el procedimiento del Ejemplo 3 (sin pulverizar agua), se consiguió rebajar muy poco la cantidad de metanol, ya que a los 269 minutos sólo se bajó hasta los 41,3 ppm (ver Figura 2). The study was repeated, but this time starting from 7 kg of chondroitin sulfate that contained less methanol, specifically contained 43.8 ppm of methanol. By applying the procedure of Example 3 (without spraying water), the amount of methanol was reduced very little, since at 269 minutes it was only lowered to 41.3 ppm (see Figure 2).

A continuación, y partiendo del sulfato de condroitina anterior que contenía 41,3 ppm de metanol, se aplicó el procedimiento del Ejemplo 1, es decir, se pulverizó agua y se irradió con microondas bajo vacío. Como se puede observar en la Figura 2, a los 358 minutos (89 minutos con las condiciones del Ejemplo 1) se consiguió bajar el contenido de metanol a 26,9 ppm, y a los 606 minutos (337 minutos con las condiciones del Ejemplo 1) ya se había conseguido bajar el contenido de metanol a 10,8 ppm. Then, starting from the above chondroitin sulfate containing 41.3 ppm of methanol, the procedure of Example 1 was applied, that is, water was sprayed and irradiated with microwaves under vacuum. As can be seen in Figure 2, at 358 minutes (89 minutes under the conditions of Example 1) the methanol content was reduced to 26.9 ppm, and at 606 minutes (337 minutes under the conditions of Example 1) The methanol content had already been lowered to 10.8 ppm.

Teniendo en cuenta estos resultados, se puede concluir que para eliminar el metanol de un glicosaminoglicano, es este caso de un sulfato de condroitina, hasta una cantidad inferior o igual a 10 ppm, es imprescindible la pulverización de agua durante el procedimiento de irradiación con microondas bajo vacío. Taking these results into account, it can be concluded that to remove methanol from a glycosaminoglycan, this is a case of a chondroitin sulfate, up to an amount less than or equal to 10 ppm, water spraying is essential during the microwave irradiation procedure under vacuum

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Claims (17)

REIVINDICACIONES 1.-Procedimiento para preparar un glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm, que comprende las siguientes etapas: 1. Process for preparing a glycosaminoglycan with a methanol content of 10 ppm or less, which comprises the following steps: a) disponer un glicosaminoglicano con un contenido de metanol superior a 10 ppm en un recipiente de un equipo que lleva incorporados un microondas y una bomba de vacío; a) dispose of a glycosaminoglycan with a methanol content greater than 10 ppm in a container of an equipment that incorporates a microwave and a vacuum pump; b) pulverizar agua sobre el glicosaminoglicano de la etapa a), bajo agitación, y b) spray water on the glycosaminoglycan of step a), under stirring, and c) someter el glicosaminoglicano de la etapa b) a una radiación de microondas, bajo vacío y agitación, a una temperatura inferior a 70ºC y durante un periodo de tiempo que permita obtener el glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. c) subjecting the glycosaminoglycan of step b) to microwave radiation, under vacuum and stirring, at a temperature below 70 ° C and for a period of time that allows obtaining the glycosaminoglycan with a methanol content of 10 ppm or less. 2.-El procedimiento según la reivindicación 1, que comprende una etapa adicional antes de la etapa b), en la que el glicosaminoglicano de la etapa a) se somete a una radiación de microondas, bajo vacío y agitación, a una temperatura inferior a 70ºC y durante un periodo de tiempo que permita obtener un glicosaminoglicano con un contenido de metanol comprendido entre 10 ppm y 150 ppm. 2. The method according to claim 1, comprising an additional stage before step b), wherein the glycosaminoglycan of step a) is subjected to microwave radiation, under vacuum and stirring, at a temperature below 70 ° C and for a period of time to obtain a glycosaminoglycan with a methanol content between 10 ppm and 150 ppm. 3.-El procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que en la etapa c), cuando la temperatura alcanza 70ºC, (i) se detiene el microondas; (ii) se rompe el vacío; (iii) se enfría el glicosaminoglicano; (iv) se pulveriza agua, y 3. The method according to claim 1 or 2, wherein in step c), when the temperature reaches 70 ° C, (i) the microwave is stopped; (ii) the vacuum is broken; (iii) the glycosaminoglycan is cooled; (iv) water is sprayed, and (v) se vuelve a conectar el microondas y el vacío. (v) the microwave and vacuum are reconnected. 4.-El procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que en la etapa c), (i) se detiene el microondas; (ii) se rompe el vacío; (iii) se pulveriza agua, y (iv) se vuelve a conectar el microondas y el vacío. 4. The method according to claim 1 or 2, wherein in step c), (i) the microwave is stopped; (ii) the vacuum is broken; (iii) water is sprayed, and (iv) the microwave and vacuum are reconnected. 5.-El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el glicosaminoglicano está en forma de polvo. 5. The process according to any one of claims 1 to 4, wherein the glycosaminoglycan is in powder form. 6.-El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el contenido de metanol del glicosaminoglicano de la etapa a) es superior a 150 ppm. 6. The process according to any one of claims 1 to 5, wherein the methanol content of the glycosaminoglycan of step a) is greater than 150 ppm. 7.-El procedimiento según la reivindicación 6, en el que el contenido de metanol del glicosaminoglicano de la etapa a) está comprendido entre 151 ppm y 2.000 ppm. 7. The process according to claim 6, wherein the methanol content of the glycosaminoglycan of step a) is comprised between 151 ppm and 2,000 ppm. 8.-El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el microondas trabaja a una potencia comprendida entre 10 y 70 vatios por kg de glicosaminioglicano de la etapa a), preferentemente trabaja a 40 vatios por kg de glicosaminioglicano de la etapa a). 8. The method according to any one of claims 1 to 7, wherein the microwave operates at a power between 10 and 70 watts per kg of glycosaminioglycan of step a), preferably works at 40 watts per kg of glycosaminioglycan of stage a). 9.-El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el vacío es de 50 mbar. 9. The method according to any one of claims 1 to 8, wherein the vacuum is 50 mbar. 10.-El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que cuando se pulveriza agua, la cantidad de agua que se pulveriza está comprendida entre 1% y 3% en peso de agua respecto al peso del glicosaminoglicano de la etapa a). 10. The method according to any one of claims 1 to 9, wherein when water is sprayed, the amount of water sprayed is between 1% and 3% by weight of water with respect to the weight of the glycosaminoglycan of the stage to). 11.-El procedimiento según la reivindicación 10, en el que la cantidad de agua que se pulveriza es de 1,5% en peso de agua respecto al peso del glicosaminoglicano de la etapa a). 11. The method according to claim 10, wherein the amount of water that is sprayed is 1.5% by weight of water with respect to the weight of the glycosaminoglycan of step a). 12.-El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el glicosaminoglicano de la etapa c) se formula en un producto adecuado para su uso en un complemento alimenticio o en un alimento funcional. 12. The method according to any one of claims 1 to 11, wherein the glycosaminoglycan of step c) is formulated in a product suitable for use in a food supplement or in a functional food. 13.-El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el glicosaminoglicano se selecciona de entre el grupo formado por sulfato de condroitina, ácido hialurónico, sulfato de dermatano, sulfato de queratano y mezclas de los mismos. 13. The process according to any one of claims 1 to 12, wherein the glycosaminoglycan is selected from the group consisting of chondroitin sulfate, hyaluronic acid, dermatan sulfate, queratane sulfate and mixtures thereof. 14.-El procedimiento según la reivindicación 13, en la que el glicosaminoglicano es sulfato de condroitina. 14. The method according to claim 13, wherein the glycosaminoglycan is chondroitin sulfate. 15.-El procedimiento según la reivindicación 13, en la que el glicosaminoglicano es ácido hialurónico. 15. The method according to claim 13, wherein the glycosaminoglycan is hyaluronic acid. ES 2 390 063 Al ES 2 390 063 Al Sin pulverizar agua Pulverizando agua Without spraying water Spraying water Figura 1 Figure 1 Sin pulverizar agua Without spraying water Pulverizando agua Spraying water Figura 2 Figure 2 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS SPANISH OFFICE OF THE PATENTS AND BRAND N.º solicitud: 201130576 Application no .: 201130576 ESPAÑA SPAIN Fecha de presentación de la solicitud: 13.04.2011 Date of submission of the application: 04.13.2011 Fecha de prioridad: Priority Date: INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA REPORT ON THE STATE OF THE TECHNIQUE 51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional 51 Int. Cl.: See Additional Sheet DOCUMENTOS RELEVANTES RELEVANT DOCUMENTS
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56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas 56 Documents cited Claims Affected
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Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud Category of the documents cited X: of particular relevance Y: of particular relevance combined with other / s of the same category A: reflects the state of the art O: refers to unwritten disclosure P: published between the priority date and the date of priority submission of the application E: previous document, but published after the date of submission of the application
El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº: This report has been prepared • for all claims • for claims no:
Fecha de realización del informe 17.10.2012 Date of completion of the report 17.10.2012
Examinador M. Hernández Cuellar Página 1/4 Examiner M. Hernández Cuellar Page 1/4
INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA REPORT OF THE STATE OF THE TECHNIQUE Nº de solicitud: 201130576 Application number: 201130576 CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD C07H5/00 (2006.01) CLASSIFICATION OBJECT OF THE APPLICATION C07H5 / 00 (2006.01) C08B37/00 (2006.01) F26B5/04 (2006.01) Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación) C08B37 / 00 (2006.01) F26B5 / 04 (2006.01) Minimum documentation sought (classification system followed by classification symbols) C07H, C08B, F26B C07H, C08B, F26B Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados) INVENES, EPODOC, WPI, MEDLINE, BIOSIS, EMBASE, CAPLUS Electronic databases consulted during the search (name of the database and, if possible, terms of search used) INVENES, EPODOC, WPI, MEDLINE, BIOSIS, EMBASE, CAPLUS Informe del Estado de la Técnica Página 2/4 State of the Art Report Page 2/4 OPINIÓN ESCRITA  WRITTEN OPINION Nº de solicitud: 201130576 Application number: 201130576 Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 17.10.2012 Date of Written Opinion: 17.10.2012 Declaración Statement
Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Novelty (Art. 6.1 LP 11/1986)
Reivindicaciones Reivindicaciones 1-15 SI NO Claims Claims 1-15 IF NOT
Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986) Inventive activity (Art. 8.1 LP11 / 1986)
Reivindicaciones Reivindicaciones 1-15 SI NO Claims Claims 1-15 IF NOT
Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986). The application is considered to comply with the industrial application requirement. This requirement was evaluated during the formal and technical examination phase of the application (Article 31.2 Law 11/1986). Base de la Opinión.-  Opinion Base.- La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica. This opinion has been made on the basis of the patent application as published. Informe del Estado de la Técnica Página 3/4 State of the Art Report Page 3/4 OPINIÓN ESCRITA  WRITTEN OPINION Nº de solicitud: 201130576 Application number: 201130576 1. Documentos considerados.-  1. Documents considered.- A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión. The documents belonging to the state of the art taken into consideration for the realization of this opinion are listed below.
Documento Document
Número Publicación o Identificación Fecha Publicación Publication or Identification Number publication date
D01 D01
WO 2006101030 A1 (Q P CORP) 28.09.2006 WO 2006101030 A1 (Q P CORP) 28.09.2006
D02 D02
JP 2008179710 A (SHISEIDO CO LTD) 07.08.2008 JP 2008179710 A (SHISEIDO CO LTD) 07.08.2008
2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración  2. Statement motivated according to articles 29.6 and 29.7 of the Regulations for the execution of Law 11/1986, of March 20, on Patents on novelty and inventive activity; quotes and explanations in support of this statement La presente invención se refiere a un procedimiento para preparar un glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm que comprende las siguientes etapas: a) disponer un glicosaminoglicano con un contenido de metanol superior a 10 ppm en un recipiente de un equipo que lleva incorporados un microondas y una bomba de vacío; b) pulverizar agua sobre el glicosaminoglicano de la etapa a), bajo agitación, y c) someter el glicosaminoglicano de la etapa b) a una radiación de microondas, bajo vacío y agitación, a una temperatura inferior a 70ºC y durante un periodo de tiempo que permita obtener el glicosaminoglicano con un contenido de metanol inferior o igual a 10 ppm. The present invention relates to a process for preparing a glycosaminoglycan with a methanol content of less than or equal to 10 ppm, comprising the following steps: a) arranging a glycosaminoglycan with a methanol content of more than 10 ppm in a container of equipment that it has a microwave and a vacuum pump incorporated; b) spray water on the glycosaminoglycan of stage a), under stirring, and c) subject the glycosaminoglycan of stage b) to microwave radiation, under vacuum and stirring, at a temperature below 70 ° C and for a period of time that allow to obtain glycosaminoglycan with a methanol content less than or equal to 10 ppm. El procedimiento permite formular dicho glicosaminoglicano, preferentemente sulfato de condroitina o ácido hialurónico, en un producto adecuado para su uso en un complemento alimenticio o en un alimento funcional. The process allows to formulate said glycosaminoglycan, preferably chondroitin sulfate or hyaluronic acid, in a product suitable for use in a food supplement or in a functional food. El documento D01 describe un método de fabricación de ácido hialurónico de bajo peso molecular y / o su sal, para su uso en productos alimenticios y cosméticos. De acuerdo con la invención el ácido hialurónico y / o su sal se dispersa en un medio que contiene una solución ácida de agua. El medio puede ser etanol, metanol y acetona. Según el ejemplo preferido de la invención, el agua que contiene 73% de ácido clorhídrico y etanol se calienta a 50 [grados] C y se prepara una solución ácida. La materia prima que contiene hialuronato de sodio en polvo fino (6 kg) se dispersa en el medio. La mezcla se calienta a 50 [grados] C y se agita continuamente. La mezcla se mantiene aparte y el depósito se obtiene por decantación. Posteriormente, el agua precalentada que contiene ácido clorhídrico y etanol se añade al depósito y se agita durante 15 minutos. El método se repite hasta que el ácido clorhídrico restante se elimina. El residuo se seca al vacío durante 6 horas y se obtiene ácido hialurónico de bajo peso molecular. Document D01 describes a method of manufacturing low molecular weight hyaluronic acid and / or its salt, for use in food and cosmetic products. According to the invention, hyaluronic acid and / or its salt is dispersed in a medium containing an acidic solution of water. The medium can be ethanol, methanol and acetone. According to the preferred example of the invention, water containing 73% hydrochloric acid and ethanol is heated to 50 [degrees] C and an acid solution is prepared. The raw material containing fine sodium hyaluronate powder (6 kg) is dispersed in the medium. The mixture is heated to 50 [degrees] C and stirred continuously. The mixture is kept apart and the deposit is obtained by decantation. Subsequently, the preheated water containing hydrochloric acid and ethanol is added to the reservoir and stirred for 15 minutes. The method is repeated until the remaining hydrochloric acid is removed. The residue is dried under vacuum for 6 hours and low molecular weight hyaluronic acid is obtained. El documento D02 describe método para la producción de ácido hialurónico de bajo peso molecular a un bajo coste con un alto rendimiento sin causar la decoloración del ácido hialurónico, que es adecuado para una producción industrial en masa. El polvo de ácido hialurónico se hidroliza en presencia de un ácido por irradiación con microondas en una sustancia de bajo peso molecular en un estado en el que se dispersa el polvo de ácido hialurónico en un medio líquido que contiene agua, para no disolver el polvo de ácido hialurónico. El medio que contiene el agua medio líquido es un solvente orgánico de una sola fase que no disuelve el polvo de ácido hialurónico pero si el agua y un ácido. El solvente orgánico se selecciona preferiblemente entre metanol, etanol, propanol e isopropanol Document D02 describes a method for the production of low molecular weight hyaluronic acid at a low cost with a high yield without causing the discoloration of hyaluronic acid, which is suitable for mass industrial production. The hyaluronic acid powder is hydrolyzed in the presence of an acid by microwave irradiation in a low molecular weight substance in a state in which the hyaluronic acid powder is dispersed in a liquid medium containing water, so as not to dissolve the powder of hyaluronic acid. The medium containing the liquid medium water is a single-phase organic solvent that does not dissolve the hyaluronic acid powder but the water and an acid. The organic solvent is preferably selected from methanol, ethanol, propanol and isopropanol 1.-NOVEDAD Ninguno de los documentos citados en la opinión escrita y en el informe del estado de la técnica describe un que comprenda la combinación de etapas y condiciones correspondientes al procedimiento de la solicitud de patente. En consecuencia, en opinión de esta Oficina, las reivindicaciones 1-15 cumplen con el requisito de novedad establecido en el Art. 6.1 11/1986. 1.-NOVELTY None of the documents cited in the written opinion and in the state of the art report describes one that includes the combination of stages and conditions corresponding to the procedure of the patent application. Consequently, in the opinion of this Office, claims 1-15 comply with the requirement of novelty established in Art. 6.1 11/1986. 2.-ACTIVIDAD INVENTIVA 2.-INVENTIVE ACTIVITY En cuanto a la actividad inventiva, la solicitud plantea el problema de la reducción del contenido de metanol de los glicosaminoglicanos a. La solución es el procedimiento propuesto en la invención que se dearrolla en unas condiciones determinadas: microondas bajo vacio, pulverización de agua, agitación y temperatura inferior a 70ºC. Como resultado se obtienen glicosaminoclicanos con una cantidad de metanol inferior o igual a 10 ppm. As for the inventive activity, the application raises the problem of reducing the methanol content of glycosaminoglycans a. The solution is the procedure proposed in the invention that is developed under certain conditions: microwave under vacuum, water spray, stirring and temperature below 70 ° C. As a result, glycosaminoclycans with an amount of methanol less than or equal to 10 ppm are obtained. De ninguno de los documentos citados, tomados solos o en combinación, se desprende de forma evidente que tal procedimiento tenga como efecto el resultado obtenido. Por tanto, en opinión de esta Oficina, las reivindicaciones 1-15 cumplen con el requisito de actividad inventiva establecido en el Art. 8.1 11/1986. None of the documents cited, taken alone or in combination, clearly shows that such a procedure has the effect of the result obtained. Therefore, in the opinion of this Office, claims 1-15 comply with the inventive activity requirement established in Art. 8.1 11/1986. Informe del Estado de la Técnica Página 4/4 State of the Art Report Page 4/4
ES201130576A 2011-04-13 2011-04-13 GLYCOSAMINOGLYCANS WITH VERY LOW METHANOL CONTENT. Withdrawn - After Issue ES2390063B1 (en)

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