ES2379253T3 - Composiciones repelentes de alomonas para luchar contra arácnidos - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende una de alomona repelente de pato derivada de secreciones de una glandula uropigial de un pato, que comprende adipato de bis (2-etilhexilo) y diisobutirato de 2, 2, 4-trimetil-1, 3-pentanodiol y/o sus derivados y/o mezclas de adipato de bis (2-etilhexilo) o diisobutirato de 2, 2, 4-trimetil-1, 3-pentanodiol con uno o mas derivados de adipato de bis (2-etilhexilo) y diisobutirato de 2, 2, 4-trimetil-1, 3-pentanodiol, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis (2-etilhexilo) y diisobutirato de 2, 2, 4-trimetil-1, 3-pentanodiol.

Description

Composiciones repelentes de alomonas para luchar contra aracnidos

La presente invenci6n se refiere a composiciones de alomonas derivadas de la glandula uropigial de patos para tratar aracnidos

5 Tecnica anterior

Los aracnidos son una clase de artr6podos relacionados con insectos y crustaceos, pero que tienen ocho patas, ninguna ala o antena, dos regiones corporales y un mecanismo de respiraci6n de un tubo traqueal o una fuente pulmonar. En la clase de los aracnidos estan incluidas las aranas, los acaros, las garrapatas, aranas de patas largas ("papa piernas largas") y escorpiones.

10 Ciertos aracnidos particulares son una molestia para los vertebrados. Como por ejemplo la arana viuda negra es venenosa y quince veces mas t6xica que el veneno de la serpiente de cascabel. La arana viuda negra no tiene ninguna preferencia por ningun anfitri6n en particular y, por lo tanto, mordera a cualquier sujeto. Aunque en muchos casos el veneno de una mordedura de una arana viuda negra no es mortal aun existen algunos casos en los que ha ocurrido mortalidad en individuos j6venes o muy viejos.

15 Esto contrasta con las garrapatas, en las cuales los ratones y los ciervos son los animales mas comunmente infectados los cuales sirven como anfitriones para las garrapatas. Es bien sabido que las garrapatas son la causa de la enfermedad de Lyme que provoca una enfermedad inflamatoria aguda caracterizada por cambios en la piel, inflamaci6n de las articulaciones y sintomas semejantes a la gripe provocados por la bacteria Borrelia burgdorferi transmitida por la picadura de una garrapata de ciervo. Es bien sabido que la enfermedad de Lyme ha sido vinculada

20 a un sindrome cr6nico de sufrimientos difusos, dolores, problemas de memoria y otros varios problemas medicos que pueden ocurrir en seres humanos durante meses e incluso anos. El numero de casos de enfermedad de Lyme ha aumentado en los ultimos anos y s6lo en Estados Unidos se inform6 de un alto record de 17.730 casos en el ano 2000.

Otra categoria de aracnidos son los acaros, los cuales son parasitos y especificos del anfitri6n. Ciertos acaros

25 migran desde las aves, roedores, comida, materia vegetal y polvo casero y pueden atacar y causar molestias a los seres humanos. Hay diferentes categorias de acaros que incluyen los acaros del norte de las aves de corral (Omithonyssus sylviarum), acaros del pollo (Dermanyssus gallinae), acaros de la rata tropical (Omithonyssus bacoti), acaros del rat6n casero (Uiponyssoides sanuineus), acaros de los foliculos (Demodex Folliculorum), acaros del prurito o de la sarna (Sarcoptes scabiei hominis), acaros del prurito de la paja (Pyemotes tritici), acaros del grano

30 (Acarus siro U.) y del moho (Tyrophagus putrescentiae) y acaros del polvo casero (Dermatophagoides sp.).

Los acaros tambien infectan a una variedad de otros animales. Los adultos pueden encontrarse en una variedad de localizaciones, mientras que los huevos son usualmente depositados en la superficie del suelo, en grietas y hendiduras y en algunos casos bajo la piel del anfitri6n que infestan. Se sabe que los acaros de la sarna excavadores (Sarcoptes scabiei) asi como los no excavadores (Chorioptes Boris) infestan a muchos animales

35 incluyendo a los hombres. Los acaros de la sarna felina (Notoedres cati), aunque bastante raros son muy contagiosos e infectan gatitos, gatos y conejos. Psoroptes ovis es el acaro que infecta a las ovejas. Psoroptes bovis es el acaro que infecta al ganado vacuno y Psoroptes cuniculi es el acaro que infecta a los conejos. El grupo de acaros de los Psoroptes provoca sarna en los animales infectados.

Demodex folliculorum, el acaro con forma de cigarro causa la demodecosis canina. Esta enfermedad de la piel en

40 perros es dificil de tratar ya que los sintomas de la piel pueden dar lugar a una forma escamada o pustulosa. En general, se requiere tratamiento repetido con antibi6ticos y antihistaminicos. Dermanyssus gallinae, comunmente conocido como acaro del pollo o acaro rojo del pollo, es el acaro rojo de las aves de corral y normalmente se alimenta de aves s6lo por la noche. Los gatos y los perros pueden llegar a ser infectados como resultado del contacto con las aves de corral.

45 Por ejemplo, las aves, gatitos, gatos y conejos de compania pueden ser infestados por los acaros. Recientemente, se ha informado que los jerbos de compania tambien llegan a ser infestados con acaros del norte de las aves de corral y acaros del pollo. Los acaros que chupan la sangre tambien pueden transmitir encefalitis y pueden causar dermatitis y acariasis del acaro de las aves de corral.

Los acaros son parasitos y pueden alimentarse de su anfitri6n chupando su sangre y causando anemia, purito,

50 dermatitis y sarna. Su naturaleza parasitaria provoca que ciertos acaros sean una amenaza, no s6lo para los seres humanos, sino especialmente para ciertas industrias tales como la industria de las aves de corral.

Es bien sabido que el acaro del norte de las aves de corral (Omithonyssus sylviarum) es un parasito externo de las aves de corral con grandes poblaciones capaces de reducir la producci6n de huevos hasta 10% a 15%. El ciclo de vida total puede completarse en un ave y consiste en huevo, larva, estadios ninfales y adulto. El adulto de ocho

55 patas tiene una longitud de aproximadamente 0,98 mm y es de color rojo oscuro a negro. El ciclo de vida total puede completarse en una semana. 2

Ademas del acaro del norte de las aves de corral, el acaro del pollo (Dermanyssus gallinae) chupa la sangre de las aves de corral durante la noche y permanece recluido durante el dia. Estos acaros son en general de color gris y se vuelven rojos despues de alimentarse. Estos acaros apenas pueden verse sin una lente de aumento. Cuando hay una infestaci6n grave de acaros, se reduce la ganancia de peso en varias aves de corral asi como la producci6n de huevos. En algunos casos, con una gran infestaci6n de acaros, las aves j6venes y las gallinas ponedoras pueden realmente morir por la anemia inducida por los acaros.

La infestaci6n de acaros en granjas de aves de corral es un problema grave y da lugar no s6lo a una perdida de la producci6n de huevos, sino tambien a una perdida de los pollos de engorde en si mismos. La industria de las aves de corral se encuentra actualmente a si misma perdiendo enormes cantidades de dinero debido a la infestaci6n de acaros. No hay ninguna soluci6n facil para este problema, ya que en muchos casos una alimentaci6n higienica requiere que no puedan usarse todos los productos quimicos usados para matar acaros en presencia de aves de corral vivas.

Para tratar el problema de los acaros estan disponibles muchos productos quimicos. Estos productos incluyen Actograd (Virbac), Tugon 80 (Bayer), Sebacil (Bayer) y Etcodex (Hoechst), por mencionar unos pocos acaricidas. Pero, como se mencion6 anteriormente, estos productos no pueden usarse en presencia de aves de corral y, por tanto, el criador de pollos tiene que separar los pollos y gallinas de sus gallineros cuando usa estos productos.

Ademas de acaricidas, hay otras alternativas para tratar a los acaros y a varios otros aracnidos. Estos tratamientos incluyen tratamiento mediante un gas para desinfectar los gallineros de aves de corral y el uso de polvo de silice. Sin embargo, el primer metodo es bastante costoso y requiere que las aves de corral se alojen en un entorno diferente durante el tratamiento. Asimismo, las moleculas gaseosas usadas en este tratamiento son con frecuencia perjudiciales para la salud de los seres humanos y de los animales.

El tratamiento con polvo de silice puede hacerse en presencia de las aves de corral, pero requiere una muy fuerte dosificaci6n y se esta obligado a saturar con polvo de silice todos los gallineros. Por otra parte, se sabe que el polvo de silice provoca varias enfermedades del pulm6n tanto en aves como en hombres.

Uno de los problemas mas prominentes del tratamiento quimico y con polvo de silice es que se sabe que los acaros habitan en grietas y en hendiduras de los gallineros y, por tanto, son dificiles de matar usando tratamiento con acaricidas quimicos y polvo de silice.

Debido a la infestaci6n de acaros en aves de corral, los granjeros de aves de corral pierden entre el 10% y el 40% de su negocio. Una vez que los acaros estan presentes en una bandada es imposible exterminar a los acaros en un intento con un tratamiento. De hecho, en los Estados Unidos, cuando un gallinero es infestado con acaros en una escala de 10 durante mas de cuatro meses, siendo la tasa media de 8, el gallinero de pollos o gallinas es completamente destruido. Despues de la destrucci6n del gallinero de pollos o gallinas, el suelo en el cual se construy6 el gallinero, asi como 400 metros a su alrededor, es entonces esterilizado y luego se construye un nuevo gallinero. Puede apreciarse que este procedimiento, aunque bastante eficiente para deshacerse de la infestaci6n con acaros, es muy costoso.

Por tanto, existe una necesidad en esta tecnica de encontrar una mejor soluci6n al problema de tratar aracnidos, y especialmente Dermanyssus gallinae, en la industria de las aves de corral, sin danar a otros animales o a los hombres.

Las secreciones producidas por las diferentes glandulas que pueden intervenir en una comunicaci6n quimica se conocen como senales quimicas. Entre las senales quimicas estan las que participan estrictamente en comunicaciones intraespecificas, las cuales pueden distinguirse de las que estan implicadas en las comunicaciones interespecificas.

Aquellas senales quimicas que participan en comunicaciones intraespecificas se denominan feromonas. Por definici6n, las feromonas son sustancias liberadas por el cuerpo que provocan una reacci6n predecible en otro individuo de la misma especie, sustancia que sirve, por ejemplo, como agente atrayente especifico, agente comunicador social, estimulante sexual y semejantes. Se sabe que varias glandulas diferentes producen feromonas en mamiferos macho, tales como las glandulas salivales y las submaxilares, las glandulas paratiroides y las glandulas sebaceas. En las patentes de EE.UU. nOs 6.054.481, 6.077.867 y 6.169.113, se describen varias aplicaciones de las feromonas.

Zeman, en Experimental & Applied Acarology, 5 (1988) 163-173, describe una composici6n de kairomonas derivada de las glandulas uropigiales, las cuales son diesteres de acidos grasos que son responsables de la alimentaci6n de los acaros en la piel de las aves de corral.

La glandula uropigial del zambullidor orejudo que produce grandes cantidades de alcanos esta descrita por Cheesbrough y Kolattuduky, en The Journal of Biochemistry, vol 264 (1998) 2738-2743.

La publicaci6n de patente de EE.UU. 2001/0021378 A1 describe una composici6n plaguicida para luchar contra los insectos daninos del orden Acarina, que comprende 0,1 a 20% en peso de al menos un compuesto plaguicidamente 3 5

activo, 0,01% a 30% en peso de una o mas sustancias senalizadoras seleccionadas del grupo que consiste en feromonas, kairomonas y atrayentes, 40% a 98% en peso de un agente o mezcla absorbente de la radiaci6n UV y aditivos seleccionados del grupo que consiste en agentes espesantes reguladores de la viscosidad, cargas, disolventes y otros agentes auxiliares de la formulaci6n.

La patente de EE.UU. 4.853.217 describe 5,9-dimetilheptadecano como un agente atrayente en una composici6n para luchar contra la polilla de la ampolla de las hojas de peral Ueucoptera scitella.

Las feromonas sexuales masculinas y femeninas producidas por Acarus immobilis son descritas por Sato et al., en Naturrissen-schaften, 80 (1993) 34-36.

Bohnet et al., describen diesteres de 3-hidroxiacidos grasos que se producen en anades reales hembra durante la estaci6n de apareamiento.

Aquellas senales quimicas que participan en comunicaciones interespecificas se agrupan en la categoria general de senales aleloquimicas.

Las senales aleloquimicas se dividen en general en dos subgrupos y su funci6n afecta a la relaci6n entre el emisor de la senal y el receptor del mensaje. Cuando existe una senal quimica que es emitida, que esta en relaci6n favorable con el emisor, el subgrupo se conoce como una alomona. Por definici6n, una alomona es una hormona o sustancia producida por una especie que tiene un efecto sobre otras especies, especialmente para beneficiar a la especie que emite. Por ejemplo, las alomonas atrayentes emitidas por ciertas flores pueden atraer a varios insectos que pueden polinizar a estas flores.

En contraste, cuando la senal quimica emitida esta en relaci6n favorable con el receptor el subgrupo se conoce como una kairomona. Una kairomona, por definici6n, es una feromona o sustancia que puede atraer a otras especies y algunas veces incluso a enemigos naturales. Las kairomonas estan algunas veces implicadas en la localizaci6n de un anfitri6n particular por un parasito. Por ejemplo, el acido lactico que es emitido por la piel de se humano es un kairomona conocida por varias Culicidae.

Las alomonas y las kairomonas son sustancias naturales que se degradan no causando ningun dano en el usuario. Estos compuestos quimicos no causan inmunidad y son seguros.

Asi, en un aspecto, la presente invenci6n proporciona una alomona repelente de pato, que puede usarse para tratar las infestaciones con aracnidos y la cual es segura y efectiva y puede usarse en presencia de otros animales, incluyendo a los seres humanos.

En otro aspecto, la presente invenci6n se refiere a una composici6n de una alomona repelente de pato para uso en el tratamiento o prevenci6n de los acaros del pollo o de acaros del norte de las aves de corral en aves tales como gallinas, pollos, pavos, patos, gansos y polluelos.

Estos y otros objetos se consiguen mediante la presente invenci6n como se pone en evidencia mediante el sumario de la invenci6n, la descripci6n de las realizaciones preferidas y las reivindicaciones.

Sumario de la invencian

La presente invenci6n se refiere asi a una alomona repelente de pato. La presente descripci6n describe una kairomona de pollo atrayente. Las alomonas y las kairomonas se derivaron de la glandula uropigial de patos y pollos, respectivamente.

La composici6n de alomona repelente de pato de la presente invenci6n puede usarse para repeler aracnidos tales como aranas, garrapatas y acaros y asi impide que estos aracnidos muerdan a o se alimenten de los anfitriones.

En otro aspecto, la presente descripci6n describe una composici6n de kairomona que puede usarse para atraer aracnidos. Una vez que los aracnidos son atraidos por esta kairomona, que puede ademas fijarse en una trampa usando un material adhesivo o puede inducir que el acaro se alimente de un acaricida que esta en la trampa, la kairomona induce el comportamiento alimentario y asi es posible potenciar que el acaro quede pegado sobre cualquier clase de superficie adhesiva tales como, por ejemplo, peliculas de polietileno.

En otro aspecto, la presente invenci6n proporciona una composici6n de alomona repelente de pato que comprende adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol y/o sus derivados, asi como mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol con uno o mas derivados, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol.

En otro aspecto, la presente invenci6n proporciona una composici6n de kairomona atrayente de pollo que comprende 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano y/o sus derivados y/o sus is6meros, asi como mezclas de uno o mas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano con uno o mas derivados de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), 4 5

octadecano con uno o mas is6meros de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano y/o uno o mas is6meros de los derivados de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano.

Tambien se describe una composici6n de kairomona atrayente de pollo que comprende entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 1-heptadeceno, entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadecano, entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de octadecano y/o derivados esteres, o sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de 1heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano, y/o sus is6meros, asi como mezclas de uno o mas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano con uno o mas derivados esteres, o sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano con uno o mas is6meros de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano y/o uno o mas is6meros de los derivados de 1heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano.

Las composiciones de alomona y kairomona descritas anteriormente pueden tener varias concentraciones de 0,1% a 99,9%. Sin embargo, cuando se usan las concentraciones especificas descritas en la presente memoria esta presente un afecto acrecentado. Por otra parte, en la composici6n de kairomona al menos dos de los compuestos seleccionados de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano pueden usarse en la formulaci6n y aun posee un efecto de kairomona.

En otro aspecto, la presente invenci6n se refiere a una alomona repelente de pato como se describi6 anteriormente para usar para repeler aracnidos. Los aracnidos incluyen, pero no se limitan a, Dermanyssus gallinae, una garrapata

o un Ornithonyssus.

En otro aspecto, la presente invenci6n tambien se refiere a una composici6n de alomona repelente de pato que comprende entre 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y entre 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol y/o sus derivados, asi como mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) o diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol con uno o mas derivados de adipato de bis(2etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol, para usar en el tratamiento de acaros de pollo o de acaros del norte de las aves de corral en gallinas, pollos y polluelos.

Ademas, se describe una composici6n de kairomona atrayente de pollo que comprende entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 1-heptadeceno, entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadecano, entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de octadecano, asi como mezclas de uno o mas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano con uno o mas derivados esteres, o sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano con uno o mas is6meros de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano y/o uno o mas is6meros de los derivados de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano, para atraer Dermanyssus en edificios o gallineros.

Breve descripcian de los dibujos

La figura 1 es un perfil de un espectro de cromatografia de gases/espectroscopia de masas de los componentes encontrados en las secreciones de patos y pollos de la glandula uropigial.

La figura 2 es otro perfil de un espectro de cromatografia de gases/espectroscopia de masas de los componentes encontrados en las secreciones de patos y pollos de la glandula uropigial.

La figura 3 es todavia otro perfil de un espectro de cromatografia de gases/espectroscopia de masas de los componentes encontrados en las secreciones de patos y pollos de la glandula uropigial.

La figura 4 es un grafico que muestra los tipos de disolventes usados. Chl representa cloroformo, D-eth representa dietil eter, Acet representa acetona y Eth 60% representa etanol al 60%. D Quiere decir la proporci6n de alimentaci6n de acaros con piel lavada con el disolvente, _ representa la proporci6n de alimentaci6n de acaros despues de depositar sobre la piel un producto lavado con la otra piel, D representa la proporci6n de alimentaci6n de acaros despues de depositar sobre la piel lavada un producto que fue lavado y enjuagado con agua y D quiere decir la proporci6n de alimentaci6n de acaros para la piel natural de pollo.

La figura 5 es un grafico que muestra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae con varias concentraciones de extractos derivados de la glandula uropigial de pollo o pato con diferentes concentraciones de extracto diluido con alcohol solubilizado usando diluciones 1/10 a 1/160. El primer grupo de extractos se ensay6 con piel de pollo lavado. El segundo grupo de extractos se ensay6 con piel de pato lavada. El tercer grupo de extractos

se ensay6 con piel de pollo no lavada y el cuarto grupo de extractos se ensay6 con piel de pato no lavada. Estos extractos fueron de la glandula uropigial de pato; uno se solubiliz6 en alcohol (D) y el otro en acetonitrilo (_).

La figura 6 es un grafico que ilustra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae con extractos de glandula uropigial de pato (D) o de pollo (_). Solo representa alimentaci6n de los acaros sobre piel lavada; GL Ca representa la alimentaci6n de los acaros con piel lavada mas el extracto de las glandulas uropigiales de pato; LCa representa la alimentaci6n de los acaros de piel lavada mas el producto de lavados del pato. GI Pou representa la alimentaci6n de los acaros sobre piel lavada mas el extracto de la glandula uropigial de pollo. Lpou representa la alimentaci6n de los acaros de piel lavada mas el producto de lavados del pollo.

La figura 7 es un grafico que muestra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae durante un periodo de 11 dias despues de que se diera a las gallinas en el pienso la alomona repelente de pato de la presente invenci6n.

La figura 8 es un grafico que muestra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae durante un periodo de 11 dias despues de que se diera a los pollos en la comida la alomona repelente de pato de la presente invenci6n.

La figura 9 es un grafico que muestra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae durante un periodo de 11 dias despues de que se diera a las gallinas en el pienso la alomona repelente de pato de la presente invenci6n y sangre neutra. Por "sangre neutra" se quiere decir la sangre de un pollo que ha sido alimentado con comida normal.

La figura 10 es un grafico que ilustra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae durante un periodo de 11 dias usando la sangre de gallinas suplementada con la alomona repelente de pato de la presente invenci6n.

La figura 11 son varios graficos en dias diferentes que ilustran el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae con seis grupos diferentes ensayados con un placebo o con la alomona repelente de pato de la presente invenci6n colocada en agua o en el pienso del dia 0 al dia 6.

La figura 12 son varios graficos en dias diferentes que ilustran el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae con seis grupos diferentes ensayados con un placebo o con la alomona repelente de pato de la presente invenci6n colocada en agua o en el pienso del dia 10 al dia 20.

La figura 13 es un grafico en dias diferentes que ilustra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae en polluelos. D Representa el testigo; _ representa la administraci6n de la alomona repelente de pato en el pienso que

se par6;

representa la administraci6n de la alomona repelente de pato de la invenci6n a los polluelos.

La figura 14 es un grafico que ilustra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae en piel normal de pollo

con plumas y piel de pollo desnuda sin plumas. D Representa el testigo;

representa la administraci6n de la alomona repelente de pato de la invenci6n.

La figura 15 es un grafico que ilustra el porcentaje de alimentaci6n de Dermanyssus gallinae en polluelos durante un

periodo de veinticuatro dias. D Representa el testigo;

representa la administraci6n de la alomona repelente de pato de la invenci6n.

La figura 16 es un grafico que muestra el grado de infestaci6n el dia 0 antes del tratamiento y el dia 35 despues del tratamiento con alomona repelente de pato (DRA) de acaros de pollo para cada una de las siete filas de gallinas tratadas.

La figura 17 es un grafico que muestra el porcentaje de infestaci6n de acaros de pollo en cada jaula (coop) para cada una de las siete filas de gallinas el dia 0 (sin tratar) y el dia 35 despues del tratamiento con alomona repelente de pato (DRA).

La figura 18 es un grafico que muestra el numero de colonias por jaula (coop) de acaros de pollo el dia 0 antes del tratamiento y el dia 35 despues del tratamiento con alomona repelente de pato (DRA) en las siete filas de gallinas que se ensayaron.

La figura 19 es un grafico que muestra el diametro de los acaros de pollo el dia 0 antes del tratamiento y el dia 35 despues del tratamiento con alomona repelente de pato (DRA) para las siete filas de gallinas que se ensayaron.

La figura 20 es un grafico que muestra la infestaci6n de los excrementos de las gallinas el dia 0 antes del tratamiento y el dia 35 despues del tratamiento con alomona repelente de pato (DRA) para las siete filas de gallinas que se ensayaron.

La figura 21 es un grafico que muestra el porcentaje de alimentaci6n de acaros de pollo en polluelos con la alomona repelente de pato (DRA) extraida de los excrementos de las gallinas. El producto DRA se extrajo con alcohol.

La figura 22 es un grafico que muestra el porcentaje de infestaci6n de acaros de pollo en soportes de jaula (coop) para cada una de las siete filas de gallinas el dia 0 (sin tratar) y el dia 35 despues del tratamiento con alomona repelente de pato (DRA).

La figura 23 es un grafico que muestra el porcentaje de alimentaci6n de acaros de pollo en polluelos que fueron tratados con la alomona repelente de pato (DRA) en diferentes diluciones, extraida de las glandulas uropigiales de gallinas sometidas a autopsia despues del tratamiento, el dia 35.

La figura 24 es un espectrografico GC/MS de la alomona repelente de pato (DRA) extraida de gallinas que fueron sometidas a autopsia a los 35 dias despues del tratamiento. El pico de DRA puede verse en este espectrografico a alrededor de 13,23.

La figura 25 es una curva que muestra la cantidad de producci6n de huevos de las gallinas tratadas con alomona repelente de pato (DRA). . Representa la edad en porcentaje de los huevos que se depositaron; D representa el

peso medio de los huevos; ----representa el peso de las gallinas vivas (LW); y

representa el peso te6rico de las gallinas vivas (LW).

La figura 26 es una curva te6rica de la producci6n de huevos de gallinas normales que no fueron tratadas con alomona repelente de pato (DRA).

Realizaciones preferidas de la presente invencian

Cuando se usa en la presente memoria, el termino "aracnidos" engloba todas las clases de Arachnida que incluyen el orden Arachnida, Parasitiformes y Acarini. Asi, en la clase Arachnida se incluyen las aranas asi como todos los tipos de acaros, que incluyen los sub6rdenes de Mesostigmata, Astigmata y Prostigmata.

Cuando se usan en la presente memoria, las palabras "ave" y "aviar" se usan intercambiablemente y engloban a cualquier animal de sangre caliente con plumas y alas que pone huevos y usualmente es capaz de volar. Ejemplos de aves incluyen, pero no se limitan a, polluelos, pollos, gallinas, patos, gansos, pavos y semejantes.

Por "kairomona" se quiere decir un compuesto semioquimico que es producido por un organismo para inducir una respuesta en un organismo de otra especie. Produce una respuesta que es desfavorable para el emisor.

Por "alomona" se quiere decir un compuesto semioquimico que es producido por un organismo para inducir una respuesta en un organismo de otra especie. Produce una respuesta favorable para el emisor. Por ejemplo, algunas plantas producen alomonas que repelen a los insectos y evitan que se alimenten de ellas.

Mediante el termino "disoluci6n" se quiere decir un s6lido que se dispersa mediante un liquido disolviendose en el o estando en suspensi6n.

Mediante "composici6n reforzante" se quiere decir una composici6n activa que es especifica especie-especie en aves y que puede usarse para reforzar o actuar sinergicamente con la composici6n de alomona o kairomona para aumentar la efectividad de la composici6n en especies especificas.

Cuando se hace referencia a las mezclas de los compuestos descritos en la presente memoria con uno o mas de sus derivados y uno o mas is6meros se quiere decir que la composici6n puede incluir s6lo, por ejemplo, adipato de bis(2-etilhexilo) y un derivado alcohol de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol o un derivado alcohol de adipato de bis(2-etilhexilo) y un is6mero del derivado alcohol de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol. Los derivados e is6meros a los que se hace referencia en la presente memoria tienen los mismos porcentajes en peso que se mencionaron para sus contrapartidas quimicas. Por ejemplo, los derivados e is6meros de adipato de bis(2etilhexilo) de aproximadamente 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso) y de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3pentanodiol de aproximadamente 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso), tienen la misma concentraci6n de entre 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso). La misma l6gica tambien aplica a la composici6n de kairomona.

Cuando se usa en la presente memoria, el termino "is6meros" incluye isomerismo estructural e isomerismo espacial y se refiere a los is6meros de la composici6n de alomona y de la composici6n de kairomona, asi como a sus derivados.

Mas especificamente, la presente descripci6n describe la identificaci6n de una composici6n de alomona y una composici6n de kairomona que se derivan de secreciones de alrededor de la glandula uropigial de aves.

La composici6n de alomona de la presente invenci6n comprende una mezcla de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol y/o sus derivados y/o mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) o diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol con uno o mas derivados de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol.

La composici6n de alomona de la presente invenci6n comprende una mezcla de entre 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y entre 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4trimetil-1,3-pentanodiol y/o sus derivados y/o mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) o diisobutirato de 2,2,4-trimetil1,3-pentanodiol con uno o mas derivados de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3pentanodiol, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol.

La composici6n de kairomona descrita en esta descripci6n comprende una mezcla de entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 1-heptadeceno, entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadecano, de aproximadamente 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de octadecano y/o sus derivados y/o sus is6meros y/o mezclas de uno o mas de 1heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano con uno o mas derivados esteres, o sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano con uno o mas is6meros de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano y/o uno o mas is6meros de los derivados de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano.

Las composiciones de alomona y kairomona descritas anteriormente pueden tener concentraciones variables de 0,1% a 99,9%. Sin embargo, cuando se usan las concentraciones especificas descritas en la presente memoria se presenta un efecto acrecentado. Por otra parte, en la formulaci6n de la composici6n de kairomona pueden usarse al menos dos de los compuestos seleccionados de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano y aun posee un efecto de kairomona.

Las composiciones de alomona o kairomona tambien pueden unirse a un soporte quimico siempre que se preserve la estructura bioactiva de la composici6n. Tales moleculas soporte incluyen, pero no se limitan a, resinas, liposomas, compuestos corona, proteinas soporte, cualquier clase de polimero y moleculas semejantes.

Las composiciones pueden usarse en su forma pura, asi como sus formas derivadas tales como esteres, o sales, asi como alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas. En la presente descripci6n tambien pueden englobarse is6meros de las formas puras y derivadas. Estos derivados o is6meros pueden reemplazar a uno o mas

o a todos los componentes quimicos en las composiciones de la presente descripci6n y tienen los mismos efectos.

En otro aspecto, la presente invenci6n comprende la composici6n en disoluci6n. Asi, la presente invenci6n proporciona en disoluci6n entre 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y entre 45,0% y 55,0% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol de una alomona de pato repelente de Dermanyssus y/o sus derivados, y/o mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) o diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3pentanodiol con uno o mas derivados de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol. En la presente memoria tambien se describe una composici6n en disoluci6n de una kairomona de pollo atrayente de Dermanyssus que comprende entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 1-heptadeceno, entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadecano, entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y entre 23,5% y 26,5% (% en peso/% en peso) de octadecano y/o sus derivados y/o sus is6meros y/o mezclas de uno o mas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano con uno o mas derivados esteres, o sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano con uno o mas is6meros de 1-heptadeceno, heptadecano, 9octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y/o uno o mas is6meros de sus derivados.

Estas composiciones y disoluciones se usan separadamente como una composici6n repelente o atrayente.

La composici6n puede estar en forma de una disoluci6n, un aerosol para pulverizar, un gel, una matriz de liberaci6n lenta, un champu, un jab6n, una loci6n, una pomada y semejantes.

La disoluci6n y las composiciones de alomona descritas en la presente memoria tambien pueden introducirse en el pienso y ser alimento para las aves y otros animales. Tambien pueden introducirse en agua y ser bebidas por las aves y otros animales.

La concentraci6n de las composiciones de alomona y kairomona anteriormente mencionadas puede variar dependiendo de la forma final de uso. Sin embargo, las concentraciones de estas composiciones que se utilizan y su concentraci6n pueden averiguarse y analizarse segun metodos puestos de manifiesto en la presente descripci6n.

Las composiciones de alomona y kairomona pueden diluirse en cualquier disolvente no acuoso para formar la disoluci6n descrita en la presente memoria. Disolventes tales como alcohol, dietil eter, cloroformo, etanol, benceno, alcohol propilico, isopropanol, 2-propanol, acetona, polisorbato 80 y semejantes. Tambien pueden usarse combinaciones de estos disolventes.

Cuando las composiciones se administran en la comida, en general se disuelven en una disoluci6n acuosa que pueda ingerirse, tal como agua, o en un aceite vegetal o animal, o en cualquier clase de producto graso usado para 8 5

preparar comida para animales o para seres humanos.

La kairomona de pollo atrayente de Dermanyssus tambien puede colocarse sobre un papel pegajoso, tal como papel celul6sico, o en una caja que puede atraer y atrapar a los aracnidos. Ademas de la kairomona atrayente tambien se usa un adhesivo con el fin de atrapar. Tal adhesivo puede ser un adhesivo natural o uno sintetico. Los adhesivos tipicos naturales incluyen almidones y almidones modificados. Los adhesivos sinteticos que pueden usarse incluyen, pero no se limitan a, poliacrilatos, poli(cloruros de vinilo), silicona, uretanos, copolimeros de estireno, poli(acetatos de vinilo) y semejantes. La capa adhesiva es en general de un espesor entre 0,051 cm y 1,27 cm.

La caja o recipiente de atrapamiento puede fabricarse de cualquier material tal como cart6n para uso interior o plastico o polimeros para uso exterior. La kairomona atrayente se extiende por todo el interior y el recipiente o caja tiene una o mas pasillos de entrada tal que los aracnidos pueden entrar libremente y quedar atrapados por la sustancia adhesiva. La concentraci6n de la kairomona es de aproximadamente 0,015 ppm a 0,5 ppm en esta aplicaci6n para el recipiente.

Las presentes composiciones de alomona pueden aplicarse a una variedad de objetos con los que los aracnidos entran en contacto con paredes, tiendas de campana, camas, alfombras, ropas y materiales semejantes. Por otra parte, la presente composici6n de alomona puede aplicarse t6picamente sobre animales o seres humanos para repeler aracnidos tales como acaros, garrapatas, aranas y semejantes.

La presente descripci6n tambien describe un metodo para repeler aracnidos, comprendiendo dicho metodo administrar una cantidad repelente de una alomona repelente de pato a un animal que necesite tal tratamiento. En la categoria de animal esta el hombre ya que los acaros de pollo son parasitos zoon6ticos y es efectivo evitar la alimentaci6n en seres humanos.

La presente descripci6n incluye un metodo para tratar o prevenir los acaros de pollo o los acaros del norte de las aves de corral en gallinas, pollos, patos, pavos, gansos y polluelos, comprendiendo dicho metodo administrar a gallinas, pollos o polluelos que necesiten tal tratamiento una cantidad farmaceuticamente efectiva de una alomona repelente de pato que comprende aproximadamente 45,0% a 55,0% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2etilhexilo) y aproximadamente 45,0% a 55,0% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3pentanodiol y/o sus derivados, y/o sus is6meros, y/o mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) o diisobutirato de 2,2,4trimetil-1,3-pentanodiol con uno o mas derivados esteres, o sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol con uno o mas is6meros de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol y/o uno o mas is6meros de los derivados de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol.

En aun otro aspecto, la presente invenci6n incluye un metodo para atraer Dermanyssus en edificios o gallineros, que comprende introducir en el edificio o gallinero una kairomona atrayente que comprende aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de 1-heptadeceno, aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadecano, aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de octadecano y/o sus derivados y/o sus is6meros y/o mezclas de uno o mas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico), octadecano con uno o mas derivados esteres, o sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano con uno o mas is6meros de 1-heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano y/o uno o mas is6meros de los derivados de 1heptadeceno, heptadecano, 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y octadecano, atrayendo de este modo a Dermanyssus.

Las composiciones anteriormente descritas se descubrieron despues de un analisis detallado de las composiciones quimicas obtenidas de secreciones de la glandula uropigial de patos y pollos.

Mas particularmente, este procedimiento implica restregar el area uropigial de patos y pollos con una compresa esteril y analizar la composici6n de las secreciones por cromatografia de gases/espectroscopia de masas. A partir de los cromatogramas, las composiciones quimicas que prevalecieron en las secreciones se analizaron adicionalmente usando una base de datos en un ordenador, la cual es conocida en la tecnica, y se determin6 la composici6n quimica de la composici6n de alomona y de la composici6n de kairomona.

Con el fin de ilustrar la presente invenci6n y sus ventajas se dan los siguientes ejemplos especificos.

Ejemplo 1

Aislamiento V anmlisis para identificar alomonas V kairomonas de pollos V patos

Las muestras se obtuvieron de patos y pollos aplicando una compresa esteril a la glandula uropigial o a la glandula de la cola, y las secreciones de esta glandula se recogieron en la compresa. La compresa se coloc6 inmediatamente en un matraz que contenia 10 mL de diclorometano y el matraz se agit6 varias veces tal que la secreci6n se desorbiera.

Despues de obtener las muestras de 10 patos y 16 pollos, se tomaron 5 mL de disolvente (acetonitrilo y diclorometano) de cada una de las muestras de la misma serie para formar una muestra combinada. La muestra combinada de 15 mL se concentr6 entonces 10 veces evaporando bajo una corriente de aire hasta 1,5 mL.

A continuaci6n, la muestra se analiz6 por cromatografia de gases/espectroscopia de masas (GC/MS) usando un

5 equipo Turbo Mass GC/MS de Perkin-Elmer. La columna utilizada fue una JW tipo DB 5 MS que tenia una longitud de 30 m, una anchura de 0,25 mm y una pelicula de 0,25 um. La divisi6n ("split") usada fue 1/20 y el periodo de divisi6n/sin divisi6n usado fue 45 segundos. El volumen de inyecci6n fue 2,0 uL.

La detecci6n se efectu6 por impacto usando un impacto electr6nico positivo (EIn) a una energia de 70 eV a 180OC. Esta tecnica se us6 para separar las moleculas de una manera reproducible y caracteristica.

10 A continuaci6n se interrog6 a una base de datos conocida en la tecnica para que interpretara que moleculas en las muestras eran las mas pr6ximas a los espectros obtenidos.

Para confirmar la estructura de diferentes moleculas, se realiz6 luego una ionizaci6n quimica positiva (CIn) en metano. Esta tecnica es conocida en la tecnica.

Los perfiles de los dos diferentes cromatogramas que se obtuvieron fueron diferentes para el pato y el pollo. En el

15 pollo se encontr6 una composici6n de una kairomona atrayente. Por el contrario, en el pato se encontr6 una alomona repelente, como se indica mas adelante en la tabla 1.

Los resultados de los cromatogramas se encuentran en las figuras 1 a 3, para pollos y patos, respectivamente.

Tabla1

Composici6n

Aplicaci6n Masa molar g/mol Tiempo de retenci6n en minutos

Diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol

Alomona 286 13,37

Heptadeceno-1-ol

Kairomona 254 17,57

Heptadecano/ heptadeceno

Kairomona 240/238 17,61

Esteroide

Alomona 284 17,80

9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico)

Kairomona 268 18,52

Octadecano/octadeceno

Kairomona 254/252 18,65

Esteroide

Alomona 312 19,60

Adipato de bis(2-etilhexilo)

Alomona 370 21,15

20 Despues de un examen completo de los cromatogramas, la kairomona atrayente en pollos estaba compuesta por la siguiente composici6n: Aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadeceno-1-ol Aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadecano/heptadeceno Aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico)

25 Aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de octadecano/octadeceno. Despues de un examen completo de los cromatogramas, se encontr6 que la alomona repelente de patos estaba compuesta por la siguiente composici6n:

Aproximadamente 45,0% a 55,0% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) Aproximadamente 45,0% a 55,0% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol. 30 Las concentraciones especificas de kairomonas y alomonas que se han puesto de manifiesto anteriormente fueron usadas en todos los ejemplos que siguen.

Ejemplo 2

Seleccian de la opcian de disolventes

Las moleculas presentes sobre la piel son esencialmente liposolubles y para extraerlas es necesario usar un disolvente organico. Sin embargo, los disolventes organicos son extremadamente irritantes para la piel y existe riesgo de alterar la textura cutanea, lo cual podria inducir una modificaci6n del comportamiento en un parasito. Por lo tanto, se realizaron los siguientes experimentos para ensayar diferentes disolventes y para identificar aquellos que no alteren la textura cutanea de la piel, asi como que sean menos nocivos para la piel asi como para el parasito o aracnido.

Se ensayaron cuatro disolventes diferentes; a saber, cloroformo, dietil eter, acetona y etanol al 60%. Para cada disolvente, la variaci6n de la cantidad de Dermanyssus gallinae que se alimentaba se evalu6 para un parche extirpado de piel de pollo lavada con el disolvente particular y para la piel natural.

Cada piel se lav6 tres veces con 0,5 mL de disolvente. En un primer grupo, la piel se lav6 in vitro y a continuaci6n aliment6 a los aracnidos (Dermanyssus gallinae). En un segundo grupo, se coloc6 una parte alicuota de 0,5 mL de disolvente sobre la piel ya lavada y se permiti6 que se evaporara. En un tercer grupo, la piel se lav6 en un liquido obtenido despues de lavar una piel de pollo o pato diferente. Para etanol al 60%, despues de lavar y dejar que este disolvente se evaporara, la piel se lav6 de nuevo dos veces con 0,5 mL de agua.

Los resultados se muestran en la figura 4. Esta claro por esta figura que el etanol al 60% debe usarse como disolvente ya que existen sobre la capa sebacea de la piel de pollo una o mas sustancias que atraen a Dermanyssus gallinae para que se alimente.

Ejemplo 3

EnsaVos con los extractos

En este ejemplo, la piel de pollos y patos se utiliz6 para buscar la presencia de kairomonas y alomonas en estas dos diferentes aves. La piel de los patos y pollos se lav6 con 0,5 mL de etanol al 60% tres veces y se recogieron las partes alicuotas de estos lavados. A continuaci6n, 0,5 mL de las partes alicuotas de los lavados se redepositaron sobre la misma piel otras tres veces y se mantuvo un periodo de una hora entre cada lavado para permitir que el alcohol se evaporara. Despues del tercer ultimo lavado, la piel se lav6 una vez con 0,5 mL de agua desionizada.

Se depositaron extractos de la glandula uropigial o de la glandula de la cola sobre la piel de pollo o de pato lavada con etanol. Antes de depositarse, estos extractos se diluyeron 1/20. Esta diluci6n tiene en cuenta el volumen de la secreci6n cruda que se encontr6 sedimentada a lo largo de todo el cuerpo.

Se aplicaron Dermanyssus gallinae (30 por tubo) a la piel de pollo o a la de pato. En este experimento se usaron tres tubos, conteniendo cada uno 30 Dermanyssus gallinae. Los resultados se muestran en la figura 5. A partir de estos experimentos se concluy6 que existen sobre la piel una o mas sustancias que potencian la alimentaci6n de los Arcadnida y que es una kairomona. Esta kairomona esta presente en la glandula uropigial o de la cola. Tambien existe sobre la piel de un pato una o mas sustancias que tienen un efecto repelente sobre los Arcadnida y que tambien se encuentran en la glandula uropigial o de la cola. Estas sustancias son alomonas.

Extractos de la glandula uropigial del pato se diluyeron 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 y 1/160 con alcohol etilico. Cuatro trozos de papel absorbente se colocaron en una placa de Petri. Sobre uno de los papeles se coloc6 un conocido acaricida (LD 100 en 12 horas a 1,20 de la dosis prescrita). Sobre el otro papel se colocaron los productos de extracci6n. Los acaricidas se introdujeron en la placa de Petri. La placa de Petri se cerr6 y se coloc6 en un area seca durante 12 horas. Despues de 12 horas se contaron los acaros muertos. Los resultados de los extractos se muestran en la figura 6.

Ejemplo 4

EnsaVo de la alomona repelente en polluelos

Se infest6 una jaula con Dermanyssus gallinae con un nivel de infestaci6n de 5/8. El maximo observado en la crianza es 6/8. Esto quiere decir alrededor de 60 acaros por cm2.

La jaula se separ6 en dos compartimentos. Un compartimento contenia s6lo el pienso. Esta separaci6n permiti6 una circulaci6n libre de los acaros entre ambos compartimentos pero no de los polluelos, los cuales estuvieron restringidos al compartimento que no contenia el pienso. Las dos zonas de la jaula fueron infestadas igualmente con los acaros de pollo. En este ejemplo, la edad de los polluelos fue de un dia.

Los polluelos se separaron en dos lotes. El lote A fue alimentado con un pienso suplementado con alomona repelente de pato (de aqui en adelante DRA) y el lote B con pienso regular el dia 1. Al pienso se anadieron 800 ug/200 g de DRA, por tanto, se anadieron 4 mg/kg.

La cantidad de pienso comido por los polluelos fue en promedio de 15 g a 20 g.

Cuatro polluelos en cada compartimiento fueron introducidos en la jaula con dos compartimentos. Todos los polluelos muertos fueron inmediatamente extraidos y reemplazados para mantener 4 animales en cada compartimento. El experiment6 se desarroll6 durante 11 dias. En la tabla 2 mas adelante se muestran los siguientes resultados.

Tabla 2

Numero de muertes

Numero de muertes

Dia

Lote A Lote B

0

0

0

1

4 4

2

4 4

3

3

4

4

0 2

5

0 3

6

0 1

7

0 1

8

0 1

9

0 0

10

0 0

0

0

Muertes totales

11 20

Los resultados anteriores prueban la eficacia de la protecci6n de DRA en pienso para polluelos contra los acaros del pollo.

Ejemplo 5

10 EnsaVo de la alomona repelente en gallinas V pollos de engorde

Se ensayaron diferentes concentraciones de alomona repelente de pato (de aqui en adelante DRA) en piensos de gallinas y pollos de engorde del tipo industrial en una concentraci6n base de 200 ug pienso/animal/dia segun la tabla 3 mostrada a continuaci6n:

Tabla 3

Grupo 1

Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4

Dosis de DRA en ug/animal7dia

0 32 160 800

Tratamiento

A1 A2 A3 A4

15 Los resultados obtenidos se muestran en las figuras 7 y 8.

Estos resultados muestran que dos concentraciones protegen a las gallinas contra el ataque de Dermanyssus gallinae ya que la proporci6n de alimentaci6n es inferior a 20% y este es el limite aceptable tolerado en pollos en las granjas. La comparaci6n con la otra concentraci6n y el testigo muestra que la variaci6n es significativa. En efecto, el grupo 3 y el 4 tuvieron una proporci6n de alimentaci6n inferior a los otros tres grupos (testigo, grupo 1 y grupo 2).

20 Por lo tanto, existe una dosis efectiva de la DRA integrada en el pienso.

La pequena inflexi6n de las curvas del grupo 3 y 4 el dia 8 fue una variaci6n en el protocolo puesto que estos grupos de animales no fueron alimentados ad libitu durante el dia anterior a este experimento.

Las curvas de las figuras 7 y 8 muestran que los resultados son identicos entre la gallina y el pollo y, por lo tanto, la

DRA no tiene un efecto diferente sobre sexos diferentes.

Las diferencias estadisticas usando el ensayo permiten comparar los grupos diferentes con el testigo y mostrar las diferencias estadisticas, las cuales son como sigue:

(1)

p < 0,0001 a p < 0,005, el maximo para el grupo 4 vs el testigo el dia 4.

(2)

Existe una diferencia significativa entre el grupo 3 y el 4 el dia 6 (pollos), el dia 8 (gallinas y pollos) y el dia 11 (gallinas): p < 0,01 para cada una de estas comparaciones.

(3)

Para el grupo 4, la variaci6n fue significativamente diferente de los otros tres grupos: p < 0,0001 para el grupo 4 vs el testigo, grupo 1 y grupo 2.

Ejemplo 6 EnsaVo de la alomona con sangre neutra V DRA

En este experimento se us6 sangre neutra y la piel de gallinas y pollos se suplement6 con la DRA (p < 0,0007) y se usaron los mismos grupos y el mismo tratamiento que en el ejemplo 4 (vease la tabla). Los acaros se alimentaron en la misma proporci6n que previamente en el ejemplo 5. Los resultados se muestran en la figura 9.

Hubo diferencias significativas entre el grupo 1 y el grupo 2 y el testigo. Se advierte la similitud de los dos graficos con variaciones significativas entre el grupo 3 y el grupo 4 el dia 8 y el dia 11.

Ejemplo 7 EnsaVo de la alomona en la sangre

La figura 10 confirma que la DRA no entra en la sangre de los animales ensayados. Este ensayo se efectu6 usando un indice sanguineo de Dermanyssus gallinae. Asimismo, las sustancias ingeridas con el pienso pudieron absorberse en el curso de la digesti6n. El uso de piel neutra con la sangre del animal suplementado con DRA permite demostrar que la DRA se encontr6 sobre la piel y, por tanto, fue excretada cutaneamente por el animal.

Se indujo a los acaros a que se alimentaran a traves de un trozo de piel normal, pero la sangre propuesta fue una muestra de sangre obtenida de polluelos alimentados con DRA.

Ejemplo 8

En este ejemplo, la alomona repelente de pato (de aqui en adelante DRA) se incorpor6 al pienso y al agua y se compar6 con un grupo testigo neutro y un grupo placebo. Se colocaron 200 mL de DRA en el agua/animal/dia y se pusieron 200 ug de DRA en la alimentaci6n/animal/dia. La tabla 4 siguiente ilustra los grupos y sus dosificaciones en este ejemplo. El pollo consumi6 en promedio aproximadamente 120 g a 150 g de alimento.

Tabla 4

Grupo 1

Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6

Dosis DRA en ug/animal/dia

00 60 00

Agua

Neutro Neutro Neutro Agua 1 Agua 2 Agua 3

Alimento

Neutro Alimento 1 Alimento 2 Neutro Neutro Neutro

Asimismo, los grupos 2 y 4 constituyen los placebos mientras que el grupo 1 es el testigo. Las figuras 11 y 12 del dia 0 al dia 20 indican los resultados en terminos de alimentaci6n hasta el sacrificio de los pollos.

La figura 11 indica las diferencias significativas entre el grupo testigo y el grupo placebo comenzando el dia 4 para el grupo 3 para todos los ensayos (p < 0,0001 el dia 4 y p = 0,0025 el dia 20 comparado con el grupo 1. Para el grupo 1 frente al grupo 6, p = 0,015 el dia 2, p < 0,0001 el dia 4 y p = 0,0031 el dia 20). Las diferencias para estos 2 grupos son muy significativas para todos los ensayos.

Por lo tanto, las diferencias entre el grupo 1, el grupo 2 y el grupo 4 son significativamente importantes. Uno advierte una disminuci6n en la proporci6n de alimentaci6n en los acaros de pollo cuando se usa DRA.

No hay ninguna variaci6n entre los grupos 3 y 6 que demuestre una cinetica perfectamente lineal de no alimentaci6n. La variaci6n se advierte para los otros cuatro grupos. Asimismo, la proporci6n de alimentaci6n disminuye estadisticamente entre el dia 8 y el dia 10 (siendo el dia 10 equivalente al dia 12) para el grupo placebo el cual fue diferente del testigo. La variaci6n para el grupo 5 fue notable.

No hubo ninguna diferencia notable entre los dos modos de administraci6n (agua vs pienso) en una dosis promedio como se refleja en los grupos 3 y 6, lo cual proporciona una buena protecci6n a los animales.

Ejemplo 9 Proteccian con alomona en polluelos V gallinas

Este ejemplo ilustra el tiempo de aparici6n de la protecci6n con polluelos en comparaci6n con gallinas. El 5 procedimiento fue el mismo que en el ejemplo 4; es decir, la DRA se anadi6 al pienso.

Las gallinas consumieron en promedio aproximadamente 120 g a 150 g de pienso, mientras que los polluelos consumieron en promedio aproximadamente 15 g a 20 g de pienso.

Debe advertirse que el polluelo no produce una pelicula cutanea antes de una cierta edad y, por tanto, el tratamiento puede tener un efecto diferente que el de las gallinas y pollos adultos.

10 Los resultados en el dia 6 se muestran en la siguiente tabla 5.

Tabla 5

Grupo

Alimentaci6n % Desviaci6n estandar (%) Valor p

DRA

5,6 5,1 < 0,0001

Placebo

93,3 3,3

Como puede verse a partir de la tabla 5 anterior, la alimentaci6n disminuy6 bastante en comparaci6n con el grupo placebo el dia 6. Los valores p fueron todos p < 0,0001 justo hasta el dia 20 cuando el valor de p fue 0,003. El dia 14 se decidi6 parar el tratamiento con DRA y volver al pienso regular con el fin de observar la cinetica de desaparici6n y

15 el efecto de protecci6n de DRA. El dia 6 se observ6 el siguiente aumento de alimentaci6n como se muestra en la siguiente tabla 6.

Tabla 6

Comparaci6n

Alimentaci6n (5) Desviaci6n estandar (%) Valor p

Dia 14 vs dia 16

2,2 vs 15,6 3,8 vs 5,1 0,022

Dia 14 vs dia 18

2,2 vs 8,9 3,8 vs 3,9 0,101

Dia 14 vs dia 20

2,2 vs 35,6 3,8 vs 8,4 0,003

Dia 14 vs dia 22

2,2 vs 24,4 3,8 vs 6,9 0,008

Dia 14 vs dia 24

2,2 vs 26,7 3,8 vs 12,0 0,028

Dia 14 vs dia 26

2,2 vs 26,7 3,8 vs 6,7 0,053

Dia 14 vs dia 28

2,2 vs 51,1 3,8 vs 5,1 < 0,001

Dia 14 vs dia 30

2,2 vs 66,7 3,8 vs 3,3 0,003

Los resultados en la tabla 6 anterior prueban que los polluelos s6lo son protegidos despues del tratamiento con DRA durante un periodo entre 0 y 48 horas despues de finalizar el tratamiento con DRA. Por lo tanto, es necesario tratar

20 continuamente a los polluelos durante la duraci6n de su crecimiento.

Sin embargo, debe advertirse que la diferencia entre el placebo y aquellos polluelos tratados con DRA es significativa el dia 28 (p = 0,006) y, por tanto, la protecci6n aun existe el dia 28.

El dia 30, los polluelos se volvieron a tratar. Las figuras 13 y 15 ilustran que el efecto de la protecci6n con DRA es mucho menor el dia 30 que 14 dias despues del final del tratamiento con DRA (p = 0,011 para DRA vs placebo). La

25 reaparici6n del efecto protector es, sin embargo, casi inmediato (p = 0,0008 el dia 32), si se considera que la DRA ha desaparecido.

Por tanto, una vez que se ha detenido el tratamiento con DRA, los acaros recuperaron su comportamiento alimentario. Inmediatamente despues de readministrar el tratamiento se observa el efecto repelente. Por lo tanto, para proteger es mejor mantener la dieta especial con DRA.

Ejemplo 10

Uso de diferentes tipos de piel

En este ejemplo, se trataron con DRA dos (2) tipos diferentes de piel; es decir, piel desnuda y piel con plumas. Las pieles que se trataron fueron las de pollos alimentados con sangre normal o con DRA. La mitad de las plumas de la piel se eliminaron y la mitad se mantuvieron.

La piel desnuda tuvo menos Dermanyssus gallinae (p = 0,033 para placebo vs placebo). Parece que las plumas tienen un cierto tipo de atracci6n para Dermanyssus gallinae. Sin embargo, la diferencia entre el placebo y la piel tratada con DRA fue significativa (p < 0,0001 para el placebo vs DRA). Por tanto, parece que las senales quimicas parecen "concentrarse" en las plumas.

Ejemplo 11

Se prepara una disoluci6n de aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadeceno-1, aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de heptadecano, aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de 9-octadeceno-ol-1 (alcohol oleico) y aproximadamente 23,5% a 26,5% (% en peso/% en peso) de octadecano.

El interior del recipiente fabricado de plastico y que tiene aperturas esta saturado con un material adhesivo de poliacrilato con el fin de atrapar acaros. La disoluci6n de kairomona se anade entonces al interior del recipiente que se coloca a continuaci6n en un gallinero. Los acaros que acuden al cebo de la disoluci6n de kairomona son entonces atrapados en el recipiente al cabo de unos pocos dias. Luego, el recipiente se elimina.

Ejemplo 12

En este ejemplo se usa el mismo recipiente con la kairomona que en el ejemplo 11. El recipiente se coloc6 en una ventana bien fuera de una casa en la que anidaban numerosas aranas viuda negra. Las aranas viuda negra que acuden al cebo de la disoluci6n de kairomona son entonces atrapadas en el recipiente al cabo de unos pocos dias. Luego, el recipiente se elimina.

Ejemplo 13

Se lav6 a un perro con un champu que comprendia aproximadamente 45,0 a 55,0 (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y aproximadamente 45,0 a 55,0 (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil1,3-pentanodiol. Luego, se hizo caminar al perro a traves de un bosque que esta generalmente infestado con garrapatas. Luego se buscaron garrapatas en el perro y no se encontr6 ninguna ya que la alomona del champu repeli6 a este aracnido.

Ejemplo 14

Se aplic6 el mismo metodo que en el ejemplo 13, pero se usaron gatos. Luego se buscaron garrapatas en el gato y no se encontr6 ninguna ya que la alomona del champu repeli6 a este aracnido.

Ejemplo 15

Se lav6 a un nino con un champu/jab6n que comprendia aproximadamente 45,0 a 55,0 (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y aproximadamente 45,0 a 55,0 (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil1,3-pentanodiol. Luego, se hizo caminar al nino a traves de un bosque que esta generalmente infestado con garrapatas. Luego se buscaron garrapatas en el perro y no se encontr6 ninguna ya que la alomona del champu/jab6n repeli6 a este aracnido.

Ejemplo 16

Se lav6 a un criador de pollos con un jab6n que comprendia aproximadamente 45,0 a 55,0 (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y aproximadamente 45,0 a 55,0 (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4trimetil-1,3-pentanodiol. Luego, el criador de pollos entr6 en el gallinero y trabaj6 con los pollos, gallinas y polluelos la mayor parte del dia. El criador de pollos advirti6 que habia menos picaduras de acaros en el cuerpo que sin lavar con el jab6n.

Ejemplo 17

Este ejemplo ilustra la eficacia de la alomona repelente de pato (DRA) cuando se suministra en el agua potable de gallinas ponedoras de huevos que padecen de una infecci6n parasita cr6nica y masiva por Dermanyssus gallinae.

El gallinero fue en primer lugar visitado por las personas implicadas en el estudio y se emprendi6 una inspecci6n visual del gallinero infectado con Dermanyssus gallinae estando presente el avicultor jefe del gallinero. El gallinero fue inspeccionado por los investigadores que vestian botas y guantes. Las gallinas se dividieron a continuaci6n en 7

filas en el gallinero y a cada fila se le asign6 un numero de 1 a 7.

Se requiri6 al avicultor jefe para que escogiera dos gallinas al azar de cada una de las siete filas de gallinas. Se extrajo sangre de cada una de las gallinas escogidas aleatoriamente y tambien se realiz6 una autopsia a las gallinas. Se extrajeron 4 mL de sangre de la vena radial de cada gallina. Parte de la sangre se coloc6 en un tubo de ensayo que no contenia ningun aditivo quimico y la otra parte se coloc6 en un tubo de ensayo que contenia EDTA. Las muestras de sangre se colocaron luego en un recipiente isotermico que tenia bloques refrigerantes. Se analizaron el dia siguiente en un laboratorio.

Despues del muestreo de sangre, las gallinas escogidas aleatoriamente se sacrificaron y se sometieron a una autopsia completa, que incluy6 una busqueda de parasitos externos. Durante la autopsia se extrajo una pizca de la mucosa cecal de la pared del intestino ciego y se coloc6 en formalina al 10% para finalmente buscar infestaciones de protozoos.

Al mismo tiempo que los investigadores estaban en el gallinero, se hizo un examen en profundidad del gallinero recogiendo y contando el numero de aracnidos presentes. Cada fila del gallinero tenia 60 jaulas de gallinas en cada nivel y habia tres niveles. Se recogieron colonias de aracnidos visibles y polvo para 20 jaulas. Cada una de las muestras se coloc6 en frascos hermeticos y se llevaron a un laboratorio para determinar la identidad y el numero de aracnidos presentes. Las colonias de aracnidos se contaron en 12 jaulas y se midi6 el mayor diametro de las colonias de aracnidos en cada una de las 12 jaulas. Finalmente, se emprendi6 el muestreo de 15 mililitros de excrementos en cada fila debajo de cada fila, los cuales representaban a todos los excrementos de las gallinas en los tres niveles.

Asimismo, durante esta visita los investigadores mostraron al jefe de los avicultores c6mo usar el producto llamado P1, el cual tenia 50% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y 50% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol, y se les dio un protocolo especifico de administraci6n del producto. El tratamiento comenz6 despues de la primera visita (V1).

Productos utilizados en el tratamiento

Se usaron tres productos que tenian diferentes analogos de DRA, que representaban el compuesto activo principal, y se colocaron en una disoluci6n acuosa. Las disoluciones no variaron en su naturaleza, pero s6lo con respecto a los tensioactivos y conservantes usados. En el tratamiento se utilizaron las siguientes disoluciones:

Disoluci6n 1: una disoluci6n titulada al 4% (% en peso/% en peso) de DRA 50% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y 50% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol y aforada a 100 mL con etanol. Este producto se coloc6 en botellas de agua de 2,5 litros.

Disoluci6n 2: una disoluci6n titulada al 4% (% en peso/% en peso) de DRA 50% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y 50% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol que contenia 5% (% en peso/% en peso) de polisorbato 80 y aforada a 100 mL usando etanol. Este producto se coloc6 en botellas de agua de 5 litros.

Disoluci6n 3: una disoluci6n titulada al 4% (% en peso/% en peso) de DRA 50% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y 50% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol que contenia 5% (% en peso/% en peso) de polisorbato 80 y aforada a 100 mL usando agua. Este producto se coloc6 en botellas de agua de 4 litros.

La primera disoluci6n 1 se present6 al avicultor en V1. Se realiz6 un testigo usando lotes de dos generaciones sucesivas del producto DRA. Se emprendieron entrevistas telef6nicas con el avicultor para tratar problemas asociados con la administraci6n de los productos DRA con los investigadores.

En el curso de una de las entrevistas telef6nicas se decidi6 evaluar la formulaci6n del producto.

Administracian del producto

El producto se administr6 en botellas de agua. La muy debil miscibilidad de la disoluci6n 1 en agua requiri6 la atomizaci6n en cada botella de agua por el reservorio en cada fila de gallinas. La disoluci6n 1 se coloc6 en la botella de agua con una jeringa de 50 mL y cada dosis se atomiz6 a continuaci6n en el reservorio mediante el paso a traves de una jeringa que poseia un diametro exterior de 0,5 milimetros. Esta operaci6n se realiz6 manana y noche.

Duracian del tratamiento

El tratamiento se consumi6 durante un periodo de 32 dias. Durante los primeros 10 dias, la primera disoluci6n se us6 como tratamiento. Los siguientes 6 dias, la segunda disoluci6n se administr6 como tratamiento y en los 16 dias restantes, la disoluci6n 3 se administr6 como tratamiento.

La cantidad de producto consumida durante este tratamiento de 32 dias se muestra en la siguiente tabla 7:

Tabla 7

Cantidad dada (litros)

Cantidad que qued6 (litros) Cantidad consumida (litros) Cantidad te6rica consumida (litros) Tasa observada %

Disoluci6n 1

10 2,5 7,5 7 93%

Disoluci6n 2

15 8,4 6,6 4,2 63%

Disoluci6n 3

16 4 12 8,9 74%

La tasa observada por calculo de las disoluciones 2 y 3 puede explicarse por el metodo de administraci6n de estas dos disoluciones. Para facilitar la manipulaci6n de estas disoluciones, el avicultor coloc6 una cantidad variable de estos productos (disoluciones 2 y 3) en un volumen muy pequeno de un cuenco para ensaladas antes de aspirar la dosis que se administr6. Asi, debido a esta variaci6n se calcul6 por lo tanto la cantidad te6rica que se consumi6.

No se dio ningun otro tratamiento para aracnidos durante los 32 dias en los que las gallinas fueron tratadas.

Se emprendi6 una segunda visita (V2) al gallinero despues de dia 32 de tratamiento. Como en la visita 1, se requiri6 al avicultor jefe para que seleccionara dos gallinas al azar de cada una de las siete filas de gallinas y se extrajo sangre y realiz6 la autopsia usando el mismo procedimiento que en la visita 1 con la excepci6n de no se extrajeron copias del intestino ciego de las gallinas que se sometieron a autopsia. Esta excepci6n fue debida al hallazgo de ausencia de parasitos despues de la evaluaci6n de las muestras del grupo I. Los resultados de la autopsia de la visita 1 en las diferentes gallinas indicaron que existian anomalias macrosc6picas en diferentes 6rganos, de modo que diversas recogidas fueron tomadas para realizar autopsia para un analisis citopatico. Tambien se separaron las glandulas uropigiales en la autopsia de la visita 2 para determinar si la DRA estaba presente en las secreciones.

Tambien se extrajeron muestras de cada uno de los diferentes reservorios de agua en los que se coloc6 el tratamiento. Las muestras se analizaron entonces en un laboratorio para averiguar si la composici6n quimica del producto DRA se alter6 o no.

Se recuperaron las observaciones realizadas por el avicultor durante el experimento.

Criterios usados para la evaluacian

La eficacia del producto se evalu6 usando tres parametros: parametros parasitol6gicos, parametros medicos y parametros zootecnicos.

Parmmetros parasitolagicos

Toda la poblaci6n de aracnidos se reagrup6 y se realizaron ensayos para evaluar el vigor de los aracnidos, el numero de aracnidos y la cantidad de infestaci6n en diferentes zonas del gallinero. Se realizaron ensayos in vitro para medir la cantidad de inhibici6n de la alimentaci6n de los aracnidos en presencia de la DRA en las secreciones de la glandula uropigial de las gallinas sometidas a autopsia y se obtuvieron los excrementos en la visita 2. Para cada categoria de los parametros parasitol6gicos que se midieron se calcularon los resultados separadamente para cada fila. Se realiz6 una comparaci6n de los parasitos totales antes y despues del tratamiento, resultados que tambien fueron comparados con los realizados en el laboratorio.

Se observ6 el comportamiento de alimentaci6n de los aracnidos en un tubo de ensayo y en una jaula con un anfitri6n (polluelo), asi como el comportamiento social de los aracnidos en las mismas condiciones. Tambien se realiz6 un analisis de las cuticulas de los aracnidos por GC/MS.

Parmmetros medicos

La infestaci6n por Dermanyssus gallinae presenta problemas hematol6gicos con las gallinas que son infestadas. Es por esto por lo que se extrajo sangre en la visita 1 y en la 2 de 14 gallinas que se escogieron aleatoriamente. A continuaci6n, se realiz6 el siguiente analisis a las muestras de sangre:

(1)

Hematocrito;

(2)

Recuento de sangre que permite evaluar la relaci6n leucocitos/linfocitos que es un indicador de estres y se cuantific6 el numero de granulocitos ya que el recuento de granulocitos es un indicador de infestaci6n de parasitos;

(3)

Electroforesis de las proteinas de la sangre; y

(4)

Concentraci6n de T4 (corticosterona).

Las gallinas a las que se extrajo sangre tambien fueron sacrificadas, se separ6 un trozo de la mucosa cecal de la pared del intestino ciego la cual se coloc6 en formalina al 10% y se realiz6 una evaluaci6n histopatol6gica. En las gallinas que fueron sacrificadas en la visita 2 se separaron la pared de la molleja y un l6bulo hepatico para clarificar el origen del estado caquectico el cual es indicativo de un reflujo biliar masivo a la luz de la molleja, observado en ciertas gallinas en la fila 4. Los resultados de este analisis permitieron la evaluaci6n del impacto de los parasitos para la existencia de alimentos oportunistas y proporcion6 alguna informaci6n relacionada con el estado fisiol6gico de las gallinas.

Parmmetros zootecnicos

Los parametros zootecnicos que se acometieron en este estudio fueron los siguientes:

(1)

Cantidad de comida consumida;

(2)

Numero de huevos que se pusieron;

(3)

Peso de los huevos;

(4)

Numero de huevos que se rompieron; y

(5)

Consumo de agua por gallina.

Evaluacian de los resultados

Para calcular la cantidad de infestaci6n se acometi6 una estimaci6n de la superficie lineal total del gallinero asi como del material en el gallinero. Despues de tomar estas medidas se determin6 la medida del diametro medio de las colonias observadas y de la frecuencia de repetici6n en zonas similares. Todas estas medidas permitieron el calculo de la concentraci6n media de aracnidos por cm2 para cada gallinero. Este valor se compar6 luego en una escala semilogaritmica de 8 unidades. A continuaci6n, se obtuvo el grado de infestaci6n en una escala de 0 a 8. El grado 8 se asign6 cuando habia mas que 400 aracnidos por cm2 y es indicativo de la cantidad maxima de infestaci6n de aracnidos en un gallinero.

Para estimar la evoluci6n del numero de parasitos, se tomaron siete tipos de medidas diferentes para cada fila, para tener la mejor estimaci6n posible de la evoluci6n de la poblaci6n parasita del gallinero estudiado. Las medidas que se tomaron fueron:

(1)

El numero de colonias por jaula;

(2)

El diametro de las colonias observadas;

(3)

El grado de infestaci6n de los excrementos del suelo;

(4)

El grado de infestaci6n de los huevos que se recogieron;

(5)

Las infestaciones sobre las estructuras del gallinero (jaulas, tuberias, etc.);

(6)

El numero de jaulas que fueron infestadas; y

(7)

El grado de infestaci6n media en cada fila.

Para cada fila y para cada uno de los valores se observ6 una disminuci6n muy clara de cada uno de los parametros de los parasitos que fueron medidos. El grado de infestaci6n del gallinero disminuy6 de 6,5 a 2 (figura 6). En5 semanas, usando el producto DRA se mostr6 una disminuci6n de la infestaci6n por aracnidos a un nivel de infestaci6n de 2.

Las primeras medidas se efectuaron para evaluar directamente el numero de jaulas que estaban infestadas con aracnidos, el numero de colonias de aracnidos presente y los diametros de los aracnidos. Estas medidas poseen una doble ventaja ya que pueden obtenerse facilmente y tambien sirven como referencia personal al avicultor para estimar su cantidad de infestaci6n en los gallineros. Tambien se inform6 de medidas basadas en una infestaci6n fuerte o debil. Este dato permite al avicultor estimar la infestaci6n sin prejuicios y determinar si se sobrepasa el nivel de infestaci6n de 2. Por el contrario, si el grado de infestaci6n pasa de 5 6 mas, la estimaci6n del avicultor es muy importante y debe iniciarse un tratamiento contra los aracnidos.

En la visita V1 se advirti6 que mas que 80% de las jaulas estaban infestadas con una media de 2,5 colonias por jaula y que los diametros de los aracnidos tuvieron un promedio de 5 cm. Despues de la visita 2 final, el porcentaje de jaulas que estaban infestadas cay6 de 80% a 18% con una promedio de 0,5 por jaula y el diametro de las colonias cay6 de 5 a 1,5 (figuras 17, 18 y 19).

Tambien hubo interes en medir la cantidad de infestaciones de aracnidos en la estructura del gallinero. Para este

tipo de medida, se midi6 el grado de infestaci6n de las estructuras recogiendo los excrementos y evaluando el numero de aracnidos, recogiendo los huevos y contando el numero de aracnidos y los aracnidos en otras estructuras del gallinero tales como las paredes, en la alimentaci6n animal y semejantes. Las medidas se tomaron para evaluar si el producto DRA repele solamente a los parasitos de las jaulas, o si tambien destruye a los acaros que habitan en los pollos o en su entorno de alimentaci6n.

El grado de infestaci6n de se evalu6 recogiendo los excrementos del piso. Los excrementos secos son un lugar privilegiado para que los parasitos se escondan y su evacuaci6n del gallinero aumenta el riesgo de recontaminaci6n de los otros gallineros con los parasitos. Los resultados tambien mostraron que el producto DRA impide que Dermanyssus coma. Una vez que la poblaci6n de aracnidos se vuelve a formar en medio del gallinero, la recontaminaci6n es inevitable.

La figura 20 muestra los datos obtenidos y la eficacia del producto DRA de la presente invenci6n en el gallinero de los excrementos reunidos, el cual muestra un grado medio de infestaci6n de 5 antes del tratamiento y un grado de infestaci6n inferior a 1 despues del tratamiento.

Los excrementos se ensayaron para ver si repelian a los aracnidos en el laboratorio. Los resultados se muestran en la figura 21 en la cual los datos muestran que un extracto de alcohol de los excrementos prevenia que los aracnidos se alimentaran de la piel de un polluelo utilizado para estos ensayos in vitro.

En lo que se refiere a los huevos y a las otras estructuras del gallinero se observ6 una clara disminuci6n del porcentaje medio de infestaci6n de aracnidos. Para la infestaci6n de los huevos, en la primera visita la tasa de infestaci6n fue 64% y cay6 a 14% despues del tratamiento con el producto DRA de la presente invenci6n. Para la infestaci6n de las estructuras del gallinero se determin6 una tasa de infestaci6n de 57% en la primera visita y cay6 a 12% despues del tratamiento (figura 22).

De manera global, en los gallineros se observ6 una caida de la cantidad de parasitos de 6,5 a 2.

Evaluacian de la poblacian parmsita

Se evaluaron las ninfas numero 2 ya que es un estadio intermedio en el desarrollo de los aracnidos en el que las ninfas numero 2 son muy sensibles al ayuno, asi como el hecho de que su presencia avisa de una expansi6n de la colonia. El analisis de la poblaci6n de adultos clarifica la dinamica evolutiva de las colonias. En particular, el porcentaje de ninfas hembra tipo 2 es muy interesante. Estas hembras son mayores que las hembras tipo 1 y tienen una coloraci6n marr6n rojiza a negra. Tambien poseen un huevo que es visible a simple vista. Este huevo no es puesto es ausencia de adultos macho sino en presencia de hembras tipo 1 y produce un nuevo macho para el origen de una nueva colonia. Las hembras mueren despues de poner su huevo. Su prevalencia entre los adultos avisa de un nuevo estado de degradaci6n de las colonias con la desaparici6n de los dos sexos. Esta situaci6n es seguida por una dispersi6n de las colonias.

En la visita 1, la demografia de los parasitos en el gallinero correspondia efectivamente a una demografia que estaba en expansi6n con una mayoria de deutoninfas en el estado de deutoninfa. En la segunda visita, la poblaci6n parasita estaba en una demografia de regresi6n. Notablemente, mas que 87% de los aracnidos presentes en la colonia despues de la segunda visita estaban muertos en comparaci6n con menos que 7% despues de la primera visita. Asimismo, en el muestreo de la visita 2 no hubo ninfas en estadio N2. Esto indic6 que la poblaci6n de acaros fue detenida y estaba en regresi6n. Tambien se observ6 durante la visita 2 que habia numerosas hembras tipo 2. Ninguna de las hembras tipo 2 se encontr6 en el centro de las colonias, lo cual es su costumbre usual. Las hembras tipo 2 fueron erraticamente encontradas en una pila alrededor de las ninfas tipo 1.

Otro parametro fue medir el numero de acaros que se estaban alimentando y que, por lo tanto, tenian un color rojo. En la visita 1, el 80% de la poblaci6n tenia un color rojo. En la visita 2, s6lo la fila 4 tuvo varios acaros con color rojo.

EnsaVos de parmsitos in vitro

Se ensayaron tres parametros: la presencia de DRA en los excrementos, la presencia de DRA en las secreciones de la glandula uropigial de las gallinas que fueron sacrificadas en la visita 2 y la sensibilidad de los acaros presentes en el gallinero.

Presencia de DRA en los excrementos

Se extrajeron usando alcohol excrementos de gallina recogidos del gallinero. Los extractos de los excrementos de gallina que fueron tratados con DRA se aplicaron a la piel de los polluelos y protegieron a los polluelos contra Dermanyssus gallinae. La piel de los polluelos testigo fue picada por los acaros en el 90% de los casos mientras que la piel de los polluelos tratados con extracto alcoh6lico de excrementos de gallina fue picada en el 20% de los casos.

Presencia de DRA en secreciones uropigiales de gallinas en la segunda visita

Las glandulas uropigiales de las gallinas que fueron sacrificadas despues de la visita dos fueron separadas y

ensayadas respecto a la presencia de DRA.

La figura 23 muestra los resultados cuando la DRA se ensay6 en diferentes concentraciones. Una diluci6n de 160 fue muy repelente. Una diluci6n de 320 tambien fue eficiente y puede concluirse que el producto DRA no s6lo estaba presente en la glandula uropigial de la gallina, sino tambien en una concentraci6n que normalmente se encuentra en la glandula de patos.

Otros ensaVos EnsaVos de resistencia a otros acaricidas

Se ensayaron otros acaricidas respecto a su eficiencia y los resultados se muestran en la siguiente tabla 8:

Tabla 8

Material activo

Muertos (%) dosis 1X Muertos (%) dosis 4X Muertos (%) dosis 8X Muertos (%) dosis 16X Muertos (%) dosis 32X

Triclorf6n

20,4 39,7 34,4 80,8 94,4

Amitraz

97,4 98,5 100,00 100,00 100,0

Azametifos

30,0 43,3 54,8 100,00 97,8

Afametrina

48,1 85,2 97,0 98,9 99,6

Carbarilo

19,3 37,8 64,4 91,1 97,8

Testigo

0,4 0,7 0,0 0 1,1

Las dosis se escogieron de 1 a 32 veces la dosis comercialmente dada en las instrucciones del producto. Amitraz fue el acaricida mas eficiente en la dosis prescrita. Todos los otros acaricidas ensayados tuvieron una eficacia de menos que una tasa de mortalidad de 50%. A cuatro veces la dosis, la afametrina tuvo una tasa de eficacia de 85%. Sin embargo, en estos productos comerciales s6lo fue efectiva 16 veces la dosis recomendada para matar a los acaros del pollo. Incluso si los productos eran efectivos se advirti6 que las colonias tuvieron una tendencia a volver a formarse despues del tratamiento.

Alimentacian de mcaros recogidos en la visita 2 V crecimiento demogrmfico en el laboratorio

Los resultados mencionados en esta secci6n son s6lo cualitativos y s6lo son una comparaci6n de la evoluci6n del grado de infestaci6n de una jaula de gallinas usando un anfitri6n viviente. Se colocaron dos poblaciones de acaros que tenian un tamano similar (grado 4) en dos jaulas de pollos distintas con un polluelo vivo. La primera poblaci6n fue el testigo al que no se administr6 ningun tratamiento con DRA y los Dermanyssus que se usaron en este ejemplo se obtuvieron de una fuente diferente. La segunda jaula de pollos contenia Dermanyssus que se recogieron del gallinero que fue tratado despues de la visita 2.

En dos semanas, la poblaci6n testigo tuvo un aumento de dos puntos en la escala de graduaci6n respecto a la poblaci6n de la visita 2. La virulencia de los acaros de pollo en el grupo testigo lleg6 a un grado 4 y dio lugar a la muerte de los polluelos, mientras que con la poblaci6n de acaros de la visita 2 los polluelos sobrevivieron.

Comportamiento social

Despues del quinto dia de tratamiento se observ6 que la migraci6n de las colonias de acaros fue constante. Estas observaciones fueron confirmadas en un laboratorio con los acaros de pollo de la visita 1. No fue posible encontrar colonias estables en los experimentos en tubos de ensayo que se realizaron. S6lo se observ6 migraci6n continua.

Los acaros de pollo de la visita 2 se introdujeron en las colonias de acaros testigo y se observ6 que habia desorganizaci6n de las colonias que no pudieron alcanzar su reconstrucci6n.

Estudio de los perfiles cromatogrmficos de la cuticula de los mcaros de la visita 2

Los Dermanyssus de la visita 2 fueron muertos por inmersi6n en CO2 a -78OC para provocar una muerte brutal sin drenar sus tubos digestivos. Los acaros de pollo se colocaron entonces en diclorometano y el analisis del disolvente se realiz6 usando GC/MS. Los cromatogramas se ilustran en la figura 24 y muestran los dos picos caracteristicos de DRA (a 13,23). La adsorci6n por la cuticula de los acaros de las dos moleculas que son fuertemente hidr6fobas no fue sorprendente ya que las cuticulas de los acaros tienen una estructura que tiene una alta afinidad por las composiciones hidr6fobas.

Parmmetros medicos de la sangre de las gallinas

El analisis de la sangre extraida de las gallinas en la visita 1 y 2 tuvo notables diferencias con respecto a los 35 dias de tratamiento. La tabla 9 de mas adelante ilustra los resultados de los ensayos de la sangre en la visita 1 y 2 y se calcularon la media y las variaciones (σ).

5 Como puede verse en esta tabla, se observ6 un aumento significativo en el hematocrito para este valor fisiol6gico. El valor observado en la visita 1 fue extremadamente bajo y comprendia valores que variaban de 19,73% a 27,77%, valores los cuales son inferiores al valor fisiol6gico normal de 30%. El valor hematocrito refleja la perdida de sangre que es importante y no compatible con la producci6n de huevos correctos. En contraste, el hematocrito de las gallinas tratadas desde la visita 2 tuvo valores entre 31,42% y 38,78%, los cuales son valores normales y, por tanto,

10 reflejan que el tratamiento con DRA dio lugar a la inhibici6n de la alimentaci6n de los Dermanyssus y, por tanto, la perdida de sangre no se produce en las gallinas tratadas.

Los menores valores de los granulocitos de la sangre de las gallinas tratadas con DRA en la visita 2 en comparaci6n con la visita 1 confirman la regresi6n de la infestaci6n de acaros del pollo. Una disminuci6n drastica de granulocitos y eosin6filos es indice de la disminuci6n de la perturbaci6n de las gallinas inducida por las picaduras de los acaros

15 del pollo, las cuales dan lugar a una respuesta inflamatoria o a un estado de estres inducido por irritaci6n repetida.

El resultado de los leucocitos/linfocitos se considera como un indice medico fiable de estres y este valor fue significativamente menor en la sangre extraida de las gallinas en la visita 2 en comparaci6n con la sangre extraida de las gallinas en la visita 1, las cuales no fueron tratadas con DRA.

Tabla 9

Valores biol6gicos normales (%)

Valores en la visita 1 (%) Valores en la visita 2 (%)

Granulocitos neutr6filos de nucleo no segmentado

0-6 5,53 (σ = 1,125) 1,2 (σ = 1,320)*

Granulocitos neutr6filos de nucleo segmentado

60-75 71,13 (σ = 18,71) 57,4 (σ = 15,76)*

Eosin6filos

0-4 1,20 (σ = 0,55) 0,32 (σ = 0,23)*

Bas6filos

0-1 0,08 (σ = 0,12) 0,22 (σ = 0,12)

Macr6fagos

0-5 1,69 (σ = 0,10) 2,11 (σ = 0,57)

Linfocitos

15-30 21,36 (σ = 1,91) 16,87 (σ = 1,65)

Relaci6n leucocitos/linfocitos

< 0,55 (± 0,27) 0,32 (σ = 0,06) 0,10 (σ = 0,07)*

Hematocrito

30-40 22,8 (σ = 3,00) 35,2 (σ = 4,61)*

20 En la que * significa que las diferencias entre las medias son estadisticamente significativas (ensayo t de Student (n = 28) (p < 0,01)).

Electroforesis de las proteinas de la sangre de gallinas

Se realiz6 una electroforesis de la sangre extraida de las gallinas en la visita 1 y en la visita 2 para determinar el contenido de proteinas en la sangre de las muestras.

25 La tabla 10 siguiente muestra la relaci6n entre albumina/globulinas (A/G) que evalua la inflamaci6n en los animales. Esta tabla refleja los valores obtenidos en la visita 1 (V1) y en la visita 2 (V2).

Tabla 10

Visita 1 (V1)

Visita 2 (V2)

0,15

0,00

0,53

0,98

0,34

0,76

0,53

0,78

0,41

1,05

0,58

0,97

0,39

1,02

0,73

0,93

0,28

1,05

0,66

0,93

0,50

0,90

0,46

0,79

0,38

0,80

0,61

El valor medio de la relaci6n A/G es 0,46 para V1 y 0,92 para V2. El valor normal que esta publicado es 0,71 (Sturkie y Nerman, 1951). Por tanto, estos resultados ilustran que hubo mas inflamaci6n en las gallinas que no fueron tratadas con DRA que en las gallinas que fueron tratadas con DRA.

Resultados de las autopsias

Las gallinas de la visita 1 que fueron sacrificadas y sometidas a una autopsia revelaron que no hubo ninguna anomalia en las 14 autopsias realizadas fuera de las lesiones por aranazos presentadas en la regi6n axilar y que aparecieron en el anca de muchas gallinas. Los examenes histopaticos del intestino ciego fueron normales. Se examinaron las glandulas uropigiales de las aves y fueron de tamano normal y su contenido estaba conforme con el que habitualmente se observa en esta especie; es decir, contenian un aceite amarillo y tenian pequenos gl6bulos translucidos de cera.

Las gallinas de la visita 2 que fueron sometidas a autopsia no tuvieron ninguna anomalia macrosc6pica. Las glandulas uropigiales fueron muy voluminosas. Su contenido fue muy diferente del descrito anteriormente para las gallinas de la visita 1; era muy oleaginoso y tenia un color opaco ambar a naranja. El aspecto de la glandula uropigial de las gallinas de la visita 2 es el mismo que el que se observ6 en el pato. Se extrajeron las secreciones y se usaron en los ensayos de alimentaci6n in vitro anteriormente descritos.

Durante la prueba, los investigadores advirtieron una alta tasa de mortalidad en las gallinas de la fila 4. Las gallinas de la fila 4 tuvieron una fase de anorexia acompanada por insomnio antes de morir. Se realizaron tres autopsias adicionales a las gallinas muertas de la fila 4. Estas gallinas eran caquecticas y tuvieron una atrofia muscular particularmente notable es sus musculos del estern6n. Tambien se not6 una regresi6n uterina y los foliculos maduros estaban bloqueados.

Se examin6 la molleja de las gallinas sacrificadas de la fila 4. La cavidad de las mollejas contenia el exterior del cereal y varios fragmentos de comida que eran dificiles de identificar. El contenido de las mollejas estaba saturado con bilis y contenia una materia verde, la cual era la misma para la membrana de la mucosa. Esto indic6 que las gallinas ayunaron. El area parenquimal hepatica de dos de las gallinas tenia un aspecto bronceado el cual no es, sin embargo, el aspecto bronceado que es tipico de las gallinas infectadas por Salmonella.

Parmmetros zootecnicos

La produccian de huevos

Tambien se analiz6 la producci6n de huevos y los resultados se presentan en la figura 25.

Como puede deducirse a partir de esta figura, la curva de producci6n de huevos de las gallinas en esta prueba tuvo tendencia a seguir la curva te6rica mostrada en la figura 24. Como puede verse en esta figura, despues de un fuerte comienzo y un pico inicial de producci6n de huevos, la producci6n de huevos disminuy6 rapidamente y permaneci6 constante por debajo de la curva te6rica con una importante caida alrededor de las 55 semanas respecto al peso te6rico. Esta curva sobrepasa a la primera curva. En efecto, el peso de los huevos esta debajo del te6rico normal, pero el peso de los huevos para cada gallina es normal.

La tasa de huevos de baja calidad recogidos es una variable que es interesante observar porque es un componente principal de la rentabilidad del grupo de gallinas. Los resultados medios antes y despues del tratamiento permiten observar un aumento de la relaci6n de huevos que fueron de calidad inferior.

Las cinco ultimas semanas durante la duraci6n del tratamiento se observa un aumento de la producci6n de huevos en comparaci6n con la producci6n normal de huevos. La relaci6n de los huevos que fueron de calidad inferior aumenta ligeramente en las dos primeras semanas del tratamiento con DRA , alcanza luego una meseta y el tamano aumenta luego al final para, en general, pasar el 15%.

El peso medio de los huevos desminuye despues de 4 semanas con el inicio del tratamiento de DRA. Este margen no es significativo, pero es interesante ya que la figura 25 permite una comparaci6n del peso de los huevos producidos antes y despues del tratamiento, la cual muestra el aumento del peso medio de los huevos.

La cantidad de pienso comido por las gallinas por dia tambien disminuye algo para las gallinas en el curso del tratamiento con DRA. Pueden realizarse las siguientes dos hip6tesis en relaci6n con esta situaci6n:

La DRA en el agua de las gallinas perturba a las gallinas debido al sabor diferente del agua o a problemas digestivos asociados con el tratamiento. Sin embargo, la cantidad de agua que fue consumida por dia fue constante. Podria pensarse que DRA tiene una influencia vehemente sobre las gallinas, lo cual no es el caso. La producci6n de huevos (peso/clase inferior/tamano del huevo) fue muy favorable usando el tratamiento con DRA.

La DRA permite la disminuci6n del consumo de comida de las gallinas y mantiene la producci6n clasica en la que la disminuci6n del indice de consumo de comida aumenta el margen bruto del criador de gallinas.

La tasa de mortalidad de las gallinas es conforme con el intervalo normal de una granja de gallinas ponedoras.

Discusian de resultados

Resultados parasitolagicos

Los resultados parasitol6gicos completos muestran una importante regresi6n de la poblaci6n de Dermanyssus en el curso del ensayo con DRA. Esta regresi6n, que sigue la cinetica que se observ6 durante los ensayos in vitro, comenz6 el quinto dia del tratamiento. La invasi6n de la poblaci6n parasita comienza por los estadios vulnerables que son el estadio de ninfas N2, luego las hembras de tipo 1 y despues los machos. Las formas de resistencia de las ninfas tipo N1 y de las hembras de tipo 2 muestran una supervivencia significativa que disminuy6 y se asoci6 con modificaciones mayores en el comportamiento social. La incapacidad aparente de estos acaros de pollo para reagruparse en colonias estructurales alrededor de las hembras de tipo 2, que se observa habitualmente, se asemeja a una disminuci6n de su esperanza de vida.

Los ensayos relacionados con la alimentaci6n de los acaros in vitro con las secreciones uropigiales tomadas en la visita 2 (V2) confirman la presencia de DRA en las secreciones y confirman la elecci6n de administraci6n. Los componentes de DRA despues de la reabsorci6n por el tracto digestivo son secretados por la glandula uropigial.

Los resultados obtenidos para la fila 4 no se correlacionaron con los resultados obtenidos para las otras filas. Parece que el tratamiento en la fila 4 comenz6 aproximadamente 2 semanas despues de las otras filas, ya que, de hecho, se observ6 la presencia de dos fases liquidas en el recipiente de agua. El sobrenadante observado en los reservorios de agua fue del color del arco iris, cubri6 la superficie total y se adhiri6 con fuerza a la pared interna del reservorio de agua. Un analisis por cromatografia de una muestra extraida del reservorio en la fila 4 confirm6 que era DRA.

Ademas, el reservorio de agua de la fila 4 tuvo mas dep6sitos de calcio que los otros 6 reservorios. Asimismo, algas verdes estaban colonizando en este reservorio en ciertos dep6sitos de calcio. Este reservorio de agua tambien fue colocado justo pr6ximo al sistema de ventilaci6n del aire acondicionado y la temperatura del agua se elev6. Por tanto, la diferencia en el reservorio de agua de la fila 4 explica las diferencias obtenidas en los resultados comparados con las otras filas tratadas con DRA.

Parmmetros medicos

Estos resultados fueron consistentes con los resultados parasitol6gicos. La inhibici6n del comportamiento de alimentaci6n de los acaros de pollo mostr6 un termino de carencia de sangre y el proceso inmune fue provocado por las picaduras repetidas las cuales disminuyeron con el tratamiento con DRA. El estudio de estos parametros tambien permite subrayar la mejora del bienestar de las gallinas como indicaron los resultados de los valores de leucocitos/linfocitos y hematocrito. Esta mejora de los parametros fisiol6gicos favoreci6 mejor la producci6n de huevos y dio lugar a menos morbilidad.

Parmmetros zootecnicos

La edad de las gallinas tratadas y tambien la duraci6n del ensayo (limitado por el sacrificio del total de los animales participantes) no permitieron ningun analisis estadisticamente significativo de los resultados. Sin embargo, la tendencia que se observ6 en aquellos parametros que se midieron en los animales participantes muy parasitados por Dermanyssus fue alentadora.

Las implicaciones terapeuticas de DRA estan limitadas al dominio parasitol6gico. Los resultados zootecnicos son de 23

hecho indicativos de la supresi6n de los acaros de pollo cuando se administra DRA.

En EE.UU., los medios de producci6n se calculan sobre la base de la cantidad de producci6n por ano recientemente suministrada en los "Grand Consortiums of the Laying Hen". Asi, en 1987, ya un 92% de las granjas americanas pudieron ser consideradas infestadas por Ornithonyssus sylviarum. Hinkle habia deducido que 92% de la producci6n que fue suministrada es la cantidad correspondiente a los animales que estaban parasitados. Para este autor no es una situaci6n normal.

Ejemplo 18

El objetivo de este ejemplo fue ensayar la eficacia de DRA en gallineros con gallinas ponedoras de huevos. Esta prueba dur6 4 semanas. En este ejemplo, se usaron 6 edificios, B1 a B6, que albergaban 31.000 gallinas por edificio. Las gallinas utilizadas en este ejemplo fueron gallinas Isabrorn (ponedora de huevos marrones). La edad de las gallinas diferia en los edificios. En los edificios 1, 2 y 3 (denominados de aqui en adelante como B1, B2 y B3) las gallinas tenian una edad ed 29 semanas, mientras que en los edificios 4, 5 y 6 (denominados de aqui en adelante como B4, B5 y B6) las gallinas tenian una edad ed 57 semanas.

Tratamiento

Cada edificio fue tratado independientemente de los otros 5 edificios. Para el edificio B1 se efectu6 un ensayo con una pulverizaci6n de la DRA usando un termonebulizador de 12 mL de DRA (50% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y 50% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol) en una concentraci6n de 4% (% en peso/% en peso), diluidos en 12 litros de producto en el termonebulizador y se mantuvieron 3 reservorios en este edificio. Para los edificios 2 a 6 se administr6 DRA (50% (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y 50% (% en peso/% en peso) de diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol) en el agua potable. Esto proporciona un tratamiento ininterrumpido a las gallinas y la duraci6n del tratamiento vari6 como se indica en la tabla 11 siguiente. Para los edificios B2 y B6, se emprendi6 un segundo tratamiento despues de una visita de control el dia 15 (15 dias despues del inicio del tratamiento). Las cantidades que se distribuyeron para los edificios B2 a B6 fueron 50 mL de la DRA en un reservorio de 500 litros. En este ejemplo no se realiz6 ningun control.

Tabla 11

Edificio

Tratamiento Duraci6n Cantidad

B1

Pulverizaci6n 3 Reservorios

B2

Agua potable 5 dias (n 5 dias despues del dia 15) Voluntaria

B3

Agua potable 10 dias Voluntaria

B4

Agua potable 3 dias Voluntaria

B5

Agua potable 5 dias Voluntaria

B6

Agua potable 3 dias (n 3 dias despues del dia 15) Voluntaria

Se administraron comida y agua a las gallinas como se conoce en el negocio. Se realiz6 una visita control en dia 2 y el dia 15.

El estado de infestaci6n de los acaros rojos del pollo se determin6 segun el metodo de Bruneau et al., Parasitology, 123, 583-589 (Dec. 200). La medida del estado de infestaci6n se proporcion6 en escala log. La nueva infestaci6n de 6/8 no puede medirse excepto en un laboratorio. La escala consider6 que una nueva infestaci6n de 4/8 es un estadio critico para tratar los edificios o gallineros.

Se extrajo sangre de las gallinas y se realiz6 una electroforesis de proteinas. Tambien se evalu6 el estado de las gallinas.

Caracteristicas de los edificios gallineros

Los edificios gallineros estaban infectados por acaros rojos del pollo durante 7 anos antes de esta prueba. Las diferentes soluciones para minimizar a los acaros rojos del pollo que se utilizaron previamente fueron diferentes ciclos ligeros de 4 horas con 2 horas de descanso dia y noche, tratamientos (justo para 5 bandadas) con Sevin, Cepoux y Actograde, que son productos comercialmente disponibles usados para tratar acaros rojos del pollo. Los tratamientos no tuvieron exito, lo cual no tiene ninguna influencia sobre las gallinas en esta prueba.

Los edificios estaban situados como sigue:

Corredor

Lugar para juntar los huevos 1

2 3 4 5 6

La evaluaci6n del grado de infestaci6n de acaros rojos del pollo fue segun el metodo de Bruneau, supra. Se efectu6 una primera evaluaci6n de los edificios para verificar el estado de infestaci6n de los edificios y los diferentes acaros rojos del pollo que estaban presentes. Despues, el dia 1 se efectu6 en un laboratorio un estudio de diagn6stico del estado de la poblaci6n de los acaros rojos del pollo despues de su eliminaci6n de los edificios. En los edificios gallineros estaban presentes dos especies de acaros del pollo, Dermanyssus gallinae (DG) y Dermanyssus hirundinis (DH).

Los resultados de la evaluaci6n se muestran en la siguiente tabla 12:

Tabla 12

Edificio

Dermanyssus gallinae (%) Escala de infestaci6n (nO/8)

B1

86 3,9

B2

97 3,4

B3

93 3,7

B4

84 5,4

B5

89 4,2

B6

87 4,6

Despues de aproximadamente 9 semanas se hicieron las siguientes observaciones.

Observaciones V resultados

La poblaci6n la infestaci6n de los acaros del pollo no cambi6 durante esta prueba. El 85% de los acaros del pollo presentes fueron Dermanyssus gallinae y el resto fueron Dermanyssus hirundinis.

Se evalu6 cada uno de los edificios y se obtuvieron los siguientes resultados:

Edificio 1 -Las colonias de acaros aun estaban alli. En este edificio se advirti6 la mejora de la situaci6n de los parasitos. No habia acaros en los huevos recogidos. Menos que 1% de los huevos tenian manchas y fueron arruinados por los acaros que se alimentaban sobre las mismas. En el laboratorio, los acaros parecieron perfectamente funcionales; es decir, huian de la luz, volvian a formar sus colonias incluso aunque se dispersaran y comian normalmente. El tratamiento esta siendo comprobado adicionalmente en este edificio.

Edificio 2 -Se encontr6 pilas de los acaros rojos del pollo, pero no colonias. Su presencia en zonas marcadas en la primera visita de colonias desapareci6 despues del tratamiento con DRA. No hubo ninguna observaci6n de huevos con manchas por acaros que se alimentaban sobre las mismas. Los acaros no huian de la luz o por estimulaci6n mecanica. Los acaros tampoco eran capaces de alimentarse.

Edificio 3 -Se advirtieron las mismas observaciones que en el edificio 2.

Edificio 4 - Se advirti6 la presencia de varios acaros rojos del pollo en movimiento sobre todas las estructuras de este edificio. Las colonias estaban desorganizadas y molestas. Se observ6 una caida en el numero de acaros del pollo en el edifico de recogida de huevos. Muchos de los huevos fueron de baja calidad, en promedio 35%. Los acaros del pollo tenian tendencia a ocultarse en el suelo, lo cual causaba multiples riesgos porque eran aplastados en el edifico de recogida de huevos.

Edificio 5 -Mismas observaciones que en el edificio 4.

Edificio 6 -Mismas observaciones que en el edificio 4.

La siguiente tabla 13 muestra los resultados de la infestaci6n el dia 15:

Tabla 13

Edificio

Dia 0 (nO/8) Dia 15 (nO/8)

B1

3,9 4,1

B2

3,4 2,2

B3

3,7 1,6

B4

5,4 4,8

B5

4,2 3,7

B6

4,6 3,1

S6lo el edifico 1 tuvo un grado de infestaci6n de acaros del pollo que aument6. Todos los otros edificios tratados con la DRA en agua reaccionaron de una manera positiva al tratamiento; es decir, la infestaci6n de los acaros del pollo disminuy6.

5 Evaluacian el dia 35

Los edificios tambien fueron evaluados el dia 35, de una manera similar a la que se describi6 anteriormente el dia

15. Se advirtieron las siguientes observaciones:

Edificios B1, B2 y B3: los acaros no reaccionaron a la luz o a otra estimulaci6n mecanica. Los acaros fueron incapaces de alimentarse. En el edificio 1 mas que 60% de las colonias se volvieron a formar despues de 10 su desagregaci6n. La reformaci6n de las colonias en el edificio 2 y en el edificio 3 no super6 el 60%.

Edificios B4, B5 y B6: los acaros no reaccionaron a la luz. La reacci6n al estimulo mecanico fue muy poca. El umbral de 60% de las colonias vueltas a formar se super6 en el edificio 4 y en el edificio 6. Las infestaciones fueron practicamente identicas en B4 y B6 que en el edificio B1.

La siguiente tabla 14 muestra los resultados obtenidos relativos a la infestaci6n comparando el dia 0, el dia 15 y el 15 dia 35:

Tabla 14

Edificio

Dia 0 (nO/8) Dia 15 (nO/8) Dia 35 (nO/8)

B1

3,9 4,1 2,4

B2

3,4 2,2 2,3

B3

3,7 1,6 1,9

B4

5,4 4,8 4,5

B5

4,2 3,7 4,1

B6

4,6 3,1 4,1

Estos resultados indican que hay una disminuci6n de la cantidad de acaros rojos del pollo con el tratamiento con DRA.

Claims (5)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una composici6n que comprende una de alomona repelente de pato derivada de secreciones de una glandula uropigial de un pato, que comprende adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol y/o sus derivados y/o mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) o diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol con

   5 uno o mas derivados de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol.
2. 2. La composici6n segun la reivindicaci6n 1, en la que dicha alomona repelente de pato comprende entre 45,0 y 55,0 (% en peso/% en peso) de adipato de bis(2-etilhexilo) y entre 45,0 y 55,0 (% en peso/% en peso) de

   10 diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol y/o sus derivados y/o mezclas de adipato de bis(2-etilhexilo) o diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol con uno o mas derivados de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4-trimetil-1,3-pentanodiol, en la que dichos derivados se seleccionan de esteres, sales, alcoholes, cetonas, eteres, aldehidos, esteroles y amidas de adipato de bis(2-etilhexilo) y diisobutirato de 2,2,4trimetil-1,3-pentanodiol.

   15 3. La composici6n de alomona repelente de pato segun la reivindicaci6n 1 6 2, para usar para repeler aracnidos.

3. 4.

   La composici6n de alomona repelente de pato segun la reivindicaci6n 1 6 2, para usar para tratar o prevenir acaros de pollo o acaros del norte de aves de corral en gallinas, pollos y polluelos.

4. 5.

   La composici6n de alomona repelente de pato segun la reivindicaci6n 3 6 4, en la que dicha alomona repelente de pato se administra oralmente.

   20 6. La composici6n de alomona repelente de pato segun la reivindicaci6n 3 6 4, en la que dicha alomona repelente de pato se administra t6picamente.

5. 7. Disoluci6n, que comprende una alomona repelente de pato segun la reivindicaci6n 1 6 2.

   ��1

   ��6

   1

   6

   1