ES2329529T3 - Formulaciones terapeuticas que contienen veneno de serpiente y/o de insecto para la profilaxis y la terapia del neoplasma. - Google Patents
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Abstract
Utilización de veneno de serpiente y de al menos un adyuvante para la fabricación de un medicamento que comprende una composición de liberación sostenida o dirigida por medio de liposomas para la prevención o tratamiento del neoplasma o del desarrollo neoplásico.
Description
Formulaciones terapéuticas que contienen veneno
de serpiente y/o de insecto para la profilaxis y la terapia del
neoplasma.
La presente invención comprende la utilización
de formulaciones farmacéuticas que contienen veneno de serpiente o
extractos procedentes de estos venenos, los cuales pueden contener,
total o parcialmente, una actividad de la enzima fosfolipasa
A_{2}, sola o en combinación con fosfolipasa A_{2} animal o
vegetal, con o sin compuestos inhibidores de la fosfolipasa C o
antisuero de la enzima fosfolipasa C mono o policlonal a fosfolipasa
C, como candidatas a la vacuna terapéutica para todas las
enfermedades neoplásicas.
Las Fosfolipasas A_{2} son enzimas lipolíticas
que hidrolizan el enlace
sn-2-aciléster de los
glicerofosfolípidos. Existen numerosas formas de PLA_{2} en la
naturaleza, que se describen y clasifican en varios grupos. Las
PLA_{2} del tipo I, II y III son enzimas peptídicas extracelulares
de bajo peso molecular (13-18 kDa), incluyendo
veneno PLA_{2} (tipo I) de cobra y pancreático, PLA_{2} (tipo
II) de serpiente de cascabel e inflamatorio y veneno de abeja (tipo
III). Las PLA_{2} citosólicas intracelulares pertenecen a
distintos grupos, incluyendo las enzimas de 85 kDa (tipo IV) y de
40-75 kDa.
Existen evidencias de que la fosfolipasa
A_{2} (PLA_{2}) está involucrada en la patogénesis de muchas
enfermedades. Por tanto, los niveles locales y circulantes de la
enzima fosfolipasa A_{2} y productos enzimáticos son elevados
durante la infección, la enfermedad inflamatoria, la lesión de
tejidos y la disfunción cerebral y es una indicación precoz del
desarrollo neoplásico antes de que se evidencie la masa de células
tumorales por métodos convencionales de exploración tumoral en
tejidos.
Una actividad excesiva de la fosfolipasa A_{2}
puede provocar inflamación crónica, reacción alérgica, daño
tisular y complicaciones patofisiológicas. Estos efectos pueden ser
consecuencia de la acumulación de productos de fosfolipasa A_{2}
(lisofosfolípidos y ácidos grasos libres, por ejemplo, ácido
araquidónico) y la destrucción de componentes clave de la membrana
fosfolipídica estructural, pero son potenciados por los metabolitos
secundarios tales como eicosanoides y el factor activador
plaquetario. Los productos de fosfolipasa A_{2} y los mediadores
lipídicos procedentes de los mismos se ven implicados en numerosas
actividades que forman parte integrante de la activación celular,
quimiotaxis, adhesión, degranulación, fagocitosis y
agregación.
La fosfolipasa A_{2} secretada en exceso en
sitios locales puede resultar responsable del daño tisular común a
los trastornos reumáticos, lesión del epitelio alveolar de la
enfermedad pulmonar y reperfusión.
Durante la isquemia miocárdica aguda, la
activación citosólica de la fosfolipasa A_{2} y fosfolipasa C
provoca un incremento de Ca^{2+} intracelular. La acumulación
posterior de lisofosfolípidos y ácidos grasos libres provoca el
daño de las membranas sarcolemales, lo que conduce a una lesión
celular irreversible y finalmente a la muerte celular.
La actividad citosólica alterada de la
fosfolipasa A_{2} y fosfolipasa C, o defectos en su control y
regulación, es un factor de predisposición al desarrollo de células
tumorales.
Las prostaglandinas y eicosanoides relacionados
son mediadores y reguladores importantes de las respuestas tanto
inmunes como inflamatorias. La prostaglandina E_{2} induce la
resorción ósea y el leucotrieno B_{4} estimula la vasodilatación
y la quimiotaxis. Se observa un incremento de los niveles de
fosfolipasa A_{2} en la artritis reumatoide (RA), la
osteoartritis, gota, enfermedades vasculares y del colágeno. La
fosfolipasa A_{2} induce la hiperactividad no específica de las
vías aéreas evidente en el asma. La fosfolipasa A_{2} es elevada
también en la peritonitis, el shock séptico, la insuficiencia renal,
la pancreatitis, la enfermedad de Chron y la enfermedad de
Graves.
La actividad de los sistemas de defensa mediados
por células es estimulada por la formación consecutiva de
interleuquina 1\beta (IL-1\beta),
interleuquina-2 (IL-2) e interferón
\gamma (IFN \gamma). El sistema es inhibido por la
interleuquina-4 (IL-4) y también por
la prostaglandina E_{2} (PGE_{2}) e histamina, que son
liberadas cuando se activa el sistema inmune. La inhibición es
fuerte en pacientes de cáncer, debido a que la PGE_{2} se forma
en numerosas células cancerosas y su formación es estimulada por
IL-1\beta. La PGE_{2} y la histamina son
inhibidores de retroacción de la inmunidad mediada por células.
La PGE_{2} se forma a partir de ácido
araquidónico en los monocitos, macrófagos, células cancerosas y
demás células, cuando se libera el ácido araquidónico de los
fosfolípidos celulares. La formación de PGE_{2} es estimulada por
varios compuestos, incluidos histamina, IL-1
(\alpha y \beta) y el factor de necrosis tumoral \alpha
(TNF\alpha). La PGE_{2} inhibe la formación y expresión del
receptor de IL-2 mediante el incremento del nivel
de AMP cíclico (cAMP) en células T ayudantes. Esta concomitancia
reduce la formación de IFN\gamma.
La PGE_{2} inhibe la capacidad de las células
asesinas naturales (NK) para unirse a células tumorales mediante el
incremento de cAMP en las células asesinas naturales. Esto reduce la
muerte de las células tumorales.
Cuando el sistema inmune es estimulado para
destruir células tumorales, la muerte se ve impedida debido a que
IL-1\beta estimula la formación de PGE_{2} en
las células tumorales, lo que aumenta los niveles de cAMP en las
células NK e impide la unión de NK y las células tumorales.
Se bloquea también la activación de la defensa
mediada por células debido a que PGE_{2} aumenta el cAMP en las
células T ayudantes e inhibe la formación de IL-2 e
IFN\gamma.
La células T citotóxicas pueden producir también
PGE_{2} inhibiendo así la actividad de las células NK.
\vskip1.000000\baselineskip
Ciertos tumores humanos y animales
experimentales contiene y/o produce grandes cantidades de
prostaglandinas (PG). Se ha demostrado que las prostaglandinas
E_{2} favorecen una proliferación celular significativa en el
crecimiento tumoral y suprimen la capacidad de respuesta inmune.
La fosfolipasa C específica de
fosfatidilinositol es una importante enzima para la señalización
intracelular. Existen al menos tres grandes clases de fosfolipasas
C específicas de fosfatidilinositol (PtdlnsPLC: PtdlnsPLC \beta,
\gamma,\delta). Las PtdlnsPLC hidrolizan un fosfolípido de
membrana menor, fosfatidilinositol-(4,5)-bifosfato
(Ptdlns (4,5) P_{2}) para producir los segundos mensajeros
inositol-(1,4,5)- trifosfato (Ins (1,4,5) P_{3}), que libera
Ca^{++} de los almacenes intracelulares, aumentando la
concentración de Ca^{++} libre intracelular, y
diacilglicerol, que activa el Ca^{++} y la proteína
fosfolípido-dependiente
serina/treonina-quinasa, proteína quinasa C. Las
proteínas fosforiladas por la proteína quinasa C incluyen factores
de transcripción. Tanto el incremento de la concentración de
Ca^{++} libre intracelular como la activación de proteína quinasa
C conducen a una serie de eventos que culminan en la síntesis de ADN
y en la proliferación celular de células tumorales.
Diversos factores de crecimiento y mitógenos,
incluyendo el factor de crecimiento derivado plaquetario (PDGF),
el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y la bombesina, actúan a
través de los receptores específicos incrementando la actividad de
Ptd Ins PLC en las células. La estimulación continua de Ptd Ins PLC
puede llevar a la transformación celular.
Se ha descubierto que la actividad de Ptd Ins
PLC aumenta en diversos tumores humanos. El 76% de los cánceres de
mama humanos tienen una proteína inmunorreactiva Ptd Ins
PLC-\gamma detectable en comparación con sólo un
6% en tejido mamario benigno.
La actividad citosólica de Ptd Ins PLC aumenta
hasta más de 4 veces en el cáncer de pulmón humano de células no
pequeñas y el cáncer celular renal en comparación con un tejido
normal.
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con un primer aspecto de la
invención, se proporciona la utilización de veneno de serpiente y al
menos un adyuvante para la fabricación de un medicamento que
comprende una composición de liberación sostenida o dirigida por
medio de liposomas, para la prevención o el tratamiento del
neoplasma o del desarrollo neoplásico. Preferentemente, el
medicamento comprende además suero anti-fosfolipasa
C o parte del mismo, o compuestos inhibidores de la fosfolipasa
C.
Los compuestos inhibidores de la fosfolipasa C
pueden ser uno o más de EDTA, fenantrolina, ácido
cloromercuribenzoico, ácido yodoacético y
1-oleoil-2-acetil-sn-glicerol
(OAG).
El medicamento puede comprender además otros
agentes terapéuticamente eficaces.
Esta patente se refiere a la utilización de uno
o más compuestos que, en general, se pueden describir en referencia
a su función, causando directa o indirectamente la inhibición de la
enzima fosfolipasa A_{2} y/o la fosfolipasa C, donde dicha
inhibición es parcial o total.
Por tanto, la región Fc del anticuerpo a dicha
fosfolipasa puede eliminarse total o parcialmente.
Además, esta patente se refiere a la utilización
de uno o más compuestos que, en general se pueden describir en
referencia a función por la interacción con la membrana celular
neoplásica, impidiendo su crecimiento o propagación, impidiendo así
la disrupción de los órganos corporales no implicados y provocando
la no toxicidad al paciente o animal infectado que se está
tratando.
Se demuestra aquí que el suero
anti-PLA_{2} de veneno de serpiente y de plantas,
insectos, mamíferos, y/o epítopos o moléculas mímicas de PLA_{2}
son compuestos proliferativos antitumorales activos y de mejora
inmune.
Por tanto, se puede utilizar un compuesto no
tóxico que presenta actividad inhibidora contra las enzimas
fosfolipasa C, conjuntamente con un suero
anti-PLA_{2}, para obtener un incremento de la
actividad antineoplásica.
El suero anti-PLA_{2} se puede
generar en huevos, produciendo anticuerpos que no reaccionan con el
sistema del complemento humano.
El suero anti-PLA_{2} se puede
generar en mamíferos y extraerse del calostro.
Para su uso al respecto, los compuestos de la
invención se administran a mamíferos, incluidos humanos, en una
cantidad eficaz de 0,05 a 5 g al día por kilogramo de peso corporal.
La cantidad depende, por supuesto, de la condición a ser tratada,
de la gravedad de la condición, la vía de administración del
medicamento y la naturaleza del sujeto. Los medicamentos se pueden
utilizar i.v., por vía oral, parenteral, o por otras vías de
administración estándar, incluyendo la dirección mediante
liposomas/RBC.
Alternativamente, el antisuero se puede producir
sintéticamente por impresión molecular de moléculas orgánicas
patrón utilizando fosfolipasas.
El antisuero puede ser monoclonal o
policlonal.
La actividad terapéutica de los compuestos de
esta invención se demuestra mediante la inhibición de las líneas
celulares tumorales in vitro e in vivo. La toxicidad
de los compuestos se sometió a prueba en ratones Scid. Los
resultados se exponen en la Figura 1 [datos sobre la toxicidad].
\vskip1.000000\baselineskip
Se trataron ratones Scid hembra
(6-8 semanas de edad) con una dilución pura o 1:10
de preparación de antisuero, subcutáneamente (0,1 ml, diario)
durante un período de 14 días. Se midió diariamente el peso de los
ratones. A la finalización, se retiraron los órganos y se fijaron
en formalina para su examen histológico.
\vskip1.000000\baselineskip
No se evidenció ninguna toxicidad, tal como se
evaluó mediante los pesos y el bienestar clínico de los animales
(Figura 1). Los compuestos de esta invención se pueden combinar con
otros agentes quimioterapéuticos o
inmunosupresores/antiinflamatorios tales como esteroides o agentes
antiinflamatorios no esteroideos en las composiciones farmacéuticas
y métodos descritos aquí.
El anti-suero de veneno de
serpiente y/o de insecto y/o de mamífero y/o de enzima PLA_{2} o
sus epítopos se puede utilizar como tratamiento terapéutico en
enfermedades en las que se evidencian altos niveles de fosfolipasa
A_{2} (por ejemplo artritis reumatoide, véase Tabla B). Se plantea
también que esta nueva terapia con suero
anti-PLA_{2} de veneno (serpiente o insecto) y/o
anti-componentes de PLA_{2} (procedentes de
animales o plantas) se pueda aplicar como terapia profiláctica
mediante la utilización de dosis sub-letales de
venenos o extractos de la enzima PLA_{2} de veneno junto con
PLA_{2} de mamífero o planta o péptidos sintéticos que muestren
actividad de PLA_{2}, más un adyuvante, para estimular una
respuesta de inmunoglobulina en el paciente, véanse los resultados
- Eficacia de las vacunas en ratones Balb/c. Se plantea asimismo que
un péptido sintético que incorpora la actividad de la fosfolipasa
A_{2} y/o fosfolipasa C se podría utilizar para generar dicho
antisuero o agente terapéutico o vacuna. Se puede utilizar en la
generación de esta vacuna/anti-suero terapéutico
por medio de la conocida homología de secuencias que existe entre la
fosfolipasa A_{2} humana y los venenos de serpiente/insecto junto
con PLA_{2} de animal utilizada en combinación con compuestos
conocidos por inhibir la actividad de la fosfolipasa C o antisuero
desarrollado contra esta enzima.
Se pueden formular composiciones de liberación
sostenida o dirigida, por ejemplo mediante liposomas, o aquellas en
las que el compuesto activo está protegido por revestimientos
diferencialmente degradables, por ejemplo microencapsulación, capas
múltiples, etc. También es posible liofilizar los nuevos compuestos
y utilizar los productos liofilizados obtenidos, por ejemplo para
la preparación de productos para su almacenamiento y posterior
inyección.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incorpora el uso farmacéutico de venenos o
partes de los mismos y/o de PLA_{2} de mamífero o componentes
enzimáticos como antígenos en vacunas: compuestos no tóxicos que
presentan actividad anti-fosfolipasa C se pueden
incorporar con el suero anti-PLA_{2} de cualquier
origen, o moléculas mímicas que presenten actividad de la
fosfolipasa A_{2}.
En ciertas aplicaciones de esta terapia, puede
resultar necesario limitar la reacción ADCC que podría provocar la
enfermedad del suero y asegurar que no se produzca que el componente
de IgG (FC) sea segmentado enzimáticamente de la inmunoglobulina
purificada por afinidad, de forma que las células asesinas naturales
no reaccionen a la inmunoglobulina en el antisuero.
Se sometió a prueba la inhibición de la enzima
fosfolipasa A_{2} de fluido sinovial aislado de un paciente con
artritis reumatoide en un rango de dilución del
anti-suero de veneno de serpiente. El
anti-suero de veneno de serpiente generado en
caballos se reconstituyó en 10 ml de agua estéril. Se utilizaron las
siguientes diluciones: 1:10; 1:20; 1:40; y 1:60. El método empleado
fue el señalado en "Infection and Immunity, Sept. 1992, p.
3928-3931. Induction of Circulating Group II
Phospholipase A_{2} Expression in Adults with Malaria".
\vskip1.000000\baselineskip
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Se sometió a prueba un rango de líneas celulares
tumorales con 3 concentraciones de anti-suero de
veneno de serpiente por medio del ensayo MTT. Este antisuero no
estaba purificado por afinidad. El ensayo MTT se describe en Alley
y col. (Cancer Research, 48: 589-601, 1988), véase
la Tabla B.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
C57BL/6
\vskip1.000000\baselineskip
Los ratones fueron inoculados vía subcutánea
(sc) con 0,5 x 10^{6} células de melanoma B16F1 en la región del
costado. Una vez desarrollados tumores palpables, los ratones
recibieron diariamente inyecciones sc como sigue:
Se midieron diariamente las dimensiones de los
tumores mediante calibradores. Una vez los tumores de los ratones
control fueron de aproximadamente 1,5 cm o más de diámetro, se
sacrificaron todos los ratones. Los tumores se retiraron y se
pesaron.
\vskip1.000000\baselineskip
Los pequeños tumores se apreciaron primero por
palpación en todos los ratones 6-7 días después de
la inoculación. Se midieron los cambios de volumen según las
medidas de los calibradores, junto con el peso de los tumores en la
autopsia. Véase la Fig. 2 [Efecto del suero antiveneno de serpiente
purificado por no afinidad sobre el crecimiento del Melanoma B16F1]
en cuanto al efecto del suero antiveneno de serpiente sobre el
retardo del crecimiento de
tumores.
tumores.
\newpage
Examen in vitro de la
preparación de suero purificado por afinidad antiveneno de serpiente
frente a un rango de líneas celulares tumorales (Fig. 3A [Tumor
colorrectal humano C170HM2], Fig. 3B [Tumor de vejiga humano T24],
Fig. 3C [Tumor de linfoma humano MOLT 4], Fig. 3D [Tumor pancreático
humano PAN 1], Fig. 3E [Tumor de mama humano MDA 468], Fig. 3F
[Tumor de pulmón de células pequeñas humano 841], Fig. 3G [Tumor
gástrico humano ST24] y Fig. 3H [Tumor de ovario humano
OVCAR3])
Los efectos inhibidores in vitro de la
preparación de suero antiveneno de serpiente generado en caballo,
previamente evaluados, se ocultaron debido al aumento de células
tumorales en el caldo. Por tanto, en el ensayo siguiente, se
evaluó el suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sembraron líneas celulares en placas de 96
pocillos a una concentración celular de 10^{4} células por
pocillo tanto en medio sin suero (Hams F12:RPMI 1640 + 0,5% de
seroalbúmina bovina) como en medio que contiene suero (RPMI 1640 +
10% de suero de ternera fetal inactivado por calor). La preparación
de antisuero se diluyó en el medio correspondiente y se añadió a
los pocillos 2-3 horas después de añadir las células
(para permitir la adherencia celular). Se incubaron las placas a
37ºC en -5% de CO_{2} durante 3 días. Luego se incubaron las
células con 1 mg/ml de MTT (metil tiazol tetrazolio) durante 4 horas
a 37ºC. Después, se solubilizaron los cristales con
dimetilsulfóxido y se midió la absorbancia a 550 nm.
\vskip1.000000\baselineskip
Los antisueros de prueba inhibieron la totalidad
de las líneas celulares a todas las concentraciones estudiadas. El
nivel de inhibición fue estadísticamente significativo a partir del
control no tratado a todas las diluciones de antisuero, con todas
las líneas celulares, tal como se evaluó por medio de un análisis de
variancia monodimensional.
\vskip1.000000\baselineskip
Se inyectaron vía subcutánea células
C170MH_{2} en el costado izquierdo de diez ratones macho sin pelo.
Se repartieron los ratones al azar en dos grupos.
Grupo 1 - 100 \mul de antisuero dos veces al
día vía intravenosa (IV)
Grupo 2 - 100 \mul de PBS dos veces al día
IV
Se midieron los tumores dos veces por semana,
utilizando calibradores en dos dimensiones. Se calculó la sección
transversal. También se pesaron los ratones una vez por semana. La
terapia terminó el día 22.
\vskip1.000000\baselineskip
Se midieron las áreas de sección transversal a
intervalos de tiempo crecientes durante el experimento, tal como se
muestra en la Fig. 4 [Efecto del suero antiveneno de serpiente
purificado por afinidad sobre el área de sección transversal media
de C170HM_{2} en ratones sin pelo]. La preparación de antisuero
purificado por afinidad indujo una deceleración en el crecimiento
cuando se compara con controles de solución salina. Se realizó un
ANOVA sobre cuyos resultados se evaluó el tratamiento con respecto
al tiempo, y muestra una significancia de P = 0,028.
A la finalización del experimento, se pesaron
los tumores, se muestran los resultados en la Fig. 5 [Efecto del
suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad sobre el peso
final de los tumores de C170HM_{2}]. No se observó ningún efecto
tóxico de la preparación del antisuero purificado por afinidad.
\vskip1.000000\baselineskip
La preparación de suero antiveneno de serpiente
purificado por afinidad se diluyó 1:2 y 1:10 y se combinó con 5
\muM de OAG y se añadió a los pocillos tal como se describe
anteriormente para el Ensayo MTT. Las líneas celulares sometidas a
prueba eran de tumor de mama humano, MDA 468, tumor de pulmón humano
de células pequeñas 841 y tumor renal humano TK-10.
Se muestran los resultados en la Fig. 6A [Suero antiveneno de
serpiente purificado por afinidad y (OAG) una combinación de
inhibidor de Fosfolipasa C - Tumor de mama humano MDA 468], Fig. 6B
[Suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad y (OAG) una
combinación de inhibidor de Fosfolipasa C - Tumor de pulmón humano
de células pequeñas 841] y 6C [Suero antiveneno de serpiente
purificado por afinidad y (OAG) una combinación de inhibidor de
Fosfolipasa C - Tumor renal humano TK-10].
\vskip1.000000\baselineskip
Se retiraron asépticamente los tumores MDA 468
de los ratones Scid hembra donantes. Se trituró asépticamente el
tejido, se juntó y se implantó en ratones Scid hembra anestesiados
(el producto anestésico se componía de una inyección de 0,2 ml de
Hypnorm (Jannsen):Hyonovel (Roche):agua destilada en una proporción
de 1:1:5). Los implantes de tejido se componían de trozos de
3-5 mm^{2} y después del transplante subcutáneo en
el costado izquierdo, se cosió la incisión. Entonces se repartieron
al azar los ratones Scid en 2 grupos de 10 animales. Se trataron
diariamente con una inyección subcutánea de 0,2 ml (en el costado
opuesto al injerto de tumor) de una combinación de suero antiveneno
de serpiente purificado por afinidad y una dilución (OAG) 5 \muM
de preparación de antisuero. Los animales control recibieron 0,2 ml
de solución salina tamponada con fosfato, pH 7,6. Se sacrificaron
todos los animales el día 63 y los tumores se diseccionaron, pesaron
y procesaron para su histología. Los resultados se muestran en la
Fig. 7 [Efecto del suero antiveneno purificado por afinidad en
combinación con 5 \muM del inhibidor de fosfolipasa C (OAG)].
\vskip1.000000\baselineskip
El objetivo del estudio consiste en demostrar la
eficacia de los niveles subletales del veneno de víbora de Russell
atrapado dentro de liposomas y la enzima porcina fosfolipasa A_{2}
atrapada dentro de liposomas trabajando en combinación para otorgar
una respuesta sostenida y protectora del anticuerpo a una prueba con
células de leucemia (células WEHI-3).
El veneno de víbora de Russell se sometió a
toxoides con tetróxido de osmio al 2% y se atrapó en liposomas
(fosfocolina y colesterol de huevo). Se esterilizaron los
liposomas.
La enzima porcina fosfolipasa A_{2} se atrapó
en liposomas (fosfocolina y colesterol de huevo) y se
esterilizó.
La inmunización de los ratones consistía en una
inyección subcutánea inicial de 0,25 ml (que contenía 250 \mug de
veneno) y 3 días más tarde se inyectó vía subcutánea a los ratones
0,25 ml de PLA_{2} porcina (que contenía 250 \mug de PLA_{2}
porcina). Se aplicaron refuerzos de cada vacuna a intervalos de 3
semanas.
Se inyectó a los ratones control 0,25 ml de
solución salina fisiológica estéril los días que correspondían a
las inoculaciones de los ratones de prueba.
\vskip1.000000\baselineskip
En el estudio se utilizaron ratones Balb/c
(20-25 g). Se emplearon 15 ratones en cada
grupo.
Grupo I - ratones de prueba
Grupo II - ratones control
\vskip1.000000\baselineskip
Los ratones inmunizados y de control se
sometieron a prueba mediante una inyección intravenosa en la vena
de la cola con aproximadamente 5 x 10^{5} células leucémicas
(células WEHI-3) el día 30 del estudio.
Se observaron los ratones de prueba durante un
período prolongado después de la muerte de los ratones control,
aproximadamente a los 24 días.
\vskip1.000000\baselineskip
Todos los ratones control murieron de leucemia
en un período de tiempo asignado de 24 días. La inoculación de la
combinación de venenos protegió al grupo vacunado contra las células
cancerosas y el coeficiente de supervivencia fue del 100% el día
35, cuando finalizó el experimento.
Claims (10)
1. Utilización de veneno de serpiente y de al
menos un adyuvante para la fabricación de un medicamento que
comprende una composición de liberación sostenida o dirigida por
medio de liposomas para la prevención o tratamiento del neoplasma
o del desarrollo neoplásico.
2. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque el medicamento comprende además suero
anti-fosfolipasa C o parte del mismo, o compuestos
inhibidores de la fosfolipasa C.
3. Utilización según la reivindicación 2,
caracterizada porque los compuestos inhibidores de la
fosfolipasa C son uno o más de EDTA, fenantrolina, ácido
cloromercuribenzoico, ácido yodoacético y
1-oleoil-2-acetil-sn-glicerol
(OAG).
4. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el
medicamento comprende además otros agentes terapéuticamente
eficaces.
5. Utilización según la reivindicación 2,
caracterizada porque la región Fc del anticuerpo a dicha
fosfolipasa se elimina total o parcialmente.
6. Utilización según las reivindicaciones 2, 3 ó
5, caracterizada porque se utiliza un compuesto no tóxico
que muestra actividad inhibidora contra las enzimas fosfolipasa C
conjuntamente con un suero anti-fosfolipasa A_{2}
(PLA_{2}) para obtener un aumento de la actividad
antineoplásica.
7. Utilización según la reivindicación 6,
caracterizada porque el suero anti-PLA_{2}
se genera en el huevo, produciendo anticuerpos que no reaccionan
con el Sistema del Complemento humano.
8. Utilización según la reivindicación 6,
caracterizada porque el suero anti-PLA_{2}
se genera en mamíferos y se extrae del calostro.
9. Utilización según la reivindicación 6,
caracterizada porque el antisuero se produce sintéticamente
mediante impresión molecular de moléculas orgánicas patrón
utilizando fosfolipasas.
10. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 6 a 9, caracterizada porque el antisuero es
monoclonal o policlonal.
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WO2002085391A1 (es) * | 2001-04-24 | 2002-10-31 | Luis Alberto Costa | Uso de una fosfolipasa a2 para la preparacion de composiciones farmaceuticas y/o cosmeticas para la prevencion y/o el tratamiento local y/o sistemico de enfermedades y/o procesos provocados por patogenos intra y extracelulares que expresen fosfolipidos de membrana |
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US5053492A (en) * | 1986-08-07 | 1991-10-01 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunopurification using monoclonal antibodies to Mojave toxin |
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US5622832A (en) * | 1990-02-28 | 1997-04-22 | Genetics Institute, Inc. | Arachidonic acid releasing phospholipase A2 enzyme and methods of use |
JP2984029B2 (ja) * | 1990-05-30 | 1999-11-29 | 塩野義製薬株式会社 | 膜型ホスホリパーゼa▲下2▼を認識するモノクローナル抗体および膜型ホスホリパーゼa▲下2▼の免疫測定法 |
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