ES2240520T3

ES2240520T3 - Tripeptidos o tetrapeptidos angiogenicos derivados de acsdkp.

Info

Publication number: ES2240520T3
Application number: ES01972173T
Authority: ES
Inventors: Joanna Bakala; Pierre Jean-Paul Potier; Francoise Lawrence; Nathalie Cheviron; Jerome Bignon; Yves Fromes
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date: 2000-09-21
Filing date: 2001-09-20
Publication date: 2005-10-16
Anticipated expiration: 2021-09-20
Also published as: CA2423190A1; DE60110247D1; WO2002024218A1; EP1318829A1; AU2001291962A1; EP1318829B1; DE60110247T2; US20040038907A1; FR2814076A1; CA2423190C; US7235532B2; FR2814076B1; JP4925551B2; JP2004509148A

Abstract

Utilización de un compuesto de fórmula I: **(Fórmula)** en la que, A1 es el radical correspondiente a D- o L-Ser, A2 es el radical correspondiente a D- o L-Asp o Glu, A3 es el radical correspondiente a D- o L-Lys, Arg u Orn, A4 es el radical correspondiente a D- o L-Pro, R1 y R2 se seleccionan independientemente de entre H, C1-C12-alquilo sustituido o no, C7-C20-arilalquilo sustituido o no, R4CO o R4COO, siendo R4 C1-C12-alquilo sustituido o no, C7-C20-arilalquilo sustituido o no, entre las sustituciones se deben citar OH, NH2 o COOH, X1 y X2 son unos enlaces peptídicos o pseudopeptídicos, X3 es CO o CH2, y R3 es OH, NH2, C1-C12-alcoxi o NH-X4-CH2-Z, X4 es un C1-C12-hidrocarbono normal o ramificado, Z es H, OH, CO2H o CONH2 o bien los tripéptidos correspondientes que comprenden los radicales A1, A2, A3, así como las sales farmacéuticamente aceptables, para la realización de un medicamento destinado al tratamiento de patologías que pueden beneficiarse de una angiogénesis.

Description

Tripéptidos o tetrapéptidos angiogénicos derivados de AcSDKP.

La presente invención se refiere a unos compuestos que inducen la angiogénesis y a sus aplicaciones, en particular en el tratamiento de ciertas patologías vasculares.

La angiogénesis es un fenómeno fisiológico fundamental presente a lo largo de toda la vida de un individuo y que permite mantener la integridad estructural y funcional del organismo. La angiogénesis aparece como respuesta a unos estímulos locales que inducen una sucesión de acontecimientos que llevan a la formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de vasos preexistentes.

Durante una neovascularización, las células endoteliales representan el elemento central indispensable para la creación de nuevos vasos. Su desarrollo y su crecimiento son regulados por unos factores positivos (angiogénicos) y negativos (angioestáticos). A nivel de los vasos ya formados, las células endoteliales están en estado quiescente. Sin embargo, en respuesta a un estímulo angiogénico, estas células comienzan a proliferar y a emigrar hacia el lugar de creación de nuevos vasos para lo que se precisa la creación de interacciones con las células circundantes y los elementos de la matriz extracelular.

En el adulto, la angiogénesis es un proceso clave de las funciones reproductoras (formación del cuerpo lúteo, formación de la placenta, desarrollo del endometrio) y sobre todo de la reparación tisular en caso de traumatismos (cicatrización) y de isquemias. Por lo tanto, resulta evidente que la estimulación de la angiogénesis mediante la administración de moléculas exógenas representaría un progreso importante en la terapia de ciertas afecciones tales como la reparación de llagas cutáneas, óseas, gástricas u oftálmicas. Asimismo, se abren las perspectivas de utilización clínica de dichos mediadores angiogénicos para favorecer la regeneración tisular asociada a las patologías isquémicas o para la endotelización de prótesis.

Se han identificado varios factores angiogénicos, capaces de inducir tanto in vitro como in vivo las etapas de angiogénesis (angiogenina, angiopoietina, interleucina 8 (IL-8), "epidermal growth factor" (EGF), "fibroblast growth factors" (FGFs), "transforming growth factor" (TGF) \alpha y \beta, "hepathocyte growth factor" (HGF), "plateled-derived endothelial growth factor" (PDGF), "tumor necrosis factor \alpha" (TNF\alpha), "vascular endothelial growth factors" (VEGFs), "placental growth factor" (PDGF). Todos estos factores, de naturaleza proteica, son objeto de investigaciones intensas con referencia a sus aptitudes para la reparación tisular en el hombre. Ya se han iniciado los ensayos clínicos en las fases I y II con los VGEFs y los FGFs. En particular, estos factores son evaluados por sus efectos terapéuticos sobre las patologías isquémicas tanto cardíacas como cerebrales. Los resultados actuales de estos ensayos muestran que cualquiera que sea el modo de administración de estos factores (perfusión de las proteínas recombinantes o terapia génica), estos últimos no manifiestan la eficacia terapéutica esperada (Ferrara N. Alitalo K., 1999 Clinical applications of angiogenic growth factors and their inhibitors. Nature Med, 5: 1359-1364). En la actualidad, nuevas vías de investigación que apuntan a estimular la neovascularización tisular, se dirigen hacia terapias que combinan varios factores angiogénicos.

La disponibilidad de los factores angiogénicos en forma de proteínas recombinantes ha permitido demostrar que su aplicación local podía acelerar la curación de las llagas. El producto que parece más interesante es el TGF\beta. Sus propiedades cicatrizantes están sólidamente establecidas desde hace varios años y se están llevando a cabo ensayos clínicos.

En cualquier caso, la mayoría de estos factores angiogénicos son unas proteínas de elevado peso molecular que sólo pueden ser obtenidas por vía recombinante, con lo cual, aumenta el precio de coste del tratamiento.

Aunque ciertos polipéptidos son susceptibles de estimular la angiogénesis, los inventores han conseguido demostrar una actividad angiogénica propia de las estructuras peptídicas de pequeño tamaño, y más especialmente de cuatro ácidos aminados.

Debe observarse que los péptidos de pequeño tamaño, que comprenden la fórmula I o por lo menos los tres ácidos aminados (que comprenden los radicales que corresponden a A_{1}, A_{2}, A_{3}), forman parte asimismo de la invención.

Es la razón por la cual la presente invención se refiere, para este tipo de aplicación, a la utilización de pequeños péptidos cuya síntesis química no plantea problemas y cuyo precio de coste es bastante bajo.

Además, la utilización de estos péptidos presenta, en el plano industrial, un cierto número de ventajas, en particular el hecho de que son más fácilmente manipulables que las proteínas.

La presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de fórmula I:

1

en la que,

A_{1} es el radical correspondiente a D- o L-Ser,

A_{2} es el radical correspondiente a D- o L-Asp o Glu,

A_{3} es el radical correspondiente a D- o L-Lys, Arg u Orn,

A_{4} es el radical correspondiente a D- o L-Pro,

R_{1} y R_{2} se seleccionan independientemente de entre H, C_{1}-C_{12}-alquilo sustituido o no, C_{7}-C_{20}-arilalquilo sustituido o no, R_{4}CO o R_{4}COO, siendo R_{4} C_{1}-C_{12}-alquilo sustituido o no, C_{7}-C_{20}-arilalquilo sustituido o no, entre las sustituciones se deben citar OH, NH_{2} o COOH,

X_{1} y X_{2} son unos enlaces peptídicos o pseudopeptídicos,

X_{3} es CO o CH_{2}, y

R_{3} es OH, NH_{2}, C_{1}-C_{12}-alcoxi o NH-X_{4}-CH_{2}-Z, X_{4} es un C_{1}-C_{12}-hidrocarbono normal o ramificado, Z es H, OH, CO_{2}H o CONH_{2},

o bien los tripéptidos correspondientes que comprenden los radicales A_{1}, A_{2}, A_{3},

así como las sales farmacéuticamente aceptables, para la realización de un medicamento destinado al tratamiento de patologías que pueden beneficiarse de una angiogénesis.

Por la expresión "beneficiarse de una angiogénesis" se entiende beneficiarse de una inducción y/o de una estimulación de la angiogénesis.

Los péptidos o pseudopéptidos que corresponden a estas fórmulas son derivados de la estructura de base del tetrapéptido Acetil-Ser-Asp-Lys-Pro (AcSDKP), estando destinados estos derivados en particular a aumentar la actividad angiogénica, disminuir los efectos secundarios y/o aumentar la duración de vida en medio fisiológico.

Entre los compuestos de la invención, es preciso mencionar el tripéptido derivado de un péptido AcSDKP y que comprende los radicales A_{1}, A_{2}, A_{3}.

La estructura de base es una molécula que ha sido aislada de la médula ósea de ternera fetal y cuyas aplicaciones han estado, hasta la fecha, unidas a una función de la inhibición de la proliferación de unas células cepas hematopoiéticas, descrita en particular en el documento WO 88/00594.

Por "radical correspondiente" se ha de entender el radical A de la fórmula: NH_{2}-CH(A)-COOH correspondiente al ácido aminado.

Así, A es

-CH_{2}OH para Ser,

-CH_{2}COOH para Asp,

-CH_{2}-CH_{2}-COOH para Glu,

-(CH_{2})_{3}-NH-C(NH)NH_{2} para Arg,

-(CH_{2})_{3}-NH_{2} para Orn, y

-(CH_{2})_{4}-NH_{2} para Lys,

para el ácido aminado terminal A_{4}, se trata o bien de la estructura:

=N-CH(A)-CO- o bien NH-(CH)A-CO-.

Por "pseudopéptido" se designan unos compuestos similares a los péptidos de referencia pero en los que uno o varios enlaces peptídicos -CO-NH- han sido reemplazados por un enlace equivalente al enlace peptídico que es denominado pseudopeptídico, es decir -CH_{2}-NH_{3}, -CH_{2}-S-, -CH_{2}-O-, -CO-CH_{2}-, -CH_{2}-CO-, -CH_{2}-CH_{2}- representado por ejemplo por \Psi (CH_{2}NH).

Entre los radicales R_{1} y R_{2}, se preferirán muy particularmente los radicales: H y (C_{1}-C_{3})-alquil-CO- en particular CH_{3}CO así como HOOC-CH_{2}-CH_{2}-CO-O

Asimismo R_{3} es preferentemente NH_{2}, OH o NHCH_{3}.

Entre los compuestos, se deben citar:

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-NH_{2}

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-OH

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-OH

H-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-OH

HOOCCH_{2} CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-OH

HOOCCH_{2} CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-OH

HOOCCH_{2} CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-OH

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-NH_{2}

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-NH_{2}

H-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-NH_{2}.

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

H-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-Pro-NHCH_{3}

H-Ser-Asp-Lys-Pro-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-Pro-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-Pro-NH_{2}

Así como los siguientes compuestos:

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-OH

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-NH_{2}

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-OH

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-OH

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-OH

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-OH

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-NH_{2}

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

H-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-NHCH_{3}

H-Ser-Asp-Lys-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

Entre las sales farmacéuticamente aceptables, se deben citar en particular las sales no solamente con ácidos no orgánicos, cloruro, sulfato, fosfato, nitrato, clorhidrato sino también con los ácidos orgánicos, en particular el lactato, el citrato por ejemplo, así como las sales con las bases.

Los inventores han puesto ahora en evidencia que este tetrapéptido o los péptidos emparentados de fórmula I eran capaces de inducir la angiogénesis.

Entre los tratamientos de patologías que pueden beneficiarse de una estimulación de la angiogénesis, se deben citar las patologías vasculares, en particular en el tratamiento de las isquemias. Así, los compuestos según la presente invención pueden ser utilizados en particular en los siguientes casos:

1.: inducción de la formación de vasos colaterales en el caso de las patologías isquémicas:

-: isquemia miocárdica (enfermedad de las arterias coronarias, infarto de miocardio),

-: isquemia periférica (oclusión de las arterias periféricas),

-: isquemias cerebrales (enfermedades vasculares cerebrales),

2.: cicatrizaciones y reparaciones de fracturas en el caso de las lesiones de los tejidos:

-: dermatología: quemaduras o heridas, úlceras crónicas,

-: oftalmología: lesiones corneanas o retinianas,

-: gastroenterología: úlceras gastroduodenales,

-: cirugía de los huesos: reparaciones de los tejidos duros: hueso + cartílago,

3.: regeneración nerviosa,

4.: cirugía reconstructiva y cirugía estética,

5.: endotelización de biometales y de implantes vasculares,

6.: transplante de órganos (por ejemplo los islotes de Langherans).

La lista anterior únicamente constituye una parte de las aplicaciones posibles, en particular en el caso de tratamientos combinados, una aceleración de la angiogénesis puede permitir acelerar la cura.

Los compuestos según la presente invención resultan asimismo útiles en los cultivos ex vivo o in vitro de tejidos que precisan una neovascularización como inductores de angiogénesis, por ejemplo, en el cultivo de piel o en los recubrimientos de materiales por unos tejidos.

In vitro, se ha podido demostrar que el AcSDKP es capaz de estimular de forma significativa el crecimiento de las células endoteliales humanas (HUVEC y EA.hy926) y de las células endoteliales que provienen de los capilares de cerebro bovino (BBC).

In vivo, la actividad angiogénica del AcSDKP ha sido testada sobre el modelo experimental "de la membrana corioalantoidiana del embrión de pollo". Sobre este modelo, el AcSDKP induce de forma importante la neovascularización.

Por otra parte, un estudio preliminar realizado sobre unas células medulares ha revelado que el AcSDKP in vitro aumenta la adherencia de estas células sobre diferentes componentes de la matriz extracelular tales como la fibronectina, el colágeno IV y la laminina. Se han obtenido unos resultados comparables en un experimento preliminar realizado con unas células endoteliales humanas HUVEC. Se ha establecido que estas interacciones entre unas células endoteliales y la matriz extracelular son determinantes para la neovascularización e intervienen en diferentes etapas de la angiogénesis. En efecto, la matriz extracelular influye en la proliferación y la migración de las células endoteliales vasculares, así como en su capacidad de diferenciarse y organizarse en capilares para formar nuevos vasos funcionales adaptados a su microentorno tisular.

Los compuestos según la presente invención pueden ser administrados en una forma farmacéuticamente apropiada, por ejemplo por vía oral, intravenosa, transdérmica, pulmonar, subcutánea, nasal o de otro tipo, con las formas correspondientes, ya se trate de comprimidos, soluciones inyectables o pomadas, geles, en particular cuando se desee realizar unas composiciones destinadas a mejorar la cicatrización.

En las revascularizaciones, en particular en el tratamiento de las isquemias, se preferirá recurrir a unas vías inyectables y en particular a unas perfusiones.

Evidentemente, los compuestos según la presente invención podrán ser utilizados en combinación con otros principios activos destinados eventualmente a tratar directamente la patología cuando la angiogénesis únicamente constituya una terapia de apoyo de una terapia principal, por ejemplo en el tratamiento de las úlceras gastroduode-
nales.

En cuanto a lo que se refiere a las dosis de administración, se ha constatado en los modelos utilizados que el efecto angiogénico pasaba por un máximo para decrecer a continuación si se aumentaban las dosis administradas. Por lo tanto, será preciso adaptar eventualmente la dosis de administración al tipo de patología y al paciente en caso necesario. Las dosis óptimas de AcSDKP están comprendidas entre 10^{-5} y 10^{-11} M y estarán preferentemente comprendidas entre 10^{-6} y 10^{-9}.

Los compuestos según la presente invención pueden ser sintetizados mediante unos procedimientos de síntesis de tipo peptídico o pseudopeptídico, en particular los procedimientos descritos en el documento WO 88/00594 que describe la síntesis del derivado AcSDKP y en el documento WO 97/28183 que describe la síntesis de pseudopéptidos emparentados con el AcSDKP.

Leyenda de las figuras

- Figuras 1a, 1b y 1c: el AcSDKP estimula in vitro el crecimiento de las células endoteliales bovinas (BBC) y humanas (HUVEC y EA.hy926).

- Figuras 2a, 2b y 2c: efecto del AcSDKP y de sus análogos sobre la vascularización de la membrana corioalantoidiana de embrión de pollo (CAM).

- Figura 3: efecto del AcSDKP sobre la formación de tubos vasculares in vitro por las células endoteliales (EA.
hy926) en el Matrigel.

Ejemplo 1

Los ensayos siguientes han sido realizados con el tetrapéptido AcSDKP y se han observado los siguientes resultados:

El AcSDKP estimula de manera significativa el crecimiento de las células endoteliales provenientes de capilares del cerebro bovino (BBC) y de las células endoteliales venosas de cordones umbilicales humanos (HUVEC) así como el crecimiento de una descendencia de células HUVEC inmortalizadas (EA.hy926). El efecto mitógeno del AcSDKP se manifiesta en unas concentraciones que varían entre 10^{-6} y 10^{-11} M con un máximo para 10^{-9} M.

Los resultados de estos estudios están agrupados en las figuras 1 a, 1b y 1c.

Un estudio complementario realizado sobre médula total (que contiene entre otras células endoteliales) ha demostrado que el AcSDKP in vitro aumenta la adherencia de las células de la médula sobre diversos componentes de la matriz extracelular tales como la fibronectina, el colágeno IV y la laminina.

La concentración óptima de AcSDKP en este tipo de modelo está comprendida entre 10^{-6} y 10-^{8} M.

Se han obtenido unos resultados comparables en unos experimentos preliminares realizados sobre células endoteliales humanas HUVEC.

Se ha establecido que estas interacciones entre las células endoteliales y la matriz extracelular son determinantes para la neovascularización e intervienen en diferentes etapas de la angiogénesis. En efecto, la matriz extracelular influye en la proliferación y la migración de las células endoteliales vasculares, así como en su capacidad de diferenciarse y organizarse en capilares para formar nuevos vasos funcionales adaptados a su microentorno tisular.

Ejemplo 2

Los siguientes experimentos han sido realizados sobre el modelo experimental de la membrana corioalantoidiana del embrión de pollo y sobre este modelo se ha testado la actividad del AcSDKP y de sus análogos. Se ha podido demostrar que el AcSDKP y su análogo que resiste a la proteolisis, AcSDKP-NH_{2}, inducían de manera significativa la neovascularización, mientras que su isómero óptico, el AcS_{D}DKP, no mostraba ningún efecto angiogénico. El aumento de la densidad de la vascularización varía en función de la dosis estudiada con un máximo de efecto para el AcSDKP y el AcSDKP-NH_{2} a unas concentraciones comprendidas entre 10^{-9} M y 10^{-7} (figuras 2a, 2b y 2c)

Ejemplo 3

Los resultados de un estudio in vivo realizado en ratas muestran que el AcSDKP induce asimismo la neovascularización en los mamíferos.

En estos experimentos, el AcSDKP ha sido inyectado en el músculo abdominal en la rata normal (tratamiento dos veces por día durante 5 días). Una angiografía de las paredes abdominales realizada en el animal sacrificado el día 8 ha revelado una vascularización más desarrollada (aumento significativo del número de pequeños vasos) en los animales tratados con AcSDKP a la dosis de 5 \mug/kg/inyección. Se debe destacar que este efecto persiste en el tiempo (observaciones realizadas un mes después del inicio del tratamiento). No se ha observado ninguna modificación significativa de la vascularización tras la administración de AcSDKP a la dosis de 50 \mug/kg/inyección.

La pérdida de la actividad angiogénica del AcSDKP unida al aumento de la dosis administrada que se ha observado tanto in vitro (células en cultivo) como in vivo (embrión de pollo o de rata) permanece acorde con la existencia para el AcSDKP de una dosis de respuesta en campana como se ha descrito anteriormente [(Guignon M. Bonnet D, Lemoine F., Kobari L., Parmentier C., Mary JY, Najman A., (1990) Inhibition of human bone marrow progenitors by the synthetic tetrapeptide AcSDKP; Exp. Hematol. 18, 1112; Jackson JD, Yan Y., Ewel C., Talmage JE. (1996) Activity of Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro (AcSDKP) on hematopoietic progenitors in short term and long-term murine bone marrow cultures. Exp. Hematol., 24, 475)].

Ejemplo 4

La organización de las células endoteliales en tubos vasculares constituye una etapa importante de la angiogénesis. Se ha demostrado que el AcSDKP estimula, tanto in vitro como in vivo, la formación de los tubos en el Matrigel.

Las experiencias realizadas in vitro con dos tipos de células endoteliales muestran que el AcSDKP a las concentraciones de 10^{-9} M y 10^{-11} M induce un aumento de la superficie total de la red vascular con respecto a los valores de control. Se han observado las estimulaciones máximas, correspondientes a 60% y a 58% de aumento, tras 6 horas de exposición de las células al tetrapéptido. Estos efectos son comparables al generado por el FGFb a 1 ng/ml (figura 3).

In vivo, el AcSDKP induce de manera dosisdependiente la invasión vascular del Matrigel colocado bajo la piel del animal (rata Sprague-Dawley). En este experimento, el AcSDKP ha sido mezclado al Matrigel antes de la implantación. Siete días mas tarde, los animales han sido sacrificados y se han tomado muestras del Matrigel que han sido fijadas en el formol y han sido objeto de un estudio histológico. Las observaciones microscópicas y la cuantificación de los vasos tras la coloración y el inmunomarcaje han revelado la presencia de un número mucho más importante de vasos en el interior del Matrigel que ha contenido AcSDKP frente al Matrigel testigo (Tabla 1). Para la cuantificación, las secciones vasculares han sido contadas sobre 10 campos consecutivos (superficie=32 mm^{2}) a partir de la zona más rica.

TABLA 1 Efecto del AcSDKP sobre la invasión vascular in vivo del Matrigel

Tratamiento	Número de vasos
	(% de aumento con respecto al testigo)
	Exp.1	Exp.2	Exp.3
AcSDKP 10^{-5}M	60	185	-
AcSDKP 10^{-6}M	-	121	-
AcSDKP 10^{-7}M	294	118	139
AcSDKP 10^{-8}M	-	223	-
AcSDKP 10^{-9}M	108	61	197
FGFb (50 ng/ml)	-	297	-

Ejemplo 5

Teniendo en cuenta la capacidad de los factores angiogénicos para estimular in vivo la formación de nuevos vasos en unas regiones lesionadas que están caracterizadas por un déficit de la vascularización, se ha estudiado la eficacia del AcSDKP para favorecer la reparación de las lesiones titulares utilizando un modelo de colgajo cutáneo. En efecto, la necrosis distal de los colgajos cutáneos resulta por lo general de una ruptura de la red vascular y por lo tanto de una insuficiencia de flujo arterial, lo que plantea importantes problemas en los campos de la cirugía estética y reconstructiva. Se ha demostrado que la administración de un factor angiogénico, que contribuye a la revascularización de estos colgajos, aumenta así a su supervivencia.

Se ha demostrado que unas inyecciones s.c. del AcSDKP en la zona de los colgajos disminuyen sus necrosis. Los colgajos cutáneos ventrales (6 x 6 cm) pediculados (pedículo inguinal izquierdo) han sido realizados en las ratas Sprague-Dawley. El AcSDKP ha sido administrado a la dosis de 5 \mug/kg/inyección (250 \mul/inyección) inmediatamente después de la intervención quirúrgica y a continuación 5 veces cada 12 horas. Los resultados obtenidos muestran que la supervivencia de los colgajos en los animales tratados con AcSDKP aumenta un 10% con respecto a los controles. En el plano macroscópico, la disminución de la necrosis está acompañada por el aumento de la densidad de la vascularización sobre la superficie interna de los colgajos.

Claims

1. Utilización de un compuesto de fórmula I:

2

en la que,

A_{1} es el radical correspondiente a D- o L-Ser,

A_{2} es el radical correspondiente a D- o L-Asp o Glu,

A_{3} es el radical correspondiente a D- o L-Lys, Arg u Orn,

A_{4} es el radical correspondiente a D- o L-Pro,

X_{1} y X_{2} son unos enlaces peptídicos o pseudopeptídicos,

X_{3} es CO o CH_{2}, y

R_{3} es OH, NH_{2}, C_{1}-C_{12}-alcoxi o NH-X_{4}-CH_{2}-Z, X_{4} es un C_{1}-C_{12}-hidrocarbono normal o ramificado, Z es H, OH, CO_{2}H o CONH_{2}

o bien los tripéptidos correspondientes que comprenden los radicales A_{1}, A_{2}, A_{3}, así como las sales farmacéuticamente aceptables, para la realización de un medicamento destinado al tratamiento de patologías que pueden beneficiarse de una angiogénesis.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dichas patologías son unas patologías vasculares, en particular las isquemias.

3. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dichas patologías son unas patologías que implican una lesión de los tejidos, en particular la cicatrización y la reparación de fracturas.

4. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dichas patologías implican una regeneración nerviosa, una cirugía reconstructiva, una endotelización de materiales o un transplante de órganos.

5. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque el compuesto de fórmula I es un pseudopéptido derivado de un péptido AcSDKP.

6. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque el compuesto de fórmula I es un tripéptido derivado de un péptido AcSDKP y que comprende los radicales A_{1}, A_{2}, A_{3}.

7. Utilización según una de las reivindicaciones 1 y 6, caracterizada porque el compuesto se selecciona de entre:

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-NH_{2}

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-OH

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-OH

H-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-OH

HOOCCH_{2} CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-OH

HOOCCH_{2} CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-OH

HOOCCH_{2} CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-OH

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-NH_{2}

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-NH_{2}

H-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-Pro-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-Pro-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-\Psi-(CH_{2}N)-Pro-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

H-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-Pro-NHCH_{3}

H-Ser-Asp-Lys-Pro-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

8. Utilización según una de las reivindicaciones 1 y 6, caracterizada porque el compuesto se selecciona de entre:

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-OH

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-OH

CH_{3}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-NH_{2}

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-OH

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-OH

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-OH

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-OH

H-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-NH_{2}

H-Ser-Asp-\Psi-(CH_{2}NH)-Lys-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-\Psi-(CH_{2}NH)-Asp-Lys-NH_{2}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-\Psi CH_{2}NH)-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

H-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

CH_{3}CO-Ser-Asp-Lys-NHCH_{3}

H-Ser-Asp-Lys-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-NHCH_{3}

HOOCCH_{2}CH_{2}CO-Ser-Asp-Lys-NH_{2}

9. Utilización del compuesto de fórmula I:

3

en la que,

A_{1} es el radical correspondiente a D- o L-Ser,

A_{2} es el radical correspondiente a D- o L-Asp o Glu,

A_{3} es el radical correspondiente a D- o L-Lys, Arg u Orn,

A_{4} es el radical correspondiente a D- o L-Pro,

X_{1} y X_{2} son unos enlaces peptídicos o pseudopeptídicos,

X_{3} es CO o CH_{2} y

o bien los tripéptidos correspondientes que comprenden los radicales A_{1},A_{2}, A_{3}, así como sus sales farmacéuticamente aceptables, a título de inductor de angiogénesis en los cultivos de tejidos ex vivo o in vitro.