EP4750435A1 - Utilisation d'un hydrolysat de kératine pour améliorer l'aspect de la peau et pour prevenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutane - Google Patents

Abstract

Utilisation cosmétique, non thérapeutique, par voie orale, d'un hydrolysat de kératine comme agent pour améliorer la qualité et/ou l'aspect de la peau, ledit hydrolysat présentant un profil particulier en acides aminés totaux et comprenant au moins 88% en poids d'acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l'hydrolysat, le reste des acides aminés de l'hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, et procédé de traitement cosmétique correspondant.

Description

Utilisation d’un hydrolysat de kératine pour améliorer l’aspect de la peau et pour prévenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutané

Domaine de l’invention

La présente invention se rapporte au domaine des hydrolysats de kératine et plus particulièrement à l’utilisation cosmétique, par voie orale, d’un hydrolysat de kératine comme agent pour améliorer la qualité, l’aspect de la peau et pour prévenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutané.

État de la technique

La peau est constituée de trois couches : l’épiderme, le derme et l’hypoderme. L’épiderme, qui est en contact avec l’extérieur, est plus particulièrement concerné par les agressions extérieures. L’épiderme est recouvert par un film hydrolipidique et est composé de quatre couches : la couche cornée, la couche granuleuse, la couche épineuse et la couche basale.

La peau, et en particulier l’épiderme, est la principale barrière de protection du corps humain à l’égard des agressions extérieures telles que la pollution atmosphérique, les variations climatiques et le rayonnement UV. Elle est ainsi constamment soumise à des stress qui engendrent son vieillissement.

On distingue généralement le vieillissement intrinsèque et le vieillissement extrinsèque.

Le vieillissement intrinsèque, encore appelé vieillissement physiologique (« chrono-ageing » en langue anglaise) est la conséquence d’un ralentissement du renouvellement des kératinocytes qui sont les cellules des couches superficielles de la peau, en particulier de l’épiderme. La réduction du tissu adipeux sous-cutané et l’apparition de fines rides sont les principales manifestations du vieillissement intrinsèque.

Le vieillissement extrinsèque (« photo-ageing » en langue anglaise) se caractérise par une perte d’élasticité de la peau, une altération de la fonction barrière de la peau et l’apparition de rides plus profondes. Le vieillissement extrinsèque est essentiellement dû aux expositions répétées de la peau au soleil, il est également associé à l’apparition de taches plus foncées qui génèrent des zones d’aspect non-homogène. Ce vieillissement est également nommé photo-vieillissement ou vieillissement actinique. Il demeure toujours un besoin de nouveaux produits cosmétiques pour améliorer la qualité, l’aspect de la peau notamment pour prévenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutané.

En particulier il demeure toujours un besoin de nouveaux produits efficaces et dont l’administration est aisée.

Ce problème a été résolu par la présente invention qui vise l’utilisation d’un hydrolysat de kératine particulier présentant un poids moléculaire particulièrement faible.

Un tel hydrolysat, ainsi que son utilisation pour améliorer la qualité et/ou l’aspect des ongles et/ou des cheveux sont déjà connus, notamment dans la demande WO2019/043128. Cependant cette demande de brevet ne suggère pas l’utilisation d’un tel hydrolysat pour améliorer l’aspect de la peau.

Le brevet US 7 579 317 B2 décrit également l’obtention de dérivés de kératine ainsi que, parmi de nombreuses applications médicales, l’amélioration de la santé de la peau. Ces dérivés de kératine se caractérisent par leur poids moléculaire élevé, de l’ordre du poids moléculaire des protéines de la matière première, et par le fait qu’ils sont S-sulfonés. Ils sont en effet obtenus par une étape de digestion consistant en la sulfonation d’une matière kératinique par sulfitolyse oxydative suivie d’une extraction aqueuse. Ces dérivés de kératine sont très différents de l’hydrolysat utilisé dans la présente invention.

D’autres aspects, avantages, propriétés de la présente invention sont présentés dans la description et les exemples qui suivent.

Résumé de l’invention

La présente invention a pour objet l’utilisation cosmétique, non thérapeutique, par voie orale, d’un hydrolysat de kératine comme agent pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau, ledit hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat présentant la composition suivante en chacun des acides aminés par rapport au total des acides aminés : une teneur en acide aspartique allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 7,3 à 8,2 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4,6 à 5,3 % en poids ; une teneur en sérine allant de 10,0 à 15,0 % en poids, de préférence de 11 ,9 à 13,0 % en poids ; une teneur en acide glutamique allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence de 11 ,0 à 11 ,9 % en poids ; une teneur en glycine allant de 7,0 à 10,0 % en poids, de préférence de 8,4 à 9, 1 % en poids ; une teneur en alanine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 5,2 à 5,5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6,0 à 10,0 % en poids, de préférence 7,8 à 8,5 % en poids ; une teneur en méthionine allant de 0,0 à 0,5 % en poids, de préférence de 0,1 à 0,4 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4, 1 à 4,6 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 6,7 à 7,7 % en poids ; une teneur en tyrosine allant de 0,0 à 0,6 % en poids, de préférence 0,1 à 0,5 % en poids ; une teneur en phénylalanine allant de 2,0 à 3,2 % en poids, de préférence 2,3 à 3,0 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 ,0 à 3,0 % en poids, de préférence 1 ,7 à 2,3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,4 à 1 ,0 % en poids, de préférence 0,5 à 0,8 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,0 à 8,0 % en poids, de préférence 5,5 à 6,8 % en poids ; une teneur en proline allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence 9,5 à 11 ,8 % en poids , une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 % ,de préférence égale à 0,0 % en poids et une teneur en cystine allant de 4,0 à 7,2 % en poids, de préférence 5,3 à 6,3 % en poids.

Ce profil en acides aminés représente le pourcentage pondéral de chacun des acides aminés (libres + liés) par rapport au total des acides aminés (libres + liés).

La présente invention a aussi pour objet un procédé de traitement cosmétique, non thérapeutique, pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau, comprenant au moins une étape d’administration, par voie orale, à un individu, d’un hydrolysat de kératine comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat présentant la composition suivante en chacun des acides aminés par rapport au total des acides aminés : une teneur en acide aspartique allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 7,3 à 8,2 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4,6 à 5,3 % en poids ; une teneur en sérine allant de 10,0 à 15,0 % en poids, de préférence de 11 ,9 à 13,0 % en poids ; une teneur en acide glutamique allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence de 11 ,0 à 11 ,9 % en poids ; une teneur en glycine allant de 7,0 à 10,0 % en poids, de préférence de 8,4 à 9,1 % en poids ; une teneur en alanine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 5,2 à 5,5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6,0 à 10,0 % en poids, de préférence 7,8 à 8,5 % en poids ; une teneur en méthionine allant de 0,0 à 0,5 % en poids, de préférence de 0,1 à 0,4 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4,1 à 4,6 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 6,7 à 7,7 % en poids ; une teneur en tyrosine allant de 0,0 à 0,6 % en poids, de préférence 0,1 à 0,5 % en poids ; une teneur en phénylalanine allant de 2,0 à 3,2 % en poids, de préférence 2,3 à 3,0 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 ,0 à 3,0 % en poids, de préférence 1 ,7 à 2,3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,4 à 1 ,0 % en poids, de préférence 0,5 à 0,8 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,0 à 8,0 % en poids, de préférence 5,5 à 6,8 % en poids ; une teneur en proline allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence 9,5 à 11 ,8 % en poids , une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 % ,de préférence égale à 0,0 % en poids et une teneur en cystine allant de 4,0 à 7,2 % en poids, de préférence 5,3 à 6,3 % en poids.

Les inventeurs ont montré que, de manière surprenante, cet hydrolysat permet de conférer des propriétés particulièrement avantageuses à la peau, notamment en termes de brillance, de fermeté, d’élasticité.

Par « peau », au sens du présent texte, on entend l’épiderme.

Les sujets auxquels l’hydrolysat selon l’invention a été administré présentent une peau d’aspect plus jeune et reposé.

Il a également été observé que l’hydrolysat confère à la peau un bon niveau d’hydratation.

De manière particulière l’hydrolysat selon l’invention permet de prévenir, diminuer l’apparition des rides et/ou des ridules et conduit à une peau plus épaisse. En effet la diminution de l’épaisseur de la peau est un indicateur du vieillissement de cette dernière.

Les dérivés de kératine connus pour leurs effets sur la peau possèdent généralement un poids moléculaire élevé de l’ordre du poids moléculaire de la kératine. Au vu de leur structure proche de la kératine, un effet bénéfique pour la peau pouvait être attendu. Par contre rien ne laissait penser que l’hydrolysat utilisé selon l’invention, dont le poids moléculaire et le taux d’acides aminés libres sont très différents de ceux de la kératine native, aurait, à faible dosage quotidien, également un effet significativement bénéfique sur l’aspect de la peau.

D’autres caractéristiques et avantages de l’invention ressortiront à la lecture de la description détaillée qui suit.

Description de l’invention

Selon un premier aspect, l’invention concerne l’utilisation cosmétique, non thérapeutique, par voie orale, d’un hydrolysat de kératine particulier comme agent pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau.

Selon un deuxième aspect, l’invention concerne un procédé de traitement cosmétique, non thérapeutique, pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau comprenant l’administration, par voie orale, à un individu, d’un hydrolysat de kératine particulier.

L’hydrolysat de kératine utilisé selon l’invention présente un taux élevé d’acides aminés libres ainsi qu’un profil en acides aminés particulier.

Notamment, la tyrosine est présente dans l’hydrolysat de kératine selon la présente invention en une teneur inférieure ou égale à 0,6% en poids, de préférence inférieure ou égale à 0,5% en poids et de manière préférée inférieure ou égale à 0,4% en poids par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat. Cette faible teneur en tyrosine est la conséquence de la mise en œuvre d’une étape d’extraction de la tyrosine dans le procédé de préparation de l’hydrolysat.

Avantageusement, l’hydrolysat ne contient pas de tyrosine, les seules traces de cet acide aminé étant dues aux limites des conditions opératoires, du matériel mis en œuvre lors de l’étape d’extraction.

En outre, la cystéine est avantageusement présente dans l’hydrolysat de kératine selon la présente invention en une teneur inférieure ou égale à 0,10%, de préférence inférieure ou égale 0,05% en poids par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, de manière encore préférée, l’hydrolysat ne contient pas de cystéine.

Par contre, l’hydrolysat selon la présente invention comprend de la cystine, plus particulièrement de la L-cystine, qui est un dimère de la cystéine, en une teneur significative. En effet, la teneur en cystine va de 4,0 à 7,2 % en poids, de préférence 5,3 à 6,3 % en poids par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat.

L’hydrolysat selon la présente invention comprend au moins 88%, de préférence au moins 93% et de manière encore préférée au moins 95% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton. Le poids moléculaire moyen de l’hydrolysat va de 140 à 160 Da.

En effet, l’hydrolysat comprend essentiellement des acides aminés : des acides aminés libres (au moins 88% en poids par rapport au poids total des acides aminés) et des acides aminés liés pour former des peptides, l’hydrolysat comprenant en outre de la matière minérale et de l’eau.

Avantageusement, la teneur en acides aminés encore appelés acides aminés totaux (libres + liés) de l’hydrolysat va de 80% à 90% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.

L’hydrolysat de kératine utilisé selon l’invention présente la composition particulière en acides aminés présentée ci-dessus c’est-à-dire le pourcentage de chacun des acides aminés (libres + liés) par rapport au total des acides aminés (libres + liés).

Avantageusement, le taux de matière minérale dudit hydrolysat est inférieur ou égal à 9 % en poids, de préférence inférieure à 8% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat.

Le taux de matière minérale est déterminé après calcination de l’hydrolysat à 550°C pendant 4 heures.

Les acides aminés sont dosés selon la méthode du règlement CE 152/2009.

Selon cette méthode, pour la détermination des quantités d’acides aminés totaux une hydrolyse au moyen d’un acide est préalablement effectuée.

Pour la détermination des quantités d’acides aminés libres et totaux, les acides aminés sont séparés par chromatographie (CLHP ou « HPLC » en langue anglaise) avec colonne échangeuse d’ions et dosés par réaction avec la ninhydrine et détection photométrique généralement à 570 nm. Sans vouloir être lié à une quelconque théorie, il semble qu’effectuer une hydrolyse chimique poussée permettant de conduire à ces caractéristiques, notamment une masse moléculaire des peptides présents inférieure ou égale à 800 Dalton, confère des propriétés particulières à l’hydrolysat vis-à vis de la peau.

Un autre avantage de l’hydrolysat selon la présente invention est qu’il est très digestible, en outre, il est reconnu être de qualité alimentaire. L’hydrolysat selon l’invention présente une digestibilité vraie des acides aminés d’au moins 90%. Cette valeur est très proche du maximum possible (100%). Cette propriété permet une bonne assimilation de l’hydrolysat et par conséquent une meilleure efficacité des acides aminés libres.

La digestibilité est mesurée in vivo selon la méthode décrite par Cozannet P, Primot Y., Gady C., Métayer J. P., Lessire M. Skiba F., Noblet J. dans « Standardised amino acid digestibility of wheat distillers' dried grains with solubles in force-fed cockerels ». British Poultry Science, Feb. 2011 ; 52(1 )72-81.

Procédé de préparation de l’hydrolysat

L’hydrolysat utilisé selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre d’un procédé de préparation à partir de matières kératiniques naturelles, notamment de volaille, avantageusement à partir de plumes de volaille.

Cette matière kératinique naturelle comprend majoritairement des polypeptides de haut poids moléculaires et à la structure très ramifiée la rendant peu accessible aux enzymes et qui font que ladite matière kératinique naturelle n’est pas digestible.

Avantageusement ledit hydrolysat est un hydrolysat de matière première kératinique de volaille.

A titre de volaille, on peut citer les poules, poulets, dindes, canards...

De préférence, l’hydrolysat utilisé selon la présente invention n’est pas obtenu à partir de kératine humaine tels que les cheveux.

Le procédé de préparation de l’hydrolysat de kératine utilisé selon l’invention met en œuvre au moins une hydrolyse chimique au moyen d’un acide dans des conditions aptes à obtenir un hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton.

Le pourcentage de peptides dans l’hydrolysat va généralement de 5 à 12 % en poids par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat.

En effet l’hydrolyse étant partielle, le pourcentage de peptides dans l’hydrolysat n’est pas nul, de préférence il est d’au moins 5 % en poids du total des acides aminés.

L’hydrolyse chimique de la matière première est réalisée au moyen d’un acide de préférence un acide fort choisi parmi les acides chlorhydrique, phosphorique et sulfurique, de préférence l’acide chlorhydrique.

L’hydrolyse chimique est généralement effectuée pendant une durée allant de 1 heure à 8 heures, de préférence allant de 6 à 7 heures à une température allant de 110 à 115°C.

Selon une variante particulière, l’hydrolyse chimique est effectuée en deux étapes :

-une première hydrolyse chimique réalisée à une température allant de 60 à 80°C pendant une période allant de 4 à 5 heures puis

-une deuxième hydrolyse chimique réalisée à une température allant de 100 à 115°C pendant une période allant de 5 à 7 heures, les deux hydrolyses pouvant être réalisées sans étape de pause intermédiaire ou en effectuant une étape de pause intermédiaire comprise entre 1 heure et 7 jours.

Plus précisément la première hydrolyse chimique est réalisée à 72°C pendant 4,5 heures et la deuxième hydrolyse chimique est réalisée à 107°C pendant 6 heures, une pause intermédiaire de 24 à 80 heures étant effectuées entre les deux hydrolyses chimiques.

L’étape d’extraction de la tyrosine est réalisée au moyen d’une base de préférence choisie parmi l’hydroxyde de sodium, l’hydroxyde de potassium de préférence l’hydroxyde de sodium.

L’étape d’extraction de la tyrosine est une étape classique dont la mise en œuvre relève des compétences de l’homme du métier.

Contrairement à certains hydrolysats de kératine, l’hydrolysat selon la présente invention ne contient pas de sulfocystéine. Les étapes d’hydrolyse chimique et d’extraction de la tyrosine peuvent être suivies d’étapes optionnelles de purification de l’hydrolysat obtenu.

Les étapes d’hydrolyse chimique et d’extraction de la tyrosine peuvent être suivies d’étapes optionnelles de concentration de l’hydrolysat obtenu.

Les étapes d’hydrolyse chimique et d’extraction de la tyrosine peuvent être suivies d’étapes optionnelles de séchage par exemple par atomisation.

Les étapes de purification, de concentration et de séchage sont des étapes classiques dont la mise en œuvre relève des compétences de l’homme du métier.

Avantageusement, l’hydrolysat de kératine obtenu est séché par atomisation (« spray-drying » en langue anglaise) afin d’obtenir l’hydrolysat sous forme solide.

Utilisations

Comme déjà mentionné, la présente invention vise l’utilisation cosmétique, par voie orale, de l’hydrolysat de kératine selon l’invention comme agent pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau.

Plus spécifiquement, la présente invention vise l’utilisation cosmétique, par voie orale, de l’hydrolysat de kératine pour améliorer la brillance et conférer un effet « bonne mine », pour améliorer la fermeté et/ou diminuer la perte d’élasticité de la peau. Les sujets auxquels l’hydrolysat a été administré présentent une peau d’aspect plus jeune, plus reposé.

Plus spécifiquement, la présente invention vise l’utilisation cosmétique, par voie orale, de l’hydrolysat de kératine pour prévenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutané, en particulier l’apparition de rides et/ou de ridules.

Chez les sujets auxquels l’hydrolysat a été administré, les rides apparaissent moins marquées, moins profondes. La peau présente un aspect plus lisse avec une nette réduction des imperfections.

Chez les sujets auxquels l’hydrolysat a été administré, la peau est significativement plus épaisse, ce qui est une des causes de la réduction des rides. La peau présente également une meilleure hydratation. Selon un deuxième aspect, l’invention concerne un procédé de traitement cosmétique, non thérapeutique, pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau, comprenant l’administration, par voie orale, à un individu, d’un hydrolysat particulier. Avantageusement l’invention vise un procédé de traitement cosmétique pour prévenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutané, en particulier l’apparition de rides et/ou de ridules et/ou pour améliorer la brillance et/ou la fermeté de la peau et/ou diminuer la perte d’élasticité de la peau.

Avantageusement l’utilisation et le procédé selon l’invention comprennent l’administration quotidienne d’une quantité d’hydrolysat allant de 0,3 à 0,7 g, de préférence de 0,4 à 0,6 g d’hydrolysat et de manière préférée 0,5 g d’hydrolysat.

De préférence, l’administration quotidienne d’une quantité d’hydrolysat allant de 0,3 à 0,7 g, de préférence de 0,4 à 0,6 g d’hydrolysat et de manière préférée 0,5 g d’hydrolysat est effectuée pendant une période allant d’au moins 30 jours à 100 jours, de préférence pendant une période allant d’au moins 45 jours à 95 jours et de manière préférée de 90 jours.

Comme il ressort des exemples, l’administration de l’hydrolysat est avantageusement effectuée sous la forme de deux prises par jour, de préférence une prise le matin et une prise le soir.

Selon un premier mode préféré, dans l’utilisation et le procédé selon l’invention, l’hydrolysat est administré sous la forme d’une composition comprenant ledit hydrolysat et au moins un composant choisi dans le groupe formé par le zinc ou l’un de ses sels, le cuivre ou l’un de ses sels, les vitamines B, notamment B3, B5, B6 et/ou B8, la vitamine D3, la vitamine C, la vitamine A, la vitamine E, le silicium, le sélénium, le magnésium, le calcium, le manganèse, le molybdène, le fer, les levures, les extraits de plantes notamment de prêle, le [3-carotène, le collagène, l’acide hyaluronique, le glutathion et les mélanges de ces composants.

Selon un deuxième mode préféré, dans l’utilisation et le procédé selon l’invention, l’hydrolysat est administré sous la forme d’une composition comprenant ledit hydrolysat et au moins un des acides aminés additionnels suivants : de la cystine additionnelle et/ou de l’arginine additionnelle et/ou de la proline additionnelle et/ou de la lysine additionnelle et/ou de la méthionine additionnelle, de préférence la quantité en poids de cystine additionnelle est égale à la quantité en poids de cystine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids d’arginine additionnelle est égale à la quantité en poids d’arginine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids de proline additionnelle est égale à la quantité en poids de proline de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids de lysine additionnelle est égale à la quantité en poids de lysine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids de méthionine additionnelle va de 10 mg/jour à 80 mg/jour.

Les exemples qui suivent illustrent l’invention sans en limiter la portée.

EXEMPLES

Exemple 1 - Hydrolysats conformes

On a préparé 3 hydrolysats conformes à l’invention selon le même procédé à partir de 3 lots de plumes différents. A chaque fois les plumes sont des plumes fraichement collectées chez les partenaires du déposant, en conséquence la nature des plumes (poulets, dindes, canards, oies... ) peut varier.

A. Préparation des hydrolysats

A chaque fois, on introduit 4500 kg de plumes de volaille dans un réacteur/hydrolyseur de 50 000 litres.

Une première étape d’hydrolyse chimique est réalisée en ajoutant 18 000 litres d’acide chlorhydrique (24%), l’hydrolyse est effectuée à 72°C pendant 4,5 heures.

Le produit obtenu est stocké pendant 48 heures à température ambiante (pause intermédiaire).

Ensuite une deuxième hydrolyse chimique est effectuée en chauffant à 105°C pendant 6 heures sans ajout d’acide.

Le produit obtenu est laissé à refroidir.

Puis une étape d’extraction de la tyrosine est réalisée en remontant le pH à environ 7 au moyen d’hydroxyde de sodium.

La solution obtenue est dessalée par électrodialyse puis séchée par atomisation.

On obtient 4200 kg d’hydrolysat I sous forme sèche.

B. Détermination de la composition des hydrolysats Les acides aminés sont dosés selon la méthode du règlement CE 152/2009.

Les acides aminés sont séparés par chromatographie (CLHP ou « HPLC » en langue anglaise) avec colonne échangeuse d’ions et dosés par réaction avec la ninhydrine et détection photométrique à 570 nm.

Les valeurs présentées sont exprimées en gramme d’acides aminés par rapport au total des acides aminés.

L’aminogramme des acides aminés totaux de l’hydrolysat I c’est-à- dire les teneurs en chaque acide aminé par rapport au total des acides aminés est présenté dans le tableau 1 .

Tableau 1

L’hydrolysat I comprend 6,6 % en poids de matières minérales et 83,3 % en poids d’acides aminés libres.

L’aminogramme des acides aminés totaux de l’hydrolysat II c’est-à- dire les teneurs en chaque acide aminé par rapport au total des acides aminés est présenté dans le tableau 2.

Tableau 2

L’hydrolysat II comprend 7,6 % en poids de matières minérales et 80,4 % en poids d’acides aminés libres.

L’aminogramme des acides aminés totaux de l’hydrolysat III c’est- à-dire les teneurs en chaque acide aminé par rapport au total des acides aminés est présenté dans le tableau 3.

Tableau 3 L’hydrolysat III comprend 7,1 % en poids de matières minérales et

83,0 % en poids d’acides aminés libres. C. Digestibilité

Dans le tableau 4 ci-dessous, sont présentés les coefficients de digestibilité vraie de chacun des acides aminés de l’hydrolysat I, exprimés en pourcentage, ainsi que la valeur moyenne de digestibilité vraie du total des acides aminés.

Ces valeurs ont été obtenues selon le protocole suivant sur coqs caecectomisés, qui est un modèle de référence pour la mesure de la biodisponibilité des acides aminés dans le règne animal.

Protocole expérimental

Les mesures de digestibilité sont effectuées sur les coqs adultes caecectomisés logés dans des cages individuelles et nourris hors période d'essai avec un régime alimentaire standard.

2 répétitions de 4 coqs caecectomisés ont été utilisées.

Tous les animaux sont mis à jeun pendant 24h avant d'ingérer un repas unique de 80 g composé de 24 g d'échantillon d’hydrolysat I mélangé à 56 g de sucre.

Toutes les fèces (= matières fécales), y compris les pertes endogènes, sont collectées pendant les 48 h suivantes en deux périodes de 24h pour éviter leur fermentation et détérioration éventuelle.

Ces fèces, exclues de toutes contaminations telles des plumes par exemple, sont soigneusement prélevées avant d'être congelées (-80°C).

Les fèces sont ensuite séchées au four, regroupées et mélangées en 2 pools correspondant aux 2 répétitions de 4 animaux utilisés pour l’hydrolysat.

Les 2 pools sont analysés.

Les analyses nutritionnelles (matière sèche, protéines brutes (méthode Dumas) et acides aminés) sont effectuées sur l’hydrolysat, les fèces de coqs ainsi que sur les pertes endogènes.

Ces données sont utilisées pour calculer la digestibilité vraie des protéines et des acides aminés. Pour la digestibilité des protéines, en raison de la contamination des excréments d'oiseaux par l'azote urique, l'azote protéique est mesuré dans les fèces (méthode Terpstra).

La digestibilité vraie des nutriments mesurée en pourcentage est donc calculée selon une méthode quantitative par la différence entre la quantité d’hydrolysat ingéré et la quantité de fèces excrétée, corrigée des pertes endogènes selon les formules suivantes :

Protéines ingérées hydrolysat - (protéines excrétées fèces - protéines excrétées endogènes) Digestibilité vraie protéines % = - x 100

Protéines ingérées hydrolysat

Acide aminé ingéré hydrolysat - (Acide aminé excrété fèces -Acide aminé excrété endogène) Digestibilité vraie A. aminé % = - x 100

Acide aminé ingéré hydrolysat

Les valeurs de digestibilité de l’hydrolysat I figurent dans le tableau 4 ci-dessous :

Tableau 4

La digestibilité vraie des acides aminés de l’hydrolysat I selon l’invention est très élevée puisqu’elle est très proche du maximum possible (100%). L’hydrolysat selon l’invention est par conséquent bien assimilable par l’organisme. On arriverait à la même conclusion pour la digestibilité vraie des acides aminés des hydrolysats II et III.

Exemple 2 - Mesures des activités cosmétiques

Les exemples ci-dessous ont été effectués en utilisant un produit A comprenant l’hydrolysat II conforme à l’invention et un produit du commerce à base de kératine en tant que produit C comparatif.

Chaque gélule de produit A comprenait 125 mg d’hydrolysat de kératine II préparé ci-dessus avec 205 mg de maltodextrine de maïs et 10 mg de stéarate de magnésium en tant qu’excipients.

D’après les informations disponibles, le produit C comprend un dérivé de kératine de laine de mouton de poids moléculaire supérieur à 950 Da. La fraction protéique du dérivé de kératine est comprise entre 60% et 70% en poids du poids total du dérivé et la fraction minérale représente de 30% à 40% en poids. La part d’acides aminés libres représente moins de 6% en poids des acides aminés du dérivé de kératine. La fraction protéique se compose à 80% en poids de peptides associant de 3 à 35 acides aminés. La digestibilité vraie du produit C déterminée selon la méthode décrite dans le paragraphe Exemple 1 . C ci-dessus est inférieure à 75%.

Chaque gélule de produit C comprend 125 mg de dérivé de kératine, avec 205 mg de maltodextrine de maïs et 10 mg de stéarate de magnésium en tant qu’excipients.

Le placebo se compose uniquement de 330 mg de maltodextrine de maïs (excipient) et 10 mg de stéarate de magnésium (excipient).

L’étude a été réalisée sur 99 sujets en bonne santé âgés de 35 à 65 ans, en double aveugle, avec répartition aléatoire et en présence d’un placebo (33 sujets ont reçu le produit A, 33 sujets ont reçu le produit comparatif C et 33 sujets ont reçu le placebo). Les autres critères d’inclusion sont listés ci- après : rides visibles au niveau de la patte d’oie, relâchement de la peau léger à modéré, phototypes allant de I à IV selon l’échelle de Fitzpatrick. Les produits A, C et le placebo ont été administrés par voie orale à raison de 4 gélules par jour (2 gélules le matin et 2 gélules le soir) pendant 90 jours avec mesure des résultats intermédiaires au bout de 45 jours.

Le premier groupe a reçu une dose quotidienne de 0,5 g d’hydrolysat Il (4 gélules de produit A), le deuxième groupe a reçu une dose quotidienne de 0,5 g de dérivé de kératine (4 gélules de produit C), le troisième groupe a reçu 4 gélules de placebo par jour.

A. Brillance

La brillance de la peau a été mesurée en utilisant un spectrophotomètre/colorimètre CM 700D (Konica-Minolta).

Le paramètre mesuré était la valeur de brillance (« gloss value » en langue anglaise) à 8°.

L'instrument émet une lumière diffuse qui atteint la peau par une ouverture située à l'extrémité de la sphère d'éclairage.

Un capteur situé à 8° par rapport à l'axe vertical de l'ouverture détecte alors la lumière réfléchie et calcule un paramètre appelé "brillance" (« gloss value » en langue anglaise).

La valeur de la brillance est utilisée dans la gestion de l'éclat de la couleur.

La variation entre la mesure de brillance de la peau à 45 jours (D45) vs la mesure de la brillance au début de l’étude (DO) ainsi que la variation entre la mesure de brillance à 90 jours (D90) vs la mesure de la brillance au début de l’étude (DO) ont été consignées dans le tableau 5 ci-dessous :

Tableau 5

L’hydrolysat selon l’invention (produit A) permet l’obtention d’une peau plus brillante que le produit C comparatif dès 45 jours, au bout de 90 jours la brillance est encore plus marquée. Un essai supplémentaire a été effectué en administrant quotidiennement 1 g d’hydrolysat II pendant 45 jours or cet essai n’a pas conduit à de meilleurs résultats que l’administration de 0,5 g d’hydrolysat II pendant 45 jours.

B. Fermeté et élasticité

La mesure de la fermeté et de l'élasticité de la peau est basée sur la méthode d'aspiration/élongation (Cutometer®MPA 580, Courage+Khazaka, electronic GmbH).

Une dépression (450 mbar) est créée dans l'appareil et la peau est aspirée dans l'ouverture de la sonde pendant 2 secondes et relâchée après un temps défini (2 secondes).

Le principe de cette méthode est illustré à la figure 1 qui présente la déformation (en 10’³m) en fonction du temps (en s).

Le paramètre RO correspond à l’extensibilité de la peau : il s'agit de la première amplitude maximale de la courbe (Uf) et représente le comportement passif de la peau face à une force. Le paramètre RO est inversement proportionnel au degré de fermeté de la peau. Les résultats obtenus peuvent être exprimés en valeurs absolues comme une augmentation de la fermeté de la peau.

Le paramètre R2 correspond à l’élasticité brute ou élasticité globale : c'est le rapport entre la déformation résiduelle et l'allongement maximal de la peau (Ua/Uf) et il indique la capacité de la peau à revenir à son état de récupération initial après un événement stressant.

La fermeté est mesurée en tant que valeur absolue du paramètre RO.

La variation entre la mesure de la fermeté de la peau à 45 jours (D45) vs la mesure de la fermeté au début de l’étude (DO) ainsi que la variation entre la mesure de la fermeté à 90 jours (D90) vs la mesure de la fermeté au début de l’étude (D0) ont été consignées dans le tableau 6 ci-dessous : Tableau 6

L’hydrolysat selon l’invention (produit A) permet l’obtention d’une peau plus ferme que le produit C comparatif dès 45 jours de traitement.

Un essai supplémentaire a été effectué en administrant quotidiennement 1 g d’hydrolysat II pendant 90 jours or cet essai n’a pas conduit à de meilleurs résultats que l’administration de 0,5 g d’hydrolysat II pendant 90 jours.

L’élasticité est mesurée avec le paramètre R2.

La variation entre la mesure de l’élasticité de la peau à 45 jours (D45) vs la mesure de l’élasticité au début de l’étude (DO) ainsi que la variation entre la mesure de l’élasticité à 90 jours (D90) vs la mesure de l’élasticité au début de l’étude (DO) ont été consignées dans le tableau 7 ci-dessous : Tableau 7

L’hydrolysat selon l’invention (produit A) permet l’obtention d’une peau plus élastique que le produit comparatif C dès 45 jours.

Un essai supplémentaire a été effectué en administrant quotidiennement 1 g d’hydrolysat II pendant 45 jours or cet essai n’a pas conduit à de meilleurs résultats que l’administration de 0,5 g d’hydrolysat II pendant 45 jours. C. Effet sur les rides/ ridules

La surface de la peau est évaluée quantitativement par Primos 3D (GFMesstechnik GmbH).

Primos 3D est un appareil de mesure de la peau in vivo sans contact, basé sur la projection de lumière structurée.

Associé à un logiciel complet de mesure et d'évaluation en 3D, le capteur permet d'évaluer les propriétés de la surface de la peau : profondeur, longueur, aire (superficie) des rides/ridules.

Dans cette étude, la profondeur, la longueur et la superficie des rides ont été mesurées dans la zone de la "patte d'oie".

Cette étude a été réalisée en comparaison avec le placebo.

Les variations entre les mesures de la profondeur/longueur/superficie des rides/ridules à 45 jours (D45) vs les mesures de la profondeur/longueur/superficie des rides/ridules au début de l’étude (DO) ainsi que la variation entre les mesures de la profondeur/longueur/superficie des rides/ridules à 90 jours (D90) vs les mesures de la profondeur/longueur/superficie des rides/ridules au début de l’étude (DO) ont été consignées dans le tableau 8 ci-dessous :

Tableau 8 L’hydrolysat selon l’invention permet de diminuer les rides/ridules dès 45 jours.

En complément, les avis des utilisateurs ont été récoltés : 80 % des sujets qui ont utilisé l’hydrolysat selon l’invention ont également noté que leur peau était plus lisse, plus douce et mieux hydratée.

Claims

REVENDICATIONS

1. Utilisation cosmétique, non thérapeutique, par voie orale, d’un hydrolysat de kératine comme agent pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau, ledit hydrolysat comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat présentant la composition suivante en chacun des acides aminés par rapport au total des acides aminés : une teneur en acide aspartique allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 7,3 à 8,2 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4,6 à 5,3 % en poids ; une teneur en sérine allant de 10,0 à 15,0 % en poids, de préférence de 11 ,9 à 13,0 % en poids ; une teneur en acide glutamique allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence de 11 ,0 à 11 ,9 % en poids ; une teneur en glycine allant de 7,0 à 10,0 % en poids, de préférence de 8,4 à 9,1 % en poids ; une teneur en alanine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 5,2 à 5,5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6,0 à 10,0 % en poids, de préférence 7,8 à 8,5 % en poids ; une teneur en méthionine allant de 0,0 à 0,5 % en poids, de préférence de 0,1 à 0,4 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4,1 à 4,6 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 6,7 à 7,7 % en poids ; une teneur en tyrosine allant de 0,0 à 0,6 % en poids, de préférence 0,1 à 0,5 % en poids ; une teneur en phénylalanine allant de 2,0 à 3,2 % en poids, de préférence 2,3 à 3,0 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 ,0 à 3,0 % en poids, de préférence 1 ,7 à 2,3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,4 à 1 ,0 % en poids, de préférence 0,5 à 0,8 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,0 à 8,0 % en poids, de préférence 5,5 à 6,8 % en poids ; une teneur en proline allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence 9,5 à 11 ,8 % en poids , une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 % ,de préférence égale à 0,0 % en poids et une teneur en cystine allant de 4,0 à 7,2 % en poids, de préférence 5,3 à 6,3 % en poids.

2. Utilisation selon la revendication 1 comprenant l’administration quotidienne d’une quantité d’hydrolysat allant de 0,3 à 0,7 g d’hydrolysat, de préférence de 0,4 à 0,6 g d’hydrolysat et de manière préférée 0,5 g d’hydrolysat.

3. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que ledit hydrolysat est administré sous la forme d’une composition comprenant ledit hydrolysat et au moins un composant choisi dans le groupe formé par le zinc ou l’un de ses sels, le cuivre ou l’un de ses sels, les vitamines B, notamment B3, B5, B6 et/ou B8, la vitamine D3, la vitamine C, la vitamine A, la vitamine E, le silicium, le sélénium, le magnésium, le calcium, le manganèse, le molybdène, le fer, les levures, les extraits de plantes notamment de prêle, le [3-carotène, le collagène, l’acide hyaluronique, le glutathion et les mélanges de ces composants.

4. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que ledit hydrolysat est administré sous la forme d’une composition comprenant ledit hydrolysat et au moins un des acides aminés additionnels suivants : de la cystine additionnelle et/ou de l’arginine additionnelle et/ou de la proline additionnelle et/ou de la lysine additionnelle et/ou de la méthionine additionnelle, de préférence la quantité en poids de cystine additionnelle est égale à la quantité en poids de cystine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids d’arginine additionnelle est égale à la quantité en poids d’arginine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids de proline additionnelle est égale à la quantité en poids de proline de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids de lysine additionnelle est égale à la quantité en poids de lysine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids de méthionine additionnelle va de 10 mg/jour à 80 mg/jour.

5. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes pour améliorer la brillance et/ou la fermeté de la peau et/ou diminuer la perte d’élasticité de la peau.

6. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 pour prévenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutané, en particulier l’apparition de rides et/ou de ridules.

7. Procédé de traitement cosmétique, non thérapeutique, pour améliorer la qualité et/ou l’aspect de la peau, comprenant au moins une étape d’administration, par voie orale, à un individu, d’un hydrolysat de kératine comprenant au moins 88% en poids d’acides aminés libres par rapport au poids total des acides aminés de l’hydrolysat, le reste des acides aminés de l’hydrolysat étant sous la forme de peptides présentant une masse moléculaire inférieure ou égale à 800 Dalton, ledit hydrolysat présentant la composition suivante en chacun des acides aminés par rapport au total des acides aminés : une teneur en acide aspartique allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 7,3 à 8,2 % en poids ; une teneur en thréonine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4,6 à 5,3 % en poids ; une teneur en sérine allant de 10,0 à 15,0 % en poids, de préférence de 11 ,9 à 13,0 % en poids ; une teneur en acide glutamique allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence de 11 ,0 à 11 ,9 % en poids ; une teneur en glycine allant de 7,0 à 10,0 % en poids, de préférence de 8,4 à 9,1 % en poids ; une teneur en alanine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 5,2 à 5,5 % en poids ; une teneur en valine allant de 6,0 à 10,0 % en poids, de préférence 7,8 à 8,5 % en poids ; une teneur en méthionine allant de 0,0 à 0,5 % en poids, de préférence de 0, 1 à 0,4 % en poids ; une teneur en isoleucine allant de 4,0 à 6,0 % en poids, de préférence de 4,1 à 4,6 % en poids ; une teneur en leucine allant de 6,0 à 9,0 % en poids, de préférence 6,7 à 7,7 % en poids ; une teneur en tyrosine allant de 0,0 à 0,6 % en poids, de préférence 0,1 à 0,5 % en poids ; une teneur en phénylalanine allant de 2,0 à 3,2 % en poids, de préférence 2,3 à 3,0 % en poids ; une teneur en lysine allant de 1 ,0 à 3,0 % en poids, de préférence 1 ,7 à 2,3 % en poids, une teneur en histidine allant de 0,4 à 1 ,0 % en poids, de préférence 0,5 à 0,8 % en poids ; une teneur en arginine allant de 5,0 à 8,0 % en poids, de préférence 5,5 à 6,8 % en poids ; une teneur en proline allant de 9,0 à 14,0 % en poids, de préférence 9,5 à 11 ,8 % en poids, une teneur en tryptophane inférieure à 0,1 %, de préférence égale à 0,0 % en poids et une teneur en cystine allant de 4,0 à 7,2 % en poids, de préférence 5,3 à 6,3 % en poids.

8. Procédé de traitement cosmétique selon la revendication précédente comprenant l’administration quotidienne d’une quantité d’hydrolysat allant de 0,3 à 0,7 g, de préférence de 0,4 à 0,6 g d’hydrolysat et de manière préférée 0,5 g d’hydrolysat.

9. Procédé de traitement cosmétique selon la revendication 7 ou 8 dans lequel ledit hydrolysat est administré sous la forme d’une composition comprenant ledit hydrolysat et au moins un composant choisi dans le groupe formé par le zinc ou l’un de ses sels, le cuivre ou l’un de ses sels, les vitamines B, notamment B3, B5, B6 et/ou B8, la vitamine D3, la vitamine C, la vitamine A, la vitamine E, le silicium, le sélénium, le magnésium, le calcium, le manganèse, le molybdène, le fer, les levures, les extraits de plantes notamment de prêle, le [3-carotène, le collagène, l’acide hyaluronique, le glutathion et les mélanges de ces composants.

10. Procédé de traitement cosmétique selon l’une quelconque des revendications 7 à 9 dans lequel ledit hydrolysat est administré sous la forme d’une composition comprenant ledit hydrolysat et au moins un des acides aminés additionnels suivants : de la cystine additionnelle et/ou de l’arginine additionnelle, et/ou de la proline additionnelle , et/ou de la lysine additionnelle, et/ou de la méthionine additionnelle, de préférence la quantité en poids de cystine additionnelle est égale à la quantité en poids de cystine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids d’arginine additionnelle est égale à la quantité en poids d’arginine de l’hydrolysat, et/ou la quantité en poids de proline additionnelle est égale à la quantité en poids de proline de l’hydrolysat, et/ou la quantité en poids de lysine additionnelle est égale à la quantité en poids de lysine de l’hydrolysat et/ou la quantité en poids de méthionine additionnelle va de 10 mg/jour à 80 mg/jour.

11. Procédé de traitement cosmétique selon l’une quelconque des revendications 7 à 10 pour prévenir et/ou diminuer les signes de vieillissement cutané, en particulier l’apparition de rides et/ou de ridules et/ou pour améliorer la brillance et/ou la fermeté de la peau et/ou diminuer la perte d’élasticité de la peau.