EA046220B1 - ANTI-LAG-3 ANTIBODIES AND THEIR COMPOSITIONS - Google Patents
ANTI-LAG-3 ANTIBODIES AND THEIR COMPOSITIONS Download PDFInfo
- Publication number
- EA046220B1 EA046220B1 EA201990912 EA046220B1 EA 046220 B1 EA046220 B1 EA 046220B1 EA 201990912 EA201990912 EA 201990912 EA 046220 B1 EA046220 B1 EA 046220B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- lag
- binding
- antigen
- antibodies
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 75
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 308
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 claims description 193
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 174
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 174
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 173
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 139
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 125
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 93
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 62
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 52
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 48
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 48
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 45
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 39
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 38
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 37
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 37
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 37
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 36
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 27
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 claims description 27
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 20
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 18
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 17
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 17
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 13
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims description 12
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims description 12
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 11
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 11
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 9
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 8
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 8
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 claims description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 7
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 claims description 7
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000002409 gliosarcoma Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 claims description 5
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 5
- OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbutyric acid Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=CC=C1 OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 claims description 4
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 229950009215 phenylbutanoic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 4
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 claims description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 230000001934 delay Effects 0.000 claims description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 3
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 claims description 3
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 claims description 3
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 claims description 2
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 claims 6
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 claims 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims 1
- 102100020862 Lymphocyte activation gene 3 protein Human genes 0.000 description 139
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 125
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 97
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 79
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 76
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 62
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 43
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 41
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 41
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 26
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 26
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 19
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 18
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 16
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 16
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 15
- 230000006870 function Effects 0.000 description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 12
- -1 iGhV1-24 Proteins 0.000 description 12
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 10
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 9
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 9
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 9
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- 101001047617 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-11 Proteins 0.000 description 7
- 102100022955 Immunoglobulin kappa variable 3-11 Human genes 0.000 description 7
- 101001137986 Mus musculus Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 239000004175 ponceau 4R Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 101000839682 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-34 Proteins 0.000 description 5
- 102100028306 Immunoglobulin heavy variable 4-34 Human genes 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 5
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 5
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 5
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 5
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100028666 C-type lectin domain family 4 member G Human genes 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000766915 Homo sapiens C-type lectin domain family 4 member G Proteins 0.000 description 4
- 101001005364 Homo sapiens Immunoglobulin lambda variable 3-19 Proteins 0.000 description 4
- 102100025937 Immunoglobulin lambda variable 3-19 Human genes 0.000 description 4
- 102100038454 Noggin Human genes 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 4
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 4
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 4
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 3
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001037140 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-23 Proteins 0.000 description 3
- 101000839679 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-39 Proteins 0.000 description 3
- 101000989060 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 6-1 Proteins 0.000 description 3
- 101001138128 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-12 Proteins 0.000 description 3
- 101001138133 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-5 Proteins 0.000 description 3
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 3
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100028312 Immunoglobulin heavy variable 4-39 Human genes 0.000 description 3
- 102100029416 Immunoglobulin heavy variable 6-1 Human genes 0.000 description 3
- 102100020773 Immunoglobulin kappa variable 1-12 Human genes 0.000 description 3
- 102100020769 Immunoglobulin kappa variable 1-5 Human genes 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 3
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 102000006639 indoleamine 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 3
- 108020004201 indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000002794 lymphocyte assay Methods 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical group NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 102220518628 Baculoviral IAP repeat-containing protein 6_T47E_mutation Human genes 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 102220485980 Dihydropteridine reductase_Q66R_mutation Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102220590966 Group 3 secretory phospholipase A2_S91T_mutation Human genes 0.000 description 2
- 101000998949 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-24 Proteins 0.000 description 2
- 101001138062 Homo sapiens Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102100036890 Immunoglobulin heavy variable 1-24 Human genes 0.000 description 2
- 102100040220 Immunoglobulin heavy variable 3-23 Human genes 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 102100020943 Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 2
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 2
- 101100018611 Mus musculus Igkc gene Proteins 0.000 description 2
- 102220528418 Myelin protein P0_R98S_mutation Human genes 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 102220480983 Nicotinate phosphoribosyltransferase_Q51L_mutation Human genes 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102220598898 Thiamine transporter 1_I48F_mutation Human genes 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- 102220570985 Uncharacterized protein C7orf57_A74S_mutation Human genes 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 125000004057 biotinyl group Chemical group [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 102220355991 c.274T>C Human genes 0.000 description 2
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 2
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 238000010902 jet-milling Methods 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 2
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 2
- AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N propranolol Chemical compound C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 102220246234 rs138481449 Human genes 0.000 description 2
- 102200005930 rs185017345 Human genes 0.000 description 2
- 102200118200 rs34718174 Human genes 0.000 description 2
- 102200042833 rs3815655 Human genes 0.000 description 2
- 102220093874 rs558707786 Human genes 0.000 description 2
- 102220233398 rs745611450 Human genes 0.000 description 2
- 102220097976 rs753257724 Human genes 0.000 description 2
- 102220262972 rs770678468 Human genes 0.000 description 2
- 102220126986 rs886044434 Human genes 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoate Chemical compound C=1C=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=CC=1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- MWWSFMDVAYGXBV-MYPASOLCSA-N (7r,9s)-7-[(2r,4s,5s,6s)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxyacetyl)-4-methoxy-8,10-dihydro-7h-tetracene-5,12-dione;hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-MYPASOLCSA-N 0.000 description 1
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical group CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1CC2(O)C(C=C(CO)CC3(O)C2C=C(C)C3=O)C4C(C)(C)C14OC(=O)C FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUFNLQXQSDUXKB-DOFZRALJSA-N 2-[4-[4-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]butanoyloxy]ethyl (5z,8z,11z,14z)-icosa-5,8,11,14-tetraenoate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OCCOC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 VUFNLQXQSDUXKB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 description 1
- 102220560624 ATP-binding cassette sub-family C member 8_S45A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010073360 Appendix cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 208000006400 Arbovirus Encephalitis Diseases 0.000 description 1
- SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940125565 BMS-986016 Drugs 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102220518629 Baculoviral IAP repeat-containing protein 6_T47A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 102100023995 Beta-nerve growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100024263 CD160 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 102220485589 CHRNA7-FAM7A fusion protein_Q41A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 101100228196 Caenorhabditis elegans gly-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 102220599052 Clathrin heavy chain 2_P94A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 102100025680 Complement decay-accelerating factor Human genes 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 102220516797 Double homeobox protein 4_R95A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220516745 Double homeobox protein 4_R98A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 1
- MBYXEBXZARTUSS-QLWBXOBMSA-N Emetamine Natural products O(C)c1c(OC)cc2c(c(C[C@@H]3[C@H](CC)CN4[C@H](c5c(cc(OC)c(OC)c5)CC4)C3)ncc2)c1 MBYXEBXZARTUSS-QLWBXOBMSA-N 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- LLQPHQFNMLZJMP-UHFFFAOYSA-N Fentrazamide Chemical compound N1=NN(C=2C(=CC=CC=2)Cl)C(=O)N1C(=O)N(CC)C1CCCCC1 LLQPHQFNMLZJMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100031351 Galectin-9 Human genes 0.000 description 1
- 101100229077 Gallus gallus GAL9 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102220593915 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain F_P71Q_mutation Human genes 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 1
- 101000761938 Homo sapiens CD160 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000856022 Homo sapiens Complement decay-accelerating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000866278 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101001079285 Homo sapiens Immunoglobulin heavy joining 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000840273 Homo sapiens Immunoglobulin lambda constant 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001055145 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 101000984189 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 description 1
- 101000777293 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Chk1 Proteins 0.000 description 1
- 101000777277 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Chk2 Proteins 0.000 description 1
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 1
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000037978 Immune checkpoint receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008028 Immune checkpoint receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100028078 Immunoglobulin heavy joining 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029610 Immunoglobulin lambda constant 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102220471624 Interleukin-10 receptor subunit alpha_P67A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 102100026879 Interleukin-2 receptor subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 102220478979 Interleukin-4 receptor subunit alpha_Y99A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 244000207740 Lemna minor Species 0.000 description 1
- 235000006439 Lemna minor Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025583 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102220465496 Lymphocyte activation gene 3 protein_H85F_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220465647 Lymphocyte activation gene 3 protein_R97E_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000021964 McLeod neuroacanthocytosis syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000026486 McLeod syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000002030 Merkel cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 101000686985 Mouse mammary tumor virus (strain C3H) Protein PR73 Proteins 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 101001009600 Mus musculus Granzyme A Proteins 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102220478092 Myc box-dependent-interacting protein 1_H65A_mutation Human genes 0.000 description 1
- BNQSTAOJRULKNX-UHFFFAOYSA-N N-(6-acetamidohexyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NCCCCCCNC(C)=O BNQSTAOJRULKNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102220546833 Nuclear pore complex protein Nup85_A27K_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010016731 PPAR gamma Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102100038825 Peroxisome proliferator-activated receptor gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102220635139 Phospholipid-transporting ATPase IG_Q66A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 235000001855 Portulaca oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 102220640878 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 3_L23S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- 102220502693 Prostaglandin E2 receptor EP1 subtype_A73S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 229940125566 REGN3767 Drugs 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 102220517873 SCO-spondin_Q51A_mutation Human genes 0.000 description 1
- AUVVAXYIELKVAI-UHFFFAOYSA-N SJ000285215 Natural products N1CCC2=CC(OC)=C(OC)C=C2C1CC1CC2C3=CC(OC)=C(OC)C=C3CCN2CC1CC AUVVAXYIELKVAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 102100031081 Serine/threonine-protein kinase Chk1 Human genes 0.000 description 1
- 102100031075 Serine/threonine-protein kinase Chk2 Human genes 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 101100215487 Sus scrofa ADRA2A gene Proteins 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 description 1
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 102220530950 Terminal uridylyltransferase 7_D68A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102220601514 Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3_S91A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102220533985 Tyrosine-tRNA ligase, mitochondrial_W92Q_mutation Human genes 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N UNPD149280 Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 102220482680 Uncharacterized protein EXOC3-AS1_Q64D_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108010079206 V-Set Domain-Containing T-Cell Activation Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- ZVNYJIZDIRKMBF-UHFFFAOYSA-N Vesnarinone Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C(=O)N1CCN(C=2C=C3CCC(=O)NC3=CC=2)CC1 ZVNYJIZDIRKMBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229930183665 actinomycin Natural products 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000001780 adrenocortical effect Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 210000003445 biliary tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- RSIHSRDYCUFFLA-DYKIIFRCSA-N boldenone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 RSIHSRDYCUFFLA-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 102220362550 c.283C>G Human genes 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N chembl557217 Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 108091008033 coinhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 208000017763 cutaneous neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N cytochalasin B Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]3/C=C/C[C@H](C)CCC[C@@H](O)/C=C/C(=O)O[C@@]23C(=O)N1)=C)C)C1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N cytochalasin B Natural products C[C@H]1CCC[C@@H](O)C=CC(=O)O[C@@]23[C@H](C=CC1)[C@H](O)C(=C)[C@@H](C)[C@@H]2[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- RSIHSRDYCUFFLA-UHFFFAOYSA-N dehydrotestosterone Natural products O=C1C=CC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CCC2=C1 RSIHSRDYCUFFLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-UHFFFAOYSA-N deoliosyl-3C-alpha-L-digitoxosyl-MTM Natural products CC=1C(O)=C2C(O)=C3C(=O)C(OC4OC(C)C(O)C(OC5OC(C)C(O)C(OC6OC(C)C(O)C(C)(O)C6)C5)C4)C(C(OC)C(=O)C(O)C(C)O)CC3=CC2=CC=1OC(OC(C)C1O)CC1OC1CC(O)C(O)C(C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 229940112141 dry powder inhaler Drugs 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 description 1
- AUVVAXYIELKVAI-CKBKHPSWSA-N emetine Chemical compound N1CCC2=CC(OC)=C(OC)C=C2[C@H]1C[C@H]1C[C@H]2C3=CC(OC)=C(OC)C=C3CCN2C[C@@H]1CC AUVVAXYIELKVAI-CKBKHPSWSA-N 0.000 description 1
- 229960002694 emetine Drugs 0.000 description 1
- AUVVAXYIELKVAI-UWBTVBNJSA-N emetine Natural products N1CCC2=CC(OC)=C(OC)C=C2[C@H]1C[C@H]1C[C@H]2C3=CC(OC)=C(OC)C=C3CCN2C[C@H]1CC AUVVAXYIELKVAI-UWBTVBNJSA-N 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000005699 fluoropyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 1
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 102000027411 intracellular receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008582 intracellular receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007915 intraurethral administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 102220523065 mRNA decay activator protein ZFP36L1_S90A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N mithramycin Chemical compound O([C@@H]1C[C@@H](O[C@H](C)[C@H]1O)OC=1C=C2C=C3C[C@H]([C@@H](C(=O)C3=C(O)C2=C(O)C=1C)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](C)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O)[C@@](C)(O)C3)C2)C1)[C@H](OC)C(=O)[C@@H](O)[C@@H](C)O)[C@H]1C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000003232 mucoadhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 238000002638 palliative care Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003057 platinum Chemical class 0.000 description 1
- 229960003171 plicamycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229960003712 propranolol Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 150000003246 quinazolines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 150000004508 retinoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102200108092 rs104894539 Human genes 0.000 description 1
- 102220220543 rs115782087 Human genes 0.000 description 1
- 102220042393 rs116605307 Human genes 0.000 description 1
- 102220324615 rs1216148236 Human genes 0.000 description 1
- 102220292847 rs1233421790 Human genes 0.000 description 1
- 102220313179 rs1553259785 Human genes 0.000 description 1
- 102220290526 rs1557084149 Human genes 0.000 description 1
- 102220284500 rs1557107543 Human genes 0.000 description 1
- 102220005267 rs33918474 Human genes 0.000 description 1
- 102220276804 rs376248938 Human genes 0.000 description 1
- 102220314083 rs376703933 Human genes 0.000 description 1
- 102220020162 rs397508045 Human genes 0.000 description 1
- 102220117732 rs398123320 Human genes 0.000 description 1
- 102220088396 rs5030808 Human genes 0.000 description 1
- 102220217511 rs556967140 Human genes 0.000 description 1
- 102220316145 rs587779239 Human genes 0.000 description 1
- 102200116936 rs72549407 Human genes 0.000 description 1
- 102220243714 rs750596499 Human genes 0.000 description 1
- 102220214819 rs754231971 Human genes 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000001847 surface plasmon resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 229960002372 tetracaine Drugs 0.000 description 1
- GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N tetracaine Chemical compound CCCCNC1=CC=C(C(=O)OCCN(C)C)C=C1 GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000014723 transformation of host cell by virus Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000002525 vasculotropin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229950005577 vesnarinone Drugs 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Description
Список последовательностейList of sequences
Настоящая заявка содержит список последовательностей, который подан в электронном виде в формате ASCII и включен, таким образом, посредством ссылки в полном объеме. Электронная копия списка последовательностей, созданная 5 октября 2017 года, названа 022675_WO057-SL.txt и имеет размер 64693 Б.This application contains a sequence listing that is filed electronically in ASCII format and is hereby incorporated by reference in its entirety. The electronic copy of the sequence list, created on October 5, 2017, is named 022675_WO057-SL.txt and has a size of 64693 B.
Уровень техникиState of the art
LAG-3 (ген активации лимфоцитов 3), также известный как CD223, представляет собой белок суперсемейства иммуноглобулинов, который выполняет функцию рецептора контрольной точки иммунитета. Зрелый белок представляет собой трансмембранный белок I типа из 503 аминокислот, состоящий из четырех внеклеточных Ig-подобных доменов. Он экспрессируется клетками различных типов, в том числе активированными Т-клетками, регуляторными Т-клетками (Treg), естественными киллерами, Вклетками и плазмоцитоидными дендритными клетками. Информация о последовательности, организации экзонов/интронов и расположении LAG-3 на хромосоме указывает на его близкое родство с CD4. Как и CD4, LAG-3 связывается с молекулами МНС класса II, но с более высокой аффинностью и на другом сайте по сравнению с CD4.LAG-3 (lymphocyte activation gene 3), also known as CD223, is a protein of the immunoglobulin superfamily that functions as an immune checkpoint receptor. The mature protein is a 503 amino acid type I transmembrane protein consisting of four extracellular Ig-like domains. It is expressed by various cell types, including activated T cells, regulatory T cells (Treg), natural killer cells, B cells, and plasmacytoid dendritic cells. Sequence information, exon/intron organization, and chromosomal location of LAG-3 indicate its close relationship to CD4. Like CD4, LAG-3 binds to MHC class II molecules, but with higher affinity and at a different site than CD4.
LAG-3 представляет собой коингибирующий рецептор, который предположительно регулирует Тклеточную пролиферацию, активацию и гомеостаз сходным с CTLA-4 и PD-1 образом. При связывании с внеклеточным доменом лиганда, LAG-3 проявляет свой эффект посредством последующей передачу сигнала через цитоплазматический домен. Лучше всего охарактеризованным лигандом LAG-3 является МНС класса II (MHCII), но описаны другие лиганды LAG-3, в том числе LSECtin.LAG-3 is a coinhibitory receptor that is thought to regulate T cell proliferation, activation, and homeostasis in a manner similar to CTLA-4 and PD-1. Upon binding to the extracellular domain of the ligand, LAG-3 exerts its effect through subsequent signaling through the cytoplasmic domain. The best characterized LAG-3 ligand is MHC class II (MHCII), but other LAG-3 ligands have been described, including LSECtin.
LAG-3 не имеет классических мотивов ITIM или ITSM, но имеет консервативный мотив KIEELE (SEQ ID NO: 73), который предположительно обязателен для проявления его ингибирующего эффекта на Т-клеточную активность. Точный механизм, по которому LAG-3 воздействует на Т-клеточную активность, слабо изучен. LAG-3 ингибирует деление Т-клеток посредством блокирования вхождения активированных Т-клеток в фазу роста клеточного цикла, что ведет к накоплению клеток в S-фазе. LAG-3 также предположительно играет роль в усилении супрессорной активности регуляторных Т-клеток и в модулировании функции дендритных клеток. Злокачественные клетки обладают способностью активировать экспрессию MHCII, который связывает LAG-3, на эффекторных Т-клетках, таким образом ингибируя их активность и индуцируя ускользание опухоли от иммунного ответа.LAG-3 does not have the classical ITIM or ITSM motifs, but has a conserved KIEELE motif (SEQ ID NO: 73), which is presumably required for its inhibitory effect on T cell activity. The exact mechanism by which LAG-3 affects T cell activity is poorly understood. LAG-3 inhibits T cell division by blocking the entry of activated T cells into the growth phase of the cell cycle, leading to the accumulation of cells in the S phase. LAG-3 also appears to play a role in enhancing the suppressive activity of regulatory T cells and in modulating dendritic cell function. Malignant cells have the ability to activate the expression of MHCII, which binds LAG-3, on effector T cells, thereby inhibiting their activity and inducing tumor immune escape.
Ввиду решающей роли LAG-3 в качестве иммунного модулятора, существует необходимость в новой и усовершенствованной иммунной терапии, которая нацеливается на LAG-3, для лечения злокачественных опухолей и определенных нарушений иммунной системы.Due to the critical role of LAG-3 as an immune modulator, there is a need for new and improved immune therapies that target LAG-3 for the treatment of malignancies and certain immune system disorders.
Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the invention
Изобретение относится к новым рекомбинантным антителам, нацеленными на LAG-3, а также к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько таких антител, и к применению антител и фармацевтических композиций для усиления иммунитета у пациента и для лечения злокачественных опухолей, происходящих из таких тканей, как кожа, легкое, кишечник, толстая кишка, яичник, головной мозг, предстательная железа, почка, мягкие ткани, гематопоэтическая система, голова и шея, печень, мочевой пузырь, молочная железа, желудок, матка и поджелудочная железа. По сравнению с существующими в настоящее время способами лечения таких злокачественных опухолей, включая терапию антителами, предполагается, что антитела по изобретению могут обеспечивать высокоэффективное лечение как при самостоятельном применении, так и в комбинации с другим противораковым терапевтическим средством, таким как антитело, нацеленное на другой белок контрольной точки иммунитета.The invention relates to new recombinant antibodies targeting LAG-3, as well as to pharmaceutical compositions containing one or more such antibodies, and to the use of antibodies and pharmaceutical compositions to enhance immunity in a patient and for the treatment of malignant tumors originating from tissues such as skin, lung, intestine, colon, ovary, brain, prostate, kidney, soft tissue, hematopoietic system, head and neck, liver, bladder, breast, stomach, uterus and pancreas. Compared to currently existing treatments for such cancers, including antibody therapy, it is believed that the antibodies of the invention may provide highly effective treatment either alone or in combination with another anticancer therapeutic agent, such as an antibody targeting another protein immune checkpoint.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к анmи-LAG-3 антителу или его антиген-связывающей части, где анти-LAG-3 антитело представляет собой любое антитело, указанное в настоящем описании как антитело 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011, или его вариант, где вариант, например, может относиться к другому изотипу или изотипическому подклассу и/или содержать определенные минимальные аминокислотные замены относительно антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011, не утрачивая при этом антиген-связывающую специфичность родительского антитела.In one embodiment, the present invention provides an anti-LAG-3 antibody or an antigen-binding portion thereof, wherein the anti-LAG-3 antibody is any antibody defined herein as antibody 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 or 15011, or a variant thereof, where the variant, for example, may be of a different isotype or isotypic subclass and/or contain certain minimal amino acid substitutions relative to antibody 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 or 15011 without losing the antigen -binding specificity of the parent antibody.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело конкурирует за связывание с LAG-3 человека с антителом, у которого CDR1-3 тяжелой цепи (H) и CDR1-3 легкой цепи (H) такие же как HCDR1-3 и L-CDR1-3 антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011, или получены на основе этих антител.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody competes for binding to human LAG-3 with an antibody whose heavy chain CDR1-3 (H) and light chain CDR1-3 (H) are the same as HCDR1-3 and L- CDR1-3 antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 or 15011, or derived from these antibodies.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело связывается с тем же эпитопом LAG-3 человека, что и антитело, у которого CDR1-3 тяжелой цепи (H) и CDR1-3 легкой цепи (H) такие же как H-CDR1-3 и L-CDR1-3 антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011, или получены на основе этих антител.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody binds to the same human LAG-3 epitope as the antibody in which the heavy chain CDR1-3 (H) and light chain CDR1-3 (H) are the same as H-CDR1 -3 and L-CDR1-3 antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 or 15011, or derived from these antibodies.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит H-CDR3, содержащую аминокислотную последовательность H-CDR3 антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises an H-CDR3 comprising the amino acid sequence of the H-CDR3 antibody 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит H-CDR1-3, содержащие последовательности H-CDR1-3, соответственно, антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 илиIn one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises H-CDR1-3 containing H-CDR1-3 sequences, respectively antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or
- 1 046220- 1 046220
15011.15011.
В одном из вариантов осуществления aHTu-LAG-З антитело содержит L-CDR3, содержащую аминокислотную последовательность L-CDR3 антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In one embodiment, the aHTu-LAG-3 antibody comprises an L-CDR3 comprising the amino acid sequence of the L-CDR3 antibody 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит L-CDR1-3, содержащие последовательности L-CDR1-3, соответственно, антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises L-CDR1-3 containing L-CDR1-3 sequences, respectively antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 or 15011.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит аминокислотные последовательности H-CDR3 и L-CDR3 антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises the amino acid sequences of the H-CDR3 and L-CDR3 antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит аминокислотные последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3 антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises the amino acid sequences H-CDR1-3 and L-CDR1-3 of antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело конкурирует за связывание с LAG-3 человека с антителом 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody competes for binding to human LAG-3 with antibody 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело связывается с тем же эпитопом LAG-3 человека, что и антитело 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody binds to the same human LAG-3 epitope as the 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011 antibody.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит определяющую комплементарность область тяжелой цепи (H-CDR) 3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37, 43, 46, 50, 55, 58 или 64.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises a heavy chain complementarity determining region (H-CDR) 3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37, 43, 46, 50, 55, 58, or 64.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит H-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности, соответственно, из SEQ ID NO: 35-37; 41-43; 35, 42, и 46; 48-50; 53-55; 56-58; или 62-64.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises H-CDR1-3 containing the amino acid sequences respectively of SEQ ID NO: 35-37; 41-43; 35, 42, and 46; 48-50; 53-55; 56-58; or 62-64.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет вариабельный домен тяжелой цепи (VH), последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности VH с SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a heavy chain variable domain (VH) that is at least 90% consistent (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98 % or at least 99%) identical to the amino acid sequence of VH with SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 or 27.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет VH, который содержит SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a VH that contains SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, or 27.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет тяжелую цепь (НС), которая содержит VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27 и константную области тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 30.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a heavy chain (HC) that contains a VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 or 27 and a heavy chain constant region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит определяющую комплементарность область легкой цепи (L-CDR) 3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, 52, 61 или 67.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises a light chain complementarity determining region (L-CDR) 3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, 52, 61, or 67.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 38-40; 44, 45 и 40; 44, 47 и 40; 51, 47 и 52; 59-61; или 6567, соответственно.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises L-CDR1-3 comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 38-40; 44, 45 and 40; 44, 47 and 40; 51, 47 and 52; 59-61; or 6567, respectively.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет вариабельный домен легкой цепи (VL), последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности VL с SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 или 28.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain variable domain (VL) that is at least 90% consistent (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98 % or at least 99%) identical to the amino acid sequence of VL with SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 or 28.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет VL, который содержит SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 или 28.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a VL that contains SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, or 28.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет легкую цепь (LC), которая содержит VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 или 28 и константную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 32 или 34.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain (LC) that contains a VL with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, or 28 and a light chain constant region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32 or 34.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит H-CDR3 и L-CDR3 с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 37 и 40; 43 и 40; 46 и 40; 50 и 52; 55 и 40; 58 и 61; или 64 и 67; соответственно.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody comprises H-CDR3 and L-CDR3 with the amino acid sequences of SEQ ID NO: 37 and 40; 43 and 40; 46 and 40; 50 and 52; 55 and 40; 58 and 61; or 64 and 67; respectively.
В определенных вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3 с аминокислотными последовательностями:In certain embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises H-CDR1-3 and L-CDR1-3 with the amino acid sequences:
a) SEQ ID NO: 35, 36, 37, 38, 39 и 40, соответственно,a) SEQ ID NO: 35, 36, 37, 38, 39 and 40, respectively,
b) SEQ ID NO: 41, 42, 43, 44, 45 и 40, соответственно,b) SEQ ID NO: 41, 42, 43, 44, 45 and 40, respectively,
c) SEQ ID NO: 35, 42, 46, 44, 47 и 40, соответственно,c) SEQ ID NO: 35, 42, 46, 44, 47 and 40, respectively,
d) SEQ ID NO: 48, 49, 50, 51, 47 и 52, соответственно,d) SEQ ID NO: 48, 49, 50, 51, 47 and 52, respectively,
e) SEQ ID NO: 53, 54, 55, 44, 45 и 40, соответственно,e) SEQ ID NO: 53, 54, 55, 44, 45 and 40, respectively,
f) SEQ ID NO: 56, 57, 58, 59, 60 и 61, соответственно; илиf) SEQ ID NO: 56, 57, 58, 59, 60 and 61, respectively; or
g) SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66 и 67, соответственно.g) SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66 and 67, respectively.
В определенных вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающая часть по изобретению:In certain embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof of the invention:
a) имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% илиa) has a VH that is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) sequence identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO : 3, and VL, the sequence of which is at least 90% (for example, at least 92%, at least 95%, at least 98%, or
- 2 046220 по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4;- 2 046220 is at least 99%) identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4;
b) имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8;b) has a VH that is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) sequence identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO : 7, and VL whose sequence is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8;
c) имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12;c) has a VH that is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) sequence identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO : 11, and VL, the sequence of which is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12;
d) имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16;d) has a VH that is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) sequence identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO : 15, and VL, the sequence of which is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16;
e) имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20;e) has a VH that is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) sequence identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO : 19, and VL, the sequence of which is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20;
f) имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24; илиf) has a VH that is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) sequence identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO : 23, and VL whose sequence is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24; or
g) имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28.g) has a VH that is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) sequence identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO : 27, and VL, the sequence of which is at least 90% (e.g., at least 92%, at least 95%, at least 98%, or at least 99%) identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28.
В определенных вариантах осуществления αнти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению:In certain embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention:
a) имеет VH, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3, и VL, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4;a) has a VH that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, and a VL that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4;
b) имеет VH, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, и VL, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8;b) has a VH that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, and a VL that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8;
c) имеет VH, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11, и VL, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12;c) has a VH that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and a VL that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12;
d) имеет VH, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15, и VL, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16;d) has a VH that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, and a VL that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16;
e) имеет VH, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19, и VL, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20;e) has a VH that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, and a VL that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20;
f) имеет VH, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23, и VL, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24; илиf) has a VH that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, and a VL that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24; or
g) имеет VH, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и VL, которая содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28.g) has a VH that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27, and a VL that contains or consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28.
В определенных вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело:In certain embodiments, the anti-LAG-3 antibody:
a) имеет LC, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 4 и 34; и НС, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 3 и 30;a) has an LC that contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 4 and 34; and HC, which contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 3 and 30;
b) имеет LC, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 8 и 34; и НС, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 7 и 30;b) has an LC that contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 8 and 34; and HC, which contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 7 and 30;
c) имеет LC, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 12 и 34; и НС, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 11 и 30;c) has an LC that contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 12 and 34; and HC, which contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 11 and 30;
d) имеет LC, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 16 и 34; и НС, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 15 и 30;d) has an LC that contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 16 and 34; and HC, which contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 15 and 30;
е) имеет LC, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 20 и 34; и НС, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 19 и 30;e) has an LC that contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 20 and 34; and HC, which contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 19 and 30;
f) имеет LC, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 24 и 34; и НС, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 23 и 30; илиf) has an LC that contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 24 and 34; and HC, which contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 23 and 30; or
g) имеет LC, которая содержит или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 28 и 32; и НС, которая содержитg) has an LC that contains or consists of the amino acid sequences SEQ ID NO: 28 and 32; and NS, which contains
- 3 046220 или состоит аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 27 и 30.- 3 046220 or consists of amino acid sequences SEQ ID NO: 27 and 30.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению имеет по меньшей мере одно из следующих свойств:In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention has at least one of the following properties:
a) при концентрации 20 мкг/мл более чем на 85% снижает связывание LAG-3 человека с МНС класса II человека на клетках А375 по сравнению с антителом отрицательного контроля, как определено конкурентным анализом на основе проточной цитометрии;a) at a concentration of 20 μg/ml, reduces the binding of human LAG-3 to human MHC class II on A375 cells by more than 85% compared to the negative control antibody, as determined by a flow cytometry-based competition assay;
b) в концентрации 20 мкг/мл снижает связывание LAG-3 человека с МНС класса II человека на клетках А375 до 35-85% по сравнению с антителом отрицательного контроля, как определено конкурентным анализом на основе проточной цитометрии;b) at a concentration of 20 μg/ml reduces the binding of human LAG-3 to human MHC class II on A375 cells to 35-85% compared to the negative control antibody, as determined by flow cytometry-based competition analysis;
c) блокирует связывание LAG-3 человека, экспрессируемым на клетках Jurkat, и МНС класса II человека, экспрессируемым на клетках Raji;c) blocks the binding of human LAG-3 expressed on Jurkat cells and human MHC class II expressed on Raji cells;
d) связывается с LAG-3 человека при EC50 0,1 нМ или меньше, как измерено проточной цитометрией;d) binds to human LAG-3 with an EC 50 of 0.1 nM or less, as measured by flow cytometry;
e) связывается с LAG-3 яванского макака при EC50 0,3 нМ или меньше, как измерено проточной цитометрией;e) binds to cynomolgus LAG-3 with an EC50 of 0.3 nM or less as measured by flow cytometry;
f) связывается с LAG-3 человека при KD 3,0xl0-8 или меньше, как измерено поверхностным плазмонным резонансом;f) binds to human LAG-3 at a K D of 3.0xl0 -8 or less, as measured by surface plasmon resonance;
g) связывается с LAG-3 яванского макака с KD 1,5 х10-7 или меньше, как измерено поверхностным плазмонным резонансом;g) binds to cynomolgus LAG-3 with a KD of 1.5 x 10 -7 or less as measured by surface plasmon resonance;
h) связывается с LAG-3 мыши с KD 3,5х10-8 или меньше, как измерено поверхностным плазмонным резонансом;h) binds to mouse LAG-3 with a KD of 3.5x10 -8 or less, as measured by surface plasmon resonance;
i) стимулирует продукцию IL-2 мононуклеарными клетками периферической крови человека (РВМС), обработанными стафилококковым энтеротоксином В (SEB);i) stimulates the production of IL-2 by human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) treated with staphylococcal enterotoxin B (SEB);
j) снижает клеточные уровни LAG-3 в Т-клетках человека;j) reduces cellular levels of LAG-3 in human T cells;
k) снижает растворимые уровни LAG-3 в культуре Т-клеток человека;k) reduces soluble levels of LAG-3 in cultured human T cells;
l) индуцирует регрессию опухолевого роста in vivo;l) induces regression of tumor growth in vivo;
m) задерживает опухолевый рост in vivo; иm) delays tumor growth in vivo; And
n) не связывается с тем же эпитопом LAG-3 человека, что и антитело 25F7-Lag3.5.n) does not bind to the same human LAG-3 epitope as the 25F7-Lag3.5 antibody.
Примеры такого антитела включают, без ограничения, антитело 15646 (по меньшей мере со свойствами b, с, d, e, i и n), антитело 15532 (по меньшей мере со свойствами а, с, d, e, f, g, i, j , k, m и n), антитело 15723 (по меньшей мере со свойствами b, с, d, e, i и n), антитело 15595 (по меньшей мере со свойствами а, с, d, e, i и n), антитело 15431 (по меньшей мере со свойствами а, с, d, e, f, g, i и n), антитело 15572 (по меньшей мере со свойствами b, с, d, e, f, g, i и n) и антитело 15011 (по меньшей мере со свойствами а, с, d, e, f, g, h, i, j, k, l, m и n). В некоторых вариантах осуществления антu-LAG-3 антитело или антигенсвязывающая часть по изобретению имеет по меньшей мере 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 из указанных свойств. В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антигенсвязывающая часть по изобретению имеет по меньшей мере свойства b, с, d, e, i и n; по меньшей мере свойства а, с, d, e, f, g, i, j, k, m и n; по меньшей мере свойства а, с, d, e, i и n; по меньшей мере свойства а, с, d, e, f, g, i и n; по меньшей мере свойства b, с, d, e, f, g, i и n; или по меньшей мере свойства а, с, d, e, f, g, h, i, j, k, l, m и n.Examples of such an antibody include, but are not limited to, Antibody 15646 (at least with properties b, c, d, e, i and n), Antibody 15532 (at least with properties a, c, d, e, f, g, i , j , k, m and n), antibody 15723 (at least with properties b, c, d, e, i and n), antibody 15595 (at least with properties a, c, d, e, i and n ), antibody 15431 (at least with properties a, c, d, e, f, g, i and n), antibody 15572 (at least with properties b, c, d, e, f, g, i and n ) and antibody 15011 (at least with properties a, c, d, e, f, g, h, i, j, k, l, m and n). In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen binding portion of the invention has at least 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, or 1 of these properties. In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion of the invention has at least properties b, c, d, e, i, and n; at least properties a, c, d, e, f, g, i, j, k, m and n; at least properties a, c, d, e, i and n; at least properties a, c, d, e, f, g, i and n; at least properties b, c, d, e, f, g, i and n; or at least properties a, c, d, e, f, g, h, i, j, k, l, m and n.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению конкурирует за связывание с LAG-3 человека с антителом 15011, 15572 и/или 15431.In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention competes for binding to human LAG-3 with antibody 15011, 15572, and/or 15431.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению связывается с эпитопом LAG-3 человека, имеющим:In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention binds to a human LAG-3 epitope having:
a) аминокислотные остатки Н85, Р86, А87, Р89, S91, W92 и G93 из SEQ ID NO:68;a) amino acid residues H85, P86, A87, P89, S91, W92 and G93 from SEQ ID NO:68;
b) аминокислотные остатки А40, Q41, Р43, Р46, Р49, D52, Т62, Q64, Н65, Q66, Р67, D68, G93, Р94, Р96, R98, Y99, Т100, V101, Р106, G107, R119, Е124, R129, G130, D131, S133, R137, Р138, D143, R148 и R163 из SEQ ID NO: 68;b) amino acid residues A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 and R163 from SEQ ID NO: 68;
c) аминокислотные остатки А40, Q41, Р43, Р46, Р49, D52, Т62, Q64, Н65, Q66, Р67, D68, Р96, Y99, Т100, V101, Р106, G107, R119, Е124, R129, G130, D131, S133, R137, Р138, D143, R148 и R163 из SEQ ID NO: 68; илиc) amino acid residues A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 and R163 from SEQ ID NO: 68; or
d) аминокислотные остатки G107, L109, R110 и S111 из SEQ ID NO: 68.d) amino acid residues G107, L109, R110 and S111 from SEQ ID NO: 68.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению связывается с эпитопом, имеющим аминокислотные остатки 98-105 SEQ ID NO: 68. Примеры такого антитела включают, без ограничения, антитела 15532, 15431, 15572 и 15011.In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention binds to an epitope having amino acid residues 98-105 of SEQ ID NO: 68. Examples of such an antibody include, but are not limited to, antibodies 15532, 15431, 15572, and 15011.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению связывается с эпитопом, имеющим:In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention binds to an epitope having:
a) аминокислотные остатки 78-105 и 123-131 SEQ ID NO: 68;a) amino acid residues 78-105 and 123-131 SEQ ID NO: 68;
b) аминокислотные остатки 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 и 148-152 SEQ ID NO: 68; илиb) amino acid residues 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 and 148-152 SEQ ID NO: 68; or
c) аминокислотные остатки 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 и 148-161 SEQ ID NO:68c) amino acid residues 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 and 148-161 SEQ ID NO:68
В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению относится к изотипуIn some embodiments, the antibody of the present invention is of the isotype
- 4 046220- 4 046220
IgG, например, подклассу IgG1 или IgG2 изотипа IgG. В определенных вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну мутацию в Fc-области. В конкретных вариантах осуществления антитело содержит мутацию в одном или нескольких аминокислотных положениях тяжелой цепи 228, 234 и 235, которые пронумерованы согласно схеме нумерации IMGT®. Например, один или оба аминокислотных остатка в положениях 234 и 235 могут быть мутированы из Leu в Ala и/или аминокислотный остаток в положении 228 может быть мутирован из Ser в Pro.IgG, for example, subclass IgG1 or IgG2 of the IgG isotype. In certain embodiments, the antibody contains at least one mutation in the Fc region. In specific embodiments, the antibody contains a mutation at one or more of the heavy chain amino acid positions 228, 234, and 235, which are numbered according to the IMGT® numbering scheme. For example, one or both of the amino acid residues at positions 234 and 235 may be mutated from Leu to Ala and/or the amino acid residue at position 228 may be mutated from Ser to Pro.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере одно (например, одно) анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, как раскрыто в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый эксципиент, необязательно с дополнительным терапевтическим средством, таким как противораковое терапевтическое антитело.In another aspect, the present invention provides pharmaceutical compositions comprising at least one (e.g., one) anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, as disclosed herein, and a pharmaceutically acceptable excipient, optionally with an additional therapeutic agent, such as an anti-cancer therapeutic antibody.
Настоящее изобретение дополнительно относится к выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, содержащим нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть, нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть, или обе цепи, анти-LAG-3 антитела, как раскрыто в настоящем описании. Изобретение также относится к векторам, содержащим такую выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, где указанный вектор может дополнительно содержать последовательность, контролирующую экспрессию.The present invention further relates to isolated nucleic acid molecules containing a nucleotide sequence that encodes a heavy chain or an antigen binding portion thereof, a nucleotide sequence that encodes a light chain or an antigen binding portion thereof, or both chains, an anti-LAG-3 antibody as disclosed herein description. The invention also relates to vectors containing such an isolated nucleic acid molecule, wherein said vector may further comprise an expression control sequence.
Настоящее изобретение также относится к клеткам-хозяевам, содержащим нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антиген-связывающую часть, нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антиген-связывающую часть, или обе цепи, антиLAG-3 антитела, как раскрыто в настоящем описании.The present invention also relates to host cells containing a nucleotide sequence that encodes a heavy chain or an antigen-binding portion thereof, a nucleotide sequence that encodes a light chain or an antigen-binding portion thereof, or both chains, an anti-LAG-3 antibody as disclosed in this description.
Настоящее изобретение также относится к способу получения антитела или его антиген-связывающей части, как раскрыто в настоящем описании, который включает наличие клетки-хозяина, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть, и нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антиген-связывающую часть, анти-LAG-3 антитела, как раскрыто в настоящем описании, культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела или его части, и выделение полученного антитела или его части.The present invention also relates to a method for producing an antibody or an antigen-binding portion thereof, as disclosed herein, which includes having a host cell that contains a nucleotide sequence that encodes a heavy chain or an antigen-binding portion thereof, and a nucleotide sequence that encodes a light chain or an antigen-binding portion thereof, an anti-LAG-3 antibody as disclosed herein, culturing said host cell under conditions suitable for expression of the antibody or portion thereof, and isolating the resulting antibody or portion thereof.
Настоящее изобретение также относится к полиспецифической (например, биспецифической) связывающей молекуле, содержащей антиген-связывающую часть анти-LAG-3 антитела, описанного в настоящем описании, и антиген-связывающую часть другого отличающегося антитела, такого как другое анти-LAG-3 антитело (например, как раскрыто в настоящем описании) или антитело, которое нацелено на другой белок, такой как другой белок контрольной точки иммунтитета, раковый антиген или другую молекулу клеточной поверхности, активность которого опосредует патологическое состояние, такое как злокачественная опухоль.The present invention also provides a multispecific (e.g., bispecific) binding molecule comprising an antigen-binding portion of an anti-LAG-3 antibody described herein and an antigen-binding portion of another different antibody, such as another anti-LAG-3 antibody ( for example, as disclosed herein) or an antibody that targets another protein, such as another immune checkpoint protein, a cancer antigen, or another cell surface molecule, the activity of which mediates a pathological condition, such as a cancer.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения пациента со связанным с LAG-3 нарушением, который включает введение указанному пациенту анти-LAG-3 антитела или его антигенсвязывающей части, фармацевтической композиции или биспецифической связывающей молекулы, как раскрыто в настоящем описании. Если не указано иное, пациентом в настоящем описании является человек.The present invention also provides a method of treating a patient with a LAG-3 related disorder, which comprises administering to said patient an anti-LAG-3 antibody or antigen binding portion thereof, a pharmaceutical composition or a bispecific binding molecule as disclosed herein. Unless otherwise indicated, the patient herein is a human.
Настоящее изобретение также относится к способу усиления иммунитета у пациента, который включает введение указанному пациенту анти-LAG-3 антитела или его антиген-связывающей части, фармацевтической композиции или биспецифической связывающей молекулы, как раскрыто в настоящем описании.The present invention also provides a method of enhancing immunity in a patient, which includes administering to said patient an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, a pharmaceutical composition, or a bispecific binding molecule as disclosed herein.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения злокачественной опухоли у пациента, который включает введение указанному пациенту анти-LAG-3 антитела или его антиген-связывающей части, фармацевтической композиции или биспецифической связывающей молекулы, как раскрыто в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления злокачественная опухоль происходит из ткани, выбранной из кожи, легкого, кишечника, толстой кишки, яичника, головного мозга, предстательной железы, почки, мягких тканей, гематопоэтической системы, головы и шеи, печени, мочевого пузыря, молочной железы, желудка, матки и поджелудочной железы. В определенных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой фибросаркому, немелкоклеточный рак легких, меланому, глиобластому, глиосаркому или рак толстой кишки.The present invention also provides a method of treating cancer in a patient, which includes administering to said patient an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, a pharmaceutical composition, or a bispecific binding molecule as disclosed herein. In some embodiments, the malignant tumor originates from tissue selected from skin, lung, intestine, colon, ovary, brain, prostate, kidney, soft tissue, hematopoietic system, head and neck, liver, bladder, breast, stomach , uterus and pancreas. In certain embodiments, the cancer is fibrosarcoma, non-small cell lung cancer, melanoma, glioblastoma, gliosarcoma, or colon cancer.
Любой из вышеуказанных способов дополнительно может включать введение, например, химиотерапевтического средства, анти-неопластического средства, анти-ангиогенного средства, ингибитора тирозинкиназы, ингибитора пути LAG-3 или лучевой терапии. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает введение ретиноевой кислоты, фенилбутирата, полностью трансретиноевой кислоты и/или активной формы витамина D.Any of the above methods may further include administering, for example, a chemotherapeutic agent, an anti-neoplastic agent, an anti-angiogenic agent, a tyrosine kinase inhibitor, a LAG-3 pathway inhibitor, or radiation therapy. In some embodiments, the method further comprises administering retinoic acid, phenylbutyrate, all-trans retinoic acid, and/or a reactive form of vitamin D.
Настоящее изобретение дополнительно относится к применению композиции антител, содержащей анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающую часть, как раскрыто в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для лечения пациента со связанным с LAG-3 нарушением, лечения злокачественной опухоли у пациента и/или усиления иммунитета у больного.The present invention further relates to the use of an antibody composition comprising an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety as disclosed herein for the manufacture of a medicament for treating a patient with a LAG-3 related disorder, treating a cancer in the patient and/or or strengthening the patient's immunity.
Настоящее изобретение дополнительно относится к анти-LAG-3 антителу или антиген-связываюThe present invention further relates to an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding
- 5 046220 щей части, как раскрыто в настоящем описании, для лечения пациента со связанным с LAG-3 нарушением, лечения злокачественной опухоли у пациента и/или усиления иммунитета у больного.- 5 046220 portions as disclosed herein, for treating a patient with a LAG-3 related disorder, treating a cancer in the patient, and/or enhancing immunity in the patient.
Настоящее изобретение дополнительно относится к изделию, содержащему αнти-LAG-3 антитело или антиген-связывающую часть, как раскрыто в настоящем описании, где указанное изделие подходит для лечения пациента со связанным с LAG-3 нарушением, лечения злокачественной опухоли у пациента и/или усиления иммунитета у больного.The present invention further relates to an article containing an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety as disclosed herein, wherein said article is suitable for treating a patient with a LAG-3 related disorder, treating a cancer in the patient, and/or enhancing immunity of the patient.
Краткое описание чертежейBrief description of drawings
На фиг. 1А-1С представлены репрезентативные точечные диаграммы проточной цитометрии антител, полученных, как описано в примере 2. Фиг. 1А: клон антитела, специфически связывающийся с трансфицированными клетками LAG-3 человека. Фиг. 1В: клон антитела, связывающийся неспецифически с клетками CHO-S. Фиг. 1С: клон антитела, который не связывается ни с одной популяцией клеток, используемых при скрининге.In fig. 1A-1C are representative flow cytometry dot plots of antibodies generated as described in Example 2. FIG. 1A: antibody clone that specifically binds to transfected human LAG-3 cells. Fig. 1B: antibody clone that binds nonspecifically to CHO-S cells. Fig. 1C: an antibody clone that does not bind to any cell population used in the screening.
На фиг. 2 представлен уровень продукции IL-2 SEB-стимулированными РВМС после обработки моноклональными анти-LAG-3 антителами.In fig. Figure 2 shows the level of IL-2 production by SEB-stimulated PBMCs after treatment with monoclonal anti-LAG-3 antibodies.
На фиг. 3 представлен уровень продукции IL-2 SEB-стимулированными РВМС после обработки моноклональными анти-LAG-3 антителами. Каждая точка представляет уровень секреции IL-2 у одного донора РВМС.In fig. 3 shows the level of IL-2 production by SEB-stimulated PBMCs after treatment with monoclonal anti-LAG-3 antibodies. Each dot represents the level of IL-2 secretion in one PBMC donor.
На фиг. 4 представлен уровень люминесценции в анализе блокирования LAG-3-MHC класса II после лечения моноклональными анти-LAG-3 антителами. Данные представлены в виде среднее ±SEM.In fig. Figure 4 shows the level of luminescence in the LAG-3-MHC class II blocking assay after treatment with monoclonal anti-LAG-3 antibodies. Data are presented as mean ±SEM.
На фиг. 5 представлены уровни LAG-3 в лизатах и супернатантах трансфицированной LAG-3 Тклеточной линии после обработки моноклональными анти-LAG-3 антителами. Данные представлены в виде среднее ±SEM. Звездочки обозначают статистически значимое различие между 15532 и аналогами эталонного антитела (*: р<0,05, ***: р<0,001, ****: р<0,0001).In fig. 5 shows the levels of LAG-3 in lysates and supernatants of a LAG-3 transfected T cell line after treatment with monoclonal anti-LAG-3 antibodies. Data are presented as mean ±SEM. Asterisks indicate statistically significant difference between 15532 and reference antibody counterparts (*: p<0.05, ***: p<0.001, ****: p<0.0001).
На фиг. 6 представлен эффект антитела 15011 in vivo в двух моделях сингенных опухолей на мышах.In fig. 6 shows the in vivo effect of antibody 15011 in two mouse models of syngeneic tumors.
На фиг. 7 представлен эффект антитела 15532 in vivo в модели полугуманизированной ксенотрансплантированной опухоли, где иммунную систему мышей NOG восстанавливали с использованием РВМС человека и мышам пересаживали клетки меланомы человека А375.In fig. 7 shows the in vivo effect of antibody 15532 in a semi-humanized xenograft tumor model where the immune system of NOG mice was reconstituted using human PBMC and the mice were transplanted with human A375 melanoma cells.
На фиг. 8 представлен обзор групп эпитопов (эпитопных групп), идентифицированных в анализе конкурентного связывания на панели из 13 hutu-LAG^ антител. Антитела, соединенные черными линиями, обозначают перекрестную блокирующую активность в обеих ориентациях (лиганд и аналит). Антитела, соединенные штриховыми линиями, обозначают однонаправленное блокирование, где антитело блокируют при тестировании только как аналит. Антитела группируют в соответствии с паттернами конкуренции с другими aHTu-LAG-3 антителами.In fig. 8 provides an overview of the epitope groups (epitope groups) identified in the competitive binding assay on a panel of 13 hutu-LAG^ antibodies. Antibodies connected by black lines indicate cross-blocking activity in both orientations (ligand and analyte). Antibodies connected by dashed lines indicate unidirectional blocking, where the antibody is blocked when tested as an analyte only. Antibodies are grouped according to patterns of competition with other aHTu-LAG-3 antibodies.
На фиг. 9 представлен кластерный анализ разнообразия эпитопов антител-лигандов. Антитела с точками ветвления при значениях по оси x выше 0 имеют эпитопы, которые отличаются по конкурентному связыванию с LAG-3 с другими антителами в панели.In fig. Figure 9 presents a cluster analysis of the diversity of epitopes of antibody ligands. Antibodies with branch points at x-axis values greater than 0 have epitopes that differ in their competitive binding to LAG-3 with other antibodies in the panel.
Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention
Настоящее изобретение относится к новым aнти-LAG-3 антителам человека, которые можно использовать для усиления иммунной системы у человека, такого как больной злокачественной опухолью. Если не указано иное, как используют в настоящем описании, LAG-3 относится к LAG-3 человека. Полипептидная последовательность LAG-3 человека доступна по номеру доступа UniProt P18627 (LAG3 HUMAN) (SEQ ID NO: 68).The present invention relates to novel human anti-LAG-3 antibodies that can be used to enhance the immune system in a person, such as a cancer patient. Unless otherwise specified as used herein, LAG-3 refers to human LAG-3. The human LAG-3 polypeptide sequence is available under UniProt accession number P18627 (LAG3 HUMAN) (SEQ ID NO: 68).
Термин антитело (Ab) или иммуноглобулин (Ig), как используют в настоящем описании, относится к тетрамеру, содержащему две тяжелые (H) цепи (приблизительно 50-70 кДа) и две легкие (L) цепи (приблизительно 25 кДа), соединенные друг с другом дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного домена тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи (СН). Каждая легкая цепь состоит из вариабельного домена легкой цепи (VL) и константной области легкой цепи (CL). Домены VH и VL можно дополнительно подразделить на гипервариабельные области, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), которые чередуются с областями, которые более консервативны и называются каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR (HCDR в настоящем описании обозначает CDR тяжелой цепи; и L-CDR в настоящем описании обозначает CDR легкой цепи) и четыре FR, которые расположены от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Присвоение номеров аминокислотам в тяжелой или легкой цепи может происходить согласно определениями IMGT® (Lefranc et al., Dev Comp Immunol 27(1):55-77 (2003)); или определениями Rabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 и 1991)); Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); или Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989).The term antibody (Ab) or immunoglobulin (Ig), as used herein, refers to a tetramer containing two heavy (H) chains (approximately 50-70 kDa) and two light (L) chains (approximately 25 kDa) linked to each other. with each other via disulfide bonds. Each heavy chain consists of a heavy chain variable domain (VH) and a heavy chain constant region (CH). Each light chain consists of a light chain variable domain (VL) and a light chain constant region (CL). The VH and VL domains can be further subdivided into hypervariable regions called complementarity determining regions (CDRs), which alternate with regions that are more conserved called framework regions (FRs). Each VH and VL consists of three CDRs (HCDR, as used herein, denotes the heavy chain CDR; and L-CDR, as used herein, denotes the light chain CDR) and four FRs, which are located from the amino terminus to the carboxy terminus in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. The assignment of numbers to amino acids in the heavy or light chain can occur according to IMGT® definitions (Lefranc et al., Dev Comp Immunol 27(1):55-77 (2003)); or the definitions of Rabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 and 1991)); Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); or Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989).
Термин рекомбинантное антитело относится к антителу, которое экспрессирует клетка или клеточная линия, содержащая нуклеотидную последовательность(и), которая кодирует антитело, где указанная нуклеотидная последовательность(и) не связана с клеткой в природе.The term recombinant antibody refers to an antibody that is expressed by a cell or cell line containing nucleotide sequence(s) that encodes an antibody, wherein said nucleotide sequence(s) are not naturally associated with the cell.
- 6 046220- 6 046220
Термин выделенный белок, выделенный полипептид или выделенное антитело относится к белку, полипептиду или антителу, которое по своему происхождению или источнику получения (1) не связано с природными компонентами, которые сопровождают его в его нативном состоянии, (2) свободно от других белков того же биологического вида, (3) экспрессируется клеткой другого биологического вида и/или (4) не является природным. Таким образом, полипептид, который синтезируют химически или синтезируют в клеточной системе, отличной от клетки, с которой он естественным образом связан, будет выделенным из его природных компонентов. Белок также может быть по существу свободным от природных компонентов посредством выделения, используя приемы очистки белков, хорошо известных в данной области.The term isolated protein, isolated polypeptide or isolated antibody refers to a protein, polypeptide or antibody that, by its origin or source of production, (1) is not related to the natural components that accompany it in its native state, (2) is free from other proteins of the same biological species, (3) is expressed by a cell of another biological species and/or (4) is not natural. Thus, a polypeptide that is chemically synthesized or synthesized in a cellular system other than the cell with which it is naturally associated will be isolated from its natural components. The protein may also be substantially free of natural components by isolation using protein purification techniques well known in the art.
Как используют в настоящем описании, термин зародышевая линия относится к нуклеотидным и аминокислотным последовательностям генов антител и сегментам генов, в том виде как они передаются от родителей потомству через половые клетки. Последовательности зародышевой линии отличаются от нуклеотидных последовательностей, кодирующих антитела в зрелых В-клетках, которые изменены посредством событий рекомбинации и гипермутации в ходе созревания В-клеток. Антитело, которое использует конкретную последовательность зародышевой линии, имеет нуклеотидную или аминокислотную последовательность, которую можно выровнять с нуклеотидной последовательностью или аминокислотной последовательностью указанной зародышевой линии более точно, чем с любой нуклеотидной или аминокислотной последовательностью другой зародышевой линии.As used herein, the term germline refers to the nucleotide and amino acid sequences of antibody genes and gene segments as they are transmitted from parents to offspring through germ cells. Germline sequences are distinct from the nucleotide sequences encoding antibodies in mature B cells, which are altered through recombination and hypermutation events during B cell maturation. An antibody that uses a particular germline sequence has a nucleotide or amino acid sequence that can be aligned to a nucleotide sequence or amino acid sequence of the specified germline more accurately than to any nucleotide or amino acid sequence of another germline.
Термин аффинность относится к степени сродства антигена и антитела. Присущее сродство антитела к антигену обычно выражают в виде равновесной константы связывания (аффинности) (KD) для конкретного взаимодействия антитело-антиген. Говорят, что антитело специфически связывается с антигеном, если KD составляет <1 мМ, предпочтительно <100 нМ. Константу (аффинности) связывания KD можно измерять, например, посредством поверхностного плазмонного резонанса (BIAcore™) или BioLayer Interferometry, например, с использованием системы IBIS MX96 SPR bp IBIS Technologies или системы Octet™ из ForteBio.The term affinity refers to the degree of affinity between an antigen and an antibody. The inherent affinity of an antibody for an antigen is usually expressed as the equilibrium binding constant (affinity) (KD) for a particular antibody-antigen interaction. An antibody is said to specifically bind to an antigen if the KD is <1 mM, preferably <100 nM. The KD binding constant (affinity) can be measured, for example, by surface plasmon resonance (BIAcore™) or BioLayer Interferometry, for example using the IBIS MX96 SPR bp IBIS Technologies system or the Octet™ system from ForteBio.
Термин koff относится к константе скорости диссоциации конкретного взаимодействия антитела и антигена.The term ko ff refers to the dissociation rate constant of a particular antibody-antigen interaction.
Константу скорости диссоциации koff можно измерять, например, посредством SPR (поверхностный плазмонный резонанс), например, с использованием системы IBIS MX96.The dissociation rate constant ko ff can be measured, for example, by SPR (surface plasmon resonance), for example using the IBIS MX96 system.
Термин эпитоп, как используют в настоящем описании, относится к части (детерминанте) антигена, которая специфически связывается с антителом или соответствующей молекулой, такой как биспецифическая связывающая молекула. Эпитопные детерминанты в целом состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты или углеводные или сахарные боковые цепи, и в целом имеют конкретные характеристики трехмерной структуры, а также конкретные характеристики заряда. Эпитоп может быть линейным или конформационным. В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком (например, антигеном) и взаимодействующей молекулой (например, антителом) расположении по линии первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе точки взаимодействия находятся в аминокислотных остатках белка, которые разделены друг от друга в первичной аминокислотной последовательности. Если определен желаемый эпитоп на антигене, то можно создавать антитела к этому эпитопу, используя приемы, хорошо известные в данной области. Например, антитело к линейному эпитопу можно создавать, например, посредством иммунизации животного пептидом, имеющим аминокислотные остатки линейного эпитопа. Антитело к конформационному эпитопу можно создавать, например, посредством иммунизации животного с использованием минидомена, содержащего релевантные аминокислотные остатки конформационного эпитопа. Антитело к конкретному эпитопу также можно создавать, например, посредством иммунизации животного целевой молекулой, представляющей интерес, (например, LAG-3) или ее релевантной частью, с последующим скринингом на связывание с эпитопом.The term epitope, as used herein, refers to the portion (determinant) of an antigen that specifically binds to an antibody or corresponding molecule, such as a bispecific binding molecule. Epitope determinants are generally composed of chemically active surface groups of molecules, such as amino acids or carbohydrate or sugar side chains, and generally have specific three-dimensional structure characteristics as well as specific charge characteristics. The epitope can be linear or conformational. In a linear epitope, all points of interaction between the protein (eg, antigen) and the interacting molecule (eg, antibody) are located along the primary amino acid sequence of the protein. In a conformational epitope, the interaction points are located at amino acid residues of the protein that are separated from each other in the primary amino acid sequence. Once a desired epitope on an antigen is identified, antibodies to that epitope can be generated using techniques well known in the art. For example, an antibody to a linear epitope can be generated, for example, by immunizing an animal with a peptide having the amino acid residues of the linear epitope. An antibody to a conformational epitope can be generated, for example, by immunizing an animal using a minidomain containing the relevant amino acid residues of the conformational epitope. An antibody to a specific epitope can also be generated, for example, by immunizing an animal with a target molecule of interest (eg, LAG-3) or a relevant portion thereof, followed by screening for binding to the epitope.
Можно определить, связывается ли антитело с тем же эпитопом или конкурирует за связывание с анти-LAG-3 антителом по изобретению, используя известные в данной области способы, включая, без ограничения, конкурентный анализ, эпитопные группы и сканирование аланином. В одном из вариантов осуществления обеспечивают связывание анти-LAG-3 антитела по изобретению с LAG-3 при насыщающих условиях и затем измеряют способность тестируемого антитела связываться с LAG-3. Если тестируемое антитело способно связываться с LAG-3 одновременно с эталонным антителом против LAG-3, то тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, нежели эталонное анти-LAG-3 антитело. Однако если тестируемое антитело не способно связываться с LAG-3 одновременно, то тестируемое антитело связывается с тем же эпитопом, перекрывающимся эпитопом или эпитопом, который находится в непосредственной близости от эпитопа, связываемого антителом против LAG-3 по изобретению. Этот эксперимент можно осуществлять с использованием, например, ELISA, RIA, BIAcore™, SPR, Bio-Layer Interferometry или проточной цитометрии. Для того чтобы тестировать, проявляет ли анти-LAG-3 антитело перекрестную конкуренцию с другим антителом против LAG-3, можно использовать конкурентный способ, описанный выше, в двух направлениях, то есть определять, обеспечивает ли известное антителоIt is possible to determine whether an antibody binds to the same epitope or competes for binding with an anti-LAG-3 antibody of the invention using methods known in the art, including, but not limited to, competition assays, epitope groups, and alanine scanning. In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody of the invention is bound to LAG-3 under saturating conditions and then the ability of the test antibody to bind to LAG-3 is measured. If the test antibody is capable of binding to LAG-3 at the same time as the reference anti-LAG-3 antibody, then the test antibody binds to a different epitope than the reference anti-LAG-3 antibody. However, if the test antibody is unable to bind to LAG-3 simultaneously, then the test antibody binds to the same epitope, an overlapping epitope, or an epitope that is in close proximity to the epitope bound by the anti-LAG-3 antibody of the invention. This experiment can be performed using, for example, ELISA, RIA, BIAcore™, SPR, Bio-Layer Interferometry or flow cytometry. In order to test whether an anti-LAG-3 antibody cross-competes with another anti-LAG-3 antibody, the competition method described above can be used in two ways, i.e., to determine whether a known antibody provides
- 7 046220 блокирование тестируемого антитела, и наоборот. Такие эксперименты перекрестной конкуренции можно осуществлять, например, с использованием прибора IBIS MX96 SPR или системы Octet™.- 7 046220 blocking the test antibody, and vice versa. Such cross-competition experiments can be carried out, for example, using the IBIS MX96 SPR instrument or the Octet™ system.
Антитело, которое связывается с тем же эпитопом или конкурирует за связывание с антителом по изобретению, предпочтительно обладает блокирующей MHCII активностью, например, как определяют конкурентным анализом на основе проточной цитометрии, описанным в примере 6. Антитело, которое связывается с тем же эпитопом или конкурирует за связывание с антителом по изобретению, может снижать связывание по меньшей мере, например, на 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или 80% или предпочтительно по меньшей мере на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%.An antibody that binds to the same epitope or competes for binding to an antibody of the invention preferably has MHCII blocking activity, for example, as determined by the flow cytometry-based competition assay described in Example 6. An antibody that binds to or competes for the same epitope binding to an antibody of the invention may reduce binding by at least, for example, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 or 80%, or preferably by at least 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 or 100%.
Термин химерное антитело относится в широком смысле слова к антителу, которое содержит одну или несколько областей из одного антитела и одну или несколько областей из одного или нескольких других антител, обычно к антителу, которое частично происходит от человека и частично происходит от не относящегося к человеку вида, то есть получено частично от не относящегося к человеку животного, например, мыши, крысы или другого грызуна или птицы, такой как курица. Химерные антитела предпочтительнее не принадлежащих человеку антител для снижения риска ответа на антитело у человека, например, ответа на антитело мыши у человека в случае мышиного антитела. Примером типичного химерного антитела является то, в котором последовательности вариабельных доменов относятся к мыши, тогда как последовательности константных областей относятся к человеку. В случае химерного антитела, не относящиеся к человеку части можно подвергать дополнительному изменению для того, чтобы гуманизировать антитело. Химерные антитела, описанные в описании, могут иметь, например, последовательности вариабельных доменов курицы и последовательности константных областей человека.The term chimeric antibody refers broadly to an antibody that contains one or more regions from one antibody and one or more regions from one or more other antibodies, typically an antibody that is partly derived from a human and partly derived from a non-human species , that is, derived in part from a non-human animal, such as a mouse, rat or other rodent or bird such as a chicken. Chimeric antibodies are preferred over non-human antibodies to reduce the risk of a response to an antibody in a human, such as a response to a mouse antibody in a human in the case of a mouse antibody. An example of a typical chimeric antibody is one in which the variable domain sequences are mouse, while the constant region sequences are human. In the case of a chimeric antibody, non-human portions may be further modified to humanize the antibody. The chimeric antibodies described herein may have, for example, chicken variable domain sequences and human constant region sequences.
Термин гуманизировать относится к тому факту, что когда антитело имеет происхождение полностью или частично не от человека (например, антитело мыши или курицы, полученное путем иммунизации мышей или кур, соответственно, с использованием антигена, представляющего интерес, или химерное антитело на основе такого антитела мыши или курицы), возможно осуществлять замену определенных аминокислот, в частности, в каркасных областях и константных областях тяжелых и легких цепей, во избежание или для минимизации иммунного ответа у человека. Несмотря на то что для конкретного антитела невозможно точно предсказывать иммуногенность и, тем самым, ответ на антитело у человека, не принадлежащие человеку антитела склонны быть более иммуногенными у человека, чем антитела человека. Показано, что химерные антитела, в которых чужеродные константные области (например, грызуна или птицы) заменены на последовательности, происходящие от человека, в менее иммуногенны, чем антитела полностью чужеродного происхождения, и среди терапевтических антител тенденция направлена в сторону гуманизированных антител или полностью антител человека. Химерные антитела или другие антитела не относящегося к человеку происхождения, таким образом, можно гуманизировать для того, чтобы снижать риск ответа на антитело у человека.The term humanize refers to the fact that when an antibody is of wholly or partly non-human origin (e.g., a mouse or chicken antibody produced by immunizing mice or chickens, respectively, with an antigen of interest, or a chimeric antibody based on such a mouse antibody or chicken), it is possible to make substitutions of certain amino acids, in particular in the framework regions and constant regions of the heavy and light chains, in order to avoid or minimize the immune response in humans. Although it is not possible to accurately predict immunogenicity and thus antibody response in a person for a particular antibody, non-human antibodies tend to be more immunogenic in humans than human antibodies. Chimeric antibodies, in which foreign constant regions (e.g., rodent or avian) are replaced by sequences of human origin, have been shown to be less immunogenic than antibodies of completely foreign origin, and among therapeutic antibodies the trend is towards humanized antibodies or fully human antibodies . Chimeric antibodies or other antibodies of non-human origin can thus be humanized in order to reduce the risk of antibody response in humans.
Для химерных антител гуманизация обычно включает модификацию каркасных областей последовательностей вариабельных доменов. Аминокислотные остатки, которые являются частью определяющих комплементарность областей (CDR), наиболее часто не подвергают изменениям в связи с гуманизацией, хотя в определенных случаях может быть желательно изменять индивидуальные аминокислотные остатки CDR, например, чтобы удалять участок гликозилирования, участок дезамидирования, участок изомеризации аспартата или нежелательный остаток цистеина или метионина. N-связанное гликозилирование происходит посредством прикрепления олигосахаридной цепи к остатку аспарагина в трипептидной последовательности Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где X может представлять собой любую аминокислоту, за исключением Pro. Удаления участка N-гликозилирования можно добиваться посредством мутации остатка Asn или Ser/Thr в другой остаток, предпочтительно посредством консервативной замены. Дезамидирование остатков аспарагина и глутамина может происходить в зависимости от таких факторов, как рН и экспозиция на поверхности. Остатки аспарагина особенно восприимчивы к дезамидированию, в первую очередь когда присутствуют в последовательности Asn-Gly и в меньшей степени в других дипептидных последовательностях, таких как Asn-Ala. Когда такой участок дезамидирования, в частности AsnGly, присутствует в последовательности CDR, то может быть желательно удалять этот участок, обычно посредством консервативной замены для того, чтобы удалять один из вовлеченных остатков.For chimeric antibodies, humanization typically involves modification of the framework regions of the variable domain sequences. Amino acid residues that are part of complementarity determining regions (CDRs) are most often not altered due to humanization, although in certain cases it may be desirable to change individual amino acid residues of the CDRs, for example, to remove a glycosylation site, a deamidation site, an aspartate isomerization site, or an unwanted cysteine or methionine residue. N-linked glycosylation occurs through the attachment of an oligosaccharide chain to an asparagine residue in the tripeptide sequence Asn-X-Ser or Asn-X-Thr, where X can be any amino acid except Pro. Removal of the N-glycosylation site can be achieved by mutation of the Asn or Ser/Thr residue to another residue, preferably through a conservative substitution. Deamidation of asparagine and glutamine residues can occur depending on factors such as pH and surface exposure. Asparagine residues are particularly susceptible to deamidation, primarily when present in the Asn-Gly sequence and to a lesser extent in other dipeptide sequences such as Asn-Ala. When such a deamidation site, in particular AsnGly, is present in the CDR sequence, it may be desirable to remove this region, usually by means of a conservative substitution in order to remove one of the residues involved.
Многие способы гуманизации последовательности антитела известны в данной области; см., например, обзор Almagro & Fransson, Front Biosci. 13:1619-1633 (2008). Один широко используемый способ представляет собой пересадку CDR, которая, например, для химерного антитела мышиного происхождения, включает идентификацию аналогов в генах зародышевой линии человека для генов вариабельных доменов мыши и пересадку последовательностей CDR мыши в этот каркас. Специфичность взаимодействия антитела с целевым антигеном в первую очередь заключена в аминокислотных остатках, расположенных в шести CDR в тяжелой и легкой цепи. Следовательно, аминокислотные последовательности в CDR значительно более вариабельны между индивидуальными антителами, чем последовательности вне CDR. Поскольку последовательности CDR отвечают за большинство взаимодействий антитело-антиген, возможно экспрессировать рекомбинантные антитела, которые имитируют свойства конкретного встречаемого в природе антитела или, в более общем смысле, любого специфического антитела с данной аминокислотной последовательностью, например, посредством конструирования экспрессирующих вектоMany methods for humanizing an antibody sequence are known in the art; see, for example, the review by Almagro & Fransson, Front Biosci. 13:1619–1633 (2008). One commonly used method is CDR grafting, which, for example, for a chimeric antibody of mouse origin, involves identifying human germline gene counterparts for mouse variable domain genes and grafting mouse CDR sequences into this scaffold. The specificity of the interaction of the antibody with the target antigen lies primarily in the amino acid residues located in the six CDRs in the heavy and light chain. Consequently, amino acid sequences within the CDR are significantly more variable between individual antibodies than sequences outside the CDR. Because CDR sequences are responsible for most antibody-antigen interactions, it is possible to express recombinant antibodies that mimic the properties of a particular naturally occurring antibody or, more generally, any specific antibody with a given amino acid sequence, for example, by constructing expression vectos
- 8 046220 ров, которые экспрессируют последовательности CDR из специфического антитела, пересаженные в каркасные последовательности от другого антитела. Как результат, можно гуманизировать не принадлежащее человеку антитело и все еще по существу сохранять специфичность связывания и аффинность исходного антитела. Пересадка CDR может происходить на основе определений CDR по Rabat, хотя в более новой публикации (Magdelaine-Beuzelin et al., Crit Rev.Oncol Hematol. 64:210-225 (2007)) сделано предположение о том, что определение IMGT® (международная информационная система ImMunoGeneTics®, www.imgt.org) может усовершенствовать результат гуманизации (см. Lefranc et al., Dev. Comp Immunol. 27:55-77 (2003)).- 8 046220 moats that express CDR sequences from a specific antibody transplanted into framework sequences from another antibody. As a result, it is possible to humanize a non-human antibody and still substantially retain the binding specificity and affinity of the original antibody. CDR transplantation may occur based on the Rabat CDR definitions, although a more recent publication (Magdelaine-Beuzelin et al., Crit Rev. Oncol Hematol. 64:210-225 (2007)) suggests that the IMGT® definition (international the ImMunoGeneTics® information system, www.imgt.org) can improve the humanization result (see Lefranc et al., Dev. Comp Immunol. 27:55-77 (2003)).
В некоторых случаях пересадка CDR может снижать специфичность связывания и аффинность и, таким образом, биологическую активность антитела с пересадкой CDR по сравнению с родительским антителом, из которого получают CDR. Обратные мутации (иногда обозначаемые как репарация каркаса) можно вводить в выбранные положения антитела с пересадкой CDR, обычно в каркасные области, чтобы восстанавливать специфичность связывания и аффинность родительского антитела. Положения для возможных обратных мутаций можно идентифицировать с использованием информации, доступной в литературе и в базах данных об антителах. Аминокислотными остатками, которые являются кандидатами для обратных мутаций, обычно являются те, которые расположены на поверхности молекулы антитела, тогда как погруженные остатки или те, которые имеют малую степень экспозиции на поверхности, обычно не подвергают изменениям. Альтернативным приемом гуманизации для пересадки CDR и обратной мутации является изменение поверхности, при котором сохраняют не экспонированные на поверхности остатки не относящегося к человеку происхождения, тогда как поверхностные остатки изменяют на остатки человека.In some cases, CDR grafting may reduce the binding specificity and affinity, and thus the biological activity, of the CDR grafting antibody compared to the parent antibody from which the CDR is derived. Back mutations (sometimes referred to as scaffold repair) can be introduced into selected positions of an antibody with CDR grafts, typically scaffold regions, to restore the binding specificity and affinity of the parent antibody. Positions for possible back mutations can be identified using information available in the literature and antibody databases. Amino acid residues that are candidates for back mutation are usually those located on the surface of the antibody molecule, while buried residues or those that have little surface exposure are usually not modified. An alternative humanization technique for CDR grafting and reverse mutation is surface modification, which retains the non-surface-exposed non-human residues while changing the surface residues to human residues.
В определенных случаях также может быть желательно изменять один или несколько аминокислотных остатков CDR для того, чтобы усовершенствовать аффинность связывания с целевым эпитопом. Это известно как созревание аффинности и необязательно может быть выполнено в связи с гуманизацией, например, в ситуациях, когда гуманизация антитела ведет к снижению специфичности связывания или аффинности и невозможно в достаточной мере усовершенствовать специфичность или аффинность связывания с помощью только обратных мутаций. Различные способы созревания аффинности известны в данной области, например, способ сканирующего насыщающего мутагенеза in vitro, описанный в Burks et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94:412-417 (1997), и способ постепенного созревания аффинности in vitro из Wu et al., Proc Natl Acad Sci USA 95:6037-6042 (1998).In certain cases, it may also be desirable to change one or more amino acid residues of the CDR in order to improve binding affinity to the target epitope. This is known as affinity maturation and may not necessarily be performed in connection with humanization, for example in situations where humanization of an antibody leads to a decrease in binding specificity or affinity and the binding specificity or affinity cannot be sufficiently improved using back mutations alone. Various affinity maturation methods are known in the art, for example, the in vitro scanning saturation mutagenesis method described in Burks et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94:412-417 (1997), and the in vitro gradual affinity maturation method of Wu et al., Proc Natl Acad Sci USA 95:6037–6042 (1998).
Термин антиген-связывающая часть антитела (или просто часть антитела), как используют в настоящем описании, относится к одной или нескольким частям или фрагментам антитела, которые сохраняют способность к специфическому связыванию с антигеном (например, LAG-3 человека или его частью). Показано, что определенные фрагменты полноразмерного антитела могут выполнять антигенсвязывающую функцию антитела. Примеры связывающих фрагментов, охваченных термином антигенсвязывающая часть, включают (i) фрагмент Fab: одновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; (ii) фрагмент F(ab')2: двухвалентный фрагмент, содержащий два фрагмента Fab, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (iii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и CH1; (iv) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH из одного плеча антитела, (v) фрагмент dAb, который состоит из домена VH; и (vi) выделенную определяющую комплементарность область (CDR), способную специфически связываться с антигеном. Кроме того, несмотря на то, что отдельные гены кодируют два домена фрагмента Fv, VL и VH, их можно объединять, используя рекомбинантные способы, посредством синтетического линкера, который позволяет создавать их в виде единой белковой цепи, в которой домены VL и VH образуют пару для того, чтобы формировать одновалентные молекулы (известные как одноцепочечный Fv (scFv)). Также в изобретение включены антиген-связывающие молекулы, содержащие VH и/или VL. В случае VH, молекулы также могут содержать одну или несколько из области СН1, шарнира, СН2 или СН3. Предусмотрено, что такие одноцепочечные антитела также включены в термин антиген-связывающая часть антитела. Другие формы одноцепочечных антител, такие как диатела, также включены. Диатела представляют собой двухвалентные биспецифические антитела, в которых домены VH и VL экспрессированы в одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, который слишком короток, чтобы сделать возможным образование пар между двумя доменами в одной и той же цепи, тем самым принуждая домены образовывать пару с комплементарными доменами другой цепи и создавать два антиген-связывающих участка.The term antigen-binding antibody moiety (or simply antibody moiety) as used herein refers to one or more parts or fragments of an antibody that retain the ability to specifically bind an antigen (eg, human LAG-3 or a portion thereof). It has been shown that certain fragments of a full-length antibody can perform the antigen-binding function of the antibody. Examples of binding fragments covered by the term antigen-binding moiety include (i) Fab fragment: a monovalent fragment consisting of VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) F(ab')2 fragment: a divalent fragment containing two Fab fragments linked by a disulfide bridge in the hinge region; (iii) Fd fragment consisting of VH and CH1 domains; (iv) an Fv fragment consisting of the VL and VH domains from one arm of the antibody, (v) a dAb fragment which consists of a VH domain; and (vi) a dedicated complementarity determining region (CDR) capable of specifically binding to the antigen. In addition, although individual genes encode the two domains of the Fv fragment, VL and VH, they can be combined using recombinant methods through a synthetic linker that allows them to be created as a single protein chain in which the VL and VH domains form a pair in order to form monovalent molecules (known as single-chain Fv (scFv)). Also included in the invention are antigen-binding molecules containing VH and/or VL. In the case of VH, the molecules may also contain one or more of the CH1, hinge, CH2 or CH3 region. Such single chain antibodies are also intended to be included within the term antigen-binding moiety of an antibody. Other forms of single chain antibodies, such as diabodies, are also included. Diabodies are bivalent bispecific antibodies in which the VH and VL domains are expressed on the same polypeptide chain, but using a linker that is too short to allow pairing between two domains on the same chain, thereby forcing the domains to pair with complementary domains of another chain and create two antigen-binding sites.
Часта антител, такие как фрагменты Fab и F(ab')2, можно получать из целых антител, используя общепринятые способы, такие как расщепление целых антител папаином или пепсином. Кроме того, антитела, части антител и молекулы иммуноадгезии можно получать с использованием стандартных способов рекомбинантной ДНК, например, как раскрыто в настоящем описании.Antibody portions, such as Fab and F(ab')2 fragments, can be prepared from whole antibodies using conventional methods such as papain or pepsin digestion of whole antibodies. In addition, antibodies, antibody portions, and immunoadhesion molecules can be produced using standard recombinant DNA techniques, for example, as disclosed herein.
Класс (изотип) и подкласс анти-LAG-3 антител можно определять любым известным в данной области способом. В целом, класс и подкласс антитела можно определять с использованием антител, которые обладают специфичностью к конкретному классу и подклассу антител. Такие антитела доступны коммерчески. Класс и подкласс можно определять с помощью ELISA, вестерн-блоттинга, а также другиThe class (isotype) and subclass of anti-LAG-3 antibodies can be determined by any method known in the art. In general, the class and subclass of an antibody can be determined using antibodies that have specificity for a particular class and subclass of antibodies. Such antibodies are available commercially. Class and subclass can be determined using ELISA, Western blotting, and other
- 9 046220 ми приемами. Альтернативно, класс и подкласс можно определять посредством полного или частичного секвенирования константных областей тяжелых и/или легких цепей антител, сравнения их аминокислотных последовательностей с известными аминокислотными последовательностями различных классов и подклассов иммуноглобулинов и определения класса и подкласса антител.- 9 046220 by methods. Alternatively, the class and subclass can be determined by completely or partially sequencing the constant regions of the heavy and/or light chains of the antibodies, comparing their amino acid sequences with the known amino acid sequences of various classes and subclasses of immunoglobulins, and determining the class and subclass of the antibodies.
Если не указано иное, все номера аминокислотных остатков антител, упоминаемые в этом раскрытии, приведены в соответствии со схемой нумерации IMGT®.Unless otherwise indicated, all amino acid residue numbers of antibodies mentioned in this disclosure are given in accordance with the IMGT® numbering scheme.
Ahtu-LAG-3 антитела.Ahtu-LAG-3 antibodies.
Настоящее изобретение относится к антителам, нацеленным на LAG-3, и их антиген-связывающим частям. В конкретном варианте осуществления антитела, раскрытые в настоящем описании, представляют собой антитела человека, созданные у трансгенных крыс, которые способны создавать антитела с идиотипами человека. В другом варианте осуществления антитела представляют собой полученные у курицы химерные антитела, содержащие последовательности CDR курицы и каркасные области человека, где каркасные области подвергали гуманизации.The present invention relates to antibodies targeting LAG-3 and antigen-binding portions thereof. In a specific embodiment, the antibodies disclosed herein are human antibodies generated in transgenic rats that are capable of generating antibodies with human idiotypes. In another embodiment, the antibodies are chicken-derived chimeric antibodies comprising chicken CDR sequences and human framework regions wherein the framework regions have been humanized.
Одно преимущество новых анти-LAG-3 антител по изобретению состоит в том, что они способны усиливать активность Т-клеток, как измеряют по увеличенному продуцированию IL-2; см., например, пример 7. Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, полагают, что анти-LAG-3 антитела по изобретению способны блокировать взаимодействие LAG-3 с его предполагаемыми лигандами, такими как MHCII и LSECtin. Антитела могут выполнять это непосредственно через блокирование области связывания лиганда, как продемонстрировано, например, в примере 6, или через индуцирование интернализации LAG-3, которая предусмотрена в качестве возможного механизма действия, лежащего в основе результатов, представленных в примере 9. Другое возможное преимущество анти-LAG-3 антител по изобретению состоит в низком уровне вторичных эффекторных функций у антител, имеющих мутации LALA (L234A/L235A), которые препятствуют значимому связыванию антитела с FcgR человека (рецепторы Fcy), и, таким образом, истощении эффекторных Т-клеток.One advantage of the new anti-LAG-3 antibodies of the invention is that they are capable of enhancing T cell activity, as measured by increased production of IL-2; see, for example, Example 7. Without wishing to be limited by any particular theory, it is believed that the anti-LAG-3 antibodies of the invention are capable of blocking the interaction of LAG-3 with its putative ligands, such as MHCII and LSECtin. Antibodies can do this directly through blocking the ligand binding region, as demonstrated, for example, in Example 6, or through inducing internalization of LAG-3, which is proposed as a possible mechanism of action underlying the results presented in Example 9. Another possible advantage of anti The -LAG-3 antibodies of the invention consist of a low level of secondary effector functions in antibodies having LALA mutations (L234A/L235A), which prevent the antibody from meaningfully binding to human FcgRs (Fcy receptors), and thus depleting effector T cells.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет CDR3 тяжелой цепи (H-CDR3), которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с любой из SEQ ID NO: 37, 43, 46, 50, 55, 58 и 64, например, по меньшей мере на 92% идентична, например, по меньшей мере на 95, 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична любой из SEQ ID NO: 37, 43, 46, 50, 55, 58 и 64.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a heavy chain CDR3 (H-CDR3) that is at least 90% identical in sequence to any of SEQ ID NOs: 37, 43, 46, 50, 55, 58, and 64, for example, is at least 92% identical, for example, at least 95, 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to any of SEQ ID NO: 37, 43, 46, 50, 55, 58 and 64.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет вариабельный домен тяжелой цепи (VH), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с любой из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27, например, по меньшей мере на 92% идентичен, например, по меньшей мере на 95, 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен любой из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a heavy chain variable domain (VH) that is at least 90% identical in sequence to any of SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, or 27 , e.g., at least 92% identical, e.g., at least 95%, 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical, to any of SEQ ID NO: 3 , 7, 11, 15, 19, 23 or 27.
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитело имеет вариабельный домен тяжелой цепи (VH), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности любой из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27, например, по меньшей мере на 92% идентичен, например, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен любой из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27; и константную область тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с SEQ ID NO: 30, например, по меньшей мере на 92% идентична, например, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична с SEQ ID NO: 30.In another embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a heavy chain variable domain (VH) that is at least 90% identical in sequence to any of SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 or 27, for example , is at least 92% identical, for example, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to any of the SEQ IDs NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 or 27; and a heavy chain constant region that is at least 90% identical in sequence to SEQ ID NO: 30, e.g., at least 92% identical, e.g., at least 95%, at least 96%, to at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to SEQ ID NO: 30.
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитело имеет тяжелую цепь (НС), которая содержит аминокислотную последовательность VH из любой из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23 или 27 и аминокислотную последовательность константной области тяжелой цепи из SEQ ID NO: 30.In another embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a heavy chain (HC) that comprises a VH amino acid sequence from any of SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, or 27 and a heavy chain constant region amino acid sequence from SEQ ID NO: 30.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело имеет CDR3 легкой цепи (L-CDR3), которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности любой из SEQ ID NO: 40, 52, 61 и 67, например, по меньшей мере на 92% идентична, например, по меньшей мере на 95, 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична любой из SEQ ID NO: 40, 52, 61 и 67.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain CDR3 (L-CDR3) that is at least 90% identical in sequence to any of SEQ ID NOs: 40, 52, 61 and 67, for example, at least 92% identical, e.g., at least 95%, 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to any of SEQ ID NOs: 40, 52, 61 and 67 .
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитело имеет вариабельный домен легкой цепи (VL), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью VL из любой из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 или 28, например, по меньшей мере на 92% идентичен, например, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен любой из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 или 28.In another embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain variable domain (VL) that is at least 90% identical in sequence to the amino acid sequence of VL from any of SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 or 28, for example, is at least 92% identical, for example, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to any of SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24 or 28.
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитело имеет вариабельный домен легкой цепи (VL), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью VL из любой из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20 или 24, например, по меньшей мере на 92% идентичен, например, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен любой из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20 или 24; иIn another embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain variable domain (VL) that is at least 90% identical in sequence to the amino acid sequence of VL from any of SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, or 24, for example, is at least 92% identical, for example, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to any from SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20 or 24; And
- 10 046220 аминокислотную последовательность константной области легкой цепи, которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с SEQ ID NO: 34, например, по меньшей мере на 92% идентична, например, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична с SEQ ID NO: 34.- 10 046220 amino acid sequence of a light chain constant region that is at least 90% identical in sequence to SEQ ID NO: 34, for example, at least 92% identical, for example, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to SEQ ID NO: 34.
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитело имеет вариабельный домен легкой цепи (VL), который по меньшей мере на 90% идентичен по последовательности с аминокислотной последовательностью VL из SEQ ID NO: 28, например, по меньшей мере на 92% идентичен, например, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 9 6%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичен с SEQ ID NO: 28; и аминокислотную последовательность константной области легкой цепи, которая по меньшей мере на 90% идентична по последовательности с SEQ ID NO: 32, например, по меньшей мере на 92% идентична, например, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична с SEQ ID NO: 32.In another embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain variable domain (VL) that is at least 90% identical in sequence to the VL amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, for example, at least 92% identical, for example, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to SEQ ID NO: 28; and a light chain constant region amino acid sequence that is at least 90% identical in sequence to SEQ ID NO: 32, e.g., at least 92% identical, e.g., at least 95%, at least 96% is at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to SEQ ID NO: 32.
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитело имеет легкую цепь, которая содержит любую SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20 или 24, и SEQ ID NO: 34.In another embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain that contains any of SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, or 24, and SEQ ID NO: 34.
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитело имеет легкую цепь, которая содержит SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 32.In another embodiment, the anti-LAG-3 antibody has a light chain that contains SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 32.
В определенных вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело содержит любую из описанных выше тяжелых цепей и любую из описанных выше легких цепей.In certain embodiments, the anti-LAG-3 antibody comprises any of the heavy chains described above and any of the light chains described above.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит аминокислотные последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3 из:In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises the amino acid sequences H-CDR1-3 and L-CDR1-3 of:
a) SEQ ID nO: 35, 36, 37, 38, 39 и 40, соответственно;a) SEQ ID nO: 35, 36, 37, 38, 39 and 40, respectively;
b) SEQ ID NO: 41, 42, 43, 44, 45 и 40, соответственно;b) SEQ ID NO: 41, 42, 43, 44, 45 and 40, respectively;
c) SEQ ID NO: 35, 42, 46, 44, 47 и 40, соответственно;c) SEQ ID NO: 35, 42, 46, 44, 47 and 40, respectively;
d) SEQ ID NO: 48, 49, 50, 51, 47 и 52, соответственно;d) SEQ ID NO: 48, 49, 50, 51, 47 and 52, respectively;
e) SEQ ID NO: 53, 54, 55, 44, 45 и 40, соответственно;e) SEQ ID NO: 53, 54, 55, 44, 45 and 40, respectively;
f) SEQ ID NO: 56, 57, 58, 59, 60 и 61, соответственно; илиf) SEQ ID NO: 56, 57, 58, 59, 60 and 61, respectively; or
g) SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66 и 67, соответственно.g) SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66 and 67, respectively.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит H-CDR3 и an L-CDR3, которые на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны аминокислотным последовательностям:In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises H-CDR3 and an L-CDR3 that are 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 or 99% identical to amino acid sequences:
a) SEQ ID NO: 37 и 40, соответственно;a) SEQ ID NO: 37 and 40, respectively;
b) SEQ ID NO: 43 и 40, соответственно;b) SEQ ID NO: 43 and 40, respectively;
c) SEQ ID NO: 46 и 40, соответственно;c) SEQ ID NO: 46 and 40, respectively;
d) SEQ ID NO: 50 и 52, соответственно;d) SEQ ID NO: 50 and 52, respectively;
e) SEQ ID NO: 55 и 40, соответственно;e) SEQ ID NO: 55 and 40, respectively;
f) SEQ ID NO: 58 и 61, соответственно; илиf) SEQ ID NO: 58 and 61, respectively; or
g) SEQ ID NO: 64 и 67, соответственно.g) SEQ ID NO: 64 and 67, respectively.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит VH и VL, которые на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны аминокислотным последовательностям:In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises VH and VL that are 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, or 99% amino acid identical sequences:
a) SEQ ID NO: 3 и 4, соответственно;a) SEQ ID NO: 3 and 4, respectively;
b) SEQ ID NO: 7 и 8, соответственно;b) SEQ ID NO: 7 and 8, respectively;
c) SEQ ID NO: 11 и 12, соответственно;c) SEQ ID NO: 11 and 12, respectively;
d) SEQ ID NO: 15 и 16, соответственно;d) SEQ ID NO: 15 and 16, respectively;
e) SEQ ID NO: 19 и 20, соответственно;e) SEQ ID NO: 19 and 20, respectively;
f) SEQ ID NO: 23 и 24, соответственно; илиf) SEQ ID NO: 23 and 24, respectively; or
g) SEQ ID NO: 27 и 28, соответственно.g) SEQ ID NO: 27 and 28, respectively.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит VH и VL, которые имеют аминокислотные последовательности:In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises VH and VL that have the amino acid sequences:
a) SEQ ID NO: 3 и 4, соответственно;a) SEQ ID NO: 3 and 4, respectively;
b) SEQ ID NO: 7 и 8, соответственно;b) SEQ ID NO: 7 and 8, respectively;
c) SEQ ID NO: 11 и 12, соответственно;c) SEQ ID NO: 11 and 12, respectively;
d) SEQ ID NO: 15 и 16, соответственно;d) SEQ ID NO: 15 and 16, respectively;
e) SEQ ID NO: 19 и 20, соответственно;e) SEQ ID NO: 19 and 20, respectively;
f) SEQ ID NO: 23 и 24, соответственно; илиf) SEQ ID NO: 23 and 24, respectively; or
g) SEQ ID NO: 27 и 28, соответственно.g) SEQ ID NO: 27 and 28, respectively.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело содержит:In some embodiments, the anti-LAG-3 antibody comprises:
a) НС с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 3 и 30 и LC с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 4 и 34;a) HC with amino acid sequences SEQ ID NO: 3 and 30 and LC with amino acid sequence SEQ ID NO: 4 and 34;
b) НС с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 7 и 30 и LC с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 8 и 34;b) HC with amino acid sequences SEQ ID NO: 7 and 30 and LC with amino acid sequence SEQ ID NO: 8 and 34;
- 11 046220- 11 046220
c) НС с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 11 и 30 и LC с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 12 и 34;c) HC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 11 and 30 and LC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 12 and 34;
d) НС с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 15 и 30 и LC с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 16 и 34;d) HC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 15 and 30 and LC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 16 and 34;
e) НС с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 19 и 30 и LC с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 20 и 34;e) HC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 19 and 30 and LC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 20 and 34;
f) НС с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 23 и 30 и LC с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 24 и 34; илиf) HC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 23 and 30 and LC with amino acid sequences SEQ ID NOs: 24 and 34; or
g) НС с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 27 и 30 и LC с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 28 и 32.g) HC with amino acid sequences SEQ ID NO: 27 and 30 and LC with amino acid sequence SEQ ID NO: 28 and 32.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит аминокислотные последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3 антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In some embodiments, the anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises the amino acid sequences H-CDR1-3 and L-CDR1-3 of antibody 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит VH и VL, которые по меньшей мере на 90% идентичны по аминокислотной последовательности VH и VL, соответственно, антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises VH and VL that are at least 90% identical in amino acid sequence to VH and VL, respectively, antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 or 15011.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть по изобретению содержит VH и VL, которые представляют собой VH и VL, соответственно, антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011.In some embodiments, the anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety of the invention comprises VH and VL, which are VH and VL, respectively, antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело по изобретению представляет собой антитело 1564 6, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 или 15011 или антитело с теми же аминокислотными последовательностями, что и у указанного антитела.In some embodiments, the anti-LAG-3 antibody of the invention is antibody 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572, or 15011, or an antibody with the same amino acid sequences as the antibody.
Изобретение также относится к анти-LAG-3 антителу или его антиген-связывающей части, которое связывается с эпитопом LAG-3 человека, имеющим:The invention also relates to an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof that binds to a human LAG-3 epitope having:
a) 1, 2, 3, 4, 5, 6 или все 7 аминокислотных остатков, выбранных из Н85, Р86, А87, Р89, S91, W92 и G93 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15532);a) 1, 2, 3, 4, 5, 6 or all 7 amino acid residues selected from H85, P86, A87, P89, S91, W92 and G93 with SEQ ID NO: 68 (for example, antibody 15532);
b) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 или все 32 аминокислотных остатка, выбранных из А40, Q41, Р43, Р46, Р49, D52, Т62, Q64, Н65, Q66, Р67, D68, G93, Р94, Р96, R98, Y99, Т100, V101, Р106, G107, R119, Е124, R129, G130, D131, S133, R137, Р138, D143, R148 и R163 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15431);b) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 or all 32 amino acid residues selected from A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96 , R98, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 and R163 with SEQ ID NO: 68 (for example, antibody 15431);
c) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 или все 29 аминокислотных остатков, выбранных из А4 0, Q41, Р4 3, Р46, Р49, D52, Т62, Q64, Н65, Q66, Р67, D68, Р96, Y99, Т100, V101, Р106, G107, R119, Е124, R129, G130, D131, S133, R137, Р138, D143, R148 и R163 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15572); илиc) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 or all 29 amino acid residues selected from A4 0, Q41, P4 3, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106 , G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 and R163 with SEQ ID NO: 68 (for example, antibody 15572); or
d) 1, 2, 3 или все 4 аминокислотных остатка, выбранных из G107, L109, R110 и S111 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15011).d) 1, 2, 3 or all 4 amino acid residues selected from G107, L109, R110 and S111 with SEQ ID NO: 68 (for example, antibody 15011).
Изобретение также относится к моноклональному антителу или его антиген-связывающей части, которые связываются с эпитопом LAG-3 человека, имеющим остатки 98-105. В некоторых вариантах осуществления антитело или антиген-связывающая часть связывается с эпитопом LAG-3 человека, имеющим:The invention also relates to a monoclonal antibody or antigen-binding portion thereof that binds to the human LAG-3 epitope having residues 98-105. In some embodiments, the antibody or antigen-binding moiety binds to a human LAG-3 epitope having:
a) 2 или 3 аминокислотных сегмента, выбранных из остатков 78-105 и 123-131 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15532);a) 2 or 3 amino acid segments selected from residues 78-105 and 123-131 of SEQ ID NO: 68 (for example, antibody 15532);
b) 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных сегментов, выбранных из остатков 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 и 148-152 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15431);b) 1, 2, 3, 4 or 5 amino acid segments selected from residues 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 and 148-152 of SEQ ID NO: 68 (eg, antibody 15431);
c) 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных сегментов, выбранных из остатков 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 и 148-161 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15572); илиc) 1, 2, 3, 4 or 5 amino acid segments selected from residues 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 and 148-161 of SEQ ID NO: 68 (eg, antibody 15572); or
d) аминокислотные остатки 98-105 с SEQ ID NO: 68 (например, антитело 15011).d) amino acid residues 98-105 of SEQ ID NO: 68 (for example, antibody 15011).
Изобретение также относится к моноклональному антителу или его антиген-связывающей части, которые связываются с эпитопом LAG-3 человека, имеющим остатки 23-30 и 40-66 с SEQ ID NO: 68. В некоторых вариантах осуществления эпитоп дополнительно имеет остатки 88-105, 123-137 и/или 148-152 с SEQ ID NO: 68. В некоторых вариантах осуществления эпитоп дополнительно имеет остатки 98-105, 118-137 и 148-161 с SEQ ID NO: 68.The invention also provides a monoclonal antibody or antigen-binding portion thereof that binds to the human LAG-3 epitope having residues 23-30 and 40-66 of SEQ ID NO: 68. In some embodiments, the epitope additionally has residues 88-105, 123-137 and/or 148-152 of SEQ ID NO: 68. In some embodiments, the epitope further has residues 98-105, 118-137, and 148-161 of SEQ ID NO: 68.
Изобретение также относится к анти-LAG-3 антителу или его антиген-связывающей части, которое конкурируют или перекрестно конкурирует за связывание или связывается с тем же эпитопом, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из 15532, 15646, 15723, 15595, 15431, 15572 и 15011.The invention also provides an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof that competes or cross-competes for binding or binds to the same epitope as an antibody selected from the group consisting of 15532, 15646, 15723, 15595, 15431 , 15572 and 15011.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающая часть по изобретению не связываются с тем же эпитопом LAG-3 человека, что и антитело 25F7-Lag3.5.In some embodiments, the anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof of the invention does not bind to the same human LAG-3 epitope as the 25F7-Lag3.5 antibody.
В некоторых вариантах осуществления в анти-LAG-3 антителе или его антиген-связывающей части по изобретению используют ген тяжелой цепи зародышевой линии человека, выбранный из группы, состоящей из IGHV4-34, iGhV1-24, IGHV6-1, IGHV4-39 и IGHV3-23. В определенных вариантах осуществления ген тяжелой цепи зародышевой линии по меньшей мере на 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92,In some embodiments, the anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof of the invention uses a human germline heavy chain gene selected from the group consisting of IGHV4-34, iGhV1-24, IGHV6-1, IGHV4-39, and IGHV3 -23. In certain embodiments, the germline heavy chain gene is at least 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92,
- 12 046220- 12 046220
93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичен соответствующей последовательности тяжелой цепи в антителе против LAG3 или антиген-связывающей части. В определенных вариантах осуществления последовательности каркасных областей указанного гена тяжелой цепи зародышевой линии по меньшей мере на 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичны соответствующим последовательностям каркасных областей тяжелых цепей в антителе против LAG3 или антигенсвязывающей части.93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 or 100% identical to the corresponding heavy chain sequence in the anti-LAG3 antibody or antigen-binding portion. In certain embodiments, the framework sequences of said germline heavy chain gene are at least 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 , 99 or 100% identical to the corresponding heavy chain framework sequences in the anti-LAG3 antibody or antigen-binding portion.
В некоторых вариантах осуществления в анти-LAG-3 антителе или его антиген-связывающей части по изобретению используют ген легкой цепи зародышевой линии человека, выбранный из группы, состоящей из IGKV3-11, IGKV1-12, IGKV1-5 и IGLV3-19. В определенных вариантах осуществления ген легкой цепи зародышевой линии по меньшей мере на 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичен соответствующей последовательности легкой цепи в антителе против LAG3 или антиген-связывающей части. В определенных вариантах осуществления последовательности каркасных областей указанного гена легкой цепи зародышевой линии по меньшей мере на 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичны соответствующим последовательностям легких цепей каркасных областей в антителе против LAG3 или антиген-связывающей части.In some embodiments, the anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof of the invention uses a human germline light chain gene selected from the group consisting of IGKV3-11, IGKV1-12, IGKV1-5, and IGLV3-19. In certain embodiments, the germline light chain gene is at least 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, or 100 % identical to the corresponding light chain sequence in the anti-LAG3 antibody or antigen-binding portion. In certain embodiments, the framework regions of said germline light chain gene are sequenced at at least 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 , 99 or 100% identical to the corresponding light chain framework sequences in the anti-LAG3 antibody or antigen-binding portion.
В конкретных вариантах осуществления в анти-LAG-3 антителе или его антиген-связывающей части по изобретению используют любую комбинацию вышеуказанных генов тяжелых цепей зародышевой линии человека и генов легких цепей зародышевой линии человека (например, IGHV4-34 и IGKV3-11, IGHV1-24 и IGKV1-12, IGHV6-1 и IGKV3-11, IGHV4-39 и IGKV1-5 или IGHV3-23 и IGLV3-19). В некоторых вариантах осуществления гены тяжелых и легких цепей зародышевой линии по меньшей мере на 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичны соответствующим последовательностям тяжелых и легких цепей, соответственно, в антителе против LAG3 или антигенсвязывающей части. В определенных вариантах осуществления последовательности каркасных областей указанных генов тяжелых и легких цепей зародышевой линии по меньшей мере на 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичны соответствующим последовательностям тяжелых и легких цепей каркасных областей, соответственно, в антителе против LAG3 или антигенсвязывающей части.In specific embodiments, the anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof of the invention uses any combination of the above human germline heavy chain genes and human germline light chain genes (e.g., IGHV4-34 and IGKV3-11, IGHV1-24 and IGKV1-12, IGHV6-1 and IGKV3-11, IGHV4-39 and IGKV1-5 or IGHV3-23 and IGLV3-19). In some embodiments, germline heavy and light chain genes at least 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 or 100% identical to the corresponding heavy and light chain sequences, respectively, in the anti-LAG3 antibody or antigen-binding portion. In certain embodiments, the framework sequences of said germline heavy and light chain genes are at least 75, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 , 98, 99 or 100% identical to the corresponding sequences of the heavy and light chain framework regions, respectively, in the anti-LAG3 antibody or antigen-binding portion.
В некоторых вариантах осуществления любые анти-LAG-3 антитела или антиген-связывающие части, описанные в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 человека с EC50, например, 0,2 нМ или меньше, 0,15 нМ или меньше, 0,1 нМ или меньше, 0,09 нМ или меньше, 0,0 8 нМ или меньше, 0,07 нМ или меньше, 0,0 6 нМ или меньше, 0,05 нМ или меньше или 0,04 нМ или меньше. В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 яванского макака, например, с EC50 0,4 нМ или меньше, 0,3 нМ или меньше, 0,2 нМ или меньше, 0,1 нМ или меньше, 0,09 нМ или меньше, 0,0 8 нМ или меньше, 0,07 нМ или меньше, 0,06 нМ или меньше, 0,05 нМ или меньше, 0,04 нМ или меньше или 0,03 нМ или меньше.In some embodiments, any anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can bind to human LAG-3 with an EC 50 of, e.g., 0.2 nM or less, 0.15 nM or less, 0 .1 nM or less, 0.09 nM or less, 0.0 8 nM or less, 0.07 nM or less, 0.0 6 nM or less, 0.05 nM or less, or 0.04 nM or less. In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein may bind to cynomolgus LAG-3, e.g., with an EC50 of 0.4 nM or less, 0.3 nM or less, 0.2 nM or less, 0.1 nM or less, 0.09 nM or less, 0.08 nM or less, 0.07 nM or less, 0.06 nM or less, 0.05 nM or less, 0.04 nM or less or 0.03 nM or less.
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 человека с EC50, например, 0,1 нМ или меньше. В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 яванского макака, например, с ЕС50 0,3 нМ или меньше. В конкретных вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 человека, например, с EC50 0,1 нМ или меньше и LAG-3 яванского макака, например, с ЕС50 0,3 нМ или меньше.In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can bind to human LAG-3 with an EC 50 of, for example, 0.1 nM or less. In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can bind to cynomolgus LAG-3, for example, an EC 50 of 0.3 nM or less. In specific embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can bind to human LAG-3, e.g., with an EC50 of 0.1 nM or less, and cynomolgus LAG-3, e.g. with EC50 0.3 nM or less.
В некоторых вариантах осуществления любое анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающая часть, описанная в настоящем описании, может ингибировать связывание лигандов, таких как МНС класса II (MHCII) или LSECtin, с LAG-3. Например, при 20 мкг/мл, анти-LAG-3 антитело или антигенсвязывающая часть может снижать связывание LAG-3 с MHCII по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% по сравнению со связыванием в присутствии антитела отрицательного контроля. В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающий белок может снижать связывание LAG-3 с MHCII больше чем на 85% по сравнению с отрицательным контролем. В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающий белок может снижать связывание LAG-3 с MHCII приблизительно на 35-85% по сравнению с отрицательным контролем.In some embodiments, any anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety described herein can inhibit the binding of ligands, such as MHC class II (MHCII) or LSECtin, to LAG-3. For example, at 20 μg/ml, an anti-LAG-3 antibody or antigen binding moiety may reduce the binding of LAG-3 to MHCII by at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least by 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85 %, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95% , at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% compared to binding in the presence of a negative control antibody. In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody or antigen binding protein may reduce the binding of LAG-3 to MHCII by more than 85% compared to a negative control. In one embodiment, an anti-LAG-3 antibody or antigen binding protein may reduce the binding of LAG-3 to MHCII by approximately 35-85% compared to a negative control.
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут блокировать связывание между LAG-3 и МНС класса II, например, LAG-3 человека, экспрессируемым на клетках Jurkat, и МНС класса II человека, экспрессируемым на клетках Raji (например, в концентрации 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 20, 30, 40 или 50 мкг/мл).In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can block binding between LAG-3 and MHC class II, e.g., human LAG-3 expressed on Jurkat cells and MHC class human II expressed on Raji cells (eg, at a concentration of 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 20, 30, 40 or 50 μg/ml).
- 13 046220- 13 046220
В некоторых вариантах осуществления любые из aHTu-LAG-З антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 человека с KD 5,0х10-8 или меньше, 4,0х10-8 или меньше, 3,0х10-8 или меньше, 2,0х10-8 или меньше, 1,0х10-8 или меньше, 9,0x10-9 или меньше, 8,0х10-9 или меньше, 7,0х10-9 или меньше, 6,0х10-9 или меньше, 5,0х10-9 или меньше, 4,0х10-9 или меньше, 3,0х10-9 или меньше, 2,0х10-9 или меньше или 1,0х10-9 или меньше, как измерено поверхностным плазмонным резонансом.In some embodiments, any of the aHTu-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can bind to human LAG-3 with a K D of 5.0 x 10 -8 or less, 4.0 x 10 -8 or less, 3 ,0x10 -8 or less, 2.0x10 -8 or less, 1.0x10 -8 or less, 9.0x10-9 or less, 8.0x10-9 or less, 7.0x10-9 or less, 6.0x10 - 9 or less, 5.0x10-9 or less, 4.0x10-9 or less, 3.0x10-9 or less, 2.0x10-9 or less, or 1.0x10-9 or less, as measured by surface plasmon resonance .
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 яванского макака с KD 1,5х10-7 или меньше, 1,0х10-7 или меньше, 9,0х10-8 или меньше, 8,0х10-8 или меньше, 7,0х10-8 или меньше, 6,0х10-8 или меньше, 5,0х10-8 или меньше, 4,0х10-8 или меньше, 3,0х10-8 или меньше, 2,0х10-8 или меньше или 1,0х10-8 или меньше, как измерено поверхностным плазмонным резонансом.In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can bind to cynomolgus LAG-3 with a K D of 1.5 x 10 -7 or less, 1.0 x 10 -7 or less, 9.0x10 -8 or less, 8.0x10 -8 or less, 7.0x10 -8 or less, 6.0x10 -8 or less, 5.0x10 -8 or less, 4.0x10 -8 or less, 3, 0x10 -8 or less, 2.0x10 -8 or less, or 1.0x10 -8 or less, as measured by surface plasmon resonance.
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с LAG-3 мыши с KD 5,0х10-8 или меньше, 4,5х10-8 или меньше, 4,0х10-8 или меньше, 3,5х10-8 или меньше или 3,0х10-8 или меньше, как измерено поверхностным плазмонным резонансом.In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can bind to mouse LAG-3 with a K D of 5.0 x 10 -8 or less, 4.5 x 10 -8 or less, 4 .0x10 -8 or less, 3.5x10 -8 or less, or 3.0x10 -8 or less, as measured by surface plasmon resonance.
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут стимулировать продукцию IL-2, например SEBстимулированными РВМС.In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can stimulate IL-2 production, for example, by SEB-stimulated PBMCs.
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут снижать клеточные и/или растворимые уровни LAG-3, например, в линии Т-клеток человека (такой как линия Т-клеток человека со сверхэкспрессией LAG-3).In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can reduce cellular and/or soluble levels of LAG-3, for example, in a human T cell line (such as a T cell line human overexpressing LAG-3).
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут индуцировать регрессию опухолевого роста и/или задерживать опухолевый рост in vivo.In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein can induce regression of tumor growth and/or delay tumor growth in vivo.
В некоторых вариантах осуществления любые из анти-LAG-3 антител или антиген-связывающих частей, описанных в настоящем описании, могут связываться с другим эпитопом LAG-3 человека, нежели антитело 25F7-Lag3.5.In some embodiments, any of the anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding moieties described herein may bind to a different human LAG-3 epitope than the 25F7-Lag3.5 antibody.
В одном из вариантов осуществления введение анти-LAG-3 антитела по изобретению или его антиген-связывающей части может активировать Т-клетки, вызывая усиленную противоопухолевую активность.In one embodiment, administration of an anti-LAG-3 antibody of the invention or an antigen-binding portion thereof can activate T cells, causing enhanced antitumor activity.
Класс анти-LAG-3 антитела, получаемого с помощью способов, описанных в настоящем описании, можно изменять или переключать на другой класс или подкласс. В одном аспектов изобретения, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую VL или VH, выделяют с использованием способов, хорошо известных в данной области, так, что она не содержит последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие CL или СН, соответственно. Затем молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие VL или VH, функционально связывают с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей CL или СН, соответственно, из молекулы иммуноглобулина другого класса. Этого можно достигать с использованием вектора или молекулы нуклеиновой кислоты, которая содержит цепь CL или СН, как описано выше. Например, класс анти-LAG-3 антитела, которое исходно представляло собой IgM, можно переключать на IgG. Кроме того, переключение класса можно использовать для того, чтобы превращать IgG одного подкласса в другой, например, с IgG1 на IgG2. Константную область легкой цепи к можно менять, например, на константную область легкой цепи λ. Предпочтительный способ получения антитела по изобретению желаемого изотипа Ig включает стадии выделения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь анти-LAG-3 антитела, и молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь анти-LAG3 антитела, получения вариабельного домена тяжелой цепи, лигирования вариабельного домена тяжелой цепи с константной областью тяжелой цепи желаемого изотипа, экспрессии легкой цепи и лигированной тяжелой цепи в клетке и сбора анти-LAG-3 антитела желаемого изотипа.The class of anti-LAG-3 antibody produced by the methods described herein can be changed or switched to another class or subclass. In one aspect of the invention, a nucleic acid molecule encoding VL or VH is isolated using methods well known in the art such that it does not contain nucleic acid sequences encoding CL or CH, respectively. Nucleic acid molecules encoding VL or VH are then operably linked to a nucleic acid sequence encoding CL or CH, respectively, from a different class of immunoglobulin molecule. This can be achieved using a vector or nucleic acid molecule that contains a CL or CH strand, as described above. For example, an anti-LAG-3 antibody that was originally IgM can be switched to IgG. In addition, class switching can be used to convert IgG from one subclass to another, for example from IgG1 to IgG2. The light chain constant region k can be changed, for example, to the light chain constant region λ. A preferred method of producing an antibody of the invention of the desired Ig isotype includes the steps of isolating a nucleic acid molecule encoding the heavy chain of an anti-LAG-3 antibody and a nucleic acid molecule encoding the light chain of an anti-LAG3 antibody, obtaining the heavy chain variable domain, ligating the heavy chain variable domain with a heavy chain constant region of the desired isotype, expressing the light chain and the ligated heavy chain in the cell, and collecting an anti-LAG-3 antibody of the desired isotype.
Ahtu-LAG-3 антитело по изобретению может представлять собой молекулу IgG, IgM, IgE, IgA или IgD, но обычно относится к изотипу IgG, например, IgG подкласса IgG1, IgG2a или IgG2b, IgG3 или IgG4. В одном из вариантов осуществления антитело представляет собой IgG1. В другом варианте осуществления антитело представляет собой IgG2. В определенных вариантах осуществления антитела IgG1 по настоящему изобретению, которые связываются с эпитопом LAG-3, описанным в настоящем описании, дают превосходящую активность при модулировании (например, ингибировании) функций LAG-3, чтобы добиваться лечения злокачественных опухолей или иммуностимулирующих эффектов.The Ahtu-LAG-3 antibody of the invention may be an IgG, IgM, IgE, IgA or IgD molecule, but is typically of the IgG isotype, for example an IgG subclass of IgG1, IgG2a or IgG2b, IgG3 or IgG4. In one embodiment, the antibody is IgG1. In another embodiment, the antibody is IgG2. In certain embodiments, IgG1 antibodies of the present invention that bind to the LAG-3 epitope described herein provide superior activity in modulating (eg, inhibiting) LAG-3 functions to achieve cancer treatment or immunostimulatory effects.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело может содержать по меньшей мере одну мутацию в Fc-области. Известно множество различных мутаций Fc, где эти мутации обеспечивают измененную эффекторную функцию. Например, во многих случаях будет желательно снижать или устранять эффекторную функцию, например, когда взаимодействия лиганд/рецептор нежелательны или в случае конъюгатов антитело-лекарственное средство.In one embodiment, the anti-LAG-3 antibody may contain at least one mutation in the Fc region. Many different Fc mutations are known, where these mutations provide altered effector function. For example, in many cases it will be desirable to reduce or eliminate effector function, such as when ligand/receptor interactions are undesirable or in the case of antibody-drug conjugates.
В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело содержит по меньшей мере одну мутацию в Fc-области, которая снижает эффекторную функцию. Положения аминокислот в Fc-области, котоIn one embodiment, the anti-LAG-3 antibody contains at least one mutation in the Fc region that reduces effector function. Amino acid positions in the Fc region, which
- 14 046220 рые могут быть полезны для мутаций, чтобы снижать эффекторную функцию, включают одно или несколько из положений 228, 233, 234 и 235, где положения аминокислот нумеруют в соответствии со схемой нумерации IMGT®.- 14 046 220 mutations that may be useful to reduce effector function include one or more of positions 228, 233, 234 and 235, where the amino acid positions are numbered according to the IMGT® numbering scheme.
В одном из вариантов осуществления один или оба из аминокислотных остатков в положениях 234 и 235 можно мутировать, например, из Leu в Ala (L234A/L235A). Эти мутации снижают эффекторную функцию Fc-области антител IgG1. Дополнительно или альтернативно, аминокислотный остаток в положении 228 можно мутировать, например, в Pro. В некоторых вариантах осуществления аминокислотный остаток в положении 233 можно мутировать, например, в Pro, аминокислотный остаток в положении 234 можно мутировать, например, в Val и/или аминокислотный остаток в положении 235 можно мутировать, например, в Ala. Положения аминокислот нумеруют в соответствии со схемой нумерации IMGT®.In one embodiment, one or both of the amino acid residues at positions 234 and 235 can be mutated, for example, from Leu to Ala (L234A/L235A). These mutations reduce the effector function of the Fc region of IgG1 antibodies. Additionally or alternatively, the amino acid residue at position 228 can be mutated, for example, to Pro. In some embodiments, the amino acid residue at position 233 may be mutated, for example, to Pro, the amino acid residue at position 234 may be mutated, for example, to Val, and/or the amino acid residue at position 235 may be mutated, for example, to Ala. Amino acid positions are numbered according to the IMGT® numbering scheme.
В некоторых вариантах осуществления, где антитело относится к подклассу IgG4, оно может содержать мутацию S228P, то есть иметь пролин в положении 228, где положение аминокислоты нумеруют в соответствии со схемой нумерации IMGT®. Известно, что эта мутация снижает нежелательный обмен плечами Fab.In some embodiments, where the antibody is of the IgG4 subclass, it may contain the S228P mutation, that is, have a proline at position 228, where the amino acid position is numbered according to the IMGT® numbering scheme. This mutation is known to reduce unwanted Fab arm turnover.
В определенных вариантах осуществления антитело или его антиген-связывающая часть по изобретению может быть частью более крупной молекулы иммуноадгезии, образованной посредством ковалентной или нековалентной связи антитела или части антитела с одним или несколькими другими белками или пептидами. Примеры таких молекул иммуноадгезии включают использование области сердцевины стрептавидина для получения тетрамерной молекулы scFv (Kipriyanov et al., Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101 (1995)) и использование остатка цистеина, маркерного пептида и С-концевой полигистидиновой метки для получения двухвалентных и биотинилированных молекул scFv (Kipriyanov et al., Mol. Immunol. 31:1047-1058 (1994)). Другие примеры включают, где одну или несколько CDR из антитела встраивают в молекулу, ковалентно или нековалентно, чтобы делать ее иммуноадгезином, который специфически связывается с антигеном, представляющим интерес. В таких вариантах осуществления CDR можно встраивать в качестве части более крупной полипептидной цепи, можно ковалентно связывать с другой полипептидной цепью или можно встраивать нековалентно.In certain embodiments, an antibody or antigen-binding portion thereof of the invention may be part of a larger immunoadhesion molecule formed by covalently or non-covalently linking the antibody or antibody portion to one or more other proteins or peptides. Examples of such immunoadhesion molecules include the use of the streptavidin core region to produce a tetrameric scFv molecule (Kipriyanov et al., Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101 (1995)) and the use of a cysteine residue, a marker peptide, and a C-terminal polyhistidine tag to produce divalent and biotinylated scFv molecules (Kipriyanov et al., Mol. Immunol. 31:1047-1058 (1994)). Other examples include where one or more CDRs from an antibody are inserted into the molecule, covalently or non-covalently, to make it an immunoadhesin that specifically binds to an antigen of interest. In such embodiments, the CDR may be inserted as part of a larger polypeptide chain, may be covalently linked to another polypeptide chain, or may be inserted non-covalently.
В другом варианте осуществления можно создавать слитое антитело или иммуноадгезин, которые содержат полностью или часть анти-LAG-3 антитела по изобретению, которое связано с другим полипептидом. В определенных вариантах осуществления только вариабельные домены анти-LAG-3 антитела связывают с полипептидом. В определенных вариантах осуществления домен VH анти-LAG-3 антитела связывают с первым полипептидом, тогда как домен VL анти-LAG-3 антитела связывают со вторым полипептидом, который ассоциируется с первым полипептидом таким образом, что домены VH и VL могут взаимодействовать друг с другом для того, чтобы формировать антиген-связывающий участок. В другом предпочтительном варианте осуществления домен VH отделяют от домена VL посредством линкера так, что домены VH и VL могут взаимодействовать друг с другом (например, одноцепочечные антитела). Затем антитело УИ-линкер-УЪ связывают с полипептидом, представляющим интерес. Кроме того, можно создавать слитые антитела, в которых два (или больше) одноцепочечных антитела связывают друг с другом. Это можно использовать при желании создавать двухвалентное или поливалентное антитело на одной полипептидной цепи или при желании создавать биспецифическое антитело.In another embodiment, a fusion antibody or immunoadhesin can be created that contains all or part of an anti-LAG-3 antibody of the invention that is linked to another polypeptide. In certain embodiments, only the variable domains of the anti-LAG-3 antibody are bound to the polypeptide. In certain embodiments, the VH domain of the anti-LAG-3 antibody is coupled to a first polypeptide, while the VL domain of the anti-LAG-3 antibody is coupled to a second polypeptide that associates with the first polypeptide such that the VH and VL domains can interact with each other to form an antigen-binding site. In another preferred embodiment, the VH domain is separated from the VL domain by a linker so that the VH and VL domains can interact with each other (eg, single chain antibodies). The VY-linker-Yb antibody is then coupled to the polypeptide of interest. In addition, fusion antibodies can be created in which two (or more) single chain antibodies are linked to each other. This can be used if you want to create a divalent or multivalent antibody on a single polypeptide chain or if you want to create a bispecific antibody.
Для того чтобы создавать одноцепочечное антитело (scFv), VH- и VL-кодирующие фрагменты ДНК функционально связывают с другим фрагментом, кодирующим гибкий линкер, например, кодирующим аминокислотную последовательность (Gly4 Ser) 3 (SEQ ID NO: 74), так, что последовательности VH и VL можно экспрессировать в виде непрерывного одноцепочечного белка, с доменами VL и VH, соединенными гибким линкером. См., например, Bird et al., Science 242:423 426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879 5883 (1988); и McCafferty et al., Nature 348:552 554 (1990). Одноцепочечное антитело может быть одновалентным, если только используют одну VH и VL; двухвалентным, если используют две VH и VL; или поливалентным, если используют больше чем две VH и VL. Например, можно создавать биспецифические или поливалентные антитела, которые специфически связываются с LAG-3 человека и другой молекулой.To generate a single-chain antibody (scFv), VH and VL-encoding DNA fragments are operably linked to another flexible linker encoding fragment, for example, encoding the amino acid sequence (Gly4 Ser) 3 (SEQ ID NO: 74), so that the sequences VH and VL can be expressed as a continuous single-chain protein, with the VL and VH domains connected by a flexible linker. See, for example, Bird et al., Science 242:423,426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879 5883 (1988); and McCafferty et al., Nature 348:552,554 (1990). A single chain antibody can be monovalent as long as only one VH and VL are used; divalent if two VH and VL are used; or polyvalent if more than two VH and VL are used. For example, it is possible to create bispecific or multivalent antibodies that specifically bind to human LAG-3 and another molecule.
В других вариантах осуществления можно получать другие модифицированные антитела с использованием молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих анти-LAG-3 антитело. Например, каппа-тела (111 et al., Protein Eng. 10:949-57 (1997)), миниантитела (Martin et al., EMBO J. 13:5303-9 (1994)), диатела (Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)) или янусины (Traunecker et al. , EMBO J. 10:3655-3659 (1991) и Traunecker et al., Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992)) можно получать с использованием стандартных молекулярно-биологических приемов, придерживаясь указаний из описания.In other embodiments, other modified antibodies can be produced using nucleic acid molecules encoding an anti-LAG-3 antibody. For example, kappa bodies (111 et al., Protein Eng. 10:949-57 (1997)), minibodies (Martin et al., EMBO J. 13:5303-9 (1994)), diabodies (Holliger et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)) or Janus (Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991) and Traunecker et al., Int. J. Cancer ( Suppl.) 7:51-52 (1992)) can be prepared using standard molecular biological techniques, following the instructions from the description.
В анти-LAG-3 антитело или антиген-связывающую часть по изобретению можно ввести функциональные группы или связать с другой молекулой (например, другим пептидом или белком). В целом, в антитела или их части вводят такие функциональные группы, которые при получении производных или введении метки на связывание с LAG-3 не оказывают нежелательного влияния. Соответственно, предполагается, что антитела и части антител по изобретению включают как интактные, так и модифицированThe anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion of the invention can be functionalized or linked to another molecule (eg, another peptide or protein). In general, functional groups are introduced into antibodies or parts thereof such that, when derivatized or tagged, binding to LAG-3 is not undesirably affected. Accordingly, the antibodies and antibody portions of the invention are intended to include both intact and modified
- 15 046220 ные формы aHTu-LAG-З антител человека, описанных в настоящем описании. Например, антитело или часть антитела по изобретению можно функционально связывать (путем химического конъюгирования, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иным образом) с одним или несколькими другими молекулярными объектами, такими как другое антитело (например, биспецифическое антитело или диатело), средство детекции, фармацевтическое средство и/или белок или пептид, который может опосредовать связывание антитела или части антитела с другой молекулой (такой как область сердцевины стрептавидина или полигистидиновая метка).- 15 046220 new forms of human aHTu-LAG-3 antibodies described in the present description. For example, an antibody or portion of an antibody of the invention may be operably linked (by chemical conjugation, genetic fusion, non-covalent association, or otherwise) to one or more other molecular entities, such as another antibody (e.g., a bispecific antibody or diabody), a detection agent, a pharmaceutical an agent and/or a protein or peptide that can mediate the binding of an antibody or portion of an antibody to another molecule (such as a streptavidin core region or a polyhistidine tag).
Один тип производных антитела получают посредством перекрестного связывания двух или нескольких антител (одного и того же типа или различных типов, например, для создания биспецифических антител). Подходящие агенты перекрестного связывания включают гетеробифункциональные агенты и агенты, имеющие две отдельные реакционноспособные группы, разделенные подходящим спейсером (например, сложный эфир м-малеимидобензоил-Ы-гидроксисукцинимида) или гомобифункциональным (например, дисукцинимидилсуберат). Такие линкеры доступны, например, в Pierce Chemical Company, Rockford, II.One type of antibody derivative is made by cross-linking two or more antibodies (of the same type or different types, for example to create bispecific antibodies). Suitable cross-linking agents include heterobifunctional agents and agents having two distinct reactive groups separated by a suitable spacer (eg, m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester) or homobifunctional (eg, disuccinimidyl suberate). Such linkers are available, for example, from Pierce Chemical Company, Rockford, II.
В aнти-LAG-3 антитело также можно введсти функциональную химическую группу, такую как полиэтиленгликоль (PEG), метильная или этильная группа или углеводная группа. Эти группы можно использовать для улучшения биологических характеристик антитела, например, для повышения времени полужизни в сыворотке.A chemical functional group such as polyethylene glycol (PEG), a methyl or ethyl group, or a carbohydrate group can also be introduced into the anti-LAG-3 antibody. These groups can be used to improve the biological characteristics of the antibody, such as increasing serum half-life.
В антитело по настоящему изобретению также можно вводить метку. Как используют в настоящем описании, термины введение метки или меченное относятся ко встраиванию другой молекулы в антитело. В одном из вариантов осуществления метка представляет собой поддающийся обнаружению маркер, например, встраивание радиоактивно-меченной аминокислоты или присоединение к полипептиду биотинильных фрагментов, которые можно обнаруживать с помощью помеченного авидина (например, стрептавидина, содержащего флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которые можно обнаруживать оптическими или колориметрическими способами). В другом варианте осуществления метка или маркер могут быть терапевтическими, например, конъюгат лекарственного средства или токсин. В настоящей области известны различные способы мечения полипептидов и гликопротеинов, которые можно использовать. Примеры меток для полипептидов включают, но не ограничиваясь ими, следующее: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3Н, 14С, 15N, 35S, 90Y, 99Тс, 'in. 125I, 131I), флуоресцентные метки (например, FITC, родамин, лантаноидные люминофоры), ферментативные метки (например, пероксидазу хрена, β-галактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу), хемилюминесцентные маркеры, биотинильные группы, предварительно определяемые полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, пара последовательностей лейциновой молнии, сайты связывания для вторичных антител, металлсвязывающие домены, эпитопные метки), магнитные средства, такие как хелаты гадолиния, токсины, такие как токсин коклюша, таксол, цитохалазин В, грамицидин D, бромистый этидий, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи. В некоторых вариантах осуществления метки прикрепляют с помощью спейсерных плеч различной длины для того, чтобы снижать потенциальные стерические затруднения.The antibody of the present invention can also be labeled. As used herein, the terms tagging or labeled refer to the incorporation of another molecule into an antibody. In one embodiment, the label is a detectable marker, such as the insertion of a radiolabeled amino acid or the attachment of biotinyl moieties to the polypeptide that can be detected by labeled avidin (e.g., streptavidin containing a fluorescent marker or enzymatic activity that can be detected by optical or colorimetric methods). In another embodiment, the label or marker may be therapeutic, such as a drug conjugate or toxin. Various methods for labeling polypeptides and glycoproteins are known in the art and can be used. Examples of labels for polypeptides include, but are not limited to, the following: radioisotopes or radionuclides (eg, 3 H, 14 C, 15 N, 35 S, 90 Y, 99 Tc, 'in. 125 I, 131 I), fluorescent labels ( e.g., FITC, rhodamine, lanthanide phosphors), enzymatic tags (e.g., horseradish peroxidase, β-galactosidase, luciferase, alkaline phosphatase), chemiluminescent markers, biotinyl groups, predefined polypeptide epitopes recognized by a secondary reporter (e.g., a pair of leucine zipper sequences, binding sites for secondary antibodies, metal binding domains, epitope tags), magnetic agents such as gadolinium chelates, toxins such as pertussis toxin, taxol, cytochalasin B, gramicidin D, ethidium bromide, emetine, mitomycin, etoposide, tenoposide, vincristine, vinblastine , colchicine, doxorubicin, daunorubicin, dihydroxyanthracindione, mitoxantrone, mithramycin, actinomycin D, 1-dehydrotestosterone, glucocorticoids, procaine, tetracaine, lidocaine, propranolol and puromycin and their analogs or homologues. In some embodiments, tags are attached using spacer arms of varying lengths to reduce potential steric hindrance.
В определенных вариантах осуществления антитела по изобретению могут присутствовать в нейтральной форме (включая цвиттер-ионные формы) или в виде положительно или отрицательно заряженных частиц. В некоторых вариантах осуществления антитела могут образовывать комплексы с противоионом для того, чтобы формировать фармацевтически приемлемую соль.In certain embodiments, the antibodies of the invention may be present in neutral form (including zwitterionic forms) or as positively or negatively charged species. In some embodiments, the antibodies can form complexes with a counterion to form a pharmaceutically acceptable salt.
Термин фармацевтически приемлемая соль относится к комплексу, содержащему одно или несколько антител и один или несколько противоионов, где противоионы происходят из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований.The term pharmaceutically acceptable salt refers to a complex containing one or more antibodies and one or more counterions, where the counterions are derived from pharmaceutically acceptable inorganic and organic acids and bases.
Биспецифические связывающие молекулы.Bispecific binding molecules.
В дополнительном аспекте, изобретение относится к биспецифической связывающей молекуле, обладающей специфичностью связывания (например, которая содержит антиген-связывающие части) антиLAG-3 антитела, описанного в настоящем описании, и специфичностью связывания другого aнти-LAG-3 антитела (например, другого aнти-LAG-3 антитела, описанного в настоящем описании) или антитела, которое направлено на другой белок, такой как другой белок контрольной точки иммунтитета, антиген злокачественной опухоли или другая молекула клеточной поверхности, активность которой опосредует патологическое состояние, такое как злокачественная опухоль. Такие биспецифические связывающие молекулы известны в данной области, и примеры биспецифических связывающих молекул других типов приведены в другом месте в настоящем описании.In an additional aspect, the invention provides a bispecific binding molecule having the binding specificity (eg, which contains the antigen binding portions) of an anti-LAG-3 antibody described herein, and the binding specificity of another anti-LAG-3 antibody (eg, another anti-LAG-3 antibody). LAG-3 antibody described herein) or an antibody that is directed to another protein, such as another immune checkpoint protein, a cancer antigen, or another cell surface molecule whose activity mediates a pathological condition, such as a cancer. Such bispecific binding molecules are known in the art, and examples of other types of bispecific binding molecules are provided elsewhere herein.
Молекулы нуклеиновой кислоты и векторы.Nucleic acid molecules and vectors.
Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты и последовательностям, кодирующим aнти-LAG-3 антитела или их антиген-связывающие части, описанные в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления различные молекулы нуклеиновой кислоты кодируют аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи aнти-LAG-3 антитела или его антигенThe present invention also relates to nucleic acid molecules and sequences encoding anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding portions thereof described herein. In some embodiments, the various nucleic acid molecules encode the amino acid sequences of the heavy chain and light chain of an anti-LAG-3 antibody or antigen thereof
- 16 046220 связывающей части. В других вариантах осуществления одна и та же молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи анти-LAG-3 антитела или его антиген-связывающей части.- 16 046220 connecting part. In other embodiments, the same nucleic acid molecule encodes the heavy chain and light chain amino acid sequences of an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof.
Указание нуклеотидной последовательности включает ее комплементарный варианте, если не указано иное. Таким образом, следует понимать, что указание на нуклеиновую кислоту с конкретной последовательностью, включает ее комплементарную цепь с комплементарной последовательностью. Термин полинуклеотид, как обозначают в настоящем описании, обозначает полимерную форму нуклеотидов по меньшей мере в 10 оснований в длину, рибонуклеотидов или дезоксинуклеотидов, или модифицированную форму нуклеотида любого типа. Термин включает одно- и двухцепочечные формы.The indication of a nucleotide sequence includes its complementary variant unless otherwise indicated. Thus, it should be understood that reference to a nucleic acid with a particular sequence includes its complementary strand with a complementary sequence. The term polynucleotide as used herein means a polymeric form of nucleotides at least 10 bases in length, ribonucleotides or deoxynucleotides, or a modified form of any type of nucleotide. The term includes single- and double-stranded forms.
Изобретение также относится к нуклеотидным последовательностям, которые по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентичны одной или нескольким нуклеотидным последовательностям, перечисленным в настоящем описании, например, к нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 17, 18, 21, 22, 25 и 26, или к нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 7, 8, 11, 12, 15, 16, 19, 20, 23, 24, 27 и 28. Термин процент идентичности последовательностей в контексте последовательностей нуклеиновой кислоты относится к остаткам в двух последовательностях, которые представляют собой одно и то же при выравнивании для максимального соответствия. Отрезок сравнения идентичности последовательностей может охватывать фрагмент по меньшей мере приблизительно в 9 нуклеотидов, обычно по меньшей мере приблизительно 18 нуклеотидов, более обычно по меньшей мере приблизительно 24 нуклеотида, обычно по меньшей мере приблизительно 28 нуклеотидов, более обычно по меньшей мере приблизительно 32 нуклеотида и предпочтительно по меньшей мере приблизительно 36, 48 или больше нуклеотидов. Существует множество различных алгоритмов, известных в данной области, которые можно использовать для того, чтобы измерять идентичность нуклеотидных последовательностей. Например, полинуклеотидные последовательности можно сравнивать с использованием FASTA, Gap или Bestfit, которые представляют собой программы в Wisconsin Package версии 10.0, Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin. FASTA, которая включает, например, программы FASTA2 и FASTA3, предоставляет выравнивания и процент идентичности последовательностей для областей наилучшего перекрытия между запрашиваемой и поисковой последовательностями (см., например, Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); и Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998) включены в настоящее описание посредством ссылки). Если не указано иное, используют параметры по умолчанию для конкретной программы или алгоритма. Например, процент идентичности последовательностей между последовательностями нуклеиновой кислоты можно определять с использованием FASTA с ее параметрами по умолчанию (размер слова 6 и коэффициент NOPAM для весовой матрицы) или с использованием Gap с ее параметрами по умолчанию, как предоставлено в GCG версии 6.1, включенном в настоящее описание посредством ссылки.The invention also relates to nucleotide sequences that are at least 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 or 99% identical to one or more nucleotide sequences listed in the present description, for example, a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 17, 18, 21, 22, 25 and 26, or to a nucleotide sequence encoding an amino acid sequence selected from the group consisting of from SEQ ID NOs: 3, 4, 7, 8, 11, 12, 15, 16, 19, 20, 23, 24, 27 and 28. The term percent sequence identity in the context of nucleic acid sequences refers to residues in two sequences that represent the same thing when aligned for maximum consistency. The sequence identity comparison stretch may span a fragment of at least about 9 nucleotides, typically at least about 18 nucleotides, more typically at least about 24 nucleotides, typically at least about 28 nucleotides, more typically at least about 32 nucleotides, and preferably at least about 36, 48 or more nucleotides. There are many different algorithms known in the art that can be used to measure nucleotide sequence identity. For example, polynucleotide sequences can be compared using FASTA, Gap, or Bestfit, which are programs in the Wisconsin Package version 10.0, Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin. FASTA, which includes, for example, the programs FASTA2 and FASTA3, provides alignments and percent sequence identity for regions of best overlap between the query and search sequences (see, for example, Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); and Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998) are incorporated herein by reference ). Unless otherwise specified, the default parameters for a particular program or algorithm are used. For example, the percentage of sequence identity between nucleic acid sequences can be determined using FASTA with its default parameters (word size 6 and NOPAM coefficient for the weight matrix) or using Gap with its default parameters, as provided in GCG version 6.1, included herein description by reference.
В одном из аспектов, изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 17, 18, 21, 22, 25 и 26. В определенных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидные последовательности из SEQ ID NO: 1 и 2, SEQ ID NO: 5 и 6, SEQ ID NO: 9 и 10, SEQ ID NO: 13 и 14, SEQ ID NO: 17 и 18, SEQ ID NO: 21 и 22 или SEQ ID NO: 25 и 26.In one aspect, the invention provides a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 17, 18, 21, 22, 25 and 26. In certain embodiments, the nucleic acid molecule comprises the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 1 and 2, SEQ ID NOs: 5 and 6, SEQ ID NOs: 9 and 10, SEQ ID NOs: 13 and 14, SEQ ID NOs : 17 and 18, SEQ ID NO: 21 and 22 or SEQ ID NO: 25 and 26.
В любом из приведенных выше вариантов осуществления, молекулы нуклеиновой кислоты могут быть выделенными.In any of the above embodiments, the nucleic acid molecules can be isolated.
В дополнительном аспекте, настоящее изобретение относится к вектор, подходящий для экспрессии одной из цепей антитела или его антиген-связывающей части, как раскрыто в настоящем описании. Термин вектор, как используют в настоящем описании, обозначает молекулу нуклеиновой кислоты, способную транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой плазмиду, то есть круглый двухцепочечный фрагмент ДНК, в который можно лигировать дополнительные сегменты ДНК. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой вирусный вектор, где дополнительные сегменты ДНК можно лигировать в вирусный геном. В некоторых вариантах осуществления векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую их вводят (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный участок начала репликации, и эписомные векторы млекопитающих). В других вариантах осуществления векторы (например, не эписомные векторы млекопитающих) можно встраивать в геном клетки-хозяина после введения в клетку-хозяина и тем самым реплицировать наряду с геномом хозяина. Кроме того, определенные векторы способны управлять экспрессией генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы обозначают в настоящем описании как рекомбинантные экспрессирующие векторы (или просто экспрессирующие векторы).In a further aspect, the present invention provides a vector suitable for expressing one of the chains of an antibody or an antigen-binding portion thereof, as disclosed herein. The term vector, as used herein, refers to a nucleic acid molecule capable of transporting another nucleic acid to which it is associated. In some embodiments, the vector is a plasmid, that is, a circular double-stranded DNA fragment into which additional DNA segments can be ligated. In some embodiments, the vector is a viral vector, where additional DNA segments can be ligated into the viral genome. In some embodiments, the vectors are capable of autonomous replication in the host cell into which they are introduced (eg, bacterial vectors having a bacterial origin of replication and mammalian episomal vectors). In other embodiments, vectors (eg, non-episomal mammalian vectors) can be inserted into the host cell genome after introduction into the host cell and thereby replicate along with the host genome. In addition, certain vectors are capable of controlling the expression of genes to which they are functionally associated. Such vectors are referred to herein as recombinant expression vectors (or simply expression vectors).
Изобретение относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют тяжелую цепь анти-LAG-3 антитела по изобретению или его антиген-связывающей части, легкую цепь анти-LAG-3 антитела по изобретению или его антиген-связывающей части или как тяжелую, так и легкую цепи анти-LAG-3 антитела по изобретению или его антиген-связывающей части. ИзобретениеThe invention relates to vectors containing nucleic acid molecules that encode the heavy chain of an anti-LAG-3 antibody of the invention or an antigen-binding portion thereof, the light chain of an anti-LAG-3 antibody of the invention or an antigen-binding portion thereof, or both heavy and and a light chain of an anti-LAG-3 antibody of the invention or an antigen-binding portion thereof. Invention
- 17 046220 дополнительно предусматривает векторы, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие слитые белки, модифицированные антитела, фрагменты антител и их зонды.- 17 046220 further provides vectors containing nucleic acid molecules encoding fusion proteins, modified antibodies, antibody fragments and probes thereof.
Молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую и/или легкую цепь анти-LAG-3 антитела или его антиген-связывающей части по изобретению, можно выделять из любого источника, который продуцирует такое антитело или часть. В различных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты выделяют из В-клеток, экспрессирующих анти-LAG-3 антитело, которые выделены у животного, иммунизированного с использованием антигена LAG-3 человека, или из иммортализованной клетки, полученной из такой В-клетки. Способы выделения нуклеиновых кислот, кодирующих антитело, хорошо известны в данной области. мРНК можно выделять и использовать для получения кДНК для использования в полимеразной цепной реакции (ПЦР) или клонировании кДНК генов антитела. В определенных вариантах осуществления молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению можно синтезировать, а не выделять.The nucleic acid molecule encoding the heavy and/or light chain of an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof of the invention can be isolated from any source that produces such antibody or portion. In various embodiments, the nucleic acid molecules are isolated from B cells expressing an anti-LAG-3 antibody that are isolated from an animal immunized with human LAG-3 antigen or from an immortalized cell derived from such a B cell. Methods for isolating nucleic acids encoding an antibody are well known in the art. The mRNA can be isolated and used to produce cDNA for use in polymerase chain reaction (PCR) or cDNA cloning of antibody genes. In certain embodiments, the nucleic acid molecule of the invention can be synthesized rather than isolated.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую домен VH анти-LAG-3 антитела или антигенсвязывающей части по изобретению, соединенный с сохранением рамки считывания с нуклеотидной последовательностью, кодирующей константную область тяжелой цепи, из любого источника. Аналогичным образом, молекула нуклеиновой кислоты по изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую домен VL анти-LAG-3 антитела или антиген-связывающей части по изобретению, соединенную с сохранением рамки считывания с нуклеотидной последовательностью, кодирующей константную область легкой цепи, из любого источника.In some embodiments, a nucleic acid molecule of the invention may comprise a nucleotide sequence encoding the VH domain of an anti-LAG-3 antibody or antigen binding portion of the invention linked in frame to a nucleotide sequence encoding a heavy chain constant region from any source. Likewise, a nucleic acid molecule of the invention may comprise a nucleotide sequence encoding the VL domain of an anti-LAG-3 antibody or antigen binding moiety of the invention linked in frame to a nucleotide sequence encoding a light chain constant region from any source.
В дополнительном аспекте изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие вариабельный домен тяжелых (VH) и/или легких (VL) цепей, можно превращать в полноразмерные гены антител. В одном из вариантов осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие домены VH или VL, превращают в полноразмерные гены антител посредством инсерции в экспрессирующий вектор, уже кодирующий константную область тяжелой цепи (СН) или константную область легкой цепи (CL), соответственно, так, что сегмент VH функционально связывают с сегментом(ами) СН в векторе и/или сегмент VL функционально связывают с сегментом CL в векторе. В другом варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие домены VH и/или VL, превращают в полноразмерные гены антител посредством связывания, например, лигирования, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей домены VH и/или VL, с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей область СН и/или CL, используя стандартные приемы молекулярной биологии. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полноразмерные тяжелые и/или легкие цепи, затем можно экспрессировать в клетке, в которую их ввели, и выделять анти-LAG-3 антитело.In a further aspect of the invention, nucleic acid molecules encoding the variable domain of the heavy (VH) and/or light (VL) chains can be converted into full-length antibody genes. In one embodiment, nucleic acid molecules encoding the VH or VL domains are converted into full-length antibody genes by insertion into an expression vector already encoding a heavy chain constant region (CH) or a light chain constant region (CL), respectively, such that the segment The VH is operably linked to the CH segment(s) in the vector and/or the VL segment is operably linked to the CL segment in the vector. In another embodiment, nucleic acid molecules encoding the VH and/or VL domains are converted into full-length antibody genes by linking, for example, ligation, a nucleic acid molecule encoding the VH and/or VL domains with a nucleic acid molecule encoding the CH and/or region. or CL using standard molecular biology techniques. Nucleic acid molecules encoding full-length heavy and/or light chains can then be expressed in the cell into which they are introduced and anti-LAG-3 antibody can be isolated.
Молекулы нуклеиновой кислоты можно использовать для рекомбинантной экспрессии больших количеств анти-LAG-3 антител. Молекулы нуклеиновой кислоты также можно использовать для получения химерных антител, биспецифических антител, одноцепочечных антител, иммуноадгезинов, диател, мутантных антител и производных антител, как раскрыто в настоящем описании.The nucleic acid molecules can be used to recombinantly express large quantities of anti-LAG-3 antibodies. Nucleic acid molecules can also be used to produce chimeric antibodies, bispecific antibodies, single chain antibodies, immunoadhesins, diabodies, mutant antibodies and antibody derivatives, as disclosed herein.
В другом варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению используют в качестве зонда или ПЦР праймера для специфической последовательности антитела. Например, нуклеиновую кислоту можно использовать в качестве зонда в диагностических способах или в качестве ПЦР праймера для амплификации областей ДНК, что можно использовать, inter alia, для выделения дополнительных молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих вариабельные домены анти-LAG-3 антител. В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты представляют собой олигонуклеотиды. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды происходят из высоко вариабельных доменов тяжелых и легких цепей антитела, представляющего интерес. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды кодируют полностью или частично одну или несколько CDR анти-LAG-3 антител или их антиген-связывающих частей по изобретению, как раскрыто в настоящем описании.In another embodiment, a nucleic acid molecule of the invention is used as a probe or PCR primer for a specific antibody sequence. For example, the nucleic acid can be used as a probe in diagnostic methods or as a PCR primer to amplify regions of DNA that can be used, inter alia, to isolate additional nucleic acid molecules encoding the variable domains of anti-LAG-3 antibodies. In some embodiments, the nucleic acid molecules are oligonucleotides. In some embodiments, the oligonucleotides are derived from the high variable domains of the heavy and light chains of the antibody of interest. In some embodiments, the oligonucleotides encode, in whole or in part, one or more CDRs of anti-LAG-3 antibodies or antigen-binding portions thereof of the invention, as disclosed herein.
В другом варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты и векторы можно использовать для получения мутантных анти-LAG-3 антител. В вариабельные домены тяжелых и/или легких цепей антитела можно вводить мутации, например, чтобы изменять связывающее свойство антитела. Например, мутацию можно создавать в одной или нескольких из CDR для того, чтобы увеличивать или уменьшать KD анти-LAG-3 антитела, увеличивать или уменьшать koff или изменять специфичность связывания антитела. В другом варианте осуществления одну или несколько мутаций создают в аминокислотном остатке, который доподлинно подлежит изменению по сравнению с зародышевой линией в моноклональном антителе по изобретению. Мутации можно создавать в CDR или каркасной области вариабельного домена или в константной области. В предпочтительном варианте осуществления мутации выполняют в вариабельном домене. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько мутаций выполняют в аминокислотном остатке, который доподлинно подлежит изменению по сравнению с зародышевой линией в CDR или каркасной области вариабельного домена антитела или его антигенсвязывающей части по изобретению.In another embodiment, nucleic acid molecules and vectors can be used to produce mutant anti-LAG-3 antibodies. Mutations can be introduced into the variable domains of the heavy and/or light chains of an antibody, for example, to change the binding property of the antibody. For example, a mutation can be created in one or more of the CDRs to increase or decrease the KD of an anti-LAG-3 antibody, increase or decrease koff, or change the binding specificity of an antibody. In another embodiment, one or more mutations are created at an amino acid residue that is significantly different from the germline in the monoclonal antibody of the invention. Mutations can be created in the CDR or framework region of the variable domain or in the constant region. In a preferred embodiment, the mutations are made in the variable domain. In some embodiments, one or more mutations are made at an amino acid residue that is specifically subject to change from the germline in the CDR or framework region of the variable domain of an antibody or antigen-binding portion thereof of the invention.
В другом варианте осуществления в каркасную область(и) вводят мутацию с тем, чтобы получаемая каркасная область(и) имела аминокислотную последовательность соответствующего гена зародышевойIn another embodiment, a mutation is introduced into the framework region(s) such that the resulting framework region(s) have the amino acid sequence of the corresponding germline gene
- 18 046220 линии. Мутацию можно создавать в каркасной области или константной области для увеличения времени полужизни анти-LAG-3 антитела. См., например, публикацию PCT WO 00/09560. Мутацию в каркасной области или константной области также можно выполнять для того, чтобы изменять иммуногенность антитела и/или предоставлять участок для ковалентного или нековалентного связывания с другой молекулой. В соответствии с изобретением, одно антитело может иметь мутации в любой одной или нескольких CDR или каркасных областях вариабельного домена или в константной области.- 18 046220 lines. A mutation can be created in the framework region or constant region to increase the half-life of the anti-LAG-3 antibody. See, for example, PCT publication WO 00/09560. A mutation in the framework region or constant region can also be performed in order to alter the immunogenicity of the antibody and/or provide a site for covalent or non-covalent binding to another molecule. In accordance with the invention, a single antibody may have mutations in any one or more CDR or framework regions of the variable domain or constant region.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитела по изобретению или их антигенсвязывающие части экспрессируют посредством встраивания ДНК, кодирующей частичные или полноразмерные легкие и тяжелые цепи, полученные как описано выше, в экспрессирующие векторы так, что гены функционально связывают с необходимыми управляющими экспрессией последовательностями, такими как транскрипционные и трансляционные управляющие последовательности. Экспрессирующие векторы включают плазмиды, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы (AAV), вирусы растений, такие как вирус мозаики цветной капусты, вирус табачной мозаики, космиды, YAC, эписомы, полученные из EBV и т.п. Кодирующую последовательность антитела можно лигировать в вектор так, что транскрипционные и трансляционные управляющие последовательности в векторе выполняют свою предполагаемую функцию регуляции транскрипции и трансляции кодирующей последовательности антитела. Экспрессирующий вектор и управляющие экспрессией последовательности можно выбирать так, чтобы они были совместимыми с выбранной экспрессионной клеткой-хозяином. Кодирующую последовательность легкой цепи антитела и кодирующую последовательность тяжелой цепи антитела можно вставлять в отдельные векторы и можно функционально связывают в одними и теми же или различными управляющими экспрессией последовательностями (например, промоторами). В одном из вариантов осуществления обе кодирующие последовательности вставляют в один и тот же экспрессирующий вектор и можно функционально связывать с одними и теми же управляющими экспрессией последовательностями (например, обыкновенный промотор), с отдельными идентичными управляющими экспрессией последовательностями (например, промоторами) или с различными управляющими экспрессией последовательностями (например, промоторами). Кодирующие последовательности антитела можно вставлять в экспрессирующий вектор стандартными способами (например, лигированием комплементарных участков рестрикции на фрагменте гена антитела и векторе или лигированием тупых концов, если участки рестрикции отсутствуют).In some embodiments, anti-LAG-3 antibodies of the invention or antigen-binding portions thereof are expressed by inserting DNA encoding partial or full-length light and heavy chains obtained as described above into expression vectors such that the genes are operably linked to the necessary expression control sequences, such as transcriptional and translational control sequences. Expression vectors include plasmids, retroviruses, adenoviruses, adeno-associated viruses (AAV), plant viruses such as cauliflower mosaic virus, tobacco mosaic virus, cosmids, YAC, EBV-derived episomes, and the like. The antibody coding sequence can be ligated into a vector such that the transcriptional and translational control sequences in the vector perform their intended function of regulating the transcription and translation of the antibody coding sequence. The expression vector and expression control sequences can be selected so that they are compatible with the selected expression host cell. The antibody light chain coding sequence and the antibody heavy chain coding sequence can be inserted into separate vectors and can be operably linked to the same or different expression control sequences (eg, promoters). In one embodiment, both coding sequences are inserted into the same expression vector and can be operably linked to the same expression control sequences (e.g., a common promoter), to separate identical expression control sequences (e.g., promoters), or to different control sequences. expression sequences (for example, promoters). Antibody coding sequences can be inserted into an expression vector by standard methods (eg, by ligating complementary restriction sites on the antibody gene fragment and the vector, or blunt-end ligation if restriction sites are missing).
Удобным вектором является тот, который кодирует функционально полную последовательность СН или CL иммуноглобулина человека с подходящими участками рестрикции, разработанными с тем, чтобы любую последовательность VH или VL можно было легко вставлять и экспрессировать, как описано выше. НС- и LC-кодирующие гены в таких векторах могут содержать последовательности интронов, которые будут вести к увеличенному общему выходу белков антител посредством стабилизации соответствующей мРНК. Последовательности интронов фланкируют посредством участками доноров сплайсинга и акцепторов сплайсинга, которые определяют, где будет происходить сплайсинг РНК. Местоположение последовательностей интронов может находиться в вариабельных или константных областях цепей антител или как в вариабельных, так и в константных областях, когда используют несколько интронов. Полиаденилирование и терминация транскрипции могут происходить в нативных хромосомных участках ниже по направлению считывания от кодирующих областей. Рекомбинантный экспрессирующий вектор также может кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела клеткой-хозяином. Ген цепи антитела можно клонировать в вектор так, что сигнальный пептид связывают с сохранением рамки считывания с аминоконцом цепи иммуноглобулина. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (то есть сигнальный пептид из неиммуноглобулинового белка).A convenient vector is one that encodes a functionally complete human immunoglobulin CH or CL sequence with suitable restriction sites designed so that any VH or VL sequence can be readily inserted and expressed as described above. The HC and LC encoding genes in such vectors may contain intronic sequences that will lead to increased overall yield of antibody proteins by stabilizing the corresponding mRNA. The intron sequences are flanked by splice donor and splice acceptor regions, which determine where RNA splicing will occur. The location of the intron sequences may be in the variable or constant regions of antibody chains, or in both the variable and constant regions when multiple introns are used. Polyadenylation and transcription termination can occur in native chromosomal regions downstream of the coding regions. The recombinant expression vector may also encode a signal peptide that facilitates secretion of the antibody chain by the host cell. The antibody chain gene can be cloned into a vector such that the signal peptide is linked in frame to the amino terminus of the immunoglobulin chain. The signal peptide may be an immunoglobulin signal peptide or a heterologous signal peptide (ie, a signal peptide from a non-immunoglobulin protein).
В дополнение к генам цепей антител, рекомбинантные экспрессирующие векторы по изобретению могут нести регуляторные последовательности, которые управляют экспрессией генов цепей антител в клетке-хозяине. Специалисты в данной области примут во внимание, что разработка экспрессирующего вектора, включая выбор регуляторных последовательностей, может зависеть от таких факторов как выбор клетки-хозяина, подлежащей трансформации, желаемый уровень экспрессии белка и т.д. Предпочтительные регуляторные последовательности для экспрессии в клетке-хозяине млекопитающего включают вирусные элементы, которые задают высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающих, такие как промоторы и/или энхансеры, полученные из ретровирусных LTR, цитомегаловируса (CMV) (такие как промотор/энхансер CMV), вируса обезьян 40 (SV40) (такие как промотор/энхансер SV40), аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса (AdMLP)), полиомы и сильные промоторы млекопитающих, такие как нативные промоторы иммуноглобулинов и актина. Дополнительное описание вирусных регуляторных элементов и их последовательностей см. например, в патентах США 5168062, 4510245 и 4968615. Способы экспрессии антител у растений, включая описание промоторов и векторов, а также трансформации растений известны в данной области. См., например, патент США 6517529. Способы экспрессии полипептидов в бактериальных клетках или грибковых клетках, например дрожжевых клетках, также хорошо известны в данной области.In addition to antibody chain genes, the recombinant expression vectors of the invention may carry regulatory sequences that direct expression of antibody chain genes in a host cell. Those skilled in the art will appreciate that the development of an expression vector, including the selection of regulatory sequences, may depend on factors such as the choice of host cell to be transformed, the desired level of protein expression, etc. Preferred regulatory sequences for expression in a mammalian host cell include viral elements that drive high levels of protein expression in mammalian cells, such as promoters and/or enhancers derived from cytomegalovirus (CMV) retroviral LTRs (such as the CMV promoter/enhancer), simian virus 40 (SV40) (such as the SV40 promoter/enhancer), adenovirus (such as the adenovirus major late promoter (AdMLP)), polyomas, and strong mammalian promoters such as native immunoglobulin and actin promoters. For further description of viral regulatory elements and their sequences, see, for example, US Pat. Nos. 5,168,062, 4,510,245, and 4,968,615. Methods for expressing antibodies in plants, including the description of promoters and vectors, and transforming plants are known in the art. See, for example, US Pat. No. 6,517,529. Methods for expressing polypeptides in bacterial cells or fungal cells, such as yeast cells, are also well known in the art.
В дополнение к генам цепей антител и регуляторным последовательностям, рекомбинантные эксIn addition to antibody chain genes and regulatory sequences, recombinant ex
- 19 046220 прессирующие векторы по изобретению могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, участки начала репликации), и гены селективных маркеров. Ген селективного маркера облегчает отбор клетокхозяев, в которые введен вектор (см., например, патенты США 4399216, 4634665 и 5179017). Например, обычно ген селективного маркера придает устойчивость к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат, клетке-хозяину, в которую введен вектор. Например, гены селективных маркеров включают ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) (для использования в dhfr-клетках-хозяевах с отбором/амплификацией на метотрексате), ген пео (для отбора на G418) и ген глутаматсинтетазы.- 19 046220 compression vectors of the invention may carry additional sequences, such as sequences that regulate the replication of the vector in host cells (eg origins of replication) and selectable marker genes. The selectable marker gene facilitates the selection of host cells into which the vector is introduced (see, for example, US patents 4399216, 4634665 and 5179017). For example, typically a selectable marker gene confers resistance to drugs, such as G418, hygromycin, or methotrexate, to the host cell into which the vector is introduced. For example, selectable marker genes include the dihydrofolate reductase (DHFR) gene (for use in dhfr host cells with selection/amplification on methotrexate), the peo gene (for selection on G418) and the glutamate synthetase gene.
Термин управляющая экспрессией последовательность, как используют в настоящем описании, обозначает полинуклеотидные последовательности, которые необходимы для того, чтобы вызывать экспрессию и процессинг кодирующих последовательностей, с которыми их лигируют. Управляющие экспрессией последовательности включают подходящие последовательности инициации транскрипции, терминации, промоторные и энхансерные последовательности; эффективные сигналы процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования; последовательности, которые стабилизируют цитоплазматическую мРНК; последовательности, которые увеличивают эффективность трансляции (то есть консенсусную последовательность Козак); последовательности, которые увеличивают стабильность белка; и, по желанию, последовательности, которые усиливают секрецию белка. Свойства таких управляющих последовательностей различаются в зависимости от организма-хозяина; у прокариот такие управляющие последовательности в целом включают промотор, участок связывания рибосомы и последовательность терминации транскрипции; у эукариот в целом такие управляющие последовательности включают промоторы и последовательность терминации транскрипции. Термин управляющие последовательности предназначен включать, как минимум, все компоненты, присутствие которых необходимо для экспрессии и процессинга, и также может включать дополнительные компоненты, присутствие которых благоприятно, например, лидерные последовательности и последовательности партнеров слияния.The term expression control sequence, as used herein, refers to polynucleotide sequences that are necessary to cause expression and processing of the coding sequences to which they are ligated. Expression control sequences include suitable transcription initiation, termination, promoter and enhancer sequences; efficient RNA processing signals such as splicing and polyadenylation signals; sequences that stabilize cytoplasmic mRNA; sequences that increase translation efficiency (ie, the Kozak consensus sequence); sequences that increase protein stability; and, optionally, sequences that enhance protein secretion. The properties of such control sequences vary depending on the host organism; in prokaryotes, such control sequences generally include a promoter, a ribosome binding site, and a transcription termination sequence; in eukaryotes in general, such control sequences include promoters and transcription termination sequences. The term control sequences is intended to include, at a minimum, all components whose presence is essential for expression and processing, and may also include additional components whose presence is beneficial, such as leader sequences and fusion partner sequences.
Клетки-хозяева и способы получения антител и композиций антител.Host cells and methods for producing antibodies and antibody compositions.
Дополнительный аспект изобретения относится к способам получения композиций антител и антител и их антиген-связывающих частей по изобретению. Один из вариантов осуществления этого аспекта изобретения относится к способу получения антитела, как определено в настоящем описании, который включает предоставление рекомбинантной клетки-хозяина, способной экспрессировать антитело, культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела, и выделение получаемого антитела. Антитела, получаемые посредством такой экспрессии в таких рекомбинантных клетках-хозяевах, обозначают в настоящем описании как рекомбинантные антитела. Изобретение также относится к клеткам потомства таких клеток-хозяев и антителам, продуцируемым ими.A further aspect of the invention relates to methods for preparing the antibody and antibody compositions and antigen-binding portions thereof of the invention. One embodiment of this aspect of the invention relates to a method for producing an antibody, as defined herein, which includes providing a recombinant host cell capable of expressing the antibody, culturing said host cell under conditions suitable for expression of the antibody, and isolating the resulting antibody. Antibodies produced by such expression in such recombinant host cells are referred to herein as recombinant antibodies. The invention also relates to progeny cells of such host cells and antibodies produced by them.
Термин рекомбинантная клетка-хозяин (или просто клетка-хозяин), как используют в настоящем описании, обозначает клетку, в которую введен рекомбинантный экспрессирующий вектор. Изобретение относится к клеткам-хозяевам, которые могут содержать, например, вектор в соответствии с изобретением, описанный выше. Изобретение также относится к клеткам-хозяевам, которые содержат, например, нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь или ее антиген-связывающую часть, нуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь или ее антиген-связывающую часть, или обе, анти-LAG-3 антитела или его антиген-связывающей части по изобретению. Следует понимать, что рекомбинантная клетка-хозяин и клетка-хозяин обозначают не только конкретную рассматриваемую клетку, но также потомство такой клетки. Поскольку определенные модификации могут происходить в последующих поколениях из-за мутационных или средовых влияний, такое потомство фактически может не быть идентичным родительской клетке, но все еще быть включенным в объем термина клетка-хозяин как используют в настоящем описании.The term recombinant host cell (or simply host cell) as used herein means a cell into which a recombinant expression vector has been introduced. The invention relates to host cells, which may contain, for example, a vector in accordance with the invention described above. The invention also relates to host cells that contain, for example, a nucleotide sequence encoding a heavy chain or an antigen-binding portion thereof, a nucleotide sequence encoding a light chain or an antigen-binding portion thereof, or both, an anti-LAG-3 antibody, or antigen-binding part according to the invention. It should be understood that recombinant host cell and host cell refer not only to the particular cell in question, but also to the progeny of such cell. Since certain modifications may occur in subsequent generations due to mutational or environmental influences, such progeny may not in fact be identical to the parent cell, but still be included within the scope of the term host cell as used herein.
Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие анти-LAG-3 антитела, и векторы, содержащие эти молекулы нуклеиновой кислоты, можно использовать для трансфекции подходящей клетки-хозяина млекопитающего, растения, бактерии или дрожжей. Трансформацию можно осуществлять любым известным способом введения полинуклеотидов в клетку-хозяина. Способы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны в данной области и включают опосредованную декстраном трансфекцию, преципитацию с фосфатом кальция, опосредованную полибреном трансфекцию, слияние протопластов, электропорацию, инкапсулирование полинуклеотида(ов) в липосомы и прямую микроинъекцию ДНК в ядра. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты можно вводить в клетки млекопитающих посредством вирусных векторов. Способы трансформации клеток хорошо известны в данной области. См., например, патенты США 4399216, 4912040, 4740461 и 4959455. Способы трансформации клеток растения хорошо известны в данной области и включают, например, опосредованную Agrobacterium трансформацию, биолистическую трансформацию, прямую инъекцию, электропорацию и вирусную трансформацию. Способы трансформации бактериальных и дрожжевых клеток также хорошо известны в данной области.Nucleic acid molecules encoding anti-LAG-3 antibodies and vectors containing these nucleic acid molecules can be used to transfect a suitable mammalian, plant, bacterial or yeast host cell. Transformation can be accomplished by any known method of introducing polynucleotides into a host cell. Methods for introducing heterologous polynucleotides into mammalian cells are well known in the art and include dextran-mediated transfection, calcium phosphate precipitation, polybrene-mediated transfection, protoplast fusion, electroporation, encapsulation of polynucleotide(s) in liposomes, and direct microinjection of DNA into nuclei. In addition, nucleic acid molecules can be introduced into mammalian cells via viral vectors. Methods for transforming cells are well known in the art. See, for example, US Pat. Nos. 4,399,216, 4,912,040, 4,740,461, and 4,959,455. Methods for transforming plant cells are well known in the art and include, for example, Agrobacterium-mediated transformation, biolistic transformation, direct injection, electroporation, and viral transformation. Methods for transforming bacterial and yeast cells are also well known in the art.
Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают многие линии иммортализованных клеток, доступные в American Type Culture Collection (ATCC). Они включают, inter alia, клетки яичника китайского хомяка (СНО), клеткиMammalian cell lines available as expression hosts are well known in the art and include many immortalized cell lines available from the American Type Culture Collection (ATCC). These include, inter alia, Chinese hamster ovary (CHO) cells,
- 20 046220- 20 046220
NS0, клетки SP2, клетки HEK-293T, клетки 293 Freestyle (Invitrogen), клетки NIH-3T3, клетки HeLa, клетки почки новорожденного хомяка (ВНК), клетки почки африканской зеленой мартышки (COS), клетки гепатоцеллюлярной карциномы человек (например, Hep G2), клетки А549 и множество других клеточных линий. Клеточные линии, которым отдают конкретное предпочтение, выбирают посредством определения того, какие клеточные линии имеют высокие уровни экспрессии. Другие клеточные линии, которые можно использовать, представляют собой линии клеток насекомых, такие как клетки Sf9 или Sf21. Когда рекомбинантные экспрессирующие векторы, кодирующие гены антител, вводят в клеткихозяева млекопитающих, антитела получают посредством культивирования клеток-хозяев в течение определенного периода времени, достаточного для того, чтобы сделать возможной экспрессию антитела в клетках-хозяевах или, более предпочтительно, секрецию антитела в среду для культивирования, в которой растят клетки-хозяева. Антитела можно извлекать из среды для культивирования с использованием стандартных способов очистки белка. Клетки-хозяева растений включают, например, Nicotiana, Arabidopsis, ряску, кукурузу, пшеницу, картофель и т. д. Бактериальные клетки-хозяева включают Е. coli и виды Streptomyces. Клетки-хозяева дрожжей включают Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris.NS0 cells, SP2 cells, HEK-293T cells, 293 Freestyle cells (Invitrogen), NIH-3T3 cells, HeLa cells, neonatal hamster kidney (NHK) cells, African green monkey kidney (COS) cells, human hepatocellular carcinoma cells (eg, Hep G2), A549 cells and many other cell lines. Cell lines that are particularly preferred are selected by determining which cell lines have high levels of expression. Other cell lines that can be used are insect cell lines such as Sf9 or Sf21 cells. When recombinant expression vectors encoding antibody genes are introduced into mammalian host cells, the antibodies are produced by culturing the host cells for a period of time sufficient to allow expression of the antibody in the host cells or, more preferably, secretion of the antibody into the host cell medium. culture in which host cells are grown. Antibodies can be recovered from the culture medium using standard protein purification methods. Plant host cells include, for example, Nicotiana, Arabidopsis, duckweed, corn, wheat, potato, etc. Bacterial host cells include E. coli and Streptomyces species. Yeast host cells include Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris.
Кроме того, экспрессию антител по изобретению или их антиген-связывающих частей продуцирующими клеточными линиями можно усиливать с использованием множества известных приемов. Например, система экспрессии гена глутаминсинтетазы (система GS) представляет собой обычный подход для усиления экспрессии при определенных условиях. Система GS рассмотрена в целом или частично в связи с патентами EP 0216846, 0256055, 0323997 и 0338841.In addition, the expression of antibodies of the invention or antigen-binding portions thereof by producing cell lines can be enhanced using a variety of known techniques. For example, the glutamine synthetase gene expression system (GS system) is a common approach to enhance expression under certain conditions. The GS system is discussed in whole or in part in connection with patents EP 0216846, 0256055, 0323997 and 0338841.
Вероятно антитела, экспрессируемые различными клеточными линиями или трансгенными животными, будут иметь паттерны гликозилирования, отличные друг от друга. Однако, все антитела, кодируемые молекулами нуклеиновой кислоты, предусмотренными в настоящем описании, или содержащие аминокислотные последовательности, предусмотренные в настоящем описании, представляют собой часть настоящего изобретения, независимо от состояния гликозилирования антител и, в более общем смысле, независимо от присутствия или отсутствия посттрансляционной модификации(й).It is likely that antibodies expressed by different cell lines or transgenic animals will have glycosylation patterns that differ from each other. However, all antibodies encoded by nucleic acid molecules provided herein or containing amino acid sequences provided herein are part of the present invention, regardless of the glycosylation state of the antibodies and, more generally, regardless of the presence or absence of post-translational modification (th).
Фармацевтические композиции.Pharmaceutical compositions.
Другой аспект изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента (или в качестве единственного активного ингредиента) анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, биспецифическую связывающую молекулу или композицию антител по изобретению. Фармацевтическая композиция может содержать любое анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, биспецифическую связывающую молекулу или композицию антител как раскрыто в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции предназначены для улучшения, предотвращения и/или лечения связанного с LAG-3 нарушения и/или злокачественной опухоли. Как используют в настоящем описании, LAG-3-связанное или -опосредованное нарушение относится к нарушению, заболеванию или состоянию, которое улучшают или у которого замедляют прогрессирование посредством модуляции активности LAG-3. В некоторых вариантах осуществления композиции предназначены для активации иммунной системы. В определенных вариантах осуществления композиции предназначены для улучшения, предотвращения и/или лечения злокачественной опухоли, происходящей из таких тканей, как кожа, легкое, кишечник, ободочная кишка, яичник, головной мозг, предстательная железа, почка, мягкие ткани, гематопоэтическая система, голова и шея, печень, мочевой пузырь, молочная железа, желудок, матка и поджелудочная железа. В определенных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой фибросаркому, карциному легких или меланому. В определенных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой глиобластому, глиосаркому или рак толстой кишки. В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции по изобретению предназначены для лечения псориаза.Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition containing as an active ingredient (or as the sole active ingredient) an anti-LAG-3 antibody or an antigen-binding portion thereof, a bispecific binding molecule or an antibody composition of the invention. The pharmaceutical composition may contain any anti-LAG-3 antibody or antigen-binding moiety, bispecific binding molecule, or antibody composition as disclosed herein. In some embodiments, the pharmaceutical compositions are for the amelioration, prevention, and/or treatment of a LAG-3-related disorder and/or cancer. As used herein, a LAG-3-related or β-mediated disorder refers to a disorder, disease or condition that is improved or whose progression is slowed by modulating LAG-3 activity. In some embodiments, the compositions are intended to activate the immune system. In certain embodiments, the compositions are intended to improve, prevent, and/or treat cancer originating from tissues such as skin, lung, intestine, colon, ovary, brain, prostate, kidney, soft tissue, hematopoietic system, head, and neck, liver, bladder, mammary gland, stomach, uterus and pancreas. In certain embodiments, the malignant tumor is a fibrosarcoma, lung carcinoma, or melanoma. In certain embodiments, the malignant tumor is a glioblastoma, gliosarcoma, or colon cancer. In certain embodiments, the pharmaceutical compositions of the invention are for the treatment of psoriasis.
В целом, антитела, антиген-связывающие части и биспецифические связывающие молекулы по изобретению подходят для введения в виде состава в связи с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, например, как описано ниже.In general, the antibodies, antigen-binding moieties and bispecific binding molecules of the invention are suitable for administration as a formulation in association with one or more pharmaceutically acceptable excipients, for example as described below.
Фармацевтические композиции по изобретению должны содержать одно или несколько анти-LAG3 антител, связывающих частей или биспецифических связывающих молекул по изобретению, например, одно или два анmи-LAG-3 антитела, связывающих части или биспецифических связывающих молекулы. В одном из вариантов осуществления композиция содержит одно анти-LAG-3 антитело по изобретению или его связывающую часть.The pharmaceutical compositions of the invention must contain one or more anti-LAG3 antibody binding moieties or bispecific binding molecules of the invention, for example, one or two anti-LAG-3 antibody binding moieties or bispecific binding molecules. In one embodiment, the composition contains one anti-LAG-3 antibody of the invention or a binding portion thereof.
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция может содержать по меньшей мере одно анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, например, одно анти-LAG-3 антитело или часть, и одно или несколько дополнительных антител, которые направлены на один или несколько релевантных рецепторов клеточной поверхности, например, один или несколько релевантных рецепторов злокачественных опухолей.In another embodiment, the pharmaceutical composition may contain at least one anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, for example, one anti-LAG-3 antibody or portion, and one or more additional antibodies that are directed to one or more relevant cell surface receptors, for example one or more relevant cancer receptors.
Термин эксципиент используют в настоящем описании для того, чтобы описывать любой ингредиент, отличный от соединения(й) по изобретению. Выбор эксципиента(ов) в значительной степени зависит от таких факторов, как конкретный способ введения, эффект, оказываемый эксципиентом на расThe term excipient is used herein to describe any ingredient other than the compound(s) of the invention. The choice of excipient(s) depends largely on factors such as the specific route of administration, the effect the excipient has on the
- 21 046220 творимость и стабильность, и свойства дозированной формы. Как используют в настоящем описании, фармацевтически приемлемый эксципиент включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и задерживающие абсорбцию средства и т.п., которые физиологически совместимы. Некоторые примеры фармацевтически приемлемых эксципиентов представляют собой воду, солевой раствор, фосфатно-солевой буфер, декстрозу, глицерин, этанол и т.п., а также их сочетания. Во многих случаях в композицию предпочтительно включать изотонические средства, например, сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит, или хлорид натрия. Дополнительные примеры фармацевтически приемлемых веществ представляют собой смачивающие средства или незначительные количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие средства, консерванты или буферы, которые увеличивают срок хранения или эффективность антитела.- 21 046220 solubility and stability, and properties of the dosage form. As used herein, a pharmaceutically acceptable excipient includes any and all solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption delaying agents, and the like that are physiologically compatible. Some examples of pharmaceutically acceptable excipients are water, saline, phosphate-buffered saline, dextrose, glycerol, ethanol, and the like, and combinations thereof. In many cases, it is preferable to include isotonic agents in the composition, for example, sugars, polyhydric alcohols such as mannitol, sorbitol, or sodium chloride. Additional examples of pharmaceutically acceptable substances are wetting agents or minor amounts of excipients, such as wetting or emulsifying agents, preservatives or buffers, which increase the shelf life or potency of the antibody.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению и способы их получения будут без труда видны специалистам в данной области. Такие композиции и способы их получения можно найти, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, 19-е изд. (Mack Publishing Company, 1995).The pharmaceutical compositions of the present invention and methods for their preparation will be readily apparent to those skilled in the art. Such compositions and methods for their preparation can be found, for example, in Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed. (Mack Publishing Company, 1995).
Фармацевтические композиции предпочтительно изготавливают по условиям GMP (Good Manufacturing Practice).Pharmaceutical compositions are preferably manufactured under GMP (Good Manufacturing Practice) conditions.
Фармацевтическую композицию по изобретению можно получать, упаковывать или продавать партиями, в виде единичной стандартной дозы или в виде множества единичных стандартных доз. Как используют в настоящем описании, стандартная доза представляет собой дискретное количество фармацевтической композиции, содержащей предварительно определяемое количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента в целом равно дозе активного ингредиента, которую следует вводить субъекту, или удобной доле от такой дозы, например, такой как половина или треть такой дозы.The pharmaceutical composition of the invention may be prepared, packaged or sold in batches, as a single unit dose or as a plurality of unit dose units. As used herein, a unit dose is a discrete amount of a pharmaceutical composition containing a predetermined amount of the active ingredient. The amount of active ingredient is generally equal to the dose of active ingredient to be administered to the subject, or a convenient fraction of such dose, such as one-half or one-third of such dose.
Любой способ введения пептидов, белков или антител, принятый в данной области, можно подходящим образом использовать для антител и антиген-связывающих частей по изобретению.Any method of administering peptides, proteins or antibodies accepted in the art can be suitably used for the antibodies and antigen-binding moieties of the invention.
Фармацевтические композиции по изобретению обычно подходят для парентерального введения. Как используют в настоящем описании, парентеральное введение фармацевтической композиции включает любой путь введения, отличающийся физическим нарушением целостности ткани субъекта и введением фармацевтической композиции через брешь в ткани, что таким образом в целом ведет к непосредственному введению в кровоток, в мышцу или во внутренний орган. Парентеральное введение, таким образом, включает, но не ограничиваясь этим, введение фармацевтической композиции посредством инъекции композиции, посредством внесения композиции через хирургический разрез, посредством внесения композиции через проникающее не хирургическое ранение ткани и т.п. В частности, предусмотрено, что парентеральное введение включает, но не ограничиваясь этим, подкожную, внутрибрюшинную, внутримышечную, интрастернальную, внутривенную, внутриартериальную, интратекальную, внутрижелудочковую, внутриуретральную, внутричерепную, внутриопухолевую и интрасиновиальную инъекцию или инфузию; и приемы инфузии при почечном диализе. Также предусмотрены регионарные перфузии. Конкретные варианты осуществления включают внутривенные и подкожные пути.The pharmaceutical compositions of the invention are generally suitable for parenteral administration. As used herein, parenteral administration of a pharmaceutical composition includes any route of administration characterized by physically disrupting the integrity of the subject's tissue and introducing the pharmaceutical composition through a gap in the tissue, thereby generally leading to direct administration into the bloodstream, into a muscle, or into an internal organ. Parenteral administration thus includes, but is not limited to, administration of the pharmaceutical composition by injection of the composition, by administration of the composition through a surgical incision, by administration of the composition through a penetrating non-surgical tissue wound, and the like. In particular, parenteral administration is intended to include, but is not limited to, subcutaneous, intraperitoneal, intramuscular, intrasternal, intravenous, intraarterial, intrathecal, intraventricular, intraurethral, intracranial, intratumoral, and intrasynovial injection or infusion; and infusion techniques for renal dialysis. Regional perfusions are also provided. Specific embodiments include intravenous and subcutaneous routes.
Составы фармацевтической композиции, подходящие для парентерального введения, обычно содержат активный ингредиент в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, таким как стерильная вода или стерильный изотонический солевой раствор. Такие составы можно получать, упаковывать или продавать в форме, подходящей для болюсного введения или для непрерывного введения. Инъецируемые составы можно получать, упаковывать или продавать в стандартной дозированной форме, например, в ампулах или в контейнерах нескольких доз, содержащих консервант. Составы для парентерального введения включают, но не ограничиваясь этим, суспензии, растворы, эмульсии в масляных или водных носителях, пасты и т.п. Такие составы дополнительно могут содержать один или несколько дополнительных ингредиентов, включая в качестве неограничивающих примеров суспендирующее, стабилизирующее или диспергирующее средство. В одном из вариантов осуществления состава для парентерального введения активный ингредиент предоставляют в сухой (то есть порошковой или гранулированной) форме для восстановления с использованием подходящего носителя (например, стерильной апирогенной воды) перед парентеральным введением восстановленной композиции. Парентеральные составы также включают водные растворы, которые могут содержать эксципиенты, такие как соли, углеводы и буферные средства (предпочтительно при pH от 3 до 9), но для некоторых применений их можно более подходящим образом формулировать в виде стерильного неводного раствора или в виде высушенной формы, подлежащей использованию в сочетании с подходящим носителем, таким как стерильная апирогенная вода. Образцовые формы для парентерального введения включают растворы или суспензии в стерильных водных растворах, например, водных растворах пропиленгликоля или декстрозы. При желании, такие дозированные формы можно подходящим образом забуферить. Другие парентерально вводимые составы, которые можно использовать, включают те, которые содержат активный ингредиент в микрокристаллической форме или в липосомном препарате. Составы для парентерального введения можно формулировать для незамедлительного и/или модифицированного высвобождения. Составы с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, импульсное, контролируемое, направленное и программируемое высвобождение.Pharmaceutical composition formulations suitable for parenteral administration typically contain the active ingredient in combination with a pharmaceutically acceptable carrier, such as sterile water or sterile isotonic saline solution. Such formulations may be prepared, packaged or sold in a form suitable for bolus administration or for continuous administration. Injectable formulations may be prepared, packaged or sold in unit dosage form, such as ampoules or multi-dose containers containing a preservative. Formulations for parenteral administration include, but are not limited to, suspensions, solutions, emulsions in oily or aqueous vehicles, pastes, and the like. Such formulations may further contain one or more additional ingredients, including, but not limited to, a suspending, stabilizing or dispersing agent. In one embodiment of a parenteral formulation, the active ingredient is provided in dry (ie, powder or granular) form for reconstitution using a suitable vehicle (eg, sterile pyrogen-free water) prior to parenteral administration of the reconstituted composition. Parenteral formulations also include aqueous solutions that may contain excipients such as salts, carbohydrates and buffering agents (preferably pH 3 to 9), but for some applications they may be more suitably formulated as a sterile non-aqueous solution or in a dried form , to be used in combination with a suitable vehicle such as sterile pyrogen-free water. Exemplary forms for parenteral administration include solutions or suspensions in sterile aqueous solutions, for example, aqueous solutions of propylene glycol or dextrose. If desired, such dosage forms can be suitably buffered. Other parenterally administered formulations that may be used include those containing the active ingredient in microcrystalline form or in a liposomal formulation. Formulations for parenteral administration can be formulated for immediate and/or modified release. Modified release formulations include delayed, sustained, pulsed, controlled, targeted and programmable release.
- 22 046220- 22 046220
Например, в одном из аспектов стерильные инъецируемые растворы можно получать посредством встраивания анти-LAG-3 антитела, его антиген-связывающей части, биспецифической связывающей молекулы или композиции антител в требуемом количестве в подходящий растворитель с одним или комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, при необходимости, после чего следует стерилизация фильтрованием. В целом, дисперсии получают посредством встраивания активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты из тех, что перечислены выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъецируемых растворов, предпочтительные способы получения представляют собой вакуумную сушку и лиофилизацию, которая дает порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из его раствора, предварительно стерилизованного фильтрованием. Надлежащую текучесть раствора можно поддерживать, например, с помощью покрытия, такого как лецитин, посредством поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии, и с помощью поверхностно-активных средств. Пролонгированную абсорбцию инъецируемых композиций можно обеспечивать посредством включения в композицию средства, которое задерживает абсорбцию, например, солей моностеаратов и желатина, и/или посредством использования покрытий с модифицированным высвобождением (например, покрытий с медленным высвобождением).For example, in one aspect, sterile injectable solutions can be prepared by incorporating an anti-LAG-3 antibody, an antigen binding portion thereof, a bispecific binding molecule, or an antibody composition in the required amount into a suitable diluent with one or a combination of the ingredients listed above, as appropriate, followed by sterilization by filtration. In general, dispersions are prepared by incorporating the active compound into a sterile vehicle that contains the basic dispersion medium and the necessary other ingredients from those listed above. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, the preferred methods of preparation are vacuum drying and lyophilization, which yields a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from its solution, previously sterilized by filtration. Proper fluidity of the solution can be maintained, for example, by using a coating such as lecithin, by maintaining the desired particle size in the case of a dispersion, and by using surfactants. Prolonged absorption of injectable compositions can be achieved by including in the composition an agent that delays absorption, for example, monostearate and gelatin salts, and/or through the use of modified release coatings (eg, slow release coatings).
Антитела по изобретению также можно вводить интраназально или посредством ингаляции, обычно в форме сухого порошка (отдельно, в виде смеси или в виде смешанных частиц компонентов, например, смешанных с подходящим фармацевтически приемлемым эксципиентом) из ингалятора сухого порошка, в виде аэрозольного спрея из контейнера под давлением, насоса, спрея, атомизатора (предпочтительно атомизатора, использующего электрогидродинамику для получения мелкодисперсного тумана) или небулайзера, с использованием или без использования подходящего пропеллента, или в виде назальных капель.Antibodies of the invention can also be administered intranasally or by inhalation, typically in the form of a dry powder (alone, as a mixture, or as mixed particulate components, e.g., mixed with a suitable pharmaceutically acceptable excipient) from a dry powder inhaler, as an aerosol spray from a container under pressure, pump, spray, atomizer (preferably an atomizer using electrohydrodynamics to produce a fine mist) or nebulizer, with or without the use of a suitable propellant, or in the form of nasal drops.
Контейнер под давлением, насос, спрей, атомизатор или небулайзер в целом содержит раствор или суспензию антитела по изобретению, которые содержат, например, подходящее средство для диспергирования, солюбилизации или продления высвобождения активного средства, пропеллент(ы) в качестве растворителя.The pressurized container, pump, spray, atomizer or nebulizer generally contains a solution or suspension of the antibody of the invention, which contains, for example, a suitable agent for dispersing, solubilizing or prolonging the release of the active agent, propellant(s) as a solvent.
Перед использованием в сухом порошковом или суспензионном составе, лекарственный продукт в целом микронизируют до размера, подходящего для доставки посредством ингаляции (обычно меньше 5 мкм). Этого можно достигать любым подходящим способом измельчения, таким как размол на спиральной струйной мельнице, размол на струйной мельнице с кипящим слоем, обработка сверхкритического текучего вещества для формирования наночастиц, гомогенизация высокого давления или распылительная сушка.Before use in a dry powder or suspension formulation, the entire drug product is micronized to a size suitable for delivery by inhalation (typically less than 5 microns). This can be achieved by any suitable comminution method, such as spiral jet milling, fluidized bed jet milling, supercritical fluid processing to form nanoparticles, high pressure homogenization, or spray drying.
Для использования в ингаляторе или инсуффляторе можно формулировать капсулы, блистеры и картриджи, содержащие порошковую смесь соединения по изобретению, подходящей порошковой основы и модификатора эксплуатационных характеристик.For use in an inhaler or insufflator, capsules, blisters and cartridges can be formulated containing a powder mixture of a compound of the invention, a suitable powder base and a performance modifier.
Подходящий состав раствора для использования в атомизаторе с использованием электрогидродинамики для получения мелкодисперсного тумана может содержать подходящую дозу антитела по изобретению на приведение в действие и объем приведения в действие, например, может варьировать от 1 мкл до 100 мкл.A suitable solution composition for use in an electrohydrodynamic atomizer to produce a fine mist may contain a suitable dose of the antibody of the invention per actuation and the actuation volume, for example, may vary from 1 μl to 100 μl.
Можно формулировать составы для ингаляционного/интраназального введения с незамедлительным и/или модифицированным высвобождением. Составы с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, импульсное, контролируемое, направленное и программируемое высвобождение.Immediate and/or modified release formulations may be formulated for inhalation/intranasal administration. Modified release formulations include delayed, sustained, pulsed, controlled, targeted and programmable release.
В случае ингаляторов сухого порошка и аэрозолей, единицу дозирования определяют с помощью клапана, который доставляет отмеренное количество. Единицы в соответствии с изобретением обычно устраивают так, чтобы вводить отмеренную дозу или пшик антитела по изобретению. Общую суточную дозу обычно вводят в однократной дозе или, более обычно, в виде разделенных доз на всем протяжении суток.In the case of dry powder and aerosol inhalers, the dosage unit is determined by a valve that delivers a metered amount. Units in accordance with the invention are typically designed to administer a metered dose or zilch of the antibody of the invention. The total daily dose is usually administered in a single dose or, more usually, in divided doses throughout the day.
Антитела и части антител по изобретению также можно формулировать для введения через оральный путь. Оральное введение может включать проглатывание с тем, чтобы соединение попадало в желудочно-кишечный тракт, и/или буккальное, лингвальное или сублингвальное введение, посредством которого соединение попадает в кровоток непосредственно изо рта.Antibodies and antibody portions of the invention can also be formulated for administration via the oral route. Oral administration may include ingestion, so that the compound enters the gastrointestinal tract, and/or buccal, lingual or sublingual administration, whereby the compound enters the bloodstream directly from the mouth.
Составы, подходящие для орального введения, включают твердые, полутвердые и жидкие системы, такие как таблетки; мягкие или твердые капсулы, содержащие мульти- или наночастицы, жидкости или порошки; пастилки (в том числе заполненные жидкостью); жвачки; гели; быстро диспергируемые дозированные формы; пленки; суппозитории; спреи; и буккальные/мукоадгезивные пластыри.Formulations suitable for oral administration include solid, semi-solid and liquid systems such as tablets; soft or hard capsules containing multi- or nanoparticles, liquids or powders; lozenges (including those filled with liquid); chewing gum; gels; rapidly dispersible dosage forms; films; suppositories; sprays; and buccal/mucoadhesive patches.
Жидкие составы включают суспензии, растворы, сиропы и крепкие настои. Такие составы можно использовать в качестве наполнителей в мягких или твердых капсулах (выполненных, например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы), и обычно они содержат носитель, например, воду, этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло, и одно или несколько эмульгирующих средств и/или суспендирующих средств. Жидкие составы также можно получать поLiquid formulations include suspensions, solutions, syrups and infusions. Such formulations can be used as fillers in soft or hard capsules (made, for example, from gelatin or hydroxypropyl methylcellulose) and typically contain a carrier, for example, water, ethanol, polyethylene glycol, propylene glycol, methylcellulose or a suitable oil, and one or more emulsifying agents and/or suspending agents. Liquid formulations can also be prepared by
- 23 046220 средством восстановления твердого вещества, например, из саше.- 23 046220 means for the recovery of solid matter, for example from a sachet.
Терапевтическое применение антител и композиций по изобретению.Therapeutic use of antibodies and compositions according to the invention.
В одном из аспектов, анти-LAG-3 антитела и их антиген-связывающие части, композиции против LAG-3 и биспецифические связывающие молекулы по изобретению используют для усиления или активации иммунной системы у человека, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет иммунную супрессию. Например, врач может повышать активность собственной иммунной системы пациента против злокачественной опухоли посредством введения анти-LAG-3 антитела по настоящему изобретению, отдельно или в комбинации с другими терапевтическими средствами (последовательно или параллельно). антитело к LAG-3 модулирует активность LAG-3 в клетках иммунной системы, что ведет к усилению иммунитета против злокачественной опухоли.In one aspect, anti-LAG-3 antibodies and antigen-binding moieties thereof, anti-LAG-3 compositions and bispecific binding molecules of the invention are used to enhance or activate the immune system in a person in need thereof. In some embodiments, the patient is immune suppressed. For example, a physician may enhance the activity of a patient's own immune system against cancer by administering an anti-LAG-3 antibody of the present invention, alone or in combination with other therapeutic agents (sequentially or in parallel). anti-LAG-3 antibody modulates the activity of LAG-3 in cells of the immune system, which leads to enhanced immunity against malignant tumors.
В определенных вариантах осуществления антитело или его антиген-связывающая часть, композиция или биспецифическая связывающая молекула предназначены для использования в лечении злокачественной опухоли, например, злокачественных опухолей, которые происходят из тканей, таких как кожа, легкое, кишечник, ободочная кишка, яичник, головной мозг, предстательная железа, почка, мягкие ткани, гематопоэтическая система, голова и шея, печень, мочевой пузырь, молочная железа, желудок, матка и поджелудочная железа и любые злокачественные опухоли или другие состояния, которые зависят от активности LAG-3 и/или при которых пациент экспрессирует или сверхэкспрессирует лиганд LAG-3 (например, MHCII, LSECtin или оба).In certain embodiments, the antibody or antigen-binding portion, composition, or bispecific binding molecule thereof is for use in the treatment of a cancer, e.g., cancers that originate from tissues such as skin, lung, intestine, colon, ovary, brain , prostate, kidney, soft tissue, hematopoietic system, head and neck, liver, bladder, breast, stomach, uterus and pancreas and any malignancies or other conditions that depend on LAG-3 activity and/or in which the patient expresses or overexpresses a LAG-3 ligand (eg, MHCII, LSECtin, or both).
В некоторых вариантах осуществления злокачественные опухоли, которые лечат антителами против LAG-3, антиген-связывающими частями, биспецифическими связывающими молекулами и/или композициями антител по изобретению, могут включать, например, меланому (например, распространенную или метастатическую меланому), немелкоклеточный рак легких, плоскоклеточную злокачественную опухоль головы и шеи, почечноклеточную карциному, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, глиобластому, глиому, плоскоклеточную злокачественную опухоль легких, мелкоклеточную злокачественную опухоль легких, гепатоцеллюлярную карциному, злокачественную опухоль мочевого пузыря, злокачественную опухоль верхних мочевых путей, злокачественную опухоль пищевода, злокачественную опухоль гастроэзофагеального перехода, злокачественную опухоль желудка, злокачественную опухоль печени, рак толстой кишки, карциному толстой кишки, множественную миелому, саркомы, острый миелолейкоз, хронический миелолейкоз, миелодиспластический синдром, назофарингеальную злокачественную опухоль, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, злокачественную опухоль яичников, злокачественную опухоль желудочно-кишечного тракта, первичную перитонеальную злокачественную опухоль, злокачественную опухоль фаллопиевой трубы, уротелиальную злокачественную опухоль, HTLV-ассоциированный Т-клеточный лейкоз/лимфому, злокачественную опухоль предстательной железы, урогенитальную злокачественную опухоль, менингиому, адренокортикальную злокачественную опухоль, глиосаркому, фибросаркому, злокачественную опухоль почки, злокачественную опухоль молочной железы, злокачественную опухоль поджелудочной железы, злокачественную опухоль эндометрия, базальноклеточную злокачественную опухоль кожи, злокачественную опухоль аппендикса, злокачественную опухоль желчных путей, злокачественную опухоль слюнных желез, распространенную злокачественную опухоль из клеток Меркеля, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, фолликулярную лимфому, мезотелиому или солидные опухоли. Злокачественная опухоль может быть, например, на ранней, промежуточной, поздней или метастатической стадии.In some embodiments, cancers that are treated with anti-LAG-3 antibodies, antigen binding moieties, bispecific binding molecules, and/or antibody compositions of the invention may include, for example, melanoma (e.g., advanced or metastatic melanoma), non-small cell lung cancer, squamous cell malignant tumor of the head and neck, renal cell carcinoma, Hodgkin's lymphoma, non-Hodgkin's lymphoma, glioblastoma, glioma, squamous cell malignant tumor of the lung, small cell malignant lung tumor, hepatocellular carcinoma, malignant tumor of the bladder, malignant tumor of the upper urinary tract, malignant tumor of the esophagus, malignant tumor gastroesophageal transition, malignant tumor of the stomach, malignant liver tumor, colon cancer, carcino colon carcinum, multiple myeloma, sarcoma, acute myelolecosis, chronic myelocosis, myelodesplastic syndrome, nasopharyngeal, chronic lymphocytic leukemia, small lymphosis, smallly leukemia cell lymphocytic lymphoma, malignant ovarian tumor, gastrointestinal malignancy, primary peritoneal malignancy, fallopian tube malignancy, urothelial malignancy, HTLV-associated T-cell leukemia/lymphoma, prostate malignancy, urogenital malignancy, meningioma, adrenocortical malignancy, gliosarcoma , fibrosarcoma, malignant kidney tumor, malignant breast tumor, malignant tumor of the pancreas, malignant tumor of the endometrium, basal cell malignant tumor of the skin, malignant tumor of the appendix, malignant tumor of the biliary tract, malignant tumor of the salivary glands, advanced malignant Merkel cell tumor, diffuse large cell B -cellular lymphoma, follicular lymphoma, mesothelioma or solid tumors. A malignant tumor may be, for example, at an early, intermediate, late or metastatic stage.
В некоторых вариантах осуществления злокачественные опухоли, которые лечат антителами против LAG-3, антиген-связывающими частями, композициями и/или биспецифическими связывающими молекулами по изобретению, могут включать, например, гематологические злокачественные новообразования, глиобластому (например, рецидивирующую глиобластому), глиосаркому, немелкоклеточный рак легких (например, распространенную немелкоклеточный рак легких), рак толстой кишки и солидные опухоли.In some embodiments, the cancers that are treated with anti-LAG-3 antibodies, antigen-binding moieties, compositions, and/or bispecific binding molecules of the invention may include, for example, hematologic malignancies, glioblastoma (eg, recurrent glioblastoma), gliosarcoma, non-small cell lung cancer (eg, advanced non-small cell lung cancer), colon cancer and solid tumors.
В одном из аспектов анти-LAG-3 антитела и их антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно использовать для лечения иммунно-опосредованного нарушения, такого как псориаз, системная красная волчанка, MLS (склероз), болезнь Крона, сахарный диабет и/или язвенный колит.In one aspect, anti-LAG-3 antibodies and their antigen-binding portions, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention can be used to treat an immune-mediated disorder such as psoriasis, systemic lupus erythematosus, MLS (sclerosis), Crohn's disease, diabetes mellitus and/or ulcerative colitis.
В некоторых вариантах осуществления анти-LAG-3 антитела и их антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно использовать для лечения вирусных и/или паразитарных инфекций, например, при которых патогены подавляют иммунный ответ хозяина. Например, патогеном может быть HIV, гепатит (А, В или С), вирус папилломы человека (HPV), вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCMV), аденовирус, флавивирус, эховирус, риновирус, вирус Коксаки, коронавирус, респираторный синцитиальный вирус, вирус паротита, ротавирус, вирус кори, вирус краснухи, парвовирус, вирус осповакцины, человек Т-лимфотропный вирус человека (HTLV), вирус денге, вирус моллюска, полиовирус, вирус бешенства, вирус Джона Каннингема (JC), вирус арбовирусного энцефалита, вирус иммунодефицита обезьян (SIV), грипп, герпес, лямблия, малярия, лейшмания, Staphylococcus aureus или Pseudomonas aeruginosa.In some embodiments, anti-LAG-3 antibodies and antigen-binding portions thereof, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention can be used to treat viral and/or parasitic infections, for example, in which pathogens suppress the host's immune response. For example, the pathogen may be HIV, hepatitis (A, B or C), human papillomavirus (HPV), lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV), adenovirus, flavivirus, echovirus, rhinovirus, coxsackievirus, coronavirus, respiratory syncytial virus, mumps virus, rotavirus, measles virus, rubella virus, parvovirus, vaccinia virus, human human T-lymphotropic virus (HTLV), dengue virus, molluscan virus, poliovirus, rabies virus, John Cunningham virus (JC), arboviral encephalitis virus, simian immunodeficiency virus (SIV) ), influenza, herpes, giardia, malaria, leishmania, Staphylococcus aureus or Pseudomonas aeruginosa.
- 24 046220- 24 046220
В некоторых вариантах осуществления aHTu-LAG-3 антитела и их антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно использовать для лечения пациента с ослабленным иммунитетом или у которого имеется риск ослабленного иммунитета (например, из-за химиотерапии или лучевой терапии).In some embodiments, aHTu-LAG-3 antibodies and antigen-binding portions thereof, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention may be used to treat a patient who is immunocompromised or who is at risk of being immunocompromised (eg, due to chemotherapy or radiation therapy ).
В некоторых вариантах осуществления aнти-LAG-3 антитела и их антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно использовать для активации и деления антиген-специфических Т-клеток ex vivo.In some embodiments, anti-LAG-3 antibodies and antigen-binding portions thereof, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention can be used to activate and divide antigen-specific T cells ex vivo.
Лечить, лечащий и лечение относятся к способу облегчения или устранения биологического нарушения и/или по меньшей мере одного из сопутствующих ему симптомов. Как используют в настоящем описании, облегчать заболевание, нарушение или состояние обозначает снижать тяжесть и/или частоту возникновения симптомов заболевания, нарушения или состояния. Кроме того, в настоящем описании отсылки к лечению включают отсылки к излечивающему, паллиативному и профилактическому лечению.Treat, treating and treatment refer to a method of alleviating or eliminating a biological disorder and/or at least one of its accompanying symptoms. As used herein, to alleviate a disease, disorder or condition means to reduce the severity and/or frequency of symptoms of the disease, disorder or condition. In addition, as used herein, references to treatment include references to curative, palliative and prophylactic treatment.
Терапевтически эффективное количество относится ко вводимому количеству терапевтического средства, которое будет облегчать в определенной степени один или несколько симптомов нарушения, подлежащего лечению. Терапевтически эффективное количество терапевтического средства против злокачественной опухоли, например, ведет к уменьшению размеров опухоли, увеличенной выживаемости, элиминации клеток злокачественной опухоли, сниженному прогрессированию заболевания, обращению метастазов или другим клиническим конечным точкам, которые желательны для работников здравоохранения.A therapeutically effective amount refers to an administered amount of a therapeutic agent that will alleviate, to a certain extent, one or more symptoms of the disorder being treated. A therapeutically effective amount of a cancer therapeutic agent, for example, leads to tumor shrinkage, increased survival, cancer cell clearance, reduced disease progression, metastasis reversal, or other clinical endpoints that are desirable to healthcare professionals.
Ahtu-LAG-З антитела или их антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными средствами или антителами (или в виде любого их сочетания). Фармацевтические композиции, способы и использования по изобретению, таким образом, также охватывают варианты осуществления комбинаций (совместное введение) с другими активными средствами, как подробно изложено далее.Ahtu-LAG-3 antibodies or antigen-binding portions thereof, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention may be administered alone or in combination with one or more other drugs or antibodies (or any combination thereof). The pharmaceutical compositions, methods and uses of the invention thus also include embodiments of combinations (co-administration) with other active agents, as detailed below.
Как используют в настоящем описании, термины совместное введение, совместно вводимый и в комбинации с, в отношении aнти-LAG-3 антител и их антиген-связывающих частей, композиций антител и биспецифических связывающих молекул по изобретению с одним или несколькими другими терапевтическими средствами, предназначен для того, чтобы обозначать и ссылаться на и включать следующее:As used herein, the terms co-administration, co-administration and in combination with, with respect to anti-LAG-3 antibodies and antigen-binding moieties thereof, antibody compositions and bispecific binding molecules of the invention with one or more other therapeutic agents, are intended to to designate and refer to and include the following:
a) одновременное введение такой комбинации антитела/антиген-связывающей части/композиции антител/биспецифической связывающей молекулы по изобретению и терапевтического средства (в) больному, когда такие компоненты формулируют вместе в одной дозированной форме, которая высвобождает указанные компоненты указанному пациенту по существу одновременно,a) simultaneous administration of such combination of antibody/antigen binding moiety/antibody composition/bispecific binding molecule of the invention and a therapeutic agent (c) to a patient, where such components are formulated together in a single dosage form that releases said components to said patient substantially simultaneously,
b) по существу одновременное введение такой комбинации антитела/антиген-связывающей части/композиции антител/биспецифической связывающей молекулы по изобретению и терапевтического средства(в) больному, когда такие компоненты формулируют отдельно друг от друга в отдельных дозированных формах, которые указанный пациент принимает по существу одновременно, после чего происходит по существу одновременное высвобождение указанных компонентов указанному пациенту,b) substantially simultaneous administration of such combination of antibody/antigen binding moiety/antibody composition/bispecific binding molecule of the invention and therapeutic agent(s) to a patient, where such components are formulated separately from each other in separate dosage forms, which said patient takes substantially simultaneously, followed by substantially simultaneous release of said components to said patient,
c) последовательное введение такой комбинации антитела/антиген-связывающей части/композиции антител/биспецифической связывающей молекулы по изобретению и терапевтического средства(в) больному, когда такие компоненты вводят в состав отдельно друг от друга в дозированные лекарственные формы, которые указанный пациент принимает последовательно во времени со значительным временным интервалом между каждым введением, в связи с чем происходит поступление указанных компонентов указанному пациенту по существу в разные моменты времени; иc) sequentially administering such combination of antibody/antigen binding moiety/antibody composition/bispecific binding molecule of the invention and therapeutic agent(s) to a patient, where such components are formulated separately from each other in dosage forms which are taken sequentially by said patient time with a significant time interval between each administration, in connection with which the specified components are delivered to the specified patient at essentially different points in time; And
d) последовательное введение такой комбинации антитела/антиген-связывающей части/композиции антител/биспецифической связывающей молекулы по изобретению и терапевтического средства(в) больному, когда такие компоненты вводят вместе в состав общей дозированной лекарственной формы, которая высвобождает указанные компоненты контролируемым образом, после чего происходит их параллельное, последовательное и/или перекрывающееся поступление указанному пациенту в один и те же и/или различные моменты времени, где каждую часть можно вводить одним и тем же или отличающимся путем.d) sequentially administering such combination of antibody/antigen binding moiety/antibody composition/bispecific binding molecule of the invention and therapeutic agent(s) to a patient, wherein such components are administered together in a common dosage form that releases said components in a controlled manner, thereafter there is parallel, sequential and/or overlapping delivery to the specified patient at the same and/or different points in time, where each part can be administered in the same or different way.
Ahtu-LAG-З антитела и их антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно вводить без дополнительного терапевтического лечения, то есть в виде самостоятельно применяемой терапии (монотерапии). Альтернативно, лечение антителами против LAG-3 и их антиген-связывающими частями, композициями антител или биспецифическими связывающими молекулами по изобретению может включать по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое лечение (комбинированная терапия), например, другое иммуностимулирующее средство, средство против злокачественной опухоли, противовирусное средство или вакцину (например, противоопухолевую вакцину).Ahtu-LAG-3 antibodies and their antigen-binding moieties, antibody compositions or bispecific binding molecules of the invention can be administered without additional therapeutic treatment, that is, as a self-administered therapy (monotherapy). Alternatively, treatment with anti-LAG-3 antibodies and antigen-binding portions thereof, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention may include at least one additional therapeutic treatment (combination therapy), e.g., another immunostimulant agent, an anticancer agent, an antiviral agent or a vaccine (eg, a tumor vaccine).
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антиген-связывающую часть, композициюIn some embodiments, the antibody or antigen-binding portion thereof, the composition
- 25 046220 антител или биспецифическую связывающую молекулу можно совместно вводить или формулировать с другим лекарством/лекарственным средством для лечения злокачественной опухоли. Дополнительное терапевтическое лечение может включать, например, химиотерапевтическое, антинеопластическое или антиангиогенное средство, другое антитело против злокачественной опухоли и/или лучевую терапию.- 25 046220 antibodies or bispecific binding molecule can be co-administered or formulated with another drug/drug for the treatment of cancer. Additional therapeutic treatment may include, for example, a chemotherapeutic, antineoplastic or antiangiogenic agent, another anti-cancer antibody, and/or radiation therapy.
Посредством объединения антител или их антиген-связывающих частей, композиций антител или биспецифических связывающих молекул по изобретению со средствами, которые доподлинно индуцируют терминальную дифференцировку клеток злокачественной опухоли, эффект можно усовершенствовать дополнительно. Такие соединения, например, можно выбирать из группы, состоящей из ретиноевой кислоты, транс-ретиноевых кислот, цис-ретиноевых кислот, фенилбутирата, фактора роста нервов, диметилсульфоксида, активной формы витамина D3, активированного пролифератором пероксисом рецептора γ, 12-O-тетрадеканоилфорбол-13-ацетата, гексаметилен-бис-ацетамид, трансформирующего фактора роста β, масляной кислоты, циклического AMP и веснаринона. В некоторых вариантах осуществления соединение выбирают из группы, состоящей из ретиноевой кислоты, фенилбутирата, полностью трансретиноевой кислоты и активной формы витамина D.By combining antibodies or antigen-binding portions thereof, antibody compositions or bispecific binding molecules of the invention with agents that reliably induce terminal differentiation of cancer cells, the effect can be further enhanced. Such compounds, for example, may be selected from the group consisting of retinoic acid, trans-retinoic acids, cis-retinoic acids, phenylbutyrate, nerve growth factor, dimethyl sulfoxide, active form of vitamin D3, peroxisome proliferator-activated receptor-γ, 12-O-tetradecanoylphorbol- 13-acetate, hexamethylene bis-acetamide, transforming growth factor β, butyric acid, cyclic AMP and vesnarinone. In some embodiments, the compound is selected from the group consisting of retinoic acid, phenylbutyrate, all-trans retinoic acid, and the active form of vitamin D.
Фармацевтические изделия, содержащие анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, композицию антител или биспецифическую связывающую молекулу по изобретению и по меньшей мере одно другое средство (например, химиотерапевтическое, антинеопластическое или антиангиогенное средство) можно использовать в качестве комбинированного лечения для одновременного, раздельного или последовательного введения при терапии злокачественной опухоли. Другое средство может представлять собой любое средство, подходящее для лечения конкретной рассматриваемой злокачественной опухоли, например, средство, выбранное из группы, состоящей из алкилирующих средств, например, производных платины, таких как цисплатин, карбоплатин и/или оксалиплатин; растительных алкалоидов, например, паклитаксела, доцетаксела и/или иринотекана; противоопухолевых антибиотиков, например, доксорубицина (адриамицина), даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, митоксантрона, дактиномицина, блеомицина, актиномицина, лутеомицина и/или митомицина; ингибиторов топоизомеразы, таких как топотекан; и/или антиметаболитов, например, фторурацила и/или других фторпиримидинов. В некоторых вариантах осуществления другим средством является дакарбазин или гемцитабин.Pharmaceutical products containing an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, an antibody composition, or a bispecific binding molecule of the invention and at least one other agent (e.g., a chemotherapeutic, antineoplastic, or antiangiogenic agent) can be used as a combination treatment to simultaneously , separate or sequential administration in the treatment of a malignant tumor. The other agent may be any agent suitable for treating the particular cancer in question, for example, an agent selected from the group consisting of alkylating agents, for example, platinum derivatives such as cisplatin, carboplatin and/or oxaliplatin; plant alkaloids, for example, paclitaxel, docetaxel and/or irinotecan; antitumor antibiotics, for example, doxorubicin (Adriamycin), daunorubicin, epirubicin, idarubicin, mitoxantrone, dactinomycin, bleomycin, actinomycin, luteomycin and/or mitomycin; topoisomerase inhibitors such as topotecan; and/or antimetabolites, for example, fluorouracil and/or other fluoropyrimidines. In some embodiments, the other agent is dacarbazine or gemcitabine.
Ahtu-LAG-З антитело или его антиген-связывающую часть, композицию антител или биспецифическую связывающую молекулу по изобретению также можно использовать в комбинации с другой терапией против злокачественной опухоли, такой как вакцины, цитокины, ингибиторы ферментов, иммуностимулирующие соединения и Т-клеточная терапия. В случае вакцины, например, она может представлять собой белковую, пептидную или ДНК вакцину, содержащую один или несколько антигенов, которые релевантны для злокачественной опухоли, подлежащей лечению, или вакцину, содержащую дендритные клетки наряду с антигеном. Подходящие цитокины включают, например, IL-2, IFN-γ и GMCSF. Примером типа ингибитора фермента, который обладает активностью против злокачественной опухоли, является ингибитор индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), например, 1-метил-Э-триптофан (1-DMT). Адоптивная Т-клеточная терапия относится к различным иммунотерапевтическим приемам, которые включают размножение или изменение собственных Т-клеток пациентов для того, чтобы они распознавали и атаковали свои опухоли.The Ahtu-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, antibody composition, or bispecific binding molecule of the invention may also be used in combination with other cancer therapies such as vaccines, cytokines, enzyme inhibitors, immunostimulatory compounds, and T-cell therapies. In the case of a vaccine, for example, it may be a protein, peptide or DNA vaccine containing one or more antigens that are relevant for the cancer being treated, or a vaccine containing dendritic cells along with the antigen. Suitable cytokines include, for example, IL-2, IFN-γ and GMCSF. An example of a type of enzyme inhibitor that has activity against cancer is an indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) inhibitor, such as 1-methyl-E-tryptophan (1-DMT). Adoptive T-cell therapy refers to various immunotherapies that involve expanding or modifying patients' own T cells so that they recognize and attack their tumors.
Также предусмотрено, что анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, композицию антител или биспецифическую связывающую молекулу по изобретению можно использовать в смежной терапии в связи с ингибиторами тирозинкиназы. Они представляют собой синтетические молекулы низкой молекулярной массы, преимущественно производные хиназолина, которые взаимодействуют с внутриклеточным доменом тирозинкиназы рецепторов и ингибируют индуцированное лигандом фосфорилирование рецептора посредством конкуренции за внутриклеточный сайт связывания Mg-АТР.It is also contemplated that an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, an antibody composition, or a bispecific binding molecule of the invention may be used in related therapy in connection with tyrosine kinase inhibitors. They are low molecular weight synthetic molecules, predominantly quinazoline derivatives, that interact with the intracellular receptor tyrosine kinase domain and inhibit ligand-induced receptor phosphorylation by competing for the intracellular Mg-ATP binding site.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антиген-связывающую часть, композицию антител или биспецифическую связывающую молекулу можно использовать в комбинации с другим лекарством/лекарственным средством, которое опосредует активацию иммунной системы, включая в качестве неограничивающих примеров, средство, которое модулирует экспрессию или активность A2AR, BTLA, B7-H3, В7-Н4, CTLA-4, CD27, CD28, CD40, CD47, CD55, CD73, CD122, CD137, CD160, CGEN15049, CHK1, CHK2, CTLA-3, СЕАСАМ (например, СЕАСАМ-1 и/или СЕАСАМ-5), GAL9, GITR, HVEM, LY108, LAIR1, ICOS, IDO, KIR, LAIR1, PD-1/PD-L1/PD-L2, ОХ40, TIGIT, TIM-3, TGFR-β, VISTA, LILRB2, СМТМ6 и/или 2В4. В определенных вариантах осуществления средством является антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который связывается с одной из вышеуказанных молекул. Также предусмотрено, что анти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, композицию антител или биспецифическую связывающую молекулу по изобретению можно использовать в комбинации с цитокином (например, IL-1, IL-2, IL-12, IL-15 или IL-21), ингибитором EGFR, ингибитором VEGF и т.д.In some embodiments, an antibody or an antigen-binding portion thereof, an antibody composition, or a bispecific binding molecule may be used in combination with another drug/drug that mediates activation of the immune system, including, but not limited to, an agent that modulates A2AR expression or activity, BTLA, B7-H3, B7-H4, CTLA-4, CD27, CD28, CD40, CD47, CD55, CD73, CD122, CD137, CD160, CGEN15049, CHK1, CHK2, CTLA-3, SEACAM (for example, SEACAM-1 and /or SEACAM-5), GAL9, GITR, HVEM, LY108, LAIR1, ICOS, IDO, KIR, LAIR1, PD-1/PD-L1/PD-L2, OX40, TIGIT, TIM-3, TGFR-β, VISTA , LILRB2, SMTM6 and/or 2B4. In certain embodiments, the agent is an antibody or an antigen-binding fragment thereof that binds to one of the above molecules. It is also contemplated that an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, antibody composition, or bispecific binding molecule of the invention may be used in combination with a cytokine (e.g., IL-1, IL-2, IL-12, IL-15, or IL-21), EGFR inhibitor, VEGF inhibitor, etc.
В определенных аспектах антитела и антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно вводить в комбинации с другим ингибитором пути LAG-3, который может быть направлен на LAG-3 или один или несколько его лигандов. ПриIn certain aspects, the antibodies and antigen binding moieties, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention may be administered in combination with another LAG-3 pathway inhibitor, which may target LAG-3 or one or more of its ligands. At
- 26 046220 меры таких ингибиторов включают другие aHTu-LAG-З антитела, антитела против MHCII, антитела против галектина-3 и антитела против LSECtin. В некоторых вариантах осуществления aнти-LAG-3 антитело или его антиген-связывающую часть, биспецифическое антитело или композицию антител по изобретению можно вводить в комбинации с BMS-986016, GSK2831781, REGN3767, ВАР050 или BAP050-chi или LAG52 5.- 26 046220 measures of such inhibitors include other aHTu-LAG-3 antibodies, anti-MHCII antibodies, anti-galectin-3 antibodies and anti-LSECtin antibodies. In some embodiments, an anti-LAG-3 antibody or antigen-binding portion thereof, a bispecific antibody or antibody composition of the invention may be administered in combination with BMS-986016, GSK2831781, REGN3767, BAP050 or BAP050-chi or LAG52 5.
Понятно, что антитела и их антиген-связывающие части, композиции антител и биспецифические связывающие молекулы по изобретению можно использовать в способе лечения, как раскрыто в настоящем описании, могут быть для использования в лечении, как раскрыто в настоящем описании, и/или могут быть для использования в изготовлении лекарственного средства для лечения, как раскрыто в настоящем описании. Изобретение также относится к наборам и промышленным изделиям, содержащим антитела и их антиген-связывающие части, композиции антител и биспецифические связывающие молекулы, описанные в настоящем описании.It is understood that the antibodies and antigen-binding portions thereof, antibody compositions, and bispecific binding molecules of the invention can be used in a method of treatment as disclosed herein, can be used in a treatment as disclosed herein, and/or can be used for use in the manufacture of a medicinal product for treatment as disclosed herein. The invention also relates to kits and articles of manufacture containing antibodies and antigen-binding moieties thereof, antibody compositions and bispecific binding molecules described herein.
Доза и путь введения.Dose and route of administration.
Антитела или их антиген-связывающие части, композиции антител или биспецифические связывающие молекулы по изобретению следует вводить в эффективном количестве для лечения рассматриваемого состояния, то есть в дозах и в течение периодов времени, которые необходимы для достижения желаемого результата. Терапевтически эффективное количество может варьировать в соответствии с такими факторами, как конкретное состояние, подлежащее лечению, возраст, пол и масса пациента, и вводят ли антитела в качестве обособленного лечения или в комбинации с одним или несколькими дополнительными лечениями против злокачественных опухолей.Antibodies or antigen-binding portions thereof, antibody compositions, or bispecific binding molecules of the invention should be administered in an effective amount to treat the condition in question, that is, in doses and for periods of time that are necessary to achieve the desired result. The therapeutically effective amount may vary according to factors such as the particular condition being treated, the age, sex and weight of the patient, and whether the antibodies are administered as a stand-alone treatment or in combination with one or more additional anti-cancer treatments.
Схемы дозирования можно корректировать для того, чтобы обеспечивать оптимальный желаемый ответ. Например, можно вводить один болюс, можно вводить несколько разделенных доз с течением времени или дозу можно пропорционально уменьшать или увеличивать, как то указывают потребности терапевтической ситуации. В частности, благоприятно формулировать парентеральные композиции в форме единицы дозирования для облегчения введения и однородности дозы. Форма единицы дозирования, как используют в настоящем описании, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве одинарных доз для пациентов/субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит предварительно определяемое количество активного соединения, которое вычисляют для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Описание для форм единиц дозирования по изобретению в целом продиктовано и непосредственно зависит от (а) уникальных характеристик химиотерапевтического средства и конкретного терапевтического или профилактического эффекта, которого нужно достигнуть, и (b) ограничений, свойственных области компаундирования такого активного соединения для лечения чувствительности у индивидуумов.Dosing regimens can be adjusted to provide the optimal desired response. For example, a single bolus may be administered, multiple divided doses may be administered over time, or the dose may be proportionally decreased or increased as indicated by the needs of the therapeutic situation. In particular, it is advantageous to formulate parenteral compositions in dosage unit form for ease of administration and dose uniformity. Dosage unit form, as used herein, refers to physically discrete units suitable as single doses for patients/subjects to be treated; each unit contains a predetermined amount of active compound, which is calculated to produce the desired therapeutic effect, in combination with the required pharmaceutical carrier. The description for the dosage unit forms of the invention is generally dictated by and directly depends on (a) the unique characteristics of the chemotherapeutic agent and the particular therapeutic or prophylactic effect to be achieved, and (b) the limitations inherent in the field of compounding such an active compound for the treatment of sensitivity in individuals.
Таким образом, специалист в данной области примет во внимание, на основе раскрытия, предоставленного в настоящем описании, что дозу и схему дозирования корректируют в соответствии со способами, общеизвестными области терапии. То есть, можно легко устанавливать максимальную переносимую дозу, а также можно определять эффективное количество, обеспечивающее поддающийся обнаружению терапевтический эффект у пациента, как позволяют временные требования для введения каждого средства, чтобы обеспечивать поддающийся обнаружению терапевтический эффект у пациента. Соответственно, хотя определенная доза и схемы введения приведены в качестве примера в настоящем описании, эти примеры ни коим образом не ограничивают дозу и схему введения, которые можно предоставлять пациенту при практическом осуществлении настоящего изобретения.Thus, one skilled in the art will appreciate, based on the disclosure provided herein, that the dosage and dosage schedule will be adjusted in accordance with methods well known in the art of therapy. That is, the maximum tolerated dose can be easily determined, and the effective amount to provide a detectable therapeutic effect in a patient can be determined as the timing requirements for administering each agent to provide a detectable therapeutic effect in a patient can be determined. Accordingly, although specific dosage and dosage schedules are exemplified herein, these examples do not in any way limit the dosage and dosage schedule that can be provided to a patient in the practice of the present invention.
Следует отметить, что значения доз могут варьировать вместе с типом и тяжестью состояния, подлежащего облегчению, и могут включать однократные и многократные дозы. Кроме того, следует понимать, что у любого конкретного субъекта конкретные схемы дозирования следует корректировать с течением времени в соответствии с индивидуальными потребностями и профессиональным суждением человека, осуществляющего введение или наблюдение за введением композиций, и что диапазоны доз, приведенные в настоящем описании, являются лишь образцовыми и не предназначены для того, чтобы ограничивать объем или практику осуществленной композиции. Кроме того, схема дозирования композиций по данному изобретению может быть основана на различных факторах, включая тип заболевания, возраст, массу, пол, медицинское состояние пациента, тяжесть состояния, путь введения и конкретное используемое антитело. Таким образом, схема дозирования может варьировать широко, но ее можно определять обычным образом, используя стандартные способы. Например, дозы можно корректировать на основе фармакокинетических или фармакодинамических параметров, которые могут включать клинические эффекты, такие как токсические эффекты, и/или лабораторные значения. Таким образом, настоящее изобретение относится к индивидуальному увеличению дозы, как определяет специалист в данной области. Определение подходящих доз и схем общеизвестно в релевантной области, и специалисту в данной области будет понятно, что оно включено в предоставленные положения, раскрытые в настоящем описании.It should be noted that dosage levels may vary with the type and severity of the condition being alleviated and may include single or multiple doses. In addition, it should be understood that in any particular subject, specific dosage regimens should be adjusted over time according to the individual needs and professional judgment of the person administering or supervising the administration of the compositions, and that the dosage ranges provided herein are exemplary only and are not intended to limit the scope or practice of composition performed. In addition, the dosage regimen of the compositions of this invention can be based on various factors, including the type of disease, age, weight, gender, medical condition of the patient, severity of the condition, route of administration and the specific antibody used. Thus, the dosage schedule may vary widely, but can be determined in a conventional manner using standard methods. For example, dosages can be adjusted based on pharmacokinetic or pharmacodynamic parameters, which may include clinical effects, such as toxic effects, and/or laboratory values. Thus, the present invention relates to individual dose escalation, as determined by one skilled in the art. The definition of suitable dosages and schedules is well known in the relevant field, and one skilled in the art will understand that it is included in the provisions disclosed herein.
Предусмотрено, что подходящая доза антитела, антиген-связывающей части, композиции антител или биспецифической связывающей молекулы по изобретению находится в диапазоне 0,1-100 мг/кг, таком как приблизительно 0,5-50 мг/кг, например, приблизительно 1-20 мг/кг. Антитело, антигенIt is contemplated that a suitable dose of the antibody, antigen binding moiety, antibody composition, or bispecific binding molecule of the invention is in the range of 0.1-100 mg/kg, such as about 0.5-50 mg/kg, such as about 1-20 mg/kg. Antibody, antigen
- 27 046220 связывающую часть, композицию антител или биспецифическую связывающую молекулу, например, можно вводить в дозе по меньшей мере 0,25 мг/кг, например, по меньшей мере 0,5 мг/кг, например, по меньшей мере 1 мг/кг, например, по меньшей мере 1,5 мг/кг, например, по меньшей мере 2 мг/кг, например, по меньшей мере 3 мг/кг, например, по меньшей мере 4 мг/кг, например, по меньшей мере 5 мг/кг; и, например, вплоть до самое большее 50 мг/кг, например, вплоть до самое большее 30 мг/кг, например, вплоть до самое большее 20 мг/кг, например, вплоть до самое большее 15 мг/кг. Введение обычно повторяют с подходящими интервалами, например, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели или один раз в четыре недели, и до тех пор, пока это сочтет подходящим ответственный врач, который может необязательно увеличивать или уменьшать дозу по мере необходимости.- 27 046220 the binding moiety, antibody composition or bispecific binding molecule, for example, can be administered at a dose of at least 0.25 mg/kg, for example at least 0.5 mg/kg, for example at least 1 mg/kg , for example at least 1.5 mg/kg, for example at least 2 mg/kg, for example at least 3 mg/kg, for example at least 4 mg/kg, for example at least 5 mg /kg; and, for example, up to at most 50 mg/kg, for example, up to at most 30 mg/kg, for example, up to at most 20 mg/kg, for example, up to at most 15 mg/kg. Administration is usually repeated at suitable intervals, for example once a week, once every two weeks, once every three weeks or once every four weeks, and for as long as deemed appropriate by the responsible physician, who may optionally increase or decrease dose as needed.
Эффективное количество терапии опухоли можно измерять по ее способности стабилизировать прогрессирование заболевания и/или улучшать симптомы у пациента и предпочтительно обращать прогрессирование заболевания, например, посредством уменьшения размера опухоли. Способность антитела, антиген-связывающей части, композиции антител или биспецифической связывающей молекулы по изобретению ингибировать злокачественную опухоль можно оценивать посредством анализов in vitro, например, как описано в примерах, а также в подходящих моделях на животных, которые позволяют предсказывать эффект, оказываемый на опухоли человека. Подходящие схемы дозирования следует выбирать для того, чтобы обеспечивать оптимальный терапевтический ответ в каждой конкретной ситуации, например, введение в виде одного болюса или в виде непрерывной инфузии и с возможной корректировкой дозы, как то указывают потребности каждого случая.An effective amount of tumor therapy can be measured by its ability to stabilize disease progression and/or improve a patient's symptoms and preferably reverse disease progression, for example, by reducing tumor size. The ability of an antibody, antigen binding moiety, antibody composition, or bispecific binding molecule of the invention to inhibit cancer can be assessed by in vitro assays, for example, as described in the Examples, as well as in suitable animal models that predict the effect on human tumors . Appropriate dosage regimens should be selected to provide the optimal therapeutic response in each specific situation, for example, administration as a single bolus or as a continuous infusion and possible dose adjustments as indicated by the needs of each case.
Диагностическое применение и композиции.Diagnostic applications and compositions.
Антитела по настоящему изобретению также можно использовать в диагностических процессах (например, in vitro, ex vivo). Например, антитела можно использовать для того, чтобы обнаруживать и/или измерять уровень LAG-3 в образце от пациента (например, образце ткани или образце текучего вещества организма, такого как воспалительный экссудат, кровь, сыворотка, текучее вещество кишечника, слюна или моча). Подходящие способы обнаружения и измерения включают такие иммунологические способы, как проточная цитометрия, твердофазный иммуносорбентный анализ (ELISA), хемилюминесцентный анализ, радиоиммунологический анализ и иммуногистология. Изобретение дополнительно включает наборы (например, диагностические наборы), содержащие антитела, описанные в настоящем описании.Antibodies of the present invention can also be used in diagnostic processes (eg, in vitro, ex vivo). For example, antibodies can be used to detect and/or measure the level of LAG-3 in a sample from a patient (e.g., a tissue sample or a body fluid sample such as inflammatory exudate, blood, serum, bowel fluid, saliva, or urine) . Suitable detection and measurement methods include immunological methods such as flow cytometry, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), chemiluminescence assay, radioimmunoassay and immunohistology. The invention further includes kits (eg, diagnostic kits) containing the antibodies described herein.
Если не определено иное в настоящем описании, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, должны иметь значения, в которых их обычно понимают средние специалисты в данной области. Образцовые способы и материалы описаны далее, хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, что описаны в настоящем описании, также можно использовать при практической реализации или тестировании настоящего изобретения. В случае противоречия, данное описание, включая определение, имеет решающее значение.Unless otherwise defined herein, scientific and technical terms used in connection with the present invention have the meanings in which they are commonly understood by those of ordinary skill in the art. Exemplary methods and materials are described below, although methods and materials similar or equivalent to those described herein may also be used in practicing or testing the present invention. In case of conflict, this description, including the definition, shall control.
В целом, используемая номенклатура и приемы из культур клеток и тканей, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетики, аналитической химии, синтетической органической химии, медицинской и фармацевтической химии, а также химии белков и нуклеиновых кислот и гибридизации, которые описаны в настоящем описании, являются общеизвестными и широко используемыми в данной области. Ферментативные реакции и приемы очистки осуществляют в соответствии с описаниями производителей, как обычно выполняют в данной области или как раскрыто в настоящем описании.In general, the nomenclature and techniques used from cell and tissue culture, molecular biology, immunology, microbiology, genetics, analytical chemistry, synthetic organic chemistry, medicinal and pharmaceutical chemistry, as well as protein and nucleic acid chemistry and hybridization, which are described herein, are well known and widely used in the art. Enzymatic reactions and purification techniques are carried out in accordance with the manufacturers' descriptions, as typically performed in the art or as disclosed herein.
Кроме того, пока иного не требует контекст, формы единственного числа включают множественное число и формы множественного числа включают единственное число. На всем протяжении это описания и вариантов осуществления, слова иметь и содержать или вариации, такие как имеет, имеющий, содержит или содержащий, следует понимать как подразумевающие включение указанного целого или группы целых, но не исключение любого другого целого или группы целых.In addition, unless the context otherwise requires, singular forms include the plural and plural forms include the singular. Throughout these descriptions and embodiments, the words have and contain, or variations such as has, having, contains, or containing, are to be understood to imply the inclusion of the specified whole or group of wholes, but not the exclusion of any other whole or group of wholes.
Все публикации и другие источники, упомянутые в настоящем описании, включены в данное описание посредством ссылки в полном объеме. Несмотря на то, что в настоящем описании процитировано множество документов, это цитирование не составляет допущение того, что любой из этих документов образует часть общих обычных познаний в данной области.All publications and other sources mentioned herein are incorporated herein by reference in their entirety. Although numerous documents have been cited herein, such citation does not constitute an assumption that any of these documents form part of the general common knowledge in the art.
Для лучшего понимания этого изобретения приведены следующие примеры. Эти примеры служат лишь иллюстративной цели, и их не следует толковать в качестве ограничения объема изобретения каким-либо образом.For a better understanding of this invention, the following examples are provided. These examples are for illustrative purposes only and should not be construed as limiting the scope of the invention in any way.
ПримерыExamples
Пример 1: создание и скрининг репертуаров анти-LAG-3 антител.Example 1: generation and screening of anti-LAG-3 antibody repertoires.
Два репертуара анти-LAG-3 антител создавали посредством иммунизации внеклеточным доменом LAG-3 (ECD) или слитым белком LAG-3 ECD Fc. Одну библиотеку антител получали из одноклеточных сортированных В-клеток от иммунизированных крыс OmniRat® с использованием технологии обнаружения антител Symplex™ (Osborn et al., J Immunol. 190(4): 1481-90 (2013); Meijer et al., J Mol Biol. 358(3): 764-72 (2006)). Экспрессионные конструкции из этого репертуара антител кодировали полностью иммуноглобулины человека в формате IgG1, несущие две мутации (L234A/L235A), которые заведомо снижаTwo anti-LAG-3 antibody repertoires were generated by immunization with LAG-3 extracellular domain (ECD) or LAG-3 ECD Fc fusion protein. One antibody library was generated from single-cell sorted B cells from immunized OmniRat® rats using Symplex™ antibody detection technology (Osborn et al., J Immunol. 190(4): 1481-90 (2013); Meijer et al., J Mol Biol 358(3): 764-72 (2006)). Expression constructs from this antibody repertoire encoded completely human immunoglobulins in the IgG1 format, carrying two mutations (L234A/L235A), which obviously reduce
- 28 046220 ют эффекторную функцию Fc-области антител IgG1 (Hezareh et al., J Virol. 75(24):12161-8 (2001)). Второй репертуар антител конструировали с использованием одноклеточных сортированных В-клеток, происходящих из лимфоидных органов иммунизированных кур дикого типа (Gallus gallus).- 28 046220 show the effector function of the Fc region of IgG1 antibodies (Hezareh et al., J Virol. 75(24):12161-8 (2001)). A second antibody repertoire was constructed using single-cell sorted B cells derived from the lymphoid organs of immunized wild-type chickens (Gallus gallus).
Клонированные антитела из обоих репертуаров против LAG-3 индивидуально трансфицировали и экспрессировали в клетках HEK293 с использованием трансфекционного реактива 293fectin™ (Invitrogen, № по каталогу 12347-019) в 384-луночном формате и собирали антителосодержащие супернатанты в сутки 6 после трансфекции.Cloned anti-LAG-3 antibodies from both repertoires were individually transfected and expressed in HEK293 cells using 293fectin™ transfection reagent (Invitrogen, catalog no. 12347-019) in a 384-well format, and antibody-containing supernatants were collected on day 6 post-transfection.
Для клеточного скрининга антител клетки CHO-S трансфицировали в 384-луночном формате для того, чтобы экспрессировать GPI-заякоренный LAG-3 человека с использованием реактива Freestyle™ MAX (Invitrogen, № по каталогу 16447-100), а клетки, трансфицированные нерелевантным GPIзаякоренным контрольным белком, использовали в качестве отрицательного контроля. Для того чтобы делать возможным проведение мультиплексного скрининга, контрольные клетки метили с использованием сложного эфира карбоксифлуоресцеинсукцинимидила (CFSE) и смешивали с немеченными LAG-3трансфицированными клетками в соотношении 1 к 1 при плотности 1 х 106 клеток на мл. В 384-луночных планшетах 40 мкл это смеси клеток смешивали с 10 мкл антителосодержащего супернатанта, и антитело, связанное с клетками, обнаруживали посредством добавления вторичного антитела AF647 козы против IgG человека (H+L) (Molecular Probes, № по каталогу А21445). Параллельно осуществляли скрининг антител на связывание с LAG-3 яванского макака в схожей постановке. Образцы получали с использованием высокопропускной проточной цитометрии (iQue® Screener, Intellicyt) и анализировали данные с использованием программного обеспечения ForeCyt® посредством построения графика CFSE в зависимости от связывания IgG человека (AF647). LAG-3-специфические первичные попадания идентифицировали как клоны антител, связывающиеся клетками, трансфицированными LAG-3 как человека, так и яванского макака (CSFE-отрицательные), но не с контрольными клетками (CFSE-положительные), и собирали номера планшетов и координаты планшетов для извлечения попаданий и последующего анализа последовательностей.For cellular antibody screening, CHO-S cells were transfected in a 384-well format to express GPI-anchored human LAG-3 using Freestyle™ MAX reagent (Invitrogen, cat. no. 16447-100), and cells transfected with an irrelevant GPI-anchored control protein was used as a negative control. To enable multiplex screening, control cells were labeled using carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) and mixed with unlabeled LAG-3 transfected cells in a 1 to 1 ratio at a density of 1 x 10 6 cells per ml. In 384-well plates, 40 μl of this cell mixture was mixed with 10 μl of antibody supernatant, and cell-bound antibody was detected by adding goat anti-human IgG (H+L) secondary antibody AF647 (Molecular Probes, catalog no. A21445). In parallel, antibodies were screened for binding to cynomolgus monkey LAG-3 in a similar setting. Samples were acquired using high-throughput flow cytometry (iQue® Screener, Intellicyt) and data were analyzed using ForeCyt® software by plotting CFSE versus human IgG binding (AF647). LAG-3-specific primary hits were identified as antibody clones binding to both human and cynomolgus LAG-3-transfected cells (CSFE-negative) but not to control cells (CFSE-positive), and plate numbers and plate coordinates were collected for hit extraction and subsequent sequence analysis.
Последовательности ДНК вариабельных областей тяжелых и легких цепей и белков шести функциональных полученных от OmniRat® анти-LAG-3 антител (15646, 15532, 15723, 15595, 15431 и 15572) и одного функционального полученного от курицы анти-LAG-3 антитела (15011; см. пример 2) предоставлены далее в разделе со списком последовательностей. Обзор SEQ ID NO: последовательностей ДНК вариабельных и константных областей и белков приведен в табл. 8 и 9. SEQ ID NO: для CDR находятся в табл. 9. Последовательности CDR в настоящем описании определяли в соответствии с определениями IMGT® для CDR1 и CDR2. Для CDR3 тяжелых и легких цепей определения в настоящем описании включают один дополнительный аминокислотный остаток выше по направлению считывания от IMGTCDR3 (Cys) и один дополнительный аминокислотный остаток ниже по направлению считывания (Trp для H-CDR3, Phe для L-CDR3). Использование генов зародышевой линии в шести полученных от OmniRat® антителах показано в табл. 10.DNA sequences of the heavy and light chain variable regions and proteins of six functional OmniRat®-derived anti-LAG-3 antibodies (15646, 15532, 15723, 15595, 15431 and 15572) and one functional chicken-derived anti-LAG-3 antibody (15011; see example 2) are provided below in the sequence listing section. An overview of SEQ ID NO: DNA sequences of variable and constant regions and proteins is given in table. 8 and 9. SEQ ID NO: for CDR are in the table. 9. The CDR sequences herein were determined according to the IMGT® definitions for CDR1 and CDR2. For CDR3 heavy and light chains, the definitions herein include one additional amino acid residue upstream of IMGTCDR3 (Cys) and one additional amino acid residue downstream (Trp for H-CDR3, Phe for L-CDR3). The use of germline genes in six OmniRat®-derived antibodies is shown in Table. 10.
Пример 2: гуманизация полученных у курицы анти-LAG-3 антител.Example 2: Humanization of chicken-derived anti-LAG-3 antibodies.
Гуманизацию каркасных областей полученных у курицы анти-LAG-3 антител осуществляли для того, чтобы получать молекулы антител, которые обладают минимальной иммуногенностью при введении человеку, при этом по существу сохраняя специфичность и аффинность родительских антител курицы.Humanization of chicken anti-LAG-3 antibody frameworks was accomplished to produce antibody molecules that are minimally immunogenic when administered to humans while substantially retaining the specificity and affinity of the chicken parent antibodies.
Гуманизацию полученного у курицы антитела осуществляли с использованием подхода пересадки CDR, способ исходно описан в посредством Jones et al., Nature 321(6069):522-5 (1986). Сначала вариабельные области тяжелых (VH) и легких (VL) цепей антител сравнивали программой BLAST с базами данных о IgG человека для того, чтобы находить ближайшие гены зародышевой линии человека. Так дентифицировали гены IGHV3-23*01 (M99660) и IGLV3-19*01 (X56178) человека в качестве ближайших к генам VH и VL курицы, соответственно. Аналогичным образом, выбранные аминокислотные последовательности человека для гуманизации области J-гена извлекали из IGHJ1*01 (J00256) и IGLJ6*01 (М18338) для VH и VL, соответственно. Затем гены VH и VL антител выравнивали с генами зародышевой линии иммуноглобулинов курицы для того, чтобы идентифицировать соматические мутации в каркасных областях, которые могут играть роль в функции и/или структуре антител. Наконец, определенные аминокислотные положения, так называемые остатки Vernier (Nishibori et al., Mol Immunol. 43(6):63442 (2006)), которые доподлинно играют важную роль в структуре, стабильности и функции антител, учитывали при генерации альтернативных вариантов гуманизированных антител, содержащих остатки человека или курицы из соответствующих зародышевых линий.Humanization of the chicken-derived antibody was accomplished using a CDR grafting approach, a method originally described in Jones et al., Nature 321(6069):522-5 (1986). First, the antibody heavy (VH) and light (VL) chain variable regions were compared with BLAST against human IgG databases to find nearby human germline genes. Thus, the human genes IGHV3-23*01 (M99660) and IGLV3-19*01 (X56178) were identified as closest to the chicken VH and VL genes, respectively. Similarly, selected human amino acid sequences for humanizing the J gene region were extracted from IGHJ1*01 (J00256) and IGLJ6*01 (M18338) for VH and VL, respectively. The antibody VH and VL genes were then aligned with chicken immunoglobulin germline genes to identify somatic mutations in the framework regions that may play a role in antibody function and/or structure. Finally, certain amino acid positions, the so-called Vernier residues (Nishibori et al., Mol Immunol. 43(6):63442 (2006)), which are known to play important roles in the structure, stability and function of antibodies, have been taken into account in the generation of alternative versions of humanized antibodies , containing human or chicken remains from the corresponding germ lines.
Сборку CDR курицы и каркасных областей человека осуществляли in silico, а синтетические гены, кодирующие гуманизированные VH и VL, заказывали в Genscript Inc. Гены VH и VL клонировали в экспрессирующие векторы (плазмиды), несущие константные области легкой цепи и тяжелой цепи антитела человека. В частности, VL соединяли с константной λ IGLC1*01 человека (J00252). Для того чтобы повышать правильное отщепление сигнального пептида выше от цепи λ, вторую аминокислоту (Ser) в гене λ IGLV3.19 заменяли на другую аминокислоту (Tyr), которая присутствует в других зародышевых линиях человека, например, IGLV3.25.Assembly of chicken CDRs and human framework regions was performed in silico, and synthetic genes encoding humanized VH and VL were ordered from Genscript Inc. The VH and VL genes were cloned into expression vectors (plasmids) carrying the human antibody light chain and heavy chain constant regions. Specifically, VL was coupled to human constant λ IGLC1*01 (J00252). In order to enhance correct cleavage of the signal peptide upstream of the λ chain, the second amino acid (Ser) in the λ gene of IGLV3.19 was replaced with another amino acid (Tyr) that is present in other human germ lines, such as IGLV3.25.
- 29 046220- 29 046220
Репрезентативные точечные диаграммы проточной цитометрии для клонов антител, созданных как описано в этом примере, представлены на фиг. 1А-С: (А) клон антитела, специфически связывающийся с трансфицированными LAG-3 человека клетками, (В) клон антитела, связывающийся неспецифически с клетками CHO-S, и (С) клон антитела, который не связывается с какими-либо из популяций клеток, используемых в скрининге.Representative flow cytometry dot plots for antibody clones generated as described in this example are presented in FIG. 1A-C: (A) an antibody clone that specifically binds to transfected human LAG-3 cells, (B) an antibody clone that binds nonspecifically to CHO-S cells, and (C) an antibody clone that does not bind to any of the populations cells used in screening.
Пример 3: клонирование аналогов эталонного анти-LAG-3 антитела.Example 3: Cloning of analogues of the reference anti-LAG-3 antibody.
Аминокислотные последовательности, кодирующие вариабельные домены тяжелых и легких цепей аналогов антител 25F7-Lag3.5 и ВАР050, получали из публикации патентной заявки США 2014/0093511 A1 (SEQ ID NO: 12 и 14) и публикации патентной заявки PCT WO 2015/138920 A1 (SEQ ID NO: 6 и 16), соответственно. Последовательности белков подвергали обратной трансляции в последовательности ДНК с использованием кодонов человека. Соответствующие последовательности ДНК после этого синтезировали и клонировали в экспрессирующие векторы, содержащие кодирующую последовательность для константного домена тяжелой цепи или легкой к цепи IgG4 человека, что вело к экспрессии полноразмерных антител. Для того чтобы предотвращать обмен плечами Fab, остаток серина в положении 228 заменяли на пролин (Angal et al., Mol. Immunol. 30:105-108 (1993)). Клетки СНО трансфицировали получаемыми экспрессирующими плазмидами с использованием стандартной экспрессирующей белок системы. Соответствующие антительные супернатанты очищали с использованием стандартной хроматографической очистки на колонке с белком А.Amino acid sequences encoding the variable domains of the heavy and light chains of the antibody analogues 25F7-Lag3.5 and BAP050 were obtained from US Patent Application Publication 2014/0093511 A1 (SEQ ID NO: 12 and 14) and PCT Patent Application Publication WO 2015/138920 A1 ( SEQ ID NO: 6 and 16), respectively. Protein sequences were reverse translated into DNA sequences using human codons. The corresponding DNA sequences were then synthesized and cloned into expression vectors containing the coding sequence for the human IgG4 heavy chain or light chain constant domain, leading to the expression of full-length antibodies. To prevent Fab arm exchange, the serine residue at position 228 was replaced with a proline (Angal et al., Mol. Immunol. 30:105-108 (1993)). CHO cells were transfected with the resulting expression plasmids using a standard protein expression system. The corresponding antibody supernatants were purified using standard protein A column chromatography.
Пример 4: скрининг панели LAG-3-специфических mAb в SEB+PBMC анализе.Example 4: Screening a panel of LAG-3-specific mAbs in the SEB+PBMC assay.
Способность большой панели LAG-3-специфических mAb стимулировать секрецию IL-2 обработанными стафилококковым энтеротоксином В (SEB) мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС) оценивали с использованием РВМС одного донора. SEB представляет собой суперантиген, который связывается с молекулами МНС класса II и специфическим областями Ve Т-клеточных рецепторов (TCR) и обеспечивает неспецифическую стимуляцию Т-клеток. Это ведет к активации/пролиферации поликлональных Т-клеток и высвобождению цитокинов, включая IL-2. РВМС человека, выделенные из лейкотромбоцитарных слоев от здоровых доноров, высевали в 384-луночные планшеты и оставляли без обработки или обрабатывали с использованием 10 нг/мл SEB и 10 мкг/мл антител. После 48 ч в увлажненном инкубаторе при 37°С, супернатанты удаляли и анализировали в них уровни IL-2 с использованием набора IL-2 ELISA (Life Technologies).The ability of a large panel of LAG-3-specific mAbs to stimulate IL-2 secretion from staphylococcal enterotoxin B (SEB)-treated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) was assessed using PBMCs from a single donor. SEB is a superantigen that binds to MHC class II molecules and specific Ve regions of T cell receptors (TCRs) and mediates nonspecific stimulation of T cells. This leads to the activation/proliferation of polyclonal T cells and the release of cytokines, including IL-2. Human PBMCs isolated from buffy coats from healthy donors were seeded in 384-well plates and left untreated or treated with 10 ng/ml SEB and 10 μg/ml antibodies. After 48 h in a humidified incubator at 37°C, supernatants were removed and their IL-2 levels were analyzed using an IL-2 ELISA kit (Life Technologies).
Увеличение секреции IL-2 после обработки репертуарами mAb против LAG-3 или аналогом 25F7Lag3.5 представлено на фиг. 2. Очевидно, что уровни IL-2 после обработки различными mAb против LAG-3 значительно варьировали, что показывает, что некоторые антитела в репертуаре не имели функциональности в этом анализе, тогда как другие антитела индуцировали секрецию IL-2 до уровней, схожих с аналогом 25F7-Lag3.5.The increase in IL-2 secretion following treatment with anti-LAG-3 mAb repertoires or the 25F7Lag3.5 analogue is presented in FIG. 2. It is apparent that IL-2 levels following treatment with various anti-LAG-3 mAbs varied significantly, indicating that some antibodies in the repertoire lacked functionality in this assay, whereas other antibodies induced IL-2 secretion to levels similar to the analog 25F7-Lag3.5.
Пример 5: связывание антител с LAG-3 человека или яванского макака, экспрессируемым клетками.Example 5: Antibody binding to human or cynomolgus LAG-3 expressed by cells.
Для того чтобы определять значения EC50 для связывания антител посредством проточной цитометрии, клетки СНО-временно трансфицировали для того, чтобы экспрессировать LAG-3 человека или яванского макака с использованием реактива Freestyle™ MAX (Invitrogen, № по каталогу 16447-100). Антитела титровали в 3-кратных разведениях от 10 до 0,05 мкг/мл в окрашивающем буфере (PBS; 2% FBS; NaN3) и смешивали и инкубировали с клетками, трансфицированными LAG-3 человека или яванского макака. После двух промываний в окрашивающем буфере, связанной с клеткой антитело обнаруживали посредством добавления вторичного антитела козы AF647 против IgG человека (H+L) (Molecular Probes, № по каталогу А21445). Образцы получали с использованием высокопропускной проточной цитометрии (iQue® Screener, Intellicyt) и анализировали данные с использованием программного обеспечения ForeCyt® посредством построения графика концентрации антитела в зависимости от средней интенсивности флуоресценции (MFI) для AF647. Значения ЕС50 вычисляли с использованием функции dose response graph в ForeCyt®.To determine EC 50 values for antibody binding by flow cytometry, CHO cells were transiently transfected to express human or cynomolgus LAG-3 using Freestyle™ MAX reagent (Invitrogen, catalog no. 16447-100). Antibodies were titrated in 3-fold dilutions from 10 to 0.05 μg/ml in staining buffer (PBS; 2% FBS; NaN3) and mixed and incubated with cells transfected with human or cynomolgus LAG-3. After two washes in staining buffer, cell-bound antibody was detected by adding goat anti-human IgG (H+L) secondary antibody AF647 (Molecular Probes, catalog no. A21445). Samples were acquired using high-throughput flow cytometry (iQue® Screener, Intellicyt) and data analyzed using ForeCyt® software by plotting antibody concentration versus mean fluorescence intensity (MFI) for AF647. EC50 values were calculated using the dose response graph function in ForeCyt®.
Сводка по связывающим свойствам антител, которые измеряли посредством титрования, находится далее в табл. 1, где huLAG-3 и cyLAG-3 представляют собой клетки, трансфицированные LAG-3 человека и яванского макака, соответственно. Как показано в табл. 1, антитела 15646, 15532, 15723, 15595, 15431 и 15572 связываются с LAG-3 как человека, так и яванского макака.A summary of the binding properties of the antibodies that were measured by titration is found in the following table. 1, where huLAG-3 and cyLAG-3 are cells transfected with human and cynomolgus LAG-3, respectively. As shown in table. 1, antibodies 15646, 15532, 15723, 15595, 15431 and 15572 bind to both human and cynomolgus LAG-3.
- 30 046220- 30 046220
Таблица 1. Обзор свойств антителTable 1. Overview of antibody properties
Пример 6: проточный цитометрический анализ aHTu-LAG-З антител на блокирующую MHCII активность.Example 6: flow cytometric analysis of aHTu-LAG-3 antibodies for MHCII blocking activity.
Этот пример иллюстрирует, как анти-LAG-3 антитела тестировали на блокирующую главный комплекс гистосовместимости II (MHCII) активность посредством выполнения конкурентным анализом на основе проточной цитометрии с использованием клеток А375 с положительной по MHCII поверхностью и меченного флуорохромом растворимого LAG-3.This example illustrates how anti-LAG-3 antibodies were tested for major histocompatibility complex II (MHCII) blocking activity by performing a flow cytometry-based competition assay using MHCII surface-positive A375 cells and fluorochrome-labeled soluble LAG-3.
Блокирующую MHCII активность изучали в клеточном анализе с использованием клеточной линии А375 меланомы человека (АТСС® CRL-1619™). R-PE-меченный химерный белок из LAG-3 человека и Fc может специфически связываться с MHCII, экспрессируемым на поверхности А375, что делает возможным количественное определение этого взаимодействия посредством проточной цитометрии. Коммерчески доступный рекомбинантный химерный белок из LAG-3 человека и Fc (R&D Systems, USA) конъюгировали с R-PE, используя Lightning-Link® R-Phycoerythrin Conjugation Kit (Innova Biosciences, UK). Клетки А375 собирали с использованием Cell Dissociation Buffer, не содержащего ферменты (Gibco™), промывали и ресуспендировали в холодном окрашивающем буфере (PBS, 2% FBS, NaN3). АнтиLAG-3 антитела, подлежащие тестированию, наносили на планшет в 96-луночном формате и корректировали до 20 мкг/мл в 50 мкл окрашивающего буфера. На лунку добавляли 1 мкл LAG-3-Fc-PE (соответствует приблизительно 0,17 мкг LAG-3-Fc), смешивали и инкубировали планшеты при 4°С в течение 30 мин для того, чтобы сделать возможным образование комплекса LAG-3-антитело. В ходе инкубации 1х105 клеток А375 (в 100 мкл окрашивающего буфера) высевали в 96-луночном формате, осаждали посредством центрифугирования и ресуспендировали клеточные осадки в предварительно инкубированных смесях LAG-3/антитело. Клетки инкубировали в течение дополнительных 20 мин при 4°С, промывали 1х в 200 мкл холодного окрашивающего буфера и ресуспендировали в 100 мкл окрашивающего буфера для регистрации.MHCII blocking activity was studied in a cellular assay using the human melanoma cell line A375 (ATCC® CRL-1619™). An R-PE-labeled chimeric protein of human LAG-3 and Fc can specifically bind to MHCII expressed on the surface of A375, making it possible to quantify this interaction by flow cytometry. A commercially available recombinant chimeric protein of human LAG-3 and Fc (R&D Systems, USA) was conjugated to R-PE using the Lightning-Link® R-Phycoerythrin Conjugation Kit (Innova Biosciences, UK). A375 cells were collected using enzyme-free Cell Dissociation Buffer (Gibco™), washed and resuspended in cold staining buffer (PBS, 2% FBS, NaN 3 ). AntiLAG-3 antibodies to be tested were applied to the plate in a 96-well format and adjusted to 20 μg/ml in 50 μl of staining buffer. 1 μl of LAG-3-Fc-PE (corresponding to approximately 0.17 μg of LAG-3-Fc) was added per well, mixed, and the plates were incubated at 4°C for 30 min to allow formation of the LAG-3-Fc complex. antibody. During incubation, 1 x 10 5 A375 cells (in 100 μl of staining buffer) were seeded in a 96-well format, pelleted by centrifugation, and cell pellets were resuspended in preincubated LAG-3/antibody mixtures. Cells were incubated for an additional 20 min at 4°C, washed 1× in 200 μl of cold staining buffer, and resuspended in 100 μl of recording buffer.
Из семи тестированных анти-LAG-3 антител (при 20 мкг/мл), четыре, 15532, 15595, 15431 и 15011, индуцировали снижение связывания LAG-3 с MHCII (MFI) приблизительно на 90% по сравнению со связыванием в присутствии антитела отрицательного контроля, и, таким образом, считались эффективными блокаторами взаимодействия. Остальные три антитела, 15646, 15723 и 15572, оказывали только ограниченный эффект на связывание LAG-3-MHCII и могли считаться слабыми блокаторами. Аналог эталонного антитела 25F7-Lag3.5 демонстрировал промежуточную блокирующую активность. Результаты сведены в табл. 2.Of the seven anti-LAG-3 antibodies tested (at 20 μg/ml), four, 15532, 15595, 15431 and 15011, induced approximately 90% reduction in LAG-3 binding to MHCII (MFI) compared to binding in the presence of the negative antibody. control, and were thus considered effective interaction blockers. The remaining three antibodies, 15646, 15723 and 15572, had only a limited effect on LAG-3-MHCII binding and could be considered weak blockers. The reference antibody analog 25F7-Lag3.5 showed intermediate blocking activity. The results are summarized in table. 2.
Таблица 2. Блокирование связывания LAG-3 с MHCII на клетках А375 __________________в присутствии анти-LAG-3 антител__________________Table 2. Blocking the binding of LAG-3 to MHCII on A375 cells __________________in the presence of anti-LAG-3 antibodies__________________
*Медиана, нормализованная по связыванию LAG-3 в присутствии антитела отрицательного контроля.*Median normalized to LAG-3 binding in the presence of negative control antibody.
Пример 7: эффект моноклональных анти-LAG-3 антител в SEB+PBMC анализе.Example 7: Effect of monoclonal anti-LAG-3 antibodies in SEB+PBMC assay.
Оценивали способность семи mAb против LAG-3 стимулировать секрецию IL-2 обработаннымиThe ability of seven anti-LAG-3 mAbs to stimulate IL-2 secretion in treated
- 31 046220 стафилококковым энтеротоксином В (SEB) мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС). В этом примере описан эффект семи mAb против LAG-3, оказываемый на РВМС нескольких доноров. Кроме того, описан эффект четырех mAb против LAG-3 из других кластеров последовательностей. Номера кластеров последовательностей приведены в скобках после номеров антител и дополнительно описаны в примере 13. Ahtu-LAG-3 антитела тестировали в концентрациях 10 или 12,5 мкг/мл в SEB+PBMC анализе, как описано в примере 4.- 31 046220 staphylococcal enterotoxin B (SEB) peripheral blood mononuclear cells (PBMC). This example describes the effect of seven anti-LAG-3 mAbs on PBMC from multiple donors. In addition, the effect of four anti-LAG-3 mAbs from other sequence clusters has been described. Sequence cluster numbers are given in parentheses after the antibody numbers and are further described in Example 13. Ahtu-LAG-3 antibodies were tested at concentrations of 10 or 12.5 μg/ml in the SEB+PBMC assay as described in Example 4.
Увеличение секреции IL-2 после обработки с использованием mAb против LAG-3 15431, 15532, 15572, 15595, 15646, 15723 и 15011 или аналога 25F7-Lag3.5 показано на фиг. 3. Каждая точка представляет уровень секреции IL-2 в РВМС одного донора. Очевидно, что уровни IL-2 после обработки с использованием mAb против LAG-3 варьировали среди различных доноров РВМС, но все семь mAb против LAG-3 стимулировали продукцию IL-2 на схожих уровнях. Это отличается от mAb против LAG-3 15445, 15429 и 15491, которые не увеличивают продукцию IL-2.The increase in IL-2 secretion following treatment with anti-LAG-3 mAbs 15431, 15532, 15572, 15595, 15646, 15723 and 15011 or the 25F7-Lag3.5 analog is shown in FIG. 3. Each dot represents the level of IL-2 secretion in PBMC from one donor. It is apparent that IL-2 levels following treatment with anti-LAG-3 mAb varied among different PBMC donors, but all seven anti-LAG-3 mAbs stimulated IL-2 production at similar levels. This is in contrast to anti-LAG-3 mAbs 15445, 15429, and 15491, which do not increase IL-2 production.
Пример 8: эффект моноклональных анти-LAG-3 антител в клеточном анализе блокирования LAG-3MHC класса II.Example 8: Effect of anti-LAG-3 monoclonal antibodies in a cell-based LAG-3MHC class II blocking assay.
Чтобы дополнительно охарактеризовать семь mAb против LAG-3, в клеточном анализе тестировали способность блокировать взаимодействие между LAG-3 и МНС класса II.To further characterize the seven anti-LAG-3 mAbs, a cell-based assay tested the ability to block the interaction between LAG-3 and MHC class II.
Клетки Jurkat, несущие ген люциферазы под управлением NFAT-RE и экспрессирующие модифицированный TCR и LAG-3 (Promega), инкубировали с клеточной линией Raji, экспрессирующей МНС класса II, 50 нг/мл стафилококкового энтеротоксина D (SED) и различными концентрациями моноклональных антител, как указано на фиг. 4. После 6 ч в увлажненном инкубаторе при 37°С, добавляли субстрат люциферазы (Promega) и измеряли люминесценцию. Люминесценция представляет собой меру экспрессии люциферазы, которую контролируют посредством передачи сигнала TCR и ингибируют посредством передачи сигнала LAG-3. Таким образом, меньшая передача сигнала LAG-3, например, посредством блокирования взаимодействия LAG-3 с MHCII, будет вести к повышенной люминесценции.Jurkat cells carrying the NFAT-RE-driven luciferase gene and expressing a modified TCR and LAG-3 (Promega) were incubated with a Raji cell line expressing MHC class II, 50 ng/ml staphylococcal enterotoxin D (SED) and various concentrations of monoclonal antibodies, as indicated in Fig. 4. After 6 h in a humidified incubator at 37°C, luciferase substrate (Promega) was added and luminescence was measured. Luminescence is a measure of luciferase expression, which is controlled through TCR signaling and inhibited through LAG-3 signaling. Thus, less LAG-3 signaling, for example by blocking LAG-3 interaction with MHCII, would lead to increased luminescence.
Увеличение люминесценции после обработки с использованием mAb против LAG-3 15431, 15532, 15572, 15595, 15646, 15723 и 15011 или аналога 25F7-Lag3.5 представлено на фиг. 4. Обнаруживали, что все тестируемые анти-LAG-3 антитела увеличивают люминесценцию до схожих уровней.The increase in luminescence after treatment with anti-LAG-3 mAbs 15431, 15532, 15572, 15595, 15646, 15723, and 15011 or the 25F7-Lag3.5 analog is shown in FIG. 4. All anti-LAG-3 antibodies tested were found to increase luminescence to similar levels.
Пример 9: эффект моноклональных анти-LAG-3 антител, оказываемый на клеточные уровни LAG-3.Example 9: Effect of anti-LAG-3 monoclonal antibodies on cellular levels of LAG-3.
Чтобы дополнительно охарактеризовать выбранные mAb против LAG-3, способность к понижающей регуляции уровней LAG-3 тестировали в линии Т-клеток со сверхэкспрессией LAG-3.To further characterize the selected anti-LAG-3 mAbs, the ability to down-regulate LAG-3 levels was tested in a LAG-3 overexpressing T cell line.
Клетки Jurkat, экспрессирующие модифицированный TCR и LAG-3 (Promega), инкубировали с 25 мг/мл моноклональных антител, как указано на фиг. 5. После 24 ч в увлажненном инкубаторе при 37°С, собирали супернатанты и осуществляли лизис клеток. Уровни LAG-3 в клетках оценивали с использованием идентифицирующего анти-LAG-3 антитела (Novus Biologicals) и приема Simple Western (Sally Sue, Proteinsimple). Уровни LAG-3 в супернатанте оценивали с использованием ELISA против LAG-3 (R&D Systems). Исследования конкурентного связывания подтверждали, что тестируемые анти-LAG-3 антитела не конкурируют с идентифицирующим антителом ELISA за связывание с растворимым LAG-3. Статистический анализ осуществляли с использованием однофакторного дисперсионного анализа с коррекцией для множественных сравнений, после чего следовал апостериорный критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони.Jurkat cells expressing modified TCR and LAG-3 (Promega) were incubated with 25 mg/ml monoclonal antibodies as indicated in Fig. 5. After 24 hours in a humidified incubator at 37°C, supernatants were collected and cell lysis was performed. LAG-3 levels in cells were assessed using anti-LAG-3 identifying antibody (Novus Biologicals) and Simple Western (Sally Sue, Proteinsimple). Levels of LAG-3 in the supernatant were assessed using an anti-LAG-3 ELISA (R&D Systems). Competitive binding studies confirmed that the anti-LAG-3 antibodies tested do not compete with the ELISA identifying antibody for binding to soluble LAG-3. Statistical analysis was performed using one-way analysis of variance with correction for multiple comparisons, followed by Student's post hoc t test with Bonferroni correction.
Уровни клеточного и растворимого LAG-3 после обработки с использованием mAb против LAG-3 15431, 15532, 15011, аналога 25F7-Lag3.5 или аналога ВАР050 представлены на фиг. 5. 15532, 15011, аналог 25F7-Lag3.5 и аналог ВАР050 снижали клеточные и растворимые уровни LAG-3. 15532 снижало клеточные уровни LAG-3 до более низкого уровня, чем аналог 25F7-Lag3.5, со статистической значимостью и снижало растворимые уровни LAG-3 до более низкого уровня, чем аналог 25F7-Lag3.5 и аналог ВАР050, со статистической значимостью. 15431 не снижало ни клеточные ни растворимые уровни LAG-3.Cellular and soluble LAG-3 levels following treatment with anti-LAG-3 mAbs 15431, 15532, 15011, the 25F7-Lag3.5 analog, or the BAP050 analog are shown in FIG. 5. 15532, 15011, 25F7-Lag3.5 analog and BAP050 analog reduced cellular and soluble levels of LAG-3. 15532 reduced cellular levels of LAG-3 to a lower level than the 25F7-Lag3.5 analogue with statistical significance and reduced soluble LAG-3 levels to a lower level than the 25F7-Lag3.5 analogue and the BAP050 analogue with statistical significance. 15431 did not reduce either cellular or soluble levels of LAG-3.
Пример 10: эффект антитела 15011 in vivo, оказываемый в двух моделях сингенных опухолей на мышах.Example 10: In vivo effect of antibody 15011 in two mouse models of syngeneic tumors.
Этот пример демонстрирует эффект антитела 15011 in vivo, оказываемый в двух моделях сингенных опухолей на мышах.This example demonstrates the in vivo effect of antibody 15011 in two mouse models of syngeneic tumors.
Способы.Ways.
2х105 клеток SalN (фибросаркома) и 5x106 клеток ASB-XIV (карцинома легких) инокулировали подкожно в бок самок мышей A/J (SalN) или BALB/cAnNRj (ASB-XIV) в возрасте 6-8 недель. Опухоли измеряли три раза в неделю штангенциркулем по двум измерениям и объем опухоли в мм3 вычисляли в соответствии с формулой: (ширина)2хдлинах0,5. В сутки 5-7 после инокуляции, при усредненном размере опухоли 30-50 мм3, мышей рандомизировали в две группы по 10 животных и начинали лечение. Мышей лечили три раза в неделю с использованием всего шести лечений посредством интраперитонеальной инъекции буфера-носителя или моноклонального антитела 15011, после чего следовал период наблюдения. Лечение антителами дозировали по 10 мг/кг. Двухфакторный дисперсионный анализ с использованием критерия множественного сравнения Бонферрони применяли для того, чтобы сравнивать объемы опухолей в каждый момент времени между группами лечения. Статистический анализ осуществляли с2 x 10 5 SalN cells (fibrosarcoma) and 5 x 10 6 ASB-XIV cells (lung carcinoma) were inoculated subcutaneously into the flank of female A/J (SalN) or BALB/cAnNRj (ASB-XIV) mice at 6-8 weeks of age. Tumors were measured three times a week using a caliper in two dimensions and the tumor volume in mm 3 was calculated according to the formula: (width) 2 x length 0.5. On days 5-7 after inoculation, with an average tumor size of 30-50 mm 3 , mice were randomized into two groups of 10 animals and treatment began. Mice were treated three times per week with a total of six treatments via intraperitoneal injection of vehicle buffer or monoclonal antibody 15011, followed by an observation period. Antibody treatment was dosed at 10 mg/kg. Two-way analysis of variance using Bonferroni's multiple comparison test was used to compare tumor volumes at each time point between treatment groups. Statistical analysis was performed with
- 32 046220 использованием GraphPad Prism версии 5.0 (GraphPad Software, Inc.).- 32 046220 using GraphPad Prism version 5.0 (GraphPad Software, Inc.).
Результаты.Results.
Результаты показывали выраженный эффект ингибирования опухоли антителом 15011 в тестируемых моделях сингенных опухолей (*Р<0,001) (фиг. 6). 15011 индуцировало регрессию опухолевого роста у 50% мышей с пересаженными опухолями Sa1N и вело к задержке опухолевого роста в модели сингенной опухоли ASB-XIV.The results showed a significant tumor inhibition effect of antibody 15011 in the syngeneic tumor models tested (*P<0.001) (Fig. 6). 15011 induced regression of tumor growth in 50% of mice transplanted with Sa1N tumors and led to delayed tumor growth in the syngeneic ASB-XIV tumor model.
Пример 11: эффект антитела 15532 in vivo у мышей NOG, которых восстанавливали с использованием РВМС человека и которым пересаживали клетки меланомы человека А375.Example 11: In vivo effect of antibody 15532 in NOG mice reconstituted with human PBMC and engrafted with human A375 melanoma cells.
В этом примере продемонстрирован эффект антитела 15532 in vivo в модели полугуманизированной ксенотрансплантированной опухоли, где иммунную систему мышей NOG восстанавливали с использованием РВМС человека, и мышам пересаживали клетки меланомы человека А375.This example demonstrates the in vivo effect of antibody 15532 in a semi-humanized xenograft tumor model where the immune system of NOG mice was reconstituted using human PBMC and the mice were transplanted with human A375 melanoma cells.
Способы.Ways.
В сутки исследования 0 мышам NOG подкожно инъецировали 2-4,5х106 клеток меланомы А375 и интраперитонеально вводили 9 или 12х106 РВМС в сутки исследования 2. В каждом эксперименте использовали РВМС от одного донора. Лечение инициировали в сутки инокуляции РВМС, и мышей лечили три раза в неделю с использованием всего шести или девяти лечений посредством интраперитонеальной инъекции буфера-носителя или моноклонального антитела 15532 (10 мг/кг), после чего следовал период наблюдения. Опухоли измеряли три раза в неделю штангенциркулем по двум измерениям и вычисляли объем опухоли мм3 в соответствии с формулой: (ширина)2хдлинах0,5. Двухфакторный дисперсионный анализ с использованием критерия множественного сравнения Бонферрони применяли для того, чтобы сравнивать объемы опухолей в каждый момент времени между группами лечения. Статистический анализ осуществляли с использованием GraphPad Prism версии 5.0 (GraphPad Software, Inc.).On study day 0, NOG mice were injected subcutaneously with 2-4.5 x 10 6 A375 melanoma cells and intraperitoneally injected with 9 or 12 x 10 6 PBMCs on study day 2. PBMC from the same donor were used in each experiment. Treatment was initiated on the day of PBMC inoculation, and mice were treated three times per week with a total of six or nine treatments via intraperitoneal injection of vehicle buffer or monoclonal antibody 15532 (10 mg/kg), followed by an observation period. Tumors were measured three times a week using a caliper in two dimensions and the tumor volume mm 3 was calculated according to the formula: (width)2xlength0.5. Two-way analysis of variance using Bonferroni's multiple comparison test was used to compare tumor volumes at each time point between treatment groups. Statistical analyzes were performed using GraphPad Prism version 5.0 (GraphPad Software, Inc.).
Результаты.Results.
На фиг. 7 представлены результаты из двух экспериментов с использованием РВМС двух различных доноров-людей, которые отвечали на лечение против LAG-3. Лечение с использованием 15532 вело к значительной задержке опухолевого роста по сравнению с группой лечения носителем [Р<0,05 (донор 1) и Р<0,001 (донор 2)].In fig. 7 shows results from two experiments using PBMCs from two different human donors that responded to anti-LAG-3 treatment. Treatment with 15532 resulted in a significant delay in tumor growth compared with the vehicle treatment group [P<0.05 (donor 1) and P<0.001 (donor 2)].
Пример 12: измерение аффинностей моноклональных анти-LAG-3 антител в отношении LAG-3 человека, яванского макака и мыши.Example 12: Measurement of affinities of anti-LAG-3 monoclonal antibodies against human, cynomolgus and mouse LAG-3.
В этом примере продемонстрировано связывание анти-LAG-3 антител с внеклеточными доменами LAG-3 человека, яванского макака и мыши, как измерено поверхностным плазмонным резонансом (SPR). Последовательность белка LAG-3 человека доступна по № доступа UniProt P18627 (SEQ ID NO: 68). Последовательность белка LAG-3 яванского макака доступна по № доступа NCBI ХР 005570011.1 (SEQ ID NO: 69). Последовательность белка LAG-3 мыши доступна по № доступа UniProt Q61790 (SEQ ID NO: 72).This example demonstrates the binding of anti-LAG-3 antibodies to the extracellular domains of human, cynomolgus and mouse LAG-3 as measured by surface plasmon resonance (SPR). The human LAG-3 protein sequence is available under UniProt accession no. P18627 (SEQ ID NO: 68). The cynomolgus LAG-3 protein sequence is available under NCBI Accession No. XP 005570011.1 (SEQ ID NO: 69). The mouse LAG-3 protein sequence is available under UniProt accession no. Q61790 (SEQ ID NO: 72).
Материалы и способы.Materials and methods.
Кинетический анализ связывания осуществляли посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR), используя Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US) в сочетании с прибором IBIS МХ96 SPR (IBIS Technologies, The Netherlands).Binding kinetic analysis was performed by surface plasmon resonance (SPR) using a Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US) coupled with an IBIS MX96 SPR instrument (IBIS Technologies, The Netherlands).
Fab анти-LAG-3 антитела создавали посредством расщепления антител IgG1 с использованием фермента GingisKHAN, используя набор, предоставляемый в Genovis (Sweden).Fab anti-LAG-3 antibodies were generated by digesting IgG1 antibodies with the GingisKHAN enzyme using a kit provided from Genovis (Sweden).
Синтезировали кДНК LAG-3, кодирующую внеклеточные домены LAG-3 человека и яванского макака, и каждую клонировали в вектор, содержащий промотор CMV и последовательность Fc IgG1 человека (АА Р101-К330), что вело к слиянию Fc IgG1 С-концом с клонированным ECD LAG-3. Слитые конструкции LAG-3 Fc создавали посредством стандартной ПЦР и приемов конструирования, и белок временно экспрессировали в 2 мл культуре с использованием экспрессирующей системы ExpiCHO™. После 9 суток собирали слитые конструкции LAG-3 человека Fc и супернатанты тестировали на аффинность связывания с Fab антителами к LAG-3 посредством SPR. Антигены очищали с использованием стандартных процедур и захватывали на G-a-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, The Netherlands) в течение 15 мин с использованием Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US). После точечного нанесения, SensEye® помещали в биосенсор IBIS МХ96 и оставшиеся захватывающие участки блокировали. Кинетический анализ осуществляли посредством применения так называемого ряда кинетического титрования (Karlsson R. 2006), где мономерные Fab фрагменты антител по изобретению впрыскивали в увеличивающихся концентрациях от 1 до 1000 нМ без применения стадий регенерации поверхности после каждого впрыска Fab. Связывание Fab осуществляли в течение 15 мин и диссоциацию антигена осуществляли в течение 15 мин. Зарегистрированные сигналы связывания аппроксимировали к простой модели связывания Ленгмюра 1:1 с использованием программного обеспечения Scrubber 2 для вычисления констант скорости ассоциации (kon или ka), скорости диссоциации (koff или kd) и аффинности (Kd).LAG-3 cDNA encoding the extracellular domains of human and cynomolgus LAG-3 was synthesized and each was cloned into a vector containing the CMV promoter and the human IgG1 Fc sequence (AA P101-K330), resulting in a C-terminal fusion of the IgG1 Fc to the cloned ECD LAG-3. LAG-3 Fc fusion constructs were generated by standard PCR and construction techniques, and the protein was transiently expressed in 2 ml culture using the ExpiCHO™ expression system. After 9 days, human LAG-3 Fc fusion constructs were collected and supernatants were tested for Fab binding affinity with anti-LAG-3 antibodies via SPR. Antigens were purified using standard procedures and captured on Ga-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, The Netherlands) for 15 min using a Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US). After spot application, SensEye® was placed into the IBIS MX96 biosensor and the remaining capture sites were blocked. Kinetic analysis was carried out using a so-called kinetic titration series (Karlsson R. 2006), where monomeric Fab fragments of the antibodies of the invention were injected in increasing concentrations from 1 to 1000 nM without the use of surface regeneration steps after each injection of Fab. Fab binding occurred within 15 min and antigen dissociation occurred within 15 min. The recorded binding signals were fitted to a simple 1:1 Langmuir binding model using Scrubber 2 software to calculate association rate constants (ko n or ka), dissociation rate (ko ff or k d ) and affinity (Kd).
Результаты.Results.
Результаты измерения аффинности показывают, что оцениваемые антитела 15532, 15431, 15572,The affinity measurement results show that the evaluated antibodies 15532, 15431, 15572,
- 33 046220- 33 046220
15011 и аналог эталонного антитела 25F7-Lag3.5 связывают LAG-3 человека и яванского макака с различными аффинностями. 15011 представляет собой единственное антитело с перекрестной реактивностью к LAG-3 мыши. Подробности о кинетике связывания приведены далее в табл. 3.15011 and the reference antibody analog 25F7-Lag3.5 bind human and cynomolgus LAG-3 with different affinities. 15011 is the only antibody that is cross-reactive to mouse LAG-3. Details about the binding kinetics are given below in the table. 3.
Таблица 3. Кинетика связывания Fab фрагментов против LAG-3 с LAG-3 человека, яванского макака и мыши ECD, как измеряют посредством SPRTable 3. Binding kinetics of anti-LAG-3 Fab fragments to human, cynomolgus, and ECD mouse LAG-3 as measured by SPR
*NB: связывание отсутствует.*NB: no binding.
Пример 13: группировка эпитопов анти-LAG-3 антител.Example 13: epitope grouping of anti-LAG-3 antibodies.
Этот пример иллюстрирует, как анти-LAG-3 антитела группировали по группам эпитопов на основе паттернов парной конкуренции в сэндвич-анализе. Антитела, относящиеся к различным группам эпитопов, распознают различные эпитопы на ECD LAG-3.This example illustrates how anti-LAG-3 antibodies were grouped into epitope groups based on pairwise competition patterns in a sandwich analysis. Antibodies belonging to different epitope groups recognize different epitopes on ECD LAG-3.
Материалы и способы.Materials and methods.
Исследование парной конкуренции антител осуществляли посредством анализа поверхностного плазмонного резонанса (SPR) с использованием Continuous Flow Microspotter (CFM) (Wasatch Microfluidics, US) в сочетании с прибором IBIS MX96 SPR (IBIS Technologies, The Netherlands). Анализ визуализации поверхностного плазмонного резонанса осуществляли на SPR датчике Goat-Anti-Human-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, The Netherlands). Всего 13 анти-LAG-3 антител, включая эталонное антитело 25F7Lag3.5, разводили до 7,5 мкг/мл в буфере PBS, содержащем 0,05% Tween 20 (PBS-T), pH 7,0. Антитела захватывали на поверхности датчика против Fc посредством точечного нанесения в течение 15 мин с использованием Continuous Flow Microspotter. После точечного нанесения, SensEye® помещали в биосенсор IBIS MX96 и оставшиеся участки против Fc блокировали посредством впрыска 30 мкг/мл неспецифического IgG1 человека. Захваченные антитела конъюгировали с поверхностью с использованием набора FixIt (Ssens BV, The Netherlands). После подготовки датчика иммобилизованные антитела (лиганды) использовали для захвата одновалентного антигена LAG-3 (50 нМ, Acro Biosystems, China) в растворе, когда впрыскивали на датчик. Затем панель антител к LAG-3, разведенных до 15 мкг/мл в буфере PBS-T, впрыскивали в качестве анализируемых веществ одно за одним на датчик и тестировали на связывание с захваченным LAG-3 в сэндвич-анализе, чтобы устанавливать паттерны конкуренции антител. После впрыска каждого антитела, поверхность датчика регенерировали с использованием 100 мМ Н3РО4 буфера, pH 3,0.Pairwise antibody competition studies were performed by surface plasmon resonance (SPR) analysis using a Continuous Flow Microspotter (CFM) (Wasatch Microfluidics, US) coupled with an IBIS MX96 SPR instrument (IBIS Technologies, The Netherlands). Surface plasmon resonance imaging analysis was performed on a Goat-Anti-Human-IgG Fc SensEye® SPR sensor (Ssens BV, The Netherlands). A total of 13 anti-LAG-3 antibodies, including the reference antibody 25F7Lag3.5, were diluted to 7.5 μg/ml in PBS buffer containing 0.05% Tween 20 (PBS-T), pH 7.0. Antibodies were captured on the surface of the anti-Fc sensor by spot application for 15 min using a Continuous Flow Microspotter. After spot application, SensEye® was placed into the IBIS MX96 biosensor and the remaining anti-Fc sites were blocked by injection of 30 μg/ml non-specific human IgG1. Captured antibodies were conjugated to the surface using the FixIt kit (Ssens BV, The Netherlands). After preparing the sensor, immobilized antibodies (ligands) were used to capture monovalent LAG-3 antigen (50 nM, Acro Biosystems, China) in solution when injected onto the sensor. A panel of anti-LAG-3 antibodies diluted to 15 μg/ml in PBS-T buffer were then injected as analytes one by one onto the probe and tested for binding to captured LAG-3 in a sandwich assay to establish patterns of antibody competition. After injection of each antibody, the sensor surface was regenerated using 100 mM H 3 PO 4 buffer, pH 3.0.
Результаты.Results.
Паттерн конкуренции 13 анти-LAG-3 антител представлен на фиг. 8. Антитела названы в соответствии с их идентификационным номером, а кластерные группы перечислены в скобках. Ожидают, что mAbThe competition pattern of 13 anti-LAG-3 antibodies is shown in FIG. 8. Antibodies are named according to their identification number, and cluster groups are listed in parentheses. It is expected that mAb
- 34 046220 из идентичных кластерных групп связывают идентичные группы эпитопов, поскольку белковые последовательности элементов кластеров являются близкородственными и различаются только несколькими положениями.- 34 046220 from identical cluster groups bind identical groups of epitopes, since the protein sequences of the cluster elements are closely related and differ only in a few positions.
Все антитела успешно проходили группировку по эпитопам; однако антитела 15595 (52), 15613 (33) и 15431 (38) не работают при использовании в качестве лигандов и могут тестироваться только в качестве анализируемых веществ. Антитела 15646 (15) и 15011 (94) тестировали только в качестве лигандов.All antibodies successfully passed epitope grouping; however, antibodies 15595 (52), 15613 (33), and 15431 (38) do not work when used as ligands and can only be tested as analytes. Antibodies 15646 (15) and 15011 (94) were tested only as ligands.
Анализ конкуренции показывал, что панель антител к LAG-3 охватывает 6 основных групп эпитопов (фиг. 8). Антитело 15011 (94) связывалось с уникальным эпитопом, который не подвергался перекрестному блокированию любыми другими антителами из панели, и, следовательно, это антитело присваивали группе эпитопов 1. Группа эпитопов 2 содержит 7 антител, которые перекрестно конкурировали с некоторыми другими mAb из группы, и эти антитела дополнительно делили на подгруппы. mAb 15584 (54) отличалось перекрестным блокированием 15532 (17) и 15595 (52) при тестировании в качестве лиганда или анализируемого вещества, но его не блокировало эталонное mAb 25F7-Lag3.5 при тестировании в качестве анализируемого вещества. mAb 15613 (33) тестировали только в качестве анализируемого вещества и показывали, что его блокируют 15723 (39), 15532 (17) и 15646 (15), но не 25F7-Lag3.5. Следовательно, несмотря на то, что 15532 (17) связывало эпитоп, перекрывающийся с 25F7-Lag3.5, эпитоп 15532 (17) отличается от такового для 25F7-Lag3.5 из-за различий в конкуренции с 15584 (84) и 15613 (33), и, следовательно, эти антитела присваивали различным подгруппам. Аналогичным образом, другие mAb в группе эпитопов 2 присваивали подгруппам на основе паттернов конкуренции с другими антителами в группе 2 (фиг. 8).Competition analysis showed that the panel of antibodies to LAG-3 covered 6 main groups of epitopes (Fig. 8). Antibody 15011 (94) bound to a unique epitope that was not cross-blocked by any other antibodies in the panel, and therefore this antibody was assigned to epitope group 1. Epitope group 2 contains 7 antibodies that cross-competed with some of the other mAbs in the group, and these antibodies were further divided into subgroups. mAb 15584 (54) was notable for cross-blocking 15532 (17) and 15595 (52) when tested as a ligand or analyte, but was not blocked by the reference mAb 25F7-Lag3.5 when tested as an analyte. mAb 15613 (33) was tested as an analyte only and was shown to block 15723 (39), 15532 (17), and 15646 (15), but not 25F7-Lag3.5. Therefore, although 15532 (17) bound an epitope overlapping with 25F7-Lag3.5, the epitope of 15532 (17) is different from that of 25F7-Lag3.5 due to differences in competition with 15584 (84) and 15613 ( 33), and therefore these antibodies were assigned to different subgroups. Similarly, other mAbs in epitope group 2 were assigned to subgroups based on competition patterns with other antibodies in group 2 (Fig. 8).
У mAb 15572 (91) обнаруживали только перекрестную конкуренцию с mAb 15584 (54), и его относили к отдельной группе 3. Аналогичным образом, mAb 15431 (83) относили к отдельной группе 4, поскольку это антитело перекрестно конкурирует только с mAb 15723 (39). Наконец, идентифицировали две отдельные группы эпитопов, содержащие антитела с нефункциональной активностью. Группа эпитопов 5 содержала перекрестно блокирующие антитела 15445 (70) и 15491 (84) и группа эпитопов 6 содержала mAb 15429 (72), которое не демонстрирует перекрестного блокирования любого из антител из панели. Антитела группы 5 также блокировали антитела 25F7-Lag3.5, 15532 (17) и 15723 (39) из группы 2, когда их тестировали в качестве анализируемых веществ (фиг. 8). Сводка по паттернам конкуренции для антител-лигандов приведена на фиг. 9, где родство эпитопов для mAb показано на основе кластеризации с использованием эвклидова расстояния. В кластерной диаграмме можно наблюдать, что антитела с точками ветвления при значениях по оси x выше нуля имеют другие эпитопы по сравнению с другими антителами в тестируемой панели LAG-3. В кластерный анализ не включали mAb 15595 (52), 15613 (33) и 15431 (38), поскольку они не работают в качестве лигандов.mAb 15572 (91) showed only cross-competition with mAb 15584 (54) and was classified as a separate group 3. Similarly, mAb 15431 (83) was classified as a separate group 4 because it only cross-competed with mAb 15723 (39 ). Finally, two distinct groups of epitopes containing antibodies with nonfunctional activity were identified. Epitope group 5 contained cross-blocking antibodies 15445 (70) and 15491 (84) and epitope group 6 contained mAb 15429 (72), which does not show cross-blocking with any of the antibodies from the panel. Group 5 antibodies also blocked group 2 antibodies 25F7-Lag3.5, 15532 (17) and 15723 (39) when tested as analytes (Fig. 8). A summary of competition patterns for antibody ligands is shown in FIG. 9, where epitope relatedness for mAbs is shown based on clustering using Euclidean distance. In the cluster plot, it can be observed that antibodies with branch points at x-axis values greater than zero have different epitopes compared to other antibodies in the LAG-3 panel tested. mAbs 15595 (52), 15613 (33), and 15431 (38) were not included in the cluster analysis because they do not function as ligands.
Пример 14: картирование эпитопов антител к LAG-3 посредством мутагенеза LAG-3.Example 14: epitope mapping of anti-LAG-3 antibodies by LAG-3 mutagenesis.
Эпитопы антител в целом можно охарактеризовать как линейные эпитопы (также называемые непрерывными эпитопами) или конформационные эпитопы (также называемые прерывистыми эпитопами). Линейные эпитопы определяют на основе одной непрерывной аминокислотной последовательности, тогда как конформационные эпитопы могут состоять из нескольких более мелких не непрерывных линейных последовательностей или отдельных контактных остатков. Совокупность контактных остатков, которые образуют кластер в межмолекулярном белковом интерфейсе между антителом и антигеном, также называют горячей точкой (Moreira et al., Proteins 68(4):803-12 (2007)). Сейчас общепризнанным является то, что большинство эпитопов В-клеток являются не непрерывными по природе (Sivalingam and Shepherd, Mol Immunol. 51 (3-4) :304-92012 (2012), Kringelum et al., Mol Immunol. 53(1-2) :24-34 (2013)), причем усредненный эпитоп охватывает 15-22 аминокислотных остатков, из которых 2-5 аминокислот вносят основной вклад в связывание (Sivalingam and Shepherd, выше).Antibody epitopes can generally be characterized as linear epitopes (also called continuous epitopes) or conformational epitopes (also called discontinuous epitopes). Linear epitopes are defined on the basis of a single contiguous amino acid sequence, whereas conformational epitopes can consist of several smaller, non-contiguous linear sequences or individual contact residues. The collection of contact residues that form a cluster at the intermolecular protein interface between antibody and antigen is also called a hot spot (Moreira et al., Proteins 68(4):803-12 (2007)). It is now generally accepted that most B cell epitopes are not continuous in nature (Sivalingam and Shepherd, Mol Immunol. 51(3-4):304-92012 (2012), Kringelum et al., Mol Immunol. 53(1- 2) :24-34 (2013)), with the average epitope covering 15-22 amino acid residues, of which 2-5 amino acids make the main contribution to binding (Sivalingam and Shepherd, supra).
Посредством ранжирования аффинности связывания с 108 различными мутантами LAG-3, этот пример иллюстрирует, как связывающие эпитопы анти-LAG-3 антител 15532, 15431, 15572 и 15011 можно делить на линейные эпитопы и горячие точки, которые отличаются от эпитопа, распознаваемого аналогом эталонного антитела 25F7-Lag3.5.By ranking binding affinities to 108 different LAG-3 mutants, this example illustrates how the binding epitopes of anti-LAG-3 antibodies 15532, 15431, 15572, and 15011 can be divided into linear epitopes and hot spots that differ from the epitope recognized by the reference antibody analogue 25F7-Lag3.5.
Способы.Ways.
Рецептор LAG-3 человека (CD223) представляет собой трансмембранный белок из 525 аминокислот (АА), который содержит внеклеточный домен (ECD) из 427 аминокислот (остатки 23-450), после которого следует трансмембранный домен (остатки 451-471) и цитоплазматический домен (остатки 472-525). ECD LAG-3 содержит 4 иммуноглобулиновых домена (D1-D4), где первый домен, домен типа IgV, участвует в связывании лиганда (связывании MHCII), а остальные три домена представляют собой домены типа IgC2. Отдельно первых двух N-концевых доменов (D1-D2) достаточно для связывания лиганда и показано, что D2 необходим для корректного представления рецептора (Huard et al., Proc Natl Acad Sci USA 94:5744-5749 (1997), Andrews et al., Immunol Rev. 276(1):80-96 (2017)). Домен 1 содержит дополнительный уникальный фрагмент из 30 аминокислот (дополнительная петля), который не находят в других IgV-доменах и который, как показано, важен для связывания лиганда. Аминокислоты (АА) 99, 110, 125, 131 и 137 также идентифицированы в качестве важных для связывания лиганда (Y77, R88, R103, D109, R115 в зрелом белке) (Huard et al., выше; Andrews et al., выше). Структура LAG-3 не опубликована. ОдThe human LAG-3 receptor (CD223) is a 525 amino acid (AA) transmembrane protein that contains a 427 amino acid extracellular domain (ECD) (residues 23-450), followed by a transmembrane domain (residues 451-471) and a cytoplasmic domain (residues 472-525). ECD LAG-3 contains 4 immunoglobulin domains (D1-D4), where the first domain, the IgV-type domain, is involved in ligand binding (MHCII binding), and the remaining three domains are IgC2-type domains. Separately, the first two N-terminal domains (D1-D2) are sufficient for ligand binding and D2 has been shown to be required for correct receptor presentation (Huard et al., Proc Natl Acad Sci USA 94:5744-5749 (1997), Andrews et al. , Immunol Rev. 276(1):80–96 (2017)). Domain 1 contains an additional unique 30 amino acid fragment (extra loop) that is not found in other IgV domains and has been shown to be important for ligand binding. Amino acids (AA) 99, 110, 125, 131 and 137 have also been identified as important for ligand binding (Y77, R88, R103, D109, R115 in the mature protein) (Huard et al., supra; Andrews et al., supra) . The structure of LAG-3 has not been published. Od
- 35 046220 нако установлены последовательность и эволюционная гомология между LAG-3 и CD4, что, таким образом, делает возможным доступ к структурной информации о LAG-3 на основе моделирования по гомологии с CD4 (Huard et al., выше; Andrews et al., выше).- 35 046220 The sequence and evolutionary homology between LAG-3 and CD4 have now been established, thus making it possible to access structural information about LAG-3 based on homology modeling with CD4 (Huard et al., supra; Andrews et al. , higher).
Белковые последовательности LAG-3 человека и ортологи загружали из UniProt или NCBI: человек (Р18627; SEQ ID NO: 68), яванский макак (Масаса fascicularis, XP_005570011.1; SEQ ID NO: 69), крыса (Rattus norvegicus, Q5BK54; SEQ ID NO: 70) и собака (Canis Lupus Familiaris, F1P7Z3; SEQ ID NO: 71). Идентичности последовательностей для различных аминокислотных последовательностей внеклеточных доменов LAG-3 представлены далее в табл. 4.Human LAG-3 protein sequences and orthologs were downloaded from UniProt or NCBI: human (P18627; SEQ ID NO: 68), cynomolgus macaque (Macaca fascicularis, XP_005570011.1; SEQ ID NO: 69), rat (Rattus norvegicus, Q5BK54; SEQ ID NO: 70) and dog (Canis Lupus familiaris, F1P7Z3; SEQ ID NO: 71). Sequence identities for various amino acid sequences of the extracellular domains of LAG-3 are presented below in table. 4.
Таблица 4. Список аминокислотных различий и идентичность последовательностей с LAG-3 человека во внеклеточном домене LAG-3 от трех различных биологических видов.Table 4. List of amino acid differences and sequence identities with human LAG-3 in the extracellular domain of LAG-3 from three different species.
Для картирования линейных эпитопов в контексте нативной структуры LAG-3 человека разрабатывали 35 химерных белков, где 10 аминокислоты в последовательности ECD LAG-3 человека последовательно заменяли на последовательность крысы в сегментах, которые перекрывались на 5 аминокислот, и с добавлением версий собаки и яванского макака в областях особого интереса (например, критичные АА вставочные последовательности и фрагментеы петель). Замены последовательностей осуществляли в домене 1 LAG-3 человека, охватывающем аминокислоты 23-170. По сконструированной гомологичной модели на основе кристаллических структур CD4 (1WIO, 1WIQ) и выравниваниям аминокислотных последовательностей идентифицировали аминокислоты, экспонированные на поверхности, и разрабатывали 80 индивидуальных замен в домене 1 LAG-3 человека. Введенные точечные мутации в первую очередь представляли собой аланиновые замены. Когда экспонированный на поверхности остаток представ лял аланин, это положение меняли на серии.To map linear epitopes in the context of the native structure of human LAG-3, 35 chimeric proteins were designed where 10 amino acids of the human LAG-3 ECD sequence were sequentially replaced with the rat sequence in segments that overlapped by 5 amino acids, and with the addition of dog and cynomolgus versions in areas of special interest (eg critical AA insertion sequences and loop fragments). Sequence substitutions were made in domain 1 of human LAG-3, spanning amino acids 23-170. Using the constructed homology model based on CD4 crystal structures (1WIO, 1WIQ) and amino acid sequence alignments, surface exposed amino acids were identified and 80 individual substitutions in domain 1 of human LAG-3 were designed. The point mutations introduced were primarily alanine substitutions. When the residue exposed on the surface was alanine, this position was changed in the series.
кДНК LAG-3, кодирующую домены 1 и 2 внеклеточного домена LAG-3 человека (АА 1-266), синтезировали и клонировали в вектор, содержащий промотор CMV и последовательность Fc IgG1 человека (АА Р101-К330), что вело к экспрессии слитого белка из доменов 1-2 LAG и Fc. Слитые конструкции мутантного LAG-3 человека и Fc создавали посредством стандартной ПЦР и приемов конструирования, и белок временно экспрессировали в 2 мл культуре с использованием экспрессирующей системы ExpiCHO™. Слитые конструкции из LAG-3 человека и Fc собирали, очищали и тестировали на аффинность связывания с mAb против LAG-3 посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Слитые белки LAG-3 иммобилизовали на G-a-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, The Netherlands) в течение 15 мин с использованием Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US). После точечного нанесения, SensEye® помещали в биосенсор IBIS MX96 и оценивали аффинность связывания захваченных белков. Кинетический анализ осуществляли посредством применения так называемого радя кинетического титрования (Karlsson R. 2006), где мономерные Fab фрагменты антител по изобретению впрыскивали в увеличивающихся концентрациях от 0,4 до 300 нМ без применения стадий регенерации поверхности после каждого впрыска Fab. Связывание Fab осуществляли в течение 15 мин и диссоциацию антигена осуществляли в течение 15 мин. Зарегистрированные сигналы связывания аппроксимировали к простой модели связывания Ленгмюра 1:1 с использованием программного обеспечения Scrubber 2 для вычисления констант скорости ассоциации (kon или ka), скорости диссоциации (koff или kd) и аффинности (KD). Результаты Аффинности связывания Fab фрагментов анти-LAG-3 антител 15532, 15431, 15572, 15011 и аналога эталонного антитела 25F7-Lag3.5 оценивали в отношении измененного связывания с конструкциями мутантного LAG-3. Аффинности связывания Fab фрагментов, связывающихся с конструкциями мутантного LAG-3, экспрессировали в виде соотношения KD мутанта/KD дикого типа (нормализованная аффинность связывания). Далее в табл. 5 и 6 представлены нормализованные аффинности связывания со всеми тестированными химерными белками и для экспериментов сканирования аланином, соответственно. Порог по меньшей мере 5-кратного снижения аффинности использовали в качестве критерия для обнаружения значительно сниженной аффинности связывания с конструкциями мутантного LAG-3. В некоторых случаях нельзя обнаруживать связывание со специфическими антителами. Эти конструкции перечислены как связывание отсутствует (С.О.).LAG-3 cDNA encoding domains 1 and 2 of the extracellular domain of human LAG-3 (AA 1-266) was synthesized and cloned into a vector containing the CMV promoter and the human IgG1 Fc sequence (AA P101-K330), leading to expression of the fusion protein from domains 1-2 of LAG and Fc. Mutant human LAG-3 and Fc fusion constructs were generated by standard PCR and construction techniques, and the protein was transiently expressed in 2 ml culture using the ExpiCHO™ expression system. Human LAG-3-Fc fusion constructs were assembled, purified, and tested for binding affinity to anti-LAG-3 mAb by surface plasmon resonance (SPR). LAG-3 fusion proteins were immobilized onto Ga-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, The Netherlands) for 15 min using a Continuous Flow Microspotter (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, US). After spot application, SensEye® was placed into the IBIS MX96 biosensor and the binding affinity of the captured proteins was assessed. Kinetic analysis was carried out using so-called kinetic titration (Karlsson R. 2006), where monomeric Fab fragments of antibodies according to the invention were injected in increasing concentrations from 0.4 to 300 nM without the use of surface regeneration steps after each injection of Fab. Fab binding occurred within 15 min and antigen dissociation occurred within 15 min. The recorded binding signals were fitted to a simple 1:1 Langmuir binding model using Scrubber 2 software to calculate association rate constants (k on or k a ), dissociation rate (k off or k d ), and affinity (K D ). Results The binding affinities of Fab fragments of anti-LAG-3 antibodies 15532, 15431, 15572, 15011 and the reference antibody analogue 25F7-Lag3.5 were assessed for altered binding to mutant LAG-3 constructs. The binding affinities of Fab fragments binding to mutant LAG-3 constructs were expressed as the ratio of mutant KD/wild-type KD (normalized binding affinity). Further in the table. Figures 5 and 6 present the normalized binding affinities for all chimeric proteins tested and for the alanine scanning experiments, respectively. A threshold of at least a 5-fold decrease in affinity was used as a criterion to detect significantly reduced binding affinity for mutant LAG-3 constructs. In some cases, binding to specific antibodies cannot be detected. These constructs are listed as binding absent (S.O.).
Анализ показывал, что связывающие эпитопы анти-LAG-3 антител 15532, 15431, 15572, 15011 отличаются от таковых для аналога эталонного антитела 25F7-Lag3.5. Связывающий эпитоп для 15532 был очевиден из химерных белков с АА, вставленными в положениях 78-87, 84-92, 88-97 - совокупный аминокислотный фрагмент в LAG-3, который находится в пределах дополнительной петли домена 1. Однако, в отличие от 25F7-Lag3.5, линейные эпитопы для 15532 выходят за пределы этого фрагмента, вклюThe analysis showed that the binding epitopes of anti-LAG-3 antibodies 15532, 15431, 15572, 15011 differ from those of the analogue of the reference antibody 25F7-Lag3.5. A binding epitope for 15532 was evident from chimeric proteins with AA inserted at positions 78-87, 84-92, 88-97 - a cumulative amino acid fragment in LAG-3 that lies within the additional loop of domain 1. However, unlike 25F7 -Lag3.5, linear epitopes for 15532 extend beyond this fragment, including
- 36 046220 чая АА 95-100, АА 98-105 и АА123-131. Интересно, что ключевые аминокислоты для лигандных взаимодействий идентифицированы в сегменте 99-131 (Y99, R125 и D131; Huard et al., выше). Аналог 25F7Lag3.5 не демонстрирует какую-либо чувствительность к мутациям в области, критичной для связывания лиганда. Контактные остатки 15532, как измеряют посредством аланиновых замен, идентифицировали как Н85, Р86, А87, Р89, S91, W92 и G93, тогда как аналог 25F7-Lag3.5 не демонстрирует чувствительность к Р86 и S91, что иллюстрирует дифференцированные контактные остатки в области АА 85-93. 15532 способен связывать химерную конструкцию №28 с обратными мутациями АА яванского макака (Р84Н; H85R; S90Y), тогда как аналог 25F7-Lag3.5 не способен, что снова отражает дифференцированный тонкий эпитоп в области АА 84-90.- 36 046220 tea AA 95-100, AA 98-105 and AA123-131. Interestingly, key amino acids for ligand interactions are identified in segment 99-131 (Y99, R125 and D131; Huard et al., supra). The 25F7Lag3.5 analogue does not show any sensitivity to mutations in the region critical for ligand binding. Contact residues 15532, as measured by alanine substitutions, were identified as H85, P86, A87, P89, S91, W92, and G93, while the 25F7-Lag3.5 analog did not show sensitivity to P86 and S91, illustrating differentiated contact residues in the AA region 85-93. 15532 is able to bind chimeric construct #28 to the cynomolgus AA reverse mutations (P84H; H85R; S90Y), whereas the 25F7-Lag3.5 analogue is not, again reflecting a differentiated thin epitope in the AA region 84-90.
Было обнаружено, что два антитела 15431 и 15572 связывают линейные эпитопы в сегментах АА 23-30 и 40-66. Кроме того, аланиновое сканирование иллюстрировало, что оба антитела имели идентичные контактные остатки в положениях А40, Q41, Р43, Р46, Р49, D52, Т62, Q64, Н65, Q66, Р67 и D68. Кроме того, 15431 чувствителен к химерным конструкциям 88-97, 95-100 и 98-105 (сегмент АА 88-105). Доказано, что АА область 98-105 является уникальным общим эпитопом для 15532, 15431, 15572 и 15011.Two antibodies, 15431 and 15572, were found to bind linear epitopes in AA segments 23-30 and 40-66. In addition, the alanine scan illustrated that both antibodies had identical contact residues at positions A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, and D68. In addition, 15431 is sensitive to chimeric constructs 88-97, 95-100 and 98-105 (AA segment 88-105). The AA region 98-105 has been shown to be a unique common epitope for 15532, 15431, 15572 and 15011.
Аналог 25F7-Lag3.5 не связывает этот эпитоп. Аланиновое сканирование показывало, что 15431 и 15572 делили контактные остатки Р96, Y99, Т100, V101, Р106 и G107, тогда как 15431 имело уникальные контакты в положениях G93, Р94 и R98. Антитело 15431 также имело линейный эпитоп в сегментах АА 123-131, 128-137 и 148-154. Интересно, что предварительно показано, что положения 125, 131 и 137 важны для связывания лиганда (Huard et al., выше). Эти сегменты (АА 123-131, 128-137 и 148-154) также важны для 15572, которое распознавало линейные эпитопы в сегментах АА 118-137 и 148-161. Кроме того, аланиновое сканирование показывало, что 15431 и 15572 делили контактные остатки в положениях R119, Е124, R129, G130, D131, S133, R137, Р138, D143, R148 и R163, тогда как аналог 25F7-Lag3.5 не демонстрирует чувствительность к любым из этих областей эпитопов или аминокислотных положений.The 25F7-Lag3.5 analogue does not bind this epitope. Alanine scans showed that 15431 and 15572 shared contact residues P96, Y99, T100, V101, P106, and G107, while 15431 had unique contacts at positions G93, P94, and R98. Antibody 15431 also had a linear epitope in AA segments 123-131, 128-137 and 148-154. Interestingly, positions 125, 131 and 137 have previously been shown to be important for ligand binding (Huard et al., supra). These segments (AA 123-131, 128-137 and 148-154) are also important for 15572, which recognized linear epitopes in AA segments 118-137 and 148-161. In addition, alanine scanning showed that 15431 and 15572 shared contact residues at positions R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 and R163, whereas the analog 25F7-Lag3.5 did not show sensitivity to any of these epitope regions or amino acid positions.
Антитело 15011 содержало линейный эпитоп, определяемый химерной конструкцией с мутациями в диапазоне АА 98-105, и аланиновое сканирование дополнительно расширяло уникальный эпитоп на контактные остатки в положениях G107, L109, R110 и S111. Интересно, что показано, что R110 важен для связывания лиганда (Huard et al., выше). Аминокислотная последовательность высоко консервативна в этой области (АА98-113) между ортологами человека, яванского макака, мыши и крысы, что объясняет перекрестную реактивность этого антитела к LAG-3 мыши и яванского макака (пример 12). Сводка собранных находок при картировании эпитопов представлена далее в табл. 7.Antibody 15011 contained a linear epitope defined by a chimeric construct with mutations in the range AA 98-105, and alanine scanning further extended the unique epitope to contact residues at positions G107, L109, R110, and S111. Interestingly, R110 has been shown to be important for ligand binding (Huard et al., supra). The amino acid sequence is highly conserved in this region (AA98-113) between the human, cynomolgus, mouse and rat orthologs, which explains the cross-reactivity of this antibody to mouse and cynomolgus LAG-3 (Example 12). A summary of the collected findings from epitope mapping is presented below in Table. 7.
Вкратце, авторы изобретения показали на разрешении в одну аминокислоту, посредством анализа связывания с панелью из 108 мутантов LAG-3, что четыре антитела 15532, 15431, 15572 и 15011 распознают уникальные, но частично перекрывающиеся эпитопы в домене 1 LAG-3. Эта находка соответствует анализу группировки эпитопов в примере 13, который показывает, что 15532 перекрестно конкурирует с аналогом 25F7-Lag3.5, но имеет дифференцированный паттерн конкуренции с другими антителами к LAG-3 и, таким образом, другой эпитоп (табл. 7). 15431, 15572 и 15011 не конкурируют за связывание с 15532 или 25F7-Lag3.5 и имеют уникальные паттерны конкуренции с отдельными антителами группы эпитопов 2. Присвоенные группы эпитопов (пример 13) хорошо совпадают с картированием эпитопом, которое обнаруживало, что каждое антитело демонстрировано уникальные дифференцированные эпитопы (табл. 7). Данные об эпитопах, включая химерную конструкцию №28, также хорошо подтверждаются анализом аффинности связывания (пример 12), в котором 15532 демонстрировало значимое связывание с LAG-3 яванского макака, a 25F7-Lag3.5 - нет, что отражает различные свойства антител из-за дифференцированных контактных остатков.Briefly, we show at single amino acid resolution, through binding assays to a panel of 108 LAG-3 mutants, that four antibodies 15532, 15431, 15572 and 15011 recognize unique but partially overlapping epitopes in domain 1 of LAG-3. This finding is consistent with the epitope clustering analysis in Example 13, which shows that 15532 cross-competes with the 25F7-Lag3.5 analog, but has a differential pattern of competition with other anti-LAG-3 antibodies and thus a different epitope (Table 7). 15431, 15572, and 15011 do not compete for binding to 15532 or 25F7-Lag3.5 and have unique competition patterns with individual epitope group 2 antibodies. The assigned epitope groups (Example 13) match well with epitope mapping, which revealed that each antibody exhibited unique differentiated epitopes (Table 7). The epitope data, including chimeric construct #28, are also well supported by the binding affinity assay (Example 12), in which 15532 showed significant binding to cynomolgus LAG-3, but 25F7-Lag3.5 did not, reflecting the different properties of the antibodies due to for differentiated contact residues.
- 37 046220- 37 046220
Таблица 5. Сводка по анализу аффинности связывания для Fab фрагментов aHTu-LAG-З антител, связывающих конструкции мутантного ECD LAG-3 со вставленными сегментами последовательностей крысы, собаки или яванского макака. Нормализованное связывание приведено в виде KD мутанта/KD дикого типаTable 5. Summary of binding affinity analyzes for Fab fragments of aHTu-LAG-3 antibodies binding mutant LAG-3 ECD constructs with inserted rat, dog, or cynomolgus sequence segments. Normalized binding is given as KD mutant/KD wild type
Таблица 6. Сводка по анализу аффинности связывания для Fab фрагментов aHTu-LAG-З антител, связывающих сканированных точечными мутациями LAG-3 человека. Нормализованное _______связывание представляли в виде KD мутанта/KD дикого типа_______Table 6. Summary of binding affinity analysis for Fab fragments of aHTu-LAG-3 antibodies binding human LAG-3 point mutation scanned individuals. Normalized _______binding was represented as KD mutant/KD wild type_______
- 39 046220- 39 046220
- 40 046220- 40 046220
Таблица 7. Сводка по связывающим эпитопам, которые идентифицировали для тестируемых анти-LAG-3 антителTable 7. Summary of binding epitopes that were identified for the anti-LAG-3 antibodies tested
- 41 046220- 41 046220
Таблица 8. SEQ ID NO последовательностей ДНК и белков VH, VL, НС и LCTable 8. SEQ ID NO of DNA and protein sequences VH, VL, HC and LC
- 42 046220- 42 046220
Таблица 9. SEQ ID NO последовательностей ДНК и белка VH и VL и аминокислотных последовательностей H-CDR1-3 и L-CDR1-3 анти-LAG-3 антителTable 9. SEQ ID NO of DNA and protein sequences of VH and VL and amino acid sequences of H-CDR1-3 and L-CDR1-3 anti-LAG-3 antibodies
Таблица 10. Определяющие комплементарность области (CDR) анти-LAG-3 антител и происхождение генов зародышевой линии для антител, полученных у ОМТ крысTable 10. Anti-LAG-3 antibody complementarity determining regions (CDRs) and germline gene origins for antibodies derived from OMT rats
*Гены, используемые для гуманизации, см. пример 2.*Genes used for humanization, see example 2.
- 43 046220- 43 046220
Список последовательностейList of sequences
Последовательности ДНК и белка VH и VLDNA and protein sequences of VH and VL
SEQ ID NO:1 (15646 последовательность ДНК VH)SEQ ID NO:1 (15646 VH DNA sequence)
CAGGTGCAGCTGCAGCAGTGGGGTGCCGGTCTGCTGAAGCCTTCTGAAACTCTGTCTCTCAGGTGCAGCTGCAGCAGTGGGGTGCCGGTCTGCTGAAGCCTTCTGAAACTCTGTCTCT
GACTTGTGCCGTCTATGGTGGATCATTCAGCGGCTACTATTGGTCCTGGATCAGGCAGCCCCCT GGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCAACCACCGGGGCTCTACCAACTACAATCCCTCTC TGAAGAGCAGGGTGACCATCTCCGTGGACACATCTAAGAATCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCTC CGTGACCGCCGCTGATACAGCCGTGTACTATTGCACAAGGGGGGAGGAATGGGAGTCACTGTTC TTTGATTACTGGGGGCAGGGGACACTGGTCACAGTCTCGAGTGACTTGTGCCGTCTATGGTGGATCATTCAGCGGCTACTATTGGTCCTGGATCAGGCAGCCCCCT GGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCAACCACCGGGGCTCTACCAACTACAATCCCTCTC TGAAGAGCAGGGTGACCATCTCCGTGGACACATCTAAGAATCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCTC CGTGACCGCCGCTGATACAGCCGTGTACTATTGCACAAGGGGGGAGGAA TGGGAGTCACTGTTC TTTGATTACTGGGGGCAGGGGACACTGGTCACAGTCTCGAGT
SEQ ID NO:2 (15646 последовательность ДНК VL)SEQ ID NO:2 (15646 VL DNA sequence)
GAAATCGTCCTGACCCAGTCCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGAGAAAGAGCCACGAAATCGTCCTGACCCAGTCCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGAGAAAGAGCCAC
CCTGTCCTGCCGAGCAAGCCAGTCCATCAGCTCCTATCTCGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGC CAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGGCGCCTCCAACAGAGCTACAGGAATCCCAGCCCGCTTCA GCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACAATCTCTAGCCTGGAGCCTGAGGATTTCGC CGTGTACTATTGCCAGCAGAGATCTAATTGGCCACTGACATTCGGCGGCGGCACACGGGTGGAG ATCAAGCCTGTCCTGCCGAGCAAGCCAGTCCATCAGCTCCTATCTCGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGC CAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGGCGCCTCCAACAGAGCTACAGGAATCCCAGCCCGCTTCA GCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACAATCTCTAGCCTGGAGCCTGAGGATTTCGC CGTGTACTATTGCCAGCAGAGATCTAATTGGCCACTGACATTCGGCGGCGGCACA CGGGTGGAG ATCAAG
SEQ ID NO:3 (15646 последовательность белка VH)SEQ ID NO:3 (15646 VH protein sequence)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNYQVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNY
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCTRGEEWESLFFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:4 (15646 последовательность белка VL)NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCTRGEEWESLFFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:4 (15646 VL protein sequence)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIP
ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTRVEIKARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTRVEIK
SEQ ID NO:5 (15532 последовательность ДНК VH)SEQ ID NO:5 (15532 VH DNA sequence)
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCCGGCCTGCTGAGACCAAGCGAGACCCTGTCCCTCAGGTTCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCCGGCCTGCTGAGACCAAGCGAGACCCTGTCCCT
GACATGCGCCGTGTATGGCGAGAGCTTCTCCGGCTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGCCTCCCGACATGCGCCGTGTATGGCGAGAGCTTCTCCGGCTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGCCTCCC
- 44 046220- 44 046220
GGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCAATCACTCCGGCTCCACCAATTACAACCCATCCC TGAAGTCTCGGGTGACAATCAGCGTGGATACAAGCAAGACCCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCTC CGTGACAGCTGCCGATACCGCCGTGTATTACTGCGCCAGAGGCTGGGACCTGCTGGATTGGAAT GACTACTGGAATGAGTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGTGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCAATCACTCCGGCTCCACCAATTACAACCCATCCC TGAAGTCTCGGGTGACAATCAGCGTGGATACAAGCAAGACCCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCTC CGTGACAGCTGCCGATACCGCCGTGTATTACTGCGCCAGAGGCTGGGACCTGCTGGATTGGAAT GACTACTGGAATGAGTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGT
SEQ ID NO:6 (15532 последовательность ДНК VL)SEQ ID NO:6 (15532 VL DNA sequence)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCTCTGTCCCCTGGCGAGCGGGCCAC CCTGTCCTGTAGAGCTTCTCAGTCCGTGTCTTCCTACCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGA CAGGCCCCAAGACTGCTGATCTATGACGCTTCCAATCGGGCTACCGGCATCCCAGCTCGCTTTA GCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCTCCCTGGAGCCAGAGGATTTTGC CGTGTATTACTGTCAGCAGAGGTCCAATTGGCCACTGACATTTGGCGGCGGCACAAAGGTTGAG ATCAAGGAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCTCTGTCCCCTGGCGAGCGGGCCAC CCTGTCCTGTAGAGCTTCTCAGTCCGTGTCTTCCTACCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGA CAGGCCCCAAGACTGCTGATCTATGACGCTTCCAATCGGGCTACCGGCATCCCAGCTCGCTTTA GCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCTCCCTGGAGCCAGAG GATTTTGC CGTGTATTACTGTCAGCAGAGGTCCAATTGGCCACTGACATTTGGCGGCGGCACAAAGGTTGAG ATCAAG
SEQ ID NO:7 (15532 последовательность белка VH)SEQ ID NO:7 (15532 VH protein sequence)
QVQLQQWGAGLLRPSETLSLTCAVYGESFSGYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYQVQLQQWGAGLLRPSETLSLTCAVYGESFSGYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNY
NPSLKSRVTISVDTSKTQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGWDLLDWNDYWNEYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:8 (15532 последовательность белка VL)NPSLKSRVTISVDTSKTQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGWDLLDWNDYWNEYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:8 (15532 VL protein sequence)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP
ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:9 (15723 последовательность ДНК VH)SEQ ID NO:9 (15723 VH DNA sequence)
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCTGGCCTGCTGAAGCCCTCTGAGACCCTGTCTCT GACCTGTGCCGTGTATGGCGGCAGCTTCTCCGGCTATTACTGGAACTGGATCCGCCAGCCCCCC GGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCAACCACTCCGGCTCTACCAACTACAATCCTTCTC TGAAGTCCAGGGTGACAATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTTAGCCTGAAGCTGTCCAG CGTGACAGCTGCCGATACAGCCGTGTATTACTGCGCCAGAGGCGAGGATTGGGGCGAGAGCTTC TTTGATTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGTCAGGTTCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCTGGCCTGCTGAAGCCCTCTGAGACCCTGTCTCT GACCTGTGCCGTGTATGGCGGCAGCTTCTCCGGCTATTACTGGAACTGGATCCGCCAGCCCCCC GGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCAACCACTCCGGCTCTACCAACTACAATCCTTCTC TGAAGTCCAGGGTGACAATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTTAGCCTGA AGCTGTCCAG CGTGACAGCTGCCGATACAGCCGTGTATTACTGCGCCAGAGGCGAGGATTGGGGCGAGAGCTTC TTTGATTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGT
SEQ ID NO:10 (15723 последовательность ДНК VL)SEQ ID NO:10 (15723 VL DNA sequence)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCTCTGTCCCCTGGCGAGCGGGCCAC CCTGAGCTGTCGGGCCTCCCAGTCCGTGAGCTCCTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGA CAGGCCCCAAGACTGCTGATCTACGCCGCTTCCAATCGGGCCACCGGCATCCCCGCCAGATTTT CCGGCTCTGGCTCCGGCACCGATTTCACCCTGACAATCAGCTCCCTGGAGCCAGAGGACTTCGC CGTGTACTACTGCCAGCAGAGGTCTAATTGGCCACTGACATTTGGCGGCGGCACCAAGGTTGAG ATCAAGGAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCTCTGTCCCCTGGCGAGCGGGCCAC CCTGAGCTGTCGGGCCTCCCAGTCCGTGAGCTCCTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGA CAGGCCCCAAGACTGCTGATCTACGCCGCTTCCAATCGGGCCACCGGCATCCCCGCCAGATTTT CCGGCTCTGGCTCCGGCACCGATTTCACCCTGACAATCAGCTCCCTGGAGCCAGA GGACTTCGC CGTGTACTACTGCCAGAGGTCTAATTGGCCACTGACATTTGGCGGCGGCACCAAGGTTGAG ATCAAG
SEQ ID NO:11 (15723 последовательность белка VH)SEQ ID NO:11 (15723 VH protein sequence)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYQVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNY
NPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGEDWGESFFDYWGQGTLVTVSSNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGEDWGESFFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:12 (15723 последовательность белка VL)SEQ ID NO:12 (15723 VL protein sequence)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYAASNRATGIPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYAASNRATGIP
- 45 046220- 45 046220
ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:13 (15595 последовательность ДНК VH)SEQ ID NO:13 (15595 VH DNA sequence)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGAGCTTCTGTGAAGGT TTCCTGTAAGGTTTCCGGCTATAGCCTGACCGAGATCTCTATGCACTGGGTACGGCAAGCCCCC GGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCTTTGACCCAGAGGATGGCGAGACCATCTACGCTCAGA GGTTTCAGGGGCGCGTGATCATGACCGAGGATACCAGCACCGATACCGCCTACATGGAGCTGTC CAGCCTGAGATCCGAGGATACCGCCGTGTATTACTGCGCTACTGGTGGCTGGGGCCCCAATTGG TTCGATCCTTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGTCAGGTTCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGAGCTTCTGTGAAGGT TTCCTGTAAGGTTTCCGGCTATAGCCTGACCGAGATCTCTATGCACTGGGTACGGCAAGCCCCC GGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCTTTGACCCAGAGGATGGCGAGACCATCTACGCTCAGA GGTTTCAGGGGCGCGTGATCATGACCGAGGATACCAGCACCGATACCG CCTACATGGAGCTGTC CAGCTGAGATCCGAGGATACCGCCGTGTATTACTGCGCTACTGGTGGCTGGGGCCCCAATTGG TTCGATCCTTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGT
SEQ ID NO:14 (15595 последовательность ДНК VL)SEQ ID NO:14 (15595 VL DNA sequence)
GACATCCAGATGACACAGTCTCCTTCCTCTGTGAGCGCCTCTGTGGGCGACCGCGTGAC CATCACATGCCGCGCTTCCCAGGGGATCTCTTCCTGGCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCCGGC AAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTATGCTGCCAGCAGCCTGCAGTCCGGCGTGCCTTCCAGGTTTA GCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTTACACTGACAATCAGCTCCCTGCAGCCCGAGGATTTTGC CACCTATTACTGTCAGCAGGCGAATTCCTTCCCTTTTACATTCGGCCCTGGCACCAAGGTTGAT ATCAAGGACATCCAGATGACACAGTCTCCTTCCTCTGTGAGCGCCTCTGTGGGCGACCGCGTGAC CATCACATGCCGCGCTTCCCAGGGGATCTCTTCCTGGCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCCGGC AAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTATGCTGCCAGCAGCCTGCAGTCCGGCGTGCCTTCCAGGTTTA GCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTTACACTGACAATCAGCTCCCTGCAGCCCGA GGATTTTGC CACCTATTACTGTCAGCAGGCGAATTCCTTCCCTTTTACATTCGGCCCTGGCACCAAGGTTGAT ATCAAG
SEQ ID NO:15 (15595 последовательность белка VH)SEQ ID NO:15 (15595 VH protein sequence)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYSLTEISMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYSLTEISMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETI
YAQRFQGRVIMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGGWGPNWFDPWGQGTLVTVSSYAQRFQGRVIMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGGWGPNWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:16 (15595 последовательность белка VL)SEQ ID NO:16 (15595 VL protein sequence)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPFTFGPGTKVDIKDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPFTFGPGTKVDIK
SEQ ID NO:17 (15431 последовательность ДНК VH)SEQ ID NO:17 (15431 VH DNA sequences)
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCCGGCCCCGGCCTGGTGAAGCCAAGCCAGACCCTGTCTCT GACATGCGCCATCTCCGGCGACAGCGTGTCCTCTAACTCCGCCGCTTGGAATTGGATCCGGCAG TCTCCATCCAGAGGCCTGGAGTGGCTGGGCAGAACCTATTACCGGTCCAAGTGGTACAACGATT ATGCCGTGTCCGT GAAGAG CAGAAT CAC CAT СAAC С С T GATAC CAG CAAGAAC CAG T T CAG С С T GCAGCTGAATTCCGTGACCCCAGAGGATACAGCCGTGTATTACTGTGCTAGGGACGATGATTGG AATGACTTCGATTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACAGTCTCGAGTCAGGTTCAGCTGCAGCAGTCCGGCCCCGGCCTGGTGAAGCCAAGCCAGACCCTGTCTCT GACATGCGCCATCTCCGGCGACAGCGTGTCCTCTAACTCCGCCGCTTGGAATTGGATCCGGCAG TCTCCATCCAGAGGCCTGGAGTGGCTGGGCAGAACCTATTACCGGTCCAAGTGGTACAACGATT ATGCCGTGTCCGT GAAGAG CAGAAT CAC CAT CAAC C T GATAC CAG CAAGAAC CAG T T CAG C C T GCAGCTGAATTCCGTGACCCCAGAGGATACAGCCGTGTATTACTGTGCTAGGGACGATGATTGG AATGACTTCGATTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACAGTCTCGAGT
SEQ ID NO:18 (15431 последовательность ДНК VL)SEQ ID NO:18 (15431 VL DNA sequences)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCAGCTACACTGTCCCTGTCTCCCGGCGAGCGGGCCAC CCTGAGCTGTAGAGCTTCCCAGTCCGTGTCTTCCTATCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGA CAGGCCCCAAGGCTGCTGATCTACGACGCCTCCAATAGAGCCACCGGCATCCCAGCTAGATTTT CTGGCTCCGGCTCCGGCACCGATTTCACACTGACCATCTCTAGCCTGGAGCCAGAGGATTTTGC TGTATATTACTGCCAGCAGCGCAGCAACTGGCCCCTGACATTTGGCGGCGGCACCAAGGTTGAG ATCAAGGAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCAGCTACACTGTCCCTGTCTCCCGGCGAGCGGGCCAC CCTGAGCTGTAGAGCTTCCCAGTCCGTGTCTTCCTATCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGA CAGGCCCCAAGGCTGCTGATCTACGACGCCTCCAATAGAGCCACCGGCATCCCAGCTAGATTTT CTGGCTCCGGCTCCGGCACCGATTTCACACTGACCATCTCTAGCCTGGAGCCAGAG GATTTTGC TGTATATTACTGCCAGCAGCGCAGCAACTGGCCCCTGACATTTGGCGGCGGCACCAAGGTTGAG ATCAAG
SEQ ID NO:19 (15431 последовательность белка VH)SEQ ID NO:19 (15431 VH protein sequences)
- 46 046220- 46 046220
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKW YNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDDDWNDFDYWGQGTLVTVSSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKW YNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDDDWNDFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:20 (15431 последовательность белка VL)SEQ ID NO:20 (15431 VL protein sequences)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:21 (15572 последовательность ДНК VH)SEQ ID NO:21 (15572 VH DNA sequence)
CAGCTGCAGCTGCAGGAAAGCGGCCCCGGCCTGGTGAAGCCCTCTGAGACCCTGTCCCT GACATGCACCGTGAGCGGCGATTCCATCAGCTCTTCCAGCTATTACTGGGGCTGGATCCGGCAG CCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCAGCATCTTCTACTCCGGCAATACATATTATAATC CTTCTCTGAAGAGCAGGGTGACAATCAGCGTGGATACCTCCAAGAATCAGTTTAGCCTGAAGCT GAGCTCCGTGACAGCTGCCGATACAGCCGTGTATTACTGCGCTAGGGAGGACGATTTTCTGACC GATTATTACGGCGCTTTCGACATCTGGGGCCAGGGGACAATGGTGACAGTCTCGAGTCAGCTGCAGCTGCAGGAAAGCGGCCCCGGCCTGGTGAAGCCCTCTGAGACCCTGTCCCT GACATGCACCGTGAGCGGCGATTCCATCAGCTCTTCCAGCTATTACTGGGGCTGGATCCGCAG CCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCAGCATCTTCTACTCCGGCAATACATATTATAATC CTTCTCTGAAGAGCAGGGTGACAATCAGCGTGGATACCTCCAAGAATCAGTTTAGC CTGAAGCT GAGCTCCGTGACAGCTGCCGATACAGCCGTGTATTACTGCGCTAGGGAGGACGATTTTCTGACC GATTATTACGGCGCTTTCGACATCTGGGGCCAGGGGACAATGGTGACAGTCTCGAGT
SEQ ID NO:22 (15572 последовательность ДНК VL)SEQ ID NO:22 (15572 VL DNA sequence)
GATATCCAGATGACCCAGTCTCCAAGCACCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATCGGGTGAC CATCACATGTCGGGCTTCTCAGTCCATCAGCAGCTGGCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGC AAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACAAGGCCTCTTCCAGCGAGAGCGGCGTGCCATCCAGGTTTA GCGGCTCCGGCTCCGGCACCGAGTTTACCCTGACCATCTCTTCCCTGCAGCCCGATGACTTTGC CACCTACTACTGTCAGCAGTACAATTCCTATCTGACATTCGGCGGCGGCACCAAGGTTGAGATC AAGGATATCCAGATGACCCAGTCTCCAAGCACCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATCGGGTGAC CATCACATGTCGGGCTTCTCAGTCCATCAGCAGCTGGCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGC AAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACAAGGCCTCTTCCAGCGAGAGCGGCGTGCCATCCAGGTTTA GCGGCTCCGGCTCCGGCACCGAGTTTACCCTGACCATCTCTTCCCTGCAGCCCGA TGACTTTGC CACCTACTACTGTCAGCAGTACAATTCCTATCTGACATTCGGCGGCGGCACCAAGGTTGAGATC AAG
SEQ ID NO:23 (15572 последовательность белка VH)SEQ ID NO:23 (15572 VH protein sequence)
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIFYSGNT YYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREDDFLTDYYGAFDIWGQGTMVTVS SS
SEQ ID NO:24 (15572 последовательность белка VL)SEQ ID NO:24 (15572 VL protein sequence)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSSESGVP SRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYLTFGGGTKVEIKDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSSESGVP SRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:25 (15011 последовательность ДНК VH)SEQ ID NO:25 (15011 VH DNA sequence)
GAGGTGCAGCTGCTGGAATCCGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCCCTGCGACT GAGCTGCGCCGCTTCTGGCTTCGACTTTAGAAGCTACGCAATGATGTGGGTCCGCCAGGCACCA GGAAAGGGACTGGAGTGGGTGGGAGGGATCAACGGTGAAGTCGGTGGCTCTAATACATACTATG CACCTGCCGTCAAGGGAAGGGCTACTATTAGTCGGGACAACTCAAAAAATACCCTGTATCTGCA AATGAACAGTCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTATTGCGTGAAAGGTGCTGGCGCATGC GGCATCTGTAATGACGATATTGATGCATGGGGACAGGGGACCCTGGTGACAGTCTCGAGTGAGGTGCAGCTGCTGGAATCCGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCCCTGCGACT GAGCTGCGCCGCTTCTGGCTTCGACTTTAGAAGCTACGCAATGATGTGGGTCCGCCAGGCACCA GGAAAGGGACTGGAGTGGGTGGGAGGGATCAACGGTGAAGTCGGTGGCTCTAATACATACTATG CACCTGCCGTCAAGGGAAGGGCTACTATTAGTCGGGACAACTCAAAAATACCCTGTATC TGCA AATGAACAGTCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTATTGCGTGAAAGGTGCTGGCGCATGC GGCATCTGTAATGACGATATTGATGCATGGGGACAGGGGACCCTGGTGACAGTCTCGAGT
SEQ ID NO:26 (15011 последовательность ДНК VL)SEQ ID NO:26 (15011 VL DNA sequence)
AGTTATGAGCTGACTCAGGACCCAGCAGTGTCAGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAAT CACTTGCAGTGGGGCTGGTTCATATGCAGGCTCCTACTATTACGGATGGCACCAGCAGAAGCCCAGTTATGAGCTGACTCAGGACCCAGCAGTGTCAGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAAT CACTTGCAGTGGGGCTGGTTCATATGCAGGCTCCTACTATTACGGATGGCACCAGCAGAAGCCC
- 47 046220- 47 046220
GGACAGGCACCTGTGACAGTCATCTACGACAACGATAAAAGGCCAAGCAATATTCCCGACCGGT TCTCTGGGTCCAGCTCTGGTAACACCGCCTCCCTGACCATTACTGGGGCCCAGGCTGAGGACGA AGCTGATTATTACTGTGGCTCTACAAACGATAATGACGATGGCGGACTGTTTGGCTCCGGAACT AAGGTCACCGTCCTAGGACAGGCACCTGTGACAGTCATCTACGACAACGATAAAAGGGCCAAGCAATATTCCCGACCGGT TCTCTGGGTCCAGCTCTGGTAACACCGCCTCCCTGACCATTACTGGGGCCCAGGCTGAGGACGA AGCTGATTATTACTGTGGCTCTACAAACGATAATGACGATGGCGGACTGTTTGGCTCCGGAACT AAGGTCACCGTCCTA
SEQ ID NO:27 (15011 последовательность белка VH)SEQ ID NO:27 (15011 VH protein sequence)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFRSYAMMWVRQAPGKGLEWVGGINGEVGGSN TYYAPAVKGRATISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGAGACGICNDDIDAWGQGTLVTV SSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFRSYAMMWVRQAPGKGLEWVGGINGEVGGSN TYYAPAVKGRATISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGAGACGICNDDIDAWGQGTLVTV SS
SEQ ID NO:28 (15011 последовательность белка VL)SEQ ID NO:28 (15011 VL protein sequence)
SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGAGSYAGSYYYGWHQQKPGQAPVTVIYDNDKRPSNI PDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCGSTNDNDDGGLFGSGTKVTVLSYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGAGSYAGSYYYGWHQQKPGQAPVTVIYDNDKRPSNI PDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCGSTNDNDDGGLFGSGTKVTVL
Последовательности ДНК и белка константной областиConstant region DNA and protein sequences
SEQ ID NO:29 (последовательность ДНК константной области IgHC)SEQ ID NO:29 (IgHC constant region DNA sequence)
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGG GGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGG AACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAA CGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAA ACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCC CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGA CGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAAT GCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCG TCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCC AGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACC CTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCT TCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGAC CACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAG AGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACT ACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGG GGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGG AACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACC TACATCTGCAA CGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAA ACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCC CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGA CGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACG TGGACGGCGTGGAGGTGCATAAT GCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCG TCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCC AGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACC CTGCCCCCATCCCGGAGGAGATGACCAA GAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCT TCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGAC CACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAG AGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACT ACACGCAGAAGAGCCTCCC TGTCCCCGGGTAAA
SEQ ID NO:30 (последовательность белка константной области IgHC)SEQ ID NO:30 (IgHC constant region protein sequence)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS VLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCL
- 48 046220- 48 046220
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGKVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:31 (последовательность ДНК константной области IgLC)SEQ ID NO:31 (IgLC constant region DNA sequence)
GGCCAGCCCAAGGCCAACCCCACTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTCCAGGCCAGCCCAAGGCCAACCCCACTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTCCA
AGCCAACAAGGCCACACTAGTGTGTCTGATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCTGTGACAGTGGCC TGGAAGGCAGATGGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCAAACCCTCCAAACAGAGCA ACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAG CTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGT TCAAGCCAACAAGGCCACACTAGTGTGTCTGATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCTGTGACAGTGGCC TGGAAGGCAGATGGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCAAACCCTCCAAACAGAGCA ACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGAACGCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAG CTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAG TGGCCCCTACAGAATGT TCA
SEQ ID NO:32 (последовательность белка константной области IgLC)SEQ ID NO:32 (IgLC constant region protein sequence)
GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPS
KQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:33 (последовательность ДНК константной области IgKC)SEQ ID NO:33 (IgKC constant region DNA sequence)
CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATC
TGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGG AAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGG ACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGT CTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGA GAGTGTTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGG AAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGG ACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGT CTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAA GAGCTTCAACAGGGGA GAGTGT
SEQ ID NO:34 (последовательность белка константной области IgKC)SEQ ID NO:34 (IgKC constant region protein sequence)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ
DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:35 (15646/15723 H-CDR1)SEQ ID NO:35 (15646/15723 H-CDR1)
GGSFSGYYGGSFSGYY
SEQ ID NO:36 (15646 H-CDR2)SEQ ID NO:36 (15646 H-CDR2)
INHRGSTINHRGST
SEQ ID NO:37 (15646 H-CDR3)SEQ ID NO:37 (15646 H-CDR3)
CTRGEEWESLFFDYWCTRGEEWESLFFDYW
SEQ ID NO:38 (15646 L-CDR1)SEQ ID NO:38 (15646 L-CDR1)
QSISSYQSISSY
SEQ ID NO:39 (15646 L-CDR2)SEQ ID NO:39 (15646 L-CDR2)
GASG.A.S.
- 49 046220- 49 046220
SEQ ID NO:40 (15646/15532/15723/15431 L-CDR3)SEQ ID NO:40 (15646/15532/15723/15431 L-CDR3)
CQQRSNWPLTFCQQRSNWPLTF
SEQ ID NO:41 (15532 H-CDR1)SEQ ID NO:41 (15532 H-CDR1)
GESFSGYYGESFSGYY
SEQ ID NO:42 (15532/15723 H-CDR2)SEQ ID NO:42 (15532/15723 H-CDR2)
INHSGSTINHSGST
SEQ ID NO:43 (15532 H-CDR3)SEQ ID NO:43 (15532 H-CDR3)
CARGWDLLDWNDYWNEYWCARGWDLLDWNDYWNEYW
CARGEDWGESFFDYWCARGEDWGESFFDYW
SEQ ID NO:47 (15723/15595 L-CDR2)SEQ ID NO:47 (15723/15595 L-CDR2)
AASA.A.S.
SEQ ID NO:48 (15595 H-CDR1)SEQ ID NO:48 (15595 H-CDR1)
GYSLTEISGYSLTEIS
SEQ ID NO:49 (15595 H-CDR2)SEQ ID NO:49 (15595 H-CDR2)
FDPEDGETFDPEDGET
SEQ ID NQ:50 (15595 H-CDR3)SEQ ID NQ:50 (15595 H-CDR3)
CATGGWGPNWFDPWCATGGWGPNWFDPW
SEQ ID NO:51 (15595 L-CDR1)SEQ ID NO:51 (15595 L-CDR1)
QGISSWQGISSW
SEQ ID NO:52 (15595 L-CDR3)SEQ ID NO:52 (15595 L-CDR3)
CQQANSFPFTFCQQANSFPFTF
SEQ ID NO:53 (15431 H-CDR1)SEQ ID NO:53 (15431 H-CDR1)
GDSVSSNSAGDSVSSNSA
SEQ ID NO:54 (15431 H-CDR2)SEQ ID NO:54 (15431 H-CDR2)
TYYRSKWTYYRSKW
SEQ ID NO:55 (15431 H-CDR3)SEQ ID NO:55 (15431 H-CDR3)
CARDDDWNDFDYWCARDDDWNDFDYW
SEQ ID NO:56 (15572 H-CDR1)SEQ ID NO:56 (15572 H-CDR1)
GDSISSSSYYGDSISSSSYY
SEQ ID NO:57 (15572 H-CDR2)SEQ ID NO:57 (15572 H-CDR2)
IFYSGNTIFYSGNT
- 50 046220- 50 046220
SEQ ID NO:58 (15572 H-CDR3)SEQ ID NO:58 (15572 H-CDR3)
CAREDDFLTDYYGAFDIWCAREDDFLTDYYGAFDIW
SEQ ID NO:59 (15572 L-CDR1)SEQ ID NO:59 (15572 L-CDR1)
QSISSWQSISSW
SEQ ID NO:60 (15572 L-CDR2)SEQ ID NO:60 (15572 L-CDR2)
KASKAS
SEQ ID NO:61 (15572 L-CDR3)SEQ ID NO:61 (15572 L-CDR3)
CQQYNSYLTFCQQYNSYLTF
SEQ ID NO:62 (15011 H-CDR1)SEQ ID NO:62 (15011 H-CDR1)
GFDFRSYAGFDFRSYA
SEQ ID NO:63 (15011 H-CDR2)SEQ ID NO:63 (15011 H-CDR2)
INGEVGGSNTINGEVGGSNT
SEQ ID NO:64 (15011 H-CDR3)SEQ ID NO:64 (15011 H-CDR3)
CVKGAGACGICNDDIDAWCVKGAGACGICNDDIDAW
SEQ ID NO:65 (15011 L-CDR1)SEQ ID NO:65 (15011 L-CDR1)
GSYAGSYGSYAGSY
SEQ ID NO:66 (15011 L-CDR2)SEQ ID NO:66 (15011 L-CDR2)
DNDDND
SEQ ID NO:67 (15011 L-CDR3)SEQ ID NO:67 (15011 L-CDR3)
CGSTNDNDDGGLFCGSTNDNDDGGLF
SEQ ID NO:68 (LAG-3 человека)SEQ ID NO:68 (LAG-3 people)
MWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPLQPGAEVPWWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLRRAMWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPLQPGAEVPWWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLRRA
GVTWQHQPDSGPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLDGVTWQHQPDSGPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLD
ERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQASMTASPPGSLRASDWVILERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQASMTASPPGSLRASDWVIL
NCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPHHHLAESFLFLPQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNVNCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPHHHLAESFLFLPQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNV
SIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPAGVGTRSFLTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGDSIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPAGVGTRSFLTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGD
FTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPVSGQER FVWSSLDTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLYQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPG ALPAGHLLLFLILGVLSLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPE PEPEPEPEPEPEPEPEQLFTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPVSGQER FVWSSLDTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLYQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPG ALPAGHLLLFLILGVLSLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPE PE PEPEPEPEPEPEPEQL
SEQ ID NO:69 (LAG-3 яванского макака)SEQ ID NO:69 (LAG-3 Cynomolgus)
MWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPPQPGAEISWWAQEGAPAQLPCS PTIPLQDLSLLRRA GVTWQHQPDSGPPAXAPGHPPVPGHRPAAPYSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLD ERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRATVHLRDRALSCRLRLRVGQASMTASPPGSLRTSDWVIL NCSFSRPDRPASVHWFRSRGQGRVPVQGSPHHHLAESFLFLPHVGPMDSGLWGCILTYRDGFNV SIMYNLTVLGLEPATPLTVYAGAGSRVELPCRLPPAVGTQSFLTAKWAPPGGGPDLLVAGDNGDMWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPPQPGAEISWWAQEGAPAQLPCS PTIPLQDLSLLRRA GVTWQHQPDSGPPAXAPGHPPVPGHRPAAPYSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLD ERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRATVHLRDRALSCRLRVGQASMTASPPGSLRTSDWVIL NCSFSRPDRPASVHWFRSRG QGRVPVQGSPHHHLAESFLFLPHVGPMDSGLWGCILTYRDGFNV SIMYNLTVLGLEPATPLTVYAGAGSRVELPCRLPPAVGTQSFLTAKWAPPGGGPDLLVAGDNGD
- 51 046220- 51 046220
FTLRLEDVSQAQAGTYICHIRLQGQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPASGQEH FVWSPLNTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLHQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPG ALRAGHLPLFLILGVLFLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPE LEPEPELERELGPEPEPGPEPEPEQLFTLRLEDVSQAQAGTYICHIRLQGQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPASGQEH FVWSPLNTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLHQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPG ALRAGHLPLFLILGVLFLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPE LEPEPELEERELGPEPEPGPEPEPEQL
SEQ ID NO:70 (LAG-3 крысы)SEQ ID NO:70 (LAG-3 rats)
MRQDLFLDLLLLQLLWEAPWSSGPGKELSWWAQEGAPVHLPCSLEFPHLDPNFLRRG WVTWQHRPDSDQPASIPALDLLQGMPSTRRHPPHRYTVLSVAPGGLRSGRQPLLSHVQLEKRGP QRGDFSLWLRPATRKDAGEYHAFVRLPDRDFSCSLRLRVGQASMIASPPGTLKPSDWVILNCSF SRPDRPVSVHWFQGQSRVPVHNSPRHYLAESFLLLPQVSPLDSGTWGCVLTYRDGFNVSITYNL KVQGLEPVAPLTVYAAEGSRVELPCHLPPWGTPSLLIAKWTPPGGGPELPVTGKSGNFTLQLE NVGRAQAGTYTCSIHLQGRQLSAAVTLAVITVTPKSFGLPGSPQKLLCEWPASGEGRFVWRPL SDLSRSSLGPVLELQEAKLLAEQWQCQLYEGQKLLGATVYTAESSSGAWSAKRISGDLKGGHLF LSLILGALALFLLVTGAFGFHLWRRQLLRRRFSALEHGIRPPPVQSKIEELEREPETEMEPETE PDPEPQPEPELEPESRQLMRQDLFLDLLLLQLLWEAPWSSGPGKELSWWAQEGAPVHLPCSLEFPHLDPNFLRRG WVTWQHRPDSDQPASIPALDLLQGMPSTRRHPPHRYTVLSVAPGGLRSGRQPLLSHVQLEKRGP QRGDFSLWLRPATRKDAGEYHAFVRLPDRDFSCSLRLRVGQASMIASPPGTLKPSDWVILNCSF SRPDRPVSVHWFQGQSRVP VHNSPRHYLAESFLLLPQVSPLDSGTWGCVLTYRDGFNVSITYNL KVQGLEPVAPLTVYAAEGSRVELPCHLPPWGTPSLLIAKWTPPGGGPELPVTGKSGNFTLQLE NVGRAQAGTYTCSIHLQGRQLSAAVTLAVITVTPKSFGLPGSPQKLLCEWPASGEGRFVWRPL SDLSRSSLGPVLELQEAKLLAEQWQCQLYEGQKLL GATVYTAESSSGAWSAKRISGDLKGGHLF LSLILGALALFLLVTGAFGFHLWRRQLLRRRFSALEHGIRPPPVQSKIEELEREPETEMEPETE PDPEPQPEPELEPESRQL
SEQ ID NO:71 (LAG-3 собаки)SEQ ID NO:71 (LAG-3 dogs)
MWEVQFLVLLLLQLLWVAPVAAPGSGTEVQWWAQEGAPVQLPCSPTIPLQDVSLLRNA GVTWYHLPESGPAAPALSLRPAAPSARGPGPRSYWLMRAPGGLRSGLVPTVNALALNSPGPTR FSLALQTVISLPHSWLFPGPSSLPGQPLASCWPSPHVGVGCVCEHPPFIHLTLLPARQSPLLFL LPSLQPQCSASLYLSLSASTLASSFPGLEPSGPLTVYTGAGSRVGLPCRLPPGVGTQSFLTAKW TPPGGGPDLLVAGDDGNFTLQLEWNQAQAGTYTCHIHLQGQQLSTTVTLAVITVTPKSSGLPG NLRKLLCEVTPASGQERFVWSPLDKQSWRGSPGPCLEMQETRLLSQPWQCHVYQAERLLGTAVY LIDPAGPGAQRSGRAQGVLKTGHLSLLLILGILFLLLLMTGAFGFQLWRRQWRPRRFSALELGT HPPQAQSKIGELEQEPELELEPEPELEPEPEPEMWEVQFLVLLLLQLLWVAPVAAPGSGTEVQWWAQEGAPVQLPCSPTIPLQDVSLLRNA GVTWYHLPESGPAAPALSLRPAAPSARGPGPRSYWLMRAPGGLRSGLVPTVNALALNSPGPTR FSLALQTVISLPHSWLFPGPSSLPGQPLASCWPSPHVGVGCVCEHPPFIHLTLLPARQSPLLFL LPSLQPQCSASLYLSLSASTLASSFP GLEPSGPLTVYTGAGSRVGLPCRLPPGVGTQSFLTAKW TPPGGGPDLLVAGDDGNFTLQLEWNQAQAGTYTCHIHLQGQQLSTTVTLAVITVTPKSSGLPG NLRKLLCEVTPASGQERFVWSPLDKQSWRGSPGPCLEMQETRLLSQPWQCHVYQAERLLGTAVY LIDPAGPGAQRSGRAQGVLKTGHLSLLLILGILFL LLLMTGAFGFQLWRRQWRPRRFSALELGT HPPQAQSKIGELEQEPELELEPEPEPEPEPEPEPE
SEQ ID NO:72 (мыши LAG-3)SEQ ID NO:72 (LAG-3 mice)
MREDLLLGFLLLGLLWEAPWSSGPGKELPWWAQEGAPVHLPCSLKSPNLDPNFLRRG GVIWQHQPDSGQPTPIPALDLHQGMPSPRQPAPGRYTVLSVAPGGLRSGRQPLHPHVQLEERGL QRGDFSLWLRPALRTDAGEYHATVRLPNRALSCSLRLRVGQASMIASPSGVLKLSDWVLLNCSF SRPDRPVSVHWFQGQNRVPVYNSPRHFLAETFLLLPQVSPLDSGTWGCVLTYRDGFNVSITYNL KVLGLEPVAPLTVYAAEGSRVELPCHLPPGVGTPSLLIAKWTPPGGGPELPVAGKSGNFTLHLE AVGLAQAGTYTCSIHLQGQQLNATVTLAVITVTPKSFGLPGSRGKLLCEVTPASGKERFVWRPL NNLSRSCPGPVLEIQEARLLAERWQCQLYEGQRLLGATVYAAESSSGAHSARRISGDLKGGHLV LVLILGALSLFLLVAGAFGFHWWRKQLLLRRFSALEHGIQPFPAQRKIEELERELETEMGQEPE PEPEPQLEPEPRQLMREDLLLGFLLLGLLWEAPWSSGPGKELPWWAQEGAPVHLPCSLKSPNLDPNFLRRG GVIWQHQPDSGQPTPIPALDLHQGMPSPRQPAPGRYTVLSVAPGGLRSGRQPLHPHVQLEERGL QRGDFSLWLRPALRTDAGEYHATVRLPNRALSCSLRLRVGQASMIASPSGVLKLSDWVLLNCSF SRPDRPVSVHWFQGQNRVP VYNSPRHFLAETFLLLPQVSPLDSGTWGCVLTYRDGFNVSITYNL KVLGLEPVAPLTVYAAEGSRVELPCHLPPGVGTPSLLIAKWTPPGGGPELPVAGKSGNFTLHLE AVGLAQAGTYTCSIHLQGQQLNATVTLAVITVTPKSFGLPGSRGKLLCEVTPASGKERFVWRPL NNLSRSCPGPVLEIQEARLLAERWQCQLYEGQRLL GATVYAAESSSGAHSARRISGDLKGGHLV LVLILGALSLFLLVAGAFGFHWWRKQLLLRRFSALEHGIQPFPAQRKIEELERELETEMGQEPE PEPEPQLEPEPRQL
Claims (19)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/407,678 | 2016-10-13 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA046220B1 true EA046220B1 (en) | 2024-02-16 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11834503B2 (en) | Anti-lag-3 antibodies and compositions | |
TWI780083B (en) | Anti-pd-1 antibodies and compositions | |
TWI751981B (en) | Anti-pd-1 antibodies and compositions | |
KR20220057558A (en) | anti-CD73 antibody | |
US12030942B2 (en) | Anti-PD-1 antibodies and compositions | |
EA046220B1 (en) | ANTI-LAG-3 ANTIBODIES AND THEIR COMPOSITIONS | |
EA043633B1 (en) | ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND THEIR COMPOSITIONS | |
NZ793343A (en) | Anti- LAG-3 antibodies and compositions |