EA009386B1 - Гидрофильные, реакционные в отношении тиол-группы цианиновые красители, и их конъюгаты с биомолекулами для флюоресцентной диагностики - Google Patents
Гидрофильные, реакционные в отношении тиол-группы цианиновые красители, и их конъюгаты с биомолекулами для флюоресцентной диагностики Download PDFInfo
- Publication number
- EA009386B1 EA009386B1 EA200501064A EA200501064A EA009386B1 EA 009386 B1 EA009386 B1 EA 009386B1 EA 200501064 A EA200501064 A EA 200501064A EA 200501064 A EA200501064 A EA 200501064A EA 009386 B1 EA009386 B1 EA 009386B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- formula
- compound
- solvates
- salts
- indotricarbocyanine dye
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/0008—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes substituted on the polymethine chain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/0008—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes substituted on the polymethine chain
- C09B23/0025—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes substituted on the polymethine chain the substituent being bound through an oxygen atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/0008—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes substituted on the polymethine chain
- C09B23/005—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes substituted on the polymethine chain the substituent being a COOH and/or a functional derivative thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/0066—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain being part of a carbocyclic ring,(e.g. benzene, naphtalene, cyclohexene, cyclobutenene-quadratic acid)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/02—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups
- C09B23/08—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups more than three >CH- groups, e.g. polycarbocyanines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/02—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups
- C09B23/08—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups more than three >CH- groups, e.g. polycarbocyanines
- C09B23/086—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups more than three >CH- groups, e.g. polycarbocyanines more than five >CH- groups
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к новым флюоресцентным красителям из класса цианиновых красителей, в частности индотрикарбоцианинам, с абсорбционным и флюоресцентным максимумом в спектральной области от 700 до 900 нм, со специфической в отношении тиольной группы реакционной группой и тремя, предпочтительно четырьмя, сульфонатными группами, к увеличению растворимости в воде, а также получению красителей. Настоящее изобретение относится также к коньюгатам этих красителей с биомолекулами и их применению.
Description
Настоящее изобретение относится к новым флюоресцентным красителям из класса цианиновых красителей, в частности индотрикарбоцианинам с абсорбционным и флюоресцентным максимумом в спектральной области от 700 до 900 нм, с реакционной группой, специфической в отношении тиолгруппы, и тремя, предпочтительно четырьмя, сульфонатными группами, к увеличению растворимости в воде, а также к получению красителей. Настоящее изобретение относится также к коньюгатам этих красителей с биомолекулами и их применению.
Предпосылки изобретения
В последнее время приобрело значение использование света в медицинской диагностике (см., например, Вютебка1 Рйо1ошсз НаибЬоок (Ебйот: Т. νο-ΩίηΙι). СРС Ргезз). При проведении экспериментальных исследований разработано большое количество разнообразных диагностических методов для применения в различных медицинских областях, например эндоскопии, маммографии, хирургии и гинекологии. Базирующиеся на применении света процессы имеют высокую инструментальную чувствительность и делают возможным молекулярное обнаружение и визуализацию малейших количеств хромофоров и/или флюорофоров (Ае1зз1ебег е1 а1. (2001) Мо1еси1аг 1тад1ид, К.абю1оду 219, 316-333).
Красители, которые вводят в ткани в качестве экзогенных контрастных сред с целью флюоресцентной диагностики и визуализации, в особенности флюоресцентные красители с абсорбционным и флюоресцентным максимумом в спектральной области 700-900 нм (диагностическое окно тканей), представляют особый интерес для применения в условиях ίη νίνο. Протоны этих длин волн сравнительно мало абсорбируются тканями и могут поэтому проникать в ткани на несколько сантиметров перед тем, как абсорбционный процесс (главным образом, посредством действия оксигемоглобина и деоксигемоглобина) остановит перемещение света. Абсорбция может происходить, кроме того, с помощью флюоресцентных красителей, которые вводятся в ткань, но которые излучают абсорбированную энергию в виде более длинноволнового флюоресцентного излучения. Флюоресцентная радиация может быть обнаружена спектрально и делает возможной локализацию красителей и корреляцию с молекулярными структурами, к которым краситель присоединен (см. в связи с этим Ьюйа, К. (2002) Сои1га81 Адеи!з ίοτ Орбса1 Бпадшд (Ре\зе\\·). В: Торюз ίη Сштеи! Сйет1з1ту - Сои1та81 Адеи!з II (Ебйот: А. Кгаизе), νοίιιιικ 222, 8ргшдет Не1бе1Ьегд, стр. 1-31).
Чтобы достичь диагностически существенного различия между болезненными структурами и здоровыми тканями, вводимый краситель должен приводить к высокой, насколько это возможно, разнице концентраций между тканями. Это может быть осуществлено, исходя из физиологических свойств опухоли (кровоснабжение, кинетика локализации, позднее удаление). Для молекулярного маркирования болезненно-специфических структур могут быть использованы коньюгаты, состоящие из флюоресцентных красителей с биомолекулами, родственными мишеням, такими как белки, пептиды и антитела. После инъекции определенная часть этих коньюгатов связывается с такими структурами молекулярной мишени, как рецепторы или матричные белки, в то время как несвязанная часть выводится из организма. Таким образом, при осуществлении флюоресцентной диагностики более высокая концентрационная разница приводит к большей визуальной контрастности.
Флюоресцентные красители класса цианиновых красителей попадают в категорию перспективных представителей и были синтезированы с использованием многих различных структур. В частности, карбоцианины с индокарбоцианиновыми, индодикарбоцианиновыми и индотрикарбоцианиновыми структурами имеют высокие коэффициенты экстинкции и хорошие флюоресцентные квантовые выходы [Ь1сйа, К. (2002) Сои1га81 Адеи!з ίοτ Орйса1 Бпадшд (Веу1е\\·). В: Торюз ίη Сштеи! Сйет1з1ту -Сои1таз1 Адеи!з II (Εάίΐοτ: А. Кгаизе), νο1ιιιικ 222, 8ргшдет Не1бе1Ьегд, стр. 1-31, и приведенные в них ссылки].
В заявке АО 96/17628 описан диагностический процесс, проводимый в условиях ίη νίνο, посредством использования ближнего инфракрасного излучения. В этом случае водорастворимые красители и их биомолекулярные аддукты со специфическими фотофизическими и фармакохимическими свойствами являются контрастными средами для флюоресцентной и трансиллюминационной диагностики.
Синтез цианиновых красителей с индокарбоцианиновыми, индодикарбоцианиновыми и индотрикарбоцианиновыми структурами хорошо известен из уровня техники. Связанная с этим соответствующая литература представлена, например, в: Вюсоищда1е С1ет. 4, 105-111, 1993; Вюсоищда1е С1ет. 7, 356-62, 1996; Вюсоищда1е С1ет. 8, 751-56, 1997; Су1оте1гу 10, 11-19, 1989 и 11, 418-30, 1990; 1. Не!егосус1. С1ет. 33, 1871-6, 1996; 1. Огд. С1ет. 60, 2391-5, 1995; Эуез аиб Р1дтеи1з 17, 19-27, 1991, Эуез аиб Р1дтеи!з 21, 227-34, 1993; 1. Ииогезс. 3, 153-155, 1993; и Аиа1. Вюсйет. 217, 197-204, 1994.
Дополнительные методы описаны в патентных публикациях: И8 4981977; И8 5688966; И8 5808044; АО 97/42976; АО 97/42978; АО 98/22146; АО 98/26077 и ЕР 0800831.
Кроме того, индотрикарбоцианины с другими заместителями синтезированы и присоединены к биомолекулам (описаны, например, в РНоЮсНет. Рйо1оЬю1. 72, 234, 2000; Вюсоищда1е С1ет. 12, 44, 2001; Ыа1иге Вю1есйио1. 19, 237, 2001; 1. Вютеб. Орйсз 6, 122, 2001; 1. Меб. С1ет. 45, 2003, 2002). Другие примеры можно найти, в частности, в публикациях: АО 00/61194 (81юг1-С11ат Рерйбе Эуе Соищда!ез аз Сои1таз1 Адеи1з ίοτ Орйса1 Э1адиозбсз), АО 00/71162, АО 01/52746, АО 01/52743 и АО 01/62156.
Однако известные индотрикарбоцианины, используемые ранее специалистами в области техники,
- 1 009386 имеют недостатки, которые ухудшают их эффективное применение.
Низкие флюоресцентные квантовые выходы индотрикарбоцианинов всегда возникают после присоединения к биомолекуле. Так, СтиЬег и др. (Вюсоищда1е СНетп. 11, 696-704, 2000) отмечают, что для коммерчески доступного красителя Су 7 потеря флюоресцентной эффективности имеет место после присоединения к биомолекуле. Вескег и др. (Рйо1оскет. Р1ю1оЬю1. 72, 234, 2000) описывают коньюгаты индотрикарбоцианина с НА8 и трансферрином с флюоресцентными квантовыми выходами 2,9% или 2,8% и деформированным абсорбционным спектром в физиологической среде.
Кроме того, коньюгаты красителей имеют тенденцию к аггрегации. Вескег и др. (Рйо1оскет. РНоЮЬю1. 72, 234, 2000) для коньюгатов индотрикарбоцианина с НА8 и трансферрином и ЫсНа и др. (Вюсои)ида1е СНет. 12, 44-50, 2001) для рецептор-связывающих пептидов описали их, как имеющие деформированный абсорбционный спектр в физиологической среде. Эти деформации указывают на образование аггрегаций и флюоресцентную экстинкцию, которые является результатом этого. Подобная проблема существует и в случае неадекватной водной растворимости красителей.
Что касается реакционных групп, всегда существует также проблема неэффективного доступа к производным. Так, СтиЬег и др. (Вюсоищда1е СНетп. 11, 696-704, 2000) описывают использование Су7бифункциональных НА8-эфиров с двумя реакционными группами, которые потенциально могут приводить к образованию поперечных связей между двумя биомолекулами. Однако, при наличии двух карбоксильных групп в молекуле, синтетический доступ к производным затруднен только с одной реакционной группой и приводит к побочным продуктам (например, к содержанию порции монореакционных НА8эфиров Су7 неактивированной и вдвойне-активированной молекулы Су7).
Таким образом, существует постоянная потребность в эффективных и легко получаемых цианиновых красителях для флюоресцентной диагностики, у которых снижены или вовсе отсутствуют упомянутые выше недостатки. Кроме того, эти красители должны быть в достаточной мере пригодными для получения коньюгатов с биомолекулами.
Первым объектом по изобретению является индотрикарбоцианиновый краситель общей формулы (I)
в которой X обозначает О, 8 или С, то есть замещен в двух местах, при этом заместители могут быть выбраны из метил, этил, пропил, изопропил и/или бутил; Υ обозначает СН2-СН2 или СН2-СН2-СН2; Ζ обозначает С1-С5алкил, при этом С атомы необязательно замещены О или 8, или
независимо друг от друга обозначают 8О3Н или Н, при условии, что по крайней мере три из В1-В4 обозначают 8О3Н, Р5 обозначает -ίΌ-ΝΗ-Ρ8-Ρ9,. -ΝΗ-ί’8-ΝΗ-Ρ8-Ρ9, или -ΝΗ-ίΌ-Ρ8-Ρ9. где В8 выбран из группы, которая содержит неразветвленный С2-С13алкил, в котором атомы углерода необязательно замещены О или 8, и Я9 выбран из или
или ацетихлорида, ацетилбромида, ацетилйодида, хлорацетамидогруппы, йодацетамидогруппы, хлорал
- 2 009386 кила, бромалкила, йодалкила, пиридилдисульфида и винилсульфоамида, и в которой К6 и К7 обозначают СН или связаны с радикалами от С3алкила до гексильного кольца, которое необязательно может быть замещено в п-положении С1-С4алкильным радикалом, и соли, и сольваты этого соединения.
Предпочтительным является индотрикарбоцианиновый краситель по настоящему изобретению, в котором Υ обозначает СН2-СН2; Ζ обозначает С1-С4алкил, при этом атомы углерода необязательно замещены О или Б, и в котором К6 и К7 обозначают СН, и соли, и сольваты этого соединения.
Наиболее предпочтительным является индотрикарбоцианиновый краситель по настоящему изобретению, в котором Ζ обозначает С1-С5алкил.
Еще более предпочтительным является индотрикарбоцианиновый краситель по настоящему изобретению, в котором Ζ обозначает
О и Кб и К7 связаны с гексильным кольцом через С3алкил.
Флюоресцентные красители из класса цианиновых красителей, в частности индотрикарбоцианины с абсорбционным и флюоресцентным максимумом в спектральной области от 700 до 900 нм, реакционной группой, специфической по отношению к тиолгруппе и тремя, предпочтительно четырьмя, сульфонатными группами, являются, таким образом, объектами по настоящему изобретению. Последние используются для увеличения растворимости в воде.
Неожиданно недавно было найдено, что индотрикарбоцианины согласно изобретению с вышеупомянутой структурой (компактное положение 3-4 сульфонатных групп с сульфонатэтильными радикалами) имеют высокий флюоресцентный квантовый выход > 15%, и что флюоресцентный квантовый выход после присоединения к биомолекулам остается практически неизменным (максимальная потеря составляет около 10%). Кроме того, абсорбционные спектры коньюгатов не обнаруживают никакой деформации в ближней инфракрасной области около 750 нм. Таким образом, получены красители с хорошей гидрофильностью, пониженной аггрегацией и увеличенным флюоресцентным квантовым выходом по сравнению со стандартными индотрикарбоцианинами или Су7 производными с менее чем тремя сульфонатными группами, в частности в случае Су7 и других известных структур.
Другой ценный аспект в получении цианиновых красителей для флюоресцентной диагностики согласно изобретению относится к производным, которые имеют реакционные функциональные группы, дающие возможность ковалентного соединения со специфическими в отношении мишеней биомолекулами. Подходящими производными являются, например, ЫНБ эфиры и изотиоцианаты (Вюсопщда1е СНет. 4, 105-111, 1993; Вюсонщда1е СНет. 8, 751-56, 1997), которые реагируют с аминогруппами в таких соединениях, как, например, имиды малоновой кислоты, α-галокетоны, или α-галоацетамиды (Вюсопщда1е СНет. 13, 387-391, 2002; Вюсопщда1е СНет. 11, 161-166, 2000), реагирующие с тиольными группами. Другие бифункциональные линкеры (связывающие промежуточные группы) могут происходить из группы, которая содержит арилендиизотиоцианаты, алкилендиизотиоцианаты, бис-Ы-гидроксисукцинимидилэфиры, гексаметилендиизоцианат и эфир Ы-(у-малеинимидобутирилокси)сукцинимида.
В заявке XVО 01/77229 описаны цианиновые красители с комбинацией сульфоарильных групп, алкильных заместителей в мезо-положении метиновой цепи и по крайней мере одной реакционной группой, которая дает возможность присоединения к биомолекулам. Однако, варианты осуществления относятся к индодикарбоцианинам (полиметиновая цепь которых состоит из 5 атомов углерода) и соединениям, не имеющим реакционных групп в мезо-положении.
В заявке νθ 00/16810 (Ыеаг-1пГгагей Ииогексеп! С’оЩгаЧ Адеп1 апй Ииогексепсе 1тащпд) описаны индотрикарбоцианины, например, с заместителями в мезо-положении С7-полиметиновой цепи. Не указано, однако, каким образом могут быть введены или получены реакционные группы.
Другой аспект настоящего изобретения относится к индотрикарбоцианиновому красителю, в котором К обозначает СООН или ΝΗ2.
Опубликованные производные базируются, главным образом, на Су3-, Су5-, Су5,5- и Су7-базисных структурах (коммерчески доступны от Атегвйат Рйагтааа Вю1есй; ИБ 5268486; Су3 = индокарбоцианин, Су5 = индодикарбоцианин, Су 7 = индотрикарбоцианин). Производные с реакционной группой по отношению к тиольной представляют особый интерес, так как делают возможным непосредственное соединение с биотехнологичными цистеинами, которые занимают специфическое положение среди биомолекул. Уровень техники сейчас концентрируется главным образом на Су3 и Су5 производных.
Особенно предпочтительные индотрикарбоцианиновые красители согласно изобретению выбраны из красителей с формулами от (II) до (XX), которые представлены ниже в табл. 1.
- 3 009386
Таблица 1. Предпочтительные красители согласно изобретению
Формула | |||||
(II) | О | ||||
Пример 1 | |||||
Ок | ,ЫН )---« | ||||
67 | |||||
\/30эН | |||||
0 Т | |||||
Ν' ) | |||||
ЗО3Н | \ ЗОзН |
(III) Пример 2 | о-О-0 Ο>ζ,-№^3/ ζ № .....Vх 3°зн ЗО3Н |
(IV) Пример 3 | О °ί5ν^νΥ ί /’тхгЗОзН $ 30зн 50зН |
(V) Пример 4 | О \Χ^Ν+/ 6 <> 3°зн ЗОзН |
- 4 009386
- 5 009386
- 6 009386
- 7 009386
- 8 009386
- 9 009386
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения индотрикарбоцианинового красителя по настоящему изобретению. В этом случае был найден простой доступ через 4-замещенные пиридины. Как ни странно, различные 4-замещенные пиридины с высокими выходами могут быть превращены посредством реакции Цинке (реакция ΖίποΚοΚοηφ. см. Яотррк СНепие Ьех1кои [Яотррк С11ст1са1 Э|с1юпагу|. 10111 Εάίίίοη. стр. 5067) в мезо-замещенный глутакональдегид-дианилид (предшественник цианинового красителя).
Кроме того. простой и эффективный синтез 4-замещенных пиридинов. симметричные структуры красителей по этому изобретению. открывает возможность определенной дериватизации реакционной группы. селективной по отношению к тиольной группе. в симметричном мезо-положении молекулы.
Таким образом была проведена дальнейшая дериватизация до соединений с реакционной группой по отношению к тиольной. Функциональными реакционными группами по отношению к тиольной являются. например. малеинимидная (малеимидная). хлорацетильная. бромацетильная. йодацетильная. хлорацетамидная. бромацетамидная. йодацетамидная. хлоралкильная. бромалкильная. йодалкильная. пиридилдисульфидная и винилсульфонамидная группы.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу получения коньюгатов. который включает присоединение индотрикарбоцианинового красителя по настоящему изобретению к биомолекуле. В объеме этого изобретения под термином «биомолекула» следует понимать любую молекулу органического происхождения. обладающую биологической активностью. в частности ферментативной активностью. или связывающую вещества синтетического или биологического происхождения такие. как например. фармацевтические агенты. пептиды. белки. рецепторы или нуклеиновые кислоты. В свою очередь. предпочтительными биомолекулами являются белки. как например. ферменты. пептиды. антитела и фрагменты антител (такие как. например. одиночная цепь. ЕаЬ. Е(аЬ)2. диатела и т.п.). липопротеины. нуклеиновые кислоты. такие как. например. олигонуклеотиды или полинуклеотиды из ДНК или РНК. аптамеры. РНК. и сахара. такие как. например. моно-. ди-. три-. олиго- и полисахариды.
Синтез и биологическая характеристика коньюгатов цианиновых красителей с биомолекулами. такими как пептиды. антитела и их фрагменты и белки для флюоресцентной диагностики опухолей в условиях ίη νίνο описаны ранее во многих публикациях. В этом случае преимущественно были использованы упомянутые выше Су3. Су5. Су5.5 и Су 7 (см. в связи с этим. например. №1Шге Вю1ес1шо1. 15. 1271. 1997; Саисег Эе1ес1. Ргет. 22. 251. 1998; 1. 1ттиио1. Ме111. 231. 239. 1999; ЫаШге Вю1ссЬио1. 17. 375. 1999; Ыа1иге Мебюше 7. 743. 2001).
Другой аспект настоящего изобретения связан с полученным согласно способу по изобретению коньюгатом индотрикарбоцианинового красителя с биомолекулой. Этот коньюгат может быть охарактеризован тем. что он включает биомолекулу. как определено выше. причем в качестве биомолекулы по крайней мере одна биомолекула. выбранная из пептидов. белков. липопротеинов. антител или фрагментов антител. нуклеиновых кислот таких как. например. олигонуклеотиды или полинуклеотиды ДНК или РНК. аптамеров. РНК и сахаров. таких как. например. моно-. ди-. три-. олиго- и полисахариды. является
- 10 009386 наиболее предпочтительной. Присоединенный белок может быть охарактеризован тем, что он выбран из группы структурных белков или растворимых белков организма. Абсолютно предпочтительными являются сывороточные белки (например, ЧСА), антитела/фрагменты антител, как, например, ксЕу-фрагмент или Е(аЬ), а также пептиды, БСА, яичный альбумин или полученная из них пероксидаза.
Так, из уровня техники известны, например, антитела, которые направлены против молекул, которые интенсивно экспрессируют в ангиогенетически активной ткани и только на очень низком уровне в примыкающей ткани (см. XVО 96/01653). Особый интерес представляют антитела рецепторов факторов сосудистого роста, рецепторов с эндотелиальными клетками, с которыми связаны медиаторы воспаления, и матричных белков, которые особенно экспрессируют при формировании новых сосудов. Предпочтительными являются другие антитела и фрагменты антител, которые противостоят матричному белку ΕΌΒ-фибронектину и его коньюгатам согласно изобретению. ΕΌΒ-фибронектин, известный также в качестве онкофетального фибронектина, является вариантом сплайсинга фибронектина, который формируется, в частности, вокруг вновь образуемых сосудов в процессе ангиогенезиса. Особенно предпочтительными являются антитела Ь19, Е8, АР38 и АР39 против ΕΌΒ-фибронектина (Сапсег Век 1999, 59, 347; 1 1ттипо1 Ме111 1999, 231, 239; Рго1ет Ехрг РипГ 2001, 21, 156).
Предпочтительным является коньюгат согласно изобретению, который характеризуется тем, что индотрикарбоцианиновый краситель присоединен к биомолекуле через 8Н-группу, в частности через 8Н-группу к цистеину. Необязательно даже более предпочтительно получаемыми из них являются такие антитела и их фрагменты, которые получают с помощью рекомбинантной технологии так, что на С- или Ν-концах (в пределах 1-10 крайних аминокислот) они содержат цистеин, который не образует никаких внутримолекулярных 8-8-мостиков, и поэтому могут быть использованы для присоединения к красителям согласно изобретению.
Другой аспект настоящего изобретения относится к диагностическому комплекту, который включает индотрикарбоцианиновый краситель по настоящему изобретению и/или коньюгат по настоящему изобретению. Кроме того, набор может содержать дополнительные адъюванты для осуществления диагностики, в частности опухолей, в условиях ίη νίνο. Эти адъюванты представляют собой, например, подходящие буферы, сосуды, реагенты для обнаружения или инструкции для применения. Набор предпочтительно содержит все материалы для внутривенного введения красителей согласно изобретению. Специальное содержание таких наборов согласно изобретению является, например, следующим.
Первый сосуд содержит антитело (биомолекулу) со свободной 8Н-группой и стандартными буфером/добавками в виде раствора или лиофилизированного материала. Другой сосуд содержит красители согласно изобретению в виде раствора (обычные добавки) или лиофилизированный материал в молярном соотношении 0,1:1 (10-кратный дефицит в эквимолярном количестве). Краситель, содержащийся в сосуде, необязательно смешан с буфером или дистиллированной водой и добавляется к биомолекуле, содержащейся в другом сосуде, инкубируется в течение 1-10 мин, и используется как инъекционный раствор.
В другом варианте набор представляет собой 2-х-камерную систему (например, шприц), в которой одна камера, содержащая раствор антитела, физически отделена разрушаемой перегородкой от второй камеры, содержащей краситель в виде раствора или твердого вещества. После слома перегородки происходит смешивание и образование инъекционного раствора.
Последний аспект настоящего изобретения касается применения коньюгата по изобретению в качестве флюоресцентной контрастной среды для диагностирования опухолей в условиях ίη νίνο. Абсорбционный максимум Су7 в связи с этим лежит в области 745 нм и является поэтому особенно подходящим для обнаружения флюоресценции в условиях ίη νίνο в более глубоких слоях тканей (см. выше). Однако Су7 производные с реакционными группами, селективными по отношению к тиольной группе, еще не описаны. Кроме того, использование коньюгатов с антителами для обнаружения границ распространения опухоли уже описаны в νθ 01/23005 (ЛпйЬобу Эуе Сопщда1ек ίοτ Βίη6ίη§ ίο Тагде! 81гис1игек οί Лпдюдепейк ίη Огбег ίο 1п1гаорегаЦуе1у Эер1с1 Титог Репрйепек). но без применения перспективных красителей по изобретению.
Изобретение описано далее в терминах следующих примеров и фигур, однако, не ограничивающих его.
На фиг. 1 представлены стандартизированные абсорбционные и флюоресцентные спектры коньюгата К11 (А) и К15 (Б) (см. табл. 2) в ФБР (физиологический раствор с фосфатным буфером).
На фиг. 2 показаны результаты визуализованных свойств коньюгатов примера 24 по изобретению: вещество: коньюгат К15, опухоль: Е9 тератокарцинома в правом нижнем боку мыши, доза: 50 нмол/кг массы тела (данные относятся к красителю), возбуждение: 740 нм (диодный лазер), обнаружение: ССЭ-камера (Нататайи) с 802,5 ± 5 нм и полосно-пропускным фильтром, время: перед инъекцией, 1, 6 и 24 ч после инъекции.
Положение опухоли указано стрелками.
- 11 009386
Примеры
Примеры 1-16: Синтез индотрикарбоцианиновых красителей с малеимидными группами
Пример 1. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(2-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}этил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула II)
0-8=0 0=8-0 Ыа
И II о о
а) 1-(2-Сульфонатэтил)-2,3,3-триметил-3Н-индоленин-5-сульфокислота 10 г (0,04 моля) 2,3,3триметил-3Н-индоленин-5-сульфокислоты (В1осоп)цда1е СНст 1993, 4, 105), 6,8 г (0,04 моля) хлорангидрида 2-хлорэтансульфокислоты и 4,2 г (0,04 моля) триэтиламина перемешивают в 200 мл ацетонитрила в течение 6 ч. Осадок отсасывают и высушивают. Выход составляет 5,0 г (35% от теоретического). Апа1. ВюсЬет. 1994, 217, 197.
б) Трет-бутиловый эфир 3-пиридин-4-илпропионовой кислоты г (89 ммолей) трет-бутил-Р,Р-диметилфосфонацетата в 50 мл ТГФ добавляют по каплям при 0°С к суспензии 3,9 г (98 ммоля) гидрида натрия (60%-ная суспензия в минеральном масле) в 250 мл ТГФ. После перемешивания в течение 1 ч при 0°С, добавляют по каплям раствор 10 г (93 ммоля) пиридинкарбальдегида в 50 мл ТГФ, и перемешивают реакционную смесь в течение 1 ч при 0°С и в течение 18 ч при комнатной температуре. Выпавшее твердое вещество удаляют фильтрованием и раствор концентрируют выпариванием. Остаток при нагревании растворяют в изопропаноле, нерастворимую часть отфильтровывают, а раствор охлаждают до 0°С для кристаллизации. Твердое вещество отфильтровывают, перемешивают с гексаном, отфильтровывают гексан и высушивают. Промежуточный продукт (15,3 г) гидрируют в 150 мл этанола с 0,15 г 10%-ного палладия на активированном угле в течение 6 ч. Катализатор отфильтровывают, раствор концентрируют выпариванием, а остаток фильтруют на силикагеле (подвижная фаза диэтиловый эфир), получая 13,0 г слегка желтого масла (выход 71% от теоретического).
в) Гидробромид 3-[2-(трет-бутилоксикарбонил)этил]глутакональдегиддианилида
Раствор 10 г (48 ммолей) трет-бутилового эфира 3-пиридин-4-илпропионовой кислоты в 150 мл диэтилового эфира перемешивают с 8,9 г (96 ммолями) анилина и затем перемешивают при 0°С с раствором 5,4 г (48 ммолями) бромциана в 2 мл диэтилового эфира. После 3 ч перемешивания при 0°С отфильтровывают образовавшееся красное твердое вещество, промывают эфиром и высушивают в вакууме.
Выход: 20,3 г (92% от теоретического).
г) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(2-карбоксиэтил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Ниндол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Суспензию 1,0 г (2,2 ммоля) гидробромида 3-[2-(трет-бутилоксикарбонил)этил]глутакональдегиддианилида. (пример 1в) и 1,5 г (4,4 ммоля) 1-(2-сульфонатэтил)-2,3,3-триметил-3Ниндоленин-5-сульфокислоты (пример 1а) в 20 мл ангидрида уксусной кислоты и 5 мл уксусной кислоты смешивают с 0,75 г (9,1 ммоля) ацетата натрия и перемешивают в течение 1 ч при 120°С. После охлаждения реакционную смесь перемешивают с диэтиловым эфиром, выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают, очищают хроматографически (ВР-С 18-силикагель, подвижная фаза вода/метанол) и лиофилизируют (0,5 г). Отщепление защитной группы проводят посредством перемешивания промежуточного продукта в 4 мл дихлорметана/1 мл трифторуксусной кислоты в течение 1 ч. После концентрирования выпариванием и хроматографической очистки (ВР-С18-силикагель, подвижная фаза вода/метанол), получают 0,45 г (23% от теоретического) голубого лиофилизата.
д) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(2-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}этил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль 0,4 г (0,45 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 1г, и 45 мг (0,45 ммоля) триэтиламина растворяют в 10 мл ДМФ, смешивают при 0°С с 0,15 г (0,45 ммоля) ТВТи и перемешивают в течение 10 мин. Затем добавляют раствор 0,17 г (0,68 ммоля) трифторацетата Ы-(2-аминоэтил)малеимида (Ιηΐ. 1. Рер1. Рго1ет Век. 1992, 40, 445) и 68 мг (0,68 ммоля) триэтиламина в 0,5 мл ДМФ, и перемешивают в те
- 12 009386 чение 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляют 10 мл диэтилового эфира, твердое вещество отделяют центрифугированием, высушивают и очищают с помощью хроматографии (ВР-С-18 силикагель, градиент метанол/вода). Выход: 0,30 г голубого лиофилизата (65% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 47,24; Н 4,26; N 5,51; Б 12,61; Ыа 6,78
Найдено: С 47,74; Н 4,47; N 5,40; Б 11,99; Ыа 7,02
Пример 2. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(2-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексил]карбамоил}этил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула III)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,4 г (0,45 ммоля) названного в заголовке примера 1г соединения и 0,21 г (0,68 ммоля) трифторацетата Ы-(6-аминогексил)малеимида (Ιηΐ. 1. Рер1. Рго1еш Век. 1992, 40, 445). Выход: 0,38 г голубого лиофилизата (81% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 49,25; Н 4,79; N 5,22; Б 11,95; Ыа 6,43
Найдено: С 48,96; Н 4,92; N 5,32; Б 11,88; Ыа 6,56
Пример 3. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(2-{[13-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-4,7,10-триоксатридецил]карбамоил}этил)гепта-2,4,6-триен-1 -илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула IV)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,4 г (0,45 ммоля) названного в заголовке примера 1г соединения и 0,28 г (0,68 ммоля) трифторацетата N-(13-амино-4,7,10-триоксатридецил)малеимида (Ш1. 1. Рер1. Рго1еш Век., 1992, 40, 445). Выход: 0,27 г голубого лиофилизата (51% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 49,97; Н 5,05; N 4,76; Б 10,89; №1 5,86
Найдено: С 49,22; Н 5,16; N 4,62; Б 10,67; № 5,66
Пример 4. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(4-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-этил]карбамоил}бутил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула V)
- 13 009386
а) (3 -трет-Бутоксикарбонилпропил)трифенилфосфонийбромид г (0,30 моля) 4-броммасляной кислоты по каплям смешивают в 400 мл ТГФ при -40°С с 187 г (0,89 моля) ангидрида трифторуксусной кислоты. После 30 мин перемешивания при -40°С, добавляют по каплям 400 мл смеси трет-бутанол/30 мл ТГФ в течение 1 ч. После 16 ч перемешивания при комнатной температуре реакционную смесь переносят в охлажденный льдом раствор карбоната натрия, водную фазу трижды экстрагируют диэтиловым эфиром, органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и концентрируют выпариванием. Остаток перегоняют в вакууме (температура кипения 72°С/0,9 мбар; выход: 41 г). Для образования соли фосфония реакцию проводят, нагревая с обратным холодильником 41 г (0,18 моля) промежуточного продукта, 44,6 г (0,17 моля) трифенилфосфина и 32,5 г (0,36 моля) бикарбоната натрия в 250 мл ацетонитрила в течение 20 ч. Реакционную смесь фильтруют, концентрируют выпариванием и остаток для кристаллизации перемешивают с диэтиловым эфиром. Выход белого твердого вещества составляет 58,5 г (40% от теоретического относительно 4-броммасляной кислоты).
б) трет-Бутиловый эфир 5-пиридин-4-илпентановой кислоты
Раствор 14 г (28 ммолей) (3-трет-бутоксикарбонилпропил)трифенилфосфонийбромида (пример 4а) в 100 мл безводного ТГФ смешивают при -40°С в вакууме в течение 20 мин с 17,5 мл (28 ммолей) бутиллития (1,6-молярный раствор в гексане) и перемешивают в течение 1 ч при -40°С. К реакционной смеси добавляют по каплям раствор 2,78 г (26 ммолей) 4-пиридинкарбальдегида в 20 мл ТГФ и перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре, затем переносят в ледяную воду, водную фазу трижды экстрагируют диэтиловым эфиром, органические фазы высушивают над сульфатом натрия и концентрируют выпариванием. После хроматографической очистки (силикагель, подвижная фаза гексан/этилацетат) получают продукт в виде Ε,Ζ-смеси (4:1 по данным ЯМР; 5,0 г). Для гидрирования двойной связи промежуточный продукт растворяют в 200 мл метанола и перемешивают со 100 мг Р1О2 катализатора при комнатной температуре в атмосфере водорода. После фильтрования и концентрирования выпариванием получают желтое масло. Выход: 4,9 г (74% от теоретического).
в) Гидробромид 3-[4-(трет-бутилоксикарбонил)бутил]глютакональдегиддианилида
Раствор 4,0 г (17 ммолей) трет-бутилового эфира 5-пиридин-4-илпентановой кислоты в 35 мл диэтилового эфира смешивают с 3,2 г (34 ммолей) анилина и затем при 0°С с раствором 1,9 г (17 ммолей) бромциана в 8 мл диэтилового эфира. После перемешивания в течение 3 ч при 0°С образовавшееся красное твердое вещество отфильтровывают, промывают эфиром и высушивают в вакууме. Выход: 7,8 г (95% от теоретического).
г) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(4-карбоксибутил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Ниндол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Синтез проводят аналогично примеру 1г из соединения, названного в заголовке примера 4в (2,5 ммолей), и 1-(2-сульфонатэтил)-2,3,3-триметил-3Н-индоленин-5-сульфоновой кислоты (5 ммолей). Выход составляет 0,85 г (37% от теоретического) голубого лиофилизата.
д) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(4-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}бутил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,4 г (0,43 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 4г. Выход составляет 0,31 г (69% от теоретического) голубого лиофилизата.
Элементный анализ: вычислено: С 48,27; Н 4,53; N 5,36; Б 12,27; Να 6,60
Найдено: С 48,01; Н 4,44; N 5,56; Б 12,10; Ыа 6,81
Пример 5. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(4-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексил]карбамоил}бутил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула VI)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,4 г (0,43 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 1г, и 0,20 г (0,66 ммоля) Ы-(6-аминогексил)малеимида трифторуксусной кислоты. Выход со- 14 009386 ставляет 0,35 г голубого лиофилизата (74% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 50,17; Н 5,03; N 5,36; 8 11,65; Ыа 6,26
Найдено: С 49,83; Н 4,89; N 5,34; 8 12,05; Ыа 6,42
Пример 6. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(4-{[13-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-4,7,10-триоксатридецил]карбамоил}бутил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула VII)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,4 г (0,43 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 1г, и 0,30 г (0,72 ммоля) трифторацетата N-(13-амино-4,7,10-триоксатридецил)малеимида. Выход составляет 0,27 г голубого лиофилизата (52% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 49,83; Н 5,27; N 4,65; 8 10,64; Ыа 5,72
Найдено: С 49,45; Н 5,19; N 4,66; 8 10,85; Ыа 5,80
Пример 7. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(6-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-этил]карбамоил}гексил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула VIII)
а) (3 -трет-Бутоксикарбонилпентил)трифенилфосфонийбромид
Получение проводят аналогично описанному в примере 4а, при этом промежуточный продукт третбутиловый эфир 3-пиридин-4-илпропионовой кислоты вводят в реакцию в сыром виде, получая 79 г продукта (69% от теоретического) в виде вязкого бесцветного масла из 50 г 6-бромгексановой кислоты.
б) трет-Бутиловый эфир 7-пиридин-4-илгептановой кислоты
Получение проводят аналогично описанному в примере 4б. трет-Бутиловый эфир 7-пиридин-4илгептановой кислоты (7,5 г, 65% от теоретического) получают в виде желтого масла из 25 г (48,7 ммолей) (3-трет-бутоксикарбонилпентил)трифенилфосфонийбромида (пример 7а).
в) Гидробромид 3-[4-(трет-бутилоксикарбонил)гексил]глютакональдегиддианилида
Раствор 5,0 г (19 ммолей) трет-бутилового эфира 5-пиридин-4-илгептановой кислоты в 30 мл диэтилового эфира смешивают с 3,6 г (38 ммолями) анилина и затем при 0°С с раствором 2,1 г (19 ммолей) бромциана в 5 мл диэтилового эфира. После перемешивания в течение 2,5 ч при 0°С образовавшееся красное твердое вещество отфильтровывают, промывают эфиром и высушивают в вакууме. Выход составляет 8,9 г (91% от теоретического).
г) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(6-карбоксигексил)гепта-2,4,6-триен-1 -илиден}-1 -(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Ниндол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Синтез проводят аналогично примеру 1г из названного в заголовке примера 4в соединения (3 ммоля) и 1-(2-сульфонатэтил)-2,3,3-триметил-3Н-индоленин-5-сульфоновой кислоты (6 ммолей). Выход составляет 1,5 г (54% от теоретического) голубого лиофилизата.
- 15 009386
д) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(6-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}гексил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,4 г (0,43 ммоля) названного в заголовке примера 4г соединения. Выход составляет 0,31 г (69% от теоретического) голубого лиофилизата.
Элементный анализ: вычислено: С 49,25; Н 4,79; N 5,22; 8 11,95; Ыа 6,43
Найдено: С 48,98; Н 4,86; N 5,12; 8 11,76; Ыа 6,77
Пример 8. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(6-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексил]карбамоил}гексил)гепта-2,4,6триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула IX)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,5 г (0,53 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 7г, и 0,23 г (0,75 ммоля) трифторацетата Ы-(6-аминогексил)малеимида. Выход составляет 0,42 г голубого лиофилизата (70% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 51,05; Н 5,27; N 4,96; 8 11,36; Ыа 6,11
Найдено: С 50,74; Н 5,55; N 4,76; 8 11,38; Ыа 6,35
Пример 9. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(6-{[13-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-4,7,10-триоксатридецил]карбамоил}гексил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула X)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,5 г (0,53 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 1г, и 0,44 г (1,06 ммоля) трифторацетата N-(13-амино-4,7,10-триоксатридецил)малеимида. Выход составляет 0,24 г голубого лиофилизата (37% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 50,64; Н 5,48; N 4,54; 8 10,40; №1 5,59
Найдено: С 50,30; Н 5,56; N 4,34; 8 10,15; № 5,73
Пример 10. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)3Н-индолиум-2-ил]-4-(5-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}-3-оксапентил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XI)
- 16 009386
а) трет-Бутиловый эфир 3-окса-6-(4-пиридинил)гексановой кислоты
Раствор 75 г (0,4 моля) 3-(4-пиридинил)-1-пропанола в 400 мл толуола/50 мл ТГФ смешивают с 10 г сульфата тетрабутиламмония и 350 мл 32%-ного раствора гидроксида натрия. Затем по каплям прибавляют 123 г (0,68 моля) трет-бутилового эфира бромуксусной кислоты и перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре. Органическую фазу отделяют, водную фазу трижды экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывают раствором №1С1. высушивают над сульфатом натрия и концентрируют выпариванием. После хроматографической очистки (силикагель, подвижная фаза: раствор гексан:этилацетат) получают 56 г продукта в виде коричневатого масла (41% от теоретического).
б) Гидробромид 3-[4-окса-5-(трет-бутилоксикарбонил)пентил]глютакональдегиддианилида
Раствор 5,0 г (20 ммолей) трет-бутилового эфира 3-окса-6-(4-пиридинил)гексановой кислоты в 60 мл диэтилового эфира смешивают с 3,7 г (40 ммолей) анилина и затем при 0°С с раствором 2,2 г (20 ммолей) бромциана в 8 мл диэтилового эфира. После перемешивания в течение 1 ч при 0°С образовавшееся твердое вещество отфильтровывают, промывают эфиром и высушивают в вакууме. Выход составляет 8,5 г (85% от теоретического) твердого вещества фиолетового цвета.
в) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(6-карбокси-4-оксагексил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Суспензию 3,0 г (6 ммолей) гидробромида 3-[2-(трет-бутилоксикарбонил)этил]глутакональдегиддианилида (пример 106) и 4,2 г (12 ммолей) 1-(2-сульфонатэтил)-2,3,3-триметил-3Н-индоленин-5сульфоновой кислоты (пример 1а) в 50 мл ангидрида уксусной кислоты и 10 мл уксусной кислоты смешивают с 2,5 г (30 ммолей) ацетата натрия и перемешивают в течение 50 мин при 120°С. После охлаждения перемешивают с диэтиловым эфиром, выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают, осаждают в ацетоне и высушивают в высоком вакууме. После хроматографической очистки (КР-С18силикагель, подвижная фаза вода/метанол) удаляют метанол в вакууме и лиофилизируют (0,5 г). После концентрирования выпариванием и хроматографической очистки (КР-С18-силикагель, подвижная фаза вода/метанол), сразу получают названное в заголовке соединение. Выход: 2,3 г (41% от теоретического) голубого лиофилизата.
г) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(5-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}-3-оксапентил)гепта2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Синтез проводят аналогично примеру 1в из 1,0 г (1,1 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 10в. Выход: 0,85 г голубого лиофилизата (73% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 47,54; Н 4,46; N 5,28; 8 12,09; Να 6,50
Найдено: С 47, 97; Н 4,65; N 5,10; 8 12,02; Ыа 6,68
Пример 11. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)3Н-индолиум-2-ил]-4-(5-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-гексил]карбамоил}-3-оксапентил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XII)
- 17 009386
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,5 г (0,55 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 10в, и 0,23 г (0,75 ммоля) трифторацетата Ы-(6-аминогексил)малеимида. Выход: 0,42 г голубого лиофилизата (68% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 49,46; Н 4,96; N 5,01; 8 11,48; Ыа 6,17
Найдено: С 48,95; Н 5,21; N 5,22; 8 11,23; № 6,60
Пример 12. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)3Н-индолиум-2-ил]-4-(5-{[13-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-4,7,10-триоксатридецил]карбамоил}-4-оксапентил)гепта-2,4,6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XIII)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,5 г (0,55 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 10в, и 0,46 г (1,06 ммоля) трифторацетата Ы-(13-амино-4,7,10-триоксатридецил)малеимида. Выход: 0,34 г голубого лиофилизата (56% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 49,17; Н 5,20; N 4,59; 8 10,50; Ыа 5,65
Найдено: С 49,34; Н 5,32; N 4,45; 8 10,28; Ыа 5,56
Пример 13. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)3Н-индолиум-2-ил]винилен}-2-[4-(2-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}этил)фенокси]циклогекс-1 -ен-3 -илиден)этилиден]-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XIV)
а) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]винилен}-2-хлорциклогекс-1-ен-3-илиден)этилиден]-1-(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
5,0 г (14,4 ммолей) 1-(2-сульфонатоэтил)-2,3,3-триметил-3Н-индоленин-5-сульфокислоты (пример 1а) и 2,6 г (7,2 ммолей) гидрохлорида №[(3-(анилинометилен)-2-хлор-1-циклогексен-1ил)метилен]анилина (ΑΙΗγιοΠ Сотрапу) нагревают с обратным холодильником с 2,5 г (30 ммолями) безводного ацетата натрия в 100 мл метанола в течение 1 ч, охлаждают, смешивают с 150 мл диэтилового эфира и перемешивают в течение ночи. Осадок отсасывают, высушивают и очищают с помощью хроматографии (силикагель, градиент: дихлорметан/метанол). Выход: 3,8 г голубого твердого вещества (58% от теоретического).
- 18 009386
б) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонато-1-(2-сульфонатоэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-винилен}-2-[4-(2-карбоксиэтил)фенокси]циклогекс-1-ен-3-илиден)этилиден]-1-(2сульфонатоэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
0,37 г (2,2 ммоля) 3-(4-гидроксифенил)пропионовой кислоты в 30 мл ДМФ смешивают с 0,18 г (4,5 ммоля) гидрида натрия (60%-ная минеральная дисперсия). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин смесь охлаждают до 0°С, добавляют по каплям раствор 2,0 г (2,2 ммоля) названного в заголовке примера 12а соединения в 100 мл ДМФ и перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь гасят сухим льдом и растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в метаноле, перемешивают с 200 мл эфира и твердый осадок отфильтровывают, после чего проводят хроматографическую очистку (силикагель, градиент: этилацетат/метанол). Выход: 1,9 г голубого твердого вещества (83% от теоретического).
в) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)-3Ниндолиум-2-ил]винилен}-2-[4-(2-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)этил]карбамоил}этил)фенокси]циклогекс-1 -ен-3-илиден)этилиден]-1 -(2-сульфонатэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
0,1 мг (0,10 ммоля) названного в заголовке примера 126 соединения вводят в реакцию с ТВТИ и трифторацетатом Ы-(2-аминоэтил)малеимида в присутствии триэтиламина и полученный продукт очищают хроматографически. Выход: 93 мг голубого лиофилизата (81% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 51,21; Н 4,47; N 4,88; 8 11,16; Ыа 6,00
Найдено: С 51,50; Н 4,55; N 4,95; 8 10,93; Ыа 6,15
Пример 14. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатэтил)3Н-индолиум-2-ил]винилен}-2-[4-(2-{[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексил]карбамоил}этил)фенокси]циклогекс-1 -ен-3 -илиден)этилиден]-1-(2-сульфонатоэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XV)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,7 г (0,68 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 14а, и 0,53 г (1,22 ммоля) трифторацетата Ы-(13-амино-4,7,10-триоксатридецил)малеимида. Выход: 0,56 г голубого лиофилизата (68% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 48,27; Н 4,53; N 5,36; 8 12,27; Ыа 6,60
Найдено: С 48,01; Н 4,44; N 5,56; 8 12,10; Ыа 6,81
Пример 15. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-(2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2сульфонатоэтил)-3Н-индолиум-2-ил]винилен}-2-[4-(2-{[3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)4,7,10-триоксатридецил]карбамоил}этил)фенокси]циклогекс-1 -ен-3 -илиден)этилиден]-1 -(2-сульфонатоэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XVI)
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0,7 г (0,68 ммоля) соединения, названного в заголовке примера 14а, и 0,59 г (1,36 ммоля) трифторацетата N-(13-амино-4,7,10-триоксатридецил)малеимида. После проведения двух хроматографических очисток выход составляет 0,67 г голубого лиофилизата (75% от теоретического).
- 19 009386
Элементный анализ: вычислено: С 52,29; Н 5,16; N 4,28; 8 9,79; Ыа 5,27
Найдено: С 51,88; Н 5,40; N 4,34; 8 9,53; Ыа 5,68
Пример 16. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2сульфонатоэтил)-3Н-индолиум-2-ил]винилен}-2-[4-(2-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1ил)этил]карбамоил}этил)фенокси]-5-трет-бутилциклогекс-1-ен-3 -илиден)этилиден]-1 -(2сульфонатоэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XVII)
а) Г идрохлорид N-[(3 -(анилинометилен)-2-хлор-5-трет-бутил-1 -циклогексен-1 -ил)метилен]анилина
6,7 мл (73,4 ммолей) оксихлорида фосфора добавляют по каплям при 0°С к 8 мл ДМФ. Затем добавляют по каплям раствор 5,0 г (32,4 ммоля) 4-трет-бутилциклогексанона в 30 мл дихлорметана, и реакционную смесь перемешивают при нагревании с обратным холодильником в течение 3 ч. После охлаждения до 0°С медленно по каплям прибавляют 6 г (64,8 ммоля) анилина в 5,5 мл этанола, смесь переносят в 200 г льда и при перемешивании добавляют 5 мл конц. хлористо-водородной кислоты. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают, промывают эфиром и высушивают. Выход: 6,8 г (50% от теоретического) красного твердого вещества.
б) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатоэтил)-3Ниндолиум-2-ил] винилен }-2-хлор-5-трет-бутилциклогекс-1-ен-3 -илиден)этилиден]-1 -(2-сульфонатоэтил)2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
5,0 г (14,4 ммолей) 1-(2-сульфонатоэтил)-2,3,3-триметил-3Н-индоленин-5-сульфокислоты (пример 1а) и 3,0 г (7,2 ммоля) гидрохлорида Ы-[(3-(анилинометилен)-2-хлор-5-трет-бутил-1-циклогексен-1ил)метилен]анилина (пример 16а) нагревают с обратным холодильником с 2,5 г (30 ммолями) безводного ацетата натрия в 100 мл метанола в течение 1,5 ч, охлаждают, смешивают с 150 мл диэтилового эфира и перемешивают в течение ночи. Осадок отсасывают, высушивают и очищают с помощью хроматографии (силикагель, градиент: дихлорметан/метанол). Выход: 4,7 г голубого твердого вещества (68% от теоретического).
в) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатоэтил)-3Ниндолиум-2-ил]винилен}-2[4-(2-карбоксиэтил)фенокси]-5-трет-бутил-циклогекс-1-ен-3-илиден)этилиден]-1-(2-сульфонатоэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Реакцию проводят с 2,0 г (2,1 ммоля) названного в заголовке примера 166 соединения, как описано в примере 136. Выход: 1,5 г (66% от теоретического).
г) Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-[2-(1-{[3,3-диметил-5-сульфонат-1-(2-сульфонатоэтил)-3Ниндолиум-2-ил]винилен}-2-[4-(2-{[2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-этил]карбамоил}этил)фенокси]-5-трет-бутилциклогекс-1-ен-3 -илиден)этилиден]-1 -(2-сульфонатоэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5сульфоновой кислоты, внутренняя соль
Реакцию проводят с 1,0 г (0,92 ммоля) названного в заголовке примера 16в соединения, как описано в примере 13в. Дважды проводят хроматографическую очистку, используя КР-С18-силикагель, (подвижная фаза ацетонитрил/вода). Выход: 0,24 г (22% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 52,82; Н 4,93; N 4,65; 8 10,64; Ыа 5,72
Найдено: С 52,23; Н 5,20; N 4,31; 8 10,30; \а 6,15
Примеры 17-19. Синтез индотрикарбоцианиновых красителей с бромацетиламидными группами
Пример 17. Тринатриевая соль 3,3-диметил-2-{7-[3,3-диметил-5-сульфонато-1-(2-сульфонатоэтил)3Н-индолиум-2-ил]-4-(5-{[6-(бромацетиламино)гексил]карбамоил}-4-оксапентил)гепта-2,4,6-триен-1илиден}-1-(2-сульфонатоэтил)-2,3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты, внутренняя соль (формула XIX)
- 20 009386
а) Тринатриевая соль 3.3-диметил-2-{7-[3.3-диметил-5-сульфонато-1-(2-сульфонатоэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(5-{(6-аминогексилгексил)карбамоил}-4-оксапентил)гепта-2.4.6-триен-1-илиден}-1-(2сульфонатоэтил)-2.3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты. внутренняя соль
Синтез проводят аналогично примеру 1д из 0.5 г (0.55 ммоля) названного в заголовке примера 10в соединения и 0.15 г (0.70 ммоля) Ν-бок-гександиамина (Ника). Реакционный продукт очищают с помощью хроматографии (ЯР-С 18-хроматография. градиент метанол/вода) и после лиофилизации перемешивают при охлаждении льдом в смеси 2 мл трифторуксусной кислоты/8 мл дихлорметана в течение 15 мин. После центрифугирования в вакууме остаток растворяют в метаноле. осаждают диэтиловым эфиром и выделяют. Выход: 0.26 г голубого твердого вещества (22% от теоретического).
б) Тринатриевая соль 3.3-диметил-2-{7-[3.3-диметил-5-сульфонато-1-(2-сульфонатоэтил)-3Ниндолиум-2-ил]-4-(5-{[6-(бромацетиламино)гексил]карбамоил}-4-оксапентил)гепта-2.4.6-триен-1-илиден}-1-(2-сульфонатоэтил)-2.3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты. внутренняя соль
0.26 г (0.23 ммоля) названного в заголовке примера 18а соединения охлаждают в 5 мл ДМФ до -20°С. смешивают с 28 мг (0.28 ммоля) триэтиламина и раствором 0.10 г (0.46 ммоля) бромацетилбромида в 0.2 мл диметилформамида. После перемешивания в течение 5 ч при максимальной температуре 0°С осаждают продукт добавлением диэтилового эфира и получают после переосаждения из смеси диметилформамид/диэтиловый эфир и высушивания 0.23 г голубого твердого вещества (86% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 45.63; Н 4.87; N 4.84; 8 11.07; Ыа 5.96
Найдено: С 45.13; Н 4.66; N 4.67; 8 10.83; Ыа не определяли
Пример 18. Тринатриевая соль 3.3-диметил-2-{7-[3.3-диметил-5-сульфонато-1-(2-сульфонатоэтил)3Н-индолиум-2-ил]-4-(3-{[3-(бромацетиламино)пропил]карбамоил}этил)гепта-2.4.6-триен-1-илиден}-1(2-сульфонатоэтил)-2.3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты. внутренняя соль (формула XVIII)
Синтез проводят из названного в заголовке примера 1г соединения (0.5 г; 0.56 ммоля) и Ν-бокпропилендиамина аналогично примеру 17. Выход по всем стадиям: 0.22 г (37% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 43.70; Н 4.33; N 5.23; 8 11.96; Ыа 5.96
Найдено: С 43.21; Н 4.14; N 5.53; 8 10.89; Ыа не определяли
Пример 19. Тринатриевая соль 3.3-диметил-2-[2-(1-{[3.3-диметил-5-сульфонато-1-(2сульфонатоэтил)-3Н-индолиум-2-ил]винилен-2-(4-{[3-(бромацетиламино)пропил]карбамоил}этил)фенокси}циклогекс-1 -ен-3 -илиден)этилиден]-1 -(2-сульфонатоэтил)-2.3-дигидро-1Н-индол-5-сульфоновой кислоты. внутренняя соль (формула XX)
- 21 009386
Синтез проводят из названного в заголовке примера 136 соединения (0,5 г; 0,49 ммоля) и №бокпропилендиамина аналогично примеру 17. Выход по всем стадиям: 0,31 г (53% от теоретического).
Элементный анализ: вычислено: С 47,88; Н 4,52; N 4,65; Б 10,65; 5,73
Найдено: С 48,04; Н 4,43; N 4,69; Б 10,72; № 5,84
Примеры 20-23. Синтез коньюгатов с биомолекулами и фотофизическая характеристика коньюгатов
Пример 20. Маркирование БСА (альбумин бычьей сыворотки) соединениями, названными в заголовках примеров 1-16
Общие инструкции:
Раствор 5 мг (0,074 мкмоля) БСА (БДта Сотрапу) в 5 мл фосфатного буфера (0,1-молярный Nа2НРΟ4/NаН2РΟ4, рН 6,8) смешивают в каждом случае с 0,74 мкмолями соединений, названных в заголовках примеров 1-16 (исходные растворы для разведения 0,5 мг/мл в ФБР (физиологический раствор с фосфатным буфером), и инкубируют в течение 30 мин при 25°С. Очистку коньюгатов проводят посредством гель-хроматографии (колонка: Берйабех 650, диаметр 1,5 см, Рйагтааа, элюент: ФБР).
Пример 21. Маркирование БСА соединениями, названными в заголовках примеров 17-19
Общие инструкции: Раствор 5 мг (0,074 мкмоля) БСА (от фирмы БДта Сотрапу) в 5 мл фосфатного буфера (0,1-молярный боратный буфер, рН 8,5) смешивают в каждом случае с 1,10 мкмолями соединений, названных в заголовках примеров 17-19 (исходные растворы для разведения 0,5 мг/мл в ФБР), и инкубируют в течение 5 ч при 25°С. Очистку коньюгатов проводят посредством гель-хроматографии (колонка: Берйабех 650, диаметр 1,5 см, Рйагтас1а, элюент: ФБР).
Пример 22. Маркирование ксЕу антитела АР39 (фрагмент одиночной цепи) к ΕΌ-Β-фибронектину соединениями, названными в заголовках примеров 1-16
АР39 является ксЕу с С-концевым цистеином и присутствует в виде Б-Б-димера с молярной массой около 56 000 г/мол (Сигг. Орш. Эгид Э|ксоу. Эеуе1. 2002 Маг; 5(2): 204-13). При восстановлении дисульфидных мостиков образуются два мономера с доступными БН-группами (молярная масса 28000 г/мол).
Общие инструкции: 0,3 мл раствора АР39 в ФБР (концентрация 0,93 мг димера/мл) смешивают с 60 мкл раствора трис(карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР) в ФБР (2,8 мг/мл) и инкубируют в атмосфере азота в течение 1 ч при 25°С. Избыток ТСЕР отделяют посредством гель-фильтрации на NΑР-5 колонке (элюент: ФБР). Количество полученного АР39-мономера (ОИ280НМ = 1,4), определенное с помощью фотометрии, составляет 230-250 мкг (объемы 0,5-0,6 мл). Раствор смешивают с 0,03 мкмоля соединений, названных в заголовках примеров 1-16, (исходные растворы для разведения 0,5 мг/мл в ФБР), и инкубируют в течение 30 мин при 25°С. Коньюгат очищают с помощью гель-хроматографии на NΑР-5 колонке (элюент: ФБР/10% глицерин). Иммунореактивность раствора коньюгата определяют с помощью афинной хроматографии (ΕΌ-Β-фибронектиновая смола) (1. Iттиηо1. Ме111.. 1999, 231, 239). Иммунореактивность полученных коньюгатов составляет >80% (АР39 перед коньюгацией >95%).
Пример 23. Маркирование ксЕу антитела АР39 (фрагмент одиночной цепи) к ΕΌ-Β-фибронектину соединениями, названными в заголовках примеров 17-19
Общие инструкции: 0,3 мл раствора АР39 в ФБР (концентрация 0,93 мг димера/мл) смешивают с 60 мкл раствора трис(карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР) в ФБР (2,8 мг/мл) и инкубируют в атмосфере азота в течение 1 ч при 25°С.
Избыток ТСЕР отделяют посредством гель-фильтрации на NΑР-5 колонке (элюент: 50 ммолей боратного буфера, рН 8,5). Количество полученного АР39-мономера (ОО280НМ = 1,4), определенное с помощью фотометрии, составляет 230-250 мкг (объемы 0,5-0,6 мл). Раствор смешивают с 0,06 мкмолей соединений, названных в заголовках примеров 1-16, (исходные растворы для разведения 0,5 мг/мл в ФБР), и инкубируют в течение 4 ч при 25°С. Коньюгат очищают с помощью гель-хроматографии на NΑР-5 колонке (элюэнт: ФБР/10% глицерин). Иммунореактивность раствора коньюгата определяют с помощью афинной хроматографии (ΕΌ-Β-фибронектиновая смола) (1. Iттиηо1. МеЩ, 1999, 231, 239). Иммунореактивность полученных коньюгатов составляет >75% (АР39 перед коньюгацией >95%).
Фотофизическая характеристика краситель-БСА-коньюгатов примеров 21 и 22 и коньюгатов краситель-ксЕу антитело примеров 23 и 24.
Степень концентрации (молярное соотношение краситель/антитело) определяют фотометрически,
- 22 009386 основываясь на коэффициенте экстинкции 75000 л мол-1 см-1 в коротковолновом плече спектральной линии (около 690-710 нм); абсорбцию антитела (АР39) определяют с ΟΌ280ΗΜ 1,4; и/или абсорбцию белка (БСА) определяют с ΟΌ277ΗΜ 0,58. Флюоресцентный квантовый выход определяют с помощью БРЕХ Г1иого1од (зависимая от длины волны чувствительность калибруется лампой и детектором) относительно индоцианинового зеленого (О = 0,13 в ДМСО, I. СНет. Епд. Оа1а, 1977, 22, 379, Вюсоп)ида1е СНет., 2001, 12, 44).
Таблица 2. Свойства коньюгатов согласно изобретению
Субстанция (биомолекула/ образец соединения) | Степень концентрации | Асорбционный максимум (нм) | Флюоресцентный максимум (нм) | Флюоресцентный квантовый выход | |
Пример 20 | |||||
К1 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 2 | 0,5 | 766 | 790 | 0,13 |
К.2 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 4 | 0,6 | 767 | 792 | 0,16 |
КЗ | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 5 | 0,7 | 765 | 790 | 0,15 |
К4 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 10 | 0,5 | 766 | 789 | Не определено 1 |
К5 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 11 | 0,5 | 768 | 790 | 0,14 |
Кб | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 13 | 0,4 | 772 | 793 | 0,11 |
К7 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 16 | 0,4 | 772 | 793 | Не определено |
Пример 21 | |||||
К8 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 17 | 0,3 | 768 | 790 | 0,15 |
Пример 22 | |||||
К.9 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 1 | 1,1 | 768 | 794 | 0,14 |
К10 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера в заголовке примера 2 | 1,0 | 767 | 793 | 0,12 |
К11 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 4 | 0,8 | 767 | 792 | 0,12 |
К12 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 5 | 0,9 | 768 | 794 | 0,14 |
К13 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 6 | 1,1 | 769 | 792 | 0,10 |
К14 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 7 | 1,0 | 769 | 792 | Не определено |
К.15 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 10 | 1,1 | 767 | 790 | 0,13 |
1К16 | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 11 | 1,1 | 767 | 789 | 0,15 |
|К17 !_______________________________ | Коньюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 12 | 0,9 | 766 | 790 | 0,11 |
- 23 009386
К18 | Конъюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 13 | 1,2 | 771 | 795 | 0,10 |
К19 | Конъюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 14 | 1,1 | 772 | 796 | 0,09 |
Пример 23 | |||||
К20 | Конъюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 17 | 0,7 | 767 | 790 | 0,18 |
К21 | Конъюгат из БСА и соединения, названного в заголовке примера 19 | 0,8 | 773 | 794 | 0,13 |
Пример 24.
Визуализационные свойства коньюгатов согласно изобретению исследуют в условиях ίη νί\Ό после инъекции безволосой мыши, имеющей опухоль. С этой целью коньюгаты вводят внутривенно и за концентрацией в области расположения опухоли наблюдают в течение 24 ч после введения. Флюоресценцию субстанций возбуждают на участке облучения животных посредством близкого инфракрасного света с длиной волны 740 нм, который получают с помощью диодного лазера (0,5 V выход). Флюоресцентную радиацию обнаруживают с помощью усиленной ССЭ камеры, а флюоресцентные изображения сохраняют в цифровом виде. Эффективность в условиях ίη νί\Ό коньюгатов красителей изображена на фиг. 2, основанном на примере.
Можно полагать, что любой специалист в области техники без дальнейшей разработки, применяя предшествующее описание, может использовать настоящее изобретение в полнейшей степени. Поэтому следующие предпочтительные специфические варианты следует истолковывать только как иллюстративные и совсем не лимитирующие любым путем остальной объем изобретения.
Полное описание(я) всех заявок, патентов и публикаций, цитированных при этом, включены в данное описание посредством ссылок.
Предшествующие примеры могут быть повторены с подобным успехом при замене общих или специфически описанных регентов или технических условий по настоящему изобретению для их применения в предшествующих примерах.
Из приведенного выше описания любой специалист в данной области техники может легко установить существенные характеристики по настоящему изобретению и, без отклонения от его сущности и объема, может произвести различные изменения и модификации изобретения, чтобы адаптировать его к различным вариантам применения и условиям.
Claims (33)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Индотрикарбоцианиновый краситель формулы (I)К.‘7 (I) в которойX обозначает С, который замещен в двух положениях метильной группой, Υ обозначает СН2-СН2,Ζ обозначает С1-5алкил, при этом атомы углерода необязательно замещены О, или обозначает груп пуОКу-Ку независимо друг от друга обозначают 8О3Н, К5 обозначает -СО-ЯН-К^Кз или СООН, где К8 обозначает неразветвленный С2ц3алкил, в котором С атомы необязательно замещены О, а К9 выбирают из- 24 009386 или и К6 и К7 обозначают СН или связаны с гексильным кольцом через С3алкил, который необязательно может быть замещен в п-положении С1-4алкильным радикалом, и соли и сольваты этого соединения.
- 2. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.1, в котором Υ обозначает СН2-СН2, Ζ обозначает С1-5алкил, при этом атомы углерода необязательно замещены О, а К<5 и К7 обозначают СН, и соли и сольваты этого соединения.
- 3. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.1 или 2, в котором Ζ обозначает С1-5алкил.
- 4. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.1 или 2, в котором Ζ обозначает и Кб и К7 связаны с гексильным кольцом через С3-алкил.
- 5. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно пп.1-4, в котором К5 обозначает СООН.
- 6. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (II) и соли и сольваты этого соединения.
- 7. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (III) и соли и сольваты этого соединения.
- 8. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (IV)- 25 009386 и соли и сольваты этого соединения.
- 9. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (V) и соли и сольваты этого соединения.
- 11. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (VII)
- 12. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (VIII)- 26 009386 и соли и сольваты этого соединения.
- 13. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (IX) и соли и сольваты этого соединения.
- 14. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (X)
- 15. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.2 формулы (XI)- 27 009386 и соли и сольваты этого соединения.
- 16. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.2 формулы (XII) и соли и сольваты этого соединения.
- 17. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.2 формулы (XIII) и соли и сольваты этого соединения.
- 18. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.4 формулы (XIV) и соли и сольваты этого соединения.
- 19. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.4 формулы (XV)- 28 009386 и соли и сольваты этого соединения.
- 20. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.4 формулы (XVI) и соли и сольваты этого соединения.
- 21. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.4 формулы (XVII) и соли и сольваты этого соединения.
- 22. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.3 формулы (XVIII) и соли и сольваты этого соединения.
- 23. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.2 формулы (XIX)- 29 009386 и соли и сольваты этого соединения.
- 24. Индотрикарбоцианиновый краситель согласно п.4 формулы (XX) и соли и сольваты этого соединения.
- 25. Способ получения индотрикарбоцианинового красителя формулы (I) по одному из пп.1-24, включающий:а) получение соответствующего 4-замещенного пиридина,б) превращение 4-замещенного пиридина посредством реакции Цинке-Кёнига в соответствующий мезозамещенный глутакональдегиддианилид, который является предшественником цианинового красителя, ив) превращение мезозамещенного глутакональдегиддианилида в соответствующий индотрикарбоцианиновый краситель формулы (I).
- 26. Способ получения коньюгатов, включающий присоединение индотрикарбоцианинового красителя согласно одному из пп.1-24 к биомолекуле.
- 27. Коньюгат индотрикарбоцианинового красителя с биомолекулой, полученный согласно п.26.
- 28. Коньюгат согласно п.27, характеризующийся тем, что в качестве биомолекулы включает по крайней мере одну биомолекулу, выбранную из пептидов, белков, липопротеинов, антител или фрагментов антител, нуклеиновой кислоты, такой как, например, олиго- или полинуклеотиды из ДНК или РНК, аптамеров, РНК и Сахаров, таких как, например, моно-, ди-, три-, олиго- и полисахариды.
- 29. Коньюгат согласно п.28, где белок выбран из группы структурных белков или растворимых белков организма.
- 30. Коньюгат согласно п.28 или 29, где растворимый белок является сывороточным белком, таким как, например, Н8А. В8А, яичный альбумин, ферментом, как, например, пероксидаза, или антителом, ксЕу фрагментом или Е(аЬ).
- 31. Коньюгат согласно одному из пп.27-30, где растворимый белок имеет сродство по отношению к ΕΌ-В -фибронектину.
- 32. Коньюгат согласно одному из пп.27-31, где индотрикарбоцианиновый краситель присоединен к биомолекуле через 8Н-группу, в частности, через 8Н-группу к цистеину.
- 33. Диагностический набор, включающий индотрикарбоцианиновый краситель согласно одному из пп.1-24 и/или коньюгат согласно одному из пп.27-31, вместе с дополнительными адъювантами для осуществления диагностики в условиях ίη νίνο, в частности, опухолей.
- 34. Применение коньюгата согласно одному из пп.27-31 в качестве флюоресцентной контрастной среды для ίη νίνο диагностики опухолей.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2003102787 DE10302787A1 (de) | 2003-01-24 | 2003-01-24 | Hydrophile, Thiol-reaktive Cyaninfarbstoffe und deren Konjugate mit Biomolekülen für die Fluoreszenzdiagnostik |
US44319703P | 2003-01-29 | 2003-01-29 | |
PCT/EP2003/012735 WO2004065491A1 (en) | 2003-01-24 | 2003-11-14 | Hydrophilic, thiol-reactive cyanine dyes and conjugates thereof with biomolecules for fluorescence diagnosis |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200501064A1 EA200501064A1 (ru) | 2006-02-24 |
EA009386B1 true EA009386B1 (ru) | 2007-12-28 |
Family
ID=32773159
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200501064A EA009386B1 (ru) | 2003-01-24 | 2003-11-14 | Гидрофильные, реакционные в отношении тиол-группы цианиновые красители, и их конъюгаты с биомолекулами для флюоресцентной диагностики |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20040260072A1 (ru) |
EP (1) | EP1585791B1 (ru) |
JP (1) | JP2006513293A (ru) |
KR (1) | KR20050103907A (ru) |
AT (1) | ATE409209T1 (ru) |
AU (1) | AU2003292019A1 (ru) |
BR (1) | BR0318028A (ru) |
CA (1) | CA2514131A1 (ru) |
CR (1) | CR7925A (ru) |
DE (1) | DE60323766D1 (ru) |
EA (1) | EA009386B1 (ru) |
EC (1) | ECSP055975A (ru) |
ES (1) | ES2311736T3 (ru) |
MX (1) | MXPA05007668A (ru) |
NZ (1) | NZ541414A (ru) |
PL (1) | PL376459A1 (ru) |
WO (1) | WO2004065491A1 (ru) |
Families Citing this family (36)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7597878B2 (en) * | 2000-09-19 | 2009-10-06 | Li-Cor, Inc. | Optical fluorescent imaging |
EP1619501B1 (en) * | 2004-07-22 | 2007-09-26 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Use of cyanine dyes for the diagnosis of disease associated with angiogenesis |
EP1679082A1 (en) * | 2005-01-07 | 2006-07-12 | Schering AG | Use of cyanine dyes for the diagnosis of proliferative diseases |
FR2889700B1 (fr) * | 2005-08-11 | 2012-11-23 | Synthinnove Lab | Marqueurs, leur procede de fabrication et leurs applications |
EP1760467A1 (en) * | 2005-09-02 | 2007-03-07 | Schering AG | Optically fluorescent nanoparticles |
US7972789B2 (en) | 2005-11-28 | 2011-07-05 | Dako Denmark A/S | Dye compounds |
WO2007091661A1 (ja) * | 2006-02-08 | 2007-08-16 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | 分子イメージングに適した糖鎖修飾リポソームならびにその利用および製造 |
DK2118206T3 (en) | 2007-02-09 | 2018-06-18 | Visen Medical Inc | POLYCYCLOF COLORS AND APPLICATION THEREOF |
WO2009023813A1 (en) * | 2007-08-15 | 2009-02-19 | Applied Soil Water Technologies Llc | Metals recovery from mining heap leach ore |
US20090214436A1 (en) | 2008-02-18 | 2009-08-27 | Washington University | Dichromic fluorescent compounds |
KR101043407B1 (ko) * | 2009-02-19 | 2011-06-22 | 한국과학기술연구원 | 암 표적성이 우수한 단백질 복합체 및 이의 제조방법 |
JP2011046663A (ja) | 2009-08-28 | 2011-03-10 | Fujifilm Corp | 近赤外蛍光造影剤 |
KR101228147B1 (ko) * | 2010-08-13 | 2013-01-31 | 국립암센터 | 방사성 동위원소가 표지되고 근적외선 영역의 형광색소 및 가시광선 영역의 색소가 결합된 알부민을 포함하는 감시림프절 표지자 |
WO2012054784A1 (en) | 2010-10-20 | 2012-04-26 | Li-Cor, Inc. | Fluorescent imaging with substituted cyanine dyes |
US10053447B2 (en) | 2010-12-21 | 2018-08-21 | Pierce Biotechnology, Inc | Fluorescent compounds |
US8889884B1 (en) | 2011-07-14 | 2014-11-18 | Pierce Biotechnology, Inc. | Phosphine derivatives of fluorescent compounds |
US9249307B2 (en) | 2011-08-16 | 2016-02-02 | Pierce Biotechnology, Inc. | Benzocyanine compounds |
WO2013044156A1 (en) * | 2011-09-23 | 2013-03-28 | Li-Cor, Inc. | Application of reduced dyes in imaging |
EP3338617B1 (en) | 2012-01-23 | 2020-08-19 | Washington University | Goggle imaging systems and devices |
US9751868B2 (en) | 2012-02-28 | 2017-09-05 | Pierce Biotechnology, Inc. | Benzocyanine compounds |
CN104395306B (zh) | 2012-03-02 | 2019-04-23 | 皮尔斯生物科技有限公司 | 作为生物分子的标记染料的吲哚衍生物 |
ES2678211T3 (es) | 2012-03-27 | 2018-08-09 | Ventana Medical Systems, Inc. | Conjugados de señalización y procedimientos de uso |
CN104540819B (zh) | 2012-08-28 | 2019-04-19 | 皮尔斯生物科技有限公司 | 苯并吡喃鎓化合物 |
EP3033111B1 (en) | 2013-08-12 | 2019-03-13 | Genentech, Inc. | 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment |
MX2016007578A (es) | 2013-12-16 | 2016-10-03 | Genentech Inc | Compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco dimerico de 1-(clorometil)-2,3-dihidro-1h-benzo [e] indol, y metodos de uso y tratamiento. |
DK3191135T3 (da) | 2014-09-12 | 2020-10-12 | Genentech Inc | Anti-HER2-antistoffer og immunokonjugater |
EP3001197A1 (en) * | 2014-09-23 | 2016-03-30 | Universität Heidelberg | Fluorescent protein stains |
US10806804B2 (en) | 2015-05-06 | 2020-10-20 | Washington University | Compounds having RD targeting motifs and methods of use thereof |
JP6752582B2 (ja) * | 2016-02-08 | 2020-09-09 | キヤノン株式会社 | 光音響イメージング用造影剤 |
CA3067110A1 (en) * | 2017-06-27 | 2019-01-03 | Coriolis Pharma Research GmbH | Polysorbate quantification assay |
CN107955392B (zh) * | 2017-12-05 | 2019-04-16 | 大连理工大学 | 一类具有长寿命三重激发态的近红外氨基菁染料及其制备方法 |
CN108624081B (zh) * | 2018-05-29 | 2020-03-10 | 苏州百源基因技术有限公司 | 一种荧光染料及其制备方法与应用 |
US11712482B2 (en) | 2019-12-13 | 2023-08-01 | Washington University | Near infrared fluorescent dyes, formulations and related methods |
JP2023513285A (ja) * | 2020-02-10 | 2023-03-30 | シーバイオメックス カンパニー リミテッド | 生体物質と連結し得る両性蛍光物質 |
CA3174389A1 (en) | 2020-06-23 | 2021-12-30 | Francesco Blasi | Near-infrared cyanine dyes and conjugates thereof |
JPWO2022265043A1 (ru) * | 2021-06-18 | 2022-12-22 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000016810A1 (en) * | 1998-09-18 | 2000-03-30 | Schering Aktiengesellschaft | Near infrared fluorescent contrast agent and fluorescence imaging |
US20020077487A1 (en) * | 2000-09-29 | 2002-06-20 | Molecular Probes, Inc. | Modified carbocyanine dyes and their conjugates |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5242680A (en) * | 1991-08-23 | 1993-09-07 | Merck & Co., Inc. | Thiol-reactive maleimido-based radiolabeling reagents |
DE4445065A1 (de) * | 1994-12-07 | 1996-06-13 | Diagnostikforschung Inst | Verfahren zur In-vivo-Diagnostik mittels NIR-Strahlung |
DE19717904A1 (de) * | 1997-04-23 | 1998-10-29 | Diagnostikforschung Inst | Säurelabile und enzymatisch spaltbare Farbstoffkonstrukte zur Diagnostik mit Nahinfrarotlicht und zur Therapie |
GB9710049D0 (en) * | 1997-05-19 | 1997-07-09 | Nycomed Imaging As | Method |
US6733744B1 (en) * | 2000-10-16 | 2004-05-11 | Mallinckrodt Inc. | Indole compounds as minimally invasive physiological function monitoring agents |
EP1341557A2 (en) * | 2000-10-27 | 2003-09-10 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Non-isotopic detection of osteoblastic activity in vivo using modified bisphosphonates |
US20040022731A1 (en) * | 2002-04-26 | 2004-02-05 | Alexei Bogdanov | In vivo imaging of apoptosis |
-
2003
- 2003-11-14 PL PL03376459A patent/PL376459A1/xx unknown
- 2003-11-14 ES ES03767544T patent/ES2311736T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-14 BR BR0318028-0A patent/BR0318028A/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-11-14 MX MXPA05007668A patent/MXPA05007668A/es active IP Right Grant
- 2003-11-14 AT AT03767544T patent/ATE409209T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-11-14 JP JP2004566758A patent/JP2006513293A/ja active Pending
- 2003-11-14 EP EP03767544A patent/EP1585791B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-14 DE DE60323766T patent/DE60323766D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2003-11-14 AU AU2003292019A patent/AU2003292019A1/en not_active Abandoned
- 2003-11-14 CA CA002514131A patent/CA2514131A1/en not_active Abandoned
- 2003-11-14 WO PCT/EP2003/012735 patent/WO2004065491A1/en active IP Right Grant
- 2003-11-14 NZ NZ541414A patent/NZ541414A/en unknown
- 2003-11-14 KR KR1020057013493A patent/KR20050103907A/ko not_active Application Discontinuation
- 2003-11-14 EA EA200501064A patent/EA009386B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-01-23 US US10/762,582 patent/US20040260072A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-07-28 CR CR7925A patent/CR7925A/es not_active Application Discontinuation
- 2005-08-23 EC EC2005005975A patent/ECSP055975A/es unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000016810A1 (en) * | 1998-09-18 | 2000-03-30 | Schering Aktiengesellschaft | Near infrared fluorescent contrast agent and fluorescence imaging |
US20020077487A1 (en) * | 2000-09-29 | 2002-06-20 | Molecular Probes, Inc. | Modified carbocyanine dyes and their conjugates |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
A. ZAHEER ET AL.: "IRDye78 Conjugates for Near-Infrared Fluoresence Imaging," MOLECULAR IMAGING, vol. 1, no. 4, October 2002 (2002-10), pages 354-364, XP008029547, MIT PRESS, US ISSN: 1535-3508, page 354, left-hand column, paragraph 1, page 355, right-hand column, paragraph 1, page 362, right-hand column, paragraph 2, page 363, left-hand column, paragraph 1 * |
FLANAGAN ET AL.: "Functionalized tricarbocyanine dyes as near-infrared fluorescent probes for biomolecules," BIOCONJUGATE CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, WASHINGTON, US, vol. 8, no. 5, 1997, pages 1043-1802, XP002272364 ISSN: 1043-1802, cited in the application the whole document * |
ZAHEER A. ET AL.: "IN VIVO NEAR-INFRARED FLUORESCENCE IMAGING OF OSTEOBLASTIC ACTIVITY," NATURE BIOTECHNOLOGY, NATURE PUBLISHING, US, vol. 19, no. 12, December 2001 (2001-12), pages 1148-1154, XP001080134, ISSN: 1087-0156, page 1150, right-hand column, last paragraph, page 1151, right-hand column, paragraph 2 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR0318028A (pt) | 2005-12-06 |
EA200501064A1 (ru) | 2006-02-24 |
PL376459A1 (en) | 2005-12-27 |
NZ541414A (en) | 2007-12-21 |
CR7925A (es) | 2006-02-06 |
MXPA05007668A (es) | 2005-09-30 |
ECSP055975A (es) | 2006-01-16 |
EP1585791B1 (en) | 2008-09-24 |
ATE409209T1 (de) | 2008-10-15 |
DE60323766D1 (de) | 2008-11-06 |
AU2003292019A1 (en) | 2004-08-13 |
US20040260072A1 (en) | 2004-12-23 |
KR20050103907A (ko) | 2005-11-01 |
CA2514131A1 (en) | 2004-08-05 |
EP1585791A1 (en) | 2005-10-19 |
JP2006513293A (ja) | 2006-04-20 |
ES2311736T3 (es) | 2009-02-16 |
WO2004065491A1 (en) | 2004-08-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA009386B1 (ru) | Гидрофильные, реакционные в отношении тиол-группы цианиновые красители, и их конъюгаты с биомолекулами для флюоресцентной диагностики | |
CN1093768C (zh) | 诊断用标记物 | |
CN100577742C (zh) | 花青染料标记试剂 | |
US20130280172A1 (en) | Fluorescent imaging with substituted cyanine dyes | |
CN104395306B (zh) | 作为生物分子的标记染料的吲哚衍生物 | |
DE102012107475B4 (de) | Benzocyaninverbindungen | |
JP2004510011A (ja) | シアニン色素 | |
AU6874698A (en) | Glycoconjugated fluorescent labeling reagents | |
WO2010121163A2 (en) | Fluorescent imaging with substituted cyanine dyes | |
AU2005263638A1 (en) | Cyanine dyes conjugated with antibodies for the diagnosis of micrometastasis | |
JP3669752B2 (ja) | 診断用マーカー | |
US20180134689A1 (en) | Benzocyanine compounds | |
US6630570B1 (en) | Short-chain peptide-dye conjugates as contrast media for optical diagnosis | |
EP1281405B1 (de) | Kurzkettige Peptid-Farbstoffkonjugate als Kontrastmittel für die optische Diagnostik | |
EP2655327A1 (en) | Fluorescent compounds | |
KR20220008802A (ko) | 변형된 시아닌 염료 및 그것의 콘쥬게이트 | |
ZA200506759B (en) | Hydrophilic, thiol-reactive cyanine dyes and conjugates thereof with biomolecules for fluorescence diagnosis | |
JP2010505991A (ja) | フルオロ置換ベンゾオキサゾールポリメチン色素 | |
JP5189096B2 (ja) | 診断薬及びそれを用いた測定方法 | |
KR20110033763A (ko) | 물질 표지용 벤즈인도시아닌 화합물, 그 제조 중간체 및 그 제조방법 | |
US11964965B2 (en) | Methods of manufacture and synthesis of fluorescent dye compounds and uses thereof | |
KR20190103631A (ko) | 형광 화합물, 이를 포함하는 복합체 나노입자, 및 이의 제조방법 | |
CN116731708A (zh) | 一种花青染料和白蛋白的组合物及其制备方法和应用 | |
CN116601238A (zh) | Ph响应性花青染料及其缀合物 | |
CN118047766A (zh) | 一种花菁类近红外荧光标记试剂及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM |
|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY RU |