DK176213B1 - Insulinanalog-protamin-komplekser, parenterale formuleringer indeholdende disse samt fremgangsmåde til fremstilling af LysB28ProB29-human insulin-protaminkrystaller og fremgangsmåde til fremstilling af insulin-protamin-komplekser og -krystaller - Google Patents
Insulinanalog-protamin-komplekser, parenterale formuleringer indeholdende disse samt fremgangsmåde til fremstilling af LysB28ProB29-human insulin-protaminkrystaller og fremgangsmåde til fremstilling af insulin-protamin-komplekser og -krystaller Download PDFInfo
- Publication number
- DK176213B1 DK176213B1 DK199500676A DK67695A DK176213B1 DK 176213 B1 DK176213 B1 DK 176213B1 DK 199500676 A DK199500676 A DK 199500676A DK 67695 A DK67695 A DK 67695A DK 176213 B1 DK176213 B1 DK 176213B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- protamine
- insulin
- approx
- human insulin
- zinc
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
Description
i DK 176213 B1
Den foreliggende opfindelse angår monomere analoge af human insulin. Nærmere betegnet angår den foreliggende opfindelse forskellige insulinanalog-protamin-komplekser samt parenterale formuleringer, som omfatter en monomer 5 insulinanalog, zink, protamin og et phenolderivat. Med formuleringerne opnås en forlænget varighed. Endvidere beskrives en fremgangsmåde til fremstilling af insulinana-log-protamin-formuleringer.
10 Siden insulin blev introduceret i 1920erne, er der fortløbende gjort fremskridt til forbedring af behandlingen af diabetes mellitus. Med udviklingen af rekombinant DNA-teknologi er der sket store fremskridt med hensyn til insulins renhed og tilgængelighed. Ligeledes er der udviklet 15 adskillige formuleringer med forskellige tidsmæssige virkninger. På nuværende tidspunkt er der generelt syv kommercielt tilgængelige insulin-formuleringer: almindelig (engelsk: "regular") insulin, semilente insulin, globin-insu lin, isophan-insulin, insulin-zink-suspension, protamin-20 zink-insulin og ultralente insulin.
Trods de mange tilgængelige formuleringer opnår en patient stadig ikke på bekvem vis regulering og normaliseret gly-cæmisk kontrol ved subcutan injektionsterapi. Hyppige af-25 vigeiser fra normale glycæminiveauer i løbet af en patients livstid fører til hyper- eller hypoglycæmi og langtidskomplikationer, herunder retinopati, neuropati, nefro-pati og mikro- og makroangiopati.
30 For at undgå ekstreme glycæmiske niveauer praktiserer dia-betespatienter ofte multipel injektionsterapi, hvorved insulin administreres med hvert måltid. Denne terapiform er imidlertid endnu ikke optimeret. Den hurtigst virkende insulin, som er kommercielt tilgængelig, når sin maksimale DK 176213 B1 2 serumkoncentration for sent efter injektion og virker for længe til på optimal vis at kunne kontrollere glucoseind-holdet. Væsentlige bestræbelser er derfor tilegnet frembringelsen af insulin-formuleringer og insulinanalog-5 formuleringer, som ændrer kinetikken af den subcutane absorptionsproces .
Fordi alle kommercielle farmaceutiske insulin-formuleringer indeholder insulin i den selvassocierede tilstand og 10 overvejende i den hexamere form, antages det, at det hastighedsbegrænsende trin for absorption af insulin fra det subcutane injektionsdepot til blodbanen er dissociationen af den selvaggregerede insul inhexamer. Der er for nylig udviklet monomere insulinanaloge, som har mindre tendens 15 til at knytte sig sammen til former med højere molekylvægt, end tilfældet er for human insulin. Denne manglende selvassociation skyldes modifikationer i aminosyresekvensen af human insulin, som nedsætter association primært ved at forstyrre dannelsen af dimere. Se f.eks. Brems et 20 al., Protein Engineering, 5^6, 527-533 (1992) og Brange et al., Nature 333:679-682 (1988). Således har monomere insu linanaloge en forholdsmæssigt hurtigere aktivitetsstart, samtidig med at den biologiske aktivitet af nativ human insulin bevares. Med disse insulinanaloge opnås en hurtig 25 absorption, hvilket bringer injektionstid og maksimal effekt af insulin tættere på postprandialt glucoseudsving i forbindelse med respons på et måltid.
De fysiske egenskaber og karakteristika af monomere analo-30 ge er ikke analoge til insulin. For eksempel har Brems et al. beskrevet, at forskellige monomere analoge kun har ringe eller ingen Zn-induceret association. Eventuel observeret association er til flere former med højere molekylvægt. Dette afviger drastisk fra insulin, som i nærvær DK 176213 B1 3 af zink næsten udelukkende har en ordnet, hexamer konfor-mation. Brange et al. Diabetes Care 13^923-954 (1990). Den manglende association tilskrives de hurtigt virkende karakteristika af de analoge. Fordi de analoge har lavere 5 tendens til at associere, er det ganske overraskende, at der kan formuleres en monomer insulinanalog, som udviser en middellang virkningsvarighed.
Den foreliggende opfindelse angiver en monomer insulinana-10 log-formulering, som ved anvendelse udviser en middellang virkningsvarighed. Opfindelsen angiver endvidere en hidtil ukendt protaminkrystal betegnet insulinanalog-NPD. Den foreliggende opfindelse angiver også en blanding af insulinanalog-NPD og opløselig monomer insulinanalog. Denne blan-15 ding tilvejebringer en hurtig virkningsbegyndelse og en middellang virkningsvarighed. Følgelig besidder blandingen fordele i forhold til såvel insulin som den monomere analog. Den foreliggende opfindelse tilvejebringer endvidere en fremgangsmåde til fremstilling af ensartede krystaller 20 af insulinanalog-NPD.
Opfindelsen angår nærmere bestemt insulinanalog-protamin-komplekser som angivet i krav 1.
25 Opfindelsen angiver yderligere et krystallinsk insulinana-log-protamin kompleks. Man har defineret dette kompleks som insulinanalog-NPD. LysB28ProB29-human insulin-NPD omfatter: en LysB28ProB29-human insulin, ca. 0,27 - 0,32 mg protamin/100 U insulinanalog, ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink 30 og et phenolderivat.
Opfindelsen angår desuden en fremgangsmåde til fremstilling af de omhandlede komplekser som angivet i krav 16.
DK 176213 B1 4
Mere specifikt angår opfindelsen endvidere en fremgangsmåde til fremstilling af LysB28ProB29-human insulin-NPD, hvilken fremgangsmåde omfatter: - kombinering af en vandig opløsning af LysB28ProB29-human 5 insulin i en hexamer associationstilstand og en protamin- opløsning ved en temperatur på ca. 8 - 22 °C; - den nævnte vandige opløsning omfatter ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink, LysB28ProB2^-human insulin og et phenolderi- 10 vat med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6; - den nævnte protaminopløsning omfatter protamin med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6, således at slutkoncentrationen af protamin er ca. 0,2 7 - 0,32 mg protamin/100 IU insu- 15 linanalog.
Opfindelsen angiver endvidere formuleringer, der virker både hurtigt og middellangt. Formuleringerne er blandinger af monomer insulinanalog og krystallinsk insulinanalog-20 NPD, i hvilke blandinger de to komponenters vægtforhold er ca. 1-99:99-1.
Patienter, som lider af diabetes mellitus, kan behandles ved administrering til patienten af et farmaceutisk præpa-25 rat indeholdende de omhandlede insulinanalog-protamin-krystaller.
FIGUR 1 er en grafisk afbildning af aktivitetsprofilen for LysB28ProB2^-hl-NPD og human insulin-NPH. Grafen viser 30 μϋ/ml overfor infusionstiden. Figuren viser fordelen ved den foreliggende opfindelse.
DK 176213 B1 5 FIGUR 2 viser et billede af AspB28-human insulin-protamin-krystaller ifølge den foreliggende opfindelse. Billedet er taget med lOOOx forstørrelse med differentialfasekontrast.
5 FIGUR 3 viser et billede af LysB28ProB29-hI-protaminkry-staller ifølge den foreliggende opfindelse. Billedet er taget med lOOOx forstørrelse med differentialfasekontrast.
Som bemærket ovenfor angiver opfindelsen forskellige for-10 muleringer af en monomer insulinanalog. Udtrykket "monomer insulinanalog" eller "insulinanalog" som anvendt heri betegner en hurtigtvirkende insulinanalog, som er mindre tilbøjelig til dimerisation eller selvassociation. Monomer insulinanalog er human insulin, hvori Pro i position B28 15 er substitueret med Asp, Lys, Leu, Val eller Ala, og Lys i position B29 er lysin eller prolin; des(B28-B30); eller des(B27). Monomere insulinanaloge er beskrevet i Chance et al., EP ansøgning 383 472, og Brange et al., EP ansøgning 214 826.
20
Alle aminosyreforkortelser anvendt i denne beskrivelse er de af United States Patent & Trademark Office, som angivet i 37 C.F.R. § 1.822(b) (2), accepterede. Særligt foretruk ne monomere insulinanaloge er LysB28ProB29-human insulin 25 (B28 er Lys; B29 er Pro) og AspB28-human insulin (B28 er
Asp) .
"Monomer insulinanalog-NPD" eller "insulinanalog-NPD" betegner en suspension af krystallinsk insulinanalog og pro-30 tamin i en formulering. NPD er Neutral Protamin-formulering i henhold til DeFelippis. Formuleringen fremstilles i henhold til den angivne proces beskrevet heri. Et beslægtet udtryk "insulinanalog-NPD-krystaller", "krystallinsk insulinanalog-NPD" eller "LysB28ProB29-human insulin- DK 176213 B1 6 protamin-krystaller" henviser til insulinanalog-protamin-krystallerne i NPD-formuleringen.
Udtrykket "behandling" som anvendt i den foreliggende be-5 skrivelse med krav henviser til behandlingen af en patient med den hensigt at bekæmpe sygdommen, sygdomstilstanden eller forstyrrelsen og omfatter administrering af en forbindelse ifølge den foreliggende opfindelse med det formål at forhindre indtræden af symptomer eller komplikationer, 10 afhjælpe symptomer eller komplikationer eller eliminere sygdommen, sygdomstilstanden eller forstyrrelsen.
Udtrykket "isotonicitetsmiddel" henviser til et stof, som er fysiologisk tolereret og tilfører formuleringen en pas-15 sende tonicitet for at hindre en nettostrømning af vand over cellemembranen. Forbindelser, såsom glycerin, er almindeligt anvendt til sådanne formål i kendte koncentrationer. Isotonicitetsmidlets koncentration ligger inden for det i teknikken kendte område for insulin-formuleringer.
20
Udtrykket "phenolderivat" betegner m-cresol, phenol eller, fortrinsvis, en blanding af m-cresol og phenol.
Udtrykket "basis af fri base" angiver mængden af protamin 25 i formuleringen. Basis af fri base korrigerer for vand- og saltindholdet af de kommercielt tilgængelige protaminsalte og er almindeligt anvendt i parenterale formuleringer. Den foretrukne protamin, protaminsulfat, er ca. 80% protamin.
30 Udtrykket "IU" eller "U" betyder international enhed.
Udtrykket "isophanforhold" betegner den ligevægtsmængde af protamin, der er nødvendig til at danne kompleks med den analoge, som beskrevet af Krayenbuhl og Rosenberg, STENO
DK 176213 B1 7 MEMORIAL HOSPITAL REPORT (COPENHAGEN), 1:60 (1946). Iso- phanforholdet bestemmes ved titrering på en måde, der er velkendt inden for teknikken og beskrevet af Krayenbuhl, et al.
5
Den foreliggende opfindelse angiver en insulinanalog-protamin-formulering, som omfatter: en monomer insulinanalog, protamin, zink og et phenolderivat. Protaminkon-centrationen er fortrinsvis ca. 0,2 - 1,5 mg protamin til 10 10 0 U insulinanalog på en basis af fri base. Mest fore- trukkent ligger protaminområdet på ca. 0,27 - 0,35 mg/100 U. Zinkkoncentrationen er ca. 0,35 - 0,9 vægt-%. Fortrinsvis er zinkkoncentrationen ca. 0,7 %.
15 Phenolderivatet er m-cresol, phenol eller en blanding af m-cresol og phenol. Fortrinsvis er phenolderivatet m-cresol og phenol. Fagmanden vil være bekendt med koncentrationen af phenolderivatet. Koncentrationen skal være tilstrækkelig til at bibeholde den konserverende effekt, 20 dvs. hæmme mikrobiel vækst. Almindeligvis ligger phenol-koncentrationen for eksempel i området 1,0 - 6,0 mg/ml; foretrukkent over ca. 2,5 mg/ml. Den mest foretrukne koncentration er ca. 3 mg/ml. Tilstedeværelsen af et phenolderivat er kritisk, fordi det virker kompleksdannende på 25 analog, protamin og zink ud over at fungere som et konserveringsmiddel. Det antages imidlertid, at kun et molekyle phenol pr. molekyle insulinanalog bindes til krystalstrukturen.
30 Fortrinsvis tilsættes der et isotonicitetsmiddel til formuleringen. Det foretrukne isotonicitetsmiddel er glycerin. Isotonicitetsmidlets koncentration er for eksempel 14 - 18 mg/ml, fortrinsvis ca. 16 mg/ml.
DK 176213 B1 8
Formuleringens pH kan bufres med en fysiologisk tolereret buffer, fortrinsvis en phosphatbuffer såsom dibasisk na-triumphosphat. Andre fysiologisk tolererede buffere omfatter TRIS, natriumacetat eller natriumcitrat. Valg og kon-5 centration af buffer vil være velkendt for fagmanden. Almindeligvis er koncentrationen for eksempel ca. 1,5 - 5,0 mg/ml, fortrinsvis 3,8 mg/ml.
Den foreliggende opfindelse angiver endvidere specifikke 10 betingelser, hvorunder insulinanalog-protamin forekommer som et stabilt krystal. Formuleringer af disse krystaller defineres som insulinanalog-NPD. Insulinanalog-NPD er en formuleret suspension af insulinanalog-NPD-krystaller, og ved anvendelsen opnås en middellang virkningsvarighed. I 15 betragtning af den monomere analogs manglende selvassociation er insulinanalog-NPD1 s aktivitetsprofil ganske overraskende .
Evnen til med en monomer analog at danne en formulering 20 med middellang virkning er vist i FIGUR I. FIGUR I angiver en aktivitetsprofil for LysB2®ProB29-hI-NPD og insu-lin-NPH. NPD-profilen ligner den for insulin-NPH. Virkningsvarigheden for NPD-formuleringen og insulin-NPH-formuleringen er tilnærmelsesvis ens. Mest signifikant er 25 det imidlertid, at den foreliggende opfindelse stiger hurtigere og forbliver stabil i et længere tidsrum end insulin-NPH. Denne forskel er ganske uventet i betragtning af den monomere analogs hurtigt-virkende profil.
30 En særligt foretrukken insulinanalog-protamin formulering, LysB2SProB29-human insulin-NPD, omfatter: LysB28ProB29- human insulin, ca. 0,27 - 0,32 mg protamin/100 U insulinanalog, ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink samt et phenolderivat.
DK 176213 B1 9
Protamins koncentration er fortrinsvis 0,3 mg/10Q U på basis af fri base.
Opfindelsen angiver endvidere en fremgangsmåde til frem-5 stilling af LysB28ProB29-human insulin-protamin-krystal-ler, hvilken proces omfatter: kombinering af en vandig opløsning af LysB28ProB29-human insulin i en hexamer associationstilstand og en pro-10 taminopløsning ved en temperatur på ca. 8 - 22 °C; den nævnte vandige opløsning omfatter ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink, LysB28ProB29-human insulin og et phenolderi-vat med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6; 15 den nævnte protaminopløsning omfatter protamin med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6, således at slutkoncentrationen af protamin er ca. 0,27 - 0,32 mg protamin/100 IU insulinanalog .
20 På opfindelsestidspunktet var det kendt, at monomere insulinanaloge har en mindre tendens til at associere og danne hexamerer. De nødvendige betingelser til at få de monomere insulinanaloge til at associere med protamin til dannelse 25 af krystaller var tidligere ukendte inden for teknikken. Tidligere undersøgelser vedrører insulin. Den tekniske lære angående fremstilling af insulin-NPH (neutral protamin-formulering i henhold til Hagedorn) eller isophan-insulinformuleringer ved Krayenbiihl og Rosenberg, STENO MEMORIAL 30 HOSPITAL REPORT (COPENHAGEN), 1:60 (1946), er ikke rele vante i betragtning af de monomere insulinanaloges særlige egenskaber. Den kommercielle proces til producering af Humulin-N™ (insulin-NPH), en syreneutral proces, danner rent faktisk ikke krystallinsk insulinanalog-NPD.
DK 176213 B1 10
Mest væsentligt har man fundet, at parameteme i den nærværende fremgangsmåde, nemlig krystallisationstemperaturen og dannelsen af et hexamerkompleks af insulinanalogen, 5 zink og phenolderivatet, er kritiske begrænsninger for dannelsen af stabile LysB28ProB29-hI-NPD-krystaller.
Krystallisationstemperaturen skal være ca. 8-22 °C, fortrinsvis 13 - 17 °C. Ligger temperaturen uden for dette 10 område, opnås der en overvejende amorf insulinanalog-protamin-formulering.
Det er ligeledes kritisk, at insulinanalogen transformeres til en hexamer tilstand før krystallisationen. I et amorft 15 produkt fremkommer krystallisationen, når processen foretages med en monomer associationstilstand. Krystaller dannes uden omrøring på 5 - 36 timer. Der dannes almindeligvis krystaller af en god kvalitet på 24 timer.
20 Opløselig monomer insulinanalog kompleksbindes til en hexamer associationstilstand ved at suspendere fast monomer analog i et fortyndingsmiddel, som indeholder phenolderivatet, og tilsætte zink, indtil koncentrationen er ca.
0,35 - 0,9 vægt-%. Zink tilsættes fortrinsvis på saltform.
25 Typiske eksempler på et zinksalt omfatter zinkacetat, zinkbromid, zinkchlorid, zinkfluorid, zinkiodid og zinksulfat. Det vil for fagmanden være velkendt, at der er mange andre zinksalte, som ligeledes kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Man anvender fortrins-30 vis zinkacetat eller zinkchlorid.
Opløsning af insulinanalogen i opløsningsmidlet kan fremmes ved det, der almindeligvis er kendt som en sur opløsning. I en sur opløsning sænkes pH til ca. 3,0 - 3,5 med DK 176213 B1 11 en fysiologisk tolereret syre, fortrinsvis HCl, for at øge opløseligheden af analogen. Andre fysiologisk tolererede syrer omfatter eddikesyre, citronsyre og phosphorsyre. Derefter justeres pH med en fysiologisk tolereret base, 5 fortrinsvis NaOH, til ca. 7,1 - 7,6 med henblik på krystallisationen. Andre fysiologisk tolererede baser omfatter KOH og ammoniumhydroxid.
Især er fremgangsmåden til fremstilling af LysB28ProB29-10 hl-NPD kompleks følsom over for NaCl-koncentrationen. Dersom koncentrationen overstiger ca. 4 mg/ml, bliver insu- linanalog-NPD-krystallerne blandet med amorft produkt. Derfor foretrækkes det at opløse den monomere analog ved neutral pH for at undgå dannelsen af saltioner. Alterna-15 tivt kan analogen opløses i opløsningsmidlet ved sur pH før tilsætning af bufferen. Herved reduceres koncentrationen af salte dannet som følge af pH-justeringen. Imidlertid er den rækkefølge, hvori de indgående bestanddele tilsættes, ikke kritisk for dannelsen af den hexamere eller 20 den amorfe formulering.
Som tidligere omtalt kan formuleringerne ifølge opfindelsen tilsættes et isotonicitetsmiddel. Isotonicitetsmidlet kan tilsættes analogopløsningen, protaminopløsningen eller 25 den endelige insulinanalog-NPD-formulering. Ligeledes kan den fysiologisk tolererede buffer tilsættes analogopløsningen, protaminopløsningen eller den endelige insulinanalog-NPD- formulering. Det foretrækkes imidlertid, at såvel analogopløsningen som protaminopløsningen indeholder iso-30 tonicitetsmidlet og bufferen, før man kombinerer den vandige opløsning og protaminen. Grundet indvirkningerne af NaCl på processen til fremstilling af krystallinsk insulinanalog-NPD, er glycerin det foretrukne isotonicitetsmiddel .
DK 176213 B1 12
Opfindelsen tilvejebringer også insulinanalog-formuleringer omfattende blandinger af insulinanalog-NPD i form af et krystallinsk fast stof og opløselig insulinanalog. Dis-5 se blandinger fremstilles, så de ligger i et område fra ca. 1:99 til 99:1 efter volumen suspenderet insulinanalog-NPD i forhold til opløselig insulinanalog. Den opløselige insulinanalog er en monomer insulinanalog opløst i et vandigt opløsningsmiddel omfattende zink, et phenolderivat, 10 et isotonicitetsmiddel samt buffer. De i fortyndingsmidlet beskrevne koncentrationer er de samme som tidligere omtalt. Fortrinsvis er forholdet mellem insulinanalog-NPD og opløselig insulinanalog 25:75 til 75:25; og mere foretruk-kent 50:50. Blandingerne fremstilles let ved at blande de 15 individuelle bestanddele.
De blandede formuleringer ifølge den foreliggende opfindelse er særligt egnede til behandling af diabetes melli-tus grundet kombinationen af en hurtig virkningsbegyndelse 20 og forlænget varighed. Med disse blandinger tillades "finkontrol" ved at variere mængden af hver enkelt bestanddel baseret på patientens behov, kost og fysiske aktivitet. Blandingen af suspenderet insulinanalog-NPD og opløselig insulinanalog er desuden fordelagtig, fordi de er homoge-25 ne, dvs. eventuel ligevægtsændring mellem de suspenderede krystaller og opløselig insulinanalog er transparent.
De insulinanaloge ifølge den foreliggende opfindelse kan fremstilles ved enhver af en række forskellige anerkendte 30 peptidsynteseteknikker, herunder klassiske (opløsning) metoder, fastfasemetoder, semisyntetiske metoder og de nyere rekombinant DNA-metoder. For eksempel beskriver Chance et al., EP ansøgning 383 472, og Brange et al., EP ansøgning 214 826, fremstillingen af forskellige monomere analoge.
DK 176213 B1 13
De efterfølgende eksempler angives til yderligere belysning af fremstillingen af de insulinanaloge og opfindelsen.
5 EKSEMPEL 1
Fremstilling af LysB28ProB29-hI-NPD
10 En opløsning af LysB28ProB2^-human insulin (LysB28ProB2^~ hl) med en koncentration på 200 IU/ml (U200) blev fremstillet ved at opløse zinkholdige krystaller af LysB28ProB29-hI i et konserveringsmiddel/buffer-system indeholdende: 1,6 mg/ral m-cresol, 0,73 mg/ml phenol (ækvi- 15 valent til 0,65 mg/ml phenol beregnet som 89%), 16 mg/ml glycerin og 3,78 mg/ml dibasisk natriumphosphat-buffer. Krystallernes endogene zinkindhold blev suppleret ved at tilsætte et passende volumen af en sur ZnO opløsning (10 mg/ml) til opnåelse af en slutkoncentration på 0,025 20 mg/100 IU (0,7%). Opløsning af LysB28ProB29-hI blev opnået ved omgivelsernes temperatur ved at sænke pH til ca. 3 med μΐ volumener af 5 M HC1. Efter klaring af opløsningen blev pH genjusteret til 7,5 med μΐ volumener af 5 M NaOH.
25 En protaminopløsning blev fremstillet ved i konserveringsmiddel/buf fer-opløsningen at opløse tilstrækkeligt fast protaminsulfat til opnåelse af en slutkoncentration på 0,6 mg/100 IU beregnet på en basis af fri base. Denne opløsnings pH blev justeret til 7,5 og ækvilibreret ved 15 °C.
30
Begge opløsninger blev med vand til injektion fortyndet til slutkoncentration og filtreret. 5 ml alikvoter af LysB28ProB2^-hI subsektionen blev fyldt i separate rene glasrør og prøverne inkuberet i vandbad ved 15 °C. Efter DK 176213 B1 14 passende tid til ækvilibrering (15 minutter), blev præci-pitation induceret ved hurtig tilsætning af 5 ml protami-nopløsning til LysB28ProB29-hl-prøverne. Krystallisationen fik lov at foregå i ca. 24 timer ved 15 °C.
5 EKSEMPEL 2
Fremstilling af LysB28ProB29-hI-NPD
10 Processen er identisk med den i eksempel 1 med undtagelse af, at opløsningen af LysB28ProB29-hl foregår ved neutral pH. Processen blev udført således, at slut-pH var 7,4.
EKSEMPEL 3 15
Fremstilling af LysB28ProB29-hI-NPD
Insulinanalog-NPD blev fremstillet på en måde analog til den i eksempel 1, men den sure opløsning af LysB28ProB29-20 hl blev udført i nærvær af alle excipienser undtagen den dibasiske natriumphosphat-buffer. Fast dibasisk na- triumphosphat tilsættes, efter at insulinanalog-opløsningen var ført tilbage til pH 7,4. Tilsætning af dibasisk natriumphosphat klarede opløsningen.
25 EKSEMPEL 4
Fremstilling af formuleringer af insulinanalog-NPD-blandinger 30
Blandinger af middellangt og hurtigt virkende LysB28ProB29-hI-formuleringer fremstilles som følger. Suspensionspræparatet med middellang virkning fremstilles ved de i eksempel 3 beskrevne metoder og udgør blandingens DK 176213 B1 15 middellangt virkende del. En separat opløsning af LysB28ProB29-hI (100 IU) fremstilles ved at opløse zink-holdige LysB28ProB29-hI-krystaller ved omgivelsernes temperatur i det i eksempel 1 beskrevne fortyndingsmiddel.
5 Det endogene zinkindhold af LysB28ProB29-hI i denne opløsning suppleres ved at tilsætte sur ZnO-opløsning for at modsvare indholdet i suspensionsdelen (dvs. 0,025 mg/100 IU (0,7%)). Vand til injektion anvendes til at fortynde opløsningen til slutkoncentration, efter pH-værdien er ju-10 steret til 7,4 ved anvendelse af 10% opløsninger af HC1 og/eller NaOH. Denne opløsning er den hurtigt virkende del af blandingerne. Slutblandingen fremstilles ved at kombinere passende volumener af de middellangt og hurtigt virkende subsektioner til opnåelse af det ønskede forhold. En 15 50/50 blanding fremstilles ved at kombinere 1 del af den middellangt virkende del med 1 del af den hurtigt virkende del efter volumen.
DK 176213 B1 EKSEMPEL 5 16
Ionstyrkens effekt på krystallisation af LysB28ProB2^-hI-protamin 5
Ionstyrkens effekt på krystallisationen blev evalueret ved at tilsætte NaCl til LysB28ProB28-hI-sektionen før blanding med protamin. Der blev tilsat NaCl, således at den totale koncentration var 20, 3 0 og 4 0 mM (1,2, 1,8 og 2,3 10 mg/ml). Partikelstørrelsesvolumen udviste multimodal reaktion {yderligere toppe ved små partikelstørrelser), efterhånden som NaCl-koncentrationen blev forøget. Middelvolumen af partikelstørrelse formindskedes ved forøget NaCl-koncentration, hvilket er tegn på en forøgelse af amorft 15 materiale. Resultaterne af partikelstørrelse i forhold til NaCl-koncentration er som følger: [NaCl] Middel volumen af partikelstørrelse _(μπΟ_ 13 mM 3,9 20 mM 3,5 30 mM 3,3 _40 mM_3^2_
Mikroskopanalysen viste, at alle prøver indeholdt en blan-20 ding af amorft og krystallinsk materiale. Prøven indeholdende 40 mM NaCl havde overvejende amorft materiale og meget få krystaller.
DK 176213 B1 EKSEMPEL 6 17
Sammenlignende dynamik af Lys^^Prcr^^-hl-NPD og human in-sulin-NPH 5
Denne undersøgelse blev udført på en hund, der var ved bevidsthed. Før undersøgelsen blev påbegyndt, udtog man tre basale prøver. Der blev påbegyndt en infusion af somatostatin (0,3 pg/kg-min). Efter et 10 minutters interval 10 blev der indgivet en subcutan injektion af enten NPD eller NPH. Der blev påbegyndt hyppig overvågning af plasma glucose, og en variabel glucose (20%) infusion blev indgivet til opretholdelse af subnormal glycæmi. Der blev under hele forløbet udtaget prøver, som blev analyseret for immu-15 noreaktiv insulin (Linco antistof) og glucose. Resultaterne er vist i FIGUR 1.
EKSEMPEL 7 20 Fremstilling af Asp(B28)-analog-protamin-krystaller
Der blev fremstillet en subsektion af ASP(B28)-hI med en koncentration på 200 IU/ml (U200) ved at opløse lyofilise-ret masse (95% renhed) i et konserveringsmiddel/buffer-25 system indeholdende: 1,6 mg/ml m-cresol, 0,73 mg/ml phenol (ækvivalent til 0,65 mg/ml phenol beregnet som 89%), 16 mg/ml glycerin og 3,78 mg/ml dibasisk natriumphosphat.
Der blev tilsat zink til systemet ved anvendelse af et passende volumen af en sur ZnO-opløsning (10 mg/ml) til 30 opnåelse af en slutkoncentration på 0,025 mg/100 IU. Opløsning af Asp(B28) blev opnået ved omgivelsernes temperatur ved neutral pH. Sektionens slut-pH var 7,4.
DK 176213 B1 18
En krystallisation blev udført som beskrevet i eksempel 2. Slutkoncentrationer af protamin på 0,3 mg/lOOU, 0,35 mg/100U og 0,4 mg/100 U blev undersøgt. Disse protamin-koncentrationer svarer til henholdsvis 2,9%, 9,3% og 10,5% 5 på en vægt/vægt basis. Inkubationstemperaturerne var på 5 °C (kun 0,3 mg/100U) , 15 °C og 22 °C. Efter 24 timer ved disse temperaturer blev prøverne analyseret for krystal-dannelse. Resultaterne bestemt ved mikroskopi viser en blanding af nogle få krystaller og amorft produkt.
10 EKSEMPEL 8
Fremstilling af Asp(B28)-analog-protamin-krystaller 15 Krystallisation af Asp(B28) protamin blev udført som beskrevet i eksempel 7 med undtagelse af, at proteinet først blev opløst i et bufferfrit opløsningsmiddel. Tilsætning af den sure ZnO-s tamopløsning var tilstrækkelig til at syrne prøven til pH 2,0-2,5. Efter opløsningen havde kla-2 0 ret, blev pH-værdi en re justeret til ca. pH 7 med μΐ-volumener af 5 N NaOH. Der blev tilsat natriumphosphat, dibasisk, ved at anvende en koncentreret stamopløsning på 47,25 mg/ml til opnåelse af slutkoncentrationen på 3,78 mg/ml. Subsektionen blev justeret til pH 7,4 ved anvendel-25 se af μΐ-mængder af HCl.
Krystallisation blev påbegyndt ved at kombinere Asp(B28)-og protamin-sektionerne som beskrevet i tidligere eksempler. Slutkoncentrationer af protamin på 0,3 mg/100U, 0,35 30 mg/100U og 0,4 mg/100U blev undersøgt. Inkubationstempera turerne var på 15 °C og 22 °C. Efter 24 timer ved disse temperaturer blev prøverne analyseret for krystaldannelse. Resultaterne bestemt ved mikroskopi viser en blanding af krystal og amorft materiale.
EKSEMPEL 9 DK 176213 B1 19
Fremstilling af Leu(B28)Pro(B29)-analog-protamin- 5 krystaller
En subsektion af Leu(B28)Pro(B29) (93% renhed) med en kon centration på 200 IU/ml (U200) blev fremstillet som beskrevet i eksempel 8 ved anvendelse af en sur opløsning af 10 massen efterfulgt af pH-justering med 5N NaOH til pH 7,4. Krystallisationen foregik som ovenfor beskrevet. Slutkon-centrationer af protamin på 0,3 mg/ioou, 0,35 mg/100U og 0,4 mg/100U blev undersøgt. Inkubationstemperaturerne var på 5 °C , 15 °C og 22 °C. Efter 24 timer ved disse tempera-15 turer indeholder alle prøver nogle krystaller, men var, bestemt ved mikroskopi, primært amorfe.
EKSEMPEL 10 20 Des(B27)hl-protamin-krystaller
En subsektion af DesThr(B27) {97,37% renhed) med en koncentration på 200 IU/ml (U200) blev fremstillet som beskrevet i eksempel 8 ved anvendelse af en sur opløsning af 25 massen efterfulgt af pH-justering med 5N NaOH til pH 7,4.
En krystallisation blev udført som beskrevet i eksempel 8. Slutkoncentrationer af protamin på 0,3 mg/100U, 0,35 mg/100U og 0,4 mg/100U blev undersøgt. Inkubationstemperaturerne var på 15 °C og 22 °C. Efter 24 timer ved disse 30 temperaturer var alle prøver, bestemt ved mikroskopi, primært amorfe. Kvalitativt blev der observeret krystaller.
EKSEMPEL 11 DK 176213 B1 20
Des(B28-B30)hl-protamin 5 En subsektion af Des(B28-B30) (96,3% renhed) med en kon centration på 200 IU/ml (U200) blev fremstillet som beskrevet i eksempel 8 ved anvendelse af en sur opløsning af massen efterfulgt af pH-justering med 5N NaOH til pH 7,4. Krystallisation blev forsøgt ved anvendelse af neu-10 tral/neutral kombinationsmetoden af protein- og protamin-sektionerne som ovenfor beskrevet. Slutkoncentrationer af protamin på 0,3 mg/lOOU, 0,35 mg/100U og 0,4 mg/100U blev undersøgt. Inkubationstemperaturerne var på 15 °C og 22 °C.
Efter 24 timer ved disse temperaturer var alle prøver, be-15 stemt ved mikroskopi, primært amorfe. Kvalitativt blev der observeret krystaller. Krystallerne var veldefinerede.
EKSEMPEL 12 20 Asp(B28)-analog-protamin
En opløsning af insulin Asp(B28)-human insulinanalog blev fremstillet ved at opløse 16,6 mg af proteinet i 1 ml af en opløsning indeholdende 3,2 mg/ml m-cresol, 1,3 mg/ml 25 phenol og 32 mg/ml glycerin. Der blev tilsat en 14,4 μΐ alikvot af en sur zink-s tamopløsning (10 mg/ml i Zn2 + , fremstillet ved at opløse 0,311 g zinkoxid i 5 ml 10% HCl og fortynde til 25 ml med vand). Opløsningens pH var 2,3, hvilket tillod fuldstændig opløsning af proteinet. Der 30 blev tilsat en 10 μΐ alikvot af 10% NaOH for at justere pH til 7,06. Der blev til opløsningen tilsat 100 μΐ 0,28 M dibasisk natriumphosphat, pH 7,0, hvorved opløsningens pH hævedes til 7,27. Opløsningen blev tilsat en 870 ml alikvot vand til injektion. Yderligere 10% HCl (1 μΐ) og NaOH
DK 176213 B1 21 (0,7 μΐ) blev tilsat, og opløsningens slutvolumen blev med vand til injektion bragt til 2 ml, hvilket resulterede i en slut-pH på 7,26. Opløsningen blev før anvendelsen filtreret gennem et 0,2 μπι Supor® Acrodisc® 13, Gelman Sci-5 ences) filter.
Der blev fremstillet protamin-stamopløsninger ved at opløse protaminsulfat i en opløsning indeholdende 1,6 mg/ml m-cresol, 0,65 mg/ml phenol, 16 mg/ml glycerin og 14 mM 10 dibasisk natriumphosphat. Opløsningens slut-pH blev justeret til 7,3. Slutkoncentrationen af protamin var 0,60/mg/100U på en basis af fri base. Begge opløsninger blev før anvendelsen filtreret gennem 0,22 μπι (Millipore Sterivex™-GV) filterenheder.
15
Krystallisation blev opnået ved blanding af Asp(B28)-human insulin-opløsningen i et 1:1 forhold ved kontrolleret temperatur som vist i tabel 1. De endelige blandingsforhold var 3,94 mg/ml Asp(B28)-human insulin, 0,0359 mg/ml (0,9%) 20 zinkioner, 1,6 mg/ml m-cresol, 0,65 mg/ml phenol, 16 mg/ml glycerin, 14 mM dibasisk natriumphosphat og 0,30 mg/l00U protamin med pH 7,3. Specielt blev 50-200 μΐ portioner af AspB28-opløsningen overført til glasrør, og prøverne blev ækvilibreret ved 4, 8, 15 eller 23 (omgivelsestemperatur) 25 °c. Portioner af begge protaminopløsninger blev ligeledes ækvilibreret ved disse temperaturer. Efter 15-20 minutter blev lige store volumener af begge protaminopløsninger pipetteret over i Asp(B28)-human insulin-prøverne. Blandingen blev hvirvlet forsigtigt rundt, tilproppet og fik der-30 på lov at henstå ved kontrolleret temperatur under krystallisationsperioden. Efter 24 timer blev alle prøverne undersøgt ved mikroskopi og fundet overvej ende amorfe. Prøven indeholdende 0,30 mg/100 U protamin og inkuberet DK 176213 B1 22 ved 15 °C udviste efter 48 timer store mængder nålelignende krystaller og noget amorft materiale.
EKSEMPEL 13 5
En opløsning af insulin Asp(B28)-human insulinanalog blev fremstillet ved at opløse 10,62 mg af proteinet i 0,71 ml af en opløsning indeholdende 3,2 mg/ml m-cresol, 1,3 mg/ml phenol og 32 mg/ml glycerin. Der blev tilsat en 10,2 μΐ 10 alikvot af en sur zink-stamopløsning (10 mg/ml i Zn2 + , fremstillet ved at opløse 0,311 g zinkoxid i 5 ml 10% HCl og fortynde til 25 ml med vand) . Opløsningens pH var 2,3, hvilket tillod fuldstændig opløsning af proteinet. Der blev tilsat en 6,5 μΐ alikvot af 10% NaOH for at justere 15 pH til 7,00. Opløsningen blev tilsat 71 μΐ 0,28 M dibasisk natriumphosphat, pH 7,0, hvorved opløsningens pH hævedes til 7,26. Opløsningen blev tilsat en 620 ml alikvot vand til injektion. Yderligere 10% HCl (0,2 μΐ) og NaOH (0,6 μΐ) blev tilsat, og opløsningens slutvolumen blev med vand 20 til injektion bragt til 1,42 ml, hvilket resulterede i en slut-pH på 7,42. Opløsningen blev før anvendelsen filtreret gennem et 0,2 μτη Supor® Acrodisc® 13, Gelman Sciences, filter.
25 Der blev fremstillet en protamin-stamopløsning ved at opløse protaminsulfat i en opløsning indeholdende 1,6 mg/ml m-cresol, 0,65 mg/ml phenol, 16 mg/ml glycerin og 14 mM dibasisk natriumphosphat. Opløsningens slut-pH blev justeret til 7,4, og slutkoncentrationen af protamin var 30 0,60/mg/100U på en basis af fri base. Opløsningen blev før anvendelsen filtreret gennem en 0,22 μπι (Millipore Steri-vex™-GV) filterenhed.
DK 176213 B1 23
Der blev opnået krystallisation ved at blande Asp(B28)-human insulin-opløsningen med protaminopløsningen i et forhold på 1:1, som angivet i eksempel 12, ved kontrollerede temperaturer på 13 °C, 15 °C, 17 °c og 23 °C. Resulta-5 terne er vist i tabel l. De endelige blandingsforhold var 3,74 mg/ml Asp(B28)-human insulin, 0,0359 mg/ml (0,9%) zinkioner, 1,6 mg/ml m-cresol, 0,65 mg/ml phenol, 16 mg/ml glycerin, 14 mM dibasisk natriumphosphat og 0,30 mg/100U protamin med pH 7,4. Fire forskellige krystallisationstem-10 peraturer blev evalueret. En 1 ml alikvot af AspB2®-human insulin ækvilibreret ved 15 °C blev blandet med 1 ml af protaminopløsningen justeret til samme temperatur. Efter at være blevet hvirvlet forsigtigt rundt, fik præparatet lov at henstå ved 15 °C. En anden prøve blev fremstillet 15 ved at ækvilibrere 100 μΐ af Asp(B28)-human insulin-opløsningen til 13 °C og derpå kombinere med 100 μΐ af protaminopløsningen justeret til samme temperatur. Den endelige blanding blev inkuberet ved 13 °C. Den tredie prøve blev fremstillet på lignende måde med undtagelse af, at de to 20 100 ml alikvoter blev ækvilibreret, kombineret og derpå inkuberet ved 17 °C. Den sidste opløsning blev fremstillet ved at blande 80 μΐ alikvoter af Asp(B28)-human insulin-og protaminopløsningerne, der var ækvilibreret ved omgivelsernes temperatur, og inkubere ved omgivelsernes tempe-25 ratur (23 °C) . Alle prøver blev undersøgt ved mikroskopi efter 24 timer samt på andre tidspunkter derefter som angivet i tabel 1.
TABEL 1 24 DK 176213 B1
Krystallisationsbetingelser1· og mikroskopiresultater [Asp®28] [Protamin] Temperatur Tid Mikroskopiresultater (mg/ml) <mg/100 U) (°c) (timer) 3.94 0,3 0 15 24 amorf 48 krystallinsk 72 krystallinsk 96 krystallinsk 120 krystallinsk 3.94 0,30 23 24 amorf 48 amorf 72 amorf 3.74 0,3 0 13 24 amorf 40 krystallinsk/amorf 48 krystallinsk/amorf 69 krystallinsk/amorf 3.74 0,30 15 24 amorf /krystallinsk 40 krystallinsk 48 krystallinsk 69 krystallinsk 3.74 0,30 17 24 amorf/få krystaller 40 krystallinsk/amorf 48 krystallinsk/amorf 69 krystallinsk/amorf 3.74 0,30 23 24 amorf 40 amorf/få krystaller 48 amorf/få krystaller 69 amorf/få krystaller 5
Alle opløsninger indeholdt også 0,9% zinkioner, 1,6 mg/ml m-cresol, 0,65 mg/ml phenol, 16 mg/ml glycerin og 14 mM dibasisk natriumphosphat, pH 7,4.
DK 176213 B1 25 k Krystallisationsresultatet blev bedømt ved mikroskopi ved 600X (Nikon Optiphot 66 mikroskop) eller 1000X (Zeiss Axioplan mikroskop med differential interfase kontrast) 5 forstørrelse. Begge mikroskoper var udstyret med tilbehør til fotografering.
Krystaller fremstillet som beskrevet i de ovenstående eksempler er vist i figurerne 2 og 3.
10
Claims (20)
1. Insulinanalog-protamin-kompleks, som omfatter: human 5 insulin, hvori Pro i position B28 er substitueret med Asp, Lys, Leu, Val eller Ala, og Lys i position B29 er Lys eller Pro, des(B28-B30)-human insulin eller des(B27)-human insulin; protamin; zink; samt et phenolderivat; forudsat at dersom insulinen er AspB28-human insulin, da er prota-10 minkoncentrationenen mindre end 10 vægt-%.
2. Kompleks ifølge krav 1, hvilket kompleks er LysB28ProB29-human insulin, ca. 0,27 - 0,32 mg prota-min/100 IU insulinanalog, ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink samt 15 et phenolderivat.
3. Kompleks ifølge krav 1, hvilket kompleks er AspB28-human insulin, ca. 0,27 - 0,35 mg protamin/100 IU insulinanalog, ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink samt et phenol- 20 derivat.
4. Kompleks ifølge ethvert af kravene 1, 2 eller 3, hvilket kompleks er krystallinsk.
5. Parenteral farmaceutisk insulinanalog-protamin-formule ring, som omfatter komplekset ifølge krav 1, 2, 3 eller 4.
6. Formulering ifølge krav 5, hvilken formulering yderligere omfatter ca. 0,2 - 1,5 mg protamin/100 IU insulinana- 30 log, ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink samt et phenolderivat.
7. Parenteral farmaceutisk formulering ifølge krav 6, hvilken formulering omfatter: LysB28ProB29-human insulin, DK 176213 B1 27 ca. 0,27 - 0,32 mg protamin/100 IU insulinanalog og ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink.
8. Parenteral farmaceutisk formulering ifølge krav 6, 5 hvilken formulering omfatter: AspB28-human insulin, ca. 0,27 - 0,35 mg protamin/100 IU insulinanalog og ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink.
9. Parenteral farmaceutisk formulering, som omfatter:
10. Parenteral farmaceutisk formulering ifølge ethvert af kravene 5 til 9, hvilken formulering yderligere omfatter opløselig insulinanalog.
10 LysB28ProB29-human insulin, ca. 0,3 mg protamin/100 IU insulinanalog, ca. 0,7 vægt-% zink, 1,7 mg/ml m-cresol, ca. 0,7 mg/ml phenol, ca. 16 mg/ml glycerin og ca. 3,78 mg/ml dibasisk natriumphosphat.
11. Parenteral farmaceutisk formulering, som omfatter: en 20 blanding af opløselig insulinanalog og insulinanalog- protamin-krystaller, i hvilken blanding de to komponenters vægtforhold er ca. 1:99 til 99:1 insulinanalog til insulinanalog -protamin-krystaller; 25 den nævnte insulinanalog er human insulin, hvori Pro i position B28 er substitueret med Asp, Lys, Leu, Val eller Ala, og Lys i position B29 er Lys eller Pro; des(B28-B30)-human insulin; eller des(B27)-human insulin; forudsat at dersom insulinen er AspB28-human insulin, da er protamin-30 koncentrationen mindre end 10 vægt-%.
12. Parenteral farmaceutisk formulering ifølge krav 11, i hvilken formulering de to komponenters vægtforhold er ca. 75:25 til 25:75. DK 176213 B1 28
13. Parenteral farmaceutisk formulering ifølge krav 12, hvilken formulering omfatter: LysB28ProB29-human insulin og LysB28ProB29-human insulin-protamin-krystaller. 5
14. Parenteral farmaceutisk formulering ifølge krav 13, i hvilken formulering de to komponenters vægtforhold er 50:50, 75:25 eller 25:75.
15. Parenteral farmaceutisk formulering ifølge ethvert af kravene 5 til 14 til anvendelse ved behandling af diabetes mellitus.
16. Fremgangsmåde til fremstilling af komplekset ifølge 15 ethvert af kravene 1 til 4, hvilken fremgangsmåde omfatter: kombinering af en monomer insulinanalog, protamin, zink og et fenolderivat i et vandigt opløsningsmiddel og tilladelse af kompleksdannelse.
17. Fremgangsmåde til fremstilling af LysB28ProB29-human insulin-protamin-krystaller, hvilken fremgangsmåde omfatter: kombinering af en vandig opløsning af LysB28ProB29-25 human insulin i en hexamer associationstilstand og en pro-taminopløsning ved en temperatur på ca. 8 - 22 °C; idet nævnte vandige opløsning omfatter ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink, LysB28ProB29-human insulin og et phenolderi-30 vat med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6; idet nævnte protaminopløsning omfatter protamin med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6, således at slutkoncentrationen DK 176213 B1 29 af protamin er ca. 0,27 - 0,32 mg protamin/100 IU insulinanalog.
18. Fremgangsmåde ifølge krav 17, ved hvilken fremgangs-5 måde temperaturen er 15 °C, zinkkoncentrationen er 0,7 - 0,9%, og protaminkoncentrationen er 0,3 mg/100 IU insulinanalog.
19. Fremgangsmåde til fremstilling af AspB28-human insulin 10 protamin-krystaller, hvilken fremgangsmåde omfatter: kombinering af en vandig opløsning af AspB28-human insulin i en hexamer associationstilstand og en protami-nopløsning ved en temperatur på ca. 13 °C - 17 °C; 15 idet den vandige opløsning omfatter ca. 0,35 - 0,9 vægt-% zink, AspB28-human insulin og et phenolderivat med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6; 20 og idet protaminopløsningen omfatter protamin med en pH-værdi på ca. 7,1 - 7,6, således at slutkoncentrationen af protamin er ca. 0,27 - 0,32 mg protamin/100 IU insulinanalog .
20. Fremgangsmåde til fremstilling af en parenteral farma ceutisk formulering ifølge ethvert af kravene 5 til og med 14, hvilken fremgangsmåde omfatter: suspendering af insu lin analog-protamin-krystaller i et farmaceutisk acceptabelt fortyndingsmiddel.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US26063394 | 1994-06-16 | ||
| US08/260,633 US5461031A (en) | 1994-06-16 | 1994-06-16 | Monomeric insulin analog formulations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK67695A DK67695A (da) | 1995-12-17 |
| DK176213B1 true DK176213B1 (da) | 2007-02-12 |
Family
ID=22989963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK199500676A DK176213B1 (da) | 1994-06-16 | 1995-06-14 | Insulinanalog-protamin-komplekser, parenterale formuleringer indeholdende disse samt fremgangsmåde til fremstilling af LysB28ProB29-human insulin-protaminkrystaller og fremgangsmåde til fremstilling af insulin-protamin-komplekser og -krystaller |
Country Status (37)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5461031A (da) |
| JP (1) | JP3812962B2 (da) |
| KR (1) | KR100386038B1 (da) |
| CN (1) | CN1145641C (da) |
| AT (1) | AT408611B (da) |
| BE (1) | BE1009409A5 (da) |
| BR (1) | BR9502797A (da) |
| CA (1) | CA2151564C (da) |
| CH (2) | CH693019A5 (da) |
| CO (1) | CO4410204A1 (da) |
| CZ (1) | CZ294556B6 (da) |
| DE (1) | DE19521753B4 (da) |
| DK (1) | DK176213B1 (da) |
| ES (1) | ES2091728B1 (da) |
| FI (1) | FI118208B (da) |
| FR (1) | FR2721215B1 (da) |
| GB (1) | GB2290294B (da) |
| GR (1) | GR1002494B (da) |
| HU (1) | HU218943B (da) |
| IE (1) | IE68852B1 (da) |
| IL (1) | IL114153A (da) |
| IT (1) | IT1276722B1 (da) |
| LU (1) | LU88627A1 (da) |
| MY (1) | MY116831A (da) |
| NL (2) | NL1000565C2 (da) |
| NO (1) | NO320808B1 (da) |
| NZ (1) | NZ272360A (da) |
| PE (1) | PE34496A1 (da) |
| PL (1) | PL183284B1 (da) |
| PT (1) | PT101723B (da) |
| RO (1) | RO115124B1 (da) |
| SE (1) | SE509295C2 (da) |
| SI (1) | SI9500199A (da) |
| TW (1) | TW347334B (da) |
| UA (1) | UA34468C2 (da) |
| YU (1) | YU39795A (da) |
| ZA (1) | ZA954941B (da) |
Families Citing this family (98)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5888477A (en) * | 1993-01-29 | 1999-03-30 | Aradigm Corporation | Use of monomeric insulin as a means for improving the bioavailability of inhaled insulin |
| US6024090A (en) * | 1993-01-29 | 2000-02-15 | Aradigm Corporation | Method of treating a diabetic patient by aerosolized administration of insulin lispro |
| US6131567A (en) * | 1993-01-29 | 2000-10-17 | Aradigm Corporation | Method of use of monomeric insulin as a means for improving the reproducibility of inhaled insulin |
| EP1607086A1 (en) * | 1993-01-29 | 2005-12-21 | Aradigm Corporation | Method of use of monomeric insulin as a means for improving the reproducibility of inhaled insulin |
| DK72793D0 (da) * | 1993-06-21 | 1993-06-21 | Novo Nordisk As | Nyt produkt |
| US5461031A (en) * | 1994-06-16 | 1995-10-24 | Eli Lilly And Company | Monomeric insulin analog formulations |
| US5547929A (en) * | 1994-09-12 | 1996-08-20 | Eli Lilly And Company | Insulin analog formulations |
| YU18596A (sh) * | 1995-03-31 | 1998-07-10 | Eli Lilly And Company | Analogne formulacije monomernog insulina |
| ATE252913T1 (de) * | 1995-06-30 | 2003-11-15 | Novo Nordisk As | Vorbeugung einer krankheit mit diabetes charakter |
| EP0921812B2 (en) * | 1996-06-20 | 2011-12-21 | Novo Nordisk A/S | Insulin preparations containing a halogenide |
| EP0966482B1 (en) * | 1997-02-07 | 2005-04-27 | Novo Nordisk A/S | Crystallisation of proteins |
| US5898067A (en) * | 1997-02-07 | 1999-04-27 | Novo Nordisk A/S | Crystallization of proteins |
| ZA984697B (en) | 1997-06-13 | 1999-12-01 | Lilly Co Eli | Stable insulin formulations. |
| EP1283051B1 (en) * | 1997-06-13 | 2006-06-14 | Eli Lilly And Company | Stable insulin formulations |
| AU1111799A (en) | 1997-10-24 | 1999-05-17 | Eli Lilly And Company | Fatty acid-acylated insulin analogs |
| CO4970787A1 (es) * | 1997-12-23 | 2000-11-07 | Lilly Co Eli | Composiciones insolubles de insulina y derivados de insulina que controlan la glucosa sanguinea |
| US20010053761A1 (en) * | 1998-01-08 | 2001-12-20 | Dimarchi Richard Dennis | Method for administering aspb28-human insulin |
| US20040214747A1 (en) * | 1999-01-06 | 2004-10-28 | Dimarchi Richard Dennis | Method for administering monomeric insulin |
| US6624141B1 (en) * | 1999-03-17 | 2003-09-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Protamine fragment compositions and methods of use |
| US7169889B1 (en) * | 1999-06-19 | 2007-01-30 | Biocon Limited | Insulin prodrugs hydrolyzable in vivo to yield peglylated insulin |
| US7678364B2 (en) | 1999-08-25 | 2010-03-16 | Alkermes, Inc. | Particles for inhalation having sustained release properties |
| EP1346726A4 (en) * | 2000-12-25 | 2004-09-15 | Shiseido Co Ltd | FRAGRANCE COMPOSITION STIMULATING THE SYMPATHETIC SYSTEM |
| ATE349469T1 (de) * | 2001-02-09 | 2007-01-15 | Genentech Inc | Kristallisierung von igf-1 |
| US6867183B2 (en) | 2001-02-15 | 2005-03-15 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
| US7060675B2 (en) | 2001-02-15 | 2006-06-13 | Nobex Corporation | Methods of treating diabetes mellitus |
| US7713932B2 (en) | 2001-06-04 | 2010-05-11 | Biocon Limited | Calcitonin drug-oligomer conjugates, and uses thereof |
| US6713452B2 (en) * | 2001-06-04 | 2004-03-30 | Nobex Corporation | Mixtures of calcitonin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
| US6828305B2 (en) | 2001-06-04 | 2004-12-07 | Nobex Corporation | Mixtures of growth hormone drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
| US6858580B2 (en) * | 2001-06-04 | 2005-02-22 | Nobex Corporation | Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
| US6828297B2 (en) | 2001-06-04 | 2004-12-07 | Nobex Corporation | Mixtures of insulin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same |
| US6835802B2 (en) * | 2001-06-04 | 2004-12-28 | Nobex Corporation | Methods of synthesizing substantially monodispersed mixtures of polymers having polyethylene glycol moieties |
| WO2003020201A2 (en) * | 2001-08-28 | 2003-03-13 | Eli Lilly And Company | Pre-mixes of glp-1 and basal insulin |
| US6770625B2 (en) | 2001-09-07 | 2004-08-03 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of calcitonin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
| US7030082B2 (en) * | 2001-09-07 | 2006-04-18 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of drug-oligomer conjugates and methods of treating disease therewith |
| US6913903B2 (en) | 2001-09-07 | 2005-07-05 | Nobex Corporation | Methods of synthesizing insulin polypeptide-oligomer conjugates, and proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same |
| US7166571B2 (en) | 2001-09-07 | 2007-01-23 | Biocon Limited | Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same |
| US7312192B2 (en) | 2001-09-07 | 2007-12-25 | Biocon Limited | Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same |
| US7196059B2 (en) | 2001-09-07 | 2007-03-27 | Biocon Limited | Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
| US20030068361A1 (en) * | 2001-10-09 | 2003-04-10 | Rimona Margalit | Liposome-encapsulated insulin formulations |
| CN1571676A (zh) * | 2001-10-19 | 2005-01-26 | 伊莱利利公司 | Glp－1和胰岛素的双相混合物 |
| AU2002346491A1 (en) * | 2001-12-19 | 2003-07-09 | Eli Lilly And Company | Crystalline compositions for controlling blood glucose |
| AU2003236521A1 (en) * | 2002-06-13 | 2003-12-31 | Nobex Corporation | Methods of reducing hypoglycemic episodes in the treatment of diabetes mellitus |
| US20060258561A1 (en) * | 2003-03-13 | 2006-11-16 | Novo Nordisk A/S | Novel NPH insulin preparations |
| BRPI0411479A (pt) | 2003-06-17 | 2006-07-25 | Sembiosys Genetics Inc | métodos para a produção de insulina em plantas |
| US20050054818A1 (en) * | 2003-07-02 | 2005-03-10 | Brader Mark Laurence | Crystalline compositions for controlling blood glucose |
| EP2085406A1 (en) * | 2003-07-25 | 2009-08-05 | ConjuChem Biotechnologies Inc. | Long lasting insulin derivatives and methods thereof |
| CA2553392A1 (en) * | 2004-01-16 | 2005-08-11 | Biodel Inc | Sublingual drug delivery device |
| EP2319500B1 (en) * | 2004-03-12 | 2012-10-24 | Biodel, Inc. | Rapid acting drug delivery compositions |
| US20080090753A1 (en) * | 2004-03-12 | 2008-04-17 | Biodel, Inc. | Rapid Acting Injectable Insulin Compositions |
| US20080096800A1 (en) * | 2004-03-12 | 2008-04-24 | Biodel, Inc. | Rapid mucosal gel or film insulin compositions |
| US20080085298A1 (en) * | 2004-03-12 | 2008-04-10 | Biodel, Inc. | Rapid Mucosal Gel or Film Insulin Compositions |
| CA2910494C (en) | 2004-07-19 | 2018-10-23 | Biocon Limited | Insulin-oligomer conjugates, formulations and uses thereof |
| US7597884B2 (en) | 2004-08-09 | 2009-10-06 | Alios Biopharma, Inc. | Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use |
| MX2007001589A (es) * | 2004-08-09 | 2007-08-02 | Alios Biopharma Inc | Variantes de polipeptido resistentes a proteasa, hiperglicosiladas sinteticas, formulaciones orales y metodos para utilizar las mismas. |
| AU2005291233B2 (en) * | 2004-10-05 | 2011-02-03 | Novo Nordisk A/S | A pharmaceutical formulation comprising crystalline insulin and dissolved insulin |
| ES2391776T3 (es) | 2004-11-22 | 2012-11-29 | Novo Nordisk A/S | Formulaciones solubles, estables conteniendo insulina con una sal de protamina |
| US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
| US8084420B2 (en) * | 2005-09-29 | 2011-12-27 | Biodel Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| US7713929B2 (en) * | 2006-04-12 | 2010-05-11 | Biodel Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| CN100371346C (zh) * | 2005-12-14 | 2008-02-27 | 浙江大学 | 人工合成胰岛素模拟肽及其应用 |
| EP1991576B1 (en) * | 2006-02-27 | 2010-09-29 | Novo Nordisk A/S | Insulin derivatives |
| AU2007238114B2 (en) * | 2006-04-12 | 2010-10-14 | Biodel, Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| US8927015B2 (en) | 2006-04-12 | 2015-01-06 | Emisphere Technologies, Inc. | Formulations for delivering insulin |
| CN101062948B (zh) * | 2006-04-29 | 2010-05-12 | 上海生物泰生命科学研究有限公司 | 单体速效胰岛素及其制法和用途 |
| WO2008124522A2 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Biodel, Inc. | Amylin formulations |
| US20080260820A1 (en) * | 2007-04-19 | 2008-10-23 | Gilles Borrelly | Oral dosage formulations of protease-resistant polypeptides |
| ES2664822T3 (es) | 2007-10-16 | 2018-04-23 | Biocon Limited | Una composición farmacéutica sólida administrable por vía oral y un proceso de la misma |
| US20090175840A1 (en) * | 2008-01-04 | 2009-07-09 | Biodel, Inc. | Insulin formulations for insulin release as a function of tissue glucose levels |
| EP2337563B1 (en) | 2008-09-08 | 2014-04-09 | The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University | Modulators of aldehyde dehydrogenase activity and methods of use thereof |
| CN102202669A (zh) | 2008-10-28 | 2011-09-28 | 利兰·斯坦福青年大学托管委员会 | 醛脱氢酶调节剂及其使用方法 |
| EP2391217A4 (en) | 2009-01-28 | 2015-05-20 | Smartcells Inc | SYNTHETIC CONJUGATES AND USES THEREOF |
| JP5508438B2 (ja) | 2009-01-28 | 2014-05-28 | スマートセルズ・インコーポレイテツド | 制御された薬物送達のための複合体に基づくシステム |
| AU2010212794A1 (en) | 2009-02-12 | 2011-08-11 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | Use of cardiotrophin- 1 for the treatment of metabolic diseases |
| US9060927B2 (en) * | 2009-03-03 | 2015-06-23 | Biodel Inc. | Insulin formulations for rapid uptake |
| AU2010226243A1 (en) | 2009-03-20 | 2011-09-22 | Smartcells, Inc. | Terminally-functionalized conjugates and uses thereof |
| HUP0900482A2 (en) * | 2009-08-03 | 2011-03-28 | Cera Med Kft | Pharmaceutical formulation for oral administration |
| JP2013535467A (ja) | 2010-07-28 | 2013-09-12 | スマートセルズ・インコーポレイテツド | 組換えにより発現されたインスリンポリペプチドおよびその使用 |
| EP2643009A4 (en) * | 2010-11-24 | 2015-04-01 | Durect Corp | BIODEGRADABLE DRUG DELIVERY COMPOSITION |
| KR20140043709A (ko) | 2011-01-20 | 2014-04-10 | 질랜드 파마 에이/에스 | 아실화 글루카곤 유사체와 인슐린 유사체의 조합 |
| WO2012149106A1 (en) | 2011-04-29 | 2012-11-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods for increasing proliferation of adult salivary stem cells |
| WO2014088836A1 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Merck Sharp & Dohme Corp. | O-glycosylated carboxy terminal portion (ctp) peptide-based insulin and insulin analogues |
| CN105358531B (zh) | 2013-03-14 | 2017-11-14 | 利兰-斯坦福大学初级学院的董事会 | 线粒体醛脱氢酶‑2调节剂和其使用方法 |
| EP3052134B1 (en) | 2013-10-04 | 2021-05-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Glucose-responsive insulin conjugates |
| CN105764491A (zh) | 2013-12-09 | 2016-07-13 | 度瑞公司 | 药物活性剂复合物、聚合物复合物，以及包括其的组合物和方法 |
| WO2015104311A1 (en) * | 2014-01-09 | 2015-07-16 | Sanofi | Stabilized glycerol free pharmaceutical formulations of insulin analogues and/or insulin derivatives |
| EP3094343A4 (en) | 2014-01-13 | 2017-10-18 | Thermalin Diabetes, LLC | Rapid action insulin formulations and pharmaceutical delivery systems |
| AR099569A1 (es) | 2014-02-28 | 2016-08-03 | Novo Nordisk As | Derivados de insulina y los usos médicos de estos |
| DK3006045T3 (da) | 2014-10-07 | 2017-07-17 | Cyprumed Gmbh | Farmaceutiske formuleringer til oral indgivelse af peptid- eller proteinlægemidler |
| WO2017163159A1 (en) | 2016-03-21 | 2017-09-28 | Wockhardt Limited | Biphasic pharmaceutical composition of insulin human |
| KR20200044016A (ko) | 2017-08-24 | 2020-04-28 | 노보 노르디스크 에이/에스 | Glp-1 조성물 및 그 용도 |
| US11110063B2 (en) | 2017-08-25 | 2021-09-07 | MAIA Pharmaceuticals, Inc. | Storage stable sincalide formulations |
| US11820805B2 (en) | 2017-12-18 | 2023-11-21 | Merck Sharp & Dohme Llc | Conjugate based systems for controlled insulin delivery |
| US11413352B2 (en) | 2017-12-18 | 2022-08-16 | Merck, Sharp & Dohme LLC | Conjugate based systems for controlled insulin delivery |
| CN110063932A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-07-30 | 浙江大学 | 一种多肽蛋白类药物的缓释组合物制剂及其制备方法 |
| JP7132441B2 (ja) | 2020-02-18 | 2022-09-06 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | Ｇｌｐ－１組成物およびその使用 |
| MX2022012208A (es) | 2020-03-31 | 2022-12-15 | Protomer Tech Inc | Conjugados para reactividad selectiva a dioles vecinales. |
| EP4247429A1 (en) | 2020-11-19 | 2023-09-27 | Protomer Technologies Inc. | Aromatic boron-containing compounds and insulin analogs |
| US20230374045A1 (en) | 2022-05-18 | 2023-11-23 | Protomer Technologies Inc. | Aromatic boron-containing compounds and related insulin analogs |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2538018A (en) * | 1944-04-04 | 1951-01-16 | Nordisk Insulinlab | Crystalline product of insulin and alkaline protein and process of making it |
| US2801953A (en) * | 1952-02-28 | 1957-08-06 | Hoechst Ag | Process of preparing crystallized insulin preparations |
| US2849370A (en) * | 1953-06-04 | 1958-08-26 | Novo Terapeutisk Labortorium A | Injectable insulin preparations with protracted effect and process of producing same |
| US3060093A (en) * | 1957-07-18 | 1962-10-23 | Nordisk Insulinlab | Slowly acting insulin preparation in crystalline form and method of preparation |
| US3868358A (en) * | 1971-04-30 | 1975-02-25 | Lilly Co Eli | Protamine-insulin product |
| DE3326473A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-01-31 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Pharmazeutisches mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| DK119785D0 (da) * | 1985-03-15 | 1985-03-15 | Nordisk Gentofte | Insulinpraeparat |
| PH25772A (en) * | 1985-08-30 | 1991-10-18 | Novo Industri As | Insulin analogues, process for their preparation |
| PT86819B (pt) * | 1987-02-25 | 1992-05-29 | Novo Industri As | Processo para a preparacao de novos derivados da insulina e de composicoes farmaceuticas que os contem |
| DE3717370A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-01 | Hoechst Ag | Mischkristalle aus insulin und insulinderivaten, verfahren zur herstellung dieser mischkristalle, diese mischkristalle enthaltende pharmazeutische mittel und ihre verwendung zur behandlung von diabetes mellitus |
| WO1990001038A1 (en) * | 1988-07-20 | 1990-02-08 | Nordisk Gentofte A/S | Human insulin analogs and preparations containing them |
| WO1990007522A1 (en) * | 1988-12-23 | 1990-07-12 | Novo Nordisk A/S | Human insulin analogues |
| PT93057B (pt) * | 1989-02-09 | 1995-12-29 | Lilly Co Eli | Processo para a preparacao de analogos da insulina |
| US5514646A (en) * | 1989-02-09 | 1996-05-07 | Chance; Ronald E. | Insulin analogs modified at position 29 of the B chain |
| DE122006000017I1 (de) * | 1993-06-21 | 2006-06-29 | Novo Nordisk As | ASP-B28-Insulinkristalle |
| DK72793D0 (da) * | 1993-06-21 | 1993-06-21 | Novo Nordisk As | Nyt produkt |
| US5461031A (en) * | 1994-06-16 | 1995-10-24 | Eli Lilly And Company | Monomeric insulin analog formulations |
| US5474978A (en) * | 1994-06-16 | 1995-12-12 | Eli Lilly And Company | Insulin analog formulations |
-
1994
- 1994-06-16 US US08/260,633 patent/US5461031A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-24 TW TW083105766A patent/TW347334B/zh not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-01 US US08/458,151 patent/US5747642A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-01 US US08/458,150 patent/US5650486A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-12 CA CA002151564A patent/CA2151564C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-13 YU YU39795A patent/YU39795A/sh unknown
- 1995-06-13 HU HU9501717A patent/HU218943B/hu unknown
- 1995-06-14 MY MYPI95001592A patent/MY116831A/en unknown
- 1995-06-14 SE SE9502168A patent/SE509295C2/sv not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 AT AT0101795A patent/AT408611B/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 IE IE950435A patent/IE68852B1/en not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 PL PL95309100A patent/PL183284B1/pl unknown
- 1995-06-14 CO CO95026236A patent/CO4410204A1/es unknown
- 1995-06-14 FI FI952932A patent/FI118208B/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 ES ES09501196A patent/ES2091728B1/es not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-14 ZA ZA954941A patent/ZA954941B/xx unknown
- 1995-06-14 NL NL1000565A patent/NL1000565C2/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 RO RO95-01141A patent/RO115124B1/ro unknown
- 1995-06-14 IL IL11415395A patent/IL114153A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 GR GR950100228A patent/GR1002494B/el not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 KR KR1019950015781A patent/KR100386038B1/ko active IP Right Grant
- 1995-06-14 IT IT95MI001277A patent/IT1276722B1/it active IP Right Grant
- 1995-06-14 CZ CZ19951543A patent/CZ294556B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 NO NO19952356A patent/NO320808B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 GB GB9512105A patent/GB2290294B/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 PT PT101723A patent/PT101723B/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 JP JP14729695A patent/JP3812962B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 BE BE9500527A patent/BE1009409A5/fr active
- 1995-06-14 DE DE19521753A patent/DE19521753B4/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 SI SI9500199A patent/SI9500199A/sl not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 UA UA95062796A patent/UA34468C2/uk unknown
- 1995-06-14 DK DK199500676A patent/DK176213B1/da not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 CH CH02083/99A patent/CH693019A5/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 NZ NZ272360A patent/NZ272360A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 CH CH01764/95A patent/CH689934A5/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 FR FR9507095A patent/FR2721215B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-14 LU LU88627A patent/LU88627A1/fr unknown
- 1995-06-14 PE PE1995271265A patent/PE34496A1/es not_active IP Right Cessation
- 1995-06-14 CN CNB95106567XA patent/CN1145641C/zh not_active Ceased
- 1995-06-14 BR BR9502797A patent/BR9502797A/pt not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-11-29 NL NL1004643A patent/NL1004643C2/nl not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK176213B1 (da) | Insulinanalog-protamin-komplekser, parenterale formuleringer indeholdende disse samt fremgangsmåde til fremstilling af LysB28ProB29-human insulin-protaminkrystaller og fremgangsmåde til fremstilling af insulin-protamin-komplekser og -krystaller | |
| DK173015B1 (da) | Human insulinanalog-kompleks og parenteral farmaceutisk formulering indeholdende dette | |
| US5948751A (en) | X14-mannitol | |
| US5547929A (en) | Insulin analog formulations | |
| US5834422A (en) | AspB28 insulin compositions | |
| JP4472027B2 (ja) | 炭水化物含有インスリン製剤 | |
| EP0925792A2 (en) | Insoluble compositions for controlling blood glucose | |
| WO2010028055A1 (en) | Insulin with a basal release profile | |
| EP0921812A1 (en) | INSULIN PREPARATIONS CONTAINING NaCl | |
| RU2154494C2 (ru) | Комплекс аналога инсулина и протамина, способ получения, фармацевтическая композиция и способ лечения диабета | |
| AU711428B2 (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
| AU738101B2 (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
| GB2327424A (en) | Insulin analog protamine complexes | |
| MXPA00006209A (en) | Insoluble compositions for controlling blood glucose | |
| IL127365A (en) | Insulin preparations containing carbohydrates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |
Expiry date: 20150614 |