DE718245C

DE718245C - Method for determining the presence of malignant tumors

Info

Publication number: DE718245C
Application number: DER106037D
Authority: DE
Inventors: Dr Karl Hinsberg; Dr Wilhelmine Rodewald
Original assignee: KARL HINSBERG DR; WILHELMINE RODEWALD DR
Current assignee: KARL HINSBERG DR; WILHELMINE RODEWALD DR
Priority date: 1938-11-22
Filing date: 1939-09-10
Publication date: 1942-03-06
Also published as: DE695875C

Description

Verfahren zur Bestimmung des Vorhandenseins bösartigen Geschwülste Zusatz zum Patent 695 875 Das Verfahren zur Bestimmung des Vorhandenseins bösartiger Geschwülste nach Patent 695 875 besteht darin, daß man an dem dem Organismus entnommenen Blut, Ergüssen aus Körperhöhien oder Extrakten aus Organen oder Gewebsstücken, im folgenden Substrate genannt, feststellt, ob gegen das Melanophoren- oder das gonadotrope Hormon gerichtete Hemmstoffe vorhanden sind.Procedure for determining the presence of malignant tumors Addendum to Patent 695 875 The procedure for determining the presence of malignant Tumors according to patent 695 875 consists in the fact that one is removed from the organism Blood, effusions from body heights or extracts from organs or pieces of tissue, im called the following substrates, determines whether against the melanophore or the gonadotropic Hormone directed inhibitors are present.

Es wurde nun gefunden, daß diese Hemmstoffe auf folgende Weise gereinigt und getrennt werden können. Die Substrate werden mit Aceton vollkommen gefällt und anschließend mit Aceton, Alkohol, Äther, Chloroform oder ähnlichen Lösungsmitteln entwässert und von Begleitsubstanzen befreit. Der unlösliche Rückstand wird mit 30 Obigem Aceton, Alkohol oder anderen wasserlöslichen Lösungsmitteln mehrmals extrahiert und der Extrakt gegebenenfalls im Vakuum eingeengt. Dieser trockene Rückstand kann noch einmsl mit Lipoidlösungsmitteln zwecks weiterer Reinigung ausgezogen werden und wird dann in Wasser- oder Salzlösung aufgenommen. Nach Filtration der Lösung kann die Fällung mit Aceton und Aufnahme in Wasser ein- oder mehrmals wiederholt werden. Die auf diese Weise gewonnenen gereinigten Lösungen der Hemmstoffe werden mit bekannten Mengen von Melanophorenhormon und gonadotropem Hormon ausgetestet. It has now been found that these inhibitors are purified in the following manner and can be separated. The substrates are completely precipitated with acetone and then with acetone, alcohol, ether, chloroform or similar solvents dehydrated and freed from accompanying substances. The insoluble residue is with 30 Extract the above acetone, alcohol or other water-soluble solvents several times and the extract optionally concentrated in vacuo. This dry residue can once more with lipoid solvents for the purpose of further cleaning and is then taken up in water or saline solution. After filtering the solution the precipitation with acetone and absorption in water can be repeated one or more times will. The purified solutions of the inhibitors obtained in this way become Tested with known amounts of melanophore hormone and gonadotropic hormone.

Der Hemmstoff gegen das Melanophorenhormon läßt sich aus den Substraten wie folgt von dem gonadotropen Hormon, den Sexualhormonen und anderen Hemmstoffen, wie z. B. Idem antigonadotropen Hormon, oder Begleitsub,stanzen abtrennen: Die Substrate werden mit Aceton oder Alkohol vollkommen gefällt und enevässert, der Niederschlag abgetrennt, mit Chloroform, Äther o. dgl. ausgezogen und zum Schluß einmal mit 60%igem Aceton geschüttelt, um Verunreinigungen zu entfernen. Aus dem Niederschlag kann dann der Melanophorenhormonhemmstoff vollständig mit 50%igem Aceton oder 50%igem Alkohol, der gegen das gonadotrope Hormon gerichtete I-Iemmstoff danach mit 30%igem Aceton oder 30%igem Alkohol oder direl;t mit Wasser oder Ringerlösung extrahiert werden. Die einzelnen Lösungen werden in der früher angegebenen Weise an Fröschen bzw. an infantilen Tieren ausgetestet. The inhibitor against the melanophore hormone can be derived from the substrates from the gonadotropic hormone, sex hormones and other inhibitors as follows, such as B. Idem antigonadotropic hormone, or accompanying substance, punch separate: The substrates become perfect with acetone or alcohol pleases and drains, the precipitate is separated off, extracted with chloroform, ether or the like and finally Shaken once with 60% acetone to remove impurities. From the The melanophore hormone inhibitor can then precipitate completely with 50% acetone or 50% alcohol, the gonadotropic hormone inhibitor thereafter with 30% acetone or 30% alcohol or direl; t with water or Ringer's solution extracted. The individual solutions are presented in the manner given earlier tested on frogs and infantile animals.

Der Vorteil dieses Verfahrens liegt darin, daß aus einem Substrat sowohl der gegen das Melanophorenhormon als auch der gegen das gonadotrope Hormon gerichtete Hemmstoff bzw. die Antihormone gewonnen und ausgetestet werden können und daß störende Einflüsse der Hypophysen- und Sexualhormone ausgeschaltet werden. The advantage of this method is that from one substrate both the one against the melanophore hormone and the one against the gonadotropic hormone directed inhibitor or antihormones can be obtained and tested and that disturbing influences of the pituitary and sex hormones are eliminated.

Durch die vorgenannte Reinigung und die Testmethode läßt sich nicht nur aus Blut und Körperflüssigkeiten, sondern auch aus exzidierten Gewebsstücken feststellen, ob eine gut-oder bösartige Geschwulst vorliegt. The aforementioned cleaning and the test method cannot only from blood and body fluids, but also from excised pieces of tissue determine whether the tumor is benign or malignant.

Die Hemmstoffe können im Organismus spontan auftreten oder experimentell erzeugt oder zum Verschwinden gebracht werden. In einzelnen Fällen ist bei Carcinomträgern die Hemmstoffmenge nicht groß genug, um in ldeincn Substratmengen, wie z. B. Blut oder Ascites, sicher nachgewiesen werden zu können. In diesen Fällen läßt sich die Hemmstoffmenge durch intramuskulare Injektion von Ilämatoporphyrin vermehren, wozu im allgemeinen 4 mg genügen. Die Hemmstoffbildung ist bei Carcinomträgern oder bei Individuen, wo eine solche Geschwulst im Entstehen begriffen ist, wesentlich stärker als bei gesunden oder anders erkrankten Menschen oder Tieren. The inhibitors can occur spontaneously in the organism or experimentally generated or made to disappear. In individual cases it is in carcinoma carriers the amount of inhibitor is not large enough to be used in ldeincn substrate amounts, e.g. B. blood or ascites, to be reliably detected. In these cases, the Increase the amount of inhibitor by intramuscular injection of ilematoporphyrin, for what purpose generally 4 mg are sufficient. The formation of inhibitors is in carcinoma carriers or in Individuals, where such a tumor is developing, much stronger than in healthy or otherwise sick people or animals.

Andererseits lassen sich die Hemmstoffe durch Protoporphyrin innerhalb 48 Stunden zurückbilden, wodurch eine Unterscheidung von anderen' unspezifisch wirkenden Hemm -faktoren möglich ist. On the other hand, the inhibitors can be blocked by protoporphyrin within 48 hours recede, thereby distinguishing it from other 'unspecific acting Inhibition factors is possible.

BeispieRe-1. 10 ccm Blut werden mit 190 ccm Aceton gefällt, der Niederschlag mit Alkohol und Äther oder Chloroform gewaschen und dann mit je 40 bis 6o ccm 30%igem Aceton zwei mal je I Stunde geschüttelt. Das Filtrat dieser Extrakte verdampft man im Vakuum, der geringe Rückstand enthält sowohl den gonadotropen wie den Melanophorenhormonhemmstoff. Er wird in 10 ccm Ringerlösung aufgenommen und ein Teil davon, z. B. 3 ccm, unter Zusatz von Hypophysin an Fröschen und ein anderer Teil, z. B. 5 ccm. an infantilen Mäusen in bekannter Weise ausgetestet. EXAMPLE-1. 10 cc of blood are precipitated with 190 cc of acetone, the precipitate Washed with alcohol and ether or chloroform and then each with 40 to 60 ccm of 30% strength Acetone shaken twice every 1 hour. The filtrate from these extracts is evaporated in a vacuum, the small residue contains both the gonadotropic and the melanophore hormone inhibitor. It is taken up in 10 cc Ringer's solution and part of it, e.g. B. 3 cc, under Addition of pituitary to frogs and another part, e.g. B. 5 cc. of infantile Mice tested in a known manner.

2. 5 ccm Ascites werden mit 95 ccm .X1-kobol gefällt und der Niederschlag einmal mit 10 ccm 60%igem Aceton 10 Minuten lang unter Schütteln extrahiert. Die Lösung wird verworfen. Der Rückstand wird zweimal mit je 20 ccm 50%igem Aceton je 30 Minuten lang geschüttelt, die Filtrate verdampft, mit Ätherchloroform extrahiert und der Rückstand der Filtrate schließlich in 3 ccm Ringerlösung aufgenommen; diese Lösung enthält das Antimelanophorenhormon und wird an Fröschen ausgetestet. Der nach der Extraktion mit 50%igem Aceton verbleibende Rückstand wird nun zweimal mit je 20 ccm 30%igem Aceton je 30 Minuten geschüttelt, die Filtrate im Vakuum verdampft, mit Äther und Chloroform extrahiert und schließlich in 6 ccm Ringerlösung aufgenommen. Diese Lösung enthält das antigonadotrope Hormon und wird an infantilen Mäusen ausgetestet. 2. 5 cc of ascites are felled with 95 cc .X1-Kobol and the precipitate extracted once with 10 cc of 60% acetone for 10 minutes with shaking. the Solution is discarded. The residue is twice with 20 ccm 50% acetone each Shaken for 30 minutes, the filtrates evaporated, extracted with ether chloroform and the residue of the filtrate was finally taken up in 3 cc of Ringer's solution; these Solution contains the anti-melanophore hormone and is tested on frogs. Of the after the extraction with 50% acetone residue is now twice with each 20 ccm of 30% acetone shaken for 30 minutes, the filtrates evaporated in vacuo, extracted with ether and chloroform and finally taken up in 6 cc Ringer's solution. This solution contains the antigonadotropic hormone and is tested on infantile mice.

3. 1,3g frisches Gewebe, z. B. Magencarcinomgewebe, wird zerkleinert, mit Quarz zerrieben und mit 100 ccm reinem Aceton behandelt, der Niederschlag auf der Zentrifuge abgetrennt und mit Alkohol und Äther gründlich gewaschen. Der wasserfreie Rückstand wird zweimal mit je 50 ccm 5o0;oigem Alkohol je ½ Stunde lang geschüttelt, die vereinigten Filtrate im Vakuum verdampft; der geringe Rückstand in 3 ccm Wasser aufgenommen und auf die Anwesenheit von Antimelanophorenhormon geprüft. Der in 50%-igem Aceton unlösliche Rückstand wird zweimal mit je 50 ccm 30%igem Alkohol ausgezogen, die vereinigten Filtrate im Vakuum verdampft, in 5 ccm Ringerlösung aufgenommen und auf die antigonadotrope Wirkung ausgetestet. 3. 1.3 g of fresh tissue, e.g. B. gastric cancer tissue, is crushed, triturated with quartz and treated with 100 cc of pure acetone, the precipitate on the centrifuge separated and washed thoroughly with alcohol and ether. The anhydrous The residue is shaken twice with 50 ccm of 50% alcohol each time for ½ hour, the combined filtrates evaporated in vacuo; the small residue in 3 cc of water recorded and checked for the presence of antimelanophore hormone. The one in 50% Acetone-insoluble residue is extracted twice with 50 ccm of 30% alcohol each time, the combined filtrates evaporated in vacuo, taken up in 5 ccm Ringer's solution and tested for the antigonadotropic effect.

Claims

P A T E N T A N S P R Ü C H E: 1. Further training of the procedure according to patent 695 875, characterized in that the inhibitors are purifying for the purpose from the blood taken from the organism, the effusions from body cavities or the Extracts from organs or pieces of tissue with water-soluble organic solvents precipitated, the precipitate after dehydration more corn with 30% acetone or Alcohol extracted, the extract evaporated, treated with lipoid solvents and the thus purified two inhibitors are dissolved in water or saline.

Modification of the method according to claim 1, characterized in that that the precipitate is first treated with lipoid solvents after drying and then carry out further cleaning Extraction with 30% acetone or alcohol.

3. The method according to claim 1 and 2> characterized in that for the purpose of separating both inhibitors, the evaporated and, if necessary, with solvents treated extract or the precipitate produced according to claim 1 only with 50% strength Alcohol or acetone, which is the inhibitor directed against the melanophore hormone goes into solution, and then the remaining residue with 30% alcohol or acetone, the gonadotropic hormone inhibitor being in solution is going to be treated.