DE69524953T2

DE69524953T2 - Antibakterielle öl-in-wasser-emulsion

Info

Publication number: DE69524953T2
Application number: DE69524953T
Authority: DE
Inventors: D.Craig Wright
Original assignee: Novavax Inc
Current assignee: Novavax Inc
Priority date: 1994-05-20
Filing date: 1995-05-18
Publication date: 2002-08-29
Anticipated expiration: 2015-05-19
Also published as: AU687562B2; CA2190606A1; BR9507742A; CN1158069C; EP0760650B1; AU2593695A; DE69524953D1; EP0765151B1; AU2593795A; JPH10500687A; WO1995031956A1; CN1159158A; EP0765151A1; EP0760650A1; EP0765151A4; ES2180636T3; CA2190604A1; US5618840A; WO1995031966A1; CN1156404A

Description

Hinterrund der Erfindung

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine Lipid enthaltende Öl-in-Wasser- Emulsion, die nach Kontakt Bakterien, besonders Helicobacter pylori, inaktiviert.
Es ist bekannt, wenn eine mit Wasser nicht mischbare Flüssigphase unter mechanischem Rühren, zum Beispiel mittels eines Ultradispersers, in eine wässrige Phase gemischt wird, dass die Stabilität der sich ergebenden Öl-in-Wasser-Dispersion sehr häufig das Zufügen eines Emulgiermittels erforderlich macht, dessen Moleküle an der Oberfläche der Öltröpfchen zur Bildung einer Art kontinuierlicher Membran adsorbiert werden, die direkten Kontakt zwischen zwei benachbarten Tröpfchen verhindert. Die Öltropfen können ferner in einem organischen Medium lösliche Substanzen, wie zum Beispiel ein Sterin enthalten.
Außer den in einer wässrigen Phase dispergierten diskreten Öltröpfchen können Öl-in-Wasser-Emulsionen auch andere Lipidstrukturen, wie zum Beispiel kleine Lipidvesikel (das heißt Lipidsphären, die häufig aus mehreren im Wesentlichen voneinander durch Schichten der wässrigen Phase getrennten konzentrischen Lipid-Doppelschichten bestehen), Micellen (das heißt amphiphile Moleküle in kleinen Clusters von 50-200 Molekülen, die dergestalt angeordnet sind, dass die polaren Kopfgruppen nach außen in Richtung der wässrigen Phase gerichtet und die apolaren Schwänze nach innen, weg von der wässrigen Phase sequestriert sind) oder lamellare Phasen (Lipiddispersionen, worin jeder Partikel aus parallelen amphiphilen Doppelschichten besteht, die durch dünne Wasserfilme getrennt sind) enthalten. Diese Lipidstrukturen werden aufgrund der hydrophoben Kräfte gebildet, welche apolare Rückstände (das heißt lange Kohlenwasserstoffketten) weg von dem Wasser treiben.
Helicobacter pylori ist ein spiralförmiges, Urease bildendes Bacterium, das an der Übergangsstelle des gastrischen Epithels zur Schleimhaut lebt und antrale Gastritis, Ulkuskrankheit, gastrisches Non-Hodgkin-Lymphom und Magenkarzinome verursacht.
Es wird angenommen, dass das Bacterium direkt von Person auf Person übertragen wird, da kein nicht menschliches Reservoir nachgewiesen wurde (Berkowicz et al. (1987) Lancet 680-81). Die Eintrittspforten der pathogenen Bakterien, wie zum Beispiel Helicobacter pylori, sind vorwiegend die Haut und Schleimhäute, einschließlich der oberen und unteren Luftwege. Der erste Schritt bei einer Infektion ist die Anhaftung oder Kolonisierung auf der Haut oder den Schleimhäuten mit sich anschließender Invasion und Disseminierung des Bacteriums.
Bisher ist die Therapie mit Bismut und Antibiotika im Allgemeinen bei der Eradikation des Bacteriums und der Prävention der Kolonisierung nicht erfolgreich gewesen (Rauws et al. (1988) Gastroenterology 94: 33-40). Es ist deshalb eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, einen alternativen Ansatz zur Inaktivierung von Bakterien, wie zum Beispiel Helicobacter pylori, nach Kontakt vorzusehen.
WO 94/21232 offenbart ein Therapeutikum, das 2,4 Gew.-% Betacaroten, 66,7 Gew.-% Glycerin, 6,8 Gew.-% Sojabohnenöl, 7,2 Gew.-% Glycerinmonooleat und Wasser umfasst. Diese Anmeldung wurde vor dem Prioritätsdatum der vorliegenden Anmeldung eingereicht und danach veröffentlicht und ist folglich Teil des Standes der Technik unter Artikel 54(3) EPÜ.

Zusammenfassung der Erfindung

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist, wie in Anspruch 1 definiert, eine stabile antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion zur Inaktivierung von Bakterien, besonders von gramnegativen Bakterien, wie zum Beispiel Helicobacter pylori, nach Kontakt. Die Emulsion umfasst Tröpfchen einer öligen "diskontinuierlichen Phase", die in einer wässrigen "kontinuierlichen Phase" dispergiert ist. Die diskontinuierliche Phase der Emulsion kann positiv geladen, negativ geladen oder nicht geladen sein und enthält mindestens ein Emulgiermittel und einen Ölträger. Das primäre Emulgiermittel umfasst Glycerinmonooleat (GMO). Bevorzugte Glycerinester zur Verwendung bei der Bildung der öligen diskontinuierlichen Phase sind GMO und GMS (Glycerinmonostearat). In einer Ausführungsform der Erfindung kann mindestens ein Teil der Emulsion in der Form von Lipidstrukturen, einschließlich, aber nicht beschränkt darauf, unilamellaren, multilamellaren und paucilamellaren Lipidvesikeln, Micellen und lamellaren oder hexagonalen Phasen vorliegen.
Bei der Bildung der öligen diskontinuierlichen Phase nützliche Öle schließen ein breites Spektrum mit Wasser nicht mischbarer Materialien, wie zum Beispiel Sojabohnenöl, Avocadoöl, Squalen-Öl, Sesamöl, Olivenöl, Canolaöl, Maisöl, Rapsöl, Safloröl, Sonnenblumenöl, Fischöle, Aromaöle, wasserunlösliche Vitamine und Gemische davon ein.
Die ölige diskontinuierliche Phase der Emulsion kann ferner ein Mittel einschließen, das eine positive oder negative Ladung herbeiführt. Eine positive Ladung herbeiführende Mittel zur Verwendung in der Erfindung sind bevorzugt kationische, Halogen enthaltende Verbindungen, die eine C&sub1;&sub2;-C&sub1;&sub6;-Kette aufweisen. In einer bevorzugten Ausführungsform wird die kationische, Halogen enthaltende Verbindung mit einer C&sub1;&sub2;-C&sub1;&sub6;-Kette ausgewählt aus der Gruppe, die aus Cetylpyridiniumchlorid (CPC), Cetylpyridiniumbromid (CPB) und Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB) besteht. Eine negative Ladung herbeiführende Mittel, die verwendet werden können, sind bevorzugt anionische Verbindungen mit einer C&sub1;&sub2;-C&sub2;&sub2;-Kette, am bevorzugtesten organische Säuren. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung handelt es sich bei dem Mittel, das eine negative Ladung herbeiführt, um Ölsäure.
Die ölige diskontinuierliche Phase kann ferner mindestens ein Sterin, ausgewählt aus der Gruppe enthalten, die aus Cholesterin, Cholesterinderivaten, Hydrocortison, Phytosterin und Gemischen davon besteht. Die Bezeichnung "Cholesterinderivate" wie hierin verwendet, schließt Sulfat- und Phosphatderivate des Cholesterins ein, ist aber nicht beschränkt darauf. Bevorzugte Sterine schließen Phytosterine, wie zum Beispiel Sojasterin ein.
Antibakterielle Emulsionen der vorliegenden Erfindung sind nicht toxisch und sicher; wenn sie beispielsweise verschluckt, inhaliert oder auf die Haut appliziert werden. Dieses Ergebnis ist unerwartet, besonders für die positiv geladenen Emulsionen der Erfindung, da viele kationische, Halogen enthaltende Verbindungen mit einer C&sub1;&sub2;-C&sub1;&sub6;-Kette äußerst toxisch sind, wenn sie allein verabreicht werden. So verursacht zum Beispiel Cetylpyridiniumchlorid (CPC), eine bevorzugte kationische, Halogen enthaltende Verbindung der Erfindung, eine schwere Reizung und Gewebsschädigung der oberen Atemwege, Schleimhäute und Haut, wenn es allein verabreicht wird. Wenn es jedoch in der Form einer Emulsion der Erfindung verabreicht wird, treten keine solchen unerwünschten Wirkungen auf. Darüber hinausgehend sind die Emulsionen der Erfindung, wenn sie erhitzt oder signifikanten Säure- und Basenkonzentrationen ausgesetzt werden, stabil.
Die antibakteriellen Emulsionen der vorliegenden Erfindung können zum Beispiel in pharmazeutischen Zubereitungen (wie zum Beispiel Cremes, Lösungen und Suspensionen) zum Inhibieren des Wachstums von Bakterien, besonders von mit einer Kapsel umgebenen Bakterien, wie zum Beispiel Helicobacter pylori, die im Vergleich zu den anderen gramnegativen Bakterien relativ grobe LPS-Typen (Lipopolysaccharid-Typen) aufweisen, verwendet werden. Demgemäß sieht die vorliegende Erfindung auch eine antibakterielle Zubereitung vor, die für die pharmazeutische Verabreichung geeignet ist, die sich aus einer antibakteriellen Emulsion der Erfindung und einem pharmazeutisch zulässigen Träger zusammensetzt.
Die Zubereitung kann topisch auf Areale der Hautoberfläche, Schleimhäute oder orale Oberflächen zum Beispiel als Creme, Gel, Spray oder Mundspülmittel zur Behandlung oder Prävention bakterieller Infektionen appliziert werden. Als Alternative kann die Zubereitung zur Inaktivierung pathogener Bakterien, wie zum Beispiel Helicobacter pylori, enteral verabreicht werden. Demgemäß können antibakterielle Emulsionen der vorliegenden Erfindung ferner als ein Verfahren zur Inhibition des Wachstums eines Bacteriums in einem Individuum, besonders von Helicobacter pylori, durch orale oder systemische Verabreichung der antibakteriellen Emulsion an das Individuum angewendet werden.

Ausführliche BeschreibunE der Erfindun2

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine stabile, antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion aus Tröpfchen einer öligen diskontinuierlichen Phase, die mindestens ein Emulgiermittel dispergiert in einer wässrigen kontinuierlichen Phase enthält.
Die Bezeichnung "antibakteriell", wie hierin verwendet, bedeutet Aufweisen der Fähigkeit zur Inaktivierung eines Bacteriums, besonders eines gramnegativen Bacteriums, wie zum Beispiel Helicobacter pylori. Die Bezeichnung "inaktivieren", wie hierin verwendet, schließt das Abtöten oder Inhibieren des Wachstums des Bacteriums ein, ist aber nicht beschränkt darauf. Es hat den Anschein, dass eine derartige Inaktivierung durch Zerstörung der bakteriellen Membran auftritt. Demgemäß sieht ein Aspekt der vorliegenden Erfindung eine antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion vor, welche die Membranstruktur eines Bacteriums, wie zum Beispiel Helicobacter pylori zerstört, so dass das Bacterium inaktiviert wird.
Die Bezeichnung "Emulsion", wie hierin verwendet, schließt sowohl klassische Öl-in-Wasser-Dispersionen oder Tröpfchen als auch andere Lipidstrukturen ein, die sich aufgrund hydrophober Kräfte bilden können, die apolare Rückstände (das heißt lange Kohlenwasserstoffketten) weg vom Wasser treiben und polare Kopfgruppen in Richtung des Wassers treiben, wenn eine mit Wasser nicht mischbare ölige Phase mit einer wässrigen Phase gemischt wird. Diese anderen Lipidstrukturen schließen unilamellare, paucilamellare und multilamellare Lipidvesikel, Micellen und lamellare und hexagonale Phasen ein, sind aber nicht beschränkt darauf.
Die ölige diskontinuierliche Phase der Emulsionen der vorliegenden Erfindung umfasst mindestens teilweise ein primäres Emulgiermittel und einen Ölträger. Die Bezeichnung "primäres Emulgiermittel" bezieht sich auf das Emulgiermittel, das den größten Gewichtsanteil eines jeden einzelnen Emulgiermittels ausmacht, das in der öligen diskontinuierlichen Phase enthalten ist und das Glycerinmonooleat ist. Die ölige diskontinuierliche Phase kann ferner mindestens ein Sterin enthalten, ausgewählt aus der Gruppe, die aus Cholesterin, Cholesterinderivaten, Hydrocortison, Phytosterin und Gemischen davon und Öl besteht. Die Bezeichnung "Cholesterinderivate", wie hierin verwendet, schließt Sulfat- und Phosphatderivate des Cholesterins ein, ist aber nicht beschränkt darauf. Bevorzugte Sterine schließen Phytosterine, wie zum Beispiel Sojasterin ein.
Bei der Bildung antibakterieller Öl-in-Wasser-Emulsionen der vorliegenden Erfindung nützliche Öle schließen ein breites Spektrum von mit Wasser nicht mischbaren Materialien, wie zum Beispiel Sojabohnenöl, Avocadoöl, Squalen-Öl, Sesamöl, Olivenöl, Canolaöl, Maisöl, Rapsöl, Safloröl, Sonnenblumenöl, Fischöle, Aromaöle, wasserunlösliche Vitamine und Gemische davon ein. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Öl ein Duftöl oder Aromaöl, wie zum Beispiel Pfefferminzöl.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst die Emulsion ferner ein Mittel, das eine positive oder negative Ladung herbeiführt. Mittel zum Einsatz in der Erfindung, die eine positive Ladung herbeiführen, schließen bevorzugt kationische, Halogen enthaltende Verbindungen mit einer C&sub1;&sub2;-C&sub1;&sub6;-Kette ein. In einer bevorzugten Ausführungsform wird die kationische, Halogen enthaltende Verbindung mit einer C&sub1;&sub2;-C&sub1;&sub6;-Kette aus der Gruppe ausgewählt, die aus Cetylpyridiniumchlorid (CPC), Cetylpyridiniumbromid (GBP) und Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB) besteht. Andere kationische, Halogen enthaltende Verbindungen, die verwendet werden können, schließen zum Beispiel Cetyldimethylethylammoniumbromid, Cetyltrimethylammoniumchlorid, Cetylbenzyldimethylammoniumchlorid; Cetyltributylphosphoniumbromid, Dodecyltrimethylammoniumbromid und Tetradecyltrimethylammoniumbromid ein.
Als Alternative kann die Emulsion ein Mittel enthalten, das eine negative Ladung herbeiführt. Mittel, die eine negative Ladung herbeiführen, die verwendet werden können, sind anionische Verbindungen, die eine C&sub1;&sub2;-C&sub2;&sub2;-Kette, bevorzugt organische Säuren aufweisen. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das eine negative Ladung herbeiführende Mittel Ölsäure.
Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsionen der vorliegenden Erfindung können unter Verwendung klassischer emulsionsbildender Verfahren gebildet werden, die im Fach weithin bekannt sind. In Kürze ist anzumerken, dass die Lipid-Öl-Phase mit der wässrigen Phase unter relativ hohen Scherkräften gemischt wird, um eine Öl-in-Wasser-Emulsion zu erhalten, die Öltröpfchen enthält, die ca. ein Mikron im Durchmesser betragen. Insbesondere wird eine Lipid enthaltende ölige diskontinuierliche Phase durch Zusammenmischen von (a) einem Ölträger; (b) einem primären Emulgiermittel, das GMO ist und wahlweise (c) einem Mittel, das wie oben beschrieben eine positive oder negative Ladung herbeiführt, zusammen mit jeglichen anderen kompatiblen Amphiphilen oder Emulgiermitteln, wie zum Beispiel Polysorbat 60 und jeglichen Sterinen oder anderen lipophilen Materialien, die in die Lipid-Öl-Phase inkorporiert werden sollen, gebildet.
Sobald die Lipid-Öl-Phase gebildet ist, wird sie, wie für die Fließfähigkeit notwendig, erhitzt und mit einer wässrigen Phase (wie zum Beispiel Wasser, Kochsalzlösung oder jeglicher anderer wässriger Lösung, die die Lipide hydratisieren kann) auf einer Volumen-zu-Volumenbasis in dem Bereich von ca. 1 : 4 bis 1 : 2, bevorzugt ca. 1 : 3 Lipid-Öl-Phase zu wässriger Phase zusammengemischt. Die Lipid-Öl- und wässrigen Phasen können unter Verwendung eines beliebigen Apparates, der zur Herbeiführung der zum Mischen notwendigen hohen Scherkräfte fähig ist, einschließlich beispielsweise einer French-Presse, einer NovamixTM-Lipidvesikel-Herstellungsvorrichtung (IGI Inc. Buena N. J.), eines Spritzenmischers oder als Alternative von Hand unter Verwendung von zwei Spritzen wie in U.S.-Patenten Nr. 4,895,452 und 4,911,928 beschrieben, zusammengemischt werden.
Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsionen der vorliegenden Erfindung sehen den Vorteil vor, dass sie bei Anwesenheit von Hitze, Säure oder Base stabil sind. Wie beispielsweise unten in Beispiel 4 gezeigt, werden Emulsionen der Erfindung nicht signifikant verändert oder abgebaut, wenn sie gekocht oder 1 N Salpetersäure oder 1 N Natriumhydroxid ausgesetzt werden. Diese Stabilität macht die Emulsionen für die pharmazeutische Verabreichung, selbst für die innerliche Anwendung, geeignet.
Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsionen der vorliegenden Erfindung können zur Inaktivierung von Bakterien, besonders von gramnegativen Bakterien, wie zum Beispiel Helicobacter pylori, nach Kontakt verwendet werden. So können die hier offenbarten Emulsionen beispielsweise für die oropharyngeale Applikation als ein Spray oder Mundwasser zur Inaktivierung oder Prävention einer durch Streptococcus pneumoniae, β-hämolytischen Streptococcus der Gruppe A, Haemophilus influenzae und Neisseria meningitidis verursachten Infektion verwendet werden. Die vorliegend offenbarten Emulsionen können auch zur Inaktivierung oder zur Verhinderung der durch Helicobacter pylori verursachten gastrointestinalen Infektionen (wie zum Beispiel Gastritis oder Ulkuskrankheit) verabreicht werden. Diese Emulsionen können auch für die venerische Applikation als eine Creme, ein Gel oder Suppositorium zur Inaktivierung oder Prävention von durch Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis und Streptococcus der Gruppe B verursachten Infektionen verwendet werden. Die hier offenbarten Emulsionen können auch zur dermatologischen Applikation als eine Creme oder ein Gel zur Inaktivierung oder Prävention von durch Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis und Streptococcus der Gruppe B verursachten Infektionen verwendet werden. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden antibakterielle Emulsionen der vorliegenden Erfindung zur Verhinderung von Infektionen durch gramnegative Bakterien, wie zum Beispiel Helicobacter pylori, mit relativ groben LPS-Typen im Vergleich zu anderen gramnegativen Bakterien verwendet. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die Emulsionen zur Inaktivierung oder Prävention von durch Helicobacter pylori verursachten gastrointestinalen Infektionen (wie zum Beispiel Gastritis oder Ulkuskrankheit) oral verabreicht.
Die vorliegende Erfindung sieht auch eine zur pharmazeutischen Verabreichung geeignete antibakterielle Zubereitung vor, die aus der antibakteriellen Emulsion und einem pharmazeutisch zulässigen Träger besteht. Die Bezeichnung "pharmazeutisch zulässiger Träger", wie hierin verwendet, bezieht sich auf jeglichen physiologisch kompatiblen Träger, der für die pharmazeutische Verabreichung geeignet ist. Die Verwendung solcher Medien und Mittel für pharmazeutisch aktive Substanzen ist im Fach weithin bekannt. Außer insoweit, dass irgendein konventionelles Medium oder Mittel mit den Emulsionen der vorliegenden Erfindung inkompatibel ist, wird die Verwendung davon in einer pharmazeutischen Zubereitung in Betracht gezogen.
Die antibakterielle Emulsion der vorliegenden Erfindung kann in Verfahren zur Inhibition des Wachstums eines Bacteriums, besonders von Helicobacter pylori, entweder in vivo oder in vitro, anhand topischer oder systemischer Verabreichung der antibakteriellen Emulsion verwendet werden. Die Bezeichnung "topisch", wie hierin verwendet, schließt die Applikation auf Schleimhäute, orale Oberflächen, Haut, Innenohroberflächen oder die Oberflächen jeglicher Körperöffnungen, wie zum Beispiel die Vagina oder das Rektum ein. Die Bezeichnung "systemisch", wie hierin verwendet, schließt jegliche Form der innerlichen Anwendung, einschließlich, aber nicht beschränkt darauf, der oralen oder intravenösen Verabreichung ein.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Wirksamkeit der Erfindung.

Beispiel 1 - Zubereitung von GMO- und GMS*-Öl-in-Wasser-Emulsionen

In diesem Beispiel wurden eine Reihe positiv geladener, negativ geladener und nicht geladener Öl-in-Wasser-Emulsionen mit entweder GMO oder GMS als das primäre Emulgiermittel gebildet. Ausgewählte Emulsionen wurden auch in Bezug auf Reinheit, pH und Größe der Öltröpfchen charakterisiert.
Tabelle 1 zeigt die Menge einer jeden chemischen Komponente, die zur Bildung der Lipid-Öl-Phase aus mehreren positiv geladenen GMO- und GMS-Öl-in-Wasser-Emulsionen mit Glycerinmonooleat (GMO) oder Glycerinmonostearat (GMS) als die primären Emulgiermittel und Cetylpyridiniumchlorid (CPC), Cetylpyridiniumbromid (CPB), Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB) oder Dimethyldioctadecylammoniumbromid (DDDAB) als Mittel, die eine positive Ladung herbeiführen, verwendet wurde.
* Nur für Referenzzwecke TABELLE 1
Zur Zubereitung der oben in Tabelle 1 gezeigten positiv geladenen Emulsionen wurde eine Lipid-Öl-Phase, die ca. 12 bis 21 Gew.-% GMO oder GMS, 0,8 bis 0,9 Gew.-% kationische, Halogen enthaltende Verbindung, 67 bis 80 Gew.-% Trägeröl, wie zum Beispiel Sojabohnenöl, 3 bis 5 Gew.-% Tween 60 (Polyoxyethylen(20)-sorbitanmonostearat) und 3 bis 6 Gew.-% Sojasterin enthielt, ca. eine Stunde bei 86ºC erhitzt. Die Lipid-Öl-Phase wurde dann mit einer wässrigen Phase, die Wasser bei 65ºC enthielt, unter Verwendung einer 5-ml-Spritzenmaschine, wie in US-Patent Nr. 4,895,452 beschrieben, auf einer Volumen-zu-Volumenbasis von 13 Teilen Lipid-Öl zu 37 Teilen Wasser zusammengemischt.
Tabelle 2 zeigt die Menge einer jeden chemischen Komponente, die zur Bildung der Lipid-Öl-Phase von negativ geladenen GMO- und GMS-Öl-in-Wasser-Emulsionen, die Glycerinmonooleat (GMO) oder Glycerinmonostearat (GMS) aufweisen, als die primären Lipide und Ölsäure als ein Mittel, das eine negative Ladung herbeiführt, verwendet wird. TABELLE 2
Zur Zubereitung der oben in Tabelle 2 gezeigten negativ geladenen Emulsionen wurde eine Lipid-Öl-Phase, die ca. 12 bis 21 Gew.-% GMO oder GMS, 67 bis 80 Gew.-% Trägeröl, wie zum Beispiel Sojabohnenöl, 5 bis 8 Gew.-% Tween 60 (Polyoxyethylen(20)-sorbitanmonostearat), 5 bis 6 Gew.-% Sojasterin und 0,4 bis 0,7% Ölsäure enthielt, ca. eine Stunde bei 86ºC erhitzt. Die Lipid-Öl-Phase wurde dann mit einer wässrigen Phase, die Wasser bei 65ºC enthält, unter Verwendung einer 5-ml-Spritzenmaschine, wie in US-Patent Nr. 4,895,452 beschrieben, auf einer Volumen-zu-Volumen-Basis von 13 Teilen Lipid-Öl zu 37 Teilen Wasser zusammengemischt.
Tabelle 3 zeigt die Menge von jeder chemischen Komponente, die zur Bildung der Lipid-Öl-Phase von GMO- und GMS-Öl-in-Wasser-Emulsionen mit keiner Ladung verwendet wird. TABELLE 3
Zur Zubereitung der oben in Tabelle 3 gezeigten ladungslosen Emulsionen wurde eine Lipid-Öl-Phase, die ca. 12 bis 13 Gew.-% GMO oder GMS, 78 bis 80 Gew.-% Trägeröl, wie zum Beispiel Sojabohnenöl, 3 Gew.-% Tween 60 (Polyoxyethylen(20)-sorbitanmonostearat) und 3 bis 7 Gew.-% Sojasterin enthielt, ca. eine Stunde bei 86ºC erhitzt. Die Lipid-Öl-Phase wurde dann mit einer wässrigen Phase, die Wasser bei 65ºC enthielt, unter Verwendung einer 5-ml-Spritzenmaschine, wie in US-Patent Nr. 4,895,452 beschrieben, auf einer Volumen-zu-Volumenbasis von 13 Teilen Lipid-Öl zu 37 Teilen Wasser zusammengemischt.
Tabelle 4 zeigt den pH von ausgewählten positiv und negativ geladenen Emulsionen von Tabellen 1 und 2. Auch gezeigt wird die Größe der Lipid-Öl-Tröpfchen der Emulsionen, die an einem mit einem zirkulierenden Wasserbad ausgestatteten Coulter LS 130 Laser-Größenmessinstrument gemessen wurden. TABELLE 4

Beispiel 2 - Zubereitung von 10 N GMO-Öl-in-Wasser-Emulsionen

In diesem Beispiel wurden eine Reihe positiv geladener Öl-in-Wasser-Emulsionen zubereitet, die GMO als das primäre Emulgiermittel und einen um das 10fach höheren prozentualen Anteil (10 N) kationischer, Halogen enthaltender Verbindung (Cetylpyridiniumchlorid (CPC), Cetylpyridiniumbromid (CPB), Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB), Cetyldimethylethylammoniumbromid (CDEAB) und Benzalkoniumchlorid (BAC)) aufwiesen, im Vergleich zu Beispiel 1, als ein Mittel, das eine positive Ladung herbeiführt.
Tabelle 5 zeigt die Menge von jeder chemischen Komponente, die zur Bildung der Lipid-Öl-Phase der positiv geladenen 10 N GMO-Emulsionen verwendet wird. TABELLE 5 Positiv geladene 10 N Emulsionen
Zur Zubereitung der in Tabelle 3 oben gezeigten 10 N Emulsionen wurde eine Lipid-Öl-Phase, die ca. 19 Gew.-% GMO, 62 Gew.-% Trägeröl, wie zum Beispiel Sojabohnenöl, 4,7 Gew.-% Tween 60 (Polyoxyethylen(20)-sorbitanmonostearat), 5,4 Gew.-% Sojasterin, und 7,4 bis 8,4 Gew-% kationisches Detergens enthielt, ca. eine Stunde bei 86ºC erhitzt. Die Lipid-Öl-Phase wurde dann mit einer wässrigen Phase, die Wasser bei 65ºC enthielt, unter Verwendung einer 5-ml-Spritzenmaschine (wie in US-Patent Nr. 4,895,452 beschrieben) auf einer Volumen-zu-Volumenbasis von 13 Teilen Lipid-Öl zu 37 Teilen Wasser vermischt.

Beispiel 3 - Mikrobizide Aktivität gegen Helicobacter pylori

In diesem Beispiel wurden aus Tabellen 1-3 und 5 ausgewählte positiv geladene, negativ geladene und nicht geladene GMO- und GMS-Emulsionen auf antibakterielle Aktivität gegen fünf verschiedene Isolate von Helicobacter pylori von der American Type Culture Collection (ATCC) getestet. Der mikrobizide Assay wurde wie folgt verwendet:
Lyophilisierte Isolate von Helicobacter pylori wurden von der American Type Culture Collection (ATCC) erhalten. Der lyophilisierten Kultur wurde 0,5 ml Schädler-Bouillon zugefügt und der gesamte Inhalt des Fläschchens auf eine 5%ige Schafblutagarplatte (TSA 11) inokuliert. Die Kulturen wurden dann in einem anaeroben Gefäß mit Campy GasPAK 72 Stunden bei 37ºC inkubiert. Die Kolonien von den TSA-11-Platten (72 Stunden) wurden dann in die Schädler-Bouillon inokuliert, bis ein McFarland-Standard von 0,5 erreicht wurde.
Ein 1-ml-Aliquot der Bakterienkultur wurde dann 10 Minuten mit 1 ml Öl-in-Wasser-Emulsion gemischt. Dann wurden von jedem Gemisch quantitative Kulturen im Doppelansatz angelegt und eine quantitative Kultur wurde von der Originalbouillon-Kultur angelegt. Bakterien enthaltende Platten wurden 72 Stunden bei 37ºC in einem anaeroben Gefäß mit Campy GasPAK inkubiert und dann gezählt. Der prozentuale Anteil der abgetöteten Bakterien wurde anhand der folgenden Gleichung bestimmt, und die Ergebnisse gehen aus Tabelle 6 hervor.
Abtötung (%) = (A - B)/A · 100
A = Die Gesamtzahl der inokulierten Bakterien
B = Die nach dem Mischen mit einer Emulsion oder Liposomen gezählte Zahl TABELLE 6
Tabelle 6 zeigt, dass drei der Emulsionen (GMO/CPC, GMO/OA und GMO) alle fünf Isolate von Helicobacter pylori nach 10-minütiger Exposition vollkommen inaktivierten. Diese drei Emulsionen hatten jeweils eine andere Ladung (das heißt positive Ladung (Cetylpyridiniumchlorid), negative Ladung (Ölsäure) und keine Ladung (nur GMO)). Die anderen getesteten und in Tabelle 6 gezeigten Emulsionen wiesen auch eine signifikante Aktivität gegen die verschiedenen Isolate auf.
Tabelle 7 listet die prozentualen Anteile von Helicobacter pylori (ATCC Nr. 43579) auf, die nach einer 10-minütigen Inkubation von 5 · 10&sup6; CFU/ml (Versuch Nr. 1) oder 2 · 10&sup6; CFU/ml (Versuch Nr. 2) Bakterien mit der 10 N GMO/CPC-Emulsion von Tabelle 5 abgetötet wurden. Die 10 N GMO/CPC-Emulsion wurde in unverdünnter Form und in mehreren Verdünnungen, wie aus Tabelle 7 hervorgeht, getestet. TABELLE 7
Tabelle 7 zeigt, dass nach 10 Minuten eine mit der 10 N GMO/CPC-Emulsion getestete 99%ige bis 100%ige Inaktivierung von Helicobacter pylori vorliegt. Tabelle 7 zeigt auch, dass die 10 N GMO/CPC-Emulsion 100% ihrer Wirksamkeit beibehält, wenn sie bis zu 1 : 20 verdünnt wird, 99% ihrer Wirksamkeit, wenn sie bis zu 1 : 40 verdünnt wird und 99 bis 99,2% ihrer Wirksamkeit, wenn sie bis zu 1 : 80 verdünnt wird.

Beispiel 4 - Stabilität von Öl-in-Wasser-Emulsionen

In diesem Beispiel wurde die in Tabelle 1 gezeigte GMO/CPC-Emulsion bei Vorliegen von Hitze Säure und Base auf Stabilität getestet. Tabelle 8 zeigt die Wirkung von (a) 1-stündigem Kochen auf Abbau oder Aggregation der GMO/CPC-Emulsion, (b) 2-stündigem Mischen gleicher Volumina von 1 N Salpetersäure und GMO/CPC-Emulsion auf Abbau oder Aggregation der GMP/CPC-Emulsion und (c) 2-stündiges Mischen gleicher Volumina von 1 N Natriumhydroxid und GMO/CPC-Emulsion auf Abbau oder Aggregation der GMO/CPC-Emulsion. TABELLE 8
Tabelle 8 zeigt, dass: (a) 1-ständiges Kochen den Abbau oder die Größe der GMP/CPC-Emulsion nicht signifikant ändert: (b) 2-ständige Exposition gegenüber 1 N Salpetersäure das Größen- oder Aggregatprofil der GMO/CPC-Emulsion nicht signifikant ändert und (c) 2-ständige Exposition gegenüber 1 N Natriumhydroxid eine 20%ige Abnahme der mittleren Größe der GMO/CPC-Emulsion ohne Zerstörung der Emulsion oder Herbeiführung von Aggregation verursacht.
Aus den oben beschriebenen Beispielen 1-4 ist evident, dass die positiv geladenen, negativ geladenen und nicht geladenen antibakteriellen Öl-in-Wasser-Emulsionen der vorliegenden Erfindung eine signifikante mikrobizide Aktivität gegen eine Reihe verschiedener Isolate von Helicobacter pylori aufweisen. Die Emulsionen der Erfindung sind überdies bei Vorliegen von Hitze, Säure und Base stabil, was sie zur pharmazeutischen Verabreichung, ob topisch, oral oder systemisch, sehr geeignet macht.
Die Fachleute auf dem Gebiet werden erkennen oder in der Lage sein, unter Verwendung von nicht mehr als routinemäßigem Experimentieren viele Äquivalente der hierin beschriebenen spezifischen Ausführungsformen der Erfindung zu ermitteln. Es wird beabsichtigt, dass derartige Äquivalente anhand der folgenden Ansprüche eingeschlossen sind.

Claims

1. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion zur Anwendung bei der Inhibition des Wachstums von Helicobacter pylori in einem Individuum, wobei genannte antibakterielle Emulsion in der Form von Tröpfchen einer öligen diskontinuierlichen Phase in einer kontinuierlichen wässrigen Phase dispergiert ist, wobei die Emulsion ein Öl und Glycerinmonooleat umfasst, unter der Voraussetzung, dass die Emulsion nicht 2,4 Gew.-% Betacaroten umfasst.

2. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion nach Anspruch 1, worin die ölige diskontinuierliche Phase weiter eine kationische, Halogen enthaltende Verbindung mit einer C&sub1;&sub2;-C&sub1;&sub6;-Kette umfasst.

3. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion nach Anspruch 1, worin die ölige diskontinuierliche Phase weiter ein Mittel mit einer C&sub1;&sub2;-C&sub2;&sub2;-Kette umfasst, das eine negative Ladung herbeiführt.

4. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin das Öl ausgewählt wird aus: Sojabohnenöl, Squalen-Öl, Sesamöl, Olivenöl, Canolaöl, Maisöl, Rapsöl, Safloröl, Sonnenblumenöl, Fischölen, Avocadoöl, Aromaölen, wasserunlöslichen Vitaminen und Gemischen davon.

5. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin die ölige diskontinuierliche Phase weiter mindestens ein Sterin umfasst, das aus Chlolesterin, Cholesterinderivaten, Hydrocortison, Phytosterin und Gemischen davon ausgewählt wird.

6. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion nach einem der Ansprüche 2, 4 oder 5, worin das Halogen aus Chlor, Brom und Fluor ausgewählt wird.

7. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion nach einem der Ansprüche 2 oder 4 bis 6, worin die kationische, Halogen enthaltende Verbindung, die eine C&sub1;&sub2;-C&sub1;&sub6;-Kette aufweist, ausgewählt wird aus: Cetylpyridiniumchlorid, Cetylpyridiniumbromid, Cetyltrimethylammoniumbromid, Cetyldimethylethylammoniumbromid, Cetyltrimethylammoniumchlorid, Cetylbenzyldimethylammoniumchlorid, Cetyltributylphosphoniumbromid, Dodecyltrimethylammoniumbromid und Tetradecyltrimethylammoniumbromid.

8. Antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion nach einem der Ansprüche 3 bis 5, worin das Mittel, das die negative Ladung herbeiführt, Ölsäure ist.

9. Pharmazeutische Zubereitung, die eine antibakterielle Öl-in-Wasser-Emulsion wie nach einem der Ansprüche 1 bis 8 definiert und eine pharmazeutisch zulässige Trägersubstanz umfasst.

10. Pharmazeutische Zubereitung nach Anspruch 9 in oraler Dosierungsform.