DE60307358T2

DE60307358T2 - Zubereitung zur Verabreichung von Dithranol

Info

Publication number: DE60307358T2
Application number: DE60307358T
Authority: DE
Inventors: Suresh Kumar Mumbai-400076 Gidwani; Purushottam Sharshikant Yawal Distr. Jalgaon Singnurkar
Original assignee: USV Pvt Ltd
Current assignee: USV Pvt Ltd
Priority date: 2002-05-23
Filing date: 2003-05-21
Publication date: 2007-08-16
Anticipated expiration: 2023-05-22
Also published as: US20030219465A1; PT1364642E; DE60307358D1; JP2003342171A; EP1364642A1; ES2269920T3; DK1364642T3; EP1364642B1; ATE335466T1

Description

Dithranol (1,8,9-Trihydroxyanthracen) wird bei der topischen Behandlung von Psoriasis, Ekzemen, Dermatophytosen, Alopecia areata und anderen dermatologischen Erkrankungen verwendet. Es besitzt jedoch einige gravierende Nachteile.

– Es ist höchst irritierend für die Haut, die nicht von Psoriasis betroffen ist, und muss deshalb mit beträchtlicher Sorgfalt angewendet werden und beschränkt häufig die Expositionsdauer solcher Zubereitungen auf der Haut. Gegenwärtig müssen die Zubereitungen, die Dithranol enthalten, in der klinischen Praxis für kurze Perioden auf der Haut angewendet werden und müssen nach 30 Minuten Anwendung entfernt werden, weil es ansonsten sehr schwer wird, die Hautirritation zu tolerieren.
– Es wird leicht zu braunen oder schwarzen Produkten oxidiert und hat einen starken Färbeeffekt auf Kleidung und normale Haut. Kommerziell ist in europäischen Ländern bekannt, dass Dithranol mit Salbenbase gemischt wird und durch den Apotheker in der Apotheke angemischt und dem Patienten zur sofortigen Verwendung gegeben wird. Auch die "British Pharmacopoeia 2001, Volumen II", Seite 2035, legt dar, dass Dithranol-Creme bei einer Temperatur gelagert werden sollte, die 25°C nicht übersteigt.
– Es ist sehr schwierig, Dithranol in löslicher Form in einer Konzentration, die über 0,15% liegt, zuzuführen und es ist die lösliche Form des Dithranols, die wirksamer ist als dispergiertes oder suspendiertes Dithranol.

Es besteht ein Bedarf an Dithranol-Zusammensetzungen, die frei sind von obigen unerwünschten Effekten, und welche auf der Haut für eine ausgedehnte Zeitspanne angewendet werden können, um einen besseren therapeutischen Effekt bei der Behandlung von Psoriasis zu erreichen. Auch sollten solche Zubereitungen bei längerfristiger Lagerung stabil sein.
Es hat eine Anzahl von Referenzen in der Literatur zu Zusammensetzungen gegeben, die Dithranol enthalten. Wie zum Beispiel:

– Salben (Erdölbasis).
– Cremes, entweder mit Ö/W- oder W/Ö-Emulsion.
– Liposom- und Niosom-Zubereitungen (kommerziell nicht erhältlich).
– Feste Lipid-Nanopartikel (kommerziell nicht erhältlich).

Jedoch haben die eine wie die andere ihre speziellen Beschränkungen im Bezug auf Stabilität, Wirksamkeit, Irritationspotenzial und durch Dithranol verursachte Färbungen. Eine der Hauptbeschränkungen ist der geringe Gehalt an Dithranol in löslicher Form, wodurch häufig die Dispersion von Dithranol in Pulverform erforderlich ist, um Dithranol-Konzentrationen über 0,75% in dem Produkt zu erreichen.
Jean Pierre Laugier et al. beschrieben im US-Patent Nr. 5358716 eine Öl-in-Wasser-Emulsion, die Dithranol und nicht-ionische Vesikel enthält, hergestellt für nichtionische amphiphile Lipide, um die Oxidation des Dithranols zu verhindern. Vesikel werden in der wässrigen Phase der Emulsion dispergiert. Jedoch ist Dithranol nicht in den Vesikeln eingeschlossen und die Ö/W-Emulsion-Zusammensetzungen mit einem Dithranol-Gehalt von mehr als 0,15% liegen als mikronisiertes Dithranol in dispergierter Form und nicht in Form einer Lösung vor. Es ist aufgrund der Begrenzung der Löslichkeit von Dithranol in der Öl- und Lipidphase nicht möglich, Dithranol in Form einer Lösung in einer Konzentration über 0,15% in solche Zubereitungen einzubringen.
C. Shyamal et al., Journal of Pharmaceutical Science Vol. 85, Nr. 10, Oktober 1996, 1082–1084, beschrieben die topische Zuführung von Erythromycin aus liposomaler Emulsion. Eine nicht-ionische, liposomale Zubereitung, die Glyceryldilaurat, Cholesterin, Polyoxyethylen-10-stearylether in einem Gewichtsverhältnis von 57:15:28 enthält, wurde hergestellt durch Schmelzen der Lipidphase, die Erythromycin-Base enthält, bei 60°C, gefolgt von der Hydratation mit Pufferlösung. Diese liposomale Dispersion wurde mit Mineralöl oder Isopropylpalmitat gemischt und beschallt, um eine Mischung von Emulsion mit Liposomen zu ergeben. Sie zeigten eine maximale Stabilität von zwei Wochen für solche Zubereitungen. Es ist im Stand der Technik bekannt, dass jeder aktive Bestandteil/Arzneistoff, der in Form einer Lösung vorliegt, wenn er topisch angewendet wird, im Vergleich zu einem dispergierten, festen, partikulären Arzneistoff, schneller durch die Haut diffundiert. Das kann sehr gut durch das allgemeine Ficksche Diffusionsgesetz demonstriert werden. Es war ein Gegenstand der Erfindung, die oben erwähnten Beschränkungen zu überwinden und ein effizientes und stabiles Zuführungssystem zuzubereiten, das Dithranol alleine oder in Kombination mit Salicylsäure und Steinkohlenteer-Extrakt zur wirksamen und schnellen Kontrolle von Psoriasis enthält.
Zusammenfassung
Die vorliegende Erfindung betrifft ein gemischtes vesikuläres System für die topische Zuführung von Dithranol alleine oder in Kombination mit Salicylsäure, welches Niosome und Liposome nachahmt. Dieses System kann, wenn es gewünscht wird, auch vakuumgetrockneten Steinkohlenteer-Extrakt enthalten. Das gemischte vesikuläre System ist zusammengesetzt aus einer Nanoemulsion mit Doppelschicht-Nanovesikeln, worin Dithranol und, falls vorhanden, Salicylsäure in den Vesikeln eingeschlossen sind. Das wird durch die Verwendung eines nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Materials in diesem System erreicht, welches imstande ist, Dithranol alleine oder in Kombination mit Salicylsäure zu solubilisieren. Das gemischte vesikuläre System hat bevorzugt eine Partikelgröße, die nicht größer als 450 nm ist, und kann bei Raumtemperatur für ausgedehnte Zeitspannen gelagert werden. Weiterhin ruft die erfindungsgemäße Zusammensetzung keine Irritation oder Färbung hervor und ist für die Behandlung von Psoriasis sehr wirksam.
Es ist bekannt, dass jeder aktive Bestandteil/Arzneistoff, der in Form einer Lösung vorliegt, im Vergleich zu einem festen, dispergierten, partikulären Arzneistoff, schnell durch die Haut diffundiert. Die erfindungsgemäße Zusammensetzung stellt topische pharmazeutische Zusammensetzungen bereit, die Dithranol in löslicher Form in sogar höheren Arzneimittel-Konzentrationen enthalten, um sie dadurch wirksamer zu machen. Auf diese Weise können die aktiven Bestandteile in und durch die Haut eindringen, so dass die aktiven Bestandteile kontinuierlich und in ausreichender Menge am Wirkungsort bereitgestellt wer den. Die erfindungsgemäßen topischen Zusammensetzungen können für die topische Behandlung von Psoriasis, Ekzemen, Dermatophytosen, Alopecia areata und anderen dermatologischen Erkrankungen verwendet werden. Zusätzlich stellt diese Erfindung eine topische Zusammensetzung bereit, die bei 37°C bis 45°C mehr als sechs Monate lang stabil ist, wodurch sie leicht zuzubereiten ist und bei Raumtemperatur in tropischen Ländern gelagert werden kann.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
In einem ersten Aspekt stellt die Erfindung eine Zusammensetzung bereit, die solubilisiertes Dithranol enthält, wobei die Zusammensetzung eine Mischung aus Doppelschicht-Vesikeln in einer Öl-und-Wasser-Nanoemulsion umfasst, worin eine ölige Lipidphase der genannten Doppelschicht-Vesikel und der genannten Nanoemulsion aus einem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material besteht, welches Dithranol solubilisiert;
dadurch gekennzeichnet, dass:
das genannte
nicht-ionische, ölige, flüssige Lipid-Material aus α-Tocopherolacetat alleine oder in Kombination mit Polyoxypropylen-15-stearylether besteht,
und dadurch, dass:
die genannten Doppelschicht-Vesikel in situ in einem Hochdruck-Homogenisierungsschritt gebildet werden.
In einem zweiten Aspekt stellt die Erfindung eine Zusammensetzung bereit, die solubilisiertes Dithranol enthält, wobei die genannte Zusammensetzung eine Mischung aus Doppelschicht-Vesikeln in einer Öl-und-Wasser-Nanoemulsion umfasst, worin eine ölige Lipidphase der genannten Doppelschicht-Vesikel und der genannten Nanoemulsion aus einem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material besteht, das Dithranol solubilisiert, das Verfahren umfassend:

a) Bereitstellen sowohl einer Lösung aus Dithranol, das in einem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material gelöst ist, als auch eines wässrigen Mediums;
b) Mischen der genannten öligen Lösung mit dem genannten wässrigen Medium, um eine Mischung zu bilden;
c) Homogenisieren der genannten Mischung, um eine homogene Emulsion zu bilden, die eine ölige Phase und eine wässrige Phase enthält, und
d) Aussetzen der genannten homogenen Mischung einer Hochdruck-Homogenisierung bei Drucken von 138 MPa bis 207 MPa (20.000 psi bis 30.000 psi);

Bevorzugte Ausführungsbeispiele sind in den abhängigen Ansprüchen definiert. Beispielsweise kann die Zusammensetzung entweder Dithranol oder eine Mischung von Dithranol mit Salicylsäure, solubilisiert in der Lipidphase, enthalten. In Übereinstimmung mit dieser Erfindung kann entweder Dithranol alleine oder mit Salicylsäure den aktiven Bestandteil bei der topischen Behandlung dermatologischer Erkrankungen, wie Psoriasis etc., bilden. In Übereinstimmung mit dieser Erfindung kann das Dithranol, das in dem System in so hohen Konzentrationen wie 1,0 Gewichts-% der genannten Zusammensetzung vorliegt, vollständig in dieser Zusammensetzung solubilisiert sein. Allgemein enthalten diese Zusammensetzungen Dithranol in einer Menge, die von ungefähr 0,1 Gewichts-% bis ungefähr 1 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, reicht. Wenn es gewünscht ist, Salicylsäure in die Zusammensetzung einzubringen, liegt die Salicylsäure in Kombination mit Dithranol in einer Menge vor von ungefähr 0,1 Gewichts-% bis ungefähr 3 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, und bevorzugt von ungefähr 0,5 Gewichts-% bis ungefähr 1,5 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der genannten Zusammensetzung. Wenn Salicylsäure in Kombination mit Dithranol vorliegt, ist diese Kombination in der Lipidphase der Doppelschicht-Vesikel innerhalb der Nanoemulsion eingeschlossen.
Solubilisierung ist wichtig, weil Dithranol unlöslich ist in Wasser und schwer löslich ist in Kohlenwasserstoff-Basen, pflanzlichen Ölen und Estern von Fettsäuren, wodurch dessen Konzentration auf unter 0,1% in löslicher Form begrenzt ist. Es ist sehr schwierig gewesen, Zubereitungen zuzubereiten, die Dithranol in einer Konzentration von über 0,1 Gewichts-% in löslicher Form enthalten. Überraschenderweise ist gefunden worden, dass Dithranol und Kombinationen von Dithranol und Salicylsäure in nicht-ionischen, flüssigen Lipid-Materialien wie Tocopherolacetat (Vitamin-E-Acetat) solubilisiert werden können, welches als Vehikel verwendet werden kann, um das Dithranol in Lösung in stabiler Form, sogar bei hohen Konzentrationen, zu halten.
In Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung wurde entdeckt, dass durch die Verwendung von α-Tocopherolacetat, einem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material, welches als Solubilisierungsmittel für Dithranol fungiert, das Dithranol und Kombinationen von Dithranol und Salicylsäure in Lösung gehalten werden, eingeschlossen in den Vesikeln in diesem öligen Lipid-Material, welches die ölige Phase in sowohl der Nanoemulsion als auch den Doppelschicht-Vesikeln bildet. Das nicht-ionische, ölige, flüssige Lipid-Material kann eine Mischung aus α-Tocopherolacetat und Arlamol E^® (Polyoxypropylen-15-stearylether) sein, wobei α-Tocopherolacetat bevorzugt ist. Bei der Zubereitung des erfindungsgemäßen Systems kann das nicht-ionische, ölige, flüssige Lipid-Material allgemein in einer Menge von ungefähr 3 Gewichts-% bis 40 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegen, wobei Mengen von ungefähr 5 Gewichts-% bis 30 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, insbesondere bevorzugt sind.
Das erfindungsgemäße System erreicht einen gesteigerten Einschluss von Dithranol in solubilisiertem Zustand. Weiterhin ist überraschenderweise gefunden worden, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung frei von unerwünschten Nebenwirkungen ist und exzellente therapeutische Effekte bei Psoriasis, Ekzemen, Dermatophytosen, Alopecia areata und anderen Hauterkrankungen bereitstellt, wenn es topisch verabreicht wird. In klinischen Versuchen ist gefunden worden, dass das erfindungsgemäße System aufgrund der Anwesenheit von Mikro-Emulsion mit gemischten Vesikeln eine effektive Zuführung von Dithranol bereitstellt. Diese Vorteile bestehen teilweise

– aufgrund der Anwesenheit von Nanoemulsion anstelle von Emulsion,
– aufgrund der Anwesenheit der Kombination von Mikro-Emulsion mit gemischten Vesikeln,
– aufgrund des Einschlusses von Dithranol in löslicher Form,
– weil die Zubereitung ein liposomales und niosomales Zuführungssystem nachahmt.

Es ist bekannt, dass jeder aktive Bestandteil/Arzneistoff, der in Form einer Lösung vorliegt, im Vergleich zu einem festen, dispergierten, partikulären Arzneistoff, schnell durch die Haut diffundiert. Es ist ein Gegenstand der Erfindung pharmazeutische Zusammensetzungen herzustellen, die Dithranol in löslicher Form sogar in höheren Arzneimittel-Konzentrationen enthalten, um sie somit wirksamer zu machen, wodurch der aktive Bestandteil in und durch die Haut eindringen kann, so dass die aktiven Bestandteile kontinuierlich und in ausreichender Menge am Wirkungsort bereitgestellt werden.
In Übereinstimmung mit dieser Erfindung liegt die Zusammensetzung zur topischen Verabreichung in Form einer homogenen Mischung aus einer Öl-und-Wasser-Nanoemulsion vor, die aus einer Öl-Lipidphase und einer wässrigen Phase zusammengesetzt ist. Sie kann entweder eine Öl-in-Wasser- oder Wasser-in-Öl-Emulsion sein, in welcher kugelförmige, hohle Doppelschicht-Vesikel wie Liposome in dem Einzelsystem vorliegen, worin das Dithranol oder das Dithranol in Kombination mit Salicylsäure in sowohl den Öl-Kügelchen der Emulsion als auch in der Öl- oder Lipidphase der Doppelschicht-Vesikel in einem gelösten Zustand vorliegen. Allgemein ist es bevorzugt, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung eine homogene Mischung einer Öl-in-Wasser-Nanoemulsion ist, wobei die Öl-Lipidphase, welche in der wässrigen Phase emulgiert ist, in einer Menge von 8 Gewichts-% bis 50 Gewichts-% der Zusammensetzung, bevorzugt von ungefähr 5 Gewichts-% bis ungefähr 40 Gewichts-% der Zusammensetzung vorliegt.
Das obige erfindungsgemäße gemischte vesikuläre System, das als Flüssigkeit vorliegt, kann, wenn es gewünscht ist, eingedickt werden, um ein Gel oder eine Creme zu bilden. Das kann durchgeführt werden, indem ein Geliermittel, welches ein Verdickungsmittel ist, oder ein die Viskosität verändernden Mittels zu dem flüssigen System hinzugefügt wird. Es kann jedes konventionelle Geliermittel eingesetzt werden, um die erfindungsgemäße flüssige Emulsion in eine Creme oder ein Gel zu überführen. Unter den bevorzugten Geliermitteln sind Xanthan, Ethylenoxid, Carbopol oder Hydroxypropylmethylcellulose. Die Menge des zu der Zusammensetzung hinzuzufügenden Geliermittels ist abhängig von der gewünschten Endviskosität des Gels oder der Creme.
In Übereinstimmung mit einem erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel, wenn Salicylsäure in Kombination mit Dithranol verwendet wird, wird auch die Salicylsäure gemeinsam mit Dithranol in gelöster Form in dem gemischten vesikulären System zurückgehalten, welches Niosome und Liposome nachahmt. Es ist auch im Stand der Technik bekannt, dass pharmazeutische Zusammensetzungen, die Dithranol enthalten, in Kombination mit Salicylsäure und alkoholischen Extrakten von Steinkohlenteer wirksamer sind für die Behandlung von Psoriasis. Jedoch wird berichtet, dass solche Zubereitungen einen Alkohol-Gehalt von einigen Prozent haben, welcher das Irritationspotenzial gegenüber der Haut verstärken kann. Zusätzlich kann man, wenn gewünscht wird, jeglichen möglichen zusätzlichen irritierenden Effekt des Alkohols der topischen erfindungsgemäßen Zusammensetzung auf der Haut weiter zu reduzieren, den alkoholischen Extrakt des Steinkohlenteers vakuumtrocknen und ihn zu der erfindungsgemäßen Zusammensetzung hinzufügen. Dieser vakuumgetrocknete Steinkohlenteer-Extrakt liegt in Form eines viskosen Schlamms vor. Allgemein wird in Übereinstimmung mit einem bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel der Steinkohlenteer-Extrakt in einer Menge von ungefähr 0,1 Gewichts-% bis ungefähr 6,0 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, hinzugefügt, wobei Mengen von ungefähr 0,25 Gewichts-% bis ungefähr 2,0 Gewichts-% insbesondere bevorzugt sind.
Es ist im Stand der Technik bekannt, dass Dithranol sehr empfindlich gegenüber oxidativem Abbau ist, und es kann eine Auswahl bekannter Antioxidanzien, wie butyliertes Hydroxyanisol, butyliertes Hydroxytoluol, Ascorbinsäure, Zitronensäure, Oxalsäure, Weinsäure, Bernsteinsäure etc. in der bevorzugten erfindungsgemäßen Zusammensetzung vorhanden sein. In der vorliegenden Erfindung ist es bevorzugt Antioxidanzien wie BHA und BHT in Kombination mit Ascorbinsäure zu verwenden, um den oxidativen Abbau von Dithranol zu verhindern. In einem erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel wird Dithranol alleine oder in Kombination mit Salicylsäure in einer Mischung von Tocopherolacetat und Arlamol E^® (Polyoxypropylen-15-stearylether) gelöst, die nicht-ionischen Oberflächenaktivstoff und Cholesterin enthält. Demgemäß wurde die gebildete ölige Phase mit wässriger Phase homogenisiert.
Es ist bekannt, dass jeder aktive Bestandteil/Arzneistoff in Form einer Lösung, im Vergleich zu einem festen, dispergierten, partikulären Arzneistoff, schnell durch die Haut diffundiert. In Übereinstimmung mit dieser Erfindung werden topische, pharmazeutische Zusammensetzungen hergestellt, die Dithranol in löslicher Form sogar in höheren Arzneistoff-Konzentrationen enthalten als es bisher erreichbar war, um sie somit wirksamer zu machen. Auf diese Weise können die aktiven Bestandteile in und durch die Haut eindringen, so dass sie kontinuierlich und in ausreichender Menge am Wirkungsort bereitgestellt werden.
Die Ölphase kann Lecithin (Phosphotidylcholin) oder andere synthetische, semisynthetische Lecithine alleine oder in Kombination enthalten, wie hydriertes Phosphatidylcholin, Phosphatidylethanolamin, Dipalmatoylphosphatidylcholin (DPPC), Dipalmatoylphosphatidylethanolamin (DPPE), Distearoylphosphatidylcholin (DSPC), Distearoylphosphatidylethanolamin (DSPE), Dioleylphosphatidylcholin (DOPC), Dioleylphosphatidylethanolamin (DOPE), Phosphatidsäure (PA), Phosphatidylserin (PS), Phosphatidylglycerin (PG) und ihre hydrierten Analoga.
Der bevorzugte Träger für Dithranol oder Dithranol mit Salicylsäure ist in Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung Tocopherolacetat oder eine Tocopherolacetat-Mischung. Die Konzentration von Tocopherolacetat in dem System, das für die Auflösung von Dithranol verwendet wird, kann von ungefähr 5 Gewichts-% bis ungefähr 40 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Gesamtzusammensetzung, reichen. Der bevorzugte Konzentrationsbereich ist jedoch von ungefähr 3% bis ungefähr 30%. Die Konzentration von Arlamol E^® (Polyoxypropylen-15-stearylether) kann von ungefähr 1 Volumen-% bis ungefähr 10 Volumen-%, bezogen auf das Volumen der Gesamtzusammensetzung, reichen. Der bevorzugte Konzentrationsbereich ist jedoch von ungefähr 3% bis ungefähr 7%.
In der vorliegenden Erfindung bezieht sich nichtionischer Oberflächenaktivstoff auf Fettsäureester und Ether von Triglyceriden, Diglyceriden oder Monoglyceriden, die einen HLB-Wert im Bereich von 4 bis 16, bevorzugt zwischen 8 und 14 haben. Beispiele nicht-ionischer Oberflächenaktivstoffe schließen ein, sind aber nicht begrenzt auf, Polyoxyl 60 hydriertes Rizinusöl (Cremophore^® RH-60), Polyoxyl 35 hydriertes Rizinusöl (Cremophore^® EL), Polyoxyl 40 hydriertes Rizinusöl (Cremophore^® RH-40), Sorbitanmonooleat (Span-80), Polyoxyethylen 20 Sorbitanmonooleat (Tween-80), Span 20 Polyglyceryl-3-oleat (Plurol Olique^®) PEG-32, Glycerylstearat (Gelucire53/10).
Die Konzentration von nicht-ionischem Oberflächenaktivstoff kann von ungefähr 0,5 Volumen-% bis ungefähr 5 Volumen-%, bezogen auf das Volumen der Gesamtzusammensetzung, reichen. Der bevorzugte Konzentrationsbereich ist jedoch von ungefähr 0,75 Volumen-% bis ungefähr 3 Volumen-%.
Die Konzentration von Cholesterin kann von ungefähr 0,1 Volumen-% bis ungefähr 2 Volumen-% der Zusammensetzung, bevorzugt von ungefähr 0,5 bis ungefähr 1,5% reichen. Das Lecithin kann in dem gemischten vesikulären System vorhanden sein und die Konzentration kann von 0,2 Volumen-% bis 10 Volumen-% der Gesamtzusammensetzung, bevorzugt von ungefähr 1% bis ungefähr 6% reichen.
In Übereinstimmung mit erfindungsgemäßen Ausführungsbeispielen können andere gewöhnlich verwendete Zusatzstoffe, die im Stand der Technik bekannt sind, wie Antioxidanzien, Chelatbildner, vorhanden sein. Antioxidanzien, die in Übereinstimmung mit einem erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel eingeschlossen werden können, sind Kombinationen von butyliertem Hydroxyanisol, butyliertem Hydroxytoluol und Ascorbinsäure-Chelatbildnern, einschließlich Dinatrium-EDTA. Die Konzentrationen von Antioxidanzien und Chelatbildnern können von ungefähr 0,01 Volumen-% bis ungefähr 0,5% Volumen-% der Gesamtzusammensetzung, bevorzugt ungefähr 0,1 Volumen-% bis ungefähr 0,5 Volumen-% reichen.
Die Teilchengröße des gemischten vesikulären Systems, das durch die vorliegende Erfindung erhalten wird, ist bevorzugt nicht größer als 450 nm. Dementsprechend ist in einem anderen erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel das gemischte vesikuläre System bevorzugt geliert. Unter den Geliermitteln, die verwendet werden können, sind Cellulosederivate wie Hydroxypropylmethylcellulose, Carbopol, Xanthan und andere hydrophile Polymere, wie Polyethylenoxid. In Abhängigkeit von der gewünschten Viskosität kann das Geliermittel allgemein in Mengen von ungefähr 0,1 Gewichts-% bis ungefähr 5 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, bevorzugt 0,5 Gewichts-% bis ungefähr 3 Gewichts-% hinzugegeben werden. Die Konzentration von Dithranol in dem gemischten vesikulären System kann gemäß einem erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel von ungefähr 0,01 Gewichts-% bis ungefähr 1,0 Gewichts-% in löslicher Form reichen.
Die Konzentration von Salicylsäure in dem gemischten vesikulären System kann gemäß einem erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel von ungefähr 0,1% bis ungefähr 3,0% in löslicher Form, bevorzugt von ungefähr 0,5 Gewichts-% bis 1,5 Gewichts-% reichen. Der vakuumgetrocknete Steinkohlenteer-Extrakt kann gemäß der vorliegenden Erfindung hergestellt werden, indem zuerst die viskose Steinkohlenteer-Masse in einer alkoholischen Lösung aus Polyoxyethylen 20 Sorbitanmonolaurat (Tween-80) 7 Tage lang dispergiert und eingeweicht wird. Der Extrakt wird dann filtriert und der Alkohol wird aus dem Filtrat mittels Vakuumverdampfung bei einer Temperatur von 35°C im Vakuumrotationsverdampfer entfernt, um vakuumgetrockneten Steinkohlenteer-Extrakt zu erhalten. Die Konzentration des vakuumgetrockneten Steinkohlenteer-Extrakts in dem erfindungsgemäßen gemischten vesikulären, System kann von ungefähr 0,01 Gewichts-% bis ungefähr 6,0 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, bevorzugt von ungefähr 0,25 Gewichts-% bis ungefähr 2 Gewichts-% reichen.
Diese Erfindung ist auf ein Verfahren zur Herstellung einer Öl-und-Wasser-Nanoemulsion mit einer Öl- und Wasserphase gerichtet, wobei in der Nanoemulsion eine Vielzahl von Doppelschicht-Vesiklen dispergiert sind, welche Dithranol alleine oder in Kombination mit Salicylsäure, solubilisiert in den öligen Schichten der Vesikel, zurückhalten. In Übereinstimmung mit dieser Erfindung wird die Nanoemulsion realisiert durch Bereitstellen einer Lö sung von Dithranol, das in dem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material gelöst ist, wie auch eines separaten wässrigen Mediums, welches solche Hilfsstoffe wie Stabilisatoren, Antioxidanzien etc. darin gelöst enthalten kann. Das wässrige Medium und die ölige Lösung werden zusammengemischt und dann homogenisiert, um eine homogene Emulsion zu bilden, welche die ölige Phase und die wässrige Phase enthält. Es kann jeder konventionelle Homogenisator verwendet werden, um diese Emulsions-Mischung zu homogenisieren. Diese Emulsion wird als nächstes einer Hochdruck-Homogenisierung bei Drucken von ungefähr 138 MPa bis ungefähr 207 MPa (ungefähr 20.000 psi bis ungefähr 30.000 psi) unterworfen. Im letzten Schritt wird die homogene Mischung, nachdem sie der Hochdruck-Homogenisierung unterworfen wurde, durch eine 0,45 μm Membran gegeben. Auf diese Weise wird die Öl-und-Wasser-Nanoemulsion hergestellt. Das ölige, nicht-ionische Lipid-Medium α-Tocopherolacetat enthält vor dem Mischen mit der wässrigen Phase Dithranol oder Dithranol in Kombination mit Salicylsäure, solubilisiert in der genannten Lipidphase, welche optional Polyoxypropylen-15-stearylether enthält.
Diese homogenisierte Mischung wird dann durch einen Hochdruck-Homogenisator bei einem Druck von 138 bis 207 MPa (20.000 bis 30.000 psi) geführt, gefolgt vom Durchleiten durch eine 0,45 μm Membran. Es wurde gefunden, dass das resultierende System ein gemischtes vesikuläres System ist, das Nanoemulsion mit Vesikeln umfasst, die durch Kombination von Tocopherolacetat, nicht-ionischem Oberflächenaktivstoff, Cholesterin und Lecithin gebildet werden, welche das Dithranol alleine oder in Kombination mit Salicylsäure in löslicher Form einschließen. In der vorliegenden Erfindung ist die Ölphasen-Zusammensetzung derart, dass sie nach dem Emulgieren und der Hochdruck- Homogenisierung eine Öl-in-Wasser-Emulsion zusammen mit der in-situ-Bildung von Doppelschicht-Vesikeln bildet, welche aus dem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material α-Tocopherolacetat, optional mit Polyoxypropylen-15-stearylether, bestehen. In Übereinstimmung mit dem erfindungsgemäßen Verfahren werden die Doppelschicht-Vesikel in situ nach dem Hochdruck-Homogemisierungsschritt gebildet und nicht separat zu dem System hinzugegeben.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung, die 0,5 Gewichts-% Dithranol, 1,15 Gewichts-% Salicylsäure und 0,58 Gewichts-% vakuumgetrockneten Steinkohlenteer-Extrakt aufweist, wurde klinisch an 12 Patienten mit Haut-Psoriasis getestet, und es wurde gefunden, dass sie im Vergleich zu konventioneller Dithranol-Salbe, die 1,1 Gewichts-% Dithranol, 1,15 Gewichts-% Salicylsäure und 5,3 Gewichts-% alkoholische Steinkohlenteer-Extrakt-Lösung enthält, genauso wirksam ist.
Beispiele
Die folgenden hierin dargelegten Beispiele veranschaulichen die Erfindung: Beispiel 1

– Erhitze Teil A unter Stickstoffgasspülung auf 50°C und mische, um eine homogene Lösung zu erhalten. Dann kühle auf Raumtemperatur.
– Mische Teil B mit Homogenisator.
– Gebe unter Homogenisieren Teil A in Teil B. Dann überführe die Mischung in Hochdruck-Homogenisator (APV Gaulin LAB 40) und homogenisiere sie 10–12 Durchläufe lang bei einem Druck von 207 MPa (30.000 psi). Die resultierende Dispersion wird durch eine 0,45 μm Membran gegeben, um das gemischte vesikuläre System mit einer mittleren Teilchengröße von weniger als 450 nm zu erhalten.
– Teil C, Xanthan-Gel wird separat hergestellt durch Hydratisieren von Xanthan in demineralisiertem Wasser, das Parabene enthält, bei einer Temperatur von 80–90°C, und man lässt abkühlen und einweichen bei Raumtemperatur. Dann füge obiges homogenisierte, gemischte vesikuläre System hinzu und mische, um die Gelkonsistenz zu erhalten. Füge abschließend Steinkohlenteer-Extrakt-Schlamm (vakuumgetrocknet) hinzu und mische sorgfältig, um die Endzusammensetzung zu erhalten.

Beschleunigte Stabilitäts-Studie:
Die gemischte vesikuläre Zusammensetzung von Beispiel 1 wurde in Tuben gefüllt und bei beschleunigten Temperaturbedingungen, 25°C, 37°C und 45°C 6 Monate lang aufbewahrt. Es wurden periodisch Proben auf den Dithranol- und Salicylsäuregehalt mittels HPLC-Analyse analysiert. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle tabelliert.
Ergebnis: Die gemischte vesikuläre Zusammensetzung ist über 6 Monate lang stabil, sogar bei einer Lagerung bei 37°C und 45°C, wie durch ihren Dithranol-Gehalt und Salicyläure-Gehalt bewiesen wird, der im Vergleich zum Anfangswert nicht drastisch reduziert ist. Beispiel 2

– Erhitze Teil A unter Stickstoffgasspülung auf 50°C und mische, um eine homogene Lösung zu erhalten. Dann kühle auf Raumtemperatur.
– Mische Teil B mit Homogenisator.
– Füge Teil A unter Homogenisieren in Teil B. Dann überführe die Mischung in einen Hochdruck-Homogenisator (APV Gaulin LAB 40) und homogenisiere 10–12 Durchläufe lang bei einem Druck von 207 MPa (30.000 psi). Die resultierende Dispersion wird durch eine 0,45 μm Membran gegeben, um das gemischte vesikuläre System mit einer mittleren Teilchengröße von weniger als 450 nm zu erhalten.
– Teil C, Xanthan-Gel wird separat hergestellt durch Hydratisieren von Xanthan in demineralisiertem Wasser, das Parabene enthält, bei einer Temperatur von 80–90°C, und man lässt abkühlen und einweichen bei Raumtemperatur. Dann füge obiges, homogenisierte, gemischte vesikuläre System hinzu und mische, um die Gelkonsistenz zu erhalten.

Beispiel 3
[Therapeutische Zusammensetzung ohne Polyoxypropylen-15-stearylether (Arlamol^®-E)]
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der in Beispiel 1 beschriebenen ist, außer dass α-Tocopherolacetat von 15 Gewichts-% auf 20 Gewichts-% erhöht wurde und Polyoxypropyen-15-stearylether (Arlamol^®-E) weggelassen wurde.
Beispiel 4
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der in Beispiel 1 beschriebenen ist, außer dass 3,0 Gewichts-% Ei-Lecithin (Lipoid E 80 S) durch Soja-Lecithin (Lipoid^® S75) ersetzt wurden.
Beispiel 5
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der in Beispiel 1 beschriebenen ist, außer dass 3,0 Gewichts-% Ei-Lecithin (Lipoid E 80 S) durch Dipalmitoylphosphatidylcholin (DPPC) ersetzt wurden.
Beispiel 6
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der in Beispiel 1 beschriebenen ist, außer dass 1,0 Gewichts-% Polyoxyl-40 hydriertes Rizinusöl durch 1,0 Gewichts-% Polysorbat 80 ersetzt wurde.
Beispiel 7
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der in Beispiel 1 beschriebenen ist, außer dass 1,0 Gewichts-% Polyoxyl-40 hydriertes Rizinusöl durch 1,0 Gewichts-% Span 20 (Sorbitanmonolaurat) ersetzt wurde.
Beispiel 8
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der aus Beispiel 1 ist, außer dass 1,0 Gewichts-% Polyoxyl-40-Rizinusöl durch 1,0 Gewichts-% Polyglyceryl-3-oleat (Plurol Olique^®) ersetzt wurde.
Beispiel 9
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der aus Beispiel 1 ist, außer dass 0,5 Gewichts-% Dithranol durch 0,1 Gewichts-% Dithranol ersetzt wurden und α-Tocopherolacetat von 15 Gewichts-% auf 10 Gewichts-% reduziert wurde.
Beispiel 10
Therapeutische Zusammensetzung, die gleich der aus Beispiel 1 ist, außer dass 0,5 Gewichts-% Dithranol durch 1,0 Gewichts-% Dithranol ersetzt wurden.
Beispiel 11 (Bildet keinen Teil der Erfindung) Dithranol-Salbe
Dithranol und Maisstärke wurden in geschmolzenem weißen Weichparaffin bei einer Temperatur von 65–70°C fein dispergiert und unter Mischen auf Raumtemperatur abgekühlt. Salicylsäure wurde in Steinkohlenteerlösung gelöst und zur Dithranol-Paraffin-Mischung hinzugegeben und gründlich gemischt, um Salbenkonsistenz zu erhalten.
Klinischer Test:
Die therapeutischen Zusammensetzungen, wie in den Beispielen 1, 2 und 11 beschrieben, wurden klinisch getestet und es wurde ein Vergleich angestellt. Es wurde dem klinischen Test-Protokoll gefolgt, wie es von Eugene J. Van Scott et al. im US-Patent Nr. 4287214 beschrieben wurde.
Von Psoriasis betroffene Haut ist hyperplastisch (verdickt), erythematös (rot oder entzündet) und hat dicke, adhärente Schuppen. Der Grad der Verdickung ist derart, dass Läsionen bis zu 1 mm gegenüber der benachbarten, normalen Haut erhöht sind; die Hautrötung ist gewöhnlich ein intensives Rot; die verdickten, adhärenten Schuppen bewirken, dass die Oberfläche der betroffenen Haut gekennzeichnet ist durch rau und uneben. Diese drei Attribute der Dicke, Farbe und Oberflächenbeschaffenheit, wie sie im US-Patent Nr. 4287214 beschrieben werden, wurden quantifiziert, um vergleichende Messungen des Verbesserungsgrades durch topisch angewendete therapeutische Zusammensetzungen – der erfindungsgemäßen therapeutischen Zusammensetzung (Beispiel 1 und Beispiel 2) und konventioneller Dithranol-Salbe (Beispiel 11), zu gestatten.
Verbesserungsgrad
Um festzustellen, ob die erfindungsgemäßen Dithranol-Zusammensetzungen (Beispiel 1 und Beispiel 2) therapeutisch wirksamer sind für die topische Behandlung von Psoriasis, als konventionelle Dithranol-Salbe (Beispiel 11), wurde in dieser Studie eine Gesamtzahl von mehr als 12 Patienten, die Psoriasis haben, getestet.
Die Behandlungsbereiche bei den Patienten, die Psoriasis haben, waren lokalisierte Läsionen von 8–20 cm Durchmesser. Die therapeutischen Zusammensetzungen wurden topisch durch den Patienten in einer Menge angewendet, die ausreicht, um die Behandlung abzudecken. Die Anwendungen wurden zwei- bis dreimal täglich und ohne okklusiven Verband durchgeführt. Die klinische Evaluierung des Verbesserungsgrades wurde im wöchentlichen Intervall durchgeführt. Die Behandlung wurde 4 Wochen lang fortgesetzt, sofern nicht vorher ein Verschwinden der Krankheit auftrat, und es wurde die Evaluierung des Verbesserungsgrads durchgeführt. Die Behandlungsergebnisse werden wie folgt zusammengefasst:
TABELLE 1: Effekt auf Psoriasis
TABELLE 2: Färbungs- und Irritationseffekt von topisch angewendeter Zusammensetzung auf der Haut
Ergebnis
Es wurde gefunden, dass erfindungsgemäße therapeutische Zusammensetzungen nicht-irritierend, nicht-färbend und therapeutisch effektiver sind, sogar bei niedrigen Dithranol-Konzentrationen (0,5 Gewichts-%), im Vergleich zu konventioneller Dithranol-Salbe, die 1,1 Gewichts-% Dithranol enthält.
DEFINITIONEN
Die Begriffe "Nanoemulsion" und "Mikro-Emulsion", wie sie hierin verwendet werden, beziehen sich auf Submikron-Emulsionen, die Emulsionen sind, welche eine dispergierte Phase besitzen, die einen mittleren Tropfendurchmesser unter 1 μm hat (siehe H. A. Lieberman, M. M. Rieger, G. S. Banker, "Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Volume 2, Second Edition, Revised and Expanded, Marcel Dekker, Inc., New York", 1996, Seite 49).
Der Begriff "Vesikel", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich insbesondere auf eine Doppelschicht-Vesikel, die eine Struktur ist, welche aus einer Kugel aus Lipid-Doppelschichten besteht, die etwas der wässrigen Phase einschließen. Es können mehrere Vesikel ineinander in verringerter Größe gebildet werden, wodurch eine Doppelschicht-Struktur konzentrischer Lipid-Doppelschicht-Kügelchen erzeugt wird, die durch Schichten aus Wasser oder wässriger Phase getrennt werden. Sie ähneln Liposomen.
Referenzen

US-Patent 3 981 996 September 1976 Leigh et al.
US-Patent 5 904 932 Mai 1976 Tom De Winger
US-Patent 4 954 345 September 1990 Joseph Muller
US-Patent 5 061 486 Oktober 1991 Martin Whitefield
US-Patent 4 367 224 Januar 1983 Van Scott et al.
US-Patent 5 894 019 April 1999 Hesse. et al.
US-Patent 4 895 727 Januar 1990 Larry M. Allen
US-Patent 4 438 052 März 1984 Weder et al.
US-Patent 6 328 988 Dezember 2001 Kathryn E. Uhrich
US-Patent 4 287 214 September 1981 Van Scott et al.
US-Patent 4 203 969 Mai 1980 Yarrow et al.
US-Patent 5 358 716 Oktober 1994 Laugier et al.
GB 2 157 173A Oktober 1985 Josef Muller et al.
C. Shyamala, C. Jayaraman; Topical Delivery of Erythromycin form Various Formulations: An in Vivo Hairless Mouse Study; J. Pharm. Sci.; Vol. 85; N.10; Oktober 1996, 1082–84.

Claims

Zusammensetzung, die solubilisiertes Dithranol enthält, wobei die genannte Zusammensetzung eine Mischung aus Doppelschicht-Vesikeln in einer Öl-und-Wasser-Nanoemulsion umfasst, worin eine ölige Lipidphase der genannten Doppelschicht-Vesikel und der genannten Nanoemulsion aus einem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material besteht, das Dithranol solubilisiert; dadurch gekennzeichnet, dass: das genannte nicht-ionische, ölige, flüssige Lipid-Material aus a-Tocopherolacetat alleine oder in Kombination mit Polyoxypropylen-15-stearylether besteht, und dadurch, dass: die genannten Doppelschicht-Vesikel in situ in einem Hochdruck-Homogenisierungsschritt gebildet werden.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin das genannte Dithranol in der Zusammensetzung in einer Menge von 0,01 Gewichts-% bis 1 Gewichts-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der genannten Zusammensetzung, vorliegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin die genannte ölige Lipidphase der genannten Vesikel und der genannten Nanoemulsion Salicylsäure gemeinsam mit Dithranol, solubilisiert in der genannten öligen Lipidphase enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 3, worin Salicylsäure in der Zusammensetzung in einer Menge von 0,1 Gewichts-% bis 3% Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 4, worin die Salicylsäure in einer Menge von 0,5 Gewichts-% bis 1,5 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin a-Tocopherolacetat in einer Menge von 3 Gewichts-% bis 40 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 6, worin a-Tocopherolacetat in einer Menge von 5 Gewichts-% bis 30 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 7, worin die ölige Lipidphase eine Mischung aus Polyoxypropylen-15-stearylether und a-Tocopherolacetat umfasst.
Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, worin die Zusammensetzung vakuumgetrockneten Steinkohlenteer-Extrakt in einer Menge von 0,1 Gewichts-% bis ungefähr 6 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 9, worin der Steinkohlenteer-Extrakt in einer Menge von 0,25 Gewichts-% bis 2,0 Gewichts-% der Zusammensetzung vorliegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, in welche ein Geliermittel in einer Menge eingeschlossen ist, die ausreicht, um ein Gel zu bilden.
Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, in welche ein Geliermittel in einer Menge eingeschlossen ist, die ausreicht, um eine Creme zu bilden.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin Polyoxypropylen-15-stearylether in einer Menge von 1 Gewichts-% bis 40 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Zusammensetzung, wie in einem der vorstehenden Ansprüche beansprucht, worin die mittlere Partikelgröße der genannten Vesikel nicht größer als 450 nm ist.
Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung, die solubilisiertes Dithranol enthält, wobei die genannte Zusammensetzung eine Mischung aus Doppelschicht-Vesikeln in einer Öl-und-Wasser-Nanoemulsion umfasst, worin eine ölige Lipidphase der genannten Doppelschicht-Vesikel und der genannten Nanoemulsion aus einem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material besteht, das Dithranol solubilisiert, wobei das Verfahren umfasst: a) Bereitstellen von sowohl einer Lösung aus Dithranol, das in einem nicht-ionischen, öligen, flüssigen Lipid-Material gelöst ist, als auch einem wässrigen Medium; b) Mischen der genannten öligen Lösung mit dem genannten wässrigen Medium, um eine Mischung zu bilden; c) Homogenisieren der genannten Mischung, um eine homogene Emulsion zu bilden, die eine ölige Phase und eine wässrige Phase enthält, und d) Unterwerfen der genannten homogenen Mischung einer Hochdruck-Homogenisierung bei Drucken von 138 MPa bis 207 MPa (20.000 psi bis 30.000 psi); dadurch gekennzeichnet, dass: das genannte nicht-ionische, ölige, flüssige Lipid-Material aus a-Tocopherolacetat alleine oder in Kombination mit Polyoxypropylen-15-stearylether besteht, und dadurch, dass: die genannten Doppelschicht-Vesikel in situ in dem genannten Hochdruck-Homogensierungsschritt (d) gebildet werden.
Verfahren nach Anspruch 15, worin das genannte Dithranol in der Zusammensetzung in einer Menge von 0,1 Gewichts-% bis 1 Gewichts-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der genannten Zusammensetzung, vorliegt.
Verfahren nach Anspruch 15, worin a-Tocopherolacetat in einer Menge von 3 Gewichts-% bis 40 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Verfahren nach Anspruch 17, worin das wässrige Medium natürliche oder semi-synthetische Lecithine enthält, die darin gelöst sind.
Verfahren nach Anspruch 18, worin die genannte ölige Lipidphase, vor dem Mischen mit dem genannten wässrigen Medium, Salicylsäure gemeinsam mit Dithranol, solubilisiert in der genannten öligen Lipidphase, enthält.
Verfahren nach Anspruch 19, worin die Salicylsäure in einer Menge von 0,1 Gewichts-% bis 3 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Verfahren nach Anspruch 20, worin die Salicylsäure in einer Menge von 0,5 Gewichts-% bis 1,5 Gewichts-%, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
Verfahren nach einem der Ansprüche 15 bis 21, das den weiteren Schritt umfasst: (e) Durchleiten der aus Schritt (d) erhaltenen homogenen Mischung durch eine 0,45 μm Membran.