DE4408534A1

DE4408534A1 - Substituted N-ethyl-glycine derivatives for the production of PNA and PNA / DNA hybrids

Info

Publication number: DE4408534A1
Application number: DE4408534A
Authority: DE
Inventors: Eugen Dr Uhlmann; Gerhard Dr Breipohl; Jochen Dr Knolle
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1994-03-14
Filing date: 1994-03-14
Publication date: 1995-09-28
Also published as: FI951128A0; FI951128A; AU1479995A; NO307705B1; CA2144474A1; CA2144474C; AU686729B2; NO950959D0; JPH07258222A; US6075143A; EP0672661A1; NO950959L; FI120199B

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue substituierte N-Ethyl-Glycinderivate zur Herstellung von PNA und PNA-/DNA-Hybriden wie in der gleichzeitig eingereichten Anmeldung "Peptid-Oligonucleotid-Derivate, deren Herstellung und Verwendung" (HOE 94/F057) beschrieben.The present invention relates to new substituted N-ethyl-glycine derivatives for Production of PNA and PNA / DNA hybrids as in the same time Filed application "peptide oligonucleotide derivatives, their preparation and Use "(HOE 94 / F057).

Peptide Nucleic Acids (PNA) sind DNA-analoge Verbindungen in denen das Deoxyribose-Phosphat-Gerüst durch ein Peptid-Oligomer ersetzt wurde. Die bisher in der Literatur (z. B. Michael Egholm, Peter E. Nielsen, Rolf H. Berg and Ole Buchardt, Science 1991, 254, 1497-1500; Ole Buchardt, Michael Egholm, Peter E. Nielsen and Rolf H. Berg, WO 92/20702) beschriebenen Synthesen verwenden als temporäre Schutzgruppe der Aminogruppe des Monomers die säurelabile tert.-Butyloxycarbonyl (Boc)-Schutzgruppe, die durch mittelstarke Säuren, wie z. B. Trifluoressigsäure abgespalten wird. Die Festphasensynthese von Oligomeren folgt dabei den üblichen Peptidsyntheseverfahren, wie sie z. B. von Merrifield (B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 2149) beschrieben wurde. Die Abspaltung des PNA-Oligomeres erfolgt dabei mit einer starken Säure, üblicherweise mit flüssigem Fluorwasserstoff.Peptide nucleic acids (PNA) are DNA-analogous compounds in which the Deoxyribose phosphate backbone was replaced by a peptide oligomer. The previously in literature (e.g. Michael Egholm, Peter E. Nielsen, Rolf H. Berg and Ole Buchardt, Science 1991, 254, 1497-1500; Ole Buchardt, Michael Egholm, Peter E. Nielsen and Rolf H. Berg, WO 92/20702) use the as a temporary protecting group of the amino group of the monomer acid-labile tert-butyloxycarbonyl (Boc) protective group, which is characterized by medium strength Acids such as B. trifluoroacetic acid is split off. Solid phase synthesis of oligomers follows the usual peptide synthesis methods, such as z. B. by Merrifield (B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 2149) has been. The PNA oligomer is split off with a strong one Acid, usually with liquid hydrogen fluoride.

Die wiederholte Behandlung mit Trifluoressigsäure und die anschließende Spaltung mit Fluorwasserstoff ist mit der Synthese von gemischten PNA/DNA- Sequenzen nicht kompatibel, da unter diesen Bedingungen die nucleosidische Bindung nicht stabil ist. Insbesondere werden die Purinnucleotide Desoxyguanosin und Desoxyadenosin mit starken Säuren an der N- glykosidischen Bindung rasch gespalten. Weiterhin wäre für die Synthese von derartigen Molekülen eine Verwendung von den üblichen DNA-Synthesizern und einer weitgehenden Beibehaltung der in diesen Geräten verwendeten Chemie besonders wünschenswert. Dies gilt auch für die Herstellung von PNA- Sequenzen mit der Hilfe solcher Geräte.The repeated treatment with trifluoroacetic acid and the subsequent Hydrogen fluoride cleavage is with the synthesis of mixed PNA / DNA Sequences not compatible, because under these conditions the nucleosidic Bond is not stable. In particular, the purine nucleotides Deoxyguanosine and deoxyadenosine with strong acids at the N- Glycosidic bond quickly cleaved. Furthermore, for the synthesis of such molecules use conventional DNA synthesizers and largely maintaining the chemistry used in these devices particularly desirable. This also applies to the production of PNA Sequences with the help of such devices.

Ziel der Erfindung ist es daher, Glycinderivate zur Verfügung zu stellen, die einen einfachen Aufbau von PNA und PNA-/DNA-Hybriden und die Verwendung von Syntheseautomaten ermöglichen.The aim of the invention is therefore to provide glycine derivatives that have a simple construction of PNA and PNA / DNA hybrids and the use of Enable synthesis machines.

Für diesen Zweck geeignete Substanzen sind die Verbindungen der Formel ISubstances suitable for this purpose are the compounds of the formula I.

worin
PG für eine gegen schwache Säuren labile Aminoschutzgruppe vom Urethantyp, wie z. B. 1-(1-Adamantyl)1-methylethoxycarbonyl (Adpoc), 1- (3,5-di-tert.-butylphenyl)1-methylethoxycarbonyl (t-Bumeoc) und 1- Methyl-1-(4-biphenyl)ethyloxycarbonyl (Bpoc), 3,5-Dimethoxyphenyl-2- propyl-2-oxycarbonyl (Ddz) oder vom Trityl-Typ, wie Triphenylmethyl (Trt), (4-Methoxyphenyl)diphenylmethyl (Mmt), (4- Methylphenyl)diphenylmethyl (Mtt), Di-(4-methoxyphenyl)phenylmethyl (Dmt) und 9-(9-Phenyl)xanthenyl (Pixyl),
X für NH, O oder S, bevorzugt für NH oder O,
Y für CH₂, NH oder O, bevorzugt für CH₂, und
B′ für in der Nucleotidchemie übliche Basen, beispielsweise für natürliche Basen wie Adenin, Cytosin, Guanin, Thymin und Uracil oder unnatürliche Basen, wie Purin, 2.6-Diaminopurin, 7-Deazaadenin, 7-Deazaguanin, N⁴N⁴-Ethanocytosin, N⁶N⁶-Ethano-2. 6-diaminopurin, 5-Methylcytosin, 5- (C₃-C₆)-Alkinyl-uracil, 5-(C₃-C₆)-Alkinyl-cytosin, 5-Fluor-uracil oder Pseudoisocytosin, deren exocyclische Amino bzw. Hydroxygruppen durch geeignete bekannte Schutzgruppen, wie die Benzoyl-, Isobutyryl-, Acetyl-, Phenoxyacetyl-, 4-(t-Butyl)-benzoyl-, 4-(t-Butyl)-Phenoxyacetyl-, 4- (Methoxy)-benzoyl-, 2-(4-Nitrophenyl)ethyl-oxycarbonyl-, 2-(2,4- Dinitrophenyl)ethyl-oxycarbonyl-, 9-Fluorenylmethoxycarbonyl- oder Formamidin-Gruppe, bevorzugt die Benzoyl-, Isobutyryl-, Acetyl-, Phenoxyacetyl-, 4-(t-Butyl)-benzoyl-, 4-(Methoxy)-benzoyl-Gruppe, geschützt sind, stehen, sowie deren Salze, bevorzugt deren Salze mit tert. organischen Basen, wie z. B. Triethylamin oder Pyridin.wherein
PG for an amino protective group of urethane type which is labile against weak acids, such as e.g. B. 1- (1-Adamantyl) 1-methylethoxycarbonyl (Adpoc), 1- (3,5-di-tert-butylphenyl) 1-methylethoxycarbonyl (t-Bumeoc) and 1-methyl-1- (4-biphenyl) ethyloxycarbonyl (Bpoc), 3,5-dimethoxyphenyl-2-propyl-2-oxycarbonyl (Ddz) or of the trityl type, such as triphenylmethyl (Trt), (4-methoxyphenyl) diphenylmethyl (Mmt), (4-methylphenyl) diphenylmethyl ( Mtt), di- (4-methoxyphenyl) phenylmethyl (Dmt) and 9- (9-phenyl) xanthenyl (Pixyl),
X is NH, O or S, preferably NH or O,
Y for CH₂, NH or O, preferably for CH₂, and
B 'for bases customary in nucleotide chemistry, for example for natural bases such as adenine, cytosine, guanine, thymine and uracil or unnatural bases such as purine, 2,6-diaminopurine, 7-deazaadenine, 7-deazaguanine, N⁴N⁴-ethanocytosine, N⁶N⁶-ethano- 2nd 6-diaminopurine, 5-methylcytosine, 5- (C₃-C₆) alkynyl-uracil, 5- (C₃-C₆) -alkynyl-cytosine, 5-fluoro-uracil or pseudoisocytosine, their exocyclic amino or hydroxyl groups by suitable known protective groups such as the benzoyl, isobutyryl, acetyl, phenoxyacetyl, 4- (t-butyl) benzoyl, 4- (t-butyl) phenoxyacetyl, 4- (methoxy) benzoyl, 2- (4th -Nitrophenyl) ethyl-oxycarbonyl, 2- (2,4-dinitrophenyl) ethyl-oxycarbonyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl or formamidine group, preferably the benzoyl, isobutyryl, acetyl, phenoxyacetyl, 4- (t- Butyl) benzoyl, 4- (methoxy) benzoyl group, are protected, and their salts, preferably their salts with tert. organic bases, such as. B. triethylamine or pyridine.

Verbindungen der Formel l mit Y in der Bedeutung CH₂ können beispielsweise dadurch erhalten werden, daß man eine Verbindung der Formel IICompounds of formula I with Y in the meaning CH₂ can for example can be obtained by a compound of formula II

worin
PG und X wie oben definiert sind, und
R¹ Wasserstoff oder eine Esterschutzgruppe, wie z. B. Methyl, Ethyl, Butyl oder 2-(Methoxy-ethoxy)-ethyl, bedeutet,
mit einer Verbindung der Formel IIIwherein
PG and X are as defined above, and
R¹ is hydrogen or an ester protecting group, such as. B. methyl, ethyl, butyl or 2- (methoxy-ethoxy) -ethyl means
with a compound of formula III

worin
B′ wie oben definiert ist und
Y für CH₂ steht,
bei 0-45°C, bevorzugt bei Raumtemperatur, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z. B. DMF, Acetonitril, Dichlormethan oder Mischungen dieser Lösungsmittel unter Verwendung eines in der Peptidchemie üblichen Kupplungsreagenzes, wie z. B. Carbodiimiden, Phosphonium-Reagenzien, Uronium-Reagenzien, Säurehalogeniden, aktivierten Estern zu einer Verbindung der Formel IVwherein
B 'is as defined above and
Y represents CH₂,
at 0-45 ° C, preferably at room temperature, in a suitable solvent, such as. B. DMF, acetonitrile, dichloromethane or mixtures of these solvents using a coupling reagent customary in peptide chemistry, such as. B. carbodiimides, phosphonium reagents, uronium reagents, acid halides, activated esters to a compound of formula IV

worin
PG, X, B′ und R¹ wie oben definiert sind,
umsetzt und anschließend diese Verbindung durch Abspaltung der Esterschutzgruppe R¹ unter schwach alkalischen Bedingungen mit Alkalilauge, wie z. B. NaOH, LiOH, KOH, oder auch enzymatisch mit Hilfe von Esterasen oder Lipasen bei 0-50°C, bevorzugt bei Raumtemperatur, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dioxan, Wasser, Tetrahydrofuran, Methanol, Wasser oder Gemischen aus diesen Lösungsmitteln in eine Verbindung der Formel I überführt.wherein
PG, X, B ′ and R¹ are as defined above,
implemented and then this compound by splitting off the ester protecting group R¹ under weakly alkaline conditions with alkali metal hydroxide solution, such as. B. NaOH, LiOH, KOH, or enzymatically with the aid of esterases or lipases at 0-50 ° C, preferably at room temperature, in a suitable solvent such as dioxane, water, tetrahydrofuran, methanol, water or mixtures of these solvents in one Transfer compound of formula I.

In der Peptidsynthese übliche Aktivierungsmethoden sind z. B. in Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Band 15/2 oder weitere Reagenzien, wie z. B. BOP (B. Castro, J.R. Dormoy, G. Evin and C. Selve, Tetrahedron Lett. 1975, 1219-1222), PyBOP (J. Coste, D. Le-Nguyen und B. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 205-208), BroP (J. Coste, M.-N. Dufour, A. Pantaloni und B. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 669-672), PyBroP (J. Coste, E. Frerot, P. Jouin und B. Castro, Tetrahedron Lett. 1991, 1967-1970) und Uronium-Reagenzien, wie z. B. HBTU (V. Dourtoglou, B. Gross, V. Lambropoulou, C. Zioudrou, Synthesis 1984, 572-574), TBTU, TPTU, TSTU, TNTU, (R. Knorr, A. Trzeciak, W. Bannwarth and D. Gillessen, Tetrahedron Letters 1989, 1927-1930), TOTU (EP-A 0 460 446), HATU (L.A. Carpino, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397- 4398), HAPyU, TAPipU (A. Ehrlich, S. Rothemund, M. Brudel, M. Beyermann, L.A. Carpino und M. Bienert, Tetrahedron Lett. 1993, 4781-4784), BOI (K. Akali, N. Kuriyama, T. Kimura, Y. Fujiwara und Y. Kiso, Tetrahedron Lett. 1992, 3177-3180) oder Säurechloride bzw. Säurefluoride (L. A. Carpino, H. G. Chao, M. Beyermann and M. Bienert, J. Org. Chem., 56 (1991), 2635; J.-N. Bertho, A. Loffet, C. Pinel, F. Reuther and G. Sennyey in E. Giralt and D. Andreu (Eds.) Peptides 1990, Escom Science Publishers B. V.1991, pp. 53-54; J. Green und K. Bradley, Tetrahedron 1993, 4141-4146), 2,4,6-Mesitylensulfonyl-3-nitro- 1,2,4-triazolid (MSNT) (B. Blankemeyer-Menge, M. Nimitz und R. Frank, Tetrahedron Lett. 1990, 1701-1704), 2,5-Diphenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4- hydroxythiophendioxid (TDO) (R. Kirstgen, R.C. Sheppard, W. Steglich, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1987, 1870-1871) oder aktivierte Ester (D. Hudson) Peptide Res. 1990, 51-55) in den jeweiligen Literaturstellen beschrieben.Activation methods customary in peptide synthesis are e.g. B. in Houben-Weyl, Methods of organic chemistry, Volume 15/2 or other reagents, such as e.g. B. BOP (B. Castro, J.R. Dormoy, G. Evin and C. Selve, Tetrahedron Lett. 1975, 1219-1222), PyBOP (J. Coste, D. Le-Nguyen and B. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 205-208), BroP (J. Coste, M.-N. Dufour, A. Pantaloni and B. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 669-672), PyBroP (J. Coste, E. Frerot, P. Jouin and B. Castro, Tetrahedron Lett. 1991, 1967-1970) and uronium reagents, such as B. HBTU (V. Dourtoglou, B. Gross, V. Lambropoulou, C. Zioudrou, Synthesis 1984, 572-574), TBTU, TPTU, TSTU, TNTU, (R. Knorr, A. Trzeciak, W. Bannwarth and D. Gillessen, Tetrahedron Letters 1989, 1927-1930), TOTU (EP-A 0 460 446), HATU (L.A. Carpino, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397- 4398), HAPyU, TAPipU (A. Ehrlich, S. Rothemund, M. Bruderel, M. Beyermann, L.A. Carpino and M. Bienert, Tetrahedron Lett. 1993, 4781-4784), BOI (K. Akali, N. Kuriyama, T. Kimura, Y. Fujiwara and Y. Kiso, Tetrahedron Lett. 1992, 3177-3180) or acid chlorides or acid fluorides (L.A. Carpino, H.G. Chao, M. Beyermann and M. Bienert, J. Org. Chem., 56 (1991), 2635; J.-N. Bertho, A. Loffet, C. Pinel, F. Reuther and G. Sennyey in E. Giralt and D. Andreu (Eds.) Peptides 1990, Escom Science Publishers B.V. 1991, pp. 53-54; J. Green and K. Bradley, Tetrahedron 1993, 4141-4146), 2,4,6-mesitylenesulfonyl-3-nitro- 1,2,4-triazolide (MSNT) (B. Blankemeyer-Menge, M. Nimitz and R. Frank, Tetrahedron Lett. 1990, 1701-1704), 2,5-diphenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4- hydroxythiophene dioxide (TDO) (R. Kirstgen, R.C. Sheppard, W. Steglich, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1987, 1870-1871) or activated esters (D. Hudson) Peptide Res. 1990, 51-55) in the respective literature references described.

Bevorzugt ist die Verwendung von Carbodiimiden, z. B. Dicyclohexylcarbodiimid oder Diisopropylcarbodiimid. Bevorzugt verwendet werden ebenfalls Phosphonium-Reagenzien, wie z. B. PyBOP oder PyBroP, Uronium-Reagenzien, wie z. B. HBTU, TBTU, TPTU, TSTU, TNTU, TOTU oder HATU, BOI oder Säurechloride bzw. Säurefluoride.Preferred is the use of carbodiimides, e.g. B. Dicyclohexylcarbodiimide or diisopropylcarbodiimide. Are also preferably used Phosphonium reagents, such as. B. PyBOP or PyBroP, uronium reagents, such as B. HBTU, TBTU, TPTU, TSTU, TNTU, TOTU or HATU, BOI or Acid chlorides or acid fluorides.

Für die Synthese der Verbindungen der Formel II werden Aminoethylglycin, Hydroxyethylglycin, Mercaptoethylglycin oder deren entsprechende Ester mit der entsprechenden gegen schwache Säuren labilen Schutzgruppe versehen. Die Einführung der gegen schwache Säuren labilen Schutzgruppe erfolgt dabei mit an sich literaturbekannten, zum Teil modifizierten Verfahren. Geeignete Reagenzien sind z. B. t-Bumeoc-fluorid, Adpoc-azid, Bpoc-azid, Ddz- (phenyl)carbonat, Trt-Cl, Mtt-Cl, Mmt-Cl, Dmt-Cl, Pixyl-Cl. Bei dieser Umsetzung kann die Löslichkeit des Aminoethylglycins unter gleichzeitigem Schutz der Säurefunktion durch Umsetzung mit üblichen Silylierungsreagenzien, wie z. B. Bis-Trimethylsilylacetamid, verbessert werden. Die Abspaltung dieser temporären Schutzgruppe erfolgt nach der Umsetzung mit den Schutzgruppenreagenzien durch Zugabe von Wasser oder Alkoholen zur Reaktionsmischung. Das als Ausgangsmaterial verwendete Aminoethylglycin oder der entsprechende Aminoethylglycinester werden nach literaturbekannter Methode (E.P. Heimer, H.E. Gallo-Torres, A.M. Felix, M. Ahmad, T.J. Lambros, F. Scheidl and J. Meienhofer Int. J. Peptide Protein Res. 23, 1984, 203-211) 2- Aminoethylglycin (H-Aeg-OH) hergestellt.For the synthesis of the compounds of formula II, aminoethylglycine, Hydroxyethylglycine, mercaptoethylglycine or their corresponding esters with the appropriate protection group unstable against weak acids. The The protective group, which is unstable against weak acids, is also introduced per se known, partly modified processes. Suitable Reagents are e.g. B. t-Bumeoc fluoride, Adpoc-azide, Bpoc-azide, Ddz- (phenyl) carbonate, Trt-Cl, Mtt-Cl, Mmt-Cl, Dmt-Cl, Pixyl-Cl. In this implementation can the solubility of aminoethylglycine while protecting the Acid function by reaction with conventional silylation reagents, such as. B. Bis-trimethylsilylacetamide, can be improved. The split off of this temporary protection group takes place after implementation with the Protecting group reagents by adding water or alcohols Reaction mixture. The aminoethylglycine used as the starting material or the corresponding aminoethylglycine ester are known from the literature Method (E.P. Heimer, H.E. Gallo-Torres, A.M. Felix, M. Ahmad, T.J. Lambros, F. Scheidl and J. Meienhofer Int. J. Peptide Protein Res. 23, 1984, 203-211) 2- Aminoethylglycine (H-Aeg-OH) produced.

Ein weiteres Verfahren zur Herstellung von Aminoethylglycin besteht in der reduktiven Aminierung von Glyoxylsäure mit Ethylendiamin und ist in der gleichzeitig eingereichten Anmeldung mit dem Titel "Verfahren zur Herstellung von Aminoethylglycin" (HOE 94/F 061) beschrieben.Another process for the preparation of aminoethylglycine consists in reductive amination of glyoxylic acid with ethylenediamine and is in the Simultaneously filed application entitled "Process for Manufacturing of aminoethylglycine "(HOE 94 / F 061).

Die Synthese von 2-Hydroxyethylglycin bzw. 2-Mercaptoethylglycin erfolgt z. B. durch reduktive Aminierung von Glyoxylsäure oder Glyoxylsäureestern mit Aminoethanol oder Cysteamin mit Wasserstoff an Palladium auf Kohle oder im Falle von Mercaptoethylglycin bevorzugt mit Natriumcyanoborhydrid oder Natrium-triacetoxy-borhydrid als Reduktionsmittel.The synthesis of 2-hydroxyethylglycine or 2-mercaptoethylglycine takes place, for. B. by reductive amination of glyoxylic acid or glyoxylic acid esters with Aminoethanol or cysteamine with hydrogen on palladium on carbon or in Case of mercaptoethylglycine preferred with sodium cyanoborohydride or Sodium triacetoxy borohydride as a reducing agent.

Die Nucleobasen-Essigsäurederivate der Formel III können durch Alkylierung der entsprechenden Nucleobasen oder der in der exocyclischen Hydroxy- oder Aminofunktion geschützten Nucleobasen mit Chloressigsäure, Bromessigsäure, Jodessigsäure oder deren Estern erhalten werden. Gegebenenfalls werden dabei zur selektiven Alkylierung zusätzlich temporäre Schutzgruppen an der Nucleobase eingeführt. Als Schutzgruppe für die Nucleobasen können alle mit der gegen schwache Säuren labilen Schutzgruppe PG kompatible Schutzgruppen verwendet werden. Für die exocyclische Aminofunktion werden bevorzugt Schutzgruppen, wie die Benzoyl-, Isobutyryl-, Acetyl-, Phenoxyacetyl-, 4-(t- Butyl)-benzoyl-, 4-(t-Butyl)-Phenoxyacetyl-, 4-(Methoxy)-benzoyl-, 2-(4- Nitrophenyl)ethyl-oxycarbonyl-, 2-(2,4-Dinitrophenyl)ethyl-oxycarbonyl-, 9- Fluorenylmethoxycarbonyl- oder Formamidin-Gruppe verwendet. Insbesondere bevorzugt sind die Benzoyl-, Isobutyryl-, 4-(t-Butyl)-benzoyl-, 2-(4- Nitrophenyl)ethyl-oxycarbonyl-, 2-(2,4-Dinitrophenyl)ethyl-oxycarbonyl-, 9- Fluorenylmethoxycarbonyl-, 4-(Methoxy)-benzoyl- oder para-(t-Butyl)- Phenoxyacetyl-, para-Nitrophenyl-2-ethyl-oxycarbonyl-Gruppe.The nucleobase acetic acid derivatives of formula III can by alkylation of the corresponding nucleobases or those in the exocyclic hydroxy or Amino function protected nucleobases with chloroacetic acid, bromoacetic acid, Iodoacetic acid or its esters can be obtained. If necessary, be there for selective alkylation, additional temporary protective groups on the Nucleobase introduced. As a protective group for the nucleobases, everyone can use the protective group PG, which is labile against weak acids be used. Preferred for the exocyclic amino function Protecting groups such as the benzoyl, isobutyryl, acetyl, phenoxyacetyl, 4- (t- Butyl) benzoyl, 4- (t-butyl) phenoxyacetyl, 4- (methoxy) benzoyl, 2- (4- Nitrophenyl) ethyl-oxycarbonyl-, 2- (2,4-dinitrophenyl) ethyl-oxycarbonyl-, 9- Fluorenylmethoxycarbonyl or formamidine group used. Especially benzoyl-, isobutyryl-, 4- (t-butyl) -benzoyl-, 2- (4- Nitrophenyl) ethyl-oxycarbonyl-, 2- (2,4-dinitrophenyl) ethyl-oxycarbonyl-, 9- Fluorenylmethoxycarbonyl-, 4- (methoxy) -benzoyl- or para- (t-butyl) - Phenoxyacetyl, para-nitrophenyl-2-ethyl-oxycarbonyl group.

Ein alternatives Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I mit Y in der Bedeutung CH₂ besteht darin, daß man
eine Verbindung der Formel IIAn alternative process for the preparation of the compounds of formula I with Y in the meaning CH₂ is that one
a compound of formula II

worin
PG und X wie oben definiert sind und
R¹ Wasserstoff oder eine temporäre Silylschutzgruppe, wie z. B. Trimethylsilyl, bedeutet,
mit einer Verbindung der Formel Vwherein
PG and X are as defined above and
R¹ is hydrogen or a temporary silyl protecting group such as e.g. B. trimethylsilyl means
with a compound of formula V

B′-CH₂-CO-R² (V),B'-CH₂-CO-R² (V),

worin
B′ wie oben definiert ist und
R² Halogen, wie z. B. Fluor, Chlor oder Brom, oder den Rest eines Aktivesters, wie z. B. OBt, OObt, OPfp, ONSu, bedeutet,
bei 0-40°C, bevorzugt 20-30°C, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie zum Beispiel DMF, NMP, Acetonitril, Dichlormethan oder Mischungen dieser Lösungsmittel umsetzt, wobei gegebenenfalls der temporäre Schutz der Säurefunktion in der Verbindung der Formel II durch Umsetzung mit üblichen Silylierungsreagenzien, wie z. B. Bis-Trimethylsilyacetamid, und die Abspaltung dieser temporären Schutzgruppe - nach der Umsetzung mit der Verbindung der Formel V - durch Zugabe von Wasser oder Alkoholen zur Reaktionsmischung erfolgen kann.wherein
B 'is as defined above and
R² halogen, such as. B. fluorine, chlorine or bromine, or the rest of an active ester, such as. B. OBt, OObt, OPfp, ONSu, means
at 0-40 ° C, preferably 20-30 ° C, in a suitable solvent such as DMF, NMP, acetonitrile, dichloromethane or mixtures of these solvents, where appropriate, the temporary protection of the acid function in the compound of formula II by reaction with common silylation reagents, such as. B. bis-trimethylsilyacetamide, and the cleavage of this temporary protective group - after the reaction with the compound of formula V - can be done by adding water or alcohols to the reaction mixture.

Ein weiteres alternatives Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I mit Y in der Bedeutung CH₂ besteht darin, daß man eine Verbindung der Formel IIAnother alternative method of making the compounds of formula I with Y in the meaning CH₂ is that one a compound of formula II

worin
PG und X wie oben definiert sind und
R¹ eine Esterschutzgruppe, wie z. B. Methyl, Ethyl, Butyl, 2-(Methoxy ethoxy)-ethyl etc., bedeutet,
mit einem Halogen-essigsäurederivat, wie z. B. Chloressigsäurechlorid, Bromessigsäurebromid, Bromessigsäurechlorid oder Jodessigsäurechlorid, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie z. B. Tetrahydrofuran, Dichlormethan oder DMF, mit einer Hilfsbase, wie z. B. Triethylamin, N-Ethylmorpholin oder Diisopropylethylamin, zur Verbindung der Formel VIwherein
PG and X are as defined above and
R¹ is an ester protecting group, such as. B. methyl, ethyl, butyl, 2- (methoxy ethoxy) ethyl etc., means
with a halogen-acetic acid derivative, such as. B. chloroacetic acid chloride, bromoacetic acid bromide, bromoacetic acid chloride or iodoacetic acid chloride, in a suitable solvent, such as. B. tetrahydrofuran, dichloromethane or DMF, with an auxiliary base, such as. B. triethylamine, N-ethylmorpholine or diisopropylethylamine, for the compound of formula VI

worin
Hal Cl, Br, I, bevorzugt Br oder Cl, ganz besonders bevorzugt Cl, bedeutet
und
PG, X und R¹ wie oben definiert sind,
umsetzt,
diese Zwischenverbindung der Formel VI mit der gegebenenfalls geschützten Nucleobase B′ und einer Hilfsbase, z. B. Kaliumcarbonat, in einem geeigneten Lösungsmittel, z. B. DMF oder NMP, zur Verbindung der Formel IVwherein
Hal is Cl, Br, I, preferably Br or Cl, very particularly preferably Cl
and
PG, X and R 1 are as defined above,
implements
this intermediate compound of formula VI with the optionally protected nucleobase B 'and an auxiliary base, for. Potassium carbonate, in a suitable solvent, e.g. B. DMF or NMP, for the compound of formula IV

umsetzt,
anschließend diese Verbindung durch Abspaltung der Esterschutzgruppe R¹ mit Alkalilauge, wie z. B. NaOH, LiOH, KOH, oder auch enzymatisch mit Hilfe von Esterasen oder Lipasen bei 0-50°C, bevorzugt bei Raumtemperatur, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dioxan, Wasser, Tetrahydrofuran, Methanol, Wasser oder Gemischen aus diesen Lösungsmitteln in eine Verbindung der Formel I überführt.implements
then this compound by splitting off the ester protecting group R¹ with alkali metal solution, such as. B. NaOH, LiOH, KOH, or enzymatically with the aid of esterases or lipases at 0-50 ° C, preferably at room temperature, in a suitable solvent such as dioxane, water, tetrahydrofuran, methanol, water or mixtures of these solvents in one Transfer compound of formula I.

Verbindungen der Formel I mit Y in der Bedeutung O oder NH werden dadurch erhalten, daß man eine Verbindung der Formel IICompounds of formula I with Y in the meaning O or NH are thereby get that one a compound of formula II

worin
PG und X wie oben definiert sind und
R¹ eine Esterschutzgruppe, wie z. B. Methyl, Ethyl, Butyl, 2-(Methoxy ethoxy)-ethyl, bzw. eine temporäre Esterschutzgruppe, wie z. B. Trimethylsilyl, bedeutet,
mit einer Verbindung der Formel VIIwherein
PG and X are as defined above and
R¹ is an ester protecting group, such as. As methyl, ethyl, butyl, 2- (methoxy ethoxy) ethyl, or a temporary ester protecting group, such as. B. trimethylsilyl means
with a compound of formula VII

B′-Y-CO-R³ (VII),B′-Y-CO-R³ (VII),

worin
B′ wie oben definiert ist,
Y O oder NH bedeutet und
R³ Cl, ONp, ONSu bedeutet,
bei 0-40°C, bevorzugt 20-30°C, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie DMF, Acetonitril oder Dichlormethan, oder Mischungen dieser Lösungsmittel umsetzt und anschließend die Esterschutzgruppe R¹ mit Alkalilauge, wie z. B. NaOH, LiOH, KOH, oder auch enzymatisch mit Hilfe von Esterasen oder Lipasen bei 0-50°C, bevorzugt bei Raumtemperatur, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dioxan, Wasser, Tetrahydrofuran, Methanol, Wasser oder Gemischen aus diesen Lösungsmitteln abspaltet. wherein
B ′ is as defined above,
YO or NH means and
R³ Cl, ONp, ONSu means
at 0-40 ° C, preferably 20-30 ° C, in a suitable solvent such as DMF, acetonitrile or dichloromethane, or mixtures of these solvents and then reacting the ester protecting group R¹ with an alkali metal hydroxide solution, such as. B. NaOH, LiOH, KOH, or enzymatically with the aid of esterases or lipases at 0-50 ° C, preferably at room temperature, in a suitable solvent, such as dioxane, water, tetrahydrofuran, methanol, water or mixtures of these solvents.

Die als Ausgangsmaterial für die letztere Reaktion benötigten N-Amino-bzw. N- Hydroxy-Nucleobasen werden nach bekannten Verfahren wie z. B. bei K. Kohda, I. Kobayashi, K. Itano, S. Asano, Y. Kawazoe (Tetrahedron 49, 3947-3958 (1993)) beschrieben erhalten und dann mit Phosgen oder Chlorameisensäureestern zu den Carbamaten oder Carbonaten der Formel VII umgesetzt.The N-amino or. Required as starting material for the latter reaction. N- Hydroxy nucleobases are by known methods such. B. with K. Kohda, I. Kobayashi, K. Itano, S. Asano, Y. Kawazoe (Tetrahedron 49, 3947-3958 (1993)) and then with phosgene or Chloroformic acid esters to the carbamates or carbonates of the formula VII implemented.

Die für Aminosäuren verwendeten Abkürzungen entsprechen dem in der Peptidchemie üblichen drei Buchstaben-Code wie er in Europ. J. Biochem. 138, 9 (1984) beschrieben ist. Weitere verwendete Abkürzungen sind nachfolgend aufgelistet.The abbreviations used for amino acids correspond to those in the Peptide chemistry usual three letter code as described in Europ. J. Biochem. 138, 9 (1984). Other abbreviations used are below listed.

Aeg N-(2-Aminoethyl)glycyl, -NH-CH₂-CH₂-NH-CH₂-CO-
Aeg(A^MeOBz) N-(2-Aminoethyl)-N-((9-(N⁶-4-methoxybenzoyl)-adenosyl)acetyl) glycyl
Aeg(C^Bz) N-(2-Aminoethyl)-N-((1-(N⁴-benzoyl)-cytosyl)acetyl)-glycyl
Aeg(C^MeOBz) N-(2-Aminoethyl)-N-((1-(N⁴-4-methoxybenzoyl)-cytosyl)acetyl) glycyl
Aeg(C^tBuBz) N-(2-Aminoethyl)-N-((1-(N⁴-4-tert.butylbenzoyl)-cytosyl)acetyl) glycyl
Aeg(G^iBu) N-(2-Aminoethyl)-N-((9-(N²-isobutyryl)-guanosyl)acetyl)-glycyl
Aeg(T) N-(2-Aminoethyl)-N-((1-thyminyl)acetyl)-glycyl
Bnpeoc 2,2-[Bis(4-nitrophenyl)]-ethoxycarbonyl)
Boc tert.-Butyloxycarbonyl
BOI 2-(Benzotriazol-1-yl)oxy-1,3-dimethyl-imidazolidinium hexafluorphosphat
BOP Benzotriazolyl-1-oxy-tris(dimethylamino)-phosphonium hexafluorphosphat
BroP Brom-tris(dimethylamino)-phosphonium-hexafluorphosphat
BSA N,O-Bis-(trimethylsilyl)-acetamid
But tert.-Butyl
Bz Benzoyl
Bzl Benzyl
Cl-Z 4-Chlor-benzyloxycarbonyl
CPG Controlled Pore Glas
DBU 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en(1,5-5)
DCM Dichlormethan
Ddz 3.5-Dimethoxyphenyl-2-propyl-2-oxycarbonyl
DMF Dimethylformamid
DMT 4,4′-Dimethoxytriphenylmethyl
Dmt Di-(4-methoxyphenyl)phenylmethyl,
Dnpeoc 2-(2,4-Dinitrnphenyl)-ethoxycarbonyl
FAM Fluorescein-Rest
Fm 9-Fluorenylmethyl
Fmoc 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl
H-Aeg-OH N-(2-Aminoethyl)glycin
HAPyU O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-bis(tetramethylen)uronium hexafluorphosphat
HATU O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorphosphat
HBTU O-(Benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorphosphat
HOBt 1-Hydroxybenzotriazol
HONSu N-Hydroxysuccinimid
HOObt 3-Hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzotriazin
iBu Isobutyryl
MeOBz 4-Methoxybenzoyl
Mmt 4-Methoxytriphenylmethyl
Moz 4-Methoxybenzyloxycarbonyl
MSNT 2,4,6-Mesitylensulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazolid
Mtt 4-Methylphenyl)diphenylmethyl
NMP N-Methylpyrrolidin
Oeg N-(2-Oxyethyl)glycyl, -O-CH₂-CH₂-NH-CH₂-CO-
Pixyl 9-(9-Phenyl)xanthenyl
PyBOP Benzotriazolyl-1-oxy-tripyrrolidinophosphonium-hexafluorphosphat
PyBroP Brom-tripyrrolidinophosphonium-hexafluorphosphat
TAPipU O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-bis(pentamethylen)uronium tetrafluordborat
TBTU O-(Benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-tetrafluoroborat
tBu tert.-Butyl
tBuBz 4-tert.Butylbenzoyl
TDBTU O-(3,4-Dihydro-4-oxo-1,2,3-benzotriazin-3-yl)-1,1,3,3- tetramethyluronium-tetrafluoroborat
TDO 2,5-Diphenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxythiophendioxid
TFA Trifluoressigsäure
THF Tetrahydrofuran
TNTU O-[(5-Norbonen-2,3-dicarboximido]-1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborat
TOTU O-[(Cyano(ethoxycarbonyl)methylen)amino]-1,1,3,3- tetramethyluronium-tetrafluoroborat
TPTU O-(1,2-Dihydro-2-oxo-1-pyridyl)-1,1,3,3′-tetramethyluronium tetrafluoroborat
Trt Trityl
TSTU O-(N-Succinimidyl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-tetrafluoroborat
Z Benzyloxycarbonyl
MS(ES⁺) Elektrospray Massenspektrum (Positiv Ion)
MS(ES^-) Elektrospray Massenspektrum (Negativ Ion)
MS(DCl) Direkt-Ionisations-Massenspektrum
MS(FAB) Fast-Atom-Bombardement-Massenspektrum
NBA Nitrobenzylalkohol
Aeg N- (2-aminoethyl) glycyl, -NH-CH₂-CH₂-NH-CH₂-CO-
Aeg (A ^MeOBz ) N- (2-aminoethyl) -N - ((9- (N⁶-4-methoxybenzoyl) adenosyl) acetyl) glycyl
Aeg (C ^Bz ) N- (2-aminoethyl) -N - ((1- (N⁴-benzoyl) cytosyl) acetyl) glycyl
Aeg (C ^MeOBz ) N- (2-aminoethyl) -N - ((1- (N⁴-4-methoxybenzoyl) cytosyl) acetyl) glycyl
Aeg (C ^tBuBz ) N- (2-aminoethyl) -N - ((1- (N⁴-4-tert.butylbenzoyl) cytosyl) acetyl) glycyl
Aeg (G ^iBu ) N- (2-aminoethyl) -N - ((9- (N²-isobutyryl) guanosyl) acetyl) glycyl
Aeg (T) N- (2-aminoethyl) -N - ((1-thyminyl) acetyl) glycyl
Bnpeoc 2,2- [bis (4-nitrophenyl)] - ethoxycarbonyl)
Boc tert-butyloxycarbonyl
BOI 2- (benzotriazol-1-yl) oxy-1,3-dimethyl-imidazolidinium hexafluorophosphate
BOP benzotriazolyl-1-oxy-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate
BroP bromo-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate
BSA N, O-bis (trimethylsilyl) acetamide
But tert-butyl
Bz benzoyl
Bzl benzyl
Cl-Z 4-chloro-benzyloxycarbonyl
CPG Controlled Pore Glass
DBU 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (1.5-5)
DCM dichloromethane
Ddz 3,5-dimethoxyphenyl-2-propyl-2-oxycarbonyl
DMF dimethylformamide
DMT 4,4'-dimethoxytriphenylmethyl
Dmt di- (4-methoxyphenyl) phenylmethyl,
Dnpeoc 2- (2,4-dinitrenphenyl) ethoxycarbonyl
FAM fluorescein residue
Fm 9-fluorenylmethyl
Fmoc 9-fluorenylmethyloxycarbonyl
H-Aeg-OH N- (2-aminoethyl) glycine
HAPyU O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-bis (tetramethylene) uronium hexafluorophosphate
HATU O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
HBTU O- (benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
HOBt 1-hydroxybenzotriazole
HONSu N-hydroxysuccinimide
HOObt 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzotriazine
iBu isobutyryl
MeOBz 4-methoxybenzoyl
Mmt 4-methoxytriphenylmethyl
Moz 4-methoxybenzyloxycarbonyl
MSNT 2,4,6-mesitylenesulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazolide
Mtt 4-methylphenyl) diphenylmethyl
NMP N-methylpyrrolidine
Oeg N- (2-oxyethyl) glycyl, -O-CH₂-CH₂-NH-CH₂-CO-
Pixyl 9- (9-phenyl) xanthenyl
PyBOP benzotriazolyl-1-oxy-tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate
PyBroP bromine tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate
TAPipU O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-bis (pentamethylene) uronium tetrafluoroborate
TBTU O- (benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
tBu tert-butyl
tBuBz 4-tert-butylbenzoyl
TDBTU O- (3,4-dihydro-4-oxo-1,2,3-benzotriazin-3-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
TDO 2,5-diphenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxythiophene dioxide
TFA trifluoroacetic acid
THF tetrahydrofuran
TNTU O - [(5-norbonen-2,3-dicarboximido] -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
TOTU O - [(cyano (ethoxycarbonyl) methylene) amino] -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
TPTU O- (1,2-dihydro-2-oxo-1-pyridyl) -1,1,3,3'-tetramethyluronium tetrafluoroborate
Trt trityl
TSTU O- (N-succinimidyl) -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
Z benzyloxycarbonyl
MS (ES⁺) electrospray mass spectrum (positive ion)
MS (ES ^- ) electrospray mass spectrum (negative ion)
MS (DCl) direct ionization mass spectrum
MS (FAB) fast atom bombardment mass spectrum
NBA nitrobenzyl alcohol

Examples example 1 Production of N- (hydroxyethyl) glycine

46 g Glyoxylsäure-Mondhydrat werden in 1000 ml Wasser gelöst und dann unter Kühlung und Rühren 30.2 ml 2-Aminoethanol dazugegeben. Die Mischung wird mit 10 g Katalysator (10% Pd/C) versetzt und im Autoklaven bei 10 bar Wasserstoffdruck und Räumtemperatur hydriert. Zur Aufarbeitung wird vom Katalysator abgesaugt und das Filtrat im Vakuum zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird zweimal mit wenig Toluol nachdestilliert. Dieses Rohprodukt wird mit 250 ml heißem Methanol digeriert, warm abgesaugt, mit wenig Methanol nachgewaschen und dann im Exsiccator getrocknet.
Ausbeute: 49.56 g
Fp.: 178-180°C, Zers.
R_f(n-Butanol/Essigsäure/Wasser/Ethylacetat = 1 : 1 : 1 : 1): 0.36
MS(DCl): 120 (M+H)⁺46 g of glyoxylic acid moon hydrate are dissolved in 1000 ml of water and then 30.2 ml of 2-aminoethanol are added with cooling and stirring. The mixture is mixed with 10 g of catalyst (10% Pd / C) and hydrogenated in an autoclave at 10 bar hydrogen pressure and room temperature. For working up, the catalyst is filtered off with suction and the filtrate is evaporated to dryness in vacuo. The residue is redistilled twice with a little toluene. This crude product is digested with 250 ml of hot methanol, suction filtered while warm, washed with a little methanol and then dried in a desiccator.
Yield: 49.56 g
Mp .: 178-180 ° C, dec.
R _f (n-butanol / acetic acid / water / ethyl acetate = 1: 1: 1: 1): 0.36
MS (DCl): 120 (M + H) ⁺

Example 2 Synthesis of N- (9-fluorenylmethoxycarbonyl) -N- (hydroxyethyl) glycine

10.08 g Natriumhydrogencarbonat werden in 150 ml Wasser gelöst und dann 7.15 g N-(Hydroxyethyl)glycin unter Rühren zugegeben. Nach ca. 5 min erhält man eine klare Lösung zu der 20.22 g Fmoc-ONSu in 300 ml Dioxan unter gutem Rühren zugetropft werden. Man rührt noch 3 h bei Raumtemperatur nach und läßt über Nacht bei 4°C stehen. Die Lösung wird filtriert und das Filtrat am Rotationsverdampfer im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in 100 ml Wasser aufgenommen und durch portionsweise Zugabe von Kaliumhydrogensulfat-Lösung auf pH 2 gestellt. Dann extrahiert man mit dreimal 150 ml Ethylacetat, wäscht die organische Phase mit viermal 50 ml Wasser und trocknet über Natriumsulfat. Man filtriert vom Trockenmittel und engt das Filtrat am Rotationsverdampfer im Vakuum zur Trockene ein. Der Rückstand wird mit 200 ml Diisopropylether versetzt und verrieben, wobei Kristallisation eintritt. Man läßt über Nacht stehen, saugt den Niederschlag ab und kristallisiert aus Ethylacetat/Diisopropylether um. Das so erhaltene Produkt wird abgesaugt und im Exsiccator getrocknet.
Ausbeute: 15.8 g
Fp.: 114-116°C, Zers.
R_f(n-Butanol/ESsigsäure/Wasser/Ethylacetat = 3 : 1 : 1): 0.62
MS(ES+): 342 (M+H)⁺10.08 g of sodium hydrogen carbonate are dissolved in 150 ml of water and then 7.15 g of N- (hydroxyethyl) glycine are added with stirring. After about 5 minutes, a clear solution is obtained, to which 20.22 g of Fmoc-ONSu in 300 ml of dioxane are added dropwise with thorough stirring. The mixture is stirred for a further 3 h at room temperature and left to stand at 4 ° C. overnight. The solution is filtered and the filtrate is concentrated in vacuo on a rotary evaporator. The residue is taken up in 100 ml of water and adjusted to pH 2 by adding potassium hydrogen sulfate solution in portions. The mixture is then extracted with three 150 ml portions of ethyl acetate, the organic phase is washed with four 50 ml portions of water and dried over sodium sulfate. The desiccant is filtered off and the filtrate is concentrated to dryness on a rotary evaporator in vacuo. The residue is mixed with 200 ml of diisopropyl ether and triturated, with crystallization occurring. The mixture is left to stand overnight, the precipitate is filtered off and recrystallized from ethyl acetate / diisopropyl ether. The product obtained in this way is filtered off with suction and dried in a desiccator.
Yield: 15.8 g
Mp .: 114-116 ° C, dec.
R _f (n-butanol / acetic acid / water / ethyl acetate = 3: 1: 1): 0.62
MS (ES +): 342 (M + H) ⁺

Example 3 Synthesis of N- (9-fluorenylmethoxycarbonyl) -N- (4-methoxyphenyl-diphenyl methoxyethyl) glycine

14.74 g N-(Fluorenylmethoxycarbonyl)-N-(hydroxyethyl)glycin werden in 160 ml Pyridin gelöst und 13.31 g 4-Methoxyphenyl-diphenyl-methylchlorid zugegeben. Die Mischung wird 2 h bei Raumtemperatur gerührt und über Nacht bei 4°C stehengelassen. Dann wird das Lösungsmittel im Vakuum am Rotationsverdampfer abgezogen und der Rückstand in 300 ml Ethylacetat aufgenommen und mit dreimal 30 ml gesättigter wäßriger Bicarbonat-Lösung extrahiert. Dann wird noch mit dreimal 30 ml Wasser gewaschen und die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet. Das Trockenmittel wird abfiltriert, das Filtrat auf ca. 70 ml Volumen eingeengt und unter Rühren in 700 ml Diisopropylether eingetropft. Das ausgefallene Produkt wird abgesaugt und im Exsiccator getrocknet.
Ausbeute: 19.95 g
R_f(Ethylacetat/Methanol/Triethylamin = 60 : 40 : 1): 0.45
MS(FAB/MeOH/NBA): 658.3 (M+2Na)⁺ 14.74 g of N- (fluorenylmethoxycarbonyl) -N- (hydroxyethyl) glycine are dissolved in 160 ml of pyridine and 13.31 g of 4-methoxyphenyl-diphenyl-methyl chloride are added. The mixture is stirred at room temperature for 2 hours and left to stand at 4 ° C. overnight. The solvent is then removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue is taken up in 300 ml of ethyl acetate and extracted with three times 30 ml of saturated aqueous bicarbonate solution. Then it is washed three times with 30 ml of water and the organic phase is dried over sodium sulfate. The drying agent is filtered off, the filtrate is concentrated to a volume of about 70 ml and added dropwise to 700 ml of diisopropyl ether with stirring. The precipitated product is suctioned off and dried in the desiccator.
Yield: 19.95 g
R _f (ethyl acetate / methanol / triethylamine = 60: 40: 1): 0.45
MS (FAB / MeOH / NBA): 658.3 (M + 2Na) ⁺

Example 4a N⁴- (4-methoxybenzoyl) cytosine

Cytosin (11.1 g) wird in trockenem Pyridin (250 ml) suspendiert. Dann wird mit einer Spritze 4-Methoxybenzoylchlorid (17.06 g) tropfenweise zugegeben. Es entsteht eine fast klare Lösung aus der nach ca. 10 min ein Niederschlag ausfällt. Man rührt noch ca. 1.5 h bei Raumtemperatur nach und filtriert dann ab.
Der Niederschlag ist das gewünschte Produkt.
Ausbeute: 20.5 g
MS(ES+): 246 (M+H)⁺
R_f = 0.77 (Dichlormethan : Isopropanol/8 : 2)Cytosine (11.1 g) is suspended in dry pyridine (250 ml). Then 4-methoxybenzoyl chloride (17.06 g) is added dropwise with a syringe. An almost clear solution is formed from which a precipitate precipitates after about 10 minutes. The mixture is stirred for about 1.5 h at room temperature and then filtered off.
Precipitation is the desired product.
Yield: 20.5 g
MS (ES +): 246 (M + H) ⁺
R _f = 0.77 (dichloromethane: isopropanol / 8: 2)

Example 4b

Cytosin (2.8 g) wird in trockenem DMF (100 ml) suspendiert und mit Triethylamin (2 ml) versetzt. Dann wird mit einer Spritze 4-Methoxybenzoesäureanhydrid (7.2 g) tropfenweise zugegeben. Es entsteht eine fast klare Lösung aus der nach einiger Zeit ein Niederschlag ausfällt. Man rührt noch ca. 2 h bei Raumtemperatur nach und filtriert dann ab. Der Niederschlag ist das gewünschte Produkt.
Ausbeute: 5.9 g
MS(ES+): 246 (M+H)⁺
R_f = 0.77 (Dichlormethan : Isopropanol/8 : 2)Cytosine (2.8 g) is suspended in dry DMF (100 ml) and triethylamine (2 ml) is added. Then 4-methoxybenzoic anhydride (7.2 g) is added dropwise with a syringe. An almost clear solution emerges from which a precipitate precipitates after some time. The mixture is stirred for about 2 hours at room temperature and then filtered off. Precipitation is the desired product.
Yield: 5.9 g
MS (ES +): 246 (M + H) ⁺
R _f = 0.77 (dichloromethane: isopropanol / 8: 2)

Example 5 N⁴- (4-methoxybenzoyl) -N¹-methoxycarbonylmethylcytosine

N⁴-(4-methoxybenzoyl)-cytosin (12.25 g) werden in trockenem DMF (250 ml) suspendiert und Natriumhydrid (1.25 g) in Portionen zugegeben. Die Mischung wird kurz auf 60°C erhitzt bis die Wasserstoffentwicklung beendet ist. Bei Raumtemperatur wird anschließend mit einer Spritze Bromessigsäuremethylester (4.75 ml) tropfenweise zugegeben. Man rührt noch 1 h bei Raumtemperatur nach und versetzt dann mit wenig Kohlendioxid in Methanol. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgezogen und der verbliebene Rückstand mit Dichlormethan versetzt und dann filtriert. Der Filterrückstand wird noch mit wenig Wasser gewaschen und dann im Vakuum getrocknet.
Ausbeute 12.86 g
Fp.: 219°C
MS(ES+): 318 (M+H)⁺
R_f = 0.71 (n-Butanol : Essigsäure : Wasser/3 : 1 : 1)N⁴- (4-methoxybenzoyl) cytosine (12.25 g) are suspended in dry DMF (250 ml) and sodium hydride (1.25 g) is added in portions. The mixture is briefly heated to 60 ° C. until the evolution of hydrogen has ended. At room temperature, methyl bromoacetate (4.75 ml) is then added dropwise using a syringe. The mixture is stirred for a further 1 h at room temperature and then a little carbon dioxide in methanol is added. The solvent is removed in vacuo and the remaining residue is mixed with dichloromethane and then filtered. The filter residue is washed with a little water and then dried in vacuo.
Yield 12.86 g
Mp: 219 ° C
MS (ES +): 318 (M + H) ⁺
R _f = 0.71 (n-butanol: acetic acid: water / 3: 1: 1)

Example 6 N⁴- (4-methoxybenzoyl) -N¹-carboxymethylcytosine

N⁴-(4-methoxybenzoyl)-N¹-methoxycarbonylmethylcytosin (12.5 g) wird in Wasser (100 ml) suspendiert und bei 0°C tropfenweise mit 2N wäßriger Natronlauge unter pH-Kontrolle (pH 12) versetzt bis der Methylester verseift ist. Der Fortgang der Reaktion wird mittels DC verfolgt. Dann wird die Reaktionslösung Filtriert und das Filtrat mit 2M Kaliumhydrogensulfat-Lösung auf pH 3 gestellt wobei das Produkt ausfällt. Man filtriert den Niederschlag ab, wäscht mit wenig kaltem Wasser nach und trocknet im Vakuum.
Ausbeute: 11.5 g
Fp.: 270-275°C, Zers.
MS(ES+): 304 (M+H)⁺
R_f = 0.53 (n-Butanol : Essigsäure : Wasser/3 : 1 : 1)N⁴- (4-methoxybenzoyl) -N¹-methoxycarbonylmethylcytosine (12.5 g) is suspended in water (100 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution is added dropwise at 0 ° C. under pH control (pH 12) until the methyl ester has saponified. The progress of the reaction is monitored by TLC. Then the reaction solution is filtered and the filtrate is adjusted to pH 3 with 2M potassium hydrogen sulfate solution, the product precipitating. The precipitate is filtered off, washed with a little cold water and dried in vacuo.
Yield: 11.5 g
Mp .: 270-275 ° C, dec.
MS (ES +): 304 (M + H) ⁺
R _f = 0.53 (n-butanol: acetic acid: water / 3: 1: 1)

Example 7 N⁴- (4-tert-butylbenzoyl) cytosine

Cytosin (11.1 g) wird in trockenem DMF (250 ml) suspendiert und mit Triethylamin (15.4 ml) versetzt. Dann wird mit einer Spritze 4-tert.-Butyl benzoylchlorid (18.6 ml) tropfenweise zugegeben. Man rührt noch ca. 4 h bei Raumtemperatur nach und gibt dann weiteres 4-tert.-Butyl-benzoylchlorid (3.7 ml) hinzu. Nach weiteren 2 h wird die Reaktion durch Zugabe von etwas Methanol gequencht. Man entfernt das Lösungsmittel im Vakuum und versetzt den Rückstand mit Dichlormethan und Wasser. Der dabei ausfallende Feststoff ist die gewünschte Substanz. Der Niederschlag wird abfiltriert und im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 15.7 g
DCIMS: 272 (M+H)*
R_f = 0.55 (Dichlormethan : Methanol/9 : 1)Cytosine (11.1 g) is suspended in dry DMF (250 ml) and triethylamine (15.4 ml) is added. Then 4-tert-butyl benzoyl chloride (18.6 ml) is added dropwise with a syringe. The mixture is stirred for a further 4 h at room temperature and then further 4-tert-butyl-benzoyl chloride (3.7 ml) is added. After a further 2 h, the reaction is quenched by adding a little methanol. The solvent is removed in vacuo and the residue is mixed with dichloromethane and water. The solid that precipitates is the desired substance. The precipitate is filtered off and dried in vacuo.
Yield: 15.7 g
DCIMS: 272 (M + H) *
R _f = 0.55 (dichloromethane: methanol / 9: 1)

Example 8 N⁴- (4-tert-Butylbenzoyl) -N¹-methoxycarbonylmethyl-cytosine

N⁴-(4-tert-Butylbenzoyl)-cytosin (14.96 g) werden in trockenem DMF (250 ml) suspendiert, Natriumhydrid (1.32 g) in Portionen zugegeben und die Mischung 1 h bei Raumtemperatur gerührt bis die Wasserstoffentwicklung beendet ist. Bei Raumtemperatur wird anschließend mit einer Spritze Bromessigsäuremethylester (5.2 ml) tropfenweise zugegeben. Man rührt noch 1 h bei Raumtemperatur nach und versetzt dann mit Methanol (10 ml). Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgezogen und der verbliebene Rückstand zwischen Dichlormethan und Wasser verteilt. Die organische Phase wird mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und nach Filtration im Vakuum eingeengt. Das so erhaltene Rohprodukt wird aus Isopropanol umkristallisiert und dann im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 8.0 g
Fp.: 189-193°C, Zers.
MS(DCl): 344 (M+H)⁺
R_f =0.72 (Dichlormethan : Methanol/9 : 1) N⁴- (4-tert-butylbenzoyl) cytosine (14.96 g) are suspended in dry DMF (250 ml), sodium hydride (1.32 g) is added in portions and the mixture is stirred at room temperature for 1 h until the evolution of hydrogen has ended. At room temperature, methyl bromoacetate (5.2 ml) is then added dropwise using a syringe. The mixture is stirred for a further 1 h at room temperature and then methanol (10 ml) is added. The solvent is removed in vacuo and the remaining residue is partitioned between dichloromethane and water. The organic phase is washed with water, dried over sodium sulfate and, after filtration, concentrated in vacuo. The crude product thus obtained is recrystallized from isopropanol and then dried in vacuo.
Yield: 8.0 g
Mp: 189-193 ° C, dec.
MS (DCl): 344 (M + H) ⁺
R _f = 0.72 (dichloromethane: methanol / 9: 1)

Example 9 N⁴- (4-tert-Butylbenzoyl) -N¹-carboxymethylcytosine

N⁴-(4-tert-ButylbenzoyI)-N¹-methoxycarbonylmethylcytosin (8.0 g) wird in einer Mischung von Dioxan (50 ml) und Wasser (10 ml) gelöst und unter Rühren bei Raumtemperatur 2N wäßrige Natronlauge tropfenweise zugegeben (pH 11-12). Wenn die Verseifung des Methylesters beendet ist, -DC-Kontrolle- wird die Reaktionslösung mit 2M Kaliumhydrogensulfat-Lösung auf pH 3 gestellt. Der ausgefallene Niederschlag wird abgesaugt. Diese Rohprodukt wird in Natriumcarbonat-Lösung gelöst und erneut durch Zugabe von 2M Kaliumhydrogensulfat-Lösung ausgefällt. Das Produkt wird abgesaugt, mit wenig Wasser nachgewaschen und im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 6.62 g
Fp.: ab 285°C, Zers.
MS(DCl): 330 (M+H)⁺
R_f = 0.2 (Dichlormethan : Methanol/9 : 1)N⁴- (4-tert-ButylbenzoyI) -N¹-methoxycarbonylmethylcytosine (8.0 g) is dissolved in a mixture of dioxane (50 ml) and water (10 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution is added dropwise with stirring at room temperature (pH 11-12) . When the saponification of the methyl ester has ended, DC control, the reaction solution is adjusted to pH 3 with 2M potassium hydrogen sulfate solution. The precipitate is filtered off. This crude product is dissolved in sodium carbonate solution and precipitated again by adding 2M potassium hydrogen sulfate solution. The product is filtered off, washed with a little water and dried in vacuo.
Yield: 6.62 g
Mp .: from 285 ° C, dec.
MS (DCl): 330 (M + H) ⁺
R _f = 0.2 (dichloromethane: methanol / 9: 1)

Example 10 N⁴- (Benzoyl) -N¹-carboxymethylcytosine N⁴- (benzoyl) cytosine

Cytosin (5.55 g) wird in trockenem Pyridin (100 ml) suspendiert. Dann wird mit einer Spritze Benzoylchlorid (6.4 ml) tropfenweise zugegeben. Es entsteht eine fast klare Lösung aus der nach ca. 5 min ein Niederschlag ausfällt. Man rührt noch ca. 2 h bei Raumtemperatur nach, gibt dann Methanol (100 ml) dazu und engt die Mischung im Vakuum ein. Der Rückstand wird mit Isopropanol verrührt, filtriert, mit wenig Methanol und Dieethylether gewaschen und im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 10.1 g
Fp.: (305°C
MS(DCl): 216 (M+H)⁺Cytosine (5.55 g) is suspended in dry pyridine (100 ml). Then benzoyl chloride (6.4 ml) is added dropwise with a syringe. An almost clear solution is formed, from which a precipitate precipitates after about 5 minutes. The mixture is stirred for a further 2 h at room temperature, then methanol (100 ml) is added and the mixture is concentrated in vacuo. The residue is stirred with isopropanol, filtered, washed with a little methanol and dieethyl ether and dried in vacuo.
Yield: 10.1 g
Mp .: (305 ° C
MS (DCl): 216 (M + H) ⁺

Example 11 N⁴- (Benzoyl) -N¹-methoxycarbonylmethylcytosine

N⁴-(Benzoyl)-cytosin (4.3 g) werden in trockenem DMF (60 ml) suspendiert und Natriumhydrid (0.48 g) in Portionen zugegeben. Die Mischung wird kurz auf 40°C erwärmt bis die Wasserstoffentwicklung beendet ist. Bei Raumtemperatur wird anschließend mit einer Spritze Bromessigsäuremethylester (2.1 ml) tropfenweise zugegeben. Man rührt noch 2.5 h bei Raumtemperatur nach und versetzt dann mit Methanol (10 ml). Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgezogen und der verbliebene Rückstand mit Dichlormethan versetzt und dann filtriert. Der Filterrückstand wird noch mit wenig Wasser gewaschen und dann im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 6.45 g
Fp.: 234°C
MS(DCl): 288 (M+H)*
R_f =0.85 (Ethylacetat : Methanol/8 : 2)N⁴- (Benzoyl) -cytosine (4.3 g) are suspended in dry DMF (60 ml) and sodium hydride (0.48 g) is added in portions. The mixture is briefly heated to 40 ° C. until the evolution of hydrogen has ended. At room temperature, methyl bromoacetate (2.1 ml) is then added dropwise using a syringe. The mixture is stirred at room temperature for a further 2.5 h and then methanol (10 ml) is added. The solvent is removed in vacuo and the remaining residue is mixed with dichloromethane and then filtered. The filter residue is washed with a little water and then dried in vacuo.
Yield: 6.45 g
Mp: 234 ° C
MS (DCl): 288 (M + H) *
R _f = 0.85 (ethyl acetate: methanol / 8: 2)

Example 12 N⁴- (Benzoyl) -N¹-carboxymethylcytosine

N⁴-(Benzoyl)-N¹-methoxycarbonylmethylcytosin (5.85 g) wird in einer Mischung von Dioxan (80 ml) und Wasser (40 ml) gelöst und unter Rühren bei Raumtemperatur 2N wäßrige Natronlauge (11.25 ml) tropfenweise zugegeben (pH 11-12). Wenn die Verseifung des Methylesters beendet ist, - DC-Kontrolle - wird die Reaktionslösung mit 2M Kaliumhydrogensulfat-Lösung auf pH 3 gestellt. Der ausgefallene Niederschlag wird abgesaugt. Diese Rohprodukt wird in Natriumcarbonat-Lösung gelöst und erneut durch Zugabe von 2M Kaliumhydrogensulfat-Lösung ausgefällt. Das Produkt wird abgesaugt, mit wenig Wasser nachgewaschen und im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 5.84 g
Fp.: ab 283-286°C, Zers.
MS(ES+): 274 (M+H)*
R_f = 0.15 (Ethylacetat : Methanol/8 : 2)N⁴- (benzoyl) -N¹-methoxycarbonylmethylcytosine (5.85 g) is dissolved in a mixture of dioxane (80 ml) and water (40 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution (11.25 ml) is added dropwise with stirring at room temperature (pH 11-12) . When the saponification of the methyl ester has ended, TLC control, the reaction solution is adjusted to pH 3 with 2M potassium hydrogen sulfate solution. The precipitate is filtered off. This crude product is dissolved in sodium carbonate solution and precipitated again by adding 2M potassium hydrogen sulfate solution. The product is filtered off, washed with a little water and dried in vacuo.
Yield: 5.84 g
Mp .: from 283-286 ° C, dec.
MS (ES +): 274 (M + H) *
R _f = 0.15 (ethyl acetate: methanol / 8: 2)

Example 13 N⁴- (tert-butyloxycarbonyl) cytosine

Cytosin (11.1 g) wird in trockenem Pyridin (250 ml) suspendiert. Dann werden Di-tert.butyldicarbonat (21.8 g) und 1 Spatelspitze 4-Dimethylaminopyridin zugegeben. Die Mischung wird 6 h bei 60°C gerührt wobei ein dicker Niederschlag entsteht. Die Reaktionslösung wird abgekühlt und der Niederschlag abgesaugt. Der Niederschlag wird in der Wärme mit Wasser verrührt, abgesaugt und im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 10.26 g
MS(DCl): 212 (M+H)*
R_f = 0.6 (Dichlormethan : Methanol/6 : 4)Cytosine (11.1 g) is suspended in dry pyridine (250 ml). Then di-tert-butyl dicarbonate (21.8 g) and 1 spatula tip of 4-dimethylaminopyridine are added. The mixture is stirred at 60 ° C. for 6 hours, a thick precipitate being formed. The reaction solution is cooled and the precipitate is filtered off with suction. The precipitate is stirred with water while hot, suction filtered and dried in vacuo.
Yield: 10.26 g
MS (DCl): 212 (M + H) *
R _f = 0.6 (dichloromethane: methanol / 6: 4)

Example 14 N⁴- (tert-butyloxycarbonyl) -N¹-methoxycarbonylmethylcytosine

N⁴-(tert.Butyloxycarbonyl)l-cytosin (1.6 g) werden in trockenem DMF (30 ml) suspendiert, Natriumhydrid (0.19 g) in Portionen zugegeben und die Mischung 1.5 h bei Raumtemperatur gerührt bis die Wasserstoffentwicklung beendet ist. Bei Raumtemperatur wird anschließend mit einer Spritze Bromessigsäuremethylester (0.84 ml) tropfenweise zugegeben. Man rührt noch 5 h bei Raumtemperatur nach und versetzt dann mit Methanol (1 ml). Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgezogen und der verbliebene Rückstand mittels Säulenchromatographie an Kieselgel mit Dichlormethan als Elutionsmittel gereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt.
Ausbeute: 1.1 g
MS(DCl): 284 (M+H)*
R_f = 0.5 (Dichlormethan : Methanol/95 : 5)N⁴- (tert.butyloxycarbonyl) l-cytosine (1.6 g) are suspended in dry DMF (30 ml), sodium hydride (0.19 g) is added in portions and the mixture is stirred at room temperature for 1.5 h until the evolution of hydrogen has ended. At room temperature, methyl bromoacetate (0.84 ml) is then added dropwise using a syringe. The mixture is stirred for a further 5 h at room temperature and then methanol (1 ml) is added. The solvent is removed in vacuo and the residue which remains is purified by column chromatography on silica gel with dichloromethane as the eluent. The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo.
Yield: 1.1 g
MS (DCl): 284 (M + H) *
R _f = 0.5 (dichloromethane: methanol / 95: 5)

Example 15 N⁴- (tert-butyloxycarbonyl) -N¹-carbonylmethylcytosine

N⁴-(tert. Butyloxycarbonyl)-N¹-methoxycarbonylmethylcytosin (4.2 g) wird in Wasser (30 ml) suspendiert und bei O°C tropfenweise mit 2N wäßriger Natronlauge unter pH-Kontrolle (pH 12) versetzt bis der Methylester verseift ist. Der Fortgang der Reaktion wird mittels DC verfolgt. Dann wird die Reaktionslösung mit Essigsäure auf pH 3 gestellt und das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Die Reinigung des Rohproduktes erfolgt mit Säulenchromatographie an Kieselgel mit Dichlormethan : Methanol : Triethylamin /8 : 1 : 1 als Elutionsmittel. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt.
Ausbeute: 3.5 g
Fp.: 95-98°C, Zers.
MS(FAB/NBA): 270.2 (M+H)*
R_f = 0.35 (Dichlormethan : Methanol : Triethylamin/8 : 1 : 1)N⁴- (tert. Butyloxycarbonyl) -N¹-methoxycarbonylmethylcytosine (4.2 g) is suspended in water (30 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution is added dropwise at 0 ° C. under pH control (pH 12) until the methyl ester has saponified. The progress of the reaction is monitored by TLC. Then the reaction solution is adjusted to pH 3 with acetic acid and the solvent is distilled off in vacuo. The crude product is purified by column chromatography on silica gel with dichloromethane: methanol: triethylamine / 8: 1: 1 as the eluent. The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo.
Yield: 3.5 g
Mp .: 95-98 ° C, dec.
MS (FAB / NBA): 270.2 (M + H) *
R _f = 0.35 (dichloromethane: methanol: triethylamine / 8: 1: 1)

Example 16 N⁸- (4-methoxybenzoyl) adenine

Adenin (13.5 g) wird in trockenem Pyridin (250 ml) suspendiert. Dann wird mit einer Spritze 4-Methoxybenzoylchlorid (17.06 g) tropfenweise zugegeben. Das Gemisch wird 3 h bei 100°C gerührt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wird die Reaktionslösung mit Methanol versetzt und anschließend das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Man koevaporiert den Rückstand noch zweimal mit wenig Toluol und verrührt dann mit heißem Isopropanol. Man läßt die Mischung langsam abkühlen, saugt das ausgefallene Produkt ab und trocknet es im Vakuum.
Ausbeute: 22.2 g
Fp.: 212-214°C
MS(ES+): 270 (M+H)*
R_f = 0.67 (Dichlormethan : Isopropanol/8 : 2)Adenine (13.5 g) is suspended in dry pyridine (250 ml). Then 4-methoxybenzoyl chloride (17.06 g) is added dropwise with a syringe. The mixture is stirred at 100 ° C. for 3 hours and left to stand at room temperature overnight. Then the reaction solution is mixed with methanol and then the solvent is distilled off in vacuo. The residue is coevaporated twice with a little toluene and then stirred with hot isopropanol. The mixture is allowed to cool slowly, the precipitated product is filtered off with suction and dried in vacuo.
Yield: 22.2 g
Mp .: 212-214 ° C
MS (ES +): 270 (M + H) *
R _f = 0.67 (dichloromethane: isopropanol / 8: 2)

Example 17 N⁶- (4-methoxybenzoyl) -N⁹-methyloxycarbonylmethyladenine

N⁶-(4-Methoxybenzoyl)-adenin (8.01 g) werden in trockenem DMF (150 ml) suspendiert, Natriumhydrid (0.75 g) in Portionen zugegeben und die Mischung 0.5 h bei Raumtemperatur gerührt bis die Wasserstoffentwicklung beendet ist. Bei Raumtemperatur wird anschließend mit einer Spritze Bromessigsäuremethylester (2.85 ml) tropfenweise zugegeben. Man rührt noch 2 h bei Raumtemperatur nach und versetzt dann mit wenig Kohlendioxid in Methanol. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgezogen und der verbliebene Rückstand mit Dichlormethanlwasser versetzt und dann filtriert. Der Filterrückstand wird noch mit wenig Wasser gewaschen und dann im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 4.03 g
MS(ES+): 342 (M+H)*
R_f = 0.76 (Ethylacetat : Methanol/8 : 2)N⁶- (4-methoxybenzoyl) adenine (8.01 g) are suspended in dry DMF (150 ml), sodium hydride (0.75 g) is added in portions and the mixture is stirred at room temperature for 0.5 h until the evolution of hydrogen has ended. Methyl bromoacetate (2.85 ml) is then added dropwise at room temperature with a syringe. The mixture is stirred for a further 2 h at room temperature and then a little carbon dioxide in methanol is added. The solvent is removed in vacuo and the remaining residue is mixed with dichloromethane water and then filtered. The filter residue is washed with a little water and then dried in vacuo.
Yield: 4.03 g
MS (ES +): 342 (M + H) *
R _f = 0.76 (ethyl acetate: methanol / 8: 2)

Example 18 N⁶- (4-methoxybenzoyl) -N⁹-carboxymethyladenine

N⁶-(4-Methoxybenzoyl)-N⁹-methyloxycarbonylmethyladenin (1.71 g) wird in Wasser (40 ml) suspendiert und bei 0°C tropfenweise mit 2N wäßriger Natronlauge unter pH-Kontrolle (pH 11.2) versetzt bis der Methylester verseift ist. Der Fortgang der Reaktion wird mittels DC verfolgt. Dann wird die Reaktionslösung filtriert und das Filtrat mit 2M Kaliumhydrogensulfat-Lösung auf pH 3 gestellt wobei das Produkt ausfällt. Man filtriert den Niederschlag ab, wäscht mit wenig kaltem Wasser nach und trocknet im Vakuum.
Ausbeute: 1.52 g
Fp.: 222-223°C, Zers.
MS(ES+): 328 (M+H)*
R_f = 0.2 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser 3 : 1 : 1)N⁶- (4-methoxybenzoyl) -N⁹-methyloxycarbonylmethyladenine (1.71 g) is suspended in water (40 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution is added dropwise at 0 ° C. under pH control (pH 11.2) until the methyl ester has saponified. The progress of the reaction is monitored by TLC. Then the reaction solution is filtered and the filtrate is adjusted to pH 3 with 2M potassium hydrogen sulfate solution, the product precipitating. The precipitate is filtered off, washed with a little cold water and dried in vacuo.
Yield: 1.52 g
Mp: 222-223 ° C, dec.
MS (ES +): 328 (M + H) *
R _f = 0.2 (n-butanol / acetic acid / water 3: 1: 1)

Example 19 N²- (isobutyryl) guanine

Guanin (3.02 g) wird in trockenem DMF (40 ml) suspendiert und mit Triethylamin (1.45 ml) versetzt. Dann wird mit einer Spritze Isobuttersäurechlorid (2.12 g) tropfenweise zugegeben. Das Gemisch wird 3 h bei 100°C gerührt, dann die Reaktionslösung mit Methanol versetzt und anschließend das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Man verrührt den Rückstand mit heißem Isopropanol, saugt das ausgefallene Produkt ab und trocknet es im Vakuum.
Ausbeute: 2.67 g
R_f = 0.45 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser 3 : 1 : 1)Guanine (3.02 g) is suspended in dry DMF (40 ml) and triethylamine (1.45 ml) is added. Then isobutyric acid chloride (2.12 g) is added dropwise with a syringe. The mixture is stirred at 100 ° C. for 3 h, then methanol is added to the reaction solution and the solvent is then distilled off in vacuo. The residue is stirred with hot isopropanol, the precipitated product is filtered off with suction and dried in vacuo.
Yield: 2.67 g
R _f = 0.45 (n-butanol / acetic acid / water 3: 1: 1)

Example 20 N²- (isobutyryl) -N⁹-methyloxycarbonylmethylguanine

N²-(Isobutyryl)-guanin (4.42 g) werden in trockenem DMF (50 ml) suspendiert, Natriumhydrid (0.5 g) in Portionen zugegeben und die Mischung 1 h bei Raumtemperatur gerührt bis die Wasserstoffentwicklung beendet ist. Bei Raumtemperatur wird anschließend mit einer Spritze Bromessigsäuremethylester (1.9 ml) tropfenweise zugegeben. Man rührt noch 1 h bei Raumtemperatur nach und versetzt dann mit wenig Kohlendioxid in Methanol. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgezogen und der verbliebene Rückstand mittels Säulenchromatographie an Kieselgel mit Dichlormethan : Methanol/95 : 5 als Elutionsmittel gereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt.
Ausbeute: 2.35 g
MS(DCl): 294(M+H)*
R_f = 0.58 (Dichlormethan : Methanol/9 : 1)N²- (isobutyryl) guanine (4.42 g) are suspended in dry DMF (50 ml), sodium hydride (0.5 g) is added in portions and the mixture is stirred at room temperature for 1 h until the evolution of hydrogen has ended. Methyl bromoacetate (1.9 ml) is then added dropwise at room temperature using a syringe. The mixture is stirred for a further 1 h at room temperature and then a little carbon dioxide in methanol is added. The solvent is removed in vacuo and the residue which remains is purified by column chromatography on silica gel with dichloromethane: methanol / 95: 5 as the eluent. The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo.
Yield: 2.35 g
MS (DCl): 294 (M + H) *
R _f = 0.58 (dichloromethane: methanol / 9: 1)

Example 21 N²- (isobutyryl) -N⁹-carboxymethylguanine

N²-(Isobutyryl)-N⁹-methyloxycarbonylmethylguanin (9.68 g) wird in Wasser (100 ml) suspendiert und bei 0°C tropfenweise mit 2N wäßriger Natronlauge unter pH-Kontrolle (pH 11) versetzt bis der Methylester verseift ist. Der Fortgang der Reaktion wird mittels DC verfolgt. Dann wird die Reaktionslösung filtriert, das Filtrat mit 2M Kaliumhydrogensulfat-Lösung auf pH 3 gestellt und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wird verworfen. Die wäßrige Phase wird im Vakuum auf ca. 20 ml Volumen konzentriert und mit Ethylacetat überschichtet. Der sich langsam abscheidende Niederschlag wird abgesaugt und getrocknet.
Ausbeute: 1.35 g
MS(ES+): 342(M+H)*
R_f = 0.34 (n-Butanol : Essigsäure : Wasser/3 : 1 : 1)N²- (isobutyryl) -N⁹-methyloxycarbonylmethylguanin (9.68 g) is suspended in water (100 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution is added dropwise at 0 ° C. under pH control (pH 11) until the methyl ester has saponified. The progress of the reaction is monitored by TLC. Then the reaction solution is filtered, the filtrate is adjusted to pH 3 with 2M potassium hydrogen sulfate solution and extracted with ethyl acetate. The organic phase is discarded. The aqueous phase is concentrated in vacuo to about 20 ml volume and covered with ethyl acetate. The slowly separating precipitate is filtered off and dried.
Yield: 1.35 g
MS (ES +): 342 (M + H) *
R _f = 0.34 (n-butanol: acetic acid: water / 3: 1: 1)

Example 22 Preparation of N- (4-methoxyphenyl-diphenyl-methylaminoethyl) glycine Mmt-Aeg-OMe

14.76 g N-(Aminoethyl)glycinmethylester-Dihydrochlorid (H-Aeg-OMe 2 HCl) werden in 300 ml DMF suspendiert und unter Rühren mit 30.2 ml Triethylamin versetzt. Man kühlt auf ca. 4°C und gibt unter gutem Rühren 22.23 g Mmt-Cl gelöst in 100 ml Dichlormethan langsam zutropfen. Man rührt noch 2.5 h bei Raumtemperatur nach. Dann filtriert man von ausgefallenem Triethylaminhydrchlorid ab, gibt 10 ml Methanol zur Lösung und engt das Filtrat im Vakuum ein. Der Rückstand wird dann an Kieselgel mit einer Mischung aus Diethylether/Petrolether/Triethylamin 200 : 100 : 3 chromatographiert. Die das Produkt enthaltenen Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum zur Trockene eingedampft.
Ausbeute: 18.82 g Öl, das beim Stehenlassen langsam kristallisiert
R_f: 0.16 (Diethylether/Petrolether 2 : 1 mit 1% Triethylamin)
MS(FAB/MeOH/NBA/LiCl): 411.2 (M + Li)⁺14.76 g of N- (aminoethyl) glycine methyl ester dihydrochloride (H-Aeg-OMe 2 HCl) are suspended in 300 ml of DMF and 30.2 ml of triethylamine are added with stirring. The mixture is cooled to about 4 ° C. and 22.23 g of Mmt-Cl dissolved in 100 ml of dichloromethane are slowly added dropwise with thorough stirring. The mixture is stirred for a further 2.5 h at room temperature. Then precipitated triethylamine hydrochloride is filtered off, 10 ml of methanol are added to the solution and the filtrate is concentrated in vacuo. The residue is then chromatographed on silica gel with a mixture of diethyl ether / petroleum ether / triethylamine 200: 100: 3. The fractions containing the product are combined and evaporated to dryness in vacuo.
Yield: 18.82 g of oil, which slowly crystallizes on standing
R _f : 0.16 (diethyl ether / petroleum ether 2: 1 with 1% triethylamine)
MS (FAB / MeOH / NBA / LiCl): 411.2 (M + Li) ⁺

Example 23 Synthesis instructions for the preparation of N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino? ethyl N - ((1-thyminyl) acetyl) glycine methyl ester (Mmt-Aeg (T) -OMe)

1.21 g (3 mMol) Mmt-Aeg-OMe werden in 20 ml THF gelöst und dann unter Kühlung und gutem Rühren 0.24 ml Chloracetylchlorid gelöst in 10 ml THF gleichzeitig mit 0.42 ml Triethylamin gelöst in 10 ml THF langsam zugetropft. Danach läßt man noch 30 min nachreagieren, saugt vom ausgefallenen Triethylaminhydrochlorid ab und versetzt die Lösung mit 30 ml trockenem DMF. Anschließend zieht man das THF im Vakuum am Rotationsverdampfer ab und gibt zu der Lösung von Mmt-Aeg(Chloracetyl)-OMe in DMF nacheinander 0.756 g (6 mMol) Thymin und 1.66 g (12 mMol) feingepulvertes Kaliumcarbonat. Diese Mischung läßt man 48 h bei Raumtemperatur rühren und saugt dann von dem Ungelösten ab. Das Lösungsmittel wird abgezogen und der Rückstand zwischen Wasser und Ethylacetat verteilt. Das in der Essigesterphase verbliebene Rohprodukt wird nach Abziehen des Lösungsmittels in einer Mischung von Dioxan/Methanol/Wasser durch Zugabe von 35 ml 0.2 N NaOH verseift. Der nach Abziehen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wird dann an Kieselgel mit Dichlormethan/MeOH/Triethylamin (100/10/1) chromatographisch gereinigt. Die das Produkt enthaltenen Fraktionen werden vereinigt und eingeengt. Es verbleiben 0.81 g eines farblosen Schaumes.
R_f 0.29 (Dichlormethan/Methanol/Triethylamin 100 : 10 : 1)
MS(ES-): 1112.0 (2M-H), 555.3 (M-H).1.21 g (3 mmol) of Mmt-Aeg-OMe are dissolved in 20 ml of THF and then 0.24 ml of chloroacetyl chloride dissolved in 10 ml of THF, simultaneously with 0.42 ml of triethylamine dissolved in 10 ml of THF, are slowly added dropwise while cooling and stirring well. Thereafter, the mixture is left to react for a further 30 minutes, the triethylamine hydrochloride which has precipitated is filtered off and the solution is mixed with 30 ml of dry DMF. Then the THF is removed in vacuo on a rotary evaporator and 0.756 g (6 mmol) of thymine and 1.66 g (12 mmol) of finely powdered potassium carbonate are added to the solution of Mmt-Aeg (chloroacetyl) -OMe in DMF. This mixture is allowed to stir at room temperature for 48 hours and then the undissolved material is filtered off with suction. The solvent is removed and the residue is partitioned between water and ethyl acetate. After the solvent has been stripped off, the crude product which remains in the ethyl acetate phase is saponified in a mixture of dioxane / methanol / water by adding 35 ml of 0.2N NaOH. The residue obtained after stripping off the solvent is then chromatographically purified on silica gel with dichloromethane / MeOH / triethylamine (100/10/1). The fractions containing the product are combined and concentrated. There remain 0.81 g of a colorless foam.
R _f 0.29 (dichloromethane / methanol / triethylamine 100: 10: 1)
MS (ES-): 1112.0 (2M-H), 555.3 (MH).

Example 24 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1-thyminyl) acetyl) glycine methyl ester (Mmt-Aeg (T) -OMe)

1.00 g (2.48 mmol) N-((4-Methoxyphenyl)-diphenylmethyl)-aminoethylglycin methylester wurden in 5 ml DMF gelöst. Zu dieser Lösung gab man 0.404 g (2.48 mmol) 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine und 0.632 ml (4.96 mmol) 4-Ethylmorpholin. Dann wurde eine Lösung von 0.456 g (2.48 mmol) N-1-Carboxymethylthymine in 5 ml DMF hinzugetropft, gefolgt von 0.46 ml (3.0 mmol) N,N′-Diisopropylcarbodiimid. Die Reaktionsmischung wurde 20 h bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand in Ethylacetat gelöst. Diese Lösung wurde zweimal mit Wasser und gesättigter Kaliumchloridlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und dann zur Trockene eingedampft. Das so erhaltene Rohprodukt wurde an Kieselgel, das mit einer Mischung aus Dichlormethan/Methanol/Triethylamin (100/1/1) äquilibriert wurde, mit einem Gradienten von 1-5% Methanol in Dichlormethan chromatographisch gereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Man erhielt 1.28 g Produkt als farblosen Schaum.
MS(FAB) 571.2 (M+H)*
R_f = 0.28 (CH₂Cl₂:MeOH/95 : 5) 1.00 g (2.48 mmol) of N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyl) aminoethylglycine methyl ester was dissolved in 5 ml of DMF. 0.404 g (2.48 mmol) of 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine and 0.632 ml (4.96 mmol) of 4-ethylmorpholine were added to this solution. Then a solution of 0.456 g (2.48 mmol) of N-1-carboxymethylthymine in 5 ml of DMF was added dropwise, followed by 0.46 ml (3.0 mmol) of N, N'-diisopropylcarbodiimide. The reaction mixture was stirred at room temperature for 20 h. The solvent was then removed in vacuo and the residue dissolved in ethyl acetate. This solution was washed twice with water and saturated potassium chloride solution. The organic phase was dried over sodium sulfate, filtered and then evaporated to dryness. The crude product thus obtained was chromatographically purified on silica gel, which was equilibrated with a mixture of dichloromethane / methanol / triethylamine (100/1/1), with a gradient of 1-5% methanol in dichloromethane. The fractions containing the product were combined and concentrated in vacuo. 1.28 g of product were obtained as a colorless foam.
MS (FAB) 571.2 (M + H) *
R _f = 0.28 (CH₂Cl₂: MeOH / 95: 5)

Example 25 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1-thyminyl) acetyl) glycine (Mmt-Aeg (T)) - OH

Das Produkt aus der obigen Reaktion wurde in einer Mischung aus 10 ml Dioxan und 2 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde auf 0°C gekühlt und tropfenweise 1 N Natronlauge zugegeben bis ein pH-Wert von 11 erreicht war. Nach 2 h Reaktionszeit war die Reaktion beendet und die Lösung wurde durch vorsichtige Zugabe von 2 N KHSO₄-Lösung auf pH 5 gestellt. Die Lösung wurde dreimal mit Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Phasen über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das so erhaltene Rohprodukt wurde an Kieselgel mit einem Gradienten von 5-10% Methanol und 1% Triethylamin in Dichlormethan chromatographisch gereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Durch Koevaporation mit Pyridin und anschließend Toluol wurde noch vorhandenes überschüssiges Triethylamin entfernt. Man erhielt 1.065 g Produkt als farblosen Schaum.
MS(ES-) 1112.0 (2M-H), 555.3 (M-H)
R_f 0.28 (CH₂Cl₂:MeOH/8 : 2)The product from the above reaction was dissolved in a mixture of 10 ml of dioxane and 2 ml of water. The solution was cooled to 0 ° C. and 1 N sodium hydroxide solution was added dropwise until a pH of 11 was reached. After a reaction time of 2 h, the reaction was complete and the solution was adjusted to pH 5 by carefully adding 2 N KHSO₄ solution. The solution was extracted three times with ethyl acetate, the combined organic phases were dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo. The crude product thus obtained was purified by chromatography on silica gel with a gradient of 5-10% methanol and 1% triethylamine in dichloromethane. The fractions containing the product were combined and concentrated in vacuo. Excess triethylamine still present was removed by coevaporation with pyridine and then toluene. 1,065 g of product were obtained as a colorless foam.
MS (ES-) 1112.0 (2M-H), 555.3 (MH)
R _f 0.28 (CH₂Cl₂: MeOH / 8: 2)

Example 26 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴-benzoyl) cytosyl) acetyl) glycine methyl ester Mmt-Aeg (C ^Bz ) -OMe)

1.10 g N-((4-Methoxyphenyl)-diphenylmethyl)-aminoethylglycinmethylester (2.72 mmol) wurden in 5 ml DMF gelöst und 0.444 g (2.72 mMol) 3,4-Dihydro- 3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin sowie 0.94 ml 4-Ethylmorpholin (5.45 mMol) zugegeben. Eine Suspension von 0.744 g (2.72 mMol) N⁴-Benzoyl-N¹ carboxymethylcytosin in 20 ml DMF wurde zugefügt, gefolgt von 0.51 ml (3.27 mMol) N,N′-Diisopropylcarbodiimid. Die Reaktionsmischung wurde 20 h bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde das Lösungsmittel im Vakuum abgezogen und der Rückstand in Ethylacetat gelöst. Diese Lösung wurde zweimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das so erhaltene Rohprodukt wurde an Kieselgel, das mit einer Mischung aus Dichlormethan/Methanol/Triethylamin (100/1/1) äquilibriert war, mit einem Gradienten von 1-2% Methanol in Dichlormethan chromatographisch gereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Man erhielt 0.96 g Produkt als gelblich-weißen Schaum.
MS(ES-) 658.6 (M-H)^-
R_f = 0.37 (CH₂Cl₂ : MeOH/95 : 5)1.10 g of N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyl) aminoethylglycine methyl ester (2.72 mmol) were dissolved in 5 ml of DMF and 0.444 g (2.72 mmol) of 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2. 3-benzotriazine and 0.94 ml of 4-ethylmorpholine (5.45 mmol) were added. A suspension of 0.744 g (2.72 mmol) of N⁴-benzoyl-N¹ carboxymethylcytosine in 20 ml of DMF was added, followed by 0.51 ml (3.27 mmol) of N, N′-diisopropylcarbodiimide. The reaction mixture was stirred at room temperature for 20 h. The solvent was then removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate. This solution was washed twice with water and once with saturated saline. The organic phase was dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The crude product thus obtained was chromatographically purified on silica gel, which had been equilibrated with a mixture of dichloromethane / methanol / triethylamine (100/1/1), with a gradient of 1-2% methanol in dichloromethane. The fractions containing the product were combined and concentrated in vacuo. 0.96 g of product was obtained as a yellowish-white foam.
MS (ES-) 658.6 (MH) ^-
R _f = 0.37 (CH₂Cl₂: MeOH / 95: 5)

Example 27 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴-benzoyl) cytosyl) acetyl) glycine (Mmt-Aeg (C ^Bz )) - OH

2.26 g (3.43 mMol) N-((4-Methoxyphenyl)-diphenylmethylamino)ethyl-N-((1-(N⁴ benzoyl)-cytosyl)acetyl)glycinmethylester wurden in 50 ml Dioxan gelöst. Die Lösung wurde auf 0°C gekühlt und 34.4 ml IN Natronlauge tropfenweise zugegeben. Nach 10 min wurde durch tropfenweise Zugabe von 1N KHSO₄ auf pH 5 gestellt, von ausgefallenen Salzen abfiltriert und mit wenig Dioxan nachgewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum eingedampft und der Rückstand zweimal mit Methanol und Dichlormethan koevaporiert. Das so erhaltene Rohprodukt wurde an Kieselgel mit einem Gradienten von 5-10% Methanol und 1% Triethylamin in Dichlormethan chromatographisch gereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Durch Koevaporation mit Pyridin und anschließend Toluol wurde noch vorhandenes überschüssiges Triethylamin entfernt. Man erhielt 1.306 g Produkt als fast weißen Schaum.
MS(ES-) 644.3 (M-H)^-
R_f =0.68 (CH₂Cl₂ : MeOH/8 : 2)2.26 g (3.43 mmol) of N - ((4-methoxyphenyl) -diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴ benzoyl) -cytosyl) acetyl) glycine methyl ester were dissolved in 50 ml of dioxane. The solution was cooled to 0 ° C. and 34.4 ml IN sodium hydroxide solution were added dropwise. After 10 min, the pH was adjusted to 5 by dropwise addition of 1N KHSO₄, the precipitated salts were filtered off and washed with a little dioxane. The combined filtrates are evaporated in vacuo and the residue is coevaporated twice with methanol and dichloromethane. The crude product thus obtained was purified by chromatography on silica gel with a gradient of 5-10% methanol and 1% triethylamine in dichloromethane. The fractions containing the product were combined and concentrated in vacuo. Excess triethylamine still present was removed by coevaporation with pyridine and then toluene. 1,306 g of product were obtained as an almost white foam.
MS (ES-) 644.3 (MH) ^-
R _f = 0.68 (CH₂Cl₂: MeOH / 8: 2)

Example 28 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴- (4-tert-but-ylbenzoyl) cytosyl) acetyl) glycine methyl ester (Mmt-Aeg (C ^tBuBz ) -OMe)

1.00 g (2.48 mMol) N-((4-Methox-phenyl)-diphenylmethyl)-aminoethylglycin methylester wurden in 5 ml DMF gelöst. Zu dieser Lösung werden nacheinander 0.403 g (2.48 mMol) 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin und 0.63 ml (4.96 mMol) 4-Ethylmorpholin gegeben. Dann fügt man eine Suspension von 0.740 g (2.48 mMol) N⁴-(4-tert-Butylbenzoyl)-N¹-carboxymethyl-cytosin in 5 ml DMF gefolgt von 0.47 ml N,N′-Diisopropylcarbodiimid hinzu. Die Mischung wird 20 h bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in Ethylacetat gelöst, mit Wasser, gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird mit Kieselgelgel-Säule, die mit einer Mischung aus Dichlormethan/Ethylacetat/Triethylamin (50/50/1) äquilibriert wurde und Dichlormethan/Ethylacetat (1/1) als Elutionsmittel gereinigt. Die vereinigten, das Produkt enthaltenden Fraktionen werden im Vakuum eingeengt. Man erhielt das Produkt als gelblich-weißen Schaum in einer Ausbeute von 1.635 g.
MS (FAB/MeOH, NBA, LiCl) 722.5 (M+Li)⁺
R_f = 0.31 (CH₂Cl₂ : Ethylacetat/1 : 1)1.00 g (2.48 mmol) of N - ((4-methoxphenyl) diphenylmethyl) aminoethylglycine methyl ester was dissolved in 5 ml of DMF. 0.403 g (2.48 mmol) of 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine and 0.63 ml (4.96 mmol) of 4-ethylmorpholine are added to this solution in succession. Then add a suspension of 0.740 g (2.48 mmol) of N⁴- (4-tert-butylbenzoyl) -N¹-carboxymethyl-cytosine in 5 ml of DMF followed by 0.47 ml of N, N'-diisopropylcarbodiimide. The mixture is stirred at room temperature for 20 h and then evaporated to dryness in vacuo. The residue is dissolved in ethyl acetate, washed with water, saturated sodium chloride solution, dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The crude product is purified using a silica gel column which has been equilibrated with a mixture of dichloromethane / ethyl acetate / triethylamine (50/50/1) and dichloromethane / ethyl acetate (1/1) as the eluent. The combined fractions containing the product are concentrated in vacuo. The product was obtained as a yellowish-white foam in a yield of 1,635 g.
MS (FAB / MeOH, NBA, LiCl) 722.5 (M + Li) ⁺
R _f = 0.31 (CH₂Cl₂: ethyl acetate / 1: 1)

Example 29 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴- (4-tert-but-ylbenzoyl) cytosyl) acetyl) glycine (Mmt-Aeg (C ^tBuBz ) -OH)

1.63 g (2.28 mMol) N-((4-Methoxyphenyl)-diphenylmethylamino)ethyl-N-((1-(N⁴- (4-tert-butylbenzoyl)-cytosyl)acetyl)glycin-methylester wurden in einer Mischung aus 10 ml Dioxan und 1 ml Wasser gelöst und bei 0°C unter Rühren tropfenweise mit 4.56 ml IN NaOH versetzt. Nach 2 h wurde durch tropfenweise Zugabe von 1N KHSO₄der pH auf 5 gestellt, von ausgefallenen Salzen abfiltriert und mit wenig Dioxan nachgewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum eingedampft und der Rückstand zweimal mit Methanol und Dichlormethan koevaporiert. Das so erhaltene Rohprodukt wurde an Kieselgel mit einem Gradienten von 2-10% Methanol und 1% Triethylamin in Dichlormethan chromatographisch gereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Durch Koevaporation mit Pyridin und anschließend Toluol wurde noch vorhandenes überschüssiges Triethylamin entfernt. Man erhielt 0.831 g Produkt als fast weißen Schaum.
MS(ES-) 700.7 (M-H)^-
R_f = 0.28 (CH₂Cl₂ : MeOH/9 : 1), 0.63 (CH₂Cl₂ : MeOH/7 : 3)1.63 g (2.28 mmol) of N - ((4-methoxyphenyl) -diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴- (4-tert-butylbenzoyl) -cytosyl) acetyl) glycine methyl ester were mixed in a mixture of 10 ml Dioxane and 1 ml of water were dissolved and 4.56 ml of IN NaOH were added dropwise with stirring at 0 ° C. After 2 h, the pH was adjusted to 5 by dropwise addition of 1N KHSO₄, the precipitated salts were filtered off and washed with a little dioxane. The combined filtrates were evaporated in vacuo and the residue coevaporated twice with methanol and dichloromethane The crude product thus obtained was purified by chromatography on silica gel with a gradient of 2-10% methanol and 1% triethylamine in dichloromethane. The fractions containing the product were combined and concentrated in vacuo. Excess triethylamine still present was removed by coevaporation with pyridine and then toluene, giving 0.831 g of product as an almost white foam.
MS (ES-) 700.7 (MH) ^-
R _f = 0.28 (CH₂Cl₂: MeOH / 9: 1), 0.63 (CH₂Cl₂: MeOH / 7: 3)

Example 30 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyloxy) ethyl-N - ((1-thyminyl) acetyl) g-lycine (Mmt-Oeg (T) -OH)

0.5 g (1.28 mMol) N-((4-Methoxyphenyl)-diphenylmethyloxy)ethylglycin wurden in 10 ml DMF suspendiert und 0.47 ml (1.92 mMol) BSA wurden tropfenweise zugegeben. Nacheinander werden dann 0.7 ml (5.1 mMol) Triethylamin und 0.26 g (1.28 mMol) Chlorcarboxymethylthymin zugefügt. Die Reaktionsmischung wird 4 h bei Raumtemperatur gerührt, dann weitere 65 mg (0.32 mMol) Chlorcarboxymethylthymin zugegeben und noch für 16 h gerührt. Danach zog man das Lösungsmittel im Vakuum ab und reinigte das Rohprodukt an einer Kieselgelsäule mit einem Gradienten von 5-15% Methanol und 1% Triethylamin in Dichlormethan. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene bräunliche Öl wurde in wenig Dichlormethan gelöst und durch Zugabe von Diethylether das Produkt ausgefällt.
Man erhielt das Produkt als fast weißes Pulver.
Ausbeute: 0.219 g
MS(ES-) 556.3 (M-H)^-
R_f =0.54 (CH₂Cl₂ : MeOH/8 : 2)0.5 g (1.28 mmol) of N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyloxy) ethylglycine was suspended in 10 ml of DMF and 0.47 ml (1.92 mmol) of BSA was added dropwise. 0.7 ml (5.1 mmol) of triethylamine and 0.26 g (1.28 mmol) of chlorocarboxymethylthymine are then added in succession. The reaction mixture is stirred at room temperature for 4 h, then a further 65 mg (0.32 mmol) of chlorocarboxymethylthymine are added and stirring is continued for 16 h. The solvent was then removed in vacuo and the crude product was purified on a silica gel column using a gradient of 5-15% methanol and 1% triethylamine in dichloromethane. The fractions containing the product were combined and concentrated in vacuo. The brownish oil obtained was dissolved in a little dichloromethane and the product was precipitated by adding diethyl ether.
The product was obtained as an almost white powder.
Yield: 0.219 g
MS (ES-) 556.3 (MH) ^-
R _f = 0.54 (CH₂Cl₂: MeOH / 8: 2)

Example 31 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴- (4-methoxyb-enzoyl) cytosyl) acetyl) glycine methyl ester (Mmt-Aeg (CHMeOBzH) -OMe)

N-((4-methoxyphenyl)-diphenylmethyl)-aminoethylglycinmethylester (4.00 g; 9.9 mmol) werden in DMF (50 ml) gelöst. Zu dieser Lösung gibt man nacheinander 4-Ethylmorpholin (3.44 ml), 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3- benzotriazin (1.62 g), N⁴-(4-methoxybenzoyl)-N¹-carboxymethylcytosin (3.00 g; 9.9 mmol) und N,N′-Diisopropylcarbodiimid (1.87 ml). Die Reaktionsmischung wird 48 h bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft und der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen. Diese Lösung wird zweimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Kaliumchloridlösung extrahiert. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie an Kieselgel, das vorher mit Dichlormethan enthaltend 1% Triethylamin äquilibriert worden ist. Die Elution erfolgt mit einem Gradienten von 0-2% Methanol in Dichlormethan enthaltend 1% Triethylamin. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum auf kleines Volumen eingeengt. Der hierbei ausfallende Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Man erhält die gewünschte Verbindung als hellgelben Schaum.
Ausbeute: 6.72 g
MS (FAB/MeOH, NBA, LiCl) 696.3 (M+Li)⁺
R_f =0.59 (Dichlormethan : Methanol/9 : 1) N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyl) aminoethylglycine methyl ester (4.00 g; 9.9 mmol) are dissolved in DMF (50 ml). 4-Ethylmorpholine (3.44 ml), 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine (1.62 g), N⁴- (4-methoxybenzoyl) -N¹- carboxymethylcytosine (3.00 g; 9.9 mmol) and N, N'-diisopropylcarbodiimide (1.87 ml). The reaction mixture is stirred for 48 h at room temperature. The solvent is then evaporated off in vacuo and the residue is taken up in ethyl acetate. This solution is extracted twice with water and once with saturated potassium chloride solution. The organic phase is dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The purification is carried out by means of column chromatography on silica gel which has previously been equilibrated with dichloromethane containing 1% triethylamine. Elution is carried out using a gradient of 0-2% methanol in dichloromethane containing 1% triethylamine. The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo to a small volume. The resulting dicyclohexylurea is filtered off and the filtrate is evaporated in vacuo. The desired compound is obtained as a light yellow foam.
Yield: 6.72 g
MS (FAB / MeOH, NBA, LiCl) 696.3 (M + Li) ⁺
R _f = 0.59 (dichloromethane: methanol / 9: 1)

Example 32 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N - ((1- (N⁴- (4-methoxyb-enzoyl) cytosyl) acetyl) glycine (Mmt-Aeg (C ^MeOBz ) -OH)

N-((4-methoxyphenyl)-diphenylmethyl)-aminoethyl-N-((1-(N⁴-(4- methoxybenzoyl))-cytosyl)acetyl)glycinmethylester (6.60 g; 9. 6 mmol) werden in einer Mischung aus Dioxan (50 ml) und Wasser (50 ml) gelöst und bei 0°C tropfenweise mit 1M wäßriger Natronlauge (15 ml) in zwei Teilen versetzt. Nach 2 h Reaktionszeit wird die Lösung durch Zugabe von Ionenaustauscher (Dowex AG 50WX4, Pyridinium-Form) neutralisiert. Der Ionenaustauscher wird abfiltriert und mit wäßrigem Dioxan und Methanol nachgewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum zur Trockene eingedampft und durch Säulenchromatographie an Kieselgel durch Elution mit 10% Methanol in Dichlormethan (mit 1% Triethylamin) gereinigt. Man erhält das Produkt als gelblich-weißen Schaum. Nachumkristallisation aus Ethylacetat erhält man ein farbloses Pulver.
Ausbeute: 4.00 g
MS(ES-): 674.1 (M-H)^-
R_f = 0.39 (Dichlormethan : Methanol/9 : 1)N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyl) aminoethyl-N - ((1- (N⁴- (4-methoxybenzoyl)) cytosyl) acetyl) glycine methyl ester (6.60 g; 9. 6 mmol) are mixed in a mixture of dioxane (50 ml) and water (50 ml) were dissolved and 1M aqueous sodium hydroxide solution (15 ml) was added dropwise at 0 ° C. in two parts. After a reaction time of 2 h, the solution is neutralized by adding ion exchanger (Dowex AG 50WX4, pyridinium form). The ion exchanger is filtered off and washed with aqueous dioxane and methanol. The combined filtrates are evaporated to dryness in vacuo and purified by column chromatography on silica gel by elution with 10% methanol in dichloromethane (with 1% triethylamine). The product is obtained as a yellowish-white foam. After recrystallization from ethyl acetate, a colorless powder is obtained.
Yield: 4.00 g
MS (ES-): 674.1 (MH) ^-
R _f = 0.39 (dichloromethane: methanol / 9: 1)

Example 33 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N- (9- (N²- (isobutyryl) - guanosyl) acetyl) glycine methyl ester (Mmt-Aeg (G ^iBu ) -OMe)

N-((4-methoxyphenyl)-diphenylmethyl)-aminoethylglycinmethylester (1.45 g; 3.59 mmol) werden in DMF (7 ml) gelöst. Zu dieser Lösung gibt man nacheinander 4-Ethylmorpholine (1.24 ml; 7.17 mmol), 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4- oxo-1,2,3-benzotriazin (0.585 g; 3. 59 mmol), N²-(isobutyryl)-N⁹ carboxymethylguanin (1.00 g; 3. 59 mmol) und N,N′-Diisopropylcarbodiimid (0.67 ml; 4.31 mmol). Die Reaktionsmischung wird 48 h bei 4°C gerührt. Dann wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft und der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen. Diese Lösung wird zweimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Kaliumchloridlösung extrahiert. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der verbleibende gelbe Schaum wird in wenig Ethylacetat gelöst und mit Eis gekühlt um noch enthaltenen Dicyclohexylharnstoff auszufällen. Nach Filtration wird das Filtrat im Vakuum eingeengt. Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie an Kieselgel, das vorher mit Dichlormethan:Ethylacetat 1/1 enthaltend 1% Triethylamin äquilibriert worden ist. Man eluiert mit Dichlormethan:Ethylacetat 1/1. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Man erhält die gewünschte Verbindung als hellgelben Schaum.
Ausbeute: 1.181 g
MS (FAB/MeOH, NBA, LiCl) 678.3 (M+2Li-H)⁺; 672.3 (M+Li)⁺
R_f = 0.13 (Dichlormethan : Methanol/95 : 5)N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyl) aminoethylglycine methyl ester (1.45 g; 3.59 mmol) is dissolved in DMF (7 ml). 4-Ethylmorpholines (1.24 ml; 7.17 mmol), 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine (0.585 g; 3. 59 mmol), N²- (isobutyryl) -N⁹ carboxymethylguanine (1.00 g; 3. 59 mmol) and N, N'-diisopropylcarbodiimide (0.67 ml; 4.31 mmol). The reaction mixture is stirred at 4 ° C. for 48 h. The solvent is then evaporated off in vacuo and the residue is taken up in ethyl acetate. This solution is extracted twice with water and once with saturated potassium chloride solution. The organic phase is dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The remaining yellow foam is dissolved in a little ethyl acetate and cooled with ice to precipitate any dicyclohexylurea that is still present. After filtration, the filtrate is concentrated in vacuo. The purification is carried out by means of column chromatography on silica gel, which has previously been equilibrated with dichloromethane: ethyl acetate 1/1 containing 1% triethylamine. It is eluted with dichloromethane: ethyl acetate 1/1. The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo. The desired compound is obtained as a light yellow foam.
Yield: 1,181 g
MS (FAB / MeOH, NBA, LiCl) 678.3 (M + 2Li-H) ⁺; 672.3 (M + Li) ⁺
R _f = 0.13 (dichloromethane: methanol / 95: 5)

Example 34 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N- (9- (N²- (isobutyryl) - guanosyl) acetyl) glycine (Mmt-Aeg (G ^iBu ) -OH)

N-((4-methoxyphenyl)-diphenylmethylamino)ethyl-N-(9-(N²-(isobutyryl)- guanosyl)acetyl)glycinmethylester (1.15 g; 1.72 mmol) werden in Dioxan (10 ml) gelöst und über einen Zeitraum von 2.5 h bei 0°C tropfenweise mit 1M wäßriger Natronlauge (10.32 ml) in 5 Teilen versetzt. Nach weiteren 2 h Reaktionszeit bei Raumtemperatur wird die Lösung durch tropfenweise Zugabe von 2M wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung auf pH 5 gestellt. Die ausgefallenen Salze werden abfiltriert und mit wenig Dioxan nachgewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum zur Trockene eingedampft und der Rückstand je zweimal mit Ethanol sowie Dichlormethan:Methanol 1/1 koevaporiert. Die Reinigung erfolgt durch Säulenchromatographie an Kieselgel durch Elution mit einem Gradienten von 10-20% Methanol in Dichlormethan (mit 1% Triethylamin). Man erhält das Produkt als weißen Schaum.
Ausbeute: 1.229 g
MS (ES-): 650.3 (M-H)^-
R_f = 0.25 (Dichlormethan : Methanol/8 : 2)N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N- (9- (N²- (isobutyryl) guanosyl) acetyl) glycine methyl ester (1.15 g; 1.72 mmol) is dissolved in dioxane (10 ml) and over a period of 2.5 hours at 0 ° C. 1M aqueous sodium hydroxide solution (10.32 ml) was added dropwise in 5 parts. After a further 2 h reaction time at room temperature, the solution is adjusted to pH 5 by dropwise addition of 2M aqueous potassium hydrogen sulfate solution. The precipitated salts are filtered off and washed with a little dioxane. The combined filtrates are evaporated to dryness in vacuo and the residue is coevaporated twice with ethanol and dichloromethane: methanol 1/1. The purification is carried out by column chromatography on silica gel by elution with a gradient of 10-20% methanol in dichloromethane (with 1% triethylamine). The product is obtained as a white foam.
Yield: 1,229 g
MS (ES-): 650.3 (MH) ^-
R _f = 0.25 (dichloromethane: methanol / 8: 2)

Example 35 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N- (9- (N⁶- (4-methoxybenzoyl) adenosyl) acetyl) glycine methyl ester (Mmt-Aeg (A ^MeOBz ) -OMe)

N-((4-methoxyphenyl)-diphenylmethyl)-aminoethylglycinmethylester (1.24 g; 3.06 mmol) werden in DMF (7 ml) gelöst. Zu dieser Lösung gibt man nacheinander 4-Ethylmorpholin (1.06 ml; 6.12 mmol), 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4- oxo-1,2,3-benzotriazin (0.498 g; 3.06 mmol), N⁶-(4-methoxybenzoyl)-N⁹ carboxymethyadenin (1.00 g; 3.06 mmol) and N,N′-Diisopropylcarbodiimid (0.58 ml; 3.67 mmol).N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethyl) aminoethylglycine methyl ester (1.24 g; 3.06 mmol) are dissolved in DMF (7 ml). One gives to this solution sequentially 4-ethylmorpholine (1.06 ml; 6.12 mmol), 3,4-dihydro-3-hydroxy-4- oxo-1,2,3-benzotriazine (0.498 g; 3.06 mmol), N⁶- (4-methoxybenzoyl) -N⁹ carboxymethyadenine (1.00 g; 3.06 mmol) and N, N'-diisopropylcarbodiimide (0.58 ml; 3.67 mmol).

Die Reaktionsmischung wird 48 h bei 4°C gerührt. Dann wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft und der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen. Diese Lösung wird zweimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Kaliumchloridlösung extrahiert. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der verbleibende gelbe Schaum wird in wenig Ethylacetat gelöst und mit Eis gekühlt um noch enthaltenen Dicyclohexylharnstoff auszufällen. Dieser wird abfiltriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie an Kieselgel, das vorher mit Dichlormethan:Ethylacetat 1/1 enthaltend 1% Triethylamin äquilibriert worden ist. Die Elution erfolgt mit Dichlormethan : Ethylacetat 1/1. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Man erhält die gewünschte Verbindung als hellgelben Schaum.
Ausbeute: 1.752 g
MS (FAB/MeOH, NBA, LiCl) 720.3 (M+Li)⁺
R_f = 0.21 (Dichlormethan : Methanol/95 : 5)The reaction mixture is stirred at 4 ° C. for 48 h. The solvent is then evaporated off in vacuo and the residue is taken up in ethyl acetate. This solution is extracted twice with water and once with saturated potassium chloride solution. The organic phase is dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The remaining yellow foam is dissolved in a little ethyl acetate and cooled with ice to precipitate any dicyclohexylurea that is still present. This is filtered off and the filtrate is concentrated in vacuo. The purification is carried out by means of column chromatography on silica gel, which has previously been equilibrated with dichloromethane: ethyl acetate 1/1 containing 1% triethylamine. Elution is carried out with dichloromethane: ethyl acetate 1/1. The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo. The desired compound is obtained as a light yellow foam.
Yield: 1,752 g
MS (FAB / MeOH, NBA, LiCl) 720.3 (M + Li) ⁺
R _f = 0.21 (dichloromethane: methanol / 95: 5)

Example 36 N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N- (9- (N⁶- (4-methoxybenzoyl) adenosyl) acetyl) glycine (Mmt-Aeg (A ^MeOBz ) -OH)

N-((4-methoxyphenyl)-diphenylmethylamino)ethyl-N-(9-(N⁶-(4-methoxybe-nzoyl) adenosyl)acetyl)glycinmethy lester (1.70 g; 2.38 mmol) werden in Dioxan (10 ml) gelöst und über einen Zeitraum von 2.5 h bei 0°C tropfenweise mit 1M wäßriger Natronlauge (10.32 ml) in 5 Teilen versetzt. Nach weiteren 2h Reaktionszeit bei Raumtemperatur wird die Lösung durch tropfenweise Zugabe von 2M wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung auf pH 5 gestellt. Die ausgefallenen Salze werden abfiltriert und mit wenig Dioxan nachgewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum zur Trockene eingedampft und der Rückstand je zweimal mit Ethanol sowie Dichlormethan:Methanol 1/1 koevaporiert. Die Reinigung erfolgt durch Säulenchromatographie an Kieselgel durch Elution mit einem Gradienten von 10-20% Methanol in Dichlormethan (mit 1% Triethylamin). Man erhält das Produkt als weißen Schaum.
Ausbeute: 1.619 g
MS (ES-): 698.3(M-H)^-
R_f = 0.10 (Dichlormethan : Methanol/8 : 2)N - ((4-methoxyphenyl) diphenylmethylamino) ethyl-N- (9- (N⁶- (4-methoxybenzoyl) adenosyl) acetyl) glycine methyl ester (1.70 g; 2.38 mmol) is dissolved in dioxane (10 ml) and 1M aqueous sodium hydroxide solution (10.32 ml) in 5 parts was added dropwise over a period of 2.5 h at 0 ° C. After a further 2 h reaction time at room temperature, the solution is adjusted to pH 5 by dropwise addition of 2M aqueous potassium hydrogen sulfate solution. The precipitated salts are filtered off and washed with a little dioxane. The combined filtrates are evaporated to dryness in vacuo and the residue is coevaporated twice with ethanol and dichloromethane: methanol 1/1. The purification is carried out by column chromatography on silica gel by elution with a gradient of 10-20% methanol in dichloromethane (with 1% triethylamine). The product is obtained as a white foam.
Yield: 1,619 g
MS (ES-): 698.3 (MH) ^-
R _f = 0.10 (dichloromethane: methanol / 8: 2)

Claims

1. Compound of formula I. wherein
PG for an amino protecting group labile against weak acids from
Urethane type or trityl type,
X for NH, O or S,
Y represents CH₂, NH or O, and
B 'represent bases customary in nucleotide chemistry, their exocyclic bases
Amino or hydroxyl groups through suitable known protective groups
are protected,
as well as their salts.

2. A compound of formula I according to claim 1, wherein
PG for a urethane-type amino protecting group labile against weak acids from the series 1- (1-adamantyl) 1-methylethoxycarbonyl (Adpoc), 1- (3,5-di-tert-butylphenyl) 1-methylethoxycarbonyl (t-Bumeoc) and 1-methyl-1 (4-biphenyl) ethyloxycarbonyl (Bpoc) or of the trityl type from the series triphenylmethyl (Trt), (4-methoxyphenyl) diphenylmethyl (Mmt), (4-methylphenyl) diphenylmethyl (Mtt), di- ( 4-methoxyphenyl) phenylmethyl (Dmt) and 9- (9-phenyl) xanthenyl (Pixyl), and
B ′ for a natural nucleobase such as adenine, cytosine, guanine, thymine and uracil or an unnatural nucleobase such as purine, 2,6-diaminopurine, 7-deazaadenine, 7-deazaguanine, N⁴N⁴-ethanocytosine, N⁸N⁶-ethano-2.6-diaminopurine, 5- Methylcytosine, 5- (C₂-C₆) alkynyl-uracil, 5- (C₂-C₆) -alkynyl cytosine, 5-fluoro-uracil or pseudoisocytosine, the exocyclic amino or hydroxyl groups of which are protected by suitable known protective groups.

3. A process for the preparation of a compound of formula I with Y = CH₂ according to claim 1 or 2 ', characterized in that

a) a compound of formula II wherein
PG and X are as defined in claim 1 or 2,
R¹ is hydrogen or an ester protecting group,
with a compound of formula III wherein
B 'is as defined in claim 1 or 2 and
Y represents CH₂,
at 0-45 ° C in a suitable solvent or mixtures of these solvents using a coupling reagent customary in peptide chemistry to give a compound of formula IV wherein
PG, X, B ′ and R¹ are as defined above,
implemented and then this compound by splitting off the ester protecting group R¹ under weakly alkaline conditions with alkali metal hydroxide or also enzymatically with the aid of esterases or lipases at 0-50 ° C in a suitable solvent or mixtures of these solvents into a compound of formula I, or
b) a compound of formula II wherein
PG and X are as defined above and
R¹ represents hydrogen or a temporary silyl protective group,
with a compound of formula VB'-CH₂-CO-R² (V), wherein
B 'is as defined above and
R² is halogen or the rest of an active ester,
at 0-40 ° C in a suitable solvent or mixtures of these solvents, where appropriate the temporary protection of the acid function in the compound of the formula II by reaction with customary silylating reagents and the cleavage of this temporary protective group - after the reaction with the compound of the formula V. - Can be done by adding water or alcohols to the reaction mixture, or
c) a compound of formula II wherein
PG and X are as defined above and
R¹ represents an ester protecting group,
with a halogen-acetic acid derivative in a suitable solvent with an auxiliary base for the compound of formula VI wherein
Hal means Cl, Br or I and
PG, X and R 1 are as defined above,
implements
this intermediate compound of formula VI with the optionally protected nucleobase B 'and an auxiliary base in a suitable solvent for the compound of formula IV implements
then this compound is converted into a compound of the formula I by splitting off the ester protecting group R 1 with an alkali metal hydroxide solution or also enzymatically with the aid of esterases or lipases at 0-50 ° C. in a suitable solvent or mixtures of these solvents.

4. A process for the preparation of a compound of formula I with Y = O or NH according to claim 1 or 2, characterized in that a compound of formula II wherein
PG and X are as defined in claim 1 or 2 and
R¹ represents an ester protecting group or a temporary ester protecting group,
with a compound of formula VIIB'-Y-CO-R³ (VII), wherein
B ′ is as defined above,
YO or NH means and
R³ means Cl, ONp or ONSu,
at 0-40 ° C in a suitable solvent or mixtures of these solvents and then cleaving the ester protecting group R¹ with alkali metal hydroxide or also enzymatically with the aid of esterases or lipases at 0-50 ° C in a suitable solvent or mixtures of these solvents.

5. Use of the compounds of formula I according to claim 1 or 2 for Manufacture of PNA and PNA / DNA hybrids.