DE4032187C2 - N-Retinoyl-L-aminomercapto-Verbindungen und Zwischenprodukte, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung - Google Patents

N-Retinoyl-L-aminomercapto-Verbindungen und Zwischenprodukte, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung

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Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung, Zwischenverbindungen und Verwendungen dieser neuen Verbindungen.
Vitamin A und seine Verbindungen regulieren durch Beeinflussung der Genexpression das Wachstum und die Differenzierung verschiedenster Gewebe (Übersicht bei Sherman, M. I.: Retinoids in differentiation and disease; Boca Raton, Florida, CRC Press, Review, (1986) und bei Roberts, A. B., Sporn, M. B.: Cellular biology and biochemistry of retinoids; in: M. B. Sporn: The Retinoids; Orlando, Academic Press (1984)).
Diese Wirkung erstreckt sich besonders auch auf neoplastische Zellen (Sherman, M. I.: wie oben zitiert), so daß das Vitamin zur Therapie von malignen Erkrankungen und Differenzierungsstörungen, besonders im Bereich der Schleimhäute des Gastroinstestinal-, Tracheobronchial- und Urogenitaltraktes, eingesetzt wird (Main, A. N.; Mills, R. R.; Russell, R. I.; Bronte-Stewart, J.; Nelson, L. M.; McLelland, A.; Shenkin, A.: Vitamin A deficiency in Crohn′s disease. Gut 24, (12) 1169-1175 (1983)). Insbesondere zur Prävention von Differenzierungsstörungen der Schleimhäute ist das Vitamin seit geraumer Zeit verstärkt eingesetzt worden (Clark J. N. et al.: Reestablishment of a mucociliary epithelium intracheal organ cultures. Eur. J. Cell Biol. 21, 261-268 (1980) und Pinnock et al.: Vitamin A status in children who are prone to respiratory tract infections. Aust. Pediatr. J. 22, 95-99 (1986)). Von Nachteil sind die erforderlichen hohen Dosierungen mit teilweise starken Nebenwirkungen (Biesalski H. K.: Comparative assessment of the toxicology of vitamin A and retinoids in man. Toxicology 57, 117-161 (1989)), wie auch die Schwierigkeit, die Verbindung in ausreichender Konzentration an den Wirkort zu bringen. Aus diesem Grunde wurden auch bisher schon geeignete Vitamin-A-Verbindungen gesucht, bei denen dieser Nachteil in geringerem Umfang oder überhaupt nicht gegeben ist.
Aus der US 4 618 685 sind N-Homocystein-thiolactonyl- retinamidverbindungen und ihre Verwendung als antineoplastische Arzneimittel bekannt. Weitere Retinsäureverbindungen sind in "Arzneimittel-Fortschritte 1972 -1985", herausgegeben von A. Kleemann, E. Lindner und J. Engel, Verlag Chemie und aus der Veröffentlichung Organicchemical drugs and their synonyms (an international survey) von M. Negwer, Akademie-Verlag Berlin, 1987, Seite 541 und aus den Chemical Abstracts Volume 96, 1982, 123037 g bekannt. Die erfindungsgemäß bereitgestellten Verbindungen werden hierdurch weder vorweggenommen noch nahegelegt.
Die US 4,900,478 offenbart Retinoide, die jedoch die erfindungsgemäß offenbarten Erfindungen nicht vorwegnehmen oder nahelegen.
Es ist eine Aufgabe der Erfindung, neue substituierte Retinsäureverbindungen bereitzustellen, die aufgrund ihrer strukturellen Besonderheit für ihren therapeutischen Einsatz vorteilhafte pharmakokinetische Eigenschaften aufweisen und die vorstehend aufgeführten Nachteile der Vitamin-A- Verbindungen nach dem Stand der Technik vermeiden.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch N-Retinoyl-L- aminomercapto-Verbindungen der folgenden allgemeinen Generalstrukturformel (GS)
und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindungen gelöst, wobei
R₁ = H,
R₂ = H, OH, CH₃, C₂H₅, C₃H₇ oder =O,
R₃ = H, OH oder =O,
R₄ = H oder eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-3 C-Atomen,
R₅ = H oder eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-6 C-Atomen,
R₆ = eine Alkylen- oder Alkenylengruppe mit je 1-6 C- Atomen und fakultativ einer Alkyl- oder Alkenylseitenkette,
R₇ = H, eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-4 C-Atomen, Hydroxyl-, Carboxyl- oder alpha- Aminocarboxylgruppen oder ein weiteres Schwefelatom tragen kann, oder ein zweites Molekül entsprechend der oben angegebenen allgemeinen Strukturformel, das mit dem ersten über eine Disulfid- oder Thioetherbrücke verknüpft ist,
R₈ = -COOX mit X = Wasserstoff oder eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-6 C-Atomen, oder eine Hydroxyalkyl- oder Hydroxyalkenylgruppe mit 1-4 C-Atomen, oder eine Formaldehyd- oder Acetaldehyd- oder Propionaldehyd- oder n-Butyraldehydgruppe.
R₁, R₂ und R₃ werden bevorzugt aus folgenden Kombinationen ausgewählt:
Aus den erfindungsgemäß bereitgestellten N-Retinoyl-L- aminomercaptoverbindungen sind insbesondere folgende Verbindungen sowie deren physiologisch verträgliche Salze bevorzugt:
Die erfindungsgemäße Verbindung einer S-haltigen Aminosäure mit einem Vitamin-A-Derivat hat gezeigt, daß die zellulären Konzentrationen des Vitamins durch Erleichterung der Aufnahme bei gleichzeitig niedrigeren absoluten Konzentrationen gesteigert werden können. Die Steigerung der zellulären Aufnahme ergibt sich aus der Verbesserung des Membrantransfers, während die Erniedrigung der Dosierung zur Erzielung eines Effektes durch die besondere Wirkung der Cysteinverbindung auf Differenzierungsvorgänge einerseits und Sekretionsvorgänge andererseits zurückgeführt werden kann.
I. Darstellung von N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (V)
Es handelt sich dabei um diejenigen Verbindungen, die sich aus der Menge der durch die allgemeine Generalformel (GS) beschriebenen Verbindungen dadurch herausheben, daß für sie R₇ = H und R₈ = -COOH ist.
1. Allgemeiner Syntheseweg
Ausgangsstoffe sind schwefelhaltige L-Aminosäuren der allgemeinen Strukturformel (S1)
sowie Retinsäure-Derivate der allgemeinen Strukturformel (III)
  • 1.1. Im ersten Schritt müssen die freien Carboxylfunktionen von (S1) geschützt werden, insbesondere durch Überführung in einen Ester, vorzugsweise durch azeotrope Veresterung mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäuremonohydrat in einem geeigneten unpolaren oder schwach polaren Lösemittel, bevorzugt Benzol oder Toluol. Dabei erhält man die Hydro-p-toluolsulfonate der entsprechenden Allylester der allgemeinen Strukturformel (I)
  • 1.2. Nach der Einführung der Schutzgruppen wird die Kupplungsreaktion von (I) mit (III) vorgenommen, was bevorzugt unter Aktivierung der Carboxylgruppe von (III) erfolgt. Dies geschieht vorzugsweise durch Umsetzung der beiden Reaktionspartner in einem geeigneten schwach polaren Lösemittel, bevorzugt Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, in Gegenwart von
    • - Triethylamin und EEDQ (1-Ethoxycarbonyl-2- ethoxy-1,2-dihydrochinolin) oder
    • - 2-Nitrophenol und DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • - Triethylamin, 1-Hydroxy-benzotriazol und DCC (N,N- Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • - DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) alleine.
  • Die Reaktion muß unter Licht- und Luftabschluß ablaufen. Sie führt zu Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (II)
  • 1.3. Im nächsten Syntheseschritt müssen die Allylester- Schutzgruppen der Verbindung (II) unter geeigneten, schonenden Bedingungen entfernt werden. Hierzu ist insbesondere eine katalytische Spaltung geeignet, vorzugsweise mit Tetrakis-(triphenylphosphin)- palladium (O) oder (Tris-(triphenylphosphin)-rhodium (I) chlorid) in Gegenwart von Morpholin oder Dimedon oder N,N-Dimethylbarbitursäure als Abfangnucleophil und in einem Reaktionsmedium aus wasser- und sauerstofffreiem dipolar aprotischen Lösemittel, bevorzugt Tetrahydrofuran. Dadurch erhält man die entsprechende Verbindung der allgemeinen Strukturformel (IV):
  • 1.4. Um zum gewünschten Endprodukt zu gelangen, muß in der Verbindung der allgemeinen Formel (IV) die Disulfidbrücke gespalten werden, um zwei identische Moleküle zu erhalten. Dies wird insbesondere durch Reduktion der Disulfidbrücke in basischem Medium erreicht, vorzugsweise mit β-Mercaptoethanol oder Thioglycolsäure, wobei β-Mercaptoethanol bevorzugt wird. Dies führt zum entsprechenden Endprodukt der allgemeinen Strukturformel (V):
2. Spezieller Syntheseweg
Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (V) bevorzugt wie folgt dargestellt:
  • 2.1. Synthese von Hydro-p-toluolsulfonaten der Allylester von L-Aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (I):
    Substanzen der allgemeinen Strukturformel (S1), insbesondere L-Cystin, werden in einem geeigneten unpolaren oder schwach polaren Lösemittel, das ein großes "Wasserschleppvermögen" aufweist, vorzugsweise Benzol oder Toluol, gelöst. Die Lösung wird mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäuremonohydrat versetzt und unter Rückfluß am Wasserabscheider erhitzt. Die Reaktionsdauer richtet sich nach der abgeschiedenen Wassermenge. Sofern das für diese azeotrope Veresterung berechnete abgeschiedene Wasservolumen erreicht ist, kann die Umsetzung beendet werden. Das Lösemittel wird abgezogen und der Rückstand mittels Umkristallisation oder Säulenchromatographie gereinigt.
  • 2.2. Synthese von N′,N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäurediallylestern und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (II).
    Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (I) mit Retinsäurederivaten der allgemeinen Strukturformel (III) nach einer der als "Variante a) bis d)" beschriebenen Verfahrensweisen umgesetzt. Variante a):
    Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (I) werden in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel aufgenommen und mit Triethylamin und EEDQ (1-Ethoxy- carbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin) versetzt. Unter Rühren wird eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel zum Ansatz gegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter Licht- und Luftausschluß gerührt. Den Reaktionsverlauf kontrolliert man mittels Dünnschichtchromatographie. Es kann mehrere Stunden dauern, bis die Reaktion beendet ist. Der Ansatz wird mit 0,5 n Salzsäure, 0,5 n NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen. Die Trocknung erfolgt über MgSO₄. Nach dem Einengen wird der Rückstand mittels Umkristallisation oder Säulenchromatographie gereinigt.Variante b):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (I) werden nach dem Lösen in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, mit 2-Nitrophenol und einer geringen Menge an DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) versetzt. Zu dieser Lösung gibt man eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in dem obigen Lösemittel. Unter Licht- und Luftausschluß wird weiter gerührt. Der Reaktionsverlauf wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Die Reaktion kann einige Stunden benötigen. Die Lösung wird danach eingeengt, in einem organischen Lösemittel (dipolar aprotisch) aufgenommen und von möglicherweise ausgefallenem Harnstoff abgetrennt. Die Lösung wird mit MgSO₄ getrocknet und dann eingeengt. Die Substanz kann durch Säulenchromatographie gereinigt werden.Variante c):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (I) werden in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, gelöst. Der Ansatz wird dann mit Triethylamin, 1-Hydroxy- benzotriazol und einer Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel versetzt. Bei 0°C wird portionsweise N,N-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird mehrere Stunden unter Licht- und Luftausschluß bei Raumtemperatur gerührt. Der Reaktionsverlauf wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wird abgetrennt und der Ansatz mit 0,5 n Salzsäure, 0,5 n NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen. Die Trocknung erfolgt über Magnesiumsulfat. Nach dem Einengen wird der Rückstand gereinigt.Variante d):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (I) werden in einem schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, gelöst. Der Ansatz wird mit N,N-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) als wasserentziehende und die Carboxylgruppe der Retinsäure aktivierende Substanz versetzt. Zu dieser Lösung gibt man eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel und rührt unter Licht- und Luftausschluß weiter. Den Verlauf der Reaktion verfolgt man mittels Dünnschichtchromatographie. Nach Beendigung der Umsetzung wird die Lösung eingeengt, dann in einem organischen Lösemittel (dipolar aprotisch) gelöst und ausgefallener Harnstoff abfiltriert. Die Lösung wird über MgSO₄ getrocknet und danach eingeengt. Zur Reinigung werden die üblichen Verfahren angewendet.Durch jede der Varianten a)-d) werden als Endprodukt Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (II) erhalten.
  • 2.3. Synthese von N′,N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (IV):
    Erfindungsgemäß wird eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) in wasser- und sauerstofffreiem THF (Tetrahydrofuran) oder einem äquivalenten Lösemittel aufgenommen. Zu dieser Lösung werden unter Schutzgas, vorzugsweise unter einer Argonatmosphäre, Tetrakis- (triphenylphosphin) -palladium (O) und Morpholin gegeben. Die Produktbildung wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Nach dem Reaktionsende wird das Lösemittel abgezogen und der Rückstand in einem entsprechenden unpolaren oder schwach polaren Lösemittel aufgenommen. Es wird mit 2 n Salzsäure und Wasser extrahiert. Die Trocknung erfolgt über MgSO₄. Nach dem Einengen wird die Substanz in einem unpolaren Lösemittel gelöst und filtriert. Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie.
  • 2.4. Synthese von N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (V):
    Zur Spaltung der Disulfidbrücke wird eine Verbindung der allgemeinen Formel (IV) unter striktem Luftausschluß in Methanol mit β-Mercaptoethanol bei pH 9 einige Stunden bei Raumtemperatur reagieren gelassen. Der Reaktionsablauf wird mittels Dünnschichtchromatographie beobachtet. Der Ansatz wird unter schonenden Bedingungen eingeengt und mit Methanol aufgenommen. Nach Trocknen über Magnesiumsulfat wird die Substanz mittels Säulenchromatographie gereinigt. Es ist auf Luftausschluß zu achten.
II. Darstellung von N-Retinoyl-aminomercapto-Verbindungen und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (VIII)
wobei
R₈ = eine veresterte Carboxylgruppe oder
R₈ = eine Formaldehyd-, Acetaldehyd-, Propionaldehyd- oder n-Butyraldehyd-Gruppe oder
R₈ = eine Hydroxyalkyl- oder Hydroxyalkenyl-Gruppe ist.
1. Allgemeiner Syntheseweg
Ausgangsstoffe sind schwefelhaltige Aminocarbonsäureester oder schwefelhaltige Aminoaldehyde oder schwefelhaltige Aminoalkohole der allgemeinen Strukturformel (VI)
mit den obigen Einschränkungen für die Art des Restes R₈, sowie Retinsäure-Derivate der allgemeinen Strukturformel (III).
  • 1.1. Eine Verbindung der allgemeinen Strukturformel (VI) wird mit einem Retinsäurederivat der allgemeinen Strukturformel (III) unter Aktivierung der Carboxylgruppe des Retinsäurederivates zur Kupplung gebracht. Dies geschieht vorzugsweise durch Umsetzung der beiden Reaktionspartner in einem geeigneten schwach polaren Lösemittel, bevorzugt Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, in Gegenwart von
    • - Triethylamin und EEDQ (1-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy- 1,2-dihydrochinolin) oder
    • - 2-Nitrophenol und DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • - Triethylamin, 1-Hydroxy-benzotriazol und DCC (N,N- Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • - DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) alleine.
  • Die Reaktion muß unter Licht- und Luftabschluß ablaufen. Sie führt zu Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (VII)
  • 1.2. Um zum gewünschten Endprodukt zu gelangen, muß in der Verbindung der allgemeinen Formel (VII) die Disulfidbrücke gespalten werden, um zwei identische Moleküle zu erhalten. Dies wird insbesondere durch Reduktion der Disulfidbrücke in basischem Milieu erreicht, vorzugsweise mit β-Mercaptoethanol oder Thioglycolsäure, insbesondere bevorzugt mit β-Mercaptoethanol.
    Dies führt zum entsprechenden Endprodukt der allgemeinen Strukturformel (VIII).
2. Spezieller Syntheseweg
Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (VIII) bevorzugt wie folgt dargestellt:
  • 2.1. Synthese von N′,N-Retinoyl-aminomercapto-Verbindungen und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (VII):
    Eine Verbindung der allgemeinen Strukturformel (VI) wird mit einem Retinsäurederivat der allgemeinen Strukturformel (III) nach einer der als "Variante a) -d)" beschriebenen Verfahrensweisen umgesetzt. Variante a):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (VI) werden in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, aufgenommen und mit Triethylamin und EEDQ (1-Ethoxy- carbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin) versetzt. Unter Rühren wird eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel zum Ansatz gegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter Licht- und Luftausschluß gerührt. Den Reaktionsverlauf kontrolliert man mittels Dünnschichtchromatographie. Es kann mehrere Stunden dauern, bis die Reaktion beendet ist. Der Ansatz wird mit 0,5 n Salzsäure, 0,5 n NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen. Die Trocknung erfolgt über MgSO₄. Nach dem Einengen wird der Rückstand mittels Umkristallisation oder Säulenchromatographie gereinigt.Variante b):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (VI) werden nach dem Lösen in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, mit 2-Nitrophenol und einer geringen Menge an DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) versetzt. Zu dieser Lösung gibt man eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel. Unter Licht- und Luftausschluß wird weiter gerührt. Der Reaktionsverlauf wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Die Reaktion kann einige Stunden benötigen. Die Lösung wird danach eingeengt, in einem organischen Lösemittel (dipolar aprotisch, bevorzugt Aceton) aufgenommen und von möglicherweise ausgefallenem Harnstoff abgetrennt. Die Lösung wird mit MgSO₄ getrocknet und dann eingeengt. Die Substanz kann durch Säulenchromatographie gereinigt werden.Variante c):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (VI) werden in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, gelöst. Der Ansatz wird dann mit Triethylamin, 1-Hydroxy- benzotriazol und einer Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel, versetzt. Bei 0°C wird portionsweise N,N-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch rührt mehrere Stunden unter Licht- und Luftausschluß bei Raumtemperatur. Der Reaktionsverlauf wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wird abgetrennt und der Ansatz mit 0,5 n Salzsäure, 0,5 n NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen. Die Trocknung erfolgt über Magnesiumsulfat. Nach dem Einengen wird der Rückstand gereinigt.Variante d):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (VI) werden in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, gelöst. Der Ansatz wird mit N,N-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) als wasserentziehende und die Carboxylgruppe der Retinsäure aktivierende Substanz versetzt. Zu dieser Lösung gibt man eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel und rührt unter Licht- und Luftausschluß weiter. Den Verlauf der Reaktion verfolgt man mittels Dünnschichtchromatographie. Nach Beendigung der Umsetzung wird die Lösung eingeengt, dann in einem organischen Lösemittel (dipolar aprotisch) gelöst und ausgefallener Harnstoff abfiltriert. Die Lösung wird über MgSO₄ getrocknet und danach eingeengt. Zur Reinigung werden die üblichen Verfahren angewendet.Durch jede der Varianten a)-d) wird als Endprodukt die Verbindung (VII) erhalten.
  • 2.2. Synthese von N-Retinoyl-aminomercapto-Verbindungen und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (VIII):
    Zur Spaltung der Disulfidbrücke wird eine Verbindung der allgemeinen Formel (VII) unter striktem Luftausschluß in einem polaren Lösemittel, bevorzugt Methanol, mit β-Mercaptoethanol bei pH 9 einige Stunden bei Raumtemperatur reagieren gelassen. Der Reaktionsverlauf wird mittels Dünnschichtchromatographie beobachtet. Der Ansatz wird unter schonenden Bedingungen eingeengt und mit Methanol aufgenommen. Nach Trocknen über Magnesiumsulfat wird die Substanz mittels Säulenchromatographie gereinigt.
III. Darstellung von N-Retinoyl-L-amino-mercapto-carbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Formel (Z)
wobei gegenüber der erfindungsgemäßen Generalformel (GS) R₇ ungleich H und R₈=COOH ist.
1. Allgemeiner Syntheseweg
Ausgangsstoffe sind schwefelhaltige L-Aminosäuren der allgemeinen Strukturformel (S2)
wobei wiederum R₇ ungleich H ist, sowie Retinsäure-Derivate der allgemeinen Strukturformel (III).
  • 1.1. Im ersten Schritt muß die freie Carboxylfunktion von (S2) geschützt werden, insbesondere durch Überführung in einen Ester, vorzugsweise durch azeotrope Veresterung mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäuremonohydrat, in einem geeigneten unpolaren oder schwach polaren Lösemittel, bevorzugt Benzol oder Toluol. Dabei erhält man die Hydro-p-toluolsulfonate der entsprechenden Allylester der allgemeinen Strukturformel (X). Falls R₇ weitere Carboxylfunktionen trägt, so werden dabei auch diese in den Allylester überführt.
  • 1.2. Nach der Einführung der Schutzgruppe kann die Kupplungsreaktion von (X) mit (III) vorgenommen werden, was bevorzugt unter Aktivierung der Carboxylgruppe von (III) erfolgt. Dieses geschieht vorzugsweise durch Umsetzung der beiden Reaktionspartner in einem geeigneten schwach polaren Lösemittel, bevorzugt Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, in Gegenwart von
    • a) Triethylamin und EEDQ (1-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2- dihydrochinolin) oder
    • b) 2-Nitrophenol und DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • c) Triethylamin, 1-Hydroxy-benzotriazol und DCC (N,N- Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • d) DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) alleine.
  • Die Reaktion muß unter Licht- und Luftabschluß ablaufen. Sie führt zu Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (Y) Falls R₇ eine weitere Aminofunktion trägt, so reagiert diese mit einem weiteren Molekül von (III) zum Säureamid.
  • 1.3. Um zum gewünschten Endprodukt zu gelangen, müssen unter geeigneten schonenden Bedingungen die Allylester- Schutzgruppe bzw. -Schutzgruppen der Verbindung (Y) entfernt werden. Hierzu ist insbesondere eine katalytische Spaltung geeignet, vorzugsweise mit Tetrakis-(triphenylphosphin)-palladium (O) in Gegenwart von Morpholin als Abfangnucleophil. Dadurch erhält man das entsprechende Endprodukt (Z).
2. Spezieller Syntheseweg
Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (Z) bevorzugt wie folgt dargestellt:
  • 2.1. Synthese von Hydro-p-Toluolsulfonaten von L-Aminomercapto- carbonsäureallylestern und ihren Derivaten der allgemeinen Formel (X):
    Substanzen der allgemeinen Formel (S2), insbesondere L-Methionin oder L-Lanthionin oder L-Cystathionin oder L-Cystin, werden in einem geeigneten unpolaren oder schwach polaren Lösemittel, das ein großes "Wasserschleppvermögen" aufweist, vorzugsweise Benzol oder Toluol, gelöst. Die Lösung wird mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäuremonohydrat versetzt und unter Rückfluß am Wasserabscheider erhitzt. Die Reaktionsdauer richtet sich nach der abgeschiedenen Wassermenge. Sofern das für diese azeotrope Veresterung berechnete abgeschiedene Wasservolumen erreicht ist, kann die Umsetzung beendet werden. Das Lösemittel wird abgezogen und der Rückstand mittels Umkristallisation oder Säulenchromatographie gereinigt.
    Bei den so erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (Z) sind beispielhaft zu nennen das Reaktionsprodukt von L-Methionin: oder von L-Cystin:
  • 2.2. Synthese von N-Retinoyl-L-aminomercapto-carbonsäureallylestern und deren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (Y)
    Durch jede der Varianten a)-d) (Verfahren analog wie unter II.2.1. a)-d) beschrieben) werden als Endprodukt Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (Y) erhalten. Beispielhaft sind wiederum die entsprechenden Produkte aus L-Methionin: oder aus L-Cystin: genannt.
  • 2.3. Synthese von N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (Z).
    Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (Y) in wasser- und sauerstofffreiem THF (Tetrahydrofuran) oder einem äquivalenten Lösemittel aufgenommen. Zu dieser Lösung werden unter Schutzgas, vorzugsweise unter einer Argonatmosphäre, Tetrakis-(triphenylphosphin)-palladium (O) und Morpholin gegeben.
    Die Produktbildung wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Nach dem Reaktionsende wird das Lösemittel abgezogen und der Rückstand in einem entsprechenden unpolaren oder schwach polaren Lösemittel aufgenommen. Es wird mit 2 n Salzsäure und Wasser extrahiert. Die Trocknung erfolgt über MgSO₄. Nach dem Einengen wird die Substanz in einem unpolaren Lösemittel gelöst und filtriert. Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie.
    Beispielhaft für die dabei erhaltenen Endprodukte der allgemeinen Summenformel (Z) seien wiederum die entsprechenden Endprodukte aus L-Methionin oder aus L-Cystin genannt.
IV. Darstellung von N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-amino- mercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (O4)
Es handelt sich um diejenigen Verbindungen, die sich aus der Menge der durch die allgemeine Generalformel (GS) be­ schriebenen Verbindungen dadurch herausheben, daß
R₈ = COOH und
R₇ = eine Acetamidomethylgruppe
ist.
1. Allgemeiner Syntheseweg
Ausgangsstoffe sind schwefelhaltige L-Aminocarbonsäure­ hydrochloride der allgemeinen Strukturformel (S3)
und Retinsäurederivate der allgemeinen Strukturformel (III).
  • 1.1. Im ersten Syntheseschritt wird die Acetamidomethyl­ gruppe in die Ausgangsverbindung (S3) eingeführt. Dies geschieht bevorzugt, indem das betreffende Hydrochlorid unter Inertgas und bei niedrigen Tempe­ raturen in wäßriger Lösung bei pH ca. 0,5 mit N-Hy­ droxymethylacetamid umgesetzt wird. Dies führt zu Reaktionsprodukten der allgemeinen Strukturformel (S4)
  • 1.2. Um die weiteren Syntheseschritte analog zu I.1.1. bis I.1.3. durchführen zu können, muß zunächst die Verbindung der allgemeinen Formel (S4), die als Hy­ drochlorid vorliegt, in die neutrale Aminosäure-Form überführt werden. Dies ist beispielsweise durch Um­ setzung von (S4) mit Silberoxid in wäßriger Lösung und anschließendes Ausfällen der Ag(II)-Ionen mit Schwefelwasserstoff möglich.
    Dies führt zu Reaktionsprodukten der allgemeinen Strukturformel (O1):
  • 1.3. Im nächsten Syntheseschritt muß die freie Carboxyl­ funktion der Verbindung (O1) geschützt werden. Dies kann insbesondere durch die Überführung in ei­ nen Ester geschehen, vorzugsweise durch azeotrope Veresterung mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäu­ remonohydrat in einem geeigneten unpolaren oder schwach polaren Lösemittel, bevorzugt Benzol oder Toluol. Dabei erhält man die Hydro-p-toluolsulfonate der entsprechenden Allylester der allgemeinen Struk­ turformel (O2):
  • 1.4. Nach Einführung der Schutzgruppe kann die Kupplungs­ reaktion von Verbindung (O2) mit dem Retinsäurede­ rivat (III) vorgenommen werden, was bevorzugt unter Aktivierung der Carboxylfunktion des Retinsäurederi­ vates erfolgt.
    Dies geschieht vorzugsweise durch Umsetzung der bei­ den Reaktionspartner in einem geeigneten schwach po­ laren Lösemittel, bevorzugt Tetrahydrofuran oder Di­ chlormethan, in Gegenwart von
    • - Triethylamin und EEDQ (1-Ethoxycarbonyl-2- ethoxy-1,2-dihyrochinolin) oder
    • - 2-Nitrophenol und DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • - Triethylamin, 1-Hydroxy-benzotriazol und DCC (N,N- Dicyclohexylcarbodiimid) oder
    • - DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) alleine.
  • Die Reaktion muß unter Licht- und Luftabschluß ab­ laufen. Sie führt zu Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (O3)
  • 1.5. Um das Endprodukt zu erhalten, muß die Allylester- Schutzgruppe der Verbindung (O3) unter geeigneten, schonenden Bedingungen entfernt werden. Hierzu ist insbesondere eine katalytische Spaltung geeignet, vorzugsweise mit Tetrakis- (triphenylphos­ phin)-palladium (O) oder (Tris-(triphenylphosphin)- rhodium (I) chlorid) in Gegenwart von Morpholin, Di­ medon oder N,N-Dimethylbarbitursäure als Abfangnu­ cleophil und in einem Reaktionsmedium aus wasser- und sauerstofffreiem Tetrahydrofuran. Dadurch erhält man die entsprechende Verbindung der allgemeinen Strukturformel (O4):
2. Spezieller Syntheseweg
Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (O4) bevorzugt wie folgt dargestellt:
  • 2.1. Synthese von S-Acetamidomethyl-L-aminomercaptocar­ bonsäurehydrochloriden und ihren Derivaten der all­ gemeinen Strukturformel (S4):
    Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (S3), insbesondere L-Cysteinhydrochlorid-monohydrat, wer­ den bevorzugt mit N-Hydroxymethylacetamid in Wasser bei pH 0,5 unter einer Inertgasatmosphäre, bevorzugt Stickstoff, umgesetzt. Die Zugabe von Salzsäure er­ folgt bei 0°C. Nach 3 Tagen ist die Reaktion abge­ schlossen. Die Lösung wird eingeengt und mit Metha­ nol/Ether umkristallisiert.
  • 2.2. Synthese von S-Acetamidomethyl-L-aminomercapto-car­ bonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Struk­ turformel (O1):
    Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (S4) werden zusammen mit Silberoxid Ag₂O in Wasser unter Lichtausschluß gerührt. Danach werden die Ag(II)-Io­ nen durch Einleiten von Schwefelwasserstoff in die Reaktionslösung ausgefällt und abgetrennt. Nach dem Einengen wird der Rückstand in heißem Wasser/Ethanol umkristallisiert.
  • 2.3. Synthese von Hydro-p-toluolsulfonaten von S-Acetami­ domethyl-L-aminomercapto-carbonsäureallylestern und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (O2):
    Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (O1) werden in einem geeigneten unpolaren oder schwach polaren Lösemittel, das ein hohes "Wasserschleppver­ mögen" aufweist, bevorzugt Benzol oder Toluol, ge­ löst. Die Lösung wird mit Allylalkohol und p-Toluol­ sulfonsäuremonohydrat versetzt und unter Rückfluß am Wasserabscheider erhitzt. Die Reaktionsdauer richtet sich nach der abgeschiedenen Wassermenge. Sofern das für diese azeotrope Veresterung berechnete abge­ schiedene Wasservolumen erreicht ist, kann die Um­ setzung beendet werden. Das Lösemittel wird abgezo­ gen und der Rückstand mittels Umkristallisation oder Säulenchromatographie gereinigt.
  • 2.4. Synthese von N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-amino­ mercaptocarbonsäureallylestern und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (O3): Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (O2) werden mit Retinsäure-Derivaten der allgemeinen Strukturformel (III) nach einer der als "Variante a) -d)" beschriebenen Verfahrensweise umgesetzt.Variante a):
    Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (O2) werden in einem geeigneten, schwach polaren Lösemit­ tel aufgenommen und mit Triethylamin und EEDQ (1- Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin) ver­ setzt. Unter Rühren wird eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel zum Ansatz gegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter Licht- und Luftausschluß gerührt. Den Reaktionsver­ lauf kontrolliert man mittels Dünnschichtchromato­ graphie. Es kann mehrere Stunden dauern, bis die Re­ aktion beendet ist. Der Ansatz wird mit 0,5 n Salz­ säure, 0,5 n NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen. Die Trocknung erfolgt über MgSO₄. Nach dem Einengen wird der Rückstand mittels Umkristallisation oder Säulen­ chromatographie gereinigt.Variante b):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (O2) werden nach dem Lösen in einem geeigneten, schwach polaren Löse­ mittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, mit 2-Nitrophenol und einer geringen Menge an DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) versetzt. Zu dieser Lösung gibt man eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in dem obigen Lösemit­ tel. Unter Licht- und Luftausschluß wird weiter ge­ rührt. Der Reaktionsverlauf wird mittels Dünn­ schichtchromatographie verfolgt. Die Reaktion kann einige Stunden benötigen. Die Lösung wird danach eingeengt, in einem organischen Lösemittel (dipolar aprotisch) aufgenommen und von möglicherweise ausge­ fallenem Harnstoff abgetrennt. Die Lösung wird mit MgSO₄ getrocknet und dann eingeengt. Die Substanz kann durch Säulenchromatographie gereinigt werden.Variante c):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (O2) werden in einem geeigneten, schwach polaren Lösemittel, vor­ zugsweise Tetrahydrofuran oder Dichlormethan, ge­ löst. Der Ansatz wird dann mit Triethylamin, 1-Hy­ droxy-benzotriazol und einer Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel versetzt. Bei 0°C wird portionsweise N,N-Dicycloh­ exylcarbodiimid (DCC) zugesetzt. Das Reaktionsge­ misch wird mehrere Stunden unter Licht- und Luftaus­ schluß bei Raumtemperatur gerührt. Der Reaktionsver­ lauf wird mittels Dünnschichtchromatographie ver­ folgt. Der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wird abgetrennt und der Ansatz mit 0,5 n Salzsäure, 0,5 n NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen. Die Trocknung erfolgt über Magnesiumsulfat. Nach dem Einengen wird der Rückstand gereinigt.Variante d):
    Verbindungen der allgemeinen Formel (O2) werden in einem schwach polaren Lösemittel, vorzugsweise Te­ trahydrofuran oder Dichlormethan, gelöst. Der Ansatz wird mit N,N-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) als was­ serentziehende und die Carboxylgruppe der Retinsäure aktivierende Substanz versetzt. Zu dieser Lösung gibt man eine Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in obigem Lösemittel und rührt unter Licht- und Luftausschluß weiter. Den Verlauf der Reaktion verfolgt man mittels Dünnschichtchromato­ graphie. Nach Beendigung der Umsetzung wird die Lö­ sung eingeengt, dann in einem organischen Lösemittel (dipolar aprotisch) gelöst und ausgefallener Harn­ stoff abfiltriert. Die Lösung wird über MgSO₄ ge­ trocknet und danach eingeengt. Zur Reinigung werden die üblichen Verfahren angewendet.
    Durch jede der Varianten a) - d) wird als Endprodukt die Verbindung (O3) erhalten.
  • 2.5. Synthese von N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-amino­ mercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allge­ meinen Strukturformel (O4):
    Erfindungsgemäß werden Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (O3) in wasser- und sauerstofffreiem THF (Tetrahydrofuran) oder einem äquivalenten Löse­ mittel aufgenommen. Zu dieser Lösung werden unter Schutzgas, vorzugsweise unter einer Argonatmosphäre, Tetrakis-(triphenylphosphin) -palladium (O) und Mor­ pholin gegeben. Die Produktbildung wird mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Nach dem Reak­ tionsende wird das Lösemittel abgezogen und der Rückstand in einem entsprechenden unpolaren oder schwach polaren Lösemittel aufgenommen. Es wird mit 2 n Salzsäure und Wasser extrahiert. Die Trocknung erfolgt über MgSO₄. Nach dem Einengen wird die Substanz in einem unpolaren Lösemittel gelöst und filtriert. Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie.
Weitere Vorteile, Aufgabenstellungen und Merkmale der Erfin­ dung ergeben sich aus der folgenden Beschreibung von Ausfüh­ rungsbeispielen zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbin­ dungen:
Ausführungsbeispiele Beispiel 1 Synthese von N-Retinoyl-L-cystein Darstellung von L-Cystindiallylester-di-(hydro-p-toluolsulfo­ nat): Verbindung (A)
Die Ausgangssubstanz des Syntheseweges dieses erfindungsgemä­ ßen Produktes ist L-Cystin. Dieses läßt sich leicht und in gu­ ter Ausbeute mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäure-monohy­ drat in Benzol azeotrop verestern. Die Reaktionszeit beträgt einige Tage. Verbindung (A) fällt beim Erkalten des Reaktions­ ansatzes grobkristallin aus.
Darstellung von N′,N-Retinoyl-L-cystindiallylester (Verbindung (B))
All-trans-Retinsäure und Verbindung (A) lassen sich durch eine Kondensationsreaktion zu Produkt (B) umsetzen. Zur Aktivierung der Carboxylgruppe der Retinsäure kann 1-Hydroxy-benzotriazol verwendet werden. Die Reaktion ergibt auch ohne diesen "Akti­ vator" zufriedenstellende Ergebnisse. Als wasserentziehendes Mittel wird N,N-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) dem Ansatz por­ tionsweise bei 0°C zugesetzt. Das Reaktionsmedium besteht aus Dichlormethan. Nach 24 Stunden erhält man das ölige Endpro­ dukt.
N′,N-Retinoyl-L-cystin (Verbindung (C))
Nach erfolgter Kondensation wird die Carboxyl-Schutzgruppe von Verbindung (B) wieder abgespalten. Dies geschieht durch Palla­ dium-katalysierte Allylübertragung mit Tetrakis-(triphenyl­ phosphin)-palladium (O) und Morpholin als Abfangnucleophil. Das Reaktionsmedium besteht aus wasser- und sauerstofffreiem Tetrahydrofuran (THF). Zur Vermeidung von Nebenprodukten be­ trägt die Reaktionsdauer nur 30 min.
N-Retinoyl-L-cystein (Verbindung (D))
Das Endprodukt Verbindung (D) erhält man durch die Spaltung der Disulfidbrücke von Verbindung (C). Unter striktem Luft- und Lichtausschluß erfolgt die Spaltung mittels β-Mercaptoet­ hanol bei pH 9 nach 3 Stunden.
Versuchsvorschriften zur Herstellung von N-Retinoyl-L-cystein L-Cystindiallylester-di-(hydro-p-toluolsulfonat)
Verbindung (A):
C₂₆H₃₆O₁₀N₂S₄    MG: 664 g/mol
30 g (0,125 mol) L-Cystin werden zusammen mit 171,42 g (2,94 mol) Allylalkohol und 65,52 g (0,345 mol) p-Toluolsulfonsäure­ monohydrat in 500 ml getrocknetem Benzol für 74 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionszeit richtet sich nach dem Vo­ lumen des abzuscheidenden Wassers. Sofern dieses Volumen er­ reicht ist, wird die Umsetzung beendet. Die Lösung wird fil­ triert und danach abgekühlt. Das Produkt fällt grobkristallin aus der Lösung aus. Es wird isoliert und unter Vakuum getrock­ net.
Ausbeute: 69,11 g (0,10 mol) (83,3% d. Th.)
beiger Feststoff
= -16,11°    (c = 0,01 : Methanol)
Schmp.: 175,5°C
Elementaranalyse: in [%]:
berechnet:
C 46,99 H 5,42 N 4,22 S 19,28
gefunden:
C 47,04 H 5,50 N 4,19 S 19,31
UV-Spektrum (Methanol):
λmax=273,7 nm
IR-Spektrum (KBr):
[cm-1]=3250 ν NH₃⁺
2980 νas, sy CH₂, CH₃
1735 C=O
1635 δas NH₃⁺
1570 δas NH₃⁺
1500 δsy NH₃⁺
1200 C-O
1160 C-O
400 MHz ¹H - NMR (DMSO-d₆):
δ [ppm]=2,28 (s, 3H,C₆H₄-CH₃)
3,25 (m, 1H, CH-CH₂)
4,42 (t, 2H, CH-CH₂)
4,69 (m, 2H, CH₂-CH-CH₂)
5,34 (m, 2H, CH-CH₂)
5,92 (m, 1H, CH₂-CH=CH₂)
7,12 (d, JH/H=9 Hz. 2H, C₆H₄)
7,49 (d, JH/H=9 Hz. 2H, C₆H₄)
8,58 (s, breit 3H, NH₃)
N′,N-Retinoyl-L-cystindiallylester (Verbindung (B))
C₅₂H₇₂O₄N₂S₂    MG: 864 g/mol
Eine Lösung von 5 g (7,5 mmol) der Verbindung (A) in 50 ml Di­ chlormethan wird mit 1,5 g (0,015 mol) Triethylamin und einer Lösung von 4,5 g (0,015 mol) all-trans-Retinsäure in 50 ml Di­ chlormethan vereinigt. Bei 0°C werden dem Ansatz portionsweise 3,4 g (0,017 mol) Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zugesetzt. Man rührt 22 Stunden bei Raumtemperatur. Der Reaktionsverlauf wird mittels Dünnschichtchromatographie (Lfm.: CH₂Cl₂/CH₃OH (7 : 1)) verfolgt.
Man filtriert vom ausgefallenen Dicyclohexylharnstoff ab und extrahiert die Lösung mit 0,5 n Salzsäure, 0,5 n NaHCO₃-Lösung und Wasser. Die Trocknung der organischen Phase erfolgt mit­ tels Magnesiumsulfat. Das Lösemittel wird abdestilliert und der Rückstand in Aceton aufgenommen und auf 0°C gekühlt. Hier­ bei fällt der restliche Dicyclohexylharnstoff aus. Dieser wird abgetrennt und die Lösung in -20°C gestellt, wodurch nicht um­ gesetzte Retinsäure weitgehend abgetrennt werden kann. Nach dem Einengen wird der Rückstand mittels Säulenchromatographie (Lfm.: CH₂Cl₂/CH₃OH (20 : 1)) gereinigt.
Ausbeute: 3,97 g (4,6 mmol) (61% d. Th.)
oranger Feststoff
Schmp.: 65°C
IR-Spektrum (KBr):
ν [cm-1] = 3330 ν NH
2920 νas, sy CH₂, CH₃
1730 ν C=O Ester
1690 Amid I
1625 Amid II
1250 Amid III
1170 ν C-O
965 ν C=C trans
400 MHz ¹H = NMR (CDCl₃):
    22
δ [ppm] = 0,99 (s, 6H, 1,1-C(CH 3 ) 2 ) 1,69 (s, 3H, 5-CH 3 )
1,95 (s+t, 5H, 9-CH 3 ; 4-CH 2 )
2,33 (s, 3H, 13-CH 3 )
3,27 (m, 2H, S-CH 2 -CH)
4,65 (m, 2H, CH 2 -CH=CH₂)
4,95 (m, 1H, CH)
5,34 (m, 2H, CH 2 =CH)
5,76 (s, 1H, 14-CH)
5,92 (m, 1H, CH=CH₂)
6,10 (d, 1H, 10-CH)
6,12 (d, JH₈/H₇=15,5 Hz, 1H, 8-CH)
6,26 (d, JH₇/H₈=15,5 Hz, 1H, 7-CH)
6,28 (d, JH₁₂/H₁₁=14,5 Hz, 1H, 12-CH)
6,90 (m, JH₁₁/H₁₀=14,5 Hz, JH₁₁/H₁₂=14,5 Hz, 1H, 11-CH)
N′,N-Retinoyl-L-cystin (Verbindung (C))
C₄₆H₆₄O₆N₂S₂    MG: 816 g/mol
In 50 ml wasser- und sauerstofffreiem Tetrahydrofuran werden 3 g (3,5 mmol) Substanz (B) gelöst. Unter Inertgas-Atmosphäre werden zu dieser Lösung 0,8 g (0,68 mmol) Tetrakis-(triphenyl­ phosphin)-palladium (O) und durch ein Septum 6 ml (70 mmol) Morpholin gegeben. Die Umsetzung wird mittels Dünnschichtchro­ matographie (Lfm.: CH₂Cl₂/CH₃OH (2 : 1)) kontrolliert. Nach 30 min ist die Reaktion beendet und das Lösemittel wird abdestil­ liert. Man nimmt den Rückstand in 100 ml Dichlormethan auf und extrahiert die Lösung in 2 n Salzsäure und Wasser. Dann trock­ net man über MgSO₄ und engt ein. Die weitere Reinigung des Pro­ duktes erfolgt durch Aufnahme in Ether, Filtration und an­ schließender Durchführung von Säulenchromatographie (Lfm.: CH₂Cl₂/CH₃OH (3 : 1)).
Ausbeute: 1,64 g (2 mmol) (58% d. Th.)
oranges Öl
IR-Spektrum (NaCl):
[cm-1] = 3330 ν NH
2920 νas, sy CH₂, CH₃
1705 ν C=O Säure
1690 Amid I
1625 Amid II
1280 ν C-O Säure
1250 Amid III
965 ν C=C trans
400 MHz ¹H - NMR (CDCl₃):
δ [ppm] = 1,00 (s, 6H, 1,1-C(CH 3 ) 2 ) 1,70 (s, 3H, 5-CH 3 )
1,99 (s+t, 5H, 9-CH 3 ; 4-CH 2 )
2,27 (s, 3H, 13-CH 3 )
3,27 (m, 2H, S-CH 2 -CH)
4,95 (m, 1H, CH)
5,76 (s, 1H, 14-CH)
6,10 (d, 1H, 10-CH)
6,12 (d, JH₈/H₇=15,5 Hz, 1H, 8-CH)
6,26 (d, JH₇/H₈=15,5 Hz, 1H, 7-CH)
6,28 (d, JH₁₂/H₁₁=14,5 Hz, 1H, 12-CH)
6,90 (m, JH₁₁/H₁₀=14,5 Hz, JH₁₁/H₁₂=14,5 Hz, 1H, 11-CH)
N-Retinoyl-L-cystein (Verbindung (D))
C₂₃H₃₃O₃ N S    MG: 409 g/mol
Unter striktem Luftausschluß werden 1,2 g (1,5 mmol) Verbin­ dung (C) in 50 ml Methanol gelöst, mit NaOH auf pH 9 einge­ stellt und mit 24 ml β-Mercaptoethanol reagieren gelassen. Es wird 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der Ansatz wird schonend eingeengt und der Rückstand in Methanol aufgenommen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie (Lfm.: CH₂Cl₂/CH₃OH (10 : 1)).
Ausbeute: 0,33 g (0,81 mmol) (55% d. Th.)
gelbes zähes Öl
IR-Spektrum (NaCl):
[cm-1] = 3330 ν NH
2920 νas, sy CH₂, CH₃
1705 ν C=O Säure
1690 Amid I
1625 Amid II
1275 ν C-O Säure
1250 Amid III
965 ν C=C trans
400 MHz ¹H - NMR (CDCl₃):
δ [ppm] = 1,01 (s, 6H, 1,1-C(CH 3 ) 2 ) 1,70 (s, 3H, 5-CH 3 )
1,99 (s+t, 5H, 9-CH 3 ; 4-CH 2 )
2,25 (s, 3H, 13-CH 3 )
3,27 8m, 2H, S-CH 2 -CH)
4,65 (m, 2H, CH 2 -CH=CH₂)
4,95 (m, 1H, CH)
5,76 (s, 1H, 14-CH)
6,10 (d, 1H, 10-CH)
6,12 (d, JH₈/H₇=15,5 Hz, 1H, 8-CH)
6,26 (d, JH₇/H₈=15,5 Hz, 1H, 7-CH)
6,28 (d, JH₁₂/H₁₁=14,5 Hz, 1H, 12-CH)
6,90 (m, JH₁₁/H₁₀=14,5 Hz, JH₁₁/H₁₂=14,5 Hz, 1H, 11-CH)
Die Spektren der Verbindungen (C) und (D) sind ähnlich, da aufgrund der Äquivalenz der Protonen zwischen dem Doppel- und dem Einzelmolekül kein Unterschied zu erkennen ist.
Beispiel 2 Synthese von N′,N-(4-Hydroxy-)retinoyl-L-cystindimethylester Darstellung von all-trans-4-Hydroxy-retinsäure a) Synthese von all-trans-Retinsäuremethylester
3 g (0,01 mol) all-trans-Retinsäure wird in einem Gemisch aus Methanol/Wasser (10 : 1) gelöst und so lange mit Diazomethanlö­ sung versetzt, bis keine Stickstoffentwicklung mehr zu beob­ achten ist. Nach 20 min wird die Reaktion durch Zugabe von ei­ nigen Tropfen Diazomethanlösung auf ihre Vollständigkeit hin überprüft. Die Lösung wird dann im Vakuum eingeengt und in Et­ her aufgenommen. Nach dem Waschen mit verd. Natronlauge und Wasser trocknet man die organische Phase über Magnesiumsulfat und engt sie erneut ein.
Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie (Lfm.: To­ luol/Ethylacetat). Die Produktfraktion wird nach dem Abziehen des Lösemittels mit Petrolether (Sdp. 40-60°C) versetzt und 2 Tage unter Stickstoff in -30°C gestellt.
b) Herstellung von 4-Hydroxyretinsäure
320,3 mg (1,02 mmol) von all-trans-Retinsäuremethylester wer­ den unter einer Stickstoffatmosphäre in 32 ml zusatzfreiem Chloroform gelöst und auf -15°C heruntergekühlt. Hierauf ver­ setzt man die Lösung zunächst mit 0,98 ml Eisessig und dann mit einer Lösung von 130 mg (0,73 mmol) N-Bromsuccinimid in 32 ml zusatzfreiem Chloroform. Nach Ablauf von 15 min werden 2,64 g (25,63 mmol) N-Ethylmorpholin zugegeben und die Lösung lang­ sam auf Raumtemperatur gebracht. Das Reaktionsgemisch verdünnt man mit 200 ml Petrolether (Sdp.: 40-60°C) und wäscht es mit 0,1 n Salzsäure und Wasser. Die Trocknung erfolgt mit Magnesi­ umsulfat. Der Rückstand, der nach dem Einengen der organischen Phase zurückbleibt, wird mit 35 ml einer 10%igen methanoli­ schen Kalilösung während 12 Stunden verseift. Dieser Ansatz wird mit 200 ml Ether verdünnt, mit Eisessig angesäuert und nach dem Neutralwaschen mit Wasser über Magnesiumsulfat ge­ trocknet.
Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie. Als Elu­ ationsmittel werden nacheinander Petrolether (niedrig siedend)/ Ethylacetat (1 : 2) und Ethylacetat/Methanol (2 : 1) verwen­ det. Nach dem Abziehen des Lösemittels bleibt ein gelbes Öl zurück, das in Methylenchlorid/Methanol (3 : 1) gelöst und dann in -30°C aufbewahrt wird.
Synthese von L-Cystindimethylester
3 g (17 mmol) L-Cystin werden in einem Gemisch aus Methanol/ Wasser (10 : 1) gelöst und solange mit Diazomethanlösung ver­ setzt, bis keine Stickstoffentwicklung mehr zu beobachten ist. Nach 20 min wird die Reaktion durch Zugabe von einigen Tropfen Diazomethanlösung auf ihre Vollständigkeit hin überprüft. Die Lösung wird dann im Vakuum eingeengt und in Ether aufgenommen. Nach dem Waschen mit verd. Natronlauge und Wasser, trocknet man die organische Phase über Magnesiumsulfat und engt sie er­ neut ein.
Die Reinigung erfolgt mittels Säulenchromatographie.
Synthese von N′,N-(4-Hydroxy-)-retinoyl-L-cystindimethylester
Zu einer Lösung von 2,04 g (0,01 mol) L-Cystindimethylester in 50 ml Methylenchlorid werden 2,02 g (0,02 mol) Triethylamin und eine Lösung von 6,32 g (0,02 mol) 4-Hydroxyretinsäure in 50 ml Methylenchlorid gegeben. Bei 0°C werden portionsweise 4,1 g (0,02 mol) Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zugegeben. Die­ se Mischung läßt man 24 Stunden unter Stickstoff bei Raumtem­ peratur rühren. Die Kontrolle der Reaktion erfolgt durch Dünn­ schichtchromatographie (Lfm.: Methylenchlorid/Methanol (3 : 1)). Der entstandene Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und der Ansatz mit 0,5 n Salzsäure, 0,5 n NaHCO₃ - Lsg und Was­ ser ausgeschüttelt. Zur Trocknung der organischen Phase wird MgSO₄ verwendet. Nach dem Einengen wird der Rückstand mittels Säulenchromatographie gereinigt (Lfm.: CH₂Cl₂/CH₃OH (40 : 1)).
Beispiel 3 Synthese von N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-cystein S-Acetamidomethyl-L-cysteinhydrochlorid
Eine Mischung 33,78 g (0,38 mol) N-Hydroxymethylacetamid und 60,64 g (0,35 mol) L-Cysteinhydrochlorid-monohydrat wird in 200 ml Wasser gelöst. Bei 0°C wird so viel konz. Salzsäure zugesetzt, bis ein pH von ca. 0,5 erreicht ist. Die Lösung läßt man unter Stickstoff 2 Tage bei Raumtemperatur stehen. Die Kontrolle des Reaktionsverlaufs erfolgt mittels Dünn­ schichtchromatographie (Lfm.: n-Butylalkohol/Essigsäure/ Wasser (10 : 2 : 3)).
Rf-Werte: Edukt (0,19); Produkt (0,25).
Die Lösung wird bis zur Trocknung eingeengt. Noch vorhandene Wasserspuren können durch Zugabe von Ethanol während des Ein­ engens beseitigt werden. Der erhaltene Feststoff wird in Me­ thanol aufgenommen und man gibt so lange Ether zu, bis der Cloudpunkt erreicht ist.
Nach 10-14 Tagen fallen in der Kälte weiße Kristalle aus. Diese werden abgesaugt, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet.
S-Acetamidomethyl-L-cystein-monohydrat
58,36 g (0,26 mol) von S-Acetamidomethyl-L-cystein-hydrochlo­ rid (XIa) und 59,32 g (0,26 mol) Silberoxid werden in 300 ml Wasser gelöst und eine Stunde unter Lichtausschluß gerührt. Zum Ausfällen der Ag (II)-Ionen leitet man Schwefelwasserstoff in die Lösung. Nach der Filtration folgt die Einengung bis zur Trocknung. Der Rückstand wird durch Lösen in heißem Wasser und Zugabe des doppelten Volumens an Ethanol umkristallisiert. In­ nerhalb von 4 Tagen bildet sich ein weißer Feststoff, der ab­ gesaugt und bei 100°C unter Vakuum getrocknet wird.
S-Acetamidomethyl-L-cysteinallylester-hydro-p-toluolsulfonat
In einem Kolben werden 15,75 g (0,075 mol) S-Acetamidomethyl- L-cystein-monohydrat (XI), 45 g (0,78 mol) Allylalkohol und 17,2 g (0,09 mol) p-Toluolsulfonsäuremonohydrat mit 400 ml Benzol versetzt. Das Reaktionsgemisch erhitzt man so lange un­ ter Rückfluß, bis sich das berechnete Wasservolumen abgeschie­ den hat. Die Lösung wird filtriert und das Benzol unter Vakuum abgezogen.
Es bleibt eine ölige Substanz zurück, die durch Chromatogra­ phie gereinigt wird (Lfm.: CH₂Cl₂/CH₃OH (3 : 1)).
N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-cysteinallylester wird durch die schon bei den Beispielen 1 und 2 beschriebenen Kupplungs­ reaktionen mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (III) dargestellt.
Die Abspaltung der Allylgruppe zu der Verbindung N-Retinoyl- S-acetamidomethyl-L-cystein erfolgt ebenfalls anhand der Vor­ schrift unter Beispiel 1.
N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-cysteinallylester: N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-cystein: Beispiel 4 Synthese von N-Retinoyl-2-amino-S-acetamidomethyl-3-mercapto­ propanol Darstellung von 2-Amino-3-mercapto-propanol
In einem Erlenmeyerkolben mit Magnetrührer, Zweihalsaufsatz, Tropftrichter und Rückflußkühler mit Calciumrohr gibt man die für die Reduktion notwendige Menge an Lithiumaluminiumhydrid in 10%igem Überschuß in abs. Ether. Zu diesem Gemisch tropft man eine Lösung von L-Cystein in abs. Ether. Das Zutropfen sollte so langsam vor sich gehen, daß die Reaktion unter Kon­ trolle gehalten werden kann und der Ether nur mäßig siedet. Nach Beendigung des Zutropfens rührt man noch einige Stunden (4-5 Stunden) und kocht dann noch eine Stunde unter Rückfluß. Danach kühlt man den Kolben durch Eiskühlung ab und versetzt vorsichtig unter Rühren so lange mit Eiswasser, wie sich noch Wasserstoff entwickelt. Anschließend wird der gebildete Alumi­ niumhydroxidniederschlag mit wenig 10%iger Schwefelsäure gera­ de zum Lösen gebracht. Es wird im Scheidetrichter getrennt und einige Male mit Ether ausgeschüttelt. Die organische Phase wird mit gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über Magnesiumsul­ fat getrocknet und dann mittels Säulenchromatographie gerei­ nigt.
2-Amino-S-acetamidomethyl-propanol Bemerkung
Der Schutz der Sulfhydrylgruppe von 2-Amino-3-mercapto-propan­ ol bei der Umsetzung zu 2-Amino-S-acetamidomethyl-propanol er­ folgt nach der unter Beispiel 3 beschriebenen Variante.
Darstellung von N-Retinoyl-2-amino-S-acetamidomethyl-propanol
Diese Darstellung erfolgt nach den schon unter Beispiel 1 und 2 beschriebenen Varianten.
Beispiel 5 Synthese von N-Retinoyl-2-amino-S-acetamidomethyl-3-mercapto­ propanol Darstellung von 2-Amino-3-mercapto-propanol
In einem Kolben mit Rückflußkühler und Calciumchlorid wird 2-Amino-3-mercapto-propanol in heißem Aceton gelöst. Das Ace­ ton ist zuvor über Kaliumpermanganat und Kaliumhydroxid gerei­ nigt worden. Diese Lösung wird mit Aluminium-tert-butylat, das in thiophenfreiem, absolutem Benzol gelöst ist, versetzt. Es wird etliche Stunden (ca. 10 h) unter Rückfluß erhitzt und nach dem Erkalten mehrmals mit verd. Schwefelsäure ausgeschüt­ telt zur Abtrennung der Aluminiumsalze. Die Benzolphase wird mit Wasser gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Einengen wird der Rückstand durch Umkristallisation gereinigt.
Darstellung von 2-Amino-S-acetamidomethyl-3-mercapto-propanol
Diese Darstellung ist unter Beispiel 3 beschrieben.
Darstellung von N-Retinoyl-2-amino-S-acetamidomethyl-3-mercap­ to-propanol
Diese Darstellung ist unter Beispiel 1 und 2 beschrieben.
Einige bevorzugte Zwischenprodukte
Verwendungen
Bevorzugt können die erfindungsgemäßen Verbindungen, insbesondere das N-Retinoyl-L-cystein, therapeutisch vorteilhaft eingesetzt werden zur systemischen und topischen Anwendung für die
  • 1. Prävention und Therapie von Erkrankungen der Schleimhäute.
  • 1.1. Prävention und Therapie von Störungen der sekretorischen Funktion und/oder der Differenzierung der Schleimhäute des Tracheobronchial-, Intestinal- und Urogenitaltraktes.
  • 1.1.1. Prävention und Therapie von Hyper- und Hypo- und Dyssekretion der Tracheobronchial-, Intestinal- und Urogenitalschleimhaut.
  • 1.1.1.1. Prävention und Therapie von Metaplasien und Differenzierungsstörungen
    • - des Tracheobronchialepithels wie Mucoviszidose, Fibrosen, Silikosen, Staublunge, chronischer Bronchitis, chemischen und/oder squamösen Differenzierungsstörungen, Neoplasien
    • - des Magen-Darm-Traktes, wie erosiver, chronischer oder akuter Gastritis, squamösen Differenzierungsstörungen, Karzinome und Cancer in situ, Ulcus ventriculi und/oder duodeni;
    • - des Urogenitaltraktes wie chronischer Urethritis, Cystitis, Leukoplakien und Karzinomen der ableitenden Harnwege und der Blase.
Die vorteilhafte Verwendung zu den vorgenannten Zwecken ergibt sich aus
  • - Versuchen zur Wachstumshemmung und Differenzierungsinduktion bei Behandlung von Rhabdomyosarkom-Zellinien mit N- Retinoyl-L-Cystein; des weiteren aus
  • - Tierversuchen zur Prüfung der differenzierungsinduzierenden Potenz bei chemisch induzierten Praecancerosen; des weiteren aus
  • - Tierversuchen zur Wachstumshemmung etablierter Tumorzellinien in vivo; des weiteren aus
  • - Versuchen zur Wirkung von N-Retinoylcystein auf die Sekretionsvorgänge in der Intestinalschleimhaut (in vitro) sowie zum cytoprotektiven Effekt auf die Intestinalschleimhaut.

Claims (33)

1. N-Retinoyl-L-aminomercapto-Verbindungen der folgenden allgemeinen Generalstrukturformel (GS) und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindungen, wobei
R₁ = H,
R₂ = H, OH, CH₃, C₂H₅, C₃H₇ oder =O,
R₃ = H, OH oder =O, wobei R₁ und R₂ oder R₂ und R₃ auch eine Doppelbindung darstellen können,
R₄ = H oder eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-3 C-Atomen,
R₅ = H oder eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-6 C-Atomen,
R₆ = eine Alkylen- oder Alkenylengruppe mit je 1-6 C- Atomen und fakultativ einer Alkyl- oder Alkenylseitenkette,
R₇ = H, eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-4 C-Atomen, die Hydroxyl-, Carboxyl, alpha-Amino-Carboxylgruppen oder ein weiteres Schwefelatom tragen kann, oder ein zweites Molekül entsprechend der oben angegebenen allgemeinen Strukturformel, das mit dem ersten über eine Disulfid- oder Thioetherbrücke verknüpft ist,
R₈ = -COOX mit X = Wasserstoff oder eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit je 1-6 C-Atomen, oder eine Hydroxyalkyl- oder Hydroxyalkenylgruppe mit 1-4 C-Atomen, oder eine Formaldehyd- oder Acetaldehyd- oder Propionaldehyd- oder n-Butyraldehydgruppe.
2. N-Retinoyl-L-aminomercapto-Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R₁, R₂ und R₃ bevorzugt aus folgenden Kombinationen ausgewählt werden:
3. N-Retinoyl-L-cystein der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
4. N-Retinoyl-L-cysteinmethylester der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
5. N-(3-Dehydro)-retinoyl-L-cysteinmethylester der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
6. N-(4-Oxo-)-retinoyl-L-cysteinethylester der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
7. N-Retinoyl-(2-amino-3-mercapto-propanol) der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
8. N-Retinoyl-(2-amino-3-mercapto-propanol) der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
9. N-Retinoyl-N-methyl-(2-amino-3-mercapto-propionsäure) der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
10. N-Retinoyl-(2-amino-2-methyl-3-mercapto-propionsäure) der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
11. N-Retinoyl-L-methionin der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
12. N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-cystein der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
13. N-Retinoyl-L-homocystein der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
14. N-(4-Hydroxy-)-retinoyl-L-homocystein der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
15. N′-N-Retinoyl-L-cystin der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
16. N′,N-(3-Dehydro)-retinoyl-L-cystin der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
17. N′,N-(4-Oxo)-retinoyl-L-lanthionin der Strukturformel und physiologisch verträgliche Salze dieser Verbindung.
18. Verfahren zur Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen und ihrer Derivate und Salze nach Anspruch 1 der allgemeinen Strukturformel (V), gekennzeichnet durch folgende Verfahrensschritte:
  • a) Umsetzung der freien Carboxylfunktionen der Verbindung der allgemeinen Strukturformel (S1) mit Allylakohol und p-Toluolsulfonsäure-monohydrat zu den Hydro- p-toluolsulfonaten der entsprechenden Allylester der allgemeinen Formel (I):
  • b) Herstellung von N′,N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäurediallylestern und ihren Homologen und Derivaten der allgemeinen Formel (II): durch Kondensation der Hydro-p-toluolsulfonate der Allylester (I) und ihrer Derivate und Homologen mit Retinsäure und deren Derivate der allgemeinen Formel (III):
  • c) Herstellung von N′,N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten und Homologen der allgemeinen Formel (IV): durch Abspaltung der Allylestergruppen der Verbindung der allgemeinen Formel (II) unter geeigneten, schonenden Bedingungen.
  • d) Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten und Homologen der allgemeinen Formel (V): durch Reduktion der Disulfidbrücke.
19. Verfahren zur Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen und ihrer Derivate und Salze nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel (VIII): wobei
R₈ eine veresterte Carboxylgruppe oder eine Formaldehyd-, Acetaldehyd-, Propionaldehyd- oder n-Butyraldehyd-Gruppe oder eine Hydroxyalkyl- oder Hydroxyalkenyl-Gruppe ist, gekennzeichnet durch folgende Verfahrensschritte:
  • a) Umsetzen von Retinsäure und ihren Derivaten der allgemeinen Formel (III) in Gegenwart einer die Carboxylgruppe der Retinsäure aktivierenden Verbindung mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (VI), mit den oben angegebenen Bedeutungen für R₈ zur Verbindung (VII)
  • b) Herstellung der Verbindung (VIII) durch Spaltung der Disulfidbrücke der Verbindung (VII).
20. Verfahren zur Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen und ihrer Derivate und Salze nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß die Kupplungsreaktion der Verbindungen (VI) und (III) in einem geeigneten schwach polaren Lösemittel in Gegenwart von Triethylamin und EEDQ (1-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin) oder 2-Nitrophenol und DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) oder Triethylamin, 1-Hydroxy-benzotriazol und DCC (N,N-Dicyclohexylcarbodiimid) oder DCC (N,N- Dicyclohexylcarbodiimid) alleine erfolgt.
21. Verfahren zur Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen und ihrer Derivate und Salze nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel (Z) wobei R₇ ungleich H ist, gekennzeichnet durch folgende Verfahrensschritte:
  • a) Herstellung von Hydro-p-Toluolsulfonaten von L-Amino- mercapto-carbonsäureallylestern und ihren Derivaten der allgemeinen Formel (X) durch azeotrope Veresterung mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäuremonohydrat der Verbindung (S2)
  • b) Herstellung von N-Retinoyl-aminomercapto-carbonsäureallylestern und deren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (Y) durch Kondensation der Verbindungen (X) mit (III).
  • c) Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto-carbonsäuren und ihrer Derivate der allgemeinen Strukturformel (Z) durch Abspaltung der Schutzgruppe der Verbindung (Y).
22. Verfahren zur Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen und ihrer Derivate und Salze nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß als Verbindungen der allgemeinen Formel (S2) L-Methionin, L-Lanthionin, L-Cystathionin oder L-Cystin angesetzt werden.
23. Verfahren zur Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen und ihrer Derivate und Salze nach Anspruch 1 der allgemeinen Strukturformel (O4) gekennzeichnet durch folgende Verfahrensschritte:
  • a) Herstellung von S-Acetamidomethyl-L-aminomercaptocarbonsäurehydrochloriden und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (S4) durch Einführung der Acetamidomethylgruppe in die schwefelhaltigen L-Aminocarbonsäurehydrochloride der allgemeinen Strukturformel (S3)
  • b) Herstellung von S-Acetamidomethyl-L-aminomercapto-carbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (O1): durch Überführung der als Hydrochlorid vorliegenden Verbindung der allgemeinen Formel (S4) in die neutrale Aminosäure-Form,
  • c) Herstellung von Hydro-p-toluolsulfonaten von S-Acetamidomethyl- L-aminomercapto-carbonsäureallylestern und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (O2) durch azeotrope Veresterung mit Allylalkohol und p-Toluolsulfonsäuremonohydrat der freien Carboxylfunktion der Verbindung (O1),
  • d) Herstellung von N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-aminomercapto- carbonsäureallylestern und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (O3) durch Kondensation von Verbindung (O2) mit der Verbindung (III),
  • e) Herstellung von N-Retinoyl-S-acetamidomethyl-L-aminomercaptocarbonsäuren und ihren Derivaten der allgemeinen Strukturformel (O4): durch Abspaltung der Allylestergruppe.
24. Verfahren zur Herstellung von N-Retinoyl-L-aminomercapto- Verbindungen und ihrer Derivate und Salze nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, daß als Verbindung mit der allgemeinen Strukturformel (S3) L-Cysteinhydrochlorid-monohydrat eingesetzt wird.
25. L-Aminomercapto-carbonsäureallylester der allgemeinen Formel
26. S-Acetamidomethyl-L-cysteinallylester-hydro- p-toluolsulfonat der Formel
27. L-Cystindiallylester-di(hydro-p-toluolsulfonat) der Formel
28. L-Methioninallylester-hydro-p-toluolsulfonat der Formel
29. N-Retinoyl-L-aminomercapto-carbonsäureallylester der allgemeinen Formel:
30. N-(2-Dehydro)-retinoyl-L-methioninallylester der Formel
31. N′,N-Retinoyl-L-lanthionindiallylester der Formel
32. Verwendung der N-Retinoyl-L-aminomercapto-Verbindungen nach einem oder mehreren der Ansprüche 1-17 zur systemischen und topischen Anwendung für die Prävention und Therapie von Erkrankungen der Schleimhäute.
33. Verwendung der N-Retinoyl-L-aminomercapto-Verbindungen nach Anspruch 32, insbesondere der Verbindung N-Retinoyl-L-cystein, zur systemischen und topischen Anwendung für die Prävention und Therapie von Störungen der sekretorischen Funktion und/oder der Differenzierung der Schleimhäute des Tracheobronchial-, Intestinal- und Urogenitaltraktes.
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