DE3640409C2

DE3640409C2 -

Info

Publication number: DE3640409C2
Application number: DE3640409A
Authority: DE
Inventors: Kanshiro Kitagaki; Keiko Hachioji Tokio/Tokyo Jp Ebihara; Shigeo Yokohama Kanagawa Jp Morioka; Takao Urawa Saitama Jp Nakamura; Taizo Urayasu Chiba Jp Okada
Original assignee: Sato Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Sato Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1985-11-27
Filing date: 1986-11-26
Publication date: 1989-07-20
Also published as: JPS62126128A; FR2593396B1; JPH0255404B2; GB2184353B; DE3640409A1; SE8605044L; US4886667A; GB2184353A; CH670047A5; GB8628115D0; SE8605044D0; FR2593396A1

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung von Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol.

Bisher wurde Ratanhia aufgrund seiner adstringierenden Wirkung für hemostatische Arzneimittel sowie für Arzneimittel gegen Durchfall verwendet. Ratanhia wurde in den offiziellen Compendien vieler Länder beschrieben, wie beispielsweise in der Japanischen Pharmacopeia (3. Revision), im Deutschen Arzneibuch (8. Ausgabe), in der Pharmacope Francaise (8. Edition) und in der Pharmacopoea Helvetica (Edition Quinta). Ratanhia wird seit langem für Arzneimittel verwendet, so beispielsweise in der Mundmedizin (RO-PS 83 061) und für Suppositorien (NL-PS 64 090). Hierbei wird die adstringierende Wirkung von Tannin ausgenutzt, welches in Ratanhia enthalten ist.

Weitere Anwendungsgebiete von Ratanhiaextrakten sind verschiedene Formen der Entzündung im Bereich der Mundhöhle und des Rachens. Innerlich wird diese Droge bei Durchfällen, auch blutigen Diarrhöen, Enteritis, Gastritis sowie bei Nieren- und Harnröhrenblutungen verwendet. Auch die anregende Wirkung bei der Epithelbildung bei Schenkelgeschwüren und ihr Zusatz zu Hämorrohoidal- und Frostbeulenmitteln sind bekannt (P. H. List und L. Hörhammer, Hagers Handbuch der pharmazeutischen Praxis, Band V, 1976, Seiten 409 bis 412).

Andererseits wurde in neuerer Zeit festgestellt, daß infektiöse Hauterkrankungen gemischte infektiöse Erkrankungen sind, welche durch aerobe und anaerobe Bakterien verursacht werden. So setzen sich beispielsweise die hauptsächlichen pathogenen Bakterien bei Akne aus Corynebakterium acnes als anaerobe Bakterien und Staphylococcus epidermis als aerobe Bakterien zusammen, und im Brennpunkt von Dekubitus wurden Bacteroides fragilis und Fusobacterium nucleatum als anaerobe Bakterien und Staphylococcus aureus als aerobe Bakterien festgestellt.

Während es sich außerdem bei den hauptsächlichen pathogenen Pilzen bei Dermatomykose, wie beispielsweise Ringelflechte, bei Favus und Tinea pedis, um aerobe pathogene Pilze, wie beispielsweise Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum, Trichophyton canis, Microsporum gypseum und dgl., handelt, wurden als pathogene Bakterien bei infektiösen Sekundärerkrankungen Staphylococcus aureus als aerobe Bakterien, Candida albicans als aerobe Hefepilze und Bacteroides fragilis als anaerobe Bakterien festgestellt. Um daher eine therapeutische Wirkung für jede spezielle infektiöse Erkrankung zu erzielen, ist es auch erforderlich, Ingredienzen zu kombinieren, welche eine antibakterielle Wirkung sowohl gegenüber aeroben als auch anaeroben Bakterien besitzen. In dieser Hinsicht wurden noch keine zufriedenstellenden äußerlich anwendbaren Präparate gefunden. Außerdem wurde das Vorhandensein einer Ingredienz erwartet, welche antibakterielle und antifungale Wirkung gegen alle pathogenen Bakterien bei sogenannten infektiösen Hauterkrankungen von Akne und Dekubitus bis zur Dermatomykose besitzt und außerdem in der Anwendung sehr sicher ist.

Die Erfindung hat sich daher die Aufgabe gestellt, ein äußerlich anwendbares Präparat zu schaffen, welches sehr sicher ist und außerdem ein weitreichendes antibakterielles Spektrum gegenüber pathogenen Bakterien besitzt, welche infektiöse Hauterkrankungen verursachen.

Zur Lösung dieser Aufgabe ist Gegenstand der Erfindung die Verwendung von Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol zur Bekämpfung von infektiöse Hauterkrankungen verursachenden pathogenen Bakterien und Pilzen.

Bei der Suche nach einer natürlichen Quelle unter verschiedenen Pflanzen und nach Aussiebung vieler Spezien wurde nämlich festgestellt, daß ein äußerlich anwendbares Präparat, welches mit Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol kombiniert wird, bei denen es sich um eine der Ingredienzen in Ratanhia handelt, ausgezeichnete antibakterielle Wirkungen sowie ein breites antibakterielles Spektrum gegenüber pathogenen Bakterien bei infektiösen Hauterkrankungen, wie beispielsweise Akne, Dekubitus, Dermatomycose und dgl., besitzt. Bei einer äußerlich anwendbaren Komposition wird man äußerlich anwendbare Flüssigkeiten, Lotionen, Salben, Suppositorien, feste Gesichtswaschmittel, flüssige Gesichtswaschmittel, kremige Gesichtswaschmittel, Kataplasmen, Pflaster und dgl. mit Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol kombinieren.

Bei der Pflanze, aus welcher der erfindungsgemäß zu verwendende Ratanhiaextrakt oder das Ratanhiaphenol erhalten wird, handelt es sich um Ratanhia, deren Ursprungspflanzen die Krameria triandra Ruitz et Pavon und/oder die Krameria argentea Martius (Leguminose-Caesalpinioideae) sind. Vorzugsweise wird die Pflanze in pulverisierter Form ihrer Wurzel verwendet.

Der Ratanhiaextrakt wird aus der Ratanhiapflanze mit einem Lösungsmittel, wie beispielsweise Wasser, Äthanol, Methanol, Hexan, Äther, Azeton, Äthylazetat, Toluol, Benzol, Propylenglykol Glyzerin und dgl. oder einer Mischung derselben, extrahiert. Je nach dem Zustand der Extraktfraktion wird beispielsweise eine Extraktion vom Lösungsmittel durch Verdampfung getrennt und dann direkt als Extrakt mit antibakteriellen Eigenschaften verwendet, oder eine Extraktfraktion wird mehrmals mit den vorgenannten Lösungsmitteln extrahiert, um den Gehalt einer derartigen wirksamen Ingredienz zu erhöhen, und die auf diese Weise sekundäre Extraktfraktion wird dann vom Lösungsmittel beispielsweise durch Verdampfung getrennt, um einen Extrakt zu ergeben, welcher antibakterielle Eigenschaften besitzt.

Ratanhiaphenol wird beispielsweise derart erhalten, daß ein Ratanhiaextrakt der vorgenannten Art mit einer Mischung von verdünnter Salzsäure und Äthyläther extrahiert wird, dann die Ätherschicht verdampft wird, alsdann der Rest in Chloroform gelöst wird, die Lösung aus Silicagel (74 bis 149 µ) mit Chloroform und Hexan 7 : 3 als Eluat fraktioniert wird, woraufhin die Ratanhiaphenolfraktion aufgefangen und dann als Petroläther rekristallisiert wird. Bei dem auf diese Weise erhaltenen Ratanhiaphenol handelt es sich um farblose, nadelartige Kristalle. Dieses Ratanhiaphenol besitzt drei Strukturarten des nachstehenden Aufbaues.

Zur Herstellung von Ratanhiaextrakt oder Ratanhiaphenol kann übrigens auch irgendein anderes Verfahren als das vorgenannte Extraktionsverfahren angewendet werden, ohne daß dadurch die erfindungsgemäße Verwendung beeinflußt würde. Es können auch mehrere derartige Produkte zusammen verwendet werden, welche als Ratanhiaextrakt oder Ratanhiaphenol bei einem Verfahren der vorbeschriebenen Art erhalten werden.

Die Menge von Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol, welche mit äußerlich anwendbaren Kompositionen kombiniert werden sollen, liegt zwischen 0,00005 bis 5 Gew.-%, und vorzugsweise zwischen 0,005 bis 2 Gew.-%.

Als weitere Bestandteile der äußerlich anwendbaren Komposition können alle Bestandteile verwendet werden, welche für äußerlich anwendbare Präparate geeignet sind. So wird beispielsweise bei Anwendung an einem erkrankten Teil einer infektiösen Hauterkrankung unter Beachtung des jeweiligen Falles die Mischung gelöst, dispergiert oder mit einer geeigneten Grundlage gemischt und alsdann erforderlichenfalls mit Emulgatoren, Stabilisatoren, Sprühmitteln, Eindringungsmitteln, die Hornhaut aufweichenden Mitteln, entzündungshemmenden Mitteln und anderen versetzt, um ein Medikament zu erhalten.

Außerdem können die erfindungsgemäß äußerlich anwendbaren Kompositionen auch in Kombination mit antibakteriellen Substanzen verwendet werden. Bei Untersuchung der Wirkung bei Verwendung in Kombination mit anderen antibakteriellen Substanzen wurde festgestellt, daß bei einer Verwendung in Kombination mit Cefalexin, Novobiocin, Tetracyclin, Nalidinsäure und Tolnaftat die erfindungsgemäß äußerlich anwendbaren Kompositionen keinen Antagonismus, sondern zusätzlichen Effekt zeigten. Dies bedeutet, daß eine erfindungsgemäße Verwendung der Kompositionen in Kombination mit anderen antibakteriellen Substanzen die individuelle antibakterielle Aktivität nicht beeinträchtigt und sich dazu eignet, das antibakterielle Spektrum der Kompositionen weiter auszudehnen.

1. Herstellung von Ratanhiaextrakt und Ratanhiaphenol Ratanhiaextrakt

Zu 100,0 g an Ratanhia-Trockenpulver wurden 500 ml Äthanol zugesetzt und die Mischung wurde unter Rückfluß bei 60 bis 70°C 3 h lang erhitzt und gefiltert. Dem Rückstand wurden dann nochmals 250 ml Äthanol zugesetzt und der gleiche Rückfluß wurde zweimal wiederholt, um aus der insgesamt dreimaligen Extraktion den Äthanolextrakt zu erhalten. Der Äthanolextrakt wurde bei 12 000 U/min 10 min unter Kühlung zentrifugiert, das auf diese Weise erhaltene Filtrat wurde ausgetrocknet und ergab 16,2 g. Die gleichen Extraktionen mit anderen Lösungsmitteln wurden nach dem gleichen Verfahren wie vorbeschrieben durchgeführt, um Extrakte zu erhalten.

Nachstehende Tabelle 1 zeigt die Ausbeute (Gew.-%) an Ratanhiaextrakt bei jedem Extraktionsmittel.

Tabelle 1

Ausbeute an Ratanhiaextrakt

Ratanhiaphenol

Der aus dem flüssigen Äthanolextrakt erhalten Ratanhiaextrakt wurde nochmals mit einer Mischung von verdünnter Salzsäure und Äthyläther extrahiert. Die Ätherschicht des Extraktes wurde ausgetrocknet und der Rückstand in Chloroform gelöst und dann auf Silikagel (Teilchendurchmesser: 74-149 µ) mit einem Eluat aus Chloroform und n-Hexan 7 : 3 fraktioniert. Die Ratanhiaphenolfraktion wurde aufgefangen und anschließend zu Ratanhiaphenolkristallen rekristallisiert.

2. Antibakterielle Aktivität 1) Antibakterielle Aktivität in vitro

Die inhibierenden Mindestkonzentrationen (MIC) der im Beispiel 1 erhaltenen Ratanhiaextrakte (A-E) und Ratanhiaphenole (F) wurden für zehn Spezies von 10 Standardstämmen und drei Spezies von 79 klinisch isolierten anaeroben Stämmen bestimmt. Die Resultate zeigen die Tabellen 2-1 bzw. 2-2 bzw. 3.

Verfahren

MIC wurde nach der Agar-Verdünnungsmethode in zweimaliger Verdünnung bestimmt.

Die Einimpfung von Bakterien wurde mit einer Flüssigkeit durchgeführt, welche Bakterien in 10^6-7 Zellen/ml enthielt, wobei ein Mikroplanter (Sakuma Seisakusho) verwendet wurde.

Hinsichtlich der Zuchtbedingungen wurden anaerobe Bakterien in einem anaeroben Behälter gezüchtet, wobei ein Gasgemisch (CO₂ : H₂ : N₂ ≡ 1 : 1 : 8) bei 37°C 60 Stunden lang unter Luftabschluß zugeführt wurde. Aerobe Bakterien wurden bei 37°C 48 Stunden lang gezüchtet, ausgenommen pathogene Pilze, welche 168 Stunden lang unter aeroben Bedingungen gezüchtet wurden.

Stämme 1) Standardstämme (ATCC, RIMD, IFO)

Anaerobe Bakterien:

Bacteroides fragilis RIMD 023001
Fusobacterium nucleatum ATCC 25586
Corynebacterium acnes ATCC 11828

Aerobe Bakterien:

Staphylococcus aureus ATCC 6538 P
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
Staphylococcus pyogenes ATCC 10389

Dermatophyten: (pathogene Pilze)

Trichophyton mentagrophytes IFO 5466
Trichophyton rubrum IFO 5467
Microsporum gypseum IFO 8231

Hefepilze:

Candida albicans ATCC 10261

2) Klinisch isolierte Stämme

Anaerobe Bakterien:

Bacteroides fragilis (48 isolierte Stämme)
Peptostreptococcus sp. (22 isolierte Stämme)
Clostridium perfringens (9 isolierte Stämme)

Medien:

CAM-Nährlösung für anaerobe Bakterien,
BHI-Medium für aerobe Bakterien,
Sabouraud-Medien für Dermatophyten und Hefepilze.

Kontrolle

Als antibakterielle Kontrollsubstanzen wurden verwendet Ticarcillin, Tetracyclin, Cefalexin und Apalcillin, welche bei anaeroben Bakterien wirksam sind, ferner Isopropylmethylphenol, welches bei aeroben Bakterien wirksam ist, ferner Tolnaftat, Undezinsäure und Griseofulvin, welche bei Dermatophytes wirksam sind.

Aus den Resultaten der Tabellen 2-1 und 2-2 zeigt sich, daß eine Kombination von Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol eine ausgezeichnete antibakterielle Aktivität gegenüber allen anaeroben Bakterien, aeroben Bakterien und Dermatophytes besitzt.

Ferner zeigen die Resultate der antibakteriellen Aktivität (MIC) bei klinisch isolierten anaeroben Bakterien gemäß Tabelle 3, daß Ratanhiaphenol einen kleinen Bereich an effektiver Konzentration im Vergleich zu Tetracyclin und Cefalexin sowie 100%ige Wirksamkeit bei 79 isolierten Stämmen der getesteten Bakterien bei 1,56 bis 12,5 µg/ml besitzt.

Bei 48 isolierten Stämmen von Bacteroides fragilis zeigte Ratanhiaphenol eine 100%ige Wirksamkeit bei 1,56 bis 6,25 µg/ml. Andererseits zeigten Tetracyclin und Cefalexin ihre antibakterielle Wirkung über einen weiten Konzentrationsbereich, wie beispielsweise von 1,56 bis 400 µg/ml für Tetracyclin und bei 3,13 bis 400 µg/ml für Cefalexin.

In gleicher Weise zeigte Ratanhiaphenol eine 100%ige Wirksamkeit bei 22 isolierten Stämmen von Peptostreptococcus sp. und 9 isolierten Stämmen von Clostridium perfringens bei 3,13 bis 12,5 µg/ml.

Die Tatsache, daß die antibakterielle Wirkung von Ratanhiaphenol in einem kleinen Konzentrationsbereich wirksam ist im Vergleich zu der antibakteriellen Wirkung von Tetracyclin und Cefalexin, welche über einen großen Konzentrationsbereich wirksam sind, zeigt, daß es weniger arzneimittelresistente Bakterien für Ratanhiaphenol gibt, was daher bedeutet, daß Ratanhiaphenol eine ausgezeichnete antibakterielle Aktivität besitzt.

2) Antifungale Aktivität in vivo bei Trichophytose von Guineaschweinen

Die antifungale Aktivität von 1%iger Lösung von Ratanhiaextrakt (B) und Ratanhiaphenol (F) bei experimenteller Trichophytose von Guineaschweinen wurde im Vergleich mit den positiven Kontrollen von 1%iger Clotrimazol-Lösung und 1%iger Thimerosal-Lösung geprüft.

Für den Versuch verwendete Tiere: Männliche Hartley′s white Guineaschweine; Körpergewicht 400-500 g; 20 Guineaschweine für eine Dosisgruppe.

Versuchsmethoden

Gemäß der Kakenmethode von Sakai und al. (Japanisches Journal der Medical Mycology, 1(3)252-257 (1960)) wurde ein Guineaschwein an 4 bis 5 Stellen seines Rückens jeweils in einer Größe von 2 cm Durchmesser mit Klebestreifen depiliert und mit Sandpapier an den Stellen abgerieben. Auf die ganze Fläche wurde mit einer kleinen Bürste eine Flüssigkeit aufgetragen, welche einen Pilz (Trichophyton mentagrophytes IFO 5810, 1,6 × 10⁷ Sporen/ml) enthielt. Zwei Tage (48 Stunden) nach der Pilzinfektion wurde das Arzneimittel 8 Tage lang jeweils einmal pro Tag mit jeweils 0,1 ml aufgetragen.

Einen Tag (24 Stunden) nach der letzten Verabreichung des Arzneimittels wurde das Tier getötet und 4 Scheiben von jeweils 0,5 cm² wurden von der Körperfläche abgetrennt und auf ein Sabouraud Agarmedium übertragen, welches mit 400 µg/ml von Cycloheximid und 50 µg/ml von Chloromycetin versetzt war. Nach 2wöchiger Züchtung bei 25°C wurde jede der Scheiben in bezug auf das Pilzwachstum untersucht.

Aus der Anzahl von fungal negativen Scheiben und der Anzahl von fungal negativen Herden wurden der fungale Negativindex und der Heilungsindex gemäß nachstehender Formel berechnet.

Tabelle 4

Antifungale Aktivität bei Trichophytose von Guineaschweinen

Aus den Resultaten der Tabelle 4 zeigt sich, daß die Heilwirkung von 1%iger Ratanhiaphenollösung die gleiche war wie die mit 1%iger Clotrimazollösung.

Untersuchung

Heilungsindex: Fisher's direkte Wahrscheinlichkeitsberechung P < 0,05.

Fungaler Negativitätsindex: χ² Untersuchung P < 0,05.

3. Akute Toxizität

Ratanhiaextrakt (B) und Ratanhiaphenol (F) wurden als Suspension in 0,5%iger Natriumcarboxymethyl Zellulose hergestellt.

Eine einzige Dosis jeder Komposition wurden oral oder subkutan an 5 Wochen alte männliche Mäuse eines ddy-Stammes verabreicht.

Die Tiere wurden am Tage der Verabreichung des öfteren und dann täglich 16 Tage lang nach Verabreichung auf irgendwelche Zeichen von Toxizität oder Sterblichkeit beobachtet.

Es wurden dann 50%ige Lethaldosen (LD50), wie die Tabellen 5 und 6 zeigen, geschätzt.

Alle am Ende der 16tägigen Beobachtung überlebenden Tiere wurden getötet und auf mögliche Restschädigungen untersucht.

Das Resultat ergab keinerlei abnormale Anzeichen. Die Toxizität von Ratanhiaextrakt (B) und Ratanhiaphenol (F) waren gering.

Tabelle 5

LD50-Werte und Sterblichkeit bei männlichen Mäusen nach oraler Verabreichung

Tabelle 6

LD50-Werte und Sterblichkeit bei männlichen Mäusen nach subkutaner Verabreichung

Beispiel 2 Pharmazeutisches Präparat

Einige Beispiele von Medikamenten unter Verwendung der erfindungsgemäßen äußerlich anwendbaren Komposition folgen nachstehend.

1) Salben

Eine lipophile Salbe wurde in normaler Weise entsprechend nachstehender Formel mit Ratanhiaextrakt hergestellt, wobei dieser durch Extraktion mit Äthanol erhalten wurde.

Polyoxyäthylengehärtetes Kastoröl\|1,0%
Polyoxyäthylen Lauryläther	2,0%
Diäthylsebazat	5,0%
Ratanhiaextrakt	1,0%
Äthanol	0,5%
Parfüm	0,1%
weißes Petrolat	Ausgleich
	100,0%

2) Kremige Gesichtswaschmittel

Ein kremiges Gesichtswaschmittel wurde in normaler Weise entsprechend nachstehender Formel mit Ratanhiaphenol hergestellt.

Beagum\|1,0%
Natriumlaurylsulfat	28,0%
Parfüm	0,1%
Diäthylenglykolstearat	2,0%
Ratanhiaphenol	0,005%
Zetylalkohol	2,0%
Lecithin	2,0%
Wasser	Ausgleich
	100,0%

3) Lotionen

Eine Lotion wurde in normaler Weise gemäß nachstehender Formel hergestellt, wobei Ratanhiaphenol und ein durch Extraktion mit n-Hexan hergestellter Ratanhiaextrakt verwendet wurden.

Karboxyvinylpolymer\|0,5%
Zetanol	3,0%
Lauromakrogol	2,0%
Betain Lauryldimethylaminoazetat	3,0%
Ratanhiaextrakt	1,0%
Ratanhiaphenol	1,0%
Polyoxyäthylen sorbitan monolaurat	1,0%
Wasser	Ausgleich
	100,0%

4) Suppositorien

Ein Suppositorium wurde in normaler Weise gemäß nachstehender Formel hergestellt und enthielt einen Ratanhiaextrakt, welcher mittels Methanol und n-Hexan (1 : 1) extrahiert worden war.

Monostearin\|6,0%
Zinkoxid	5,0%
Äthylaminobenzoat	3,0%
Ratanhiaextrakt	2,0%
Medium chain Fettsäureglyzerid	Ausgleich
	100,0%

5) Flüssigkeiten

Eine Flüssigkeit für äußerliche Anwendung wurde in normaler Weise gemäß der nachstehenden Formel hergestellt und enthielt Ratanhiaphenol.

Diphenhydramin Hydrochlorid\|1,0%
Dikalium glycyrrhizinat	0,5%
Polyoxyäthylen sorbitan monooleat	3,0%
Ratanhiaphenol	0,1%
Parfüm	0,1%
Lauromakrogol	0,5%
Wasser	Ausgleich
	100,0%

6) Pflaster

Ein Pflaster wurde in normaler Weise gemäß der nachstehenden Formel hergestellt und enthielt Ratanhiaextrakt, der unter Verwendung von 70 Vol.-% Äthanol extrahiert worden war.

Polyoxyäthylen Oktyl phenyl äther\|2,0%
Äthanol	0,5%
Terpentinester	4,0%
Silikonöl	5,0%
l-Methanol	3,0%
Ratanhiaextrakt	1,5%
Paraffin	5,0%
Sucrose fettsäure ester	1,0%
Polyurethan Akrylpolymer	Ausgleich
	100,0%

Claims

1. Verwendung von Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol zur Bekämpfung von infektiöse Hauterkrankungen verursachenden pathogenen Bakterien und Pilzen.

2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Ratanhiaphenol aus der Gruppe mit einer der nachstehenden Strukturformeln ausgewählt wird.

3. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß in einer äußerlich anwendbaren Komposition 0,00005 bis 5 Gew.-%, vorzugsweise 0,005 bis 2 Gew.-% an Ratanhiaextrakt und/oder Ratanhiaphenol enthalten sind.