DE3247610A1 - Process for the preparation of rosmarinic acid from plant cell cultures and of plant cell pellets containing rosmarinic acid - Google Patents
Process for the preparation of rosmarinic acid from plant cell cultures and of plant cell pellets containing rosmarinic acidInfo
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Abstract
Description
Beschreibungdescription
Die vorliegende Erfindung betrifft ein neues Verfahren zur Herstellung von Rosmarinsäure aus Pflanzenzellkulturen und deren galenische Formulierungen ohne Extraktion des Wirkprinzips aus den gezüchteten Pflanzenzellen.The present invention relates to a new method of manufacture of rosmarinic acid from plant cell cultures and their pharmaceutical formulations without Extraction of the active principle from the cultivated plant cells.
Rosmarinsäure ist ein wichtiger Naturstoff mit bekannten anti-inflammatorischen (DE-OS 29 52 114) und anti-gonadotropen (Planta med. 39, 245, 1980) Eigenschaften. Es ist deshalb von großem Interesse, Rosmarinsäure in reiner Form zu gewinnen.Rosmarinic acid is an important natural substance with known anti-inflammatory properties (DE-OS 29 52 114) and anti-gonadotropic (Planta med. 39, 245, 1980) properties. It is therefore of great interest to obtain rosmarinic acid in its pure form.
Rosmarinsäure (3,4-Dihydroxy-0(-C(3 (3,4-dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl)-oxy]-phenylpropionsäure kommt hauptsächlich in Pflanzenarten folgender Gattungen der Unterfamilie der Saturejoideae, der Familie der Labiatae vor: Acinos, Amaracus, Calamintha, Clinopodium, Glechoma, Hymenocrater, Hyssopus, Lavendula, Lophanthus, Lycops, Majorana, Meehania, Melissa, Menthas Micromeria, Monarda, Nepeta, Origanum, Perilla, Perovskia, Prunella, Rosmarinus, Salvia, Saturea, Schizonepeta, Thymus, Ziziphora (Planta med. 27, 372, 1975).Rosmarinic acid (3,4-dihydroxy-0 [-C (3 (3,4-dihydroxyphenyl) -1-oxo-2-propenyl) -oxy] -phenylpropionic acid occurs mainly in plant species of the following genera of the subfamily of the Saturejoideae, of the Labiatae family: Acinos, Amaracus, Calamintha, Clinopodium, Glechoma, Hymenocrater, Hyssopus, Lavendula, Lophanthus, Lycops, Majorana, Meehania, Melissa, Menthas Micromeria, Monarda, Nepeta, Origanum, Perilla, Perovskia, Prunella, Rosmarinus, Salvia, Saturea, Schizonepeta, Thymus, Ziziphora (Planta med. 27, 372, 1975).
Rosmarinsäure wurde auch in den Pflanzenarten folgender Gattungen der Unterfamilie der Saniculoideae , der Familie der Umbellifera: Astrantia, Eryngium und Sanicula (Pharmazie 22, 220, 1967) nachgewiesen.Rosmarinic acid was also found in the following genera the subfamily of the Saniculoideae, the family of the Umbellifera: Astrantia, Eryngium and Sanicula (Pharmazie 22, 220, 1967).
Außerdem noch in Pflanzenzellkulturen von Ocimum basilicum (Eur. J. Cell. Biol. 19, 67, 1979). Der Gehalt an Rosmarinsäure liegt jedoch in all diesen Beispielen nicht höher als 3 %.In addition, in plant cell cultures of Ocimum basilicum (Eur. J. Cell. Biol. 19, 67, 1979). However, the content of rosmarinic acid lies in all of these Examples not higher than 3%.
In der DE-OS 30 10 040 wird ein Verfahren beschrieben, um aus Melissa officinalis, welche einen Rosmarinsäuregehalt von 2,1 °% pro Trockengewicht enthält, zu extrahieren, wobei die Ausbeute zwischen 50 - 60 % lag.In DE-OS 30 10 040 a method is described to get from Melissa officinalis, which contains a rosmarinic acid content of 2.1% per dry weight, to extract, the yield being between 50-60%.
Durch Erzeugen von Pflanzenzellkulturen der Pflanzenart Coleus blumei (Naturwiss. 64, 585, 1977) wurde gefunden, daß sich diese relativ geringen Ausbeuten an Rosmarinsäure aus der Droge auf bis zu 13% steigern läßt. Das hierzu verwendete Nährmedium "85" für die Pflanzenzellen nach Gamborg et al. (Exptl. Cell. Res. 50, 151, 1968) mit der sehr hohen Konzentration von 75 g Saccharose/Liter Medium ist jedoch wegen der komplexen Zusammensetzung unhandlich und teuer.By producing plant cell cultures of the plant species Coleus blumei (Naturwiss. 64, 585, 1977) it was found that these relatively low yields in rosmarinic acid from the drug can be increased by up to 13%. The one used for this Nutrient medium "85" for the plant cells according to Gamborg et al. (Exptl. Cell. Res. 50, 151, 1968) with the very high concentration of 75 g sucrose / liter of medium however, bulky and expensive because of the complex composition.
Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, Rosmarinsäure nach einfachen Verfahren in hohen Ausbeuten durch Pflanzenzellkulturen zu gewinnen.The aim of the present invention is to produce rosmarinic acid after simple Obtain process in high yields by plant cell cultures.
Das Ziel wird erreicht durch das Verfahren gemäß den Patentansprüchen.The object is achieved by the method according to the patent claims.
Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß man Rosmarinsäure aus Pflanzenzellkulturen von Coleus blumei in einem neuen Zwei-Stufen-Prozeß in kreisförmig-exzentrisch bewegten Kulturgefäßens vorzugsweise Erlenmeyer-Glaskolben, unter Verwendung eines vollständig geänderten Produktionsmediums erhalten kann, wobei die Ausbeute höher ist als bei allen bekannten Verfahren. Es werden 10 - 20 Gew.-% Rosmarinsäure bezogen auf Trockensubstanz, vorzugsweise 15 Gew.-,-erreicht.It has now surprisingly been found that rosmarinic acid can be made from Plant cell cultures of Coleus blumei in a new two-step process in circular-eccentric agitated culture vessels, preferably Erlenmeyer glass flasks, using a can get completely changed production medium, with higher yield is than with any known method. 10-20% by weight of rosmarinic acid is obtained on dry matter, preferably 15% by weight.
Die erste Stufe des Verfahrens dient der dauerhaften Erhaltung der lebenden Zellkultur. Dazu werden die Zellen von Coleus blumei in Form der Zellsuspensionskultur in regelmäßigen Abständen teilweise in frisches Erhaltungsmedium überführt und weitergezüchtet. Das Erhaltungsmedium besteht ausMineralsalzen, Vitaminen und organischen Substanzen, Phytohormonen und Kohlenhydraten, vorzugweise in der Zusammensetzung nach Gamborg et al. (Exptl. Cell Res. 50, 151, 1968).The first stage of the process is used to maintain the permanent living cell culture. For this purpose, the cells of Coleus blumei are in the form of the cell suspension culture at regular intervals partially transferred to fresh maintenance medium and further bred. The maintenance medium consists of mineral salts, vitamins and organic substances, Phytohormones and carbohydrates, preferably in the Gamborg composition et al. (Exptl. Cell Res. 50, 151, 1968).
Das wässrige Erhaltungsmedium enthält 1,6 - 4,9 g/l Mineralsalzmischung 0*056 - 0,168 g/l Vitamine 1 - 3 gll NZ-Amine (Typ A) 1,6 - 4,8 mg/l Phytohormone 10 - 30 g/l Kohlenhydrate Als Mineralsalze werden verwendet: Kaliumnitrat, Magnesiumsulfat, Natriumhydrogenphosphat, Calciumchlorid, Ammoniumsulfat, Titriplex III, Eisen-II-sulfat, Borsäure, Zinksulfat, Mangansulfat, Kai iumjodid, Natriummolybdat, Kupfersulfat, Kobaltchl orid.The aqueous maintenance medium contains 1.6-4.9 g / l mineral salt mixture 0 * 056 - 0.168 g / l vitamins 1 - 3 gll NZ-Amine (type A) 1.6 - 4.8 mg / l phytohormones 10 - 30 g / l carbohydrates The following mineral salts are used: potassium nitrate, magnesium sulfate, Sodium hydrogen phosphate, calcium chloride, ammonium sulfate, Titriplex III, iron (II) sulfate, Boric acid, zinc sulfate, manganese sulfate, potassium iodide, sodium molybdate, copper sulfate, Cobalt chloride.
Als Vitamine werden verwendet: myo-Inosit, Thiaminiumdichlorid, Nikotinsäure, Pyridoxalhydrochlorid.The following vitamins are used: myo-inositol, thiamine dichloride, nicotinic acid, Pyridoxal hydrochloride.
Als organische Substanzen werden verwendet: NZ-Amine (Typ A).The following organic substances are used: NZ amines (type A).
Als Phytohormone werden verwendet: 2,4-Dichlorphenoxyessigsäure, 1-Naphthylessigsäure, Indol-3-essigsäure, Kinetin.The following phytohormones are used: 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, 1-naphthylacetic acid, Indole-3-acetic acid, kinetin.
Als Kohlenhydrate werden Saccharose, Abfallprodukte und Zwischenprodukte der Zuckerherstellung, wie Melasse und Rohzucker, oder Stärke verwendet.Sucrose, waste products and intermediate products are used as carbohydrates used in sugar production, such as molasses and raw sugar, or starch.
In der zweiten Stufe wird die Zellmasse nach hinreichender Vermehrung im Erhaltungsmedium in Teilmengen in ein Produktionsmedium überführt, vorzugsweise in einer Menge von 1 -10 g Zellfrischmasse pro Liter Produktionsmedium.In the second stage, the cell mass is increased after sufficient reproduction transferred in partial quantities in the maintenance medium into a production medium, preferably in an amount of 1 - 10 g fresh cell mass per liter of production medium.
Das Produktionsmedium besteht aus einer Mischung von -5 -50 Vol.-% rückgeführtem, konditioniertem Erhaltungsmedium der Inokulumkultur und 95 - 50 Vol.-% wässriger Nährstofflösung. Diese Nährstofflösung enthält 30 - 100 g/l Kohlenhydrate, vorzugsweise Saccharose, vorzugsweise eine Menge von 50 g/l. Es können aber auch Nebenprodukte der Zuckerherstellung, wie Melasse, die auf einen entsprechenden Gesamtzuckergehalt von 30 - 100 g/l, vorzugsweise 50 g/l, gebracht wird, in Wasser gelöst verwendet werden. Außerdem können Mineralsalze hinzugefügt werden, vorzugsweise Calciumchlorid 0 - 300 mg/l, vorzugsweise 150 mg/l.The production medium consists of a mixture of -5 -50% by volume recycled, conditioned maintenance medium of the inoculum culture and 95 - 50% by volume aqueous nutrient solution. This nutrient solution contains 30-100 g / l carbohydrates, preferably sucrose, preferably an amount of 50 g / l. But it can also By-products of sugar production, such as molasses, which result in a corresponding total sugar content from 30-100 g / l, preferably 50 g / l, dissolved in water will. Mineral salts can also be added, preferably calcium chloride 0-300 mg / l, preferably 150 mg / l.
Nach einer ausreichenden Verweilzeit in einem Bioreaktor, beispielsweise von 120 - 340 Stunden bei 20 - 30 OC, und ständiger Belüfung ist die Bildung von Rosmarinsäure erfolgt.After a sufficient residence time in a bioreactor, for example from 120 - 340 hours at 20 - 30 OC, and constant ventilation is the formation of Rosmarinic acid is made.
Die gezüchtete Biomasse wird dann sofort vom verbrauchten Produktionsmedium separiert, vorzugsweise durch Zentrifugation oder Filtration, und anschließend schnell getrocknet, vorzugsweise durch Einfrieren der Zellen und anschließender Gefriertrocknung oder durch Behandlung mit den üblichen Sprühtrocknungsverfahren oder durch Trocknung im Wirbelschichtverfahren. Das Endprodukt ist ein hellbraunes Zell-Pulver, vorwiegend aus ganzen Zellen bestehend, von neutralem Geschmack.The grown biomass is then immediately consumed by the production medium separated, preferably by centrifugation or filtration, and then quickly dried, preferably by freezing the cells and then freeze drying or by treatment with the customary spray-drying processes or by drying in the fluidized bed process. The end product is a predominantly light brown cell powder composed of whole cells, of neutral taste.
Bei den Untersuchungen zur Optimierung des Verfahrens und Vergrößerung der Volumina wurde überraschend gefunden, daß die Rührbedingungen im Bioreaktor die Ausbeute an Rosmarinsäure erheblich beeinflussen. Durch Anwendung von die Zellkultur nicht schädigenden Rührbedingungen, die unter Vermeidung von starken Scherkräften das Medium jedoch gut durchmischen, können die Ausbeuten der Chargen erhöht werden.During the investigations to optimize the process and to enlarge it of the volumes, it was surprisingly found that the stirring conditions in the bioreactor significantly affect the yield of rosmarinic acid. Using cell culture non-damaging stirring conditions that avoid strong shear forces however, if the medium is mixed thoroughly, the yields of the batches can be increased.
Als besonders geeignet hat sich ein sogenannter Spiral- oder Wendelrührer erwiesen.A so-called spiral or helical stirrer has proven to be particularly suitable proven.
Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß von der getrockneten, definierte Mengen Rosmarinsäure enthaltenden Biomasse der Pflanzenzellen von Coleus blumei direkt pharmazeutische Präparationen hergestellt werden können, z.B durch Mischen, Granulieren, Dragieren oder Lyophilisieren, vorzugsweise als Tabletten und/oder Kapseln durch Mischen der getrockneten Biomasse der Pflanzenzellen mit entsprechenden anorganischen. oder organischen, festen oder flüssigen pharmazeutischen Hilfsstoffen. Die Präparate können enteral oder parenteral verabreicht werden.It has now been found, surprisingly, that of the dried, Coleus plant cell biomass containing defined amounts of rosmarinic acid blumei pharmaceutical preparations can be made directly, e.g. by Mixing, granulating, coating or lyophilising, preferably as tablets and / or capsules by mixing the dried biomass of the plant cells with corresponding inorganic. or organic, solid or liquid pharmaceutical Auxiliary materials. The preparations can be administered enterally or parenterally.
Auf diese Weise können vorzugsweise Tabletten oder Kapseln hergestellt werden, die neben der den Wirkstoff in therapeutischen Mengen enthaltenden Biomasse Gleitmittel, wie Silica, Talkum, Stearinsäure oder deren Salze, wie Magnesium-oder Calciumstearat und/oder Polyethylenglycol enthalten.In this way, tablets or capsules can preferably be produced that in addition to the biomass containing the active ingredient in therapeutic amounts Lubricants, such as silica, talc, stearic acid or their salts, such as magnesium or Contain calcium stearate and / or polyethylene glycol.
Sie können auch Bindemittel enthalten, wie Magnesiumaluminiumsilikate, Getreidestärke, Gelatine, Methylcellulose, Natriumcarboxylmethylcellulose, und/oder Polvinylpyrrolidon und möglicherweise Füllstoffe wie Agar, Alginate oder deren Salze, wie Natriumalginat und/oder Absorbentinen, Farbstoffe, Geruchsstoffe, Süßstoffe und Brausemittel.They can also contain binders, such as magnesium aluminum silicates, Corn starch, gelatin, methyl cellulose, sodium carboxylmethyl cellulose, and / or Polyvinylpyrrolidone and possibly fillers such as agar, alginates or their salts, such as sodium alginate and / or absorbentins, colorants, odorants, sweeteners and effervescent agents.
Außerdem wurde überraschenderweise gefundene daß durch die Beimengung von getrockneten Zellen aus Pflanzenzellkulturen der Phytostandard von Pflanzendrogen bezüglich der Inhaltsstoffe verbessert wird und sich bezüglich einer bestimmten pharmakologischen Wirkung steigern läßt, vorzugsweise durch Beimischen von Zellen von Coleul-blumei-Pflanzenzellkulturen zu Rosmarinsäure-haltigen Pflanzendrogen, wie Melissa piperita, Melissa officinalis, Rosmarinus officinalis.In addition, it was surprisingly found that due to the addition of dried cells from plant cell cultures the phytostandard of plant drugs with regard to the ingredients is improved and with regard to a certain Can increase pharmacological effect, preferably by adding cells from coleul blumei plant cell cultures to rosmarinic acid-containing plant drugs, such as Melissa piperita, Melissa officinalis, Rosmarinus officinalis.
Beispiel 1 Die von Explantaten einer Pflanze der Art Coleus blumei mit den bekannten Verfahren der Kallusinduktion erzeugten Zellkulturen werden als Zellsuspensionskulturen durch Überführen von jeweils ca. 30 Vol.-% Inokulum in frisches Erhaltungsmedium unter aseptischen Bedingungen nach jeweils 7 Tagen in permanentem Wachstum gehalten.Example 1 Those from explants of a plant of the species Coleus blumei Cell cultures generated with the known methods of callus induction are called Cell suspension cultures by transferring each approx. 30% by volume inoculum into fresh Maintenance medium under aseptic conditions every 7 days in permanent Growth kept.
Das Erhaltungsmedium besteht aus Wasser mit Kaliumnitrat 2,5 g/l, Magnesiumsulfat 250 mg/l, Natriumdihydrogenphosphat 172 mg/l, Calciumchlorid 150 mg/l, Ammoniumsulfat 134 mg/l, Titriplex 111R 34,3mg/l, Eisen-II-sulfat 25,6 mg/l, Borsäure 3 mg/l, Zinksulfat 3 mg/l> Mangansulfat 1 mg/l, Kaliumjodid 0>75 mg/l, Natriummolybdat 0,25mg/l, Kupfersulfat 0,25 mg/l, Kobaltchlorid 0,25 mg/l, meso-Inosit 100 mg/l, Thiaminiumdichlord 10 mg/l, Nikotinsäure 1 mg/l, Pyridoxalhydrochlorid 1 mg/l, NZ-Amine (Typ A) 2 g/l, 2,4-Dichlorphenoxyessig säure 2 m/l, Naphthylessigsäure 0,5 mg/l, Indolessigsäure 0,5 mg/T, Kinetin 0,2 mg/l und Saccharose 20 g/l.The maintenance medium consists of water with potassium nitrate 2.5 g / l, Magnesium sulfate 250 mg / l, sodium dihydrogen phosphate 172 mg / l, calcium chloride 150 mg / l, ammonium sulfate 134 mg / l, Titriplex 111R 34.3 mg / l, iron (II) sulfate 25.6 mg / l, Boric acid 3 mg / l, zinc sulfate 3 mg / l> manganese sulfate 1 mg / l, potassium iodide 0> 75 mg / l, sodium molybdate 0.25 mg / l, copper sulfate 0.25 mg / l, cobalt chloride 0.25 mg / l, meso-inositol 100 mg / l, thiaminium dichloride 10 mg / l, nicotinic acid 1 mg / l, pyridoxal hydrochloride 1 mg / l, NZ-Amine (type A) 2 g / l, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid 2 m / l, naphthylacetic acid 0.5 mg / l, indole acetic acid 0.5 mg / T, kinetin 0.2 mg / l and sucrose 20 g / l.
Sämtliche Komponenten werden in Wasser vorgelöst oder suspendie, in vorgelegtem Wasser vereinigt, auf den pH 5,5 mittels 0,1 N HCl oder 0,1 N KOH eingestellt und dann auf das gewünschte Endvolumen aufgefüllt. Das Erhaltungsmedium wird chargenweise in einem Autoklaven 25 Minuten lang bei 121"C und 1 bar Druck erwärmt und dadurch sterilisiert.All components are pre-dissolved or suspended in water combined water, adjusted to pH 5.5 using 0.1 N HCl or 0.1 N KOH and then topped up to the desired final volume. The maintenance medium will be in batches heated in an autoclave for 25 minutes at 121 "C and 1 bar pressure and thereby sterilized.
Die im Erhaltungsmedium auf einem Kreisschüttler (150 UpM und 5 cm Exzentrizität) bei 25° + 1°C, Schwachlicht von ca.The in the maintenance medium on an orbital shaker (150 rpm and 5 cm Eccentricity) at 25 ° + 1 ° C, weak light of approx.
100 Lux Fluoran und bei einer rel. Luftfeuchtigkeit von 50 * 10% in zu 40 % gefüllten Erlenmeyer-Glaskolben vermehrten Chargen der Vorkultur von Coleus blumei werden vereinigt und als Inokulum in einen mit frischem Erhaltungsmedium gefüllten Anzucht-Bioreaktor überführt. Dabei wird ein Volumenverhältnis von 30 Teilen Vorkultur mit 70 Teilen Erhaltungsmedium eingehalten. Diese erste Stufe des erfindungsgemäßen Verfahrens dient der dauerhaften Erhaltung der Zellkultur, wobei jeweils immer 30 Vol.-% in frisches Erhaltungsmedium in einem Bioreaktor überführt werden. 70 Vol.-CiÓ stehen zur überführung in Produktionsmedium zur Verfügung.100 lux fluoran and at a rel. Humidity of 50 * 10% in 40% filled Erlenmeyer glass flasks increased batches of the preculture of Coleus flowers are pooled and inoculated into one with fresh maintenance medium transferred to the filled cultivation bioreactor. A volume ratio of 30 Parts of preculture with 70 parts of maintenance medium complied with. This first stage of the The method according to the invention is used to permanently maintain the cell culture, with 30% by volume in each case transferred into fresh maintenance medium in a bioreactor will. 70 vol.CiÓ are available for transfer to the production medium.
Die Vorkultur wird im entsprechenden Animpfverhältnis in den Produktions-Bioreaktor transferiert, in dem Produktionsmedium vorgelegt ist. Es werden 30 Volumenteile Vorkultur mit 70 Volumenteilen Produktionsmedium kombiniert.The preculture is fed into the production bioreactor in the appropriate inoculation ratio transferred, is presented in the production medium. It will be 30 parts by volume Pre-culture combined with 70 parts by volume of production medium.
Das Produktionsmedium besteht aus zwei Volumenteilen wässriger Saccharoselösung (75 g/l) und einem Volumenteil verbrauchtem Alt- Erhaltungsmedium von der Vorkultur das ggfs.The production medium consists of two parts by volume of aqueous sucrose solution (75 g / l) and a volume of used old maintenance medium from the preculture the possibly.
filtriert wird, um unerwünschte Feststoffe abzutrennen.is filtered to remove unwanted solids.
Der Bioreaktor wird mit einer Temperatur von 25 + 1"C und mit einer Belüftung (Preßluft) von 0,6 vvm (Volumen Luft pro Arbeitsvolumen pro Minute) gefahren. Die Umwälzung der Zellmassen wird durch einen speziell konstruierten Wendelrührer, dessen konstruktive Gestaltung in der gleichzeitig eingereichten Anmeldung Nr. beschrieben ist, mit einer Drehzahl von 50 UpM unterstützt und gewährleistet.The bioreactor is at a temperature of 25 + 1 "C and with a Ventilation (compressed air) of 0.6 vvm (volume of air per working volume per minute). The circulation of the cell mass is carried out by a specially designed spiral stirrer, its structural design in the simultaneously filed application no. Described is supported and guaranteed with a speed of 50 rpm.
Das Maximum der Rosmarinsäurebildung liegt am 7. Tag der Kultivierung mit einer Ausbeute von 3,1 g + 5 % Rosmarinsäure pro Liter Medium entsprechend 0,4 g Rosmarinsäure pro Liter pro Tag. Bezogen auf die Trockenmasse wird eine Rosmarinsäuregehalt von 16 - 18 % erreicht. Die Schaumbildung wird mit 0,1 ml UcolubR Antischaummittel pro Liter Medium unterdrückt.The maximum formation of rosmarinic acid is on the 7th day of cultivation with a yield of 3.1 g + 5% rosmarinic acid per liter of medium, corresponding to 0.4 g rosmarinic acid per liter per day. A rosmarinic acid content is related to the dry matter achieved by 16 - 18%. Foaming is done with 0.1 ml UcolubR antifoam per liter of medium suppressed.
Zum Zeitpunkt der maximalen Ausbeute wird die Zellmasse geerntet, vom Altmedium durch Filtration separiert, der Zellkuchen bei -200C tiefgefroren und in einer Gefriertrockungsanlage lyophilisiert.At the time of maximum yield, the cell mass is harvested, separated from the old medium by filtration, the cell cake frozen at -200C and lyophilized in a freeze dryer.
Beispiel 2 Herstellung von Pflanzenzellen enthaltenden Tabletten.Example 2 Preparation of tablets containing plant cells.
200 mg getrocknete Pflanzenzellen von Coleus blumei, gemäß Beispiel 1, 25 mg Zucker und 2 mg Calciumstearat werden gut gemischt, zu Tabletten gepreßt und mit einer Schutzschicht, bestehend aus Gelatine-Zucker-Wasser im Verhältnis 24 : 105, 6 : 52, der ein Farbstoff Eisenoxyd hinzugesetzt wird, überzogen. Die Tabletten enthalten in dieser Zubereitung 30 mg Rosmari nsäure.200 mg of dried plant cells from Coleus blumei, according to the example 1.25 mg of sugar and 2 mg of calcium stearate are mixed well and compressed into tablets and with a protective layer consisting of gelatin-sugar-water in a ratio 24: 105, 6: 52, to which a dye iron oxide is added, coated. the Tablets in this preparation contain 30 mg rosemary acid.
Beispiel 3 Herstellung von Pflanzenzellen enthaltenden Kapseln.Example 3 Preparation of capsules containing plant cells.
350 mg getrocknete Pflanzenzellen von Coleus blumei gemäß Beispiel 1, 30 mg Talkum und 60 mg Aerosil 200 werden gut gemischt, granuliert und in Gelatine-Kapseln gefüllt.350 mg of dried plant cells from Coleus blumei according to the example 1.30 mg talc and 60 mg Aerosil 200 are mixed well, granulated and placed in gelatin capsules filled.
Beispiel 4 4 g Folia Melissae werden mit 0,4 g getrockneten nach Beispiel 1 hergestellten Zellen von Coleus blumei angereichert und gemischt und i bekannten Verfahren in papierene Teebeutel gefüllt zur späteren Heißwasserextraktion. bei Anwendung.Example 4 4 g of Folia Melissae are dried with 0.4 g according to the example 1 cells produced from Coleus blumei enriched and mixed and i known Process filled in paper tea bags for later hot water extraction. at Use.
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