DE2844879A1 - Verfahren zum nachweisen einer antigen/antikoerper-reaktion - Google Patents
Verfahren zum nachweisen einer antigen/antikoerper-reaktionInfo
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Description
— ~z _
Verfahren zum Nachweisen einer Antigen/Antikörper-Reaktion
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum Nachweisen einer stattgefundenen Antigen/Antikörper-Reaktion und mehr im
besonderen bezieht sich die Erfindung auf ein Verfahren zum Nachweisen solcher Reaktionen durch Peststellen von Aggregationen
proteinüberzogener Teilchen unter Verwendung einer Widerstandsimpulsmethode. Die Erfindung bezieht sich auch auf die
Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens.
Ein solches Verfahren' zum Nachweisen einer stattgefundenen Antigen/Antikörper-Reaktion,
auch Antigen/Antikörper-Assay genannt, das auf der Widerstandsimpulsmethode beruht, kann von deutlichem
klinischen Interesse sein, wegen seines Potentials, kleine Mengen eines Antigens im Serum eines Patienten nachzuweisen. Mit
dieser Widerstandsimpulsmethode kann eine Empfindlichkeit nahe der Radioimmun-Assay-Methode erreicht werden, die derzeit Standard
für die bei der klinischen Anwendung erzielbar Empfindlichkeit ist.
Bei der konventionellen Praxis des Widerstandsimpuls-Verfahrens zum Nachweisen von Antigen/Antikörper-Reaktionen werden Latexteilchen
mit Antikörper überzogen und es wird die Aggregation der Teilchen in Gegenwart von Antigen beobachtet, indem man die
Zunahme der relativen Zahl der Teilchenmultiplette zählt. Geringe Zunahmen in der relativen Zahl von Dimeren, Trimeren usw.
ergeben ein empfindliches Maß für die Antigen/Antikörper-Reaktion und die Widerstandsimpulsmethode ist in idealer Weise für
die Messung der Teilchen- und Teilchenmultiplett-Größenverteilungen geeignet. Es kann dabei eine hohe Empfindlichkeit für
geringe Mengen Antigen erreicht werden.
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Eine der Hauptbegrenzungen beim empfindlichen Nachweis geringer Antigenmengen ist die falsche Anzeige, die von Multipletts herrührt,
die vor der Zugabe des Antigens in der Teilchensuspension vorhanden sind. Diese Multiplette entstammen den zur Herstellung
der Antikörper-überzogenen Teilchen benutzten Verfahren, d. h. es treten bei der Bildung der Suspension der Antikörperüberzogenen
Teilchen Agglomerationen dieser Teilchen auf.
Es wurde festgestellt, daß mit der Widerstandsimpulsmethode des Teilchennachweises sehr genaue Teilchengrößenverteilungen festgestellt
werden können, während man Interferenzen in der Analyse durch die Messung der Multiplette in unumgesetzten Teilchen-Suspensionen
vermeidet. Um diese genauen Messungen zu machen, werden zwei Teilchensuspensionen zubereitet und die Teilchen jeder
Suspension werden mit dem gleichen Antikörper überzogen, doch weisen die einzelnen Teilchen in einer Suspension ein um einen
vorbestimmten Paktor größeres Volumen auf als die einzelnen Teilchen
in der anderen Suspension. In Abwesenheit des für den Antikörperüberzug
spezifischen Antigens enthält eine Mischung der beiden Teilchensuspensionen zwar Multiplette der einen und der
anderen Teilchenart aber keine Kombinationen der beiden verschiedenen Teilchenarten. Wenn z. B. für die beiden verschiedenen
Teilchensuspensionen ein Verhältnis der einzelnen Teilchenvolumina von von 1,5:1 benutzt wird, dann kann man in einer
Mischung solcher Suspensionen Teilchen und Teilchenmultiplette
mit Volumina von 1, 2, 3, 4 und 1,5; 3j ^j5 usw.
erwarten, wenn die Volumina in Einheiten des Volumens der kleineren
Teilchen in den Ausgangsteilchensuspensionen angegeben sind. Es wurde außerdem festgestellt, daß in Gegenwart von Antigen
ein starkes Koppeln großer mit kleinen Teilchen in der Mischung stattfindet. Dadurch kann man ein Widerstandsimpulssignal
bei einem TeilchenmultipIettvolumen von 2 1/2 erhalten,
das ohne Antigen nicht vorhanden sein würde. Die von den Teilchenmultip lettVolumina von 2 1/2 erhaltenen Widerstandsimpulssignale
sind daher ein Anzeichen für eine Antikörper/Antigen-Wechselwirkung
und diese Signale sind so frei von Hintergrund-Interferenz, als würde der Test nur mit einer einzigen Teilchengröße
und ohne anfängliche Multipletts ausgeführt werden. Die
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Erfindung macht es somit möglich, die Empfindlichkeit der Widerstandsimpulsmethode
zum Nachweisen immunologischer Reaktionen deutlich zu verbessern.
Gemäß einer bevorzugten Ausfuhrungsform der vorliegenden Erfindung
umfaßt ein Verfahren zum Nachweisen einer stattgefundenen Antigen/Antikörper-Reaktion
das Zubereiten einer ersten Suspension aus Teilchen einer ersten vorbestimmten Größe, wobei jedes dieser
Teilchen mit einer Schicht eines ersten Proteins überzogen ist, sowie das Zubereiten einer zweiten Suspension von Teilchen
einer zweiten vorbestimmten Größe, wobei jedes Teilchen dieser zweiten Suspension ebenfalls mit einer Schicht des ersten Proteins
überzogen ist. Die zweite vorbestimmte Größe ist größer als das Volumen der ersten vorbestimmten Größe und kleiner als
das doppelte Volumen der ersten vorbestimmten Größe. Die beiden Suspensionen werden zu einer Mischung kombiniert und dazu eine
Lösung gegeben, die auf die Anwesenheit eines zweiten Proteins, das spezifisch zum ersten Protein ist, untersucht werden soll.
Dann versucht man Teilchenmultipletts nachzuweisen, bei denen jedes MuItipIett durch Aggregation eines Teilchens der ersten
vorbestimmten Größe mit einem Teilchen der zweiten vorbestimmten Größe gebildet ist. Ist das erste Protein ein Antikörper, dann
ist das zweite Protein ein Antigen und umgekehrt.
Bei der Ausführung des erfindungsgemäßen Verfahrens werden zwei
getrennte Teilchen^suspensionen zubereitet, wobei die Teilchen jeder der beiden Suspensionen mit dem gleichen Antikörper überzogen
sind. Die so erhaltenen Suspensionen sind wegen des SaIz-
und Proteingehaltes elektrisch leitend. Die erste Suspension wird zubereitet durch Aufbringen eines Antikörpers auf Latexkugeln
von üblicherweise 175 Nanometern Durchmesser und Dialysieren zur Entfernung von oberflächeru-aktiven Mitteln und anderen Verunreinigungen»
Dies kann dadurch bewerkstelligt werden, daß man z. B. die Teilchen in einer Glyzerinlösung rührt, die einen Immunoglobolin-G-Antikörper
enthält. Die zweite Suspension wird zubereitet durch Aufbringen des Antikörpers auf Latexkugeln von
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geeigneterweise 200 Nanometern Durchmesser und ebenfalls Dialysieren
zur Entfernung von oberflächen-aktiven Mitteln und anderen
Verunreinigungen. Auch diese zweite Suspension kann durch
Einrühren der Teilchen in eine Lösung der gleichen Zusammensetzung wie für die erste Suspension erhalten werden. Dann werden
die beiden Suspensionen miteinander und mit einer Lösung vermischt,
die auf die Anwesenheit von Antigen untersucht werden soll und danach testet man die erhaltene leitende Mischung in
der angegebenen Weise auf die Anwesenheit von Antigen.
Die Auswahl der Latexteilchengröße ist für die richtige Durchführung
des erfindungsgemäßen Verfahrens kritisch. Ein Teilchenvolumenverhältnis
zwischen 1 und 2 : 1 und vorteilhafterweise von 1,5:1 für die beiden verschiedenen Teilchengrößen ist befriedigend,
obwohl auch andere Kombinationen von Teilchengrößen ebenso gut benutzt werden können. Ist in der zu untersuchenden
Lösung kein für den Antikörper spezifisches Antigen vorhanden, dann werden Multipletts der einen Teilchenart und Multipletts
der anderen Teilchenart gebildet, aber es treten keine Kombinationen aus den beiden verschiedenen Teilchenarten auf. Ohne das
Antigen enthält die Lösung daher nur Teilchen und Teilchenmultipletts mit individuellen Volumina von 1, 2, 3>
^ usw. sowie 1j5; 3; ^j 5; usw. Ist ein solches für den Antikörper spezifisches
Antigen dagegen in der Lösung vorhanden, dann tritt ein Koppeln großer mit kleinen Teilchen- auf. Dadurch kann ein Widerstandsiinpulssignal
bei einem Multip le tt volumen von 2,5 nachgewiesen werden, das eine Antikörper/Antigen-Wechselwirkung anzeigt.
Die Erfindung wird im folgenden unter Bezugnahme auf die Zeichnung
näher erläutert. Es zeigen:
Figur 1 ein schematisches Diagramm der Vorrichtung, die zum Nachweisen
einer Antigen/Antikörper-Reaktion mit der Widerstandsimpulsmethode benutzt wird und
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Figur 2 eine graphische Darstellung von Spannungsimpulsen, die
erzeugt werden durch den Durchgang von Teilchen verschiedener Größen und von drei Teilchenaggregationen
durch eine einzelne Pore in der in der Vorrichtung der Figur 1 benutzten Membran.
In der in Figur dargestellten Vorrichtung ist eine aus einem
harzartigen Material, wie Plexiglas, bestehende Zelle 10 in zwei Kammern unterteilt, von denen jede etwa ein Volumen von 1 cm
aufweist, wobei die Trennung in die beiden Kammern mittels einer nicht-leitenden Membran erfolgt ist, die aus einer Folie
11 gegossenen Polycarbonats besteht, die eine einzelne Pore 12 aufweist mit einem Durchmesser von einigen Zehntel um und
einer Länge von mehreren um. Die Herstellung einer Polycarbonat-Folie,
die eine solche Pore enthält, ist in dem Artikel von R.L. Fleischer et al "Novel Filter for Biological Materials" in
Science 143 249-250, (Januar, 1964) beschrieben. Die Pore hat
eine ausreichende Größe, typischerweise zwischen etwa 0,3 und 10 um Durchmesser, um einzelne Multipletts von Latexteilchen
der Lösung eindringen zu lassen. Die zu untersuchende Lösung läßt man durch Anwenden von Druck auf eine der Kammern über eines
der Füllrohre 13 oder 14 durch die Pore 12 strömen. Auf jeder Seite der Membran 11 sind in der Zelle Silber/Silberchlorid-Elektroden
15 bzw. l6 enthalten.
Von der Spannungsquelle 17, wie einer Batterie, wird eine Gleichspannung
mittels eines Spannungsteilers 19, der aus einem Rheostaten 18 und einem strombegrenzenden Widerstand 20 besteht,
der in Reihe geschaltet ist mit der Spannungsquelle, an die
Elektroden 15 und 16 gelegt. Ein Lastwiderstand 21 in Reihe mit
der Elektrode 15 wird groß genug ausgewählt (z. B. von einem bis zu mehreren Gigaohm),um die Vorrichtung zu einem System mit
einem fast konstanten Strom zu machen, wie durch ein Nanometer 22 angezeigt, daß in Reihe mit der Elektrode 16 geschaltet ist.
Es wird daher ein im wesentlichen konstanter Strom in die Lösung zwischen den Elektroden 15 und 16 geschickt, der longitudinal
durch die Pore 12 verläuft.
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Die entweder einzeln oder als Aggregate vorhandenen Teilchen werden im allgemeinen durch die kombinierten Wirkungen des angewandten
Druckes, der Elektroosmose und der Elektrophorese durch die Pore 12 getrieben. Ein Teilchen oder Multiplett 23,
das in die Pore 12 eintritt, verdangt etwas von der leitenden Flüssigkeit in der Pore. Das das Latexteilchen relativ nichtleitend
ist, erhöht sich während seines Durchganges längs durch die Pore 12 der elektrische Widerstand der Pore und somit die
Spannung über die Pore, gemessen längs der Durchgangsrichtung
durch die Pore. Der resultierende Spannungsimpuls durch die Pore wird durch die Elektrode 15 angezeigt und dann mittels eines
11 HochimpedanzVerstärkers 24 (z. B. einem mit mehr als 10 Ohm)
verstärkt, wie dem von Transidyne General Corporation vertriebenen Modell MPA-6, mit dem man auch die Zellspannung von einem
in dem Verstärkerstromkreis verbundenen Voltmeter 25 ablesen kann.
Die über der Pore erzeugten Spannungsimpulse werden auf einem
Speicherschirm-Oszilloskopen 26 überwacht, wie einem von Tektronix Incorporated, Beaverton Oregon vertriebenen Modell
5IO3/DII mit 5A2ON-und 5A15N-Verstärkern und einer 5B10-Zeitbasis.
Die beiden 12 Millivoltimpulse erscheinen, die wahrscheinlich dem Durchgang zweier Dimerer von Teilchen mit 570
Nanometern Durchmesser entsprechen (obwohl einer oder beide Impulse
möglicherweise auch dem Durchgang von Trimeren von Teilchen mit 5OO Nanometer Durchmesser entsprechen können) und es tritt
ein 8 Millivoltimpuls auf, der dem Durchgang eines Dimers von Teilchen mit einem 500 Nanometer Durchmesser entspricht. Hat
eine immunologische Reaktion stattgefunden, dann bilden Teilchen mit 500 und 570 Nanometer Durchmesser Dimere und diese zeigen
Spannungsimpulse mit einer Amplitude nahe 10 Millivolt (wie durch die punktierte Linie angedeutet) In diesem Falle wäre die
Zahl der Impulse mit einer Amplitude von nahe 10 Millivolt auf einem Impulshöhenhistogramm ein Maß für die Stärke der immunologischen
Reaktion.
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Ebenso wie Antikörper-überzogene Latexteilchen zum Nachweis von Antigenen benutzt werden können, kann man Antigen-überzogene
Latexteilchen zum Nachweisen von Antikörpern verwenden.
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Leerseite
Claims (1)
- Patent ansprücheVerfahren zum Nachweisen einer Antigen/Antikörper-Reaktion gekennzeichnet durch folgende Stufen;Zubereiten einer ersten Teilchensuspension einer ersten vorbestimmten Größe, bei der jedes Teilchen mit einer Schicht eines ersten Proteins überzogen ist, Zubereiten einer zweiten Teilchensuspension einer zweiten vorbestimmten Größe, wobei jedes Teilchen mit einer Schicht des ersten Proteins überzogen ist und die zweite vorbestimmte Größe größer ist als das Volumen der ersten vorbestimmten Größe und kleiner als das doppelte des Volumens der ersten vorbestimmten Größe,Kombinieren der ersten und zweiten Suspension zusammen mit einer auf die Anwesenheit eines zweiten Proteins, das spezifisch für das erste Protein ist; zu testenden Lösung undNachweisen von Teilchenmultipletten, um die durch Aggregation eines Teilchens der ersten vorbestimmten Größe mit einem Teilchen der zweiten vorbestimmten Größe gebildeten Multiplette zu identifizieren.90981 6/10062. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das erste Protein ein Antikörper und das zweite Protein ein Antigen ist, das spezifisch ist für den Antikörper.3· Verfahren nach Anspruch 1 .oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Stufe des Machweisens der Teilchenmultiplette die folgenden Schritte umfaßt:Einführen eines im wesentlichen konstanten Stromflusses längs durch einen,einen kleinen Teil der genannten Mischung enthaltenden Bereich,die Mischung längs durch den genannten Bereich fließen lassen undÜberwachen der Spannung längs über den genannten Bereich, während die Mischung hindurchströmt, um Spannungsimpulse ■ vorbestimmter Amplitude als Anzeichen der Anwesenheit von Multipletts nachzuweisen, die durch Aggregation eines Teilchens der ersten vorbestimmten Größe mit einem Teilchen der zweiten vorbestimmten Größe gebildet sind.Ί. Verfahren nach den Ansprüchen 1 - J>, dadurch gekennzeichnet , daß die Teilchen der zweiten-vorbestimmten Größe je im wesentlichen das 1 1/2-faehe Volumen der Teilchen der ersten vorbestimmten Größe haben.b. Verfahren nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet , daß der genannte Bereich in zwei Teile unterteilt wird, die durch einen Durchgang miteinander verbunden sind, der einen Durchmesser im Bereich von 0,3 ~ 10 um aufweist.6. Verfahren nach den Ansprüchen 1 - 5 , dadurch ge kennzeichnet, daß das erste Protein ein Antigen und das zweite Protein ein Antikörper spezifisch zu dem Antigen ist.909816/1006
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Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2918342A1 (de) * | 1979-05-07 | 1980-11-20 | Behringwerke Ag | Latex-reagenz |
NL185309C (nl) * | 1980-07-28 | 1990-03-01 | Akzo Nv | Methode voor het bepalen van antigenen met behulp van twee of meer monoklonale antilichamen alsmede immuunreagens. |
US4459361A (en) * | 1982-06-04 | 1984-07-10 | Angenics, Inc. | Ligand assay with one or two particulate reagents and filter |
US4521521A (en) * | 1983-03-11 | 1985-06-04 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Particle reagent size distribution measurements for immunoassay |
WO1985004426A1 (en) * | 1984-03-26 | 1985-10-10 | International Health Services | A method of determining the clotting time of blood and particulate reagents therefor |
US4713347A (en) * | 1985-01-14 | 1987-12-15 | Sensor Diagnostics, Inc. | Measurement of ligand/anti-ligand interactions using bulk conductance |
US6060237A (en) | 1985-02-26 | 2000-05-09 | Biostar, Inc. | Devices and methods for optical detection of nucleic acid hybridization |
JPS61225656A (ja) * | 1985-03-29 | 1986-10-07 | Toshiba Corp | 検体検査装置 |
US4721681A (en) * | 1985-05-14 | 1988-01-26 | Fisher Scientific Company | Immunoassay in centrifugal field with complementary particles of differing specific gravities |
US5501949A (en) * | 1985-12-10 | 1996-03-26 | Murex Diagnostics Corporation | Particle bound binding component immunoassay |
US5236826A (en) * | 1985-12-10 | 1993-08-17 | Murex Corporation | Immunoassay for the detection or quantitation of an analyte |
US4794089A (en) * | 1986-03-25 | 1988-12-27 | Midwest Research Microscopy, Inc. | Method for electronic detection of a binding reaction |
JPH06265551A (ja) * | 1993-03-11 | 1994-09-22 | Hoechst Japan Ltd | ゼータ電位を用いた免疫学的測定方法及び免疫学的測定用キット |
US5858648A (en) * | 1996-11-04 | 1999-01-12 | Sienna Biotech, Inc. | Assays using reference microparticles |
JPWO2002079782A1 (ja) * | 2001-03-30 | 2004-07-22 | 株式会社三菱化学ヤトロン | エラスターゼ1の免疫分析用試薬及び免疫分析方法並びに膵疾患の検出方法 |
JP4331073B2 (ja) * | 2004-08-31 | 2009-09-16 | デンカ生研株式会社 | 抗原の測定方法及びそのための試薬 |
US20070202495A1 (en) * | 2006-02-06 | 2007-08-30 | Michael Mayer | Use of resistive-pulse sensing with submicrometer pores or nanopores for the detection of the assembly of submicrometer or nanometer sized objects |
GB2477287B (en) * | 2010-01-27 | 2012-02-15 | Izon Science Ltd | Control of particle flow in an aperture |
JP5944118B2 (ja) * | 2011-07-06 | 2016-07-05 | シャープ株式会社 | 粒子測定装置 |
US9804116B2 (en) | 2014-12-26 | 2017-10-31 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Method and device for detecting sample |
WO2017033296A1 (ja) * | 2015-08-26 | 2017-03-02 | 株式会社日立製作所 | 免疫学的測定装置及び免疫学的測定方法 |
JP6795245B1 (ja) * | 2019-03-12 | 2020-12-02 | 国立大学法人東北大学 | エンドトキシン検出装置、及びエンドトキシンの検出方法 |
CN111239404B (zh) * | 2019-03-31 | 2020-11-27 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种可以同时检测尿样本和血清样本中的视黄醇结合蛋白的检测试剂盒 |
CN111398137B (zh) * | 2020-04-02 | 2022-07-05 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种基于电阻微米孔颗粒计数器的检测方法及其应用 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1179435A (en) * | 1966-06-17 | 1970-01-28 | Ortho Pharma Corp | Stable Reagent for the Detection of Rheumatoid Arthritis |
US3815024A (en) * | 1970-02-20 | 1974-06-04 | Gen Electric | Particle analyzer |
BE793185A (fr) * | 1971-12-23 | 1973-04-16 | Atomic Energy Commission | Appareil pour analyser et trier rapidement des particules telles que des cellules biologiques |
US3925018A (en) * | 1973-06-08 | 1975-12-09 | Technicon Instr | Method and apparatus for quantitative analysis utilizing particulate reagent material |
US3984533A (en) * | 1975-11-13 | 1976-10-05 | General Electric Company | Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction |
IT1087285B (it) * | 1976-11-10 | 1985-06-04 | Hoffmann La Roche | Procedimento di determinazione immunologico |
GB1590525A (en) * | 1976-12-10 | 1981-06-03 | Technicon Instr | Biological analysis |
-
1977
- 1977-10-17 US US05/842,952 patent/US4191739A/en not_active Expired - Lifetime
-
1978
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