DE2712072A1 - Pseudomonas aeruginosa-naehrbruehe - Google Patents
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Description
M 3794
McDonnell Douglas Corporation, Long Beach, California, V.St.A.
Pseudomonas aeruginosa-Nährbrühe
709845/0700
Die Erfindung bezieht sich auf ein I>ßhrbrühen-Kulturmediuni zur Ermittlung
von Pseudcmonas aeruginosa im Urin. Das Kulturmedium enthält Cetyltrimethylammoniumbromid,
um das Wachstum von unerwünschten Organismen zu hemmen, die normalerweise positive Ergebnisse bei Tests auf P.aeruginosa ergeben.
Pseudomonas aeruginosa (P.aeruginosa) ist ein Mikroorganismus, der im Urin,:
in Wunden, Geschwüren usw. vorkommt. Das Vorhandensein dieses Organismus ;
im Urin ist ein zuverlässiges Zeichen für eine Infektion der Harnwege. ;
j Pseudomonas ist ein gramnegatives Bakterium und ist im allgemeinen ein Sa- '
prophyt, vermag aber auch gelegentlich pathogen zu sein und Infektionen
hervorzurufen und sich auszubreiten, wenn die natürliche Widerstandsfähigkeit eines Individuums stark verringert ist. Der Organismus hat einen höheren
Wachstums-Temperaturbereich (41 bis 42 ) als saprophytisches Pseudomonas (20 bis 3O°C) und führt häufig zu Infektionen bei Krankenhauspatienten,
und zwar in Verbindung mit Mittelohrinfektionen oder Infektionen der Hanwege sowie mit Wunden und Geschwüren, die nicht sofort heilen. Der
Organismus wird häufig bei Patienten mit schwereren Brandwunden angetroffen. Der Organismus ist von Natur aus gegenüber verschiedenen Antibiotika '
resistent, und daher ist die Chemotherapie sehr schwierig. j
Gewisse Ausbrüche von Diarrhöe bei Erwachsenen und insbesondere bei neu- j
geborenen Kindern werden auf diesen Organismus zurückgeführt. \
709845/0700
Das Kulturmedium der Erfindung ist ein verbessertes Kulturmedium, das zur
Verwendung bei einem Mechanismus unter Benutzung eines optischen Bestimmungssystems
und einer Vorrichtung vorgesehen ist, der bzw. die zur Analysienmg
von Proben auf spezielle Mikroorganismen hin unter Verwendung einer Kunststoffschale oder -karte geeignet ist, welche eine Reihe von
trocknen Kulturmedien enthält, die sich in gesonderten, aber in Verbindung bringbarer Zellen befinden, wobei jedes Kulturmedium für einen einzelnen
Mikroorganismus spezifisch ist. Wenn die Probe in die Karte eingeführt, mit den Kulturmedien in den Zellen vermischt ivl in der Vorrichtung bebrütet
wird, wirkt der in der Probe vorhandene Organismus (oder wirken die vorhandenen Organismen) auf das gegenüber dem betreffenden Organismus spezifische
Kulturmedium ein und führt zu einer Änderung in dem Kulturmedium, welche von der Vorrichtung angezeigt wird und das Vorhandensein des betreffenden
Organismus nachweist. Die Änderung in dem Kulturmedium ist mit einer Änderung der Lichtdurchlässigkeit des Kulturmediums, d.h., einer Farbänderung
oder einer Änderung der Trübung, verbunden. Die Änderung kann durch metabolische Aktivität des Organismus hervorgerufen werden, welche
z.B. die Bildung von Säure und eine Änderung des pH-Werts bewirken kann, was zu einer Farbänderung bei einem pH-empfindlichen Indikator in dem Kulturmedium
führt. Die Änderung der Lichtdurchlässigkeit des Kulturmediums kann auch durch ein Präzipitat verursacht werden, das sich in dem Kulturmedium
aufgrund der metabolischen Aktivität des Organismus bildet, oder kann durch Wachstum des Organismus bedingt werden.
Die für die Verwendung in den oben erwähnten Karten vorgesehen'spezifischen
709845/0700
Kulturmedien sind alle zur Förderung des Wachstums von einem Mikroorganismus und zur Hemming des Wachstums von anderen Mikroorganismen geeignet,
können gefriergetrocknet werden und unter den Bedingungen einer niedrigen CL-Könzentration in den Behältern der Karte funktionsgemäß wirken.
Es ist nun ein Kulturmedium gefunden worden, das den Organismus Pseudomonas aeruginosa im Urin selektiv nachweisen kann. Das Kulturmediue der Erfindung kann in dem oben erwähnten System verwendet werden.
Das Kulturmedium wird in einem Behälter in einer Kulturmedienkarte gefriergetrocknet, und beim Vermischen einer Probe mit dem Kulturaediue in dem
Behälter werden positive Ergebnisse durch eine Änderung der Trübung und
der Farbe des Kulturmediums angezeigt. Der vollständige Test kann in 12 bis 18 Stunden vollendet werden, während derzeitige BestUBungsaetnoden
36 bis 48 Stunden erfordern.
Die Erfindung schlägt ein Nährbrühe-Kulturmedium zur Ermittlung von Pseudomonas aeruginosa vor, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es enthält
(a) ein Nährsubstrat, (b) einen Zusatz zur Unterstützung des HachstuK von
Pseudomonas und der Pigmentbildung unter den Bedingungen von eingeschränkter (^-Konzentration und (c) einen Inhibitor zur Hemmung graanegativer Organismen.
Die Erfindung ist zur Ermittlung von Pseudomonas aeruginosa im Urin geeignet, und das Mittel der Erfindung enthält vorzugsweise Trypticase-Soja-
-Nährbruhe, Natriumnitrat und Cetyltrimethylamnoniumbromid. Cetyltrünethl-
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ammoniumbromid wirkt derart, daß es das Wachstum von anderen grampositiven
und von gramnegativen Mikroorganismen hemmt, die normalerweise positive Ergebnisse bei Tests auf Pseudomonas aeruginosa ergeben. Natriumnitrat
kann zugegeben werden, so daß das Kulturmedium in einer Ungebung mit niedriger
(^-Konzentration geeignet ist. Es ist außerdem von Bedeutung, daß das Kulturmedium bei etwa 70 C formuliert wird.
Die Bestinmungsnährbrühe enthält vorzugsweise 2,7 bis 3,3 Gew.-$ Nährsubstrate,
die aus Trypticase-Soja-Nährbrühe von der FinraBBL bestehen,
etwa 0,029 bis etwa 0,031 % Cetyltrimethy 1 ammoniumbromid, das als biologischer
Inhibitor unter Hemmung des Wachstums von gramnegativen Organismen wirkt, und etwa 0,45 bis etwa 0,55 Gew.-$ Natriumnitrat, das das
Wachstum des Organismus P.aeruginosa in einer Ungebung mit verringertem
Sauerstoffgehalt stimuliert.
Der Nährsubstratteil des Kulturmediums enthält etwa 27 bis etwa 33 g
Trypticase-Soja-Nährbrühe je Liter Nährbrühöi^Kulturmedium. Trypticase-Soja-Nährbrühe
ist ein Gemisch von Peptonen und enthält je Liter destilliertes Wasser 17 g Pepton, das durch pankreatische Verdauung von Kasein erhalten
wird, 3 g eines mittels Papain erhaltenen Sojamehlverdauungsprodukts mit einem hohen Vitamingehalt, insbesondere an Thiamin, 5 g NaCl, 2,5 g
Dikaliumphosphat und 2,5 g Dextrose. Diese Nährbrühe hat einen pH-Wert von etwa 7,3. Geeignete Ersatzmaterialien für Trypticase-SojifJährbrühe
sind Proteus-Pepton Nr. 3 (von DIFCO) und Thioton (von BBL). (Irgendein Pepton, das genügend Vitamine enthält, ist bei der Erfindung geeignet.)
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Zweck der Soja-Nährbrühe ist die Förderung des Wachstums von dem Organismus
P.aeruginosa.
Eine geeignete Base oder Säure wird zur Einstellung des pH-Wertes von dem
Kulturmedium auf 6,7 bis 6,9 benutzt.
Der chemische Inhibitor, Cetyltrimethylammoniumbromid, hat die Aufgabe, das
Wachstum von grannegativen Organismen zu hemmen.
Die Konzentration von Cetyltrimethylamnoniumbromid kann etwa 0,29 bis etwa
0,31 g/l betragen, und die wirksamste Konzentration davon beträgt 0,3 g/l.
Wenn die Konzentration zu hoch ist, wird eine niedrigere Ausbeute von grampositiven Organismen erhalten.
Etwa 4,75 bis etwa 5,25 g/l von einem Bestandteil, der das Wachstum von ;
Pseudomonas und die Pigmentbildung unterstützt, werden in das Kulturmedium ■
eingearbeitet, um den O9-Mangel in den Behältern der Kunststoffkarte zu !
kompensieren, die für eine automatische mikrobiologische Analysiervorrich- I
tung benutzt wird. Der bevorzugte Zusatz ist Natriumnitrat.
Weil die Ungebung eine geringe 0~-Konzentration hat, wird durch Zugabe von ι
NaNO- ein Elektronenakzeptor zur Verfügung gestellt, so daß der stark aerobe;
Organismus Pseudomonas wachsen und Pigment bilden kann. Die Bildung von Pigment von Pseudomonas aeruginosa und die Bildung von sichtbarer Biomasse
stellen den gemeinsamen Indikator dar.
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Das Pigment von Pseudomonas aeruginosa ist ein blau-grünes Pigment, das
rotes Licht absorbiert und zusammen mit Zunahme der Biomasse durch den beschriebenen
Mechanismus in einem automatischen mikrobiologischen Analysator ("Automated Microbial Analyzer") ermittelt wird.
Die Lichtdurchlässigkeit des Kulturmediums wird durch die Farbänderung und
die Bildung der Biomasse verändert.
Herstellung von Nährbrühe (unter 2X-Verdünnung) zur Verwendung in Kartenbehältern
eines Systems von einem automatischen mikrobiologischen Analysator
Die Nährbrühe zur Bestimmung von Pseudomonas aeruginosa wird nach dem folgenden
Verfahren hergestellt:
6 g Trypticase-Soja-Nährbrühe, 1 g Natriumnitrat und 0,06 g Cetyltrimethylamnoniumbromid
werden mit 100 ml destilliertem Wasser vermischt. Dieses Gemisch wird für etwa 5 Minuten gerührt und zum Sieden gebracht um sicherzustellen,
daß alle Bestandteile in Lösung sind. Der pH-Wert der Lösung wird dann auf 6,8 bei 70 C eingestellt, was ein sehr bedeutender Verfahrensschritt ist, um eine Stabilität der Lösung zu erhalten. Die Lösung wird
dann in 100 ml eingetragen und filtersterilisiert. Sie wird in einen Behälter der in einem automatischen mikrobiologischen Analysator verwendeten
Karte gebracht und vor der Verwendung gefriergetrocknet.
Das Vorhandensein von Pseudomonas aeruginosa in dem Behälter wird durch
die Bildung eines blau-grünen Pigments in dem Behälter, das durch die Wir-
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kung des Organismus auf das Kulturmedium gebildet wird, und durch die Zu-
nahre der Momasse in dem Kulturmedium aufgrund des Wachstums von P.aeruginosa nachgewiesen.
M 3794/Dr.Vel.-ro
7098A5/0700
Claims (13)
- PatentansprücheNährbrühen-Kulturmedium zur Ermittlung von Pseudomonas aeruginosa, dadurch gekennzeichnet, daß es enthält(a) ein Nährsubstrat,(b) einen Zusatz zur Unterstützung des Wachstums von Pseudomonas und einer Pigmentbildung unter der Bedingung eingeschränkter CL-Konzentration und(c) einen Inhibitor zur Hemmung gramnegativer Organismen.
- 2. Kulturmedium nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Vorhandensein von Pseudomonas aeruginosa durch metabolische Bildung eines feststellbaren Pigments angezeigt wird.
- 3. Kulturmedium nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Vorhandensein von Pseudomonas aeruginosa, gegebenenfalls außerdem, durch Bildung einer sichbaren Biomasse angezeigt wird.
- 4. Kulturmedium nach Anspruch 1, 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß der709845/0700ORIGINAL INSPECTEDbesagte Zusatz zur Unterstützung des Wachstums unter der Bedingung eingeschränkter O--Konzentration ein Nitratsalz enthält.
- 5. Kulturmedium nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Nitratsalz Natriumnitrat ist.
- 6. Kulturaiedium nach Anspruch 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß in einer IX-Verdünnung etwa 4,75 bis etwa 5,25 g/l Natriumnitrat verwendet werden.
- 7. Kulturmedium nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Inhibitor Cetyltrimethylammoniumbromid ist.
- 8. Kulturmedium nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß in einerIX-Verdünnung etwa 0,29 bis etwa 0,31 g/l Cetyltrimethylammoniumbromid verwendet werden.
- 9. Kulturmedium nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß in einer lX-Verdünnung etwa 27 bis etwa 33 g/l Nährsubstrat verwendet werden.
- 10. Kulturmedium nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Nährsubstrat Trypticase-Soja-Nährbrühe ist.
- 11. Kulturmedium nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß bei einerIX-Verdünnung der 0--Mangel durch Zugabe von Natriumnitrat kompensiert wird,7098A5/0700der Inhibitor für gramnegative Organismen Cetyltrimethylanmoniumbramid ist und das Nährsubstrat Trypticase-Soja-Nährbrühe ist.
- 12. Kulturmedium nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß etwa 4,75 bis etwa 5,25 g/l Natriumnitrat, etwa 0,29 bis etwa 0,31 g/l Cetyltrimethylammoniumbromid und etwa 27 bis etwa 33 g/l Nährsubstrat verwendet werden.
- 13. Kulturmedium nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der pH-Wert desselben etwa 6,8 beträgt.709845/0700ORIQtNAt-INSPECTED
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