DE2432518A1 - Arzneimittel und verfahren zu seiner herstellung - Google Patents
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Description
Brentford, Middlesex, England
"Arzneimittel und Verfahren zu seiner Herstellung^
Priorität: 5„ «Juli 197J - Großbritannien - Hummer 32 071/73'
Die Erfindung; bezieht sich auf bestimmte Arzneimittel, insbesondere
auf fibrinlosende Arzneimittel,
Im Blut liegt eine als Fibrinogen bekannte proteinhaltige Verbindung
vor. Unter der Einwirkung eines oder mehrerer Enzyme wird
Fibrinogen in Fibrin überführt, die die Grundsubstanz der Blutgerinsel
bildet,; wenn nicht diese Gerinsel durch die Einwirkung, von
fibrinlösenden; Enzymen rasch zerteilt oder aufgelost werden,. Man. ·
nimmt· an, daß dieses Auflösen des Fibrins durch das· Enzym Plasmin
(- Fibrinolysin) erfalgen kann,, das selbst durch, eine bestimmte
enzyrna tische Einwirkung: auf eine prOteinhaltlge Verbindung, nämlich
Plasminogen,, das: selbst Im Blut vorliegt, freigesetzt wird« Daher enthält Blut normalerweise sowohl Fibrinogen als auch Pias-,
mlnogen,, welchietzi;ez-_,3 durch die Wirkung eines Äktivators zur
Piasminerzeugung abgebaut wird. Das· derart freigesetzte Plasmin
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kann dann das Auflosen des Gerinsel bildenden Fibrins bewirken,
das aufgrund des Abbaus des Fibrinogen^ entstanden ist. Die Abbauprodukte
des Fibrins sind im Blut lösliche Peptide und vermögen
daher Blutgerinsel zu zerteilen.,
Bei Thrombose oder ähnlichen Erkrankungen sind eine oder mehrere dieser Stufen, unwirksam gemacht worden, und es sind zahlreiche
Anstrengungen unternommen worden, die Ursache dieser Erkrankungen
aufzuklären, ein Zerteilen der Fibrinblutgerinsel zu beschleunigen,
die sich gebildet haben können, und fibrinlosende Arzneimittel
zu. erzeugen.:
Plasmin Ist ein proteolytlsches Enzym, dessen spezifische Eigenschaft
nicht ohne Beziehung zu bestimmten anderen proteolytischen
Enzymen ist« Ein derartiges proteolytischest Enzym könnte das
fibrinlösende System an drei Stellen beeinflussen:;
(a) Es könnte Fibrinogen zu Fibrin abbauen und dadurch die Bildung
_von Blutgerinseln verursachen;
(b) es könnte Fibrin In lösliche Peptidprodufcte auf losen, und
(c) es konnte Plasminogen, zur Bildung: von Plasmin aktivieren,,
das die gewünschte Auflösung bewirkt.
Die zuletzt genannte Reaktion durfte die Spaltung; einer einzelnen
Arginyl-Valyl-Blndung zur Folge haben. Die aufspaltende Wirkung
eines solchen Enzyms wird hier als peptidspaltende AlEtIvItEt
bezeichnet.: Eine derartige Aktivität kann in Form einer esterspaltenden
Aktivität des Enzyms bei Verbindungen mife niederen Molekulargewichten
bestirnt ■ werden und wird üblicherweise spektrophotoraetrisch
unter verwendung: synthetischer verbindungen^ wie
des Benzoyl-Arglnln-Äthylesters oder des Tosyl-Arglnln-Methy!esters,
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gemessen werden. Eine derartige peptidspaltende Wirkung, die zur Förderung der gewünschten Freisetzung von Plasmin erwünscht ist,
ist grundsätzlich von der allgemeinen proteolytischen Aktivität zu trennen, die unerwünscht ist, da sie zu einem unkontrolliertem
proteolytischen Abbau in vivo führt. Eine solche allgemeine proteolytische Aktivität kann an der Hydrolyse von reinen Proteinen,
wie c.asein, gezeigt werden. Eine derartige Aktivität wird hier
als caseinspaltende Aktivität bezeichnet.
Zwei Proteine, die angeblich eine fibrinlösende Aktivität besitzen
sollen, sind allgemein erhältlich. Jedoch besitzen sie Nachteile. So wirkt Streptokinase als Antigen, und sogar das gereinigte
Enzym greift die Antikörper an, die sich bei Patienten gegen Streptokokkeninfektionen gebildet haben. Bevor daher eine wirksa-
me Therapie begonnen werden kann, muß der Antikörper-Titer neutralisiert
werden. Obwohl Streptokinase als Plasminogen-Aktivator wirken dürfte, besitzt sie selbst keinerlei peptide- oder
esterspaltende Wirkung. Diese Aktivität kann infolge Bildung eines Komplexes zwischen der Streptokinase und dem Plasminogen
und/oder Plasmin vorliegen, wobei die Komplexe als unmittelbare Aktivatoren für weitere Mengen Plasminogen angesehen werden können.
Das zweite verfügbare fibrinlösende Enzym ist Urokinase. Obwohl sie nicht als Antigen wirkt, ist sie doch sehr teuer und
im allgemeinen nur in kleinen Mengen durch Isolieren aus menschlichem
Harn erhältlich. Angeblich soll sie als Plasminogen-Aktivator
wirken.
Aufgabe bei vorliegender Erfindung war es daher, ein Enzymsystem ausfindig zu machen, das eine fibrinlösende und/oder plasminogen-
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eine geringe caseinspaltende Wirkung besitzt. Es vmrde nun gefunden,
daß die Bildung von wasserlöslichen Komplexen proteolytischer
Enzyme, die an polymere Verbindungen gebunden sind, zu den
gewünschten Eigenschaften führen kann.
Wasserlösliche Enzymkomplexe sind bereits früher in der Literatur beschrieben worden, doch scheint ihre Verwendung für ; medizinische
Behandlungszwecke bisher noch nicht in Betracht gezogen worden zu sein, insbesondere nicht für solche Zwecke, wo der
Komplex in die Bl,utbahn injiziert wird, wie es für eine rasche in vivo-Verteilung von"Blutgerinseln erforderlich ist.
Gegenstand der Erfindung sind.dementsprechend Arzneimittel, die
durch einen Gehalt an einem wasserlöslichen Komplex eines kovalent
an ein Polymeres gebundenes proteolytisches Enzym gekennzeichnet sind.
Für eine plasminogenaktivierende Wirkung ist das angewendete proteolytische Enzym infolge seiner eindeutigen spezifischen
Peptidaseeigenschaft vorzugsweise Trypsin, doch ist die Verwendung ähnlicher Enzyme, wie Chymotrypsin, Bromelain und Papain,
vom Standpunkt einer direkten fibrinlösenden Aktivität ebenfalls möglich. Es können auch Komplexe verwendet werden, die aus im
Handel erhältlichen proteolytischen Enzymen hergestellt worden sind,. z.B. Pronasej einem proteolytischen Enzym mit breitem Wirkungsspektrum,
das aus Streptomyces griseus isoliert worden ist,
und Brinase, die aus Aspergillus oryzae isoliert worden ist. Beide
Enzyme besitzen fibrinlösende und plasminogenaktivierende Wir-
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ORlGiHALINSPECTED
kungen.
Das Polymere ist vorzugsweise wasserlöslich und mittels in vivo-Vorgängen
verdaubar. Deshalb verwendet man vorzugsweise Polysaccharide, wie Dextran, Dextrine, Cellulose oder Stärke. Dextrane sind
bevorzugt, insbesondere mit einem Molekulargewicht im Bereich von 10 000 bis 500 000, z.B. solche Dextrane, die als "Τ4θ" und "ΐγο"
bezeichnet werden.
Gegebenenfalls können die Polysaccharide durch eine Umsetzung mit einem Modifizierungsmittel, z..B. Epichlorhydrin, modifiziert werden.
Es können auch carboxymethyl-, hydroxyäthyl- oder aminoäthylmodifizierte
Cellulose oder eine teilweise abgebaute Stärke als Polysaccharide verwendet werden. Es ist auch möglich, das Enzym
an ein wasserunlösliches Polymer, wie vernetztes Dextran, zu binden
und dann den erhaltenen Komplex mittels geeigneter Abbauverfahren wasserlöslich zu machen, z.B. durch eine partielle Hydrolyse
oder durch Umsetzen eines vernetzten Dextrans mit Dextranase.
Es ist weiterhin gefunden worden, daß es erfindungsgemäß besonders
zweckmäßig ist, als Polymere modifizierte Saccharide oder Oligosaccharide, wie Sucrose, Dextrose oder Lactose, zu verwenden.
Ein besonders vorteilhaftes Polymeres ist ein im Handel erhältliches
Sucrose-Epichlorhydrin-Mischpolymerisat (FICOLL), insbesondere niif-öinem Molekulargewicht von etwa "400 000·.
Es ist auch möglich, synthetische wasserlösliche Polymere, wie Polymere von Polyvinylalkohol und Mischpolymere von Acrylsäure
oder Maleinsäureanhydrid mit Äthylen, Styrol, Methylvinylather,
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Diylnyläther oder Vinylacetat, einzusetzen. Derartige Polymere
sind z.B. in der DT-OS 1 9^8 177 und DT-OS 1 9^8 298 und in den
OB-PS 1 290 701 und 1 223 28I beschrieben.
Eine zweckmäßige Gruppe von wasserlöslichen Mischpolymerisaten sind die Methylvinyläther-Maleinsäureanhydrid-Mischpolymerisate,
insbesondere mit einem Molekulargewicht von etwa 250 000 ("GAN-TREZ AN", insbesondere "GANTREZ AN 119")- Die Maleinsäureanhydrid-Mischpolymerisate
können mit dem proteolytischen Enzym entsprechend den allgemeinen Verfahren umgesetzt werden, wie sie in der
GB-PS 1 290 701 beschrieben sind. Zum Beispiel kann ein solches
Polymerisat in Gegenwart einer starken Pufferlösung oder anderer Mittel, um einen neutralen pH-Wert aufrecht zu erhalten, umgesetzt
werden.
Die wasserlöslichen Enzymkomplexe für den erfindungsgemäßen Anwendungsbereich
können nach beliebigen bekannten Verfahren zum Anlagern
von Enzymen an Polymere hergestellt werden, vorausgesetzt,
daß der erhaltene Komplex als wasserlöslich angesehen werden kann.
Unter dem Ausdruck "wasserlöslich" wird erfindungsgemäße auch ein
solcher Komplex verstanden, der in Wasser dispergierbar ist, um kolloidale Lösungen zu liefern. In solchen Fällen müssen die Teilchen
einen Durchmesser unter 2 μ haben. Derartige Umsetzungsverfahren
sind z.B. in der GB-PS 1.325 912 beschrieben, einschließlich
der Kupplung des proteolytisehen Enzyms an das Polymere unter Verwendung
von Reaktionsmitteln, wie Halogencyan, insbesondere Bromcyan, s-Triazonen/ ir.5besondere 2-Amino-4,6-dichlor-s-triazin,
Acyl-aziden, Diazoniumverbindungen, z.B. 2-Hydroxy~j5-(p-diazophenyl)-propyläther,
organische Cyanate, wie Phenyleyanat, und
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Diorganocarbodiimide. IIü.u_'ig werden derartig- j.„.l.:..u:..:; -:.:.'.:. :■! :.,„.--erst
mit dem Polymeren umgesetzt, um bei diesem reaktionsfähige
Gruppen zu schaffen, die dann mit dem Enzym reagieren können. In einigen Fällen können die Enzyme zuerst mit dem Polymer umgesetzt
werden, z.B. wenn es bestimmte aktive Gruppen, wie Anhydridbindungen, Aminoäthyl-, Hydroxyäthyl- oder Carboxymethyl-Substituenten
enthält, oder derart modifiziert worden ist, daß es diese Gruppen aufweist. Dialdehyde, wie Glutaraldehyd und Glyoxal können
ebenfalls zur Bildung von Brückgliedern zwischen dem Enzym und dem Polymer eingesetzt werden, vorausgesetzt, daß das Polymere
freie Aminogruppen enthält. Um diese Brückenglieder zu verlängern,
können aliphatische Diamine zusätzlich zum Dialdehyd mitverwendet werden.
Das Enzym ist an das Polymere in einer solchen Menge gebunden, daß das Gewichtsverhältnis von Polymer zu Enzym innerhalb des
Bereiches von 0,1 : 1 bis 100 : 1, vorzugsweise von 2 : 1 bis
50 : 1, liegt.
Es ist, in hohem Maße wünschenswert, daß der wasserlösliche Enzymkomplex, der nach einem der vorbeschriebenen Verfahren hergestellt
worden ist, dann gereinigt wird, so daß er im wesentlichen frei von nicht umgesetztem Enzym ist. Dies ist deshalb erforderlich,
weil - wie bereits beschrieben - das freie proteolytische Enzym häufig in vivo unerwünschte Reaktionen zeigt. Zum Beispiel kann
es allergische Reaktionen durch eine Umsetzung mit im Blut des Patienten vorhander "ntikörpern hervorrufen. Eine solche Reinigung
wird vorzugsweise unter Anwendung physikalischer Trennmethoden durchgeführt, die chemische Stoffe aufgrund unterschiedli-
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eher Molekülgröße trennen, denn der Enzymkomplex hat ein viel
höheres Molekulargewicht als das freie Enzym. Tatsächlich weist das mit dem Polymerkomplex gebundene Enzym ein Molekulargewicht
vorzugsweise von 10 000 bis 500 000 auf. Deshalb werden die für den angegebenen Zweck einzusetzenden Enzymkomplexe vorzugsweise
einer Ultrafiltration oder Gelfiltration unterworfen, wodurch die freien Enzyme entfernt werden, die ein bedeutend niedrigeres Molekulargewicht
als die entsprechenden Komplexe haben. Ein weiteres Reinigungsverfahren besteht in der Anwendung einer Dialyse.
Wenn das freie Enzym möglicherweise schädliche Antikörper bildet,
kann der rohe Enzymkomplex darüber hinaus durch eine Säule geschickt werden, die die gegen das freie Enzym reaktionsfähigen
spezifischen Antikörper enthalten und in der solche Antikörper
vorher an einem Träger, wie Agarose oder einem vernetzten Dextran, fixiert sind. Das freie Enzym, jedoch nicht der Enzymkomplex,
reagiert mit dem fixierten Antikörper, worauf der Enzymkomplex durch die Säule läuft und deshalb wie gewünscht gereinigt wird.
Die Enzymkomplexe werden vorzugsweise sterilisiert, indem sie ein Seitz-Filter passieren, und werden dann in gewünschter Weise in
einem gefriergetrockneten, d.h. lyophilisierten Zustand erhalten.
Die Komplexe nach vorliegender Erfindung haben die nachstehenden Vorteile gegenüber den entsprechenden nicht komplexgebundenen
Enzymen:
(a) Eine erhöhte biologische Halbwertszeit und/oder
(b) einen niedrigeren Grad einer Plasmahemmung und/oder
(c) eine geringere Fähigkeit, Antikörper zu bilden.
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Die erfindungsgemäßen Arzneimittel liet-^n in 17VTIr. von Eir.j;el-' sierungen
vor, d.h., daß sie eine vorbestimmte Menge des Enzymkomplexes enthalten. Vorzugsweise wird diese Menge in Aktivitätseinheiten angegeben, so daß der Arzt die geeignete Dosis in Abhängigkeit
vom Grad der Fibrinolyse verschreiben kann, die er bei dem Patienten zu erreichen wünscht. Dies hängt teilweise von dem
Ausmaß seiner Beurteilung ab, ob sich in übermäßiger Menge Fibringerinsel
im Blut des Patienten gebildet haben. Deshalb liegen die erfindungsgemäßen Arzneimittel vorzugsweise in verschlossenen
Ampullen vor, die eine vorbestimmte Menge des sterilen, gefriergetrockneten Enzymkomplexes enthalten.
Ampullen vor, die eine vorbestimmte Menge des sterilen, gefriergetrockneten Enzymkomplexes enthalten.
Zum Gebrauch müssen die erfindungsgemäßen fibrinlösenden Arzneimittel
in eine für Injektionszwecke geeignete Form überführt
werden, entweder in der Form, wie sie verkauft werden, oder
noch allgemeiner nach Auflösen in einem geeigneten Lösungsmitteil Vorzugsweise werden daher die vorgenannten verschlossenen
Ampullen hergenommen und auf gebrochen, und dann wird deren - Inhalt in sterilem oder pyrrogenfreiem Wasser oder in isotonischer Kochsalzlösung zur Verabreichung durch Injektion in den Blutkreislauf des zu behandelnden Patienten gelöst oder suspendiert. Gegebenenfalls können die Einzelsdosierungen nach ider Erfindung aus vorgefertigten Ampullen bestehen, die Lösungen des Enzymkomplexes einer vorbestimmten Konzentration in Wasser oder isotonischer Kochsalzlösung enthalten. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel werden deshalb in einer grundsätzlich anderen Weise als die Mundspülmittel nach der DT-OS 1 o/lQ ?S8 zubereitet, denn die bekannten Mundsp'ülmittel sind nicht für Injektionszwecke geeignet oder können nicht in injizierbare Lösungen überführt werden, und sie enthalten auch
werden, entweder in der Form, wie sie verkauft werden, oder
noch allgemeiner nach Auflösen in einem geeigneten Lösungsmitteil Vorzugsweise werden daher die vorgenannten verschlossenen
Ampullen hergenommen und auf gebrochen, und dann wird deren - Inhalt in sterilem oder pyrrogenfreiem Wasser oder in isotonischer Kochsalzlösung zur Verabreichung durch Injektion in den Blutkreislauf des zu behandelnden Patienten gelöst oder suspendiert. Gegebenenfalls können die Einzelsdosierungen nach ider Erfindung aus vorgefertigten Ampullen bestehen, die Lösungen des Enzymkomplexes einer vorbestimmten Konzentration in Wasser oder isotonischer Kochsalzlösung enthalten. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel werden deshalb in einer grundsätzlich anderen Weise als die Mundspülmittel nach der DT-OS 1 o/lQ ?S8 zubereitet, denn die bekannten Mundsp'ülmittel sind nicht für Injektionszwecke geeignet oder können nicht in injizierbare Lösungen überführt werden, und sie enthalten auch
£ 0 9 8 8 ζ / 1 7 Pil
keine vorbestimmte Dosis des. Enzymkomplexes.
Die Wirksamkeit einiger Enzymkomplexe für die erfindungsgemäßen
Arzneimittel ist in den nachstehenden Beispielen veranschaulicht.
Herstellung eines wasserlöslichen Trypsin-Komplexes
10 g eines Methylvinyläther-Maleinsäureanhydrid-Mischpolymerisats mit einem Molekulargewicht von 250 000 werden zu JiOO ml einer
O,2m-Phosphatpufferlösung vom pH J3 4 gegeben. Das Gemisch wird
etwa 5 Minuten zur Erzeugung einer Suspension gerührt. Dann fügt man eine Lösung von 1 g Trypsin in 4o ml Phosphatpufferlösung
zu und rührt das Gemisch 2h Stunden bei 4°C. Die erhaltene Lösung
wird nach Verdünnen mit viel entsalztem Wasser durch wiederholtes Ultrafiltrieren durch eine Membran für ein begrenztes Molekulargewicht
oder ein Molekulargewicht von 300 000 gereinigt/Dadurch
wird nicht umgesetztes Trypsin, das durch die Membran dringt, vom Komplex getrennt, welchletzterer in den Ultrafiltrationszellen
zurückbleibt. Dieses Verfahren dient auch zum Abtrennen der Phosphatpufferlösung
vom Komplex . Dann wird der Komplex gegen entsalztes Wasser dialysiert. Schließlich wird der Komplex gefriergetrocknet.
Man erhält 8,9 g weiße Flocken. Der Proteingehalt des Komplexes wird unter Verwendung von Trypsin als Standard nach der Methode
von Lowry und Mitarbeitern bestimmt. Er beträgt Ki ^g
Die peptidespaltende Aktivität des Komplexes" wird aufgrund seiner
esterspaltenden Fä:.^ö.ceit gemessen, N-Benzoyl-arginin aus N-3en
zoyl-arginin-äthylester freizusetzen. Bei diesem Versuch hatte
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jedes mg des Komplexes eine Aktivität, die 125 ;ag Trypsin äquivalent
war. Demzufolge hat der Komplex eine größere esterspaltende Aktivität und auch eine größere peptidespaltende Aktivität je
pg Protein als freies Trypsin.
Die caseinspaltende Aktivität des Trypsins und des Komplexes werden
nach dem Verfahren von Remmert & Cohen in "j.Biol.Chem." l8l
(I9^9)i Seiten 431-448, gemessen. Jedes mg des Komplexes hätte
eine Aktivität, die 10 μg des Enzyms äquivalent war. Somit ist
die caseinspaltende Aktivität des Komplexes in bezug auf die Aktivität des freien Trypsins herabgesetzt worden.
Die fibrinlösenden Aktivitäten von Trypsin und vom Komplex- werden
aufgrund ihrer Fähigkeit gemessen, Plasmagerinsel aufzulösen. Menschliches Plasma, das eine Spur von mit Jod ^ markiertem
Fibrinogen enthält, wird mittels Thrombin zum Gerinnen gebracht. Die Gerinsel werden dann in einer Lösung des Enzyms bzw. des Komplexes
inkubiert. Es wird dann das aus dem Gerinsel in das Medium freigesetzte markierte Jod ^ gemessen (vgl. Tabelle I). Der
Komplex ist verhältnismäßig stärker aktiv als freies Trypsin. Jedes mg des Komplexes ist 320 ug Trypsin äquivalent.
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Tab e. lie I
Vergleich von Trypsin und Trypsin-Komplex Untersuchung ■ Trypsin-Äquivalent Verhältnis ■
Proteingehalt 47 p
esterspaltende Wirkung
auf N-Benzoyl-argininäthylester 125 ug/mg 2,5
auf N-Benzoyl-argininäthylester 125 ug/mg 2,5
Fibrinolyse von Plasmagerinsel 300 pg/mg 7,0
caseinspaltungstest 10 Jig/mg 0,2
Aus der Tabelle I ist ersichtlich, daß der wasserlösliche Enzymkomplex eine fibrinlösende Aktivität besitzt, die 7 mal der des
freien Enzyms entspricht, und eine esterspaltende Aktivität aufweist, die 2,5mal derjenigen des freien Enzyms entspricht, jedoch
eine caseinspaltende Aktivität, die nur 1/5 derjenigen des freien Enzyms beträgt. Somit ist dargelegt, daß die gewünschte Kombination
von Eigenschaften - wie zuvor angegeben - erreicht worden
ist.
1 g eines Dextrans mit einem mittleren Molekulargewicht von etwa 4o 000 (gemessen durch Gelfiltration) wird in 10 ml einer 0,1m- "
Natriumcarbonatpufferlösung vom pH 9,0 gelöst. Zu dieser Lösung wird 1 g Bromcyan gegeben, das in 30 ml Wasser gelöst ist. Das
Gemisch wird bei rlc^uitemperatur gehalten und 10 Minuten gerührt,-währenddessen
der pH-Wert durch Zugabe von 2-m Natronlauge auf
409885/1287 ·.
pH 9 konstant gehalten wird.-Nach 10 Minuten wird das Reaktionsgemisch mit 200 ml Aceton versetzt, worauf das mit Bromcyan aktivierte
Dextran ausfällt. Der Niederschlag wird abfiltriert und an der Luft getrocknet. Man erhält ein feines Pulver, das sich in
Wasser rückständsfrei löst.
105 mg des mit Bromcyan aktivierten Dextrans wird mit 98 mg
Trypsin durch Vermischen der Lösungen beider Substanzen in Bicarbonatpufferlösung
vom pH 9,0 umgesetzt. Die Mischungen v/erden 16 Stunden langsam bei 4°C gerührt. Dann trennt man den Trypsin-Dextran-KompLex
vom freien Trypsin, chromatographisch an einer Säule mit vernetzten! Dextran. Nach dem Gefriertrocknen erhält man
den Trypsin-Dextran-Komplex als flockiges weißes Pulver und in
einem Gewicht von 22,5 mg.
Der-Komplex hat einen Proteingehalt, der 22 y.g Trypsin je'mg des
Komplexes' äquivalent ist. Die fibrinlösende Aktivität des Komplexes
wird mit derjenigen von Trypsin durch Messen der Fähigkeit jeder der Lösungen verglichen, während einer lOminütigen
^ I
Inkubationszeit aus durch Thrombin verursachten Plasmagerinseln,
125
die mit Jod -Fibrinogen markiert worden sind, die Radioaktivität in die Lösungen übertreten zu lassen (vgl. Tabelle II).
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_i4_
T a be l.l e II
Wirkung von Trypsin und Trypsin-Komplex auf die Fibrinolyse
in vitro
1OR freigesetztes J J nach lOminü
tiger Inkubation (Auflösung)
Blindversuch | 10Ö9 |
Trypsin 4o ;ig/ml | 1737 |
70 /ig/ml . | 2184 |
100 jag/ml | 2279 |
150 jig/ml | 2689 |
200 /ag/ml | 3081 |
Trypsin-Dextran- Komplex 5Q0 ^g/ml |
|
(äquiv. 11 ^g Trypsin/ml) | 993 |
1000 /ag/ml (äquiv. 22 ug Trypsin/ml) |
2114 |
2000 jug/ml (äquiv. 44 jig Trypsin/ml) |
. 5094 |
Der Trypsin-Dextran-Komplex hat eine 2,5mal größere fibrinlösende
Aktivität auf ein Protein als freies Trypsin, wobei 2 mg des
Komplexes annähernd ein 'Scotein äquivalent enthalten, das 4o jig
Trypsin entspricht.
6 g Dextran mit einem'Molekulargewicht von etwa 4o 000 werden in
600 ml Wasser gelöst und mittels 2n-Natronlauge auf einen pH 11,00 eingestellt. Dann werden 1,8 g Bromcyan und schließlich weitere
Natronlauge zugegeben, um bis zur Beendigung der Reaktion einen pH-Wert von 11,00 aufrecht zu erhalten. Dann wird die Lösung mit-
409885/1287
tels 2n-Salzsäure auf einen .pH-Wert von 8,5 eingestellt. 200 ml
dieser Lösung werden mit 200 mg Pronase vemLscht und l6 Stunden
bei 4°C gerührt. Das Produkt wird unter Verwendung einer Membran, die Substanzen mit einem Molekulargewicht über 10 000 zurückhält,
auf ein Volumen von etwa 5 ml ultrafiltriert. Nach dem Gefriertrocknen
der Lösung erhält man 2,114 g eines weißen Pulvers. Die Reinigung von 1 g-"dieses Pulvers erfolgt mittels Gelfiltration
an einer Säule (3 χ 4θ cm) mit vernetztem Dextran und Eluieren
mit 0,lm-Natriumphosphatpufferlösung vom pH 7*0. Die eluierten
'proteinhaltigen Fraktionen werden, bevor die freie Pronase eluiert
wird, wie oben angegeben auf ein Volumen von 10 ml ultrafiltriert und dann gefriergetrocknet. Man erhält 0,88 g eines weissen
Pulvers.
Der Proteingehalt dieses Pulvers beträgt J>2 μ& Pronase je mg des
Komplexes.
Die fibrinlösende Aktivität des -Komplsxe.s wird wie vorstehend beschrieben
durch Freisetzen von radioaktiv markierten Peptiden aus Jod -Fibrinogen-enthaltenden menschlichen Plasmagerinseln gemessen.
Durch Verwendung von antikoaguliertem menschlichen Plasma
anstelle der Pufferlösung im äußeren Medium kann die Plasmainhibierung
der fibrinlösenden Enzyme bestimmt werden (Tabelle III).
409885/1287
16 - | III | (2,4) | 2432518 | (2,2) | |
Tab | eile | (5,8) | (3,2) | ||
Wirkung von Pronase und | (10,5) | eine | (3,4) | ||
Fibrinolyse in vitro | Pronase-Dextran-Komplex auf | (25,4) | (3,6) | ||
freigesetztes Jod125/Min. (30minütige Inku bation in Plasma- Ιο sung) |
|||||
Blindversuch | (4,2) | 683 | (4,1) | ||
Pronase 20 ug/ml | freigesetztes Jod125/Min. (30minütige Inku bation in Puffer- 'lösung) |
962 | |||
50 /ig/ml | 732 | (5,4) | 1020 | (6,4) | |
100 /ig/ml | 1757 | (7,0) | 1101 | (6,4) | |
Pronase-Dextran-Komplex | 3171 | (10,2) | (8,2) | ||
8 /ig/ml | 7624 | 1243 | |||
(Pronas e-fiquivalent) | |||||
16 /Ug/ml . | 1279 | 1916 | |||
32 ^g/ml | I9I6 | ||||
64 ^ig/ml | 1621 | 2459 | |||
2180 | |||||
3082 |
(die Zahlenangaben in Klammern geben die Gesamtmenge freigesetates
Jod125 in % an)
409885/128 7
Tabelle IV
Wirkung von Pronase-Dextran-Komplex auf eine Fibrinolyse
in vitro In Gegenwart von zugegebenem Plasminogen
freigesetztes Joa12-^/iAin. j50minütige
Inkubation in Pufferlösung in Gegenwart von Plasminogen bei:
0,4 Casein-Ein- 1,6 Casein-Einheiten/ml heiten/ml
Blindversuch | 1252 | (4,1) | 1163 | (3,8) . |
Pronase-Dextran-Komplex 8 jag/ml |
1624 . | (5,3) | 1664 | (5,4) |
(Pronase-A'quivalent) 16 /ig/ml |
2031 | {6,6) | 4323 | (14,1) |
32 jxg/ml ■ | 3305 | (10,8) | 5953 | (19,5) |
64 ^ug/ml | 4173 | (13,6) | 9221 | (30,1) |
(die Zahlenangaben in Klammern geben die Gesamtmenge freigesetztes
Jod125 in % an)
Die caseinspaltende Aktivität der in Beispiel 10 gemessenen Zubereitung
ist annähernd gleich derjenigen, die mit einer äquivalenten Menge unmodifizierter freier Pronase hergestellt worden ist.
Es ist jedoch eine ersichtliche Erhöhung beider esterspaltenden
Aktivität des Komplexes (Beispiel 9) zu verzeichnen. Bei dieser Zubereitung muß die Wirkung des Zusatzes der Pronase zu Dextran
eine Verbindung mit im wesentlichen der gleichen caseinspaltenden Aktivität und fibrinlösenden Aktivität in einer Pufferlösung
wie freie Pronase erzeugt werden, doch·mit einer bedeutend stärker
herabgesetzten Hemmung der fibrinlösenden Wirkung durch Plasma. Die Wirkung des exogenen Plasminogen auf eine Fibrinolyse
mittels des Komplexes zeigt, da3 die Verbindung als Plasminogen-Aktivator wirken kann (Tabelle IV).
4 0 9885/1287
B e i s ρ i e 1 4
1 g Dextran vom Molekulargewicht 4θ 000 wird in 100 ml V/asser gelöst
und mit 0,5 g Bromcyan bei pH 11,0 wie bereits beschrieben
aktiviert. Der pH-Wert der Lösung wird auf 8,5 eingestellt. Dann werden 200 mg Trypsin und 100 mg Benzamidin-hydroehlorid zugegeben
> um eine Autolyse zu vermeiden. Die Lösung wird 16 Stunden
bei 4°C gerührt und dann in Gegenwart der vorstehend genannten Membranen auf ein Volumen von 10 ml ultrafiltriert. Wie weiterhin
vorstehend angegeben worden ist, wird der Komplex an einer Säule mit vernetzten! Dextran gereinigt. Die den Komplex enthaltenden
Fraktionen werden vereinigt, ultrafiltriert und gefriergetrocknet,
Man erhält 1,16 g weißes Pulver mit einem Gehalt an 126 ^Ug Protein
je mg des Komplexes. Die fibrinlösende Wirkung ist in Tabelle
V angegeben.
409885/1287
Fibrinlösende Wirkung von Trypsin und Trypsin-Komplex an Dextran "Τ4θ" (II) in vitro
freigesetztes Jod125/Min.
freigesetztes Jod125/Min.
(j5Ominütige Inku- (30minütige Inkubation
in Puffer- bation in Plasmalösung). lösung)
Blindversuch | Blindversuch | 778 | (2,20) | 1114 | (3,1). |
Trypsin 25 ug/ml | Trypsin-Dextran-Komplex | 2125 | (6,0) | - | |
50 ug/ml | (Trypsin-A'quivalent) | 4554 | (12,8) | - | |
75 ug/ml | 30 ^ig/ml | 4064 | (11,4) | - | |
100 /ig/ml | 63 ^g/ml | 7665 | (21,6) | 1166 | (3,3) |
500 ,ug/ml | 126 jag/ml | - | 1206 | (3,4) | |
750 ]xg/ml | 252 ^g/ml | - | 1358 | (3,8) | |
1110 | (3,6) | 885 | (2,8) | ||
1517 | (4,9) | - | |||
1462 ■ | (4,7) | 1006 | (3,2) | ||
1937 | (6,2) | 1084 | (3,5) | ||
4836 | (15,5) | 1280 | (4,1) |
(die Zahlenangaben in Klammern geben die Gesamtmenge freigesetztes
Jod12^ m.% an)
Die caseinspaltende Wirkung des Komplexes ist in Fig. 1 dargestellt
und beträgt annähernd 60 Prozent derjenigen des freien Trypsins. Bei die-- ■ Beispiel kommt die Reduktion der caseinspaltenden
Aktivität auf die Bindung an. Dextran gleich einer Reduktion der fibrinlösenden Aktivität, und es wird eine Retention
409885/128 7:
der Hemmung durch Plasma vermerkt. Die esterspaltende Aktivität
ist jedoch erhöht (Beispiel 9).
Chymotrypsin-Komplex an Dextran "Τ4θ"
1 g Dextran vom Molekulargewicht 4θ 000 wird in 100 ml Wasser gelöst
und mit 0,5 S Bromcyan bei pH 11,00 wie vorstehend beschrieben
vermischt. Nach Beendigung der Reaktion wird der pH-Wert mitteils
2n-Salzsäure und O^m-Natriumbicarbonatlösung auf 8,5 eingestellt.
Dann werden 200 mg Chymotrypsin und 200 mg Benzaraidinhydrochlorid
zugegeben.. Die Lösung wird 16 Stunden bei 4°C gerührt, dann wie bereits beschrieben auf ein Volumen von 5 ml ultrafiltriert
und schließlich an einer Säule mit vernetztem Dextran gereinigt.
Die den Komplex enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und dann durch Ultrafiltrieren eingeengt und gefriergetrocknet.
Man erhält 1,56 g weißes Pulver,mit einem Gehalt an den Puffersalzen
und mit einem Proteingehalt von 73 Mg/mg. Die fibrinlösende
Aktivität geht aus. Tabelle VI hervor.
409885/1287
Fibrinlösende Wirkung von Chymotrypsin und Chymotrypsin-Komplex an Dextran "Τ4θ" in vitro
freigesetztes Jod -\ (30minütige Inkubation
in Pufferlösung)
Blindversuch | 14,6 | /ig/ml | 1264 | (2,43) |
Chymotrypsin 20 }ig/ml | 36,5 | jUg/ml | 1675 | (3,22) |
50 /ig/ml | . 73,0 | Jig/ml | 2828 | (5,44) |
100 ;ig/ml | 146,0 | jug/ml | 4384 | (8,44) |
200 ug/ml | 10801 | (20,80) | ||
1544 | (2,97) | |||
1664 | (3,20) | |||
1839 | (3,54) | |||
2855 | (5,49) | |||
Chymotrypsin-Dextran-Komplex | ||||
(Chymotrypsin-Äquivalent | ||||
(die Zahlenangaben in Klammern geben die Gesamtmenge freigesetztes
Jod
12^
in % an)
Die caseinspaltende Aktivität des Komplexes (Fig. 2) beträgt annähernd
50 Prozent derjenigen des freien Enzyms und entspricht wie in Beispiel 4 - der verminderten fibrinspaltenden Aktivität.
Beisp. i e 1 6
Trypsin-Komplex an ein Sucrose-Epichlor-Mlschpolymerisat ("FICOIl]')
1 g eines Sucrose-Epichlorhydrin-Miechpolymerisats vom Molekulargewicht
400 000 v.'ii'J in 100 ml Wasser gelöst und dann mit 0,5 g
Bromcyan bei pH 11,00' in der bereits beschriebenen Weise akti-
409885/ 1 287
viert. Der pH-V/ert der Lösung wird auf 8,5 eingestellt. Der Lösung
werden dann 100 mg Trypsin und 100 rag Benzamidin-hydrochlorid zugegeben. Nach löstündigem Rühren bei 4°C wird die Lösung
in der bereits beschriebenen Weise ultrafiltriert und mittels Gelfiltration gereinigt. Nach Ultrafiltrieren und Gefriertrocknen
erhält man 0,89 g weißes Pulver mit einem Gehalt an -75 ^g Protein/mg.
Die fibrinlösende Aktivität ist in Tabelle VII angegeben.
T a b e 1 1 e VII
Fibrinlösende Wirkung eines Trypsin-Komplexes in
vitro (wegen der Trypsin-Aktivität siehe Beispiel 4)
freigesetztes Jod -yMin. (50rainütige Inkubation
in Pufferlösung)
Blindversuch | 72, | 0 | /ig/ml | 1264 | (2,43) |
Trypsin-Koiaplex | 144' | 0 | ^g/ml | ||
(Trypsin-Ä'quivalent) | ys/mi | 2181 | (4,20) | ||
2208 | (4,25) | ||||
- | 29OO | (5,57) | |||
(die Zahlenangaben in Klammern geben die Gesamtmenge freigesetztes
Jod125 in % an)
Die caseinspaltende. Aktivität .-des Komplexes (.Fig. 1) beträgt annähernd
40 Prozent derjenigen des freien Enzyms. Die esterspaltende Aktivität (Beispiel 9) ist etwas erhöht.
409 8 85/1287
1 g Dextran vom Molekulargewicht 4θ 000 wird in 100 ml Wasser
gelöst und mit 0,5 g Bromcyan in der bereits beschriebenen Weise umgesetzt. Die Lösung wird auf einen pH 8,5 eingestellt und mit
100 mg Pronase versetzt. Nach lostündigem Rühren bei 4°C wird die
Lösung in der bereits beschriebenen Weise ultrafiltriert und mittels Gelfiltration gereinigt. Nach der Gefriertrocknung erhält
man 0,99 g weißes Pulver mit einem Gehalt an 51 ug Protein/mg. Die fibrinlösende Aktivität ist in Tabelle VIII angegeben.
T."ab e 1 1 e VIII
Fibrinlösende Wirkung eines Pronase-Komplexes an Dextran "Τ4θ" (II) in vitro in Gegenwart von
Pufferlösung und menschlichern Plasma
freigesetztes Jod ^/Min.
(30minütige Inkubation)
Pufferlösung Plasma
Blindversuch 1110 (3,6) 885 (2,8) Pronase-Dextran-Komplex
(Pronase-Äq'uivalent) 10 /ig/ml 1385 (4,4)
25 /ig/ml 1559 (5,0) 1499 (4,8)"
50 /ig/ml 1937 (6,2) 1770 (5,7)
100 /ig/ml 2334 (7,5) 2253 (7,2)
(die Zahlenangaben in Klammern geben die Gesamtmenge freigesetztes
Jod ^ in % an)
Die Modifikation der Pronase mit Dextran, das in weit stärkerem Maße aktiviert worden ist als das in dem Pronase-Komplex mit Dextran
"Τ4θ" (I) verwendete, liefert einen Komplex mit einer fibrinlösenden
Aktivität, die nicht durch menschliches Plasma inhibiert
4098 8 5/1287
wird. , **\
B e i s ρ i e 1 8
2 g Dextran vom Molekulargewicht 70 000 werden in 200 ml Wasser
gelöst und mit 0,5 g Bromcyan bei einem pH-Wert 11,00 aktiviert. Nach Einstellen des pH-Wertes der Lösung auf 9,0 werden 250 mg
Pronase zugegeben. Nach l6stündigem Rühren der Lösung bei 4°C
werden 1,82 g L-Lysin zugegeben, um restliche reaktionsfähige
Zentren an dem Dextran zu neutralisieren. Dabei wird der pH-Wert auf 9,5 gehalten. Nach 4stündigem Rühren bei 4°C wird die Lösung
wie in der vorbeschriebenen Weise auf ein Volumen von 15 ml ultrafiltriert und durch Gelfiltration gereinigt. Nach Ultrafiltrieren
und Gefriertrocknen erhält man 1,70 g weißes Pulver mit einem Gehalt an 87 ug Protein/mg des Komplexes. Die fibrinlösende Aktivität
ist in Tabelle IX angegeben.
409885/1287
"■hüllen
Wirkung eines Pronase-Dextran-Komplexes auf eine Fibrinolyse in vitro in Gegenwart einer
Pufferlösung und menschlichem Plasma
freigesetztes (30minütige Inkubation)
■ Blindversuch
Pronase-Dextran-Komplex
(Pronase-Äquivalent)
Pronase-Dextran-Komplex
(Pronase-Äquivalent)
/ig/ml | Pufferlösung | (2,8) | Plasma | (2,1) | |
/ag/ml | 917 | 692 | (3,4) | ||
8,7 | ^g/ml | - | (3,4) | 1178 | (4,3) |
17,4 | pg/ml | 1116 | (4,2) | 1385 | |
34,8 | /ig/ml | 1391 | "- | (5,0) | |
43,5 | fig/ml | - | (6,0) | 1615 | (5,9) |
87 | 1948 | 1928 | (8,6) | ||
174 | - | 2811 | |||
(die Zahlenangaben in Klammern geben die Gesamtmenge freigesetztes
Jod ^ in % an)
Die Modifikation der Pronase mit Dextran vom Molekulargewicht
70 000 setzt die spezifische fibrinlösende Aktivität des Komplexes im Vergleich mit dem des Beispiels 3 herab, doch wird noch
ein Weglassen der Plasmahemmung beobachtet.
Esterspaltende Aktivität der Enzym-Zubereitungen Um eine Beurteilung der peptidespaltenden 'Aktivität der Komplexe
zu geben, wird die esterspaltende Aktivität unter Verwendung von 1 mMol N-Benzoyl-arginin-äthylester (B.A.E.E.) bei pH 8,0 bestimmt.
Eine B.A.E.E.-Einheit des Enzyms ruft eine Erhöhung bei
der optischen Dichte (0,Oi>Jim) von 0,001 in 1 Minute bei 25°C
409885/1287
hervor.
TRYPSIN 8185
TRYPSIN-Komplex (nach Beispiel 4) II9OO
TRYPSIN-Komplex (nach Beispiel 6) 12000
PRONASE 3350
PRONASE-Komplex (nach Beispiel 7) 8280
0,5 ml einer Enzym-Zubereitung verschiedener Konzentrationen werden
1 Stunde bei 37°C mit 2 ml einer 3prozentigen Caseinlösung und in Gegenwart von 2,5 ml einer 0,lm-Natriumphosphatpufferlösung
von pH 7,0 inkubiert. Unverdautes Protein wird mittels 2 ml einer lOprozentigen Trichloressigsäure ausgefällt. Der Tyrosingehalt
des Überstehenden wird nach dem Verfahren von Lowry Und Mitarbeitern in "J.Biol.Chem." _193 (1951), S. 265, bestimmt. Die optische
Dichte ist dann ein Maß für die Menge des durch das Enzym solubilisierte Casein und somi-t ein Maß für die caseinspaltende Wirksamkeit.
Die Ergebnisse von erfihdungsgemaßen bestimmten Enzym-Zubereitungen
sind in den Fig. 1 und 2 gezeigt, in denen die optische Dichte (0.D.gcOnrn) SeSen die Konzentration des Enzyms bzw. - für die .
Komplexe - der äquivalente Enzymgehalt des Komplexes aufgezeichnet ist.
409885/1287
In Fig. 1 sind die Werte für freies Trypsin durch die Kurve A, ■
die Werte für den Trypsin-Dextran-Komplex des Beispiels 4 durch
die Kurve B und die Werte für den Trypsin-Komplex an ein Sucrose-Epichlorhydrin-Mischpolymerisat
nach Beispiel 6 durch die Kurve C dargestellt.
In Fig. 2 sind die Werte für freies Chymotrypsin durch die Kurve D und die Werte für den Chymotrypsin-Dextran-Komplex nach Beispiel
5 durch die Kurve E dargestellt.
4Ü9885/-1287
Claims (10)
- PatentansprücheArzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem wasserlöslichen Komplex eines kovalent an ein Polymeres gebundenes proteolytisches Enzym.
- 2. Arzneimittel nach Anspruch 1,- gekennzeichnet durch einen Gehalt an Trypsin, Chymotrypsin, Bromelain, Papain, Pronase oder Brinase als proteolytisches Enzym.
- 3. Arzneimittel nach Anspruch 1 oder 2, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem Komplex, der sich von einem wasserlöslichen Polysaccharid ableitet.
- 4. · Arzneimittel nach Anspruch 3> gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem Dextran als Polysaccharid.
- 5. Arzneimittel nach Anspruch 3* gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem modifizierten Polysaecharid.
- 6. Arzneimittel nach Anspruch 5.» gekennzeichnet durch einen · Gehalt an einem Sucrose-Epichlorhydrin-Mischpolymerisat als modifiziertem Polysaccharid.
- 7. Arzneimittel nach mindestens einem der vorstehenden Sprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es in einer für Injektionszwecke geeigneten Form oder in einer solchen Form vorliegt, daß es in eine Injizierbare Lösung überführt werden kann.409885/1287
- 8. , Arzneimittel nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es in Form einer verschlossenen Ampulle vorliegt, die eine vorbestimmte Menge des Enzym-Komplexes in einer sterilen, gefriergetrockneten Form enthält.
- 9. Arzneimittel nach Anspruch 1Js dadurch gekennzeichnet, daß der Enzym-Komplex in sterilem oder pyrrogenfreiem Wasser oder einer isotonischen Kochsalzlösung in einer vorbestimmten Konzentration gelöst oder suspendiert vorliegt.
- 10. Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels nach den Ansprüchen 1 bis 9* dadurch gekennzeichnet, daß man eine wässrige Lösung eines wasserlöslichen Polymeren mit einem proteolytischen Enzym in Berührung bringt und aus dem erhaltenen Komplex Einzeldosierungen bildet.409885/1287
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB32071/73A GB1479268A (en) | 1973-07-05 | 1973-07-05 | Pharmaceutical compositions |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2432518A1 true DE2432518A1 (de) | 1975-01-30 |
Family
ID=10332744
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE2432518A Withdrawn DE2432518A1 (de) | 1973-07-05 | 1974-07-04 | Arzneimittel und verfahren zu seiner herstellung |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4055635A (de) |
JP (1) | JPS5031019A (de) |
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GB (1) | GB1479268A (de) |
IE (1) | IE40434B1 (de) |
IL (1) | IL45103A (de) |
NL (1) | NL7408985A (de) |
ZA (1) | ZA743934B (de) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3315482A1 (de) * | 1982-04-30 | 1984-01-12 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd., Tokyo | Mittel zur verhinderung und behandlung von blutlipid-abnormalitaet und/oder arteriosclerose |
CN105131104A (zh) * | 2001-10-10 | 2015-12-09 | 诺和诺德公司 | 肽的重构和糖缀合 |
Families Citing this family (99)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
DE2615844A1 (de) * | 1976-04-10 | 1977-10-20 | Knoll Ag | Fibrinogen spaltendes enzymsystem |
US4273873A (en) * | 1977-10-25 | 1981-06-16 | Unitika Ltd. | Preparation of antithrombogenic polymeric materials |
US4701521A (en) * | 1978-07-17 | 1987-10-20 | The Trustees Of Boston University | Method of effecting cellular uptake of molecules |
WO1979000515A1 (en) * | 1978-01-16 | 1979-08-09 | Univ Boston | Method of effecting cellular uptake of molecules |
JPS54157816A (en) * | 1978-05-27 | 1979-12-13 | Unitika Ltd | Fixing of bioactive substance to solid surface |
IT1209419B (it) * | 1980-07-01 | 1989-07-16 | Texcontor Ets | Composti ad attivita' mucolitica non assimilabili, processo per laloro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo. |
GB8430252D0 (en) * | 1984-11-30 | 1985-01-09 | Beecham Group Plc | Compounds |
SE8500341L (sv) * | 1985-01-24 | 1986-07-25 | Pharmacia Ab | Desinfektionssats samt sett for desinfektion |
US4766106A (en) * | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US5206344A (en) * | 1985-06-26 | 1993-04-27 | Cetus Oncology Corporation | Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof |
US4745180A (en) * | 1986-06-27 | 1988-05-17 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using heparin fragments |
US4894226A (en) * | 1986-11-14 | 1990-01-16 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation |
US6710169B2 (en) * | 1987-10-02 | 2004-03-23 | Genentech, Inc. | Adheson variants |
US5336603A (en) * | 1987-10-02 | 1994-08-09 | Genentech, Inc. | CD4 adheson variants |
US4847325A (en) * | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
US5565519A (en) * | 1988-11-21 | 1996-10-15 | Collagen Corporation | Clear, chemically modified collagen-synthetic polymer conjugates for ophthalmic applications |
US5162430A (en) * | 1988-11-21 | 1992-11-10 | Collagen Corporation | Collagen-polymer conjugates |
US5306500A (en) * | 1988-11-21 | 1994-04-26 | Collagen Corporation | Method of augmenting tissue with collagen-polymer conjugates |
US5510418A (en) * | 1988-11-21 | 1996-04-23 | Collagen Corporation | Glycosaminoglycan-synthetic polymer conjugates |
US5116964A (en) | 1989-02-23 | 1992-05-26 | Genentech, Inc. | Hybrid immunoglobulins |
US5166322A (en) * | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
JP2896580B2 (ja) * | 1989-08-25 | 1999-05-31 | チッソ株式会社 | アミロース―リゾチームハイブリッドと活性化糖およびその製造法 |
JP2975632B2 (ja) * | 1990-03-30 | 1999-11-10 | 生化学工業株式会社 | グリコサミノグリカン修飾プロテイン |
US5877016A (en) | 1994-03-18 | 1999-03-02 | Genentech, Inc. | Human trk receptors and neurotrophic factor inhibitors |
US6458762B1 (en) | 1994-03-28 | 2002-10-01 | Baxter International, Inc. | Therapeutic use of hemoglobin for preserving tissue viability and reducing restenosis |
US5708142A (en) | 1994-05-27 | 1998-01-13 | Genentech, Inc. | Tumor necrosis factor receptor-associated factors |
US5545553A (en) * | 1994-09-26 | 1996-08-13 | The Rockefeller University | Glycosyltransferases for biosynthesis of oligosaccharides, and genes encoding them |
US6562781B1 (en) | 1995-11-30 | 2003-05-13 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates |
US6491965B1 (en) * | 1995-11-30 | 2002-12-10 | Hamilton Civic Hospitals Research Development, Inc. | Medical device comprising glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates |
US7045585B2 (en) * | 1995-11-30 | 2006-05-16 | Hamilton Civic Hospital Research Development Inc. | Methods of coating a device using anti-thrombin heparin |
US7883693B2 (en) | 1995-12-18 | 2011-02-08 | Angiodevice International Gmbh | Compositions and systems for forming crosslinked biomaterials and methods of preparation of use |
US6458889B1 (en) | 1995-12-18 | 2002-10-01 | Cohesion Technologies, Inc. | Compositions and systems for forming crosslinked biomaterials and associated methods of preparation and use |
ES2420106T3 (es) * | 1995-12-18 | 2013-08-22 | Angiodevice International Gmbh | Composiciones de polímeros reticulados y métodos para su uso |
US6833408B2 (en) | 1995-12-18 | 2004-12-21 | Cohesion Technologies, Inc. | Methods for tissue repair using adhesive materials |
JP3394540B2 (ja) | 1997-01-31 | 2003-04-07 | ジェネンテク・インコーポレイテッド | O−フコシルトランスフェラーゼ |
US20040241645A1 (en) * | 1997-01-31 | 2004-12-02 | Genentech, Inc. | O-fucosyltransferase |
WO2000012587A2 (en) * | 1998-08-28 | 2000-03-09 | Gryphon Sciences | Polyamide chains of precise length, methods to manufacture them and their conjugates |
US7696163B2 (en) | 2001-10-10 | 2010-04-13 | Novo Nordisk A/S | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
US7265085B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-09-04 | Neose Technologies, Inc. | Glycoconjugation methods and proteins/peptides produced by the methods |
US7125843B2 (en) * | 2001-10-19 | 2006-10-24 | Neose Technologies, Inc. | Glycoconjugates including more than one peptide |
US7179617B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-20 | Neose Technologies, Inc. | Factor IX: remolding and glycoconjugation of Factor IX |
US7265084B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-09-04 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
US8008252B2 (en) * | 2001-10-10 | 2011-08-30 | Novo Nordisk A/S | Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII |
US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
US7399613B2 (en) * | 2001-10-10 | 2008-07-15 | Neose Technologies, Inc. | Sialic acid nucleotide sugars |
US7297511B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-11-20 | Neose Technologies, Inc. | Interferon alpha: remodeling and glycoconjugation of interferon alpha |
US7416858B2 (en) | 2001-10-10 | 2008-08-26 | Neose Technologies, Inc. | Pharmaceutical compositions of glycoconjugates |
US7157277B2 (en) * | 2001-11-28 | 2007-01-02 | Neose Technologies, Inc. | Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII |
US7214660B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
WO2004099231A2 (en) | 2003-04-09 | 2004-11-18 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
US7226903B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-06-05 | Neose Technologies, Inc. | Interferon beta: remodeling and glycoconjugation of interferon beta |
US7439043B2 (en) * | 2001-10-10 | 2008-10-21 | Neose Technologies, Inc. | Galactosyl nucleotide sugars |
US7795210B2 (en) | 2001-10-10 | 2010-09-14 | Novo Nordisk A/S | Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods |
US7473680B2 (en) * | 2001-11-28 | 2009-01-06 | Neose Technologies, Inc. | Remodeling and glycoconjugation of peptides |
MXPA04012496A (es) | 2002-06-21 | 2005-09-12 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Glicoformos del factor vii pegilados. |
AU2003300076C1 (en) * | 2002-12-30 | 2010-03-04 | Angiotech International Ag | Drug delivery from rapid gelling polymer composition |
JP2006519766A (ja) * | 2002-12-30 | 2006-08-31 | アンジオテック インターナショナル アクツィエン ゲゼルシャフト | 組織反応性化合物および組成物、ならびにそれらの使用法 |
JP2006523211A (ja) | 2003-03-14 | 2006-10-12 | ネオス テクノロジーズ インコーポレイテッド | 分岐水溶性ポリマーとその複合物 |
EP1613261A4 (de) * | 2003-04-09 | 2011-01-26 | Novo Nordisk As | Intrazelluläre bildung von peptidkonjugaten |
US8791070B2 (en) | 2003-04-09 | 2014-07-29 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
BRPI0410164A (pt) | 2003-05-09 | 2006-05-16 | Neose Technologies Inc | composições e métodos para preparação de mutantes de glicosilação de hormÈnio do crescimento humano |
US9005625B2 (en) | 2003-07-25 | 2015-04-14 | Novo Nordisk A/S | Antibody toxin conjugates |
US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
CA2547140A1 (en) * | 2003-11-24 | 2005-06-09 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
US7956032B2 (en) * | 2003-12-03 | 2011-06-07 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
US20060040856A1 (en) * | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
US20080318850A1 (en) * | 2003-12-03 | 2008-12-25 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated Factor Ix |
US8361961B2 (en) | 2004-01-08 | 2013-01-29 | Biogenerix Ag | O-linked glycosylation of peptides |
US8067031B2 (en) | 2004-04-28 | 2011-11-29 | Angiodevice International Gmbh | Compositions and systems for forming crosslinked biomaterials and associated methods of preparation and use |
RU2006138181A (ru) | 2004-05-04 | 2008-06-10 | Ново Нордиск Хелс Кеа Аг (Ch) | О-связанные гликоформы полипептидов и способ их изготовления |
WO2006010143A2 (en) | 2004-07-13 | 2006-01-26 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 [glp-1] |
WO2006015365A1 (en) * | 2004-07-30 | 2006-02-09 | Mount Sinai School Of Medicine Of New York University | Npc1l1 and npc1l1 inhibitors and methods of use thereof |
EP1799249A2 (de) | 2004-09-10 | 2007-06-27 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegyliertes interferon alpha |
WO2006034128A2 (en) | 2004-09-17 | 2006-03-30 | Angiotech Biomaterials Corporation | Multifunctional compounds for forming crosslinked biomaterials and methods of preparation and use |
WO2006035057A1 (en) * | 2004-09-29 | 2006-04-06 | Novo Nordisk Health Care Ag | Modified proteins |
PL2586456T3 (pl) | 2004-10-29 | 2016-07-29 | Ratiopharm Gmbh | Remodeling i glikopegilacja czynnika wzrostu fibroblastów (FGF) |
EP2514757A3 (de) | 2005-01-10 | 2014-03-05 | ratiopharm GmbH | Glycopegylierter Granulozyten-Kolonie stimulierende Faktor |
JP2008538181A (ja) * | 2005-03-30 | 2008-10-16 | ネオス テクノロジーズ インコーポレイテッド | 昆虫細胞系において増殖させたペプチドを生産するための製造方法 |
EP1871795A4 (de) | 2005-04-08 | 2010-03-31 | Biogenerix Ag | Zusammensetzungen und verfahren zur herstellung von glycosylierungsmutanten eines proteaseresistenten menschlichen wachstumshormons |
EP1891231A4 (de) * | 2005-05-25 | 2011-06-22 | Novo Nordisk As | Glykopegylierter faktor ix |
EP1888098A2 (de) | 2005-05-25 | 2008-02-20 | Neose Technologies, Inc. | Glykopegylierte erythropoetin-formulierungen |
CN102719508A (zh) * | 2005-08-19 | 2012-10-10 | 诺和诺德公司 | 糖基聚乙二醇化的因子vii和因子viia |
US20070105755A1 (en) * | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
US20090048440A1 (en) | 2005-11-03 | 2009-02-19 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide Sugar Purification Using Membranes |
US9187532B2 (en) | 2006-07-21 | 2015-11-17 | Novo Nordisk A/S | Glycosylation of peptides via O-linked glycosylation sequences |
US20100075375A1 (en) | 2006-10-03 | 2010-03-25 | Novo Nordisk A/S | Methods for the purification of polypeptide conjugates |
WO2008073620A2 (en) * | 2006-11-02 | 2008-06-19 | Neose Technologies, Inc. | Manufacturing process for the production of polypeptides expressed in insect cell-lines |
KR20150064246A (ko) | 2007-04-03 | 2015-06-10 | 바이오제너릭스 게엠베하 | 글리코페길화 g―csf를 이용하는 치료 방법 |
US20090053167A1 (en) * | 2007-05-14 | 2009-02-26 | Neose Technologies, Inc. | C-, S- and N-glycosylation of peptides |
EP2170919B8 (de) | 2007-06-12 | 2016-01-20 | ratiopharm GmbH | Verbessertes verfahren zur herstellung von nukleotidzuckern |
AU2008292186B9 (en) | 2007-08-27 | 2014-07-03 | Ratiopharm Gmbh | Liquid formulation of G-CSF conjugate |
US8207112B2 (en) | 2007-08-29 | 2012-06-26 | Biogenerix Ag | Liquid formulation of G-CSF conjugate |
KR101768792B1 (ko) | 2008-01-22 | 2017-08-16 | 아라임 파마슈티칼즈, 인크. | 조직 손상 관련 질환 및 장애를 예방 및 치료하기 위한 조직 보호 펩티드 및 펩티드 유사체 |
WO2009108806A1 (en) | 2008-02-27 | 2009-09-03 | Novo Nordisk A/S | Conjugated factor viii molecules |
SG11201406492YA (en) | 2012-04-16 | 2014-11-27 | Cantab Biopharmaceuticals Patents Ltd | Optimised subcutaneous therapeutic agents |
US20140212405A1 (en) | 2013-01-28 | 2014-07-31 | 2294719 Ontario Limited | Fibrinolytic/Proteolytic Treatment of Myofacial and Neuropathic Pain and Related Conditions |
CN109310741A (zh) | 2016-04-29 | 2019-02-05 | 阿拉伊姆药品公司 | 用于预防和治疗与组织损伤相关的疾病和障碍的组织保护肽 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2908614A (en) * | 1954-08-10 | 1959-10-13 | Glaxo Lab Ltd | Use of dextran in freeze-drying process |
US3019171A (en) * | 1957-11-25 | 1962-01-30 | Ethicon Inc | Activated enzyme compositions |
SE337223B (de) * | 1967-05-23 | 1971-08-02 | Pharmacia Ab | |
NL6812443A (de) * | 1968-08-31 | 1970-03-03 | ||
US3616229A (en) * | 1968-09-27 | 1971-10-26 | Monsanto Co | Polymer-enzyme products comprising plurality of enzymes covalently bound to polymer |
US3625827A (en) * | 1968-09-27 | 1971-12-07 | Monsanto Co | Water-soluble polymer-enzyme products |
BE744162A (fr) * | 1969-01-16 | 1970-06-15 | Fuji Photo Film Co Ltd | Procede d'encapsulage |
US3576760A (en) * | 1969-06-13 | 1971-04-27 | Nat Patent Dev Corp | Water soluble entrapping |
BE758425A (fr) * | 1969-12-02 | 1971-04-16 | Baxter Laboratories Inc | Streptokinase liee chimiquement a une matrice en carbohydrate ( |
US3876501A (en) * | 1973-05-17 | 1975-04-08 | Baxter Laboratories Inc | Binding enzymes to activated water-soluble carbohydrates |
-
1973
- 1973-07-05 GB GB32071/73A patent/GB1479268A/en not_active Expired
-
1974
- 1974-06-18 IE IE1275/74A patent/IE40434B1/xx unknown
- 1974-06-19 ZA ZA00743934A patent/ZA743934B/xx unknown
- 1974-06-21 IL IL45103A patent/IL45103A/en unknown
- 1974-07-01 AU AU70675/74A patent/AU7067574A/en not_active Expired
- 1974-07-01 FR FR7422830A patent/FR2235699B1/fr not_active Expired
- 1974-07-01 BE BE146115A patent/BE817126A/xx unknown
- 1974-07-02 US US05/485,302 patent/US4055635A/en not_active Expired - Lifetime
- 1974-07-03 NL NL7408985A patent/NL7408985A/xx not_active Application Discontinuation
- 1974-07-04 DE DE2432518A patent/DE2432518A1/de not_active Withdrawn
- 1974-07-04 CA CA204,068A patent/CA1030871A/en not_active Expired
- 1974-07-05 JP JP49077189A patent/JPS5031019A/ja active Pending
- 1974-07-08 ES ES428053A patent/ES428053A1/es not_active Expired
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3315482A1 (de) * | 1982-04-30 | 1984-01-12 | Kaken Pharmaceutical Co., Ltd., Tokyo | Mittel zur verhinderung und behandlung von blutlipid-abnormalitaet und/oder arteriosclerose |
CN105131104A (zh) * | 2001-10-10 | 2015-12-09 | 诺和诺德公司 | 肽的重构和糖缀合 |
CN105131104B (zh) * | 2001-10-10 | 2018-11-16 | 诺和诺德公司 | 肽的重构和糖缀合 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU7067574A (en) | 1976-01-08 |
ES428053A1 (es) | 1976-11-16 |
FR2235699B1 (de) | 1978-07-21 |
JPS5031019A (de) | 1975-03-27 |
IE40434B1 (en) | 1979-06-06 |
GB1479268A (en) | 1977-07-13 |
BE817126A (fr) | 1975-01-02 |
IE40434L (en) | 1975-01-05 |
CA1030871A (en) | 1978-05-09 |
FR2235699A1 (de) | 1975-01-31 |
IL45103A0 (en) | 1974-10-22 |
IL45103A (en) | 1977-10-31 |
ZA743934B (en) | 1975-06-25 |
NL7408985A (nl) | 1975-01-07 |
US4055635A (en) | 1977-10-25 |
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