DE2044513A1 - Alkaline amylase from bacillus species - Google Patents

Alkaline amylase from bacillus species

Info

Publication number
DE2044513A1
DE2044513A1 DE19702044513 DE2044513A DE2044513A1 DE 2044513 A1 DE2044513 A1 DE 2044513A1 DE 19702044513 DE19702044513 DE 19702044513 DE 2044513 A DE2044513 A DE 2044513A DE 2044513 A1 DE2044513 A1 DE 2044513A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
bacillus
medium
nutrient medium
alkaline
amylase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19702044513
Other languages
German (de)
Other versions
DE2044513C (en
Inventor
Koki Truma Ikeda Yono suke Shishido Yoshiko Yamamoto Masaki Tokio Honkoshi, (Japan) P
Original Assignee
Rikagaku Kenkyusho, Hirosawa (Ja pan)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP6478570A external-priority patent/JPS505272B1/ja
Application filed by Rikagaku Kenkyusho, Hirosawa (Ja pan) filed Critical Rikagaku Kenkyusho, Hirosawa (Ja pan)
Publication of DE2044513A1 publication Critical patent/DE2044513A1/en
Application granted granted Critical
Publication of DE2044513C publication Critical patent/DE2044513C/en
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source

Abstract

Alkaline amylase is prepared by incubating a medium inoculated with one of six typed cultures of Bacillus (e.g. species No. A-40. ATCC No. 21592). The culture medium contains carbonate, a carbon source, a nitrogen source and another inorganic material, and has a pH 7-11, preferably 10-11. It is preferred to incubate under aerobic conditions at a temperature of 24-45 degrees C for 24-75 hrs. The amylase of M.W. 30,000-40,000 may be recovered by filtration, and finds wide use as an enzyme.

Description

Alkalische Amylase und Verfahren zu ihrer Erzeugung Die Erfindung betrifft eine neuartige alkalische Amylase und ein vorteilhaftes Verfahren zu ihrer Herstellung durch Züchtung eines neuartigen Mikroorganismus, der alkalische Amylase erzeugt, in einem alkalischen Nährboden, der ein Kohlehydrat enthält. Alkaline amylase and method of making it The invention relates to a novel alkaline amylase and an advantageous method for it Manufactured by cultivating a new type of microorganism, alkaline amylase produced in an alkaline medium containing a carbohydrate.

Zur Erzeugung von Amylase, einem stärkeabbauenden Enzym mit einem optimalen pH-Wert im sauren oder neutralen Bereich, sind verschiedene Verfahren bekannt. Es ißt in der Literatur aber noch kein Verfahren zur Erzeugung von alkalischer Amylase mit Hilfe eines Mikroorganismus, eines besonderen Nährbodens und besonderer Ztlchtungsbedingungen beschrieben worden. Ein derartiges Verfahren ist ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung. To produce amylase, a starch degrading enzyme with a optimal pH in the acidic or neutral range, are different procedures known. However, there is still no process for producing alkaline in the literature Amylase with the help of a microorganism, a special nutrient medium and special Breeding conditions have been described. One such method is another Subject of the present invention.

Die Erfindung schafft eine neuartige alkalische Amylase, die ein Enzym mit einem Molekulargewicht von etwa 30 000 bis 40 000 (geschätzt unter Anwendung des Gelfiltrationsverfahrens) und einen optimalen pH-Wert von 10 - 11 hat, sowie ein Verfahren zur Erzeugung dieser Amylase Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß die Amylase durch Vergären eines alkalischen Nahrbodens, der ein Carbonat enthält, mit einem der Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169 erzeugt wird0 Der Erfindungsgegenstand ist gekennzeichnet durch den verwendeten Mikroorganismus und die Bedingungen, unter denen er zur Erzeugung einer neuartigen alkalischen Amylase gezüchtet wird0 Die erfindungsgemäß verwendeten IEkroorganismen zeigen unter den nachstehend ausführlich beschriebenen Züchtungsbedingungen ein gutes Wachstum unter Erzeugung der erfindungsgemäßen alkalischen Amylase0 Es handelt sich um neue Stämme der Gattung Bacillus, und zwar die Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169. Diese Bazillen wurden von den Erfindern der vorliegenden Erfindung entdeckt. The invention provides a novel alkaline amylase which is a Enzyme with a molecular weight of about 30,000 to 40,000 (estimated using of the gel filtration process) and has an optimal pH value of 10-11, as well as a process for producing this amylase The process is characterized that the amylase by fermentation of an alkaline nutrient medium containing a carbonate, is produced with one of the bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 1690 The subject of the invention is characterized by the microorganism used and the conditions under which it is grown to produce a novel alkaline amylase0 The Microorganisms used in the present invention are shown in detail below among those below growth conditions described a good growth to produce the invention alkaline amylase0 These are new strains of the genus Bacillus, namely the bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169. These bacilli were from the Inventors of the present invention discovered.

Jeder der im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, Nr. 135 und Nr. 169 wird aus dem Erdboden isoliert, der in dem Bezirk Yamato der Stadt Kitaadachi (Präfektur Saitama, Japan) gewonnen wird. Each of the bacilli A-40 used in the method according to the invention, A-59, 27-1, 124-1, No. 135 and No. 169 are isolated from the soil in the Yamato District of Kitaadachi City (Saitama Prefecture, Japan).

Die Isolierung der genannten Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169 wurde in der nachstehend angegebenen Weise durchgeführt. Isolation of the named bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169 was performed in the following manner.

Der Erdboden wurde in sterilisiertem Wasser suspendiert und die Suspension auf dem folgenden Nähwrboden gezüchtet: (Zusammensetzung des Nährbodens) a) lösliche Stärke 20 g K2HP04 1 g Hefe extrakt 5 g Pepton 10 g MgS04.7H20 0,2 g Agar-Agar 20 g Wasser 900 ml b) Na2CO3 10 g Wasser 100 ml Nach der Sterilisation bei 115 C während eines Zeitraums von 15 min wurden a) und b) gemischt, Die Platte wurde 24 - 48 Stunden bei 115 0 C gebrütet. The soil was suspended in sterilized water and the suspension grown on the following medium: (composition of the medium) a) soluble Starch 20 g K2HP04 1 g yeast extract 5 g peptone 10 g MgS04.7H20 0.2 g agar-agar 20 g water 900 ml b) Na2CO3 10 g water 100 ml After sterilization at 115 C during a) and b) were mixed over a period of 15 minutes. The plate was left for 24-48 hours incubated at 115 0 C.

Von den auf der Plattenkultur befindlichen Kolonien wurde eine Kolonie eines Mikroorganismus isoliert, der die genannte alkalische Amylase erzeugte. One of the colonies on the plate culture became one of a microorganism that produced said alkaline amylase.

Dieser Mikroorganismus wurde als Bazillus "A-40" bezeichnet, In derselben Weise wurden der Bazillus A-59, der Bazillus 27-1, der Bazillus 124-1, der Bazillus 135 und der Bazillus 169 isoliert. This microorganism was named Bacillus "A-40" in the same Wise became the bacillus A-59, the bacillus 27-1, the bacillus 124-1, the bacillus 135 and the bacillus 169 isolated.

Die Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169 sind bei der American Type Culture Collection (ATCC) unter den Nummern 21592, 21591, 21596, 21593, 21595 bzw0 21594 deponiert und dort ohne Einschränkung öffentlich zugänglich. The bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169 are in the American Type Culture Collection (ATCC) under numbers 21592, 21591, 21596, 21593, 21595 or 0 21594 deposited and publicly accessible there without restriction.

Diese Stämme sind seit dem 19o August 1970, 19. August 1970, dem 19o August 1970, dem 190 August 1970, dem 19. August 1970 bzw. dem 19. August 1970 für die Abgabe an die Öffentlichkeit freigegeben. Die Erfinder haben erkannt, daß die genannten Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169 unter den nachstehend beschriebenen Züchtungsbedingungen eine neuartige alalkalische Amylase erzeugen und anreichern und haben ein Verfahren zur Erzeugung der alkalischen Amylase gemäß der Erfindung entwickelt.These tribes have been around since August 19, 1970, August 19, 1970, the 19th August 1970, August 190, 1970, August 19, 1970 and August 19, 1970 for released to the public. The inventors have recognized that the named bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169 among those described below Cultivation conditions generate and enrich a new kind of alkaline amylase and have a method for producing the alkaline amylase according to the invention developed.

Die Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169 haben folgende Eigenschaften0 Die mikrobiologischen Eigenschaften wurden nach den Verfahren geprüft, die in "Aerobic Spore-forming Bacteria" von Nathan Ro Smith, R. E. Gordon und Fe E. Clark (United States Department of Agriculture, November 1952) und in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (1957) beschrieben worden sind0 Anhand der beigefügten Zeichnungen werden die Eigenschaften und Kennwerte dieser Mikroorganismen beschrieben. The bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169 have the following Properties 0 The microbiological properties were tested using the methods those in "Aerobic Spore-forming Bacteria" by Nathan Ro Smith, R. E. Gordon and Fe E. Clark (United States Department of Agriculture, Nov. 1952) and Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (1957) based on the Attached drawings show the properties and characteristics of these microorganisms described.

Fig. 1 zeigt eine Elektronenphotomikrographie des erfindungsgemäß verwendeten Bazillus A-40. Fig. 1 shows an electron photomicrograph of the invention used Bacillus A-40.

Fig. 2 zeigt eine Elektronenphotomikrographie des erfindungsgemäß verwendeten Bazillus A-590 Fig. 3 zeigt eine Elektronenphoto-mikrographie des erfindungsgemäß verwendeten Bazillus 27-1. Fig. 2 shows an electron photomicrograph of the invention Bacillus A-590 used. Fig. 3 shows an electron photomicrograph of the invention used Bacillus 27-1.

Fig. 4 zeigt eine Elektronenphotomikrographie des erfindungsgemäß verwendeten Bazillus 124-1. Fig. 4 shows an electron photomicrograph of the invention used Bacillus 124-1.

Fig. 5 zeigt eine Elektronenphotomikrographie des erfindungsgemäß verwendeten Bazillus 135. Fig. 5 shows an electron photomicrograph of the invention used Bacillus 135.

Fig. 6 zeigt eine Elektronenphotomikrographie des erfindungsgemäß verwendeten Bazillus 169. Fig. 6 shows an electron photomicrograph of the invention used Bacillus 169.

Fig. 7 und 8 sind Diagramme, aus denen der optimale pH-Wert der erfindungsgemäßen alkalischen Amylase hervorgeht. 7 and 8 are graphs showing the optimum pH of the invention alkaline amylase.

Fig. 9 zeigt in einem Diagramm die Abhängigkeit der erfindungsgemäßen alkalischen Amylase von dem pH-Wert. Fig. 9 shows in a diagram the dependency of the invention alkaline amylase from the pH.

Fig. 10 zeigt in einem Diagramm den Verwendungstemperaturbereich der erfindungsgemäßen alkalischen Amylase. Fig. 10 shows in a diagram the use temperature range the alkaline amylase according to the invention.

Bazillus A-40 (a) Wachstum im Nährboden Nährboden pH-Wert des Nährbodens 7 10,2+) (1) Bouillon sehr gering gering (2) Bouillon und Agar-Agar 1 II II (3) Glucose und Bouillon n n stark (4) Glucose, Bouillon und II II Agar-Agar (5) Gelatine-Nährboden --- gut, unter Verfltissiung (6) Pepton und Wasser --- merklich (7) Kartoffel-Nährboden sehr gering gut +) nach Zusatz von 1 % Na2aO3 Die Abmessungen des Mikroorganismus betragen 0,5 - 0f6 x 2,0 - 2,5 µm. Das Sporangium ist leicht gequollen und die Spore oval, 0,9 - 1,0 x 1,1 - 1,5 µm.Bacillus A-40 (a) Growth in the culture medium Culture medium pH value of the culture medium 7 10.2+) (1) Broth very low low (2) Broth and agar-agar 1 II II (3) Glucose and broth n n strong (4) Glucose, broth and II II agar agar (5) gelatin culture medium --- good, with liquefaction (6) peptone and water --- noticeable (7) potato culture medium very little good +) after adding 1% Na2aO3 The dimensions of the Microorganisms are 0.5 - 0f6 x 2.0 - 2.5 µm. The sporangium is slightly swollen and the spore oval, 0.9-1.0 x 1.1-1.5 µm.

Der Mikroorganisimis hat pertrichöse Geißeln (pertrichous flagella), die in der als Fig. 1 beigefEgten Elektronenphotomikrographie erkennbar sind. Der genannte Bazillus wächst auf dem nachstehend beschriebenen Nährboden (Stärke, Hefeextrakt, Pepton, K2HP04 MgS04.7H20 und Na2CO3, auf einen pH-Wert von 10,2 eingestellt) sehr gut in Form einer gelben Kolonne. Dieser Bazillus zeichnet sich dadurch aus, daß er nicht auf einem neutralen, sondern auf einem alkalischen Nährboden gut wächst (b) Physiologische Eigenschaften (1) Optimale Wachstumsbedingungen: pH-Wert 8 - 10, Temperatur 37 - 40 ° C, Vorhandensein von Luftsauerstoff. The microorganism has pertrichous flagella, which can be seen in the electron photomicrograph attached as FIG. Of the called bacillus grows on the nutrient medium described below (starch, yeast extract, Peptone, K2HP04 MgS04.7H20 and Na2CO3, adjusted to pH 10.2) very much well in the form of a yellow column. This bacillus is characterized by the fact that it does not grow well on a neutral, but on an alkaline medium (b) Physiological properties (1) Optimal growth conditions: pH value 8 - 10, temperature 37 - 40 ° C, presence of atmospheric oxygen.

(2) Bedingungen, unter denen die Bakterien wachsen können: pH-Wert 7,5 - 11, Temperatur bis zu 45 a, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(2) Conditions in which the bacteria can grow: pH 7.5 - 11, temperature up to 45 a, presence of atmospheric oxygen.

Mit Hilfe des 1 % Na2C03 enthaltenden Nährbodens wurden folgende Bestimmungen durchgeführt: (3) Gramfärbbarkeit positiv (4) Voges-Proskauer-Reaktion positiv (5) Nitrat wird reduziert. With the aid of the nutrient medium containing 1% Na2CO3, the following Determinations carried out: (3) Gram stainability positive (4) Voges-Proskauer reaction positive (5) nitrate is reduced.

(6) Katalase positiv (7) Hydrolyse von Gelatin und Casein positiv (8) Hydrolyse von Stärke positiv (9) Verwertung von Citrat geringe Auswertung (10) Verwertung von Ammoniumsalzen werden ausgewertet (11) Erkennbares Wachstum in 540iger Natriumchloridlösung (12) Sehr geringes Wachstum auf Glucose-Nitrat-Nährboden (13) Kein Wachstum unter anaeroben Bedingungen.(6) catalase positive (7) hydrolysis of gelatin and Casein positive (8) hydrolysis of starch positive (9) utilization of citrate low Evaluation (10) Utilization of ammonium salts are evaluated (11) recognizable Growth in 540% sodium chloride solution (12) Very little growth on a glucose-nitrate medium (13) No growth under anaerobic conditions.

(14) Keine Erzeugung von Gas im Nitrat-Nährboden unter anaeroben Bedingungen (15) Erkennbares Wachstum auf Glucose-Asparagin-Nährboden (c) Verwertung von Kohlenstoffträgern In einem 1 % Carbonat enthaltenden Nährboden werden Glucose, Mannose, Cellobiose, Lactose, Sucrose und Mannitol verwertet. Salicin, Arabinose und Xylose werden schlecht verwertet. Es wird Säure erzeugt.(14) No generation of gas in the nitrate culture medium under anaerobic conditions (15) Noticeable growth on glucose-asparagine culture medium (c) Utilization of carbon carriers In a culture medium containing 1% carbonate, glucose, mannose, cellobiose, Lactose, sucrose and mannitol are used. Salicin, arabinose, and xylose go bad recovered. Acid is generated.

Bazillus A-59 (a) Wachstum im Nährboden Nährboden pH-Wert des Nährbodens 7 10,2+) (1) Bouillon gering gering (2) Bouillon und Agar-Agar, merklich (3) Glucose und Bouillon merklich stark (4) Glucose, Bouillon und Agar-Agar. merklich stark (5) Gelatine-Nährboden --- gut (6) Pepton und Wasser merklich (7) Kartoffel-Nährboden merklich gut nach Zusatz von 1 % Na2CO3 Die Abmessungen des Mikroorganismus betragen 0,4 - 0,5 x 2,5 - 4 µm. Das Sporangium ist gequollen und die Spore oval, 0,8 - 1,0 x 1,3 - 1,4 µm.Bacillus A-59 (a) Growth in the culture medium Culture medium pH value of the culture medium 7 10.2+) (1) Broth low low (2) Broth and agar-agar, noticeably (3) Glucose and broth noticeably strong (4) glucose, broth and agar-agar. noticeably strong (5) Gelatine medium --- good (6) Peptone and water noticeably (7) Potato medium noticeably good after the addition of 1% Na2CO3 The dimensions of the microorganism are 0.4 - 0.5 x 2.5 - 4 µm. The sporangium is swollen and the spore is oval, 0.8 - 1.0 x 1.3 - 1.4 µm.

Aus der als Fig. 2 beigefügten Elektronenphotomikrographis geht hervor, daß der Mikroorganismus pertriachse Geißeln (pertrichous Flagella) hat0 Der genannte liazillus wächst auf dem nachstehend beschriebenen Nährboden (Stärke, Hefeextrakt, Pepton, K2HPO4, MgS04.7H20 und Na2CO3, auf einen pH-Wert von 10,2 eingestellt) gut in Form einer weißen Kolonie. Dieser Bazillus zeichnet sich dadurch aus, daß er nicht auf einem neutralen, sondern auf einem alkalischen Nährboden gut wächst. From the electron photomicrograph attached as FIG. 2 it can be seen that that the microorganism has pertrichous flagella (pertrichous flagella) liazillus grows on the nutrient medium described below (starch, yeast extract, Peptone, K2HPO4, MgS04.7H20 and Na2CO3, adjusted to pH 10.2) good in the form of a white colony. This bacillus is characterized by the fact that he grows well not on a neutral, but on an alkaline medium.

(b) Physiologische Eigenschaften (1) Optimale Wachstumsbedingungen: pH-Wert 8 - 10, Temperatur 37 - 40 °C, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(b) Physiological properties (1) Optimal growth conditions: pH value 8 - 10, temperature 37 - 40 ° C, presence of atmospheric oxygen.

(2) Bedingungen, unter denen die Bakterien wachsen können: pH-Wert 7 - 11, Temperatur bis zu 55 °C, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(2) Conditions in which the bacteria can grow: pH 7 - 11, temperature up to 55 ° C, presence of atmospheric oxygen.

Mit Hilfe des 1 Na2CO3 enthaltenden Nährbodens wurden folgende Bestimmungen durchgeführt : (3) Gramfärbbarkeit positiv (veränderlich) (4) Voges-Proskauer-Reaktion nicht klar (5) Nitrat wird reduzierte (6) Katalase positiv (7) Hydrolyse von Gelatin und Casein positiv (8) Hydrolyse von Stärke positiv (9) Verwertung von Citrat wird nicht verwertet (10) Verwertung von Ammoniumsalzen werden verwertet (11) Geringes Wachstum in 7-%iger Natriumchloridlösung (12) Erkennbares Wachstum auf einem Gluoose-Nitrat-Nährboden (13) Erkennbares Wachstum unter anaeroben Bedingungen (14) Keine Erzeugung von Gas in Nitrat-Nährboden unter anaeroben Bedingungen. The following determinations were made with the aid of the nutrient medium containing 1 Na2CO3 carried out: (3) Gram stainability positive (variable) (4) Voges-Proskauer reaction not clear (5) nitrate becomes reduced (6) catalase positive (7) Hydrolysis of gelatin and casein positive (8) hydrolysis of starch positive (9) recovery citrate is not recycled (10) recycling of ammonium salts is recycled (11) Little growth in 7% sodium chloride solution (12) Noticeable growth on a gluoose-nitrate medium (13) noticeable growth under anaerobic conditions (14) No generation of gas in nitrate culture medium under anaerobic conditions.

(15) Erkennbares Wachstum auf Glucose-Asparagin-Nährboden0 (c) Verwertung von Kohlenstoffträgern In einem 1 % Carbonat enthaltenden Medium werden Glucose, Mannose, Salicin, Cellobiose, Lactose, Sucrose, Arabinose, Mannitol und Xylose verwetet. Es wird Säure erzeugt.(15) Noticeable growth on glucose-asparagine medium 0 (c) Utilization of carbon carriers In a medium containing 1% carbonate, glucose, Mannose, salicin, cellobiose, lactose, sucrose, arabinose, mannitol and xylose are used. Acid is generated.

Bazillus Nr. 27-1 (a) Wachstum im Nährboden Nährboden pH-Wert des Nährbodens 7 10,2 (1) Bouillon sehr gering merklich (2) Bouillon und Agar-Agar lt " : (3) Glucose und Bouillon : II stark (4) Glucose, Bouillon und Agar-Agar : " " (5) Gelatine-nährboden --- " (6) Pepton und Wasser --- merklich (7) Kartoffel-Nährboden sehr gering gut 109814/1908 +)nach Zusatz von 1 % Na2CO3 Die Abmessungen des Mikroorganismus betragen 0,5 - 0,8 x 2,0 - 3,G µm. Das Sporangium ist leicht gequollen und die Spore oval, 0,9 - 1,0 x 1,2 - 1,5 µm.Bacillus No. 27-1 (a) Growth in nutrient medium pH value des Culture medium 7 10.2 (1) broth very slightly noticeable (2) broth and agar-agar acc ": (3) Glucose and broth: II strong (4) Glucose, broth and agar-agar:" "(5) gelatin medium ---" (6) peptone and water --- noticeably (7) potato medium very little good 109814/1908 +) after adding 1% Na2CO3 The dimensions of the microorganism are 0.5-0.8 x 2.0-3.0 µm. The sporangium is light swollen and the spore oval, 0.9-1.0 x 1.2-1.5 µm.

Der Mikroorganismus hat pertrichöse Geißeln, die in der als Fig. 3 beigefügten Elektronenphotomikrographie erkennbar sind. Dieser Bazillus wä@hst auf dem nachsteheiid bes@hriebenen Nährboden (lösliche Stärke, Hefeextrakt, Pepton, K2HPO4, MgSO4. 7H2O und Na2CO3, eingestellt auf einen pH-Wert von 10,2) sehr gut. Der Bazillus zeichnet sich dadurch aus, daß er nicht auf einsm neutralen, sondern auf einem alkalischen Nährboden gut wächst. The microorganism has pertrichous flagella, which are shown as Fig. 3 attached electron photomicrograph can be seen. This bacillus grows on the nutrient medium described below (soluble starch, yeast extract, peptone, K2HPO4, MgSO4. 7H2O and Na2CO3, adjusted to a pH value of 10.2) very good. The bacillus is characterized by the fact that it does not focus on a neutral, but rather grows well on an alkaline medium.

(b) Physiologische Eigenschaften (1) Optimale Wachstumsbedingungen: pH-Wert 8 - 10, Temperatur 37 - 40 ° C, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(b) Physiological properties (1) Optimal growth conditions: pH value 8 - 10, temperature 37 - 40 ° C, presence of atmospheric oxygen.

(2) Bedingungen, unter denen die Bakterien wachsen können: pH-Wert 7,5 - 11, Temperatur bis zu 45 ° C, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(2) Conditions in which the bacteria can grow: pH 7.5 - 11, temperature up to 45 ° C, presence of atmospheric oxygen.

Mit Hilfe des 1 % Na2CO3 @nthaltenden Nährbodens wurden folgende Bestimmungen durchgeführt: (3) Gramfärbbarkeit positiv (4) Voges-Pro@kauer-Reaktion # (5) Nitrat wird nicht reduziert. With the aid of the 1% Na2CO3 @containing nutrient medium, the following Determinations carried out: (3) Gram stainability positive (4) Voges-Pro @ kauer reaction # (5) Nitrate is not reduced.

(6) Katalase positiv (7) Hydrolyse von Gelatine und Casein positiv (8) Hydrolyse von Stärke positiv (9) Verwertung von Citrat wird verwertet (10) Verwertung von Ammoniumsalzen werden verwertet (11) Kein erkennbares Wachstum in einer 7-%igen Natriumchloridlösung (12) Sehr geringes Wachstum auf Glucose-Nitrat-Nährboden (13) Kein Wachstum unter anaeroben Bedingungen (14) Keine Erzeugung von Gas in Nitrat-Nährboden unter anaeroben Bedingungen (15) Erkennbares Wachstum auf Glucose-Äsparagin-Nährboden (16) Erzeugung von Indol negativ (c) Verwertung von Kohlenstoffträgern Iu einem 1 % Carbonat enthaltenden Nährboden werden Glucose, Mannose, Cellobiose, Lactose, Sucrose, Arabinose, Mannitol und xylose verwertet und wird Salicin nicht verwertet. Es wird Säure erzeugt.(6) catalase positive (7) hydrolysis of gelatin and casein positive (8th) Hydrolysis of starch positive (9) Utilization of citrate is utilized (10) utilization of ammonium salts are recovered (11) No discernible growth in a 7% Sodium chloride solution (12) Very little growth on glucose-nitrate medium (13) No growth under anaerobic conditions (14) No generation of gas in nitrate culture medium under anaerobic conditions (15) noticeable growth on glucose-asparagin culture medium (16) production of indole negative (c) utilization of carbon carriers Iu an 1% carbonate containing medium will be glucose, mannose, cellobiose, lactose, Sucrose, arabinose, mannitol and xylose are used and salicin is not used. Acid is generated.

Bazillus 124-1 (a) Wachstum im Nährboden Nährboden pH-Wert im Nährboden 7 10w2+) (1) Bouillon sehr gering gering (2) Bouillon und Agar-Agar n (3) Glucose und Bouillon " " stark (4) Glucose, Bouillon und Agar-Agar " n (5) Gelatine-Nährboden --- " (6) Pepton und Wasser --- merklich (7) Kartoffel-Nährboden sehr gering gut +)nach Zusatz von 1 % Na2C03 Die Abmessungen des Mikroorganismus betragen 0,5 - 0s6 x 2,0 - 320 µm. Das Sporangium ist gequollen und die Spore oval, 0,9 - 1,0 x 1,2 - 1,5 µm.Bacillus 124-1 (a) Growth in the culture medium Culture medium pH value in the culture medium 7 10w2 +) (1) Broth very low low (2) Broth and agar agar n (3) Glucose and broth "" strong (4) glucose, broth and agar-agar "n (5) gelatin culture medium --- "(6) peptone and water --- noticeably (7) potato culture medium very poorly good +) after adding 1% Na2C03 The dimensions of the microorganism are 0.5 - 0s6 x 2.0 - 320 µm. The sporangium is swollen and the spore is oval, 0.9 - 1.0 x 1.2 - 1.5 µm.

Der Mikroorganismus hat pertrichöse Geißeln, die in der als Fig. 4 beigefügten Elektronenphotomikrographie erkennbar sind. Der ßazillus wächst auf dem nachstehend beschriebenen Nährboden (lösliche Stärke, Hefeextrakt, Pepton, K2HPO4, MgSO4.7H2O und Na2003, eingestellt auf einen pH-Wert von 10,2) sehr gut0 Er zeichnet sich dadurch aus, daß er nicht auf einem neutralen, sondern auf einem alkalischen Nährboden gut wächet. The microorganism has pertrichous flagella, which are shown as Fig. 4 attached electron photomicrograph can be seen. The acillus grows up the nutrient medium described below (soluble starch, yeast extract, peptone, K2HPO4, MgSO4.7H2O and Na2003, adjusted to a pH value of 10.2) very good0 He draws is distinguished by the fact that it is not on a neutral but on an alkaline one Growing medium grows well.

(b) Physiologische Eigenschaften (1) Optimale Wachstumsbedingungen : pH-Wert 8 - 10, Temperatur 37 - 40 ° C, Vorhandensein von Luftsauerstoff (2) Bedingungen, unter denen die Bakterien wachsen können: pH-Wert 7,5 - 11, Temperatur bis zu 45 C, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(b) Physiological properties (1) Optimal growth conditions : pH value 8 - 10, temperature 37 - 40 ° C, presence of atmospheric oxygen (2) conditions, below which the bacteria can grow: pH value 7.5 - 11, temperature up to 45 C, presence of atmospheric oxygen.

Mit Hilfe des 1 % Na2CO3 enthaltenden Nährbodens wurden folgende Bestimmungen durchgeführt: (3) Gramfärbbarkeit positiv (4) Voges-Proskauer-Reaktion + (5) Nitrat wird nicht reduziert. With the aid of the nutrient medium containing 1% Na2CO3, the following Determinations carried out: (3) Gram stainability positive (4) Voges-Proskauer reaction + (5) Nitrate is not reduced.

(6) Katalase positiv (7) Hydrolyse von Gelatine und Casein positiv (8) Hydrolyse von Stärke positiv (9) Verwertung von Citrat wird verwertet (10) Verwertung von Ammoniumsalzen wird verwertet (11) Kein erkennbares Wachstum in einer eigen Natriumchloridlösung (12) Sehr geringes Wachstum auf Glucose-Nitrat-Nährboden (13) Erkennbares Wachstum unter anaeroben Bedingungen (14) Keine Erzeugung von Gas in einem Nitrat-Nährboden unter anaeroben Bedingungen (15) Erkennbares Wachstum auf Glucoss-Asparagin-Nährboden.(6) catalase positive (7) hydrolysis of gelatin and casein positive (8th) Hydrolysis of starch positive (9) Utilization of citrate is utilized (10) utilization of ammonium salts is recycled (11) No discernible growth in an own Sodium chloride solution (12) Very little growth on glucose-nitrate medium (13) Noticeable growth under anaerobic conditions (14) No generation of gas in a nitrate culture medium under anaerobic conditions (15) noticeable growth Glucoss asparagine medium.

(c) Verwertung von Kohlenstoffträgern In einem 1 % Carbonat enthaltenden Nährboden werden Glucose, Mannose, Cellobiose, Lactose, Sucrose, Mannitol und Xylose verwertet. Dagegen werden Salicin und Arabinose nicht verwertet. Es wird Säure erzeugt.(c) Utilization of carbon carriers in a 1% carbonate containing Glucose, mannose, cellobiose, lactose, sucrose, mannitol and xylose are the nutrient medium recovered. In contrast, salicin and arabinose are not used. Acid is generated.

Bazillenart Nr. 135 (a) Wachstum im Nährboden Nährboden pH-Wert des Nährbodens 7 10t2+) (1) Bouillon sehr gering sehr gering (2) Bouillon und Agar-Agar " n merklich (3) Glucose und Bouillon II II gut (4) Glucose, Bouillon und II fl N Agar-Agar .(5) Gelatine-Nährboden --- gut, mit Verflüssigung (6) Peptone und Wasser --- merklich (7) Kartoffel-Nähboden merklich gut +) nach Zusatz von 1 % Na2CO3 Die Abmessungen des Mikroorganismus betragen 0,6 - 0,8 x 2,5 - 4 µn. Das Sporangium ist leicht gequollen und die Spore oval, 1,0 - 1," x 1,5 -Der Mikroorganismus hat pertrichöse Geißeln (pertrichous flagella), die in der als Fig. 5 beigefügten Elektronenphotomikrographie erkennbar sind. Dieser Bazillus wächst auf dem nachstehend beschriebenen Nährboden (lösliche Stärke, Hefeextrakt, Pepton, K2HFO4, MgSO4,7H2O und Na2CO3, auf einen pH-Wert von 10,2 eingestellt) sehr gut. Er zeichnet sich dadurch aus, daß er nicht auf einem neutralen, sondern auf einem alkalischen Nährboden gut wächst.Bacilli species No. 135 (a) Growth in nutrient medium nutrient medium pH value des Culture medium 7 10t2 +) (1) bouillon very low very low (2) bouillon and agar-agar "n noticeably (3) glucose and broth II II good (4) glucose, broth and II fl N agar agar. (5) gelatin culture medium --- good, with liquefaction (6) peptones and water --- noticeably (7) potato sewing soil noticeably good +) after adding 1% Na2CO3 the The dimensions of the microorganism are 0.6-0.8 x 2.5-4 µn. The sporangium is slightly swollen and the spore oval, 1.0 - 1, "x 1.5 -The microorganism has pertrichous flagella, shown in the electron photomicrograph attached as Fig. 5 are recognizable. This bacillus grows on the medium described below (soluble starch, yeast extract, peptone, K2HFO4, MgSO4,7H2O and Na2CO3, in one pH adjusted to 10.2) very good. He is distinguished by the fact that he does not Grows well on a neutral, but rather on an alkaline medium.

(b) Physiologische Eigenschaften (1) Optimale Wachstumsbedingungen : pH-Wert 8 - 10, Temperaturen von 37 - 40 ° 0, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(b) Physiological properties (1) Optimal growth conditions : pH value 8 - 10, temperatures from 37 - 40 ° 0, presence of atmospheric oxygen.

(2) Bedingungen, unter denen die Bakterien wachsen könnens 0 pH-Wert 7 - 11, Temperatur bis zu 42 C, Vorhandensein von Luftsauerstoff.(2) Conditions under which the bacteria can grow 0 pH 7 - 11, temperature up to 42 C, presence of atmospheric oxygen.

Mit Hilfe des 1 % Na2CO3 enthaltenden Nährbodens wurden folgende Bestimmungen durchgeführt: (3) Gramfärbbarkeit positiv (veränderlich) (4) Voges-Proskauer-Reaktion positiv (5) Nitrat wird reduziert. With the aid of the nutrient medium containing 1% Na2CO3, the following Determinations carried out: (3) Gram stainability positive (variable) (4) Voges-Proskauer reaction positive (5) nitrate is reduced.

(6) Katalase positiv (7) Hydrolyse von Gelatine und Casein positiv (8) Hydrolyse von Stärke positiv (9) Verwertung von Citrat wird nicht verwertet (10) Verwertung von Ammoniumsalzen werden verwertet (11) Kein erkennbares Wachstum in einer 7-%igen Natriumchloridlösung (12) Sehr geringes Wachstum auf einem Glucose-Nitrat-Nährboden (13) Erkennbares Wachstum unter anaeroben Bedingungen (14) Keine Erzeugung von aas in Nitrat-Nährboden unter anaeroben Bedingungen (15) Erkennbares Wachstum auf Glucose-Asparagin-Nähr'boden (c) Verwrertung von Kohlenstoffträgern In einem 1 ,« Carbonat enthaltenden Nährboden werden Glucose, Mannose, Salicin, Oellobiose, Lactose, Sucrose, Arabinose, Mannitol und xylose verwertet. Es wird Säure erzeugt.(6) catalase positive (7) hydrolysis of gelatin and Casein positive (8) hydrolysis of starch positive (9) utilization of citrate will not recycled (10) recycling of ammonium salts are recycled (11) none recognizable Growth in 7% sodium chloride solution (12) Very little growth on a Glucose nitrate culture medium (13) Noticeable growth under anaerobic conditions (14) No production of carrion in nitrate culture medium under anaerobic conditions (15) Detectable Growth on a glucose-asparagine medium (c) Disposal of carbon carriers In a culture medium containing 1, «carbonate, glucose, mannose, salicin, Olelobiose, lactose, sucrose, arabinose, mannitol and xylose are used. It will Generates acid.

Bazillenart Nr. 169 (a) Wachstum im Nährboden Nährboden pH-Wert des Nährbodens 7 10,2+) (1) Bouillon sehr gering gering (2) Bouillon und Agar-Agar N II (3) Glucose und Bouillon " II gut, bei einheitlioher Trübung (4) Glucose, Bouillon und Agar-Agar --- gut (5) Gelatine-Nährboden --- gut, unter Verflüssigung (6) Pepton und Wasser -- nicht gut (7) Kartoffel-Nährboden gering gut +(nach Zusatz von 1 % Na2CO3 Die Abmessungen der Mikroorganismen betragen 0,5 - 0>6 x 2,0 - 3,0 j'im. Das Sporangium ist leicht gequollen und die Spore oval, 1,0 - 1,2 x 1,3 - 1,7 µm.Bacilli species No. 169 (a) Growth in nutrient medium nutrient medium pH value des Medium 7 10.2+) (1) Broth very low low (2) Broth and agar-agar N II (3) Glucose and broth "II good, with uniform cloudiness (4) Glucose, broth and agar-agar --- good (5) gelatin culture medium --- good, with liquefaction (6) peptone and water - not good (7) Potato culture medium poor good + (after adding 1% Na2CO3 The dimensions of the microorganisms are 0.5 - 0> 6 x 2.0 - 3.0 j'im. The sporangium is slightly swollen and the spore oval, 1.0 - 1.2 x 1.3-1.7 µm.

Der Mikroorganismus hat pertrichöse Geißeln (pertrichous flagella), die in der als Fig. 6 beigefügten Elektronenphotomikrographie erkennbar sind. Diese Bazillus wächst auf dem nachstehend beschriebenen Nährboden (lösliche Stärke, Hefeextrakt, Pepton, K2HP04, MgS04.7H20 und Na2CO3, auf einen pH-Wert von 10,2 eingestellt) sehr gut. Er zeichnet sich dadurch aus, daß er nicht auf einem neutralen, sondern auf einen alkalischen Nährboden gut wächst. The microorganism has pertrichous flagella (pertrichous flagella), which can be seen in the electron photomicrograph attached as FIG. 6. These Bacillus grows on the nutrient medium described below (soluble starch, yeast extract, Peptone, K2HP04, MgS04.7H20 and Na2CO3, adjusted to a pH of 10.2) very much Well. He is characterized by the fact that he is not on a neutral, but on an alkaline medium grows well.

(b) Physiologische Eigenschaften (1) Optimale Wachstumseigenschaften : pH-Wert 8 - 10, Temperatur 37 - 40 °C, Vorhandensein von Luftsauerstoff. (b) Physiological properties (1) Optimal growth properties : pH value 8 - 10, temperature 37 - 40 ° C, presence of atmospheric oxygen.

(2) Bedingungen, unter denen die Bakterien wachsen können: 0 pH 7,5 - 11, Temperatur bis zu 45 C, Vorhandensein von Luftsauerstoff. (2) Conditions under which the bacteria can grow: 0 pH 7.5 - 11, temperature up to 45 C, presence of atmospheric oxygen.

Mit Hilfe des 1 % Na2CO3 enthaltenden Nährbodens wurden folgende Bestimmungen durchgeführt: (3) Gramfärbbarkeit positiv (veränderlich) (4) Voges-Proskauer-Reaktion positiv (5) Nitrat wird nicht reduziert. With the aid of the nutrient medium containing 1% Na2CO3, the following Determinations carried out: (3) Gram stainability positive (variable) (4) Voges-Proskauer reaction positive (5) nitrate is not reduced.

(6) Katalase positiv (7) Hydrolyse von Gelatine und Casein positiv (8) Hydrolyse von Stärke positiv (9) Verwertung von Citrat wird nicht verwertet (10) Kein erkennbares Wachstum in 7-%iger Natriumchloridld.sung (11) Sehr geringes Wachstum auf Glucose-Nitrat-Nährboden (12) Erkennbares Wachstum unter anaeroben Bedingungen (13) Keine Erzeugung von Gas in Nitrat-Nährboden unter anaeroben Bedingungen (14) Erkennbares Wachstum auf Glucose-Asparagin-Nährboden (15) Erzeugung von Indolt negativ (c) Verwertung von Kohlenstoffträgern In einem 1 % Carbonat enthaltenden Nährboden werden Glucose, Mannose, Salicin, Cellobiose, Lactose, Sucrose und Mannitol verwertet und werden Arabinose und wlose nicht verwertet. Es wird Säure erzeugt. (6) catalase positive (7) hydrolysis of gelatin and casein positive (8) Hydrolysis of starch positive (9) Utilization of citrate is not utilized (10) No noticeable growth in 7% sodium chloride solution (11) Very little growth on a glucose-nitrate medium (12) Visible growth under anaerobic conditions (13) No generation of gas in nitrate culture medium under anaerobic conditions (14) Noticeable growth on glucose-asparagine medium (15) Negative for indole generation (c) Utilization of carbon carriers in a culture medium containing 1% carbonate glucose, mannose, salicin, cellobiose, lactose, sucrose and mannitol are used and arabinose and wlose are not used. Acid is generated.

Die genannten Mikroorganismen (Bazillenarten Nr. The microorganisms mentioned (bacilli species No.

A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169) unterscheiden sich voneinander. Ihre charakteristischen Unterschiede gehen aus der nachatehenden Tabelle hervor: Eigenschaften Bazillus A-40 A-59 27-1 124-1 135 169 Wachstum im sehr gering sehr sehr sehr sehr neutralen gering gering gering ger. ger.A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169) differ from each other. Their characteristic differences are shown in the table below: properties Bacillus A-40 A-59 27-1 124-1 135 169 Growth in very little very very very very neutral low low low ger. ger.

Nährboden Wachstum in lang- gering sehr sehr sehr sehr 7-%iger NaCl- sam gering gering ger. gering Lösung Wachstum in merk- merk- merk- merk- merk- merk-Glucose lich lich lich lich lich lich Asparagin-Nährboden Voges-Proskauer- + + t + + Reaktion Reduktion von Nitrat pos. pos. neg. neg. pos. neg.Culture medium growth in long- low very very very very 7% NaCl sam low low ger. low solution growth in remark- remark- remark- remark- remark-glucose Lich Lich Lich asparagine culture medium Voges-Proskauer + + t + + reaction Reduction of nitrate pos. pos. neg. neg. pos. neg.

Wachstum neg. merk- neg. merk- merk- merkunter anaero- lich lich lich lich ben Bedingungen Aus der vorstehenden Tabelle geht hervor, daß die genannten Mikroorganismen unterschiedliche Eigenschaften haben.Growth neg. Noticeable- neg. Noticeable- noticeably- noticeably anaerobic Lich ben conditions From the table above it can be seen that the above Microorganisms have different properties.

Eine vergleichende Untersuchung der Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169 nach dem Klassifikationsverfahren, das in den genannten Veröffentlichungen "Aerobic Spere-forming Bacteria" und "Bergey's Manual of Determinative Baoteriology" (1957) (S. 613 ff.) beschrieben ist, ergab, daß die genannten Mikroorganismen in manchen Eigenschaften den bekannten Mikroorganismen der Gattung Bacillus Chneln, sich in anderen Eigenschaften aber vollständig von diesen bekannten Mikroorganismen unterscheiden, und daß die bekannte Gattung keine Ärt besitzt, die hinsichtlich der vorstehend angegebenen Eigenschaften mit den erfindungsgemäß verwendeten Mikroorganismen übersinstimmt. Dies führte zu dem Schluß, daß es sich um neue Stämme der Gattung Bacillus handelt. A comparative study of the bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169 according to the classification procedure described in the cited publications "Aerobic Spere-forming Bacteria" and "Bergey's Manual of Determinative Baoteriology" (1957) (p. 613 ff.), Showed that the microorganisms mentioned in some properties of the known microorganisms of the genus Bacillus Chneln, but completely different from these known microorganisms in other properties distinguish, and that the known genus has no species which with regard to the properties given above with the microorganisms used according to the invention overrides. This led to the conclusion that they are new tribes of the genus Bacillus.

Da alle diese Mikroorganismen aerobe, sporenbildende Bakterien sind, gehören sie zu der Gattung Bacillus.Since all of these microorganisms are aerobic, spore-forming bacteria, they belong to the genus Bacillus.

Eine typische Eigenschaft der genannten Mikroorganismen besteht darin, daß sie in einem alkalischen Nährboden besonders gut wachsen. Der optimale pH-Wert ist 8 - 10. A typical property of the mentioned microorganisms is that they grow particularly well in an alkaline medium. The optimal pH is 8-10.

In dem erfindunigsgemäßen Verfahren kann die erfindungsgemäße alkalische Amylase nicht nur mit Hilfe der vorstehend angegebenen Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169, sondern auch mit natürlichen und künstlichen Mutanten derselben erzeugt werden, sofern diese die genannte alkalische Amylase erzeugen. In the process according to the invention, the inventive alkaline Amylase not only with the help of the above-mentioned bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169, but also with natural and artificial mutants of the same if they produce said alkaline amylase.

In dem erfindungsgemäßen Verfahren kann man die Gärung wie folgt durchführen. In the method according to the invention, fermentation can be carried out as follows carry out.

Ein Carbonat wird einem Nährboden zugesetzt, der als Kohlenstoffträger Stärke, lösliche Stärke und dergleichen enthält. Als Stickstoffträger verlrendet man Hefe extrakt, Pepton, Maisquellwasser und dergleichen. Als anorganische Salze verwendet man verschiedene Carbonate, z. B. Kaliumcarbonat, Natriuicarbonat und Natriumbicarbonat, die beim Ansetzen des Nährbodens der Lösung zugesetzt werden. Der Nährboden wird auf einen pH-Wert von etwa 10,5 eingestellt. A carbonate is added to a nutrient medium, which acts as a carbon carrier Contains starch, soluble starch and the like. Lost as a nitrogen carrier yeast extract, peptone, corn steep liquor and the like. As inorganic salts one uses different carbonates, z. B. potassium carbonate, sodium carbonate and Sodium bicarbonate, which is added to the solution when the culture medium is being prepared. The nutrient medium is adjusted to a pH of about 10.5.

Der auf diese Weise erzeugte Nährboden wird mit einem Stamm eines Mikroorganisimis geimpft, der aus einem der Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135, 169 beeteht und unter Schütteln bei einer Temperatur von etwa 24 - 45 ° C gezüchtet wird. im allgemeinen erreicht die Aktivität des erzeugten Enzyms nach einer Züchtun,gsdauer von etwa 24 - 75 Stur den ein Maximum. The culture medium created in this way becomes one with a stem Microorganisms inoculated from one of the bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135, 169 beeteht and with shaking at a temperature of about 24 - 45 ° C is grown. generally reaches the activity of the enzyme produced after a breeding time of about 24 - 75 stubbornness a maximum.

Da die Zeit bis zum Ereichen der maximalen Aktivität des Enzyms in Abhängigkeit von den Belüftungs- und Rührbedingungen auch bei gleichen Temperaturen und gleich zusammengesetzten Nährböden verschieden lang sein kann, ist es ratsam, die Züchtungsdauer in jedem Fall in Abhängigkeit von Messungen der Aktivität des Enzyms zu bestimmen. Since the time to reach the maximum activity of the enzyme in Depending on the ventilation and stirring conditions, even at the same temperatures and nutrient media of the same composition can be of different lengths, it is advisable to the cultivation time in each case depending on measurements of the activity of the To determine the enzyme.

Die zweite wichtige Bedingung ist der pH-Wert des Nährbodene, Der pH-Wert muß mit Carbonaten oder Bicarbonaten auf einen Wert im Bereich von 7 - 11 eingestellt werden. nei einem zuckerhaltigen Nährboden liegt der optimale pH-Wert im Bereich von 8 - 11. The second important condition is the pH of the nutrient medium pH must be in the range of 7-11 with carbonates or bicarbonates can be set. The optimal pH value is never found in a sugar-containing nutrient medium in the range from 8 - 11.

Zur Isolierung des Enzyms aus der Nährbrühe kann man die gebräuchlichen physikochemischen Verfahren anwenden. The usual methods can be used to isolate the enzyme from the nutrient broth use physicochemical methods.

Beispielsweise kann man nach dem Abkühlen der Kulturbrühe diese durch einen Zusatz von Essigsäure neutralisieren, wenn dies erwünscht ist. Danach wird zum quantitativen Ausfällen des aus der alkalischen Amylase bestehenden Enzyms Äthanol zugesetzt. Das Fällprodukt wird abgetrennt, gründlich mit Äthanol gewaschen und getrocknet. Es wurde bestätigt, daß das auf diese Weise aus der Kultur des genannten Mikroorganismus erhaltene Enzym eine alkalische Amylase mit einem optimalen pH-Wert von etwa 10,5 ist und seine Aktivität beibehält. For example, after the culture broth has cooled down, this can be done neutralize the addition of acetic acid if so desired. After that, will for the quantitative precipitation of the enzyme ethanol, which consists of the alkaline amylase added. The precipitate is separated off, washed thoroughly with ethanol and dried. It was confirmed that in this way from the culture of the above Microorganism obtained enzyme an alkaline amylase with an optimal pH of about 10.5 and maintains its activity.

Die Züchtung muß in einem alkalischen Nährboden mit einer hohen Carbonatkonzentration durchgerührt werden. The cultivation must be in an alkaline medium with a high carbonate concentration be carried out.

Dem Nährboden, der beispielsweise die für das Wachstum des Mikroorganismus erforderlichen Kohlenstoff- und Stickstoffträger enthält, werden verschiedene Oarbonate zugesetzt. Beispielsweise muß man einem Nährboden, der Glucose, KwHPO4, Hefeextrakt, Pepton und MgS04.7H20 enthält, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat oder Natriumbicarbonat zusetzen, wobei die Konzentration des zugesetzten Carbonats zweckmäßig 0,5 - 5 % beträgt. The breeding ground that is used, for example, for the growth of the Microorganism contains the necessary carbon and nitrogen carriers, different carbonates are used added. For example, you have to use a nutrient medium that contains glucose, KwHPO4, yeast extract, Contains peptone and MgS04.7H20, sodium carbonate, potassium carbonate or sodium bicarbonate add, the concentration of the added carbonate expediently 0.5 - 5% amounts to.

(1) Salzzusatz Bei der Erzeugung der alkalischen Amylase ist der Zusatz eines Carbonats zu dem vorstehend angegebenen Nährboden äußerst wichtig. Die nachstehenden Angaben wurden durch Versuche bestätigt.(1) Salt addition In the production of alkaline amylase, the addition is of a carbonate is extremely important to the above nutrient medium. The following Information has been confirmed by tests.

Die Züchtung der verwendeten Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169 und die Erzeugung von Amylase mit Hilfe des vorstehend angegebenen Nährbodens wurden unter Zusatz von 1 % Natriumcarbonat oder von Je 1 s der verschiedenen Carbonate bzw. unter Verwendung desselben Nährbodens durchgeführt, der kein Carbonat, sondern anstattdessen 1 9C Natriumchlorid oder Kaliumohlorid enthielt und mit Natriumhydroxyd auf einen pH-Wert von 10,0 eingestellt worden war. Dae Wachstum des Mikroorganismus (Bazillus A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 oder 169) wurde dadurch bestimmt, daß die Kulturbrühe nach 18 Stunden in eine Küvette mit einem Strahlengang von 1 cm Länge gegeben wurde und ihr Absorptionsgrad bei 660 nm und die Aktivität der Amylase unter den nachstehend angegebenen Bedingungen gemeeeen wurden. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 1 angegeben, aus der hervorgeht, daß das Vorhandensein eines Oerbonats in dem Nährboden eine wichtige Voraussetzung für die Erzeugung der erfindungsgemäßen alkalisohen Amylase ist. The cultivation of the used bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169 and the production of amylase using the above nutrient medium were with the addition of 1% sodium carbonate or 1 s of each of the various carbonates or carried out using the same nutrient medium that is not a carbonate, but instead contained 19C sodium chloride or potassium chloride and with sodium hydroxide adjusted to pH 10.0. Dae growth of the microorganism (Bacillus A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 or 169) was determined by having the After 18 hours, place the culture broth in a cuvette with a beam path of 1 cm length was given and its absorbance at 660 nm and the activity of amylase below have been complied with the following conditions. The results are in of Table 1, from which it can be seen that the presence of an Oerbonat in the nutrient medium an important prerequisite for the production of the invention is alkaline amylase.

Tabelle 1 Salzzusatz 1 % 1 % Na2HPO4 - 1 % 0,5 % 1,0 % 1,0 % Keins1) NaCl KCl NaOH NaHCO3 Na2CO3 Na2CO3 K2CO3 (0,05 M) Ursprünglicher 7,2 10,52) 10,52) 10,5 10,0 10,2 10,5 10,5 pH-Wert Wachstum A-40 0,1 0,8 0,8 0,9 1,2 1,3 1,2 0,67 A-59 0,2 0,8 0,75 1,5 2,5 3,0 1,2 1,2 27-1 0,1 0,5 Q,8 0,9 1,2 1,3 1,2 0,67 124-1 0,1 0,6 0,7 0,8 1,5 1,3 1,1 1,3 135 C,1 0,9 0,9 1,0 1,5 1,4 1,2 1,2 169 0,1 0,5 0,6 0,8 1,5 1,5 1,3 1,2 Amylaseaktivität µg/ml A-40 nicht erzeugt 300 800 1600 800 300 A-59 " " 620 2500 2000 1100 400 27-1 " " 300 1500 2600 1800 300 124-1 " 380 1600 1800 1200 400 135 s " 620 2500 2600 1500 400 169 lt " 350 2700 2200 1300 350 1) Enthielt nur lösli@he Stärke, K2HPO4, Hefeextrakt, Pepton und MgSO4.7H2O 2) Mit NaOH einge@tellt (2) pH-Wert Die nächste wichtige Bedingung für die Züchtung -ist der pH-Wert. Aus den Ergebnissen der nachstehend beschriebenen Versuche geht hervor, daß zur Erzeugung der alkalischen amylase der pH-Wert auf den gewählten Wert im Bereich von 7 - 11 eingestellt werden maß. Die Untersuchung der Wirkung des pH-Werte auf die Erzeugung der alkalischen Amylase durch Veränderung des pH-Werts des vorstehend angegebenen, 1 % Natriumcarbonat enthaltenden Nährbodens mit HCl oder NaOH ergab gemäß Tabelle 2, daß das beste Ergebnis bei einem pH-Wert von 7 - 11, insbesondere von 8 - 11, in Anwesenheit von Glucose erhalten wurde. In diesem Fall wurde als Mikroorganismus der Bazillus A-40 verwendet. Table 1 Salt addition 1% 1% Na2HPO4 - 1% 0.5% 1.0% 1.0% None1) NaCl KCl NaOH NaHCO3 Na2CO3 Na2CO3 K2CO3 (0.05 M) Original 7.2 10.52) 10.52) 10.5 10.0 10.2 10.5 10.5 pH value growth A-40 0.1 0.8 0.8 0.9 1.2 1.3 1.2 0.67 A-59 0.2 0.8 0.75 1.5 2.5 3.0 1.2 1.2 27-1 0.1 0.5 Q.8 0.9 1.2 1.3 1, 2 0.67 124-1 0.1 0.6 0.7 0.8 1.5 1.3 1.1 1.3 135 C, 1 0.9 0.9 1.0 1.5 1.4 1.2 1.2 169 0.1 0.5 0.6 0.8 1.5 1.5 1.3 1.2 Amylase activity µg / ml A-40 not generated 300 800 1600 800 300 A-59 "" 620 2500 2000 1100 400 27-1 "" 300 1500 2600 1800 300 124-1 "380 1600 1800 1200 400 135 s "620 2500 2600 1500 400 169 lt" 350 2700 2200 1300 350 1) Contains only soluble starch, K2HPO4, yeast extract, peptone and MgSO4.7H2O 2) With NaOH adjusted (2) pH The next important condition for breeding - is the pH. From the results of the below described Experiments show that the pH value increases to produce the alkaline amylase the selected value can be set in the range from 7 to 11. The investigation the effect of pH values on the production of alkaline amylase through change the pH of the above nutrient medium containing 1% sodium carbonate with HCl or NaOH showed according to Table 2 that the best result at a pH value of 7-11, especially 8-11, was obtained in the presence of glucose. In this case, the A-40 bacillus was used as the microorganism.

Tabelle 2 Amylaseaktivität µg/ml pH-Wert 7 8 9 10 11 Nährboden mit 1 % Na2CO3 < 100 350 1600 1800 300 ohne Na2CO3 < 100 < 100 < 100 < 100 < 100 Bei der Verwendung des Bazillus 27-1 wurden die in der Tabelle 3 angegebenen Ergebnisse erzielt. Table 2 Amylase activity µg / ml pH value 7 8 9 10 11 nutrient medium with 1% Na2CO3 <100 350 1600 1800 300 without Na2CO3 <100 <100 <100 < 100 <100 When using the 27-1 bacillus, the values given in Table 3 were used Results achieved.

Tabelle 3 Anylaseaktivität, µg/ml pH-Wert 7 8 9 10 11 Nährboden mit 1 % Na2CO3 200 1000 2600 2800 800 ohne Na2CO3 <100 <100 <100 c100 <100 Aus der Tabelle 3 geht hervor, daß das beste Ergebnis bei einem pH-Wert von 7 - 11, insbesondere von 8 - 11, in Anwesenheit von Carbonat, erzielt wird. Table 3 Anylase activity, µg / ml pH value 7 8 9 10 11 nutrient medium with 1% Na2CO3 200 1000 2600 2800 800 without Na2CO3 <100 <100 <100 c100 <100 the end Table 3 shows that the best result at a pH value of 7-11, in particular from 8-11, in the presence of carbonate, is achieved.

Bei der Verwendung der Bazillen A-59, 124-1, 135 und 169 als Prüforganismen waren die Ergebnisse ähnlich wie in der Tabelle 3 angegeben. When using the bacilli A-59, 124-1, 135 and 169 as test organisms the results were similar to those given in Table 3.

Durch Veränderung des pH-Werts des Nährbodens mit NaHCO3 oder Na2CO3 wurde dann die Wirkung des pH-Werts auf die Erzeugung der alkalischen Amylase untersucht. Die Frgebuisse sind in der Tabelle 4 angegeben, Dabei wurde als Mikroorganismus der Bazillus 27-1 verwendet. By changing the pH of the culture medium with NaHCO3 or Na2CO3 the effect of pH on the production of alkaline amylase was then examined. The Frgebuisse are given in Table 4, The microorganism was the bacillus 27-1 used.

Tabelle 4 Salzzusatz 0,5 % 1,0 % 2,0 % 0,5 % 1,0 % keins¹) NaHCO3 NaHCO3 NaHCO3 Na2CO3 Na2CO3 ur sprünglicher 7,0 8,9 c,o 9,2 9,7 10,3 pH-Wert EndpH-Wert 7,0 9,4 9,5 9,6 9,6 9,8 Wachstum 0,1 028 0,9 1,0 0,9 1,0 Amylase nicht aktivität er- 750 1500 1800 1400 1500 µg/ml Zeugt 1) Enthielt nur lösliche Stärke, K2HPO4, Hefesxtrakt, Pepton, MgSO4.7H2O Unter den vorstehend angegebenen Züohtungsbedingungen wird daher der Nährboden mit jedem der genannten Mikroorganismen (Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 und 169) geimpft, der in dem gleichen Nährboden vorgebrütet worden war. Der Mikroorganismus wird dann unter Schütteln des Nährbodens und unter geeigneten Bedingungen, z. B. Table 4 Salt addition 0.5% 1.0% 2.0% 0.5% 1.0% none1) NaHCO3 NaHCO3 NaHCO3 Na2CO3 Na2CO3 originally 7.0 8.9 c, o 9.2 9.7 10.3 pH value final pH value 7.0 9.4 9.5 9.6 9.6 9.8 Growth 0.1 028 0.9 1.0 0.9 1.0 Amylase inactivity he 750 1500 1800 1400 1500 µg / ml witnesses 1) Contains only soluble starch, K2HPO4, Yeast extract, peptone, MgSO4.7H2O Among those given above Breeding conditions therefore become the breeding ground for each of the microorganisms mentioned (Bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169) inoculated in the same culture medium had been pre-incubated. The microorganism is then shaking the nutrient medium and under suitable conditions, e.g. B.

0 einer Temperatur von 37 a, beispielsweise 24 - 75 Stunden lang gezüchtet. Nach dem Ablauf der Züchtungsdauer werden die Zellen entfernt und kann die Brühe gegebenenfalls mit Essigsäure oder einer ähnlichen Säure neutralisiert werden. 0 a temperature of 37 a, for example 24 - 75 hours bred. After the cultivation period has expired, the cells are removed and can neutralize the broth with acetic acid or a similar acid, if necessary will.

Dann wird zum Ausfällen der erzeugten alkalischen Amylase ein organisches Lösungsmittel, wie Äthanol oder Aceton1 zugesetzt. Zur Gewinnung der gewünschten Substanz wird das Fällprodukt entwässert und getrocknet.Then, the generated alkaline amylase becomes organic to precipitate Solvent such as ethanol or acetone1 added. To obtain the desired Substance, the precipitated product is dehydrated and dried.

Die so erhaltene alkalische amylase hat eine Aktivität von 1500 - 3000 µg/ml und einen optimalen pH-Wert von etwa 10,5 im alkalischen Bereich. The alkaline amylase obtained in this way has an activity of 1500 - 3000 µg / ml and an optimal pH value of about 10.5 in the alkaline range.

Das aus der alkalischen Amylase gemäß der Erfindung bestehende Enzym hat folgende physikoohemisohen Eigenschaften (1) Molekulargewicht bei Bestimmung mit Sephadex (eingetragenes Warenzeichen) : 30 000 bis 40 000 (2) Optimaler pH-Wert und Bereich der etabilen pH-Werte: Aus den Figuren 7 und 8 geht hervor, daß der optimale pH-Wert etwa bei 10,5 liegt. The enzyme consisting of the alkaline amylase according to the invention has the following physico-chemical properties (1) molecular weight when determined with Sephadex (Registered Trade Mark): 30,000 to 40,000 (2) Optimal pH and range of stable pH values: FIGS. 7 and 8 show that the optimal pH is around 10.5.

In den Figuren 7, 8, 9 und 10 sind mit A-40", "A-59", "27-1", "124-1", "135" und "169" die durch das Züchten der Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 bzw. 169 erhaltenen Enzyme bezeichnet. In Figures 7, 8, 9 and 10, A-40 "," A-59 "," 27-1 "," 124-1 ", "135" and "169" those obtained by growing bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1, 135 and 169 enzymes obtained, respectively.

Das erfindungsgemäße Enzym wurde mit Pufferlösungen versetzt, die verschiedene pH-Werte hatten und 3 mM Ca++ enthielten, und dans 15 min lang auf 55 °C erhitzt. Danach wurde die Restaktivität bestimm@. Die Ergehnisse sind in der Fig. 9 dargestellt. Es wurden folgende Pufferlösungen in einer Konzentration von 0,05 M verwendet : Acetat-Pufferlösung, rH 4 - 6 Tris-maleat-Pufferlösung, pH 6 - 9 Glycin-NaCl-NaOH-Pufferlösung, pH 9 - 10,7 NaCO3-NaOH-Pufferlösung, 11 - 12 (3) Untersuchung der enzymatischen Aktivität Die alkalische Amylase wurde zweckmäßig verdünnt (0,01 ml), zu 0,4 ml einer 0,15-%igen Stärkelösung (0,1 M Glycin-NaCl-NaOH-Pufferlösung, pH-Wert 10,5) zugesetzt und 10 min bei 40 C gebrütet. Die Reaktion wurde durch Zusatz von 0,5 ml 0,1 n HOl beendet. Zu dem Gemisch wurden 3 ml einer 0,005-%ogen Jodlösung zugesetzt. Der Absorptionsgrad einer Probe bei 700 nm wurde gemessen. Zur Korrektur der abgelesenen Werte wurde der Wert für eine Kontrollösung abgesogen, die aus einem Gemisch der Enzymlösung mit 0,1 n HOl vor dem Zusatz der Stärkelösung bestand. The enzyme according to the invention was mixed with buffer solutions which had different pH values and contained 3 mM Ca ++, and then for 15 min Heated to 55 ° C. The remaining activity was then determined. The results are in the Fig. 9 shown. The following buffer solutions were used in a concentration of 0.05 M used: acetate buffer solution, rH 4 - 6 tris-maleate buffer solution, pH 6 - 9 Glycine-NaCl-NaOH buffer solution, pH 9-10.7 NaCO3-NaOH buffer solution, 11-12 (3) Study of enzymatic activity The alkaline amylase became useful diluted (0.01 ml), to 0.4 ml of a 0.15% starch solution (0.1 M glycine-NaCl-NaOH buffer solution, pH 10.5) was added and the mixture was incubated at 40 ° C. for 10 minutes. The reaction was by addition finished by 0.5 ml of 0.1 N HOl. To the mixture was added 3 ml of a 0.005% iodine solution added. The absorbance of a sample at 700 nm was measured. For correction of the readings, the value for a control solution was drawn off from a Mixture of the enzyme solution with 0.1 N HOl existed before the addition of the starch solution.

Definition der enzymatischen Aktivität: Als Einheit der enzymatischen Aktivität wurde die Menge des Enzyms bezeichnet, die den Absorptionsgrad bei 700 nm unter den vorstehend angegebenen Normalbedingungen um 10 % herabsetzte. Definition of enzymatic activity: As a unit of enzymatic Activity was called the amount of the enzyme that had the absorbance at 700 nm reduced by 10% under the normal conditions given above.

(4) Verwendungstemperaturbereich Die enzymatische Aktivität wurde nach dem üblichen Verfahren unter Veränderung der Temperatur gemessen. Dabei wurden der Lösung 2 mM CaCl2 als Stabilisator zugesetzt.(4) Use temperature range The enzymatic activity was measured according to the usual method with changing the temperature. There were 2 mM CaCl2 was added to the solution as a stabilizer.

In der Fig. 10 wurde die Aktivität bei 30 mit 100 % ange-0 nommen. Die Aktivität bei 50 C betrug dann 650 % (:Bazillen A-40, A-59, 27-1, 124-1) und bei 60 C C 670 % (Bazillen 135 und 169). Alle Versuche wurden bei einem pH-Wert von 10,5 durchgeführt.In FIG. 10, the activity at 30 was assumed to be 100%. The activity at 50 C was then 650% (: Bacilli A-40, A-59, 27-1, 124-1) and at 60 C 670% (bacilli 135 and 169). All experiments were done at pH performed by 10.5.

(5) Bedingungen für eine thermische Inaktivierung: Das erfindungsgemäße Enzym wurde in einer M/20 Glyzin-NaCl-NaOH-Pufferlösung mit dem pH-Wert 10,3 gelöst.(5) Conditions for thermal inactivation: The invention Enzyme was dissolved in a M / 20 glycine-NaCl-NaOH buffer solution with a pH of 10.3.

Die Lösung wurde bei verschiedenen Temperaturen 1 5 min lang erhitzt. Dann wurde die Restaktivität gemessen. Die Messung erfolgte in An- oder Abwesenheit von 5 mM CaCl2. Aus der Tabelle 5 geht'hervor, daß bei einer Erhitzung auf etwa 30 - 50 ° C in Anwesenheit von Ca++ die Restaktivität 100 % und bei einer Erhitzung auf etwa 55 0 die Restaktivität 50 % betrug.The solution was heated at various temperatures for 15 minutes. The residual activity was then measured. The measurement was carried out in the presence or absence of 5 mM CaCl2. From table 5 it goes that when heated to about 30 - 50 ° C in the presence of Ca ++ the remaining activity 100% and when heated to about 55 0 the residual activity was 50%.

Tabelle 5 Bedingungen für eine thermische Inaktivierung Bezeichnung des Mikroorganismus A-40 A-59 27-1 124-1 135 169 30 C 100 100 100 100 100 100 % 40 C 100 100 100 100 100 100 ffi 50 0 - Ca 57 65 55 42 93 94 % + Ca 100 100 100 99 100 100% 55 ° C - Ca 5,2 6,1 622 6,3 65,8 5722 % + Ca 58,5 62,1 67,5 22,7 94,3 95,3 % 60 ° C 5,1 7,1 8,9 8,2 4,5 7,3 94 (6) Inhibierung und Aktivierung Die Inhibierung und Aktivierung des erfindungsgemäßen Enzyms wurden untersucht. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 6 angegeben. Table 5 Conditions for a thermal inactivation designation of the microorganism A-40 A-59 27-1 124-1 135 169 30 C 100 100 100 100 100 100% 40 C 100 100 100 100 100 100 ffi 50 0 - Ca 57 65 55 42 93 94% + Ca 100 100 100 99 100 100% 55 ° C - Ca 5.2 6.1 622 6.3 65.8 5722% + Ca 58.5 62.1 67.5 22.7 94.3 95.3% 60 ° C 5.1 7.1 8.9 8.2 4.5 7.3 94 (6) Inhibition and activation The inhibition and activation of the enzyme according to the invention were investigated. The results are given in Table 6.

Tabelle 6 Reagens Konzen- Bezeichnung des Mikroorganismus tration A-40 A-59 27-1 124-1 135 169 Äthylendiamintetra- 10-2 M 105 107 100 111 100 105 % essigsäure p-Chlorque cksilberbenzo- 10-@ M 97 109 100 98 100 100 % nat Harnstoff 8 M 0 0 0 0 0 0 (7) Reinigungsverfahren Das durch die erfindungsgemäße Züchtung des Mikroorganismus (Bazillus A-40 bzw. A-59) erhaltene Kultur filtrat (2000 mg/ml) wurde durch eine Kolonne geführt, die Diäthylaminoäthyloallulose enthielt, die mit 0,1 M Phosphat-Pufferlösung (pH-Wert 0,8) im Gleichgewicht gehalten wurde. Table 6 Reagent Concentration Name of the microorganism tration A-40 A-59 27-1 124-1 135 169 Ethylenediamine tetra- 10-2 M 105 107 100 111 100 105 % acetic acid p-chloro-cksilverbenzo- 10- @ M 97 109 100 98 100 100% nat urea 8 M 0 0 0 0 0 0 (7) Purification process The result of the breeding according to the invention of the microorganism (Bacillus A-40 or A-59) obtained culture filtrate (2000 mg / ml) was passed through a column containing diethylaminoäthyloallulose, which with 0.1 M phosphate buffer solution (pH 0.8) was kept in equilibrium.

Das aus der erfindungsgemäßen alkalischen Amylase bestehende Enzym wurde vollständig adsorbiert und gründlich mit einer 0,1 M Phosphat-Pufferlösung (pH-Wert 8,0) gewaschen. Die adsorbierte alkalische Amylase wurde mit einer 0,1 M Phosphat-Pufferlösung (pH-Wert 8,0) eluiert, die 0,4 M NaCl enthielt. The enzyme consisting of the alkaline amylase of the present invention was completely adsorbed and thoroughly washed with a 0.1 M phosphate buffer solution (pH 8.0). The adsorbed alkaline amylase was with a 0.1 Eluted M phosphate buffer solution (pH 8.0) containing 0.4 M NaCl.

Durch dieses Verfahren wurde die Reinheit der genannten alkalischen Amylase etwa auf das Dreißigfache erhöht. Through this procedure, the purity was said to be alkaline Amylase increased about thirty-fold.

Bei einem Vergleich der physikoohemischen Eigenschaften des von der erfindungsgemäßen alkalischen Amylase gebildeten Enzyms mit denen der bekannten Amylasen erkennt man somit, daß es sich um eine neuartige, alkalische Amylase handelt, die sich von allen bekannten Amylasen unterscheidet. When comparing the physico-chemical properties of the alkaline amylase according to the invention formed enzyme with those of the known Amylases can thus be recognized that it is a novel, alkaline amylase, which differs from all known amylases.

Wirksamkeit in der praktischen Anwendung Das von der erfindungsgemäßen alkalischen Amylase gebildete Enzym ist ein stärkeabbe\auendes Enzym, das einen optimalen pH-Wert von etwa 10,5 im alkalischen Bereich hat und auch in Anwesenheit von Detergentien eine enzymatische Aktivität besitzt.Effectiveness in practical application That of the invention The enzyme formed by alkaline amylase is a starch-degrading enzyme that has an optimal pH of about 10.5 in the alkaline range and also in presence of detergents has an enzymatic activity.

Die enzymatische Aktivität der vorliegenden alkalischen Amylase in dem Detergens wird nachstehend im Zusammenhang mit der Wirksamkeit des erfindungsgemäßen Enzyms anhand von Versuchsergebnissen erläutert. The enzymatic activity of the present alkaline amylase in the detergent is described below in connection with the effectiveness of the invention Enzyme explained on the basis of test results.

1) Verwendung : Wenn das erfindungsgemäße Euzym als Zusatz zu Detergentien verwendet wird, setzt man das erfindungsgemäße Enzym in Pulverforme dem Detergens, z. B. Natriumdodecylbenzolsulfonat (DBS) direkt zu. Dieser Mischvorgang unterliegt keinerlei einschränkungen, weder hinsichtlich des pH-Werte des Detergene, noch des Miechungsverhältnisses zwischen den Dotergenabestandteilen und den Zusätzen. Beispielsweise ermialt man eine gute Wi@ksamkeit, d. h., ein gutes Amylolyeevermögen, wann das erfindungsgemäße Enzym in einer Zenzentration von 0,01 - 1,0 Gewichtsprozant vorhanden ist.1) Use: If the euzym according to the invention as an additive to detergents is used, the enzyme according to the invention is added in powder form to the detergent, z. B. sodium dodecylbenzenesulfonate (DBS) directly to. This mixing process is subject to No restrictions whatsoever, neither with regard to the pH values of the detergent nor the Miking ratio between the dotergen components and the additives. For example one encourages a good skill, i. i.e., a good amylolyte power when that The enzyme according to the invention is present in a concentration of 0.01-1.0 percent by weight is.

2) Wirksamkeit (enzymatischis Aktivität in Detergentien) Das erfindungsgemäße Enzym wurde wäkrent einer bastimpton Zeit@auer bei 40 °C in @@weas@heit einse Detergées gebrü@@t Da@@@@ @urde die Rest@@tivität des Enzyme Versuchsmethode: Die Konzentration des mit dem erfindungsgemäßen Enzym in Berührung stehenden Detergens betrug 0,1 %. Als Detergens wurde Natriumdodecylbenzolsulfonat (DBS) verwendet. Während der Reaktion wurde der pH-Wert mit Hilfe einer Glycin-NaCl-NaOH-Pufferlösung auf 10,5 eingestellt.2) Effectiveness (enzymatic activity in detergents) The invention Enzyme was used for a bastimpton time except at 40 ° C in a detergent gebrü @@ t There @@@@ @ was the rest @@ activity of the enzyme Trial method: The concentration of the detergent in contact with the enzyme of the invention was 0.1%. Sodium dodecylbenzenesulfonate (DBS) was used as a detergent. During the reaction, the pH was adjusted using a glycine-NaCl-NaOH buffer solution set to 10.5.

Reaktionslösung: Detergens, 0,5 9§ 2 ml Glycin-NaCl-NaOH-Pufferlösung 3 ml Erfindungsgemäßes Enzym (2000 µg/ml) 1 ml Zusatz für Wasser 4 ml Ergebnisse: Restaktivität des erfindungsgemäßen Enzyms (Reaktionstemperatur 40 ° C) Bezeichnung des Restaktivität, % Mikroorganismis nach O min 30 min 60 min A-40 100 68 50 A-59 100 89 49 27-1 100 85 51 124-1 100 79 49 135 100 101 98 169 100 102 97 Die Erfindung schafft eine neuartige, alkalische Amylase, Eine erzeugt wird durch das Züchten eines neuartigen Stammes eines Mikroorganismus, und zwar eines der Bazillen A-40 (ATCC 21592), A-59 (ATCC 21591), 27-1 (ATCC 21596) 124-1 (ATCC 21593), 135 (ATCC 21595) und 169 (ATCC 21594) in eine Nährboden, der ein Carbonat, anorganische Stoffe, einen Stickstoff@r@ger und einen Kohlenstoffträger enthält, und die aus dem Nährboden isoliert wird Aus den physikochemischen Eigenschaften dieser alkalischen Amylase geht h2rVOr, daß sie ein neuartiges Enzym bildet, das ei ob ron den bekannten Amylasen unterscheidet.Reaction solution: detergent, 0.5 9 § 2 ml glycine-NaCl-NaOH buffer solution 3 ml enzyme according to the invention (2000 µg / ml) 1 ml additive for water 4 ml Results: Residual activity of the enzyme according to the invention (reaction temperature 40 ° C.) Designation of residual activity,% microorganism after 0 min 30 min 60 min A-40 100 68 50 A-59 100 89 49 27-1 100 85 51 124-1 100 79 49 135 100 101 98 169 100 102 97 the Invention creates a novel, alkaline amylase, one produced by the Growing a novel strain of a microorganism, one of the bacilli A-40 (ATCC 21592), A-59 (ATCC 21591), 27-1 (ATCC 21596) 124-1 (ATCC 21593), 135 (ATCC 21595) and 169 (ATCC 21594) in a nutrient medium containing a carbonate, inorganic Contains substances, a nitrogen @ r @ ger and a carbon carrier, and which consists of Is isolated from the nutrient medium from the physicochemical properties of these alkaline Amylase makes sure that it produces a new type of enzyme, the egg over the known Amylases are different.

Nachstehen@ werden praktische Ausführungsbeispiele der Erfindung bes@@rieben: Beispiel 1 Zusammensetzung des Nährbodens: Lösliche Stärke 20 g K2HPO4 1 g Hefeextrakt 5 g Pepton 10 g MgSO4.7H2O 0,25 g Die vorstehend angegebene Zusammensetzung wurde in 900 ml Wasser aufgelöst und 15 min bei 115 ° C sterilisiert. The following are practical embodiments of the invention bes @@ rub: Example 1 Composition of the nutrient medium: Soluble starch 20 g K2HPO4 1 g yeast extract 5 g peptone 10 g MgSO4.7H2O 0.25 g The composition given above was dissolved in 900 ml of water and sterilized at 115 ° C. for 15 min.

Eine Lösung von 10 g wasserfreiem Natriumcarbonat in 100 ml Wasser wurde 15 min bei 115 0 C sterilisiert. Durch Mischen dieser beiden Lösungen erhielt man einen Nährboden mit einem pH-Wert von etwa 10,3. Von diesem Nährboden wurden 50 ml in abgesetzte Schüttelkolben (Sakaguchi-Kolben) mit einem Fassungsvermögen von 500 ml gegeben. Der in den Eolben befindliche Nährboden wurde dann mit dem Bazillus A-40 (ATCC 21592) geimpft, der in dem gleichen Nährboden übernacht vorgebrütet worden war und in den Kolben 68 Stunden lang bei 37 C unter Schütteln gezüchtet wurde. Nach dem Entfernen der Zellen von der Kultur enthielt 1 ml des Kulturfiltrats 2100 Einheiten alkalische Amylase.A solution of 10 g of anhydrous sodium carbonate in 100 ml of water was sterilized at 115 ° C. for 15 min. By mixing these two Solutions gave a nutrient medium with a pH of about 10.3. Of this Culture medium were 50 ml in separated shake flasks (Sakaguchi flasks) with a Given a capacity of 500 ml. The culture medium in the Eolben became then inoculated with the bacillus A-40 (ATCC 21592) which overnight in the same culture medium pre-incubated and kept in the flask for 68 hours at 37 C with shaking was bred. After removing the cells from the culture, 1 ml contained des Culture filtrate 2100 units of alkaline amylase.

Diese Kulturbrühe wurde gründlich abgekühlt. Dann wurden 3 Volumen Aceton zugesetzt, worauf das Enzym quantitativ ausgefällt wurde. Dieses Fällprodukt wurde mit Aceton gründlich gewaschen und luftgetrockne,t Von einem Liter der Kulturbrühe wurden etwa 11 g eines bräunlichen Pulvers erhalten. This culture broth was thoroughly cooled. Then there were 3 volumes Acetone was added, whereupon the enzyme was precipitated quantitatively. This precipitate was washed thoroughly with acetone and air-dried, t From one liter of the culture broth about 11 g of a brownish powder were obtained.

Die auf diese Weise erhaltene Probe hat einen optimalen pH-Wert von etwa 10,5 und stellt eine alkalische Amylase mit einer spezifischen Aktivität von 200000 µg/g dar. The sample obtained in this way has an optimal pH of about 10.5 and represents an alkaline amylase with a specific activity of 200,000 µg / g.

Beispiel 2 Zusammensetzung des Nährbodens Lösliche Stärke 20 g K2HPO4 Ig Hefeextrakt 5g Pepton 10 g Mg804.7H20 0,25 g Die vorstehend angegebene Zusammensetzung wurde in 900 ml Wasser aufgelöst und 15 min bei 115 ° C sterilisiert. Eine Lösung von 10 g wasserfreiem Natriumcarbonat in 100 ml Wasser wurde 15 min bei 115 ° sterilisiert. Durch Mischen dieser beiden Lösungen wurde ein Nährboden mit einem pH-Wert von etwa 10,3 erhalten. Von diesem Nährboden wurden 50 ml in abgesetzte Schüttelkolben (Sakaguchi-Kolben) mit einem Fassungsvermögen von 500 ml gegeben. Der in den Kolben befindliche Nährboden wurde dann mit dem Bazillus A-59 (ATCC 21591) geimpft, der in dem gleichen Nährboden übernacht vorgebrütet worden war und in den Kolben 68 Stunden bei 37 ° C unter Schütteln gezüchtet wurde6 Nach dem Entfernen der Zellen von der Kultur enthielt 1 ml dieses Kulturfiltrats 2500 Einheiten alkalische Amylase.Example 2 Composition of the nutrient medium Soluble starch 20 g K2HPO4 Ig yeast extract 5g peptone 10g Mg804.7H20 0.25g The above stated composition was dissolved in 900 ml of water and 15 min at 115 ° C sterilized. A solution of 10 g of anhydrous sodium carbonate in 100 ml of water was sterilized at 115 ° for 15 min. Mixing these two solutions was get a nutrient medium with a pH of about 10.3. From this breeding ground were 50 ml in separate shake flasks (Sakaguchi flasks) with a capacity of 500 ml. The culture medium in the flask was then infected with the bacillus A-59 (ATCC 21591), which had been pre-incubated overnight in the same culture medium and cultured in the flasks with shaking at 37 ° C for 68 hours6 Nach after removing the cells from the culture, 1 ml of this culture filtrate contained 2500 Units of alkaline amylase.

Diese Kulturbrühe wurde gründlich abgekühlt. Dann boden 3 Volumen Aceton zugesetzt, worauf das Enzym quantitativ ausgefällt wurden eises Fällprodukt wurde mit Aceton grundlich gewaschen urd @uftgetrocknet. Von einem Liter der Kulturbrüne wurden etwa 11 g eines bräunlichen Pulvers erhalten. This culture broth was thoroughly cooled. Then bottom 3 volumes Acetone was added, whereupon the enzyme was precipitated quantitatively was thoroughly washed with acetone and air-dried. From one liter of the Kulturbrüne about 11 g of a brownish powder were obtained.

Die auf diese Weise erhaltene Probe hat einen optimalen pH-Wert von etwa 10,5 und stellt eine alkalische Amylase mit einer spezifiechen Aktivität von 210 000 µg/g dalJ, @l@@@ @@är@@ K@@@@4 @@@@@@tran@ Pepton 10 g Mg504 .7H20 0,25 g Die vorstehend angegebene Zusammensetzung wurde in 900 ml Wasser aufgelöst und 15 min bei 115 C sterilisiert. Eine Lösung von 10 g wasserfreiem Natriumcarbonat in 100 ml Wasser wurde 15 min bei 115 C sterilisiert. The sample obtained in this way has an optimal pH of about 10.5 and is an alkaline amylase with a specific activity of 210 000 µg / g dalJ, @l @@@ @@ är @@ K @@@@ 4 @@@@@@ tran @ Peptone 10 g Mg504 .7H20 0.25 g The above composition was dissolved in 900 ml of water dissolved and sterilized at 115 C for 15 min. A solution of 10 g of anhydrous sodium carbonate sterilization was carried out at 115 ° C. for 15 minutes in 100 ml of water.

Durch Mischen dieser beiden Lösungen wurde ein Nährboden mit einem pH-Wert von etwa 10,3 erhalten. Von diesem Nährboden wurden 50 ml in abgesetzte Schüttelkolben (Sakaguchi-Kolben) mit einer Kapazität von 500 ml gegeben. Der in den Kolben befindliche Nährboden wurde dann mit dem Bazillus 27-1 (ATCC 21596) geimpft, der in dem gleichen Nährboden iibernacht vorgebrütet worden war und in den Kolben 68 Stunden lang bei 37 C unter Schütteln gezüchtet wurde. Nach dem Entfernen der Zellen von der Kultur enthielt 1 ml dieses Kultur filtrats 3100 Einheiten alkalische Amylase.Mixing these two solutions made a culture medium with a Maintained a pH of about 10.3. 50 ml of this nutrient medium were deposited in Shake flasks (Sakaguchi flasks) with a capacity of 500 ml. The in The culture medium located in the flask was then inoculated with Bacillus 27-1 (ATCC 21596), which had been pre-incubated overnight in the same medium and in the flask Cultured for 68 hours at 37 ° C with shaking. After removing the Cells from the culture contained 1 ml of this culture filtrate 3100 units alkaline Amylase.

Beispiel 4 Zusammensetzung des Nährbodens: Lösliche Stärke 20 g E2HP04 1g Hefeextrakt sg Pepton 10 g MgS04.7H20 0,25 g Die vorstehend angegebene Zusammensetzung wurde in 900 ml Wasser gelöst und 15 min bei 115 0 C sterilisiert.Example 4 Composition of the nutrient medium: Soluble starch 20 g E2HP04 1g yeast extract so-called peptone 10 g MgS04.7H20 0.25 g The composition given above was dissolved in 900 ml of water and sterilized at 115 ° C. for 15 min.

Eine Lösung von 10 g wasserfreiem Natriumcarbonat in 100 ml Wasser wurde 15 min bei 115 ° C sterilisiert. Durch Mischen dieser beiden Lösungen wurde ein Nährboden mit einem pH-Wert von etwa 10,3 hergestellt. Von diesem Nährboden wurden 50 ml in abgesetzte Schüttelkolben (Sakaguchi-Kolben) mit einer Kapazität von 500 ml gegeben0 Der in den Kolben befindliche Nährboden wurde dann mit dem Bazillus 124-1 (ATCC 21593) geimpft, der in aen gleichen Nährboden übernacht vorgebrütet worden war und in den Kolben 68 Stunden lang bei 37 ° C unter Schüttoln gezüchtet wurde. Nach dem Entfernen der Zellen von der Kultur enthielt 1 ml dieses Kulturfiltrats 1900 Einheiten alkalische Amylase.A solution of 10 g of anhydrous sodium carbonate in 100 ml of water was sterilized at 115 ° C. for 15 min. By mixing these two Solutions, a medium with a pH of about 10.3 was made. Of this Culture medium were 50 ml in separated shake flasks (Sakaguchi flasks) with a Capacity of 500 ml. The nutrient medium in the flask was then inoculated with the bacillus 124-1 (ATCC 21593), which overnight in the same culture medium had been pre-incubated and in the flask for 68 hours at 37 ° C under Schüttoln was bred. After removing the cells from the culture, 1 ml contained it Culture filtrate 1900 units of alkaline amylase.

Diese Kulturbrühe wurde gründlieh abgekühlt. This culture broth was thoroughly cooled.

Darj-i wurden 3 Volumen Aceton zugesetzt, worauf das Enzym quantitativ ausgefällt wurde0 Dieses Fällprodukt wurde mit Aceton gründlich gewaschen und luftgetrocknet. Von einem Liter der Kulturbrühe wurden etwa 11 g eines bräunlichen Pulvers erhalten.Darj-i was added to 3 volumes of acetone, whereupon the enzyme quantitatively This precipitate was washed thoroughly with acetone and air-dried. About 11 g of a brownish powder were obtained from one liter of the culture broth.

Die auf diese Weise erhaltene Probe hat einen optimalen pH-Wert von etwa 10,5 und stellt eine alkalische Amylase mit einer spezifischen Aktivität von 170 000 tug/g dar. The sample obtained in this way has an optimal pH of about 10.5 and represents an alkaline amylase with a specific activity of 170,000 tug / g.

Beispiel 5 Zusammensetzung des Nährbodens: Lösliche Stärke 20 g K2HPO4 1 g Hefeextrakt 5 g Pepton 10 g MgSO4.7H2O 0,25 g Die vorstehend angegebene Zusanmiensetzung wurde in 900 ml Wasser gelöst und 15 min bei 115 C sterilisiert.Example 5 Composition of the nutrient medium: Soluble starch 20 g K2HPO4 1 g yeast extract 5 g peptone 10 g MgSO4.7H2O 0.25 g The above The specified composition was dissolved in 900 ml of water and sterilized at 115 ° C. for 15 minutes.

Eine Lösung von 10 g wasserfreiem Natriumcarbonat in 100 ml Wasser wurde 15 min bei 115 C steriliaiert. Durch Mischen dieser beiden Lösungen wurde ein Nährboden mit einem pH-Wert von etwa 10,3 erhalten. Von diesem Nährboden wurden 50 ml in abgesetzte Schüttelkolben (Sakaguchi-Kolben) mit einem Fassungsvermögen von 500 ml gegeben. Der in den Kolben befindliche Nährboden wurde dann mit dem Bazillus 135 (ATCC 21595) geimpft, der über nacht in dem gleichen Nährboden vorgebrütet worden war, und in den Kolben 68 Stunden lang bei 37 C unter Sohütteln gezüchtet wurde. Nach dem Entfernen der Zellen von der Kultur enthielt 1 ml dieses Kulturfiltrats 1900 Einheiten alkalische Amylase.A solution of 10 g of anhydrous sodium carbonate in 100 ml of water was sterilized at 115 ° C. for 15 min. Mixing these two solutions was get a nutrient medium with a pH of about 10.3. From this breeding ground were 50 ml in separate shake flasks (Sakaguchi flasks) with a capacity of 500 ml. The culture medium in the flask was then infected with the bacillus 135 (ATCC 21595), which had been pre-incubated overnight in the same nutrient medium and grown in the flask with shaking at 37 ° C for 68 hours. After removing the cells from the culture, 1 ml contained this culture filtrate 1900 units of alkaline amylase.

Diese Kulturbrühe wurde gründlich abgekühlt. Dann wurden 3 Volumen Aceton zugesetzt, worauf das Enzym quantitativ ausgefällt wurde. Dieses Fällprodukt wurde mit Aceton gründlich gewaschen und luftgetrocknet. Von einem Liter der Kulturbrühe wurden etwa 11 g eines bräunlichen Pulvers erhalten. This culture broth was thoroughly cooled. Then there were 3 volumes Acetone was added, whereupon the enzyme was precipitated quantitatively. This precipitate was washed thoroughly with acetone and air dried. From one liter of the culture broth about 11 g of a brownish powder were obtained.

Die auf diese Weise erhaltene Probe hat einen optimalen pH-Wert von etwa 10,5 und stellt eine alkalische Amylase mit einer spezifischen Aktivität von 200 000 µg/g dar. The sample obtained in this way has an optimal pH of about 10.5 and represents an alkaline amylase with a specific activity of 200,000 µg / g.

Beispiel 6t Zusammensetzung des Nährbodens: Lösliche Stärke 20 g K2HPO4 1g Hefeextrakt 5g Pepton 109814/1908 10 g MgS04.7H20 0125 g Die vorstehend angegebene Zusammensetzung wurde in 900 ml Wasser gelöst und 15 min bei 115 C sterilisiert.Example 6t Composition of the nutrient medium: Soluble starch 20 g K2HPO4 1g yeast extract 5g peptone 109814/1908 10 g MgS04.7H20 0125 g the The above composition was dissolved in 900 ml of water and 15 min at 115 C sterilized.

Eine Lösung von 10 g wasserfreiem Natriumcarbonat in 100 ml Wasser wurde 15 min bei 115 C sterilisiert. Durch Mischen dieser beiden Lösungen wurde ein Nährboden mit einem pH-Wert von etwa 10,3 erhalten. Von diesem Nährboden wurden 50 ml in abgesetzte Schüttelkolben (Sakaguchi-Kolben) mit einem Fassungsvermögen von 500 ml gegeben, Der in den Kolben befindliche Nährboden wurde dann mit dem Bazillus 169 (MCC 21594) geimpft, der in dem gleichen Nährboden übernacht vorgebrütet worden war, und in den Kolben 68 Stunden lang g bei 37 ° C unter Schtftteln gezüchtet wurde. Nach dem Entfernen der Zellen von der Kultur enthielt 1 ml dieses Kulturfiltrats 2100 Einheiten alkalische Amylase.A solution of 10 g of anhydrous sodium carbonate in 100 ml of water was sterilized at 115 ° C. for 15 min. Mixing these two solutions was get a nutrient medium with a pH of about 10.3. From this breeding ground were 50 ml in separate shake flasks (Sakaguchi flasks) with a capacity of 500 ml, the nutrient medium in the flask was then with the bacillus 169 (MCC 21594), which had been pre-incubated overnight in the same culture medium and cultured in the flask for 68 hours at 37 ° C with shakes. After removing the cells from the culture, 1 ml contained this culture filtrate 2100 units of alkaline amylase.

Diese KulturbrUhe wurde gründlich abgekEhlto Dann wurden 3 Volumen Aceton zugesetzt, worauf das Enzym quantitativ ausgefällt wurde. Dieses Fällprodukt wurde mit Aceton gründlich gewaschen und luftgetrocknet. Von einem Liter der Kulturbrühe wurden etwa 11 g eines bräunlichen Pulvers erhalten. This culture broth was thoroughly cooled to then 3 volumes Acetone was added, whereupon the enzyme was precipitated quantitatively. This precipitate was washed thoroughly with acetone and air dried. From one liter of the culture broth about 11 g of a brownish powder were obtained.

Die auf diese Weise erhaltene Probe hat einen optimalen pH-Wert von etwa 10,5 und stellt eine alkalische Amylase mit einer spezifischen Aktivität von 220 000 dar. The sample obtained in this way has an optimal pH of about 10.5 and represents an alkaline amylase with a specific activity of 220,000.

Claims (6)

Patentansprüche:Patent claims: 1. Alkalische Amylase, dadurch gekennzeichnet, daß sie ein Enzym ist, das aufgrund einer Schätzung mit Hilfe des Gelfiltrationsverfahrens ein Molekulargewicht von etwa 30 000 bis 40 000 hat und das einen optimalen pH-Wert von 10 - 11 hat. 1. Alkaline amylase, characterized in that it is an enzyme is a molecular weight based on an estimate using the gel filtration method from about 30,000 to 40,000 and that has an optimal pH of 10-11. 2. Verfahren zur Erzeugung einer alkalischen Amylase, welche die im Anspruch 1 angegebenen physikochemischen Eigenschaften hat, dadurch gekennzeichnet, daß ein Nährboden, der aus einem Carbonat, einem Eohlenstoffträger, einem Stickstoffträger und einer anorganischen Substanz besteht, mit einem Stamm eines Mikroorganismus, und zwar des Bazillus A-40 (ATCC 21592), des Bazillus A-59 (ATCC 21591), des Bazillus 27-1 (ATCC 21596), des Bazillus 124-1 (ATCC 21593), des Bazillus 135 (ATCC 21595) oder des Bazillus 169 (ATCC 21594), geimpft wird, der Mikroorganismus in dem Nährboden bei einem pH-Wert von 7 - 11 so lange gezüchtet wird, daß der Nährboden eine beträchtliche enzymatische Aktivität besitzt und in dem Nährboden die genannte alkalische Amylase gebildet wird, und diese alkalische Amylase von dem genannten Nährboden abgetrennt wird. 2. Process for the production of an alkaline amylase which the has specified physicochemical properties in claim 1, characterized in that that a nutrient medium consisting of a carbonate, a carbon carrier, a nitrogen carrier and an inorganic substance, with a strain of a microorganism, namely the Bacillus A-40 (ATCC 21592), the Bacillus A-59 (ATCC 21591), the Bacillus 27-1 (ATCC 21596), Bacillus 124-1 (ATCC 21593), Bacillus 135 (ATCC 21595) or Bacillus 169 (ATCC 21594), the microorganism in the medium at a pH of 7-11 is grown so long that the nutrient medium is a considerable Has enzymatic activity and in the nutrient medium the said alkaline amylase is formed, and this alkaline amylase is separated from said nutrient medium will. 3e Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Züchtung unter aeroben Bedingungen submers unter Rühren durchgeführt wird. 3e method according to claim 2, characterized in that the cultivation is carried out under aerobic conditions submerged with stirring. 4. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Züchtung bei einer Temperatur von etwa 24 - 45 0 durchgeführt wird. 4. The method according to claim 2, characterized in that the cultivation is carried out at a temperature of about 24-45 °. 5. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Züchtung während einer Dauer von etwa 24 - 75 h erfolgt. 5. The method according to claim 2, characterized in that the cultivation takes place over a period of about 24-75 hours. 6. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Nährboden einen pH-Wert von 8 - ii hat. L e e r s e i t e 6. The method according to claim 2, characterized in that the nutrient medium has a pH of 8 - ii. L e r s e i t e
DE19702044513 1969-09-10 1970-09-08 Process for the production of alkaline amylase Expired DE2044513C (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP7192769 1969-09-10
JP7192769 1969-09-10
JP6478570A JPS505272B1 (en) 1970-07-24 1970-07-24
JP6478570 1970-07-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE2044513A1 true DE2044513A1 (en) 1971-04-01
DE2044513C DE2044513C (en) 1973-04-19

Family

ID=

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0145798A1 (en) * 1983-12-09 1985-06-26 Miles Kali-Chemie GmbH &amp; Co. KG Biochemisches Werk Bacillus subtilis DSM 2704 and process for the preparation of alpha-amylase
WO1999042567A1 (en) * 1998-02-18 1999-08-26 Novo Nordisk A/S Alkaline bacillus amylase
WO2001014532A2 (en) * 1999-08-20 2001-03-01 Novozymes A/S Alkaline bacillus amylase
US7078213B1 (en) 1998-02-18 2006-07-18 Novozymes A/S Alkaline Bacillus amylase

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0145798A1 (en) * 1983-12-09 1985-06-26 Miles Kali-Chemie GmbH &amp; Co. KG Biochemisches Werk Bacillus subtilis DSM 2704 and process for the preparation of alpha-amylase
US4610964A (en) * 1983-12-09 1986-09-09 Miles Kali-Chemie Gmbh & Co. Kg Novel microorganism and its use in a process for the preparation of alpha amylase
WO1999042567A1 (en) * 1998-02-18 1999-08-26 Novo Nordisk A/S Alkaline bacillus amylase
US7078213B1 (en) 1998-02-18 2006-07-18 Novozymes A/S Alkaline Bacillus amylase
WO2001014532A2 (en) * 1999-08-20 2001-03-01 Novozymes A/S Alkaline bacillus amylase
WO2001014532A3 (en) * 1999-08-20 2001-09-27 Novozymes As Alkaline bacillus amylase

Also Published As

Publication number Publication date
DK133623C (en) 1976-11-08
DK133623B (en) 1976-06-21
NL168551C (en) 1982-04-16
NL7013396A (en) 1970-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2026092C3 (en) Process for the production of an alkaline protease
DE2247832B2 (en) Process for the microbiological production of an alkaline cellulase, which at 40 degrees C has an optimal activity in the pH range of 5-10
DE2413963B2 (en) Process for the production of 2-keto-L-gulonic acid and its salts by microbiological means
DE3018767C2 (en)
DE2614114B2 (en) Process for the production of creatinine amidohydrolase
DE2939269A1 (en) METHOD FOR THE OPTICAL SEPARATION OF D, L-2-AMINO-4-METHYLPHOSPHINOBUTTERIC ACID
DE3029348A1 (en) METHOD FOR PRODUCING L-ASPARAGIC ACID
DE1767653A1 (en) Process for the production of isoamylase
DE2502706A1 (en) METHOD FOR PRODUCING 7-AMINO-CEPHEM COMPOUNDS
DE2153232B2 (en) Process for producing an amylose
DE2549924C2 (en)
EP0145798B1 (en) Bacillus subtilis dsm 2704 and process for the preparation of alpha-amylase
DE2453860C2 (en) Production of cyclodextrin
DE2723463A1 (en) METHOD FOR PRODUCING 7-AMINO-CEPHEM COMPOUNDS USING MOLDS
DE2044513A1 (en) Alkaline amylase from bacillus species
DE2344006C3 (en) PROCESS FOR THE BIOTECHNICAL TREATMENT OF WASTEWATER CONTAINING EPSILON-CAPROLACTAM
DE2044513C (en) Process for the production of alkaline amylase
DE3741198C2 (en)
DE3332639C2 (en) Process for the production of maltopentaose
DE2659878C3 (en) Process for the production of creatinamidinohydrolase
DE2107461A1 (en) Process for the production of alkaline dextranase enzyme
DE1924431C2 (en) Antibiotic 17967RP and its microbiological production
DE2318650A1 (en) PROCESS FOR THE PRODUCTION OF DEACETYLCEPHALOSPORIN C
DE1792819C2 (en) Tenebrimycin antibiotic VI and a process for its preparation
DE2218783C3 (en) Process for the production of an alkaline amylase

Legal Events

Date Code Title Description
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)
E77 Valid patent as to the heymanns-index 1977