DE202015009883U1

DE202015009883U1 - Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung

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Publication number: DE202015009883U1
Application number: DE202015009883.5U
Authority: DE
Original assignee: Mochida Pharmaceutical Co Ltd; Nippon Suisan Kaisha Ltd
Current assignee: Nissui Corp Jp; Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-09-17
Filing date: 2015-09-17
Publication date: 2021-01-15
Anticipated expiration: 2025-09-18
Also published as: JP7190013B2; JPWO2016043251A1; US11648229B2; US20170252315A1; US9918953B2; US10576053B2; JP6953504B2; US10864185B2; EP3196280A4; US20200222356A1; US20210030707A1; US20190015375A1; EP3196280A1; JP2022008611A; WO2016043251A1; US20180147176A1; JP2020073667A; JP6664328B2; CN106795452A; US10105340B2

Abstract

Eine Zusammensetzung, enthaltend Eicosapentaensäurealkylester, die, bei Messung mit Gaschromatographie, 96-99 Flächen-% eines Eicosapentaensäurealkylesters umfasst,
wobei der Gehalt eines Arachidonsäurealkylesters 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt, wobei der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt,
wobei der Gehalt an Alkylestern von gesättigten Fettsäuren 0,5 Flächen-% oder weniger beträgt und
wobei die Zusammensetzung eine der folgenden Bedingungen (i) - (iii) erfüllt:
(i) der Gehalt eines Octadecatetraensäure(C18:4 n-3)alkylesters beträgt 0,4 Flächen-% oder weniger,
(ii) der Gehalt eines Nonadecapentaensäure(C19:5 n-3)alkylesters beträgt 0,2 Flächen- % oder weniger und
(iii) der Gehalt eines Eicosatetraensäure(C20:4 n-3)alkylesters beträgt 0,7 Flächen-% oder weniger.

Description

TECHNISCHES GEBIET
Die vorliegende Erfindung betrifft Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzungen und Verfahren zur Herstellung derselben.
STAND DER TECHNIK
Als eine der ω3-Fettsäuren ist Eicosapentaensäure (EPA; (5Z,8Z,11Z,14z,17Z)-Icosa-5,8,11,14,17-pentaensäure; im Folgenden bedeutet die einfache Bezeichnung „Eicosapentaensäure“ oder „EPA“ diese Substanz) als ein Bestandteil bekannt, der eine Wirkung gegen Arteriosklerose, eine Blutplättchenaggregation unterdrückende Wirkung, eine Blutfett senkende Wirkung usw. zeigt. Als Esterform von Eicosapentaensäure wird Eicosapentaenoat (auch als „EPA-E“ oder „Ethylicosapentat“ beschrieben) als Reformkost, freiverkäuflicher Switch, Arzneimittel usw. vertrieben.
Aufgrund dieser herausragenden Funktionen von EPA wird auch über viele Verfahren zur Herstellung von EPA oder EPA-E berichtet. Zum Beispiel ist bekannt, dass, wenn ein aus einem natürlichen Öl oder Fett erhaltenes Gemisch einer Rektifikation mit drei oder mehr Destillationssäulen unter hohem Vakuum unterzogen wird, eine Fraktion, die im Wesentlichen nur aus einer C₂₀-Fettsäure oder einem Ester davon besteht, erhalten wird, und weiter raffiniert werden kann, um ein hochreines EPA oder eine Esterform davon zu erhalten (s. JP H5-222392A ).
Andererseits ist bekannt, dass das raffinierte EPA-E auch Ethylester von von EPA verschiedenen Fettsäuren, die von Fischöl als Ausgangsmaterial abgeleitet sind, und Verunreinigungen, die bei dem Raffinierungsverfahren gebildet werden, enthält. Beispielhafte von EPA verschiedene Fettsäuren, die von Fischöl als Ausgangsmaterial abgeleitet sind, beinhalten Arachidonsäure, die als eine ω6-Fettsäure klassifiziert ist und als eine Substanz betrachtet wird, die für kardiovaskuläre Ereignisse ungünstig ist, und gesättigte Fettsäuren. Als Verunreinigungen, die bei dem Raffinierungsverfahren gebildet werden, sind Fettsäuren bekannt, die aus thermischer Denaturierung beim Raffierungsverfahren entstehen und bei denen die fünf cis-Doppelbindungen von EPA teilweise zu trans isomerisiert wurden (z.B. European Journal of Lipid Science and Technology, 108 (2006) 589-597, „Geometrical isomerization of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acid at high temperature"; JAOCS, 66 (1989) 1822-1830, „Eicosapentaenoic acid geometrical isomer artifacts in heated fish oil esters‟).
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
TECHNISCHES PROBLEM
Es besteht Bedarf an der Entwicklung eines verbesserten Verfahrens, mit dem man wirksam Zusammensetzungen erhalten kann, die Eicosapentaensäurealkylester, wie z.B. Ethyleicsoapentaenoat, mit hohen Reinheiten enthalten und welche geringere Gehalte an Verunreinigungen aufweisen.
Deshalb ist es ein Ziel der vorliegenden Erfindung, Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzungen mit verringerten Gehalten an Verunreinigung bereitzustellen. Ein anderes Ziel der vorliegenden Erfindung ist die Bereistellung von Verfahren zur Herstellung derartiger Zusammensetzungen. Ein noch weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung verschiedener Anwendungen von Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzungen.
LÖSUNGEN DES PROBLEMS
Die vorliegenden Erfinder haben umfangreiche Untersuchungen zu diesen Problemen durchgeführt und gefunden, dass das Verfahren zur Raffinierung von Ethyleicosapentaenoat zu Verunreinigungen führt, die äußerst ähnliche Strukturen wie Ethyleicosapentaenoat aufweisen und die von Ethyleicosapentaenoat schwer zu trennen sind, und dass Zusammensetzungen hergestellt werden können, in denen die Gehalte dieser Verunreinigungen verringert sind und die Eicosapentaensäurealkylester mit hohen Reinheiten enthalten; die vorliegende Erfindung wurde auf der Grundlage dieser Feststellungen vervollständigt. Verunreinigungen, die durch die Untersuchungen der vorliegenden Erfinder nachgewiesen wurden, beinhalten z.B. einen Ethylester von Arachidonsäure (C20:4n-6), der die gleiche Kohenstoffzahl wie Ethyleicosapentaenoat aufweist, andere Verunreinigungen mit ähnlichen Strukturen wie Ethyleicosapentaenoat (die jeweiligen Ethylester von C20:0, C20:4n-3, C20:5n-3(5,9,11,14,17), C18:3n-3, C18:4n-3, C19:0, C19:5n-3, C21:5n-3 und C22:6n-3) und mono-trans-Isomere von Ethyleicosapentaenoat.
Genauer gesagt beinhalten Aspekte der vorliegenden Erfindung, die folgenden, sind jedoch nicht darauf beschränkt.
[1] Eine Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie 96-99 Flächen-% eines Eicosapentaensäurealkylesters umfasst, wobei der Gehalt eines Arachidonsäurealkylesters 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt und der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
[2] Die Zusammensetzung nach [1], wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen und di-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
[3] Die Zusammensetzung nach [1], wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen, di-trans-Formen und tri-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
[4] Die Zusammensetzung nach [1], wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen, di-trans-Formen, tri-trans-Formen und tetra-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
[5] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[4], wobei der Gehalt einer der mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters, bei dem eine der Doppelbindungen an den Positionen 5, 14 und 17 desselben trans ist, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
[6] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[5], wobei der Gehalt einer mono-trans-Form des Eicosapentaensäurealkylesters, bei dem die Doppelbindung an Position 11 desselben trans ist, 1,0 Flächen-% oder weniger, 0,9 Flächen-% oder weniger, 0,8 Flächen-% oder weniger, 0,6 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
[7] Eine Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie unter den folgenden Analysebedingungen 96-99 Flächen-% Ethyleicosapentaenoat umfasst, wobei der Gehalt eines Ethylarachidonats 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt und wobei die Summe der Gehalte an Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027, 1,062 oder 1,077 erscheinen, wobei die mittlere Retensionszeit von Ethyleicosapentaenoat als 1 genommen wird, 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen- % oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt:

[Gaschromatrographische Analysebedingungen: GC-FID-Messbedingungen]
GC: 6890N (Agilent Technologies)
Säule: DB-WAX (Agilent Technologies) 30 m x 0,25 mm ID, 0,25 µm Filmdicke
Trägergas: Helium, 0,5 ml/min
Einspritzöffnung: 300°C, 1 µl, Split (1:100)
Säulentemperatur: 200°C (konstant)
Detektor: FID, 300°C
Zusatzgas: Stickstoff, 40 ml/min

[8] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[7], wobei der Arachidonsäurealkylester-Gehalt 0,1 Flächen-% oder weniger oder 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt.
[9] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[8], wobei der Gehalt eines Eicosatetraensäurealkylesters 0,7 Flächen-% oder weniger, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
[10] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[9], wobei der Gehalt eines Octadecatetraensäurealkylesters 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
[11] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[10], wobei der Gehalt eines Nonadecapentaensäurealkylesters 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,049 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger beträgt.
[12] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[11], wobei der Eicsoapentensäurealkylester Ethyleicosapentaenoat oder Methyleicosapentaenoat ist.
[13] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[12], wobei der Gehalt eines n-Nonadecansäure(C19:0)alkylesters 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger beträgt.
[14] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[13], wobei der Gehalt eines Arachinsäure(C20:0)alkylesters 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger beträgt.
[15] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[14], wobei der Gehalt an Alkylestern gesättigter Fettsäuren 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
[16] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[15], wobei der Gehalt eines Icosa-5,9,11,14,17-pentaensäure(C20:5n-3(5,9,11,14,17))alkylesters 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger beträgt.
[17] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[16], wobei der Gehalt eines Henicosapentaensäurealkylesters 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,03 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger beträgt.
[18] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[17], wobei der Gehalt des Eicosapentaensäurealkylesters 96-98 Flächen-% beträgt.
[19] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[18], wobei der Gehalt eines Dihomo-y-linolensäurealkylesters 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt.
[20] Die Zusammensetzung nach einem von [1]-[19], wobei der Gehalt an Alkylestern einfach ungesättigter Fettsäuren mit einer Kohlenstoffzahl von 20 oder mehr 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt.
[21] Ein Arzneimittel, umfassend die Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung nach einem von [1]-[20] als einen wirksamen Bestandteil.
[22] Das Arzneimittel nach [21], weiter umfassend einen pharmazeutisch verträglichen Additivbestandteil.
[23] Das Arzneimittel nach [21] oder [22], bei welchem es sich um ein therapeutisches oder prophylaktisches Mittel für mindestens eine Erkrankung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Arteriosklerose, Hirninfarkt, kardiovaskulärem Infarkt, Thrombose, lebensstilbedingten Erkrankungen, Allergien, entzündlichen Erkrankungen und Krebsarten, handelt.
[24] Ein Verfahren zur Herstellung von hochkonzentriertem Ethyleicosapentaenoat, umfassend Ethylveresterung eines Eicosapentaensäure enthaltenden Vorlauföls and anschließend Durchführen von Destillation und Chromatographie, wobei die Destillation durch Durchführen einer Rektifizierung durchgeführt wird, wobei der Vakuumgrad 0,2 Torr oder weniger beträgt und bei einer Gesamtsäulentemperatur von 190°C oder weniger, wodurch der Gehalt an Ethylarachidonat verringert wird, während die Bildung einer trans-Form aufgrund von Wärme unterdrückt wird.
[25] Ein Verfahren zur Herstellung einer einen hochkonzentrierten Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzung, welches Durchführen von Rektifizierung an einer Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzung, wobei der Vakuumgrad 0,2 Torr oder weniger beträgt und bei einer Gesamtsäulentemperatur von 190°C oder weniger, und Durchführen einer Konzentrationsbehandlung an der rektifizierten Zusammensetzung unter Verwendung von Chromatographie umfasst, wobei die Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung durch Alkylveresterung eines Vorlauföls, welches Eicosapentaensäure enthält, erhalten wird.
[26] Das Verfahren nach [25], wobei die Alkylveresterung unter Verwendung eines Niederalkohols mit der Kohlenstoffzahl 1 oder Kohlenstoffzahl 2 durchgeführt wird.
[27] Das Verfahren nach einem von [24]-[26], wobei die Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung nach einem von [1]-[20] durch Durchführen von Rektifizierung und Chromatographie erhältlich ist.
[28] Das Verfahren nach einem von [24]-[27], wobei die Rektifizierung kontinuierliche Rektifizierung unter Verwendung von zwei oder mehr Destillationssäulen ist.
[29] Das Verfahren nach einem von [24]-[28], wobei die Chromatographie Umkehrphasen-Chromatographie ist.
[30] Das Verfahren nach einem von [24]-[29], wobei das Vorlauföl ein von einem Meeresprodukt als Vorlauf abgeleitetes Öl oder Fett ist.
[31] Verwendung der Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzung nach einem von [1]-[20] bei der Herstellung von Nahrungsmitteln.
[32] Verwendung der Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzung nach einem von [1]-[20] bei der Herstellung eines Arzneimittels.
[33] Die Verwendung nach [32], wobei das Arzneimittel ein therapeutisches oder prophylaktisches Mittel für mindestens eine Erkrankung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Arteriosklerose, Hirninfarkt, kardiovaskulärem Infarkt, Thrombose, lebensstilbedingten Erkrankungen, Allergien, entzündlichen Erkrankungen und Krebsarten, ist.
[34] Verwendung der Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzung nach einem von [1]-[20] als ein wirksamer Bestandteil eines therapeutischen oder prophylaktischen Mittels für mindestens eine Erkrankung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Arteriosklerose, Hirninfarkt, kardiovaskulärem Infarkt, Thrombose, lebensstilbedingten Erkrankungen, Allergien, entzündlichen Erkrankungen und Krebsarten.
[35] Ein Verfahren zur Prävention, Behandlung oder Linderung von Erkrankungen, umfassend Verabreichen des Arzneimittels nach einem von [21]-[23] an einen Patienten, der von mindestens einer Erkrankung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Arteriosklerose, Hirninfarkt, kardiovaskulärem Infarkt, Thrombose, lebensstilbedingten Erkrankungen, Allergien, entzündlichen Erkrankungen und Krebsarten, betroffen ist oder Gefahr läuft, von diesen betroffen zu werden.
Aspekte der vorliegenden Erfindung beinhalten auch die folgenden, sind jedoch nicht darauf beschränkt:

(1) Eine Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie 96-99 Flächen-% Ethyleicosapentaenoat umfasst, wobei der Gehalt eines Ethylarachidonats 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt und der Gehalt an mono-trans-Formen des Ethyleicosapentaenoats 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(2) Die Zusammensetzung nach (1), wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen und di-trans-Formen des Ethyleicosapentaenoats 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(3) Die Zusammensetzung nach (1), wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen, di-trans-Formen und tri-trans-Formen des Ethyleicosapentaenoats 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(4) Die Zusammensetzung nach (1), wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen, di-trans-Formen, tri-trans-Formen und tetra-trans-Formen des Ethyleicosapentaenoats 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(5) Die Zusammensetzung nach einem von (1)-(4), wobei der Gehalt an einer aus den mono-trans-Formen des Ethyleicosapentaenoats, bei denen eine der Doppelbindungen an den Positionen 5, 14 und 17 derselben trans ist, 0,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(6) Die Zusammensetzung nach einem von (1)-(5), wobei der Gehalt einer mono-trans-Form des Ethyleicosapentaenoats, bei der die Doppelbindung an Position 11 derselben trans ist, 1,0 Flächen-% oder weniger beträgt.
(7) Eine Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie unter den folgenden Analysebedingungen 96-99 Flächen-% Ethyleicosapentaenoat umfasst, wobei der Gehalt eines Ethylarachidonats 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt, wobei die Summe der Gehalte an Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027, 1,062 oder 1,077 erscheinen, wobei die mittlere Retensionszeit von Ethyleicosapentaenoat als 1 genommen wird, 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt:
- [Gaschromatographische Analysebedingungen: GC-FID-Messbedingungen]
- GC: 6890N (Agilent Technologies)
- Säule: DB-WAX (Agilent Technologies) 30 m x 0,25 mm ID, 0,25 µm Filmdicke
- Trägergas: Helium, 0,5 ml/min
- Einspritzöffnung: 300°C, 1 µl, Split (1:100)
- Säulentemperatur: 200°C (konstant)
- Detektor: FID, 300°C
- Zusatzgas: Stickstoff, 40 ml/min
(8) Die Zusammensetzung nach einem von (1)-(7), wobei der Gehalt eines n-Nonadecansäure(C19:0)ethylesters 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
(9) Die Zusammensetzung nach einem von (1)-(8), wobei der Gehalt eines Arachinsäure(C20:0)ethylesters 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.
(10) Die Zusammensetzung nach einem von (1)-(9), wobei der Gehalt an Ethylestern gesättigter Fettsäuren 0,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(11) Die Zusammensetzung nach einem von (1)-(10), wobei der Gehalt an Icosa-5,9,11,14,17-pentaensäure(C20:5n-3(5,9,11,14,17)ethylester 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.
(12) Die Zusammensetzung nach einem von (1)-(11), wobei der Gehalt des Ethyleicosapentaenoats 96-98 Flächen-% beträgt.
(13) Ein Arzneimittel, umfassend die Zusammensetzung nach einem von (1)-(12) als einen wirksamen Bestandteil.
(14) Ein Verfahren zur Herstellung von hochkonzentriertem Ethyleicosapentaenoat, wobei Ethyleicosapentaenoat durch Ethylveresterung einer Vorlauföl enthaltenden Eicosapentaensäure und anschließendes Durchführen eines Destillationsschritts und eines Chromatographieschritts gereinigt wird und wobei der Destillationsschritt durch Durchführen von Rektifizierung durchgeführt wird, wobei der Vakuumgrad 0,2 Torr oder weniger beträgt und bei einer Gesamtsäulentemperatur von 190°C oder weniger, wodurch der Gehalt an Ethylarachidonat verringert wird, während die Bildung einer trans-Form aufgrund von Wärme unterdrückt wird.
(15) Das Verfahren nach (14) wobei die Rektifizierung kontinuierliche Rektifizierung unter Verwendung von zwei oder mehr Destillationssäulen ist.
(16) Das Verfahren nach (14) oder (15), wobei der Chromatographieschritt ein Umkehrphasen-Chromatographieschritt ist.
(17) Eine Zusammensetzung, umfassend 96 Flächen-% oder mehr, 96-99 Flächen-% oder 96-98 Flächen-% Ethyleicosapentaenoat und 0,7 Flächen-% oder weniger, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger an Ethylarachidonat.
(18) Die Zusammensetzung nach (17), welche bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie unter den vorstehenden Analysebedingungen derart ist, dass der Gehalt einer der Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027 oder 1,062 erscheinen, wobei die mittlere Retensionszeit von Ethyleicosapentaenoat als 1 genommen wird, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
(19) Die Zusammensetzung nach (17) oder (18), welche bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie unter den vorstehenden Analysebedingungen derart ist, dass der Gehalt einer Substanz, deren relative Retensionszeit als ein Peak bei etwa 1,077 erscheint, wobei die mittlere Retensionszeit von Ethyleicosapentaenoat als 1 genommen wird, 1,0 Flächen-% oder weniger, 0,8 Flächen-% oder weniger, 0,6 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
(20) Die Zusammensetzung nach einem von (17)-(19), wobei der Gehalt an α-Linolensäure(C18:3n-3)ethylester 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.
(21) Eine Zusammensetzung, umfassend 96-99 Flächen-% Ethyleicosapentaenoat, wobei der Gehalt an Ethylarachidonat 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt und die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen, di-trans-Formen, tri-trans-Formen und tetra-trans-Formen des Ethyleicosapentaenoats 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(22) Die Zusammensetzung nach (21), wobei der Gehalt an Ethylestern gesättigter Fettsäuren 0,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(23) Die Zusammensetzung nach (21) oder (22), wobei der Gehalt eines Ethylesters von Icosa-5,9,11,14,17-pentaensäure (C20:5n-3(5,9,11,14,17)) 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.

VORTEILHAFTE WIRKUNGEN DER ERFINDUNG
In der vorliegenden Erfindung wurde gefunden, dass man Zusammensetzungen herstellen kann, die verringerte Gehalte an Arachidonsäurealkylestern mit ähnlichen Strukturen wie Eicosapentaensäurealkylester sowie mono-trans-Formen von Eicosapentaensäurealkylestern aufweisen und die Eicosapentaensäurealkylester in hohen Reinheiten enthalten. Da Zusammensetzungen in einer Ausführungsform der Erfindung sogar auf industrieller Ebene hergestellt werden können, können sie vorteilhafterweise als Reformkost, Arzneimittel usw. verwendet werden, die serienmäßig hergestellt werden müssen, während sie Sicherheitsmerkmale erfüllen müssen.
Minimieren des Gehalts an Arachidonsäure, bei der es sich um eine typische ω6-Fettsäure handelt, bedeutet, die Menge der Fettsäure, die Funktionen aufweist, die gegensätzlich zu denen von Eicosapentaensäurealkylestern sind, so weit wie möglich zu verringern. Wenn also der Gehalt an Arachidonsäure minimiert wird, können sich die Funktionen von Eicosapentaensäurealkylestern wirksam entfalten.
Ein allgemeines Verhältnis ist bekannt, wonach ein Versuch, die Gehalte an Arachidonsäure usw. durch Destillation zu verringern, eine Zunahme an trans-Isomeren, bei denen es sich um die Produkte thermischer Denaturierung handelt, zur Folge hat. Gemäß einem Verfahren in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung können sowohl die Gehalte an Arachidonsäure als auch an trans-Isomeren von Eicosapentaensäure, die ein derartiges Verhältnis mit Eicosapentaensäure aufweisen, verglichen mit den herkömmlichen Graden verringert werden.
BESCHREIBUNG VON AUSFÜHRUNGSFORMEN
Der hierin verwendete Ausdruck „Schritt“ bedeutet nicht nur einen unabhängigen Schritt und sogar derartige Fälle, bei denen eine klare Unterscheidung von anderen Schritten nicht möglich ist, sind von diesem Begriff umfasst, sofern das beabsichtigte Ziel dieses Schritts erreicht wird. Die hierin angegebene Menge jeder Komponente in einer Zusammensetzung ist derart, dass, wenn die Zusammensetzung mehr als eine Substanz enthält, die dem jeweiligen Bestandteil entspricht, dies, sofern nicht anders angegeben, die Gesamtmenge dieser Substanzen, die in der Zusammensetzung vorliegen, bedeutet.
Die hierin angegebenen Zahlenbereiche unter Verwendung von „-“ sollen sich jeweils auf einen Bereich beziehen, der den Zahlenwert davor als Minimum und den Zahlenwert danach als Maximum angibt. Der hierin mit Bezug auf Prozentsätze verwendete Ausdruck „oder weniger“ oder „weniger als“ beinhaltet, sofern die Untergrenze nicht konkret angegeben ist, den Fall 0%, d.h. „nicht enthalten“, oder bedeutet alternativ einen Bereich, der Werte beinhaltet, die auf herkömmlichem Wege nicht nachweisbar sind.
Wenn ein Zahlenbereich, der nur eine oder mehrere Obergrenzen angibt, und ein anderer Zahlenbereich, der nur eine oder mehrere Untergrenzen angibt, wobei sich beide auf den gleichen Gegenstand beziehen, hierin angegeben sind, versteht sich, dass, sofern nicht anders angemerkt, ein Zahlenbereich, der durch Kombination irgendeiner Obergrenze, die aus der einen oder den mehreren Obergrenzen ausgewählt ist, mit einer Untergrenze, die aus der einen oder den mehreren Untergrenzen ausgewählt ist, erhalten wird, ebenfalls in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beinhaltet ist.
Das/die hierin verwendete(n) „Öl(e)“ oder „ÖI(e) und Fett(e)“ beinhaltet nicht nur jene, die nur aus Triglyceriden bestehen, sondern auch Rohöle, die, zusätzlich zu Triglyceriden als Hauptbestandteil, andere Lipide, wie z.B. Diglyceride, Monoglyceride, Phospholipide, Cholesterine und freie Fettsäuren, enthalten. Das/die „ÖI(e)“ oder „ÖI(e) und Fett(e)“ bedeutet Zusammensetzungen, die diese Lipide enthalten.
Der Ausdruck „Fettsäuren“ beinhaltet nicht nur freie gesättigte oder ungesättigte Fettsäuren als solche, sondern auch diejenigen Fettsäuren als konstituierende Einheiten, die intern in freien gesättigten oder ungesättigten Fettsäuren, gesättigten oder ungesättigten Fettsäurealkoholestern, Triglyceriden, Diglyceriden, Monoglyceriden, Phospholipiden, Sterylestern oder dergleichen enthalten sind; die Fettsäuren können somit als konstituierende Fettsäuren umschrieben werden. In der Beschreibung können, sofern nicht anders angegeben, die Formen von Fettsäuren enthaltenden Verbindungen manchmal weggelassen sein. Die Formen von Fettsäuren enthaltenden Verbindungen können die freie Fettsäureform, die Fettsäurealkoholesterform, die Glycerinesterform, Phospholipidform, die Sterylesterform usw. beinhalten. Verbindungen, die die gleiche Fettsäure enthalten, können als eine einzelne Form in Ölen enthalten sein oder sie können als Gemisch von zwei oder mehr Formen enthalten sein.
Bei der Bezeichnung von Fettsäuren kann manchmal eine bequemer numerischer Ausdruck verwendet werden, bei dem die Kohlenstoffzahl, die Anzahl an Doppelbindungen und die Positionen der Doppelbindungen mit Hilfe von Zahlen und Buchstaben des Alphabets dargestellt werden. Zum Beispiel kann eine gesättigte Fettsäure mit der Kohlenstoffzahl 20 als „C20:0“ bezeichnet werden, eine einfach ungesättigte Fettsäure mit der Kohlenstoffzahl 18 kann als „C18:1“ bezeichnet werden usw. und Arachidonsäure kann als „C20:4, n-6“ bezeichnet werden usw. Das Symbol „n-“ gibt die Position einer Doppelbindung, gezählt vom Methylende einer Fettsäure, an; zum Beispiel gibt „n-6“ an, dass eine Doppelbindung an Position 6, gezählt vom Methylende einer Fettsäure, vorliegt. Dieses Verfahren ist Fachleuten wohlbekannt und Fettsäuren, die gemäß diesem Verfahren bezeichnet werden, sind von jedem Fachmann leicht zu identifizieren.
Das hierin verwendete „Rohöl“ bedeutet ein Öl, bei dem es sich um ein Gemisch der vorstehenden Lipide handelt und das aus Organismen extrahiert wird. Das hierin verwendete „raffinierte Öl“ bedeutet ein Öl, das aus einem Rohöl durch Durchführen einer Rohöl-Raffinierungsbehandlung gewonnen wird, bei der mindestens ein Öl- oder Fett-Raffinierungsschritt, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Entbastungsschritt, einem Entsäuerungsschritt, einem Entfärbungsschritt und einem Desodorierungsschritt, auf das Rohlöl angewendet wird, um jegliche Substanzen, die sich von dem Endprodukt unterscheiden, wie z.B. Phospholipide und Sterole, zu entfernen.
<Zusammensetzungen>
Aufbau
In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthalten Zusammensetzungen die folgenden Mengen an Eicosapentaensäurealkylestern (nachstehend als EPA-Alkylester bezeichnet) wie Ethyleicosapentaenoat (EPA-E) und können die folgenden Mengen eines oder mehrerer anderer Bestandteile, nämlich Verunreinigungen, enthalten.
Kurz gesagt ist eine Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung eine Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie 96-99 Flächen-% eines Eicosapentaensäurealkylesters umfasst, wobei der Gehalt eines Arachidonsäurealkylesters 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt und der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthält die Zusammensetzung 96-99 Flächen-%, vorzugsweise 96-98 Flächen-%, des EPA-Alkylesters. Wenn der EPA-Alkylester-Gehalt 96 Flächen-% oder mehr beträgt, wird die Zusammensetzung vorteilhafterweise in Fällen wie pharmazeutischen Anwendungen verwendet, bei denen EPA-Alkylester mit hoher Reinheit von Nöten sind. Wenn der EPA-Alkylester-Gehalt 99 Flächen-% oder weniger beträgt, enthält die Zusammensetzung den EPA-Alkylester in hoher Konzentration und dennoch kann die Ausbeute des EPA-Alkylesters in dem Konzentrationsschritt in einem zufriedenstellenden Bereich gehalten werden; dies kann aus industrieller Sicht als vernünftig erachtet werden.
Der Alkylrest in EPA-Alkylestern ist ein Alkylrest, der sich von den Niederalkoholen ableitet, die gewöhnlich bei der Alkylveresterung von Fettsäuren verwendet werden. Beispiele für den Alkylrest in EPA-Alkylestern beinhalten vorzugsweise einen Alkylrest mit der Kohlenstoffzahl 1 oder Kohlenstoffzahl 2 und beinhalten insbesondere einen Methylrest und einen Ethylrest. Beispielhafte EPA-Alkylester beinhalten EPA-Ethyl (EPA-E) und EPA-Methyl (EPA-M).
Isomere als Verunreinigung, die in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung in der Zusammensetzung enthalten sein können, beinhalten mono-trans-Formen, bei denen eine der fünf cis-Doppelbindungen, die der EPA-Alkylester aufweist, in trans umgewandelt wurde. Der Gehalt dieser mono-trans-Formen in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen- % oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen- % oder weniger betragen. Wenn die mono-trans-Formen in geringeren Mengen enthalten sind, enthält die Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung den EPA-Alkylester in höheren Konzentrationen und kann die Funktionalität des EPA-Alkylesters wirksamer zeigen.
Andere Isomere als Verunreinigung sind di-trans-Formen, bei denen zwei der fünf cis-Doppelbindungen, die der EPA-Alkylester aufweist, in trans umgewandelt wurden. Die Summe der Gehalte der mono- und di-trans-Formen in der Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung auf 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger eingestellt werden.
Wenn die mono-trans-Formen und die di-trans-Formen in geringeren Summenmengen enthalten sind, enthält die Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung den EPA-Alkylester in höheren Konzentrationen und kann die Funktionalität des EPA-Alkylesters wirksamer zeigen.
Noch weitere Isomere als Verunreinigung sind tri-trans-Formen, bei denen drei der fünf cis-Doppelbindungen, die der EPA-Alkylester aufweist, in trans umgewandelt wurden. Die Summe der Gehalte dieser mono-, di- und tri-trans-Formen in der Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung auf 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger eingestellt werden.
Noch weitere Isomere als Verunreinigung sind tetra-trans-Formen, bei denen vier der fünf cis-Doppelbindungen, die der EPA-Alkylester aufweist, in trans umgewandelt wurden. Die Summe der Gehalte dieser mono-, di-, tri- und tetra-trans-Formen in der Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung auf 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger eingestellt werden.
Wie vorstehend erwähnt, enthält die Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung, wenn zwei oder mehr der mono-, di-, tri- und tetra-trans-Formen in geringeren Summenmengen vorhanden sind, den EPA-Alkylester in höheren Konzentrationen und kann die Funktionalität des EPA-Alkylesters wirksamer zeigen.
Die Isomere als Verunreinigung in der Zusammensetzung können in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung durch mono-trans-Formen veranschaulicht werden, bei denen eine der fünf cis-Doppelbindungen, die EPA-E aufweist, in trans umgewandelt wurde. Der Gehalt dieser mono-trans-Formen, die in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthalten sein können, kann 2,5 Flächen- % oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger betragen.
Andere Isomere als Verunreinigung können durch di-trans-Formen veranschaulicht werden, bei denen zwei der fünf cis-Doppelbindungen, die EPA-E aufweist, in trans umgewandelt wurden. Die Summe der Gehalte der mono- und di-trans-Formen, die in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthalten sein können, kann 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger betragen.
Noch weitere Isomere als Verunreinigung können durch tri-trans-Formen veranschaulicht werden, bei denen drei der fünf cis-Doppelbindungen, die EPA-E aufweist, in trans umgewandelt wurden. Die Summe der Gehalte dieser mono-, di- und tri-trans-Formen, die in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthalten sein können, kann 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger betragen.
Noch weitere Isomere als Verunreinigung können durch tetra-trans-Formen veranschaulicht werden, bei denen vier der fünf cis-Doppelbindungen, die der EPA-Alkylester aufweist, in trans umgewandelt wurden. Die Summe der Gehalte der mono-, di-, tri- und tetra-trans-Formen, die in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthalten sein können, kann 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger betragen.
Die Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung daran angepasst sein, derart zu sein, dass die Summe der Gehalte der mono-, di-, tri- und tetra-trans-Formen wie vorstehend beschrieben 1,417 Flächen-% oder mehr beträgt. Wenn die Zusammensetzung die mono-, di-, tri- und tetra-trans-Formen in Mengen von nicht weniger als dem angegebenen Wert enthält, sind andere Fettsäuren, die sich hinsichtlich der Struktur von EPA unterscheiden, in der Regel je nach den Gehalten dieser Isomere in geringeren Mengen enthalten. Wenn die Zusammensetzung diese Isomere in Mengen von nicht weniger als dem angegebenen Wert enthält, sind die Gehalte anderer Fettsäuren, die sich schwer von EPA trennen lassen, insbesondere Arachidonsäurealkylester, in der Regel gering, mit der Folge, dass die Zusammensetzung ein besseres Gleichgewicht hinsichtlich des Gehalts zwischen dem EPA-Alkylester und anderen Fettsäurealkylestern, die sich in der Regel schwer davon trennen lassen, aufweist und auch eine Tendenz zur Verbesserung der Produktivität besteht.
Wenn den Doppelbindungen in einer cis-Form des EPA-Alkylesters während der Destillation Wärme zugeführt wird, wandelt sich eine Doppelbindung zunächst in eine trans-Form um und weitere Anwendung von Wärme hat di-, tri- und tetra-trans-Formen zur Folge. Wenn somit die Bildung der mono-trans-Form unterdrückt werden kann, kann auch die Bildung weiterer trans-Formen unterdrückt werden.
Wenn Destillation bei einer Gesamtsäulentemperatur von 190°C oder weniger durchgeführt wird, entstehen manchmal Isomere des EPA-Alkylesters. Zum Beispiel sind, wie in den Beispielen gezeigt werden wird, die Isomere, die entstehen, wenn Destillation bei einer Gesamtsäulentemperatur von 190°C oder weniger durchgeführt wird, wie in den Beispielen gezeigt, mono-trans-Formen, bei denen eine der Doppelbindungen an Position 5, 11, 14 und 17 von EPA-E in trans umgewandelt wurde.
In der Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt einer der mono-trans-Formen des EPA-Alkylesters, bei der eine der Doppelbindungen an Positionen 5, 14 und 17 derselben trans ist, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen.
In der Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt einer mono-trans-Form des EPA-Alkylesters, bei der die Doppelbindung an Position 11 derselben trans ist, 1,0 Flächen-% oder weniger, 0,9 Flächen-% oder weniger, 0,8 Flächen-% oder weniger, 0,6 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen.
In der Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt einer der mono-trans-Formen von EPA-E, bei welcher z.B. eine der Doppelbindungen an Positionen 5, 14 und 17 derselben trans ist, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen.
In der Zusammensetzung kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt einer mono-trans-Form von EPA-E, bei welcher z.B. die Doppelbindung an Position 11 derselben trans ist, 1,0 Flächen-% oder weniger, 0,9 Flächen-% oder weniger, 0,8 Flächen-% oder weniger, 0,6 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen.
Wenn der Gehalt der mono-trans-Form, bei der eine der Doppelbindungen an Positionen 5, 14 und 17 trans ist, wie vorstehend erwähnt, geringere Werte, wie vorstehend erwähnt, aufweist oder wenn der Gehalt der mono-trans-Form, bei der die Doppelbindung an Position 11 trans ist, geringere Werte, wie vorstehend erwähnt, aufweist, enthält die Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung den EPA-Alkylester, wie z.B. EPA-E, in höheren Konzentrationen und kann die Funktionalität des EPA-Alkylesters, wie z.B. EPA-E, wirksamer zeigen. Wenn die Gehalte der trans-Formen, die niedrige Siedepunkte aufweisen und dazu neigen, trübe zu werden oder sich bei niedrigen Temperaturen leicht zu verfestigen, gering sind, zeigt die betreffende Zusammensetzung in der Regel gute Handhabungseigenschaft bei niedrigen Temperaturen.
In der vorliegenden Erfindung ist „Flächen-%“ ein Index für den relativen Gehalt eines Bestandteils mit einem entsprechenden Peak, der wie folgt ermittelt wird: in einem Graphen aus der Analyse einer Zusammensetzung unter Verwendung von Gaschromatographie, ausgestattet mit einem Flammenionisationsdetektor (FID), werden die Peaks für die jeweiligen Bestandteile identifiziert und die Peakflächen der jeweiligen Fettsäuren werden unter Verwendung des Agilent ChemStation Integrationsalgorithmus (Revision C.01.03 [37], Agilent Technologies) ermittelt, wobei der Anteil jeder Peakfläche an der Gesamtsumme der Fettsäure-Peakflächen den relativen Gehalt des Bestandteils an diesem Peak darstellt. Auf dem Gebiet der Ölchemie wird Flächen-% im Wesentlichen synonym mit Gew.-% verwendet. Siehe Standard Methods for the Analysis of Fats, Oils and Related Materials, Ausgabe 2013 (angegeben von Japan's Oil Chemists' Society (JOCS)) unter 2.4.2.1_-2013, Fatty Acids Makeup (FID-Gaschromatographie bei konstanter Temperatur) und auch unter 2.4.2.2_-2013, Fatty Acids Makeup (FID-Gaschromatographie bei ansteigender Temperatur). Die Analysebedingungen für die Gaschromatographie sind wie folgt.
Wenn der EPA-Alkylester EPA-E ist, kann jede der als eine mono-trans-Form von EPA-E identifizierten Verbindungen derart sein, dass die Retensionszeiten ihres Peaks unter den folgenden Gaschromatographie-Messbedingungen den in Tabelle 1 in Beispiel 1 angegebenen Zahlenwert zeigen. In der vorliegenden Erfindung ist die relative Retensionszeit durch eine Zahl ausgedrückt, die man erhält, indem man die tatsächliche Retensionszeit jedes Peaks bei der Gaschromatographie-Messung durch die Retensionszeit für Ethyleicosapentaenoat teilt. Mit anderen Worten stellt die relative Retensionszeit die relative Retensionszeit jedes Peaks dar, wobei die Retensionszeit von Ethyleicosapentaenoat als 1 genommen wird. Obwohl die Messwerte für die Retensionszeiten der jeweiligen Peaks entweder von Messung zu Messung oder abhängig von den Konzentrationen der in einer Probe enthaltenen Bestandteile etwas auseinanderliegen können, liegt eine derartige Streuung innerhalb von ± 0,01, wenn als relative Retensionszeit ausgedrückt. Der hierin mit Bezug auf die relative Retensionszeit verwendete Ausdruck „etwa“ bedeutet, dass der Bereich dieser Streuung eingeschlossen ist.
GC-FID-Messbedingungen
GC: 6890N (Agilent Technologies)
Säule: DB-WAX (Agilent Technologies)
30 m x 0,25 mm ID, 0,25 µm Filmdicke
Trägergas: Helium, 0,5 ml/min
Einspritzöffnung: 300°C, 1 µl, Split (1:100)
Säulentemperatur: 200°C (konstant)
Detektor: FID, 300°C
Zusatzgas: Stickstoff, 40 ml/min
Im Falle einer Zusammensetzung, bei der der EPA-Alkylester EPA-E ist, kann die Summe der Gehalte an Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027, 1,062 oder 1,077 erscheinen, wobei die mittlere Retensionszeit von Ethyleicosapentaenoat als 1 genommen wird, 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger betragen.
Im Falle der Zusammensetzung, bei der der EPA-Alkylester EPA-E ist, kann die Summe der Gehalte an Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027, 1,062 oder 1,077 betragen, wobei die mittlere Retensionszeit von Ethyleicosapentaenoat als 1 genommen wird, 1,417 Flächen-% oder mehr betragen.
In einer Zusammensetzung gemäß einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beinhalten beispielhafte Verunreinigungen gesättigte oder ungesättigte Fettsäurealkylester mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr, wie z.B. Arachidonsäurealkylester. Die gesättigten oder ungesättigten Fettsäurealkylester mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr haben ähnliche oder äußerst ähnliche Strukturen wie die EPA-Alkylester und sind allgemein in der Regel beim Destillationsschritt und dem Chromatographieschritt schwer von den EPA-Alkylestern zu trennen.
Die Alkylreste in den gesättigten oder ungesättigten Fettsäurealkylester mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr sind von Niederalkoholen abgeleitete Alkylreste, die gewöhnlich bei der Alkylveresterung von Fettsäuren verwendet werden. Beispielhafte Alkylreste in den gesättigten oder ungesättigten Fettsäurealkylestern mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr beinhalten vorzugsweise einen Alkylrest mit der Kohlenstoffzahl 1 oder der Kohlenstoffzahl 2 und beinhalten inbesondere einen Ethylrest und einen Methylrest. Zum Beispiel beinhalten beispielhafte gesättigte oder ungesättigte Fettsäurealkylester mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr gesättigte oder ungesättigte Fettsäureethylester mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr und gesättigte oder ungesättigte Fettsäuremethylester mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr. Das gleiche trifft auf die Alkylreste in den nachstehend beschriebenen konkreten Beispielen für gesättigte oder ungesättigte Fettsäurealkylester mit der Kohlenstoffzahl 18 oder mehr zu.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beträgt der Gehalt an „einem Arachidonsäurealkylester“ (C20:4n-6 Alkylester, (5Z,8Z,11Z,14Z)-5,8,11,14-Icosatetraensäurealkylester) 0,7 Flächen-% oder weniger; stärker bevorzugt kann er 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger, stärker bevorzugt 0,1 Flächen-% oder weniger oder 0,05 Flächen-% oder weniger betragen.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beträgt der Gehalt an „einem Arachidonsäureethylester“ (C20:4n-6 Ethylester, (5Z,8Z,11Z,14Z)-5,8,11,14-Icosatetraenoat) 0,7 Flächen-% oder weniger; stärker bevorzugt kann er 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger, noch stärker bevorzugt 0,1 Flächen-% oder weniger oder 0,05 Flächen-% oder weniger betragen.
Somit können sich in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung durch Verringern des Gehalts an Arachidonsäure, bei der es sich um eine typische ω6-Fettsäure handelt, auf den niedrigstmöglichen Wert, wie vorstehend beschrieben, die Funktionen von EPA-Alkylestern, wie z.B. EPA-E, wirksam entfalten.
Verunreinigungen, die sich von Arachidonsäurealkylestern unterscheiden, die in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthalten sind, können z.B. die folgenden beinhalten. Diese haben größtenteils ähnliche Strukturen wie die EPA-Alkylester und werden als Substanzen erachtet, die beim Chromatographieschritt schwer von den EPA-Alkylestern zu trennen sind. Da Zusammensetzungen in den jeweiligen Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung geringe Gehalte einer oder mehrerer dieser Verunreinigungen aufweisen, können sie die EPA-Alkylester in hohen Konzentrationen enthalten.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C20:5n-3(5,9,11,14,17)-Alkylester“ (Icosa-5,9,11,14,17-Pentaensäurealkylester) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C20:5n-3(5,9,11,14,17)-Ethylester“ (Icosa-5,9,11,14,17-Pentaensäureethylester) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C18:3n-3-Alkylester“ (α-Linolensäurealkylester, (9Z,12Z,15Z)-9,12,15-Octadecatriensäurealkylester) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C18:3n-3-Ethylester“ (Ethyl-a-linolenat, Ethyl-(9Z,12Z,15Z)-9,12,15-octadecatrienoat) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C18:4n-3-Alkylester“ (Stearidonsäurealkylester, (6Z,9Z,12Z,15Z)-6,9,12,15-Octadecatetraensäurealkylester) 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C18:4n-3-Ethylester“ (ODTA-E, Ethylstearidonat, Ethyl(6Z,9Z,12Z,15Z)-6,9,12,15-Octadecatetraenoat) 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen.
Da der C18:4n-3-Alkylester als ein funktioneller Bestandteil bekannt ist, wird eine Zusammensetzung mit geringeren Gehalten des C18:4n-3-Alkylesters, wie z.B. C18:4n-3-Ethylester, durch eine zusätzliche Funktion, die ihr selbst zugegeben wird, weniger stark beeinflusst. Somit kann bei der Verwendung dieser Zusammensetzung als eine funktionelle Zusammensetzung auf der Basis des EPA-Alkylesters eine geringere Notwendigkeit bestehen, andere Funktionen in Betracht zu ziehen, und die Handhabung der Zusammensetzung ist einfach.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C19:5n-3-Alkylester“ (Nonadecapentaensäurealkylester) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,049 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C19-5n-3-Ethylester“ (NDPA-E, Ethylnonadecapentaenoat) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,049 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen.
Da der C19:5n-3-Alkylester als ein funktioneller Bestandteil bekannt ist, wird eine Zusammensetzung mit geringeren Gehalten des C19:5n-3-Alkylesters, wie z.B. C19:5n-3-Ethylester, durch eine zusätzliche Funktion, die ihr selbst zugegeben wird, weniger stark beeinflusst. Somit kann bei Verwendung dieser Zusammensetzung als eine funktionelle Zusammensetzung auf der Basis des EPA-Alkylesters eine geringere Notwendigkeit bestehen, andere Funktionen in Betracht zu ziehen, und die Handhabung der Zusammensetzung ist einfach.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C20:4n-3-Alkylester“ (Eicosatetraensäurealkylester) 0,7 Flächen-% oder weniger, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C20:4n-3-Ethylester“ (ETA-E-Ethyleicosatetraenoat) 0,7 Flächen-% oder weniger, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen.
Da der C20:4n-3-Alkylester als ein funktioneller Bestandteil bekannt ist, wird eine Zusammensetzung mit geringeren Gehalten des C20:4n-3-Alkylesters, wie z.B. C20:4n-3-Ethylester, durch eine zusätzliche Funktion, die ihr selbst zugegeben wird, weniger stark beeinflusst. Somit kann bei Verwendung dieser Zusammensetzung als eine funktionelle Zusammensetzung auf der Basis des EPA-Alkylesters eine geringere Notwendigkeit bestehen, andere Funktionen in Betracht zu ziehen, und die Handhabung der Zusammensetzung ist einfach.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C21:5n-3-Alkylester“ (Henicosapentaensäurealkylester) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,03 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C21:5n-3-Ethylester“ (HPA-E, Ethylhenicosapentaenoat) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,03 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen.
Da der C21:5n-3-Alkylester als ein funktioneller Bestandteil bekannt ist, wird eine Zusammensetzung mit geringeren Gehalten des C21:5n-3-Alkylesters, wie z.B. C21:5n-3-Ethylester, durch eine zusätzliche Funktion, die ihr selbst zugegeben wird, weniger stark beeinflusst. Somit kann bei Verwendung dieser Zusammensetzung als eine funktionelle Zusammensetzung auf der Basis des EPA-Alkylesters eine geringere Notwendigkeit bestehen, andere Funktionen in Betracht zu ziehen, und die Handhabung der Zusammensetzung ist einfach.
Fischöl enthält gesättigte Fettsäuren mit Kohlenstoffzahlen von 14-22, aber bei Anwendungen betreffend das Herzkreislaufsystem wird die Aufnahme gesättigter Fettsäuren vorzugsweise vermieden, so dass der Gehalt an gesättigten Fettsäuren in einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung vorzugsweise so gering wie möglich ist. Die Summe der Gehalte an Alkylestern gesättigter Fettsäuren kann 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung die Summe der Gehalte an Ethylestern gesättigter Fettsäuren 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger betragen.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C19:0-Alkylester“ (n-Nonadecansäurealkylester) unter gesättigten Fettsäuren 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen. In der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C19:0-Ethylester“ (Ethyln-nonadecanoat) zum Beispiel 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen.
In einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an „C20:0-Alkylester“ (Arachidinsäurealkylester) unter gesättigten Fettsäuren 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C20:0-Ethylester“ (Ethylarachidat) 0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen- % oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger betragen.
Bei der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung reicht es, dass sie geringe Gehalte an von dem EPA-Alkylester und den vorstehend genannten Fettsäuren verschiedenen Fettsäuren aufweist. Dies ermöglicht es, dass der EPA-Alkylester in höheren Konzentrationen enthalten ist und im Falle der Verwendung dieser Zusammensetzung als funktionelle Zusammensetzung auf der Basis des EPA-Alkylesters kann die Notwendigkeit, andere Funktionen in Betracht zu ziehen, verringert sein.
Andere Fettsäuren können Alkylester einfach ungesättigter Fettsäuren (MUFA) mit der Kohlenstoffzahl 20 und mehr beinhalten und in einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann der Gehalt an MUFA-Alkylestern 0,05 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung die Summe der Gehalte an MUFA-Ethylestern, wie z.B. „C20:1n-11-Ethylester“ (Ethylgadoleat), „C20:1n-9-Ethylester“ (Ethylgondoat), „C22:1n-11-Ethylester“ (Ethylcetoleat) und „C22:1n-9-Ethylester“ (Ethylerucat) 0,05 Flächen- % oder weniger betragen.
Was noch weitere Fettsäuren betrifft, kann der Gehalt an „C20:3n-6-Alkylestern“ (Dihomo-y-linolensäurealkylester oder DGLA-Alkylester) 0,05 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C20:3n-6-Ethylester“ (Ethyldihomo-y-linolenat oder DGLA-Ethylester) 0,05 Flächen-% oder weniger betragen. Zusammensetzungen mit geringen Gehalten an n-6-Fettsäuren, die gegenteilige Wirkungen zu EPA aufweisen könnten, können in zufriedenstellender Weise die auf EPA-Alkylestern basierenden Funktionen aufweisen.
Was noch weitere Fettsäuren betrifft, kann der Gehalt an „C22:6n-3-Alkylestern“ (Docosahexaensäurealkylestern) 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,03 Flächen-% oder weniger betragen. Zum Beispiel kann in einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung der Gehalt an „C22:6n-3-Ethylester“ (Ethyldocosahexaenoat oder DHA-Ethylester) 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,03 Flächen-% oder weniger betragen.
Da die C22:6n-3-Alkylester als funktionelle Bestandteile bekannt sind, wird eine Zusammensetzung mit geringeren Gehalten des C22:6n-3-Alkylesters, wie z.B. C22:6n-3-Ethylester, durch eine zusätzliche Funktion, die ihr selbst zugegeben wird, weniger stark beeinflusst. Somit kann bei Verwendung dieser Zusammensetzung als eine funktionelle Zusammensetzung auf der Basis des EPA-Alkylesters eine geringere Notwendigkeit bestehen, andere Funktionen in Betracht zu ziehen, und die Handhabung der Zusammensetzung ist einfach.
Eine Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann zum Beispiel eine der folgenden Zusammensetzungen beinhalten, mit welcher die Funktionen der EPA-Alkylester wirksamer erzielt werden:

(1) Eine Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie 96-99 Flächen-% eines EPA-Alkylesters, wie z.B. EPA-E, umfasst, wobei der Gehalt eines Alkylarachidonats, wie z.B. Ethylarachidonat, 0,1 Flächen-% oder weniger oder 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt und der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters, wie z.B. EPA-E, 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(2) Eine Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie 96-99 Flächen-% eines EPA-Alkylesters, wie z.B. EPA-E, umfasst, wobei der Gehalt eines Alkylarachidonats, wie z.B. Ethylarachidonat, 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt und der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters, wie z.B. EPA-E, 1,417 Flächen-% oder mehr, jedoch 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
(3) Eine Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie unter den folgenden Analysebedingungen 96-99 Flächen-% EPA-E umfasst, wobei der Gehalt eines Ethylarachidonats 0,1 Flächen-% oder weniger oder 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt und wobei die Summe der Gehalte an Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027, 1,062 oder 1,077 erscheinen, wobei die mittlere Retensionszeit von EPA-E als 1 genommen wird, 2,5 Flächen- % oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt:
- [Gaschromatographische Analysebedingungen: GC-FID-Messbedingungen]
- GC: 6890N (Agilent Technologies)
- Säule: DB-WAX (Agilent Technologies) 30 m x 0,25 mm ID, 0,25 µm Filmdicke
- Trägergas: Helium, 0,5 ml/min
- Einspritzöffnung: 300°C, 1 µl, Split (1:100)
- Säulentemperatur: 200°C (konstant)
- Detektor: FID, 300°C
- Zusatzgas: Stickstoff, 40 ml/min
(4) Eine Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie unter den folgenden Analysebedingungen 96-99 Flächen-% EPA-E enthält, wobei der Gehalt eines Ethylarachidonats 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt und wobei die Summe der Gehalte an Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027, 1,062 oder 1,077 erscheinen, wobei die mittlere Retensionszeit von EPA-E als 1 genommen wird, 1,417 Flächen-% oder mehr, jedoch 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,3 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger beträgt:
- [Gaschromatographische Analysebedingungen: GC-FID-Messbedingungen]
- GC: 6890N (Agilent Technologies)
- Säule: DB-WAX (Agilent Technologies) 30 m x 0,25 mm ID, 0,25 µm Filmdicke
- Trägergas: Helium, 0,5 ml/min
- Injektionseinlass: 300°C, 1 µl, Split (1:100)
- Säulentemperatur: 200°C (konstant)
- Detektor: FID, 300°C
- Zusatzgas: Stickstoff, 40 ml/min
(5) Die Zusammensetzung nach (1) oben, wobei der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters, wie z.B. EPA-E, 1,417 Flächen-% oder mehr beträgt.
(6) Die Zusammensetzung nach (3) oben, wobei die Summe der Gehalte an Substanzen, deren relative Retensionszeiten als Peaks bei etwa 0,955, 1,027, 1,062 oder 1,077 erscheinen, wobei die mittlere Retensionszeit von EPA-E als 1 genommen wird, 1,417 Flächen-% oder mehr beträgt.
(7) Die Zusammensetzung nach (2) oben, wobei der Gehalt an Ethylarachidonat 0,1 Flächen- % oder weniger oder 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt.
(8) Die Zusammensetzung nach (4) oben, wobei der Gehalt an Ethylarachidonat 0,1 Flächen- % oder weniger oder 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt.

Die Zusammensetzungen nach (1)-(8) oben können des Weiteren derart sein, dass der Gehalt eines DGLA-Alkylesters, wie z.B. DGLA-Ethylester, 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt, und anstelle des oder zusätzlich zu dem DGLA-Alkylester können die Zusammensetzungen derart sein, dass der Gehalt eines MUFA-Alkylesters, wie z.B. MUFA-Ethylester, 0,05 Flächen-% oder weniger beträgt.
Zusätzlich zu dem DGLA, MUFA oder der Kombination aus DGLA und MUFA können die Zusammensetzungen nach (1)-(8) oben weiter in Kombination damit mindestens eine Anforderung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den folgenden, erfüllen:

0,7 Flächen-% oder weniger, 0,5 Flächen-% oder weniger, 0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger eines Eicosatetraensäurealkylesters, wie z.B. Ethyleicosatetraenoat;
0,4 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger, 0,2 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger eines Octadecatetraensäurealkylesters, wie z.B. Ethyloctadecatetraenoat;
0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,049 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger eines Nonadecapentaensäurealkylesters, wie z.B. Ethylnonadecapentaenoat;
0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger eines n-Nonadecansäure(C19:0)alkylesters, wie z.B. Ethyln-nonadecanoat;
0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger an Arachidinsärure(C20:0)alkylester, wie z.B. Ethylarachidat;
0,5 Flächen-% oder weniger, 0,3 Flächen-% oder weniger oder 0,1 Flächen-% oder weniger an gesättigten Fettsäurealkylestern, wie z.B. gesättigten Fettsäureethylestern;
0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,07 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger eines Icosa-5,9,11,14,17-pentaensäure(C20:5n-3(5,9,11,14,17)alkylesters, wie z.B. Ethylicosa-5,9,11,14,17-pentaenoat (C20:5n-3(5,9,11,14,17));
0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger, 0,03 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger eines Henicosapentaensäurealkylesters, wie z.B. Ethylhenicosapentaenoat;
0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,03 Flächen-% oder weniger eines Docosahexaensäurealkylesters, wie z.B. Ethyldocosahexaenoat;
0,2 Flächen-% oder weniger, 0,15 Flächen-% oder weniger, 0,1 Flächen-% oder weniger, 0,05 Flächen-% oder weniger oder 0,02 Flächen-% oder weniger eines α-Linolensäurealkylesters, wie z.B. Ethyl-a-linolenat.

Eine andere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst auch eine Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung, die bei Messung mit Hilfe von Gaschromatographie 96-99 Flächen-% eines Eicosapentaensäurealkylesters umfasst, wobei der Gehalt eines Arachidonsäurealkylesters 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt. Wie bereits vorstehend erwähnt, ist der Eicosapentaensäurealkylester, wie z.B. EPA-E, in der Regel in dem Raffinierungsschritt schwer von dem Arachidonsäurealkylester mit ähnlicher Struktur, wie z.B. ARA-E, zu trennen. Unter diesen zwei Verbindungen, die in einem derartigen Verhältnis zueinander stehen, dass sie schwer voneinander zu trennen sind, ist der Eicosapentaensäurealkylester als das Endprodukt in der Zusammensetzung der betreffenden Ausführungsform in hohen Konzentrationen von mindestens 96-99 Flächen-% enthalten, während der Gehalt des unbeabsichtigten Arachidonsäurealkylesters äußerst gering ist, d.h. 0,1 Flächen-% oder weniger. Somit ist die Wirkung des Arachidonsäurealkylesters in der betreffenden Zusammensetzung äußerst gering, welche deshalb vorzugsweise in Anwendungen verwendet werden kann, die hohe Gehalte des Eicosapentaensäurealkylesters erfordern. In der Zusammensetzung der betreffenden Ausführungsform kann der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 10 Flächen-% oder weniger, 5,0 Flächen-% oder weniger, 3,0 Flächen-% oder weniger, 2,5 Flächen-% oder weniger, 2,0 Flächen-% oder weniger, 1,8 Flächen-% oder weniger oder 1,5 Flächen-% oder weniger betragen.
<Verfahren zur Herstellung von Zusammensetzungen>
Eine Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beinhaltet ein Verfahren zur Herstellung einer hochkonzentrierten Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzung, welches Durchführen von Rektifizierung an einer Eicosapentaensäurealkylester enthaltenden Zusammensetzung, wobei der Vakuumgrad 0,2 Torr oder weniger beträgt und bei einer Gesamtsäulentemperatur von 190°C oder weniger, und Durchführen einer Konzentrationsbehandlung an der rektifizierten Zusammensetzung unter Verwendung von Chromatographie umfasst, wobei die Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzung durch Alkylveresterung eines Vorlauföls, welches Eicosapentaensäure enthält, erhalten wird; das Verfahren kann nach Bedarf andere Schritte umfassen.
Eine andere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beinhaltet ein Verfahren zur Herstellung von hochkonzentriertem Ethyleicosapentaenoat durch Ethylveresterung eines Vorauföls, welches Eicosapentaensäure enthält, und anschließendes Durchführen von Destillation und Chromatographie, wobei die Destillation mittels Durchführen einer Rektifizierung durchgeführt wird, wobei der Vakuumgrad 0,2 Torr oder weniger beträgt und bei einer Gesamtsäulentemperatur von 190°C oder weniger, wodurch der Gehalt an Ethylarachidonat verringert wird, während die Bildung von trans-Formen aufgrund von Wärme unterdrückt wird.
Wie hierin mit Bezug auf die Herstellungsverfahren, die an den vorstehend beschriebenen Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung beteiligt sind, beschrieben, wird der Schritt des Durchführens von Destillation manchmal einfach als der Destillationsschritt bezeichnet und der Schritt des Durchführens von Chromatographie wird manchmal einfach als der Chromatographieschritt bezeichnet. Es sollte auch angemerkt werden, dass, wie hierin beschrieben, der Destillationsschritt und der Chromatographieschritt manchmal kollektiv als der Raffinierungsschritt bezeichnet werden.
Als Beschickung für die vorliegende Erfindung können Öle und Fette oder Phospholipide, die Eicosapentaensäure als eine konstituierende Fettsäure enthalten, usw. verwendet werden. Von Eicosapentaensäure ist bekannt, dass sie reichlich in Ölen von Mikroorganismen, Ölen von Meerestieren usw. enthalten ist. Das Vorlauföl kann konkret veranschaulicht werden durch: Meerestieröle von Fischen, wie z.B. Sardinen, Thunfisch, Bonito usw. und Schalentieren, wie z.B. Krill; von Lipid produzierenden Mikroorganismen, einschließlich Hefen, wie z.B. der Gattung Yarrowia, Fadenpilzen, wie z.B. der Gattung Mortierella, Algen, wie z.B. der Gattung Euglena, und Stramenopiles abgeleitete Öle. Diese können Öle sein, die von genetisch modifzierten Mikroorganismen, in die Gene eingebracht wurden, wie z.B. genetisch modifizierter Mutant Δ9-Elongase, abgeleitet sind. Sogar diese Öle von Mikroorganismen beinhalten das gleiche Problem, mit dem man sich auseinanderzusetzen hat, da sie nicht nur EPA, sondern auch Fettsäuren mit der Kohlenstoffzahl 20, wie z.B. Arachidonsäure, enthalten. Zusätzlich können von genetisch modifizierten Pflanzen abgeleitete Öle aus Ölsamenpflanzen, wie z.B. Spezies der Gattung Brassica, Sonnenblume, Mais, Baumwolle, Flachs und Färberdistel, in die durch Rekombinationstechnologie Gene eingebracht wurden, wie z.B. Mutant Δ9-Elongase, als das Vorlauföl verwendet werden. Öle von genetisch modifizierten Pflanzen und Öle von genetisch modifizierten Mikroorganismen usw. können durch diejenigen veranschaulicht werden, die z.B. in WO2012/027698 , WO2010/033753 usw. beschrieben sind.
Zum Beispiel enthalten Fischöle EPA als ein Triglycerid, das aus einem Glycerin-Molekül besteht, an das drei Moleküle der Fettsäure gebunden sind, um eine Esterbindung zu bilden. Da Fischöle viele Arten von Fettsäuren mit einer Kohlenstoffzahl im Bereich von 14 bis 22 und mit einer Anzahl an Doppelbindungen von 0 bis 6 enthalten, ist die Konzentration an EPA begrenzt. Somit wird die Fettsäure mit Hilfe von Alkylveresterung, bei der die an das Triglycerid gebundene Fettsäure mit einem Niederalkohol in Gegenwart eines Katalysators oder eines Enzyms, z.B. durch Ethylveresterung, die eine Reaktion mit Ethanol beinhaltet, umgesetzt wird, von Glycerin getrennt und anschließend werden von EPA-Alkylestern, wie z.B. EPA-E, verschiedene Fettsäurealkylester entfernt, um dadurch hochreine EPA-Alkylester, wie z.B. EPA-E, herzustellen. Das Herstellungsverfahren kann in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung auch Bereitstellen eines wie durch eine derartige Alkylveresterung erhaltenen EPA-Alkylesters, d.h. Herstellung eines Vorlauföls und Verestern des Vorlauföls mit einem Niederalkohol, um einen EPA-Alkylester zu erhalten (was nachstehend manchmal als der Veresterungsschritt bezeichnet wird), beinhalten.
Rohöl-Raffinierungsschritt
Das bei der Alkylveresterung zu verwendende Vorlauföl kann ein Rohöl sein oder es kann raffiniertes Öl sein. Bei dem Rohöl kann es sich um Öle oder Fette, die aus Fischerei-Ausgangsmaterialien erhalten wurden, oder um Öle oder Fette, die aus Mikroorganismus-Ausgangsmaterialien erhalten wurden, handeln. Zum Beispiel können Rohöle aus Fischerei-Ausgangsmaterialien mit Hilfe irgendeines Verfahrens erhalten werden und im Fall von Fischölen werden sie gewöhnlich mit Hilfe des folgenden Verfahrens gewonnen. Fisch, entweder in seiner Gänze oder als Überreste wie dessen Kopf, Haut, Rückgrat und Eingeweide, die aus der Fischverarbeitung stammen, werden gemahlen, gedünstet und dann gepresst, um Leimwasser von Pressmehl zu trennen. Das zusammen mit dem Leimwasser erhaltene Öl oder Fett wird durch Zentrifugieren abgetrennt und als rohes Fischöl gewonnen.
Rohe Fischöle werden im Allgemeinen dem Entbastungsschritt, dem Entsäuerungsschrit, dem Entfärbungsschritt unter Verwendung von Aktivton oder Aktivkohle, dem Waschschritt, dem Desodorierungsschritt, wie z.B. durch Dampfdestillation, und anderen Schritten, abhängig von der Beschickung, unterzogen und einem Raffinierungsverfahren unterzogen, um alle unbeabsichtigten Substanzen, wie z.B. Phospholipide und Sterole, zu entfernen, wodurch ein raffiniertes Fischöl erhalten wird. In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann ein derartiges raffiniertes Fischöl auch als Vorlauf(öl) verwendet werden.
Veresterungsschritt
Das Öl oder Fett als das Vorlauföl wird einer Alkoholyse unter Verwendung eines Niederalkohols unterzogen, woraufhin es sich zu einem Niederalkoholester zersetzt. Beispielhafte Niederalkohole beinhalten jene, die gewöhnlich bei der Alkylveresterung von Fettsäuren verwendet werden, wie anhand eines Niederalkohols mit einer Kohlenstoffzahl von 1 oder einer Kohlenstoffzahl von 2 veranschaulicht. Bei der Alkoholyse werden ein Niederalkohol, wie z.B. Ethanol, und ein Katalysator oder ein Enzym dem Öl oder Fett zugegeben, woraufhin eine Reaktion stattfindet, um einen Ethylester aus der an Glycerin gebundenen Fettsäure zu bilden. Beispiele für den Katalysator, der verwendet werden kann, beinhalten einen alkalischen Katalysator, einen sauren Katalysator und dergleichen. Lipase wird als das Enzym verwendet.
Es wurde empirisch gezeigt, dass die Reaktionseffizienz der Alkoholyse von Fettsäuren hoch ist und nach der Alkoholyse Zusammensetzungen erhalten werden, die hauptsächlich jene Fettsäuren enthalten, die in Alkylesterformen vorliegen. Somit werden diese Fettsäuren, sofern nicht anders angegeben, nach dem Veresterungsschritt manchmal angegeben, ohne darauf hinzuweisen, dass es sich um Fettsäuren in Alkylesterformen handelt. Dies sollte jedoch nicht als vollständiger Ausschluss des Vorhandenseins von Fettsäuren in von den Alkylesterformen verschiedenen Formen verstanden werden.
Raffinierungsverfahren
Die Herstellung einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst ein Verfahren des Raffinierens mit Hilfe des Destillationsschritts und des Chromatographieschritts unter Verwendung von Chromatographie, wie z.B. Hochleistungs-Flüssigchromatographie (HPLC). Es wird hierin angemerkt, dass EPA-E und Ethylarachidonat z.B. ähnliche Molekülstrukturen, jedoch leicht unterschiedliche Molekulargewichte aufweisen, so dass sie durch Destillation mit verbesserter Genauigkeit, indem man sich den Unterschied hinsichtlich des Siedepunkts (EPA-E, 417°C/760 mmHg; Ethylarachidonat, 418,1°C/760 mmHg) zunutze macht, getrennt werden könnten. Unter diesem Gesichtspunkt wäre es notwendig, mehrere Stufen zu verwenden und/oder den Rückflussstrom zu erhöhen, um den Trenngrad zu verbessern. Die Verwendung mehrerer Stufen führt jedoch zu einer erhöhten Druckbeständigkeit und die Destillationstemperatur muss erhöht werden. Ähnlich führt eine Erhöhung des Rückflussstroms auch zu einer erhöhten Destillationstemperatur. Andererseits ist bekannt, dass EPA unter Wärme isomerisiert (European Journal of Lipid Science and Technology, 108 (2006) 589-597; JAOCS, 66 (1989) 1822-1830). Somit wird eine weitere Erwärmung zur Verbesserung der Destillationsgenauigkeit eine Isomerisierung bewirken und die Menge an Isomeren wird zunehmen. Somit war es äußerst schwierig, die Bildung von EPA-E-Isomeren zu verhindern oder deren Bildung auf niedrigem Niveau zu halten, so dass EPA-Alkylester, wie z.B. EPA-E, und Arachidonsäureester, wie z.B. Ethylarachidonat, auf industrieller Ebene, nämlich so, dass sowohl Ausbeute als auch Reinheit zufriedenstellend sind, getrennt werden können.
Das in JP H5-222392A beschriebene Destillationsverfahren ist nicht in der Lage, EPA-E und Ethylarachidonat zu trennen, da es beabsichtigt, C20-Fraktionen zu sammeln. Mit Hilfe des anschließenden Raffinierungsschritts auf HPLC-Basis können EPA-E und Ethylarachidonat bis zu einem gewissen Grad getrennt werden, aber um EPA-E mit hoher Reinheit zu erhalten, muss die Überschneidung zwischen EPA-E und Ethylarachidonat abgeschnitten werden und die Effizienz der EPA-E-Gewinnung sinkt beträchtlich. Tatsächlich zeigt 2 in JP H5-222392A, dass EPA-E-Fraktionen beträchtlich abgeschnitten wurden und selbst wenn EPA auf 99% und mehr gereinigt wurde, wurden C20:4-Ethylester einschließlich Ethylarachidonat als Verunreinigungen beobachtet (Absatz [0033]). Außerdem lag die Gewinnung von EPA in diesem Beispiel bei nur 60% und eine industrielle Herstellung von EPA-E mit beträchtlicher Abnahme an Ethylarachidonat war unmöglich.
Angesichts dieser Situation und wenn ein Rohprodukt einer Alkylesterform wie der in dem vorstehend beschriebenen Veresterungsschritt erhaltenen Ethylesterform gemäß dem in JP H5-222392A usw. beschriebenen Verfahren destilliert werden soll, führt das Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung eine Rektifizierung (Präzisionsdestillation) durch, indem derartige Druck- und Temperaturbedingungen aufrechterhalten werden, dass der Vakuumgrad 0,2 Torr (26,7 Pa) oder weniger beträgt und die Gesamtsäulentemperatur 190°C oder weniger beträgt, wodurch es möglich wird, EPA-E und Ethylarachidonat zu trennen, ohne die Bildung von Isomeren aufgrund von Wärme wesentlich zu erhöhen.
Was die Druck- und Temperaturbedingungen betrifft, ist es durch Berücksichtigung derartiger Faktoren wie der Abnahme der Druckbeständigkeit, der Auswahl der Vakuumpumpenarten, der Kombination von Vakuumpumpen möglich, den Vakuumgrad bei 0,2 Torr oder weniger und die Gesamtsäulentemperatur bei 190°C oder weniger zu halten. Maßnahmen zur Verringerung der Druckbeständigkeit beinhalten z.B. Erhöhen des Durchmessers von Rohren und Verbinden von Rohren in Winkeln, die eine glatte Verbindung gewährleisten. Da die Siedepunkte von Substanzen mit abnehmendem Druck sinken, kann die Destillation bei niedrigeren Temperaturen durchgeführt werden, wenn hohes Vakuum (geringer Druck) vorherrscht, und dies ermöglicht es, die Denaturierung von Substanzen aufgrund von Wärme zu unterdrücken. Andererseits erhöht einer niedrigerer Siedepunkt die Destillationsneigung und der Rückflussstrom kann erhöht werden. Durch Einstellen der Bedingungen für die Rektifizierung, so dass der Vakuumgrad bei 0,2 Torr oder weniger liegt und die Gesamtsäulentemperatur bei 190°C oder weniger liegt, kann die Rektifizierung bei noch niedrigeren Temperaturen und mit angemessenem Rückflussstrom durchgeführt werden. Der erhöhte Rückflussstrom verbessert die Genauigkeit der Trennung durch Destillation und die Abtrennung von Substanzen wie Arachidonsäurealkylestern, die Siedepunkte ähnlich denen von EPA-Alkylestern aufweisen, kann ebenfalls leicht bewerkstelligt werden. Als Folge können mit Hinblick auf ein Erzielen eines Gleichgewichts zwischen den beiden Anforderungen, d.h. Abtrennen von anderen Fettsäurealkylestern wie Arachidonsäurealkylestern und Unterdrücken der Bildung von Verunreinigungen aufgrund von Wärme, Zusammensetzungen mit höheren Gehalten an EPA-Alkylestern erhalten werden.
Der hierin verwendete Ausdruck „Rektifizierung“ bezieht sich auf ein Verfahren, bei dem ein Teil des unter Erwärmungsbedingungen gebildeten Dampfs als Rückfluss zu der gleichen Destillationssäule rückgeführt wird und eine Trennung von Bestandteilen mit hoher Genauigkeit durchgeführt wird, indem man sich das Gas-Flüssigkeits-Gleichgewicht zwischen dem durch die Säule aufsteigenden Dampf und der Probe in einem flüssigen Zustand zunutze macht ( JP H4-128250A und JP H5-222392A ).
Der hierin verwendete Ausdruck „Gesamtsäule“ bezüglich der Druck- und Temperaturbedingungen in dem Destillationsschritt bedeutet, dass die Bedingungen mit allen Destillationssäulen in Zusammenhang stehen, die in dem Destillationsschritt verwendet werden können. Wenn nur eine Destillationssäule in dem Destillationsschritt verwendet wird, bedeutet der Ausdruck, dass die Bedingungen mit dieser einzelnen Destillationssäule in Zusammenhang stehen, und wenn mehr als eine Destillationssäule in dem Destillationsschritt verwendet wird, bedeutet der Ausdruck, dass die Bedingungen mit all den Destillationssäulen, die vorhanden sind, in Zusammenhang stehen.
Der Destillationsschritt kann unter Verwendung einer einzelnen Destillationssäule durchgeführt werden; alternativ kann es sich um eine kontinuierliche Rektifizierung unter Verwendung von zwei oder mehr, drei oder mehr oder sogar vier oder mehr Destillationssäulen handeln. Bei der kontinuierlichen Rektifizierung unter Verwendung von zwei oder mehr Destillationssäulen ist es besonders wichtig, den Vakuumgrad aufrechtzuerhalten. Da die Zufuhr der Beschickung in ein Vakuum und die Entnahme von Fraktionen oder Rückstand Veränderungen des Vakuumgrads zur Folge haben können, erfolgt vorzugsweise eine kontinuierliche Herstellung unter hohem Vakuum, da Abweichungen vom Vakuumgrad unterdrückt werden, indem dafür gesorgt wird, dass sichergestellt ist, dass der Vakuumgrad auf einem stabilen Niveau gehalten wird. Bei der kontinuierlichen Destillation, die unter Verwendung von vorzugsweise drei oder mehr Destillationssäulen, stärker bevorzugt vier oder mehr Destillationssäulen, durchzuführen ist, kann der Gesamtturm-Vakuumgrad auf 0,2 Torr oder weniger eingestellt werden. Durch Verringern des Vakuumgrads kann die Temperatur weiter gesenkt werden. Aus industrieller Sicht, was die Notwendigkeit beinhaltet, Anlagen mit höherer Leistung zu bauen, wird die kontinuierliche Destillation vorzugsweise bei Temperaturen von 150-190°C, vorzugsweise bei 170-190°C, durchgeführt.
Der auf HPLC oder anderem beruhende Chromatographieschritt im Anschluss an den Destillationsschritt ist ein Schritt, bei dem die Gehalte jeglicher unbeabsichtigter Bestandteile in der in dem Destillationsschritt erhaltenen Zusammensetzung verringert werden, indem man die unbeabsichtigten Bestandteile entfernt oder anderweitig behandelt, so dass EPA-Alkylester in der Zusammensetzung nach der Rektifizierung weiter konzentriert sind; dieser Schritt kann gemäß einem herkömmlich bekannten Verfahren, z.B. das in JP H5-222392A usw. beschriebene Verfahren, durchgeführt werden. Als bei der Konzentrationsbehandlung zu verwendende Chromatographie ist Umkehrphasen-Chromatographie geeignet. Die stationäre Phase ist nicht konkret spezifiziert und jedes Adsorbens für das Umkehrphasen-Verteilungssystem kann verwendet werden; ein bevorzugtes Beispiel ist eine ODS-Säule unter Verwendung von Octadecylsilyl (ODS).
Da der Gehalt an Arachidonsäurealkylestern in dem Destillationsschritt verringert werden kann, verbessert sich der prozentuale Schnitt an EPA-Alkylestern mit Hilfe von HPLC und ihre prozentuale Gewinnung wird ausreichend verbessert, um die Herstellung von EPA-Alkylestern auf industrieller Ebene mit geringeren Gehalten an Arachidonsäurealkylestern und anderen Verunreinigungen zu ermöglichen. Als ein weiterer Vorteil ist es gemäß dem in Betracht gezogenen Verfahren möglich, die Gehalte an von Arachidonsäurealkylestern verschiedenen Verunreinigungen einschließlich Niederalkylesterformen von C20:0, C20:4n-3, C20:5n-3(5,9,11,14,17), C18:3n-3, C18:4n-3, C19:0, C19:5n-3, C21:5n-3 und C22:6n-3 - diese waren bisher schwer zu trennen - sowie mono-trans-Isomeren von EPA-Alkylestern, wie mono-trans-Isomeren von EPA-E, zu verringern.
<Verwendungsarten>
Die Art der Verwendung der Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist nicht sonderlich beschränkt, ist jedoch vorzugsweise in einer oralen Dosierungsform, wobei typischerweise orale Formulierungsformen einschließlich Granulat, Tabletten, Kapseln, Flüssigkeiten/Lösungen usw. angenommen werden. Anwendungen der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung beinhalten z.B. Nahrungsmittel und Getränke (z.B. Reformkost, nutrazeutische Nahrungsmittel, Nahrungsmittel zur speziellen Verwendung für das Wohlbefinden (FOSHU), Ergänzungsmittel, Molkereiprodukte, Softdrinks, Tierfutter oder Getränke für Tiere und Futter für Haustiere), Pharmazeutika, arzneimittelähnliche Produkte usw; Ergänzungsmittel und Pharmazeutika sind besonders bevorzugt. Zusätzlich zu der Verwendung als Nahrungsmittelbestandteile oder Nahrungsmittel als solche kann die Zusammensetzung als ein Bestandteil verwendet werden, der Tierfutter zuzugeben ist. Deshalb kann die Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung als ein Bestandteil oder ein wirksamer Bestandteil der vorstehenden Nahrungsmittel und Getränke, Pharmazeutika und arzneimittelähnlichen Produkte verwendet werden und kann vorzugsweise bei deren Fertigung verwendet werden.
<Arzneimittel>
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beinhaltet ein Arzneimittel, das die vorstehend beschriebene Zusammensetzung als einen wirksamen Bestandteil enthält. Der Gehalt der vorstehend beschriebenen Zusammensetzung in dem Arzneimittel ist nicht sonderlich beschränkt, beträgt jedoch vorzugsweise 25 Gew.-% oder mehr, stärker bevorzugt 50 Gew.-% oder mehr, noch stärker bevorzugt 70 Gew.-% oder mehr, sogar noch stärker bevorzugt 85 Gew.-% oder mehr und noch stärker bevorzugt 96 Gew.-% oder mehr und am meisten bevorzugt 98 Gew.-% oder mehr.
Das Arzneimittel kann zur Behandlung oder Prävention von Erkrankungen, einschließlich Arteriosklerose, Hirninfarkt, kardiovaskulärem Infarkt, Thrombose, lebensstilbedingter Erkrankungen, wie z.B. Hyperlipidämie, Allergien, entzündlicher Erkrankungen und Krebsarten, verwendet werden; es kann z.B. als therapeutisches Mittel für okklusive Arteriosklerose oder als therapeutisches Mittel für Hyperlipidämie verwendet werden.
Da die Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung einen verringerten Gehalt an Verunreinigungen aufweist, besitzt sie ein äußerst hohes Maß an Sicherheit und kann verwendet werden, um Arzneimittelpräparate herzustellen, die eine breite Sicherheitsspanne aufweisen. Zum Beispiel kann man hochreine EPA-Ethylester-Präparate, wie z.B. hochreine EPA-E-Präparate, bei denen die tägliche Dosis an EPA-E mindestens das Dreifache, vorzugsweise mindestens das Fünffache der gewöhnlichen Dosis beträgt, oder hochreine EPA-Ethylester-Präparate, wie z.B. hochreine EPA-E-Präparate, bei denen die tägliche Dosis an EPA-E mindestens 6 g, vorzugsweise mindestens 10 g, beträgt, herstellen. Unter Verwendung dieser Präparate können sogar Erkrankungen, für die anhand der gewöhnlich Dosen bei Hyperlipidämie usw. keine therapeutische Wirksamkeit zu erwarten ist, sicher behandelt werden.
Zusätzlich zu dem wirksamen Bestandteil kann das Arzneimittel in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung pharmazeutisch verträgliche Additivbestandteile umfassen. Das Arzneimittel, das derartige Additivbestandteile umfasst, kann einen pharmazeutisch verträglichen Exzipienten umfassen. Das Arzneimittel kann zweckmäßigerweise bekannte Antioxidantien, Beschichtungsmittel, Geliermittel, Aromastoffe, Odoriermittel, Konservierungsmittel, Antioxidantien, Emulgatoren, pH-Modifikatoren, Puffer, Färbemittel usw. darin einschließen. Als Antioxidans ist wünschenswerterweise mindestens ein Mitglied, ausgewählt aus butyliertem Hydroxytoluol, butyliertem Hydroxyanisol, Propylgallat, Gallussäure, pharmazeutisch verträglichen Chinonen, Ascorbinsäureestern wie Palmitatascorbat und Tocopherolen, als Antioxidans in einer wirksamen Menge enthalten.
Die Darreichungsform der Präparate kann ebenfalls mit der Form, in der der wirksame Bestandteil in Kombination verwendet wird, variieren und ist nicht sonderlich beschränkt, orale Präparate sind jedoch bevorzugt und beispielhafte Formen, die verwendet werden können, beinhalten Tabletten, filmbeschichtete Tabletten, Kapseln, Mikrokapseln, Granulat, verfeinertes Granulat, Pulver, flüssige Präparate zur oralen Verabreichung, Sirups, Gelees und Inhalate. Besonders bevorzugt ist die orale Verabreichung von Kapseln, die durch Verkapseln mit z.B. Weichkapseln oder Mikrokapseln hergestellt wurden. Die Präparate können oral als enterische Präparate oder Präparate mit verlängerter Freisetzung verabreicht werden oder sie können oral als Gelees an Patienten unter Dialyse, Patienten mit Schwierigkeiten beim Schlucken und ähnliche Patienten verabreicht werden. Aus dem Arzneimittel der vorliegenden Erfindung können gemäß Routineverfahren Präparate hergestellt oder formuliert werden.
Eine Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beinhaltet ein Verfahren zur Prävention, Behandlung oder Linderung von Erkrankungen, umfassend Verabreichen eines Arzneimittels in einer anderen Ausführungsform der vorliegenden Erfindung an einen Patienten, der von mindestens einer Erkrankung, ausgewählt aus Arteriosklerose, Hirninfarkt, kardiovaskulärem Infarkt, Thrombose, Lebensstilbedingter Erkrankungen, Allergien, entzündlichen Erkrankungen und Krebsarten, betroffen ist oder Gefahr läuft, von diesen betroffen zu werden. Die Art und Weise der Verabreichung kann orale Verabreichung oder topische Verabreichung sein. Die Dosierung kann eine therapeutisch oder prophylaktisch wirksame Menge sein und wird so eingestellt, wie es für derartige Bedingungen wie die Art der Zielerkrankung, die Schwere der Symptome, das Alter, Körpergewicht und den Gesundheitszustand des Patienten, an den die Zusammensetzung zu verabreichen ist, angemessen ist. Im Falle eines Erwachsenen kann die betreffende Zusammensetzung z.B. entweder oral oder parenteral in einer Dosis von 1 mg bis 1g/kg/Tag, vorzugsweise 5 mg bis 300 mg/kg/Tag, ausgedrückt als die Menge des wirksamen Bestandteils, einmal oder zweimal bis viermal täglich oder aufgeteilt in mehrere Portionen in geeigneten Abständen verabreicht werden.
Der hierin verwendete Ausdruck „therapeutisches Mittel“ bezieht sich auf ein Arzneimittel, das, wenn ein Symptom aufgrund der Zielerkrankung offensichtlich ist, verwendet wird, um das Fortschreiten einer derartigen Erkrankung zu unterdrücken oder abzuschwächen. Im Gegensatz dazu bezieht sich der Ausdruck „prophylaktisches Mittel“ auf ein Arzneimittel, das, wenn das Auftreten eines Symptoms aufgrund der Zielerkrankung zu erwarten ist, verwendet wird, um dieses Symptom zu unterdrücken, indem es im Voraus verabreicht wird. Es sollte jedoch darauf hingewiesen werden, dass diese Ausdrücke abhängig vom Zeitpunkt der Verwendung oder dem Symptom zum Zeitpunkt der Verwendung in Kombination verwendet werden können und keine einschränkende Interpretation beabsichtigt ist.
Wie hierin verwendet, schließt ein mit dem unbestimmten Artikel „ein“ oder „eine“ bezeichnetes Element die Möglichkeit des Vorhandenseins eines oder mehrerer Elemente nicht aus, sofern es keine klare Angabe oder keinen klaren Bezug in diesem Zusammenhang gibt. Somit bedeutet der unbestimmte Artikel „ein“ oder „eine“ gewöhnlich „mindestens ein(e)“.
Das Verb „umfassend“ und dessen Konjugation, die hierin genannt werden, werden in einem nicht-einschränkenden Sinn verwendet und bedeuten, dass die auf diesen Ausdruck folgenden Gegenstände eingeschlossen sind und dass Gegenstände, die nicht konkret genannt sind, nicht ausgenommen sind.
Einzelne, die Erfindung konkretisierende Merkmale, die hierin in einer Ausführungsform, die jeden Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft, erklärt sind, können auf jede gewünschte Art und Weise kombiniert werden, um eine neue Ausführungsform zu formulieren, und es versteht sich, dass sogar eine derartige neue Ausführungsform in jedem Aspekt der vorliegenden Erfindung umfasst sein kann.
BEISPIELE
Die vorliegende Erfindung wird nachstehend mit Bezug auf Beispiele genauer beschrieben, die vorliegende Erfindung ist jedoch in keiner Weise durch diese Beispiele beschränkt. Es sei darauf hingewiesen, dass in den folgenden Beispielen, sofern nicht anders angegeben, „%“ „Gew.-%“ bedeutet.
In den Beispielen und Vergleichsbeispielen in den folgenden Abschnitten wird EPA-E als ein EPA-Alkylester verwendet, die vorliegende Erfindung ist jedoch nicht darauf beschränkt und es kann durch andere EPA-Alkylester, wie z.B. EPA-M, ersetzt werden.
Auf empirischem Wege wurde gezeigt, dass die prozentuale Ethylveresterung von Fischölen unter Verwendung von Ethanol im Allgemeinen 95% bis 100% beträgt. Somit war der in dem Abschnitt der vorliegenden Beispiele beschriebene Ausgangsmaterial-Ethylester (Fischöl-Ethylester) vermutlich derart, dass nahezu alle enthaltenen gesättigten oder ungesättigten Fettsäuren in der Fettsäureethylesterform vorlagen. Deshalb werden im Abschnitt der vorliegenden Beispiele die in dem Vorlauföl enthaltenen gesättigten oder ungesättigten Fettsäuren alle als gesättigte oder ungesättigte Fettsäuren in der Ethylesterform beschrieben. Dies soll jedoch nicht so verstanden werden, dass das Vorhandensein von anderen Fettsäuren als der Ethylesterform vollständig ausgenommen ist.
Beispiel 1
<Herstellungsverfah ren>
Ein auf herkömmliche Weise hergestellter Fischöl-Ethylester (EPA in Fettsäuren ≥16 Flächen- %; Säurewert ≤0,8; POV ≤30) wurde kontinuierlicher Rektifizierung unter Verwendung eines mehrstufigen Destillierapparats unter derartigen Gesamtsäulenbedingungen unterzogen, dass der Vakuumgrad 0,2 Torr oder weniger betrug und die Temperatur 190°C oder weniger betrug, woraufhin die Beschickung in eine anfängliche Fraktion, eine Hauptfraktion und eine Restfraktion fraktioniert wurde. Die resultierende Hauptfraktion wurde mit Hilfe von Hochleistungs-Flüssigsäulenchromatographie (HPLC) unter Verwendung einer mit einem octadecyliertem Kieselgel gepackten Säule eines Umkehrphasen-Verteilungssystems raffiniert, woraufhin gereinigtes EPA-E erhalten wurde.
<Beurteilungsverfahren>
Unter Verwendung verschiedener Ausgangsmaterialien wurden 11 Partien gereinigtes EPA-E hergestellt und hinsichtlich des Aufbaus der Fettsäuren unter Verwendung von Gaschromatographie (GC) analysiert. Die mittleren Retensionszeiten für die Peaks der jeweiligen Fettsäureethylester, deren relative Retensionszeiten, die durchschnittlichen Gehalte, Maxima und Minima (Flächen-%) sind in Tabelle 1 gezeigt. Die in Tabelle 1 angegebenen relativen Retensionszeiten beziehen sich auf die mittleren Retensionszeiten für die jeweiligen Peaks, wobei die mittlere Retensionszeit von EPA-E als 1 genommen wird.
Die zur Analyse des Aufbaus der Fettsäuren verwendeten GC-Messbedingungen waren wie folgt:

GC-FID-Messbedingungen
GC: 6890N (Agilent Technologies)
Säule: DB-WAX (Agilent Technologies) 30 m x 0,25 mm ID, 0,25 µm Filmdicke
Trägergas: Helium, 0,5 ml/min (so eingestellt, dass EPA-E in ca. 30 min eluieren würde) Einspritzöffnung: 300°C, 1 µl, Split (1:100)
Säulentemperatur: 200°C (konstant)
Detektor: FID, 300°C
Zusatzgas: Stickstoff, 40 ml/min

	Mittlere Retensionszeit (min)	Relative Retensionszeit	Minimalwert (Flächen-%)	Maximalwert (Flächen-%)	Mittelwert (Flächen-%)
EPA-E	29,333	1,000	96,477	97,603	97,155
Ethylarachidonat	23,571	0,804	0,044	0,208	0,090
Isomer A (Position 14, trans-Form)	28,010	0,955	0,256	0,339	0,290
Isomer B (Position 17, trans-Form)	30,138	1,027	0,262	0,369	0,312
Isomer C (Position 5, trans-Form)	31,146	1,062	0,231	0,295	0,265
Isomer D (Position 11, trans-Form) + Isomer E (Struktur noch zu ermitteln)	31,591	1,077	0,668	0,965	0,820
C18:3n-3-Ethylester	14,197	0,484	0,036	0,098	0,060
C18:4n-3-Ethylester	15,385	0,524	0,062	0,185	0,116
C19:0-Ethylester	12,936	0,441	0,012	0,076	0,049
C19:5n-3-Ethylester	21,658	0,738	0,049	0,153	0,098
C20:0-Ethylester	17,062	0,582	0,014	0,087	0,038
C20:4n-3-Ethylester	26,968	0,919	0,089	0,374	0,174
C20:5n-3(5,9,11,14,17)-Ethylester	40,286	1,373	0,059	0,161	0,086
C21:5n-3-Ethylester	38,862	1,325	0,029	0,133	0,086
C22:6n-3-Ethylester	55,389	1,888	0,029	0,075	0,050

Was die Isomere A-D betrifft, wurden durch erzwungenes Erwärmen hergestellte Isomerproben verwendet, um den Aufbau der Isomere mit Hilfe von GC-FID zu ermitteln, die Anzahl an Doppelbindungen der jeweiligen Peaks mit Hilfe von GC-MS zu bestimmen und NMR-Analyse der jeweiligen Peaks durchzuführen. Als Ergebnis wurde nachgewiesen, dass die Isomere A-D jeweils ein Isomer von EPA-E waren, bei dem nur eine der Positionen 14, 17, 5 und 11 der fünf Doppelbindungen in EPA-E eine trans-Form annahmen. Da die Peaks von Isomer D und Isomer E sich überschnitten und nicht zu trennen waren, wurde die Menge an Isomer D als Summe mit der Menge an Isomer E angegeben.
<Ergebnisse der Beurteilung>
Durch Durchführen einer Rektifizierung, wobei der Gesamtsäulen-Vakuumgrad und die Temperatur auf 0,2 Torr bzw. 190°C oder weniger eingestellt wurden, konnten die Gehalte an schwer zu trennenden Verunreinigungen, wie z.B. Ethylarachidonat, C20:0-Ethylester, C20:4n-3-Ethylester, C20:5n-3(5,9,11,14,17)-Ethylester, C18:3n-3-Ethylester, C18:4n-3-Ethylester, C19:0-Ethylester, C19:5n-3-Ethylester, C21:5n-3-Ethylester und C22:6n-3-Ethylester verringert werden, während gleichzeitig die Gehalte an trans-Isomeren von EPA-E ebenfalls verringert werden konnten. Außerdem betrugen die Gehalte an MUFA-Ethylester und DHA-Ethylester in den resultierenden Zusammensetzungen jeweils 0,05 Flächen-% oder weniger.
Durch Durchführen von HPLC auf Basis einer ODS-Säule nach der Rektifizierung wurden Eicosapentaensäurealkylester enthaltende Zusammensetzungen erhalten, die 96-99 Flächen-% Ethyleicosapentaenonat enthielten, während der Ethylarachidonat-Gehalt 0,7 Flächen-% oder weniger betrug und der Gehalt an mono-trans-Formen von Ethyleicosapentaenoat 2,5 Flächen-% oder weniger betrug.
In der vorliegenden Erfindung wurde gefunden, dass man Zusammensetzungen herstellen kann, in denen Eicosapentaensäurealkylester, wie z.B. Ethyleicosapentaenoat, in hohen Reinheiten enthalten sind, während die Gehalte an Verunreinigungen verglichen mit den herkömmlichen Graden weiter verringert sind. Da die Zusammensetzung in einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung sogar im industriellen Maßstab hergestellt werden kann, kann sie vorteilhafterweise als Ausgangsmaterial für Reformkost, Arzneimittel usw. verwendet werden, die serienmäßig hergestellt werden müssen, während sie Sicherheitsmerkmale erfüllen müssen.
Die Offenbarung der japanischen Patentanmeldung Nr. 2014-188997 , eingereicht am 17. September 2014, ist durch Bezugnahme in ihrer Gesamtheit hierin aufgenommen.
Alle hierin beschriebenen Dokumente, Patentanmeldungen und technischen Normen sind durch Bezugnahme in gleichem Maße hierin aufgenommen, wie wenn konkret und einzeln angegeben ist, dass die einzelnen Dokumente, Patentanmeldungen und technischen Normen durch Bezugnahme aufgenommen sind.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
Zitierte Patentliteratur

JP H5222392 A [0003, 0120, 0121, 0123]
WO 2012/027698 [0113]
WO 2010/033753 [0113]
JP H4128250 A [0123]
JP 2014188997 [0149]

Zitierte Nicht-Patentliteratur

uropean Journal of Lipid Science and Technology, 108 (2006) 589-597, „Geometrical isomerization of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acid at high temperature“; JAOCS, 66 (1989) 1822-1830, „Eicosapentaenoic acid geometrical isomer artifacts in heated fish oil esters‟ [0004]
European Journal of Lipid Science and Technology, 108 (2006) 589-597; JAOCS, 66 (1989) 1822-1830 [0119]

Claims

Eine Zusammensetzung, enthaltend Eicosapentaensäurealkylester, die, bei Messung mit Gaschromatographie, 96-99 Flächen-% eines Eicosapentaensäurealkylesters umfasst, wobei der Gehalt eines Arachidonsäurealkylesters 0,7 Flächen-% oder weniger beträgt, wobei der Gehalt an mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt, wobei der Gehalt an Alkylestern von gesättigten Fettsäuren 0,5 Flächen-% oder weniger beträgt und wobei die Zusammensetzung eine der folgenden Bedingungen (i) - (iii) erfüllt: (i) der Gehalt eines Octadecatetraensäure(C18:4 n-3)alkylesters beträgt 0,4 Flächen-% oder weniger, (ii) der Gehalt eines Nonadecapentaensäure(C19:5 n-3)alkylesters beträgt 0,2 Flächen- % oder weniger und (iii) der Gehalt eines Eicosatetraensäure(C20:4 n-3)alkylesters beträgt 0,7 Flächen-% oder weniger.
Die Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen und di-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen, di-trans-Formen und tri-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Summe der Gehalte an mono-trans-Formen, di-trans-Formen, tri-trans-Formen und tetra-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters 2,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei der Gehalt an einer der mono-trans-Formen des Eicosapentaensäurealkylesters, bei dem eine der Doppelbindungen an seinen 5-, 14- und 17-Positionen trans ist, 0,5 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei der Gehalt einer mono-trans-Form des Eicosapentaensäurealkylesters, bei dem die Doppelbindung an seiner 11-Position trans ist, 1,0 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei der Gehalt eines n-Nonadecansäure(C19:0)alkylesters 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei der Gehalt eines Arachinsäure(C20:0)alkylesters 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei der Gehalt an α-Linolensäure(C18:3 n-3)alkylester 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei der Gehalt eines Icosa-5,9,11,14,17-pentaensäure(C20:5 n-3(5,9,11,14,17))alkylesters 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10, wobei der Gehalt eines Henicosapentaensäure(C21:5 n-3)alkylesters 0,2 Flächen-% oder weniger beträgt.
Die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, wobei der Gehalt an Docosahexaensäure(C22:6 n-3)alkylester 0,1 Flächen-% oder weniger beträgt.