DE19930253A1 - Chamber for two-dimensional electrophoresis using stacked horizontal includes at least two guide members for inserting an isolating element for temporarily separating two gels - Google Patents

Chamber for two-dimensional electrophoresis using stacked horizontal includes at least two guide members for inserting an isolating element for temporarily separating two gels

Info

Publication number
DE19930253A1
DE19930253A1 DE1999130253 DE19930253A DE19930253A1 DE 19930253 A1 DE19930253 A1 DE 19930253A1 DE 1999130253 DE1999130253 DE 1999130253 DE 19930253 A DE19930253 A DE 19930253A DE 19930253 A1 DE19930253 A1 DE 19930253A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
gel
electrophoresis
characterized
ief
dimension
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
DE1999130253
Other languages
German (de)
Inventor
Brigitte Wittmann-Liebold
Christian Scheler
Christian Wurzel
Andreas Reuter
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
WITA PROTEOMICS AG, 14513 TELTOW, DE
Original Assignee
Wita Wittmann Institutes Of Technology And Analysis Of Biomolecules GmbH
Wita Wittmann Inst Of Tec GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wita Wittmann Institutes Of Technology And Analysis Of Biomolecules GmbH, Wita Wittmann Inst Of Tec GmbH filed Critical Wita Wittmann Institutes Of Technology And Analysis Of Biomolecules GmbH
Priority to DE1999130253 priority Critical patent/DE19930253A1/en
Publication of DE19930253A1 publication Critical patent/DE19930253A1/en
Application status is Ceased legal-status Critical

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electro-chemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electro-chemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416Systems
    • G01N27/447Systems using electrophoresis
    • G01N27/44756Apparatus specially adapted therefor
    • G01N27/44773Multi-stage electrophoresis, e.g. two-dimensional electrophoresis
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/24Extraction; Separation; Purification by electrochemical means
    • C07K1/26Electrophoresis
    • C07K1/28Isoelectric focusing
    • C07K1/285Isoelectric focusing multi dimensional electrophoresis
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electro-chemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electro-chemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416Systems
    • G01N27/447Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704Details; Accessories

Abstract

Combination chamber for two-dimensional electrophoresis using stacked horizontal gels comprises a back plate and a cover plate between which are located at least two guide members for inserting an isolating element. Independent claims are also included for the following: (1) a process for performing two-dimensional electrophoresis in a combination chamber, comprising: (a) arranging an isoelectric focussing (IEF) gel horizontally in the chamber and rehydrating the gel with buffer; (b) loading the IEF gel with a sample and performing electrophoresis in the first dimension; (c) introducing a sodium dodecyl sulfate (SDS) gel into the chamber so that its is horizontally isolated from the IEF gel, and polymerizing the SDS gel; and (d) when IEF electrophoresis is complete, removing the isolation, introducing a contact gel into the resulting space, adding a buffer solution, performing SDS electrophoresis in the second dimension, and developing and staining the gels; (2) a process for performing one-dimensional electrophoresis, comprising inserting a comb into an SDS gel, polymerizing the gel, removing the comb, introducing samples into the resulting wells, and performing one-dimensional electrophoresis; (3) a hydrated IEF gel produced by: casting and polymerizing a low-pK immobilin gel on a film; casting and polymerizing an acrylamide gel on the immobilin gel; casting and polymerizing a high-pK immobilin gel on the acrylamide gel; and rehydrating the IEF gel with a buffer containing 1-4% of ampholines (not defined) providing a pH of 2-11; and (4) a dry gel produced by: (a) casting and polymerizing a low-pK immobilin gel on a film; (b) casting and polymerizing an acrylamide gel on the immobilin gel; and (c) casting and polymerizing a high-pK immobilin gel on the acrylamide gel.

Description

Die Erfindung betrifft eine Kombinationskammer und Verfahren zur Trennung von Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen und ist anwendbar insbesondere bei der ein- oder zwei-dimensionalen Trennung von Biomolekülen in Gelen durch Elektrophorese in einer Elektrophoreseapparatur, beispielsweise der Auftrennung von Proteinen, Glycoproteinen, Lipoproteinen, Nukleinsäuren oder Zellkomplexen in Gelen. The invention relates to a combination chamber and process for the separation of biomolecules or other mixtures and is particularly applicable to the one- or two-dimensional separation of biomolecules in gels by electrophoresis in an electrophoresis apparatus, for example, the separation of proteins, glycoproteins, lipoproteins, nucleic acids or cell complexes in gels.

Aus der DE 198 31 210 ist ein Verfahren und eine Vorrichtung zur zwei-dimensionalen Trennung von Biomolekülen in Gelen durch Elektrophorese in einer Elektrophoreseapparatur bekannt, welche insbesondere der Auftrennung von beispielsweise Proteinen, Glycoproteinen, Lipoproteinen, Nukleinsäuren oder Zellkomplexen dienen. From DE 198 31 210, a method and a device for two-dimensional separation of biomolecules in gels by electrophoresis in an electrophoresis apparatus is known, which serve in particular for the separation of, for example, proteins, glycoproteins, lipoproteins, nucleic acids or cell complexes. Die dort beschriebene Vorrichtung ist dadurch gekennzeichnet, daß eine Elektrophorese- Kombikammer einen Kern mit Kühlelementen aufweist, wobei die Kühlelemente unter den beidseitig des Kerns durch innere Platten und äußere Platten im Zusammenwirken mit entfernbaren oder schaltbaren Isolierelementen gebildeten Gelkammern und Puffergefäßen angeordnet sind. The device described therein is characterized in that an electrophoresis combination chamber comprising a core with cooling elements, wherein the cooling elements are arranged at the both sides of the core formed by inner plates and outer plates in cooperation with removable or switchable insulating members gel chambers and buffer vessels.

Das Verfahren basiert darauf, daß in der Elektrophorese-Kombikammer senkrecht nebeneinander angeordnete Gele bearbeitet werden. The method is based on that vertically arranged side by side in the electrophoresis chamber combination gels are processed.

Eine Behandlung von waagerecht übereinander angeordneten Gelen ist mit der beschriebenen Lösung nicht möglich. Treatment of horizontally superposed gels is not possible with the described solution.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Kombinationskammer und ein Verfahren zur Trennung von Biomolekülen zu schaffen, mit welchen mit einfachen Mitteln in einer einzigen Apparatur mit selbstgegossenen Gelen und/oder getrockneten Fertig gelen effektive Gelelektrophoresen der ersten und zwei ten Dimension vollautomatisch durchgeführt werden können. The invention has for its object to provide a combination chamber and a process for the separation of biomolecules with which gelen effective gel electrophoresis of the first and two th dimension can be carried out fully automatically with simple means in a single apparatus with self-cast gels and / or dried instant. Es ist weiterhin Aufgabe der Erfindung, spezifische Fertiggele anzugeben. It is a further object of the invention to provide specific precast.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch die Merkmale in den Ansprüchen 1, 10, 19 und 20. This object is achieved by the features in claims 1, 10, 19 and 20th

Zweckmäßige Ausgestaltungen der Erfindung sind in den Unteransprüchen enthalten. Advantageous embodiments of the invention are contained in the subclaims.

Ein besonderer Vorteil der Erfindung besteht darin, daß eine Vollautomatisierung der gesamten 2DE einfach durchgeführt werden kann, indem die Gele für die Trennung in der ersten Dimension und die Gele für die Trennung in der zweiten Dimension waagerecht zueinander, also übereinander angeordnet werden. A particular advantage of the invention is that a full automation of the entire 2DE can be easily performed by the gels for the separation in the first dimension and the gels horizontally to each other for separation in the second dimension, are therefore arranged one above the other.

Diese waagerechte Anordnung wird dadurch ermöglicht, daß die Isolierelemente zwischen den Gelen der ersten Dimension und den Gelen der zweiten Dimension ebenfalls in einem definierten Bereich waagerecht verlaufen, gleichwohl jedoch über Umlenkelemente zur Führung nach obenhin aus der Kombinationskammer herausgezogen werden können. This horizontal arrangement is made possible in that the insulating members between the gels in the first dimension and the second dimension gels also extend horizontally in a defined region, but nevertheless over deflecting elements can be pulled out carelessly from the combination chamber for guiding.

Ein weiterer Vorteil der Erfindung besteht darin, daß mit der gleichen Kombinationskammer auch die ein- dimensionale Trennung durchgeführt werden kann, indem anstelle des Gels für die Trennung in der ersten Dimension sowie des Isolierelementes ein Kamm mit Probentaschen für verschiedene Proben in das SDS-Gel eingesetzt und dieses auspolymerisiert wird, der Kamm nach dem Auspolymerisieren entfernt, die Proben in die entstandenen Aussparungen eingebracht und nachfolgend die ein-dimensionale Elektrophorese durchgeführt wird. Another advantage of the invention is that the one-dimensional separation can be performed with the same combination chamber by used a comb with sample wells for various samples in the SDS-gel in place of the gel for the separation in the first dimension as well as the insulating and this polymerization is completed, the comb is removed after the complete polymerization, is introduced, the samples in the resulting recesses and then the one-dimensional electrophoresis is performed.

Hierzu wird auf den Einsatz des Isolierelementes verzichtet und statt dessen ein Kamm mit Probentaschen beim Auspolymerisieren des SDS-Geles mit eingesetzt, der nach Auspolymerisierung des Geles herausgenommen wird, so daß nunmehr multiple Ports für das Auftragen verschiedener Proben im Gel enthalten sind. For this purpose, without the use of the insulating member and a comb with sample wells used with, instead, when complete polymerization of the SDS-gel, which is taken out after Auspolymerisierung of the gel, so that now multiple ports are included for the application of various samples in the gel. Diese können alle parallel zueinander in der ein- dimensionalen Elektrophorese getrennt werden. These can be separated each other in the one-dimensional electrophoresis in parallel all. Die Konstruktion der Kombinationskammer bleibt also erhalten und es können sowohl ein-dimensionale wie zwei-dimensionale Gele im gleichen Kammersystem durchgeführt werden. The construction of the combination chamber therefore remains unchanged and it can be carried out both one-dimensional as two-dimensional gels in the same chamber system. Vorteilhaft ist auch, daß lange Laufstrecken, z. It is also advantageous that long running tracks, eg. B. 32 cm lange ein-dimensionale Gele, durchgeführt werden können. B. 32 cm one-dimensional gels can be made long.

Die Erfindung soll nachstehend anhand von in den Figuren dargestellten Ausführungsbeispielen näher erläutert werden. The invention will be explained in detail below based on illustrated in the figures embodiments. Es zeigen die Fig. 1 bis 5: In the drawings figures 1 to. 5:
eine Prinzipdarstellung der Kombinationskammer in den einzelnen Komplettierungsstufen. a schematic diagram of the combination chamber in the various completion stages.

Die Kombinationskammer besteht aus zwei Teilen, die übereinander angeordnet sind, dem oberen IEF-Teil für die Durchführung der IEF-Elektrophorese in der ersten Dimension und dem unteren Teil für die Durchführung der SDS-Elektrophorese in der zweiten Dimension. The combination chamber consists of two parts which are arranged one above the other, the upper IEF part for carrying out the IEF electrophoresis in the first dimension and the lower part for the implementation of SDS-electrophoresis in the second dimension.

Die Kombinationskammer besteht aus mehreren Bestandteilen, die beispielsweise durch Verschraubung oder Klemmen zusammengesetzt werden. The combination chamber consists of several components that are assembled for example by screwing or clamping. Die Rückwandplatte 28 A bildet mit dem oberen Pufferreservoir 29 der zweiten Dimension sowie den Gießgefäßen 30 zum Gießen der zweiten Dimension, dem Puffergefäß 31 zum Einfüllen des Puffers der zweiten Dimension eine Einheit. The rear wall plate 28 A forms with the upper buffer reservoir 29 of the second dimension and the Gießgefäßen 30 for casting the second dimension, the buffer vessel 31 for filling of the buffer in the second dimension a unit. Die als Glasplatte ausgebildete Deckplatte 28 B wird mit der Rückwandplatte 28 A und dem oberen Pufferreservoir 29 z. The formed as a glass plate, cover plate 28 B is to the rear wall plate 28 A and the upper buffer reservoir 29 z. B. durch Verschraubung verbunden. B. connected by screwing. Flache Dichtungen 23 rechts und links dichten nach außen ab und legen die Dicke der Gele zwischen den Platten 28 A und 28 B fest. Flat seals 23 right and left sealed to the outside and set the thickness of the gels firmly between the plates 28 A and 28 B. Die Platte 28 B hat eine Höhe, die sich aus der Höhe der Platte 28 A und der Höhe des oberen Pufferreservoirs 29 ergibt. The plate 28 B has a height extending from the level of the plate 28 A and the height of the upper buffer reservoir 29 results. Die Platten 28 A, 28 B können transparent sein. The plates 28 A, 28 B may be transparent. Insbesondere die obere Deckplatte 28 B sollte durchsichtig sein, um die einzelnen Verfahrensschritte beobachten zu können. In particular, the upper cover plate 28 B should be transparent in order to observe the individual process steps.

Zwischen den Umlenkelementen 22 befindet sich U-förmig ein im vorliegenden Ausführungsbeispiel als Schlauchdichtung ausgebildetes Isolierelement 24 , daß das Gel 25 der ersten Dimension vom Gel 36 der zweiten Dimension trennt. Between the deflection elements 22, a U-shape is formed in the present embodiment as a tube seal insulation member 24 so that the gel 25 in the first dimension of the gel 36 of the second dimension separates. Neben den Umlenkelementen 22 befinden sich die Elektroden 26 und 27 für die Elektrophorese der ersten Dimension. In addition to the deflection elements 22, the electrodes 26 and 27 for the first dimension electrophoresis.

Die zusammengesetzte Konstruktion aus den Platten 28 A, 28 B und den oberen Reservoirs wird in den unteren Puffertank 32 der zweiten Dimension gestellt. The composite construction of the plates 28 A, 28 B and the upper reservoir is placed in the lower buffer tank 32 of the second dimension. Dort befindet sich eine Dichtung 33 , die z. There is a seal 33 which for example. B. pneumatisch angehoben werden kann (Zustand 33 a), um den Leerraum zwischen den Platten 28 A und 28 B nach unten abzudichten, damit das Gel 36 der zweiten Dimension über eine Verbindung (z. B. einen Schlauch) aus dem Gießgefäß 30 gegossen werden kann. Can be raised pneumatically B. (state 33 a) to the space A between the plates 28 and B 28 to seal downwardly so that the gel 36 in the second dimension on a compound (z. B. a tube) cast from the casting vessel 30 can be. Das Pufferfüllgefäß 31 dient dem Füllen des unteren Puffertanks 32 . The Pufferfüllgefäß 31 is filling the lower buffer tank 32nd In dem Puffergefäß 29 und dem Puffertank 32 befinden sich die Elektroden 38 und 39 der zweiten Dimension. In the buffer vessel 29 and the buffer tank 32, the electrodes 38 and 39 of the second dimension.

Nachfolgend soll das Zusammensetzen der Kombinationskammer beschrieben werden. Subsequently, the assembly of the combination chamber will be described.

Zur Vorbereitung der 2DE werden auf eine Glasplatte 28 B, aus der zwei Umlenkelemente 22 , z. To prepare the 2DE be on a glass plate 28 B from the two deflection elements 22, for example. B. Bolzen, herausragen, rechts und links jeweils Flachdichtungen 23 als Spacer aus Kunststoff gelegt (vgl. Fig. 1). As bolts, protrude right and left, respectively gaskets 23 as a spacer made of plastic placed (see. Fig. 1). Die Bereiche der ersten und zweiten Dimension sind lediglich durch ein Isolierelement 24 , hier einen dehnbaren Kunststoffschlauch voneinander getrennt, der U-förmig zwischen den zwei Umlenkelementen 22 so angeordnet ist, daß sich eine gerade Abgrenzung nach unten ergibt. The areas of the first and second dimension, are a stretchable plastic tube only separated by an insulating member 24 from each other here, the U-shape between the two deflector elements 22 is arranged such that a straight delimitation down results. Er ragt an beiden Enden der oberen Kammer heraus und läßt sich leicht herausziehen. He stands out at both ends of the upper chamber and can be easily pulled out. Zwischen den Umlenkelementen 22 wird im vorliegenden Ausführungsbeispiel ein IEF-Fertiggelstreifen 25 positioniert (weiße waagerechte Fläche) und in direkten Kontakt mit den beiden Elektroden 26 , 27 gebracht, die bei den Umlenkelementen 22 durch die Glasplatte 28 B ragen und die Elektrophorese in der ersten Dimension ermöglichen. Between the deflecting elements 22 an IEF Fertiggelstreifen is in the present embodiment 25 is positioned (white level surface) and is brought into direct contact with the two electrodes 26, 27 that protrude in the deflector 22 through the glass plate 28 B and the electrophoresis in the first dimension enable. Dann wird die obere Glasplatte 28 B aufgelegt ( Fig. 2) und im vorliegenden Ausführungsbeispiel mittels Klammern mit der unteren Rückwandplatte 28 A und dem oberen Pufferreservoirs 29 zusammengehalten. Then, the upper glass plate is laid B (Fig. 2) and in the present embodiment by means of clips with the lower rear wall plate 28 A and the upper buffer reservoir 29 held together 28. Das Glasplattensandwich wird darauf in den Puffertank 32 gestellt ( Fig. 3). The sandwich glass plate is placed on it in the buffer tank 32 (Fig. 3). Das Gießgefäß 30 dient zum Gießen des SDS-PAGE-Geles und das Reservoir 29 und der Puffertank 32 als Pufferreservoir für die SDS-PAGE, wobei der Puffertank 32 über eine Verbindungsleitung aus Pufferfüllgefäß 31 gefüllt wird. The casting vessel 30 serves for molding the SDS-PAGE gel and the reservoir 29 and the buffer tank 32 as a buffer reservoir for the SDS-PAGE, wherein the buffer tank 32 is filled through a connecting line from Pufferfüllgefäß 31st

Im Puffertank 32 befindet sich eine Dichtung 33 , die beim Abdichten den Schlitz zwischen den beiden Glasscheiben 28 A, 28 B an der Unterseite verschließen kann. In the buffer tank 32 is a seal 33 which can seal for sealing the slot between the two glass sheets 28 A, 28 B at the bottom. In Fig. 3 ist sie im nicht-abdichtenden Zustand dargestellt. In Fig. 3 is illustrated in the non-sealing state.

Die Vorbereitung und Durchführung der Elektrophorese verläuft im vorliegenden Ausführungsbeispiel wie folgt: The preparation and execution of the electrophoresis runs in the present embodiment as follows:

Das IEF-Gel 25 wird zur Rehydratisierung mit Rehydratisierungspuffer zwischen den Glasplatten 28 A, 28 B im Raum 34 überschichtet und rehydratisiert. The IEF gel 25 is for the rehydration with rehydration buffer between the glass plates 28 A, 28 B overlaid in space 34 and rehydrated. Nach der Rehydratisierung (<2 h) wird der überschüssige Puffer entfernt. After rehydration (<2 hours) the excess buffer is removed. Dann wird die Probe in eine Aussparung 35 eingebracht, deren Platz durch Einbringung eines Spacer-Einsatzes während der Rehydratisierung ausgespart blieb. Then, the sample is placed in a recess 35, the space was omitted by incorporating a spacer insert during rehydration. Dann wird die Elektrophorese durch Anlegen einer Spannung zwischen den Elektroden 26 , 27 durchgeführt. Then, the electrophoresis is performed by applying a voltage between the electrodes 26, 27th Nach der Durchführung der IEF- Elektrophorese wird das IEF-Gel 25 durch Zusatz von Reequilibrierungspuffer, der in Raum 34 eingebracht wird, umgepuffert (30 min. bei pH 6,9). After carrying out the IEF electrophoresis, the IEF gel is 25 by addition of Reequilibrierungspuffer, which is introduced into space 34, rebuffered (30 min. At pH 6.9).

Das SDS-Gel 36 für die zweite Dimension wird vor, nach oder während der Durchführung der ersten Dimension gegossen, indem die Gellösung über das Gießgefäß 30 eingefüllt wird und durch eine Leitung nach unten zwischen die Glasplatten 28 A, 28 B geleitet wird ( Fig. 4). The SDS-gel 36 for the second dimension is before, after or while performing the first dimension molded by the gel solution is poured through the casting vessel 30 and is passed through a line down between the glass plates 28 A, 28 B (Fig. 4). In diesem Zustand dichtet die Dichtung 33 A das Glasplatten-Sandwich nach unten ab, so daß die Gellösung nicht auslaufen kann. In this state, the seal 33 seals the glass plates A sandwich downwards, so that the gel solution can not leak. Das Gel 36 wird zwischen den Glasplatten 28 A, 28 H für mindestens zwei Stunden polymerisiert. The gel 36 is polymerized between glass plates 28 A, 28 H for at least two hours. Danach wird die Abdichtung durch die Dichtung 33 A wieder aufgehoben und es resultiert die Dichtung 33 . Thereafter, the sealing by the gasket 33 A is canceled again and the result is the seal 33rd

Nach Beendigung der IEF-Elektrophorese und erfolgter Umpufferung des Gelstreifens 25 wird der Reequilibrierungspuffer aus dem Raum 34 entfernt, der Kunststoffschlauch 24 aus der Apparatur seitlich nach oben z. After completion of the IEF gel electrophoresis and successful re-buffering the gel strip 25 of the Reequilibrierungspuffer is removed from the space 34, the plastic tube 24 from the apparatus laterally upward z. B. mit einem Schrittmotor herausgezogen und der entstehende Zwischenraum 37 zwischen erster und zweiter Dimension mit Kontaktgel (z. B. Agarose-Sammelgel) befüllt ( Fig. 5). B. pulled out with a stepper motor, and the resulting intermediate space 37 between first and second dimension with electrode (z. B. agarose stacking gel) filled (Fig. 5). Dann wird Puffer in das Pufferreservoir 29 und den Puffertank 32 eingefüllt und über ein elektrisches Feld zwischen den Elektroden 38 , 39 der zweiten Dimension in den mit Puffer gefüllten Puffergefäßen 29 , 32 die SDS-Elektrophorese in der zweiten Dimension durchgeführt. Then, the buffer in the buffer reservoir 29 and the buffer tank is filled 32 and carried out via an electric field between the electrodes 38, 39 of the second dimension in the filled buffer buffer vessels 29, 32 the SDS-electrophoresis in the second dimension. Nach Ende der Elektrophorese wird das Platten-Sandwich herausgenommen, das Gel abgehoben und nach bekannten Methoden entwickelt, z. After the electrophoresis, the plate sandwich is taken, lifted off the gel and developed according to known methods, for. B. mit Silbernitratlösung oder Coomassielösung angefärbt. B. stained with silver nitrate solution or Coomassielösung.

Die Kühlung beider Elektrophorese-Dimensionen erfolgt durch Eintauchen der Gelsandwiche in thermostatisierte Pufferlösung der zweiten Dimension, die sich in dem Puffertank 32 befindet, oder es werden die Kammersandwiche durch an die Glasplatten 28 A, 28 B angelegte Kühlkammern gekühlt. The cooling of both electrophoresis dimensions is carried out by immersing the Gelsandwiche in thermostated buffer solution of the second dimension, which is located in the buffer tank 32, or it can be the chamber sandwiches cooled by the glass plates 28 A, 28 B-scale cooling chambers.

Eine andere vorteilhafte Ausführung des Isolierelementes 24 besteht darin, daß es sich um einen Schlauch handelt, welcher zur Erhöhung der Abdichtungseigenschaften zwischen den beiden Gelen mittels eines Fluides aufgepumpt werden kann und um die Entfernung des Schlauches nach der Durchführung der ersten Dimension zu erleichtern evakuiert werden kann. Another advantageous embodiment of the insulating element 24 is that it is a tube which can be inflated to increase the sealing characteristics between the two gels by means of a fluid and can be evacuated to facilitate the removal of the hose after the execution of the first dimension , Eine weitere vorteilhafte Ausführung besteht darin, daß ein dünnwandiger Schlauch als Isolierelement verwendet wird. Another advantageous embodiment consists in that a thin-walled tube is used as an insulating member. Der Schlauch kann in einer Rille in den Platten 28 A und/oder 28 B geführt sein und wird nach der Durchführung der ersten Dimension evakuiert und verbleibt aber in der Kombinationskammer. The tube can be guided in a groove in the plates 28 A and / or B and 28 is evacuated after performing the first dimension and but remains in the combination chamber. Der durch die Evakuierung freiwerdende Raum zwischen den beiden Gelen wird mit einem Kontaktgel befüllt. The released by the evacuation space between the two gels is filled with a contact gel. Der sonstige Ablauf der zwei-dimensionalen Elektrophorese verläuft analog dem beschriebenen. The other end of the two-dimensional electrophoresis is analogous to the process described.

Gegenstand der Erfindung sind auch neue IEF-Gele (isoelektrische Fokussierungsgele) gemäß der Ansprüche 20 bis 25, die einen hervorragenden Trenneffekt für Biomoleküle bieten, insbesondere für Proteine, und einen erweiterten Auftrennungsbereich auf der sauren und basischen Trennseite. The invention provides also new IEF gels (isoelectric Fokussierungsgele) according to the claims 20 to 25, which provide an excellent release effect for biomolecules, in particular proteins, and an extended separation range on the acidic and basic separator page. Nachfolgend werden ausgewählte Rezepte von Gelen dokumentiert. Below selected recipes from gels be documented.

Standard-Rezepte Standard recipes Ampholin-Fertiggele (hydratisiertes Gel) Pre-cast ampholine (hydrated gel)

3.5-4% Acrylamidgel mit 9 M Harnstoff mit minimal 2% Ampholinen (WITA Ampholyte), pH-Bereich pH 2.0 bis 11.0 (mit oder ohne Zusatz von Detergenzien und Thioharnstoff). 3.5-4% acrylamide gel with 9 M urea with minimal 2% ampholines (WITA ampholytes), pH range 2.0 to pH 11.0 (with or without addition of detergents, and thiourea).

Ampholin-Immobilon-Fertiggele (hydratisiertes Gel) Ampholine Immobilon-precast gels (hydrated gel)

3.5-4% Acrylamidgel mit 9 M Urea mit minimal 2% Ampholinen (WITA Ampholyte), pH-Bereich pH 2.0 bis 11.0 (mit oder ohne Zusatz von Detergenzien und Thioharnstoff) 3.5-4% acrylamide gel with 9 M urea with minimal 2% ampholines (WITA ampholytes), pH range 2.0 to pH 11.0 (with or without addition of detergents, and thiourea)
seitliche Immobilingele: 10% Acrylamidgel unter Zusatz von 50 mM bis 100 mM Immobilinen. lateral Immobilingele: 10% acrylamide gel with the addition of 50 mM to 100 mM immobilines.

SDS-Gel, 2. Dimension SDS gel, 2nd Dimension

SDS-PAGE mit 15% Acrylamid, 0,1% SDS, Tris/HCl-Puffer, pH 8,8. SDS-PAGE with 15% acrylamide, 0.1% SDS, Tris / HCl buffer, pH 8.8.

Rehydratisierungspuffer rehydration

9 M Harnstoff, 2-4% Ampholine, pH Bereich 2-11 (mit oder ohne Zusatz von Detergenzien und Thioharnstoff). 9 M urea, 2-4% Ampholine, pH range 2-11 (with or without addition of detergents, and thiourea).

Reequilibrierungspuffer Reequilibrierungspuffer

3% SDS, 70 mM DTT, Tris/Phosphat, pH 6,8. 3% SDS, 70 mM DTT, Tris / phosphate, pH 6.8.

Agarose Sammelgel agarose stacking

0,1% SDS, 1% Agarose, Tris/Phosphat, pH 6,8. 0.1% SDS, 1% agarose, Tris / phosphate, pH 6.8.

Elektrophorese-Puffer 1. Dimension Electrophoresis buffer first dimension

Puffer A: 4% (v/v) Phosphorsäure Buffer A: 4% (v / v) phosphoric acid
Puffer B: 5% (v/v) Ethylendiamin. Buffer B: 5% (v / v) ethylene diamine.

Elektrophoresepuffer 2. Dimension Electrophoresis 2nd Dimension

SDS-Laufpuffer: 192 mM Glycin, 25 mM Tris-Base, 0,1% SDS. SDS running buffer: 192 mM glycine, 25 mM Tris-Base, 0.1% SDS.

Laufbedingungen running conditions 1. Dimension 1st dimension
1 h 1 hour 100 V 100 V
1 h 1 hour 200 V 200 V
17,5 h 17.5 hours 400 V 400 V
1 h 1 hour 600 V 600 V
0.5 h 0.5 h 800 V 800 V
10 min 10 min 1500 V 1500 V
5 min 5 min 2000 V 2000 V
2. Dimension 2nd dimension
30 min 30 min 40 mM 40 mM
6 h 6 hours 80 mM 80 mM

Die Erfindung ist nicht beschränkt auf die hier darge stellten Ausführungsbeispiele. The invention is not limited to the embodiments presented here Darge. Vielmehr ist es möglich, durch Kombination und Modifikation der genannten Mittel und Merkmale weitere Ausführungsvarianten zu realisie ren, ohne den Rahmen der Erfindung zu verlassen. Rather, it is possible, reindeer further variants to realisie by combining and modifying the said means and features, without departing from the scope of the invention.

Bezugszeichenliste LIST OF REFERENCE NUMBERS

22 22

Umlenkelement deflecting

23 23

Dichtung poetry

24 24

Isolierelemente insulating

25 25

Gel der ersten Dimension Gel in the first dimension

26 26

Elektrode der ersten Dimension Electrode of the first dimension

27 27

Elektrode der ersten Dimension Electrode of the first dimension

28 28

A Rückwandplatte A backplane

28 28

B Deckplatte B cover plate

29 29

oberes Pufferreservoir der zweiten Dimension upper buffer reservoir of the second dimension

30 30

Gießgefäß der zweiten Dimension Casting vessel of the second dimension

31 31

Pufferfüllgefäß Pufferfüllgefäß
der zweiten Dimension the second dimension

32 32

unterer Puffertank der zweiten Dimension bottom buffer tank of the second dimension

33 33

Dichtung (kann z. B. pneumatisch angehoben werden) Seal (can be raised pneumatically z. B.)

33 33

A Dichtung (ist z. B. pneumatisch angehoben) A seal (z. B. is raised pneumatically)

34 34

Raum zwischen Platten ( Space between plates (

28 28

A, A,

28 28

B) über der Schlauch ( B) (via the hose

24 24

), der zur Rehydratisierung und Umpufferung des Gels der ersten Dimension mit Puffer gefüllt wird is filled for the rehydration and re-buffering the gel in the first dimension with buffer)

35 35

Aussparung im Gel der ersten Dimension für Probenauftrag Recess in the gel in the first dimension for sample application

36 36

Gel der zweiten Dimension Gel of the second dimension

37 37

Zwischenraum zwischen Platten ( Space between plates (

28 28

A, A,

28 28

B), der mit Kontaktgel gefüllt wird B), which is filled with contact

38 38

Elektrode im oberen Puffergefäß für Elektrophorese der zweiten Dimension In the upper electrode buffer vessel for the second dimension electrophoresis

38 38

Elektrode im unteren Puffergefäß für Elektrophorese der zweiten Dimension In the lower electrode buffer vessel for the second dimension electrophoresis

Claims (25)

1. Kombinationskammer zur zweidimensionalen Trennung von Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen in waagerecht übereinander angeordneten Gelen durch Elektrophorese mit einer Rückwandplatte ( 28 A) und einer Deckplatte ( 28 B), wobei zwischen Rückwandplatte ( 28 A) und Deckplatte ( 28 B) mindestens zwei Umlenkelemente ( 22 ) zur Führung von Isolierelementen ( 24 ) angeordnet sind. 1. Combination chamber for two-dimensional separation of biomolecules or other substance mixtures in horizontally stacked gels by electrophoresis with a rear wall plate (28 A) and a cover plate (28 B), whereby between the rear wall plate (28 A) and cover plate (28 B) at least two deflection elements ( 22) for guiding insulating elements (24) are arranged.
2. Kombinationskammer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Kammeranordnung aus einem oberen IEF-Teil für die Durchführung der IEF-Elektrophorese in der ersten Dimension und einem unteren Teil für die Durchführung der SDS-Elektrophorese in der zweiten Dimension besteht und die Gele ( 25 ) und ( 36 ) waagerecht übereinander angeordnet sind. 2. Combination chamber according to claim 1, characterized in that the chamber assembly comprises an upper IEF part for carrying out the IEF electrophoresis in the first dimension and a lower portion for carrying out the SDS-electrophoresis in the second dimension and the gels ( 25) and (36) are arranged horizontally one above the other.
3. Kombinationskammer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Platten ( 28 A, 28 B) nach außen durch Dichtungen ( 23 ) abgedichtet werden und die Gestaltung der Dichtungen ( 23 ) die Dicke der Gele ( 25 , 36 ) festlegt. 3. Combination chamber according to claim 1, characterized in that the plates (28 A, 28 B) are sealed from the outside by seals (23) and the design of the seals (23) the thickness of the gels (25, 36) defines.
4. Kombinationskammer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß neben den Umlenkelementen ( 22 ) Elektroden ( 26 , 27 ) für die Elektrophorese der ersten Dimension eingelassen sind. 4. Combination chamber according to claim 1, characterized in that in addition to the deflecting elements (22) electrodes (26, 27) are inserted for the electrophoresis of the first dimension.
5. Kombinationskammer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Platte ( 28 A) aus Keramik oder Glas besteht und die Platte ( 28 B) eine transparente Platte ist. 5. Combination chamber according to claim 1, characterized in that the plate (28 A) is made of ceramic or glass and the plate (28 B) is a transparent plate.
6. Kombinationskammer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Rückwandplatte ( 28 A) mit dem oberen Pufferreservoir ( 29 ) der zweiten Dimension sowie dem Gießgefäß ( 30 ) und dem Pufferfüllgefäß ( 31 ) eine Einheit bildet. 6. Combination chamber according to claim 1, characterized in that the rear wall plate (28 A) (29) of the second dimension as well as the casting vessel (30) and the Pufferfüllgefäß (31) forms a unit with the upper buffer reservoir.
7. Kombinationskammer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die zusammengesetzte Konstruktion aus den Platten ( 28 A, 28 B) und dem oberen Pufferreservoir ( 29 ), dem Gießgefäß ( 30 ) und dem Pufferfüllgefäß ( 31 ) in den unteren Puffertank ( 32 ) gestellt angeordnet ist. 7. combination chamber according to claim 1, characterized in that the composite construction of the plates (28 A, 28 B) and the upper buffer reservoir (29), the casting vessel (30) and the Pufferfüllgefäß (31) in the lower buffer tank (32) is arranged provided.
8. Kombinationskammer nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß eine Dichtung ( 33 ) angeordnet ist, welche anhebbar ausgebildet ist. 8. combination chamber according to claim 7, characterized in that a seal (33) is arranged which is formed can be raised.
9. Kombinationskammer nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß in dem oberen Pufferreservoir ( 29 ) und in dem unteren Puffertank ( 32 ) Elektroden ( 38 , 39 ) für die Elektrophorese der zweiten Dimension angeordnet sind. 9. chamber combination according to claim 7, characterized in that in the upper buffer reservoir (29) and in the lower buffer tank (32) electrodes (38, 39) are arranged for electrophoresis in the second dimension.
10. Verfahren zur zwei-dimensionalen Trennung von Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen in Gelen oder Polymerträgern durch Elektrophorese in einer Elektrophorese-Kombinationskammer, wobei 10. A method for two-dimensional separation of biomolecules or other mixtures of substances in gels or polymer carriers by electrophoresis in an electrophoresis combination chamber,
  • - ein IEF-Gel in der Kombinationskammer waagerecht angeordnet und zur Rehydratisierung mit Rehydratisierungspuffer überschichtet wird, - an IEF gel in the combination chamber arranged horizontally and overlaid for the rehydration with rehydration buffer,
  • - nachfolgend eine Biomolekül- oder Stoffgemischprobe am IEF-Gel eingebracht oder am IEF-Gel angebracht und die Elektrophorese der ersten Dimension durchgeführt wird, - subsequently filed a biomolecule or mixture of sample at the IEF gel or attached to the IEF gel and electrophoresis of the first dimension is performed,
  • - vor, nach oder während der Durchführung der ersten Dimension ein SDS-Gel für die Durchführung der zweiten Dimension waagerecht zu dem IEF-Gel und von diesem isoliert in die Kombinationskammer eingebracht und das SDS-Gel polymerisiert wird, - before, after or an SDS gel for carrying out the second dimension horizontally isolated during execution of the first dimension to the IEF gel and from that introduced into the combination chamber and the SDS gel is polymerized,
  • - nach Beendigung der IEF-Elektrophorese die Isolierung aufgehoben, in die hierdurch entstehenden Räumen Kontaktgel eingeführt, Pufferlösung zugeführt und die SDS-Elektrophorese in der zweiten Dimension durchgeführt wird und anschließend die Gele nach bekannten Methoden entwickelt und angefärbt werden. be removed after completion of the IEF electrophoresis the insulation, contact gel introduced into the thereby resulting space, the buffer solution supplied and the SDS gel electrophoresis is performed in the second dimension and then developed according to known methods, the gels and stained -.
11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß nach der Rehydratisierung des IEF-Gels überschüssige Pufferlösung entfernt wird. 11. The method according to claim 10, characterized in that excess buffer solution is removed after rehydration of the IEF gel.
12. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Aussparung im IEF-Gel durch Einbringen eines Spacer-Einsatzes während der Rehydratisierung erzeugt wird. 12. The method according to claim 10, characterized in that the recess in the IEF gel is produced by introducing a spacer insert during rehydration.
13. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß das IEF-Gel nach der Elektrophorese durch Zusatz von Reequilibrierungspuffer umgepuffert wird. 13. The method according to claim 10, characterized in that the IEF gel is rebuffered after electrophoresis by addition of Reequilibrierungspuffer.
14. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Isolierung durch Entfernen eines Kunststoffschlauches durch Herausziehen mittels eines Schrittmotors aufgehoben wird. 14. The method according to claim 10, characterized in that the isolation of a plastic tube by removing by pulling out by means of a stepping motor is canceled.
15. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Isolierung durch Evakuieren eines Kunststoffschlauches aufgehoben wird, wobei der Kunststoffschlauch wahlweise anschließend entfernt wird oder in der Kombinationskammer verbleibt. 15. The method according to claim 10, characterized in that the insulation is removed by evacuating a plastic tube, wherein the plastic tube is optionally subsequently removed or remains in the combination chamber.
16. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Kühlung beider Elektrophorese-Dimensionen durch Eintauchen der Gelsandwiche in thermostatierte Pufferlösung der zweiten Dimension erfolgt. 16. The method according to claim 10, characterized in that the cooling of both dimensions electrophoresis is carried out by immersing the Gelsandwiche in thermostated buffer solution of the second dimension.
17. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Kühlung beider Elektrophorese-Dimensionen durch in der Kombinationskammer angeordnete Kühlkammern realisiert wird. 17. The method according to claim 10, characterized in that the cooling of both dimensions electrophoresis is realized by the combination of chamber arranged in the cooling chambers.
18. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Biomolekül- oder Stoffgemischprobe in eine Aussparung im IEF-Gel eingebracht wird. 18. The method according to claim 10, characterized in that the biomolecule or mixture of sample is placed in a recess in the IEF gel.
19. Verfahren zur eindimensionalen Trennung von Biomolekülen oder anderen Stoffgemischen durch Elektrophorese, dadurch gekennzeichnet, daß 19. A method for one-dimensional separation of biomolecules or other mixtures by electrophoresis, characterized in that
  • - anstelle des Gels für die Trennung in der ersten Dimension sowie des Isolierelementes ein Kamm mit Probentaschen für verschiedene Proben in das SDS-Gel eingesetzt und dieses auspolymerisiert wird, - a comb with sample wells for different samples used in place of the gel for the separation in the first dimension and the insulating member in the SDS-gel and this is polymerized to completion,
  • - der Kamm nach dem Auspolymerisieren entfernt, - the comb removed after complete polymerization,
  • - die Proben in die entstandenen Aussparungen eingebracht und - the sample is introduced into the resulting recesses and
  • - nachfolgend die ein-dimensionale Elektrophorese durchgeführt wird. - is subsequently carried out the one-dimensional electrophoresis.
20. Hydratisiertes IEF-Gel hergestellt durch Gießen eines Immobilin-Gels mit niedrigem pK auf einer Gelpolymerisationsfolie und dessen Polymerisation, Gießen eines Acrylamidgels auf dem Immobilin-Gel und dessen Anpolymerisation, Gießen eines Immobilin-Gels mit hohem pK auf dem Acrylamidgel und dessen Anpolymerisation und nachfolgendes Rehydratisieren mittels eines Rehydratisierungs puffers, der 1-4% von solchen Ampholinen enthält, die einen pH-Bereich innerhalb von 2-11 ermöglichen. 20. Hydrated IEF gel prepared by casting a immobiline gel with a low pK on a Gelpolymerisationsfolie and the polymerization casting of acrylamide on the immobiline gel and its incipient polymerization, casting an immobiline gel with a high pK on the acrylamide gel, and its incipient polymerization, and subsequent rehydration by means of a rehydration buffer containing 1-4% of such ampholines that allow a pH range within 2-11.
21. IEF-Gel nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß die Immobilin-Gele aus 6-10%, vorzugsweise 10%, Acrylamid unter Zusatz von 50-200 mM, vorzugsweise 50-100 mM, Immobilin hergestellt sind. 21. IEF gel according to claim 20, characterized in that the immobiline gels of 6-10%, preferably 10%, acrylamide with the addition of 50-200 mM, preferably 50-100 mM, Immobilin are made.
22. IEF-Gel nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß das Acrylamidgel aus 3,5-4,5%, vorzugsweise 3,5-4%, Acrylamid hergestellt ist. 22. IEF gel according to claim 20, characterized in that the acrylamide from 3.5-4.5%, preferably 3.5-4%, acrylamide is produced.
23. IEF-Gel nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß der Rehydratisierungspuffer von 5-9,5 M, vorzugsweise 9 M, Harnstoff und gegebenenfalls Detergenzien, vorzugsweise Tween 20, Chaps oder Triton X-100 enthält. 23. IEF gel according to claim 20, characterized in that the rehydration of 5-9.5 M, preferably 9 M, urea and optionally detergents, preferably Tween 20, Chaps or Triton X-100.
24. IEF-Gel nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß vor der Rehydratisierung gegebenenfalls Waschschritte durchgeführt werden und getrocknet wird. 24. IEF gel according to claim 20, characterized in that, where appropriate, washing steps are performed prior to rehydration and is dried.
25. Trockengel hergestellt durch Gießen eines Immobilin-Gels mit niedrigem pK auf einer Gelpolymerisationsfolie und dessen Polymerisation, Gießen eines Acrylamidgels auf dem Immobilin-Gel und dessen Anpolymerisation, Gießen eines Immobilin-Gels mit hohem pK auf dem Acrylamidgel und dessen Anpolymerisation. 25. dry gel prepared by casting a immobiline gel with a low pK on a Gelpolymerisationsfolie and the polymerization casting of acrylamide on the immobiline gel and its incipient polymerization, casting an immobiline gel with a high pK on the acrylamide gel, and its incipient polymerization.
DE1999130253 1999-06-25 1999-06-25 Chamber for two-dimensional electrophoresis using stacked horizontal includes at least two guide members for inserting an isolating element for temporarily separating two gels Ceased DE19930253A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE1999130253 DE19930253A1 (en) 1999-06-25 1999-06-25 Chamber for two-dimensional electrophoresis using stacked horizontal includes at least two guide members for inserting an isolating element for temporarily separating two gels

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE1999130253 DE19930253A1 (en) 1999-06-25 1999-06-25 Chamber for two-dimensional electrophoresis using stacked horizontal includes at least two guide members for inserting an isolating element for temporarily separating two gels

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE19930253A1 true DE19930253A1 (en) 2000-12-28

Family

ID=7913244

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE1999130253 Ceased DE19930253A1 (en) 1999-06-25 1999-06-25 Chamber for two-dimensional electrophoresis using stacked horizontal includes at least two guide members for inserting an isolating element for temporarily separating two gels

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE19930253A1 (en)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002084273A1 (en) * 2001-04-17 2002-10-24 Nextgen Sciences Ltd Electrophoretic separation system
EP1353172A1 (en) * 2002-04-12 2003-10-15 Tecan Trading AG Cassette, system, and 2D gel electrophoresis method for separating molecules
EP1385603A1 (en) * 2001-05-10 2004-02-04 Invitrogen Corporation Methods and apparatus for electrophoresis of prior-cast, hydratable separation media
WO2004055506A1 (en) * 2002-12-14 2004-07-01 Ehrfeld Mikrotechnik Bts Gmbh Microseparator for the electrophoretic separation of proteins and other biomolecules
WO2005029060A1 (en) * 2003-09-24 2005-03-31 Agilent Technologies, Inc. Electrophoretic separation of amphoteric molecules
DE10353406A1 (en) * 2003-11-14 2005-06-16 INSTITUT FüR MIKROTECHNIK MAINZ GMBH A method for separating chemical substances and / or particles, apparatus and their use
US7517442B1 (en) 1999-08-09 2009-04-14 Life Technologies Corporation Facile method and apparatus for the analysis of biological macromolecules in two dimensions using common and familiar electrophoresis formats
US7601251B2 (en) 2001-05-10 2009-10-13 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for low resistance electrophoresis of prior-cast, hydratable separation media
EP2159573A1 (en) * 2008-08-28 2010-03-03 Philips Electronics N.V. 2D electrophoresis device and method of manufacturing

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4874490A (en) * 1988-11-04 1989-10-17 Bio-Rad Laboratories, Inc. Pre-cast gel systems for two-dimensional electrophoresis
EP0684467A1 (en) * 1994-05-26 1995-11-29 Bio-Rad Laboraties, Inc. Electrophoresis slab gel enclosure for gradient gels
WO1998059092A1 (en) * 1997-06-24 1998-12-30 Large Scale Biology Corporation Automated system for two-dimensional electrophoresis

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4874490A (en) * 1988-11-04 1989-10-17 Bio-Rad Laboratories, Inc. Pre-cast gel systems for two-dimensional electrophoresis
EP0684467A1 (en) * 1994-05-26 1995-11-29 Bio-Rad Laboraties, Inc. Electrophoresis slab gel enclosure for gradient gels
WO1998059092A1 (en) * 1997-06-24 1998-12-30 Large Scale Biology Corporation Automated system for two-dimensional electrophoresis

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7517442B1 (en) 1999-08-09 2009-04-14 Life Technologies Corporation Facile method and apparatus for the analysis of biological macromolecules in two dimensions using common and familiar electrophoresis formats
WO2002084273A1 (en) * 2001-04-17 2002-10-24 Nextgen Sciences Ltd Electrophoretic separation system
US7601251B2 (en) 2001-05-10 2009-10-13 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for low resistance electrophoresis of prior-cast, hydratable separation media
EP1385603A1 (en) * 2001-05-10 2004-02-04 Invitrogen Corporation Methods and apparatus for electrophoresis of prior-cast, hydratable separation media
EP1385603A4 (en) * 2001-05-10 2005-01-12 Invitrogen Corp Methods and apparatus for electrophoresis of prior-cast, hydratable separation media
US6936150B2 (en) 2001-05-10 2005-08-30 Invitrogen Corporation Methods and apparatus for electrophoresis of prior-cast, hydratable separation media
US8034223B2 (en) 2001-05-10 2011-10-11 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for low resistance electrophoresis of prior-cast, hydratable separation media
EP1353172A1 (en) * 2002-04-12 2003-10-15 Tecan Trading AG Cassette, system, and 2D gel electrophoresis method for separating molecules
WO2004055506A1 (en) * 2002-12-14 2004-07-01 Ehrfeld Mikrotechnik Bts Gmbh Microseparator for the electrophoretic separation of proteins and other biomolecules
WO2005029060A1 (en) * 2003-09-24 2005-03-31 Agilent Technologies, Inc. Electrophoretic separation of amphoteric molecules
US8021530B2 (en) 2003-11-14 2011-09-20 Istitut fur Mikrotechnik Mainz GmbH Method for separation of chemical substances and/or particles, device and its use
DE10353406A1 (en) * 2003-11-14 2005-06-16 INSTITUT FüR MIKROTECHNIK MAINZ GMBH A method for separating chemical substances and / or particles, apparatus and their use
EP2159573A1 (en) * 2008-08-28 2010-03-03 Philips Electronics N.V. 2D electrophoresis device and method of manufacturing

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Raymond Acrylamide gel electrophoresis
Khaledi et al. Micellar electrokinetic capillary chromatography of acidic solutes: migration behavior and optimization strategies
EP0560974B1 (en) System and method for improving sample concentration in capillary electrophoresis
DE60215377T2 (en) The multiwell cell growth apparatus
DE69831408T2 (en) filter plate
EP1410029B1 (en) Arrays of buffers for analysing biomolecules by their isoelectric point
DE69823156T2 (en) Locked monoblock battery cooling device
EP1564550B1 (en) Method for analysis of proteins by solution isoelectric focusing
Manabe et al. Two-dimensional electrophoresis of plasma proteins without denaturing agents
EP0251306B1 (en) Process and apparatus for the preparation of a controllable and reproduceable temperature gradient, and its use
Mc Laughlin et al. Pharmaceutical drug separations by HPCE: practical guidelines
DE3229877C2 (en)
DE69828517T2 (en) Method for dns-insulation.
US4415418A (en) Gel electrophoresis device and method
EP1115839B1 (en) Cell culture device and apparatus for biological and genetical treatment of cells based thereon
Matson Polyacrylamide gel electrophoresis: A simple system using gel columns
US20040222096A1 (en) Electrophoresis system
Dunbar et al. [34] Protein analysis using high-resolution two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis
CA1085772A (en) Apparatus for electrophoresis separation
CH418480A (en) Device for diverting of electrostatic charges from the surfaces of poorly conductive materials by means of an electrical corona discharge
EP1047933B1 (en) Encapsulated ipg strips
DE2917717C2 (en)
US4234400A (en) Horizontal slab gel electrophoresis
US3932265A (en) Vertical gel slab electrophoresis apparatus
DE19744649C2 (en) A method for measuring bioelectric signals from cells after the patch-clamp method, and use of a device for this purpose

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8127 New person/name/address of the applicant

Owner name: WITA PROTEOMICS AG, 14513 TELTOW, DE

8131 Rejection