DE19811732A1 - Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit - Google Patents

Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit

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DE19811732A1
DE19811732A1 DE1998111732 DE19811732A DE19811732A1 DE 19811732 A1 DE19811732 A1 DE 19811732A1 DE 1998111732 DE1998111732 DE 1998111732 DE 19811732 A DE19811732 A DE 19811732A DE 19811732 A1 DE19811732 A1 DE 19811732A1
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Wolf Bertling
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NOVEMBER AG NOVUS MEDICATUS BERTLING GESELLSCHAFT fur MOLEKULARE MEDIZIN
NOVEMBER AG MOLEKULARE MEDIZIN
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    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813Hybridisation assays
    • C12Q1/6834Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase

Abstract

The coating has oligonucleotide (P1) covalently-bonded to the plastic surface (M). An Independent claim is included for the corresponding method of detecting biomolecules.

Description

Die Erfindung betrifft eine Mikrotiterplatte nach dem Oberbe griff des Anspruchs 1. Sie betrifft ferner ein Verfahren zum Nachweis von Molekülen, insbesondere Biomolekülen, nach dem Oberbegriff des Anspruchs 10. The invention relates to a microtiter plate according to the Oberbe handle of claim 1. It further relates to a method for the detection of molecules, particularly biomolecules, according to the preamble of claim 10.

Eine solche Mikrotiterplatte wird beispielsweise von der Fir ma Boehringer Mannheim GmbH, unter der Bezeichnung "Streptavidin-coated Microtiter Plates, nuclease free No. 1 768 000" vertrieben. Such a microtiter plate is sold for example by the Fir ma Boehringer Mannheim GmbH, under the name "streptavidin-coated microtiter plates, nuclease free No. 1768000". Innerhalb der Kavitäten ist eine Streptavidin- oder Avidinbeschichtung vorgesehen. Within the cavities a streptavidin or Avidinbeschichtung is provided. An diese Beschichtung kann zur Durchführung einer Nachweisreaktion ein spezifisches Biomolekül, z. On this coating, a specific biomolecule for performing a detection reaction, z. B. ein Antikörper, gebunden wer den. , An antibody bound to whoever. Damit eignet sich die Mikrotiterplatte z. Thus, the microtiter plate for suitable. B. zum Nachweis eines spezifischen Antigens. As for the detection of a specific antigen.

Eine solche Mikrotiterplatte kann auch zum Nachweis von mit tels der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) oder Ligase-Ket tenreaktion (LCR) hergestellten Produkten benutzt werden. Such a microtiter plate can be used products made tenreaktion (LCR) is also for detecting with means of the polymerase chain reaction (PCR) or ligase Ket. In diesem Fall wird an diese Beschichtung eine mit einem bio tinylierten Primer amplifizierte Probe gebunden. In this case, an amplified with a primer tinylierten bio sample is bound to this coating. Die Proben lösung wird entfernt und die Beschichtung gewaschen. The sample solution is removed and washed the coating. An schließend wird ein weiteres Reagenz mit der gebundenen Probe in Kontakt gebracht, mit dem mittels einer Farbreaktion die Bindung nachweisbar ist. On adding a further reagent of the bound sample is contacted with which the binding can be detected by a color reaction.

Insbesondere im Hinblick auf den Nachweis von PCR- oder LCR-Pro dukten ist das vorgenannte Verfahren sowie die bekannte Mikrotiterplatte nachteilig. Particularly with regard to the detection of PCR or LCR-Pro the aforementioned method as well as the known microtitre plate is Dukten disadvantageous. Aufgrund mangelnder Temperatur beständigkeit der Beschichtung ist es erforderlich, die Probe in einem unbeschichteten Behälter zu amplifizieren und danach in die Kavitäten der Mikrotiterplatte zu überführen. Due to lack of resistance temperature of the coating, it is necessary to amplify the sample in an uncoated vessel, and then to transfer into the wells of the microtiter plate. Weiter ist es erforderlich die Probenlösung zu entfernen und die Be schichtung anschließend zu waschen. Next, it is necessary to remove the sample solution and then coating wash the Be. Die Schritte des Überfüh rens, Entfernens und Waschens bergen ein Kontaminationsrisi ko. The steps of Überfüh proceedings, removing and washing pose a contamination risk ko. Sie sind zeit- und kostenaufwendig. They are time consuming and costly.

Aufgabe der Erfindung ist es, die Nachteile nach dem Stand der Technik zu beseitigen. Object of the invention is to eliminate the disadvantages of the prior art. Insbesondere sollen eine Mikroti terplatte und ein Verfahren zum Nachweis von Biomolekülen an gegeben werden, mit denen ein einfacher und schneller Nach weis von PCR- oder LCR-Produkten möglich ist. In particular, a microtiter should terplatte and a method for the detection of biomolecules to be given with which one can be easier and faster After setting of PCR or LCR products.

Diese Aufgabe wird durch die Merkmale der Ansprüche 1 und 10 gelöst. This object is solved by the features of claims 1 and 10. FIG. Zweckmäßige Ausgestaltungen der Erfindung ergeben sich aus den Merkmalen der Ansprüche 2 bis 9 und 11 bis 25. Expedient refinements of the invention result from the features of claims 2 to 9 and 11 to the 25th

Zur Lösung der Aufgabe weist die Beschichtung kovalent an die Kunststoffoberfläche gebundene Oligonukleotide auf. To achieve the object, the coating has covalently bound to the plastic surface of oligonucleotides. Eine sol che Beschichtung ist temperaturbeständig. A sol surface coating is temperature-resistant. Der Amplifizie rungsschritt einer PCR kann in den Kavitäten der Mikrotiter platte erfolgen. The Amplifizie approximately step PCR can be performed in the wells of the microtiter plate. Das Überführen der bereits amplifizierten Probenlösung entfällt. The transfer of the already amplified sample solution is eliminated. Der Nachweis erfolgt unmittelbar unter Zuhilfenahme des kovalent ausgebildeten Oligonukleotids. The detection is effected directly with the aid of the covalently formed oligonucleotide.

Die gebundenen Oligonukleotide können aus DNA, PNA, PTO oder Chimären davon bestehen, wobei vorteilhafterweise an die Oli gonukleotide fluorophore Moleküle oder Quencher gebunden sind oder im Laufe der Reaktion gebunden werden. The bound oligonucleotides can be composed of DNA, PNA, PTO, or chimeras thereof, are advantageously bound to the Oli gonukleotide fluorophore or quencher molecules are bound or in the course of the reaction. Dadurch kann eine Hybridisierung der Probe mittels einer, an der Beschichtung beobachtbaren Fluoreszenzreaktion nachgewiesen werden. Thereby it can be demonstrated hybridization of the sample by means of an observable fluorescence in the coating reaction.

Zweckmäßigerweise erstreckt sich die Beschichtung nur über einen Abschnitt der Oberfläche innerhalb der Kavitäten. Suitably, the coating extends over only a portion of the surface within the cavities. Eine an der Beschichtung erfolgende Fluoreszenzreaktion ist so be sonders einfach und schnell erkennbar. An acceptance of the coating fluorescence reaction is so Sonder be quickly and easily recognizable.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal kann der Kunststoff elektrisch leitfähig sein. According to a further embodiment feature, the plastic material may be electrically conductive. Er ist vorzugsweise aus Polypropy len oder Polycarbonat hergestellt. It is preferably made of polypropy len or polycarbonate. Aufgrund der elektrischen Leitfähigkeit ist es möglich, die vorzugsweise 96 Kavitäten aufweisende Mikrotiterplatte zu polarisieren. Because of the electrical conductivity, it is possible to polarize the microtiter plate preferably having 96 wells. In der Proben lösung enthaltende geladene Biomoleküle können so in Richtung der Beschichtung bewegt werden. In the sample solution containing charged biomolecules can be so moved in the direction of the coating. Das beschleunigt die Nach weisreaktion. This speeds up response-setting the post.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal kann jede Kavität eines Satzes von n Kavitäten mit einer unterschiedlichen Be schichtung eines Satzes von n unterschiedlichen spezifischen Beschichtungen vorgesehen sein. According to a further embodiment feature, each cavity may be a set of n cavities with a different coating loading of a set of n different specific coatings may be provided. So kann beispielsweise eine 96 Kavitäten aufweisende Mikrotiterplatte mit 96 verschiede nen Beschichtungen versehen sein. Thus, a 96-well microtiter plate having, for example, be provided with 96 nen Various coatings. Jede Kavität dient in die sem Fall einer anderen Nachweisreaktion. Each well is in the case of a different sem detection reaction. Es ist aber auch möglich, auf einer Mikrotiterplatte zwei Sätze von jeweils 48 Kavitäten mit jeweils 48 verschiedenen Beschichtungen vorzu sehen. but it is also possible to clarify the scope for on a microtiter plate, two sets of 48 wells with 48 different coatings. Auf diese Weise kann jede Nachweisreaktion zur Erhö hung der Nachweissicherheit unter Verwendung einer einzigen Mikrotiterplatte zweifach durchgeführt werden oder eine Nega tivkontrolle mitgeführt wird. In this way, each detection reaction may be used to raised stabili hung proof security are performed in duplicate or Nega tivkontrolle is carried using a single microtiter plate. Die zweckmäßigerweise einstüc kig ausgebildete Mikrotiterplatte kann Perforationen aufwei sen, so daß sie in kleine Einheiten zerbrochen werden kann. The suitably trained einstüc kig microtiter plate can perforations aufwei sen so that they can be broken into small units.

Zur Lösung der Aufgabe ist ferner vorgesehen, daß als Biomo leküle kovalent an die Kunststoffoberfläche gebundene Oligo nukleotide verwendet werden. To achieve the object is further contemplated that as biomolecules covalently bound to the plastic surface oligo nucleotides are used. Die Verwendung einer solchen Be schichtung ermöglicht die Amplifizierung des nachzuweisenden Biomoleküls in der Kavität. The use of such Be coating allows the amplification of the biomolecule in the cavity. Es kann auf eine Überführung ei ner vorher amplifizierten Probenlösung verzichtet werden. There is no need for a transfer ei ner previously amplified sample solution. Das vereinfacht und beschleunigt das Verfahren. This simplifies and accelerates the process.

Nach einem vorteilhaften Ausgestaltungsmerkmal sind an die Oligonukleotide fluorophore Moleküle oder Quencher gebunden. According to an advantageous embodiment feature fluorophore or quencher molecules are attached to the oligonucleotides. Der Probenlösung kann ein Primer zugesetzt sein, der mit ei nem fluorophoren Molekül markiert ist. The sample solution may be added to a primer that is labeled with NEM ei fluorophoric molecule. Auch können der Pro benlösung Nukleotide zugesetzt werden, die mit einem fluoro phoren Molekül markiert sind. Also, the Pro nucleotides can be added benlösung that are labeled with a fluoro phoren molecule. Eine Hybridisierung der nachzu weisenden Biomoleküle mit den Oligonukleotiden wird so vor teilhafterweise durch eine Fluoreszenzreaktion angezeigt. Hybridization of the nachzu looking biomolecules with the oligonucleotides is so displayed before some way legally by a fluorescence reaction.

Zur Beschleunigung der Nachweisreaktion kann die Kunststoff oberfläche elektrisch so polarisiert werden, daß geladene nachzuweisende Biomoleküle in Richtung der Beschichtung ange zogen werden. In order to accelerate the detection reaction, the plastic material can be surface electrically polarized so that charged biomolecules to be detected in the direction of the coating to be tightened.

Die in der Kavität aufgenommene Probenlösung wird zweckmäßi gerweise wiederkehrend erhitzt und abgekühlt, so daß das nachzuweisende Biomolekül amplifiziert wird. The recorded in the cavity sample solution is heated recurring zweckmäßi gerweise and cooled so that the detected biomolecule is amplified. Um dabei eine Verdampfung von Probenlösung zu vermeiden, werden die Kavitä ten mittels eines, vorzugsweise beheizbaren, Deckelelements verschlossen. In order to avoid evaporation of the sample solution, the Kavitä be ten by means of a, preferably heatable, the lid member closed.

Insbesondere zur Durchführung des Verfahrens ist ein Kit mit einer erfindungsgemäßen Mikrotiterplatte und mindestens einem Primer vorgesehen. In particular for performing the method with a kit of a microtiter plate according to the invention and at least one primer is provided. Der Kit kann ferner Nukleotide, Pufferbe standteile und Enzyme sowie eine Heiz-/Kühleinrichtung umfas sen. The kit may further constituents nucleotides Pufferbe and sen enzymes and a heating / cooling device umfas. Zweckmäßigerweise liegen die Komponenten Primer, Nukleo tide, Pufferbestandteile und Enzyme in gefriergetrockneter Form vor. Conveniently, the components primer nucleo tide, buffer components and enzymes are present in freeze-dried form. In diesem Fall kann die PCR oder LCR durch Zugabe von Wasser gestartet werden. In this case, the PCR or LCR can be started by adding water. Gleichfalls ist es möglich, daß die Komponenten Primer, Nukleotide, Pufferbestandteile und Enzyme in aus Kunststoff oder Wachs hergestellten Kapseln eingeschlossen sind. It is also possible that the components of primers, nucleotides, buffer components and enzymes in made of plastic or wax capsules are included. In diesem Fall kann die Reaktion nach Zugabe der Probe durch Temperaturerhöhung gestartet werden. In this case, the reaction may be initiated by increasing the temperature after addition of the sample.

Ausführungsbeispiele des erfindungsgemäßen Verfahrens werden anhand der Zeichnung näher erläutert. Embodiments of the method according to the invention will be explained in detail with reference to the drawing. Hierin zeigen: The drawings are:

Fig. 1 eine schematische Ansicht einer an dem ersten Pri mer hybridisierten Probe, Fig. 1 is a schematic view of a mer hybridized to the first Pri sample,

Fig. 2 eine schematische Ansicht nach Fig. 1 mit einem er sten Gegenstrang, Fig. 2 is a schematic view of FIG. 1 with a he sten strand,

Fig. 3 eine schematische Ansicht gemäß Fig. 2 mit einem zweiten Gegenstrang, Fig. 3 is a schematic view of FIG. 2 with a second strand,

Fig. 4 eine schematische Ansicht gemäß Fig. 2 mit einem dritten Gegenstrang, wobei der erste Primer mit ei nem fluorophoren Molekül markiert ist, Fig. 4 is a schematic view of FIG. 2 with a third strand, wherein the first primer is labeled with NEM ei fluorophore molecule,

Fig. 5 die Synthese eines Strangs ausgehend von einem zweiten mit einem zweiten fluorophoren Molekül mar kierten Primer, Fig. 5 synthesis of a strand from a second to a second fluorophore molecule mar-labeled primer,

Fig. 6 die Anregung des zweiten fluorophoren Moleküls, Fig. 6, the excitation of the second fluorophore molecule,

Fig. 7 die Anregung des zweiten fluorophoren Moleküls ge mäß Fig. 6, wobei am ersten Primer ein erstes fluo rophores Molekül vorgesehen ist und Fig. 7 shows the excitation of the second fluorophore molecule accelerator as Fig. 6, a first fluo rophores molecule is provided on the first primer, and

Fig. 8 die Anregung von an Nukleotiden gebundenen zweiten fluorophoren Molekülen. Fig. 8, the excitation of bound nucleotides second fluorophore molecules.

In Fig. 1 ist ein erster Primer P1 kovalent an eine Oberflä che M innerhalb der Kavität einer Mikrotiterplatte gebunden. In Fig. 1, a first primer is bound P1 covalently to a surface Oberflä M within the cavity of a microtiter plate. Ein nachzuweisendes Biomolekül N bindet mit einem zum ersten Primer P1 korrespondierenden Sequenzabschnitt A1 an den er sten Primer P1. A biomolecule to be detected with a corresponding N binds to the first primer P1 sequence segment A1 to which it most primers P1. Unter Vermittlung einer Taq-Polymerase er folgt ausgehend vom ersten Primer P1 in Pfeilrichtung die Synthese eines Gegenstrangs G. Through the intermediary of a Taq polymerase, it follows, starting from the first primer in direction of arrow P1 the synthesis of a complementary strand G.

Bei der Synthese des Gegenstrangs G werden in der Probenlö sung befindliche Nukleotide eingebaut. In the synthesis of the complementary strand G in the solution Probenlö nucleotides located to be installed. Die Nukleotide können mit einem ersten fluorophoren Molekül F1 markiert sein. The nucleotides may be labeled with a first fluorophore molecule F1. In diesem Fall reichen sich in der Nähe der Oberfläche M erste fluorophore Moleküle F1 an. In this case, first fluorophore molecules F1 rich in to the vicinity of the surface of M. Das ist in Fig. 2 gezeigt. This is shown in Fig. 2.

Gemäß Fig. 3 kann eine erste Gruppe von Nukleotiden mit einem ersten fluorophoren Molekül F1 und eine zweite Gruppe von Nu kleotiden mit einem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert sein. Referring to FIG. 3, a first group of nucleotides may with a first fluorophore molecule F1 and a second group of Nu kleotiden be labeled with a second fluorophore molecule F2. Beim ersten fluorophoren Molekül F1 kann es sich um ei ne Donor-Gruppe beim zweiten fluorophoren Molekül F2 um eine Akzeptor-Gruppe handeln. In the first fluorophore molecule F1 there may be an acceptor group of egg ne donor group at the second fluorophore molecule F2. Aufgrund von zwischen dem ersten fluorophoren Molekül F1 und dem zweiten fluorophoren Molekül F2 sich ausbildenden Wechselwirkungen kann es nach dem För ster-Effekt zu einer verstärkten Fluoreszenz durch strah lungslosen oder auch direkten Energieübergang am zweiten flu orophoren Molekül F2 kommen. Due to between the first fluorophore molecule and the second fluorophore molecule F1 F2 the forming interactions may lung loose or in increased fluorescence by strah are also direct energy transition at the second flu orophoren molecule F2 after För edge effect.

Eine solche die Fluoreszenz verstärkende oder schwächende Wechselwirkung kann auch dadurch erzeugt werden, daß am er sten Primer P1 das erste fluorophore Molekül F1 vorgesehen ist und die Nukleotide mit dem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert sind. Such fluorescence enhancing or debilitating interaction can also be produced in that at most it primer P1, the first fluorophore molecule F1 is provided and the nucleotides of the second fluorophore molecule F2 are labeled. Durch Energieübergang kann es am zweiten fluorophoren Molekül F2 bei entsprechender Anregung zu einer Fluoreszenzreaktion kommen. By energy transfer there may be a fluorescent response at the second fluorophore molecule F2 with appropriate excitation. Auch das ist schematisch in Fig. 4 gezeigt. Also schematically shown in Fig. 4.

Fig. 5 zeigt die Situation nach einem ersten Amplifizierungs zyklus. Fig. 5 shows the situation after a first amplification cycle. Dabei wird ein Strang S ausgehend von einem zweiten Primer P2 in Pfeilrichtung synthetisiert. Here, a strand S is starting from a second primer P2 synthesized in the arrow direction. Der zweite Primer P2 ist mit dem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert. The second primer P2 labeled with the second fluorophore molecule F2. Bei einer Anregung des zweiten fluorophoren Moleküls F2 kommt es - wie in Fig. 6 gezeigt ist - zur Fluoreszenz. At an excitation of the second fluorophore molecule F2 there is - as shown in Figure 6 is shown -. For fluorescence.

Wie in Fig. 7 gezeigt ist, kann es zu einer Wechselwirkung mit einem am ersten Primer P1 befindlichen ersten fluoropho ren Molekül F1 und dem am zweiten Primer 2 gebundenen zweiten fluorophoren Molekül F2 kommen. As shown in Fig. 7, there may be located in an interaction with a first primer P1 on first fluoropho ren molecule bound to the F1 and the second primer 2 second fluorophore molecule F2. Dabei kommt es zu einer Ver stärkung der Fluoreszenzreaktion oder zu einer Verschiebung des Fluoreszenzspektrums. This leads to an amplification of the fluorescence Ver reaction or a shift of the fluorescence spectrum.

In Fig. 8 ist der zweite Primer P2 mit dem ersten fluoropho ren Molekül F1 markiert. In FIG. 8, the second primer P2 is labeled with the first fluoropho ren molecule F1. Sowohl im Gegenstrang G als auch im Strang S sind Nukleotide eingebaut, welche mit dem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert sind. Both in opposite strand and G strand S in nucleotides are incorporated, which are labeled with the second fluorophore molecule F2. Durch Energieübergang vom ersten F1 auf das zweite fluorophore Molekül F2 wird am zweiten fluorophoren Molekül F2 eine verstärkte oder verän derte Fluoreszenzreaktion erzeugt. Through energy transfer from the first to the second fluorophore molecule F1 F2 enhanced or altered fluorescence reaction is generated at the second fluorophore molecule F2.

Bezugszeichenliste LIST OF REFERENCE NUMBERS

M Oberfläche der Kavität M surface of the cavity
P1 erster Primer P1 first primer
P2 zweiter Primer P2 second primer
A1 korrespondierender Abschnitt A1 corresponding section
N nachzuweisendes Molekül N molecule to be detected
F1 erstes fluorophores Molekül F1 first fluorophore molecule
F2 zweites fluorophores Molekül F2 second fluorophore molecule
G Gegenstrang G strand
S Strang S train

Claims (25)

  1. 1. Mikrotiterplatte mit einer Mehrzahl an Kavitäten, wobei die Mikrotiterplatte aus Kunststoff hergestellt und in nerhalb der Kavitäten eine aus Biomolekülen gebildete Be schichtung vorgesehen ist, dadurch gekennzeichnet , daß die Beschichtung kovalent an die Kunststoffoberfläche (M) gebundene Oligonukleotide (P1) aufweist. 1. Microtiter plate having a plurality of cavities, wherein the microtiter plate is made of plastic and a Be formed of biomolecules coating provided in nerhalb of the cavities, characterized in that bound the coating covalently bound to the plastic surface (M) oligonucleotides comprising (P1).
  2. 2. Mikrotiterplatte nach Anspruch 1, wobei die Oligonukleo tide (P1) aus DNA, PNA, PTO oder Chimären davon bestehen. 2. Microtiter plate according to claim 1, wherein the tide Oligonukleo (P1) from DNA, PNA, PTO, or chimeras consist thereof.
  3. 3. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei an die Oligonukleotide (P1) fluorophore Moleküle (F1, F2) oder Quencher gebunden sind. 3. Microtiter plate according to any one of the preceding claims, wherein the oligonucleotides (P1) fluorophore molecules (F1, F2) or quencher are bound.
  4. 4. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Beschichtung sich nur über einen Abschnitt der Kunststoffoberfläche (M) innerhalb der Kavitäten er streckt. 4. Microtiter plate according to any one of the preceding claims, wherein the coating extends only over a portion of the plastic surface (M) within the cavities he stretches.
  5. 5. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Kunststoff elektrisch leitfähig ist. 5. Microtiter plate according to any one of the preceding claims, wherein the plastic is electrically conductive.
  6. 6. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Kunststoff aus Polypropylen oder Polycarbonat hergestellt ist. 6. Microtiter plate according to any one of the preceding claims, wherein the plastic is polypropylene or polycarbonate is produced.
  7. 7. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Mikrotiterplatte 96 Kavitäten aufweist. 7. Microtiter plate according to any one of the preceding claims, wherein the microtiter plate comprises 96 wells.
  8. 8. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei jede Kavität eines Satzes von n Kavitäten mit einer Beschichtung eines Satzes von n unterschiedlichen spezi fischen Beschichtungen versehen ist, so daß bei Zugabe der Probenlösung in die n Kavitäten n unterschiedliche Nachweisreaktionen gleichzeitig durchführbar sind. 8. Microtiter plate according to any one of the preceding claims, being provided each well of a set of n cavities with a coating of a set of n different down specific coatings, so that n different detection reactions are carried out with the addition of the sample solution in the n cavities simultaneously.
  9. 9. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei ein, vorzugsweise beheizbares, Deckelelement zum Verschließen der Kavitäten vorgesehen ist. 9. The microtitration plate according to any of the preceding claims, wherein a heatable, is provided for closing the cavities, preferably the cover element.
  10. 10. Verfahren zum Nachweis von Biomolekülen, wobei eine das nachzuweisende Molekül enthaltende Probenlösung herge stellt und mit einer in einer Kavität einer aus Kunst stoff hergestellten Mikrotiterplatte vorgesehenen aus Biomolekülen gebildeten Beschichtung in Kontakt gebracht wird, dadurch gekennzeichnet, daß als Biomoleküle kova lent an die Kunststoffoberfläche (M) gebundene Oligonu kleotide (P1) verwendet werden. 10. A method for the detection of biomolecules, wherein a sample solution, the molecule to be detected containing Herge position and is brought into contact with an opening provided in a cavity of a microtiter plate material made of synthetic formed of biomolecules coating, characterized in that the biomolecules kova lent to the plastic surface bound (M) Oligonu kleotide (P1) may be used.
  11. 11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei die Oligonukleotide (P1) aus DNA, PNA, PTO oder Chimären davon gebildet sind. 11. The method of claim 10, wherein the oligonucleotides (P1) are formed from DNA, PNA, PTO, or chimeras thereof.
  12. 12. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 oder 11, wobei an die Oligonukleotide (P1) fluorophore Moleküle (F1, F2) oder Quencher gebunden sind. fluorophore 12. The method according to any one of claims 10 or 11, wherein the oligonucleotides (P1) molecules (F1, F2) or quencher are bound.
  13. 13. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 12, wobei der Probenlösung ein Primer (P2) zugesetzt wird, der mit ei nem fluorophoren Molekül (F1, F2) markiert ist. 13. The method according to any one of claims 10 to 12, wherein the sample solution, a primer (P2) is added to the (f1, f2) is labeled with NEM ei fluorophoric molecule.
  14. 14. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 13, wobei der Probenlösung Nukleotide zugesetzt werden, die mit einem fluorophoren Molekül (F1, F2) markiert sind. 14. A method according to any one of claims 10 to 13, wherein the sample solution nucleotides are added which (F1, F2) are labeled with a fluorophore molecule.
  15. 15. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 14, wobei eine Hybridisierung der nachzuweisenden Moleküle mit den Oli gonukleotiden (P1) durch eine Fluoreszenzreaktion ange zeigt wird. is 15. A method according to any one of claims 10 to 14, wherein hybridization of the molecules to be detected with the Oli gonukleotiden (P1) by a fluorescence response be displayed.
  16. 16. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 15, wobei die Kunststoffoberfläche (M) elektrisch so polarisiert wird, daß geladene nachzuweisende Moleküle in Richtung der Be schichtung angezogen werden. 16. The method according to any one of claims 10 to 15, wherein the plastic surface (M) is electrically polarized so that charged molecules to be detected are attracted coating in the direction of loading.
  17. 17. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 16, wobei die in der Kavität aufgenommene Probenlösung durch wiederkeh rend erhitzt und abgekühlt wird, so daß das nachzuweisen de Molekül amplifiziert wird. 17. The method according to any one of claims 10 to 16, wherein the absorbed sample solution in the cavity is heated by rend wiederkeh and cooled so that detect the de molecule is amplified.
  18. 18. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 17, wobei die Kavitäten mittels eines, vorzugsweise beheizbares, Decke lelements verschlossen werden. 18. The method according to any one of claims 10 to 17, wherein the cavities by means of a, preferably heatable, ceiling lelements be closed.
  19. 19. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 18, wobei das nachzuweisende Molekül (N) in der Beschichtung angerei chert werden. 19. A method according to any one of claims 10 to 18, wherein the molecule to be detected (N) in the coating are angerei chert.
  20. 20. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 19, wobei jede Kavität eines Satzes von n Kavitäten mit einer Beschich tung eines Satzes von n unterschiedlichen spezifischen Beschichtungen versehen ist, so daß bei Zugabe der Pro benlösung in die n Kavitäten n unterschiedliche Nachweis reaktionen gleichzeitig durchgeführt werden. 20. The method according to any one of claims 10 to 19, wherein each cavity of a set of n cavities with a Beschich processing of a set of n different specific coatings is provided so that benlösung upon addition of Pro n different detection performed in the n cavities reactions simultaneously become.
  21. 21. Kit mit einer Mikrotiterplatte nach einem der Ansprüche 1 bis 9 und mindestens einem Primer (P2) 21. Kit with a microtiter plate according to any one of claims 1 to 9 and at least one primer (P2)
  22. 22. Kit nach Anspruch 21, umfassend ferner Nukleotide, Puf ferbestandteile und Enzyme. 22. The kit of claim 21, further comprising nucleotides Puf ferbestandteile and enzymes.
  23. 23. Kit nach Anspruch 21 oder 22, umfassend ferner eine Heiz-/Kühleinrichtung. 23. The kit of claim 21 or 22, further comprising a heating / cooling device.
  24. 24. Kit nach einem der Ansprüche 22 bis 23, wobei die Kompo nenten Primer (P2), Nukleotide, Pufferbestandteile und Enzyme in gefriergetrockneter Form vorliegen. 24. Kit according to any one of claims 22 to 23, wherein the compo nents primer (P2), nucleotides, buffer components and enzymes are present in freeze-dried form.
  25. 25. Kit nach einem der Ansprüche 22 bis 24, wobei die Kompo nenten Primer (P2), Nukleotide, Pufferbestandteile und Enzyme in aus Kunststoff oder Wachs hergestellte Kapseln eingeschlossen sind. 25. Kit according to any one of claims 22 to 24, wherein the compo nents primer (P2), nucleotides, buffer components and enzymes are included in made of plastic or wax capsules.
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