DE102015108523A1

DE102015108523A1 - Peptide biomarker for cancer

Info

Publication number: DE102015108523A1
Application number: DE102015108523.2A
Authority: DE
Inventors: Henning Zelba; Benjamin Weide; Nikolaus Pawlowski; Ulf Reimer
Original assignee: Eberhard Karls Universitaet Tuebingen; JPT Peptide Technologies GmbH
Current assignee: Eberhard Karls Universitaet Tuebingen; JPT Peptide Technologies GmbH
Priority date: 2015-05-29
Filing date: 2015-05-29
Publication date: 2016-12-01

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft Biomarker-Peptide zur Verwendung in der Diagnose, Prognose, und/oder Prädiktion von Tumoren, sowie Verfahren zur Identifizierung/Quantifizierung von gegen die Biomarker-Peptide gerichteten Antikörpern in einer biologischen Probe. Ferner betrifft die vorliegende Erfindung Antikörper und Peptide zum diagnostischen oder therapeutischen Einsatz in der Krebstherapie bzw. -diagnose.The present invention relates to biomarker peptides for use in the diagnosis, prognosis and / or prediction of tumors, and to methods for identifying / quantifying antibodies directed against the biomarker peptides in a biological sample. Furthermore, the present invention relates to antibodies and peptides for diagnostic or therapeutic use in cancer therapy or diagnosis.

Description

GEGENSTAND DER VORLIEGENDEN ERFINDUNGOBJECT OF THE PRESENT INVENTION

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Peptid zur Verwendung als Biomarker in der Diagnose von Tumoren und/oder der Prognose oder Prädiktion von Therapieansprechen/Nebenwirkungen eines Tumors, sowie Verfahren zur Diagnose von Tumoren und/oder der Prognose oder Prädiktion von Therapieansprechen/Nebenwirkungen eines Tumors und gegen das Peptid gerichtete Antikörper.The present invention relates to a peptide for use as a biomarker in the diagnosis of tumors and / or the prognosis or prediction of therapy response / side effects of a tumor, as well as methods for the diagnosis of tumors and / or the prognosis or prediction of therapy response / side effects of a tumor and against the peptide targeted antibodies.

HINTERGRUND DER VORLIEGENDEN ERFINDUNGBACKGROUND OF THE PRESENT INVENTION

Die Bestimmung von Biomarkern, die wichtige Informationen für die Diagnose und Prognose liefern können, ist in der modernen Krebsdiagnose und -therapie inzwischen fest etabliert. The determination of biomarkers that can provide important information for diagnosis and prognosis is now firmly established in modern cancer diagnosis and therapy.

Dabei wird unter einem „Biomarker“ allgemein eine Eigenschaft verstanden, die objektiv gemessen und evaluiert werden kann und als Indikator für normale oder pathogene biologische Prozesse oder für pharmakologische Reaktionen auf therapeutische Interventionen dient. Biomarker sind, je nach Natur, zu unterschiedlichen Zwecken geeignet, und erlauben es bspw., die Erkrankung eines Patienten innerhalb einer Gruppe von ähnlichen Krankheiten genau zu definieren, und dienen so der Diagnose. Andererseits können Biomarker auch Aussagen über die voraussichtlichen Heilungschancen und/oder den Krankheitsverlauf erlauben, oder die Wahrscheinlichkeit anzeigen, zukünftig an einer Krankheit zu erkranken. Auch bieten manche Biomarker die Möglichkeit, Aussagen über das voraussichtliche Ansprechen auf eine bestimmte Therapie zu treffen und erleichtern damit die Auswahl der individuell besten Behandlung. Dabei kann ein und derselbe Marker auch mehrere dieser Zwecke erfüllen, und für die Diagnose, Prognostik und/oder Prädiktion geeignet sein.In this context, a "biomarker" is generally understood as a property that can be objectively measured and evaluated and serves as an indicator for normal or pathogenic biological processes or for pharmacological reactions to therapeutic interventions. Biomarkers, depending on the nature, are suitable for different purposes, and allow, for example, to accurately define a patient's disease within a group of similar diseases, and thus serve to diagnose. On the other hand, biomarkers can also allow statements about the expected chances of recovery and / or the course of the disease, or indicate the likelihood of developing a future disease. Also, some biomarkers provide the ability to make statements about the likely response to a particular therapy, thereby facilitating the selection of the best individualized treatment. One and the same marker can also fulfill several of these purposes, and be suitable for diagnosis, prognosis and / or prediction.

Gegenwärtig werden viele und sehr spezifische Biomarker auch in der Diagnose und Therapie von Krebserkrankungen verwendet. Krebszellen produzieren sogenannte "Tumormarker" und geben diese ins Blut ab. Einige dieser Marker liegen zwar auch bei gesunden Menschen vor, allerdings nicht in so großer Menge wie bei Krebserkrankungen, so dass sich diese Mengenunterschiede für die Analyse von Blut- oder Urinproben nutzen lassen. Allerdings gibt es längst nicht für alle Krebsarten solche Biomarker: Viele Tumorzellen unterscheiden sich nicht genug von gesunden Zellen und produzieren keine für die Krebskrankheit typischen Stoffe.At present, many and very specific biomarkers are also used in the diagnosis and therapy of cancers. Cancer cells produce so-called "tumor markers" and release them into the blood. Although some of these markers are also present in healthy people, but not as large as in cancers, these differences can be used to analyze blood or urine samples. However, there are by no means such biomarkers for all types of cancer: many tumor cells do not differ enough from healthy cells and produce no substances typical for cancer.

Ein bekannter Biomarker für eine Krebsart ist bspw. ErbB-2, auch bekannt als HER2/neu, ein Wachstumsfaktorrezeptor, der bei etwa 20 bis 30 Prozent aller Brustkrebspatientinnen überexprimiert ist. ErbB-2 ist nicht nur ein Biomarker für ungünstigere Therapieprognosen, sondern auch Angriffspunkt neuer Arzneistoffe. Ebenfalls insbesondere mit Brustkrebs assoziiert sind BRCA1 und -2 (breast cancer gene), die beide an der Reparatur von DNA-Schäden beteiligt sind. Als weitere Biomarker, allerdings für Prostatakrebs, sind gegenwärtig das Prostata-spezifische Antigen (PSA) sowie Sarkosin, ein N-Methylderivat von Glycin, zu nennen. Ferner ist auch Serum-LDL als einziger Biomarker im breiten Einsatz in der Behandlung und Nachsorge des malignen Melanoms. Neben Serum-LDL wird auch oftmals der Serumspiegel von S100B bestimmt, der im Rahmen von Nachsorgeuntersuchungen sich entwickelnde Rezidive frühzeitig anzeigt. Allerdings ist bisher noch kein prognostischer Serummarker bekannt, über welchen eine gute Prognose bestimmt werden kann. For example, a known biomarker for a cancer is ErbB-2, also known as HER2 / neu, a growth factor receptor that is overexpressed in about 20 to 30 percent of all breast cancer patients. ErbB-2 is not only a biomarker for less favorable therapeutic prognoses, but also a target for new drugs. Also particularly associated with breast cancer are BRCA1 and -2 (breast cancer genes), both of which are involved in the repair of DNA damage. Other biomarkers, however, for prostate cancer, currently include prostate-specific antigen (PSA) and sarcosine, an N-methyl derivative of glycine. Furthermore, serum LDL is the only biomarker widely used in the treatment and follow-up of malignant melanoma. In addition to serum LDL, the serum level of S100B is often determined, which early in the context of follow-up visits, developing recurrences. However, so far no prognostic serum markers are known about which a good prognosis can be determined.

Kritische Faktoren, die einen “guten“ Biomarker auszeichnen, sind insbesondere technische Aspekte wie die Zugänglichkeit des Probenmaterials, die Genauigkeit des Nachweisverfahrens des Biomarkers und eine möglichst geringe Abweichung zwischen Resultaten verschiedener Labore. Auch spielt die Geschwindigkeit, mit der Testergebnisse für den Biomarker vorgelegt werden können, eine Rolle, insbesondere bei anstehenden Akutbehandlungen. Blut als einfach zugängliches Probenmaterial wird beim Nachweis zirkulierender Tumorzellen verwendet. Diese können direkt gemessen werden, zum Beispiel durch Anfärbung mit Fluoreszenz-markierten Antikörpern gegen tumorspezifische Proteine. Dieser Test liefert Informationen über das Vorhandensein eines Tumors und sein Ansprechen auf die Therapie. Critical factors that characterize a "good" biomarker include, in particular, technical aspects such as the accessibility of the sample material, the accuracy of the detection method of the biomarker and the smallest possible deviation between results of different laboratories. Also, the speed at which test results for the biomarker can be presented plays a role, especially in upcoming acute treatments. Blood as easily accessible sample material is used in the detection of circulating tumor cells. These can be measured directly, for example by staining with fluorescence-labeled antibodies against tumor-specific proteins. This test provides information about the presence of a tumor and its response to therapy.

Da sowohl die genaue Klassifikation einer Erkrankung als auch die Auswahl der optimalen Behandlung angesichts einer immer stärker individualisierten Therapie enorme Bedeutung gewinnen, werden Biomarker in der modernen Medizin immer wichtiger, und zwar nicht nur als reines Diagnosehilfsmittel. Since both the exact classification of a disease and the selection of the optimal treatment in view of an increasingly individualized therapy gaining enormous importance, biomarkers are becoming increasingly important in modern medicine, and not only as a pure diagnostic tool.

ZUSAMMENFASSENDE DARSTELLUNG DER ERFINDUNGSUMMARY OF THE INVENTION

Vor diesem Hintergrund ist es Aufgabe der vorliegenden Erfindung neue Biomarker bereitzustellen, mittels welcher Aussagen übe Diagnose von Tumoren und/oder der Prognose oder Prädiktion der Therapie eines Tumors getroffen werden können. Against this background, it is an object of the present invention to provide new biomarkers, by means of which statements übe diagnosis of tumors and / or the prognosis or prediction of the therapy of a tumor can be made.

Diese Aufgabe wird durch die Bereitstellung eines Peptids gelöst, wobei das Peptid ein Fragment von höchstens 48 Aminosäureresten des C-terminalen Bereichs der Isoform 2 des NY-ESO-1 Proteins mit der SEQ ID Nr. 1 umfasst, sowie zumindest einen Aminosäurerest des Sequenzabschnitts von Aminosäure Nr. 135 bis Nr. 168 der SEQ ID Nr. 1. Das Peptid ist dabei vorzugsweise isoliert, synthetisch oder rekombinant hergestellt. This object is achieved by providing a peptide wherein the peptide comprises a fragment of at most 48 amino acid residues of the C-terminal region of the isoform 2 of the NY-ESO-1 protein having SEQ ID NO: 1 and at least one amino acid residue of the sequence segment of Amino acid No. 135 to No. 168 of SEQ ID No. 1. The peptide is preferably isolated, synthetic or recombinant produced.

Insbesondere wird diese Aufgabe durch ein wie oben definiertes erfindungsgemäßes Peptid gelöst, das mindestens 8 und höchstens 20, vorzugsweise 15 Aminosäurereste umfasst.In particular, this object is achieved by an inventive peptide as defined above comprising at least 8 and at most 20, preferably 15 amino acid residues.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform ist dabei das Peptid ein Peptid-Fragment, das die Aminosäure Nr. 135 der SEQ ID Nr. 1 umfasst, und noch bevorzugter ein Peptid, das das Fragment mit der SEQ ID Nr. 2 ist, oder Fragmente davon, die mindestens 8 Aminosäurereste sowie die Aminosäure Nr. 14 der SEQ ID Nr. 2 noch umfassen, aufweist.In a preferred embodiment, the peptide is a peptide fragment comprising amino acid No. 135 of SEQ ID NO: 1, and more preferably a peptide which is the fragment of SEQ ID NO: 2 or fragments thereof at least 8 amino acid residues and amino acid no. 14 of SEQ ID NO: 2 still has.

Die der Erfindung zugrunde liegende Aufgabe wird auf diese Weise vollkommen gelöst. The object underlying the invention is completely solved in this way.

Die Erfinder haben eine Isoform des NY-ESO-1 Proteins als Biomarker im Zusammenhang mit Tumoren bzw. Krebs, insbesondere mit Melanomen, identifiziert. The inventors have identified an isoform of the NY-ESO-1 protein as a biomarker associated with tumors, particularly melanomas.

NY-ESO-1 ist ein intrazelluläres Protein, dessen Funktion bisher noch unbekannt ist. Im Stand der Technik sind zwei Isoformen dieses Proteins bekannt, nämlich die Isoform 1 (UniProt Identifier P78358-1), die aus 180 Aminosäuren besteht, sowie die Isoform 2 (UniProt Identifier P78358-2), die aus 168 Aminosäuren besteht. Dabei sind die Aminosäuren 1 bis 134 der beiden Isoformen 1 und 2 identisch, die Aminosäuren der C-Termini der beiden Isoformen unterscheiden sich jedoch. NY-ESO-1 is an intracellular protein whose function is still unknown. Two isoforms of this protein are known in the prior art, namely isoform 1 (UniProt Identifier P78358-1), which consists of 180 amino acids, and isoform 2 (UniProt Identifier P78358-2), which consists of 168 amino acids. The amino acids 1 to 134 of the two isoforms 1 and 2 are identical, but the amino acids of the C termini of the two isoforms are different.

Die Isoform 1 von NY-ESO-1 ist als ein Tumorantigen aus der Gruppe der Cancer/Testis-Antigene bekannt, und verschiedene Untersuchungen zu dieser Isoform wurden publiziert. So offenbart bspw. die WO 1999/918296 die Identifizierung der Sequenz der Isoform 1 von NY-ESO-1. Ferner ist in der US 6,525,177 beschrieben, dass die Isoform 1 von NY-ESO-1 in bestimmten Tumoren stark exprimiert ist, und daher als Tumormarker dienen kann. The isoform 1 of NY-ESO-1 is known as a tumor antigen from the group of cancer / testis antigens, and various studies on this isoform have been published. For example, the WO 1999/918296 the identification of the sequence of Isoform 1 of NY-ESO-1. Furthermore, in the US 6,525,177 described that the isoform 1 of NY-ESO-1 is strongly expressed in certain tumors, and therefore can serve as a tumor marker.

Nicht offenbart oder bekannt war jedoch die Sequenz der Isoform 2 zur Verwendung als Biomarker, insbesondere der weiter oben definierten Sequenzen, nicht zuletzt deswegen, da keine Untersuchungen zur Expression dieses Proteins vorlagen. However, the sequence of isoform 2 for use as a biomarker, in particular the sequences defined above, was not disclosed or known, not least because no studies on the expression of this protein were available.

Mit der vorliegenden Erfindung wird daher zum ersten Mal die Verwendung der Isoform 2 von NY-ESO-1, bzw. von für die Isoform 2 charakteristischen Fragmenten, als Biomarker beschrieben, und gezielte Einsatzmöglichkeiten dieses Biomarkers aufgezeigt, wie bspw. dessen Verwendung zur Diagnose von Tumoren und/oder Prognose oder Prädiktion der Therapie eines Tumors. The present invention therefore for the first time describes the use of the isoform 2 of NY-ESO-1, or of fragments characteristic of the isoform 2, as biomarkers, and shows targeted uses of this biomarker, such as its use for the diagnosis of Tumors and / or prognosis or prediction of the therapy of a tumor.

Dabei bezieht sich ”Biomarker” im Kontext der vorliegenden Erfindung auf ein erfindungsgemäßes Peptid, über welches es möglich ist, die Diagnose, Prädiktion oder Prognose einer Krebserkrankung zu bestimmen, nachgewiesen wird. In the context of the present invention, "biomarker" refers to a peptide according to the invention by means of which it is possible to determine the diagnosis, prediction or prognosis of a cancerous disease.

Der Ausdruck "Peptid" bedeutet ein Polymer, worin die Monomere Aminosäuren sind, die miteinander über Amidbindungen verbunden sind. Das Peptid kann mindestens ungefähr 5, mindestens 8, mindestens 10, mindestens 15, oder aus mindestens ungefähr 50 Aminosäuren zusammengesetzt sein.The term "peptide" means a polymer wherein the monomers are amino acids linked together via amide bonds. The peptide may be at least about 5, at least 8, at least 10, at least 15, or composed of at least about 50 amino acids.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind mit der Verwendung des Begriffs ”ein Peptid” oder ”das Peptid” in der Einzahl auch Verwendungen von zwei oder mehreren der erfindungsgemäßen Peptide gemeint, mithin also von Peptiden, die unter die oben genannten Definitionen fallen. In the context of the present invention, the use of the term "a peptide" or "the peptide" in the singular also means uses of two or more of the peptides according to the invention, that is to say of peptides which fall under the abovementioned definitions.

Die erfindungsgemäße Verwendung kann bspw. im Einsatz eines oder mehrerer der erfindungsgemäßen Peptide im einen Verfahren liegen, im Rahmen dessen das Vorliegen von und ggf. die Menge von gegen das/die erfindungsgemäßen Peptide gerichteten Antikörpern in einer biologischen Probe eines Patienten bestimmt wird. Werden die Antikörper bzw. eine bestimmte Menge an Antikörpern durch Bindung an das/die Peptide in der Probe nachgewiesen, können dadurch prognostische Aussagen getroffen werden: Die Erfinder der vorliegenden Anmeldung haben nämlich gezeigt, dass Patienten, in deren Proben ein erhöhter Titer von Antikörpern vorlag, die gegen das /die Peptide gerichtet waren, einen signifikanten Überlebensvorteil hatten gegenüber Patienten, bei denen kein erhöhter Titer von Antikörpern nachgewiesen werden konnte, welche gegen das/die Peptide gerichtet waren. The use according to the invention can be, for example, in the use of one or more of the peptides according to the invention in a method in which the presence of and, if necessary, the amount of antibodies directed against the peptide (s) according to the invention is determined in a biological sample of a patient. If the antibodies or a specific amount of antibodies are detected by binding to the peptide (s) in the sample, prognostic statements can be made. The inventors of the present application have shown that patients in whose samples an elevated titre of antibodies was present which were directed against the peptide (s) had a significant survival advantage over patients in whom no elevated titer of antibodies could be detected which were directed against the peptide (s).

Grundsätzlich können zum Nachweis des Vorliegens oder der Menge des/der erfindungsgemäßen Biomarkerpeptide und/oder Antikörpern jedes gängigen Verfahren eingesetzt werden, dass sich zum Protein-/Peptid- oder Antikörpernachweis eignet. Erfindungsgemäß bevorzugt erfolgt der Nachweis der Peptide oder Fragmente davon oder der Antikörper durch ein immunologisches Verfahren, mithin also durch den Einsatz von gegen das/die erfindungsgemäßen Peptide/Antikörper gerichteten Antikörpern, und Antikörpern, die wiederum die an die erfindungsgemäßen Peptide/Antikörper gebundenen Antikörper erkennen. In principle, any conventional method that is suitable for protein / peptide or antibody detection can be used to detect the presence or amount of the biomarker peptides and / or antibodies of the invention. Preferably, according to the invention, the peptides or fragments thereof or the antibody are detected by an immunological method, that is to say by the use of antibodies directed against the peptide (s) of the invention, and antibodies which in turn recognize the antibodies bound to the peptides / antibodies according to the invention ,

Der Begriff ”Antikörper” bezieht sich vorliegend auf einen (Poly)peptid-Liganden, der im Wesentlichen von einem Immunglobulin-Gen oder Immunglobulin-Genen codiert wird, oder Fragmente davon, der spezifisch ein Epitop (z. B. ein Antigen) bindet und erkennt. Zu den anerkannten Immunglobulingenen gehören die Kappa- und Lambda-Leichtkette-Gene der konstanten Region, die Alpha-, Gamma-, Delta-, Epsilon- und mu-Schwerkette-Gene der konstanten Region sowie die unzähligen Immunglobulinvariable-Region-Gene. Antikörper existieren z. B. als intakte Immunglobuline oder als eine Anzahl von gut charakterisierten Fragmenten, die durch Verdau mit verschiedenen Peptidasen erzeugt werden. Hierzu zählen z. B. Fab'- und F(ab)'2-Fragmente. Der Begriff ”Antikörper”, wie hierin verwendet, schließt auch Antikörperfragmente mit ein, die entweder durch Modifikation ganzer Antikörper produziert werden, oder diejenigen, die unter Anwendung von rekombinanten DNA-Methoden de novo synthetisiert werden. Umfasst sind ferner polyklonale Antikörper, monoklonale Antikörper, chimäre Antikörper, humanisierte Antikörper oder Einzelketten-Antikörper ein. ”Fc”-Abschnitt eines Antikörpers bezieht sich auf denjenigen Abschnitt einer Immunglobulin-Schwerkette, der ein oder mehrere Schwerketten-Konstantregion-Domänen, CH₁, CH₂ und CH₃, umfasst, aber nicht die variable Region der Schwerkette einschließt.The term "antibody" as used herein refers to a (poly) peptide ligand that is substantially encoded by an immunoglobulin gene or immunoglobulin genes, or fragments thereof that specifically binds an epitope (eg, an antigen) and recognizes. Recognized immunoglobulin genes include the kappa and lambda light chain Constant region genes, alpha, gamma, delta, epsilon and mu heavy chain constant region genes, as well as myriad immunoglobulin variable region genes. Antibodies exist z. As intact immunoglobulins or as a number of well-characterized fragments generated by digestion with various peptidases. These include z. B. Fab 'and F (ab)' 2 fragments. The term "antibody" as used herein also includes antibody fragments produced either by modification of whole antibodies or those synthesized de novo using recombinant DNA techniques. Also included are polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies or single chain antibodies. "Fc" portion of an antibody refers to that portion of an immunoglobulin heavy chain which comprises one or more heavy chain constant region domains, CH ₁ , CH ₂ and CH ₃ , but does not include the variable region of the heavy chain.

Wie hierin verwendet, werden die Ausdrücke "Patientenprobe", "eine von einem Patienten/Individuum erhaltene Probe" austauschbar verwendet und schließen jede Probe ein, die von einem Patienten oder anderen Individuum erhalten wurde. Daher kann die Probe eine feste Gewebeprobe sein, z.B. eine Biopsieprobe, eine flüssige Probe, z.B. eine Blutprobe, oder jede andere Patientenprobe, die herkömmlich medizinisch verwendet wird. In einigen Ausführungsformen der Erfindung ist die Probe eine Probe von "Körperflüssigkeit", eine Probe von Lymphflüssigkeit, Zelllysaten, Plasma, Speichel, Serum, Spinalflüssigkeit, Tränen, Gesamtblut, Fraktionen von Gesamtblut, Wundproben, die externen Teile der Haut und die Sekrete der respiratorischen, intestinalen und genitourinären Trakte. Bevorzugt ist die Probe Blut, Sputum, Urin oder Fraktionen von Gesamtblut.As used herein, the terms "patient sample", "a sample obtained from a patient / individual" are used interchangeably and include any sample obtained from a patient or other individual. Therefore, the sample may be a solid tissue sample, e.g. a biopsy sample, a liquid sample, e.g. a blood sample, or any other patient sample that is conventionally used medicinally. In some embodiments of the invention, the sample is a sample of "body fluid", a sample of lymphatic fluid, cell lysates, plasma, saliva, serum, spinal fluid, tears, whole blood, whole blood fractions, wound samples, the external parts of the skin, and the respiratory secretions , intestinal and genitourinary tracts. Preferably, the sample is blood, sputum, urine or whole blood fractions.

Sofern nicht anders definiert, haben alle technischen und wissenschaftlichen Begriffe, die hierin verwendet werden, die Bedeutung, die allgemein von einem Fachmann auf dem Gebiet, zu dem diese Erfindung gehört, verstanden wird.Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the meaning generally understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs.

Wie weiter oben erwähnt, umfasst gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung das erfindungsgemäße Peptid die Aminosäuresequenz VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID Nr. 2), mithin also die Sequenzen 121–135 der Isoform 2, und Antikörper, die dieses Peptid, das auch Teil einer längeren Sequenz sein kann, die diese Sequenz VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID Nr. 2) umfasst, oder eine hierfür codierende Nukleinsäuresequenz spezifisch binden. As mentioned above, according to a preferred embodiment of the present invention, the peptide according to the invention comprises the amino acid sequence VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID NO: 2), ie the sequences 121-135 of the isoform 2, and antibodies comprising this peptide, which also forms part of a longer May be a sequence comprising this sequence VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID NO: 2), or specifically bind a nucleic acid sequence coding therefor.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform wird das erfindungsgemäße Peptid als diagnostischer Biomarker für das Bestimmen des Vorliegens einer Tumorerkrankung, insbesondere von einem der folgenden Krebsarten eingesetzt: malignes Melanom, Brustkrebs, Lungenkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Eierstockkrebs, Gebärmutterkrebs, Hodenkrebs, Nierenzellkrebs, Leberkrebs, Leukämie, Hautkrebs, hirneigene Krebse, insbesondere Glioblastom, Ösophagus-Krebs, Magenkrebs, und Metastasen jeglicher davon, und insbesondere malignem Melanom. According to a preferred embodiment, the peptide according to the invention is used as a diagnostic biomarker for determining the presence of a tumor disease, in particular one of the following cancers: malignant melanoma, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, uterine cancer, testicular cancer, renal cell cancer, liver cancer, Leukemia, skin cancer, brain cancer, especially glioblastoma, esophageal cancer, gastric cancer, and metastases of any of them, and especially malignant melanoma.

Dabei bedeutet „diagnostisch” das Identifizieren des Vorhandenseins oder der Natur eines pathologischen Zustands, d. h. des Krebs, durch Nachweis des erfindungsgemäßen Peptids und/oder durch Bestimmung der Expression des erfindungsgemäßen Peptids in einer Patientenprobe ggf. im Vergleich zur Expression des Peptids in einer gesunden und/oder durch Bestimmen des Vorliegens von gegen das Peptid/die Peptide gerichteten Antikörpern. Here, "diagnostic" means identifying the presence or nature of a pathological condition, i. H. of the cancer, by detection of the peptide according to the invention and / or by determining the expression of the peptide according to the invention in a patient sample optionally in comparison to the expression of the peptide in a healthy and / or by determining the presence of antibodies directed against the peptide (s).

Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird das erfindungsgemäße Peptid als prädiktiver Biomarker für das Ansprechen oder Nebenwirkungen auf eine Tumor-Therapie eingesetzt. Hierbei wird also der Biomarker dazu eingesetzt, um zu bestimmen, ob eine bestimmte Behandlung/Therapie bei einem Patienten überhaupt wirken wird und/oder ob Nebenwirkungen, die ggf. mit einer Therapie assoziiert sind, auftreten. Dies ist insbesondere dann wichtig, wenn ein modernes zielgerichtetes Medikament eingesetzt werden soll. Viele dieser Mittel wirken nur, wenn die Tumorzellen bestimmte Eigenschaften aufweisen. Die Bestimmung des erfindungsgemäßen Biomarkers bzw. von gegen diesen gerichteten Antikörpern, bei einem Patienten, gibt darüber Auskunft. Liegt der/die Biomarker nicht vor, ist es nutzlos, einen Patienten mit dem Mittel, bspw. mit spezifisch gegen den Biomarkern gerichteten Antikörpern zu behandeln. Die in diesem Zusammenhang betreffenden Tumore oder Krebsarten sind dabei ausgewählt aus zumindest einem der folgenden: malignes Melanom, Brustkrebs, Lungenkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Eierstockkrebs, Gebärmutterkrebs, Hodenkrebs, Nierenzellkrebs, Leberkrebs, Leukämie, Hautkrebs, hirneigene Krebse, insbesondere Glioblastom, Ösophagus-Krebs, Magenkrebs, und Metastasen jeglicher davon.According to a further embodiment, the peptide according to the invention is used as a predictive biomarker for the response or side effects on a tumor therapy. In this case, the biomarker is used to determine whether a specific treatment / therapy will actually affect a patient and / or whether side effects that may be associated with therapy occur. This is especially important when a modern targeted drug is to be used. Many of these agents work only if the tumor cells have certain properties. The determination of the biomarker according to the invention or of antibodies directed against it, in a patient, provides information thereon. If the biomarker (s) does not exist, it is useless to treat a patient with the agent, for example with antibodies directed specifically against the biomarker. The tumors or cancers involved in this context are selected from at least one of the following: malignant melanoma, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, uterine cancer, testicular cancer, renal cell carcinoma, liver cancer, leukemia, skin cancer, brain cancer, especially glioblastoma, Esophageal cancer, gastric cancer, and metastases of any one of them.

Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird das Peptid als prognostischer Biomarker eingesetzt. Hierbei – wie auch allgemein – wird unter einem „prognostischem“ Biomarker ein Marker verstanden, der – bspw. durch seine Expression/sein Vorliegen/oder durch das Vorliegen von gegen das erfindungsgemäße Peptid gerichteten Antikörpern – Hinweise darauf gibt, ob ein Subjekt, insbesondere ein Mensch, bei dem noch kein Krebs diagnostiziert wurde, Krebs entwickeln wird, und somit vor Ausbruch des Krebs als entsprechender Marker dient, bzw. wie er Krankheitsverlauf und/oder die Überlebensvorteile des betreffenden Subjekts sind. Die in diesem Zusammenhang betreffenden Tumore oder Krebsarten sind dabei ebenfalls ausgewählt aus zumindest einem der folgenden: malignes Melanom, Brustkrebs, Lungenkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Eierstockkrebs, Gebärmutterkrebs, Hodenkrebs, Nierenzellkrebs, Leberkrebs, Leukämie, Hautkrebs, hirneigene Krebse, insbesondere Glioblastom, Ösophagus-Krebs, Magenkrebs, und Metastasen jeglicher davonIn another embodiment, the peptide is used as a prognostic biomarker. Here, as well as in general terms, a "prognostic" biomarker is understood to mean a marker which, for example by its expression / presence / or by the presence of antibodies directed against the peptide according to the invention, gives indications as to whether a subject, in particular a human People who have not yet been diagnosed with cancer will develop cancer, and thus serve as markers before the onset of cancer, or like him Disease course and / or the survival benefits of the subject in question. The tumors or cancers associated therewith are also selected from at least one of malignant melanoma, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, uterine cancer, testicular cancer, renal cell carcinoma, liver cancer, leukemia, skin cancer, brain cancer, especially glioblastoma , Esophageal cancer, gastric cancer, and metastases of any one of them

Der Nachweis der erfindungsgemäßen Peptide oder daran bindenden Antikörper kann dabei mittels jedem gängigen Verfahren, dass sich zum Peptid-/Protein- oder Antikörpernachweis eignet, durchgeführt werden. Erfindungsgemäß bevorzugt erfolgt der Nachweis der erfindungsgemäßen Peptide oder Fragmente davon, oder Antikörper, durch ein immunologisches Verfahren.The detection of the peptides according to the invention or antibodies binding thereto can be carried out by means of any conventional method that is suitable for peptide / protein or antibody detection. According to the invention, it is preferable to detect the peptides or fragments thereof according to the invention, or antibodies, by an immunological method.

Für den Nachweis des Peptids/der Expression des Peptids kann vorliegend ein Nachweisreagenz eingesetzt werden, bspw. ein Antikörper oder einer Nukleinsäure, der/die spezifisch an das erfindungsgemäße Peptid bindet, bzw. an die dieses Peptid codierende mRNA hybridisiert. Durch die Bindung mindestens einen Nachweisreagenz, bspw. eines Antikörpers, der mindestens ein erfindungsgemäßes Biomarker-Peptid erkennt, oder wenigstens einem weiteren Antikörper, Antikörper-Chip-, Peptid-Microrarray, beschichteter Mikrotiterplatte oder Lateral-Flow-Vorrichtungen /Immunochormatographischer Schnelltest/Teststreifen, können eine Vielzahl an Nachweisreagenzien bereitgestellt werden, die in einer Vielzahl von Verfahren eingesetzt werden. Insbesondere immuncytochemische Verfahren, wie die Bestimmung durch die Durchflusszytometrie (FACS), die Bestimmung durch einen ”Enzyme linked Immunosorbent Assay” (ELISA) oder mit Hilfe eines Peptid Microarray haben sich als besonders geeignet erwiesen.In the present case, a detection reagent can be used for the detection of the peptide / the expression of the peptide, for example an antibody or a nucleic acid which specifically binds to the peptide according to the invention or to which the mRNA coding for this peptide hybridizes. By binding at least one detection reagent, for example an antibody which recognizes at least one biomarker peptide according to the invention, or at least one further antibody, antibody chip, peptide microrarray, coated microtiter plate or lateral flow devices / immunochormatographic rapid test / test strip, For example, a variety of detection reagents used in a variety of methods can be provided. In particular, immunocytochemical methods, such as the determination by flow cytometry (FACS), the determination by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or with the aid of a peptide microarray have proven to be particularly suitable.

Geeignete immunologische Nachweisverfahren können bspw. ein direkter ELISA, ein indirekter ELISA, ein Sandwich ELISA, ein Zellkultur ELISA, Durchflusszytometrie (FACS), immunochromatographischer Schnelltests und Peptid Microarray darstellen. Suitable immunological detection methods may, for example, be a direct ELISA, an indirect ELISA, a sandwich ELISA, a cell culture ELISA, flow cytometry (FACS), immunochromatographic rapid tests and peptide microarray.

Peptid-basierte Microarrays bieten den Vorteil einer schnellen Analyse von Proben, da – im Gegensatz zum Nachweis von bspw. DNA – auf eine Vermehrung des genetischen Materials sowie die Hybridisierung verzichten kann. Zudem lassen Protein-Microarrays eine Analyse des tatsächlichen Proteinlevels zu.Peptide-based microarrays offer the advantage of a rapid analysis of samples, since - in contrast to the detection of, for example, DNA - can do without an increase in the genetic material and hybridization. In addition, protein microarrays allow an analysis of the actual protein levels.

Bei Peptid-Microarrays werden statt der DNA-Kopien kleine Protein/Peptidmengen auf dem Trägermaterial (Chips) aufgebracht. Diese werden dann mit einer biologischen Probe, die zum Beispiel einen Antikörper enthält, inkubiert, wobei dieser dann an einige der auf dem Chip befindlichen Protein-/Peptidspots unter geeigneten Bindungsbedingungen bindet. Nach der Durchführung eines Waschschritts, bei dem ungebundener Antikörper entfernt wird, kann die Stärke des Signals jedes Spots und damit die Menge des dort gebundenen Antikörpers aus der Probe ermittelt werden. Das Signal entsteht beispielsweise durch einen weiteren Antikörper, der an einen fluoreszierenden Farbstoff gebunden ist und wiederum an den ersten Antikörper bindet. Man kann die verschiedenen Protein und Peptid-Microarray-Arten nach der Art der Interaktion (Antigen-Antikörper, Enzym-Substrat, Rezeptor-Protein oder allgemeine Protein-Protein Interaktion) unterscheiden.In peptide microarrays, small amounts of protein / peptide are applied to the carrier material (chips) instead of the DNA copies. These are then incubated with a biological sample containing, for example, an antibody, which then binds to some of the on-chip protein / peptide spots under appropriate binding conditions. After carrying out a washing step in which unbound antibody is removed, the strength of the signal of each spot and thus the amount of antibody bound therefrom can be determined from the sample. The signal is generated, for example, by another antibody which is bound to a fluorescent dye and in turn binds to the first antibody. One can differentiate the different protein and peptide microarray species according to the type of interaction (antigen-antibody, enzyme-substrate, receptor-protein or general protein-protein interaction).

Der Ausdruck "Bindungsbedingungen" ist dazu gedacht, diejenigen Bedingungen der Zeit, Temperatur und pH und die nötigen Mengen und Konzentrationen an Reaktanten und Reagenzien zu bedeuten, die ausreichend sind, um eine Bindung zwischen Bindungspaaren, z.B. einem Antikörper an ein Protein, das das entsprechende Epitop aufweist, zu ermöglichen. Wie im Stand der Technik gut bekannt ist, hängen die für eine Bindung erforderlichen Zeit-, Temperatur- und pH-Bedingungen von der Größe jedes Mitglieds des Bindungspaars, der Affinität zwischen dem Bindungspaar, und der Anwesenheit anderer Materialien in dem Reaktionsgemisch ab. Die aktuellen Bedingungen, die für jeden Bindungsschritt erforderlich sind, sind im Stand der Technik gut bekannt oder können ohne unzumutbaren Aufwand leicht bestimmt werden. Typische Bindungsbedingungen für die meisten Biomoleküle, z.B. Antikörper an ein Protein, das das entsprechende Epitop aufweist, schließen die Verwendung von auf einen pH von ungefähr 7 bis ungefähr 8,5 gepufferten Lösungen ein und werden bei Temperaturen von ungefähr 22°C bis ungefähr 60°C und bevorzugt von ungefähr 30°C bis ungefähr 55°C für eine Zeitdauer von ungefähr 1 Sekunde bis ungefähr 1 Tag, bevorzugt von ungefähr 10 Minuten bis ungefähr 16 Stunden, und am meisten bevorzugt von ungefähr 15 Minuten bis ungefähr 3 Stunden ausgeführt. "Bindungsbedingungen" erfordern auch einen effektiven Puffer. Jeder Puffer der kompatibel, d.h., chemisch inert, im Hinblick auf die Biomoleküle und anderen Komponenten ist, und immer noch eine Bindung zwischen dem Bindungspaar erlaubt und unspezifische Bindungen wesentlich verhindert, kann verwendet werden.The term "binding conditions" is intended to mean those conditions of time, temperature and pH and the requisite amounts and concentrations of reactants and reagents sufficient to allow binding between binding pairs, e.g. to allow an antibody to a protein having the corresponding epitope. As is well known in the art, the time, temperature and pH conditions required for a bond will depend upon the size of each member of the binding pair, the affinity between the binding pair, and the presence of other materials in the reaction mixture. The actual conditions required for each binding step are well known in the art or can be readily determined without undue burden. Typical binding conditions for most biomolecules, e.g. Antibodies to a protein having the corresponding epitope include the use of solutions buffered to a pH of from about 7 to about 8.5 and are maintained at temperatures of from about 22 ° C to about 60 ° C and preferably at about 30 ° C to about 55 ° C for a period of about 1 second to about 1 day, preferably from about 10 minutes to about 16 hours, and most preferably from about 15 minutes to about 3 hours. "Binding conditions" also require an effective buffer. Any buffer that is compatible, i.e., chemically inert, with respect to the biomolecules and other components, and still allows binding between the binding pair and substantially prevents non-specific binding can be used.

Entsprechend betrifft die vorliegende Erfindung ferner einen rekombinanten oder transgen-synthetisierter Antikörper, der gegen ein erfindungsgemäßes Peptid gerichtet ist. Accordingly, the present invention further relates to a recombinant or transgene-synthesized antibody directed against a peptide of the invention.

Dabei bedeutet „gegen ein erfindungsgemäßes Peptid gerichtet“, dass der Antikörper nur das erfindungsgemäße Peptid ganz spezifisch erkennt und bindet, nicht jedoch andere Peptide, und insbesondere nicht Peptide, die nicht ein Peptid-Fragment der Isoform 2 von NY-ESO-1 spezifisch binden, d.h. als Epitop spezifisch erkennen, das die Aminosäure Nr. 135 der SEQ ID Nr. 1 aufweist. Here, "directed against a peptide according to the invention" means that the antibody only the peptides of the invention specifically recognizes and binds, but not other peptides, and in particular not peptides that do not specifically bind a peptide fragment of the isoform 2 of NY-ESO-1, ie specifically recognize as an epitope, the amino acid no. 135 of SEQ ID No. 1.

Die Herstellung von rekombinanten oder transgen-synthetisierter Antikörpern, die auf gentechnischem Weg erzeugt werden, ist im Stand der Technik generell bekannt, und erfolgt durch Klonierung in Expressionsvektoren und Transformation in Wirtszellen wie Escherichia coli, Hefen und Pflanzen. Beispielhaft wird hierzu auf die folgenden Veröffentlichungen verwiesen: Peter J. Hudson: „Recombinant antibody fragments“. Current Opinion in Biotechnology, Bd. 9, Nr. 4, 1998, S. 395–402 ; und Jürgen Krauss: “Recombinant antibodies for the diagnosis and treatment of cancer”, Molecular Biotechnology, Bd. 25, Nr. 1, 2003, S. 1–17 , auf deren Inhalte ausdrücklich Bezug genommen wird. The production of recombinant or transgene-synthesized antibodies produced by genetic engineering is well known in the art, and is accomplished by cloning into expression vectors and transformation into host cells such as Escherichia coli, yeasts and plants. For example, reference is made to the following publications: Peter J. Hudson: Recombinant antibody fragments. Current Opinion in Biotechnology, Vol. 9, No. 4, 1998, pp. 395-402 ; and Jürgen Krauss: "Recombinant antibodies for the diagnosis and treatment of cancer", Molecular Biotechnology, Vol. 25, No. 1, 2003, p. 1-17 , the contents of which are expressly referred to.

Die im Rahmen der vorliegenden Erfindung beanspruchten therapeutischen oder diagnostischen Antikörper können dabei in üblicherweise für die Therapie bzw. Diagnostik verwendeten Puffern und Lösungen vorliegen. Geeignete pharmazeutische Zusammensetzungen finden sich bspw. in A. Kibbe, “Handbook of Pharmaceutical Excipients”, 3rd Ed., 2000, American Pharmaceutical Association and Pharmaceutical Press .The therapeutic or diagnostic antibodies claimed in the context of the present invention can be present in buffers and solutions usually used for therapy or diagnostics. Suitable pharmaceutical compositions can be found, for example, in A. Kibbe, "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3rd ed., 2000, American Pharmaceutical Association and Pharmaceutical Press ,

Die vorliegende Erfindung betrifft ferner, wie auch weiter oben direkt für die erfindungsgemäßen Peptide formuliert, die Verwendung eines oder mehreren erfindungsgemäßen Peptide, zur Diagnose von Tumoren und/oder Prognose eines Tumors und/oder Prädiktion von Ansprechen oder Nebenwirkungen von Tumor-Therapien. Dabei können, wie ebenfalls weiter oben dargestellt, ein oder mehrere erfindungsgemäße Peptide dazu eingesetzt werden, Antikörper in einer zu untersuchenden biologischen Probe zu detektieren, die spezifisch an ein erfindungsgemäßes Peptid binden. Sind in der biologischen Probe solche spezifischen Antikörper, so wird diese Information in der Diagnose, Prognose und/oder Prädiktion entsprechend eingesetzt. Mit dem vorliegenden erfindungsgemäßen Peptid bzw. dessen Verwendung wird auch erstmals ein prognostischer Marker bereitgestellt, anhand dessen eine positive Prognose bestimmt werden kann.The present invention further relates, as also formulated directly above for the peptides according to the invention, the use of one or more peptides according to the invention, for the diagnosis of tumors and / or prognosis of a tumor and / or prediction of responses or side effects of tumor therapies. In this case, as also shown above, one or more peptides according to the invention can be used to detect antibodies in a biological sample to be examined which bind specifically to a peptide according to the invention. If such specific antibodies are present in the biological sample, this information is used accordingly in the diagnosis, prognosis and / or prediction. With the present peptide according to the invention or its use, a prognostic marker is also provided for the first time, by means of which a positive prognosis can be determined.

Die vorliegende Erfindung betrifft ferner die Verwendung eines oder mehrerer gegen ein erfindungsgemäßes Peptid gerichteten Agens zur Therapie von Tumoren, dadurch gekennzeichnet, dass das Agens ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend Antikörper, antikörper-ähnliche Konstrukte, T-Zellen.The present invention furthermore relates to the use of one or more agents directed against a peptide according to the invention for the therapy of tumors, characterized in that the agent is selected from the group comprising antibodies, antibody-like constructs, T cells.

Der Antikörper kann dabei vorzugsweise monoklonal sein, also mittels der im Stand der Technik bekannten Hybridom-Technik produziert sein (hierzu wird ausdrücklich auf die Herstellungsverfahren verwiesen, wie sie auf der Veröffentlichung von Köhler und Milstein basieren ( “Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity” Nature 256, 495–497 (1975) ) und vorzugswiese human sein, oder rekombinant hergestellt. Diesbezüglich wird ebenfalls auf Jürgen Krauss: “Recombinant antibodies for the diagnosis and treatment of cancer”, Molecular Biotechnology, Bd. 25, Nr. 1, 2003, S. 1–17 , verwiesen. Unter einem „antikörper-ähnlichen Konstrukt“ ist vorliegend jedes synthetische oder rekombinant hergestellte Bindereagenz zu verstehen, das wie ein Antikörper spezifisch an ein erfindungsgemäßes Peptid bindet, und nicht an andere, nicht erfindungsgemäße Peptide. T-Zellen stellen Effektorzellen dar, die Tumorzellen direkt bekämpfen, abtöten und eliminieren können. Die gezielte Aktivierung, Stimulation, Stärkung und die Verbesserung der Spezifität von T-Zellen im Hinblick auf die erfindungsgemäßen Peptide ist ein weiterer Therapieansatz, der die Bekämpfung von Krebserkrankungen erlaubt. Hierzu erfolgt im Rahmen einer T-Zell-Therapie der Transfer einer definierten, gegen das erfindungsgemäße Peptid gerichteten T-Zellpopulation in den zu behandelnden Patienten. The antibody may preferably be monoclonal, that is to say be produced by means of the hybridoma technique known in the prior art (for this purpose, reference is expressly made to the production methods as based on the publication by Köhler and Milstein ( "Continuous cultures of fused cells secreting antibodies of predefined specificity" Nature 256, 495-497 (1975) ) and preferably human, or produced recombinantly. This will also be on Jürgen Krauss: "Recombinant antibodies for the diagnosis and treatment of cancer", Molecular Biotechnology, Vol. 25, No. 1, 2003, p. 1-17 , referenced. In the present case, an "antibody-like construct" means any synthetic or recombinantly produced binding reagent which, like an antibody, binds specifically to a peptide according to the invention, and not to other non-inventive peptides. T cells are effector cells that can fight, kill and eliminate tumor cells directly. The targeted activation, stimulation, strengthening and improvement of the specificity of T cells with regard to the peptides according to the invention is a further therapeutic approach that allows the fight against cancer. For this purpose, in the context of a T-cell therapy, the transfer of a defined, directed against the peptide according to the invention T-cell population in the patient to be treated.

Entsprechend betrifft die vorliegende Erfindung auch allgemein die Verwendung eines gegen ein erfindungsgemäßes Peptid gerichteten Agens zur Detektion des erfindungsgemäßen Peptids in einer Körperprobe eines Patienten, wobei das Agens ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend Antikörper, antikörper-ähnliche Konstrukte, Peptid-MHC-Konstrukte. Hierbei wird auf die Definitionen im vorherigen Absatz verwiesen, die auch hier gelten. Peptid-MHC-Konstrukte führen zur T-Zellaktivierung, und bei Einsatz von erfindungsgemäßen Peptiden in den Peptid-MHC-Konstrukten kann eine gezielte T-Zellaktivierung in vivo erreicht werden. Accordingly, the present invention also generally relates to the use of an agent directed against a peptide of the invention for detecting the peptide of the invention in a body sample of a patient, wherein the agent is selected from the group comprising antibodies, antibody-like constructs, peptide-MHC constructs. Reference is made to the definitions in the previous paragraph, which also apply here. Peptide MHC constructs lead to T cell activation, and when using peptides of the invention in the peptide MHC constructs, targeted T cell activation can be achieved in vivo.

Die vorliegende Erfindung betrifft ferner auch Verfahren zur Diagnose, Prognose oder Prädiktion der Therapie eines Tumors in einem Patienten, umfassend den Nachweis von gegen zumindest ein erfindungsgemäßes Peptid gerichteten Antikörpern in einer Körperprobe des Patienten. Dieser Nachweis kann, wie weiter oben dargestellt, durch im Stand der Technik bekannte immunologische Verfahren durchgeführt werden, wie bspw. durch die Durchflusszytometrie (FACS), durch einen ”Enzyme linked Immunosorbent Assay” (ELISA) oder mit Hilfe eines Peptid Microarrays. The present invention further relates to methods for diagnosing, predicting or predicting the therapy of a tumor in a patient, comprising the detection of antibodies directed against at least one peptide of the invention in a body sample of the patient. This detection can be carried out by immunological methods known in the art, such as by flow cytometry (FACS), enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) or peptide microarray, as described above.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren ist gemäß einer Ausführungsform bevorzugt, wenn es die folgenden Schritte aufweist:

– Bereitstellen eines Trägers, der zumindest ein erfindungsgemäßes Peptid immobilisiert hierauf aufweist,
– in Kontakt bringen einer flüssigen Körperprobe des Patienten, welche Körperprobe ggf. gegen ein erfindungsgemäßes Peptid gerichtete Antikörper enthält, mit dem zumindest einen auf dem Träger immobilisierten Peptid, um eine Bindung der in der Körperprobe ggf. vorliegenden Antikörper an das zumindest Peptid und die Ausbildung von Peptid-Antikörper-Komplexen zu ermöglichen,
– Identifizieren, und ggf. Quantifizieren gegenüber einer Kontrolle, der im vorherigen Schritt ggf. gebildeten Peptid-Antikörper-Komplexe.

In the method according to the invention, according to one embodiment, it is preferable if it has the following steps:

Providing a carrier which has at least one peptide according to the invention immobilized thereon,
Bringing into contact a liquid body sample of the patient, which body sample optionally contains antibodies directed against a peptide according to the invention, with the at least one peptide immobilized on the carrier in order to bind the antibody possibly present in the body sample to the at least peptide and the formation to allow peptide-antibody complexes
Identify, and if necessary, quantify against a control, the peptide-antibody complexes possibly formed in the previous step.

Dabei kann die Identifizierung der Peptid-Antikörper-Komplexe im letzten Schritt bspw. mittels eines zweiten Antikörpers erfolgen, der den an das Peptid gebundenen Antikörper erkennt, und bspw. enzym- oder fluoreszenzmarkiert ist.In this case, the identification of the peptide-antibody complexes in the last step, for example, by means of a second antibody carried out, which recognizes the antibody bound to the peptide, and, for example. Enzyme or fluorescence-labeled.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren und der Verwendung ist allgemein bevorzugt, wenn die Körperprobe ausgewählt ist aus Blut, Plasma oder Serum, insbesondere humanem Blut, Plasma oder Serum. In the method and use of the invention it is generally preferred if the body sample is selected from blood, plasma or serum, especially human blood, plasma or serum.

Die Immobilisierung des zumindest einen erfindungsgemäßen Peptides erfolgt dabei bspw. an eine Mikrotiterplatte oder ein Peptid-Array (Chip) oder einen anderen geeigneten Träger, und zwar mittels üblicher Techniken. Das/die erfindungsgemäßen Peptide werden dabei also direkt auf die Oberfläche des Trägers, bspw. einer Polystyrol-Mikrotiterplatte adsorbiert oder kovalent gebunden, wodurch nachfolgend Antikörperkonzentrationen im Vergleich zu einer Standardreihe/Kontrolle gemessen werden können. The immobilization of the at least one peptide according to the invention is carried out, for example, to a microtiter plate or a peptide array (chip) or another suitable carrier, by means of conventional techniques. The peptides according to the invention are thus adsorbed or covalently bound directly to the surface of the support, for example a polystyrene microtiter plate, whereby subsequently antibody concentrations can be measured in comparison with a standard series / control.

Die Identifizierung und ggf. Quantifizierung von Peptid-Antikörpern-Komplexen erfolgt dabei bspw. über einen markierten Zweit-Antikörper (Sekundärantikörper), der den an das erfindungsgemäße Peptid gebundenen Antikörper erkennt und an diesen bindest. Solche ELISA-Tests (und insbesondere Träger, Markierungen, Sekundär-Antikörper) sind im Stand der Technik bekannt. Geeignete Sekundärantikörper können bspw. mit Enzymen (Peroxidase, alkaline Phosphatase), Fluoreszenzmarkern markiert sein, z.B. Fluorescein-Isothiocyanat (FITC), Alexa-Fluor, Qdot, Rhodaminderivate wie TRITC, Rhodamin Red-X, Texas Red, R-Phycoerythrin (R-PE), Allophycocyanin (APC) und Peridinin-Chlorophyll (PerCP) oder Biotin, etc. markiert sein. The identification and optionally quantification of peptide-antibody complexes takes place, for example, via a labeled secondary antibody (secondary antibody), which recognizes the antibody bound to the peptide according to the invention and binds to it. Such ELISA tests (and in particular carriers, labels, secondary antibodies) are known in the art. Suitable secondary antibodies may, for example, be labeled with enzymes (peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescent labels, e.g. Fluorescein isothiocyanate (FITC), Alexa Fluor, Qdot, rhodamine derivatives such as TRITC, Rhodamine Red-X, Texas Red, R-Phycoerythrin (R-PE), Allophycocyanin (APC) and Peridinin-Chlorophyll (PerCP) or Biotin, etc. be marked.

Die Identifizierung der an die erfindungsgemäßen Peptide gebundenen Antikörper – sofern welche in der zu untersuchenden Probe vorhanden waren – erfolgt dabei gegenüber einem Standard bzw. einer Kontrolle. Geeignete Kontrollen bzw. Standards sind bspw. gereinigte Antikörper die gegen die erfindungsgemäßen Peptide hergestellt wurden. The identification of the antibodies bound to the peptides according to the invention - if any were present in the sample to be examined - takes place in comparison with a standard or a control. Suitable controls or standards are, for example, purified antibodies which have been prepared against the peptides according to the invention.

Die vorliegenden Erfindung betrifft auch die Verwendung eines der folgenden: a) eines Proteins, das die Sequenz mit der SEQ ID Nr. 1 besitzt, oder b) einem Peptid, das ein Fragment von höchstens 50 Aminosäureresten des C-terminalen Bereichs der Isoform 2 des NY-ESO-1 Proteins mit der SEQ ID Nr. 1 umfasst, oder c) einer das Peptid gemäß a) oder b) codierenden RNA oder DNA als Vakzin. The present invention also relates to the use of one of the following: a) a protein having the sequence of SEQ ID NO: 1, or b) a peptide containing a fragment of at most 50 amino acid residues of the C-terminal region of the isoform 2 of the NY-ESO-1 protein comprising SEQ ID NO: 1, or c) a RNA or DNA encoding the peptide according to a) or b) as a vaccine.

Durch den Einsatz eines solchen Vakzin kann im zu behandelnden Patienten eine entsprechende Immunantwort ausgelöst werden, mithin also bspw. die Produktion spezifischer gegen das Vakzin gerichteter Antikörper.By using such a vaccine, a corresponding immune response can be triggered in the patient to be treated, thus, for example, the production of specific antibodies directed against the vaccine.

Allgemein ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung, d.h. bei der erfindungsgemäßen Verwendung oder dem Verfahren oder dem Peptid, bevorzugt, wenn der Tumor ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend, malignes Melanom, Brustkrebs, Lungenkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Eierstockkrebs, Gebärmutterkrebs, Hodenkrebs, Nierenzellkrebs, Leberkrebs, Leukämie, Hautkrebs, hirneigene Krebse, insbesondere Glioblastom, Ösophagus-Krebs, Magenkrebs, und Metastasen jeglicher davon, wobei malignes Melanom besonders bevorzugt ist. Generally, in the context of the present invention, i. in the use according to the invention or the method or the peptide, preferably when the tumor is selected from the group comprising malignant melanoma, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, uterine cancer, testicular cancer, renal cell cancer, liver cancer, leukemia, skin cancer, brain cancer, especially glioblastoma, esophageal cancer, gastric cancer, and metastases of any of them, with malignant melanoma being particularly preferred.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung werden die Begriffe “Tumor“ und “Krebs“ synonym eingesetzt, und sollen im weiteren Sinn ist jede bösartige Zunahme des Volumens eines Gewebes von höheren Lebewesen, insbesondere des Menschen, unabhängig von der Ursache, sein, und stellen damit anders ausgedrückt maligne Neoplasien oder Krebs dar. In the context of the present invention, the terms "tumor" and "cancer" are used interchangeably, and in the broader sense are intended to be any malignant increase in the volume of a tissue of higher organisms, in particular of humans, whatever the cause expressed malignant neoplasia or cancer.

Die Erfindung betrifft ferner einen neuen Testkit zur Durchführung eines Verfahrens zum Nachweis von gegen zumindest einen erfindungsgemäßen Peptid-Biomarker gerichteten Antikörpern in menschlichen biologischen Proben, vorzugsweise Blut, Serum oder Plasma. Der Testkit umfasst dabei an einen Träger gebundene erfindungsgemäße Biomarker-Peptide, sowie entsprechende Reagenzien wie bspw. Puffer und Sekundär-Antikörper, und ggf. eine Anleitung, zur Durchführung des Tests.The invention further relates to a new test kit for carrying out a method for detecting antibodies directed against at least one peptide biomarker according to the invention in human biological samples, preferably blood, serum or plasma. The test kit comprises biomarker peptides according to the invention bound to a support, as well as corresponding reagents such as, for example, buffers and secondary antibodies, and, if appropriate, instructions for carrying out the test.

Es versteht sich, dass die vorstehend genannten und die nachstehend noch zu erläuternden Merkmale nicht nur in der jeweils angegebenen Kombination, sondern auch in anderen Kombinationen oder in Alleinstellung verwendbar sind, ohne den Rahmen der vorliegenden Erfindung zu verlassen.It is understood that the features mentioned above and those yet to be explained below can be used not only in the particular combination given, but also in other combinations or in isolation, without departing from the scope of the present invention.

Weitere Vorteile ergeben sich aus der nachstehenden Beschreibung und den angefügten Figuren. Es zeigen: Further advantages will become apparent from the following description and the attached figures. Show it:

1 ein Diagramm, das die Überlebensanalyse nach Kaplan-Meier zeigt, wobei hier die untersuchten Patienten in zwei Gruppen mit hohen (obere Kurve) und niedrigen (untere Kurve) Antikörpertitern aufgeteilt wurden; und 1 a diagram showing the survival analysis according to Kaplan-Meier, whereby the examined patients were divided into two groups with high (upper curve) and lower (lower curve) antibody titer; and

2 ein weiteres Diagramm, das die Überlebensanalyse nach Kaplan-Meier zeigt, wobei hier die untersuchten Patienten in vier Gruppen mit aufsteigenden Antikörpertitern, spezifisch gegen die Peptidsequenz VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID Nr. 2) aufgeteilt wurden; 2 a further diagram showing the Kaplan-Meier survival analysis, in which the patients studied were divided into four groups with ascending antibody titers, specifically against the peptide sequence VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID NO: 2);

3 die vollständige Aminosäuresequenz der Isoform 2 von NY-ESO 1 (SEQ ID Nr. 1) (A), sowie eine Aminosäuresequenz, die den Aminosäuren 121–135 der Isoform 2 entspricht (SEQ ID Nr. 2) (B). 3 the complete amino acid sequence of isoform 2 of NY-ESO1 (SEQ ID NO: 1) (A) and an amino acid sequence corresponding to amino acids 121-135 of isoform 2 (SEQ ID NO: 2) (B).

Material und Methodenmaterial and methods

In ersten Versuchen sollten die beiden Isoformen von NY-ESO-1 auf ev. Anitkörper-relevante Epitope untersucht werden. Hierzu wurden Seren fortgeschrittener Melanom-Patienten auf das Vorliegen von Antikörpern getestet. Die Anzahl der untersuchten Seren betrug 183. Hierzu wurde die Plattform der Firma JPT Peptide Technologies GmbH (Berlin, Deutschland) eingesetzt, die dazu dient, Epitope auf Zielproteinen zu identifizieren, gegen die sich eventuell vorhandene Antikörperantworten richten (siehe hierzu die Veröffentlichung von Pawlowski et al. (JPT Peptide Technologies), April 2013, “A Modular Approach for Epitope Discovery and High-resolution Profiling of Humoral Immune Responses”; unter https://www.jpt.com/fileadmin/user_upload/NEW/News_Publications/Application_Notes/AppNote_Seroprofiling_0413.pdf) .In initial experiments, the two isoforms of NY-ESO-1 were to be investigated for ev. Antibody-relevant epitopes. For this purpose, sera from advanced melanoma patients were tested for the presence of antibodies. The number of sera tested was 183. For this purpose, the platform of the company JPT Peptide Technologies GmbH (Berlin, Germany) was used, which serves to identify epitopes on target proteins against which any antibody responses are addressed (see the publication of Pawlowski et al. (JPT Peptide Technologies), April 2013, "A Modular Approach to Epitope Discovery and High-Resolution Profiling of Humoral Immune Responses"; at https://www.jpt.com/fileadmin/user_upload/NEW/News_Publications/Application_Notes/AppNote_Seroprofiling_0413.pdf) ,

Dazu wurde das Zielprotein, also die zwei Isotypen von NY-ESO-1 in 15 Aminosäure-Peptide zerteilt, die zu ca. 11 Aminosäuren überlappen und so das gesamte Protein umfassen. For this purpose, the target protein, ie the two isotypes of NY-ESO-1, was broken down into 15 amino acid peptides, which overlap to approximately 11 amino acids and thus comprise the entire protein.

Insgesamt wurden 45 von der Isoform 1 und 41 von der Isoform 2 abgeleitete Kandidatenpeptide getestet, wobei 31 Kandidaten identisch für beide Isoformen waren, aufgrund der Sequenzidentität in den Aminosäuren 1 bis 134. Insgesamt wurden also 55 Peptidkandidaten getestet. Die Peptide wurden auf Glasträgern immobilisiert und anschließend mit den humanen Seren inkubiert. Die Messung der Menge gebundener Antikörper je Peptid erfolgte nach Inkubation mit einem Sekundärantikörper mittels Fluoreszenz-basiertem ELISA. Die Assaybedingungen wurden analog zu den vorher publizierten gewählt ( Masch et al., "Antibody signatures defined by high-content peptide microarray analysis." Methods Mol Biol. 2010;669:161–72. ) Serumproben wurden 1:200 in SuperBlock T20 (TBS, Thermo Scientific) verdünnt und 1 Stunde bei 30°C auf den Peptid-Microarrays inkubiert. Nach Waschen der Arrays mit TBST wurden die Arrays mit einem Cy5-markierten anti-human IgG Antikörper (Jackson ImmunoResearch) eine weitere Stunde inkubiert. Nach weiteren Waschschritten wurde mittels eines GenePix Microarray Scanners die Fluoreszenzintensität der einzelnen Spots ausgelesen und mittels der GenePix Software ausgewertet.A total of 45 candidate peptides derived from isoform 1 and 41 from isoform 2 were tested, with 31 candidates being identical for both isoforms, due to sequence identity in amino acids 1 to 134. Thus, a total of 55 peptide candidates were tested. The peptides were immobilized on glass slides and then incubated with the human sera. The measurement of the amount of bound antibody per peptide was carried out after incubation with a secondary antibody by means of fluorescence-based ELISA. The assay conditions were chosen analogously to those previously published ( Masch et al., "Antibody signatures defined by high-content peptide microarray analysis." Methods Mol Biol. 2010; 669: 161-72. ) Serum samples were diluted 1 in 200 in SuperBlock T20 (TBS, Thermo Scientific) and incubated for 1 hour at 30 ° C on the peptide microarrays. After washing the arrays with TBST, the arrays were incubated with a Cy5-labeled anti-human IgG antibody (Jackson ImmunoResearch) for an additional hour. After further washes, the fluorescence intensity of the individual spots was read out by means of a GenePix microarray scanner and evaluated by means of the GenePix software.

Hinsichtlich der klinischen Daten wurde für die Spender der Seren ein Überlebens-Update durchgeführt. Da von einzelnen Patienten mehrere Seren gemessen wurden, wurden die Datensätze diesbezüglich reduziert, um nur jeweils eine Serumprobe/Patient zu berücksichtigen. Insgesamt gingen dadurch Messungen von 137 Patienten in die End-Ergebnisse ein. Regarding the clinical data, a survival update was performed for the donors of the sera. Since several sera were measured from individual patients, the data sets were reduced in this regard, to take into account only one serum sample / patient at a time. Altogether, measurements of 137 patients were included in the final results.

ErgebnisseResults

Das durchschnittlich stärkste ELISA-Signal (7758,14) als Maß für die Menge spezifische an das Kandidatenpeptid gebundenen Antikörper fand sich für die Aminosäuresequenz 121–135 von Isoform 2 (VLLKEFTVSGNILTM) (SEQ ID Nr. 2). Die Peptidsequenz ist im Anfangsbereich identisch für beide Isoformen und nur die letzte Aminosäure ist Isoform-spezifisch. Dagegen war das Signal für den entsprechenden Kandidaten (Aminosäuresequenz 121–135) von Isoform 1 (VLLKEFTVSGNILTI) (SEQ ID Nr. 3), dier sich nur hinsichtlich der letzten C-terminalen Aminosäure unterscheidet, durchschnittlich nur 2178,15. Es war also eine signifikant schwächere Antikörperantwort gegen den entsprechenden Abschnitt der Isoform 1 messbar (p < 0.01).The mean strongest ELISA signal (7758.14) as a measure of the amount of specific antibody bound to the candidate peptide was found for the amino acid sequence 121-135 of isoform 2 (VLLKEFTVSGNILTM) (SEQ ID NO: 2). The peptide sequence is identical in the initial region for both isoforms and only the last amino acid is isoform-specific. In contrast, the signal for the corresponding candidate (amino acid sequence 121-135) of isoform 1 (VLLKEFTVSGNILTI) (SEQ ID NO: 3), differing only in the last C-terminal amino acid, was on average only 2178.15. Thus, a significantly weaker antibody response to the corresponding portion of isoform 1 was measurable (p <0.01).

Anschließend wurden die Patienten nach dem Signal für Kandidat VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID Nr. 2) dichotomisiert. Patienten mit hohen Antikörpertitern gegen VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID Nr. 2) hatten einen signifikanten Überlebensvorteil (Kaplan-Meier) mit einem median Überleben von 19 Monaten nach Blutentnahme (logrank p = 0.016) gegenüber Patienten mit niedrigem Antikörpertiter, deren medianes Überlegen 10 Monate betrug (siehe 1). Für die anderen 54 Kandidatenpeptide wurden keine ähnlich starken Korrelationen mit dem Überleben beobachtet. Subsequently, the patients were dichotomized after the signal for candidate VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID NO: 2). Patients with high antibody titers to VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID NO: 2) had a significant survival benefit (Kaplan-Meier) with a median survival of 19 months post-bleeding (logrank p = 0.016) over patients with low antibody titers, median consideration of which was 10 months ( please refer 1 ). For the other 54 candidate peptides, no similar strong correlations with survival were observed.

Eine Einteilung der Patienten in 4 Gruppen anhand des Antikörpertiters gegen VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID Nr. 2) fand sich bei ansteigendem Titer jeweils ein verbessertes Überleben (siehe 2).A classification of the patients into 4 groups based on the antibody titer against VLLKEFTVSGNILTM (SEQ ID NO: 2) showed in each case an improved survival with increasing titre (see 2 ).

Mit den hierin erstmals vorgelegten Daten und Erfindungen wird es durch die Bereitstellung der erfindungsgemäßen Peptide ermöglicht, eine Blutprobe eines zu untersuchenden Patienten dahingehend einfach zu untersuchen, ob diese Blutprobe Antikörper gegen die erfindungsgemäßen Peptide aufweist, bzw. ob der Antikörpertiter gegen die erfindungsgemäßen Peptide signifikant hoch ist. Diese Identifizierung/Quantifizierung, ggf. im Vergleich zu Kontroll-Blutproben, die je nach Verwendung positiv oder negativ für die erfindungsgemäßen Peptide sind, ermöglicht den Einsatz der erfindungsgemäßen Peptide als diagnostischer, prognostischer und/oder prädiktiver Biomarker. Vorteilhafterweise reichen für solche Tests bereits kleinste Blutabnahmevolumina. Ferner bieten die erfindungsgemäßen Peptide, bzw. der Nachweis von gegen diese Peptide gerichteten Antikörpern in Blut/Blutbestandteilen von Patienten, gegenüber tumorzellassoziierten Markern wie LDH eine höhere Chance, dass der Beobachtung von erhöhten Titern eine prädiktive Funktion für das Ansprechen auf eine Immuntherapie beinhaltet. With the data and inventions presented herein for the first time, the provision of the peptides according to the invention makes it possible to easily examine a blood sample of a patient to be examined as to whether this blood sample has antibodies against the peptides according to the invention or whether the antibody titer against the peptides according to the invention is significantly high. This identification / quantification, possibly in comparison to control blood samples which are positive or negative for the peptides according to the invention, depending on the use, makes it possible to use the peptides according to the invention as diagnostic, prognostic and / or predictive biomarkers. Advantageously, even the smallest blood take-off volumes are sufficient for such tests. Furthermore, the peptides of the invention, or the detection of antibodies directed against these peptides in blood / blood components of patients, offer a higher chance to tumor cell-associated markers such as LDH that the observation of increased titers involves a predictive function for responding to immunotherapy.

Die vorliegende Erfindung ermöglicht ferner den Einsatz von Antikörpern zu entwickeln oder zu isolieren, die spezifisch gegen Epitope der NY-ESO-1 Isoform 2 gerichtet sind, und zwar zum einen im Rahmen von weiteren diagnostischen Verfahren, wie bspw. immunhistologische Färbungen, FACS-Analysen und Westernblot. The present invention also makes it possible to develop or isolate the use of antibodies which are specifically directed against epitopes of NY-ESO-1 isoform 2, on the one hand in the context of further diagnostic methods, such as, for example, immunohistological staining, FACS analyzes and western blot.

Darüber hinaus bietet die vorliegende Erfindung die Möglichkeit, mit gegen die erfindungsgemäßen Peptide gerichteten Agenzien, bspw. therapeutischen Antikörpern, antikörper-ähnlichen Konstrukten oder T-Zellen, die gegen die erfindungsgemäßen Peptide spezifisch sind, Patienten mit Tumoren erfolgreich zu behandeln. In addition, the present invention offers the possibility of successfully treating patients with tumors with agents directed against the peptides according to the invention, for example therapeutic antibodies, antibody-like constructs or T cells which are specific to the peptides according to the invention.

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

WO 1999/918296 [0015]
US 6525177 [0015]

Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

Peter J. Hudson: Recombinant antibody fragments. Current Opinion in Biotechnology, Vol. 9, No. 4, 1998, pp. 395-402 [0039]
Jürgen Krauss: "Recombinant antibodies for the diagnosis and treatment of cancer", Molecular Biotechnology, Vol. 25, No. 1, 2003, pp. 1-17 [0039]
A. Kibbe, "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3rd ed., 2000, American Pharmaceutical Association and Pharmaceutical Press [0040]
"Continuous cultures of fused cells secreting antibodies of predefined specificity" Nature 256, 495-497 (1975) [0043]
Jürgen Krauss: "Recombinant antibodies for the diagnosis and treatment of cancer", Molecular Biotechnology, Vol. 25, No. 1, 2003, pp. 1-17 [0043]
Pawlowski et al. (JPT Peptide Technologies), April 2013, "A Modular Approach to Epitope Discovery and High-Resolution Profiling of Humoral Immune Responses"; at https://www.jpt.com/fileadmin/user_upload/NEW/News_Publications/Application_Notes/AppNote_Seroprofiling_0413.pdf) [0062]
Masch et al., "Antibody signatures defined by high-content peptide microarray analysis." Methods Mol Biol. 2010; 669: 161-72. [0064]

Claims

A peptide for use as a biomarker in the diagnosis of tumors and / or the prognosis or prediction of therapy of a tumor, characterized in that the peptide comprises a fragment of at most 48 amino acid residues of the C-terminal region of the isoform 2 of the NY-ESO-1 protein SEQ ID NO: 1, and at least one amino acid residue of the sequence portion of amino acid No. 135 to No. 168 of SEQ ID NO: 1.

Peptide according to claim 1, characterized in that the peptide comprises at least 8 and at most 20, preferably 15 amino acid residues.

A peptide according to claim 1 or 2, characterized in that the peptide is a peptide fragment comprising amino acid no. 135 of SEQ ID NO: 1.

A peptide according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the peptide is the fragment of SEQ ID NO: 2, or fragments thereof still comprising at least 8 amino acid residues as well as amino acid no. 14 of SEQ ID NO: 2.

Peptide according to one of claims 1 to 4, characterized in that the peptide is used as a predictive biomarker for the response or side effects on a tumor therapy.

Peptide according to one of claims 1 to 4, characterized in that the peptide is used as a prognostic biomarker.

Recombinant or transgene-synthesized antibody directed against a peptide according to any one of claims 1 to 6.

Use of a peptide according to any one of claims 1 to 6, and / or of an antibody according to claim 7 for the diagnosis of tumors and / or prognosis of a tumor and / or prediction of responses or side effects of tumor therapies.

Use of an agent directed against a peptide according to any one of claims 1 to 6 for the therapy of tumors, characterized in that the agent is selected from the group comprising antibodies, antibody-like constructs, T cells.

Use of an anti-peptide agent according to any one of claims 1 to 6 for the detection of the peptide of any one of claims 1 to 6 in a body sample of a patient, said agent being selected from the group consisting of antibodies, antibody-like constructs, peptide MHC constructs.

A method of diagnosis, prognosis or prediction of the therapy of a tumor in a patient, comprising the detection of antibodies directed against a peptide according to any one of claims 1 to 6 in a body sample of the patient.

A method according to claim 11, characterized in that it comprises the following steps: - providing a carrier which has at least one peptide according to one of claims 1 to 6 immobilized thereon, - contacting a liquid body sample of the patient, which body sample optionally against contains a peptide according to any one of claims 1 to 6 directed antibodies, with the at least one immobilized on the support peptide to allow binding of the antibody possibly present in the body sample to the at least peptide and the formation of peptide-antibody complexes, Identifying and possibly quantifying the peptide-antibody complexes possibly formed in the previous step in relation to a control sample.

A method according to claim 11 or 12, characterized in that the body sample is selected from blood, plasma or serum.

Use one of the following: a) a protein having the sequence of SEQ ID NO: 1, or b) a peptide comprising a fragment of at most 50 amino acid residues of the C-terminal region of the isoform 2 of the NY-ESO-1 protein having the SEQ ID NO: 1, or c) an RNA or DNA which codes for the peptide according to a) or b) as a vaccine.

A peptide according to any one of claims 1 to 6, and a use according to any one of claims 8 to 10 or 14, or a method according to any one of claims 11 to 13, characterized in that the tumor is selected from the group comprising malignant melanoma, breast cancer, lung cancer , Prostate cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, uterine cancer, testicular cancer, renal cell carcinoma, liver cancer, leukemia, skin cancer, brain cancer, especially glioblastoma, esophageal cancer, gastric cancer, and metastases of any of them.