DE102011051692A1 - A process for the sterilization of functionalized nucleotides and / or nucleotide derivatives containing coated surfaces - Google Patents

A process for the sterilization of functionalized nucleotides and / or nucleotide derivatives containing coated surfaces

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DE102011051692A1
DE102011051692A1 DE201110051692 DE102011051692A DE102011051692A1 DE 102011051692 A1 DE102011051692 A1 DE 102011051692A1 DE 201110051692 DE201110051692 DE 201110051692 DE 102011051692 A DE102011051692 A DE 102011051692A DE 102011051692 A1 DE102011051692 A1 DE 102011051692A1
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coating
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DE201110051692
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Matthias Müller
Judith Reichert
Anne Förster
Bernd Schwenzer
Scharnweber Dieter
Peter Brehm
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PETER BREHM HOLDING GMBH & CO. KG, DE
Technische Universitaet Dresden
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Technische Universitaet Dresden
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    • A61L2300/258Genetic materials, DNA, RNA, genes, vectors, e.g. plasmids

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Sterilisation von funktionalisierten, Nukleotide und/oder Nukleotidderivate enthaltende, beschichteten Oberflächen, bei dem The invention relates to a method for the sterilization of functionalized nucleotides and / or nucleotide derivatives containing coated surfaces, in which
a) eine funktionalisierende Beschichtung der Oberfläche im Überschuss mit Nukleotiden und/oder Nukleotidderivaten erfolgt, wobei die überschüssigen Nukleotide und/oder Nukleotidderivate als Opferstränge nicht aus der Beschichtung ausgewaschen werden, a) takes a functionalized coating of the surface in excess with nucleotides and / or nucleotide derivatives, wherein the excess nucleotides and / or nucleotide derivatives are not washed out as a sacrificial strands from the coating,
b) die Atmosphäre über der beschichteten Oberfläche mit Ethanol angereichert wird und b) enriching the atmosphere above the coated surface with ethanol and
c) eine Bestrahlung der beschichteten Oberfläche mit ionisierender Strahlung erfolgt. c) be used to irradiate the coated surface with ionizing radiation.

Description

  • Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Sterilisation von funktionalisierten, Nukleotide und/oder Nukleotidderivate enthaltenden, beschichteten Oberflächen. The invention relates to a method for the sterilization of functionalized nucleotides and / or nucleotide derivatives containing coated surfaces.
  • Die Immobilisierung von Nukleotiden oder Nukleotidderivate auf festen Trägermaterialien ist von großer Bedeutung für die Implantologie und viele Bereiche der Biotechnologie. The immobilization of nucleotides or nucleotide derivatives on solid support materials is of great importance for implantology and many areas of biotechnology.
  • Derartig behandelte Oberflächen werden insbesondere in der Implantologie als biologisch funktionalisierte Implantate sowie in der Analytik bei der Herstellung von DNA-Chips und zur Herstellung von Sensoren eingesetzt. Such treated surfaces are used especially in implantology as biologically functionalized implants as well as in the analysis in the production of DNA chips and for the production of sensors. Weiterhin sind Anwendungsfälle von mit biologisch aktiven Komponenten beschichteten Oberflächen umfasst, deren Verwendung eine Inaktivierung mikrobieller Kontaminationen durch Sterilisation der Oberfläche erfordert. Further applications of coated biologically active component surfaces are comprised, their use requires inactivation of microbial contamination by sterilization of the surface.
  • Aus der From the WO 2004/005302 A2 WO 2004/005302 A2 geht ein mit Nukleinsäuren und Nukleinsäurederivaten beschichteter metallischer Gegenstand sowie ein Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendung hervor, bei dem Nukleinsäuren und Nukleinsäurederivate zur Herstellung von Sensoren für die Biotechnologie immobilisiert werden. is a projecting with nucleic acids and nucleic acid derivatives of coated metallic object and a process for its preparation and its use, are immobilized in the nucleic acids and nucleic acid derivatives for the production of sensors for biotechnology.
  • Weiterhin geht aus der Continues to expect the DE 10 2006 024 058 A1 DE 10 2006 024 058 A1 ein modulares System mit immobilisierten Nukleinsäuren oder Nukleinsäurederivaten an metallischen Oberflächen und ein Verfahren zu dessen Herstellung hervor. a modular system with immobilized nucleic acids or nucleic acid derivatives on metal surfaces and a process for its preparation forth.
  • Die Herstellung von gattungsgemäß funktionalisierten Beschichtungen von Oberflächen und insbesondere von Metalloberflächen oder Waferoberflächen ist somit im Stand der Technik eine bekannte Technologie. The preparation of the generic type in accordance with functionalized coatings of surfaces and in particular metal surfaces or surfaces of the wafer is thus in the art a known technology.
  • Um die erhaltenen Beschichtungen jedoch in biologischen Systemen einsetzen zu können, ist es erforderlich, durch geeignete Verfahren mögliche mikrobielle Kontaminationen zu beseitigen und somit Sterilität der beschichteten Oberflächen zu erreichen. To the obtained coatings, however, be able to use in biological systems, it is necessary to eliminate by appropriate methods potential microbial contamination and thus to achieve sterility of the coated surfaces.
  • Aus dem Stand der Technik ist auch bekannt, Produkte, beziehungsweise Oberflächen mit funktionalisierenden Beschichtungen, mittels ionisierender Strahlung zu sterilisieren. From the prior art is also known, products, or surfaces with functionalized coatings to sterilize by ionizing radiation.
  • Eine für diese Anwendungsfälle bekannte Behandlungsform ist die Bestrahlung mit Gammastrahlen in festgelegten Dosen. A known for these applications form of treatment is irradiation with gamma rays at fixed doses.
  • Weiterhin ist als damit verbundenes Problem bekannt, dass die Behandlung mit ionisierender Strahlung, dabei beispielsweise Schädigungen an DNA-Molekülen (Desoxyribonukleinsäure) verursacht, die auf direkte Wechselwirkungen und indirekte Effekte zurückzuführen sind. It is also known as a related problem that the treatment with ionizing radiation, thereby causing for example damage to DNA molecules (deoxyribonucleic acid), which are due to direct interactions and indirect effects.
  • Derartige Effekte werden hauptsächlich verursacht durch die Bildung reaktiver Spezies auf Grund der Wechselwirkung der ionisierenden Strahlung mit Komponenten in der Umgebung der DNA. Such effects are mainly caused by the formation of reactive species due to the interaction of ionizing radiation with components in the vicinity of the DNA.
  • Im Stand der Technik wird dieses Problem dadurch zu lösen versucht, dass eine geeignete Zusammensetzung der Gasatmosphäre bei der Bestrahlung gezielt eingestellt wird. In the prior art, this problem will be solved by trying that a suitable composition of the gas atmosphere during the irradiation is adjusted. Zielstellung ist es dabei, das Vorhandensein von Sauerstoff zu minimieren, da dieser bei der Bestrahlung zu reaktivem Ozon umgesetzt würde, was nachfolgend zu Schädigungen der funktionellen Beschichtung führt. Target position it is about to minimize the presence of oxygen, since this would be implemented in the irradiation to reactive ozone, leading subsequently to damage of the functional coating. Eine weitere Strategie der Minimierung der Probleme durch die Bestrahlung von DNA enthaltenden Beschichtungen besteht in einer starken Trocknung der Beschichtung vor der Bestrahlung. Another strategy of minimizing the problems caused by the irradiation of DNA containing coatings consists in a strong drying of the coating prior to irradiation. Unter Trocknung im Sinne der Erfindung ist im weitesten Sinne der Entzug von Wasser zu verstehen. Under drying purposes of the invention the removal of water is to be understood in the broadest sense.
  • Allerdings ist auch bekannt, dass die im Stand der Technik ergriffenen Maßnahmen zur Erhaltung der Biofunktionalität der bestrahlten Beschichtung häufig nicht in ausreichendem Maße wirken. However, it is also known that the measures taken in the prior art measures to preserve the bio-functionality of the irradiated coating often do not work sufficiently.
  • Insbesondere ist bekannt, dass das Ausmaß der Schädigungen von Nukleotiden oder Nukleotidderivaten über Oligonukleotide bis hin zu hochmolekularen DNA-Strukturen im Fall von partiell in anodische Oxidschichten eingebauten Einzelsträngen durch ionisierende Strahlung bei einer typischen Dosis mittels Gamma-Sterilisation zu hoch ist. In particular, it is known that the degree of damage of nucleotides or nucleotide derivatives on oligonucleotides to highly molecular DNA structures in the case of partially built-in anodic oxide films single strands is too high by ionizing radiation at a typical dose by means of gamma sterilization. Nachfolgend sollen unter Nukleotiden oder Nukleotidderivaten Verbindungen aus diesen von Oligonukleotiden bis hin zu hochmolekularen DNA-Strukturen verstanden werden. Below are intended to be understood as nucleotides or nucleotide derivatives from these compounds of oligonucleotides to high molecular weight DNA structures.
  • Unter Nukleotidderivaten werden beispielsweise auch Phosphotioate zur Erhöhung der Nukleasestabilität und ähnliche Substanzen verstanden. Under nucleotide derivatives also Phosphotioate to increase the nuclease and similar substances are meant for example.
  • Es ist Aufgabe der Erfindung, das Ausmaß der Schädigung von Nukleotide oder Nukleotidderivate enthaltenden Beschichtungen von Oberflächen durch eine Bestrahlung mit ionisierender Strahlung zu reduzieren und eine höhere Funktionalität der sterilisierten Oberfläche zu erreichen. It is an object of the invention to reduce the extent of injury of nucleotides or nucleotide derivatives containing coatings of surfaces by irradiation with ionizing radiation and to achieve higher functionality of the sterilized surface.
  • Die Aufgabe wird durch die Merkmale der selbstständigen Patentansprüche gelöst. The object is solved by the features of the independent claims. Weiterbildungen sind in den abhängigen Patentansprüchen angegeben. Further developments are specified in the dependent claims.
  • Die Aufgabe wird insbesondere durch ein Verfahren zur Sterilisation von funktionalisierten, Nukleotide oder Nukleotidderivate enthaltenden, beschichteten Oberflächen gelöst, bei dem a) eine funktionalisierende Beschichtung der Oberfläche im Überschuss mit Nukleotiden und/oder Nukleotidderivaten erfolgt, wobei die überschüssigen Nukleotide und/oder Nukleotidderivate als Opferstränge nicht aus der Beschichtung ausgewaschen werden. The object is in particular achieved by a method for the sterilization of functionalized, containing nucleotides or nucleotide derivatives, coated surfaces, in which a) is carried out a functionalized coating of the surface in excess with nucleotides and / or nucleotide derivatives, wherein the excess nucleotides and / or nucleotide derivatives as a sacrificial strands are not washed out of the coating.
  • Unter überschüssigen Nukleotiden und/oder Nukleotidderivaten sind solche zu verstehen, die nicht stabil auf der zu funktionalisierenden Oberfläche immobilisiert sind. Under excess nucleotides and / or nucleotide derivatives are understood to be those which are not stable immobilized on the surface to be functionalized.
  • In einem nächsten Verfahrensschritt b) wird die Atmosphäre über der beschichteten Oberfläche mit Ethanol, und insbesondere mit wasserfreiem Ethanol angereichert. In a next method step b) the atmosphere above the coated surface with ethanol, and enriched particularly with anhydrous ethanol.
  • Es schließt sich ein Verfahrensschritt c) an, der in einer Bestrahlung der beschichteten Oberfläche mit ionisierender Strahlung besteht. This is followed by a method step c) which consists in an irradiation of the coated surface with ionizing radiation.
  • Bevorzugt wird das Verfahren dadurch ausgebildet, dass die Bestrahlung mit Gammastrahlen mit einer Dosis von 25–30 kGray erfolgt. The process is preferably formed in that the irradiation is performed with gamma rays at a dose of 25-30 kGy.
  • Eine Verbesserung der Verfahrensergebnisse kann nach einer Weiterbildung der Erfindung dadurch erreicht werden, dass vor der Bestrahlung der beschichteten Oberfläche eine Entfernung von Wasser und Sauerstoff aus der Beschichtung und der diese umgebenden Atmosphäre erfolgt. An improvement in the process results can be achieved according to one development of the invention in that by removal of water and oxygen from the coating and the surrounding atmosphere prior to the irradiation of the coated surface.
  • Vorteilhaft zu diesem Zweck ist die Entfernung von Wasser mittels Phosphorpentoxid (P 2 O 5 ) sowie die Sauerstoffentfernung durch den Austausch von Luft gegen eine Schutzgasatmosphäre. Advantageously for this purpose, the distance from the water by means of phosphorus pentoxide (P 2 O 5) as well as the removal of oxygen through the exchange of air against a protective gas atmosphere.
  • Nach einer konkreten Ausgestaltung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist gemäß Verfahrensschritt b) die Anreicherung einer Argon-Schutzgasatmosphäre mit wasserfreiem Ethanol in der Konzentration von 1.500 μl auf 100 ml Volumen vorteilhaft. According to a concrete embodiment of the method according to the invention, the enrichment an argon protective gas atmosphere with anhydrous ethanol in the concentration of 1.500 ul to 100 ml volume is advantageous according to method step b).
  • Das Verfahren wird ferner dadurch weitergebildet, dass die funktionalisierende Beschichtung aus einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer Titanoberfläche, beziehungsweise einer Titan enthaltenden Oberfläche ausgeführt ist, beziehungsweise dass ein Teil der Stränge partiell in anodisch gebildetes Oxid eingebaut ist. The method is further developed further in that the functionalized coating of a layer of oligonucleotide single strands on a surface of titanium, or a titanium-containing surface is carried out, or that some of the strands is partially incorporated into anodically formed oxide.
  • Diese Ausgestaltung ist insbesondere für Implantate vorteilhaft ausführbar. This configuration is advantageous executable especially for implants. Alternativ zu einer Beschichtung einer metallischen Oberfläche wird die funktionalisierende Beschichtung aus einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer monokristallinen Siliziumoberfläche, auch als Wafer bezeichnet, ausgeführt. As an alternative to coating a metallic surface functionalizing the coating of a layer of oligonucleotide single strands on a monocrystalline silicon surface is also referred to as a wafer is performed. Nach dieser Ausgestaltung können sterilisierte Chips zur Herstellung von Sensoren nach dem erfindungsgemäßen Verfahren erzeugt werden. According to this embodiment sterilized chips can be produced for the production of sensors according to the present invention.
  • Das erfindungsgemäße Verfahren zur Behandlung einer Beschichtung führt auch zur vorteilhaften Effekten, wenn die funktionalisierende Beschichtung in Form einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer Oberfläche von Calciumphosphatphasen ausgeführt ist. The inventive method for treating a coating also results in beneficial effects if the functionalizing coating is in the form of a layer of oligonucleotide single strands on a surface of calcium phosphate phases.
  • Ebenso vorteilhaft ist das erfindungsgemäße Verfahren zur Behandlung einer Beschichtung anwendbar, wenn die funktionalisierende Beschichtung in Form einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer für Biomaterialanwendungen geeigneten Polymeroberfläche ausgeführt ist. Likewise advantageously, the inventive method for treating a coating is applicable when the functionalizing coating is in the form of a layer of oligonucleotide single strands on a form suitable for biomaterial polymer surface.
  • Die Konzeption der Erfindung besteht darin, dass durch die Kombination zweier Parameter eine erhebliche Verbesserung der Funktionalität der behandelten Nukleotid- und/oder Nukleotidderivatstrukturen gegeben ist. The concept of the invention is that a considerable improvement of the functionality of the treated nucleotide and / or Nukleotidderivatstrukturen is given by the combination of two parameters.
  • Nach einem ersten Aspekt der Erfindung erfolgt eine Erzeugung der Beschichtung mit einem Überschuss der Nukleotid- oder Nukleotidderivatstränge. According to a first aspect of the invention, a formation of the coating with an excess of the nucleotide or Nukleotidderivatstränge occurs.
  • Eine Abkehr von konventionellen Verfahren zur Herstellung von funktionalisierenden Beschichtungen auf Titan oder einer Titanlegierung besteht nun in der Vermeidung von Spülprozessen zur Entfernung überschüssiger, nicht in die anodische Oxidschicht partiell eingebauter Einzelstränge, die im Weiteren auch Opferstränge genannt werden. A departure from conventional processes for the preparation of functionalized coatings on titanium or a titanium alloy now consists in the avoidance of rinsing processes to remove excess, not partially built in the anodic oxide film single strands, which are also referred to below as sacrificial strands. Die Vermeidung von Spülprozessen ist neben der angeführten Beschichtungsart auch auf andere Beschichtungen, beziehungsweise Bindungsmechanismen von Beschichtungen, übertragbar. Avoiding rinsing processes in addition to the mentioned type of coating applied to other coatings or bonding mechanisms of coatings.
  • Nach einem zweiten Aspekt der Erfindung erfolgt eine Anreicherung der Atmosphäre mit Ethanol vor der Bestrahlung mittels ionisierender Strahlung. According to a second aspect of the invention an enrichment of the atmosphere with ethanol prior to irradiation by means of ionizing radiation.
  • Diese Maßnahmen führen einzeln angewendet bereits jeweils zu einer Verminderung des Verlustes der Funktionalität der Beschichtung durch die Bestrahlung. These measures lead individually already applied in each case to a reduction of the loss of functionality of the coating by irradiation. Die Kombination dieser Maßnahmen führt überraschenderweise zu einer weiteren Verbesserung des Ergebnisses. The combination of these measures surprisingly leads to a further improvement in earnings.
  • Besonders vorteilhaft wird das Verfahren dadurch weitergebildet, wenn die bekannten Strategien zur Vermeidung von Sauerstoff und Wasser mit den erfindungsgemäßen Maßnahmen kombiniert werden. Particularly advantageously, the method is further formed when the known strategies to prevent oxygen and water with the inventive measures are combined.
  • Die angegebenen Maßnahmen führen zu einem Erhalt der Funktionalität, insbesondere der Hybridisierungsfähigkeit der Einzelstränge einer Oligonukleotidbeschichtung von bis zu 80% der immobilisierten Ankerstränge nach einer Gamma-Sterilisation. The measures specified lead to a receipt of functionality, especially the ability to hybridize to the single strands of a Oligonukleotidbeschichtung of up to 80% of the immobilized anchor lines after gamma sterilization.
  • Damit schafft die erfindungsgemäße Behandlung von funktional beschichteten Oberflächen die Voraussetzung, um entwickelte Immobilisierungsverfahren nach dem Stand der Technik effektiv zur Funktionalisierung von Implantatoberflächen oder zur Sensorfertigung einsetzen zu können. Thus, the treatment of functional coated surfaces according to the invention creates the conditions to be able to use developed immobilization process according to the prior art effectively for the functionalization of implant surfaces or for sensor production.
  • Weitere Einzelheiten, Merkmale und Vorteile von Ausgestaltungen der Erfindung ergeben sich aus der nachfolgenden Beschreibung eines Ausführungsbeispieles. Further details, features and advantages of embodiments of the invention will become apparent from the following description of an embodiment.
  • Zum Nachweis der Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verfahrensweise wurden Oligonukleotideinzelstränge zur Überprüfung der Effektivität der vorgeschlagenen Maßnahmen unter identischen Bedingungen an Titansubstrate adsorbiert und durch elektrochemische Polarisation regioselektiv partiell in anodische Titanoxidschichten eingebaut und dadurch immobilisiert. To demonstrate the effectiveness of the inventive procedure Oligonukleotideinzelstränge were adsorbed to verify the effectiveness of the measures proposed under identical conditions of titanium substrates, and incorporated by electrochemical polarization regioselectively partially in anodic titanium oxide and thereby immobilized.
  • Ein Teil der Proben mit der funktionalisierenden Beschichtung wurde nachfolgend mit Acetatpuffer gespült, um gemäß der herkömmlichen Verfahrensweise nicht in die Oxidschicht eingebaute Oligonukleotide zu desorbieren und damit von der beschichteten Oberfläche zu entfernen. A portion of the samples with the functionalizing coating was subsequently purged with acetate buffer, so as not to be desorbed in accordance with the conventional method in the oxide film built oligonucleotides and thereby remove from the coated surface. Die Ergebnisse der gespülten Proben sind auf der linken Seite des Diagramms in der Figur unter der Bezeichnung mit Desorption dargestellt. The results of the rinsed samples are shown on the left side of the graph in the figure under the name of desorption.
  • Dieser Schritt der Spülung und Entfernung nicht immobilisierter Opferstränge wurde bei den mit dem erfindungsgemäßen Verfahren behandelten Proben nicht vorgenommen. This step of purging and removing non-immobilized sacrificial strands was not made with the treated with the method of the invention samples. Auf der rechten Seite sind die Ergebnisse der Proben unter der Bezeichnung ohne Desorption dargestellt. On the right side the results of the samples are shown under the name without desorption.
  • Anschließend wurden die Proben in einem Exsikkator über Phosphorpentoxid (P 2 O 5 ) getrocknet und in einer Glovebox unter Argon-Schutzgasatmosphäre in luftdicht schließende Glasgefäße, wie Duranflaschen mit einem Volumen von 100 ml, verpackt. Subsequently, the samples were dried in a glove box under an argon protective gas atmosphere in airtight glass vessels, such as Duran bottles, packed with a volume of 100 ml. In a desiccator over phosphorus pentoxide (P 2 O 5)
  • Bei einem Teil der Proben wurde im Prozess der Verpackung ein Volumen von 1.500 μl wasserfreies Ethanol zugesetzt. In some of the samples in the process of packaging a volume of 1,500 ul of anhydrous ethanol was added. Die dichtverschlossenen Proben wurden mit einer für Medizinprodukte vorgeschriebenen Dosis von 25–30 kGray mit Gamma-Strahlung sterilisiert. The sealed samples were sterilized with a prescribed for medical dose of 25-30 kGy gamma radiation.
  • Eine Überprüfung der Wirksamkeit der Verfahrensweise wurde dadurch vorgenommen, dass die beschichteten Proben mit einem radioaktiv markierten Komplementärstrang (CS) beziehungsweise einem Nicht-Komplementärstrang (NS) unter Hybridisierungsbedingungen inkubiert und die in der Folge dieses Prozesses auf den Proben vorliegenden Mengen an CS beziehungsweise NS durch Erfassung der Radioaktivität der Proben detektiert wurden. A review of the efficacy of the procedure was thereby made that the coated samples with a radiolabeled complementary strand incubated (CS) and a non-complementary strand (NS) under hybridizing conditions, and the present in the result of this process on the sample amounts of CS or NS by detecting the radioactivity of the samples were detected.
  • Die Ergebnisse in der Figur zeigen, dass in keinem Fall eine wesentliche Bindung von NS erfolgte, woraus zu schlussfolgern ist, dass die detektierte Bindung von CS durch Hybridisierung und nicht durch unspezifische Wechselwirkung erfolgt. The results in the figure indicate that in no case a substantial binding of NS was carried out, from which it can be concluded that the detected binding of CS by hybridization and not by non-specific interaction.
  • Weiterhin führt die Vorgehensweise ohne Desorption und Spülung zu einer nachweisbar deutlich größeren Menge an durch Hybridisierung immobilisiertem CS. Furthermore, the procedure without desorption and purging results in a detectable significantly larger amount of immobilized by hybridization CS.
  • Innerhalb der Gruppe der ungespülten Proben führt die Vorgehensweise in der Kopplung mit Zugabe von Ethanol zur Detektion der größten Mengen an CS. Within the group of unwashed samples, the procedure results in the coupling with the addition of ethanol for the detection of the largest amounts of CS. Dabei ist der Fehlerbalken vergleichsweise klein, sodass ein sehr gut reproduzierbarer Oberflächenzustand vorliegen muss. Here, the error bars is comparatively small, so that a very reproducible surface condition must be present.
  • Auch bei der Vorgehensweise mit Desorption führt die Gegenwart von Ethanol zu einer Verbesserung der Reproduzierbarkeit der Messwerte, wenn auch auf relativ niedrigem Niveau. Also, in the desorption procedure with the presence of ethanol leads to an improvement in the reproducibility of the measured values, albeit at relatively low levels.
  • Die Referenzproben wurden jeweils nicht sterilisiert. The reference samples were not sterilized. Die unter den verglichenen Bedingungen optimale Kombination liegt in der Kombination von Verzicht auf die Spülung und die damit verbundene Desorption der Opferstränge mit der Anreicherung von Ethanol in der Atmosphäre vor der Bestrahlung, was mit der Angabe mit EtOH Atm in der Figur dargestellt ist. The optimal under the compared conditions combination is the combination of waiver of the flushing and the associated desorption of victims strands with the accumulation of ethanol in the atmosphere prior to irradiation, which is represented by specifying with EtOH atm in the figure.
  • ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDED IN THE DESCRIPTION
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  • Zitierte Patentliteratur Cited patent literature
    • WO 2004/005302 A2 [0004] WO 2004/005302 A2 [0004]
    • DE 102006024058 A1 [0005] DE 102006024058 A1 [0005]

Claims (11)

  1. Verfahren zur Sterilisation von funktionalisierten, Nukleotide und/oder Nukleotidderivate enthaltenden, beschichteten Oberflächen, bei dem a) eine funktionalisierende Beschichtung der Oberfläche im Überschuss mit Nukleotiden und/oder Nukleotidderivaten erfolgt, wobei die überschüssigen Nukleotide und/oder Nukleotidderivate als Opferstränge nicht aus der Beschichtung ausgewaschen werden, b) die Atmosphäre über der beschichteten Oberfläche mit Ethanol angereichert wird und c) eine Bestrahlung der beschichteten Oberfläche mit ionisierender Strahlung erfolgt. A process for the sterilization of functionalized, containing nucleotides and / or nucleotide derivatives, coated surfaces, in which a) is carried out a functionalized coating of the surface in excess with nucleotides and / or nucleotide derivatives, wherein the excess nucleotides and / or nucleotide derivatives do not wash out as a sacrificial strands from the coating are, b) the atmosphere above the coated surface with ethanol is enriched and c irradiation of the coated surface is carried out) with ionizing radiation.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Bestrahlung mit Gamma-Strahlen mit einer Dosis von 25 bis 30 kGray erfolgt. A method according to claim 1, characterized in that the irradiation of gamma rays is a single dose 25 to 30 kGray.
  3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass vor der Bestrahlung der beschichteten Oberfläche eine Entfernung von Wasser und Sauerstoff aus der Beschichtung und der diese umgebenden Atmosphäre erfolgt. The method of claim 1 or 2, characterized in that by removal of water and oxygen from the coating and the surrounding atmosphere prior to the irradiation of the coated surface.
  4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Entfernung von Wasser mit Phosphorpentoxid sowie die und Sauerstoffentfernung durch den Austausch von Luft gegen eine Schutzgasatmosphäre erfolgt. A method according to claim 3, characterized in that the removal of water with phosphorus pentoxide as well as the removal and oxygen takes place through the exchange of air against a protective gas atmosphere.
  5. Anreicherung gemäß Verfahrensschritt b) einer Argon-Schutzgas-Atmosphäre mit wasserfreiem Ethanol in einer Konzentration von 1.500 µl auf 100 ml Volumen erfolgt. enrichment is carried out according to process step b) an argon protective gas atmosphere with anhydrous ethanol in a concentration of from 1.500 ul to 100 ml volume.
  6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die funktionalisierende Beschichtung in Form einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer Titan enthaltenden Oberfläche ausgeführt ist. A method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the functionalizing coating in the form of a layer of oligonucleotide single strands on a titanium-containing surface is carried out.
  7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die funktionalisierende Beschichtung in Form einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer monokristallinen Siliziumoberfläche ausgeführt ist. A method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the functionalizing coating in the form of a layer of oligonucleotide single strands on a monocrystalline silicon surface is carried out.
  8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die funktionalisierende Beschichtung in Form einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer Oberfläche von Calciumphosphatphasen ausgeführt ist. A method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the functionalizing coating in the form of a layer of oligonucleotide single strands on a surface of calcium phosphate phases is carried out.
  9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die funktionalisierende Beschichtung in Form einer Schicht von Oligonukleotid-Einzelsträngen auf einer für Biomaterialanwendungen geeigneten Polymeroberfläche ausgeführt ist. A method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the functionalizing coating in the form of a layer of oligonucleotide single strands on a form suitable for biomaterial polymer surface is carried out.
  10. Implantat mit einer Oberfläche behandelt mit einem Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche. Implant having a surface treated by a method according to any one of the preceding claims.
  11. Chip zur Herstellung von Sensoren behandelt mit einem Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche. Chip for the production of sensors treated by a method according to any one of the preceding claims.
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