DE102007044415A1 - Performance enhanced proteases and detergents and cleaning agents containing these proteases - Google Patents

Performance enhanced proteases and detergents and cleaning agents containing these proteases

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DE102007044415A1
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Cornelius Dr. Bessler
Stefan Evers
Karl-Heinz Dr. Maurer
Marion Merkel
Petra Dr. Siegert
Angrit Weber
Susanne Dr. Wieland
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    • C12N9/54Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
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    • C11D3/386Preparations containing enzymes, e.g. protease, amylase

Abstract

Die vorliegende Anmeldung betrifft Proteasen, deren proteolytische Leistung durch Veränderung der Aminosäuresequenz insbesondere im Hinblick auf deren Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln verbessert wurde, alle hinreichend ähnlichen Proteasen mit einer vergleichbaren Veränderung und Nukleinsäuren sowie technische Einsatzmöglichkeiten für diese Proteasen, vor allem ihren Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln. The present application relates proteases whose proteolytic performance has been improved by altering the amino acid sequence in particular as regards their use in detergents and cleaners, all sufficiently like proteases with a similar change and nucleic acids as well as technical applications for these proteases, especially their use in detergents - and cleaning products.

Description

  • Die vorliegende Anmeldung betrifft Proteasen, deren proteolytische Leistung durch Veränderung der Aminosäuresequenz inbesondere im Hinblick auf deren Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln verbessert wurde, alle hinreichend ähnlichen Proteasen mit einer vergleichbaren Veränderung und Nukleinsäuren sowie technische Einsatzmöglichkeiten für diese Proteasen, vor allem ihren Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln. The present application relates to proteases, whose proteolytic performance was in particular improved by altering the amino acid sequence with respect to their use in detergents and cleaners, all sufficiently similar proteases with a similar change and nucleic acids as well as technical applications for these proteases, especially their use in detergents - and cleaning products.
  • Proteasen gehören zu den technisch bedeutendsten Enzymen überhaupt. Proteases are among the technically most important enzymes in general. Hierunter sind wiederum Proteasen vom Subtilisin-Typ (Subtilasen, Subtilopeptidasen, EC 3.4.21.62) besonders wichtig, welche aufgrund der katalytisch wirksamen Aminosäuren den Serin-Proteasen zugerechnet werden. Among these in turn are proteases of the subtilisin type (subtilases subtilopeptidases, EC 3.4.21.62) is particularly important, which are supplied to the serine proteases due to the catalytically active amino acids. Sie wirken als unspezifische Endopeptidasen, das heißt, sie hydrolysieren beliebige Säureamidbindungen, die im Inneren von Peptiden oder Proteinen liegen. They act as unspecific endopeptidases, ie they hydrolyze any acid amide bonds located inside peptides or proteins. Ihr pH-Optimum liegt meist im deutlich alkalischen Bereich. Its pH optimum is usually within the distinctly alkaline range. Einen Überblick über diese Familie bietet beispielsweise der Artikel An overview of this family is provided, for example, the article . , Subtilasen werden natürlicherweise von Mikroorganismen gebildet; Subtilases are naturally produced by microorganisms; hierunter sind insbesondere die von Bacillus-Spezies gebildeten und sekretierten Subtilisine als bedeutendste Gruppe innerhalb der Subtilasen zu erwähnen. See below the formed by Bacillus species and secreted subtilisins are particularly useful as important group to mention within the subtilases.
  • Proteasen sind neben anderen Enzymen etablierte aktive Inhaltsstoffe von Wasch- und Reinigungsmitteln. Proteases are enzymes along with other established active ingredients of detergents and cleaning products. Sie bewirken dabei den Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. They cause it to degrade protein-containing stains on the items to be cleaned. Günstigenfalls ergeben sich Synergieeffekte zwischen den Enzymen und den übrigen Bestandteilen der betreffenden Mittel. Desirably, resulting synergy between the enzymes and the other elements of that agent. Unter den Wasch- und Reinigungsmittelproteasen nehmen Subtilasen aufgrund ihrer günstigen enzymatischen Eigenschaften wie Stabilität oder pH-Optimum eine herausragende Stellung ein. Among the detergent and cleaning agent proteases subtilases due to their favorable enzymic properties such as stability or pH optimum, a prominent position. Sie eignen sich daneben noch für eine Vielzahl weiterer technischer Verwendungsmöglichkeiten, beispielsweise als Bestandteile von Kosmetika oder in der organisch-chemischen Synthese. They are next to it still for a variety of other technical uses, for example as constituents of cosmetics or in organic synthesis. Hinsichtlich der Anwendung von Proteasen in Wasch- und Reinigungsmitteln ist bekannt, dass Proteasen zur Verbesserung der Wasch- beziehungsweise Reinigungs leistung zusammen mit weiteren Enzymen, beispielsweise Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, β-Glucosidasen, Oxidasen, Oxidoreduktasen oder Lipasen eingesetzt werden können. With regard to the use of proteases in detergents and cleaning agents is well known that proteases for improving the washing or cleaning can be used performance together with other enzymes, for example amylases, cellulases, hemicellulases, mannanases, β-glucosidases, oxidases, oxidoreductases or lipases. Ebenso ist der Einsatz von Proteasen in Waschmitteln in Kombination mit anderen Wirkstoffen wie etwa Bleichmitteln oder Soil-Release-Wirkstoffen dem Fachmann bekannt. Likewise, the use of proteases in detergent compositions in combination with other active ingredients such as bleaching agents or soil release agents is known in the art.
  • Beispiele für die in Wasch- und Reinigungsmitteln bevorzugt eingesetzten Proteasen vom Subtilisin-Typ sind die Subtilisine BPN' und Carlsberg, die Protease P692, die Subtilisine 147 und 309, die Alkalische Protease aus Bacillus lentus, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7. Examples of the preferably used in detergents and cleaning agents proteases of the subtilisin type are the subtilisins BPN 'and Carlsberg, Protease P692, subtilisins 147 and 309, the alkaline protease from Bacillus lentus subtilisin DY and no longer to the subtilases subtilisins in the strict sense as enzymes thermitase, proteinase K and proteases TW3 and TW7.
  • Proteasen werden durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren gezielt oder zufallsbasiert verändert und so beispielsweise für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln optimiert. Proteases are targeted based random altered by known from the prior art methods and or optimized, for example for use in detergents and cleaning agents. Dazu gehören Punktmutagenese, Deletions- oder Insertionsmutagenese oder Fusion mit anderen Proteinen oder Proteinteilen oder über sonstige Modifikationen. These include point mutagenesis, deletion or insertion or fusion with other proteins or protein fragments or by other modifications. So sind für die meisten aus dem Stand der Technik bekannten Proteasen entsprechend optimierte Varianten bekannt. Accordingly optimized variants are known for most known from the prior art proteases.
  • Das Subtilisin BPN', welches aus Bacillus amyloliquefaciens, beziehungsweise B. subtilis stammt, ist aus den Arbeiten von The subtilisin BPN 'which is derived from Bacillus subtilis amyloliquefaciens, or B. is from the work of und von and from bekannt. known. Subtilisin BPN' dient insbesondere hinsichtlich der Numerierung der Positionen als Referenzenzym der Subtilisine. Subtilisin BPN 'is used in particular as regards the numbering of positions as the reference enzyme of the subtilisins. Die internationale Patentanmeldung International Patent Application WO 95/07991 A2 WO 95/07991 A2 offenbart beispielsweise Doppelmutanten, in welchen die Aminosäure in Position 217 zu 15 anderen Aminosäuren, darunter auch zu L mutiert ist. for example, disclosed double mutants, in which the amino acid at position 217 mutated to 15 other amino acids, including L to. Waschmittel mit derartigen BPN'-Varianten werden in der Patentanmeldung Detergent with such BPN 'variants are described in patent application WO 95/29979 A1 WO 95/29979 A1 offenbart. disclosed.
  • Subtilisin Carlsberg ist in weiterentwickelter Form unter dem Handelsnamen Alcalase ® von der Firma Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dänemark, erhältlich. Subtilisin Carlsberg in a developed form under the trade names Alcalase ® from Novozymes A / S, Bagsvaerd, Denmark. Sie wird in den It is in the , und von , and from beschrieben und wird natürlicherweise von Bacillus licheniformis gebildet. described and is formed naturally by Bacillus licheniformis. Durch Punktmutationen in den Loop-Regionen dieses Moleküls erhältliche Varianten sind aus der Anmeldung By point mutations in the loop regions of this molecule are variations from the application WO 96/28566 A2 WO 96/28566 A2 bekannt. known.
  • Die Protease PB92 wird natürlicherweise von dem alkaliphilen Bakterium Bacillus nov. PB92 protease is produced naturally by the alkaliphilic bacterium Bacillus nov. spec. spec. 92 produziert und war unter dem Handelsnamen Maxacal ® von der Fa. Gist-Brocades, Delft, Niederlande, erhältlich. 92 and Gist-Brocades, Delft, The Netherlands, available under the trade name was Maxacal ® by the company.. In ihrer ursprüglichen Sequenz wird sie in der Patentanmeldung In their original sequence is in the patent application EP 283075 A2 EP 283075 A2 beschrieben. described. Durch Punktmutation erhaltene Varianten dieses Enzyms für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln werden beispielsweise in den Anmeldungen By point mutation preserved variants of this enzyme for use in detergents and cleaners, for example, in the applications WO 94/02618 A1 WO 94/02618 A1 und and EP 328229 A1 EP 328229 A1 offenbart. disclosed. Aus beiden gehen Austausche in der Position 211 hervor, beispielsweise L211E beziehungsweise 1211Y, aber nur allein oder in Kombination mit anderen, hier nicht relevanten Punktmutationen. From both go out exchanges at position 211, for example L211E or 1211Y, but only alone or in combination with other items not relevant here point mutations.
  • Die Subtilisine 147 und 309 werden unter den Handelsnamen Esperase ® , beziehungsweise Savinase ® von der Firma Novozymes vertrieben. The subtilisins 147 and 309 are sold under the trade names Esperase ®, or Savinase ® from Novozymes. Sie stammen ursprünglich aus Bacillus-Stämmen, die mit der Anmeldung They are originally from Bacillus strains with registration GB 1243784 A GB 1243784 A offenbart werden. be revealed. Durch Punktmutagenese in Hinblick auf den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln weiterentwickelte Varianten dieser Enzyme werden beispielsweise in den Anmeldungen By point mutagenesis with respect to the use in detergents and cleaners enhanced variants of these enzymes are, for example, in the applications WO 94/02618 A1 WO 94/02618 A1 (siehe oben) und (See above) and WO 95/30011 A2 WO 95/30011 A2 offenbart. disclosed. Aus Out WO 95/30011 A2 WO 95/30011 A2 gehen Mutationen in den Loop-Regionen dieser Protease, unter anderem an Position 211, hervor. Go mutations in the loop regions of this protease, including at position 211 out.
  • Von der Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 ( (By the protease from Bacillus lentus DSM 5483 WO 91/02792 A1 WO 91/02792 A1 ) leiten sich die unter der Bezeichnung BLAP ® geführten Varianten ab, die insbesondere in ) Derive listed under the name BLAP ® variants from that particular WO 92/21760 A1 WO 92/21760 A1 , . WO 95/23221 A1 WO 95/23221 A1 , . WO 02/088340 A2 WO 02/088340 A2 und and WO 03/038082 A2 WO 03/038082 A2 beschrieben werden. to be discribed. Aus der Anmeldung From the application WO 95/23221 A1 WO 95/23221 A1 beziehungsweise den zugehörigen US-Patenten or the related US patents US 5691295 US 5691295 , . US 5801039 US 5801039 und and US 5855625 US 5855625 gehen darüber hinaus für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln durch gezielte Punktmutagenese leistungsverbesserte B. lentus-Alkalische Protease-Varianten hervor. go beyond that produced for use in detergents and cleaning agents by targeted mutagenesis performance-enhanced B. lentus alkaline protease variants. Als ein relevanter Austausch gegenüber dem Wildtyp-Enzym aus B. lentus DSM 5483 ist ebenfalls die Position 211 genannt, insbesondere 211D und 211E. As a relevant exchange compared to the wild-type enzyme from B. lentus DSM 5483 is also called the position 211, in particular, 211D and 211E. Die zugehörige Strategie, nämlich gezielt die Ladungsverhältnisse nahe der Substrat-Bindungstasche zu verändern, verdeutlicht das Patent The associated strategy, namely specifically modify the charge conditions near the substrate binding pocket, shows the patent US 6197589 B1 US 6197589 B1 . ,
  • Weitere Proteasen sind beispielsweise die unter den Handelsnamen Durazym ® , Relase ® , Everlase ® , Nafizym, Natalase ® , Kannase ® , Shinezyme ® und Ovozyme ® von der Firma Novozymes, die unter den Handelsnamen, Purafect ® , Purafect ® OxP, Purafect ® Prime und Properase ® von der Firma Genencor, das unter dem Handelsnamen Protosol ® von der Firma Advanced Biochemicals Ltd., Thane, Indien, das unter dem Handelsnamen PRODET P von der Firma Richcore India, Bangalore, Indien, das unter dem Handelsnamen Wuxi ® von der Firma Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., China, die unter den Handelsnamen Proleather ® und Protease P ® von der Firma Amano Pharmaceuticals Ltd., Nagoya, Japan, und das unter der Bezeichnung Proteinase K-16 von der Firma Kao Corp., Tokyo, Japan, erhältlichen Enzyme. Other proteases are, for example, under the trade names Durazym ®, relase ®, Everlase® ®, Nafizym, Natalase ®, Kannase® ®, Shinezyme ® and Ovozyme ® from Novozymes, the ® under the trade names Purafect ®, Purafect ® OxP, Purafect Prime and Properase.RTM ® from Genencor, that under the trade name Protosol® ® from Advanced Biochemicals Ltd., Thane, India, under the trade name PRODET P by the company Rich Core India, Bangalore, India, that under the trade name Wuxi ® from Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., China, under the trade name ® Proleather and protease P ® from Amano Pharmaceuticals Ltd., Nagoya, Japan, and sold under the name proteinase K-16 from Kao Corp., Tokyo, Japan enzymes available.
  • Eine Besonderheit stellen die in der internationalen Patentanmeldung A special feature in the International Patent Application WO 03/054185 WO 03/054185 offenbarten alkalischen Proteasen aus Bacillus gibsonii (DSM 14391) dar. Dieser Stamm ist gemäß dem Budapester Vertrag über die internationale Anerkennung der Hinterlegung von Mikroorganismen vom 28. April 1977 bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zeltkulturen GmbH, Inhoffenstraße 7B, 38124 Braunschweig ( revealed alkaline proteases are produced by Bacillus gibsonii (DSM 14391). This strain is (according to the Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms of 28 April 1977 in the German Collection of Microorganisms and cell cultures GmbH, Inhoffenstraße 7B, 38124 Braunschweig ) unter der Bezeichnung ID 01-192 und der Eingangsnummer DSM 14391 hinterlegt. ) Under the name ID 01-192, and the accession number DSM 14391 deposited. Gegenüber den vorstehend genannten Proteasen weisen diese Proteasen erhebliche Unterschiede in der Aminosäuresequenz auf, so dass ein Identitätsvergleich der Aminosäuresequenzen Identitätswerte ergibt, die unter 80% Identität liegen. Opposite the above-mentioned proteases, these proteases exhibit considerable differences in the amino acid sequence such that a comparison of the identity of amino acid sequences results in identity values ​​which are below 80% identity. Nachfolgende Tabelle 1 verdeutlicht diesen Sachverhalt an konkreten Beispielen: Tabelle 1: Table 1 below illustrates this fact with concrete examples: Table 1:
    Protease protease Identität zur alkalischen Proteasen aus Bacillus gibsonii DSM 14391 (in %) Identity to the alkaline proteases from Bacillus gibsonii, DSM 14391 (in%)
    Subtilisin 309 subtilisin 309 78,4 78.4
    Alkalische Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 Alkaline protease from Bacillus lentus DSM 5483 77,7 77.7
    BPN' BPN ' 55,3 55.3
    PB92 PB92 78,1 78.1
  • Für die alkalischen Proteasen aus Bacillus gibsonii (DSM 14391) sind keine für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln leistungsverbesserte Protease-Varianten im Stand der Technik bekannt, insbesondere keine Varianten, die eine Veränderung an den Positionen 211 und/oder 212 in der Zählweise der alkalischen Proteasen aus Bacillus gibsonii (DSM 14391), bezogen auf das reife Enzym, aufweisen. no performance-enhanced for the use in detergents and cleaning agents protease variants in the prior art are known for the alkaline proteases from Bacillus gibsonii (DSM 14391), in particular no variants of a change at positions 211 and / or 212 in the counting alkaline proteases from Bacillus gibsonii (DSM 14391), relative to the mature enzyme having.
  • Die in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzten Proteasen stammen entweder ursprünglich aus Mikroorganismen, beispielsweise aus Mikroorganismen der Gattungen Bacillus, Streptomyces, Humicola, oder Pseudomonas, und/oder werden nach an sich bekannten biotechnologischen Verfahren durch geeignete Mikroorganismen produziert, beispielsweise durch transgene Expressionswirte der Gattungen Bacillus oder durch filamentöse Fungi. The proteases used in the inventive compositions either derive originally from microorganisms, such as microorganisms of the genera Bacillus, Streptomyces, Humicola or Pseudomonas, and / or are produced according to known biotechnological processes using suitable microorganisms, for example by transgenic expression hosts of the genera Bacillus, or by filamentous fungi. Letzteres gilt insbesondere für Protease-Varianten, die ausgehend von einem Ausgangsmolekül verändert wurden und somit beispielsweise für deren Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln optimiert wurden. The latter applies especially for protease variants that were changed starting from an initial molecule and have thus been optimized for example for their use in detergents and cleaning agents.
  • Es ist ferner bekannt, dass einige für den Einsatz in Waschmitteln etablierte Proteasen auch für kosmetische Zwecke oder für die organisch-chemische Synthese geeignet sind. It is also known that some for use in detergents established proteases are also suitable for cosmetic purposes or for organic-chemical synthesis.
  • Es besteht nach wie vor ein hoher Bedarf an Proteasen in diversen technischen Einsatzgebieten. There is still a great need for proteases in various technical applications. Insbesondere hinsichtlich ihrer Verwendbarkeit in Wasch- und Reinigungsmitteln besteht selbst für die im Stand der Technik etablierte Familie der Subtilisin-Proteasen nach wie vor ein Optimierungsbedarf betreffend beispielsweise deren katalytische Aktivität, die Reaktionsbedingungen, die Stabilität oder die Substratspezifität. In particular with regard to their usability in detergents and cleaning agents is for even the most established in the art family of subtilisin proteases still a need for improvement regarding, for example, their catalytic activity, reaction conditions, stability or substrate specificity. Gerade hinsichtlich der Verwendung einer Protease in Wasch- und Reinigungsmitteln ist es jedoch in der Regel nicht möglich, auf Grund der mess- oder kalkulierbaren enzymatischen Eigenschaften des Enzyms per se auf dessen Verhalten in Wasch- oder Reinigungsmittelrezepturen zu schließen. However, especially with regard to the use of a protease in detergents and cleaning agents, it is not usually possible to conclude on the basis of measurable or calculable enzymatic properties of the enzyme per se on its behavior in washing or cleaning agent formulations. Diesbezüglich spielen weitere Faktoren wie Stabilität gegenüber oxidierenden Agentien, Denaturierung durch Tenside, Faltungseffekte oder Synergien mit anderen Inhaltsstoffen eine Rolle, die das Verhalten des Enzyms bzw. der Enzyme in Wasch- oder Reinigungsmitteln bzw. in den resultierenden Wasch- bzw. Reinigungslösungen beeinflussen. In this regard, other factors such as stability against oxidizing agents, denaturation by surfactants, convolution effects or synergies with other ingredients play a role that influence the behavior of the enzyme or enzymes in detergents or cleaning formulations or in the resulting washing or cleaning solutions.
  • Der vorliegenden Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde, eine alkalische Protease vom Typ der alkalischen Proteasen aus Bacillus gibsonii DSM 14391 weiterzuentwickeln und leistungsverbesserte Varianten zu erhalten, die in technischen Anwendungen verbesserte Leistungen zeigen. The present invention is thus based on the task of further developing an alkaline protease of the type of alkaline proteases from Bacillus gibsonii, DSM 14391, and to obtain performance-enhanced variants that show improved performance in industrial applications. Insbesondere sollten solche gefunden werden, deren Leistungsverbesserung eine gesteigerte Reinigungsleistung von Wasch- und/oder Reinigungsmitteln bewirkt. Especially those to be found, the performance improvement causes increased cleaning performance of detergents and / or cleaning agents. Diesbezüglich sollten solche Protease-Varianten erzeugt werden, die in Bezug auf die Ausgangsprotease eine verbesserte Waschleistung in Bezug auf zumindest eine Anschmutzung, vorzugsweise in Bezug auf mehrere Anschmutzungen, aufweisen. In this regard, such protease variants should be generated on the output protease improved wash performance in respect of at least one stain, preferably with respect to several stains have in relation.
  • Weitere Aufgaben der vorliegenden Erfindung können darin gesehen werden, Proteasen, insbesondere vom Subtilisin-Typ, bereitzustellen, die gegenüber dem Stand der Technik eine verbesserte Stabilität gegenüber Temperatureinflüssen, pH-Wert-Schwankungen, denaturierenden oder oxidierenden Agentien, proteolytischem Abbau, hohen Temperaturen, sauren oder alkalischen Bedingungen oder gegenüber einer Veränderung der Redox-Verhältnisse aufweisen. Other objects of the present invention may be seen in proteases, especially of the subtilisin type, provide that over the prior art, an improved stability to temperature influences, pH fluctuations denaturing, or oxidizing agents, proteolytic degradation, high temperature, acidic or alkaline conditions, or exhibit to a change in the redox conditions. Weitere Aufgaben können in einer verringerten Immunogenität bzw. verringerten allergenen Wirkung gesehen werden. Other tasks can be seen in reduced immunogenicity and reduced allergenicity.
  • Eine weitere besondere Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, Proteasen ausfindig zu machen, die bei Temperaturen von 20 bis 60°C eine gute Waschleistung, vorzugsweise eine verbesserte Waschleistung im Vergleich zu den im Stand der Technik offenbarten Proteasen aufweisen. A further particular object of the present invention is to make proteases find that have at temperatures of 20 to 60 ° C a good washing performance, preferably improved wash performance in comparison to those disclosed in the prior art proteases.
  • Weitere Teilaufgaben bestanden darin, Nukleinsäuren zur Verfügung zu stellen, die für derartige Proteasen kodieren, und Vektoren, Wirtszellen und Herstellverfahren zur Verfügung zu stellen, die zur Gewinnung derartiger Proteasen genutzt werden können. Other tasks were to provide nucleic acids encoding such proteases, and to provide vectors, host cells and manufacturing processes available that can be used to obtain such proteases. Ferner sollten entsprechende Mittel, insbesondere Wasch- und Reinigungsmittel, entsprechende Wasch- und Reinigungsverfahren sowie entsprechende Verwendungsmöglichkeiten für derartige Proteasen zur Verfügung gestellt werden. Further suitable agents, especially laundry detergents and cleaning products, corresponding washing and cleaning methods as well as corresponding uses for such proteases should be made available. Schließlich sollten technische Einsatzmöglichkeiten für die gefundenen Proteasen definiert werden. Finally technical uses for the proteases found should be defined.
  • Eine Lösung für die vorstehend genannte Aufgabe ergibt sich erfindungsgemäß aus der Lehre des ersten Anspruchs. One solution to the above-mentioned object is achieved according to the invention from the teaching of the first claim. Einen Gegenstand der Erfindung bildet somit eine Protease, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO. An object of the invention thus provides a protease that comprises an amino acid sequence to that of SEQ ID NO. 2 angegebenen Aminosäuresequenz mindestens zu 78,5% identisch ist, und die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. 2 amino acid sequence shown at least 78.5% identical, and which is characterized in that it is in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 211 oder Position 212 oder an den Positionen 211 und 212 eine im Vergleich zu der in SEQ ID NO. 2 at position 211 or position 212, or at positions 211 and 212 in comparison to that in SEQ ID NO. 2 angegebenen Aminosäure veränderte Aminosäure aufweist. 2 having altered amino acid indicated amino acid.
  • Überraschenderweise wurde festgestellt, dass eine Veränderung der Positionen 211 und/oder 212 in einer Protease, die eine zu der in SEQ ID NO. It has surprisingly been found that a change in the positions 211 and / or 212 in a protease treatment to that in SEQ ID NO. 2 angegebenen Aminosäuresequenz zu mindestens 78,5% identische Aminosäuresequenz umfasst, eine verbesserte Leistung dieser veränderten Protease in Wasch- und Reinigungsmitteln bewirkt im Vergleich zu einer entsprechenden Protease, die diese Veränderungen nicht aufweist. 2 amino acid sequence shown at least 78.5% identical amino acid sequence includes, an improved performance of these modified protease in detergents and cleaning agents has the effect, compared to a corresponding protease that does not have these changes. Dies ist insbesondere deshalb überraschend, da sich die erfindungsgemäß veränderte Protease wie vorstehend beschrieben von weiteren Subtilisinen – wie beispielsweise Subtilisin 309, PB92, der alkalische Protease aus Bacillus lentus DSM 5483, BPN', Proteinase K-16, etc. – deutlich unterscheidet. This is surprising in particular because the present invention modified protease as described above further subtilisins - clearly different - such as subtilisin 309, PB92, the alkaline protease from Bacillus lentus DSM 5483, BPN ', proteinase K-16, etc. Es war somit keinesfalls zu erwarten, dass für alkalische Proteasen aus Bacillus gibsonii (DSM 14391) für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln leistungsverbesserte Protease-Varianten erhalten werden durch eine Veränderung an den Positionen 211 und/oder 212 in der Zählweise der alkalischen Proteasen aus Bacillus gibsonii (DSM 14391), bezogen auf das reife Enzym. It was thus expected not to say that performance-enhanced protease variants are obtained for alkaline proteases from Bacillus gibsonii (DSM 14391) for use in washing and cleaning agents by a change at positions 211 and / or 212 in the numbering of the alkaline proteases Bacillus gibsonii (DSM 14391), based on the mature enzyme. Unerwarteterweise führen genau diese Veränderungen bei diesen Enzymen zu einer Leistungsverbesserung, die sich von den klassischen, etablierten Proteasen vom Subtilisin-Typ unterscheiden. Unexpectedly, perform exactly these changes in these enzymes to improve performance, which differ from the traditional, established proteases of the subtilisin type.
  • In einer bevozugten Ausführungsform der Erfindung ist die Protease dadurch gekennzeichnet, dass sie eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO. In a bevozugten embodiment of the invention, the protease is characterized in that it comprises an amino acid sequence to that of SEQ ID NO. 2 angegebenen Aminosäuresequenz zunehmend bevorzugt zu mindestens 80%, 82,5%, 85%, 87,5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99% und ganz besonders bevorzugt zu 99,25% identisch ist. 2 amino acid sequence given increasing preference at least 80%, 82.5%, 85%, 87.5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95% is identical to 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99%, and most preferably about 99.25%.
  • Überraschenderweise wurde ferner festgestellt, dass mehrere Möglichkeiten vorhanden sind, die vorhandene Aminosäure in den Positionen 211 und/oder 212 zu verändern, um eine Leistugnsverbesserung der resultierenden Protease zu erhalten. Surprisingly, it has further been found that several options are available to change the existing amino acid in positions 211 and / or 212, to obtain a Leistugnsverbesserung the resulting protease. Grundsätzlich ist es von Bedeutung, dass die Protease an einer dieser Positionen überhaupt verändert ist, dh die an der jeweiligen Position vorhandene Aminosäure durch eine andere proteinogene Aminosäure ersetzt ist. Basically, it is of importance that the protease is altered in one of these positions at all, ie, the known amino acid at the respective position is replaced by another proteinogenic amino acid. Alternativ können auch beide Positionen derart verändert sein. Alternatively, both positions can be changed so. Einen weiteren Gegenstand der Erfindung bildet daher eine Protease, die dadurch gekennzeichnet ist, dass die Protease ausgewählt ist aus Therefore in another aspect the invention provides a protease that is characterized in that the protease is selected from
    • a) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. a) a protease which in the numbering according to SEQ ID NO. 2 an Position 211 eine Aminosäure aufweist, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus: Alanin, Arginin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Glutamin, Glutaminsäure, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Phenylalanin, Prolin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin und Valin 2 at position 211 has an amino acid which is selected from the group consisting of: alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan , tyrosine and valine
    • b) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. b) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 212 eine Aminosäure aufweist, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus: Alanin, Arginin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Glutamin, Glutaminsäure, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin, Phenylalanin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin und Valin 2 at position 212 has an amino acid which is selected from the group consisting of: alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, serine, threonine, tryptophan , tyrosine and valine
    • c) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. c) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 211 eine Aminosäure gemäß Merkmal a) aufweist und an Position 212 eine Aminosäure gemäß Merkmal b) aufweist. 2 at position 211 has an amino acid according to feature a) and at position 212 an amino acid in accordance with feature b) having.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist Protease dadurch gekennzeichnet, dass die Protease ausgewählt ist aus In a preferred embodiment of the invention the protease is characterized in that the protease is selected from
    • a) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. a) a protease which in the numbering according to SEQ ID NO. 2 an Position 211 einen Serinrest aufweist 2 at position 211 has a serine residue
    • b) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. b) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 212 einen Asparaginrest aufweist 2 at position 212 has an asparagine
    • c) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. c) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 211 einen Serinrest und an Position 212 einen Asparaginrest aufweist. 2 at position 211 and a serine residue at position 212 has an asparagine residue.
  • Denn für die vorstehend genannten Substitutionen wurde eine besonders vorteilhafte Leistungsverbesserung festgestellt bei einem Einsatz dieser Protease-Varianten in Wasch- und Reinigungsmitteln, insbesondere in Waschmittelformulierungen. Because of the aforementioned substitutions, a particularly advantageous performance improvement was found when using these protease variants in detergents and cleaning agents, particularly in detergent formulations. Ausgehend und in der Zählweise von SEQ ID NO. and starting the counting of SEQ ID NO. 2 weisen die erfindungsgemäßen Varianten daher die Aminosäureveränderungen M211S (die Aminosäure Methionin an Position 211 wurde ersetzt durch die Aminosäure Serin) beziehungsweise P212N (die Aminosäure Prolin an Position 212 wurde ersetzt durch die Aminosäure Asparagin) alleine oder in Kombination auf. 2 therefore have variants of the invention, amino acid changes M211S (the amino acid methionine at position 211 has been replaced by the amino acid serine) and P212N (the amino acid proline at position 212 has been replaced by the amino acid asparagine) alone or in combination.
  • Zusätzlich zu den vorstehend erläuterten Aminosäureveränderungen können erfindungsgemäße Proteasen weitere Aminosäureveränderungen, insbesondere Aminosäure-Substitutionen, -Insertionenen oder -Deletionen, aufweisen. In addition to the above-described amino acid alterations proteases of the invention may further amino acid changes, in particular amino acid substitutions, deletions or -Insertionenen having.
  • Mit allen vorstehend genannten Erfindungsgegenständen sind als weitere Erfindungsgegenstände die zugehörigen Nukleinsäuren, entsprechende natürliche Zellen, geeignete Verfahren zu ihrer Identifizierung, insbesondere auf den Nukleinsäuren aufbauende molekularbiologische Verfahren und Verfahrenselemente sowie Mittel, Wasch- und Reinigungsmittel, Wasch- und Reinigungsverfahren und über die betreffenden Proteasen gekennzeichnete Verwendungsmöglichkeiten verbunden. With all the above-mentioned invention, objects are as further objects of the invention, the corresponding nucleic acids corresponding natural cells, suitable methods for their identification, constituting in particular the nucleic acids of molecular biology methods and procedures elements and means for washing and cleaning agents, detergents and cleaning method and marked on the relevant proteases uses connected. Aufgrund der zur Verfügung gestellten Nukleinsäuren ist eine zusätzliche Optimierung dieses Enzyms, beispielsweise über weitere Punktmutationen möglich. Due to the provided nucleic acids is an additional optimization of this enzyme, for example, via further point mutations possible. Ferner kann diese DNA in Shuffling-Ansätze eingebracht und damit zur Erzeugung völlig neuartiger Proteasen genutzt werden. Furthermore, this DNA can be introduced into shuffling approaches and are thus used for the generation of completely novel proteases.
  • Unter einem Enzym ist im Sinne der vorliegenden Anmeldung ein Protein zu verstehen, das eine bestimmte biokatalytische Funktion ausübt. An enzyme is a protein is understood in the sense of the present application, which has a specific biocatalytic function. Unter Protease im Sinne der vorliegenden Anmeldung wird ein Enzym verstanden, welches die Hydrolyse von Peptidbindungen katalysiert und dadurch in der Lage ist, Peptide oder Proteine zu spalten. Among protease in the sense of the present application is meant an enzyme which catalyzes the hydrolysis of peptide bonds and thus is capable of cleaving peptides or proteins.
  • Ein Protein ist im Sinne der vorliegenden Anmeldung ein aus den natürlichen Aminosäuren zusammengesetztes, weitgehend linear aufgebautes, zur Ausübung seiner Funktion zumeist eine dreidimensionale Struktur annehmendes Polypeptid. A protein is the sense of the present application, a composite of natural amino acids, a substantially linear structure, usually a three-dimensional structure and adopts to exert its function polypeptide. Ein Peptid besteht aus Aminosäuren, die über Peptidbindungen miteinander kovalent verbunden sind. A peptide consisting of amino acids that are covalently linked together by peptide bonds. Die Bezeichnung Polypeptid verdeutlicht diesbezüglich den Sachverhalt, dass diese Peptidkette in der Regel aus vielen Aminosäuren besteht, die über Peptidbindungen miteinander verbunden sind. The term polypeptide illustrates the situation in this regard that this peptide chain is usually from many amino acids linked together by peptide bonds. Aminosäuren können in einer L- und einer D-Konfiguration vorliegen, wobei die Aminosäuren, aus denen Proteine bestehen, in der L-Konfiguration vorliegen. Amino acids may be present in an L- and a D-configuration, with the amino acids from which proteins are made, are in the L-configuration. Sie werden als proteinogene Aminosäuren bezeichnet. They are called proteinogenic amino acids. In der vorliegenden Anmeldung werden die proteinogenen, natürlich vorkommenden L-Aminosäuren mit den international gebräuchlichen 1- und 3-Buchstaben-Codes bezeichnet. In the present application, the proteinogenic, naturally occurring L-amino acids are designated by the internationally accepted 1- and 3-letter codes. Zahlreiche Proteine werden als sogenannte Präproteine, also zusammen mit einem Signalpeptid gebildet. Numerous proteins are formed as so-called pre-proteins, ie together with a signal peptide. Darunter ist dann der N-terminale Teil des Proteins zu verstehen, dessen Funktion zumeist darin besteht, die Ausschleusung des gebildeten Proteins aus der produzierenden Zelle in das Periplasma oder das umgebende Medium und/oder dessen korrekte Faltung zu gewährleisten. Among them, then the N-terminal part of the protein, whose function usually is to ensure the export of the protein formed from the producing cell into the periplasm or the surrounding medium and / or its correct folding. Anschließend wird das Signalpeptid unter natürlichen Bedigungen durch eine Signalpeptidase vom übrigen Protein abgespalten, so dass dieses seine eigentliche katalytische Aktivität ohne die zunächst vorhandenen N-terminalen Aminosäuren ausübt. Subsequently, the signal peptide is cleaved under natural conditions by a signal from the remaining protein such that it exerts its actual catalytic activity without the initially present N-terminal amino acids. Pro-Proteine sind inaktive Vorstufen von Proteinen. Pro-proteins are inactive precursors of proteins. Deren Vorläufer mit Signalsequenz werden als Prä-Pro-Proteine bezeichnet. Their precursors with signal sequence are referred to as pre-pro-proteins. Für technische Anwendungen sind aufgrund ihrer enzymatischen Aktivität die maturen, dh reifen Peptide, dh die nach ihrer Herstellung prozessierten Enzyme gegenüber den Präproteinen bevorzugt. For technical applications because of their enzymatic activity, the mature, ie mature peptides, ie the enzymes processed after their production compared with the pre-proteins are preferred. Die Proteine können von den sie produzierenden Zellen nach der Herstellung der Polypeptidkette modifiziert werden, beispielsweise durch Anknüpfung von Zuckermolekülen, Formylierungen, Aminierungen, usw. Solche Modifikationen werden als posttranslationale Modifikationen bezeichnet. The proteins may be modified by the cells that produce them after the production of the polypeptide, for example, by attachment of sugar molecules, formylation, amination, etc. Such modifications are referred to as post-translational modifications. Diese posttranslationalen Modifizierungen können, müssen jedoch nicht einen Einfluss auf die Funktion des Proteins ausüben. These post-translational modifications may or may not have an impact on the function of the protein.
  • Im Sinne der vorliegenden Erfindung werden alle Enzyme, Proteine, Fragmente und Derivate, sofern sie nicht explizit als solche angesprochen zu werden brauchen, unter dem Oberbegriff Proteine zusammengefasst. According to the present invention, all enzymes, proteins, fragments and derivatives, unless they need to be explicitly referred to as such, under the generic term proteins.
  • Durch Vergleich mit bekannten Enzymen, die beispielsweise in allgemein zugänglichen Datenbanken hinterlegt sind, lässt sich aus der Aminosäure- oder Nukleotid-Sequenz die enzymatische Aktivität eines betrachteten Enzyms folgern. By comparison with known enzymes, which are stored for example in generally accessible data banks, it can be concluded the enzymatic activity of an enzyme from the amino acid or nucleotide sequence. Diese kann durch andere Bereiche des Proteins, die nicht an der eigentlichen Reaktion beteiligt sind, qualitativ oder quantitativ modifiziert werden. This can be qualitatively or quantitatively modified by other regions of the protein that are not involved in the actual reaction. Dies könnte beispielsweise die Enzymstabilität, die Aktivität, die Reaktionsbedingungen oder die Substratspezifität betreffen. This could, for example, enzyme stability, activity, reaction conditions or substrate specificity concern.
  • Solch ein Vergleich geschieht dadurch, dass ähnliche Abfolgen in den Nukleotid- oder Aminosäuresequenzen der betrachteten Proteine einander zugeordnet werden. Such a comparison is the fact that similar sequences are assigned in the nucleotide or amino acid sequences of the studied proteins to one another. Dies nennt man Homologisierung. This is called homologation. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. A tabular assignment of the respective positions is referred to as alignment. Bei der Analyse von Nukleotidsequenzen sind wiederum beide komplementären Stränge und jeweils allen drei möglichen Leserastern zu berücksichtigen; In the analysis of nucleotide sequences, both complementary strands and all three possible reading frames have to be considered; ebenso die Degeneriertheit des genetischen Codes und die organismenspezifische Verwendung der Codons (Codon-Usage). likewise the degeneracy of the genetic code and the organism-specific codon usage (codon usage). Inzwischen werden Alignments über Computerprogramme erstellt, wie beispielsweise durch die Algorithmen FASTA oder BLAST; Alignments are now produced by computer programs, for example by the FASTA or BLAST algorithms; dieses Vorgehen wird beispielsweise von This approach is, for example, beschrieben. described.
  • Eine Zusammenstellung aller in den verglichenen Sequenzen übereinstimmenden Positionen wird als Konsensus-Sequenz bezeichnet. A compilation of all matching in the compared sequences is referred to as consensus sequence.
  • Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit oder Homologie der verglichenen Sequenzen zueinander. Such a comparison also allows a statement about the similarity or homology of the compared sequences. Diese wird in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben bzw. in einem Alignment einander entsprechenden Positionen wiedergegeben. This is expressed in percent identity, i.e. the proportion of identical nucleotides or amino acid residues in the same or in an alignment reproduced corresponding positions each other. Ein weiter gefaßter Homologiebegriff bezieht die konservierten Aminosäure-Austausche in diesen Wert mit ein. A broader definition of homology includes the conserved amino acid exchanges in this value with. Es ist dann von Prozent Ähnlichkeit die Rede. It is then of percent similarity. Solche Aussagen können über ganze Proteine oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Such statements can be made about whole proteins or genes or only about individual regions.
  • Homologe Bereiche von verschiedenen Proteinen sind durch Übereinstimmungen in der Aminosäuresequenz definiert. Homologous regions of different proteins are defined by similarities in the amino acid sequence. Diese können auch durch identische Funktion gekennzeichnet sein. These can also be characterized by identical function. Sie geht bis zu völligen Identitäten in kleinsten Bereichen, sogenannten Boxen, die nur wenige Aminosäuren umfassen und meist für die Gesamtaktivität essentielle Funktionen ausüben. She walks up to complete identities in very small regions, called boxes, which contain only a few amino acids and usually exert functions essential to overall activity. Unter den Funktionen der homologen Bereiche sind kleinste Teilfunktionen der vom gesamten Protein ausgeübten Funktion zu verstehen, wie beispielsweise die Ausbildung einzelner Wasserstoffbrückenbindungen zur Komplexierung eines Substrats oder Übergangskomplexes. Among the functions of the homologous regions of the smallest part of functions performed by the entire protein function are understood to mean for example the formation of individual hydrogen bridge bonds for complexing a substrate or transition complex.
  • Proteine können auch über die Reaktion mit einem Antiserum oder einem bestimmten Antikörper zu Gruppen immunologisch verwandter Proteine zusammengefaßt werden. Proteins can also be combined via the reaction with an antiserum or an antibody specific to groups of immunologically related proteins. Die Angehörigen einer Gruppe zeichnen sich dadurch aus, dass sie dieselbe, von einem Antikörper erkannte antigene Determinante aufweisen. The members of a group are characterized in that they have the same, recognized by an antibody antigenic determinant.
  • Einen weiteren Erfindungsgegenstand bilden daher Proteasen, dadurch gekennzeichnet sind, dass sie mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei oder vier übereinstimmende antigene Determinanten mit einer erfindungsgemäßen Protease aufweisen. Therefore, a further subject of the invention constitute proteases are characterized in that they have at least one, and increasingly preferably two, three or four identical antigenic determinants with a protease of the invention.
  • Proteasen bzw. Enzyme im allgemeinen können durch verschiedene Verfahren, z. Proteases or enzymes generally can be prepared by various methods, such. B. gezielte genetische Veränderung durch Mutageneseverfahren, weiterentwickelt und für bestimmte Einsatzzwecke oder hinsichtlich spezieller Eigenschaften, beispielsweise katalytische Aktivität, Stabilität, usw., optimiert werden. B. targeted genetic modification through mutagenesis, further developed and optimized for a particular purpose, or in terms of specific properties such as catalytic activity, stability, etc. Änderungen der Nukleotidsequenz, wie sie beispielsweise durch an sich bekannte molekularbiologische Methoden herbeigeführt werden können, werden demnach als Mutationen bezeichnet. Changes in the nucleotide sequence as they can be produced, for example, by per se known molecular biological methods are, therefore, called mutations. Je nach Art der Änderung kennt man beispielsweise Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutationen oder solche, bei denen verschiedene Gene oder Teile von Genen miteinander fusioniert (shuffling) werden; Depending on the nature of the change are known, for example, deletion, insertion or substitution mutations or those in which various genes or parts of genes are fused together (shuffling) are; dies sind Genmutationen. these are gene mutations. Die zugehörigen Organismen werden als Mutanten bezeichnet. The associated organisms are referred to as mutants. Die von mutierten Nukleinsäuren abgeleiteten Proteine werden als Varianten bezeichnet. The proteins derived from mutated nucleic acids are referred to as variants. So führen beispielsweise Deletions-, Insertions-, Substitutionsmutationen oder Fusionen zu deletions-, insertions-, substitutionsmutierten oder Fusionsgenen und auf Proteinebene zu entsprechenden Deletions-, Insertions- oder Substitutionsvarianten, beziehungsweise Fusionsproteinen. For example, deletion, insertion, substitution mutations or fusions result in deletion, insertion, or fusion genes and, at the protein level, to corresponding deletion, insertion or substitution variants, or fusion proteins. Die Strategie, in die bekannten Moleküle gezielte Punktmutationen einzuführen, etwa um die Waschleistung der Proteasen, beispielsweise Subtilisinen, zu verbessern, wird auch als Rationales Protein-Design bezeichnet. To improve the strategy of introducing specific point mutations in the known molecules, for example to the washing performance of proteases, such as subtilisins, also referred to as rational protein design. Eine ähnliche Strategie der Leistungsverbesserung besteht darin, die Oberflächenladungen und/oder den isoelektrischen Punkt der Moleküle und darüber ihre Wechselwirkungen mit dem Substrat zu verändern. A similar strategy to improve performance is to alter the surface charge and / or the isoelectric point of molecules and above its interactions with the substrate. So kann beispielsweise über Punktmutationen die Nettoladung der Subtilisine verändert werden, um darüber die Substratbindung insbesondere für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln zu beeinflussen. Thus, the net charge of the subtilisins can be changed for example via point mutations to about affecting the substrate binding in particular for use in detergents and cleaners. Eine weitere, insbesondere ergänzende Strategie besteht darin, die Stabilität der betreffenden Proteasen zu erhöhen und damit ihre Wirksamkeit zu erhöhen, beispielsweise über Kopplung an ein oder mehrere gleichartige oder verschiedenartige Polymere. Another, in particular complementary strategy is to increase the stability of the proteases concerned and thus to increase its effectiveness, for example the coupling to one or more identical or different polymers. Insbesondere für kosmetische Anwendungen kann eine solche Kopplung in einer verbesserten Hautverträglichkeit resultieren. In particular, for cosmetic applications, such a coupling can result in improved skin compatibility. Insbesondere für Wasch- und Reinigungsmittel sind zwar Stabilisierungen durch Punktmutationen geläufiger, entsprechende Kopplungen an Polymere aber dennoch möglich. Especially for detergents and cleaners stabilizations by point mutations more common, corresponding couplings of polymers are indeed but still possible.
  • Eine moderne Richtung der Enzymentwicklung besteht darin, Elemente aus bekannten, miteinander verwandten Proteinen über statistische Verfahren zu neuen Enzymen mit bislang nicht erreichten Eigenschaften zu kombinieren. A modern direction in enzyme development is to combine elements from known related proteins using statistical methods to new enzymes with previously unattainable properties. Solche Verfahren werden auch unter dem Oberbegriff Directed Evolution zusamengefaßt. Such methods are taken together evolution under the generic term directed. Dazu gehören beispielsweise folgende Verfahren: Die These include the following procedures: , . , . oder or . , Eine weitere Shuffling-Methode mit der Bezeichnung „Recombining ligation reaction" (RLR) ist in Another shuffling method called "recombining ligation reaction" (RLR) is in WO 00/09679 A1 WO 00/09679 A1 beschrieben. described.
  • Für die Beschreibung von Punktmutationen, die genau eine Aminosäureposition betreffen (Aminosäureaustausche), wird folgende Konvention angewendet: zunächst wird die natürlicherweise vorhandene Aminosäure in Form des international gebräuchlichen Einbuchstaben-Codes bezeichnet, dann folgt die zugehörige Sequenzposition und schließlich die eingefügte Aminosäure. For the description of point mutations that affect exactly one amino acid position (amino acid substitutions) is applied following convention: first, the naturally present amino acid in the form of the internationally accepted single-letter codes is referred to, followed by the corresponding sequence position and, finally, the inserted amino acid. Mehrere Austausche innerhalb derselben Polypeptidkette werden durch Schrägstriche voneinander getrennt. Multiple substitutions within the same polypeptide chain are separated by slashes.
  • Es ist aus dem Stand der Technik weiterhin allgemein bekannt, dass sich vorteilhafte Eigenschaften einzelner Mutationen, z. It is from the prior art also generally known that advantageous properties of individual mutations, eg. B. einzelner Punktmutationen, ergänzen können. B. single point mutations can supplement. Eine hinsichtlich bestimmter Eigenschaften bereits optimierte Protease, zum Beispiel hinsichtlich ihrer Stabilität gegenüber Tensiden oder anderen Komponenten, kann erfindungsgemäß zusätzlich weiterentwickelt werden. An already optimized with respect to certain properties protease, for example in terms of their stability against surfactants or other components, can be according to the invention also developed.
  • Unter Fragmenten werden alle Proteine oder Peptide verstanden, die kleiner sind als natürliche Proteine und beispielsweise auch synthetisch erhalten werden können. Fragments all proteins or peptides are understood which are smaller than natural proteins and, for example, can also be obtained synthetically. Aufgrund ihrer Aminosäuresequenzen können sie den betreffenden vollständigen Proteinen zugeordnet werden. Because of their amino acid sequences, they can be assigned to the complete proteins. Sie können beispielsweise gleiche Strukturen annehmen oder proteolytische Aktivitäten oder Teilaktivitäten ausüben, wie beispielsweise die Komplexierung eines Substrats. For example you can adopt identical structures or exert proteolytic activities or partial activities such as complexing of a substrate. Fragmente und Deletionsvarianten von Ausgangsproteinen sind prinzipiell gleichartig; Fragments and deletion variants of starting proteins are similar in principle; während Fragmente eher kleinere Bruchstücke darstellen, fehlen den Deletionsmutanten eher nur kurze Bereiche, und damit nur einzelne Teilfunktionen. while fragments represent rather relatively small pieces, missing the deletion mutants rather only short regions and thus only individual partial functions.
  • Unter chimären oder hybriden Proteinen sind im Sinne der vorliegenden Anmeldung solche Proteine zu verstehen, deren Sequenz die Sequenzen oder Teilsequenzen von mindestens zwei Ausgangsproteinen umfasst. Chimeric or hybrid proteins are to be understood as proteins in the context of the present application, the sequence comprises the sequence or partial sequence of at least two starting proteins. Die Ausgangsproteine können diesbezüglich aus verschiedenen oder aus demselben Organismus stammen. The starting proteins may originate in this regard from different or from the same organism. Chimäre oder hybride Proteine können beispielsweise durch Rekombinationsmutagenese erhalten werden. Chimeric or hybrid proteins can be obtained for example by recombination mutagenesis. Der Sinn einer solchen Rekombination kann beispielsweise darin bestehen, mithilfe des heranfusionierten Proteinteils eine bestimmte enzymatische Funktion herbeizuführen oder zu modifizieren. The purpose of such recombination may consist, for example, cause a specific enzymatic function help of the fused protein part or modify it. Es ist dabei im Sinne der vorliegenden Erfindung unwesentlich, ob solch ein chimäres Protein aus einer einzelnen Polypeptidkette oder mehreren Untereinheiten besteht, auf welche sich unterschiedliche Funktionen verteilen können. It is irrelevant in the context of the present invention whether such a chimeric protein consists of a single polypeptide chain or more subunits to which different functions can be distributed.
  • Unter durch Insertionsmutation erhaltene Proteine sind solche Varianten zu verstehen, die durch Einfügen eines Proteinfragments in die Ausgangssequenzen erhalten worden sind. Under obtained by insertion mutation proteins such variants are understood, which are obtained by inserting a protein fragment into the starting sequences. Sie sind ihrer prinzipiellen Gleichartigkeit wegen den chimären Proteinen zuzuordnen. They refer to their fundamental similarity because of the chimeric proteins. Sie unterscheiden sich von jenen lediglich im Größenverhältnis des unveränderten Proteinteils zur Größe des gesamten Proteins. They differ from the latter merely in the size ratio of the unaltered protein part to the size of the entire protein. In solchen insertionsmutierten Proteinen ist der Anteil an Fremdprotein geringer als in chimären Proteinen. In such insertion proteins of the proportion of foreign protein is lower than in chimeric proteins.
  • Inversionsmutagenese, also eine partielle Sequenzumkehrung, kann als Sonderform sowohl der Deletion, als auch der Insertion angesehen werden. Inversion mutagenesis, ie a partial sequence reversal, can be regarded as a special form of both deletion and insertion. Dasselbe gilt für eine von der ursprünglichen Aminosäureabfolge abweichende Neugruppierung verschiedener Molekülteile. The same applies to a deviate from the original amino acid sequence regrouping of various molecule parts. Sie kann sowohl als Deletionsvariante, als Insertionsvariante, als auch als Shuffling-Variante des ursprünglichen Proteins angesehen werden. It can be regarded as deletion variant, as an insertion, as well as shuffling variant of the original protein.
  • Unter Derivaten werden im Sinne der vorliegenden Anmeldung solche Proteine verstanden, deren reine Aminosäurekette chemisch modifiziert worden ist. Derivatives such proteins are understood, the pure amino acid chain has been chemically modified for the purposes of the present application. Solche Derivatisierungen können beispielsweise biologisch im Zusammenhang mit der Proteinbiosynthese durch die Wirtszelle erfolgen. Such derivatizations can be performed, for example, biologically in connection with protein biosynthesis by the host cell. Hierfür können molekularbiologische Methoden eingesetzt werden. Molecular-biological methods may be used. Sie können aber auch chemisch durchgeführt werden, etwa durch die chemische Umwandlung einer Seitenkette einer Aminosäure oder durch kovalente Bindung einer anderen Verbindung an das Protein. but they can also be carried out chemically, for example by the chemical conversion of a side chain of an amino acid or by covalent binding of another compound to the protein. Bei solch einer Verbindung kann es sich beispielsweise auch um andere Proteine handeln, die beispielsweise über bifunktionelle chemische Verbindungen an erfindungsgemäße Proteine gebunden werden. Such a compound may also be, for example, other proteins which are bound, for example via bifunctional chemical compounds to proteins of the invention. Derartige Modifizierungen können beispielsweise die Substratspezifität oder die Bindungsstärke an das Substrat beeinflussen oder eine vorübergehende Blockierung der enzymatischen Aktivität herbeiführen, wenn es sich bei der angekoppelten Substanz um einen Inhibitor handelt. Such modifications may affect to the substrate or may cause a temporary blocking of the enzymatic activity when it is in the coupled substance is an inhibitor, for example, the substrate specificity or the binding strength. Dies kann beispielsweise für den Zeitraum der Lagerung sinnvoll sein. This can be useful, for example, for the period of storage. Ebenso ist unter Derivatisierung die kovalente Bindung an einen makromolekularen Träger zu verstehen, genauso wie auch ein nichtkovalenter Einschluss in geeignete makromolekulare Käfigstrukturen. Similarly, the covalent bonding to a macromolecular carrier is meant by derivatization, as well as a non-covalent inclusion in suitable macromolecular cage structures.
  • Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellt somit eine Protease dar, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie aus einer erfindungsgemäßen Protease als Ausgangsmolekül erhaltbar ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 266 und zunehmend bevorzugt mindestens 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60 und 50 zusammenhängenden Aminosäurepositionen mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt. A further subject of the invention thus provides a protease that is characterized in that it is comprised by fragmentation, deletion, insertion or substitution, and an amino acid sequence of a protease of the invention obtainable as starting molecule, the increasingly over a length of at least 266 and preferably at least 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60 and 50 contiguous amino acid positions with the parent molecule matches.
  • So ist es beispielsweise möglich, an den Termini oder in den Loops des Enzyms einzelne Aminosäuren zu deletieren, ohne daß dadurch die proteolytische Aktivität verlorengeht. So it is for instance possible to delete individual amino acids at the termini, or in the loops of the enzyme without thereby lost the proteolytic activity. Ferner kann durch derartige Deletionen die Allergenizität betreffender Proteasen gesenkt und somit insgesamt ihre Einsetzbarkeit verbessert werden kann. Further, the allergenicity is reduced of respective proteases by such deletions and therefore its applicability can be improved as a whole. Die Fragmentierung kommt dem nachstehend ausgeführten Aspekt der Insertions- oder Substitutionsmutagenese und/oder auch einer möglichen Fusion mit anderen Enzymen zugute. The fragmentation benefits the aspect set forth below the insertion or substitution mutagenesis and / or a possible fusion with other enzymes. Hinsichtlich des beabsichtigten Einsatzes dieser Enzyme ist es besonders bevorzugt, wenn sie auch nach der Fragmentierung oder Deletionsmutagenese eine proteolytische Aktivität besitzen. With respect to the intended use of these enzymes, it is particularly preferred if they possess a proteolytic activity even after fragmentation or deletion.
  • Zahlreiche Dokumente des Stands der Technik offenbaren vorteilhafte Wirkungen von Insertionen und Substitionen in Subtilasen. Numerous documents of the prior art disclose advantageous effects of insertions and substitutions in subtilases. Prinzipiell gehören hierzu auch Einzelaustausche von Aminosäuren, es können aber auch mehrere zusammenhängende Aminosäuren gegen andere ausgetauscht werden. In principle, this includes single amino acid changes, but it can be replaced by others more contiguous amino acids. Hierzu gehören auch Neukombinationen von größeren Enzymabschnitten, dh die Kombination von Fragmenten, mit anderen Proteasen oder Proteinen anderer Funktion beziehungsweise wiederum Fragmenten derselben. This includes new combinations of larger enzyme sections, ie the combination of fragments, with other proteases or proteins of other function or turn fragments thereof. So ist es beispielsweise möglich, ein erfindungsgemäßes Protein oder Teile davon über peptidische Linker oder direkt als Fusionsprotein mit Bindungsdomänen aus anderen Proteinen, etwa der Cellulose-Bindungsdomäne, zu versehen und dadurch die Hydrolyse des Substrats effektiver zu gestalten. So it is for example possible to provide a protein of the invention or parts thereof via peptide linkers or directly as a fusion protein with binding domains from other proteins, for example the cellulose binding domain and thus to make hydrolysis of the substrate more effective. Ebenso können erfindungsgemäße Proteine beispielsweise auch mit Amylasen oder Cellulasen verknüpft werden, um eine Doppelfunktion auszuüben. Similarly, proteins of the invention can for example also be combined with amylases or cellulases to exert a dual function.
  • Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellt eine Protease dar, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie aus einer erfindungsgemäßen Protease als Ausgangsmolekül erhaltbar ist und einen oder mehrere Aminosäureaustausche in Positionen aufweist, die den Positionen 3, 4, 36, 42, 47, 56, 61, 69, 87, 96, 99, 101, 102, 104, 114, 118, 120, 130, 139, 141, 142, 154, 157, 188, 193, 199, 205, 224, 229, 236, 237, 242, 243, 255 und 268 der Alkalischen Protease aus Bacillus lentus gemäß SEQ ID NO. A further subject of the invention provides a protease that is characterized in that it is obtainable from a protease of the invention as a starting molecule and having one or more amino acid substitutions in positions corresponding to the positions 3, 4, 36, 42, 47, 56, 61 , 69, 87, 96, 99, 101, 102, 104, 114, 118, 120, 130, 139, 141, 142, 154, 157, 188, 193, 199, 205, 224, 229, 236, 237, 242 , 243, 255 and 268 of the alkaline protease from Bacillus lentus as shown in SEQ ID NO. 3 in einem Alignment zugeordnet sind. are assigned in an alignment. 3 Die Aminosäurepositionen werden hierbei durch ein Alignment der Aminosäuresequenz einer erfindungsgemäßen Protease mit der Aminosäuresequenz der Alkalischen Protease aus Bacillus lentus, wie sie in SEQ ID NO. The amino acid positions are in this case by an alignment of the amino acid sequence of a protease of the invention having the amino acid sequence of the alkaline protease from Bacillus lentus as shown in SEQ ID NO. 3 angegeben ist, zugeordnet. 3 is indicated assigned. Auf diese Art und Weise werden so genannte homologe Positionen bestimmt. In this way so-called homologous positions are determined. Ein Beispiel für ein solches Alignment ist in An example of such an alignment is in 1 1 angegeben. specified.
  • Eine endgültige Bestätigung in der Zuordnung homologer Positionen, dh insbesondere deren funktionelle Entsprechung, können letztlich nur Vergleichsversuche liefern, wonach die beiden auf der Basis eines Alignments einander zugeordneten Positionen in beiden miteinander verglichenen Proteasen auf die gleiche Weise punktmutiert werden und beobachtet wird, ob bei beiden die enzymatische Aktivität auf gleiche Weise verändert wird. A final confirmation in the assignment of homologous positions, ie in particular its functional equivalent, can ultimately provide only comparative tests, after which the two on the basis of an alignment mutually associated positions in the two compared with each other proteases in the same manner be point mutated and observing whether both the enzymatic activity is changed in the same manner. Geht beispielsweise ein Aminosäureaustausch in einer bestimmten Position der B. lentus-Alkalische Protease (BLAP) mit einer Erhöhung von KM oder einem anderen enzymatischen Parameter einher, und wird tendenziell die gleiche Verschiebung des KM-Werts in einer erfindungsgemäßen Protease-Variante beobachtet, deren Aminosäureaustausch durch dieselbe eingeführte Aminosäure erreicht wurde, so ist hierin die Bestätigung dieses Erfindungsaspekts zu sehen. Is, for example, an amino acid substitution in a particular position of the B. lentus alkaline protease (BLAP) with an increase of KM or other enzymatic parameters associated, and tends to be observed in the same displacement of the KM-value in an inventive protease variant, the amino acid substitution was achieved by the same amino acid introduced, so it in any way the confirmation of this invention aspect.
  • In den genannten Positionen liegen in dem Wildtypmolekül der B. lentus-Alkalischen Protease folgende Aminosäurereste: S3, V4, S36, N42, A47, T56, G61, T69, E87, A96, R99, A101, I102, S104, N114, H118, A120, S130, S139, T141, S142, S154, S157, A188, V193, V199, G205, A224, K229, S236, N237, N242, H243, N255 beziehungsweise T268. In said positions lentus alkaline protease are present in the wild-type molecule of the example, the following amino acid residues: S3, V4, S36, N42, A47, T56, G61, T69, E87, A96, R99, A101, I102, S104, N114, H118, A120, S130, S139, T141, S142, S154, S157, A188, V193, V199, G205, A224, K229, S236, N237, N242, H243, N255 or T268.
  • Da neben der Alkalischen Protease aus Bacillus licheniformis die B. lentus-Alkalische Protease im Stand der Technik ein wichtiges Referenzmolekül zur Beschreibung neuer Proteasen und von Punktmutationen darstellt und die hier beschriebenen neuen Proteasen und somit auch ihre Sequenz bislang unbekannt sind, erscheint es vorteilhaft, in der Zuordnung der Punktmutationen auf die Zählung der Alkalische Protease aus Bacillus lentus Bezug zu nehmen. Because in addition to the alkaline protease from Bacillus B. licheniformis lentus alkaline protease in the prior art is an important reference molecule for describing novel proteases and of point mutations and the new proteases and thus their sequence described here are still unknown, it appears to be advantageous in to accept the assignment of point mutations on the count of the alkaline protease from Bacillus lentus reference. Weiterhin richtet sich die Zählung im Allgemeinen nach dem reifen (maturen) Protein. Furthermore, the count generally followed the mature (mature) protein. Vorteilhafte Positionen für Sequenzveränderungen, beispielsweise durch Punktmutationen, der Alkalischen Protease aus Bacillus lentus, die übertragen auf homologe Positionen der erfindungsgemäßen Proteasen bevorzugt von Bedeutung sind und der Protease vorteilhafte funktionelle Eigenschaften verleihen, werden nachfolgend angegeben. Advantageous positions for sequence changes, for example by point mutations, the alkaline protease from Bacillus lentus, transferred to homologous positions of the proteases of the invention preferably meaning and the protease advantageous impart functional properties are given below.
  • Aus der Anmeldung From the application WO 92/21760 A1 WO 92/21760 A1 gehen Einfach- und Mehrfachvarianten des Subtilisins aus Bacillus lentus DSM 5483 in folgenden Positionen hervor: 3, 4, 36, 42, 47, 56, 69, 87, 96, 101, 102, 104, 114, 118, 120, 130, 139, 141, 142, 157, 188, 193, 199, 205, 224, 229, 236, 237, 242, 243, 255 und 268. Die Anmeldung go single and multiple variants of the subtilisin from Bacillus lentus DSM 5483 in the following positions out: 3, 4, 36, 42, 47, 56, 69, 87, 96, 101, 102, 104, 114, 118, 120, 130, 139 , 141, 142, 157, 188, 193, 199, 205, 224, 229, 236, 237, 242, 243, 255 and 268. The application WO 95/23221 A1 WO 95/23221 A1 offenbart neben einer Veränderung der Position 211 zusätzlich Austausche an diesem Molekül in den Positionen 99 und 154, insbesondere R99G, R99A, R99S, S154D und S154E. discloses in addition to a change in the position 211 additionally exchanges on this molecule in positions 99 and 154, in particular, R99G, R99A, R99S, S154D and S154E. Die Anmeldung registration WO 02/088340 WO 02/088340 offenbart neben einer möglichen Veränderung an Position 211 weitere mögliche Aminosäureaustausche in einer oder mehreren der Positionen 3, 4 und 199, wobei die Austausche an Position 3 (zum Beispiel S3T) und an Position 4 (zum Beispiel V4I) vermutlich über einen Stabilisierungseffekt auf das Molekül zu einer Verbesserung seines Beitrags zur Waschleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels führen. discloses in addition to a possible change at position 211 other possible amino acid substitutions in one or more of positions 3, 4 and 199, wherein the substitutions at position 3 (for example, S3T) and at position 4 (for example, V4I) presumably through a stabilizing effect on the molecule lead to an improvement of its contribution to the washing performance of a washing or cleaning agent.
  • Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist eine zuvor beschriebene Protease, die zusätzlich stabilisiert ist, insbesondere durch Kopplung an ein Polymer. Another object of the invention is a previously described protease which is additionally stabilized, in particular by coupling to a polymer.
  • Denn eine Erhöhung der Stabilität bei der Lagerung und/oder während des Einsatzes, beispielsweise beim Waschprozess führt dazu, daß ihre Aktivität länger anhält und damit in der Wirkung verstärkt wird. For an increase in stability during storage and / or during use, for example, the washing process results in their activity lasts longer and is thus enhanced in its effect. Als Stabilisierungsmöglichkeiten kommen alle im Stand der Technik beschriebenen und zweckmäßigen Strategien in Betracht, bespielsweise die kovalente Kopplung an ein Polymer. As stabilization possibilities are all strategies described in the prior art and appropriate consideration, recordable, the covalent attachment to a polymer. Alternativ hierzu sind auch solche Stabilisierungen geeignet, die über Punktmutagenese des Moleküls selbst möglich sind (und aufgrund der Sequenzunterschiede bereits unter die oben beschriebenen Ausführungsformen fallen). Alternatively, even those stabilizations are suitable which themselves are possible via point mutagenesis of the molecule (and are already covered by the embodiments described above, due to the differences in sequence). Denn diese Stabilisierungen erfordern im Anschluß an die Proteingewinnung keine weiteren Arbeitsschritte. For these stabilizations require following the protein recovery no further work. Einige hierfür geeignete Punktmutationen sind an sich aus dem Stand der Technik bekannt. Some suitable therefor point mutations are known from the prior art. So können Proteasen beispielsweise dadurch stabilisiert werden, dass ein oder mehrere Tyrosin-Reste gegen andere proteinogene Aminosäuren austauscht. As proteases, for example, be stabilized by one or more tyrosine residues against other proteinogenic amino acids exchanges.
  • Eine weitere Möglichkeit zur Stabilisierung von Enzymen stellt beispielsweise Veränderung der Bindung von Metallionen, insbesondere der Bindung von Calcium-Ionen, durch Veränderung der entsprechenden Bindungsstellen, insbesondere der Calcium-Bindungsstellen, dar. Hierfür kann beispielsweise eine oder mehrere der an der Calcium-Bindung bzw. Metallionen-Bindung beteiligten Aminosäuren gegen negativ geladene Aminosäuren ausgetauscht werden. Another way to stabilize enzymes is, for example, altering the binding of metal ions, especially the binding of calcium ions, by changing the corresponding binding sites, in particular the calcium binding sites is. For this purpose, for example, one or more, the or to the calcium binding . metal ion binding amino acids involved are replaced with negatively charged amino acids. Alternativ oder zusätzlich können zur Stabilisierung über die Calcium-Bindung gleichzeitig in mindestens einer der Folgen der beiden Aminosäurereste Arginin/Glycin Punktmutationen eingeführt werden. Alternatively or additionally, can be introduced into at least one of the sequences of the two amino acid residues of arginine / glycine point mutations for stabilization via calcium binding simultaneously. Als eine weitere Möglichkeit zur Stabilisierung können Proteine durch Mutationen auf der Oberfläche des Proteins gegen den Einfluß von denaturierenden Agentien wie Tensiden, insbesondere ionischen Tensiden, geschützt werden. As a further possibility for stabilizing proteins may be protected by mutations on the surface of the protein against the effect of denaturing agents such as surfactants, especially nonionic surfactants. Insbesondere können hydrophobe Aminosäurereste durch stärker hydrophile Aminosäurereste ersetzt werden und/oder polare ungeladene Aminosäurereste durch sterisch anspruchsvollere Aminosäurereste, vor allem solche mit im Vergleich zur ursprünglich vorhandenen Aminosäure längeren hydrophilen Seitenketten, ersetzt werden und/oder ionische Aminosäuren ersetzt werden durch ungeladene hydrophile Aminosäurereste oder durch Aminosäurereste, deren Ladung nicht gegensätzlich zur Nettoladung des denaturierenden Agens, also beispielsweise des ionischen Tensids, ist. In particular, hydrophobic amino acid residues can be replaced by more hydrophilic amino acid residues and / or polar uncharged amino acid residues are replaced by bulkier amino acid residues, especially those having in comparison to the originally present amino acid longer hydrophilic side chains and / or ionic amino acids are replaced by uncharged hydrophilic amino acid residues, or by amino acid residues whose charge is not opposite to the net charge of the denaturing agent, so for example, the ionic surfactant.
  • Eine andere Möglichkeit zur Stabilisierung gegenüber erhöhter Temperatur und dem Einwirken von Tensiden ergibt sich durch den Austausch von Aminosäuren, die nahe des N-Terminus liegen, gegen solche Aminosäuren, die vermutlich über nicht-kovalente Wechselwirkungen mit dem Rest des Moleküls in Kontakt treten und somit einen Beitrag zur Aufrechterhaltung der globulären Struktur leisten. Another possibility for stabilization against elevated temperature and the action of surfactants results from the substitution of amino acids that lie near the N-terminus, to such amino acids, which presumably contact via non-covalent interactions with the rest of the molecule and thus contribute to maintaining the globular structure.
  • Bevorzugte Ausführungsformen sind solche, bei denen das Molekül auf mehrere Arten stabilisiert wird. Preferred embodiments are those in which the molecule is stabilized in several ways. Denn in der Regel wirken mehrere stabilisierende Mutationen additiv oder synergistisch auf die Gesamtstabilität des Enzyms. Because usually more stabilizing mutations act additively or synergistically to the overall stability of the enzyme. Besonders bevozugt sind daher Kombinationen von stabilisierenden Enzymveränderungen, die synergistisch zusammenwirken und sich in ihrer stabilisierenden Wirkung dahingehend ergänzen, dass die kombinatorisch erreichte Stabilisierung die bloße Summe der einzelnen Stabilisierungseffekte übersteigt. are therefore particularly bevozugt combinations of stabilizing enzyme changes that act synergistically and the effect supplement in their stabilizing effect that the stabilization combinatorially reached beyond the mere sum of the individual stabilizing effects.
  • Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellt eine Protease wie vorstehend beschrieben dar, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie mindestens eine chemische Modifikation aufweist. A further subject of the invention provides a protease as described above is, which is characterized in that it comprises at least one chemical modification. Eine Protease mit einer solchen Veränderung wird auch als Derivat bezeichnet, dh die Protease ist derivatisiert. A protease having such a change is also referred to as a derivative, ie, the protease is derivatized.
  • Unter Derivaten werden daher solche Proteine verstanden, die durch eine zusätzliche Modifikation aus den ausgeführten Proteinen erhalten werden. By derivatives is possible for such proteins are understood, which are obtained by an additional modification of the exported proteins. Bevorzugt handelt es sich hierbei um eine chemische Modifikation der erfindungsgemäßen Proteine. It is preferable that this is a chemical modification of the proteins of the invention. Derartige Modifikationen können beispielsweise die Stabilität, Substratspezifität oder die Bindungsstärke an das Substrat oder die enzymatische Aktivität beeinflussen. Such modifications can influence, for example, stability, substrate specificity or the strength of binding to the substrate or enzymatic activity. Sie können auch dazu dienen, um die Allergenizität und/oder Immunogenizität des Proteins herabzusetzen und damit beispielsweise dessen Hautverträglichkeit zu erhöhen. You can also serve to reduce the allergenicity and / or immunogenicity of the protein and thus for example to increase its skin compatibility.
  • Solche Derivatisierungen, insbesondere chemische Modifikationen, können beispielsweise auf biologischem Wege erfolgen, etwa im Zusammenhang mit der Proteinbiosynthese durch den produzierenden Wirtsorganismus. Such derivatizations, particularly chemical modifications can be carried out by biological means, for example, for example in connection with protein biosynthesis by the producing host organism. Hier sind Kopplungen niedrigmolekularer Verbindungen wie von Lipiden oder Oligosacchariden besonders hervorzuheben. Here are especially noteworthy coupling low molecular weight compounds such as lipids or oligosaccharides.
  • Derivatisierungen können aber auch auf chemischem Wege durchgeführt werden, etwa durch die chemische Umwandlung einer Seitenkette oder durch kovalente Bindung einer anderen, beispielsweise makromolekularen Verbindung an das Protein. However, derivatizations can also be carried out chemically, for example by the chemical conversion of a side chain or by covalent binding of another, for example, macromolecular compound to the protein. Beispielsweise kann die Kopplung von Aminen an Carboxylgruppen eines Enzyms eine Veränderung des isoelektrischen Punkts des Proteins bewirken. For example, the coupling of amines of an enzyme of carboxyl groups can cause a change in the isoelectric point of the protein. Ferner können beispielsweise weitere Makromoleküle wie Proteine, etwa über bifunktionelle chemische Verbindungen, an erfindungsgemäße Proteine gebunden werden. Further, for example, other macromolecules such as proteins, for instance via bifunctional chemical compounds that bind to proteins of the invention. So ist es beispielsweise möglich, ein erfindungsgemäßes Protein auch über einen Nichtprotein-Linker mit einer spezifischen Bindungsdomäne zu versehen. So it is for example possible to provide a protein of the invention also has a non-protein-linker with a specific binding domain. Solche Derivate eignen sich besonders für den Einsatz in in Wasch- oder Reinigungsmitteln. Such derivatives are particularly suitable for use in in detergents or cleaners. Analog können beispielsweise auch Protease-Inhibitoren über Linker, insbesondere Aminosäure-Linker an die erfindungsgemäßen Proteine gebunden werden. Analog also protease inhibitors via linkers, in particular amino acid linker can be bound to the proteins according to the invention, for example. Kopplungen mit sonstigen makromolekularen Verbindungen wie etwa Polyethylenglykol verbessern das Molekül hinsichtlich weiterer Eigenschaften wie Stabilität oder Hautverträglichkeit wie bereits vorstehend erläutert. Couplings with other macromolecular compounds such as polyethylene glycol, improve the molecule as already explained above with respect to other properties such as stability or skin compatibility.
  • Unter Derivaten erfindungsgemäßer Proteine können im weitesten Sinne auch Präparationen dieser Enzyme verstanden werden. Derivatives proteins of the invention in its broadest sense and preparations of these enzymes can be understood. Je nach Gewinnung, Aufarbeitung oder Präparation kann ein Protein mit diversen anderen Stoffen vergesellschaftet sein, beispielsweise aus der Kultur der produzierenden Mikroorganismen. Depending on the production, working up or preparation, a protein can be associated with various other substances, for example, from the culture of the producing microorganisms. Ein Protein kann auch, beispielsweise zur Erhöhung seiner Lagerstabilität, mit bestimmten anderen Stoffen gezielt versetzt worden sein. A protein may also have been targeted displaced for example to increase its storage stability, with certain other substances. Erfindungsgemäß sind deshalb auch alle Präparationen eines erfindungsgemäßen Proteins unabhängig davon, ob es in einer bestimmten Präparation tatsächlich die vorgesehene enzymatische Aktivität entfaltet oder nicht. therefore, all preparations of a protein according to the invention are independent of whether it does in fact produce the intended enzymatic activity in a particular preparation, not according to the invention. Denn es kann gewünscht sein, daß es bei der Lagerung keine oder nur geringe Aktivität besitzt, und erst zum Zeitpunkt der Verwendung seine enzymatische Funktion entfaltet. Because it can be desired that there is no or only has low activity in storage, and develops its enzymatic function only at the time of use. Dies kann beispielsweise über entsprechende Begleitstoffe gesteuert werden. This can for example be controlled by suitable accompanying substances. Insbesondere die gemeinsame Präparation von Proteasen mit Protease-Inhibitoren ist vorteilhaft und aus dem Stand der Technik bekannt. In particular, the joint preparation of proteases with protease inhibitors is advantageous and known in the prior art.
  • Die Lösung einer Teilaufgabe und somit einen eigenständigen Erfindungsgegenstand bilden Nukleinsäuremoleküle, die für eine erfindungsgemäße Protease kodieren sowie Vektoren, enthaltend eine solche Nukleinsäure. The solution of a partial object and thus an independent subject of the invention provide nucleic acid molecules encoding for a protease according to the invention as well as vectors containing such nucleic acid.
  • Unter Nukleinsäuren sind im Sinne der vorliegenden Anmeldung die natürlicherweise aus Nukleotiden aufgebauten als Informationsträger dienenden Moleküle zu verstehen, die für die lineare Aminosäureabfolge in Proteinen oder Enzymen codieren. Nucleic acids are understood to be naturally composed of nucleotides as an information carrier serving molecules in the context of the present application, which code for the linear amino acid sequence in proteins or enzymes. Sie können als Einzelstrang, als ein zu diesem Einzelstrang komplementärer Einzelstrang oder als Doppelstrang vorliegen. They can be present as a single strand, as a single strand complementary to that single strand or a double strand. Als der natürlicherweise dauerhaftere Informationsträger ist die Nukleinsäure DNA für molekularbiologische Arbeiten bevorzugt. As the naturally more durable information carrier, the nucleic acid DNA is preferred for molecular biological work. Demgegenüber wird für die Realisierung der Erfindung in natürlicher Umgebung, wie beispielsweise in einer exprimierenden Zelle, eine RNA gebildet, weshalb erfindungswesentliche RNA-Moleküle ebenfalls Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung darstellen. In contrast, an RNA is used for the realization of the invention in the natural environment, for example in an expressing cell, formed, so essential to the invention, RNA molecules also represent embodiments of the present invention.
  • Bei DNA sind die Sequenzen beider komplementärer Stränge in jeweils allen drei möglichen Leserastern zu berücksichtigen. With DNA, the sequences of both complementary strands in all three possible reading frames have to be considered. Ferner ist zu berücksichtigen, dass verschiedene Codon-Triplets für dieselben Aminosäuren codieren können, so dass eine bestimmte Aminosäure-Abfolge von mehreren unterschiedlichen und möglicherweise nur geringe Identität aufweisenden Nukleotidsequenzen abgeleitet werden kann, was als Degeneriertheit des genetischen Codes bezeichnet wird. Further, it should be noted that different codon triplets can code for the same amino acids, so that a particular amino acid sequence of several different and may only have low identity Nucleotide sequences may be derived which is called degeneracy of the genetic code. Außerdem weisen verschiedene Organismen Unterschiede im Gebrauch dieser Codons auf. In addition, different organisms show differences in the use of these codons. Aus diesen Gründen müssen sowohl Aminosäuresequenzen als auch Nukleotidsequenzen in die Betrachtung des Schutzbereichs einbezogen werden. For these reasons, both amino acid sequences and nucleotide sequences must be included in the scope of protection. Daher sind sämtliche Nukleotidsequenzen in die Erfindung mit eingeschlossen, die eine der vorstehend beschriebenen Enzyme kodieren können. Therefore, all nucleotide sequences are included in the invention, which can encode one of the enzymes described above. Der Fachmann ist in der Lage, diese Nukleotidsequenzen zweifelsfrei zu bestimmen, da trotz der Degeneriertheit des genetischen Codes einzelnen Codons definierte Aminosäuren zuzuordnen sind. The expert is able to determine these nucleotide sequences doubt because in spite of the degeneracy of the genetic code defined individual codons amino acids are attributable. Daher kann der Fachmann ausgehend von einer sind jeweils nur als eine beispielhafte Codierung für eine bestimmte Aminosäurefolge anzusehen. Therefore, the expert can from a can serve only as an example of coding for a particular amino acid sequence.
  • Die einem Protein entsprechende Informationseinheit wird auch im Sinne der vorliegenden Anmeldung als Gen bezeichnet. The protein corresponding to a unit of information is also referred to in the present application as a gene.
  • Einem Fachmann ist es über heutzutage allgemein bekannte Methoden, wie beispielsweise die chemische Synthese oder die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in Verbindung mit molekularbiologischen und/oder proteinchemischen Standardmethoden möglich, anhand bekannter DNA- und/oder Aminosäuresequenzen die entsprechenden Nukleinsäuren bis hin zu vollständigen Genen herzustellen. An expert, it is possible via nowadays generally known methods such as chemical synthesis or the polymerase chain reaction (PCR) in combination with molecular biological and / or protein-chemical standard methods based on known DNA and / or amino acid sequences corresponding nucleic acids up to complete genes manufacture. Derartige Methoden sind beispielsweise aus Such methods are, for example, bekannt. known.
  • Änderungen der Nukleotidsequenz, wie sie beispielsweise durch an sich bekannte molekularbiologische Methoden herbeigeführt werden können, werden als Mutationen bezeichnet. Changes in the nucleotide sequence as they can be produced, for example, by per se known methods of molecular biology are called mutations. Je nach Art der Änderung kennt man beispielsweise Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutationen oder solche, bei denen verschiedene Gene oder Teile von Genen miteinander fusioniert oder rekombiniert werden; Depending on the nature of the change are known, for example, deletion, insertion or substitution mutations or those in which various genes or parts of genes are fused together or recombined; dies sind Genmutationen. these are gene mutations. Die zugehörigen Organismen werden als Mutanten bezeichnet. The associated organisms are referred to as mutants. Die von mutierten Nukleinsäuren abgeleiteten Proteine werden als Varianten bezeichnet. The proteins derived from mutated nucleic acids are referred to as variants. So führen beispielsweise Deletions-, Insertions-Substitutionsmutationen oder Fusionen zu deletions-, insertions-substitutionsmutierten oder Fusionsgenen und auf Proteinebene zu entsprechenden Deletions-, Insertions- oder Substitutionsvarianten, beziehungsweise Fusionsproteinen. For example, deletion, insertion substitution mutations or fusions result in deletion, insertion or fusion genes and, at the protein level, to corresponding deletion, insertion or substitution variants, or fusion proteins.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Nukleinsäuremolekül, das für eine erfindungsgemäße Protease kodiert, dadurch gekennzeichnet, dass es zu der in SEQ ID NO. In a preferred embodiment of the invention, the nucleic acid molecule which encodes for a protease according to the invention, characterized in that it in SEQ ID NO. 1 angegebenen Nukleinsäuresequenz zunehmend bevorzugt zu mindestens 78,5%, 80%, 82,5%, 85%, 87,5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99% und ganz besonders bevorzugt zu 99,25% identisch ist. 1 given nucleic acid sequence increasingly preferably to at least 78.5%, 80%, 82.5%, 85%, 87.5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93.5%, 94%, 94, 5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99%, and most preferably about 99.25% identical.
  • Bevorzugt sind solche Nukleinsäuren, die für reife (mature) Proteine codieren, und zunehmend bevorzugt sind besonders solche, die für zunehmend aktive Varianten der erfindungsgemäßen Proteine codieren. those nucleic acids that encode proteins for mature (mature) are preferred, and increasingly preferred are particularly those encoding increasingly active variants of the proteins of the invention.
  • Weiterhin bevorzugt sind solche Nukleinsäuren, von denen eines oder vorzugsweise mehrere Codons durch synonyme Codons ersetzt worden sind. Further preferably, such nucleic acids, of which more codons are one or preferably been replaced by synonymous codons.
  • Dieser Aspekt bezieht sich auf die heterologe Expression der betreffenden Proteasen. This aspect relates to the heterologous expression of the relevant proteases. So besitzt jeder Organismus, insbesondere jeder Produktionsstamm über eine gewisse Codon-Usage. So has every organism, in particular each production strain over a certain codon usage. Hierbei kann es zu Engpässen in der Proteinbiosynthese kommen, wenn die auf der transgenen Nukleinsäure liegenden Codons in der Wirtszelle einer vergleichsweise geringen Zahl von beladenen tRNAs gegenüberstehen. This can lead to bottlenecks in protein biosynthesis, if the codons lying on the transgenic nucleic acid facing in the host cell a comparatively small number of charged tRNAs. Synonyme Codons codieren dagegen für dieselben Aminosäuren und können in Abhängigkeit vom Wirt besser translatiert werden. Synonymous codons encode the other hand, for the same amino acids and can be better translated, depending on the host. Dieses gegebenenfalls notwendige Umschreiben hängt somit von der Wahl des Expressionssystems. This any necessary rewriting thus depends on the choice of expression system. Insbesondere bei Proben aus unbekannten, eventuell nicht kultivierbaren Organismen kann eine entsprechende Anpassung notwendig sein. Especially with samples from unknown, possibly not culturable organisms, a corresponding adjustment may be necessary.
  • Die vorliegende Erfindung umfasst die Herstellung rekombinanter Proteine. The present invention encompasses the production of recombinant proteins. Hierunter sind erfindungsgemäß alle gentechnischen oder mikrobiologischen Verfahren zu verstehen, die darauf beruhen, dass die Gene für die interessierenden Proteine in eine für die Produktion geeignete Wirtszelle eingebracht und von dieser transkribiert und translatiert werden. Among these, according to the invention to understand all the genetic and microbiological methods, which are based on the genes that are introduced for the proteins of interest in a suitable host cell for the production of and transcribed from this and translated. Geeigneterweise erfolgt die Einschleusung der betreffenden Gene über Vektoren, insbesondere Expressionsvektoren; Suitably, the introduction of the genes concerned about vectors, in particular expression vectors; aber auch über solche, die bewirken, dass das interessierende Gen in der Wirtszelle in ein bereits vorhandenes genetisches Element wie das Chromosom oder andere Vektoren eingefügt werden kann. but also those which cause the gene of interest in the host cell can be inserted into an existing genetic element, such as the chromosome or other vectors. Die funktionelle Einheit aus Gen und Promotor und eventuellen weiteren genetischen Elementen wird erfindungsgemäß als Expressionskassette bezeichnet. The functional unit of gene and promoter and any other genetic elements according to the invention referred to as expression cassette. Sie muss dafür jedoch nicht notwendigerweise auch als physische Einheit vorliegen. However, you must ensure not necessarily present as a physical unit.
  • Unter Vektoren werden im Sinne der vorliegenden Erfindung aus Nukleinsäuren bestehende Elemente verstanden, die als kennzeichnenden Nukleinsäurebereich ein interessierendes Gen enthalten. Vectors of the present invention will be understood from existing elements within the meaning nucleic acids which contain, as characteristic nucleic acid region of a gene of interest. Sie vermögen dieses in einer Spezies oder einer Zellinie über mehrere Generationen oder Zellteilungen hinweg als stabiles genetisches Element zu etablieren. They are able to establish this in a species or a cell line over several generations or cell divisions as a stable genetic element. Vektoren sind insbesondere bei der Verwendung in Bakterien spezielle Plasmide, also zirkulare genetische Elemente. Vectors are special plasmids, in particular for use in bacteria, ie circular genetic elements. Man unterscheidet in der Gentechnik einerseits zwischen solchen Vektoren, die der Lagerung und somit gewissermaßen auch der gentechnischen Arbeit dienen, den sogenannten Klonierungsvektoren, und andererseits denen, die die Funktion erfüllen, das interessierende Gen in der Wirtszelle zu realisieren, das heißt, die Expression des betreffenden Proteins zu ermöglichen. in genetic engineering, a distinction on the one hand between those vectors which serve for storage and thus to a certain extent also for genetic engineering work, the so-called cloning vectors, and on the other hand those who fulfill the function to realize the gene of interest in the host cell, i.e. the expression of the to enable the protein in question. Diese Vektoren werden als Expressionsvektoren bezeichnet. These vectors are referred to as expression vectors.
  • Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird die Nukleinsäure geeigneterweise in einen Vektor kloniert. In the present invention, the nucleic acid is suitably cloned in a vector. Die molekularbiologische Dimension der Erfindung besteht somit in Vektoren mit den Genen für die entsprechenden Proteine. The molecular dimension of the invention is thus to vectors containing the genes for the corresponding proteins. Dazu können beispielsweise solche gehören, die sich von bakteriellen Plasmiden, von Viren oder von Bacteriophagen ableiten, oder überwiegend synthetische Vektoren oder Plasmide mit Elementen verschiedenster Herkunft. For this example, they can include those derived from bacterial plasmids, from viruses or from bacteriophages, or predominantly synthetic vectors or plasmids with elements verschiedenster origin. Mit den weiteren jeweils vorhandenen genetischen Elementen vermögen Vektoren, sich in den betreffenden Wirtszellen über mehrere Generationen hinweg als stabile Einheiten zu etablieren. With each of the additional genetic elements existing vectors are able to establish themselves in the respective host cells over several generations as stable units. Es ist dabei im Sinne der Erfindung unerheblich, ob sie sich extrachomosomal als eigene Einheiten etablieren oder in ein Chromosom integrieren. It is irrelevant for the purposes of the invention, whether they establish themselves extrachromosomally as independent units or integrated into a chromosome. Welches der zahlreichen aus dem Stand der Technik bekannten Systeme gewählt wird, hängt vom Einzelfall ab. Which of the numerous known from the prior art is selected depends on the individual case. Ausschlaggebend können beispielsweise die erreichbare Kopienzahl, die zur Verfügung stehenden Selektionssysteme, darunter vor allem Antibiotikaresistenzen, oder die Kultivierbarkeit der zur Aufnahme der Vektoren befähigten Wirtszellen sein. Decisive for example, the achievable copy number, the selection systems available, including in particular antibiotic resistance, or the Culturability capable of accommodating the vectors, host cells can be.
  • Die Vektoren bilden geeignete Ausgangspunkte für molekularbiologische und biochemische Untersuchungen des betreffenden Gens oder zugehörigen Proteins und für erfindungsgemäße Weiterentwicklungen und letztlich für die Amplifikation und Produktion erfindungsgemäßer Proteine. The vectors form suitable starting points for molecular-biological and biochemical investigations of the gene or associated protein and for further developments according to the invention and ultimately for the amplification and production of proteins of the invention. Sie stellen insofern Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung dar, als die Sequenzen der enthaltenen erfindungsgemäßen Nukleinsäurebereiche jeweils innerhalb der oben näher bezeichneten Homologiebereiche liegen. insofar as they represent embodiments of the present invention, as the sequences of the nucleic acid regions according to the invention are each contained within the above-defined regions of homology.
  • Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellen somit Vektoren dar, die mindestens ein Nukleinsäuremolekül beinhalten, welches für eine erfindungsgemäße Protease kodiert, insbesondere ein Nukleinsäuremolekül, wie es vorstehend beschrieben ist. A further subject of the invention thus represent vectors that contain at least one nucleic acid molecule encoding an inventive protease, in particular a nucleic acid molecule as described above. In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist der Vektor dadurch gekennzeichnet, dass der Vektor ein Klonierungsvektor oder ein Expressionsvektor ist. In a further embodiment of the invention the vector is characterized in that the vector is a cloning vector or an expression vector. Klonierungsvektoren eignen sich neben der Lagerung, der biologischen Amplifikation oder der Selektion des interessierenden Gens für die Charakterisierung des betreffenden Gens, etwa über das Erstellen einer Restriktionskarte oder die Sequenzierung. Cloning vectors are, in addition to storage, biological amplification and selection of the gene of interest for the characterization of the gene, for example via the creation of a restriction map or sequencing. Klonierungsvektoren sind auch deshalb bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung, weil sie eine transportierbare und lagerfähige Form der beanspruchten DNA darstellen. Cloning vectors are also preferred embodiments of the present invention, because they represent a transportable and storable form of the claimed DNA. Sie sind auch bevorzugte Ausgangspunkte für molekularbiologische Techniken, die nicht an Zellen gebunden sind, wie beispielsweise die Polymerasekettenreaktion. They are also preferred starting points for molecular biological techniques not linked to cells, such as the polymerase chain reaction.
  • Expressionsvektoren sind chemisch den Klonierungsvektoren ähnlich, unterscheiden sich aber in jenen Teilsequenzen, die sie dazu befähigen, in den für die Produktion von Proteinen optimierten Wirtszellen oder Wirtsorganismen zu replizieren und dort das enthaltene Gen zur Expression zu bringen. Expression vectors are chemically similar to the cloning vectors, but differ in that part of sequences which enable them to replicate and to the production of proteins for optimized host cells or host organisms to cause the gene to expression there. Bevorzugte Ausführungsformen sind Expressionsvektoren, die selbst die zur Expression notwendigen genetischen Elemente tragen. Preferred embodiments are expression vectors which themselves carry the genetic elements necessary for expression. Die Expression wird beispielsweise von Promotoren beeinflußt, welche die Transkription des Gens regulieren. Expression is influenced, for example, by promoters which regulate the transcription of the gene. So kann die Expression durch den natürlichen, ursprünglich vor diesem Gen lokalisierten Promotor erfolgen, aber auch nach gentechnischer Fusion sowohl durch einen auf dem Expressionsvektor bereitgestellten Promotor der Wirtszelle als auch durch einen modifizierten oder einen völlig anderen Promotor eines anderen Organismus oder einer anderen Wirtszelle. Thus, expression can take place by the natural, original is located upstream of this gene promoter, but also by genetic fusion both through a provided on the expression vector promoter of the host cell and by a modified, or an entirely different promoter of another organism, or other host cell.
  • Bevorzugte Ausführungsformen sind solche Expressionsvektoren, die über Änderungen der Kulturbedingungen oder Zugabe von bestimmten Verbindungen, wie beispielsweise die Zelldichte oder spezielle Faktoren, regulierbar sind. Preferred embodiments are those expression vectors of changes in the culture conditions or by adding certain compounds, such as for example the cell density or special factors are regulated. Expressionsvektoren ermöglichen, dass das zugehörige Protein heterolog, also in einer anderen Zelle bzw. Wirtszelle als derjenigen, aus der es natürlicherweise gewonnen werden kann, produziert wird. Expression vectors enable the associated protein to be heterologously, ie in a different cell or host cell as that from which it can be naturally derived, is produced. Die Zellen können dabei durchaus zu verschiedenen Organismen zugehörig sein oder von verschiedenen Organismen stammen. The cells may well be associated with different organisms or from different organisms. Auch eine homologe Proteingewinnung aus einer das Gen natürlicherweise exprimierenden Wirtszelle über einen passenden Vektor liegt innerhalb des Schutzbereichs der vorliegenden Erfindung. Also, a homologous protein recovery from a gene naturally expressing host cell via an appropriate vector is within the scope of the present invention. Diese kann den Vorteil aufweisen, dass natürliche, mit der Translation in einem Zusammenhang stehende Modifikationsreaktionen an dem entstehenden Protein genauso durchgeführt werden, wie sie auch natürlicherweise ablaufen würden. This may have the advantage that natural, standing in connection with a translational modification reactions are carried out on the resulting protein as much as they would take place naturally.
  • Eine weitere Ausführungsform stellen Expressionssysteme dar, bei denen zusätzliche Gene, beispielsweise solche, die auf anderen Vektoren zur Verfügung gestellt werden, die Produktion erfindungsgemäßer Proteine beeinflussen. Another embodiment is represented by expression systems in which additional genes, such as those that are made available on other vectors, the production of inventive proteins. Hierbei kann es sich um modifizierende Genprodukte handeln oder um solche, die mit dem erfindungsgemäßen Protein gemeinsam aufgereinigt werden sollen, etwa um dessen enzymatische Funktion zu beeinflussen. This may be modifying gene products or those which are to be purified together with the protein of the invention to influence, for example to its enzymatic function. Dabei kann es sich beispielsweise um andere Proteine oder Enzyme, um Inhibitoren oder um solche Elemente handeln, die die Wechselwirkung mit verschiedenen Substraten beinflussen. It may, for example, inhibitors or those elements which influence the interaction with various substrates, other proteins or enzymes.
  • Alternative Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung können auch zellfreie Expressionssysteme sein, bei denen die Proteinbiosynthese in vitro nachvollzogen wird. Alternative embodiments of the present invention may also be cell-free expression systems, in which the protein biosynthesis is reconstructed in vitro. Derartige Expressionssysteme sind im Stand der Technik ebenfalls etabliert. Such expression systems are also established in the art.
  • Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist eine nicht menschliche Wirtszelle, die eine erfindungsgemäße Protease oder ein Fragment derselben beinhaltet oder die zu deren Herstellung angeregt werden kann, vorzugsweise unter Einsatz eines Expressionsvektors. Another object of the invention is a non-human host cell, which includes a protease of the invention or a fragment thereof, or can be induced to their preparation, preferably using an expression vector. Die in-vivo-Synthese eines erfindungsgemäßen Enzyms, also die durch lebende Zellen, erfordert den Transfer des zugehörigen Gens in eine Wirtszelle, deren sogenannte Transformation. The in vivo synthesis of an enzyme according to the invention, ie by living cells that requires the transfer of the associated gene into a host cell, the so-called transformation. Als Wirtszellen eignen sich prinzipiell alle Zellen, das heißt prokaryotische oder eukaryotische Zellen. Suitable host cells are in principle all cells are suitable, that is prokaryotic or eukaryotic cells. Bevorzugt sind solche Wirtszellen, die sich genetisch vorteilhaft handhaben lassen, was beispielsweise die Transformation mit dem Expressionsvektor und dessen stabile Etablierung angeht, beispielsweise einzellige Pilze oder Bakterien. Such host cells can be genetically handled advantageous as regards for example, transformation with the expression vector and its stable establishment, such as unicellular fungi or bacteria. Zudem zeichnen sich bevorzugte Wirtszellen durch eine gute mikrobiologische und biotechnologische Handhabbarkeit aus. Moreover, preferred host cells are distinguished by good microbiological and biotechnological manageability. Das betrifft beispielsweise leichte Kultivierbarkeit, hohe Wachstumsraten, geringe Anforderungen an Fermentationsmedien und gute Produktions- und Sekretionsraten für Fremdproteine. This applies, for example, ease of cultivation, high growth rates, low demands on fermentation media and good production and secretion rates for foreign proteins. Häufig müssen aus der Fülle an verschiedenen nach dem Stand der Technik zur Verfügung stehenden Systeme die optimalen Expressionssysteme für den Einzelfall experimentell ermitteln werden. Often, the optimal expression systems must be determined experimentally for the individual case from the abundance of different available in the prior art systems. Jedes erfindungsgemäße Protein kann auf diese Weise aus einer Vielzahl von Wirtszellen gewonnen werden. Each protein according to the invention can be obtained in this way from a variety of host cells. Auch solche Wirtszellen sind bevorzugt, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie nach Transformation mit einem der oben beschriebenen Vektoren erhalten worden sind. Also, such host cells are preferred, which are characterized in that they are obtained after transformation with one of the vectors described above. Dabei kann es sich beispielsweise um Klonierungsvektoren handeln, die zur Lagerung und/oder Modifikation beispielsweise in einen beliebigen Bakterienstamm oder eine andere erfindungsgemäße Wirtszelle eingebracht worden sind. This may for example, be cloning vectors have been introduced for storage and / or modification, for example, in any bacterial strain or other host cell of the invention. Solche Schritte sind in der Lagerung und in der Weiterentwicklung betreffender genetischer Elemente allgemein verbreitet. Such steps are common in storage and in the further development of relevant genetic elements. Da aus diesen Wirtszellen die betreffenden genetischen Elemente in nachfolgende, zur Expression geeignete Wirtszellen unmittelbar übertragen werden können, handelt es sich auch bei den vorangegangenen Transformationsprodukten um Verwirklichungen des betreffenden Erfindungsgegenstands. Since the relevant genetic elements in the following, suitable for expression host cells can be transferred directly from these host cells, it is also in the preceding transformation products realizations of the subject invention the article.
  • Bevorzugte Ausführungsformen stellen solche Wirtszellen dar, die aufgrund genetischer Regulationselemente, die beispielsweise auf dem Expressionsvektor zur Verfügung gestellt werden, aber auch von vornherein in diesen Zellen vorhanden sein können, in ihrer Aktivität regulierbar sind. Preferred embodiments are those host cells which are adjustable due to genetic regulatory elements which are made for example in the expression vector are available, but also may be present from the outset in these cells in their activity. Beispielsweise durch kontrollierte Zugabe von chemischen Verbindungen, die als Aktivatoren dienen, durch Änderung der Kultivierungsbedingungen oder bei Erreichen einer bestimmten Zelldichte können diese zur Expression angeregt werden. For example, by controlled addition of chemical compounds serving as activators, by changing the cultivation conditions or on reaching a certain cell density, they can be stimulated to expression. Dies ermöglicht eine sehr wirtschaftliche Produktion der interessierenden Proteine. This allows a very economical production of proteins of interest.
  • Bevorzugte Wirtszellen sind prokaryontische oder bakterielle Zellen. Preferred host cells are prokaryotic or bacterial cells. Bakterien zeichnen sich gegenüber Eukaryonten in der Regel durch kürzere Generationszeiten und geringere Ansprüche an die Kultivierungsbedingungen aus. Bacteria are distinguished from eukaryotes usually by shorter generation times and less demanding cultivation conditions from. Dadurch können kostengünstige Verfahren zur Gewinnung erfindungsgemäßer Proteine etabliert werden. This cost-effective method for obtaining proteins of the invention can be established. Bei gramnegativen Bakterien, wie beispielsweise Escherichia coli (E. coli), werden eine Vielzahl von Proteinen in den periplasmatischen Raum sekretiert, also in das Kompartiment zwischen den beiden die Zellen einschließenden Membranen. In gram-negative bacteria such as Escherichia coli (E. coli), a large number of proteins are secreted into the periplasmic space, thus enclosing in the compartment between the two cell membranes. Dies kann für spezielle Anwendungen vorteilhaft sein. This can be advantageous for particular applications. Grampositive Bakterien, wie beispielsweise Bacilli oder Actinomyceten oder andere Vertreter der Actinomycetales, besitzen demgegenüber keine äußere Membran, so dass sekretierte Proteine sogleich in das die Zellen umgebende Nährmedium abgegeben werden, aus welchem sich nach einer weiteren bevorzugten Ausführungsform die exprimierten erfindungsgemäßen Proteine direkt aufreinigen lassen. Gram-positive bacteria, such as Bacilli, or Actinomycetes, or other members of the Actinomycetales, in contrast, have no outer membrane so that secreted proteins immediately into which the cells are submitted surrounding nutrient medium, from which can be directly purified, the expressed proteins according to the invention according to another preferred embodiment.
  • Bevorzugtermaßen ist die Wirtszelle daher dadurch gekennzeichnet, dass sie das erfindungsgemäße Protein oder ein Fragment oder Derivat hiervon ins umgebende Medium sezerniert. Preferably, said host cell is therefore characterized in that they thereof secreted protein of the invention or a fragment or derivative into the surrounding medium. Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellen somit Wirtszellen dar, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie die Protease oder ein Fragment derselben in das die Wirtszelle umgebende Medium sezernieren. A further subject of the invention thus constitute host cells, which are characterized in that they have the protease or a fragment thereof in which the host cell secrete surrounding medium.
  • In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist die erfindungsgemäße Wirtszelle dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Bakterium ist, insbesondere eines, welches ausgewählt ist aus der Gruppe der Gattungen von Escherichia, Klebsiella, Bacillus, Staphylococcus, Corynebakterium, Arthrobacter, Streptomyces, Stenotrophomonas und Pseudomonas. In a further preferred embodiment, the host cell of the invention is characterized in that it is a bacterium, in particular one which is selected from the group of genera Escherichia, Klebsiella, Bacillus, Staphylococcus, Corynebacterium, Arthrobacter, Streptomyces, Stenotrophomonas and Pseudomonas.
  • Besonders bevorzugt handelt es sich bei der Wirtszelle um ein Bakterium, welches ausgewählt ist aus der Gruppe von Escherichia coli, Klebsiella planticola, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus alcalophilus, Bacillus globigii gibsonii, Bacillus pumilus, Staphylococcus carnosus, Corynebacterium glutamicum, Arthrobacter oxidans, Streptomyces lividans, Streptomyces coelicolor und Stenotrophomonas maltophilia. Particularly preferably, the host cell is a bacterium which is selected from the group of Escherichia coli, Klebsiella planticola, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus alcalophilus, Bacillus globigii gibsonii, Bacillus pumilus, Staphylococcus carnosus, Corynebacterium glutamicum, Arthrobacter oxidans, Streptomyces lividans, Streptomyces coelicolor and Stenotrophomonas maltophilia.
  • Die Wirtszellen können hinsichtlich ihrer Anforderungen an die Kulturbedingungen verändert sein, andere oder zusätzliche Selektionsmarker aufweisen oder andere oder zusätzliche Proteine exprimieren. The host cells may be altered to the culture conditions with respect to their requirements, have other or additional selection marker or express other or additional proteins. Es kann sich insbesondere um solche Wirtszellen handeln, die zusätzlich zu dem erfindungsgemäß hergestellten Protein noch weitere, insbesondere wirtschaftlich interessante Proteine exprimieren. It can be, in particular those host cells which express in addition to the inventively produced protein further, particularly economically interesting proteins.
  • Die Wirtszelle kann aber auch eine eukaryontische Zelle sein, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie einen Zellkern besitzt. However, the host cell may be a eukaryotic cell, which is characterized in that it possesses a nucleus. Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellt daher eine Wirtszelle dar, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie einen Zellkern besitzt. Therefore in another aspect of the invention provides a host cell, which is characterized in that it possesses a nucleus.
  • Im Gegensatz zu prokaryontischen Zellen sind eukaryontische Zellen in der Lage, das gebildete Protein posttranslational zu modifizieren. In contrast to prokaryotic cells, eukaryotic cells are able to modify posttranslationally the protein produced. Beispiele dafür sind Pilze wie Actinomyceten oder Hefen wie Saccharomyces oder Kluyveromyces. Examples include fungi such as actinomycetes or yeasts such as Saccharomyces or Kluyveromyces. Dies kann beispielsweise dann besonders vorteilhaft sein, wenn die Proteine im Zusammenhang mit ihrer Synthese spezifische Modifikationen erfahren sollen, die derartige Systeme ermöglichen. This can for example be particularly advantageous if the proteins in connection with their synthesis to learn specific modifications which enable such systems. Zu den Modifikationen, die eukaryontische Systeme besonders im Zusammenhang mit der Proteinsynthese durchführen, gehören beispielsweise die Bindung niedermolekularer Verbindungen wie Membrananker oder Oligosaccharide. The modifications that perform eukaryotic systems particularly in the context of protein synthesis, include, for example, the binding of small molecules such as membrane anchors or oligosaccharides. Derartige Oligosaccharid-Modifikationen können beispielsweise zur Senkung der Allergenizität wünschenswert sein. Oligosaccharide modifications may be for example desirable to reduce the allergenicity. Auch eine Coexpression mit den natürlicherweise von derartigen Zellen gebildeten Enzymen, wie beispielsweise Cellulasen, kann vorteilhaft sein. Coexpression with the formed naturally by cells such enzymes such as cellulases may also be advantageous. Thermophile pilzliche Expressionssysteme eignen sich beispielsweise besonders zur Expression temperaturbeständiger Enzyme beziehungsweise von Enzymvarianten. Thermophilic fungal expression systems are, for example, especially for the expression of heat-resistant enzymes or enzyme variants.
  • Die erfindungsgemäßen Wirtszellen werden in an sich bekannter Weise kultiviert und fermentiert, beispielsweise in diskontinuierlichen oder kontinuierlichen Systemen. The host cells according to the invention are cultured in a conventional manner and fermented, for example in batch or continuous systems. Im ersten Fall wird ein geeignetes Nährmedium mit den Wirtszellen beimpft und das Produkt nach einem experimentell zu ermittelnden Zeitraum aus dem Medium geerntet. In the first case a suitable nutrient medium with the host cell is inoculated and harvested the product after a period of time to be determined experimentally from the medium. Kontinuierliche Fermentationen zeichnen sich durch Erreichen eines Fließgleichgewichts aus, in dem über einen vergleichsweise langen Zeitraum Zellen teilweise absterben aber auch nachwachsen und gleichzeitig Produkt aus dem Medium entnommen werden kann. Continuous fermentations are characterized by attainment of a steady state in which, over a comparatively long period of time cells partially die but also grow and at the same product from the medium can be removed.
  • Fermentationsverfahren sind an sich aus dem Stand der Technik bekannt und stellen den eigentlichen großtechnischen Produktionsschritt dar, in der Regel gefolgt von einer geeigneten Aufreinigungsmethode des hergestellten Produktes, beispielsweise des rekombinanten Proteins. Fermentation processes are known per se from the prior art and represent the actual industrial production step, usually followed by a suitable purification method of the manufactured product, for example the recombinant protein. Alle Fermentationsverfahren, die auf einem der oben ausgeführten Verfahren zur Herstellung der rekombinanten Proteine beruhen, stellen entsprechend bevorzugte Ausführungsformen dieses Erfindungsgegenstandes dar. All fermentation process, based on any of the methods outlined above for preparing the recombinant proteins, correspondingly represent preferred embodiments of this invention the article.
  • Hierbei müssen die für die eingesetzten Herstellungsverfahren, für die Wirtszellen und/oder die herzustellenden Proteine jeweils optimalen Bedingungen anhand der zuvor optimierten Kulturbedingungen der betreffenden Stämme nach dem Wissen des Fachmanns, beispielsweise hinsichlich Fermentationsvolumen, Medienzusammensetzung, Sauerstoffversorgung oder Rührergeschwindigkeit experimentell ermittelt werden. Here, the respective optimum conditions for the employed manufacturing method, for the host cells and / or proteins to be produced on the basis of previously optimized culture conditions of the relevant strains must fermentation volume, medium composition, oxygenation or stirring rate, to the knowledge of the skilled person, for example hinsichlich.
  • Fermentationsverfahren, die dadurch gekennzeichnet sind, dass die Fermentation über eine Zulaufstrategie durchgeführt wird, kommen ebenfalls in Betracht. Fermentation processes, which are characterized in that the fermentation is carried out with a supply strategy, are also contemplated. Hierbei werden die Medienbestandteile, die durch die fortlaufende Kultivierung verbraucht werden, zugefüttert; Here, the media components that are consumed by the continuous cultivation are fed; man spricht auch von einer Zufütterungsstrategie. it is also called a feed strategy. Hierdurch können beträchtliche Steigerungen sowohl in der Zelldichte, als auch in der Biotrockenmasse und/oder vor allem der Aktivität des interessierenden Proteins erreicht werden. This makes it possible to achieve significant increases in both the cell density, and in the dry biomass and / or especially the activity of the protein of interest.
  • Analog dazu kann die Fermentation auch so gestaltet werden, dass unerwünschte Stoffwechselprodukte herausgefiltert oder durch Zugabe von Puffer oder jeweils passende Gegenionen neutralisiert werden. The fermentation can also be designed so analogous to that unwanted metabolic products filtered out or be neutralized by the addition of buffer or matching counter ions.
  • Das hergestellte Protein kann nachträglich aus dem Fermentationsmedium geerntet werden. The protein produced may be subsequently harvested from the fermentation medium. Dieses Fermentationsverfahren ist gegenüber der Produktaufbereitung aus der Trockenmasse bevorzugt, erfordert jedoch die Zurverfügungstellung geeigneter Sekretionsmarker und Transportsysteme. This fermentation process is preferred over the product preparation from the dry mass, however, requires the availability of suitable secretion and transport systems. Ohne Sekretion ist unter Umständen die Aufreinigung des Proteins aus der Zellmasse erforderlich, auch dazu sind verschiedene Verfahren bekannt, wie Fällung zum Beispiel durch Ammoniumsulfat oder Ethanol, oder die chromatographische Reinigung, wenn erforderlich bis zur Homogenität. Without secretion under certain circumstances the purification of the protein from the cell mass is required, also, various methods are known such as, for example, precipitation by ammonium sulfate or ethanol, or chromatographic purification, if needed until homogeneous. Die Mehrzahl der beschriebenen technischen Verfahren dürfte jedoch mit einer angereicherten, stabilisierten Präparation auskommen. The majority of the described techniques should be done with an enriched, stabilized preparation.
  • Alle bereits oben ausgeführten Elemente können zu Verfahren kombiniert werden, um erfindungsgemäße Proteine herzustellen. All the above listed elements can be combined to methods to produce proteins of the invention. Es ist dabei für jedes erfindungsgemäße Protein eine Vielzahl von Kombinationsmöglichkeiten an Verfahrensschritten denkbar. It is for each inventive protein a variety of possible combinations of method steps is conceivable. Das optimale Verfahren muß für jeden konkreten Einzelfall experimentell ermittelt werden. The optimum method must be determined experimentally for each specific case.
  • Durch Expression oder Klonierung können die erfindungsgemäßen Proteasen in der für den technischen Einsatz erforderlichen Menge zur Verfügung gestellt werden. By expression or cloning proteases of the invention may be provided as required for industrial use quantity.
  • Einen eigenständigen Erfindungsgegenstand stellen somit auch Verfahren zur Herstellung einer erfindungsgemäßen Protease dar. An independent subject of the invention can thus be used method for producing a protease of the invention.
  • Dazu gehört jedes Verfahren, das zur Herstellung einer oben beschriebenen, erfindungsgemäßen Protease geeignet ist beziehungsweise das den Erhalt einer erfindungsgemäßen Protease ermöglicht. This includes any method which is suitable for the production of a protease invention described above or which allows to obtain a protease of the invention. Hierzu zählen beispielsweise auch chemische Syntheseverfahren. These include for example, chemical synthesis.
  • Demgegenüber bevorzugt sind jedoch alle im Stand der Technik etablierten, oben in einzelnen Aspekten bereits angesprochenen molekularbiologischen, mikrobiologischen, beziehungsweise biotechnologischen Herstellverfahren, die auf den oben bezeichneten erfindungsgemäßen Proteinen oder Nukleinsäuren aufbauen. In contrast, however, all are established in the prior art, already discussed above in individual aspects of molecular biology, microbiological or biotechnological manufacturing processes that referred to above build proteins or nucleic acids of the invention. Hierfür kann entsprechend dem oben Gesagten beispielsweise auf die im Sequenzprotokoll unter SEQ ID NO. This may according to the above example, in the sequence listing under SEQ ID NO. 1 angegebene Nukleinsäure oder hieraus erhaltene Mutanten oder Teilsequenzen zurückgegriffen werden. 1 mentioned nucleic acid, or mutants obtained therefrom or partial sequences are resorted.
  • Vorzugsweise handelt es sich dabei um Verfahren, die unter Einsatz einer zuvor bezeichneten Nukleinsäure, vorzugsweise unter Einsatz eines vorstehend beschriebenen Vektors und besonders bevorzugt vorzugsweise unter Einsatz einer zuvor bezeichneten, vorteilhafterweise gentechnisch modifizierten Wirtszelle erfolgen. Preferably, these are processes which preferably a previously identified using a nucleic acid referred to above, preferably using a vector as described above and more preferably, using advantageously carried genetically modified host cell. Denn hierdurch wird die entsprechend bevorzugte genetische Information in mikrobiologisch verwertbarer Form zur Verfügung gestellt. Because thus the correspondingly preferred genetic information in microbiologically utilizable form is provided.
  • Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung können auf der Grundlage der zugehörigen Nukleinsäuresequenzen auch zellfreie Expressionssysteme sein, bei denen die Proteinbiosynthese in vitro nachvollzogen wird. Embodiments of the present invention may also be cell-free expression systems, in which the protein biosynthesis in vitro is reconstructed on the basis of the associated nucleic acid sequences. Alle bereits oben ausgeführten Elemente können auch zu neuen Verfahren kombiniert werden, um erfindungsgemäße Proteine herzustellen. All the above listed elements can be combined to new methods to produce proteins of the invention. Es ist dabei für jedes erfindungsgemäße Protein eine Vielzahl von Kombinationsmöglichkeiten an Verfahrensschritten denkbar, so dass optimale Verfahren für jeden konkreten Einzelfall experimentell ermittelt werden müssen. It is for each inventive protein a variety of possible combinations of method steps is conceivable so that optimal process for each individual case must be determined experimentally.
  • Entsprechend dem oben Gesagten sind unter den genannten Verfahren weiterhin solche bevorzugt, bei denen die Nukleotidsequenz in einem, vorzugsweise mehreren Codons an die Codon-Usage des Wirtsstamms angepasst worden ist. According to the above, such are preferred among the above-mentioned method further, in which the nucleotide in one, preferably more codons has been adapted to the codon usage of the host strain.
  • Einen eigenen Erfindungsgegenstand stellt ein Mittel dar, das dadurch gekennzeichnet, dass es mindestens eine erfindungsgemäße Protease wie vorstehend beschrieben enthält. A separate subject invention provides a means which is characterized in that it contains at least one protease of the invention as described above.
  • Hiermit werden alle Arten von Mitteln, insbesondere Gemische, Rezepturen, Lösungen etc., deren Einsetzbarkeit durch Zugabe eines oben beschriebenen, erfindungsgemäßen Proteins verbessert wird, in den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung eingeschlossen. This can be included in the scope of the present invention, all kinds of agents, in particular mixtures, formulations, solutions, etc., their usability is improved by adding a protein of the invention described above. Es kann sich dabei je nach Einsatzgebiet beispielsweise um feste Gemische, beispielsweise Pulver mit gefriergetrockeneten oder verkapselten Proteinen, oder um gelförmige oder flüssige Mittel handeln. It can involve depending on the application, for example, solid mixtures, for example, powders with freeze-dried or encapsulated proteins, or gel or liquid agent. Bevorzugte Rezepturen enthalten beispielsweise Puffersubstanzen, Stabilisatoren, Reaktionspartner und/oder Cofaktoren der Proteasen und/oder andere mit den Proteasen synergistische Inhaltsstoffe. Preferred formulations contain, for example, buffering agents, stabilizers, reaction partner and / or co-factors of proteases and / or other proteases with the synergistic ingredients. Insbesondere sind darunter Mittel für die weiter unten ausgeführten Einsatzgebiete zu verstehen. In particular, including funds for the detailed hereafter Applications are to be understood. Weitere Einsatzgebiete gehen aus dem Stand der Technik hervor und werden beispielsweise in dem Handbuch Additional application areas of the art produced and, for example, in the manual dargestellt. shown.
  • In bevorzugten Ausführungsformen der Erfindung ist ein erfindungsgemäßes Mittel dadurch gekennzeichnet, dass es ein Waschmittel, Handwaschmittel, Spülmittel, Handgeschirrspülmittel, Maschinengeschirrspülmittel, Reinigungsmittel, Zahnprothesen- oder Kontaktlinsenpflegemittel, Nachspülmittel, Desinfektionsmittel, kosmetisches Mittel, pharmazeutisches Mittel oder ein Mittel zur Behandlung von Filtermedien, Textilien, Pelzen, Papier, Fellen oder Leder, ist. In preferred embodiments of the invention, an agent of the invention is characterized in that it is a detergent, detergent, dishwashing, hand dishwashing detergents, machine dishwashing detergents, cleaning agents, Zahnprothesen- or contact lens care compositions, rinse agents, disinfectant, cosmetic agent, pharmaceutical agent or an agent for treatment of filter media, textiles ,, paper, skins or leather, furs.
  • Diesem Erfindungsgegenstand werden als bevorzugte Ausführungsform Mittel zugerechnet, bei denen es sich um Wasch- oder Reinigungsmittel handelt. This subject invention are allocated as a preferred embodiment, the composition in which they are washing or cleaning agent.
  • Denn wie in den Ausführungsbeispielen der vorliegenden Anmeldung gezeigt ist, konnte für Wasch- und Reinigungsmitteln mit einer erfindungsgemäß bevorzugten Protease eine Leistungssteigerung gegenüber einem proteasefreien Mittel festgestellt werden und eine sehr gute Reinigungsleistung im Hinblick auf Protease-sensitive Anschmutzungen erreicht werden. Because as shown in the embodiments of the present application, an increase in performance compared to a protease-free means could be found for detergents and cleaning products with an inventively preferred protease and a very good cleaning performance in terms of protease sensitive stains can be achieved.
  • Zu diesem Erfindungsgegenstand zählen alle denkbaren Reinigungsmittelarten, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder bei der Hand-Wäsche beziehungsweise -Reinigung. To this subject of the invention includes all conceivable types of cleaning agents, both concentrates and without dilution, for use on a commercial scale, in a washing machine or for manual laundry or cleaning. Dazu gehören beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die nach der vorliegenden Erfindung die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. These include, for example, detergents for textiles, carpets or natural fibers, for the present to the invention, the term detergent is used. Dazu gehören beispielsweise auch Geschirrspülmittel für Geschirrspülmaschinen oder manuelle Geschirrspülmittel oder Reiniger für harte Oberflächen wie Metall, Glas, Porzellan, Keramik, Kacheln, Stein, lackierte Oberflächen, Kunststoffe, Holz oder Leder; These include also dishwashing detergents for dishwashers or manual dishwashing detergents or cleaners for hard surfaces such as metal, glass, porcelain, ceramic, tiles, stone, painted surfaces, plastics, wood or leather; für solche wird nach der vorliegenden Erfindung die Bezeichnung Reinigungsmittel verwendet. for such the term detergent is used according to the present invention.
  • Ein erfindungsgemäßes Mittel kann sowohl ein Mittel für Großverbraucher oder technische Anwender als auch ein Produkt für den Privatverbraucher sein, wobei alle im Stand der Technik etablierten Wasch- und Reinigungsmittelarten ebenfalls Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung darstellen. An inventive agent can be a means for large consumers or industrial users and also a product for the private consumer, all well-established in the prior art washing and cleaning agent species also represent embodiments of the present invention. Dazu gehören beispielsweise Konzentrate und unverdünnt anzuwendende Mittel zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder bei der Handwäsche beziehungsweise -reinigung. These include concentrates and without dilution for use on a commercial scale, in washing machines or in hand washing or cleaning. Ebenso gehören dazu beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die nach der vorliegenden Erfindung die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. Likewise, these include, for example, detergents for textiles, carpets or natural fibers, the term detergent is used for the present of the invention. Weiterhin gehören dazu beispielsweise auch Geschirrspülmittel für Geschirrspülmaschinen oder manuelle Geschirrspülmittel oder Reiniger für harte Oberflächen wie Metall, Glas, Porzellan, Keramik, Kacheln, Stein, lackierte Oberflächen, Kunststoffe, Holz oder Leder; Further information can include for example, dishwashing detergents for dishwashers or manual dishwashing or cleaners for hard surfaces such as metal, glass, china, ceramic, tiles, stone, painted surfaces, plastics, wood or leather; für solche wird nach der vorliegenden Erfindung die Bezeichnung Reinigungsmittel verwendet. for such the term detergent is used according to the present invention.
  • Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen alle etablierten und/oder alle zweckmäßigen Darreichungsformen. Embodiments of the present invention include all established and / or all appropriate dosage forms. Dazu zählen beispielsweise feste, pulverförmige, flüssige, gelförmige oder pastöse Mittel, die gegebenenfalls auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können. These include, for example, solid, powdered, liquid, gel or paste-like agents which can also consist of several phases, where appropriate, and may be in compressed or uncompressed form. Einen weiteren Erfindungsgegenstand stellen daher Mittel dar, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie als Einkomponentensystem vorliegen. Therefore, a further subject of the invention are agents which are characterized in that they are present as a single component. Solche Mittel bestehen bevorzugt aus einer Phase. Such means preferably consist of one phase. Selbstverständlich können erfindungsgemäße Mittel aber auch aus mehreren Phasen bestehen. Of course, agents of the invention but also consist of several phases. Einen weiteren Erfindungsgegenstand bilden daher Mittel, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie in mehrere Komponenten aufgeteilt sind. Therefore, a further subject of the invention provide means, which are characterized in that they are divided into multiple components. Zu den erfindungsgemäßen Darreichungsformen zählen ferner Extrudate, Granulate, Tabletten oder Pouches, die sowohl in Großgebinden als auch portionsweise abgepackt vorliegen können. To give the novel dosage forms also include extrudates, granules, tablets or pouches, which may also be packed in portions both in bulk as well. Bevorzugt ist ein erfindungsgemäßes Mittel dadurch gekennzeichnet, dass es die Protease in einer Menge von 2 μg bis 20 mg, vorzugsweise von 5 μg bis 17,5 mg, besonders bevorzugt von 20 μg bis 15 mg und ganz besonders bevorzugt von 50 μg bis 10 mg pro g des Mittels enthält. Preferably, an agent of the invention is characterized in that the protease is in an amount of from 2 ug to 20 mg, preferably from 5 ug to 17.5 mg, particularly preferably from 20 .mu.g to 15 mg and very particularly preferably from 50 .mu.g to 10 mg contains per g of the composition.
  • Erfindungsgemäße Mittel können in fester Form vorliegen. Inventive compositions may be in solid form. Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellen daher Mittel dar, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie in fester Form vorliegen. Therefore in another aspect of the invention provide means, which are characterized in that they are present in solid form. In einer bevorzugten Ausführungsform liegt das Mittel als rieselfähiges Pulver mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l oder 600 g/l bis 850 g/l, vor. In a preferred embodiment, the agent is present as a free-flowing powder having a bulk density of 300 g / l to 1200 g / l, in particular 500 g / l to 900 g / l or 600 g / l to 850 g / l, above.
  • Alternativ können erfindungsgemäße Mittel auch flüssig oder pastös sein. Alternatively, agents of the invention may also be liquid or paste. Einen weiteren Gegenstand der Erfindung ist das Mittel daher dadurch gekennzeichnet, dass es in pastöser oder flüssiger Form vorliegt, insbesondere in Form eines nicht-wäßrigen Flüssigwaschmittels oder einer nicht-wäßrigen Paste oder in Form eines wäßrigen Flüssigwaschmittels oder einer wasserhaltigen Paste. A further subject of the invention is therefore characterized in that it is in paste or liquid form, in particular in the form of a non-aqueous liquid detergent or a non-aqueous paste or in the form of an aqueous liquid detergent or a water-containing paste, the agents.
  • Das erfindungsgemäße Mittel, insbesondere Wasch- oder Reinigungsmittel, kann in einem Behältnis, vorzugsweise einem luftdurchlässigen Behältnis, verpackt sein, aus dem es kurz vor Gebrauch oder während des Waschvorgangs freigesetzt wird, insbesondere kann die Protease und/oder weitere Inhaltsstoffe des Mittels mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für das Enzym undurchlässigen Substanz umhüllt sein, welche unter Anwendungsbedingungen des Mittels durchlässig für das Enzym wird. The inventive composition, in particular washing or cleaning agent, can, in a container, preferably be packed in an air-permeable container from which it is released shortly before use or during the washing process, especially the protease and / or other ingredients of the composition with a can at be enveloped room temperature or in the absence of water for the enzyme impermeable substance which is permeable to the enzyme under application conditions of the agent. Das Mittel ist somit dadurch gekennzeichnet, dass die Protease mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für die Protease undurchlässigen Substanz umhüllt ist. The agent is thus characterized in that the protease is coated with an at room temperature or in the absence of water for the protease impermeable substance.
  • Erfindungsgemäße Mittel können ausschließlich eine Protease enthalten. Agents of the invention may contain only a protease. Alternativ können sie auch weitere Proteasen oder andere Enzyme in einer für die Wirksamkeit des Mittels zweckmäßigen Konzentration enthalten. Alternatively, they may also contain other proteases or other enzymes in an expedient for the effectiveness of the agent concentration. Einen weiteren Gegenstand der Erfindung stellen somit Mittel dar, die ferner eines oder mehrere weitere Enzyme umfassen, wobei prinzipiell alle im Stand der Technik für diese Zwecke etablierten Enzyme einsetzbar sind. A further subject of the invention thus constitute means which further comprise one or more other enzymes, in principle any established in the art for this purpose enzymes can be used. Als weitere Enzyme bevorzugt einsetzbar sind alle Enzyme, die in dem erfindungsgemäßen Mittel eine katalytische Aktivität entfalten können, insbesondere Proteasen, Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, Tannasen, Xylanasen, Xanthanasen, β-Glucosidasen, Carrageenasen, Oxidasen, Oxidoreduktasen oder Lipasen, sowie vorzugsweise deren Gemische. As further enzymes are preferably used all enzymes that can exhibit a catalytic activity in the inventive compositions, in particular proteases, amylases, cellulases, hemicellulases, mannanases, tannases, xylanases, Xanthanasen, β-glucosidases, Carrageenasen, oxidases, oxidoreductases or lipases, as well as preferably mixtures thereof. Diese Enzyme sind im Prinzip natürlichen Ursprungs; These enzymes are in principle of natural origin; ausgehend von den natürlichen Molekülen stehen für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln verbesserte Varianten zur Verfügung, die entsprechend bevorzugt eingesetzt werden. starting from the natural molecules are available for use in detergents and cleaning agents, improved variants are available that can be preferably used accordingly. Erfindungsgemäße Mittel enthalten Enzyme vorzugsweise in Gesamtmengen von 1 × 10 –8 bis 5 Gewichts-Prozent bezogen auf aktives Protein. Agents of the invention preferably comprise enzymes in total quantities of 1 × 10 -8 to 5 percent by weight based on active protein. Bevorzugt sind die Enzyme von 0,001 bis 5 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,01 bis 5 Gew.-%, noch weiter bevorzugt von 0,05 bis 4 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,075 bis 3,5 Gew.-% in erfindungsgemäßen Mitteln enthalten, wobei jedes enthaltene Enzym in den genannten Mengenverhältnissen vorliegen kann. the enzymes from 0.001 to 5 wt .-%, more preferably from 0.01 to 5 wt .-%, even more preferably from 0.05 to 4 wt .-% and particularly preferably 0.075 to 3.5 by weight are preferred. -% contained in the inventive compositions, each contained enzyme may be in the stated proportions.
  • Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2'-Bichinolyl-4,4'-dicarbonsäure) oder dem Biuret-Verfahren (AG Gornall, CS Bardawill und MM David, J. Biol. Chem., 177 (1948), S. 751–766) bestimmt werden. The protein concentration can be determined using known methods, for example the BCA method (bicinchonic acid; 2,2'-biquinolyl-4,4'-dicarboxylic acid) or the biuret method (Gornall AG, CS Bardawill and MM David, J. Biol. Chem., 177 (1948), pp 751-766) are determined. Besonders bevorzugt unterstützen die weiteren Enzyme die Wirkung des Mittels, beispielsweise die Reinigungsleistung eines Wasch- oder Reinigungsmittels, hinsichtlich bestimmter Anschmutzungen oder Flecken. Particularly preferably, the additional enzymes support the effect of the agent, for example, the cleaning performance of a washing or cleaning agent, in respect of certain stains or spots. Besonders bevorzugt zeigen die Enzyme synergistische Effekte hinsichtlich ihrer Wirkung gegenüber bestimmter Anschmutzungen oder Flecken, dh die in der Mittelzusammensetzung enthaltenen Enzyme unterstützen sich in ihrer Reinigungsleistung gegenseitig. Particularly preferably, the enzymes exhibit synergistic effects in terms of their effect against certain stains or spots, ie the enzymes contained in the composition assist in their cleaning performance each other. Synergistische Effekte können nicht nur zwischen verschiedenen Enzymen, sondern auch zwischen einem oder mehreren Enzymen und weiteren Inhaltsstoffen des erfindungsgemäßen Mittels auftreten. Synergistic effects can occur not only between different enzymes, but also between one or more enzymes and other ingredients of the inventive composition. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das erfindungsgemäße Mittel somit dadurch gekennzeichnet, dass es mindestens ein weiteres Enzym enthält, welches eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase, Oxidase, Oxidoreduktase oder eine Lipase ist. In a further preferred embodiment of the invention, the inventive composition is thus characterized in that it comprises another enzyme least comprising a protease, amylase, cellulase, hemicellulase, mannanase, tannase, xylanase, xanthanase, β-glucosidase, Carrageenase, oxidase, oxidoreductase or a lipase.
  • Die in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzten Enzyme stammen entweder ursprünglich aus Mikroorganismen, etwa der Gattungen Bacillus, Streptomyces, Humicola, oder Pseudomonas, und/oder werden nach an sich bekannten biotechnologischen Verfahren durch geeignete Mikroorganismen produziert, beispielsweise durch transgene Expressionswirte der Gattungen Bacillus oder durch filamentöse Fungi. The enzymes used in the inventive compositions either derive originally from microorganisms, for example of the genera Bacillus, Streptomyces, Humicola or Pseudomonas, and / or are produced according to known biotechnological processes using suitable microorganisms, for example by transgenic expression hosts of the genera Bacillus or filamentous fungi ,
  • In erfindungsgemäßen Mitteln wird die erfindungsgemäße Protease beispielsweise mit einzelnen oder mehreren der folgenden Inhaltsstoffe kombiniert: nichtionische, anionische und/oder kationische Tenside, (gegebenenfalls weitere) Bleichmittel, Bleichaktivatoren, Bleichkatalysatoren, Builder und/oder Cobuilder, Säuren, alkalische Substanzen, Hydrotropen, Lösungsmittel, Verdicker, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Korrosionsinhibitoren, insbesondere Silberschutzmittel (Silberkorrosionsinhibitoren), Soil-Release-Wirkstoffe, Farbtransfer (oder -Übertragungs) -Inhibitoren, Schauminhibitoren, Abrasivstoffe, Farbstoffe, Duftstoffe, Parfums, antimikrobielle Wirkstoffe, UV-Schutzmittel bzw. -Absorbenzien, Antistatika, Perlglanzmitteln und Hautschutzmitteln, Enzyme wie beispielsweise Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase, Oxidase, Oxidoreduktase oder eine Lipase, Stabi In inventive compositions, the protease of the invention is combined for example with one or more of the following ingredients: nonionic, anionic and / or cationic surfactants, (optionally further) bleaching agents, bleach activators, bleach catalysts, builders and / or co-builders, acids, alkaline substances, hydrotropes, solvents , thickeners, sequestering agents, electrolytes, optical brighteners, graying inhibitors, corrosion inhibitors, in particular silver protection agents (silver corrosion inhibitors), soil release agents, dye transfer (or -Übertragungs) inhibitors, foam inhibitors, abrasives, dyes, fragrances, perfumes, antimicrobial agents, UV preservatives or absorbents, antistatic agents, pearlescent agents and skin protection agents, enzymes such as protease, amylase, cellulase, hemicellulase, mannanase, tannase, xylanase, xanthanase, β-glucosidase, Carrageenase, oxidase, oxidoreductase, or a lipase stabilizer lisatoren, insbesondere Enzymstabilisatoren, und andere Komponenten, die aus dem Stand der Technik bekannt sind. lisa factors, in particular enzyme stabilizers, and other components which are known from the prior art. In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist ein erfindungsgemäßes Mittel somit dadurch gekennzeichnet, dass es mindestens eine weitere Komponente enthält, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Tensiden, Buildern, Säuren, alkalischen Substanzen, Hydrotropen, Lösungsmitteln, Verdickungsmitteln, Bleichmitteln, Farbstoffen, Parfums, Korrosionsinhibitoren, Sequestriermitteln, Elektrolyten, optischen Aufhellern, Vergrauungsinhibitoren, Silberkorrosionsinhibitoren, Farbübertragungsinhibitoren, Schauminhibitoren, Abrasivstoffen, UV-Absorbenzien, Lösungsmitteln, Antistatika, Perlglanzmitteln und Hautschutzmitteln. In a further embodiment of the invention, an agent of the invention is thus characterized in that it comprises at least one additional component selected from the group consisting of surfactants, builders, acids, alkalis, hydrotropes, solvents, thickeners, bleaching agents, dyes, perfumes, corrosion inhibitors , sequestering agents, electrolytes, optical brighteners, redeposition inhibitors, silver corrosion inhibitors, dye transfer inhibitors, foam inhibitors, abrasives, UV absorbers, solvents, antistatic agents, pearlescent agents and skin protectants.
  • Die zu wählenden Inhaltsstoffe wie auch die Bedingungen, unter denen das Mittel eingesetzt wird, wie beispielsweise Temperatur, pH-Wert, Ionenstärke, Redox-Verhältnisse oder mechanische Einflüsse, sollten für das jeweilige Reinigungsproblem optimiert sein. The ingredients to be chosen as well as the conditions under which the agent is employed, such as temperature, pH, ionic strength, redox conditions or mechanical influences should be optimized for the particular cleaning problem. So liegen übliche Temperaturen für Wasch- und Reinigungsmittel in Bereichen von 10°C bei manuellen Mitteln über 40°C und 60°C bis hin zu 95° bei maschinellen Mitteln oder bei technischen Anwendungen. Thus, usual temperatures for washing and cleaning compositions are in the ranges of 10 ° C for manual compositions above 40 ° C and 60 ° C up to 95 ° with mechanical means or for industrial applications. Da bei modernen Wasch- und Spülmaschinen die Temperatur meist stufenlos einstellbar ist, sind auch alle Zwischenstufen der Temperatur eingeschlossen. Because in modern washing machines and dishwashers, the temperature is usually adjustable, all intermediate temperatures are also included. Vorzugsweise werden die Inhaltsstoffe der betreffenden Mittel aufeinander abgestimmt. Preferably, the ingredients of the relevant funds are matched. Bevorzugt sind Synergien hinsichtlich der Reinigungsleistung. Synergies in terms of cleaning performance are preferred. Besonders bevorzugt diesbezüglich sind Synergien, die in einem Temperaturbereich zwischen 20°C und 60°C vorhanden sind, da auch die in den erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease in diesem Temperaturbereich katalytisch aktiv ist. Particularly preferred in this regard are synergies that exist in a temperature range between 20 ° C and 60 ° C, as well as the protease contained in the agents is catalytically active in this temperature range.
  • In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst ein erfindungsgemäßes Mittel, insbesondere ein Wasch- oder Reinigungsmittel, ferner In a further preferred embodiment, an agent of the invention, in particular a washing or cleaning agent, and also
    • – 5 Gew.-% bis 70 Gew.-%, insbesondere 5 Gew.-% bis 30 Gew.-% Tenside und/oder - 5 wt .-% to 70 wt .-%, particularly 5 wt .-% to 30 wt .-% of surfactants and / or
    • – 10 Gew.-% bis 65 Gew.-%, insbesondere 12 Gew.-% bis 60 Gew.-% wasserlösliches oder wasserdispergierbares anorganisches Buildermaterial und/oder - 10 wt .-% to 65 wt .-%, in particular 12 wt .-% to 60 wt .-% water-soluble or water-dispersible inorganic builder material and / or
    • – 0,5 Gew.-% bis 10 Gew.-%, insbesondere 1 Gew.-% bis 8 Gew.-%, wasserlösliche organische Buildersubstanzen und/oder - 0.5 wt .-% to 10 wt .-%, particularly 1 wt .-% to 8 wt .-%, water-soluble organic builder substances and / or
    • – 0,01 bis 15 Gew.-% feste anorganische und/oder organische Säuren beziehungsweise saure Salze und/oder - 0,01 to 15 wt .-% solid inorganic and / or organic acids or acidic salts and / or
    • – 0,01 bis 5 Gew.-% Komplexbildner für Schwermetalle und/oder - 0,01 to 5 wt .-% complexing agent for heavy metals and / or
    • – 0,01 bis 5 Gew.-% Vergrauungsinhibitor und/oder - 0,01 to 5 wt .-% anti-redeposition agent and / or
    • – 0,01 bis 5 Gew.-% Farbübertragungsinhibitor und/oder - 0,01 to 5 wt .-% dye transfer inhibitor and / or
    • – 0,01 bis 5 Gew.-% Schauminhibitor. - 0,01 to 5 wt .-% foam inhibitor.
  • Optional kann das Mittel ferner optische Aufheller umfassen. Optionally, the composition may further comprise optical brighteners. Die optischen Aufheller werden bevorzugt von 0,01 bis 5 Gew.-% eingesetzt. The optical brighteners are preferably from 0.01 to 5 wt .-%.
  • Die Proteaseaktivität in derartigen Mitteln kann nach der in Tenside, Band 7 (1970), S. 125–132 beschriebenen Methode ermittelt werden. The protease activity in such compositions S. method described can 125-132 after in surfactants, Volume 7 (1970), are determined. Sie wird dementsprechend in PE (Protease-Einheiten) angegeben. It is accordingly indicated in PU (protease units).
  • Bei dem Vergleich der Leistungen zweier Waschmittelenzyme, wie etwa in den Beispielen der vorliegenden Anmeldung, muß zwischen proteingleichem und aktivitätsgleichem Einsatz unterschieden werden. When comparing the performance of two detergent enzymes, such as in the examples of the present application must be made between the same protein and activity the same use. Insbesondere bei gentechnisch erhaltenen, weitgehend nebenaktivitätsfreien Präparationen ist der proteingleiche Einsatz angebracht. Particularly in the case of genetically obtained, substantially free of secondary activity of the protein preparations same insert is mounted. Denn damit ist eine Aussage darüber möglich, ob dieselben Proteinmengen – als Maß für den Ertrag der fermentativen Produktion – zu vergleichbaren Ergebnissen führen. Because that a statement is possible whether the same amounts of protein - lead to comparable results - as a measure of the yield of the fermentative production. Klaffen die jeweiligen Verhältnisse von Aktivsubstanz zu Gesamtprotein (die Werte der spezifischen Aktivität) auseinander, so ist ein aktivitätsgleicher Vergleich zu empfehlen, weil hierüber die jeweiligen enzymatischen Eigenschaften verglichen werden. The respective ratios of active substance to total protein (the values ​​of specific activity) apart, is recommended, because here on the respective enzymatic properties are compared an activity equal comparison. Generell gilt, daß eine niedrige spezifische Aktivität durch Zugabe einer größeren Proteinmenge ausgeglichen werden kann. In general, a low specific activity can be compensated by adding a larger amount of protein. Hierbei handelt es sich letztlich um eine ökonomische Erwägung. This is ultimately an economic consideration.
  • Einen eigenen Erfindungsgegenstand stellt die Verwendung eines oben beschriebenen erfindungsgemäßen Mittels zur Entfernung von protease-sensitiven Anschmutzungen auf Textilien oder harten Oberflächen, dh zur Reinigung von Textilien oder von harten Oberflächen, dar. A separate subject invention provides the use of a composition according to the invention described above to remove protease-sensitive stains on textiles or hard surfaces, ie for cleaning textiles or hard surfaces, represents.
  • Denn erfindungsgemäße Mittel können, insbesondere entsprechend den oben beschriebenen Eigenschaften, dazu verwendet werden, um von Textilien oder von harten Oberflächen proteinhaltige Verunreinigungen zu beseitigen. After all, agents according to the invention, in particular according to the characteristics described above, be used to eliminate textiles or hard surfaces proteinaceous contaminants. Ausführungsformen stellen beispielsweise die Handwäsche, die manuelle Entfernung von Flecken von Textilien oder von harten Oberflächen oder die Verwendung im Zusammenhang mit einem maschinellen Verfahren dar. Embodiments are, for example, hand washing, manual removal of stains from textiles or hard surfaces, or use in connection with a mechanical method.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform dieser Verwendung werden die betreffenden erfindungsgemäßen Mittel, vorzugsweise Wasch- beziehungsweise Reinigungsmittel, nach einer der oben ausgeführten Ausführungsform bereitgestellt. In a preferred embodiment of this use, the compositions of the invention in question, preferably laundry detergents or cleaning products, provided by one of the above-described mode.
  • Einen weiteren eigenen Erfindungsgegenstand stellen Verfahren zur Reinigung von Textilien oder von harten Oberflächen dar, bei denen wenigstens in einem der Verfahrensschritte ein erfindungsgemäßes Mittel verwendet wird. Another own subject invention illustrate methods for cleaning textiles or hard surfaces in which an agent of the invention is used in at least one of the method steps. Das Verfahren zur Reinigung von Textilien oder harten Oberflächen ist demnach dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel angewendet ist. The process for cleaning textiles or hard surfaces is therefore characterized in that in at least one process step, a composition of the invention is applied.
  • Hierunter fallen sowohl manuelle als auch maschinelle Verfahren, wobei maschinelle Verfahren aufgrund ihrer präziseren Steuerbarkeit, was beispielsweise die eingesetzten Mengen und Einwirkzeiten angeht, bevorzugt sind. These include both manual and automatic methods, wherein automatic methods due to their precise controllability with regard, for example, the amounts and reaction times used, preferred.
  • Verfahren zur Reinigung von Textilien zeichnen sich im allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Waschmittel oder einer Lösung dieses Mittels behandelt wird. A method for cleaning textiles are generally distinguished by the fact that in several process steps, various cleaning-active substances are applied to the cleaned and washed after the contact time, or that the cleaned is treated in any other way with a detergent or a solution of said agent. Das gleiche gilt für Verfahren zur Reinigung von allen anderen Materialien als Textilien, welche unter dem Begriff harte Oberflächen zusammengefasst werden. The same applies to methods for cleaning all materials other than textiles, which are grouped under the term hard surfaces. Alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsverfahren können in wenigstens einem der Verfahrensschritte um ein erfindungsgemäßes Mittel bereichert werden, und stellen dann Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung dar. All conceivable washing or cleaning methods can be enriched in at least one of the method steps an agent of the invention, and illustrate embodiments of the present invention.
  • In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform solcher Verfahren werden die betreffenden erfindungsgemäßen Enzyme im Rahmen einer der oben ausgeführten Rezepturen für erfindungsgemäße Mittel, vorzugsweise erfindungsgemäße Wasch- beziehungsweise Reinigungsmittel, bereitgestellt. In a further preferred embodiment of such methods, the enzymes in the context of the formulations mentioned above for the invention agents of the invention are concerned, preferably inventive detergents or cleaning products.
  • Da bevorzugte erfindungsgemäße Enzyme natürlicherweise bereits eine proteinauflösende Aktivität besitzen und diese auch in Medien entfalten, die sonst keine Reinigungskraft besitzen, wie beispielsweise in bloßem Puffer, kann ein einzelner Teilschritt eines solchen Verfahrens zur maschinellen Reinigung von Textilien darin bestehen, daß gewünschtenfalls neben stabilisierenden Verbindungen, Salzen oder Puffersubstanzen als einzige reinigungsaktive Komponente ein erfindungsgemäßes Enzym aufgebracht wird. Since preferred enzymes according to the invention already possess a protein-dissolving activity naturally and this also develop in media which otherwise have no cleaning power, such as in the naked buffer, an individual partial step of such a process for the machine cleaning of textiles may consist in that, if desired, in addition to stabilizing compounds salts or buffer substances is applied as the sole detergent-active component is a enzyme of the invention. Dies stellt eine besonders bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung dar. This represents a particularly preferred embodiment of the present invention.
  • In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist das Verfahren zur Reinigung von Textilien oder harten Oberflächen daher dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 11 proteolytisch aktiv ist. In a further embodiment of the invention, the method for cleaning textiles or hard surfaces is therefore characterized in that a protease according to any of claims 1 to 11 is proteolytically active into at least one process step. Bevorzugt wird die Protease in einer Menge von 40 μg bis 4 g, vorzugsweise von 50 μg bis 3 g, besonders bevorzugt von 100 μg bis 2 g und ganz besonders bevorzugt von 200 μg bis 1 g pro Anwendung eingesetzt. the protease in an amount of 40 micrograms to 4 g is preferred, preferably used from 50 .mu.g to 3 g, particularly preferably from 100 micrograms to 2 g and very particularly preferably from 200 .mu.g to 1 g per application.
  • Bevorzugte Ausführungsformen dieses Erfindungsgegenstandes stellen Verfahren zur Behandlung von Textilrohstoffen oder zur Textilpflege dar, bei denen in wenigstens einem der Verfahrensschritte eine erfindungsgemäße Alkalische Protease aktiv wird. Preferred embodiments of this subject invention illustrate methods for the treatment of textile raw materials or for textile care, in which an alkaline protease according to the invention becomes active in at least one of the process steps.
  • Hierunter sind Verfahren für Textilrohstoffe, Fasern oder Textilien mit natürlichen Bestandteilen bevorzugt, und ganz besonders für solche mit Wolle oder Seide. Here, methods for textile raw materials, fibers or textiles containing natural constituents are preferred and very particularly for those containing wool or silk.
  • Es kann sich dabei beispielsweise um Verfahren handeln, in denen Materialien zur Verarbeitung in Textilien vorbereitet werden, etwa zur Antifilzausrüstung, oder beispielsweise um Verfahren, welche die Reinigung getragener Textilien um eine pflegende Komponente bereichern. It may, for example, be methods in which materials are prepared for processing into textiles, for example for anti-felt, or, for example, methods that supplement the cleaning worn textiles with a care component. Wegen der oben beschriebenen Wirkung von Proteasen auf natürliche, proteinhaltige Rohstoffe handelt es sich in bevorzugten Ausführungsformen um Verfahren zur Behandlung von Textilrohstoffen, Fasern oder Textilien mit natürlichen Bestandteilen, insbesondere mit Wolle oder Seide. Because of the above-described action of proteases on natural protein-containing raw materials, in preferred embodiments, to methods for the treatment of textile raw materials, fibers or textiles containing natural components, in particular wool or silk.
  • Erfindungsgemäße Enzyme sind entsprechend der vorstehenden Ausführungen vorteilhaft in erfindungsgemäßen Mitteln, insbesondere Wasch- und Reinigungsmitteln, und Verfahren, insbesondere Wasch- und Reinigungsverfahren, einsetzbar. Enzymes of the invention are in accordance with the foregoing, advantageous in the inventive compositions, in particular detergents and cleaning agents and methods, in particular washing and cleaning processes, can be used. Sie können dazu verwendet werden, um von Textilien oder von harten Oberflächen proteinhaltige Verunreinigungen zu beseitigen. They can be used to eliminate textiles or hard surfaces proteinaceous contaminants. Ausführungsformen stellen beispielsweise die Handwäsche, die manuelle Entfernung von Flecken von Textilien oder von harten Oberflächen oder die Verwendung im Zusammenhang mit einem maschinellen Verfahren dar. Embodiments are, for example, hand washing, manual removal of stains from textiles or hard surfaces, or use in connection with a mechanical method.
  • Einen weiteren Gegenstand der Erfindung bildet daher die Verwendung einer erfindungsgemäßen Protease, wie sie vorstehend beschreiben wurde zur Reinigung von Textilien oder von harten Oberflächen. Therefore in another aspect the invention provides the use of a protease according to the invention, as was described above for cleaning textiles or hard surfaces. Bevorzugt wird die Protease in einer Menge von 40 μg bis 4 g, vorzugsweise von 50 μg bis 3 g, besonders bevorzugt von 100 μg bis 2 g und ganz besonders bevorzugt von 200 μg bis 1 g pro Anwendung eingesetzt. the protease in an amount of 40 micrograms to 4 g is preferred, preferably used from 50 .mu.g to 3 g, particularly preferably from 100 micrograms to 2 g and very particularly preferably from 200 .mu.g to 1 g per application.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform dieser Verwendung werden die betreffenden erfindungsgemäßen Alkalischen Proteasen im Rahmen einer der oben ausgeführten Rezepturen für erfindungsgemäße Mittel, vorzugsweise Wasch-, beziehungsweise Reinigungsmittel bereitgestellt. In a preferred embodiment of this use, the alkaline proteases of the invention in question within the framework of one of the formulations mentioned above for the present invention means, preferably washing or cleaning means are provided.
  • Eine weitere Ausführungsform dieses Erfindungsgegenstands stellt die Verwendung einer erfindungsgemäßen Alkalischen Protease zur Aktivierung oder Deaktivierung von Inhaltsstoffen von Wasch- oder Reinigungsmitteln dar. Another embodiment of this inventive subject matter is the use of an alkaline protease of the invention for activating or deactivating ingredients of detergents or cleaning agents.
  • Denn wie bekannt ist, können Protein-Bestandteile von Wasch- oder Reinigungsmitteln durch das Einwirken einer Protease inaktiviert werden. Because as is well known, protein constituents of detergents or cleaning agents by the action of a protease can be inactivated. Diesen ansonsten eher unerwünschten Effekt gezielt einzusetzen, ist ebenfalls ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung. using this otherwise rather undesired effect specifically, is also an object of the present invention. Ebenso ist es wie oben beschrieben möglich, daß durch Proteolyse eine andere Komponente erst aktiviert wird, etwa, wenn sie ein Hybridprotein aus dem eigentlichen Enzym und dem dazu passenden Inhibitor darstellt. It is also possible as described above, that another component is only activated by proteolysis, for example, if it constitutes a hybrid protein of the actual enzyme and the corresponding inhibitor. Ein anderes Beispiel für eine solche Regulation ist die, bei der eine aktive Komponente zum Schutz oder zur Kontrolle seiner Aktivität in einem Material verkapselt vorliegt, das durch Proteolyse angegriffen wird. Another example of such regulation is that in the present an active component encapsulated to protect or control its activity in a material which is attacked by proteolysis. Erfindungsgemäße Proteine können somit zu Inaktivierungs-, Aktivierungs- oder Freisetzungsreaktionen verwendet werden, insbesondere in mehrphasigen Mitteln. Proteins of the invention can be used for inactivation, activation or release reactions thus, especially in multiphase agents.
  • Entsprechend den vorstehenden Ausführungen stellen auch folgende Verwendungen Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung dar: In accordance with the foregoing, also the following uses of embodiments of the present invention provide:
    • – Die Verwendung einer erfindungsgemäßen Protease zur Gewinnung oder Behandlung von Rohmaterialien oder Zwischenprodukten in der Textilherstellung, insbesondere zum Entfernen von Schutzschichten auf Geweben; - The use of a protease of the invention for obtaining or treating raw materials or intermediates in the manufacture of textiles, in particular for removing protective layers on fabrics;
    • – die Verwendung einer erfindungsgemäßen Protease zur Behandlung von Textilrohstoffen oder zur Textilpflege und hierunter bevorzugt - the use of a protease of the invention for the treatment of textile raw materials or for textile care and among these preferably
    • – die entsprechende Verwendung für Textilrohstoffe, Fasern oder Textilien mit natürlichen Bestandteilen und ganz besonders für solche mit Wolle oder Seide. - the corresponding use for textile raw materials, fibers or textiles containing natural components and very particularly for those containing wool or silk.
  • Die vorliegende Erfindung wird auch in Form von solchen eine erfindungsgemäße Alkalische Protease enthaltenden Mitteln verwirklicht, bei denen es sich um Kosmetika handelt. The present invention is also realized in the form of such an alkaline protease according to the invention containing means in which it is cosmetics. Hierunter werden alle Arten von reinigenden und pflegenden Mitteln für menschliche Haut oder Haar verstanden, insbesondere reinigende Mittel. This includes all types are understood by cleaning and care products for human skin or hair, in particular cleaning agents.
  • Denn Proteasen spielen auch im Zellerneuerungsprozeß der menschlichen Haut (Desquamation) eine entscheidende Rolle ( Proteases also play a crucial role in the cell renewal process of the human skin (desquamation) ( ). ). Dementsprechend werden Proteasen auch als bioaktive Komponenten in Hautpflegemitteln verwendet, um den Abbau der in trockener Haut vermehrten Desmosomenstrukturen zu unterstützen. Accordingly, proteases are used as bioactive components in skincare products to support the dismantling of increasingly present in dry skin desmosome. Diesbezüglich möglich ist beispielsweise der Einsatz von Subtilisin-Proteasen, beispielsweise auch Varianten der alkalischen Protease aus Bacillus lentus mit Aminosäureaustauschen in den Positionen R99G/A/S, S154D/E und/oder L211D/E, für kosmetische Zwecke. In this regard, possible such as the use of subtilisin proteases, for example, variants of the alkaline protease from Bacillus lentus having amino acid substitutions at positions R99G / A / S, S154D / E and / or L211D / E, for cosmetic purposes. Wie vorstehend erläutert können erfindungsgemäße Proteasen über die entsprechenden Punktmutationen weiterentwickelt werden. As explained above, proteases of the invention can be further developed over the corresponding point mutations. Somit eignen sich auch erfindungsgemäße Proteasen, insbesondere solche, die etwa nach Mutagenese oder durch Zugabe entsprechender, mit ihnen wechselwirkender Stoffe in ihrer Aktivität kontrolliert sind, als aktive Komponenten in Haut- oder Haar-Reinigungs- oder Pflegemitteln. Thus, proteases according to the invention, particularly those that are controlled include mutagenesis, or by addition of appropriate substances interacting with them in their activity, as active components in skin or hair cleaning or care products. Are Besonders bevorzugt sind solche Präparationen dieser Enzyme, die wie oben beschrieben, beispielsweise durch Kopplung an makromolekulare Träger stabilisiert und/oder durch Punktmutationen an hochallergenen Positionen so modifiziert sind, dass sie eine höhere Hautverträglichkeit aufweisen. Particularly preferred are those preparations of these enzymes as described above, stabilized for example by coupling to macromolecular carriers and / or are modified by point mutations at highly allergenic positions so that they have a higher skin compatibility are.
  • Dementsprechend werden auch entsprechende kosmetische Reinigungs- und Pflegeverfahren und die Verwendung derartiger proteolytischer Enzyme zu kosmetischen Zwecken in diesen Erfindungsgegenstand einbezogen, insbesondere in entsprechenden Mitteln, wie beispielsweise Shampoos, Seifen oder Waschlotionen, oder in Pflegemitteln, die beispielsweise in Form von Cremes angeboten werden. Accordingly, corresponding cosmetic cleaning and care methods and the use of proteolytic enzymes for cosmetic purposes in this inventive subject matter are included, in particular in appropriate agents, such as shampoos, soaps or washing lotions or in care products which are available for example in the form of creams. Auch die Verwendung in einem schälenden Arzneimittel beziehungsweise zu dessen Herstellung ist in diesen Gegenstand eingeschlossen. Also, the use in a peeling medicament or for the production thereof is included in the subject.
  • Neben dem Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln und Kosmetika sind im Stand der Technik zahlreiche Anwendungsmöglichkeiten von Proteasaen, insbesondere Subtilasen etabliert. Besides its use in detergents and cleaners and cosmetics numerous applications of Proteasaen, in particular subtilases have been established in the art. Einen Überblick hierüber bietet beispielsweise das Handbuch An overview here on, for example, provides the manual . , All diese Techniken können erfindungsgemäße Alkalischen Proteasen bereichert werden. All of these techniques can be enriched alkaline proteases according to the invention. Sollte sich herausstellen, daß sie durch den Einsatz erfindungsgemäßer Proteasen weiterentwickelt werden können, so sind diese in den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung eingeschlossen. If it turns out that they can be further developed by the use of proteases according to the invention, these are included in the scope of the present invention. Hierzu gehören insbesondere folgende Einsatzgebiete: These include in particular the following applications:
    • – die Verwendung einer erfindungsgemäßen Alkalischen Proteasen zur biochemischen Analyse oder zur Synthese von niedermolekularen Verbindungen oder von Proteinen; - the use of an alkaline protease of the invention for biochemically analyzing or for synthesizing low molecular weight compounds or proteins;
    • – darunter bevorzugt die Verwendung zur Endgruppenbestimmung im Rahmen einer Peptid-Sequenzanalyse; - including preferably the use for the terminal groups in a peptide sequence analysis;
    • – die Verwendung einer erfindungsgemäßen Alkalischen Proteasen zur Präparation, Reinigung oder Synthese von Naturstoffen oder biologischen Wertstoffen, vorzugsweise im Rahmen entsprechender Mittel oder Verfahren; - the use of an alkaline protease according to the invention for preparing, purifying or synthesizing natural substances or biological valuable substances, preferably in the context of appropriate means or method;
    • – die Verwendung einer erfindungsgemäßen Alkalischen Proteasen zur Synthese von Proteinen oder anderen niedermolekularen chemischen Verbindungen; - the use of an alkaline protease according to the invention for the synthesis of proteins or other low molecular weight chemical compounds;
    • – die Verwendung einer erfindungsgemäßen Alkalischen Proteasen zur Behandlung von natürlichen Rohstoffen, insbesondere zur Oberflächenbehandlung, ganz besonders in einem Verfahren zur Behandlung von Leder, vorzugsweise im Rahmen entsprechender Mittel oder Verfahren; - the use of an alkaline protease according to the invention for the treatment of natural raw materials, in particular for surface treatment, especially in a method of treatment of leather, preferably in the context of appropriate means or method;
    • – die Verwendung einer erfindungsgemäßen Alkalischen Proteasen zur Behandlung von photographischen Filmen, insbesondere zur Entfernung von gelatinhaltigen oder ähnlichen Schutzschichten; - the use of an alkaline protease according to the invention for the treatment of photographic films, in particular for removing gelatin-containing or similar protective layers; und and
    • – die Verwendung einer erfindungsgemäßen Alkalischen Proteasen zur Herstellung von Lebensmitteln oder von Futtermitteln. - the use of an alkaline protease according to the invention for the production of food or animal feed.
  • Grundsätzlich wird der Einsatz erfindungsgemäßer Alkalischer Proteasen in allen weiteren Technikgebieten in den Schutzbereich der vorliegenden Anmeldung eingeschlossen, für die es sich als geeignet herausstellt. In principle, the use of inventive alkaline proteases is included in all other areas of technology within the scope of the present application for which it turns out to be suitable.
  • Die zuvor beschriebenen erfindungsgemäßen Mittel bzw. die nach dem zuvor beschriebenen erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Mittel enthalten gegebenenfalls weitere Inhaltsstoffe wie weitere Enzyme, Enzymstabilisatoren, Tenside, z. The agents and the above-described invention, the compositions prepared according to the above-described process of the invention optionally contain further ingredients such as further enzymes, enzyme stabilizers, surfactants, eg. B. nichtionische, anionische und/oder amphotere Tenside, und/oder Bleichmittel, und/oder Builder, sowie gegebenenfalls weitere übliche Inhaltsstoffe. For example, nonionic, anionic and / or amphoteric surfactants and / or bleaching agents and / or builders, and optionally further customary ingredients. Insbesondere Kombinationen der erfindungsgemäßen Enzyme mit ausgewählten weiteren Inhaltsstoffen der Mittel erweisen sich als vorteilhaft und sind daher besonders bevorzugt. In particular, combinations of enzymes of the invention with other selected ingredients of the compositions prove to be advantageous and are therefore particularly preferred. Besonders vorteilhafte Wirkungen zeigen sich, wenn die erfindungsgemäßen Enzyme mit Gerüststoffen (nachfolgend auch als Builder bzw. Buildersubstanzen bezeichnet), Tensiden, Bleichmitteln oder weiteren Enzymen kombiniert werden. Particularly advantageous effects are exhibited when the inventive enzymes with builders (hereinafter also referred to as a builder or builders, hereinafter), surfactants, bleaching agents or further enzymes are combined. Solche vorteilhaften Kombinationen, die eine verbesserte Reinigungsleistung durch sich ergebende Synergismen ergeben, werden nachstehend beschrieben. Such advantageous combinations which give improved cleaning performance resulting synergistic interactions are described below.
  • Kombination erfindungsgemäßer Enzyme mit Gerüststoffen Combination according to the invention Enzymes with builders
  • Durch die Kombination mit ausgewählten Gerüststoffen, die nachstehend näher beschrieben werden, wird eine synergistische Reinigungsleistung des Mittels erreicht. By combining with selected builders, which will be described in more detail below, a synergistic cleaning performance of the agent is achieved. Dies bedeutet, dass das Mittel eine verbesserte Entfernung von Anschmutzungen, beispielsweise proteinhaltigen Anschmutzungen, bewirkt im Vergleich mit Mitteln, die entweder nur eine der beiden Komponenten, also Enzyme oder Gerüststoffe, beinhalten, oder auch im Vergleich zur erwarteten Reinigungsleistung eines Mittels mit beiden Komponenten auf Grund der bloßen Addition der jeweiligen Einzelbeiträge dieser beiden Komponenten zur Reinigungsleistung des Mittels. This means that the agent improved removal of soils, such as proteinaceous stains caused in comparison with agents which either include only one of the two components, ie enzymes or builders, or even compared with the expected cleaning performance of a product with two components due to the mere addition of the respective individual contributions of these two components to the cleaning performance of the agent. Somit stellt die ausgewählte Kombination von erfindungsgemäßen Enzymen mit den Gerüststoffen einen wesentlichen Aspekt der Erfindung dar, die in erfindungsgemäßen Mitteln eine synergistische Wirkung aufweisen. Thus, the combination of enzymes according to the invention with the builders selected is an essential aspect of the invention which have a synergistic effect in the inventive compositions.
  • Zu diesbezüglich vorteilhaften Gerüststoffen zählen insbesondere die Zeolithe, Silikate, Carbonate, organische Cobuilder und – wo keine ökologischen Vorurteile gegen ihren Einsatz bestehen – auch die Phosphate. To this regard advantageous builders include especially the zeolites, silicates, carbonates, organic cobuilders and - where there are no ecological objections to their use - also the phosphates.
  • Der eingesetzte feinkristalline, synthetische und gebundenes Wasser enthaltende Zeolith ist vorzugsweise Zeolith A und/oder P. Als Zeolith P wird Zeolith MAP ® (Handelsprodukt der Firma Crosfield) besonders bevorzugt. The finely crystalline, synthetic zeolite containing bound water used is preferably zeolite A and / or P. The zeolite P, zeolite MAP ® (Crosfield) is a particularly preferred. Geeignet sind jedoch auch Zeolith X sowie Mischungen aus A, X und/oder P. Kommerziell erhältlich und im Rahmen der vorliegenden Erfindung bevorzugt einsetzbar ist beispielsweise auch ein Co-Kristallisat aus Zeolith X und Zeolith A (ca. 80 Gew.-% Zeolith X), das durch die Formel However, zeolite X and mixtures of A, X and / or P are commercially available and preferably used in the present invention is for example also a co-crystallizate of zeolite X and zeolite A (ca. 80 wt .-% of zeolite X ), represented by the formula nNa 2 O·(1 – n)K 2 O·Al 2 O 3 ·(2 – 2,5)SiO 2 ·(3,5 – 5,5)H 2 O Na 2 O. (1 - n) K 2 O · Al 2 O 3 · (2 - 2.5), SiO 2 · (3,5 - 5.5), H 2 O beschrieben werden kann. can be described. Der Zeolith kann dabei sowohl als Gerüststoff in einem granularen Compound eingesetzt, als auch zu einer Art „Abpuderung" einer granularen Mischung, vorzugsweise einer zu verpressenden Mischung verwendet werden, wobei üblicherweise beide Wege zur Inkorporation des Zeoliths in das Vorgemisch genutzt werden. Geeignete Zeolithe weisen eine mittlere Teilchengröße von weniger als 10 μm (Volumenverteilung; Meßmethode: Coulter Counter) auf und enthalten vorzugsweise 18 bis 22 Gew.-%, insbesondere 20 bis 22 Gew.-% an gebundenem Wasser. The zeolite may thereby used either as a builder in a granular compound, as also be used for a kind of "powdering" a granular mixture, preferably one to be compressed mixture, and both ways of incorporating the zeolite be used in the premix. Wise Suitable zeolites an average particle size of less than 10 .mu.m (volume distribution; measurement method: Coulter Counter) and preferably contain 18 to 22 wt .-%, in particular 20 to 22 wt .-% of bound water.
  • Mit Vorzug werden auch kristalline schichtförmige Silikate der allgemeinen Formel NaMSi x O 2x+1 ·yH 2 O eingesetzt, worin M Natrium oder Wasserstoff darstellt, x eine Zahl von 1,9 bis 22, vorzugsweise von 1,9 bis 4, wobei besonders bevorzugte Werte für x 2, 3 oder 4 sind, und y für eine Zahl von 0 bis 33, vorzugsweise von 0 bis 20 steht. With preference also crystalline layered silicates of general formula NaMSi x O 2x + 1 · are used yH 2 O wherein M is sodium or hydrogen, x is a number from 1.9 to 22, preferably from 1.9 to 4, particularly preferred are values ​​for x being 2, 3 or 4, and y is a number from 0 to 33, preferably from 0 to 20th Die kristallinen schichtförmigen Silikate der Formel NaMSi x O 2x+1 ·yH 2 O werden beispielsweise von der Firma Clariant GmbH (Deutschland) unter dem Handelsnamen Na-SKS vertrieben. The crystalline layered silicates of the formula NaMSi.sub.xO.sub.2x + 1 yH 2 O, for example, by Clariant GmbH (Germany) under the trade name Na-SKS. Beispiele für diese Silikate sind Na-SKS-1 (Na 2 Si 22 O 45 ·xH 2 O, Kenyait), Na-SKS-2 (Na 2 Si 14 O 29 ·xH 2 O, Magadiit), Na-SKS-3 (Na 2 Si 8 O 17 ·xH 2 O) oder Na-SKS-4 (Na 2 Si 4 O 9 ·xH 2 O, Makatit). Examples of these silicates are Na-SKS-1 (Na 2 Si 22 O 45 · xH 2 O, kenyaite), Na-SKS-2 (Na 2 Si 14 O 29 · xH 2 O, magadiite), Na-SKS-3 (Na 2 Si 8 O 17 .xH 2 O) or Na-SKS-4 (Na 2 Si 4 O 9 · xH 2 O, makatite).
  • Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung besonders geeignet sind kristalline Schichtsilikate der Formel NaMSi x O 2x+1 ·yH 2 O, in denen x für 2 steht. Particularly suitable for the purposes of the present invention are crystalline sheet silicates of the formula NaMSi.sub.xO.sub.2x + 1 yH 2 O, where x is the second Insbesondere sind sowohl β- als auch δ-Natriumdisilikate Na 2 Si 2 O 5 ·yH 2 O sowie weiterhin vor allem Na-SKS-5 (α-Na 2 Si 2 O 5 ), Na-SKS-7 (β-Na 2 Si 2 O 5 , Natrosilit), Na-SKS-9 (NaHSi 2 O 5 ·H 2 O), Na-SKS-10 (NaHSi 2 O 5 ·3H 2 O, Kanemit), Na-SKS-11 (t-Na 2 Si 2 O 5 ) und Na-SKS-13 (NaHSi 2 O 5 ), insbesondere aber Na-SKS-6 (δ-Na 2 Si 2 O 5 ) bevorzugt. In particular, both β- and δ-sodium Na 2 Si 2 O 5 · yH 2 O, and further in particular Na-SKS-5 (α-Na 2 Si 2 O 5), Na-SKS-7 (β-Na 2 Si 2 O 5, natrosilite), Na-SKS-9 (NaHSi 2 O 5 · H 2 O), Na-SKS-10 (NaHSi 2 O 5 · 3H 2 O, kanemite), Na-SKS-11 (t- Na 2 Si 2 O 5) and Na-SKS-13 (NaHSi 2 O 5), but in particular Na-SKS-6 (δ-Na 2 Si 2 O 5 preferably).
  • Wasch- oder Reinigungsmittel enthalten vorzugsweise einen Gewichtsanteil des kristallinen schichtförmigen Silikats der Formel NaMSi x O 2x+1 ·yH 2 O von 0,1 bis 20 Gew.-%, bevorzugt von 0,2 bis 15 Gew.-% und insbesondere von 0,4 bis 10 Gew.-%, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht dieser Mittel. Washing or cleaning composition preferably contain a weight proportion of crystalline layered silicate of the formula NaMSi x O 2x + 1 · yH 2 O from 0.1 to 20 wt .-%, preferably from 0.2 to 15 wt .-% and in particular 0 , 4 to 10 wt .-%, each based on the total weight of these agents.
  • Einsetzbar sind auch amorphe Natriumsilikate mit einem Modul Na 2 O:SiO 2 von 1:2 bis 1:3,3, vorzugsweise von 1:2 bis 1:2,8 und insbesondere von 1:2 bis 1:2,6, welche vorzugsweise löseverzögert sind und Sekundärwascheigenschaften aufweisen. Other useful builders are amorphous sodium silicates with an Na 2 O: SiO 2 of 1: 2 to 1: 3.3, preferably 1: 2 to 1: 2.8 and more preferably 1: 2 to 1: 2.6, which preferably dissolve with delay and exhibit multiple wash cycle properties. Die Löseverzögerung gegenüber herkömmlichen amorphen Natriumsilikaten kann dabei auf verschiedene Weise, beispielsweise durch Oberflächenbehandlung, Compoundierung, Kompaktierung/Verdichtung oder durch Übertrocknung hervorgerufen worden sein. The delay in dissolution in relation to conventional amorphous sodium silicates can have been caused in various ways, for example by surface treatment, compounding, compacting / compression or by overdrying. Im Rahmen dieser Erfindung wird unter dem Begriff "amorph" verstanden, dass die Silikate bei Röntgenbeugungsexperimenten keine scharfen Röntgenreflexe liefern, wie sie für kristalline Substanzen typisch sind, sondern allenfalls ein oder mehrere Maxima der gestreuten Röntgenstrahlung, die eine Breite von mehreren Gradeinheiten des Beugungswinkels aufweisen, hervorrufen. In this invention is meant by the term "amorphous" means that the silicates do not produce sharp X-ray reflexes in X-ray diffraction experiments, as it is typical of crystalline substances, but at best one or more maxima of the scattered X-radiation which have a width of several degrees of the diffraction angle , cause.
  • Alternativ oder in Kombination mit den vorgenannten amorphen Natriumsilikaten werden röntgenamorphe Silikate eingesetzt, deren Silikatpartikel bei Elektronenbeugungsexperimenten verwaschene oder sogar scharfe Beugungsmaxima liefern. Alternatively or in combination with the aforementioned amorphous sodium silicates X-ray amorphous silicates are used, whose silicate particles in electron diffraction experiments crooked or even sharp diffraction maxima. Dies ist so zu interpretieren, dass die Produkte mikrokristalline Bereiche der Größe zehn bis einige Hundert Nanometer (nm) aufweisen, wobei Werte bis max. This may be interpreted so that the products have microcrystalline regions with a size ten to several hundred nanometers (nm), with values ​​up to max. 50 nm und insbesondere bis max. 50 nm and especially up to max. 20 nm bevorzugt sind. 20 nm are preferable. Derartige röntgenamorphe Silikate, weisen ebenfalls eine Löseverzögerung gegenüber den herkömmlichen Wassergläsern auf. Such X-ray amorphous silicates likewise have retarded dissolution compared with traditional water glasses. Insbesondere bevorzugt sind verdichtete/kompaktierte amorphe Silikate, compoundierte amorphe Silikate und übertrocknete röntgenamorphe Silikate. Particular preference is given to compressed / compacted amorphous silicates, compounded amorphous silicates and over dried X-ray amorphous silicates.
  • Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist es bevorzugt, dass diese(s) Silikat(e), vorzugsweise Alkalisilikate, besonders bevorzugt kristalline oder amorphe Alkalidisilikate, in Wasch- oder Reinigungsmitteln in Mengen von 3 bis 60 Gew.-%, vorzugsweise von 8 bis 50 Gew.-% und insbesondere von 20 bis 40 Gew.-%, jeweils bezogen auf das Gewicht des Wasch- oder Reinigungsmittels, enthalten sind. In the present invention, it is preferred that these (s) silicate (s), preferably alkali metal silicates, with particular preference crystalline or amorphous alkali metal disilicates, in detergents or cleaners in quantities of 3 to 60 wt .-%, preferably from 8 to 50 are wt .-% and in particular from 20 to 40 wt .-%, each based on the weight of the detergent or cleaning agent.
  • Selbstverständlich ist auch ein Einsatz der allgemein bekannten Phosphate als Gerüststoffe (Buildersubstanzen) möglich, sofern ein derartiger Einsatz nicht aus ökologischen Gründen vermieden werden sollte. Of course, the widely known phosphates as builders (builders) is also possible, provided such a use should not be avoided for ecological reasons. Unter der Vielzahl der kommerziell erhältlichen Phosphate sind die Alkalimetallphosphate unter besonderer Bevorzugung von Pentanatrium- bzw. Pentakaliumtriphosphat (Natrium- bzw. Kaliumtripolyphosphat) erfindungsgemäß bevorzugt. Among the large number of commercially available phosphates, alkali metal phosphates are preferred in the invention, with particular preference pentasodium or pentapotassium triphosphate (sodium or potassium).
  • Alkalimetallphosphate ist dabei die summarische Bezeichnung für die Alkalimetall-(insbesondere Natrium- und Kalium-)Salze der verschiedenen Phosphorsäuren, bei denen man Metaphosphorsäuren (HPO 3 ), und Orthophosphorsäure H 3 PO 4 neben höhermolekularen Vertretern unterscheiden kann. Alkali metal phosphates is the collective term for the alkali metal (especially sodium and potassium) salts of the various phosphoric acids, including metaphosphoric acids (HPO 3), and orthophosphoric acid H 3 PO 4 can be of higher molecular weight agents. Die Phosphate vereinen dabei mehrere Vorteile in sich: Sie wirken als Alkaliträger, verhindern Kalkbeläge auf Maschinenteilen bzw. Kalkinkrustationen in Geweben und tragen zur Reinigungsleistung bei. The phosphates combine several advantages: they act as alkali carriers, prevent lime deposits on machine parts and lime incrustations in fabrics and contribute to the cleaning performance.
  • Besonders wichtige Phosphate sind das Pentanatriumtriphosphat, Na 5 P 3 O 10 (Natriumtripolyphosphat) sowie das entsprechende Kaliumsalz Pentakaliumtriphosphat, K 5 P 3 O 10 (Kaliumtripolyphosphat). Important phosphates are pentasodium triphosphate, Na 5 P 3 O 10 (sodium tripolyphosphate) and the corresponding potassium salt pentapotassium triphosphate, K 5 P 3 O 10 (potassium tripolyphosphate). Erfindungsgemäß bevorzugt eingesetzt werden weiterhin die Natriumkaliumtripolyphosphate. According to the invention preference is given to continue the sodium potassium tripolyphosphates.
  • Werden im Rahmen der vorliegenden Anmeldung Phosphate als wasch- oder reinigungsaktive Substanzen in Wasch- oder Reinigungsmitteln eingesetzt, so enthalten bevorzugte Mittel diese(s) Phosphat(e), vorzugsweise Alkalimetallphosphat(e), besonders bevorzugt Pentanatrium- bzw. Pentakaliumtriphosphat (Natrium- bzw. Kaliumtripolyphosphat), in Mengen von 5 bis 80 Gew.-%, vorzugsweise von 15 bis 75 Gew.-% uns insbesondere von 20 bis 70 Gew.-%, jeweils bezogen auf das Gewicht des Wasch- oder Reinigungsmittels. Used in the context of the present application phosphates as washing- or cleaning-active substances in washing or cleaning agents, so these preferred compositions comprise (s) phosphate (s), preferably alkali metal phosphate (s), particularly preferably pentasodium or pentapotassium triphosphate (sodium or . potassium tripolyphosphate), in amounts of from 5 to 80 wt .-%, preferably from 15 to 75 wt .-% and in particular from 20 to 70 wt .-%, each based on the weight of the detergent or cleaning agent.
  • Weitere erfindungsgemäß einsetzbare Gerüststoffe sind die Alkaliträger. Further inventively usable builders are the alkali carriers. Als Alkaliträger gelten beispielsweise Alkalimetallhydroxide, Alkalimetallcarbonate, Alkalimetallhydrogencarbonate, Alkalimetallsesquicarbonate, die genannten Alkalisilikate, Alkalimetasilikate, und Mischungen der vorgenannten Stoffe, wobei im Sinne dieser Erfindung bevorzugt die Alkalicarbonate, insbesondere Natriumcarbonat, Natriumhydrogencarbonat oder Natriumsesquicarbonat eingesetzt werden. As alkali carriers, for example, alkali metal hydroxides, alkali metal carbonates, alkali metal bicarbonates, Alkalimetallsesquicarbonate, said alkali metal silicates, alkali metal metasilicates and mixtures of the aforementioned substances are, with the purposes of this invention, preferably, the alkali metal carbonates, especially sodium carbonate, sodium hydrogen carbonate or sodium sesquicarbonate. Besonders bevorzugt ist ein Buildersystem enthaltend eine Mischung aus Tripolyphosphat und Natriumcarbonat. Particularly preferred is a builder system containing a mixture of tripolyphosphate and sodium carbonate. Aufgrund ihrer im Vergleich mit anderen Buildersubstanzen geringen chemischen Kompatibilität mit den übrigen Inhaltsstoffen von Wasch- oder Reinigungsmitteln, werden die Alkalimetallhydroxide bevorzugt nur in geringen Mengen, vorzugsweise in Mengen unterhalb 10 Gew.-%, bevorzugt unterhalb 6 Gew.-%, besonders bevorzugt unterhalb 4 Gew.-% und insbesondere unterhalb 2 Gew.-%, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- oder Reinigungsmittels, eingesetzt. Due to their small in comparison with other builders chemical compatibility with the other ingredients of detergents or cleaning agents, the alkali metal hydroxides are preferably used only in small quantities, preferably in quantities below 10 wt .-%, preferably below 6 wt .-%, more preferably below 4 wt .-% and in particular below 2 wt .-%, each based on the total weight of the washing or cleaning agent used. Besonders bevorzugt werden Mittel, welche bezogen auf ihr Gesamtgewicht weniger als 0,5 Gew.-% und insbesondere keine Alkalimetallhydroxide enthalten. Particularly preferred are compositions which, based on its total weight less than 0.5 wt .-% and in particular not contain any alkali metal hydroxides.
  • Besonders bevorzugt ist der Einsatz von Carbonat(en) und/oder Hydrogencarbonat(en), vorzugsweise Alkalicarbonat(en), besonders bevorzugt Natriumcarbonat, in Mengen von 2 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise von 5 bis 40 Gew.-% und insbesondere von 7,5 bis 30 Gew.-%, jeweils bezogen auf das Gewicht des Wasch- oder Reinigungsmittels. Particularly preferred is the use of carbonate (s) and / or hydrogen carbonate (s), preferably alkali metal carbonate (s), particularly preferably sodium carbonate, in amounts of from 2 to 50 wt .-%, preferably from 5 to 40 wt .-% and in particular 7.5 to 30 wt .-%, each based on the weight of the detergent or cleaning agent. Besonders bevorzugt werden Mittel, welche bezogen auf das Gewicht des Wasch- oder Reinigungsmittels weniger als 20 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 17 Gew.-%, bevorzugt weniger als 13 Gew.-% und insbesondere weniger als 9 Gew.-% Carbonat(e) und/oder Hydrogencarbonat(e), vorzugsweise Alkalicarbonat(e), besonders bevorzugt Natriumcarbonat enthalten. Particularly preferred are compositions which, based on the weight of the detergent or cleaning agent is less than 20 wt .-%, preferably less than 17 wt .-%, preferably less than 13 wt .-% and in particular less than 9 wt .-% of carbonate (e) and / or hydrogen carbonate (s), preferably alkali metal carbonate (s), particularly preferably sodium carbonate.
  • Als organische Cobuilder sind insbesondere Polycarboxylate/Polycarbonsäuren, polymere Polycarboxylate, Asparaginsäure, Polyacetale, Dextrine, weitere organische Cobuilder (siehe unten) sowie Phosphonate zu nennen. As organic cobuilders polycarboxylates / polymeric polycarboxylates, polyacetals, dextrins, other organic cobuilders are in particular (see below) and to name phosphonates. Diese Stoffklassen werden nachfolgend beschrieben. These classes are described below.
  • Weitere erfindungsgemäß verwendbare organische Gerüstsubstanzen sind beispielsweise die in Form der freien Säure und/oder ihrer Natriumsalze einsetzbaren Polycarbonsäuren, wobei unter Polycarbonsäuren solche Carbonsäuren verstanden werden, die mehr als eine Säurefunktion tragen. Further according to the invention suitable organic builders are, for example, usable in the form of the free acid and / or their sodium salts, polycarboxylic acids, and such carboxylic acids are understood to polycarboxylic acids which carry more than one acid function. Beispielsweise sind dies Citronensäure, Adipinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Apfelsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Zuckersäuren, Aminocarbonsäuren, Nitrilotriessigsäure (NTA), sofern ein derartiger Einsatz aus ökologischen Gründen nicht zu beanstanden ist, sowie Mischungen aus diesen. For example, this citric acid, adipic acid, succinic acid, glutaric acid, malic acid, tartaric acid, fumaric acid, sugar acids, amino carboxylic acids, nitrilotriacetic are (NTA), providing their use for environmental reasons is not objectionable, and mixtures thereof. Die freien Säuren besitzen neben ihrer Builderwirkung typischerweise auch die Eigenschaft einer Säuerungskomponente und dienen somit auch zur Einstellung eines niedrigeren und milderen pH-Wertes von Wasch- oder Reinigungsmitteln. The free acids Besides their builder effect also typically have the property of an acidifying component and, hence, also serve to establish a relatively low and mild pH value in detergents or cleaners. Insbesondere sind hierbei Citronensäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Gluconsäure und beliebige Mischungen aus diesen zu nennen. Citric acid, succinic acid, adipic acid, gluconic acid and any mixtures thereof are particularly mentioned.
  • Als Gerüststoffe sind weiter polymere Polycarboxylate geeignet, dies sind beispielsweise die Alkalimetallsalze der Polyacrylsäure oder der Polymethacrylsäure, beispielsweise solche mit einer relativen Molekülmasse von 500 bis 70000 g/mol. As builders, polymeric polycarboxylates are also suitable, these are for example the alkali metal salts of polyacrylic acid or polymethacrylic acid, for example those having a relative molecular mass of 500 to 70,000 g / mol.
  • Bei den für polymere Polycarboxylate angegebenen Molmassen handelt es sich im Sinne dieser Schrift um gewichtsmittlere Molmassen M w der jeweiligen Säureform, die grundsätzlich mittels Gelpermeationschromatographie (GPC) bestimmt wurden, wobei ein UV-Detektor eingesetzt wurde. At the indicated for polymeric polycarboxylates molecular weights are within the meaning of this specification, weight-average molecular weights Mw of the particular acid form which, basically, were determined by gel permeation chromatography (GPC) using a UV-detector. Die Messung erfolgte dabei gegen einen externen Polyacrylsäure-Standard, der aufgrund seiner strukturellen Verwandtschaft mit den untersuchten Polymeren realistische Molgewichtswerte liefert. The measurement was made against an external polyacrylic acid standard, which owing to its structural similarity to the polymers under investigation, provides realistic molecular weight. Diese Angaben weichen deutlich von den Molgewichtsangaben ab, bei denen Polystyrolsulfonsäuren als Standard eingesetzt werden. These figures differ significantly from the molecular weights measured against polystyrene sulfonic acids as standard. Die gegen Polystyrolsulfonsäuren gemessenen Molmassen sind in der Regel deutlich höher als die in dieser Schrift angegebenen Molmassen. The measured against polystyrenesulfonic acids are significantly higher than the molecular weights mentioned in this specification generally.
  • Geeignete Polymere sind insbesondere Polyacrylate, die bevorzugt eine Molekülmasse von 2000 bis 20000 g/mol aufweisen. Particularly suitable polymers are polyacrylates which preferably have a molecular weight of 2,000 to 20,000 g / mol. Aufgrund ihrer überlegenen Löslichkeit können aus dieser Gruppe wiederum die kurzkettigen Polyacrylate, die Molmassen von 2000 bis 10000 g/mol, und besonders bevorzugt von 3000 bis 5000 g/mol, aufweisen, bevorzugt sein. Because of their superior solubility, the short-chain polyacrylates which have molecular weights of 2,000 to 10,000 g / mol in this group may in turn, and particularly preferably from 3000 to 5000 g / mol, may be preferred.
  • Geeignet sind weiterhin copolymere Polycarboxylate, insbesondere solche der Acrylsäure mit Methacrylsäure und der Acrylsäure oder Methacrylsäure mit Maleinsäure. Also suitable are copolymeric polycarboxylates, especially those of acrylic acid with methacrylic acid and of acrylic acid or methacrylic acid with maleic acid. Als besonders geeignet haben sich Copolymere der Acrylsäure mit Maleinsäure erwiesen, die 50 bis 90 Gew.-% Acrylsäure und 50 bis 10 Gew.-% Maleinsäure enthalten. Particularly suitable copolymers of acrylic acid with maleic acid which contain from 50 to 90 wt .-% acrylic acid and 50 to 10 wt .-% of maleic acid. Ihre relative Molekülmasse, bezogen auf freie Säuren, beträgt im allgemeinen 2000 bis 70000 g/mol, vorzugsweise 20000 bis 50000 g/mol und insbesondere 30000 bis 40000 g/mol. Their relative molecular weight, based on free acids, is generally from 2,000 to 70,000 g / mol, preferably 20,000 to 50,000 g / mol, and especially 30,000 to 40,000 g / mol.
  • Die (co-)polymeren Polycarboxylate können entweder als Pulver oder als wäßrige Lösung eingesetzt werden. The (co) polymeric polycarboxylates can be used either as a powder or as an aqueous solution. Der Gehalt von Wasch- oder Reinigungsmitteln an (co-)polymeren Polycarboxylaten beträgt vorzugsweise 0,5 bis 20 Gew.-%, insbesondere 3 bis 10 Gew.-%. The amount of washing or cleaning agents (co) polymeric polycarboxylates is preferably 0.5 to 20 wt .-%, in particular 3 to 10 wt .-%.
  • Zur Verbesserung der Wasserlöslichkeit können die Polymere auch Allylsulfonsäuren, wie beispielsweise Allyloxybenzolsulfonsäure und Methallylsulfonsäure, als Monomer enthalten. In order to improve the water solubility of the polymers can also contain allyl sulfonic acids such as allyloxybenzenesulfonic acid and methallyl sulfonic acid as monomer.
  • Insbesondere bevorzugt sind auch biologisch abbaubare Polymere aus mehr als zwei verschiedenen Monomereinheiten, beispielsweise solche, die als Monomere Salze der Acrylsäure und der Maleinsäure sowie Vinylalkohol bzw. Vinylalkohol-Derivate oder die als Monomere Salze der Acrylsäure und der 2-Alkylallylsulfonsäure sowie Zucker-Derivate enthalten. Also particularly preferred are biodegradable polymers of more than two different monomer units, for example those which contain, as monomers, salts of acrylic acid and maleic acid and vinyl alcohol or vinyl alcohol derivatives, or as monomers, salts of acrylic acid and 2-alkylallyl sulfonic acid and sugar derivatives are ,
  • Weitere bevorzugte Copolymere sind solche, die als Monomere Acrolein und Acrylsäure/Acrylsäuresalze bzw. Acrolein und Vinylacetat aufweisen. Other preferred copolymers are those which contain as monomers acrolein and acrylic acid / acrylic acid salts or acrolein and vinyl acetate.
  • Ebenso sind als weitere bevorzugte Buildersubstanzen polymere Aminodicarbonsäuren, deren Salze oder deren Vorläufersubstanzen zu nennen. Similarly, other preferred builders are polymeric aminodicarboxylic acids, salts or precursors thereof. Besonders bevorzugt sind Polyasparaginsäuren bzw. deren Salze. Particularly preferably polyaspartic acids or their salts.
  • Weitere geeignete Buildersubstanzen sind Polyacetale, welche durch Umsetzung von Dialdehyden mit Polyolcarbonsäuren, welche 5 bis 7 C-Atome und mindestens 3 Hydroxylgruppen aufweisen, erhalten werden können. Other suitable builders are polyacetals which may be obtained by reaction of dialdehydes with polyol having 5 to 7 carbon atoms and at least 3 hydroxyl groups. Bevorzugte Polyacetale werden aus Dialdehyden wie Glyoxal, Glutaraldehyd, Terephthalaldehyd sowie deren Gemischen und aus Polyolcarbonsäuren wie Gluconsäure und/oder Glucoheptonsäure erhalten. Preferred polyacetals are obtained from dialdehydes such as glyoxal, glutaraldehyde, terephthalaldehyde and mixtures thereof and from polyol such as gluconic acid and / or glucoheptonic acid.
  • Weitere geeignete organische Buildersubstanzen sind Dextrine, beispielsweise Oligomere bzw. Polymere von Kohlenhydraten, die durch partielle Hydrolyse von Stärken erhalten werden können. Other suitable organic builders are dextrins, for example oligomers or polymers of carbohydrates which may be obtained by partial hydrolysis of starches. Die Hydrolyse kann nach üblichen, beispielsweise säure- oder enzymkatalysierten Verfahren durchgeführt werden. The hydrolysis can be carried out by customary, for example acid- or enzyme-catalyzed methods. Vorzugsweise handelt es sich um Hydrolyseprodukte mit mittleren Molmassen im Bereich von 400 bis 500000 g/mol. Preferably, hydrolysis products with average molecular weights in the range of 400 to 500,000 g / mol. Dabei ist ein Polysaccharid mit einem Dextrose-Äquivalent (DE) im Bereich von 0,5 bis 40, insbesondere von 2 bis 30 bevorzugt, wobei DE ein gebräuchliches Maß für die reduzierende Wirkung eines Polysaccharids im Vergleich zu Dextrose, welche ein DE von 100 besitzt, ist. A polysaccharide with a dextrose equivalent (DE) in the range of 0.5 to 40, more preferably from 2 to 30, DE being an accepted measure of the reducing effect of a polysaccharide by comparison with dextrose which has a DE of 100 is. Brauchbar sind sowohl Maltodextrine mit einem DE zwischen 3 und 20 und Trockenglucosesirupe mit einem DE zwischen 20 und 37 als auch sogenannte Gelbdextrine und Weißdextrine mit höheren Molmassen im Bereich von 2000 bis 30000 g/mol. Both maltodextrins with a DE between 3 and 20 and dry glucose sirups with a DE of between 20 and 37 and also so-called yellow dextrins and white dextrins with relatively high molecular weights of 2,000 to 30,000 g / mol.
  • Bei den oxidierten Derivaten derartiger Dextrine handelt es sich um deren Umsetzungsprodukte mit Oxidationsmitteln, welche in der Lage sind, mindestens eine Alkoholfunktion des Saccharidrings zur Carbonsäurefunktion zu oxidieren. The oxidized derivatives of such dextrins are their reaction products with oxidizing agents which are capable of oxidizing at least one alcohol function of the saccharide ring to the carboxylic acid function.
  • Auch Oxydisuccinate und andere Derivate von Disuccinaten, vorzugsweise Ethylendiamindisuccinat, sind weitere geeignete Cobuilder. Oxydisuccinates and other derivatives of disuccinates, preferably ethylenediamine, are more suitable co-builders. Dabei wird Ethylendiamin-N,N'-disuccinat (EDDS) bevorzugt in Form seiner Natrium- oder Magnesiumsalze verwendet. Ethylenediamine-N, N'-disuccinate (EDDS) is preferably used in form of its sodium or magnesium salts. Weiterhin bevorzugt sind in diesem Zusammenhang auch Glycerindisuccinate und Glycerintrisuccinate. Further preferably in this context, glycerin and glycerol. Geeignete Einsatzmengen liegen in zeolithhaltigen und/oder silicathaltigen Formulierungen bei 3 bis 15 Gew.-%. The quantities used in zeolite-containing and / or silicate-containing formulations are from 3 to 15 wt .-%.
  • Weitere brauchbare organische Cobuilder sind beispielsweise acetylierte Hydroxycarbonsäuren bzw. deren Salze, welche gegebenenfalls auch in Lactonform vorliegen können und welche mindestens 4 Kohlenstoffatome und mindestens eine Hydroxygruppe sowie maximal zwei Säuregruppen enthalten. Other useful organic co-builders are, for example, acetylated hydroxycarboxylic acids and salts thereof, which may optionally be present in lactone form and which contain at least 4 carbon atoms and at least one hydroxyl group and at most two acid groups.
  • Darüber hinaus können alle Verbindungen, die in der Lage sind, Komplexe mit Erdalkaliionen auszubilden, ergänzend als Gerüststoffe eingesetzt werden. In addition, all compounds which are capable of forming complexes with alkaline earth ions are used as additional builders can.
  • Kombination erfindungsgemäßer Enzyme mit Tensiden Combination according to the invention Enzymes with surfactants
  • Auch durch die Kombination mit ausgewählten Tensiden, welche nachstehend näher beschrieben werden, wird eine synergistische Reinigungsleistung des Mittels erreicht. Also, by the combination with selected surfactants, which are described in more detail below, a synergistic cleaning performance of the agent is achieved. Auch durch die Kombination von erfindungsgemäßen Enzymen mit solchen Tensiden wird erreicht, dass das Mittel eine verbesserte Entfernung von Anschmutzungen bewirkt im Vergleich mit Mitteln, die entweder nur eine der beiden Komponenten, also Enzyme oder Tenside, beinhalten, oder auch im Vergleich zur erwarteten Reinigungsleistung eines Mittels mit beiden Komponenten auf Grund der bloßen Addition der jeweiligen Einzelbeiträge dieser beiden Komponenten zur Reinigungsleistung des Mittels. Also, by the combination of the invention enzymes with such surfactants it is achieved that the agent causes an enhanced removal of stains in comparison with agents which either include only one of the two components, ie enzymes or surfactants, or even compared with the expected cleaning performance of a agent with two components based on the mere addition of the respective individual contributions of these two components to the cleaning performance of the agent. Somit stellt auch die ausgewählte Kombination von erfindungsgemäßen Enzymen mit den Tensiden einen wesentlichen Aspekt der Erfindung dar, die in erfindungsgemäßen Mitteln eine synergistische Wirkung aufweisen. Thus, the combination of enzymes according to the invention with the surfactants selected are an essential aspect of the invention which have a synergistic effect in the inventive compositions.
  • Nachfolgend werden die hierfür geeigneten Tenside näher beschrieben, gegliedert in nichtionische, anionische, kationische und amphotere Tenside. Subsequently, the suitable surfactants for this purpose are described in detail, divided into non-ionic, anionic, cationic and amphoteric surfactants.
  • Als nichtionische Tenside eignen sich Alkylglykoside der allgemeinen Formel RO(G) x , in der R einem primären geradkettigen oder methylverzweigten, insbesondere in 2-Stellung methylverzweigten aliphatischen Rest mit 8 bis 22, vorzugsweise 12 bis 18 C-Atomen entspricht und G das Symbol ist, das für eine Glykoseeinheit mit 5 oder 6 C-Atomen, vorzugsweise für Glucose, steht. Suitable nonionic surfactants are alkyl glycosides of the general formula RO (G) x, a primary straight-chain R or methyl-branched, more particularly 2-methyl-branched, aliphatic radical containing 8 to 22 and preferably corresponds to 12 to 18 C-atoms and G is the symbol which stands for a glycose unit with 5 or 6 C atoms, preferably glucose. Der Oligomerisierungsgrad x, der die Verteilung von Monoglykosiden und Oligoglykosiden angibt, ist eine beliebige Zahl zwischen 1 und 10; The degree of oligomerization x, which indicates the distribution of monoglycosides and oligoglycosides, is any number between 1 and 10; vorzugsweise liegt x bei 1,2 bis 1,4. x is preferably 1.2 to 1.4.
  • Eine weitere Klasse bevorzugt einzusetzender nichtionischer Tenside, die entweder als alleiniges nichtionisches Tensid oder in Kombination mit anderen nichtionischen Tensiden eingesetzt werden, sind alkoxylierte, vorzugsweise ethoxylierte oder ethoxylierte und propoxylierte Fettsäurealkylester, vorzugsweise mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette. A further class use is preferred nonionic surfactants which may be used either as sole nonionic surfactant or in combination with other nonionic surfactants are alkoxylated, preferably ethoxylated or ethoxylated and propoxylated fatty acid alkyl ester, preferably having 1 to 4 carbon atoms in the alkyl chain.
  • Auch nichtionische Tenside vom Typ der Aminoxide, beispielsweise N-Kokosalkyl-N,N-dimethylaminoxid und N-Talgalkyl-N,N-dihydroxyethylaminoxid, und der Fettsäurealkanolamide können geeignet sein. Nonionic surfactants of the amine oxide type, for example N-cocoalkyl-N, N-dimethylamine oxide and N-tallowalkyl-N, N-dihydroxyethylamine oxide, and the fatty acid alkanolamide may be suitable. Die Menge dieser nichtionischen Tenside beträgt vorzugsweise nicht mehr als die der ethoxylierten Fettalkohole, insbesondere nicht mehr als die Hälfte davon. The amount of these nonionic surfactants is preferably not more than that of the ethoxylated fat alcohols, especially not more than half of them.
  • Weitere geeignete Tenside sind Polyhydroxyfettsäureamide der Formel, Further suitable surfactants are polyhydroxy fatty acid amides of the formula,
    Figure 00490001
    in der R für einen aliphatischen Acylrest mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, R 1 für Wasserstoff, einen Alkyl- oder Hydroxyalkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und [Z] für einen linearen oder verzweigten Polyhydroxyalkylrest mit 3 bis 10 Kohlenstoffatomen und 3 bis 10 Hydroxylgruppen steht. in which R is an aliphatic acyl radical having 6 to 22 carbon atoms, R 1 represents hydrogen, an alkyl or hydroxyalkyl having 1 to 4 carbon atoms and [Z] is a linear or branched polyhydroxyalkyl radical having 3 to 10 carbon atoms and 3 to 10 hydroxyl groups. Bei den Polyhydroxyfettsäureamiden handelt es sich um bekannte Stoffe, die üblicherweise durch reduktive Aminierung eines reduzierenden Zuckers mit Ammoniak, einem Alkylamin oder einem Alkanolamin und nachfolgende Acylierung mit einer Fettsäure, einem Fettsäurealkylester oder einem Fettsäurechlorid erhalten werden können. The polyhydroxyfatty acid amides are known substances which can be obtained with a fatty acid, a fatty acid or a fatty acid chloride by reductive amination of a reducing sugar with ammonia, an alkylamine or an alkanolamine and subsequent acylation.
  • Zur Gruppe der Polyhydroxyfettsäureamide gehören auch Verbindungen der Formel The group of polyhydroxyfatty acid amides also includes compounds of the formula
    Figure 00500001
    in der R für einen linearen oder verzweigten Alkyl- oder Alkenylrest mit 7 bis 12 Kohlenstoffatomen, R 1 für einen linearen, verzweigten oder zyklischen Alkylrest oder einen Arylrest mit 2 bis 8 Kohlenstoffatomen und R 2 für einen linearen, verzweigten oder zyklischen Alkylrest oder einen Arylrest oder einen Oxy-Alkylrest mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen steht, wobei C 1-4 -Alkyl- oder Phenylreste bevorzugt sind und [Z] für einen linearen Polyhydroxyalkylrest steht, dessen Alkylkette mit mindestens zwei Hydroxylgruppen substituiert ist, oder alkoxylierte, vorzugsweise ethoxylierte oder propxylierte Derivate dieses Restes. in which R is a linear or branched alkyl or alkenyl group having 7 to 12 carbon atoms, R 1 is a linear, branched or cyclic alkyl group or an aryl group containing 2 to 8 carbon atoms and R 2 is a linear, branched or cyclic alkyl group or an aryl group or an oxyalkyl group having 1 to 8 carbon atoms, C 1-4 alkyl or phenyl groups being preferred, and [Z] is a linear polyhydroxyalkyl residue, whose alkyl chain is substituted with at least two hydroxyl groups, or alkoxylated, preferably ethoxylated or propoxylated derivatives of that group.
  • [Z] wird vorzugsweise durch reduktive Aminierung eines reduzierten Zuckers erhalten, beispielsweise Glucose, Fructose, Maltose, Lactose, Galactose, Mannose oder Xylose. [Z] is preferably obtained by reductive amination of a reduced sugar, for example glucose, fructose, maltose, lactose, galactose, mannose or xylose. Die N-Alkoxy- oder N-Aryloxy-substituierten Verbindungen können durch Umsetzung mit Fettsäuremethylestern in Gegenwart eines Alkoxids als Katalysator in die gewünschten Polyhydroxyfettsäureamide überführt werden. The N-alkoxy- or N-aryloxy-substituted compounds may be converted as a catalyst in the desired polyhydroxy fatty acid methyl ester by reaction with in the presence of an alkoxide.
  • Ebenfalls bevorzugte Tenside sind nichtionische Tenside aus der Gruppe der alkoxylierten Alkohole. Other preferred surfactants are nonionic surfactants from the group of alkoxylated alcohols. Vorzugsweise handelt es sich hierbei um alkoxylierte, vorteilhafterweise ethoxylierte, insbesondere primäre Alkohole mit vorzugsweise 8 bis 18 C-Atomen und durchschnittlich 1 bis 12 Mol Ethylenoxid (EO) pro Mol Alkohol, in denen der Alkoholrest linear oder bevorzugt in 2-Stellung methylverzweigt sein kann bzw. lineare und methylverzweigte Reste im Gemisch enthalten kann, so wie sie üblicherweise in Oxoalkoholresten vorliegen. may be preferably these are alkoxylated, advantageously ethoxylated, more especially primary alcohols preferably containing 8 to 18 carbon atoms and on average 1 to 12 moles of ethylene oxide (EO) per mol alcohol, in which the alcohol methyl-branched linear or preferably in the 2-position or linear and methyl-branched radicals may contain the mixtures typically present in oxoalcohol radicals. Insbesondere sind jedoch Alkoholethoxylate mit linearen Resten aus Alkoholen nativen Ursprungs mit 12 bis 18 C-Atomen, z. However, alcohol ethoxylates containing linear radicals of alcohols are of natural origin having 12 to 18 carbon atoms, z. B. aus Kokos-, Palm-, Talgfett- oder Oleylalkohol, und durchschnittlich 2 bis 8 Mol EO pro Mol Alkohol bevorzugt. Example from coconut, palm, tallow or oleyl alcohol, and on average 2 to 8 EO per mole of alcohol. Zu den bevorzugten ethoxylierten Alkoholen gehören beispielsweise C 12-14 -Alkohole mit 3 EO oder 4 EO, C 9-11 -Alkohol mit 7 EO, C 13-15 -Alkohole mit 3 EO, 5 EO, 7 EO oder 8 EO, C 12-18 -Alkohole mit 3 EO, 5 EO oder 7 EO und Mischungen aus diesen, wie Mischungen aus C 12-14 -Alkohol mit 3 EO und C 12-18 -Alkohol mit 5 EO. Preferred ethoxylated alcohols include, for example, C 12-14 alcohols with 3 EO or 4 EO, C9-11 alcohol containing 7 EO, C 13-15 alcohols containing 3 EO, 5 EO, 7 EO or 8 EO, C 12-18 alcohols containing 3 EO, 5 EO or 7 EO and mixtures thereof, such as mixtures of C 12-14 alcohol with 3 EO and C12-18 alcohol containing 5 EO. Die angegebenen Ethoxylierungsgrade stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt einer ganzen oder einer gebrochenen Zahl entsprechen können. The degrees of ethoxylation indicated represent statistical averages, which can correspond to a specific product of a whole or a fractional number. Bevorzugte Alkoholethoxylate weisen eine eingeengte Homologenverteilung auf („narrow range ethoxylates", NRE). Zusätzlich zu diesen nichtionischen Tensiden können auch Fettalkohole mit mehr als 12 EO eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind Talgfettalkohol mit 14 EO, 25 EO, 30 EO oder 40 EO. Preferred alcohol ethoxylates have a narrow homolog distribution ( "narrow range ethoxylates", NRE). In addition to these nonionic surfactants, fatty alcohols containing more than 12 EO may also be used. Examples of these are tallow fatty alcohol containing 14 EO, 25 EO, 30 EO or 40 EO.
  • Mit besonderem Vorzug werden ethoxylierte Niotenside, die aus C 6-20 -Monohydroxyalkanolen oder C 6-20 -Alkylphenolen oder C 16-20 -Fettalkoholen und mehr als 12 Mol, vorzugsweise mehr als 15 Mol und insbesondere mehr als 20 Mol Ethylenoxid pro Mol Alkohol gewonnen wurden, eingesetzt. With particular preference, ethoxylated nonionic surfactant selected from C 6-20 monohydroxyalkanols or C 6-20 alkylphenols or C 16-20 fatty alcohols and more than 12 mol, preferably more than 15 mol and in particular more than 20 moles of ethylene oxide per mole of alcohol obtained, used. Ein besonders bevorzugtes Niotensid wird aus einem geradkettigen Fettalkohol mit 16 bis 20 Kohlenstoffatomen (C 16-20 -Alkohol), vorzugsweise einem C 18 -Alkohol und mindestens 12 Mol, vorzugsweise mindestens 15 Mol und insbesondere mindestens 20 Mol Ethylenoxid gewonnen. A particularly preferred nonionic surfactant is derived from a straight chain fatty alcohol having 16 to 20 carbon atoms (C 16-20 alcohol), preferably a C 18 alcohol and at least 12 mole, preferably at least 15 mol and in particular at least 20 moles of ethylene oxide. Hierunter sind die sogenannten „narrow range ethoxylates" besonders bevorzugt. Among these, the "narrow range ethoxylates" are particularly preferred.
  • Mit besonderem Vorzug werden weiterhin Kombinationen aus einem oder mehreren Talgfettalkoholen mit 20 bis 30 EO und Silikonentschäumern eingesetzt. With particular preference, combinations continue to be used from one or more tallow fatty alcohols with 20 to 30 EO and silicone.
  • Insbesondere bevorzugt sind nichtionische Tenside, die einen Schmelzpunkt oberhalb Raumtemperatur aufweisen. Especially preferred nonionic surfactants which have a melting point above room temperature are. Nichtionische(s) Tensid(e) mit einem Schmelzpunkt oberhalb von 20°C, vorzugsweise oberhalb von 25°C, besonders bevorzugt zwischen 25 und 60°C und insbesondere zwischen 26,6 und 43,3°C, ist/sind besonders bevorzugt. Nonionic surfactant (s) (e) having a melting point above 20 ° C, preferably above 25 ° C, more preferably between 25 and 60 ° C and particular between 26.6 and 43.3 ° C, is / are particularly preferred ,
  • Geeignete nichtionische Tenside, die Schmelz- bzw. Erweichungspunkte im genannten Temperaturbereich aufweisen, sind beispielsweise schwachschäumende nichtionische Tenside, die bei Raumtemperatur fest oder hochviskos sein können. Suitable nonionic surfactants have melting or softening temperature range mentioned above are, for example, low-foaming nonionic surfactants which may be solid or highly viscous at room temperature. Werden Niotenside eingesetzt, die bei Raumtemperatur hochviskos sind, so ist bevorzugt, dass diese eine Viskosität oberhalb von 20 Pa·s, vorzugsweise oberhalb von 35 Pa·s und insbesondere oberhalb 40 Pa·s aufweisen. If nonionic surfactants are used which are highly viscous at room temperature, it is preferred that they have a viscosity above 20 Pa · s, preferably above 35 Pa · s and in particular above 40 Pa · s. Auch Niotenside, die bei Raumtemperatur wachsartige Konsistenz besitzen, sind in Abhängigkeit von ihrem Anwendungszweck bevorzugt. Non-ionic surfactants that have a waxy consistency at room temperature are preferred, depending on their intended use.
  • Niotenside aus der Gruppe der alkoxylierten Alkohole, besonders bevorzugt aus der Gruppe der gemischt alkoxylierten Alkohole und insbesondere aus der Gruppe der EO-AO-EO-Niotenside, werden ebenfalls mit besonderem Vorzug eingesetzt. Nonionic surfactants from the group of alkoxylated alcohols, particularly preferably from the group of the mixed alkoxylated alcohols and in particular from the group of AO EO-EO-nonionic surfactants are likewise used with particular preference.
  • Das bei Raumtemperatur feste Niotensid besitzt vorzugsweise Propylenoxideinheiten im Molekül. The solid at room temperature nonionic surfactant preferably has propylene oxide units in the molecule. Vorzugsweise machen solche Propylenoxideinheiten bis zu 25 Gew.-%, besonders bevorzugt bis zu 20 Gew.-% und insbesondere bis zu 15 Gew.-% der gesamten Molmasse des nichtionischen Tensids aus. Preferably, such propylene oxide units make up to 25 wt .-%, particularly preferably up to 20 wt .-% and in particular up to 15 wt .-% of the total molecular weight of the nonionic surfactant. Besonders bevorzugte nichtionische Tenside sind ethoxylierte Monohydroxyalkanole oder Alkylphenole, die zusätzlich Polyoxyethylen-Polyoxypropylen Blockcopolymereinheiten aufweisen. Particularly preferred nonionic surfactants are ethoxylated monohydroxy alkanols or alkylphenols, which additionally comprise polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymer. Der Alkohol- bzw. Alkylphenolanteil solcher Niotensidmoleküle macht dabei vorzugsweise mehr als 30 Gew.-%, besonders bevorzugt mehr als 50 Gew.-% und insbesondere mehr als 70 Gew.-% der gesamten Molmasse solcher Niotenside aus. The alcohol or alkylphenol portion of such nonionic surfactant preferably makes up more than 30 wt .-%, particularly preferably more than 50 wt .-% and in particular more than 70 wt .-% of the total molecular weight of such nonionic surfactants. Bevorzugte Mittel sind dadurch gekennzeichnet, dass sie ethoxylierte und propoxylierte Niotenside enthalten, bei denen die Propylenoxideinheiten im Molekül bis zu 25 Gew.-%, bevorzugt bis zu 20 Gew.-% und insbesondere bis zu 15 Gew.-% der gesamten Molmasse des nichtionischen Tensids ausmachen. Preferred compositions are characterized in that they comprise ethoxylated and propoxylated nonionic surfactants in which the propylene oxide units in the molecule up to 25 wt .-%, preferably up to 20 wt .-% and in particular up to 15 wt .-% of the total molecular weight of the nonionic surfactant account.
  • Bevorzugt einzusetzende Tenside stammen aus den Gruppen der alkoxylierten Niotenside, insbesondere der ethoxylierten primären Alkohole und Mischungen dieser Tenside mit strukturell komplizierter aufgebauten Tensiden wie Polyoxypropylen/Polyoxyethylen/Polyoxypropylen ((PO/EO/PO)-Tenside). Preferably used surfactants come from the groups of alkoxylated nonionic surfactants, in particular ethoxylated primary alcohols, and mixtures of these surfactants with structurally complex, such as polyoxypropylene / polyoxyethylene / polyoxypropylene ((PO / EO / PO) surfactants). Solche (PO/EO/PO)-Niotenside zeichnen sich darüber hinaus durch gute Schaumkontrolle aus. Such (PO / EO / PO) nonionic surfactants are also characterized by good foam control.
  • Weitere besonders bevorzugt einzusetzende Niotenside mit Schmelzpunkten oberhalb Raumtemperatur enthalten 40 bis 70% eines Polyoxypropylen/Polyoxyethylen/Polyoxypropylen-Blockpolymerblends, der 75 Gew.-% eines umgekehrten Block-Copolymers von Polyoxyethylen und Polyoxypropylen mit 17 Mol Ethylenoxid und 44 Mol Propylenoxid und 25 Gew.-% eines Block-Copolymers von Polyoxyethylen und Polyoxypropylen, initiiert mit Trimethylolpropan und enthaltend 24 Mol Ethylenoxid und 99 Mol Propylenoxid pro Mol Trimethylolpropan, enthält. Further particularly preferred nonionic surfactants with melting points above room temperature contain 40 to 70% of a polyoxypropylene / polyoxyethylene / polyoxypropylene block polymer blend, the weight 75 wt .-% of a reverse block copolymer of polyoxyethylene and polyoxypropylene having 17 moles of ethylene oxide and 44 moles propylene oxide and 25th - contains% of a block copolymer of polyoxyethylene and polyoxypropylene initiated with trimethylolpropane and containing 24 moles of ethylene oxide and 99 moles of propylene oxide per mole of trimethylolpropane.
  • Als besonders bevorzugte Niotenside haben sich im Rahmen der vorliegenden Erfindung schwachschäumende Niotenside erwiesen, welche alternierende Ethylenoxid- und Alkylenoxideinheiten aufweisen. Particularly preferred nonionic surfactants in the context of the present invention, low-foaming nonionic surfactants have been found to comprise alternating ethylene oxide and alkylene oxide units. Unter diesen sind wiederum Tenside mit EO-AO-EO-AO- Blöcken bevorzugt, wobei jeweils eine bis zehn EO- bzw. AO-Gruppen aneinander gebunden sind, bevor ein Block aus den jeweils anderen Gruppen folgt. Among these surfactants with EO-AO-EO-AO blocks are preferred, wherein one to ten EO or AO groups are bonded to each other before a block of the other groups follows. Hier sind nichionische Tenside der allgemeinen Formel Here are nichionische surfactants of the general formula
    Figure 00530001
    bevorzugt, in der R 1 für einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder ein- bzw. mehrfach ungesättigten C 6-24 -Alkyl- oder -Alkenylrest steht; preferably, R 1 6-24 alkyl or alkenyl is a straight or branched, saturated or mono- or polyunsaturated C; jede Gruppe R 2 bzw. R 3 unabhängig voneinander ausgewählt ist aus -CH 3 , -CH 2 CH 3 , -CH 2 CH 2 -CH 3 , CH(CH 3 ) 2 und die Indizes w, x, y, z unabhängig voneinander für ganze Zahlen von 1 bis 6 stehen. each group R is -CH 2 CH 3, -CH 2 CH 2 -CH 3, CH (CH 3) 2 and the indices w, x, y, z is 2 and R 3 are independently selected from -CH 3, independently of one another are integers 1 to 6
  • Die bevorzugten Niotenside der vorstehenden Formel lassen sich durch bekannte Methoden aus den entsprechenden Alkoholen R 1 -OH und Ethylen- bzw. Alkylenoxid herstellen. The preferred nonionic surfactants of the above formula can be prepared by known methods from the corresponding alcohols R 1 -OH and ethylene oxide or alkylene. Der Rest R 1 in der vorstehenden Formel kann je nach Herkunft des Alkohols variieren. The radical R 1 in the above formula may vary depending on the origin of the alcohol. Werden native Quellen genutzt, weist der Rest R 1 eine gerade Anzahl von Kohlenstoffatomen auf und ist in der Regel unverzweigt, wobei die linearen Reste aus Alkoholen nativen Ursprungs mit 12 bis 18 C-Atomen, z. If natural sources are used, the radical R 1 has an even number of carbon atoms and is unbranched, as a rule, the linear radicals of alcohols of native origin with 12 to 18 carbon atoms, z. B. aus Kokos-, Palm-, Talgfett- oder Oleylalkohol, bevorzugt sind. Example from coconut, palm, tallow or oleyl alcohol, are preferred. Aus synthetischen Quellen zugängliche Alkohole sind beispielsweise die Guerbetalkohole oder in 2-Stellung methylverzweigte bzw. lineare und methylverzweigte Reste im Gemisch, so wie sie üblicherweise in Oxoalkoholresten vorliegen. From synthetic sources accessible alcohols are for example the Guerbet alcohols or 2-methyl-branched or linear and methyl-branched residues in the mixture, as are typically present in oxoalcohol radicals. Unabhängig von der Art des zur Herstellung der in den Mitteln enthaltenen Niotenside eingesetzten Alkohols sind Niotenside bevorzugt, bei denen R 1 in der vorstehenden Formel für einen Alkylrest mit 6 bis 24, vorzugsweise 8 bis 20, besonders bevorzugt 9 bis 15 und insbesondere 9 bis 11 Kohlenstoffatomen steht. Regardless of the type of alcohol used for preparing the nonionic surfactants contained in the agents are nonionic surfactants are preferred in which R 1 in the above formula is an alkyl radical having from 6 to 24, preferably 8 to 20, particularly preferably 9 to 15 and especially 9 to 11 is carbon atoms.
  • Als Alkylenoxideinheit, die alternierend zur Ethylenoxideinheit in den bevorzugten Niotensiden enthalten ist, kommt neben Propylenoxid insbesondere Butylenoxid in Betracht. The alkylene oxide unit that is alternatingly contained with the ethylene oxide in the preferred nonionic surfactants, especially butylene addition to propylene into consideration. Aber auch weitere Alkylenoxide, bei denen R 2 bzw. R 3 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus -CH 2 CH 2 -CH 3 bzw. CH(CH 3 ) 2 sind geeignet. However, other alkylene oxides in which R 2 and R 3 are independently selected from -CH 2 CH 2 -CH 3 or CH (CH 3) 2 are suitable. Bevorzugt werden Niotenside der vorstehenden Formel eingesetzt, bei denen R 2 bzw. R 3 für einen Rest -CH 3 , w und x unabhängig voneinander für Werte von 3 oder 4 und y und z unabhängig voneinander für Werte von 1 oder 2 stehen. Preferably, nonionic surfactants of the above formula in which R 2 and R 3 are a radical -CH 3, w and x independently of one another for values of 3 or 4 and y and z are independently values of 1 or second
  • Zusammenfassend sind insbesondere nichtionische Tenside bevorzugt, die einen C 9-15 -Alkylrest mit 1 bis 4 Ethylenoxideinheiten, gefolgt von 1 bis 4 Propylenoxideinheiten, gefolgt von 1 bis 4 Ethylenoxideinheiten, gefolgt von 1 bis 4 Propylenoxideinheiten aufweisen. Nonionic surfactants are summarize, particularly preferably having a C 9-15 alkyl group having 1 to 4 ethylene oxide units, followed by 1 to 4 propylene oxide units, followed by 1 to 4 ethylene oxide units, followed by 1 to 4 propylene oxide units. Diese Tenside weisen in wässriger Lösung die erforderliche niedrige Viskosität auf und sind erfindungsgemäß mit besonderem Vorzug einsetzbar, insbesondere wie vorstehend beschrieben durch deren synergistische Kombination mit erfindungsgemäßen Enzymen. These surfactants exhibit in aqueous solution, the required low viscosity, and are according to the invention used with particular preference, in particular as described above by their synergistic combination with the present invention enzymes.
  • Tenside der allgemeinen Formel Surfactants of the general formula R 1 -CH(OH)CH 2 O-(AO) w -(A'O) x -(A''O) y -(A'''O) z -R 2 , in der R 1 -CH (OH) CH 2 O- (AO) w - (A'O) x - (A''O) y - (A '' 'O) z -R 2 wherein R 1 und R 2 unabhängig voneinander für einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder ein- bzw. mehrfach ungesättigten C 2-40 -Alkyl- oder -Alkenylrest steht; R 1 and R 2 independently represent a linear or branched, saturated or mono- or polyunsaturated C 2-40 alkyl or alkenyl radical; A, A', A'' und A''' unabhängig voneinander für einen Rest aus der Gruppe -CH 2 CH 2 , -CH 2 CH 2 -CH 2 , -CH 2 -CH(CH 3 ), -CH 2 -CH 2 -CH 2 -CH 2 , -CH 2 -CH(CH 3 )-CH 2 -, -CH 2 -CH(CH 2 -CH 3 ) steht; A, A ', A' 'and A' '' independently of one another represent a radical from the group -CH 2 CH 2, -CH 2 CH 2 -CH 2, -CH 2 -CH (CH 3) -CH 2 - CH 2 -CH 2 -CH 2, -CH 2 -CH (CH 3) -CH 2 -, -CH 2 -CH (CH 2 -CH 3) group; und w, x, y und z für Werte zwischen 0,5 und 90 stehen, wobei x, y und/oder z auch 0 sein können sind erfindungsgemäß bevorzugt. and w, x, y and z are values ​​between 0.5 and 90, where x, y and / or z may also be 0, are preferred in the invention.
  • Bevorzugt werden insbesondere solche endgruppenverschlossene poly(oxyalkylierten) Niotenside, die gemäß der Formel In particular, preferred end-capped poly (oxyalkylated) nonionic surfactants according to the formula R 1 O[CH 2 CH 2 O] x CH 2 CH(OH)R 2 R 1 O [CH 2 CH 2 O] x CH 2 CH (OH) R 2 neben einem Rest R 1 , welcher für lineare oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte, aliphatische oder aromatische Kohlenwasserstoffreste mit 2 bis 30 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise mit 4 bis 22 Kohlenstoffatomen steht, weiterhin einen linearen oder verzweigten, gesättigten oder ungesättigten, aliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffrest R2 mit 1 bis 30 Kohlenstoffatomen aufweisen, wobei x für Werte zwischen 1 und 90, vorzugsweise für Werte zwischen 40 und 80 und insbesondere für Werte zwischen 40 und 60 steht. addition to a group R 1, which is linear or branched, saturated or unsaturated, aliphatic or aromatic hydrocarbon radicals having from 2 to 30 carbon atoms, preferably having 4 to 22 carbon atoms, further comprising a linear or branched, saturated or unsaturated, aliphatic or aromatic hydrocarbon radical R2 have 1 to 30 carbon atoms, where x stands for values ​​between 1 and 90, preferably between 40 and 80 and in particular from 40 to 60th
  • Besonders bevorzugt sind Tenside der Formel Particularly preferred surfactants are of the formula R 1 O[CH 2 CH(CH 3 )O] x [CH 2 CH 2 O] y CH 2 CH(OH)R 2 , R 1 O [CH 2 CH (CH 3) O] x [CH 2 CH 2 O] y CH 2 CH (OH) R 2, in der R 1 für einen linearen oder verzweigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 4 bis 18 Kohlenstoffatomen oder Mischungen hieraus steht, R 2 einen linearen oder verzweigten Kohlenwasserstoffrest mit 2 bis 26 Kohlenstoffatomen oder Mischungen hieraus bezeichnet und x für Werte zwischen 0,5 und 1,5 sowie y für einen Wert von mindestens 15 steht. 1 in which R is a linear or branched aliphatic hydrocarbon radical having 4 to 18 carbon atoms or mixtures thereof, R 2 thereof denotes a linear or branched hydrocarbon radical having 2 to 26 carbon atoms or mixtures thereof and x has a value between 0.5 and 1.5 and y has a value of at least 15 °.
  • Besonders bevorzugt werden weiterhin solche endgruppenverschlossene poly(oxyalkylierten) Niotenside der Formel Especially preferred are further those end-capped poly (oxyalkylated) nonionic surfactants of the formula R 1 O[CH 2 CH 2 O] x [CH 2 CH(R 3 )O] y CH 2 CH(OH)R 2 , R 1 O [CH 2 CH 2 O] x [CH 2 CH (R 3) O] y CH 2 CH (OH) R 2, in der R 1 und R 2 unabhängig voneinander für einen linearen oder verzweigten, gesättigten oder ein- bzw. mehrfach ungesättigten Kohlenwasserstoffrest mit 2 bis 26 Kohlenstoffatomen steht, R 3 unabhängig voneinander ausgewählt ist aus -CH 3 , -CH 2 CH 3 , -CH 2 CH 2 -CH 3 , CH(CH 3 ) 2 , vorzugsweise jedoch für -CH 3 steht, und x und y unabhängig voneinander für Werte zwischen 1 und 32 stehen, wobei Niotenside mit R 3 = -CH 3 und Werten für x von 15 bis 32 und y von 0,5 und 1,5 ganz besonders bevorzugt sind. independently in which R 1 and R 2 each other is a linear or branched, saturated or mono- or polyunsaturated hydrocarbon radical having 2 to 26 carbon atoms, R 3 is independently selected from -CH 3, -CH 2 CH 3, -CH 2 CH 2 CH 3, CH (CH 3) 2, but preferably is -CH 3, and x and y are independently values between 1 and 32, wherein nonionic surfactants with R 3 = -CH 3, and values for x of 15 to 32 and y of 0.5 and 1.5 are especially preferred.
  • Weitere bevorzugt einsetzbare Niotenside sind die endgruppenverschlossenen poly(oxyalkylierten) Niotenside der Formel Other preferred nonionic surfactants are the end-capped poly (oxyalkylated) nonionic surfactants of the formula R 1 O[CH 2 CH(R 3 )O] x [CH 2 ] k CH(OH)[CH 2 ] j OR 2 , R 1 O [CH 2 CH (R 3) O] x [CH 2] k CH (OH) [CH 2] j OR 2, in der R 1 und R 2 für lineare oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte, aliphatische oder aromatische Kohlenwasserstoffreste mit 1 bis 30 Kohlenstoffatomen stehen, R 3 für H oder einen Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-, iso-Propyl, n-Butyl-, 2-Butyl- oder 2-Methyl-2-Butylrest steht, x für Werte zwischen 1 und 30, k und j für Werte zwischen 1 und 12, vorzugsweise zwischen 1 und 5 stehen. are in the R 1 and R 2 are linear or branched, saturated or unsaturated, aliphatic or aromatic hydrocarbon radicals having 1 to 30 carbon atoms, R 3 is H or a methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n- butyl, 2-butyl or 2-methyl-2-butyl radical, x is a value between 1 and 30 k and j are values ​​between 1 and 12, preferably have 1 to 5 Wenn der Wert x ≥ 2 ist, kann jedes R 3 in der obenstehenden Formel R 1 O[CH 2 CH(R 3 )O][CH 2 ] k CH(OH)[CH 2 ] j OR 2 unterschiedlich sein. If the value is x ≥ 2, each R 3 may be different in the above formula R 1 O [CH 2 CH (R 3) O] [CH 2] k CH (OH) [CH 2] j OR. 2 R 1 und R 2 sind vorzugsweise lineare oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte, aliphatische oder aromatische Kohlenwasserstoffreste mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, wobei Reste mit 8 bis 18 C-Atomen besonders bevorzugt sind. R 1 and R 2 are preferably linear or branched, saturated or unsaturated, aliphatic or aromatic hydrocarbon radicals having 6 to 22 carbon atoms, said radicals having 8 to 18 carbon atoms are particularly preferred. Für den Rest R 3 sind H, -CH 3 oder -CH 2 CH 3 besonders bevorzugt. Of the radical R 3 is H, -CH 3 or -CH 2 CH 3 are particularly preferred. Besonders bevorzugte Werte für x liegen im Bereich von 1 bis 20, insbesondere von 6 bis 15. Particularly preferred values ​​for x are in the range of 1 to 20, in particular 6 to 15
  • Wie vorstehend beschrieben, kann jedes R 3 in der obenstehenden Formel unterschiedlich sein, falls x ≥ 2 ist. As described above, each R 3 may be different in the above formula, if x ≥ 2. Hierdurch kann die Alkylenoxideinheit in der eckigen Klammer variiert werden. The alkylene oxide can be varied within the square brackets. Steht x beispielsweise für 3, kann der Rest R 3 ausgewählt werden, um Ethylenoxid-(R 3 = H) oder Propylenoxid-(R 3 = CH 3 ) Einheiten zu bilden, die in jedweder Reihenfolge aneinandergefügt sein können, beispielsweise (EO)(PO)(EO), (EO)(EO)(PO), (EO)(EO)(EO), (PO)(EO)(PO), (PO)(PO)(EO) und (PO)(PO)(PO). Is for example, x 3, the radical R may be selected 3 to form ethylene oxide (R 3 = H) or propylene oxide (R 3 = CH 3) units which can be joined together in any order, for example, (EO) ( PO) (EO), (EO) (EO) (PO), (EO) (EO) (EO), (PO) (EO) (PO), (PO) (PO) (EO) and (PO) ( PO) (PO). Der Wert 3 für x ist hierbei beispielhaft gewählt worden und kann durchaus größer sein, wobei die Variationsbreite mit steigenden x-Werten zunimmt und beispielsweise eine große Anzahl (EO)-Gruppen, kombiniert mit einer geringen Anzahl (PO)-Gruppen einschließt, oder umgekehrt. The value 3 for x has been selected as an example and may be larger, whereby the variation increases with increasing values ​​of x and, for example, a large number of (EO), combined with a small number of (PO) groups, or vice versa ,
  • Besonders bevorzugte endgruppenverschlossene poly(oxyalkylierte) Alkohole der obenstehenden Formel weisen Werte von k = 1 und j = 1 auf, so dass sich die vorstehende Formel zu Particularly preferred end-capped poly (oxyalkylated) alcohols of the above formula have values ​​of k = 1 and j = 1, so that the above formula to R 1 O[CH 2 CH(R 3 )O] x CH 2 CH(OH)CH 2 OR 2 R 1 O [CH 2 CH (R 3) O] x CH 2 CH (OH) CH 2 OR 2 vereinfacht. simplified. In der letztgenannten Formel sind R 1 , R 2 und R 3 wie oben definiert und x steht für Zahlen von 1 bis 30, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 6 bis 18. Besonders bevorzugt sind Tenside, bei denen die Reste R 1 und R 2 9 bis 14 C-Atome aufweisen, R 3 für H steht und x Werte von 6 bis 15 annimmt. In this formula, R 1, R 2 and R 3 are as defined above and x represents numbers from 1 to 30, preferably from 1 to 20 and in particular from 6 to 18. Particularly preferred are surfactants in which the radicals R 1 and R 2 have 9 to 14 C atoms, R 3 is H and x assumes values 6 to 15
  • Die angegebenen C-Kettenlängen sowie Ethoxylierungsgrade bzw. Alkoxylierungsgrade der vorgenannten Niotenside stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein können. The carbon chain lengths and degrees of ethoxylation or alkoxylation of the aforementioned nonionic surfactants are statistical average values ​​which may be an integer or a fractional number for a specific product. Aufgrund der Herstellverfahren bestehen Handelsprodukte der genannten Formeln zumeist nicht aus einem individuellen Vertreter, sondern aus Gemischen, wodurch sich sowohl für die C-Kettenlängen als auch für die Ethoxylierungsgrade bzw. Alkoxylierungsgrade Mittelwerte und daraus folgend gebrochene Zahlen ergeben können. Due to the manufacturing process do not exist commercial products of the cited formulas of an individual representative, but instead of mixtures, whereby not only the C-chain lengths and the degrees of ethoxylation or alkoxylation average values ​​and can thus be fractional numbers.
  • Selbstverständlich können die vorgenannten nichtionischen Tenside nicht nur als Einzelsubstanzen, sondern auch als Tensidgemische aus zwei, drei, vier oder mehr Tensiden eingesetzt werden. Of course, the above-mentioned nonionic surfactants may be used not only as single substances, but also as surfactant mixtures of two, three, four or more surfactants. Als Tensidgemische werden dabei nicht Mischungen nichtionischer Tenside bezeichnet, die in ihrer Gesamtheit unter eine der oben genannten allgemeinen Formeln fallen, sondern vielmehr solche Mischungen, die zwei, drei, vier oder mehr nichtionische Tenside enthalten, die durch unterschiedliche der vorgenannten allgemeinen Formeln beschrieben werden können. not mixtures of nonionic surfactants as surfactant referred covered in its entirety by one of the general formulas above, but rather those mixtures which contain two, three, four or more non-ionic surfactants which may be described by various of the aforementioned general formulas ,
  • Als anionische Tenside sind beispielsweise solche vom Typ der Sulfonate und Sulfate erfindungsgemäß einsetzbar. Suitable anionic surfactants for example, those of the sulfonate and sulfate are used according to the invention. Als Tenside vom Sulfonat-Typ kommen dabei vorzugsweise C 9-13 -Alkylbenzolsulfonate, Olefinsulfonate, dh Gemische aus Alken- und Hydroxyalkansulfonaten sowie Disulfonaten, wie man sie beispielsweise aus C 12-18 -Monoolefinen mit end- oder innenständiger Doppelbindung durch Sulfonieren mit gasförmigem Schwefeltrioxid und anschließende alkalische oder saure Hydrolyse der Sulfonierungsprodukte erhält, in Betracht. Suitable surfactants of the sulfonate type are preferably C 9-13 alkyl benzene sulfonates, olefin sulfonates, ie mixtures of alkene and hydroxyalkane sulfonates, and the disulfonates obtained, for example, from C 12-18 monoolefins with terminal or internal double bond by sulfonation with gaseous sulfur trioxide and subsequent alkaline or acidic hydrolysis of the sulfonation products into consideration. Geeignet sind auch Alkansulfonate, die aus C 12-18 -Alkanen beispielsweise durch Sulfochlorierung oder Sulfoxidation mit anschließender Hydrolyse bzw. Neutralisation gewonnen werden. Also suitable are alkanesulfonates, which are obtained from C 12-18 alkanes, for example by sulfochlorination or sulfoxidation and subsequent hydrolysis or neutralization. Ebenso sind auch die Ester von α-Sulfofettsäuren (Estersulfonate), z. Likewise, the esters of α-sulfofatty acids (ester sulfonates), z are. B. die α-sulfonierten Methylester der hydrierten Kokos-, Palmkern- oder Talgfettsäuren geeignet. B. suitable are the α-sulfonated Methylester of hydrogenated coconut, palm kernel or tallow fatty acids.
  • Weitere geeignete Aniontenside sind sulfierte Fettsäureglycerinester. Other suitable anionic surfactants are sulfonated Fettsäureglycerinester. Unter Fettsäureglycerinestern sind die Mono-, Di- und Triester sowie deren Gemische zu verstehen, wie sie bei der Herstellung durch Veresterung von einem Monoglycerin mit 1 bis 3 Mol Fettsäure oder bei der Umesterung von Triglyceriden mit 0,3 bis 2 Mol Glycerin erhalten werden. Under Fettsäureglycerinestern the mono-, di- and triesters and mixtures thereof are to be understood as they are obtained in the production by esterification of a monoglycerol with 1 to 3 mol fatty acid or in the transesterification of triglycerides with 0.3 to 2 moles of glycerol. Bevorzugte sulfierte Fettsäureglycerinester sind dabei die Sulfierprodukte von gesättigten Fettsäuren mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, beispielsweise der Capronsäure, Caprylsäure, Caprinsäure, Myristinsäure, Laurinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure oder Behensäure. Preferred sulfonated Fettsäureglycerinester are the sulfonation products of saturated fatty acids having 6 to 22 carbon atoms, for example caproic acid, caprylic acid, capric acid, myristic acid, lauric acid, palmitic acid, stearic acid or behenic acid.
  • Als Alk(en)ylsulfate werden die Alkali- und insbesondere die Natriumsalze der Schwefelsäurehalbester der C 12 -C 18 -Fettalkohole, beispielsweise aus Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder der C 10 -C 20 -Oxoalkohole und diejenigen Halbester sekundärer Alkohole dieser Kettenlängen bevorzugt. Alk (en) yl sulfates are the alkali and especially the sodium salts of Schwefelsäurehalbester the C 12 -C 18 fatty alcohols, for example coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl or stearyl alcohol, or C 10 -C 20 oxo alcohols and those Halbester secondary alcohols of these chain lengths. Weiterhin bevorzugt sind Alk(en)ylsulfate der genannten Kettenlänge, welche einen synthetischen, auf petrochemischer Basis hergestellten geradkettigen Alkylrest enthalten, die ein analoges Abbauverhalten besitzen wie die adäquaten Verbindungen auf der Basis von fettchemischen Rohstoffen. Further preferred are alk (en) yl sulfates of said chain length which contain a synthetic, linear alkyl chain based on a petrochemical and which are similar in their degradation behavior to the corresponding compounds based on oleochemical raw materials. Aus waschtechnischem Interesse sind die C 12 -C 16 -Alkylsulfate und C 12 -C 15 -Alkylsulfate sowie C 14 -C 15 -Alkylsulfate bevorzugt. From the washing, the C 12 -C 16 are preferred alkyl sulfates and C 12 -C 15 alkyl sulfates and C 14 -C 15 alkyl sulfates. Auch 2,3-Alkylsulfate, welche als Handelsprodukte der Shell Oil Company unter dem Namen DAN ® erhalten werden können, sind geeignete Aniontenside. 2,3-alkyl sulfates, which can be obtained as commercial products from Shell Oil Company under the name DAN ®, are suitable anionic surfactants.
  • Auch die Schwefelsäuremonoester der mit 1 bis 6 Mol Ethylenoxid ethoxylierten geradkettigen oder verzweigten C 7-21 -Alkohole, wie 2-Methyl-verzweigte C 9-11 -Alkohole mit im Durchschnitt 3,5 Mol Ethylenoxid (EO) oder C 12-18 -Fettalkohole mit 1 bis 4 EO, sind geeignet. Also, the Schwefelsäuremonoester the ethoxylated with 1 to 6 moles of ethylene oxide chain or branched C 7-21 alcohols, such as 2-methyl-branched C9-11 alcohols containing on average 3.5 mol ethylene oxide (EO) or C12-18 - fatty alcohols having 1 to 4 EO, are also suitable. Auf Grund ihres hohen Schaumverhaltens werden sie nur in relativ geringen Mengen, beispielsweise in Mengen von 1 bis 5 Gew.-%, eingesetzt. Because of their high foaming capacity, they are only used in relatively small amounts, for example in quantities of 1 to 5 wt .-%.
  • Weitere geeignete Aniontenside sind auch die Salze der Alkylsulfobernsteinsäure, die auch als Sulfosuccinate oder als Sulfobernsteinsäureester bezeichnet werden und die Monoester und/oder Diester der Sulfobernsteinsäure mit Alkoholen, vorzugsweise Fettalkoholen und insbesondere ethoxylierten Fettalkoholen, darstellen. Other suitable anionic surfactants include the salts of alkylsulfosuccinic acid, which are also known as sulfosuccinates or as sulfosuccinic esters and which Monoester and / or diesters of sulfosuccinic acid with alcohols, preferably fatty alcohols and especially ethoxylated fatty alcohols represent. Bevorzugte Sulfosuccinate enthalten C 8-18 -Fettalkoholreste oder Mischungen aus diesen. Preferred sulfosuccinates contain C8-18 fatty alcohol radicals or mixtures thereof. Insbesondere bevorzugte Sulfosuccinate enthalten einen Fettalkoholrest, der sich von ethoxylierten Fettalkoholen ableitet, die für sich betrachtet nichtionische Tenside darstellen. Particularly preferred sulfosuccinates contain a fatty alcohol radical derived from ethoxylated fatty alcohols which, considered in isolation, represent nonionic surfactants. Dabei sind wiederum Sulfosuccinate, deren Fettalkohol-Reste sich von ethoxylierten Fettalkoholen mit eingeengter Homologenverteilung ableiten, besonders bevorzugt. Of these sulfosuccinates whose fatty alcohol radicals are derived from ethoxylated fatty alcohols with a narrow homolog distribution are particularly preferred. Ebenso ist es auch möglich, Alk(en)ylbernsteinsäure mit vorzugsweise 8 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Alk(en)ylkette oder deren Salze einzusetzen. Likewise, it is also possible to use alk (en) yl succinic acid preferably containing 8 to 18 carbon atoms in the alk (en) yl chain or salts thereof.
  • Als weitere anionische Tenside kommen insbesondere Seifen in Betracht. Other anionic surfactants in particular, soaps. Geeignet sind gesättigte Fettsäureseifen, wie die Salze der Laurinsäure, Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, hydrierte Erucasäure und Behensäure sowie insbesondere aus natürlichen Fettsäuren, z. Saturated fatty acid soaps such as the salts of lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, hydrogenated erucic acid and behenic acid, and in particular from natural fatty acids, for example. B. Kokos-, Palmkern- oder Talgfettsäuren, abgeleitete Seifengemische. As coconut, palm kernel or tallow fatty mixtures.
  • Die anionischen Tenside einschließlich der Seifen können in Form ihrer Natrium-, Kalium- oder Ammoniumsalze sowie als lösliche Salze organischer Basen, wie Mono-, Di- oder Triethanolamin, vorliegen. The anionic surfactants including the soaps can exist in the form of their sodium, potassium or ammonium salts and as soluble salts of organic bases such as mono-, di- or triethanolamine. Vorzugsweise liegen die anionischen Tenside in Form ihrer Natrium- oder Kaliumsalze, insbesondere in Form der Natriumsalze vor. Preferably, the anionic surfactants are in the form of their sodium or potassium salts, in particular in the form of the sodium salts.
  • An Stelle der genannten Tenside oder in Verbindung mit ihnen können zudem kationische und/oder amphotere Tenside eingesetzt werden. In place of the above-mentioned surfactants or in combination with them, cationic and / or amphoteric surfactants can also be used.
  • Als solche kationische Aktivsubstanzen können beispielsweise kationische Verbindungen der nachfolgenden Formeln eingesetzt werden: As such cationic active substances, cationic compounds of the following formulas can be used:
    Figure 00590001
    worin jede Gruppe R 1 unabhängig voneinander ausgewählt ist aus C 1-6 -Alkyl-, -Alkenyl- oder -Hydroxyalkylgruppen; wherein each R 1 group is independently selected from C 1-6 alkyl, alkenyl or hydroxyalkyl groups; jede Gruppe R 2 unabhängig voneinander ausgewählt ist aus C 8-28 -Alkyl- oder -Alkenylgruppen; each R 2 group is independently selected from C 8-28 alkyl or alkenyl; R 3 = R 1 oder (CH 2 ) n -TR 2 ; R 3 = R 1 or (CH 2) n -TR 2; R 4 = R 1 oder R 2 oder (CH 2 ) n -TR 2 ; R 4 = R 1 or R 2 or (CH 2) n -TR 2; T = -CH 2 -, -O-CO- oder -CO-O- und n eine ganze Zahl von 0 bis 5 ist. T = -CH 2 -, -O-CO- or -CO-O- and n is an integer from 0 to 5.
  • In maschinellen Geschirrspülmitteln, beträgt der Gehalt an kationischen und/oder amphoteren Tensiden vorzugsweise weniger als 6 Gew.-%, bevorzugt weniger als 4 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt weniger als 2 Gew.-% und insbesondere weniger als 1 Gew.-%. In automatic dishwashing agents, the content of cationic and / or amphoteric surfactants is preferably less than 6 wt .-%, preferably less than 4 wt .-%, most preferably less than 2 wt .-% and in particular less than 1 wt %. Maschinelle Geschirrspülmittel, welche keine kationischen oder amphoteren Tenside enthalten, werden besonders bevorzugt. Machine dishwashing detergents which contain no cationic or amphoteric surfactants are particularly preferred.
  • Kombination erfindungsgemäßer Enzyme mit Bleichmitteln Combination according to the invention Enzymes with bleaching agents
  • Weiterhin wird durch die Kombination erfindungsgemäßer Enzyme mit ausgewählten Bleichmitteln, welche nachstehend näher beschrieben werden, eine synergistische Reinigungsleistung des Mittels erreicht. Furthermore is achieved a synergistic cleaning performance of the agent by the combination according to the invention enzymes with selected bleaching agents, which are described in more detail below. Ein solches Mittel bewirkt eine verbesserte Entfernung von Anschmutzungen im Vergleich mit Mitteln, die entweder nur eine der beiden Komponenten, also Enzyme oder Bleichmittel, beinhalten, oder auch im Vergleich zur erwarteten Reinigungsleistung eines Mittels mit beiden Komponenten auf Grund der bloßen Addition der jeweiligen Einzelbeiträge dieser beiden Komponenten zur Reinigungsleistung des Mittels. One such means results in an improved removal of soils in comparison with agents which either include only one of the two components, ie enzymes or bleaching agents or in comparison to the expected cleaning performance of a product with two components because of the mere addition of the respective individual contributions of these two components to the cleaning performance of the agent. Somit stellt auch die ausgewählte Kombination von erfindungsgemäßen Enzymen mit solchen Bleichmitteln einen wesentlichen Aspekt der Erfindung dar, die in erfindungsgemäßen Mitteln eine synergistische Wirkung aufweisen. Thus, the combination of enzymes according to the invention with such bleaching agents selected represents a significant aspect of the invention which have a synergistic effect in the inventive compositions.
  • Nachfolgend werden die hierfür geeigneten Bleichmittel näher beschrieben. Subsequently, the purpose suitable bleaches are described in detail. Unter den als Bleichmittel dienenden, in Wasser H 2 O 2 liefernden Verbindungen haben das Natriumpercarbonat, das Natriumperborattetrahydrat und das Natriumperboratmonohydrat besondere Bedeutung. Among the compounds used as bleaching agents in water H 2 O 2 compounds, sodium percarbonate, sodium perborate tetrahydrate and sodium perborate monohydrate are particularly important. Weitere erfindungsgemäß einsetzbare Bleichmittel sind beispielsweise Peroxypyrophosphate, Citratperhydrate sowie H 2 O 2 liefernde persaure Salze oder Persäuren, wie Perbenzoate, Peroxophthalate, Diperazelainsäure, Phthaloiminopersäure oder Diperdodecandisäure. Further according to the invention can be used bleaching agents are, for example, peroxypyrophosphates, citrate perhydrates and H2 O2 -yielding peracidic salts or peracids, such as perbenzoates, peroxophthalates, diperazelaic acid, diperdodecanedioic acid or Phthaloiminopersäure.
  • Zudem können auch Bleichmittel aus der Gruppe der organischen Bleichmittel eingesetzt werden. In addition, bleaching agents from the group of organic bleaching agents can be used. Typische organische Bleichmittel sind die Diacylperoxide, wie z. Typical organic bleaching agents are diacyl peroxides, such as. B. Dibenzoylperoxid. Dibenzoyl peroxide. Weitere typische organische Bleichmittel sind die Peroxysäuren, wobei insbesondere die Alkylperoxysäuren und die Arylperoxysäuren eingesetzt werden. Other typical organic bleaching agents are the peroxy acids, in particular the alkylperoxy acids and aryl peroxy acids are used. Bevorzugte Vertreter sind (a) die Peroxybenzoesäure und ihre ringsubstituierten Derivate, wie Alkylperoxybenzoesäuren, aber auch Peroxy-α-Naphtoesäure und Magnesiummonoperphthalat, (b) die aliphatischen oder substituiert aliphatischen Peroxysäuren, wie Peroxylaurinsäure, Peroxystearinsäure, ε-Phthalimidoperoxycapronsäure [Phthaliminoperoxyhexansäure (PAP)], o-Carboxybenzamidoperoxycapronsäure, N-Nonenylamidoperadipinsäure und N-Nonenylamidopersuccinate, und (c) aliphatische und araliphatische Peroxydicarbonsäuren, wie 1,12-Diperoxycarbonsäure, 1,9-Diperoxyazelainsäure, Diperocysebacinsäure, Diperoxybrassylsäure, die Diperoxyphthalsäuren, 2-Decyldiperoxybutan-1,4-disäure, N,N-Terephthaloyl-di(6-aminopercapronsäue). Preferred representatives are (a) peroxybenzoic acid and its ring-substituted derivatives, such as alkyl, but also peroxy-α-naphthoic acid and magnesium monoperphthalate, (b) the aliphatic or substituted aliphatic peroxy acids, such as peroxylauric acid, peroxystearic acid, ε-phthalimidoperoxycaproic acid [Phthaliminoperoxyhexansäure (PAP)] , o-Carboxybenzamidoperoxycapronsäure, N-nonenylamidoperadipic acid and N-nonenylamidopersuccinates, and (c) aliphatic and araliphatic peroxydicarboxylic acids, such as 1,12-diperoxycarboxylic acid, 1,9-diperoxyazelaic acid, Diperocysebacinsäure, diperoxybrassylic acid, diperoxyphthalic acids, the 2-decyldiperoxybutane-1,4- dioic acid, N, N-terephthaloyl-di (6-aminopercaproic acid).
  • Weitere erfindungsgemäß einsetzbare Bleichmittel stellen enzymatische und chemischenzymatische Bleichsysteme dar. Hierbei wird ein geeignetes Substrat durch ein entsprechendes Enzym umgesetzt, so dass Wasserstoff-Peroxid entsteht. Further according to the invention can be used bleach represent enzymatic and chemischenzymatische bleaching systems. In this case, a suitable substrate by an appropriate enzyme is reacted, so that hydrogen peroxide is formed. Dieses kann dann enzymatisch oder chemisch aktiviert werden. This can then be enzymatically or chemically activated. Umgekehrt kann auch chemisch freigesetztes Wasserstoff-Peroxid durch ein enzymatisches System in eine aktivierte Form übertragen werden. Conversely, chemically released hydrogen peroxide may be transferred into an activated form by an enzymatic system.
  • Als Bleichmittel können auch Chlor oder Brom freisetzende Substanzen eingesetzt werden. As bleaching agents and chlorine or bromine-releasing substances may be used. Unter den geeigneten Chlor oder Brom freisetzenden Materialien kommen beispielsweise heterozyklische N-Brom- und N-Chloramide, beispielsweise Trichlorisocyanursäure, Tribromisocyanursäure, Dibromisocyanursäure und/oder Dichlorisocyanursäure (DICH) und/oder deren Salze mit Kationen wie Kalium und Natrium in Betracht. Suitable chlorine- or bromine-releasing materials, for example, heterocyclic N-bromo and N-chloroamides, for example, trichloroisocyanuric acid, tribromoisocyanuric, dibromoisocyanuric and / or dichloroisocyanuric come (DICH) and / or their salts with cations such as potassium and sodium. Hydantoinverbindungen, wie 1,3-Dichlor-5,5-dimethylhydanthoin sind ebenfalls geeignet. Hydantoin compounds such as 1,3-dichloro-5,5-dimethylhydantoin are also suitable.
  • Erfindungsgemäß werden Wasch- oder Reinigungsmittel, insbesondere maschinelle Geschirrspülmittel, bevorzugt, die 1 bis 35 Gew.-%, vorzugsweise 2,5 bis 30 Gew.-%, besonders bevorzugt 3,5 bis 20 Gew.-% und insbesondere 5 bis 15 Gew.-% Bleichmittel, vorzugsweise Natriumpercarbonat, enthalten. According to the invention the washing or cleaning compositions, especially machine dishwashing, preferably comprising 1 to 35 wt .-%, preferably 2.5 to 30 wt .-%, particularly preferably 3.5 to 20 wt .-% and especially 5 to 15 .-% bleach, preferably sodium percarbonate.
  • Der Aktivsauerstoffgehalt der Wasch- oder Reinigungsmittel, insbesondere der maschinellen Geschirrspülmittel, beträgt, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, vorzugsweise zwischen 0,4 und 10 Gew.-%, besonders bevorzugt zwischen 0,5 und 8 Gew.-% und insbesondere zwischen 0,6 und 5 Gew.-%. The active oxygen content of the washing or cleaning agents, particularly dishwasher detergents, in each case based on the total weight of the composition, preferably between 0.4 and 10 wt .-%, particularly preferably between 0.5 and 8 wt .-% and in particular between 0.6 and 5 wt .-%. Besonders bevorzugte Mittel weisen einen Aktivsauerstoffgehalt oberhalb 0,3 Gew.-%, bevorzugt oberhalb 0,7 Gew.-%, besonders bevorzugt oberhalb 0,8 Gew.-% und insbesondere oberhalb 1,0 Gew.-% auf. Particularly preferred compositions have an active oxygen content above 0.3 wt .-%, preferably above 0.7 wt .-%, more preferably above 0.8 wt .-% and in particular above 1.0 wt .-% to.
  • Erfindungsgemäß bevorzugt einsetzbare Bleichmittel können ferner Bleichaktivatoren umfassen, beispielsweise um beim Reinigen bei Temperaturen von 60°C und darunter eine nochmals verbesserte Bleichwirkung zu erreichen. According to the invention preferably usable bleaching agent may further comprise bleach activators, for example in order to achieve cleaning at temperatures of 60 ° C and including a further improved bleaching effect. Überraschenderweise wurde festgestellt, dass auch eine Kombination von erfindungsgemäßen Enzymen mit bestimmten, nachfolgend näher beschriebenen Bleichaktivatoren, synergistische Reinigungseffekte eines entsprechenden Mittels bewirkt. It has surprisingly been found that a combination of enzymes according to the invention with certain detail hereinafter described bleach activators, synergistic cleaning effect of a corresponding agent effected. Solche Bleichaktivatoren sind Verbindungen, die unter Perhydrolysebedingungen aliphatische Peroxocarbonsäuren mit vorzugsweise 1 bis 10 C-Atomen, insbesondere 2 bis 4 C-Atomen, und/oder gegebenenfalls substituierte Perbenzoesäure ergeben. Such bleach activators are compounds which under perhydrolysis conditions produce aliphatic peroxocarboxylic acids preferably containing 1 to 10 carbon atoms, especially 2 to 4 carbon atoms, and / or optionally substituted perbenzoic acid. Geeignet sind Substanzen, die O- und/oder N-Acylgruppen der genannten C-Atomzahl und/oder gegebenenfalls substituierte Benzoylgruppen tragen. Suitable substances which carry O- and / or N-acyl groups of said number of carbon atoms and / or optionally substituted benzoyl groups. Bevorzugt sind mehrfach acylierte Alkylendiamine, insbesondere Tetraacetylethylendiamin (TAED), acylierte Triazinderivate, insbesondere 1,5-Diacetyl-2,4-dioxohexahydro-1,3,5-triazin (DADHT), acylierte Glykolurile, insbesondere Tetraacetylglykoluril (TAGU), N-Acylimide, insbesondere N-Nonanoylsuccinimid (NOSI), acylierte Phenolsulfonate, insbesondere n-Nonanoyl- oder Isononanoyloxybenzolsulfonat (n- bzw. iso-NOBS), Carbonsäureanhydride, insbesondere Phthalsäureanhydrid, acylierte mehrwertige Alkohole, insbesondere Triacetin, Ethylenglykoldiacetat und 2,5-Diacetoxy-2,5-dihydrofuran, n-Methyl-Morpholinium-Acetonitril-Methylsulfat (MMA) sowie acetyliertes Sorbitol und Mannitol beziehungsweise deren Mischungen (SORMAN), acylierte Zuckerderivate, insbesondere Pentaacetylglukose (PAG), Pentaacetylfruktose, Tetraacetylxylose und Octaacetyllactose sowie acetyliertes, gegebenenfalls N-alkyliertes Glucamin und Gluconolacton, und/oder N-acylierte Lactame, beispielsweise N-Benzoylcaprolactam. Preference is given to polyacylated alkylenediamines, especially tetraacetylethylenediamine (TAED), acylated triazine derivatives, especially 1,5-diacetyl-2,4-dioxohexahydro-1,3,5-triazine (DADHT), acylated glycolurils, in particular tetraacetylglycoluril (TAGU), N- acylimides, in particular N-nonanoylsuccinimide (NOSI), acylated phenol sulfonates, more particularly n-nonanoyl or isononanoyloxybenzenesulfonate (n- or iso-NOBS), carboxylic anhydrides, more particularly phthalic anhydride, acylated polyhydric alcohols, especially triacetin, ethylene glycol diacetate and 2,5-diacetoxy 2,5-dihydrofuran, n-methyl morpholinium acetonitrile methyl sulfate (MMA) and acetylated sorbitol and mannitol and mixtures thereof (SORMAN), acylated sugar derivatives, especially pentaacetylglucose (PAG), pentaacetyl fructose, tetraacetyl xylose and octaacetyl lactose and acetylated, optionally N- alkylated glucamine and gluconolactone, and / or N-acylated lactams, for example N-benzoyl caprolactam. Hydrophil substituierte Acylacetale und Acyllactame werden ebenfalls bevorzugt eingesetzt. Hydrophilically substituted acyl acetals and acyl lactams are also preferably used. Auch Kombinationen konventioneller Bleichaktivatoren können eingesetzt werden. Combinations of conventional bleach activators may be used.
  • Diese Bleichaktivatoren werden vorzugsweise in Mengen bis 10 Gew.-%, insbesondere 0,1 Gew.-% bis 8 Gew.-%, besonders 2 bis 8 Gew.-% und besonders bevorzugt 2 bis 6 Gew.-%, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht der bleichaktivatorhaltigen Mittel, eingesetzt. These bleach activators are preferably used in amounts to 10 wt .-%, particularly 0.1 wt .-% to 8 wt .-%, particularly 2 to 8 wt .-%, and particularly preferably 2 to 6 wt .-%, each on the total weight of the bleaching activator.
  • Weitere im Rahmen der vorliegenden Anmeldung bevorzugt eingesetzte Bleichaktivatoren sind Verbindungen aus der Gruppe der kationischen Nitrile, insbesondere kationische Nitrile der Formel Other bleach activators preferably used in the present application are compounds from the group of cationic nitriles, particularly cationic nitriles of the formula
    Figure 00620001
    in der R 1 für -H, -CH 3 , einen C 2-24 -Alkyl- oder -Alkenylrest, einen substituierten C 2-24 -Alkyl- oder -Alkenylrest mit mindestens einem Substituenten aus der Gruppe -Cl, -Br, -OH, -NH 2 , -CN, einen Alkyl- oder Alkenylarylrest mit einer C 1-24 -Alkylgruppe, oder für einen substituierten Alkyl- oder Alkenylarylrest mit einer C 1-24 -Alkylgruppe und mindestens einem weiteren Substituenten am aromatischen Ring steht, R 2 und R 3 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus -CH 2 -CN, -CH 3 , -CH 2 -CH 3 , -CH 2 -CH 2 -CH 3 , -CH(CH 3 )-CH 3 , -CH 2 -OH, -CH 2 -CH 2 -OH, -CH(OH)-CH 3 , -CH 2 -CH 2 -CH 2 -OH, -CH 2 -CH(OH)-CH 3 , -CH(OH)-CH 2 -CH 3 , -(CH 2 CH 2 -O) n H mit n = 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und X ein Anion ist. in which R 1 is -H, -CH 3, a C 2-24 -alkyl or -alkenyl radical, a substituted C 2-24 -alkyl or -alkenyl radical having at least one substituent from the group -Cl, -Br, - OH, -NH 2, -CN, an alkyl or alkenylaryl radical with a C 1-24 alkyl group, or a substituted alkyl- or alkenylaryl radical with a C 1-24 alkyl group and at least one further substituent on the aromatic ring, R 2 and R 3 are independently selected from -CH 2 -CN, -CH 3, -CH 2 -CH 3, -CH 2 -CH 2 -CH 3, -CH (CH 3) -CH 3, -CH 2 - OH, -CH 2 -CH 2 -OH, -CH (OH) -CH 3, -CH 2 -CH 2 -CH 2 -OH, -CH 2 -CH (OH) -CH 3, -CH (OH) - CH 2 -CH 3, - (CH 2 CH 2 -O) n H with n = 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and X is an anion.
  • Besonders bevorzugt ist ein kationisches Nitril der Formel Particularly preferred is a cationic nitrile of the formula
    Figure 00630001
    in der R 4 , R 5 und R 6 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus -CH 3 , -CH 2 -CH 3 , -CH 2 -CH 2 -CH 3 , -CH(CH 3 )-CH 3 , wobei R 4 zusätzlich auch -H sein kann und X ein Anion ist, wobei vorzugsweise R 5 = R 6 = -CH 3 und insbesondere R 4 = R 5 = R 6 = -CH 3 gilt und Verbindungen der Formeln (CH 3 ) 3 N (+) CH 2 -CN X , (CH 3 CH 2 ) 3 N (+) CH 2 -CN X , (CH 3 CH 2 CH 2 ) 3 N (+) CH 2 -CN X , (CH 3 CH(CH 3 )) 3 N (+) CH 2 -CN X , oder (HO-CH 2 -CH 2 ) 3 N (+) CH 2 -CN X besonders bevorzugt sind, wobei aus der Gruppe dieser Substanzen wiederum das kationische Nitril der Formel (CH 3 ) 3 N (+) CH 2 -CN X , in welcher X für ein Anion steht, das aus der Gruppe Chlorid, Bromid, Iodid, Hydrogensulfat, Methosulfat, p-Toluolsulfonat (Tosylat) oder Xylolsulfonat ausgewählt ist, besonders bevorzugt wird. in which R 4, R 5 and R 6 are independently selected from -CH 3, -CH 2 -CH 3, -CH 2 -CH 2 -CH 3, -CH (CH 3) -CH 3, wherein R 4 is additionally also be -H and X is an anion, preferably R 5 = R 6 = -CH 3 and, in particular R 4 = R 5 = R 6 = CH 3 and compounds of the formulas (CH 3) 3 N (+) CH 2 -CN X -, (CH 3 CH 2) 3 N (+) CH 2 -CN X -, (CH 3 CH 2 CH 2) 3 N (+) CH 2 -CN X -, (CH 3 CH ( CH 3)) 3 N (+) CH 2 -CN X -, or (HO-CH 2 -CH 2) 3 N (+) CH 2 -CN X - are particularly preferred, and, to the cationic selected from the group of these substances nitrile of the formula (CH 3) 3 N (+) CH 2 -CN X -, where X - is an anion selected from the group of chloride, bromide, iodide, hydrogen sulfate, methosulfate, p-toluene sulfonate (tosylate) or xylene sulfonate is selected, is particularly preferred.
  • Erfindungsgemäß bevorzugt einsetzbare Bleichmittel können zusätzlich zu den Bleichaktivatoren oder an deren Stelle auch Bleichkatalysatoren umfassen. According to the invention preferably usable bleaches may additionally comprise the bleach activators or instead of them, bleach catalysts. Bei diesen Stoffen handelt es sich um bleichverstärkende Übergangsmetallsalze bzw. Übergangsmetallkomplexe wie beispielsweise Mn-, Fe-, Co-, Ru- oder Mo-Salenkomplexe oder -carbonylkomplexe. These substances are bleach-boosting transition metal salts or transition metal complexes such as Mn, Fe, Co, Ru or Mo salt complexes or carbonyl complexes. Auch Mn-, Fe-, Co-, Ru-, Mo-, Ti-, V- und Cu-Komplexe mit N-haltigen Tripod-Liganden sowie Co-, Fe-, Cu- und Ru-Amminkomplexe sind als Bleichkatalysatoren verwendbar. Also, Mn-, Fe-, Co-, Ru-, Mo-, Ti-, V- and Cu-complexes with N-containing tripod ligands and Co-, Fe-, Cu- and Ru-ammine complexes may also be used as bleach catalysts.
  • Bleichverstärkende Übergangsmetallkomplexe, insbesondere mit den Zentralatomen Mn, Fe, Co, Cu, Mo, V, Ti und/oder Ru, bevorzugt ausgewählt aus der Gruppe der Mangan- und/oder Cobaltsalze und/oder -komplexe, besonders bevorzugt der Cobalt(ammin)-Komplexe, der Cobalt(acetat)-Komplexe, der Cobalt(Carbonyl)-Komplexe, der Chloride des Cobalts oder Mangans, des Mangansulfats werden in üblichen Mengen, vorzugsweise in einer Menge bis zu 5 Gew.-%, insbesondere von 0,0025 Gew.-% bis 1 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,01 Gew.-% bis 0,25 Gew.-%, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht der erfinderischen Mittel, eingesetzt. Bleach-boosting transition metal complexes, more particularly containing the central atoms Mn, Fe, Co, Cu, Mo, V, Ti and / or Ru, preferably selected from the group of manganese and / or cobalt salts and / or complexes, more preferably the cobalt (ammine) complexes, cobalt (acetate) complexes, cobalt (carbonyl) complexes, chlorides of cobalt or manganese and manganese sulfate are used in conventional amounts, preferably in an amount up to 5 wt .-%, particularly 0.0025 wt .-% to 1 wt .-% and particularly preferably of 0.01 wt .-% to 0.25 wt .-%, each based on the total weight of the inventive agent. In speziellen Fällen kann jedoch auch mehr Bleichaktivator eingesetzt werden. In special cases, however, more bleach activator can be used.
  • Mit besonderem Vorzug werden Komplexe des Mangans in der Oxidationsstufe II, III, IV oder IV eingesetzt, die vorzugsweise einen oder mehrere makrocyclische(n) Ligand(en) mit den Donorfunktionen N, NR, PR, O und/oder S enthalten. With particular preference, complexes of manganese in the oxidation state II, III, IV, or IV, preferably containing one or more macrocyclic (s) of ligand (s) with the donor functions N, NR, PR, O and / or S. Vorzugsweise werden Liganden eingesetzt, die Stickstoff-Donorfunktionen aufweisen. Preferably, ligands are used which have nitrogen donor functions. Dabei ist es besonders bevorzugt, Bleichkatalysator(en) in den erfindungsgemäßen Mitteln einzusetzen, welche als makromolekularen Liganden 1,4,7-Trimethyl-1,4,7-triazacyclononan (Me-TACN), 1,4,7-Triazacyclononan (TACN), 1,5,9-Trimethyl-1,5,9-triazacyclododecan (Me-TACD), 2-Methyl-1,4,7-trimethyl-1,4,7-triazacyclononan (Me/Me-TACN) und/oder 2-Methyl-1,4,7-triazacyclononan (Me/TACN) enthalten. It is particularly preferred to use bleach catalyst (s) in the inventive compositions, which as a macromolecular ligand 1,4,7-trimethyl-1,4,7-triazacyclononane (Me-TACN), 1,4,7-triazacyclononane (TACN ), 1,5,9-trimethyl-1,5,9-triazacyclododecane (Me-TACD), 2-methyl-1,4,7-trimethyl-1,4,7-triazacyclononane (Me / Me-TACN) and / or 2-methyl-1,4,7-triazacyclononane contain (Me / TACN). Geeignete Mangankomplexe sind beispielsweise [Mn III 2 (μ-O) 1 (μ-OAc) 2 (TACN) 2 ](ClO 4 ) 2 , [Mn III Mn IV (μ-O) 2 (μ-OAc) 1 (TACN) 2 ](BPh 4 ) 2 , [Mn IV (μ-O) 6 (TACN) 4 ](ClO 4 ) 4 , [Mn III 2 (μ-O) 1 (μ-OAc) 2 (Me-TACN) 2 ](ClO 4 ) 2 , [Mn III Mn IV (μ-O) 1 (μ-OAc) 2 (Me-TACN) 2 ](ClO 4 ) 3 , [Mn IV 2 (μ-O) 3 (Me-TACN) 2 ](PF 6 ) 2 und [Mn IV 2 (μ-O) 3 (Me/Me-TACN) 2 ](PF 6 ) 2 (OAc = OC(O)CH 3 ). Suitable manganese complexes such as [Mn III 2 (μ-O) 1 (μ-OAc) 2 (TACN) 2] (ClO 4) 2 [Mn III Mn IV (μ-O) 2 (μ-OAc) 1 (TACN ) 2] (BPh 4) 2 [Mn IV (μ-O) 6 (TACN) 4] (ClO 4) 4, [Mn III 2 (μ-O) 1 (μ-OAc) 2 (Me-TACN) 2] (ClO 4) 2 [Mn III Mn IV (μ-O) 1 (μ-OAc) 2 (Me-TACN) 2] (ClO 4) 3, [Mn IV 2 (μ-O) 3 (Me -TACN) 2] (PF 6) 2 and [Mn IV 2 (μ-O) 3 (Me / Me-TACN) 2] (PF 6) 2 (OAc = OC (O) CH 3).
  • Kombination erfindungsgemäßer Enzyme mit weiteren Enzymen Combination according to the invention Enzymes with other enzymes
  • Auch die Kombination erfindungsgemäßer Enzyme mit weiteren Enzymen, welche nachstehend näher beschrieben werden, bewirkt eine synergistische Reinigungsleistung des Mittels. The combination according to the invention Enzymes with other enzymes, which are described in more detail below, causes a synergistic cleaning performance of the agent. Für Mittel enthaltend ausgewählte Enzymkombinationen wurde eine verbesserte Entfernung von Anschmutzungen festgestellt im Vergleich mit Mitteln, die entweder nur eines der Enzyme enthalten oder auch im Vergleich zur erwarteten Reinigungsleistung eines Mittels mit beiden Komponenten auf Grund der bloßen Addition der jeweiligen Einzelbeiträge dieser beiden Komponenten zur Reinigungsleistung des Mittels. improved removal of soils for compositions containing selected combinations of enzymes was found in comparison with agents which include either only one of the enzymes or even compared with the expected cleaning performance of a product with two components because of the mere addition of the respective individual contributions of these two components to the cleaning performance of the agent. Die unterschiedlichen Enzyme unterstützen sich somit gegenseitig in ihrem Wirken. The different enzymes thus support each other in their work. Somit stellt auch die ausgewählte Kombination von erfindungsgemäßen Enzymen mit weiteren Enzymen einen wesentlichen Aspekt der Erfindung dar. Thus, the combination of the invention with other enzymes enzymes selected is an essential aspect of the invention.
  • Hierzu zählen insbesondere Enzyme, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase, Oxidase, Oxidoreduktase, Pektinabbauendes Enzym oder Lipase. These particularly include enzymes which are selected from the group consisting of protease, amylase, cellulase, hemicellulase, mannanase, tannase, xylanase, xanthanase, β-glucosidase, Carrageenase, oxidase, oxidoreductase, Pektinabbauendes enzyme or lipase. Auch Enzymgemische aus mehren verschiedenen Enzymarten, beispielsweise erfindungsgemäße Enzyme in Kombination mit Amylasen und Lipasen, erfindungsgemäße Enzyme in Kombination mit Amylasen und Cellulasen, erfindungsgemäße Enzyme in Kombination mit Amylasen und Hemicellulasen, insbesondere Mannanasen oder Xylanasen, erfindungsgemäße Enzyme in Kombination mit Amylasen und Xanthanasen sowie erfindungsgemäße Enzyme in Kombination mit Amylasen und Carrageenasen weisen bevorzugt synergistische Reinigungsleistungen auf. Also mixtures of enzymes from several different types of enzymes, enzymes, for example, according to the invention in combination with amylases and lipases, enzymes of the invention in combination with amylases and cellulases enzymes of the invention in combination with amylases and hemicellulases, in particular, mannanases, or xylanases, enzymes of the invention in combination with amylases and Xanthanasen as well as according to the invention enzymes in combination with amylases and Carrageenasen preferably have synergistic cleaning benefits. Diese Enzyme sind im Prinzip natürlichen Ursprungs; These enzymes are in principle of natural origin; ausgehend von den natürlichen Molekülen stehen für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln allerdings oftmals verbesserte Varianten zur Verfügung, die entsprechend bevorzugt eingesetzt werden. starting from the natural molecules are available for use in detergents and cleaning agents, however, often improved variants are available, which are preferably used accordingly. Wasch- oder Reinigungsmittel enthalten Enzyme vorzugsweise in Gesamtmengen von 1 × 10 –6 bis 5 Gew.-% bezogen auf aktives Protein. Washing or cleaning composition preferably contain enzymes in total amounts of 1 × 10 -6 to 5 wt .-% based on active protein. Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren oder dem Biuret-Verfahren bestimmt werden. The protein concentration can be determined using known methods, for example the BCA method and the biuret method.
  • Unter den Proteasen sind solche vom Subtilisin-Typ bevorzugt. Among the proteases are those of the subtilisin type are preferred. Beispiele hierfür sind die Subtilisine BPN' und Carlsberg sowie deren weiterentwickelte Formen, die Protease P692, die Subtilisine 147 und 309, die Alkalische Protease aus Bacillus lentus, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7. Examples include the subtilisins BPN 'and Carlsberg, as well as their further developed forms, protease P692, subtilisins 147 and 309, the alkaline protease from Bacillus lentus subtilisin DY and the subtilases, but not more subtilisins in the strict sense as enzymes thermitase, proteinase K and proteases TW3 and TW7.
  • Beispiele für erfindungsgemäß einsetzbare Amylasen sind die α-Amylasen aus Bacillus licheniformis, aus B. amyloliquefaciens, aus B. stearothermophilus, aus Aspergillus niger und A. oryzae sowie die für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln verbesserten Weiterentwicklungen der vorgenannten Amylasen. Examples of the present invention can be used amylases are the α-amylases from Bacillus licheniformis, B. amyloliquefaciens, B. stearothermophilus, from Aspergillus niger and A. oryzae, as well as improved for use in washing and cleaning compositions of the aforementioned amylases. Desweiteren sind für diesen Zweck die α-Amylase aus Bacillus sp. Furthermore, the α-amylase from Bacillus sp for this purpose. A 7-7 (DSM 12368) und die Cyclodextrin-Glucanotransferase (CGTase) aus B. agaradherens (DSM 9948) hervorzuheben. A 7-7 (DSM 12368), and the cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) from B. agaradherens (DSM 9948) emphasized.
  • Erfindungsgemäß einsetzbar sind weiterhin Lipasen oder Cutinasen, insbesondere wegen ihrer Triglycerid-spaltenden Aktivitäten, aber auch, um aus geeigneten Vorstufen in situ Persäuren zu erzeugen. According to the invention used are lipases or cutinases, also to generate from suitable precursors in situ peracids in particular because of their triglyceride-cleaving activities, but. Hierzu gehören beispielsweise die ursprünglich aus Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus) erhältlichen, beziehungsweise weiterentwickelten Lipasen, insbesondere solche mit dem Aminosäureaustausch D96L. These include, for example, originally from Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus) or further developed lipases, in particular those with the D96L amino acid substitution. Desweiteren sind beispielsweise die Cutinasen einsetzbar, die ursprünglich aus Fusarium solani pisi und Humicola insolens isoliert worden sind. Furthermore, the cutinases are for example used, which were originally isolated from Fusarium solani pisi insolens and Humicola. Einsetzbar sind weiterhin Lipasen, beziehungsweise Cutinasen, deren Ausgangsenzyme ursprünglich aus Pseudomonas mendocina und Fusarium solanii isoliert worden sind. Also usable are lipases and cutinases whose starting enzymes were originally isolated from Pseudomonas mendocina and Fusarium solanii.
  • Weiterhin bevorzugt einsetzbar sind Enzyme, die unter dem Begriff Hemicellulasen zusammengefaßt werden. Further preferably used are enzymes, which are summarized under the term hemicellulases. Hierzu zählen Mannanasen, Xanthanlyasen, Pektinlyasen (=Pektinasen), Pektinesterasen, Pektatlyasen, Xyloglucanasen (=Xylanasen), Pullulanasen und β-Glucanasen. These include mannanases, xanthan, pectin (= pectinases), pectin esterases, lyases, xyloglucanases (= xylanases), pullulanases, and β-glucanases. Weitere einsetzbare Enzyme sind Carrageenasen sowie Tannasen. Other suitable enzymes are Carrageenasen and tannases. Ebenso können in den erfindungsgemäßen Mitteln Perhydrolasen eingesetzt werden. Likewise Perhydrolases can be used in the agents.
  • Zur Erhöhung der bleichenden Wirkung können erfindungsgemäß weitere Oxidoreduktasen, beispielsweise weitere Oxidasen, Oxygenasen, Katalasen, Peroxidasen, wie Halo-, Chloro-, Bromo-, Lignin-, Glucose- oder Mangan-peroxidasen, Dioxygenasen oder Laccasen (Phenoloxidasen, Polyphenoloxidasen) eingesetzt werden. To increase the bleaching action, the present invention further oxidoreductases, for example, other oxidases, oxygenases, catalases, peroxidases, such as halo, chloro, bromo, lignin, glucose or manganese dioxygenases or laccases (phenol oxidases, polyphenol oxidases) may be used , Vorteilhafterweise werden zusätzlich vorzugsweise organische, besonders bevorzugt aromatische, mit den Enzymen wechselwirkende Verbindungen zugegeben, um die Aktivität der betreffenden Oxidoreduktasen zu verstärken (Enhancer) oder um bei stark unterschiedlichen Redoxpotentialen zwischen den oxidierenden Enzymen und den Anschmutzungen den Elektronenfluss zu gewährleisten (Mediatoren). Advantageously, preferably organic, more preferably aromatic compounds that interact with the enzymes are added in order to enhance the activity of the oxidoreductases (enhancers) or to ensure the flow of electrons at very different redox potentials between the oxidizing enzymes and the stains (mediators).
  • Erfindungsgemäß besonders bevorzugt sind Enzymkombinationen, die eine synergistische Reinigungsleistung des sie enthaltenden Mittels bewirken, bestehend aus erfindungsgemäßen Enzymen in Kombination mit Amylasen, erfindungsgemäßen Enzymen in Kombination mit Lipasen, erfindungsgemäßen Enzymen in Kombination mit Cellulasen, erfindungsgemäßen Enzymen in Kombination mit Hemicellulasen, insbesondere Mannanasen oder Xylanasen, erfindungsgemäßen Enzymen in Kombination mit Xanthanasen sowie erfindungsgemäßen Enzymen in Kombination mit Carrageenasen. According to the invention are particularly preferred enzyme combinations that cause a synergistic cleaning performance of them containing agent, comprising according to the invention enzymes in combination with amylases, enzymes of the invention in combination with lipases, enzymes of the invention in combination with cellulases, enzymes of the invention in combination with hemicellulases, in particular, mannanases, or xylanases , enzymes invention in combination with Xanthanasen and enzymes of the invention in combination with Carrageenasen. Ganz besonders bevorzugt werden erfindungsgemäße Enzyme in synergistischer Weise mit Lipasen, Hemicellulasen, Xanthanasen oder Carrageenasen kombiniert. Enzymes of the invention are especially preferably combined in a synergistic manner with lipases, hemicellulases, Xanthanasen or Carrageenasen.
  • Die Enzyme können in jeder nach dem Stand der Technik etablierten Form eingesetzt werden. The enzymes may be used in any well-established in the prior art form. Hierzu gehören beispielsweise die durch Granulation, Extrusion oder Lyophilisierung erhaltenen festen Präparationen oder, insbesondere bei flüssigen oder gelförmigen Mitteln, Lösungen der Enzyme, vorteilhafterweise möglichst konzentriert, wasserarm und/oder mit Stabilisatoren versetzt. These include, for example, obtained by granulation, extrusion or lyophilization or solid preparations, in particular in liquid or gel form, solutions of the enzymes, advantageously highly concentrated, water and / or mixed with stabilizers.
  • Alternativ können die Enzyme sowohl für die feste als auch für die flüssige Darreichungsform verkapselt werden, beispielsweise durch Sprühtrocknung oder Extrusion der Enzymlösung zusammen mit einem vorzugsweise natürlichen Polymer oder in Form von Kapseln, beispielsweise solchen, bei denen die Enzyme wie in einem erstarrten Gel eingeschlossen sind oder in solchen vom Kern-Schale-Typ, bei dem ein enzymhaltiger Kern mit einer Wasser-, Luft- und/oder Chemikalien-undurchlässigen Schutzschicht überzogen ist. Alternatively, the enzymes can be encapsulated for both the solid and the liquid administration form, for example by spray drying or extrusion of the enzyme solution together with a preferably natural polymer or in the form of capsules, for example those in which the enzyme is embedded in a solidified gel or those of the core-shell type in which an enzyme-containing core with a water, air and / or chemical-impermeable protective layer is coated. In aufgelagerten Schichten können zusätzlich weitere Wirkstoffe, beispielsweise Stabilisatoren, Emulgatoren, Pigmente, Bleich- oder Farbstoffe aufgebracht werden. In superimposed layers further active ingredients, such as stabilizers, emulsifiers, pigments, bleaching agents or dyes may be applied in addition. Derartige Kapseln werden nach an sich bekannten Methoden, beispielsweise durch Schüttel- oder Rollgranulation oder in Fluid-bed-Prozessen aufgebracht. Such capsules are applied by known methods, for example by shaking or rolling granulation or in fluid bed processes. Vorteilhafterweise sind derartige Granulate, beispielsweise durch Aufbringen polymerer Filmbildner, staubarm und aufgrund der Beschichtung lagerstabil. Advantageously, such granules, for example, by applying a polymeric film former, and stable in storage due to the coating.
  • Weiterhin ist es möglich, zwei oder mehrere Enzyme zusammen zu konfektionieren, so dass ein einzelnes Granulat mehrere Enzymaktivitäten aufweist. Furthermore, it is possible to formulate two or more enzymes together, so that a single granule has a plurality of enzymatic activities.
  • Das bzw. die Enzyme können gegen Schädigungen wie beispielsweise Inaktivierung, Denaturierung oder Zerfall, etwa durch physikalische Einflüsse, Oxidation oder proteolytische Spaltung, geschützt werden. The or the enzymes may be protected from damage such as inactivation, denaturation or decomposition, for example by physical influences, oxidation or proteolytic cleavage. Bei mikrobieller Gewinnung der Proteine und/oder Enzyme ist eine Inhibierung der Proteolyse besonders bevorzugt, insbesondere wenn auch die Mittel Proteasen enthalten. Microbial recovery of the proteins and / or enzymes, inhibition of proteolysis is particularly preferred, especially when the compositions also contain proteases. Wasch- oder Reinigungsmittel können zu diesem Zweck zusätzlich Stabilisatoren enthalten, die hinlänglich aus dem Stand der Technik bekannt sind. Washing or cleaning agents can contain for this purpose in addition stabilizers, which are well known from the prior art. Erfindungsgemäße Mittel können daher prinzipiell alle bekannten Enzymstabilisatoren enthalten. Inventive compositions may comprise, therefore, in principle, all known enzyme stabilizers.
  • Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter, ohne sie jedoch darauf einzuschränken. The following examples illustrate the invention, but without limiting it.
  • Beispiele Examples
  • Alle molekularbiologischen Arbeitsschritte folgen Standardmethoden, wie sie beispielsweise in dem Handbuch von All molecular biological steps follow standard methods such as those described in the manual by , oder vergleichbaren einschlägigen Werken angegeben sind. are given, or comparable relevant works. Enzyme und Baukästen (Kits) wurden nach den Angaben der jeweiligen Hersteller eingesetzt. Enzymes and kits (kits) were used according to instructions of the manufacturer.
  • Beispiel 1: Ortsgerichtete Mutagenese Example 1: Mutagenesis
  • Die Protease-Varianten wurden durch ortsgerichtete („site-directed") Mutagenese der alkalischen Protease aus Bacillus gibsonii DSM 14391 hergestellt. Es wurde eine übliche Mutagenesemethode verwendet unter Einsatz des „Quick Change Site-directed Mutagenesis Kit" des Unternehmens Stratagene (Katalog-Nr. 200518, Stratagene, La Jolla, Ca, USA). The protease variants were made by site-directed ( "site-directed") mutagenesis of the alkaline protease from Bacillus gibsonii DSM 14,391th It was a usual mutagenesis method used by using the "Quick Change site-directed mutagenesis kit" of the company Stratagene (Catalog No. . 200518, Stratagene, La Jolla, CA, USA). Es wurde das Codon für die Aminosäureposition 211 (Nukleotide 631–633) in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. It was the codon for amino acid position 211 (nucleotides 631-633) in the counting of SEQ ID NO. 2 von ATG nach TCT geändert, so dass ein Austausch der Aminosäure Methionin (M) gegen die Aminosäure Serin (S) erfolgt. 2 changed from ATG to TCT, so that there is an exchange of the amino acid methionine (M) against the amino acid serine (S). Alternativ oder in Ergänzung wurde das Codon für die Position 212 (Nukleotide 634–636) in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. Alternatively or in addition, the codon for position 212 (nucleotides 634-636) in the counting of SEQ ID NO. 2 von CCT nach AAT geändert, so dass ein Austausch der Aminosäure Prolin (P) gegen die Aminosäure Asparagin (N) erfolgt. 2 changed from after CCT AAT, so that replacement of the amino acid proline (P) against the amino acid asparagine (N) takes place.
  • Beispiel 2: Expression der Proteasevarianten Example 2: Expression of protease variants
  • Die für die jeweilige Protease codierende Nukleinsäure liegt in dem Vektor pAWA22 kloniert vor. The coding for the particular protease nucleic acid is located in the vector before pAWA22 cloned. Dabei handelt es sich um einen von pBC16 abgeleiteten Expressionsvektor für den Einsatz in Bacillus-Spezies ( It is a derivative of pBC16 expression vector for use in Bacillus species ( ). ). Dieser Vektor wurde in den Wirtsstamm Bacillus subtilis DB 104 ( This vector was (in the host strain Bacillus subtilis DB 104 ) mit Standardmethoden transformiert. ) Transformed with standard methods.
  • Die Transformanten wurden zunächst auf DM3-Medium (8 g/l Agar, 0,5 M Bernsteinsäure, 3,5 g/l K2HPO4, 1,5 g/l KH2PO4, 20 mM MgCl2, 5 g/l Casiaminoacids, 5 g/l Hefeextrakt, 6 g/l Glucose, 0,1 g/l BSA) regeneriert und dann auf TBY-Skimmilk-Platten (10 g/l Pepton, 10 g/l Milchpulver (siehe oben), 5 g/l Hefe, 5 g/l NaCl, 15 g/l Agar) überimpft. The transformants were first (on DM3 medium 8 g / l agar, 0.5 M succinic acid, 3.5 g / l K2HPO4, 1.5 g / l KH2PO4, 20 mM MgCl2, 5 g / l Casiaminoacids, 5 g / regenerated l yeast extract, 6 g / l glucose, 0.1 g / l BSA) and then TBY Skimmilk plates (10 g / l peptone, 10 g / l milk powder (see above), 5 g / l of yeast, 5 g / l NaCl, inoculated 15 g / l agar). Proteolytisch aktive Klone wurden anhand ihrer Lysehöfe identifiziert. Proteolytically active clones were identified by their lysis zones. Aus den erhaltenen proteolytisch aktiven Klonen wurde einer ausgewählt, dessen Plasmid isoliert und das Insert nach Standardmethoden sequenziert, um es auf Korrektheit zu überprüfen. From the obtained clones with proteolytic activity is selected, and its plasmid was isolated and sequenced the insert according to standard methods, in order to check it for correctness. Die gewünschte Proteaseaktivität ist in Kulturüberständen entsprechend verifizierter Klone enthalten und kann bei Bedarf hieraus weiter prozessiert werden. The desired protease activity is contained in culture supernatants according verified clones and can if necessary be processed further from this.
  • Beispiel 3: Ermittlung der Waschleistung bei Einsatz in einem handelsüblichen pulverförmigen Waschmittel Example 3: Determination of the wash performance when used in a commercial powder detergent
  • Für dieses Beispiel wurden standardisiert verschmutze Textilien eingesetzt, die von der Eidgenössischen Material-Prüfungs- und -Versuchsanstalt, St. Gallen, Schweiz (EMPA), oder der Wäschereiforschungsanstalt, Krefeld, bezogen worden waren. For this example, standardized soiled fabrics were used, which, St. by the Swiss material testing and -Versuchsanstalt Gallen, Switzerland (EMPA) or the Waschereiforschungsanstalt, Krefeld, were used. Dabei wurden folgende Anschmutzungen und Textilien verwendet: The following soilings and textiles were used:
    • A Gras auf Baumwolle, EMPA 164 A grass on cotton, EMPA 164
    • B Schokomilch/Ruß auf Baumwolle, C-03 B chocolate milk / soot on cotton, C-03
    • C Kakao, EMPA 112 C Cocoa EMPA 112
    • D Blut/Milch auf Baumwolle, C-5 (044). D blood / milk on cotton, C-5 (044).
  • Mit diesem Testmaterial wurden verschiedene Waschmittelrezepturen auf ihre Waschleistung hin untersucht. This test material, various detergent formulations were tested for their washing performance. Dafür wurden die Ansätze für 60 Minuten bei einer Temperatur von 40°C gewaschen. For this, the approaches for 60 minutes at a temperature of 40 ° C were washed. Die Dosierung lag bei 5,9 g des Waschmittels pro Liter Waschflotte. The dosage was 5.9 g of detergent per liter wash liquor. Es wurde mit Stadtwasser mit einer Wasserhärte von etwa 16° deutscher Härte gewaschen. It was washed with tap water having a water hardness of about 16 ° German hardness.
  • Als Kontroll-Waschmittel diente eine Waschmittel-Basis-Rezeptur folgender Zusammensetzung (alle Angaben in Gewichts-Prozent): 10% lineares Alkylbenzolsulfonat (Natrium-Salz), 1,5% C12-C18-Fettalkoholsulfat (Natrium-Salz), 2,0% C12-C18-Fettalkohol mit 7 EO, 20% Natriumcarbonat, 6,5% Natriumhydrogencarbonat, 4,0% amorphes Natriumdisilikat, 17% Natriumcarbonat-peroxohydrat, 4,0% TAED, 3,0% Polyacrylat, 1,0% Carboxymethyllcellulose, 1,0% Phosphonat, 25% Natriumsulfat, Rest: Schauminhibitoren, optischer Aufheller, Duftstoffe. 2.0 10% linear alkyl benzene sulphonate (sodium salt), 1.5% C12-C18-fatty alcohol sulfate (sodium salt): The control detergent was a basic detergent formulation of the following composition was used (all amounts in weight percent) % C12-C18 fatty alcohol with 7 EO, 20% sodium carbonate, 6.5% sodium bicarbonate, 4.0% amorphous sodium disilicate, 17% sodium carbonate peroxohydrate, 4.0% TAED, 3.0% polyacrylate, 1.0% Carboxymethyllcellulose , 1.0% phosphonate, 25% sodium sulfate, rest: foam inhibitors, optical brighteners, perfumes. Die Waschmittel-Basis-Rezeptur wurde für die verschiedenen Versuchsreihen aktivitätsgleich mit folgenden Proteasen versetzt: Protease gemäß SEQ ID NO. The detergent base formulation was admixed for the various series of experiments with identical activities with the following proteases: protease of SEQ ID NO. 2 ( (2 WO 03/054185 WO 03/054185 ), Protease gemäß SEQ ID NO. ), Protease according to SEQ ID NO. 2 mit der Aminosäuresubstitution P212N und die alkalische Protease aus Bacillus lentus Variante F49 ( 2 (with the amino acid substitution P212N and the alkaline protease from Bacillus lentus variant F49 WO 95/23221 WO 95/23221 ). ).
  • Nach dem Waschen wurde der Weißheitsgrad der gewaschenen Textilien gemessen. After washing, the whiteness of the washed fabrics was measured. Die Messung erfolgte an einem Spektrometer Minolta CM508d, Lichtart D65, 10. Das Gerät wurde zuvor mit einem mitgelieferten Weißstandard kalibriert. The measurement was performed on a spectrometer Minolta CM508d, D65, 10. The device has been calibrated with a white standard. Die erhaltenen Ergebnisse sind die Differenzremissionen zwischen einem Waschvorgang mit einem Waschmittel enthaltend eine Protease und einem parallel durchgeführten Kontrollwaschgang mit einem Waschmittel ohne Protease. The obtained results are the difference between the reflectances to a washing operation using a detergent containing a protease and a carried out in parallel control wash with detergent without protease. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 2 zusammengestellt. The results are summarized in Table 2 below. Sie erlauben einen unmittelbaren Rückschluss auf den Beitrag des jeweils enthaltenen Enzyms zur Waschleistung des verwendeten Mittels. They allow an immediate conclusion about the contribution of the enzyme in each case contained the washing performance of the agent used. Tabelle 2: Waschergebnisse mit einem pulverförmigen Waschmittel bei 40°C Table 2: washing results with a powdered detergent at 40 ° C
    Anschmutzung soiling SEQ ID NO. SEQ ID NO. 2 2 SEQ ID NO. SEQ ID NO. 2 P212N 2 P212N B. lentus B. lentus
    A A 3,7 3.7 4,6 4.6 1,2 1.2
    B B 8,6 8.6 11,1 11.1 3,6 3.6
    C C 6,2 6.2 6,5 6.5 4,1 4.1
    D D 14,5 14.5 17,7 17.7 8,1 8.1
  • Die Protease-Variante zeigt an verschiedenen Anschmutzungen, insbesondere an den Anschmutzungen B und D, eine verbesserte Leistung im Vergleich zum Ausgangsmolekül gemäß SEQ ID NO. The protease variant displays various stains, especially at the stains B and D, an improved performance compared to the starting molecule of SEQ ID NO. 2 und im Vergleich mit der im Stand der Technik etablierten Protease aus Bacillus lentus. 2 and compared with the well-established in the prior art protease from Bacillus lentus.
  • Beispiel 4: Ermittlung der Waschleistung bei Einsatz in einem handelsüblichen flüssigen Waschmittel Example 4: Determination of the wash performance when used in a commercial liquid detergent
  • Die Versuchsdurchführung erfolgte im Wesentlichen wie in Beispiel 3 beschrieben. The experiment was carried out as described in Example 3 substantially. Dabei wurden folgende Anschmutzungen und Textilien verwendet: The following soilings and textiles were used:
    • A Gras auf Baumwolle, EMPA 164 A grass on cotton, EMPA 164
    • B Ganzei/Ruß auf Baumwolle, 10N B whole egg / carbon black on cotton, 10N
    • C Schokomilch/Ruß auf Baumwolle, C-03 C chocolate milk / soot on cotton, C-03
    • D Blut/Milch auf Baumwolle, C-5 (044). D blood / milk on cotton, C-5 (044).
  • Mit diesem Testmaterial wurden verschiedene Waschmittelrezepturen auf ihre Waschleistung hin untersucht. This test material, various detergent formulations were tested for their washing performance. Dafür wurden die Ansätze für 60 Minuten bei einer Temperatur von 40°C gewaschen. For this, the approaches for 60 minutes at a temperature of 40 ° C were washed. Die Dosierung lag bei 5,9 g des Waschmittels pro Liter Waschflotte. The dosage was 5.9 g of detergent per liter wash liquor. Es wurde mit Stadtwasser mit einer Wasserhärte von etwa 16° deutscher Härte gewaschen. It was washed with tap water having a water hardness of about 16 ° German hardness.
  • Als Kontrollwaschmittel diente eine Waschmittel-Basis-Rezeptur folgender Zusammensetzung (alle Angaben in Gewichts-Prozent): 0,3–0,5% Xanthan Gum, 0,2–0,4% Anti-Schaummittel, 6–7% Glycerin, 0,3–0,5% Ethanol, 4–7% FASOS, 24–28% Nichtionische Tenside, 1% Borsäure, 1–2% Natriumcitrat (Dihydrat), 2–4% Soda, 14–16% Kokosnuss-Fettsäuren, 0,5% HEDP, 0–0,4% PVP, 0–0,05% optischer Aufheller, 0–0,001% Farbstoff, Rest demineralisiertes Wasser. 0% Xanthan Gum 0.3-0.5, 0.2-0.4% anti-foaming agent, 6-7% glycerol,: as a control detergent, a detergent-based formulation of the following composition was used (all amounts in weight percent) , 3-0.5% of ethanol, 4-7% Faso, 24-28% nonionic surfactants, 1% boric acid, 1-2% sodium citrate (dihydrate), 2-4% soda, 14-16% coconut fatty acids, 0 , 5% HEDP, 0-0.4% PVP, 0-0.05% optical brighteners, 0 to 0.001% dye, the balance demineralized water. Die Waschmittel-Basis-Rezeptur wurde für die verschiedenen Versuchsreihen aktivitätsgleich mit folgenden Proteasen versetzt: Protease gemäß SEQ ID NO. The detergent base formulation was admixed for the various series of experiments with identical activities with the following proteases: protease of SEQ ID NO. 2 ( (2 WO 03/054185 WO 03/054185 ), Protease gemäß SEQ ID NO. ), Protease according to SEQ ID NO. 2 mit der Aminosäuresubstitution M211S und die alkalische Protease, die unter dem Handelsnamen Purafect Prime ® von dem Unternehmen Genencor International vertrieben wird. 2 with the amino acid substitution M211S and the alkaline protease which is sold under the trade names Purafect Prime ® by the company Genencor International.
  • Nach dem Waschen wurde der Weißheitsgrad der gewaschenen Textilien gemessen. After washing, the whiteness of the washed fabrics was measured. Die Messung erfolgte an einem Spektrometer Minolta CM508d, Lichtart D65, 10. Das Gerät wurde zuvor mit einem mitgelieferten Weißstandard kalibriert. The measurement was performed on a spectrometer Minolta CM508d, D65, 10. The device has been calibrated with a white standard. Die erhaltenen Ergebnisse sind die Differenzremissionen zwischen einem Waschvorgang mit einem Waschmittel enthaltend eine Protease und einem parallel durchgeführten Kontrollwaschgang mit einem Waschmittel ohne Protease. The obtained results are the difference between the reflectances to a washing operation using a detergent containing a protease and a carried out in parallel control wash with detergent without protease. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 3 zusammengestellt. The results are summarized in Table 3 below. Sie erlauben einen unmittelbaren Rückschluss auf den Beitrag des jeweils enthaltenen Enzyms zur Waschleistung des verwendeten Mittels. They allow an immediate conclusion about the contribution of the enzyme in each case contained the washing performance of the agent used. Tabelle 3: Waschergebnisse mit einem flüssigen Waschmittel bei 40°C Table 3: Results washing with a liquid detergent at 40 ° C
    Anschmutzung soiling SEQ ID NO. SEQ ID NO. 2 2 SEQ ID NO. SEQ ID NO. 2 M211S 2 M211S Purafect Prime Purafect Prime
    A A 2,7 2.7 5,5 5.5 3,2 3.2
    B B 8,6 8.6 11,1 11.1 3,0 3.0
    C C 4,1 4.1 7,9 7.9 8,1 8.1
    D D 16,6 16.6 26,1 26.1 15,2 15.2
  • Die Protease-Variante zeigt an verschiedenen Anschmutzungen, insbesondere an den Anschmutzungen A, B und D, eine deutlich verbesserte Leistung im Vergleich zum Ausgangsmolekül gemäß SEQ ID NO. The protease variant displays various stains, especially at the stains A, B and D, a significantly improved performance compared to the starting molecule of SEQ ID NO. 2 und im Vergleich mit der im Stand der Technik etablierten Protease Purafect Prime. 2 and compared with the well-established in the art Protease Purafect Prime.
  • Beschreibung der Figuren DESCRIPTION OF THE FIGURES
  • 1 1 : Alignment der erfindungsgemäßen reifen Ausgangsprotease (SEQ ID NO. 2) mit Proteasen aus dem Stand der Technik, errechnet mit dem Programm Vector NTI Suite Ver. Alignment of the mature parent protease invention (. SEQ ID NO 2) with proteases from the prior art, is calculated using the program Vector NTI Suite ver. 7 (Fa. InforMax, Inc. Bethesda, USA) unter Standardparametern (angegeben ist jeweils das reife (mature) Enzym). 7 (Fa. InforMax, Inc. Bethesda, USA) under standard parameters (specified in each case, the mature (mature) enzyme). Darin bedeuten: Where:
    SEQ ID NO. SEQ ID NO. 2: 2: Erfindungsgemäße Ausgangsprotease gemäß SEQ ID NO. Output protease of the invention according to SEQ ID NO. 2 (reifes Enzym) 2 (mature enzyme)
    BLAP: BLAP: Alkalische Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 ( Alkaline protease from Bacillus lentus DSM 5483 ( WO 92/21760 A1 WO 92/21760 A1 ) gemäß SEQ ID NO. ) According to SEQ ID NO. 3 3
    Subtilisin 309: Subtilisin 309: Subtilisin 309 gemäß SEQ ID NO. Subtilisin 309 according to SEQ ID NO. 4 4
  • Es folgt ein Sequenzprotokoll nach WIPO St. 25. Dieses kann von der amtlichen Veröffentlichungsplattform des DPMA heruntergeladen werden. It follows a sequence listing by WIPO St. 25 This can be downloaded from the official publication of the DPMA platform.
  • ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDED IN THE DESCRIPTION
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Claims (42)

  1. Protease umfassend eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO. Protease comprising an amino acid sequence to that of SEQ ID NO. 2 angegebenen Aminosäuresequenz mindestens zu 78,5% identisch ist, dadurch gekennzeichnet , dass sie in der Zählweise gemäßSEQ ID NO. 2 amino acid sequence shown at least 78.5% identical, characterized in that it is in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 211 oder Position 212 oder an den Positionen 211 und 212 eine im Vergleich zu der in SEQ ID NO. 2 at position 211 or position 212, or at positions 211 and 212 in comparison to that in SEQ ID NO. 2 angegebenen Aminosäure veränderte Aminosäure aufweist. 2 having altered amino acid indicated amino acid.
  2. Protease nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO. Protease according to claim 1, characterized in that it comprises an amino acid sequence to that of SEQ ID NO. 2 angegebenen Aminosäuresequenz zunehmend bevorzugt zu mindestens 80%, 82,5%, 85%, 87,5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99% und ganz besonders bevorzugt zu 99,25% identisch ist. 2 amino acid sequence given increasing preference at least 80%, 82.5%, 85%, 87.5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95% is identical to 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99%, and most preferably about 99.25%.
  3. Protease nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Protease ausgewählt ist aus d) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. Protease according to claim 1 or 2, characterized in that the protease is selected from d) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 211 eine Aminosäure aufweist, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus: Alanin, Arginin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Glutamin, Glutaminsäure, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Phenylalanin, Prolin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin und Valin e) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. 2 at position 211 has an amino acid which is selected from the group consisting of: alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan , tyrosine and valine e) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 212 eine Aminosäure aufweist, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus: Alanin, Arginin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Glutamin, Glutaminsäure, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin, Phenylalanin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin und Valin f) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. 2 at position 212 has an amino acid which is selected from the group consisting of: alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, serine, threonine, tryptophan , tyrosine and valine f) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 211 eine Aminosäure gemäß Merkmal a) aufweist und an Position 212 eine Aminosäure gemäß Merkmal b) aufweist. 2 at position 211 has an amino acid according to feature a) and at position 212 an amino acid in accordance with feature b) having.
  4. Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Protease ausgewählt ist aus a) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. Protease according to any of claims 1 to 3, characterized in that the protease is selected from a) a protease which in the numbering according to SEQ ID NO. 2 an Position 211 einen Serinrest aufweist b) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. 2 at position 211 has a serine residue b) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 212 einen Asparaginrest aufweist c) einer Protease, die in der Zählweise gemäß SEQ ID NO. 2 at position 212 having an asparagine residue c) a protease in the counting of SEQ ID NO. 2 an Position 211 einen Serinrest und an Position 212 einen Asparaginrest aufweist. 2 at position 211 and a serine residue at position 212 has an asparagine residue.
  5. Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei oder vier übereinstimmende antigene Determinanten mit einer der in den Ansprüchen 1 bis 4 bezeichneten Protease aufweist. Protease according to any of claims 1 to 4, characterized in that it comprises at least one, and increasingly preferably two, three or four identical antigenic determinants with a protease specified in claims 1 to. 4
  6. Protease, dadurch gekennzeichnet, dass sie aus einer Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 5 als Ausgangsmolekül erhaltbar ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 266 und zunehmend bevorzugt mindestens 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60 und 50 zusammenhängenden Aminosäurepositionen mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt. Protease, characterized in that it is obtainable as a starting molecule of a protease according to any of claims 1 to 5 comprising by fragmentation, deletion, insertion or substitution, and an amino acid sequence that is preferred over a length of at least 266 and increasingly at least 260, 250 matches, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60 and 50 contiguous amino acid positions with the parent molecule.
  7. Protease, dadurch gekennzeichnet, dass sie aus einer Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 6 als Ausgangsmolekül erhaltbar ist und einen oder mehrere weitere Aminosäureaustausche in Positionen aufweist, die den Positionen 3, 4, 36, 42, 47, 56, 61, 69, 87, 96, 99, 101, 102, 104, 114, 118, 120, 130, 139, 141, 142, 154, 157, 188, 193, 199, 205, 224, 229, 236, 237, 242, 243, 255 und 268 der Alkalischen Protease aus Bacillus lentus gemäß SEQ ID NO. Protease, characterized in that it is obtainable from a protease according to any of claims 1 to 6 as a starting molecule and one or more additional amino acid substitutions in positions corresponding to the positions 3, 4, 36, 42, 47, 56, 61, 69, 87, 96, 99, 101, 102, 104, 114, 118, 120, 130, 139, 141, 142, 154, 157, 188, 193, 199, 205, 224, 229, 236, 237, 242, 243, 255 and 268 of the alkaline protease from Bacillus lentus as shown in SEQ ID NO. 3 in einem Alignment zugeordnet sind. are assigned in an alignment. 3
  8. Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich stabilisiert ist, vorzugsweise durch kovalente Kopplung an ein Polymer. Protease according to any of claims 1 to 7, characterized in that it is additionally stabilized, preferably by covalent coupling to a polymer.
  9. Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens eine chemische Modifikation aufweist. Protease according to any of claims 1 to 8, characterized in that it comprises at least one chemical modification.
  10. Nukleinsäuremolekül, kodierend für eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 9. Nucleic acid molecule coding for a protease according to any one of claims 1 to 9.
  11. Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass es zu der in SEQ ID NO. Nucleic acid molecule according to claim 10, characterized in that it in SEQ ID NO. 1 angegebenen Nukleinsäuresequenz zunehmend bevorzugt zu mindestens 78,5%, 80%, 82,5%, 85%, 87,5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99% und ganz besonders bevorzugt zu 99,25% identisch ist. 1 given nucleic acid sequence increasingly preferably to at least 78.5%, 80%, 82.5%, 85%, 87.5%, 90%, 91%, 92%, 93%, 93.5%, 94%, 94, 5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99%, and most preferably about 99.25% identical.
  12. Vektor enthaltend eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 10 oder 11. A vector comprising a nucleic acid according to any one of claims 10 or. 11
  13. Vektor nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass er Klonierungsvektor oder ein Expressionsvektor ist. The vector according to claim 12, characterized in that it is a cloning vector or an expression vector.
  14. Nicht menschliche Wirtszelle, die eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 9 oder ein Fragment derselben beinhaltet oder die zu deren Herstellung angeregt werden kann, vorzugsweise unter Einsatz eines Vektors gemäß Anspruch 12 oder 13. Non-human host cell comprising a protease according to any of claims 1 to 9 or a fragment thereof comprises or can be induced to their preparation, preferably using a vector according to claim 12 or. 13
  15. Wirtszelle nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass sie die Protease oder ein Fragment derselben in das die Wirtszelle umgebende Medium sezerniert. The host cell of claim 14, characterized in that it comprises the protease or a fragment thereof in which the host cell secretes surrounding medium.
  16. Wirtszelle nach Anspruch 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Bakterium ist. The host cell of claim 14 or 15, characterized in that it is a bacterium.
  17. Wirtszelle nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass das Bakterium ausgewählt ist aus der Gruppe der Gattungen von Escherichia, Klebsiella, Bacillus, Staphylococcus, Corynebakterium, Arthrobacter, Streptomyces, Stenotrophomonas und Pseudomonas. A host cell according to claim 16, characterized in that the bacterium is selected from the group of genera Escherichia, Klebsiella, Bacillus, Staphylococcus, Corynebacterium, Arthrobacter, Streptomyces, and Pseudomonas Stenotrophomonas.
  18. Wirtszelle nach Anspruch 16 oder 17, dadurch gekennzeichnet, dass das Bakterium ausgewählt ist aus der Gruppe von Escherichia coli, Klebsiella planticola, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus alcalophilus, Bacillus globigii gibsonii, Bacillus pumilus, Staphylococcus carnosus, Corynebacterium glutamicum, Arthrobacter oxidans, Streptomyces lividans, Streptomyces coelicolor und Stenotrophomonas maltophilia. A host cell according to claim 16 or 17, characterized in that the bacterium is selected from the group of Escherichia coli, Klebsiella planticola, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus alcalophilus, Bacillus globigii gibsonii, Bacillus pumilus, Staphylococcus carnosus Corynebacterium glutamicum, Arthrobacter oxidans, Streptomyces lividans, Streptomyces coelicolor and Stenotrophomonas maltophilia.
  19. Wirtszelle nach Anspruch 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen Zellkern besitzt. The host cell of claim 14 or 15, characterized in that it possesses a nucleus.
  20. Verfahren zur Herstellung einer Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 9. A process for the preparation of a protease according to any of claims 1 to 9.
  21. Verfahren nach Anspruch 20 unter Einsatz einer Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 10 oder 11, vorzugsweise unter Einsatz eines Vektors nach einem der Ansprüche 12 oder 13, besonders bevorzugt unter Einsatz einer Wirtszelle nach einem der Ansprüche 14 bis 19. The method of claim 20 using a nucleic acid according to any one of claims 10 or 11, preferably using a vector according to any one of claims 12 or 13, particularly preferably using a host cell according to any one of claims 14 to 19th
  22. Mittel, dadurch gekennzeichnet, dass es mindestens eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 9 enthält. Agent, characterized in that it contains at least one protease of any one of claims 1 to 9.
  23. Mittel nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass es ein Waschmittel, Handwaschmittel, Spülmittel, Handgeschirrspülmittel, Maschinengeschirrspülmittel, Reinigungsmittel, Zahnprothesen- oder Kontaktlinsenpflegemittel, Nachspülmittel, Desinfektionsmittel, kosmetisches Mittel, pharmazeutisches Mittel oder ein Mittel zur Behandlung von Filtermedien, Textilien, Pelzen, Papier, Fellen oder Leder, ist. Composition according to claim 22, characterized in that it is a detergent, detergent, dishwashing, hand dishwashing detergents, machine dishwashing detergents, cleaning agents, Zahnprothesen- or contact lens care compositions, rinse agents, disinfectant, cosmetic agent, pharmaceutical agent or an agent for treatment of filter media, textiles, furs, paper is, hides or leather.
  24. Mittel nach Anspruch 22 oder 23, dadurch gekennzeichnet, dass es ein Wäschewaschmittel oder ein Geschirrspülmittel ist. Composition according to claim 22 or 23, characterized in that it is a laundry detergent or dishwashing detergent.
  25. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 24, dadurch gekennzeichnet, dass es als Einkomponentensystem vorliegt. Agent according to one of claims 22 to 24, characterized in that it is present as a single component.
  26. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 24, dadurch gekennzeichnet, dass es in mehrere Komponenten aufgeteilt ist. Agent according to one of claims 22 to 24, characterized in that it is split into several components.
  27. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 26, dadurch gekennzeichnet, dass es die Protease in einer Menge von 2 μg bis 20 mg, vorzugsweise von 5 μg bis 17,5 mg, besonders bevorzugt von 20 μg bis 15 mg und ganz besonders bevorzugt von 50 μg bis 10 mg pro g des Mittels enthält. Agent according to one of claims 22 to 26, characterized in that the protease is in an amount of from 2 ug to 20 mg, preferably from 5 ug to 17.5 mg, particularly preferably from 20 .mu.g to 15 mg, and most preferably from 50 contains ug to 10 mg per g of the composition.
  28. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 27, dadurch gekennzeichnet, dass es in fester Form vorliegt. Agent according to one of claims 22 to 27, characterized in that it is in solid form.
  29. Mittel nach Anspruch 28, dadurch gekennzeichnet, dass es als rieselfähiges Pulver mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l, vorliegt. Composition according to claim 28, characterized in that it as a flowable powder with a bulk density of 300 g / l to 1200 g / l, in particular 500 g / l to 900 g / l, present.
  30. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 27, dadurch gekennzeichnet, dass es in pastöser oder flüssiger Form vorliegt. Agent according to one of claims 22 to 27, characterized in that it is in paste or liquid form.
  31. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 30, dadurch gekennzeichnet, dass die Protease mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für die Protease undurchlässigen Substanz umhüllt ist. Agent according to one of claims 22 to 30, characterized in that the protease is coated with an at room temperature or in the absence of water for the protease impermeable substance.
  32. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 31, ferner umfassend eines oder mehrere weitere Enzyme. Agent according to one of claims 22 to 31, further comprising one or more additional enzymes.
  33. Mittel nach Anspruch 32, dadurch gekennzeichnet, dass mindestens ein weiteres Enzym eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, β-Glucosidase, Carrageenase, Oxidase, Oxidoreduktase oder eine Lipase ist. Composition according to claim 32, characterized in that at least one further enzyme is a protease, amylase, cellulase, hemicellulase, mannanase, tannase, xylanase, xanthanase, β-glucosidase, Carrageenase, oxidase, oxidoreductase, or a lipase.
  34. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 33, dadurch gekennzeichnet, dass es mindestens eine weitere Komponente enthält, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Tensiden, Buildern, Säuren, alkalischen Substanzen, Hydrotropen, Lösungsmitteln, Verdickungsmitteln, Bleichmitteln, Farbstoffen, Parfums, Korrosionsinhibitoren, Sequestriermitteln, Elektrolyten, optischen Aufhellern, Vergrauungsinhibitoren, Silberkorrosionsinhibitoren, Farbübertragungsinhibitoren, Schauminhibitoren, Abrasivstoffen, UV-Absorbenzien, Lösungsmitteln, Antistatika, Perlglanzmitteln und Hautschutzmitteln. Agent according to one of claims 22 to 33, characterized in that it contains at least one additional component selected from the group consisting of surfactants, builders, acids, alkalis, hydrotropes, solvents, thickeners, bleaching agents, dyes, perfumes, corrosion inhibitors, sequestering agents , electrolytes, optical brighteners, redeposition inhibitors, silver corrosion inhibitors, dye transfer inhibitors, foam inhibitors, abrasives, UV absorbers, solvents, antistatic agents, pearlescent agents and skin protectants.
  35. Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 34, ferner umfassend – 5 Gew.-% bis 70 Gew.-%, insbesondere 5 Gew.-% bis 30 Gew.-% Tenside und/oder – 10 Gew.-% bis 65 Gew.-%, insbesondere 12 Gew.-% bis 60 Gew.-% wasserlösliches oder wasserdispergierbares anorganisches Buildermaterial und/oder – 0,5 Gew.-% bis 10 Gew.-%, insbesondere 1 Gew.-% bis 8 Gew.-%, wasserlösliche organische Buildersubstanzen und/oder – 0,01 bis 15 Gew.-% feste anorganische und/oder organische Säuren beziehungsweise saure Salze und/oder – 0,01 bis 5 Gew.-% Komplexbildner für Schwermetalle und/oder – 0,01 bis 5 Gew.-% Vergrauungsinhibitor und/oder – 0,01 bis 5 Gew.-% Farbübertragungsinhibitor und/oder – 0,01 bis 5 Gew.-% Schauminhibitor Agent according to one of claims 22 to 34, further comprising - 5 wt .-% to 70 wt .-%, particularly 5 wt .-% to 30 wt .-% of surfactants and / or - by weight 10 wt .-% to 65th -%, in particular 12 wt .-% to 60 wt .-% water-soluble or water-dispersible inorganic builder material and / or - 0.5 wt .-% to 10 wt .-%, particularly 1 wt .-% to 8 wt .-% water-soluble organic builder substances and / or - from 0.01 to 15 wt .-% solid inorganic and / or organic acids or acidic salts and / or - from 0.01 to 5 wt .-% complexing agent for heavy metals and / or - 0.01 to 5 wt .-% anti-redeposition agent and / or - 0,01 to 5 wt .-% dye transfer inhibitor and / or - 0,01 to 5 wt .-% foam inhibitor
  36. Mittel nach Anspruch 35, ferner umfassend von 0,01 bis 5 Gew.-% optische Aufheller. Composition according to claim 35, further comprising from 0.01 to 5 wt .-% optical brighteners.
  37. Verwendung eines Mittels nach einem der Ansprüche 22 bis 36 zur Entfernung von protease-sensitiven Anschmutzungen auf Textilien oder harten Oberflächen. Use of an agent according to any one of claims 22 to 36 for the removal of protease sensitive stains on textiles or hard surfaces.
  38. Verfahren zur Reinigung von Textilien oder harten Oberflächen, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein Mittel nach einem der Ansprüche 22 bis 36 angewendet ist. A process for cleaning textiles or hard surfaces, characterized in that in at least one process step, a composition according to any one of claims 22 to 36 is applied.
  39. Verfahren zur Reinigung von Textilien oder harten Oberflächen, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 10 proteolytisch aktiv ist. A process for cleaning textiles or hard surfaces, characterized in that a protease according to any of claims 1 to 10 is proteolytically active into at least one process step.
  40. Verfahren nach Anspruch 39, dadurch gekennzeichnet, dass die Protease in einer Menge von 40 μg bis 4 g, vorzugsweise von 50 μg bis 3 g, besonders bevorzugt von 100 μg bis 2 g und ganz besonders bevorzugt von 200 μg bis 1 g pro Anwendung eingesetzt ist. A method according to claim 39, characterized in that the protease is used in an amount of 40 micrograms to 4 g, preferably from 50 micrograms to 3 g, particularly preferably from 100 micrograms to 2 g and very particularly preferably from 200 .mu.g to 1 g per application is.
  41. Verwendung einer Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 10 zur Reinigung von Textilien oder von harten Oberflächen. Use of a protease according to any of claims 1 to 10 for cleaning textiles or hard surfaces.
  42. Verwendung nach Anspruch 41, wobei die Protease in einer Menge von 40 μg bis 4 g, vorzugsweise von 50 μg bis 3 g, besonders bevorzugt von 100 μg bis 2 g und ganz besonders bevorzugt von 200 μg bis 1 g pro Anwendung eingesetzt ist. Use according to claim 41, wherein the protease is used in an amount of 40 micrograms to 4 g, preferably from 50 micrograms to 3 g, particularly preferably from 100 micrograms to 2 g and very particularly preferably from 200 .mu.g to 1 g per application.
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