DE102007025045B4

DE102007025045B4 - Schlankmachende kosmetische Zusammensetzung mit einem Biomasseextrakt aus der Alge Neochloris oleoabundans

Info

Publication number: DE102007025045B4
Application number: DE102007025045.4A
Authority: DE
Inventors: Isabelle Renimel; Cécile Lamy; Delphine Dupont; Sylvie Darnault
Original assignee: LVMH Recherche GIE
Current assignee: LVMH Recherche GIE
Priority date: 2006-08-11
Filing date: 2007-05-29
Publication date: 2021-10-28
Anticipated expiration: 2027-05-30
Also published as: RU2007120616A; US7563463B2; JP5483661B2; FR2904773B1; KR20080014600A; GB2440801A; GB2440801B; ITTO20070461A1; FR2904773A1; US20080038290A1; GB0710322D0; CN101120910A; DE102007025045A1; KR101506648B1; JP2008044939A

Abstract

Kosmetische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie als Wirkstoff einen Biomasseextrakt aus der Alge Neochloris oleoabundans enthält, wobei der Wirkstoff in ein mit einer topischen Anwendung vereinbares, kosmetisch akzeptables Vehikel eingebettet ist.

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung eines Biomasseextrakts aus der Alge Neochloris oleoabundans auf dem Gebiet der Kosmetik und insbesondere als schlankmachender Wirkstoff in einer kosmetischen Zusammensetzung.
Es sind zahlreiche Verwendungen von Mikroorganismen in kosmetischen oder dermatologischen Zusammensetzungen bekannt.
Die taxonomischen Informationen bezüglich der Alge Neochloris oleoabundans sind im Anschluss gegeben:

Kategorie: Chlorophyta
Klasse: Chlorophyceae
Ordnung: Chlorococcale
Familie: Chlorococcaceae
Gattung: Neochloris
Spezies: oleoabundans

Diese Alge ist eine Mikroalge, die zu den zahlreichen Mikroorganismen und Algen gehört, welche in der FR 2 873 038 A1 genannt sind ; diese beschreibt ein Verfahren zur Herstellung eines geklärten Kulturmediums aus wenigstens einem Meeresmikroorganismus und/oder photosynthetischem Süsswasser sowie die Verwendung dieser geklärten Kulturmedien, insbesondere auf dem Gebiet der Kosmetik.
Dieses Dokument behandelt in keiner Weise die Verwendung der Biomasse an sich, sondern lediglich die des geklärten Kulturmediums. Nach Humeau, A. et al., Biodiversity of microalgae: Beauty care applications, in: Cosm'ing 2004: Saint-Malo, France, S. 202, sind Mikroalgen Kandidaten als potenzielle Quelle für Wirkstoffe mit beispielsweise lipolytischen Eigenschaften.
Die Literatur weist derzeit auf keinerlei Verwendung von Biomasseextrakten aus der Alge Neochloris oleoabundans als Wirkstoff einer kosmetischen Zusammensetzung hin.
Die seitens der Erfinder der vorliegenden Erfindung an verschiedenen Biomasseextrakten aus dieser Alge durchgeführten Versuche, haben gezeigt, dass sie einen besonderen Nutzen auf dem Gebiet der Kosmetik und ganz besonders als Schlankheitsmittel aufwiesen.
Genauer gesagt zeigte sich den Erfindern der vorliegenden Erfindung, dass die Biomasseextrakte aus der Alge Neochloris oleoabundans, die mittels polarer und/oder apolarar Lösungsmittel erhalten werden, sehr günstige schlankmachende Eigenschaften aufwiesen, wenn sie topisch auf der Haut, insbesondere in kosmetischen Zusammensetzungen angewandt wurden.
Es hat sich jedoch gezeigt, dass sich einige Extrakte dieser Alge aufgrund ihrer schlankmachenden Eigenschaften als besonders interessant erwiesen. Dabei handelt es sich um die Extrakte, die mittels polarer Lösungsmittel erhalten werden, und insbesondere um die alkoholischen oder hydroalkoholischen Extrakte. Darüber hinaus hat sich auch gezeigt, dass diese mittels polarer Lösungsmittel erhaltenen Extrakte, und insbesondere die alkoholischen oder hydroalkoholischen Extrakte, anschließend später unterschiedlichen Fraktionierungsvorgängen unterzogen werden können, die vor allem ermöglichen, neue Extrakte zu erhalten, die ihrerseits ebenfalls günstige schlankmachende Eigenschaften und gleichzeitig organoleptische Eigenschaften oder eine deutlich verbesserte Färbung im Vergleich zu den ersten alkoholischen oder hydroalkoholischen Extrakten aufweisen. So ist es eine Aufgabe der Erfindung, signifikante lipolytische Aktivität mit Einsatz neuer Extrakte bereitzustellen.
So betrifft die Erfindung nach einem ersten Aspekt eine kosmetische Zusammensetzung, die einen Biomasseextrakt aus der Alge Neochloris oleoabundans enthält.
Nach einem zweiten Aspekt betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung der für die Verwendung der vorliegenden Erfindung nützlichen Extrakte.
Nach einem dritten Aspekt betrifft sie eine Anwendung eben dieser Extrakte auf dem Gebiet der Kosmetik als Schlankheitsmittel.
Nach dem wesentlichen Merkmal ihres ersten Aspekts betrifft die Erfindung eine kosmetische Zusammensetzung, die als Wirkstoff einen Biomasseextrakt aus der Alge Neochloris oleoabundans enthält, wobei der genannte Wirkstoff in ein mit einer topischen Anwendung vereinbares, kosmetisch akzeptables Vehikel eingebettet ist.
Wie im Vorangegangenen dargelegt, weisen die Biomasseextrakte aus der Alge Neochloris oleoabundans vorteilhafte schlankmachende Eigenschaften auf, wenn sie auf die Haut aufgetragen werden.
Die Kulturbedingungen, die zu der erfindungsgemäß verwendeten Biomasse führen, sind verschiedenartig. Vorzugsweise wird die Alge Neochloris oleoabundans jedoch in einem Kulturmedium auf der Basis von Meerwasser und halbsalzigem Wasser, mit einem Natriumchloridgehalt zwischen 10 g/L und 30 g/L, und vorzugsweise zwischen 16 g/L und 20 g/L kultiviert, wobei dieses Medium ferner eventuell herkömmlicherweise verwendete Nährstoffe enthält.
Eine besonders vorteilhafte Natriumchlorid-Dosierung liegt bei 18 g/L.
Das Kulturmedium umfasst vorteilhafterweise halbsalziges Wasser, also eine Mischung aus Meerwasser und Süßwasser.
In bevorzugter Weise wird als Meerwasser das des Ärmelkanals entlang der Nordküste der Bretagne, insbesondere aus der Region von Roscoff (Finistere, Frankreich) verwendet.
Wie zuvor dargelegt, werden die für die Herstellung der kosmetischen Zusammensetzungen der Erfindung verwendeten Extrakte vorteilhafterweise alkoholische oder hydroalkoholische Extrakte sein oder Extrakte, die aus einer Fraktionierung derartiger Extrakte hervorgehen.
In der nachfolgenden Beschreibung wird mit „erster Extrakt“ der alkoholische oder hydroalkoholische Extrakt bezeichnet, der durch Behandlung der Biomasse mittels eines ersten alkoholischen oder hydroalkoholischen Lösungsmittels erhalten wird.
Nach einer vorteilhaften Variante der Erfindung wird dieser erste Extrakt, der vorteilhafte schlankmachende Eigenschaften aufweist, als schlankmachender Wirkstoff in den Zusammensetzungen der Erfindung verwendet.
Nach weiteren Varianten wird als Wirkstoff in den erfindungsgemäßen kosmetischen Zusammensetzungen eine Fraktion dieses ersten Extraktes verwendet, die durch Fraktionierung dieses ersten Extraktes erhalten wird.
Nach einer noch weiteren Variante kann in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung eine Mischung aus dem ersten Extrakt, wie er oben definiert ist, und aus wenigstens einer Fraktion dieses ersten Extraktes, die durch Fraktionierung dieses ersten Extraktes erhalten wird, verwendet werden.
Für die Herstellung des ersten Extraktes wird vorteilhafterweise ein erstes alkoholisches oder hydroalkoholisches Lösungsmittel verwendet, bei dem der Alkohol aus der Gruppe der C1- bis C5-Monoalkohole, der C2- bis C6-Glykole sowie deren Mischungen ausgewählt ist.
Als Beispiel für diese Alkohole werden insbesondere Methanol, Ethanol und Butylenglykol genannt.
Die Zusammensetzung des ersten Lösungsmittels kann in sehr weiten Verhältnissen von Wasser und Alkohol variieren. Jedoch werden im Falle eines Gemischs aus Ethanol und Wasser jeweilige Verhältnisse dieser zwei Bestandteile gewählt, die zwischen 100 und 40 Vol.-% Ethanol für 0 % bis 60 % Wasser variieren.
Wie zuvor dargelegt, weist der erste Extrakt, der durch Extraktion der Biomasse mit einem alkoholischen oder hydroalkoholischen Lösungsmittel erhalten wird, besonders günstige schlankmachende Eigenschaften auf, die ihn zu einem besonders interessanten Extrakt als Wirkstoff im Sinne der Erfindung machen.
Wie ebenfalls im Vorangegangenen dargelegt, insbesondere im Hinblick auf die Verbesserung der organoleptischen Eigenschaften des Extraktes und/oder im Hinblick auf die Verringerung seiner Färbung, kann der erste Extrakt unterschiedlichen Fraktionierungsvorgängen unterzogen werden, die dazu bestimmt sind, neue Extrakte zu erhalten, die verbesserte Eigenschaften, insbesondere verbesserte organoleptische Eigenschaften und/oder eine Verminderung der Färbung aufweisen.
Nach einer vorteilhaften Variante der Erfindung wird der erste Extrakt einem Teilungsschritt durch Flüssig-Flüssig-Extraktion zwischen einem zweiten wässrigen oder hydroalkoholischen Lösungsmittel und einem mit dem zweiten Lösungsmittel nicht mischbaren dritten Lösungsmittel, das eine durch seinen Polaritätsfaktor P' definierte Polarität zwischen 0 und 4,7 aufweist, unterzogen, was zu einer hydroalkoholischen Phase führt, die eine erste Fraktion des ersten Extraktes, den sogenannten zweiten Extrakt, enthält, sowie zu einer Phase, die von dem dritten Lösungsmittel gebildet ist und die eine zweite Fraktion des ersten Extraktes, den sogenannten dritten Extrakt, enthält.
Für die Definition des Polaritätsfaktors P' wird man sich auf die Veröffentlichung von L.R. SNYDER, mit dem Titel „Classification of the solvent properties of common liquids" im Journal of Chromatography, 92 (1974) 223-230 beziehen.
Für diesen Fraktionierungsschritt ist das zweite Lösungsmittel vorteilhafterweise von einem Gemisch aus Wasser und einem Alkohol ausgewählt aus der Gruppe der C1- bis C5-Monoalkohole und der C2- bis C6-Glykole gebildet.
Als bevorzugter Alkohol wird Methanol, Ethanol, Butylenglykol sowie deren Mischungen gewählt.
Der Fachmann wird verstehen, dass die Verhältnisse von Wasser und Alkohol von der Art des Alkohols, aber auch von der des dritten Lösungsmittels abhängen.
Wenn das zweite Lösungsmittel hydroalkoholisch ist und Ethanol aufweist, so liegt letzterer vorteilhafterweise zu wenigstens 20 Vol.-% vor.
Das dritte Lösungsmittel, das mit dem zweiten Lösungsmittel nicht mischbar ist und dessen Polarität P' zwischen 0 und 4,7 liegt, ist vorteilhafterweise aus der Gruppe bestehend aus Chloroform, Ethylacetat, Diethylether und deren Mischungen ausgewählt.
Wie im Vorangegangenen dargelegt, wird als Extrakt, der einen Wirkstoff im Sinne der Erfindung bildet, vorteilhafterweise der zweite und/oder der dritte Extrakt, wie er oben definiert ist, gewählt.
Die Anteile an Extrakt(en), die in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen enthalten sind, können in sehr weiten Verhältnissen variieren.
Jedoch werden diese Anteile vorteilhafterweise zwischen 0,0003 und 2 Gew.-% variieren, ein Prozentsatz, der in Extrakt-Trockensubstanz bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung ausgedrückt ist.
Diese Anteile liegen vorteilhafterweise zwischen 0,003 und 0,3 Gew.-%.
Nach einer besonders vorteilhaften Ausführungsform, selbst dann, wenn der Extrakt nicht durch eine Butylenglykol verwendende Extraktion erhalten wird, erweist es sich außerdem als günstig, ihn in Form einer Lösung in einem Gemisch aus Wasser und Butylenglykol, insbesondere in Form einer Lösung, die 0,05 bis 5 Gew.-%, besser 0,1 bis 1 Gew.-% Trockenextrakt bezogen auf das Gewicht des Wasser/Butylenglyklol-Gemischs enthält, in die Zusammensetzung der Erfindung einzubringen.
Hierzu wird vorteilhafterweise ein Gemisch 50/50 nach Volumen aus Wasser und Butylenglykol verwendet.
Nach einem zweiten Aspekt betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines Extraktes aus Neochloris oleoabundans, das insbesondere für die Herstellung einer Zusammensetzung bestimmt ist, wie sie zuvor definiert ist. Dieses Verfahren umfasst wenigstens einen Schritt zur Extraktion der Biomasse durch ein erstes alkoholisches oder hydroalkoholisches Lösungsmittel, wie es zuvor definiert ist, um einen ersten Extrakt zu erhalten.
Dieses Verfahren umfasst vorteilhafterweise ferner wenigstens einen Schritt zur Fraktionierung dieses ersten Extrakts.
Nach einer vorteilhaften Variante beruht diese Fraktionierung des ersten Extrakts auf einem Teilungsschritt des ersten Extrakts zwischen einem zweiten hydroalkoholischen Lösungsmittel und einem mit dem zweiten Lösungsmittel nicht mischbaren dritten Lösungsmittel, das eine Polarität P' zwischen 0 und 4,7 aufweist, wobei die Teilung zu einem zweiten und zu einem dritten Extrakt führt, die in der von dem zweiten Lösungsmittel bzw. in der von dem dritten Lösungsmittel gebildeten Phase enthalten sind.
Schließlich kann das Verfahren der Erfindung zusätzliche herkömmliche Schritte zur Reinigung der verschiedenen Extrakte umfassen, die dazu bestimmt sind, deren organoleptische Eigenschaften oder deren Färbung zu verbessern.
Als Beispiel für solche Schritte werden Schritte zum Entfärben über Aktivkohle, beispielsweise über XCV-Kohle, oder zum Filtern, beispielsweise mit einer Filterdurchlassgröße zwischen 40 und 0,20 µm genannt.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der Extrakte oder Extraktgemische, wie sie zuvor definiert sind oder wie sie in dem oben definierten Verfahren erhalten werden, als schlankmachender Wirkstoff in einer kosmetischen Zusammensetzung oder für die Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung.
Die in den folgenden Beispielen angegebenen Ergebnisse zeigen deutlich die lipolytische Aktivität der erfindungsgemäßen Extrakte durch eine Überwachung der Freisetzung von Fettsäuren in situ aus Hautexplantaten.
Schließlich betrifft die Erfindung nach einem letzten Aspekt ein Verfahren zur kosmetischen Pflege des menschlichen Körpers, um eine schlankmachende Wirkung zu erzielen. Dieses Verfahren umfasst das Auftragen einer Zusammensetzung, wie sie im Vorangegangenen definiert ist, auf einen Teil des Körpers, der dies benötigt.
Ein solches Verfahren umfasst die Auswahl des Teils des Körpers, der eine Schlankheitsbehandlung erfordert, sowie das Auftragen einer erfindungsgemäßen Zusammensetzung auf diesen Teil des Körpers.
Die nachfolgenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung in nicht einschränkender Weise.
BEISPIELE
I. KULTIVIEREN DER ALGE NEOCHLORIS OLEOABUNDANS UND GEWINNUNG DER BIOMASSE
Es wird ein Stamm aus der UTEX-Algothek (Algensammlung der Universität von Texas in Austin) verwendet, welcher die Bezeichnung UTEX 1185 trägt. Dieser Stamm ist in Saudi-Arabien isoliert worden.
Im Rahmen des Beispiels wurde die Kultur im Batch-Modus in einem mit halbsalzigem Wasser mit 18 g/L Salz gefüllten 20 m³-Becken unter Zugabe eines Nährmediums mit der folgenden Zusammensetzung durchgeführt:

- Na2 EDTA : 4,36.10^-3 g/L
- FeCl3 : 6H2O : 1,58.10^-3 g/L
- NaHCO3 : 0,6.10^-3 g/L
- MnCl2, 4H2O : 0,36.10^-3 g/L
- CuSO4, 5H2O : 1.10^-5 g/L
- ZnSO4, 7H2O : 2,2.10^-5 g/L
- CoCl2, 6H2O : 1.10^-5 g/L
- MgSO4: 4,95.10^-2 g/L
- NaNO3: 0,17 g/L
- H3BO3 : 2,47.10^-3 g/L
- NaHCO3 : 4,23.10^-3 g/L
- K2HPO4: 3,475.10^-2 g/L
- CaCl2 : 2,94.10^-2 g/L
- Vitamin B1 : 1.10^-4 g/L
- Vitamin B12 : 5.10^-8 g/L
- Vitamin H : 5.10^-8 g/L

Es ist auch möglich, einen halbkontinuierlichen Modus zu verwenden. Bei dem verwendeten Beckentyp gelangt die Kultur nach 12 bis 15 Tagen zur Reife.
Am Ende dieses Zeitraums wird entweder die gesamte Algensuspension oder ein Teil derer entnommen.
Die Biomasse wird anschließend durch Zentrifugieren mit einer Beschleunigung von 14000 g (1 g = 9,81 m/s²) konzentriert.
II. HERSTELLUNG VON ERFINDUNGSGEMÄßEN EXTRAKTEN
1. Herstellung von Extrakten mittels einer ersten Extraktion mit Methanol
a. Zu 100 g Algenbiomasse mit 26% Trockenextrakt in einem 500mL-Kolben werden 250 mL Methanol zugegeben. Die Mischung wird unter Stickstoff für 30 Minuten auf 65°C erhitzt. Das Ganze wird mit 400 U/Min. 10 Minuten lang zentrifugiert. Die Flüssigphase wird von dem festen Rückstand isoliert und beiseite gestellt. Anschließend wird der Filtrationsrückstand in den 250 mL-Kolben umgefüllt und mit 250 mL Methanol unter den gleichen Bedingungen erneut extrahiert. Dieser Vorgang wird ein weiteres und letztes Mal wiederholt. Die drei Flüssigphasen werden gesammelt, anschließend mit Hilfe eines Rotationsverdampfers bis zur Trockne eingedampft. Die so erhaltene Trockensubstanz wird in 100 mL Wasser erneut solubilisiert, bevor sie gefroren und lyophilisiert wird. Dieser Extrakt liegt am Ende in Form eines Pulvers, nachfolgend als Extrakt A bezeichnet, vor.
a.1. Nach dem gleichen Herstellungsschema wie es unter Punkt a) beschrieben ist wird die immer noch gesammelte Flüssigphase mit Hilfe eines Rotationsverdampfers bis zur Trockne eingedampft, anschließend erneut solubilisiert, dieses Mal jedoch mit 200 mL Heptan. Das Ganze wird mit Ultraschall behandelt, anschließend 30 Minuten bei 4000 U/Min. zentrifugiert. Der Überstand wird zurückgewonnen, mit Hilfe eines Rotationsverdampfers bis zur Trockne eingedampft, anschließend in destilliertem Wasser unter Zugabe von 100 mL erneut solubilisiert, bevor er gefroren, dann lyophilisiert wird, um einen Extrakt, nachfolgend als A1 bezeichnet, zu erhalten.
a.2. Nach dem gleichen Extraktionsschema wie es für die Herstellung des Extraktes A unter Punkt 1.a) beschrieben ist wird hier der durch Extraktion mit Methanol erhaltene Filtrationsrückstand anschließend in 100 mL Chloroform erneut solubilisiert und werden 95 mL Wasser sowie 5 mL Methanol zugegeben. Zwischen den zwei Phasen wird eine Flüssig/Flüssig-Trennung durchgeführt. Die organische Phase wird beiseite gestellt, und die wässrige Phase wird zweimal erneut mit 50 mL Chloroform gewaschen, anschließend wird auch sie für die Herstellung des unter dem nachfolgendem Punkt a.3) beschriebenen Extraktes beiseite gestellt. Die organischen Phasen werden gesammelt, anschließend mit Hilfe eines Rotationsverdampfers bis zur Trockne eingedampft, in 50 mL Wasser erneut solubilisiert und lyophilisiert. Der auf diese Weise erhaltene Extrakt wird nachfolgend als A2 bezeichnet.
a.3. Die wässrige Phase, wie sie unter Punkt a.2) beschrieben ist, wird mittels eines Rotationsverdampfers eingedampft, in 50 mL Wasser erneut solubilisiert und lyophilisiert. Auf diese Weise erhält man einen nachfolgend als A3 bezeichneten Extrakt.
2. Herstellung eines Extraktes B mittels einer ersten hydroethanolischen Extraktion und Fraktionierung dieses Extraktes
a. Herstellung eines hydroethanolischen Extrakts B Zu 100 g Algenbiomasse mit 14,6 % Trockenextrakt in einem 500 mL-Kolben werden 250 mL eines Ethanol/Wasser-Gemischs (96/4 Volumen/Volumen, nachfolgend V/V) zugegeben. Das Gemisch wird für 30 Minuten unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen wird der Extrakt bei 4000 U/Min. für 20 Minuten zentrifugiert, anschließend wird der Zentrifugationsrückstand mittels 250 mL hydroalkoholischer Lösung erneut extrahiert und dies dreimal im Ganzen.
Anschließend werden die Überstände gesammelt, über einem Büchner-Trichter mittels eines Filters der Größe 0,40 µm (GF/F, Whatmann) gefiltert, dann mit Hilfe eines Rotationsverdampfers bis zur Trockne eingedampft.
Der so erhaltene Extrakt B wird dann für die biologischen Tests zu 5 % (Gewicht/Volumen, nachfolgend G/V) in DMSO gelöst.
b. Fraktionierung des Extrakts B durch Flüssig/Flüssig-Trennung zur Herstellung eines Extraktes B1 und eines Extraktes B2
2g des vorhergehenden Extrakts B werden in etwa 80 mL eines Ethanol/Wasser-Gemischs (20/40 V/V) verdünnt, um eine 2,5 %ige Lösung zu erhalten. Es werden 53 mL Ethylacetat zugegeben, um ein Zweiphasensystem zu bilden. Die zwei Phasen werden getrennt, um die erste organische Phase zurückzugewinnen. Die wässrige Phase wird erneut mit 53 mL Ethylacetat gewaschen, und dies wird insgesamt viermal wiederholt. Die 4 organischen Phasen werden gesammelt, anschließend mit Hilfe eines Rotationsverdampfers eingedampft, um einen Extrakt, im Anschluss als Extrakt B1 bezeichnet, zu erhalten.
Die wässrige Phase wird ebenfalls mittels des Rotationsverdampfers getrocknet, um einen Trockenextrakt, nachfolgend als Extrakt B2 bezeichnet, zu erhalten.
Für die biologischen Tests wird der Extrakt B1 zu 5 % (G/V) in DMSO solubilisiert und der Extrakt B2 zu 5 % (G/V) in Wasser gelöst.
3. Herstellung eines Extraktes C mittels einer ersten hydroethanolischen Extraktion
Zu 100g Algenbiomasse mit 12 % Trockenextrakt in einem 500 mL-Kolben werden 250 mL eines Ethanol/Wasser-Gemischs (96/4 V/V) zugegeben. Das Gemisch wird für 30 Minuten unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen wird der Extrakt bei 400 U/Min. für 20 Minuten zentrifugiert, anschließend wird der Zentrifugationsrückstand mittels 250 mL hydroalkoholischer Lösung erneut extrahiert, und dies dreimal im Ganzen.
Im Anschluss daran werden die Überstände gesammelt, über einem Büchner-Trichter (GF/F-Filter, Whatmann, 40 µm) gefiltert, dann mit dem Rotationsverdampfer bis zur Trockne eingedampft. Der so erhaltene Trockenextrakt ist der Extrakt C. Er wird anschließend für die biologischen Tests zu 5 % (G/V) in DMSO gelöst.
III. BESTIMMUNG DER LIPOLYTISCHEN AKTIVITÄT DER EXTRAKTE DER ERFINDUNG
III 1. Bestimmungsprinzip
Das Ziel ist es, die lipolytische Aktivität von erfindungsgemäßen Extrakten aus Neochloris oleoabundans an am Leben erhaltenen Fettgewebeexplantaten auszuwerten. Die verschiedenen Extrakte werden unter den nachfolgend beschriebenen Bedingungen in das Kulturmedium eingebracht.
Nach achttägigem Kontakt wird die Aktivität durch Bestimmung der in dem Kulturmedium freigesetzten Fettsäuren ausgewertet.
III 2. Arbeitsverfahren
* Explantate :

Es werden 9 Fettgewebeexplantate hergestellt und in BEM-Medium (BIO-EC's Explants Medium) am Leben erhalten.

Aufteilung der Explantate in 3 Gruppen aus 3 Explantaten:

- eine Kontrollgruppe, in Gegenwart des Kulturmediums
- eine mit einer Positivkontrolle, dem Coffein, behandelte Gruppe,
- eine mit einem erfindungsgemäßen Extrakt behandelte Gruppe,

* Zu testende Produkte :

- Positivkontrolle : Das Coffein wird in der Endkonzentration von 0,1 % (1 mg/mL) in dem Basal- oder Überlebensmedium verwendet, also in einer Konzentration, die zehnmal so hoch ist wie die Konzentration der erfindungsgemäßen Extrakte, wobei das Coffein bei der Konzentration von 0,01 % (100 µg/mL) keine lipolytische Wirkung mehr aufweist.
- erfindungsgemäßer Neochloris-Extrakt. Der Extrakt liegt in Form eines Trockenpulvers vor, das zu 50 % in DMSO solubilisiert wird und das anschließend 1/500 in dem Kulturmedium des Explantats verdünnt wird, um bei der Endkonzentration von 0,01 % (100 µg/mL) getestet zu werden.
* Anwendung der Extrakte:
- Bei J0 werden die Explantate in 2mL Kulturmedium, in das der zu testende Extrakt eingebracht ist, am Leben erhalten.
Diese Behandlung wird bei J2, J4 und J6 wiederholt.
* Entnahmen:
- Bei J2, J4, J6 und J8 wird das Kulturmedium entnommen. Für jedes Explantat werden die bei J2, J4, J6 und J8 entnommenen Medien in ein und derselben Röhre gemeinsam untergebracht und im Hinblick auf die Bestimmung der in dem Medium vorhandenen Fettsäuren bei -20°C konserviert.
* Bestimmung der in dem Medium vorhandenen freien Fettsäuren:
- Nach der Extraktion aus dem Kulturmedium werden die in dem Kulturmedium vorhandenen freien Fettsäuren abgeschieden und durch Hochleistungs-Dünnschichtchromatographie bestimmt.

III 3. ERGEBNISSE
Die Lebensfähigkeit und die Morphologie der Adipozyten werden histologisch kontrolliert. Nachdem die behandelten Kontrollexplantate 8 Tage am Leben erhalten wurden, weisen sie weder sichtbare Veränderungen noch Zellnekrosen auf
Die lipolytische Aktivität wird mittels der Bestimmung der Anteile der in dem Kulturmedium freigesetzten freien Fettsäuren ausgewertet.
Die erzielten Ergebnisse sind in den nachfolgenden Tabellen aufgeführt und entsprechen den Massen (ausgedrückt in µg) an Fettsäuren, die im Laufe der acht Behandlungstage in dem Kulturmedium freigesetzt werden.
a. Mit dem erfindungsgemäßen Extrakt B erzielte Ergebnisse
freigesetzte Fettsäuren
(Massen in µg)

Mittelwert Regelabweichung

Kontrolle 8,7 1,4

Coffein 0,1 % 46,9 6,7

Extrakt B 0,01 % 16,2 2,8
b. Mit Extrakt B1 (Ethylacetat-Fraktion) erzielte Ergebnisse freigesetzte Fettsäuren
(Massen in µg)

Mittelwert Standardabweichung

Kontrolle 3,6 0,6

Coffein 0,1 % 12,9 1,8

Extrakt B1 0,01% 20,8 3,6
c. Mit Extrakt B2 (hydroethanolische Fraktion) erzielte Ergebnisse freigesetzte Fettsäuren
(Massen in µg)

Mittelwert Standardabweichung

Kontrolle 3,6 0,6

Coffein 0,1 % 12,9 1,8

Extrakt B2 0,01 % 10,8 1,3
III 4. SCHLUSSFOLGERUNGEN
Man stellt fest, dass alle getesteten erfindungsgemäßen Extrakte eine signifikante lipolytische Aktivität in dem Sinne aufweisen, dass eine erhebliche Fettsäurefreisetzung in dem Medium stattfindet. Diese lipolytische Aktivität kann sogar als sehr signifikant betrachtet werden, insbesondere diejenige des Extrakts B1, da bei der für die erfindungsgemäßen Extrakte verwendeten Dosis von 0,01 % das Coffein, eine aufgrund ihrer lipolytischen Aktivität wohl bekannte Positivkontrolle, keine Aktivität mehr aufweist.
IV. FORMULIERUNGSBEISPIELE

Es werden die im Anschluss beschriebenen topischen kosmetischen Zusammensetzungen anhand der nachfolgenden in Gewichtsprozent angegebenen Zusammensetzungen auf herkömmliche Weise hergestellt.

Schlankmachendes Gel
entionisiertes Wasser	73.5 %
96,2 Vol.-% Alkohol	21 %
AMPS-Polymer (Sepigel 305)	3 %
Konservierungsmittel	0.3 %
Parfumkonzentrat	0.1 %
Extrakt aus Neochloris oleoabundans (3 %iger Extrakt B1 in Wasser/Butylenglykol, 50/50)	2%
Natriumhyaluronat (hohes Molekulargewicht)	0,1 %
Schlankmachende Creme
Glycerylstearat + PEG 100 Stearat	6,0 %
Hydriertes Polyisobuten	3,0 %
Squalan	3,0 %
Triglyceride Glycerin-Caprylat/Caprat	3,0 %
Glycerin	2,0 %
Octylmethoxycinnamat	2,0 %
Cetostearyl-Octanoat	1,5 %
Bienenwachs	1,5 %
Cetylalkohol	1,0 %
Stearylalkohol	1,0 %
Dimethicon	1,0 %
Xanthangummi	0,2 %
Extrakt aus Neochloris oleoabundans (3%iger Extrakt B2 in Wasser/Butylenglykol, 50/50)	2 %
Konservierungsmittel, Parfum, Farbstoffe	0,2 %
Wasser	qs
Schlankmachende Flüssigemulsion
Octylpalmitat	7,0 %
Triglyceride Glycerin-Caprylat-/Caprat	3,0 %
Octyloctanoat	2,0 %
Phenyltrimethicon	2,0 %
Glycerin	2,0 %
Stearinsäure	1,0 %
Sorbitan	1,0 %
Cetylalkohol	0,5 %
Stearylalkohol	0,5 %
Extrakt C aus Neochloris oleoabundans	1 %
Konservierungsmittel, Parfum, Farbstoffe, Neutralisierungsmittel	0,1 %
Wasser	qs
Schlankmachende Lotion
Butylenglykol	3 %
EDTA	0.1 %
Lösungsvermittler	1 %
Parfumkonzentrat	0.1 %
Alkohol	5.2 %
Extrakt A aus Neochloris oleoabundans	0,5 %
Benzophenon-4	0.13 %
Konservierungsmittel, Parfum, Farbstoffe, Neutralisierungsmittel	0,1 %
Wasser	qs

Claims

Kosmetische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie als Wirkstoff einen Biomasseextrakt aus der Alge Neochloris oleoabundans enthält, wobei der Wirkstoff in ein mit einer topischen Anwendung vereinbares, kosmetisch akzeptables Vehikel eingebettet ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Biomasse durch Kultivieren der Alge Neochloris oleoabundans in einem Kulturmedium auf der Basis von Meerwasser oder halbsalzigem Wasser, mit einem Gehalt an Natriumchlorid zwischen 10 g/L und 30 g/L erhalten wird, wobei das Medium ferner eventuell Nährstoffe enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Gehalt an Natriumchlorid des Kulturmediums zwischen 16 g/L und 20 g/L liegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Gehalt an Natriumchlorid des Kulturmediums 18 g/L beträgt.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 2 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Kulturmedium ein halbsalziges Wasser enthält.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass der genannte Extrakt ein als erster Extrakt bezeichneter alkoholischer oder hydroalkoholischer Extrakt ist, der durch Behandlung der Biomasse mit einem ersten alkoholischen oder hydroalkoholischen Lösungsmittel erhalten wird, und/oder wenigstens eine Fraktion des genannten ersten Extraktes, die durch Fraktionierung des ersten Extraktes erhalten wird.
Zusammensetzung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Alkohol des ersten Lösungsmittels ein Alkohol ausgewählt aus der Gruppe der C1-bis C5-Monoalkohole, der C2- bis C6-Glykole und ihren Mischungen ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass der Alkohol Methanol, Ethanol oder Butylenglykol ist.
Zusammensetzung nach irgendeinem der Ansprüche 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass das erste Lösungsmittel 100 bis 40 Vol.-% Ethylalkohol für 0 % bis 60 % Wasser umfasst.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Fraktionierung aus einem Teilungsschritt durch Flüssig-Flüssig-Extraktion des ersten Extraktes zwischen einem zweiten wässrigen oder hydroalkoholischen Lösungsmittel und einem mit dem zweiten Lösungsmittel nicht mischbaren dritten Lösungsmittel, das eine durch seinen Polaritätsfaktor P' definierte Polarität zwischen 0 und 4,7 aufweist, resultiert, was zu einer hydroalkoholischen Phase führt, die eine erste Fraktion des ersten Extraktes, den sogenannten zweiten Extrakt, enthält, sowie zu einer Phase, die von dem dritten Lösungsmittel gebildet ist und die eine zweite Fraktion des ersten Extraktes, den sogenannten dritten Extrakt, enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das zweite Lösungsmittel ein hydroalkoholisches Lösungsmittel ist, wobei der Alkohol dieses zweiten Lösungsmittels aus der Gruppe der C1- bis C5-Monoalkohole, der C2- bis C6-Glykole und deren Mischungen ausgewählt ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass der Alkohol Methanol, Ethanol oder Butylenglykol ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 11 oder 12, dadurch gekennzeichnet, dass der Alkohol Ethanol ist und dass er zu wenigstens 20 Vol.-% in dem hydroalkoholischen Lösungsmittel vorliegt.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass das dritte Lösungsmittel aus der Gruppe bestehend aus Chloroform, Ethylacetat, Diethylether und deren Mischungen ausgewählt ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt der erste Extrakt ist, wie er in einem der Ansprüche 5 bis 8 definiert ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt der zweite Extrakt ist, wie er in einem der Ansprüche 11 bis 14 definiert ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt der dritte Extrakt ist, wie er in einem der Ansprüche 11 bis 14 definiert ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass sie wenigstens einen ersten Extrakt und/oder einen zweiten Extrakt und/oder einen dritten Extrakt enthält, wie sie in den Ansprüche 6 bis 14 definiert sind.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass sie 0,003 bis 2 Gew.-%, ausgedrückt in Trockensubstanz, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung aus Biomasseextrakt der Neochloris oleoabundans enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass sie 0,003 bis 0,3 Gew.-%, ausgedrückt in Trockensubstanz, bezogen auf das Gewicht der Zusammensetzung aus Biomasseextrakt der Neochloris oleoabundans enthält.
Verfahren zur Herstellung eines Extraktes aus Neochloris oleoabundans, das für die Herstellung einer Zusammensetzung bestimmt ist, wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 20 definiert ist, dadurch gekennzeichnet, dass es wenigstens einen Schritt zur Extraktion der Biomasse durch ein erstes alkoholisches oder hydroalkoholisches Lösungsmittel, wie es in einem der Ansprüche 6 bis 8 definiert ist, umfasst, um einen ersten Extrakt zu erhalten.
Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, dass es ferner wenigstens einen Schritt zur Fraktionierung des ersten Extraktes umfasst.
Verfahren nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass es einen Schritt zur Teilung des ersten Extraktes zwischen einem zweiten hydroalkoholischen oder wässrigen Lösungsmittel und einem mit dem zweiten Lösungsmittel nicht mischbaren dritten Lösungsmittel, das eine Polarität P' zwischen 0 und 4,7 aufweist, umfasst, wobei die Teilung zu einem zweiten und zu einem dritten Extrakt führt, die in der durch das zweite Lösungsmittel bzw. in der durch das dritte Lösungsmittel gebildeten Phase enthalten sind.
Verwendung wenigstens eines Extraktes, wie er in einem der Ansprüche 1 bis 20 definiert ist oder wie er durch das Verfahren von einem der Ansprüche 21 bis 23 erhalten wird, als schlankmachenden Wirkstoff in einer kosmetischen Zusammensetzung oder für die Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung.
Verfahren zur kosmetischen Behandlung des menschlichen Körpers zur Erzielung einer schlankmachenden Wirkung, dadurch gekennzeichnet, dass es das Auftragen einer Zusammensetzung, wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 20 definiert ist, auf einen betroffenen Teil des Körpers umfasst.