DE10100588A1 - Inhibiting expression of target genes, useful e.g. for treating tumors, by introducing into cells two double-stranded RNAs that are complementary to the target - Google Patents

Inhibiting expression of target genes, useful e.g. for treating tumors, by introducing into cells two double-stranded RNAs that are complementary to the target

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DE10100588A1
DE10100588A1 DE2001100588 DE10100588A DE10100588A1 DE 10100588 A1 DE10100588 A1 DE 10100588A1 DE 2001100588 DE2001100588 DE 2001100588 DE 10100588 A DE10100588 A DE 10100588A DE 10100588 A1 DE10100588 A1 DE 10100588A1
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    • C12N2330/30Production chemically synthesised

Abstract

Inhibiting expression of a target gene (TG) in a cell by introducing at least two oligoribonucleotides (dsRNAI, II), both with a double-stranded (ds) structure of at most 49 sequential nucleotide (nt) pairs. At least part of one strand (S1, S2) of the ds structures in each of dsRNAI, II are complementary to regions (B1, B2) in TG. An Independent claim is also included for material for inhibiting expression of TG containing at least dsRNAI and II.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren, eine Verwendung und ei nen Stoff zur Hemmung der Expression eines Zielgens. The invention relates to a method, a use and ei NEN substance for inhibiting the expression of a target gene.

Aus der WO 99/32619 und der WO 00/44895 sind Verfahren zur Hemmung der Expression von medizinisch oder biotechnologisch interessanten Genen mit Hilfe eines doppelsträngigen Oligori bonukleotids (dsRNA) bekannt. A method for inhibiting the expression of medically or biotechnologically interesting genes using a double Oligori bonukleotids (dsRNA) are known from WO 99/32619 and WO 00/44895. Die bekannten Verfahren sind nicht besonders effektiv. The known methods are not very effective.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, die Nachteile nach dem Stand der Technik zu beseitigen. The object of the present invention is to eliminate the disadvantages of the prior art. Es soll insbesondere ein möglichst wirksames Verfahren, eine möglichst wirksame Ver wendung und ein Stoff angegeben werden, mit denen eine noch effizientere Hemmung der Expression eines Zielgens erreichbar ist. It should be particularly pointed out an effective method possible, the most efficient Ver application and a substance with which a more efficient inhibition of the expression of a target gene can be achieved.

Diese Aufgabe wird durch die Merkmale der Ansprüche 1, 36 und 72 gelöst. This object is solved by the features of claims 1, 36 and 72nd Vorteilhafte Ausgestaltungen ergeben sich aus den Merkmalen der Ansprüche 2 bis 35, 37 bis 71 und 73 bis 99. Advantageous embodiments result from the features of claims 2 to 35, 37 to 71 and 73-99.

Mit den erfindungsgemäß beanspruchten Merkmalen wird überra schender Weise eine drastische Erhöhung der Effektivität der Hemmung der Expression eines Zielgens erreicht. With the invention claimed features drastically increase the effectiveness of the inhibition of the expression of a target gene is achieved überra Schender manner. Die genauen Umstände dieses Effekts sind noch nicht geklärt. The exact circumstances of this effect are not yet clear.

Die gleichzeitige Applikation mehrerer erfindungsgemäßer Oli goribonukleotide mit zu unterschiedlichen Bereichen bzw. Ab schnitten des Zielgens komplementären Sequenzen bewirkt eine stärkere Hemmung der Expression des Zielgens schon bei Ver wendung sehr niedriger Konzentrationen. The simultaneous application of several inventive Oli goribonukleotide with different areas or cut from the target gene complementary sequences results in a stronger inhibition of the expression of the target gene even at Ver application of very low concentrations.

Die Gesamtzahl der verwendeten unterschiedlichen erfindungs gemäßen Oligoribonukleotide kann bis zu 100 betragen. The total number of different fiction, modern oligoribonucleotides used may be up to: 100. In ei nem besonderen Fall können die komplementären Bereiche der erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide die gesamte Sequenz des Zielgens lückenlos überdecken. In ei nem particular case, the complementary regions of the oligoribonucleotides according to the invention can cover the entire sequence of the target gene gaps. Dabei sind auch Überlappungen in den überdeckten Bereichen möglich. This also overlaps in the covered areas are possible.

Nach einem Ausgestaltungsmerkmal kann zumindest ein Ende des ersten und/oder des zweiten Oligoribonukleotids zumindest ein nicht nach Watson & Crick gepaartes Nukleotid aufweisen. After a design feature, one end of the first and / or second oligoribonucleotide may comprise at least comprise at least one unpaired by Watson & Crick nucleotide. Es wird angenommen, dass durch die besondere Ausbildung des zu mindest eine Endes zumindest eines der Oligoribonukleotide die Stabilität desselben erhöht wird. It is believed that at least one end of at least one of the oligoribonucleotides, the stability thereof is increased by the particular configuration of the. Durch die Erhöhung der Stabilität. By increasing the stability. wird die wirksame Konzentration in der Zelle er höht. the effective concentration in the cell he increased. Die Effektivität ist gesteigert. The effectiveness is increased.

Die Effektivität kann weiter gesteigert werden, wenn das Ende einen aus 1 bis 4 Nukleotiden gebildeten einsträngigen Ab schnitt und/oder ungepaarte Nukleotide aufweist. The effectiveness can be further enhanced when the end of a cut stranded From formed from 1 to 4 nucleotides, and / or having unpaired nucleotides. Eine beson dere Erhöhung der Stabilität des erfindungsgemäßen Oligoribo nukleotids ist beobachtet worden, wenn das Ende das 3'-Ende eines Strangs der doppelsträngigen Struktur ist. A 'specific increase the stability of the inventive oligoribo nucleotide has been observed when the end is the 3' end of a strand of the double-stranded structure.

Als besonders vorteilhaft hat es sich erwiesen, die Zelle vor dem Einführen der Oligoribonukleotide mit Interferon zu be handeln. Especially advantageous has been found to act the cell prior to introducing the oligoribonucleotides with interferon to be. Auf diese Weise können besonders effektiv Tumore be kämpft werden. In this way, especially effective tumors be struggling.

Es hat sich gezeigt, dass durch eine solche aufeinanderfol gende Applikation von Interferon und erfindungsgemäßen Oligo ribonukleotiden die Nachteile, wie sie bei der bekannten al leinigen Verwendung von langkettigen Oligoribonukleotiden auftreten, vermieden und die Vorteile der Verwendung von kur zen Oligoribonukleotiden mit weniger als 50 Nukleotidpaaren zur Hemmung der Genexpression besser ausgenutzt werden kön nen. It has been shown that by such aufeinanderfol restrictive application of interferon and oligo invention ribonucleotides the disadvantages as Leinigen use of long chain oligoribonucleotides occur in the known al avoided and the benefits of using health zen oligoribonucleotides with less than 50 nucleotide pairs for inhibition of gene expression Kings are better utilized nen. Darüber hinaus wird der durch die Oligoribonukleotide vermittelte hemmende Effekt auf die Genexpression verstärkt. In addition, the inhibitory effect mediated by the oligoribonucleotides is reinforced on gene expression.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal wird die Effektivi tät des Verfahrens erhöht, wenn zumindest ein weiteres Oligo ribonukleotid in die Zelle eingeführt wird, welches eine dop pelsträngige aus mindestens 49 aufeinanderfolgenden Nukleo tidpaaren gebildete Struktur aufweist, wobei ein Strang oder zumindest ein Abschnitt des Strangs der doppelsträngigen Struktur des weiteren Oligoribonukleotids komplementär zu ei nem dritten Bereich des Zielgens ist. According to a further embodiment feature, the Effektivi is increased if at least one further oligo ribonucleotide is introduced into the cell, which consists of having a dop-stranded at least 49 consecutive nucleo tidpaaren structure formed wherein one strand or at least a portion of the strand of the double-stranded structure ty of the process further oligoribonucleotide complementary to ei nem third region of the target gene. Die Hemmung der Expres sion des Zielgens ist in diesem Fall deutlich gesteigert. Inhibition of Expres sion of the target gene is significantly increased in this case.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal kann das erste und/oder das zweite Oligoribonukleotid eine doppelsträngige aus weniger als 25 aufeinanderfolgenden Nukleotidpaaren ge bildete Struktur aufweisen. According to a further embodiment feature, the first and / or second oligoribonucleotide may comprise a double-stranded from less than 25 successive nucleotide ge formed structure.

Der erste, zweite und dritte Bereich können abschnittsweise überlappen, aneinandergrenzen oder auch voneinder beabstandet sein. The first, second and third regions may overlap in sections, adjacent to one another or be spaced voneinder.

Die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide können dann beson ders einfach in die Zelle eingeschleust werden, wenn sie in micellare Strukturen, vorteilhafterweise in Liposomen, einge schloßen werden. The oligoribonucleotides according to the invention can be introduced into the cell then special DERS easy when they are closed is in micellar structures, most advantageously in liposomes. Es ist auch möglich das/die Oligoribonukleo tid/e in virale natürliche Kapside oder in auf chemischem oder enzymatischem Weg hergestellte künstliche Kapside oder davon abgeleitete Strukturen einzuschließen. It is also possible that / enclose the Oligoribonukleo tid / e in viral natural capsid or in prepared chemically or enzymatically produced artificial capsids or structures derived therefrom.

Das Zielgen kann nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal eine der in dem anhängenden Sequenzprotokoll wiedergegebenen Sequenzen SQ001 bis SQ140 aufweisen. The target gene may comprise SQ001 to SQ140 according to a further embodiment feature of a reproduced in the attached sequence protocol sequences. Es kann auch aus der folgenden Gruppe ausgewählt sein: Onkogen, Cytokin-Gen, Id- Protein-Gen, Entwicklungsgen, Priongen. It can also be selected from the following group: oncogene, cytokine gene, Id-protein gene, development gene, prion gene.

Das Zielgen wird zweckmäßigerweise in pathogenen Organismen, vorzugsweise in Plasmodien, exprimiert. The target gene is expressed conveniently in pathogenic organisms, preferably in plasmodia. Es kann Bestandteil eines Virus oder Viroids, insbesondere eines humanpathogenen Virus oder Viruids, sein. It may be part of a virus or viroid, particularly a human pathogenic virus or Viruids. Das Virus oder Viruid kann auch ein tier- oder pflanzenpathogenes Virus oder Viroid sein. The virus or Viruid can also be an animal or plant pathogenic virus or viroid.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal ist vorgesehen, dass die ungepaarten Nukleotide durch Nukleosidthiophosphate substituiert sind. According to a further embodiment feature is envisaged that the unpaired nucleotides are substituted by nucleoside thiophosphates.

Die doppelsträngige Struktur der erfindungsgemäßen Oligoribo nukleotide kann weiter durch eine chemische Verknüpfung der der beiden Stränge stabilisiert werden. The double-stranded structure of the inventive oligoribo nucleotides can be further stabilized by chemical linkage of the two strands. Die chemische Ver knüpfung kann durch eine kovalente oder ionische Bindung, ei ne Wasserstoffbrückenbindung, hydrophobe Wechselwirkungen, vorzugsweise von-der-Waals- oder Stapelungswechselwirkungen, oder durch Metall-Ionenkoordination gebildet werden. The chemical linkage Ver may be formed by a covalent or ionic bond, egg ne hydrogen bonding, hydrophobic interactions, preferably der Waals or stacking, or by metal-ion coordination. Es hat sich weiter als zweckmäßig und die Stabilität erhöhend erwie sen, wenn die chemische Verknüpfung in der Nähe des einen oder in der Nähe der beiden Enden des erfindungsgemäßen Oli goribonukleotids gebildet ist. It has also sen as appropriate and the stability erwie increasing when the chemical linkage in the vicinity of the one or in the vicinity of both ends of the inventive Oli goribonukleotids is formed. Weitere vorteilhafte Ausge staltungen hinsichtlich der chemischen Verknüpfung können den Merkmalen der Ansprüche 23 bis 29 entnommen werden, ohne dass es dafür einer näheren Erläuterung bedarf. Further advantageous Substituted staltungen respect to the chemical linkage may be 23 to 29 taken from the features of the claims, without need for any further explanation.

Zum Transport der erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide hat es sich ferner als vorteilhaft erwiesen, dass diese an minde stens ein von einem Virus stammendes, davon abgeleitetes oder ein synthetisch hergestelltes virales Hüllprotein gebunden, damit assoziiert oder davon umgeben werden. For transport of the oligoribonucleotides of the invention it has further proved to be advantageous that this least a derived from a virus, is derived or a synthetic viral envelope protein bound to minde, associated with, or be surrounded thereby. Das Hüllprotein kann vom Polyomavirus abgeleitet sein. The coat protein may be derived from polyomavirus. Das Hüllprotein kann insbesondere das Virus-Protein 1 und/oder das Virus-Protein 2 des Polyomavirus enthalten. The coat protein may contain, in particular, the virus protein 1 and / or the virus protein 2 of the polyoma virus. Nach einer weiteren Ausgestaltung ist vorgesehen, dass bei Bildung eines Kapsids oder kapsidar tigen Gebildes aus dem Hüllprotein die eine Seite zum Inneren des Kapsids oder kapsidartigen Gebildes gewandt ist. In a further embodiment it is provided that upon formation of a capsid or kapsidar term structure from the coat protein faces a side toward the interior of the capsid or capsid-like structure. Ferner ist es von Vorteil, dass das/die Oligoribonukleotid/e zum primären oder prozessierten RNA-Transkript des Zielgens kom plementär ist/sind. Further, it is advantageous that the / kom the oligoribonucleotide / e to the primary or processed RNA transcript of the target gene is plement / are. Die Zelle kann eine Vertebratenzelle oder eine menschliche Zelle sein. The cell can be a vertebrate cell or a human cell.

Erfindungsgemäß ist weiterhin die Verwendung der vorgenannten ersten und zweiten Oligoribonukleotide mit den vorgenannten Merkmalen zur Hemmung der Expression eines Zielgens in einer Zelle vorgesehen. According to the invention the use of the aforementioned first and second oligoribonucleotides having the aforementioned features for inhibiting the expression of a target gene in a cell is also provided. Es wird insoweit auf die vorangegangenen Ausführungen verwiesen. There reference is made to the previous comments.

Nach weiterer Maßgabe der Erfindung wird die Aufgabe gelöst durch einen Stoff zur Hemmung der Expression eines Zielgens, umfassend mindestens ein erstes und ein zweites Oligoribonu kleotid in einer zur Hemmung der Expression des Zielgens aus reichenden Menge, wobei das erste und das zweite Oligoribonu kleotid jeweils eine doppelsträngige aus höchstens 49 aufein anderfolgenden Nukleotidpaaren gebildete Struktur aufweisen, und wobei ein Strang oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs der doppelsträngigen Struktur des ersten Oligoribonu kleotids komplementär zu einem ersten Bereich des Zielgens ist, und wobei ein Strang oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs der doppelsträngigen Struktur des zweiten Oligoribo nukleotids komplementär zu einem zweiten Bereich des Zielgens ist. In further accordance with the invention, the object is achieved by a substance for inhibiting the expression of a target gene, comprising at least a first and a second Oligoribonu kleotid in a to inhibit the expression of the target gene of sufficient amount, wherein said first and second Oligoribonu kleotid each a have double from more than 49 structure formed aufein other nucleotide pairs, and wherein one strand or at least a portion of one strand of the double-stranded structure of the first Oligoribonu is kleotids complementary to a first region of the target gene, and wherein one strand or at least a portion of one strand of the double-stranded structure the second oligoribo nucleotide is complementary to a second region of the target gene.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal weist zumindest ein Ende des ersten und/oder zweiten Oligoribonukleotids zumin dest ein nicht nach Watson & Crick gepaartes Nukleotid auf. According to a further embodiment feature comprises at least one end of the first and / or second oligoribonucleotide at least one non-paired by Watson & Crick nucleotide on. Wegen der weiteren vorteilhaften Ausgestaltung des ersten und zweiten Oligoribonukleotids wird auf die vorangegangenen Aus führungen verwiesen. Due to the further advantageous embodiment the first and second oligoribonucleotide is made to the preceding From guides.

Die Erfindung wird nachfolgend anhand der Zeichnungen bei spielhaft erläutert. The invention is explained below with reference to the drawings, in way of example. Es zeigen: Show it:

Fig. 1a-c schematisch ein erstes, zweites und drittes Oligoribonukleotid und Fig. 1a-c schematically shows a first, second and third oligoribonucleotide and

Fig. 2 schematisch ein Zielgen. Fig. 2 shows schematically a target gene.

Die in den Fig. 1a bis c gezeigten Oligoribonukleotide dsRNA I, dsRNA II und dsRNA III weisen jeweils ein erstes Ende E1 und ein zweites Ende E2 auf. The oligoribonucleotides shown in Figs. 1a to c dsRNA I, II and dsRNA dsRNA III each have a first end E1 and a second end E2. Das erste Oligoribonukleotid dsRNA I und das zweite Oligoribonukleotid dsRNA II weisen an ihren Enden E1 und E2 einzelsträngige aus etwa 1 bis 4 unge paarten Nukleotiden gebildete Abschnitte auf. The first oligoribonucleotide dsRNA I and the second dsRNA II oligoribonucleotide have at their ends E1 and E2 single from about 1 to 4 unge paired nucleotides portions formed on. Beim dritten Oligoribonukleotid dsRNA III handelt es sich um ein langes Oligoribonukleotid mit mehr als 49 Nukleotidpaaren. In the third oligoribonucleotide dsRNA III is a long oligoribonucleotide having more than 49 nucleotide pairs.

In Fig. 2 ist schematisch ein auf einer DNA befindliches Zielgen gezeigt. In FIG. 2, a befindliches on a target gene DNA is shown schematically. Das Zielgen ist durch einen schwarzen Balken kenntlich gemacht. The target gene is indicated by a black bar. Es weist einen ersten Bereich B1, einen zweiten Bereich B2 und einen dritten Bereich B3 auf. It has a first portion B1, a second section B2 and a third region B3.

Jeweils ein Strang S1, S2 und S3 des ersten dsRNA I, zweiten dsRNA II und dritten Oligoribonukleotids dsRNA III ist kom plementär zum entsprechenden Bereich B1, B2 und B3 auf dem Zielgen. Each one strand S1, S2 and S3 of the first dsRNA I, second II and third dsRNA dsRNA oligoribonucleotide III is com plement to the corresponding region B1, B2 and B3 on the target gene.

Die Expression des Zielgens wird dann besonders wirkungsvoll gehemmt, wenn die kurzkettigen ersten dsRNA I und zweiten Oligoribonukleotide dsRNA II an ihren Enden E1, E2 einzel strängige Abschnitte aufweisen. The expression of the target gene is inhibited then particularly effective when the short-chain first and second dsRNA I oligoribonucleotides dsRNA II exhibit at their ends E1, E2 single-stranded portions. Die einzelsträngigen Ab schnitte können sowohl am Strang S1, S2 als auch am Ge genstrang oder am Strang S1, S3 und am Gegenstrang ausgebil det sein. From the single sections can be ausgebil det both the strand S1, S2 and on the Ge gens Trang or on the line S1, S3 and at the opposite strand. Es hat sich weiter gezeigt, dass ab einer bestimm ten Länge der Oligoribonukleotide, z. It has also been found that from a limited hours th length of the oligoribonucleotides such. B. ab einer Länge von mehr als 49 Nukleotidpaaren, eine einzelsträngige Ausbildung der Enden E1, E2 weniger stark zur Unterdrückung der Expres sion des Zielgens beiträgt. B. from a length of more than 49 nucleotide pairs, a single-stranded form of the ends E1, E2 less for suppressing the Expres sion of the target gene contributes. Bei langen Oligoribonukleotiden, hier beim dritten Oligoribonukleotid dsRNA III, ist eine ein zelsträngige Ausbildung an den Enden E1, E2 nicht unbedingt erforderlich. For long oligoribonucleotides, oligoribonucleotide here the third dsRNA III, a one-stranded form at the ends E1, E2 is not necessarily required.

Die Bereiche B1, B2 und B3 können, wie in Fig. 2 gezeigt, von einander beabstandet sein. The areas B1, B2 and B3, as shown in Fig. 2, may be spaced from each other. Sie können aber auch an einander grenzen oder überlappen. but you can also border on each other or overlap.

Im Falle der einzelsträngigen Ausbildung der Enden E1, E2 sind alle denkbaren Permutationen möglich, dh es können ein Ende oder beide Enden des Strangs S1, S2, S3 oder ein Ende oder beide Enden des Gegenstrangs überstehen. In the case of the single-stranded form of the ends E1, E2, all conceivable permutations are possible, ie able to withstand one end or both ends of the strand S1, S2, S3 or one end or both ends of the opposite strand. Der einzel strängige Abschnitt kann 1 bis 4 gepaarte Nukleotide aufwei sen. The single stranded portion may sen 1 to 4 paired nucleotides aufwei. Es ist auch möglich, dass ein Ende oder beide Enden E1, E2 mindestens ein nicht nach Watson & Crick gepaartes Nukleo tidpaar aufweisen. It is also possible that one end or both ends E1, E2 have at least one unpaired by Watson & Crick nucleo tidpaar.

Ausführungsbeispiel embodiment

Es wurden aus Sequenzen des Grün-fluoreszierenden Proteins (GFP) der Alge Aequoria victoria abgeleitete doppelsträngige RNAs (dsRNAs) hergestellt und zusammen mit dem GFP-Gen in Fi broblasten mikroinjiziert. Were prepared (GFP) of the alga Aequoria victoria derived double-stranded RNAs (dsRNAs) and from sequences of the green fluorescent protein microinjected fibroblasts along with the GFP gene in Fi. Anschließend wurde die Fluores zenzabnahme gegenüber Zellen ohne dsRNA ausgewertet. Then the fluorescence was zenzabnahme to cells without dsRNA evaluated.

Versuchsprotokoll experimental protocol

Mittels eines RNA-Synthesizers (Typ Expedite 8909, Applied Biosystems, Weiterstadt, Deutschland) und herkömmlicher che mischer Verfahren wurden die aus den Sequenzprotokollen SQ141 SQ144 ersichtlichen RNA-Einzelstränge und die zu ihnen kom plementären Einzelstränge synthetisiert. Means an RNA synthesizer (Expedite 8909 type, Applied Biosystems, Weiterstadt, Germany) and conventional mixers che method were synthesized from the sequence protocols SQ141 SQ144 apparent RNA single strands and the com plementary to them single strands. Die Hybridisierung der komplementären Einzelstränge zum Doppelstrang erfolgte für jede einzelne dsRNA durch Aufheizen des stöchiometrischen Gemischs der Einzelstränge in 10 mM Natriumphosphatpuffer, pH 6,8, 100 mM NaCl, auf 90°C und nachfolgendes langsames Abküh len über 6 Stunden auf Raumtemperatur. Hybridization of the complementary single strands of the double strand was carried out for each dsRNA by heating the stoichiometric mixture of the single strands in 10 mM sodium phosphate buffer, pH 6.8, 100 mM NaCl, at 90 ° C and subsequent slow cool down len about 6 hours at room temperature. Anschließend erfolgte Reinigung mit Hilfe der HPLC. Cleaning followed by using HPLC. Die so erhaltenen deRNAs wurden einzeln oder gemeinsam in die Testzellen mikroinjiziert. The deRNAs thus obtained were microinjected individually or together in the test cells. Als Testsystem für diese in-vivo-Experimente diente die muri ne Fibroblasten-Zellinie NIH/3T3. As a test system for these in vivo experiments the muri ne fibroblast cell line NIH / 3T3 served. Mit Hilfe der Mikroinjekti on wurde das GFP-Gen in die Zellen eingebracht. With the help of Mikroinjekti on the GFP gene was introduced into the cells. Die Expressi on des GFP wurde unter dem Einfluß gleichzeitig mittransfi zierter sequenzhomologer dsRNA untersucht. The Expressi on the GFP was examined under the influence of the same mittransfi ed sequenzhomologer dsRNA. Die Auswertung un ter dem Fluoreszenzmikroskop erfolgte 3 Stunden nach Injekti on anhand der grünen Fluoreszenz des gebildeten GFP. The evaluation was carried out un ter the fluorescence microscope 3 hours after Injekti on the basis of the green fluorescence of GFP formed.

Vorbereitung der Zellkulturen Preparation of cell cultures

Die Zellen wurden in DMEM mit 4,5 g/l Glucose, 10% fötalem Rinderserum unter 7,5% CO 2 -Atmosphäre bei 37 W in Kultur schalen inkubiert und vor Erreichen der Konfluenz passagiert. The cells were cultured in DMEM with 4.5 g / l glucose, 10% fetal bovine serum under 7.5% CO incubated in culture trays 2 atmosphere at 37 W and passaged prior to reaching confluence. Das Ablösen der Zellen erfolgte mit Trypsin/EDTA. The detachment of the cells was performed with trypsin / EDTA. Zur Vorbe reitung der Mikroinjektion wurden die Zellen in Petrischalen überführt und bis zu Bildung von Mikrokolonien weiter inku biert. For Vorbe microinjection reitung the cells were transferred into Petri dishes and to form microcolonies further biert INKU.

Mikroinjektion microinjection

Die Kulturschalen wurde zur Mikroinjektion für ca. 10 Minuten aus dem Inkubator genommen. The culture dishes were taken for microinjection for about 10 minutes from the incubator. Es wurde in ca. 50 Zellen pro An satz innerhalb eines markierten Bereiches unter Verwendung des Mikroinjektionssystems FemtoJet der Firma Eppendorf, Deutschland, einzeln injiziert. It was in about 50 cells per set to within a marked area using the microinjection system FemtoJet Eppendorf, Germany, injected separately. Anschließend wurden die Zel len weitere drei Stunden inkubiert. Then the Zel len were incubated for an additional three hours. Für die Mikroinjektion wurden Borosilikat-Glaskapillaren der Firma Eppendorf mit ei nem Spitzeninnendurchmesser von 0,5 µm verwendet. For microinjection, borosilicate glass capillaries Eppendorf were used with egg nem tip inner diameter of 0.5 microns. Die Mikro injektion wurde mit dem Mikromanipulator 5171 der Firma Ep pendorf durchgeführt. The micro-injection was carried out with the micro Pendorf 5171 the company Ep. Die Injektionsdauer betrug 0,8 Sekun den, der Druck ca. 80 hPa. Die in die Zellen injizierten Pro ben enthielten 0,01 µg/µ1 pGFP-C1 (Clontech Laboratories GmbH, Heidelberg, Deutschland) sowie an Dextran-70000 gekop peltes Texas-Rot in 14 mM NaCl, 3 mM KCl, 10 mM KP04, pH 7,5. The injection time was 0.8-seconds, the pressure about 80 hPa. The injected cells into the Pro ben contained 0.01 g / μ1 pGFP-C1 (Clontech Laboratories GmbH, Heidelberg, Germany) and peltes to dextran-70000 gekop Texas -red in 14 mM NaCl, 3 mM KCl, 10 mM KP04, pH 7.5. Zusätzlich wurden in ca. 100 pl folgende dsRNAs zugegeben: Ansatz 1: 100 µM dsRNA (Sequenzprotokoll SQ141); Additionally, the following dsRNAs were added in 100 pl: Approach 1: 100 uM dsRNA (Sequence Listing SQ141); Ansatz 2: 100 µM dsRNA (Sequenzprotokoll SQ142); Approach 2: 100 uM dsRNA (Sequence Listing SQ142); Ansatz 3: 100 µM dsRNA (Sequenzprotokoll SQ143); Approach 3: 100 uM dsRNA (Sequence Listing SQ143); Ansatz 4: 100 µM dsRNA (Sequenzpro tokoll SQ144); Approach 4: 100 uM dsRNA (Sequenzpro protocol SQ144); Ansatz 5: Gemisch von je 25 µM dsRNA (nach Se quenzprotokoll SQ141, SQ142, SQ143 und SQ144); Approach 5: Mixture of 25 uM dsRNA (after Se quenzprotokoll SQ141, SQ142, SQ143 and SQ144); Ansatz 6: ohne RNA. Approach 6: without RNA.

Die Zellen wurden bei Anregung mit Licht der Anregungswellen länge von Texas-Rot, 568 nm, bzw. von GFP, 513 nm, mittels eines Fluoreszenzmikroskops untersucht. The cells were examined upon excitation with light of the excitation wave length of Texas red, 568 nm, or of GFP, 513 nm, using a fluorescence microscope. Die Fluoreszenz aller Zellen im Gesichtsfeld wurde bestimmt und in Relation zur Zelldichte (ausgedrückt durch deren Gesamtproteinkonzentrati on) gesetzt. The fluorescence of all cells in the visual field was determined, and in relation to cell density (expressed by their Gesamtproteinkonzentrati on) are set.

Ergebnis und Schlussfolgerung Outcome and conclusion

Sowohl bei einer Gesamtkonzentration von 10 als auch von 100 µM dsRNA konnte bei gleichzeitiger Verwendung von vier unter schiedlichen dsRNAs ein deutlich stärkerer hemmender Effekt auf die Expression des GFP-Gens in Fibroblasten beobachtet werden als mit einer dsRNA allein (Tabelle 1). Both at a total concentration of 10 and 100 uM dsRNA significantly stronger inhibitory effect was observed on the expression of the GFP gene in fibroblasts with a dsRNA alone (Table 1) with simultaneous use of four difference union dsRNAs. Darüber hinaus war bei gleichzeitiger Verwendung von vier unterschiedlichen dsRNAs eine starke Hemmung bereits bei einer Konzentration von 10 µM zu erreichen, was mit nur einer dsRNA nicht möglich war. In addition, while using four different dsRNAs strong inhibition could be reached already at a concentration of 10 uM, which was not possible with only one dsRNA.

Die Verwendung mehrerer, gegen das selbe Zielgen gerichteten dsRNAs ermöglicht somit eine stärkere Hemmung der Genexpres sion in Säugerzellen bereits bei niedrigeren Konzentrationen als dies mit nur einer dsRNA erreichbar ist. The use of multiple, directed against the same target gene dsRNAs thus allows a greater inhibition of Genexpres sion in mammalian cells at lower concentrations than is possible with only a dsRNA can be achieved.

Tabelle 1: Die Symbole geben den relativen Anteil an nicht oder schwach fluoreszierende Zellen an (+++ < 90%; ++ 60-90%; + 30-60%; - < 10%). Table 1: The symbols do not indicate the relative portion of or weakly fluorescent cells (+++ <90%; 60-90% ++; 30-60% + - <10%).

SEQUENZPROTOKOLL SEQUENCE LISTING

Literatur literature

Bass, BL, 2000. Double-stranded RNA as a template for gene silencing. Bass, BL, 2000. Double-stranded RNA as a template for gene silencing. Cell 101, 235-238. Cell 101, 235-238.
Bosher, JM and Labouesse, M., 2000. RNA interference: genetic Wand and genetic watchdog. Bosher, JM and Labouesse, M., 2000. RNA interference: genetic wall and genetic watchdog. Nature Cell Biology 2, E31-E36. Nature Cell Biology 2, E31-E36.
Caplen, NJ, Fleenor, J., Fire, A., and Morgan, RA, 2000. dSRNA-mediated gene silencing in cultured Drosophila cells: a tissue culture model for the analysis of RNA interference. Caplen, NJ, Fleenor, J., Fire, A., and Morgan, RA, 2000. dsRNA-mediated gene silencing in cultured Drosophila cells: a tissue culture model for the analysis of RNA interference. Gene 252, 95-105. Gene 252, 95-105.
Clemens, JC, Worby, CA, Simonson-Leff, N., Muda, M., Mae hama, T., Hemmings, BA, and Dixon, JE, 2000. Use of double stranded RNA interference in Drosophila cell lines to dissect signal transduction pathways. Clemens, JC, Worby, CA, Simonson-Leff, N., Muda, M., Mae hama, T., Hemmings, BA, and Dixon, JE, 2000. Use of double stranded RNA interference in Drosophila cell lines to dissect signal transduction pathways. Proc. Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA 97, 6499-6503. USA 97, 6499-6503.
Ding, SW, 2000. RNA silencing. Ding, SW, 2000. RNA silencing. Curr. Curr. Opin. Opin. Biotechnol. Biotechnol. 11, 152-156. 11, 152-156.
Fire, A., Xu,S., Montgomery, MK, Kostas, SA, Driver, SE, and Mello, CC, 1998. Potent and specific genetic interfer ence by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Fire, A., Xu, S., Montgomery, MK, Kostas, SA, Driver, SE, and Mello, CC, 1998. Potent and specific genetic interfer ence by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391, 806-811. Nature 391, 806-811.
Fire, A., 1999. RNA-triggered gene silencing. Fire, A., 1999. RNA-triggered gene silencing. TrendsGenet. Trend Genet. 15, 358-363. 15, 358-363.
Freier, SM, Kierzek, R., Jaeger, JA, Sugimoto, N., Caruth ers, MH, Neilson, T., and Turner, DH, 1986. Improved free enery parameters for prediction of RNA duplex stability. Free, SM, Kierzek, R., Jaeger, YES, Sugimoto, N., Caruth ers, MH, Neilson, T., and Turner, DH, 1986. Improved free enery parameters for prediction of RNA duplex stability. Proc. Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA 83,9373-9377. USA 83.9373 to 9377.
Hammond, SM, Bernstein, E., Beach, D., and Hannon, GJ, 2000. An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Hammond, SM, Bernstein, E., Beach, D., and Hannon, GJ, 2000. An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature 404, 293-296. Nature 404, 293-296.
Limmer, S., Hofmann, H.-P., Ott, G., and Sprinzl, M., 1993. The 3'-terminal end (NCCA) of tRNA determines the structure and stability of the aminoacyl acceptor stem. Limmer, S., Hofmann, H.-P., Ott, G., and Sprinzl, M., 1993. The 3'-terminal end (NCCA) of tRNA deterministic mines the structure and stability of the aminoacyl acceptor stem. Proc. Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA 90, 6199-6202. USA 90, 6199-6202.
Montgomery, MK and Fire, A., 1998. Double-stranded RNA as a mediator in sequence-specific genetic silencing and co suppression. Montgomery, MK and Fire, A., 1998. Double-stranded RNA as a mediator in sequence-specific genetic silencing and co suppression. Trends Genet. Trends Genet. 14, 255-258. 14, 255-258.
Montgomery, MK, Xu,S., and Fire, A., 1998. RNA as a target of double-stranded RNA-mediated genetic interference in Caeno rhabditis elegans. Montgomery, MK, Xu, S., And Fire, A., 1998. RNA as a target of double-stranded RNA-mediated genetic interference in Caeno Rhabditis elegans. Proc. Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA 95, 15502- 15507. USA 95, 15502- 15,507th
Ui-Tei, K., Zenno, S., Miyata, Y., and Saigo, K., 2000. Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and Chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target. Ui-Tei, K., Zenno, S., Miyata, Y., and Saigo, K., 2000. Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and Chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target. FEBS Lett. FEBS Lett. 479, 79-82. 479, 79-82.
Zamore, PD, Tuschl, T., Sharp, PA, and Bartel, DP, 2000. RNAi: double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Zamore, PD, Tuschl, T., Sharp, PA, and Bartel, DP, 2000. RNAi: double-stranded RNA ausrichtet the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide Intervals. Cell 101, 25-33. Cell 101, 25-33.

Claims (100)

  1. 1. Verfahren zur Hemmung der Expression eines Zielgens in einer Zelle umfassend die folgenden Schritte: 1. A method for inhibiting the expression of a target gene in a cell comprising the steps of:
    Einführen mindestens eines ersten (dsRNA I) und eines zweiten Oligoribonukleotids (dsRNA II) in einer zur Hemmung der Ex pression des Zielgens ausreichenden Menge, Introducing at least a first (dsRNA I) and a second oligoribonucleotide (dsRNA II), in a sufficient to inhibit the ex pression of the target gene Volume
    wobei das erste (dsRNA I) und das zweite Oligoribonukleotid (dsRNA II) jeweils eine doppelsträngige aus höchstens 49 auf einanderfolgenden Nukleotidpaaren gebildete Struktur aufwei sen, wherein the first (dsRNA I) and the second oligoribonucleotide (dsRNA II) respectively aufwei sen a double structure formed of a maximum of 49 successive nucleotide pairs,
    wobei ein Strang (S1) oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs (S1) der doppelsträngigen Struktur des ersten Oligo ribonukleotids (dsRNA I) komplementär zu einem ersten Bereich (B1) des Zielgens ist, wherein one strand (S1) or at least a portion of a strand (S1) is the double-stranded structure of the first oligo ribonucleotide (dsRNA I) complementary to a first region (B1) of the target gene,
    und wobei ein Strang (S2) oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs (S2) der doppelsträngigen Struktur des zweiten Oligo ribonukleotids (dsRNA II) komplementär zu einem zweiten Be reich (B2) des Zielgens ist. and wherein one strand (S2) or at least a portion of a strand (S2) of the double-stranded structure of the second oligo ribonucleotide (dsRNA II) complementary to a second Be rich (B2) of the target gene.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei zumindest ein Ende (E1) des ersten (dsRNA I) und/oder des zweiten Oligoribonukleotids (dsRNA II) zumindest ein nicht nach Watson & Crick gepaartes Nukleotid aufweist. 2. The method of claim 1, wherein at least one end (E1) of the first (dsRNA I) and / or the second oligoribonucleotide (dsRNA II) having at least one unpaired by Watson & Crick nucleotide.
  3. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei das Ende (E1) einen aus 1 bis 4 Nukleotiden gebildeten einzelsträngigen Ab schnitt aufweist. includes 3. The method of claim 1 or 2, wherein the end (E1) cut from a single-stranded formed from 1 to 4 nucleotides.
  4. 4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Ende (E1) ungepaarte Nukleotide aufweist. 4. The method according to any one of the preceding claims, wherein the end (E1) unpaired nucleotides.
  5. 5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Ende (E1) das 3'-Ende eines Strangs der doppelsträngigen Struktur ist. 5. The method according to any one of the preceding claims, wherein the end (E1) is the 3 'end of a strand of the double-stranded structure.
  6. 6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Zelle vor dem Einführen der Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II) mit Interferon behandelt wird. 6. The method according to any one of the preceding claims, wherein said cell prior to introduction of the oligoribonucleotides (dsRNA I, dsRNA II) is treated with interferon.
  7. 7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei ein weiteres Oligoribonukleotid (dsRNA III) in die Zelle ein geführt wird, welches eine doppelsträngige aus mindestens 49 aufeinanderfolgenden Nukleotidpaaren gebildete Struktur auf weist, wobei ein Strang (S3) oder zumindest ein Abschnitt ei nes Strangs (S3) der doppelsträngigen Struktur des weiteren Oligoribonukleotids (dsRNA III) komplementär zu einem dritten Bereich (B3) des Zielgens ist. 7. The method according to any one of the preceding claims, wherein a further oligoribonucleotide (dsRNA III) is guided in the cell, which has a double-stranded comprising at least 49 consecutive nucleotide pairs formed structure, wherein one strand (S3) or at least a portion ei nes strand (S3) of the double-stranded structure further oligoribonucleotide (dsRNA III) complementary to a third region (B3) of the target gene.
  8. 8. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das erste (dsRNA I) und/oder das zweite Oligoribonukleotid (dsRNA II) eine doppelsträngige aus weniger als 25 aufeinan derfolgenden Nukleotidpaaren gebildete Struktur aufweist/en. 8. The method according to any one of the preceding claims, wherein the first (dsRNA I) and / or the second oligoribonucleotide (dsRNA II) having a double structure formed of less than 25 aufeinan of the following nucleotide / s.
  9. 9. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der erste (B1), zweite (B2) und dritte Bereich (B3) ab schnittsweise überlappen oder aneinandergrenzen. 9. The method according to any one of the preceding claims, wherein the first (B1), second (B2) and third region (B3) from cut partially overlap or adjoin each other.
  10. 10. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der erste (B1), zweite (B2) und dritte Bereich (B3) voneinan der beabstandet sind. 10. The method according to any one of the preceding claims, wherein the first (B1), second (B2) and third region (B3) are spaced from the voneinan.
  11. 11. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Oligoribonukleotid/e (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) in micellare Strukturen, vorzugsweise in Liposomen, eingeschlos sen werden. 11. The method according to any one of the preceding claims, wherein the oligoribonucleotide / e (dsRNA I, dsRNA II, III dsRNA) in micellar structures, preferably, be Schlos sen in liposomes.
  12. 12. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) in vi rale natürliche Kapside oder in auf chemischem oder enzymati schem Weg hergestellte künstliche Kapside oder davon abgelei tete Strukturen eingeschlossen werden. 12. The method according to any one of the preceding claims, wherein the oligoribonucleotides (dsRNA I, dsRNA II, III dsRNA) rale in vi capsids natural or manufactured in a chemical or enzymatic schem artificial capsids or structures thereof abgelei preparing be included.
  13. 13. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Zielgen eine der Sequenzen SQ001 bis SQ140 aufweist. 13. The method according to any one of the preceding claims, wherein the target gene comprises one of the sequences SQ001 to SQ140.
  14. 14. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Zielgen aus der folgenden Gruppe ausgewählt ist: Onkogen, Cytokin-Gen, Id-Protein-Gen, Entwicklungsgen, Priongen. 14. A method according to any one of the preceding claims, wherein the target gene is selected from the following group: oncogene, cytokine gene, Id-protein gene, development gene, prion gene.
  15. 15. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Zielgen in pathogenen Organismen, vorzugsweise in Plasmo dien, exprimiert wird. 15. The method according to any one of the preceding claims, wherein the target gene is expressed in pathogenic organisms, preferably in Plasmo diene.
  16. 16. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Zielgen Bestandteil eines Virus oder Viroids ist. 16. The method according to any one of the preceding claims, wherein the target gene is part of a virus or viroid.
  17. 17. Verfahren nach Anspruch 16, wobei das Virus ein humanpa thogenes Virus oder Viroid ist. 17. The method of claim 16, wherein the virus is a virus or viroid humanpa thogenes.
  18. 18. Verfahren nach Anspruch 17, wobei das Virus oder Viroid ein tier- oder pflanzenpathogenes Virus oder Viroid ist. 18. The method according to claim 17, wherein the virus or viroid is a animal or plant pathogenic virus or viroid.
  19. 19. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei ungepaarte Nukleotide durch Nukleosidthiophosphate substitu iert sind. 19. A method according to any one of the preceding claims, wherein unpaired nucleotides are substitu ated by nucleoside thiophosphates.
  20. 20. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die doppelsträngige Struktur durch eine chemische Verknüpfung der beiden Stränge stabilisiert wird. 20. The method according to any one of the preceding claims, wherein the double-stranded structure is stabilized by chemical linkage of the two strands.
  21. 21. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung durch eine kovalente oder ionische Bindung, eine Wasserstoffbrückenbindung, hydrophobe Wechsel wirkungen, vorzugsweise von-der-Waals- oder Stapelungswech selwirkungen, oder durch Metall-Ionenkoordination gebildet wird. 21. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage by a covalent or ionic bond, a hydrogen bond, hydrophobic interactions, preferably selwirkungen von-der-Waals or Stapelungswech, or is formed by metal-ion coordination.
  22. 22. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung in der Nähe des einen oder in der Nähe der beiden Enden (E1, E2) gebildet ist. 22. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage near the one or near the two ends (E1, E2) is formed.
  23. 23. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung mittels einer oder mehrerer Verbin dungsgruppen gebildet wird, wobei die Verbindungsgruppen vor zugsweise Poly-(oxyphosphinicooxy-1,3-propandiol)- und/oder Polyethylenglycol-Ketten sind. 23. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage is formed by one or more groups Verbin dung, wherein the compound groups preferably before poly (oxyphosphinicooxy-1,3-propanediol) - and / or polyethylene glycol chains.
  24. 24. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung durch Purinanaloga gebildet wird. 24. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage is formed by purine analogs.
  25. 25. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung durch Azabenzoleinheiten gebildet wird. 25. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage is formed by azabenzene units.
  26. 26. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung durch anstelle von Nukleotiden be nutzte verzweigte Nukleotidanaloga gebildet wird. 26. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage is formed by, instead of nucleotides be used branched nucleotide analogs.
  27. 27. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei zur Herstellung der chemischen Verknüpfung mindestens eine der folgenden Gruppen benutzt wird: Methylenblau; 27. The method according to any one of the preceding claims, wherein for generating the chemical linkage at least one of the following groups is used: methylene blue; bifunktio nelle Gruppen, vorzugsweise Bis-(2-chlorethyl)-amin; bifunktio nelle groups, preferably bis (2-chloroethyl) -amine; N- acetyl-N'-(p-glyoxyl-benzoyl)-cystamin; N- acetyl-N '- (p-glyoxyl-benzoyl) -cystamine; 4-Thiouracil; 4-thiouracil; Psora len. Psora len.
  28. 28. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung durch in der Nähe der Enden (E1, E2) der doppelsträngigen Struktur angebrachte Thiophosphoryl- Gruppen gebildet wird. 28. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage attached by in the vicinity of the ends (E1, E2) of the double-stranded structure thiophosphoryl groups is formed.
  29. 29. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die chemische Verknüpfung durch in der Nähe der Enden (E1, E2) befindliche Tripelhelix-Bindungen hergestellt wird. 29. The method according to any one of the preceding claims, wherein the chemical linkage is generated by in the vicinity of the ends (E1, E2) triple-helix bonds is prepared.
  30. 30. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) an mindestens ein von einem Virus stammendes, davon abgeleitetes oder ein synthetisch hergestelltes virales Hüllprotein gebun den, damit assoziiert oder davon umgeben werden. 30. The method according to any one of the preceding claims, wherein the oligoribonucleotides (dsRNA I, II dsRNA, dsRNA III) are surrounded at at least one derived from a virus, is derived or a synthetic viral coat protein TIALLY to, associated with, or thereof.
  31. 31. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Hüllprotein vom Polyomavirus abgeleitet ist. 31. A method according to any one of the preceding claims, wherein the coat protein is derived from polyomavirus.
  32. 32. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Hüllprotein das Virus-Protein 1 (VP1) und/oder das Virus- Protein 2 (VP2) des Polyomavirus enthält. 32. The method according to any one of the preceding claims, wherein the coat protein contains the virus protein 1 (VP1) and / or the virus protein 2 (VP2) of the polyomavirus.
  33. 33. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei bei Bildung eines Kapsids oder kapsidartigen Gebildes aus dem Hüllprotein die eine Seite zum Inneren des Kapsids oder kap sidartigen Gebildes gewandt ist. 33. The method according to any one of the preceding claims, wherein at the formation of a capsid or capsid-like structure from the coat protein, which faces a side toward the interior of the capsid or kap sidartigen structure.
  34. 34. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei zumindest eines der Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) zum primären oder prozessierten RNA-Transkript des Zielgens komplementär ist. 34. The method according to any one of the preceding claims, wherein at least one of the oligoribonucleotides (dsRNA I, dsRNA II, III dsRNA) complementary to the primary or processed RNA transcript of the target gene.
  35. 35. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Zelle eine Vertebratenzelle oder eine menschliche Zelle ist. 35. The method according to any one of the preceding claims, wherein the cell is a vertebrate cell or a human cell.
  36. 36. Verwendung eines ersten (dsRNA I) und eines zweiten Oli goribonukleotids (dsRNA II) in einer zur Hemmung der Expres sion des Zielgens ausreichenden Menge, 36. Use of a first (dsRNA I) and a second Oli goribonukleotids (dsRNA II) in a version for the inhibition of the target gene Expres amount sufficient
    wobei das erste (dsRNA I) und das zweite Oligoribonukleotid (dsRNA II) jeweils eine doppelsträngige aus höchstens 49 auf einanderfolgenden Nukleotidpaaren gebildete Struktur aufwei sen, wherein the first (dsRNA I) and the second oligoribonucleotide (dsRNA II) respectively aufwei sen a double structure formed of a maximum of 49 successive nucleotide pairs,
    wobei ein Strang (S1) oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs (S1) der doppelsträngigen Struktur des ersten Oligo ribonukleotids (dsRNA I) komplementär zu einem ersten Bereich (B1) des Zielgens ist, wherein one strand (S1) or at least a portion of a strand (S1) is the double-stranded structure of the first oligo ribonucleotide (dsRNA I) complementary to a first region (B1) of the target gene,
    und wobei ein Strang (S2) oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs (S2) der doppelsträngigen Struktur des zweiten Oligo ribonukleotids (dsRNA II) komplementär zu einem zweiten Be reich (B2) des Zielgens ist. and wherein one strand (S2) or at least a portion of a strand (S2) of the double-stranded structure of the second oligo ribonucleotide (dsRNA II) complementary to a second Be rich (B2) of the target gene.
  37. 37. Verwendung nach Anspruch 36, wobei zumindest ein Ende (E1) des ersten (dsRNA I) und/oder zweiten Oligoribonukleo tids (dsRNA II) zumindest ein nicht nach Watson & Crick ge paartes Nukleotid aufweist. 37. Use according to claim 36, wherein at least one end (E1) of the first (dsRNA I) and / or second Oligoribonukleo TIDS (dsRNA II) having at least a non-ge by Watson & Crick paired mating nucleotide.
  38. 38. Verwendung nach Anspruch 36 oder 37, wobei das Ende (E1) einen aus 1 bis 4 Nukleotiden gebildeten einzelsträngigen Ab schnitt aufweist. comprises 38. The use of claim 36 or 37, wherein the end (E1) cut from a single-stranded formed from 1 to 4 nucleotides.
  39. 39. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 38, wobei das Ende (E1) ungepaarte Nukleotide aufweist. 39. Use according to any one of claims 36 to 38, wherein the end (E1) unpaired nucleotides.
  40. 40. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 39, wobei das Ende (E1) das 3'-Ende eines Strangs der doppelsträngigen Struktur ist. 40. Use according to one of claims 36 to 39, wherein the end (E1) is the 3 'end of a strand of the double-stranded structure.
  41. 41. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 40, wobei zu mindest ein weiteres, Oligoribonukleotid (dsRNA III) in die Zelle eingeführt wird, wobei ein Strang (S3) oder zumindest ein Abschnitt des Strangs (S3) einer doppelsträngigen Struk tur des weiteren Oligoribonukleotids (dsRNA III) komplementär zu einem dritten Bereich (B3) des Zielgens ist. 41. Use according to any one of claims 36 to 40, wherein at least one further oligoribonucleotide (dsRNA III) in the cell is introduced, wherein a strand (S3) or at least a portion of the strand (S3) of a double structural tur further oligoribonucleotide (dsRNA III) complementary to a third region (B3) of the target gene.
  42. 42. Verwendung nach Anspruch 41, wobei die doppelsträngige Struktur aus mindestens 49 aufeinanderfolgenden Nukleotidpaa ren gebildet ist. 42. Use according to claim 41, wherein the double-stranded structure of at least 49 consecutive Nukleotidpaa ren is formed.
  43. 43. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 42, wobei das erste (dsRNA I) und/oder zweite Oligoribonukleotid (dsRNA II) eine doppelsträngige aus weniger als 25 aufeinanderfolgenden Nukleotidpaaren gebildete Struktur aufweist/en. 43. Use according to any one of claims 36 to 42, wherein the first (dsRNA I) and / or second oligoribonucleotide (dsRNA II) having a double-stranded formed from less than 25 successive nucleotide structure / s.
  44. 44. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 43, wobei der erste (B1), zweite (B2) und dritte Bereich (B3) abschnitts weise überlappen oder aneinandergrenzen. overlap 44. Use according to any one of claims 36 to 43, wherein the first (B1), second (B2) and third region (B3) portion wise or contiguous.
  45. 45. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 44, wobei der erste (B1), zweite und dritte Bereich (B3) voneinander beab standet sind. 45. Use according to any one of claims 36 to 44, wherein the first (B1), second and third region (B3) are different from each beab standet.
  46. 46. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 45, wobei die Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) in micel lare Strukturen, vorzugsweise in Liposomen, eingeschlossen sind. 46. ​​Use according to one of claims 36 to 45, wherein the oligoribonucleotides (dsRNA I, II dsRNA, dsRNA III) are in micel lare structures, preferably in liposomes, included.
  47. 47. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 46, wobei die Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) in virale natürliche Kapside oder in auf chemischem oder enzymatischem Weg hergestellte künstliche Kapside oder davon abgeleitete Strukturen eingeschlossen sind. 47. Use according to one of claims 36 to 46, wherein the oligoribonucleotides are enclosed in viral natural capsid or in prepared chemically or enzymatically produced artificial capsids or structures derived therefrom (dsRNA I, II dsRNA, dsRNA III).
  48. 48. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 47, wobei das Zielgen eine der Sequenzen SQ001 bis SQ140 aufweist. 48. Use according to one of claims 36 to 47, wherein the target gene comprises one of the sequences SQ001 to SQ140.
  49. 49. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 48, wobei das Zielgen aus der folgenden Gruppe ausgewählt ist: Onkogen, Cytokin-Gen, Id-Protein-Gen, Entwicklungsgen, Priongen. 49. Use according to one of claims 36 to 48, wherein the target gene is selected from the following group: oncogene, cytokine gene, Id-protein gene, development gene, prion gene.
  50. 50. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 49, wobei das Zielgen in pathogenen Organismen, vorzugsweise in Plasmodien, exprimiert wird. 50. Use according to any one of claims 36 to 49, wherein the target gene is expressed in pathogenic organisms, preferably in plasmodia.
  51. 51. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 50, wobei das Zielgen Bestandteil eines Virus oder Viroids ist. 51. Use according to one of claims 36 to 50, wherein the target gene is part of a virus or viroid.
  52. 52. Verwendung nach Anspruch 51, wobei das Virus ein hu manpathogenes Virus oder Viroid ist. 52. Use according to claim 51, wherein the virus is a virus or viroid hu manpathogenes.
  53. 53. Verwendung nach Anspruch 52, wobei das Virus oder Viroid ein tier- oder pflanzenpathogenes Virus oder Viroid ist. 53. Use according to claim 52, wherein the virus or viroid is a animal or plant pathogenic virus or viroid.
  54. 54. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 53, wobei un gepaarte Nukleotide durch Nukleosidthiophosphate substituiert sind. 54. Use according to one of claims 36 to 53, wherein un-paired nucleotides are substituted by nucleoside thiophosphates.
  55. 55. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 54, wobei die doppelsträngige Struktur durch eine chemische Verknüpfung der beiden Stränge stabilisiert ist. 55. Use according to one of claims 36 to 54, wherein the double-stranded structure is stabilized by chemical linkage of the two strands.
  56. 56. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 55, wobei die chemische Verknüpfung durch eine kovalente oder ionische Bin dung, eine Wasserstoffbrückenbindung, hydrophobe Wechselwir kungen, vorzugsweise von-der-Waals- oder Stapelungswechsel wirkungen, oder durch Metall-Ionenkoordination gebildet ist. 56. Use according to one of claims 36 to 55, wherein the chemical linkage fluctuations by a covalent or ionic Bin dung, a hydrogen bond, hydrophobic interactions, preferably effects by der Waals or Stapelungswechsel, or is formed by metal-ion coordination.
  57. 57. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 56, wobei die chemische Verknüpfung in der Nähe des einen oder in der Nähe der beiden Enden (E1, E2) gebildet ist. 57. Use according to one of claims 36 to 56, wherein the chemical linkage near the one or near the two ends (E1, E2) is formed.
  58. 58. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 57, wobei die chemische Verknüpfung mittels einer oder mehrerer Verbin dungsgruppen gebildet wird, wobei die Verbindungsgruppen vor zugsweise Poly-(oxyphosphinicooxy-1,3-propandiol)- und/oder Polyethylenglycol-Ketten sind. 58. Use according to one of claims 36 to 57, wherein the chemical linkage is created by one or more groups dung Verbin, wherein the compound groups preferably before poly (oxyphosphinicooxy-1,3-propanediol) - and / or polyethylene glycol chains.
  59. 59. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 58, wobei die chemische Verknüpfung durch Purinanaloga gebildet. 59. Use according to one of claims 36 to 58, wherein the chemical linkage is formed by purine analogs. ist. is.
  60. 60. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 59, wobei die chemische Verknüpfung durch Azabenzoleinheiten gebildet ist. 60. Use according to one of claims 36 to 59, wherein the chemical linkage is formed by azabenzene units.
  61. 61. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 60, wobei die chemische Verknüpfung durch anstelle von Nukleotiden benutzte verzweigte Nukleotidanaloga gebildet ist. 61. Use according to one of claims 36 to 60, wherein the chemical linkage is used instead of nucleotides by branched nucleotide is formed.
  62. 62. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 61, wobei zur Herstellung der chemischen Verknüpfung mindestens eine der folgenden Gruppen benutzt wird: Methylenblau; 62. Use according to one of claims 36 to 61, wherein for generating the chemical linkage at least one of the following groups is used: methylene blue; bifunktionelle Gruppen, vorzugsweise Bis-(2-chlorethyl)-amin, Nacetyl-N'- (p-glyoxyl-benzoyl)-cystamin; bifunctional groups, preferably bis- (2-chloroethyl) amine, N-acetyl-N '(p-glyoxyl-benzoyl) -cystamine; 4-Thiouracil, Psoralen. 4-thiouracil, psoralen.
  63. 63. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 62, wobei die chemische Verknüpfung durch in der Nähe der Enden der doppel strängigen Struktur angebrachte Thiophosphoryl-Gruppen gebil det ist. 63. Use according to one of claims 36 to 62, wherein the chemical linkage is through mounted in the vicinity of the ends of the double-stranded structure thiophosphoryl groups gebil det.
  64. 64. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 63, wobei die chemische Verknüpfung durch in der Nähe der Enden (E1, E2) befindliche Tripelhelix-Bindungen hergestellt ist. 64. Use according to one of claims 36 to 63, wherein the chemical linkage is formed by located in the vicinity of the ends (E1, E2) triple-helix bonds.
  65. 65. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 64, wobei die Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) an minde stens ein von einem Virus stammendes, davon abgeleitetes oder ein synthetisch hergestelltes virales Hüllprotein gebunden, damit assoziiert oder davon umgeben ist. 65. Use according to any one of claims 36 to 64, wherein the oligoribonucleotides (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) derived from a virus, is derived or a synthetic viral envelope protein bound to minde least, associated with, or surrounded by it.
  66. 66. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 65, wobei das Hüllprotein vom Polyomavirus abgeleitet ist. 66. Use according to one of claims 36 to 65, wherein the coat protein is derived from polyomavirus.
  67. 67. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 66, wobei das Hüllprotein das Virus-Protein 1 (VP1) und/oder das Virus- Protein 2 (VP2) des Polyomavirus enthält. 67. Use according to one of claims 36 to 66, wherein the coat protein contains the virus protein 1 (VP1) and / or the virus protein 2 (VP2) of the polyomavirus.
  68. 68. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 67, wobei bei Bildung eines Kapsids oder kapsidartigen Gebildes aus dem Hüllprotein die eine Seite zum Inneren des Kapsids oder kap sidartigen Gebildes gewandt ist. 68. Use according to one of claims 36 to 67, wherein upon formation of a capsid or capsid-like structure from the coat protein, which faces a side toward the interior of the capsid or kap sidartigen structure.
  69. 69. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 68, wobei die Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) zum primä ren oder prozessierten RNA-Transkript des Zielgens komplemen tär sind. 69. Use according to one of claims 36 to 68, wherein the oligoribonucleotides (dsRNA I, dsRNA II, III dsRNA) for ren Primae or processed RNA transcript of the target gene are komplemen Secretary.
  70. 70. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 67, wobei die Zelle eine Vertebratenzelle oder eine menschliche Zelle ist. 70. Use according to one of claims 36 to 67, wherein the cell is a vertebrate cell or a human cell.
  71. 71. Verwendung nach einem der Ansprüche 36 bis 69, wobei die zell vor dem Einführen der Oligoribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II, dsRNA III) mit Interferon-γ behandelt wird. 71. Use according to one of claims 36 to 69, wherein said cell prior to introduction of the oligoribonucleotides (dsRNA I, II dsRNA, dsRNA III) is treated with interferon-γ.
  72. 72. Stoff zur Hemmung der Expression eines Zielgens, umfas send mindestens ein erstes (dsRNA I) und ein zweites Oligori bonukleotid (dsRNA II) in einer zur Hemmung der Expression des Zielgens ausreichenden Menge, 72. substance for inhibiting the expression of a target gene, umfas send at least a first (dsRNA I) and a second Oligori bonukleotid (dsRNA II) in an amount sufficient to inhibit expression of the target gene amount
    wobei das erste (dsRNA I) und das zweite Oligoribonukleotid (dsRNA II) jeweils eine doppelsträngige aus höchstens 49 auf einanderfolgenden Nukleotidpaaren gebildete Struktur aufwei sen, wherein the first (dsRNA I) and the second oligoribonucleotide (dsRNA II) respectively aufwei sen a double structure formed of a maximum of 49 successive nucleotide pairs,
    und wobei ein Strang (S1) oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs (S1) der doppelsträngigen Struktur des ersten Oligo ribonukleotids (dsRNA I) komplementär zu einem ersten Bereich (B1) des Zielgens ist, and wherein one strand (S1) or at least a portion of a strand (S1) is the double-stranded structure of the first oligo ribonucleotide (dsRNA I) complementary to a first region (B1) of the target gene,
    und wobei ein Strang (S2) oder zumindest ein Abschnitt eines Strangs (S2) der doppelsträngigen Struktur des zweiten Oligo ribonukleotids (dsRNA II) komplementär zu einem zweiten Be reich (B2) des Zielgens ist. and wherein one strand (S2) or at least a portion of a strand (S2) of the double-stranded structure of the second oligo ribonucleotide (dsRNA II) complementary to a second Be rich (B2) of the target gene.
  73. 73. Stoff nach Anspruch 72, wobei zumindest ein Ende (E1) des ersten (dsRNA I) und/oder zweiten Oligoribonukleotids (dsRNA II) zumindest ein nicht nach Watson & Crick gepaartes Nukleotid aufweist. 73. Fabric according to claim 72, wherein at least one end (E1) of the first (dsRNA I) and / or second oligoribonucleotide (dsRNA II) having at least one unpaired by Watson & Crick nucleotide.
  74. 74. Stoff nach Anspruch 72 oder 73, wobei das Ende (E1) des Oligoribonukleotids einen aus 1 bis 4 Nukleotiden gebildeten einzelsträngigen Abschnitt aufweist. 74. Fabric according to claim 72 or 73, wherein the end (E1) of the oligoribonucleotide has a formed from 1 to 4 nucleotides single-stranded portion.
  75. 75. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 74, wobei das Ende (E1) des Oligoribonukleotids ungepaarte Nukleotide aufweist. 75. Fabric according to one of claims 72 to 74, wherein the end (E1) of said oligoribonucleotide unpaired nucleotides.
  76. 76. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 75, wobei das Ende (E1) das 3'-Ende eines Strangs oder beider Stränge der dop pelsträngigen Struktur ist. 76. Fabric according to one of claims 72 to 75, wherein the end (E1) the 3 'end of a strand or both strands of the dop-stranded structure.
  77. 77. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 76, wobei das Zielgen aus der folgenden Gruppe ausgewählt ist: Onkogen, Cytokin-Gen, Id-Protein-Gen, Entwicklungsgen, Priongen. 77. Fabric according to one of claims 72 to 76, wherein the target gene is selected from the following group: oncogene, cytokine gene, Id-protein gene, development gene, prion gene.
  78. 78. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 77, wobei das Zielgen in pathogenen Organismen, vorzugsweise in Plasmodien, exprimiert wird. 78. Fabric according to one of claims 72 to 77, wherein the target gene is expressed in pathogenic organisms, preferably in plasmodia.
  79. 79. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 78, wobei das Zielgen Bestandteil eines Virus oder Viroids ist. 79. Fabric according to one of claims 72 to 78, wherein the target gene is part of a virus or viroid.
  80. 80. Stoff nach Anspruch 79, wobei das Virus ein humanpatho genes Virus oder Viroid ist. 80. Fabric according to claim 79, wherein the virus is a virus or viroid humanpatho genes.
  81. 81. Stoff nach Anspruch 79, wobei das Virus oder Viroid ein tier- oder pflanzenpathogenes Virus oder Viroid ist. 81. Fabric according to claim 79, wherein the virus or viroid is a animal or plant pathogenic virus or viroid.
  82. 82. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 81, wobei unge paarte Nukleotide durch Nukleosidthiophosphate substituiert sind. 82. Fabric according to one of claims 72 to 81, wherein unge paired nucleotides are substituted by nucleoside thiophosphates.
  83. 83. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 82, wobei die dop pelsträngige Struktur (E1) des ersten (dsRNA I) und oder zweiten Oligoribonukleotids (dsRNA II) durch eine chemische Verknüpfung der beiden Stränge stabilisiert wird. 83. Fabric according to one of claims 72 to 82, wherein the dop-stranded structure (E1) of the first (dsRNA I) and or second oligoribonucleotide (dsRNA II) is stabilized by chemical linkage of the two strands.
  84. 84. Stoff nach einem der Ansprüche 71 bis 83, wobei die che mische Verknüpfung durch eine kovalente oder ionische Bin dung, eine Wasserstoffbrückenbindung, hydrophobe Wechselwir kungen, vorzugsweise von-der-Waals- oder Stapelungswechsel wirkungen, oder durch Metall-Ionenkoordination gebildet ist. 84. Fabric according to any one of claims 71 to 83, wherein the che mix linkage by a covalent or ionic Bin dung, a hydrogen bond, hydrophobic interactions diseases, preferably effects by der Waals or Stapelungswechsel, or is formed by metal-ion coordination.
  85. 85. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 84, wobei die che mische Verknüpfung in der Nähe des einen oder in der Nähe der beiden Enden (E1, E2) gebildet ist. 85. Fabric according to one of claims 72 to 84, wherein the che mix link in the vicinity of the one or in the vicinity of the two ends (E1, E2) is formed.
  86. 86. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 85, wobei die che mische Verknüpfung mittels einer oder mehrerer Verbindungs gruppen gebildet wird, wobei die Verbindungsgruppen vorzugs weise Poly-(oxyphosphinicooxy-1,3-propandiol)- und/oder Po lyethylenglycol-Ketten sind. 86. Fabric according to one of claims 72 to 85, wherein the che mix linkage is created by one or more compound groups, preferably the connecting groups example wherein poly (oxyphosphinicooxy-1,3-propanediol) - and / or Po lyethylenglycol chains are ,
  87. 87. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 86, wobei die che mische Verknüpfung durch Purinanaloga gebildet wird. 87. Fabric according to one of claims 72 to 86, wherein the che mix linkage is formed by purine analogs.
  88. 88. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 87, wobei die che mische Verknüpfung durch Azabenzoleinheiten gebildet wird. 88. Fabric according to one of claims 72 to 87, wherein the che mix linkage is formed by azabenzene units.
  89. 89. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 88, wobei die che mische Verknüpfung durch anstelle von Nukleotiden benutzte verzweigte Nukleotidanaloga gebildet wird. 89. Fabric according to one of claims 72 to 88, wherein the link used by che mix instead of nucleotides branched nucleotide is formed.
  90. 90. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 89, wobei zur Her stellung der chemischen Verknüpfung mindestens eine der fol genden Gruppen benutzt wird: Methylenblau; 90. Fabric according to one of claims 72 to 89 wherein for the manufacture of the chemical linking position at least one of the fol lowing groups is used: methylene blue; bifunktionelle Gruppen, vorzugsweise Bis-(2-chlorethyl)-amin; bifunctional groups, preferably bis- (2-chloroethyl) -amine; N-acetyl-N'- (p-glyoxyl-benzoyl)-cystamin; N-acetyl-N '(p-glyoxyl-benzoyl) -cystamine; 4-Thiouracil; 4-thiouracil; Psoralen. Psoralen.
  91. 91. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 90, wobei die che mische Verknüpfung durch in der Nähe der Enden (E1, E2) der doppelsträngigen Struktur angebrachte Thiophosphoryl-Gruppen gebildet wird. 91. Fabric according to one of claims 72 to 90 wherein the surface mix by linking in the vicinity of the ends (E1, E2) is formed of the double-stranded structure mounted thiophosphoryl groups.
  92. 92. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 91, wobei die che mische Verknüpfung durch in der Nähe der Enden (E1, E2) be findliche Tripelhelix-Bindungen hergestellt wird. 92. Fabric according to one of claims 72 to 91, wherein the che mix by linking in the vicinity of the ends (E1, E2) is prepared be-sensitive triple-helix bonds.
  93. 93. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 92, wobei die Oli goribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II) an mindestens ein von einem Virus stammendes, davon abgeleitetes oder ein synthe tisch hergestelltes virales Hüllprotein gebunden, damit asso ziiert oder davon umgeben sind. 93. Fabric according to one of claims 72 to 92 wherein the Oli goribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II) linked to at least one derived from a virus, is derived or a synthe table produced viral coat protein, thus asso ciated or surrounded thereof.
  94. 94. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 93, wobei das Hüllprotein vom Polyomavirus abgeleitet ist. 94. Fabric according to one of claims 72 to 93 wherein the coat protein is derived from polyomavirus.
  95. 95. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 94, wobei das Hüllprotein das Virus-Protein 1 (VP1) und/oder das Virus- Protein 2 (VP2) des Polyomavirus enthält. contains 95. Fabric according to one of claims 72 to 94, wherein the coat protein contains Virus Protein 1 (VP1) and / or the virus protein 2 (VP2) of the polyomavirus.
  96. 96. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 95, wobei bei Bil dung eines Kapsids oder kapsidartigen Gebildes aus dem Hüll protein die eine Seite zum Inneren des Kapsids oder kapsidar tigen Gebildes gewandt ist. 96. Fabric according to one of claims 72 to 95, wherein protein in Bil dung of a capsid or capsid-like structure from the envelope which faces a side toward the interior of the capsid or kapsidar term structure.
  97. 97. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 96, wobei das/die Oligoribonukleotid/e (dsRNA I, dsRNA II) zum primären oder prozessierten RNA-Transkript des Zielgens komplementär ist/sind. 97. Fabric according to any one of claims 72 to 96, wherein said / the oligoribonucleotide / e (dsRNA I, dsRNA II) is complementary to the primary or processed RNA transcript of the target gene / are.
  98. 98. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 97, wobei die Oli goribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II) in micellare Strukturen, vorzugsweise in Liposomen, eingeschlossen werden. 98. Fabric according to one of claims 72 to 97, wherein the Oli goribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II) are in micellar structures, preferably in liposomes, included.
  99. 99. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 98, wobei die Oli goribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II) in virale natürliche Kapside oder in auf chemischem oder enzymatischem Weg herge stellte künstliche Kapside oder davon abgeleitete Strukturen eingeschlossen sind. 99. Fabric according to one of claims 72 to 98, wherein the Oli goribonukleotide (dsRNA I, dsRNA II) in natural viral capsids or to chemically or enzymatically produced artificial capsids or Herge presented structures derived therefrom are included.
  100. 100. Stoff nach einem der Ansprüche 72 bis 99, wobei die Se quenz des Zielgens aus der SQ001 bis SQ140 ausgewählt ist. 100. Fabric according to one of claims 72 to 99 wherein the Se sequence of the target gene from the SQ001 to SQ140 is selected.
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Cited By (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10160151A1 (en) * 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Inhibiting expression of target gene, useful e.g. for inhibiting oncogenes, by administering double-stranded RNA complementary to the target and having an overhang
WO2004078941A2 (en) * 2003-03-06 2004-09-16 Oligo Engine, Inc. Modulation of gene expression using dna-rna hybrids
EP1611249A1 (en) * 2003-03-31 2006-01-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving rna
EP1842916A1 (en) * 2006-04-07 2007-10-10 Ludwig-Maximilians-Universität siRNA specific for the urokinase-type plasminogen activator receptor
WO2008109452A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting tie gene expression and uses thereof
US7432250B2 (en) 1996-06-06 2008-10-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving RNA
US7745418B2 (en) 2001-10-12 2010-06-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting viral replication
US7763590B2 (en) 2001-10-12 2010-07-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a mutant gene
US7767802B2 (en) 2001-01-09 2010-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US7829693B2 (en) 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US7846907B2 (en) 2002-01-22 2010-12-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded RNA (dsRNA) and method of use for inhibiting expression of a fusion gene
US7868160B2 (en) 2001-01-09 2011-01-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
US8101742B2 (en) 1999-01-30 2012-01-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US8329890B2 (en) 2002-08-05 2012-12-11 University Of Iowa Research Foundation SiRNA-mediated gene silencing
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
US8481710B2 (en) 2002-08-05 2013-07-09 University Of Iowa Research Foundation RNA interference suppression of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
US8524879B2 (en) 2002-08-05 2013-09-03 University Of Iowa Research Foundation RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
US8604183B2 (en) 2002-11-05 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
US9018179B2 (en) 2001-07-23 2015-04-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals
US9074213B2 (en) 2001-01-09 2015-07-07 Alnylam Pharmacuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US9089525B1 (en) 2011-07-01 2015-07-28 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for reducing glucose levels in a subject
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US9273107B2 (en) 2012-12-27 2016-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Uses and methods for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
US9290557B2 (en) 2012-11-28 2016-03-22 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides
US9925242B2 (en) 2012-12-27 2018-03-27 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for treatment of nonalcoholic steatohepatitis
US9963494B2 (en) 2012-11-28 2018-05-08 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for reducing glucose levels in a subject
US10093735B2 (en) 2014-01-24 2018-10-09 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Beta-klotho binding proteins

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4950652A (en) * 1987-03-23 1990-08-21 Hem Research, Inc. dsRNAs for combination therapy in the treatment of viral diseases
DE19956568A1 (en) * 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Method and medicament for the inhibition of expression of a given gene
WO2000063364A2 (en) * 1999-04-21 2000-10-26 American Home Products Corporation Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4950652A (en) * 1987-03-23 1990-08-21 Hem Research, Inc. dsRNAs for combination therapy in the treatment of viral diseases
DE19956568A1 (en) * 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Method and medicament for the inhibition of expression of a given gene
WO2000063364A2 (en) * 1999-04-21 2000-10-26 American Home Products Corporation Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences

Cited By (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US7695902B2 (en) 1996-06-06 2010-04-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving RNA
US7629321B2 (en) 1996-06-06 2009-12-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving RNA
US7432249B2 (en) 1996-06-06 2008-10-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving RNA
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US7432250B2 (en) 1996-06-06 2008-10-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving RNA
US8168776B2 (en) 1999-01-30 2012-05-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method for making a 21 nucleotide double stranded RNA chemically linked at one end
US8114851B2 (en) 1999-01-30 2012-02-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US8729037B2 (en) 1999-01-30 2014-05-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US9133454B2 (en) 1999-01-30 2015-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US8114981B2 (en) 1999-01-30 2012-02-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US9902955B2 (en) 1999-01-30 2018-02-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US8202980B2 (en) 1999-01-30 2012-06-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US8183362B2 (en) 1999-01-30 2012-05-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US8101584B2 (en) 1999-01-30 2012-01-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US8101742B2 (en) 1999-01-30 2012-01-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method and medicament for inhibiting the expression of a given gene
US7829693B2 (en) 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10160151A1 (en) * 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Inhibiting expression of target gene, useful e.g. for inhibiting oncogenes, by administering double-stranded RNA complementary to the target and having an overhang
US9074213B2 (en) 2001-01-09 2015-07-07 Alnylam Pharmacuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US7868160B2 (en) 2001-01-09 2011-01-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US9587240B2 (en) 2001-01-09 2017-03-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US7767802B2 (en) 2001-01-09 2010-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US9018179B2 (en) 2001-07-23 2015-04-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals
US7745418B2 (en) 2001-10-12 2010-06-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting viral replication
US7763590B2 (en) 2001-10-12 2010-07-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a mutant gene
US7846907B2 (en) 2002-01-22 2010-12-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded RNA (dsRNA) and method of use for inhibiting expression of a fusion gene
US8481710B2 (en) 2002-08-05 2013-07-09 University Of Iowa Research Foundation RNA interference suppression of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
US8329890B2 (en) 2002-08-05 2012-12-11 University Of Iowa Research Foundation SiRNA-mediated gene silencing
US9487779B2 (en) 2002-08-05 2016-11-08 University Of Iowa Research Foundation siRNA-mediated gene silencing
US10072264B2 (en) 2002-08-05 2018-09-11 University Of Iowa Research Foundation RNA interference suppression of neurodegenerative diseases and methods of use
US8524879B2 (en) 2002-08-05 2013-09-03 University Of Iowa Research Foundation RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
US9260716B2 (en) 2002-08-05 2016-02-16 University Of Iowa Research Foundation RNA interference suppression of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
US8779116B2 (en) 2002-08-05 2014-07-15 University Of Iowa Research Foundation SiRNA-mediated gene silencing
US8604183B2 (en) 2002-11-05 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
WO2004078941A3 (en) * 2003-03-06 2005-03-24 Todd Hauser Modulation of gene expression using dna-rna hybrids
WO2004078941A2 (en) * 2003-03-06 2004-09-16 Oligo Engine, Inc. Modulation of gene expression using dna-rna hybrids
EP1611249A1 (en) * 2003-03-31 2006-01-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving rna
EP1611249A4 (en) * 2003-03-31 2006-06-28 Isis Pharmaceuticals Inc Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving rna
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
WO2007116055A1 (en) * 2006-04-07 2007-10-18 Ludwigs-Maximilians-Universität München siRNA SPECIFIC FOR THE UROKINASE-TYPE PLASMINOGEN ACTIVATOR RECEPTOR
EP1842916A1 (en) * 2006-04-07 2007-10-10 Ludwig-Maximilians-Universität siRNA specific for the urokinase-type plasminogen activator receptor
WO2008109452A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting tie gene expression and uses thereof
US9580483B2 (en) 2011-07-01 2017-02-28 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for treatment of diabetes
US9670260B2 (en) 2011-07-01 2017-06-06 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising fusion variants of FGF19 polypeptides
US9751924B2 (en) 2011-07-01 2017-09-05 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising fusion variants of FGF19 polypeptides for reducing glucose levels in a subject
US9089525B1 (en) 2011-07-01 2015-07-28 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for reducing glucose levels in a subject
US9290557B2 (en) 2012-11-28 2016-03-22 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides
US9963494B2 (en) 2012-11-28 2018-05-08 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for reducing glucose levels in a subject
US9273107B2 (en) 2012-12-27 2016-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Uses and methods for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
US9889178B2 (en) 2012-12-27 2018-02-13 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for modulating bile acid homeostasis in a subject having nonalcoholic steatohepatitis
US9895416B2 (en) 2012-12-27 2018-02-20 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for modulating bile acid homeostasis in a subject having cholestasis
US9878008B2 (en) 2012-12-27 2018-01-30 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for modulating bile acid homeostasis in a subject having bile acid diarrhea or bile acid malabsorption
US9925242B2 (en) 2012-12-27 2018-03-27 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for treatment of nonalcoholic steatohepatitis
US9878009B2 (en) 2012-12-27 2018-01-30 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for modulating bile acid homeostasis in a subject having error of bile acid synthesis
US9974833B2 (en) 2012-12-27 2018-05-22 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for modulating bile acid homeostasis in a subject having pregnancy intrahepatic cholestasis
US9889177B2 (en) 2012-12-27 2018-02-13 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides for modulating bile acid homeostasis in a subject having primary sclerosing cholangitis
US10093735B2 (en) 2014-01-24 2018-10-09 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Beta-klotho binding proteins

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