DD299319A5 - Intronsequenzanalyseverfahren zum nachweis von benachbarten und entfernten genortallelen als haplotypen - Google Patents
Intronsequenzanalyseverfahren zum nachweis von benachbarten und entfernten genortallelen als haplotypen Download PDFInfo
- Publication number
- DD299319A5 DD299319A5 DD90343632A DD34363290A DD299319A5 DD 299319 A5 DD299319 A5 DD 299319A5 DD 90343632 A DD90343632 A DD 90343632A DD 34363290 A DD34363290 A DD 34363290A DD 299319 A5 DD299319 A5 DD 299319A5
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- sequence
- locus
- dna sequence
- hla
- amplified dna
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
- C12Q1/683—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism involving restriction enzymes, e.g. restriction fragment length polymorphism [RFLP]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/172—Haplotypes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measurement And Recording Of Electrical Phenomena And Electrical Characteristics Of The Living Body (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zum Nachweis von mindestens einem Allel eines Genorts bereit und kann zur direkten Bestimmung des Haplotyps benutzt werden. Das Verfahren umfasst die Amplifizierung genomischer DNA mit einem Primerpaar, welches eine Introsequenz überspannt und eine DNA-Sequenz definiert, die sich in genetischer Kopplung mit einem nachzuweisenden Gen befindet. Die Primer-definierte DNA-Sequenz enthält eine genügend große Anzahl von Intronsequenznukleotiden, um das Allel zu charakterisieren. Die genomische DNA wird amplifiziert, um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen, welche charakteristisch ist für das Allel. Die amplifizierte DNA Sequenz wird analysiert, um die Anwesenheit einer genetischen Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz nachzuweisen, wie z.B. eine Änderung in der Sequenzlänge, das Hinzukommen oder den Verlust einer Restriktionsstelle oder die Substitution eines Nukleotids. Die Variation ist charakteristisch für das nachzuweisende Allel und kann dazu verwendet werden, um entfernte Allele nachzuweisen. Kits, welche ein oder mehrere der in dem Verfahren verwendeten Reagenzien enthalten, sind ebenfalls beschrieben.{Intron; Sequenzanalyse; DNA; Allel; Nukleotid; genetische Variation; Restriktionsstelle; Primerpaar}
Description
genetischer Information gegeben, insbesondere bei Menschen. AIIeIe Varianten von Genorten sind mit bösartigen und nichtbösartigen, durch ein oder mehrere Gene verursachte Krankheiten korreliert worden. Durch ein Gen verursachte Krankheiten,bei denen das defekte Gen identifiziert worden ist, schließen beispielsweise die DuChennische Muskeldystrophie,
durch ein Gen verursacht werden, und bei denen das Gen nicht identifiziert ist, schließen die geistige Unterentwicklung beimfragilen X-Chromosom („fragile X mental retardation") und Chorea Huntington ein.
vorzeitige Coronararteriosklerose, sind ebenfalls identifiziert worden.
besteht, ist der Nachweis von Allelvarianten eines Genortes beim Menschen für Organtransplantationen, in der Gerichtsmedizin,bei strittiger Vaterschaft und für eine Anzahl anderer Zwecke verwendet worden. Bei kommerziell wichtigen Pflanzen und Tierensind Gene nicht nur analysiert, sondern auch mit gentechnischen Methoden verändert und In andere Organismen eingeführtworden.
von polymorphen Mustern von Restriktionsfragmentlängen (RFLP), der Verwendung von Oligonukleotid-Sonden und
(MHC) ist ausführlich studiert worden. Die Probleme, denen man begegnet beim Versuch den HLA-Typus eines Individuums zubestimmen, sind exemplarisch für Probleme, denen man bei der Charakterisierung anderer Genorte begegnet.
einnehmen. Dieser Komplex, bezeichnet als humaner Leukozytenantigenkomplex (HLA), umfaßt mindestens 50 Genorte. Zum
sind polymorph. Das bedeutet, die Sequenz des DRa-Anttgenpolypeptids ist invariant.
bei der Behandlung mit Blutbestandteilen, bei anthropologischen Studien und in Korrelationsuntersuchungen bezüglich der
passenden HLA-Typus auszuwählen, sind analytische Methoden gesucht worden, um die AIIeIe der Genorte, die mit dem
und Oligonukleotidsonden zur Bestimmung von Klasse Il Genort-Allelen verwendet worden. AIIeIe von Genorten der Klasse Iund Genorten der Klasse Il DR und DQ werden typischerweise durch serologische Methoden bestimmt. Die AIIeIe des Klasse-Il-
erhältlich sind und ständig ergänzt werden müssen. Außerdem basiert die serologische Bestimmung auf der Reaktion der
kürzliche Verwendung der Amplifizierung durch die Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Die Bestimmung mit Oligonukteotidenauf der Basis von PCR ist bei Klasse Il Genorten durchgeführt worden. Das .primed lymphocyte typing" erfordert 5 bis 10 Tagebis zum Abschluß und beinhaltet die Verwendung einer Zellkultur mit all ihren Schwierigkeiten und inhärenter Variabilität.
komplex. Außerdem erfordert die Technik die Vorwendung markierter Proben. Die am häufigsten verwendete Markierung, 32P, hat wohlbekannte Nachteile, die mit der Verwendung von Radionukliden verknüpft sind. Eine schnelle verläßliche Methode zur Analyse eines Genorts ist äußerst wünschenswert.
Das US-Patent Nr.4683195 beschreibt ein Verfahren zur Amplifizierung, zum Nachweis und/oder zum Klonieren von Nukleinsäuresequenzen. Die Methode umfaßt die Behandlung getrennter komplementärer DNA-Stränge mit zwei Oligonukleotid-Primem, die Verlängerung der Primer, um die komplementären Verlängerungsprodukte zu bilden, die als Matrizen zur Synthese der gewünschten Nukleinsäuresequenz dienen, und den Nachweis der amplifizierten Sequenz. Diese Methode wird üblicherweise als Polymerase-Kettenreaktions-Sequenzamplifizierungsmethode oder PCR bezeichnet. Variationen der Methode sind im US-Patent Nr.4683194 beschrieben. Die Polymerasen-Kettenreaktions-Sequenzamplifizierungsmethode ist ebenfalls beschrieben bei Saiki et al., Science, Band 230, Seite 1350 bis 1354 (1985) und Scharf et al., Science, Band 324, Seite 163 bis 166 (1986).
US-Patent Nr. 4 582788 beschreibt eine Methode zur HLA-Bestimmung, die auf dem Restriktionslängenpolymorphismus (RFLP) beruht, und die dabei verwendeten cDNA-Sonden. Die Methode wird so ausgeführt, daß man die HLA-DNA eines Individuums mit einer Restriktions-Endonuklease in Fragmente spaltet, die ein polymorphes Fragmentmuster erzeugen, mit dem Fragmentgemisch das sogenannte genomische Blotting-Verfahren durchführt, wobei man eine markierte cDNA-Sonde verwendet, die komplementär zu einer HLA-DNA-Sequenz ist, die am Polymorphismus beteiligt ist, und das aus dem genomischen Blotting-Verfahren resultierende Muster mit einem Standard vergleicht. Genort-spezifische Sonden für Genorte der Klasse Il (DQ) werden ebenfalls beschrieben. Kogan et al., New Engl. J. Med., Band 317, Seite 985 bis 990 (1987) beschreibt ein verbessertesPCR-Sequenzamplifizierungsverfahren, das eine hitzestabile Polymerase (Taq Polymerase) und Amplifikation bei hoher Temperatur verwendet. Die in dem Verfahren verwendeten stringenten Bedingungen ergeben genügend hohe Replikationstreue, um die Analyse der amplifizierten DNA zu erlauben, indem die Länne der DNA-Sequenz durch visuelle Beobachtung eines mit Ethidiumbromid angefärbten Gels bestimmt wird. Das Verfahren wurde angewandt, um mit Hämophilie A assoziierte DNA zu analysieren, bei der zusätzliche hintereinander angeordnete Wiederholungen einer DNA-Sequenz mit der Krankheit assoziiert sind und die amplifizierten Sequenzen wesentlich langer sind als die Sequenzen, die nicht mit der Krankheit assoziiert sind.
Simons und Erlich, Seiten 952 bis 958 in: Immunology of HLA, Band 1: Springer-Verlag, New York (1989), fassen wechselseitige RFLP-Sequenzbeziehungen an den DPA- und DPB-Genorten zuammen. RFLP Fragmentmuster, die im Southern Blotting-Verfahren mit markierten Sonden analysiert wurden, lieferten unterschiedliche Muster für DPw1-5-Allele und die korrespondierenden DPBI-Allelsoquenzon, charakterisierten zwei subtypische Muster für DPw2 und DPw4 und identifizierten neue DPw-AIIeIe.
Simons et al., Seite 959-1023 in: Immunology of HLA, Band 1: Springer-Verlag, New York (1989) faßten die Restriktionslängenpolymorphismen von HLA-Sequenzen der Klasse-Il-Genorte zusammen, wie sie beim 10th International Workshop Southern Blot Analysis bestimmt wurden. Es wurde gezeigt, daß die Southern Blot Analyse zur Bestimmung der Hauptklassen von HLA-Genorten geeignet ist.
Eine Reihe von drei Artikeln (Rommens et al., Science Band 245, Seiten 1059-1065 [1989], Riordan et al., Science Band 245, Seiten 1066-1072 [1989) und Kerem et al., Science Band 245, Seiten 1073-1079 (1989]) berichten über eine neue Methode zur Genanalyse, genannt „jumping", die benutzt wurde, um den Ort des CF-Gens, die Sequenz des CF-Gens und den Defekt in dem Gen bzw. seinen Prozentanteil in der von der Krankheit betroffenen Bevölkerung zu identifizieren.
Di Lelia et al., The Lancet i: Seiten 497-499 (1988) beschreibt ein Screening-Verfahren zum Nachweis der zwei Hauptallele, die verantwortlich sind für Phenylketonurie bei Kaukasiern nordeuropäischer Abstammung. Die Mutationen, lokalisiert etwa im Zentrum von Exon 12 und an der Verbindungsstelle von Exon 12 mit der intervenierenden Sequenz 12, werden nachgewiesen durch PCR-Amplifizierung einer 245bp langen Region von Exon 12 und flankierender intervenierender Sequenzen. Die amplif izierte Sequenz umfaßt beide Mutationen und wird analysiert unter Verwendung von Sonden, die spezifisch sind für jedes der AIIeIe (ohne vorherige elektrophoretisch^ Trennung).
Dicker et al., BioTechniques, Band 7, Seiten 830-837 (1989) und Mardis et al., BioTechniques, Band 7, Seiten 840-850 (1989) berichten über automatisierte Techniken zur DNA-Sequenzierung, insbesondere von Sequenzen, die mit dem PCR-Verfahren erzeugt wurden.
Die vorliegende Erfindung schafft ein Verfahren zum Nachweis von mindestens einem AIIeI eines Genortes und kann zur direkten Bestimmung des Haplotyps verwendet werden. Das Verfahren umfaßt die Amplifizierung genomischer DNA mit einem Primerpaar, das eine Intronsequenz überspannt und eine DNA-Sequenz, diu sich in genetischer Kopplung mit einem nachzuweisenden AIIeI befindet, definiert. Die Primer-definierte DNA-Sequenz enthält eine genügend große Anzahl von Nukleotiden der Intronsequenz, um das AIIeI zu charakterisieren. Die genomische DNA wird amplifiziert, um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen, die charakteristisch ist für das AIIeI. Die amplifizierte DNA-Sequenz wird analysiert, um die Anwesenheit einer genetischen Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz nachzuweisen, wie z. B. eine Änderung der Länge der Sequenz, das Hinzukommen oder den Verlust einer Restriktionsstelle oder die Substitution eines Nukleotids. Die Variation ist charakteristisch für das nachzuweisende AIIeI.
Die vorliegende Erfindung basiert auf der Erkenntnis, daß Inkonsequenzen genetische Variationen enthalten, die charakteristisch sind für benachbarte und entfernte AIIeIe auf demselben Chromosom. Insbesondere können DNA-Sequenzen, die eine genügend große Anzahl von Nukleotiden der Intronsequenz enthalten, zur direkten Bestimmung des Haplotyps benutzt werden. Das Verfahren kann zum Nachweis von Allelen an Genorten bei jedem eukaryotischem Organismus verwendet werden. Von besonderem Interesse sind Genorte, die mit bösartigen und nicht bösartigen Krankheiten, die von einem oder mehreren Genen verändert werden, assoziiert sind, und die Identifizierung von individuellen Organismen oder Arten bei Pflanzen und Tieren. In einer bevorzugten Ausführungsform wird das Verfahren dazu benutzt, den HLA-Alleltypus und Haplotyp zu bestimmen. Ausrüstungen, die ein oder mehrere der in dem Verfahren verwendeten Reagenzien umfassen, werden ebenfalls beschrieben. Die vorliegende Erfindung schafft ein Verfahren zum Nachweis von Allelen und Haplotypen durch die Analyse von Intronsequenzvariationen. Die vorliegende Erfindung basiert auf der Entdeckung, daß die Amplifikation von Intronsequenzen, die in einem Kopplungsungleichgewicht mit benachbarten und entfernten Genorten stehen, dazu benutzt werden kann, um Adele dieser Genorte nachzuweisen. Das vorliegende Verfahren liefert Haplotypen als direktes Ergebnis der
nützlich bei Menschen, aber es ist generell für alle Eukaryoten anwendbar und wird vorzugsweise dazu benutzt, Pflanzen- und
konservierten Regionen in den Introns oder Exons, die an die zu amplifizierende Intronsequenz angrenzen, lokalisiert. Die
charakterisieren. Die amplifizierte DNA-Sequenz wird analysiert, um die Anwesenheit einer genetischen Variation nachzuweisen,
wie z. B. eine Änderung in der Länge der Sequenz, das Hinzukommen oder den Verlust einer Restriktionsstelle oder die
von Homozygoten (zwei Kopien eines AIIeIs) unterschieden werden müssen.
und Reagenzien dieser Erfindung sind zwei Typen von Intronvariationen gefunden worden, die mit Genorten assoziiert sind. Dererste ist die Allel-assoziierte Intronvariation. Das bedeutet, das Muster der Intronvariation ist assoziiert mit dem Alleltyp an einementfernten Genort. Der zweite Variationstyp ist assoziiert mit entfernten Allelen (Haplotypen). Das heißt, die Variation istanwesend in individuellen Organismen mit demselben Genotyp am primären Genort. Unterschiede können auftreten zwischen
ungebräuchlich.
vorhandenen AIIeI variieren. Das bedeutet, die Introns enthalten genetische Variationen (z. B. Längenpolymorphismen aufgrund
von Insertionen und/oder Deletionen und Änderungen der Anzahl oder Orte von Restriktionsstellen), die mit dem besonderen
verwendeten Reagenzien enthält.
ist; d. h. eine alternative Form des Gens.
vererbt werden. Regionen auf verschiedenen Chromosomen weisen keine Kopplung auf und werden in 50% der Fälle zusammenvererbt. Benachbarte Gene, die immer gemeinsam vererbt werden, weisen 100% Kopplung auf.
getrennten Frequenzen des Auftretens jedes AIIeIs zu erwarten wäre. Von Allelen, die zusammen mit Frequenzen auftreten, dieaufgrund ihrer getrennten Frequenzen zu erwarten sind, sagt man, sie seien im „Kopplungsgleichgewicht".
von Rekombinationsstellen begrenzt wird, so daß die Genorte innerhalb einer haplotypischen Region üblicherweise als Einheitvererbt werden. Jedoch können gelegentlich genetische Umlagerungen innerhalb eines Haplotyps auftreten. Somit ist der
mit untranslatierten Regionen in 5'- und 3'-Position, die mit einem Genort assoziiert sind. Zusätzlich wird der Ausdruck benutzt in
assoziiert sind und umgangssprachlich als „Müll" bezeichnet werden. Während sich auf diesem Fachgebiet der Ausdruck„Intron" üblicherweise nur auf untranslatierte Sequenzen zwischen Exons bezieht, wurde diese erweiterte Definition aufgrunddes Fehlens eines auf diesem Gebiet allgemein anerkannten Ausdrucks, der alle Nicht-Exon-Sequenzen umfaßt, erforderlich.
ist. Der Ausdruck umfaßt nicht mit dem Genort assoziierte nicht-codierende Sequenzen, die sich stromabwärts undstromaufwärts befinden.
und deren Komplementärsequenz entsprechen.
dem 5'-Ende der zu am,)lifizierenden DNA-Sequenz hybridisiert und einen 3'-stromabwärts-Primer, der mit dem Komplementdes 3'-Endes der zu amplifizierenden Sequenz hybridisiert, umfaßt.
außerhalb eines Exons in einem konservierten Teil des Introns befinden, wobei die Primer eine DNA-Sequenz amplifizieren, dieein Exon oder einen Teil davon und nicht mehr als eine kleine, über das Exon hinausreichende Region der oder des benachbarten
überspannenden Primer können sich in konservierten Regionen des Introns oder in benachbarten stromaufwärts und/oderstromabwärts liegenden Exon-Sequenzen befinden.
Der Ausdruck „Gonort", wie hier verwendet, bezeichnet die Region genomischer DNA, die das Gen enthält, welches für ein Protein codiert, einschließlich aller stromaufwärts oder stromabwärts transkribierten nicht-codierenden Regionen und assoziierter regulatorischer Regionen. Deshalb ist ein HLA Genort diejenige Region genomischer DNA, welche das Gen einschließt, das für ein HLA Genprodukt codiert.
Der Ausdruck „benachbarter Genort", wie hier verwendet, bezieht sich entweder auf (1) den Genort, an dem sich eine DNA-Sequenz befindet, oder (2) den nächsten stromaufwärts oder stromabwärts gelegenen Genort für Intron-DNA-Sequenzen, die nicht mit einem Genort assoziiert sind.
Der Ausdruck „entfernter Genort", wie hier verwendet, bezieht sich auf entweder (1) einen Genort, der sich stromaufwärts pder stromabwärts von dem Genort befindet, an dem eine DNA-Sequenz lokalisiert ist oder (2) für Inkonsequenzen, die nicht mit einem Genort assoziiert sind, einen Genort, der sich stromaufwärts oder stromabwärts von demjenigen Genort befindet, der sich am nächsten stromaufwärts oder stromabwärts zur Inkonsequenz befindet.
Der Ausdruck „Genort-spezifischer Primer", wie hier verwendet, bezeichnet einen Primer, der spezifisch mit einem Teil des angegebenen Genorts oder seinem komplementären Strang hybridisiert, mindestens für ein AIIeI des Genorts, und unter den bei der Amplifizierungsmethode verwendeten Bedingungen nicht mit anderen DNA-Sequenzen hybridisiert. Die Ausdrücke „Endonuklease" und „Restriktionsendonuklease", wie hier verwendet, beziehen sich auf ein Enzym, das doppelsträngige DNA mit einer bestimmten Nukleotldsequenz schneidet. Die Spezifitäten zahlreicher Endonukleasen sind wohlbekannt und können in einer Anzahl von Publikationen gefunden werden, z. B. Molecular Cloning: A Laboratory Manual von Maniatis et al., Cold Spring Harbor Laboratory 1982.
Der Ausdruck „Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus" (oder RFLP), wie hier verwenden bezieht sich auf Unterschiede in den DNA Nukleotidsequenzen, die Fragmente verschiedener Länge erzeugen, wenn sie von einer Restriktionsendonuklease gespalten werden.
Der Ausdruck „Primer-definierte Längenpolymorphismen" (oder PDLP), wie hier verwendet, bezieht sich auf Unterschiede in der Länge amplifizierter DNA-Sequenzen, die zurückzuführen sind auf Insertion oder Deletion in der Intronregion des in der amplifizierten DNA-Sequenz enthaltenen Genorts.
Der Ausdruck „HLA-DNA", wie hier verwendet, bezeichnet DNA, welche die Gene, die für HLA-Antigene codieren, enthält. HLA-DNA wird in allen Zellkern-enthaltenden menschlichen Zellen gefunden. Primer:
Das erfindungsgemäße Verfahren beruht auf der Amplifikatlon ausgewählter Intronregionen genomischer DNA. Die Methodologie wird erleichtert durch die Verwendung von Primern, die selektiv DNA amplif izieren, die mit einem oder mehreren Allelen eines interessierenden Genorts assoziiert sind und nicht mit anderen Genorten.
Ein Genort-spezifisches Primerpaar enthält einen δ'-strumaufwärts-Primer, welcher das 5'-Ende der amplifizierten Sequenz durch Hybridisierung mit dem 5'-Ende der zu amplifizierenden Zielsequenz definiert, und einen 3'-stromabwärts-Primer, der dar· 3'-Ende der amplifizierten Sequenz durch Hybridisierung mit dem Komplement des 3'-Endes der zu amplifizierenden DNA-Sequenz definiert. Die Primer in dem Primerpaar hybridisieren unter den erfindungsgemäßen Bedingungen nicht mit DNA von anderen Genorten.
Jeder Primer des Genort-spezifischen Primerpaars hybridisiert mit mindestens einem AIIeI des zu amplifizierenden Genorts oder seinem Komplement. Ein Primerpaar kann für jedes AIIeI eines ausgewählten Genorts hergestellt werden, wobei das Primerpaar nur DNA des ausgewählten Genorts amplifiziert. Auf diese Weise können Kombinationen von Primerpaaren dazu verwendet werden, um genomische DNA eines besonderen Genorts zu amplifizieren, unabhängig davon, welches AIIeI in einer Probe vorhanden ist. Vorzugsweise amplifiziert das Primerpaar DNA von mindestens zwei, noch bevorzugter mehr als zwei Allelen eines Genorts. In der am meisten bevorzugten Ausführungsform sind die Primerstellen konserviert und amplifizieren so alle Haplotypen. Jedoch werden Primerpaare oder Kombinationen davon, die sich spezifisch an die AIIeIe, die am häufigsten in einer speziellen Populationsgruppe vorkommen, binden, ebenfalls in Betracht gezogen.
Oie amplifizierte DNA-Sequenz, die durch die Primer definiert wird, enthält eine genügende Anzahl von Nukleotiden der Inkonsequenz, um zwischen mindestens zwei Allelen eines benachbarten Genorts zu unterscheiden und, vorzugsweise, um das AIIeI des Genorts zu identifizieren, welches in der Probe vorhanden ist. Für einige Zwecke kann die Sequenz auch so ausgewählt werden, daß sie genügend genetische Variationen enthält, um zwischen individuellen Organismen mit demselben AIIeI oder zwischen Haplotypen zu unterscheiden
Länge der Sequenz:
Die Länge der amplifizierten Sequenz, die erforderlich ist, um genügend genetische Variabilität zu enthalten, um damit die Unterscheidung zwischen allen Allelen eines Genorts zu ermöglichen, steht in direktem Verhältnis zum Ausmaß des Polymorphismus des Genorts (der Anzahl der AIIeIe). Das bedeutet, wenn die Anzahl der AIIeIe des untersuchten Genorts wächst, wächst auch die Größe einer amplifizierten Sequenz, die genügend genetische Variationen enthält, um jedes AIIeI zu identifizieren. Bei einer speziellen Pooulationsgruppe können ein oder mehrere der identifizierten AIIeIe für irgendeinen gegebenen Genort bei dieser Gruppe fehlen und brauchen bei der Bestimmung einer Sequenz, welche genügend Variabilität für diese Gruppe enthält, nicht berücksichtigt zu werden. Bequemerweise werden die Primerpaare jedoch so ausgewählt, daß sie eine DNA-Sequenz amplifizieren, welche ausreicht, um zwischen allen identifizierten Allelen des untersuchten Genorts zu unterscheiden. Dieselben Überlegungen treffen zu, wenn ein Haplotyp bestimmt wird.
Beispielsweise ist der am geringsten polymorphe HLA-Genort DPA, welcher gegenwärtig vier identifizierte AIIeIe aufweist. Für diesen Genort enthält ein Primerpaar, welches nur einen Teil des variablen Exons, das für die Allervariation codiert, amplifiziert, genügend genetische Variabilität, um zwischen den Allelen zu unterscheiden, wenn die Primerstellen sich in einer geeigneten Region des variablen Exons befinden. Exonlimitierte Primer können dazu verwendet werden, um eine amplifizierte Sequenz zu Produkten zu erzeugen, die nur ungefähr 200 Nukleotide (nt) enthält. Wächst jedoch die Anzahl der AIIeIe des Genorts, so muß die Anzahl der genetischen Variationen in der Sequenz zunehmen, um alle AIIeIe zu unterscheiden. Die Addition von invarianten Exon-Sequenzen liefert keine zusätzliche genetische Variation. Wenn ungefähr acht oder mehr AIIeIe zu unterscheiden sind, wie beispielsweise für den DQA1 Genort und noch variablere Genorte, sollten sich die amplifizierten Sequenzen auf mindestens ein Intron im Genort erstrecken, vorzugsweise auf ein Intron, welches benachbart zu dem variablen Exon ist.
Darüber hinaus werden, wenn AIIeIo des Genorts existieren, die sich nur durch ein einzelnes Basenpaar im variablen Exon unterscheiden, Intronsequenzen in den amplifizierten Sequenzen eingeschlossen, um genügend Variabilität zur Unterscheidung der Adele zu eryeben. Beispielsweise differieren beim DQA1 Genort (mit gegenwärtig acht identifizierten Allelen) und beim DPB Genort (mit 24 Allelen) die AIIeIe DQA1.1/1.2 (jetzt als DQA1/0101/0102 bezeichnet) und DPB2.1/4.2 (jetzt als DPB0201/0402 bezeichnet) in einem einzigen Basenpaar. Um diese AIIeIe zu unterscheiden sind amplifizierte Sequenzen erforderlich, die eine Inironsequenzregion einschließen. Ungefähr 300 bis 500 Nukleotide sind ausreichend, abhängig vom Ort der Sequenz. Das bedeutet, 300 bis 500 Nukleotide, die hauptsächlich Intronsequenznukleotide umfassen, die sich genüpend nahe am variablen Exon befinden, sind ausreichend.
Bei Genorten mit noch umfangreicheren Polymorphismen (wie z.B. DQB mit gegenwärtig 14 identifizierten Allelen, DPB mit gegenwärtig 24 identifizierten Allelen, DRB mit 34 gegenwärtig identifizierten Allelen und jedem Genort der Klasse I) müssen die amplifizierten Sequenzen größer sein, um genügend Variabilität zu liefern, um zwischen allen Allelen zu unterscheiden. Eine amplifizierte Sequenz, die mindestens ungefähr 0,5 Kilobasen (Kb), vorzugsweise mindestens ungefähr 1 Kb, am bevorzugtesten mindestens ungefähr 1,5Kb enthält, liefert im allgemeinen eine genügend große Anzahl vco Restriktionsstellen für Genorte mit ausgedehnten Polymorphismen. Die amplifizierten Sequenzen, die zur Charakterisierung von in hohem Grad hochpolymorphen Genorten verwendet werden, haben im allgemeinen eine Länge von ungefähr 800 bis ungefähr 2 000 Nukleotiden (nt), vorzugsweise ungefähr 1000 bis ungefähr 1800 Nukleotiden.
Wenn Informationen über einen Haplotypus, betreffend entfernte AIIeIe, gewünscht wird, haben die Sequenzen im allgemeinen eine Länge von ungefähr 1000 bis ungefähr 2000 Nukleotiden. Längere Sequenzen sind erforderlich, wenn die amplifizierte Sequenz hochko- servierte Regionen umfaßt, wie z. B. Exons oder hochkonservierte Intronregionen, beispielsweise Promotoren, Operatoren una andere regulatorische DNA-Regionen. Längere amplifizierte Sequenzen (enthaltend mehr Intronnukleotidsequenzen) sind auch erforderlich, wenn die Distanz zwischen den amplifizierten Sequenzen und dem nachzuweisenden AIIeI wächst.
Hochkonservierte Regionen, die in der amplifizierten DNA-Sequenz enthalten sind, wie z. B. Exon-Sequenzon oder hochkonservierte Intronsequenzen (z. B. Promotoren, Enhancer oder andere regulatorische Regionen) können wenig oder keine genetischen Variationen liefern. Deshalb tragen solche Regionen nicht oder nur minimal zu den genetischen Variationen bei, die in der amplifizierten DNA-Sequenz vorhanden sind. Wenn solche Regionen in der amplifizierten DNA-Sequenz enthalten sind, können im Vergleich zu einer amplifizierten DNA-Sequenz derselben Länge, die nur Intronsequenzen enthält, zusätzliche Nukleotide erforderlich sein, um genügend genetische Variationen zu umfassen, um damit die AIIeIe zu unterscheiden. Ort der amplifizierten DNA-Sequenz
Die amplifizierte DNA-Sequenz befindet sich in einer Region genomischer DNA, welche genetische Variationen enthält, die sich in genetischer Kopplung mit dem nachzuweisenden AIIeI befindet. Vorzugsweise befindet sich die Sequenz in einer Intronsequenz, die benachbart zu einem Exon des Genorts ist. Noch bevorzugter enthält die amplifizierte Sequenz eine intervenierende Sequenz, die benachbart zu einem Exon ist, welches für die Allelvariabilität codiert, die mit dem Genort assoziiert ist (ein variables Exon). Die Sequenz enthält vorzugsweise mindestens einen Teil von einem der Introns, die benachbart zu einem variablen Exon liegen und kann ein Teil des variablen Exons enthalten. Wenn zusätzliche Sequenzinformation erforderlich ist, umfaßt die amplifizierte DNA-Sequenz vorzugsweise ein variables Exon und alle oder einen Teil der beiden benachbarten Intronsequenzen.
Als Alternative kann sich die amplifizierte Sequenz in einem Intron befinden, welches nicht an ein Exon des Genorts angrenzt. Solche Introns sind in den das Gen stromaufwärts oder stromabwärts flankierenden Regionen oder sogar in einer intervenierenden Sequenz in einom anderen Genort, welcher sich im Kopplungsungleichgewicht mit dem nachzuweisenden AIIeI befindet, lokalisiert.
Für manche Genorte mögen genomische DNA-Sequenzen nicht verfügbar sein. Wenn nur cDNA-Sequenzen verfügbar sind, und Stellen für Introns innerhalb der Sequenz nicht identifiziert sind, werden Primer in Abständen von ungefähr 200 Nukleotiden ausgewählt und dazu benutzt, genomische DNA zu amplifizieren. Wenn die amplifizierte Sequenz ungefähr 200 Nukleotide enthält, verlegt man die Stelle des ersten Primers ungefähr 200 Nukleotide zu einnr Seite der zweiten Primerstelle hin und die Amplifizierung wird wiederholt bis entweder (1) eine amplifizierte DNA-Sequenz, die größer als erwartet ist, erzeugt wird, oder (2) keine amplifizierte DNA-Sequenz erzeugt wird. In jedem Fall ist der Ort einer Intronsequenz bestimmt worden. Dieselbe Methodologie kann verwendet werden, wenn nur die Sequenz einer Markerstelle verfügbar ist, welche in hohem Grad mit dem Genort gekoppelt ist, wie es bei vielen mit vererbten Krankheiten assoziierten Genen der Fall ist.
Wenn die amplifizierte DNA-Sequenz nicht das ganze Intron oder einen Teil davon enthält, welches benachbart zu dem/den Exon(s) ist, muß die Sequenz auch einer zweiten Forderung genügen. Die amplifizierte Sequenz muß sich nahe genug an dem/den variablen Exon(s) befinden, um Rekombination und den Verlust des Kopplungsungleichgewichts zwischen der amplifizierten Sequenz und dem/den variablen Exon(s) auszuschließen. Dieser Forderung wird genügt, wenn sich die Regionen der genomischen DNA innerhalb ungefähr 5Kb, vorzugsweise innerhalb 4Kb, am bevorzugtesten innerhalb 2Kb, von den variablen Exon(s) befinden. Die amplifizierte Sequenz kann sich außerhalb des Genorts befinden, aber sie ist vorzugsweise innerhalb des Genorts.
Vorzugsweise enthält bei jedem Primerpaar die amplifizierte DNA-Sequenz, die durch die Primer definiert wird, mindestens 200 Nukleotide und bevorzugter mindestens 400 Nukleotide einer intervenierenden Sequenz, die benachbart ist zu dem/den variablen Exon(s). Obwohl das variable Exon üblicherweise weniger Variationen in einer gegebenen Anzahl von Nukleotiden ergibt als eine benachbarte intervenierende Sequenz, liefert jede dieser Variationen Allel-relevante Information. Deshalb bietet der Einschluß eines variablen Exons einen Vorteil.
Da die PCR-Methodologie dazu benutzt werden kann, um Sequenzen von mehreren Kb zu amplifizieren, können die Primer so lokalisiert werden, daß zusätzliche Exons oder intervenierende Sequenzen in der amplifizierten Sequenz enthalten sind. Natürlich wird durch die erhöhte Größe der amplifizierten DNA-Sequenz die Wahrscheinlichkeit eines Fehlers bei der Replikation vergrößert, so daß die Addition von invarianten Regionen einige Nachteile mit sich bringt. Jedoch ist es weniger wahrscheinlich, daß sich diese Nachteile auf eine Analyse, die auf der Länge der Sequenz oder des RFLP-Fragmentmusters basiert, auswirken, als auf eine Analyse, die auf der Sequenzierung des Amplifizierungsprodukts beruht. Bei besondei an Allelen, speziell solchen mit sehr ähnlichen Exon-Sequenzen, können amplifiziei *.e Sequenzen, die größer als ungefähr 1 oder 1,5 Kb sind, nötig sein, um zwischen allen Allelen eines speziellen Genorts zu unterscheiden.
Die Enden der amplifizierten DNA-Sequenz werden durch das bei der Amplification verwendete Primerpaar definiert. Jede Primersequenz muß einer konservierten Region der genomischen DNA-Sequenz entsprechen. Deshalb wird der Ort der amplifizierten Sequenz in gewissem Ausmaß von der Notwendigkeit diktiert sein, die Primer in konservierten Regionen zu lokalisieren. Wenn genügend Intronsequenz-Informatlon zur Bestimmung konservierter Intronregionen nicht verfügbar ist, können die Primer in konservierten Teilen der Exons lokalisiert und dazu verwendet werden, Intronsequenzen zwischen diesen Exons zu amplifizieren.
Wenn an geeigneten Stellen gelegene konservierte Sequenzen nicht nur bei diesem Genort vorkommen, kann ein zweiter Primer, der innerhalb der amplifizierten Sequenz, welche durch das erste Primerpaar erzeugt wurde, lokalisiert ist, dazu benutzt werden, um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu liefern, die spezifisch für den Genort Ist. Mindestens einer der Primor des zweiten Primerpaars befindet sich In einer konservierten Region der amplifizierten DNA-Sequenz, die durch das erste Primerpaar definiert wird. Das zweite Primerpaar wird nach der Amplifikatlon mit dem ersten Primerpaar benutzt, um einen Teil der amplifizierten DNA-Sequenz, welche das erste Primerpaar erzeugt hat, zu amplifizieren.
Es gibt drei H lupttypen genetischer Variationen, die nachgewiesen und zur Identifizierung eines AIIeIs benutzt werden können. Diese Variationen sind, in der Reihenfolge der Einfachheit des Nachweises, (1) eine Änderung in der Länge der Sequenz, (2) eine Änderung in Anwesenheit oder Ort von mindestens einer Restriktionsstelle und (3) die Substitution eines oder einiger weniger Nukleotide, welche nicht in einer Änderung einer Restriktionsstelle resultiert. Andere Variationen innerhalb der amplifizierten DNA-Sequenz sind ebenfalls nachweisbar.
Es gibt drei Arten von Techniken, die zum Nachweis der Variationen benutzt werden können. Die erste ist das Sequenzieren der amplifizierten DNA-Sequenz. Sequenzieren ist die zeitraubendste und auch die aufschlußreichste analytische Methode, da sie jede Art genetischer Variationen in der amplifizierten Sequenz nachweist. Die zweite analytische Methode verwendet AIIeI-spezifische Oligonukleotide oder Sequenz-spezifische Oligonukleotide (ASO- oder SSO-Sonden). Die Sonden können einzelne Nukleotidveränderungan nachweisen, die in irgendeiner der Arten von genetischer Variation resultieren, so lange die exakte Sequenz der variablen Stelle bekannt ist. Eine dritte analytische Methode weist Sequenzen verschiedener Länge nach (z. B. aufgrund einer Insertion oder Deletion oder einer Änderung des Orts einer Restriktionsstelle) und/oder eine unterschiedliche Anzahl von Sequenzen (aufgrund entweder des Hinzukommens oder des Verlusts von Restriktionsstellen). Eine bevorzugte Nachweismethode ist die Gel- oder Kapillarelektrophorese. Um Änderungen in den Längen von Fragmenten oder der Anzahl von Fragmenten aufgrund von Änderungen von Restriktionsstellen nachzuweisen, muß die amplifizierte Sequenz mit einer geeigneten Restriktionsendonuklease in Fragmente gespalten werden, bevor die Analyse des Fragmentlängenmusters durchgeführt werden kann.
Die erste genetische Variation ist eine Differenz in der Länge der durch die Primer definierten amplifizierten DNA-Sequenz, hier als Primer-definierter Längenpolymorphismus (PDLP) bezeichnet, wobei dieser Längenunterschied zwischen mindestens zwei Allelen des Genorts unterscheidet. Die PDLPs resultieren aus Insertionen oder Deletionen von großen Strecken (im Vergleich zur Gesamtlänge der amplifizierten DNA-Sequenz) von DNA in dem Teil der Intronsequenz, die durch das Primerpaar definiert ist. Um PDLPs nachzuweisen, ist die amplifizierte DNA-Sequenz in einer Region lokalisiert, die Insertionen oder Deletionen einer Größe enthält, die durch die gewählte Methode nachweisbar ist. Die amplifizierte DNA-Sequenz sollte eine Länge haben, die eine optimale Auflösung der Längendifferenzen ergibt. Bei der Elektrophorese ergeben DNA-Sequenzen mit einer Länge von ungefähr 300 bis 500 Basen eine optimale Auflösung der Längendifferenzen. Nukleotidsequenzen, deren Längen um bis zu nur 3 Nukleotiden, vorzugsweise 25 bis 50 Nukleotiden, differieren, können unterschieden werden. Jedoch sind auch bis zu 800 bis 2000 Nukleotide lange Sequenzen, die um mindestens ungefähr 50 Nukleotid-Längen differieren, ebenfalls leicht unterscheidbar. Die Gel-Elektrophorese und die Kapillarelektrophorese haben ähnliche Grenzen der Auflösung. Vorzugsweise sind die Längendifferenzen zwischen amplifizierten DNA-Sequenzen mindestens 10, bevorzugt 20, am bevorzugteste- 50 oder mehr, Nukleotide zwischen den Allelen. Vorzugsweise ist die amplifizierte DNA-Sequenz zwischen 300 und 1000 Nukleotide lang und enthält Längendifferenzen von mindestens 3, vorzugsweise 10 oder mehr Nukleotiden.
Vorzugsweise ist die amplifizierte Sequenz in einem Gebiet lokalisiert, welches für PDLP Sequenzen liefert, die die meisten oder alle AIIeIe eines Genorts unterscheiden. Ein Beispiel der Identifizierung von fünf der acht DQAI-AIIeIe auf der Basis von PDLP ist detailliert in den Beispielen beschrieben.
Wenn die nachzuweisende Variation eine Änderung in einer Restriktionsstelle ist, enthi.1t die amplifizierte DNA-Sequenz notwendigerweise mindestens eine Restriktionsstelle, die (1) in einem AIIeI anwesend ist und nicht in einem anderen, (2) offensichtlich in einer verschiedenen Position in der Sequenz von mindestens zwei Allelen lokalisiert ist, oder (3) Kombinationen davon. Die amplifizierte Sequenz wird vorzugsweise so lokalisiert sein, daß die Spaltung durch die Restriktionsendonuklease Fragmente von nachweisbar verschiedenen Längen anstatt zweier oder mehrerer Fragmente von ungefähr derselben Länge erzeugt.
Zum Nachweis von Alleldifferenzen durch ASO- oder SSO-Sonden enthält die amplifizierte DNA-Sequenz eine Region von ungefähr 200 bis 400 Nukleotiden, die in einem oder mehreren Allelen anwesend ist und in einem oder mehreren anderen Allelen nicht anwesend ist. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform enthält die Sequenz eine durch eine Sonde nachzuweisende Region, die nur auf einem AIIeI des Genorts anwesend ist. Jedoch können auch Kombinationen von Sonden, die mit einigen Allelen reagieren und nicht mit anderen, verwendet werden, um die AIIeIe zu charakterisieren. Bei dem hier beschriebenen Verfahren wird in Betracht gezogen, daß die Verwendung von mehr als einer amplifizierten DNA-Sequenz und/oder die Verwendung von mehr als einer analytischen Methode pro amplifizierter DNA-Sequenz bei sehr stark polymorphen Genorten, insbesondere bei Genorten, bei denen die AIIeIe in einzelnen Nukleotidsubstitutionen differieren, die nicht nur auf diesem AIIeI vorkommen, oder wenn die Information bezüglich entfernter AIIeIe (Haplotypen) gewünscht wird, erforderlich sein kann. Insbesondere kann es nötig sein, eine PDLP-Analyse mit einer RFLP-Analyse zu kombinieren, zwei oder mehr amplifizierte DNA-Sequenzen, die in verschiedenen Positionen lokalisiert sind, zu verwenden, oder eine einzelne amplifizierte DNA-Sequenz mit einer Vielzahl von Endonukleasen zu spalten, um alle AIIeIe von einigen Genorten zu unterscheiden. Diese Kombinationen sollen innerhalb des Umfangs dieser Erfindung eingeschlossen sein. Beispielsweise werden in der Analyse der Haplotypen dos DQA1-Genorts, die in den Beispielen beschrieben ist, PDLP- und RFLP-Analysen unter Verwendung von DNA-Fragmentgemischen von drei verschiedenen Enzymen benutzt, um die acht AIIeIe und 20 der 32 Haplotypen des Genorts zu unterscheiden.
LSnge und Sequenzhomologie von Pri.nern
Jeder Genort-spezifische Primer enthält eine Anzahl von Nukleotlden, welche unter den Bedingungen, die bei dar Hybridisierung benutzt werden, ausreichen, um ein AIIeI des zu ampliflzlerenden Genorts zu hybridisieren und keine Hybridisierung mit Allelen anderer Genorte ergeben. Diu Spezifität des Primers wächst mit der Anzahl der Nukleotide in sein»' Sequenz unter Bedingungen, welche dieselbe Stringenz liefern. Deshalb sind längere Primer wünschenswert. Bei Sequenzen mit weniger als 15 Nukleotiden Ist es weniger sicher, daß sie spezifisch für einen bestimmten Genort sind. Das heißt, bei Sequenzen mit weniger als 15 Nucleotiden ist es im umgekehrten Verhältnis zur Länge der Nukleotidsequenz wahrscheinlich, daß sie in einem Teil der DNA anwesend sind, der mit anderen Genorten assoziiert ist, Insbesondere mit Genorten mit einem anderen gemeinsamen Ursprung oder mit einem evolutionsmäßig nahe verwandten Ursprung.
Jeder Primer enthält vorzugsweise mindesten.« ungefähr 15 Nukleotide, bevorzugter mindestens ungefähr 20 Nukleotide. Der Primer geht vorzugsweise nicht über ungefähr 30 Nukleotide, noch bevorzugter nicht über ungefähr 25 Nukleotide hinaus. Am bevorzugtesten haben die Primer zwischen ungefähr 20 und ungefähr 25 Nukleotide.
Eine Anzahl bevorzugter Primer wird hier beschrieben. Jeder dieser Primer hybridisiert mit mindestens ungefähr 15 aufeinanderfolgenden Nukleotiden der vorgegebenen Region der Allelstnuenz. Bei vielen der Primer ist die Sequenz nicht identisch für alle der anderen AIIeIe des Genorts. Für jeden dieser Primer gibt es zusätzliche bevorzugte Primer mit Sequenzen, die den Sequenzen der homologen Region von anderen Allelen des Genorts oder deren Komplementen entsprechen.
Wenn zwei Sätze von Primerpaaren nacheinander benutzt werden, wobei das zweite Primerpaar das Produkt des ersten Primerpaars amplifiziert, können die Primer dieselbe Größe haben wie diejenigen, die Mr die erste Amplifizierung benutzt wurden. Jedoch können auch kleinere Primer bei der zweiten Amplifizierung benutzt werdqn und liefern die erforderliche Spezifität. Diese kleineren Primer können, wenn gewünscht, Allel-spezifisch ausgewählt werden. Die Primer des zweiten Primerpaars können 15 oder weniger, vorzugsweise 8 bis 12, bevorzugter 8 bis 10, Nukleotide haben. Wenn zwei Sätze von Primerpaaren verwendet werden, um zwei amplifizierte Sequenzen zu erzeugen, wird die zweite amplifizierte DNA-Sequenz in der nachfolgenden Analyse der genetischen Variation verwendet und muß die Forderungen erfüllen, die oben für die amplifizierte DNA-Sequenz diskutiert wurden.
Die Primer haben vorzugsweise eine Nukleotidsequenz, die identisch ist mit einem Teil der zu amplifizierenden DNA-Sequenz oder ihrem Komplement. Jedoch kann auch oin Primer mit zwei Nukleotiden, die sich von der Ziel-DNA-Sequenz oder ihrem Komplement unterscheiden, verwendet werden. Nukleotide, die nicht identisch sind mit der Sequenz oder ihrem Komplement, sind vorzugsweise nicht am 3'-Ende des Primers lokalisiert. Das 3'-Ende des Primers hat vorzugsweise mindestens zwei, bevorzugter drei oder mehr Nukleotide, die komplementär sind zu der Sequenz, an die der Primer bindet. Nukleotide, die nicht identisch sind mit der zu amplifizierenden Sequenz oder ihrem Komplement sind in der Primersequenz vorzugsweise nicht benachbart. Noch bevorzugter sind nicht-komplementäre Nukleotide in der Primersequenz durch mindestens drei, noch bevorzugter mindestens fünf Nukleotide getrennt. Die Primer sollten eine Schmelztemperatur (Tm) von ungefähr 55 bis 750C haben. Vorzugswelse beträgt die Schmelztemperatur ungefähr 60°C bis ungefähr 65°C, um stringente Amplifizierungsbedingungen zu erleichtern.
Die Primer können hergestellt werden durch Verwendung einer Anzahl von Methoden wie z. B. die Phosphotriester- oder Phosphodiestermethoden oder automatisierte Ausführungsformen davon. Die Phosphodiester- und Phosphotriestermethodqn sind beschrieben in Cruthers, Science, Band 230, Seiten 281-285 (1985); Brown et al., Meth. Enzymol., Band 68, Seite 109 (1979); und Nrang et al., Meth. Enzymol., Band 68, Seite 90 (1979). Bei einer der automatisierten Methoden werden Diethylphosphoramidite, die wie von Beaucage et al., Tetrahedron Letters, 22, Seiten 1859-1962 (1981) beschrieben, synthetisiert werden, als Ausgangsmaterial verwendet. Ein Verfahren zur Synthese « on Primer-Oligonukleotidsequenzen auf einem modifizierten festen Träger wird in der US-Patentschrift Nr.4458066 beschrieben.
Beispielhafte Primersequenzen zur Analyse von Klasse I und Klasse Il HLA Genorten, Rinderleukozytenantigenen und zystischer Fibröse worden unten beschrieben.
Amplifizierung
Die Genort-spezifischen Primer werden in einem Amplifizierungsverfahren verwendet, um eine genügend große Menge DNA für die Analysemethode zu erzeugen. Zur Erzeugung von RFLP Fragmentmustern oder PDLP-Mustern, die durch Elektrophorese analysiert werden, sind ungefähr 1 bis ungefähr 500ng DNA erforderlich. Eine bevorzugte Amplifizierur.ns;iethode ist die Polymerase-Kettenreaktion (PCR). PCR-Amplifizierungsmethoden sind beschrieben in den US-Patentsch.if<en Nr.4683195 und 4683194; Saiki et al., Science, Band 230, Seiten 1350-1354 (1985); Schärfet al., Science, Band 324, Seite 163-166 (1986); Kogan et al., New England J. Med., Band 317, Seiten 985-990 (1987) und Saiki, Gyllensten und Erlich, The Polymerase Chain Reaction in Genome Analysis: A Practical Approach, Herausg. Davies, Seiten 141-152 (1988) I. R. L. Press, Oxford.
Vor der Amplifikation wird eine Probe der DNA des individuellen Organismus erhalten. Alle Zellkern-enthaltenden Zellen enthalten genomische DNA und sind deshalb potentielle Quellen für die erforderliche DNA. Bei höheren Tieren werden üblicherweise eher periphere Blutzellen als Gewebeproben verwendet. Bereits 0,01 bis 0,05ml peripheres Blut liefert genügend DNA zur Amplifizierung. Haar, Samen und Gewebe können ebenfalls als Proben verwendet werden. Im Fall der Föten-Analyse, können Placenta-Zellen oder fötale Zellen, die im Fruchtwasser vorhanden sind, verwendet werden. Die DNA wird aus den Zellkern-enthaltenden Zellen unter Bedingungen isoliert, die den DNA-Abbau minimieren. Üblicherweise beinhaltet die Isolation den Verdau der Zellen mit einer Protease, die DNA nicht angreift, bei einer Temperatur und einem pH, welche die Wahrscheinlichkeit von DNase-Aktivität reduzieren. Bei peripheren Blutzellen ist die Lyse der Zellen mit einer hypotonischen Lösung (Wasser) ausreichend, um die DNA freizusetzen.
Die DNA-Isolierung aus Zellkern-enthaltenden Zellen wird beschrieben von Kan et al., N. Engl. J. Med., Band 297, Selten 1080-1084 (1977); Kan et al., Nature, Band 251, Seiten 392 bis 393 (1974); und Kan et al., PNAS, Band 75, Seiten 5631-5635 (1978). Extraktionsverfahren für Proben, wie z.B. Blut, Samen, Haarfollikel, Schleimhautepithel und anderen Quellen genomischer DNA sind wohlbekannt. Bei Pflanzenzellen setzt die Verdauung der Zellen mit Cellulase die DNA frei. Danach wird die DNA wie oben beschrieben gereinigt.
Die extrahierte DNA kann durch Dialyse, Chromatographie und andere bekannte Methoden zur Reinigung von Polynukleotiden
vor der Amplifizierung gereinigt werden. Üblicherweise wird die DNA vor der Amplifizierung nicht gereinigt.
Die amplifizierte DNA-Sequenz wird erzeugt durch Verwendung des Teils der DNA und ihres Komplements, welcher vom Primerpaar als Templat (Matrize) gebunden wird. Als erster Schritt des Verfahrens werden die DNA-Stränge in Einzelstrang-DNA aufgetrennt. Diese Strangtrennung kann durch eine Reihe von Methoden, welche physikalische oder chemische Mittel
einschließen, erreicht werden. Eine bevorzugte Methode ist die physikalische Methode zur Trennung der Stränge durch Erhitzen der DNA, bis sie im wesentlichen (ungefähr zu 93%) denaturiert Ist. Die Hitze-Denaturierung geschieht bei Temperaturen von ungefähr 80"C bis 1050C für Zeiten von ungefähr 16 bis 30 Sekunden. Üblicherwelse Ist das Erhitzen der DNA auf eine Temperatur von 90 bis 930C für ungefähr 30 Sekunden bis ungefähr 1 Minute ausreichend.
Das oder die erzeugten Primer-Verlängerungsprodukte sind komplementär zu der Primer-definierten Region der DNA und hybridisieren damit, um einen Doppelstrang von Strängen gleicher Länge zu bilden. Die Doppelstränge der Verlängerungsstruktur und ihre Matrizen werden dann in Einzelstrang-DNA getrennt. Wenn die komplementären Stränge der Doppelstränge getrennt sind, sind die Stränge bereit, um als Matrize für den nächsten Synthesezyklus von weiteren DNA; Strängen verwendet zu werden.
Jeder der Syntheseschritte kann unter Bedingungen durchgeführt werden, die geeignet sind zur DNA-Amplifizierung. Im allgemeinen wird dor Amplifizierungsschritt in einer gepufferten wäßrigen Lösung, vorzugsweise bei einem pH von ungefähr 7 bis ungefähr 9, bevorzugter bei ungefähr pH8 durchgeführt. Ein geeigneter Ampliflzierungspuffer enthält TrIs-HCI als Puffer in einem Konzentrationsbereich von ungefähr 10 bis ungefähr 10OmM. Der Puffer enthält auch ein einwertiges Salz, vorzugsweise bei einer Konzentration von mindestens ungefähr 1OmM und nicht mehr als ungefähr 6OmM. Bevorzugte einwertige Salze sind KCI, NaCI und (NH4)ISO4. Der Puffer enthält auch Magnesiumchlorid mit einer Konzentration von ungefähr 5 bis 6OmM. Andere Puffersysteme, wie z. B. Hepes oder Glycin-NaOH und Kaliumphosphatpuffer können verwendet werden. Üblicherwelse beträgt das Gesamtvolumen der Reaktionsmischung der Amplifizierung ungefähr 50 bis 100 μΙ.
Vorzugsweise wird für genomische DNA ein molarer Überschuß von ungefähr 10e: 1 PrIm ar !Matrize des Primerpaars zum Puffer zugegeben, der die getrennten DNA-Matrizenstränge enthält. Ein großer molarer Überschuß der Primer verbessert die Effizienz des Amplifizierungsprozeßes. Im allgemeinen werden ungefähr 100 bis 150ng von jedem Primer zugegeben. Die Deoxyribonukleotid-Triphosphate, dATP, dCTP, dGTP und dTTP werden zur Amplifizierungsmlschung ebenfalls In einer Menge zugegeben, die ausreicht, um die amplifizierten DNA-Sequenzen zu erzeugen. Vorzugsweise sind die dNTPs in einer Konzentration von ungefähr 0,75 bis 4,OmM anwesend, bevorzugter ungefähr 2,OmM. Die resultierende Lösung wird auf ungefähr 90 bis 930C für ungefähr 30 Sekunden bis ungefähr 1 Minute erhitzt, um die DNA-Strange zu trennen. Nach dieser Erhitzungszeit wird die Lösung auf die Temperatur zur Amplifizierung abgekühlt.
Nach der Trennung der DNA-Stränge läßt man die Primer mit den Strängen verschmelzen. Die Verschmelztemperatur variiert mit der Länge und dem GC-Gehalt der Primer. Diese Variablen werden durch die Tm eines jeden Primers reflektiert. Beispielhafte erfindungsgemäße HLA DQA1 Primer, wie unten beschrieben, erfordern Temperaturen von ungefähr 55°C. Die beispielhaften erfindungsgemäßen HLA Klasse I Primer verlangen etwas höhere Temperaturen von ungefähr 62 bis ungefähr 680C. Der Reaktionsschritt zur Verlängerung wird nach dem Verschmelzen der Primer mit der genomischon DNA durchgeführt. Ein geeignetes Reagenz zur Induktion oder zur Katalyse der Primerverlängerungsreaktion wird zur Amplifizierungsmischung entweder vor oder nach der Strangtrennung (Denaturierung) zugegeben, abhängig von der Stabilität des Reagenzes unter den Denaturierungsbedingungen. Die DNm .Synthesereaktion läßt man unterden Im Stand derTechnikwohlbekannten Bedingungen ablaufen. Diese Synthesereaktion (Primerverlängerung) kann in einem Bereich von Raumtemperatur bis zu einer Temperatur, oberhalb welcher die Polymerase nicht mehr effizient arbeitet, ablaufen. Erhöhung der Amplifizierungstemperatur erhöht die Stringenz der Reaktion. Wie schon vorher festgestellt, sind stringente Bedingungen notwendig, um sicherzustellen, daß die amplifizierte Sequenz und die Sequenz der DNA-Matrize dieselbe Nukleotidsequenz enthalten, da die Substitution von Nukleotiden die Restriktionsstellen oder die Sonden-Bindungsstellen in einer amplifizierten Sequenz ändern kann. Das induzierende Reagenz kann jede Verbindung oder jedes System sein, welches die Synthese von Primerverlängerungsprodukten erleichtert, vorzugsweise Enzyme. Geeignete Enzyme für diesen Zweck umfassen DNA-Polymerasen (wie z. B. E. coli DNA-Polymerase I, Klenow-Fragment von E. coli DNA-Polymerase I1T4 DNA Polymerase), reverse Transcriptase und andere Enzyme (einschließlich hitzestabiler Polymerasen), welche in geeigneter Weise die Kombination der Nukleotide zur Bildung der Primerverlängerungsprodukte erleichtern. Besonders bevorzugt sind Taq-Polymerase oder andere hitzestabile Polymerasen, welche die DNA-Synthese bei erhöhten Temperaturen erleichtern (ungefähr 60 bis 9O0C). Die Taq-Polymerase wird z.B. beschrieben bei Chien et al., J.Bacteriol., Band 127, Seiten 1550-1557 (1976). Wenn der Verlängerungsschritt bei ungefähr 720C durchgeführt wird, ist etwa 1 Minute zur Vervielfältigung von jeweils 1000 Basen der Ziel-DNA nötig. »
Die Synthese der amplifizierten Sequenz wird am 3'-Ende eines jeden Primers Initiiert und schreitet in Richtung des 5'-Endes der Matrize, entlang des DNA-Stranges fort, bis die Synthese abbricht, wobei DNA-Sequenzen verschiedener Länge erzeugt werden. Der neue synthetisierte Strang und sein Komplementärstrang bilden ein doppelstränglges Molekül, welches in den nachfolgenden Schritten des Verfahrens benutzt wird. Im nächsten Schritt werden die Stränge des doppelsträngigen Moleküls getrennt (denaturiert), wie oben beschrieben, um Einzelstrangmoleküle zu liefern.
Neue DNA wird auf den einzelsträngigen Matrizenmolekülen synthetisiert. Zusätzliche Polymerase, Nukleotide und Primer können, wenn nötig, zugefügt werden, um die Reaktion unter den oben beschriebenen Bedingungen fortschreiten zu lassen. Nach diesem Schritt besteht die Hälfte des Verlängerungsprodukts aus der amplifizierten Sequenz, die an die zwei Primer gebunden ist. Die Schritte der Strangtrennung und der Synthese des Verlängerungsprodukts können so oft wiederholt werden wie nötig, um die gewünschte Menge an amplifizierter DNA-Sequenz zu erzeugen. Die Menge der erzeugten amplifizierten Sequenz wächst exponentiell an. Üblicherweise sind ungefähr 25 bis 30 Zyklen ausreichend, um eine zur Analyse geeignete Menge an amplifizierter DNA-Sequenz zu erzeugen.
Die Amplifizierungsmethode kann schrittweise durchgeführt werden, wobei nach jedem Schritt neue Reagenzien zugefügt werden, oder simultan, wobei alle Reagenzien im Anfangsschritt hinzugefügt werden, oder zum Teil schrittweise und zum Teil simultan, wobei frisches Reagenz nach einer bestimmten Anzahl von Schritten zugefügt wird. Die Reaktionsmischung zur Amplifizierung kann zusätzlich zur genomischen Proben-DNA die vier Nukleotide, das Primerpaar in einem molaren Überschuß und das induzierende Reagenz, z. B. Taq-Polymerase, enthalten.
Jeder Schritt des Verfahrens geschieht der Reihe nach, trotz der anfänglichen Anwesenheit aller Reagenzien. Zusätzliche Materialien können hinzugefügt werden, wenn nötig. Üblicherweise wird die Polymerase nicht ergänzt, wenn eine hitzestabile Polymerase verwendet wird. Nach einer geeigneten Anzahl von Zyklen, um die gewünschte Menge der amplifizierten Sequenz zu erzeugen, kann die Reaktion gestoppt werden durch Inaktivierung der Enzyme, Trennung der Komponenten der Reaktion oder Beenden der thermischen Zyklen.
In einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens umfaßt die Amplifizlerung die Verwendung eines zweiten Primerpaares, um eine zweite Amplifizierung nach der ersten Amplifizierung durchzuführen. Das zweite Primerpaar definiert eino DNA-Sequenz, die Teil der ersten amplifizierten Sequenz ist. Das heißt/ mindestens einer der Primer des zweiten Primerpaares definiert ein Ende der zweiten amplifizierten Sequenz, welches sich Innerhalb der Enden der ersten amplifizierten Sequenz befindet. Auf diese Weise hilft die Verwendung des zweiten Prlmerpaares sicherzustellen, daß jegliche amplif izierte Sequenz, die in der zweiten Amplif izierungsreaktion erzeugt wird, spezifisch Ist für den untersuchten Genort. Das bedeutet, daß es bei Nicht-Zielsequenzen, welche von einem Genort-spezlfischen Paar kopiert werden können, unwahrscheinlich ist, daß sie Sequenzen enthalten, die mit einem zweiten Genort-spezifischen Primerpaar hybridisieren, welches innerhalb der ersten amplifizierteh Sequenz lokalisiert ist.
In einer weiteren Ausführungsform ist das zweite Primerpaar spezifisch für ein AIIeI des Genorts. Auf diese Weise zeigt der Nachweis der Anwesenheit einer zweiten amplifizierten Sequenz an, daß das AIIeI in der Probe anwesend ist. Die Anwesenheit einer zweiten emplifizierten Sequenz kann festgestellt werden, indem man die Menge an DNA am Anfang und am Ende der zweiten Amplifizierungsreaktion bestimmt. Methoden zur Mengenbestimmung von DNA sind wohlbekannt und umfassen die Bestimmung der optischen Dichte bei 260nm (OD2n) und vorzugsweise zusätzlich die Bestimmung des Verhältnisses der optischen Dichte bei 260 nm zur optischen Dichte bei 280 nm (OD2eo/OD2N), um die Menge an DNA im.Verglelch zum Protein in der Probe zu bestimmen.
Die Mischung für den ersten Amplifizierungoschritt wird vorzugsweise nur genügend Primer für eine begrenzte Anzahl von Primerverlängerungszyklen enthalten, z. B. weniger als 16, vorzugsweise ungefähr 10 bis 1,2 Zyklen, so daß die Menge der amplifizierten Sequenz, die durch das Verfahren produziert wird, ausreicht für die zweite Amplifizierung, aber die Feststellung, ob mit dem zweiten Primer eine Amplifizierung stattgefunden hat, nicht beeinträchtigt. Als Alternative kann die Amplifizierungsreaktion für weitere Zyklen fortgesetzt und die Mischung dann in Aliquots aufgeteilt werden, um angemessene Mengen an DNA für eine oder mehrere sekundäre Amplifizierungsreakiionen zu liefern. Ungefähr 100 bis 150ng eines jeden Primers des zweiten Primerpaars werden zur Amplifizierungs-Reaktionsmischung zugefügt. Der zweite Satz von Primern wird vorzugsweise nach den Anfangszyklen mit dem ersten Primerpaar hinzugefügt. Die Menge des ersten Primerpaars kann im Vergleich zum zweiten Primerpaar begrenzt werden, so daß nach dem Zufügen des zweiten Paares im wesentlichen alle amplifizierten Sequenzen vom zweiten Paar erzeugt werden.
Wie oben festgestellt, kann eine DNA Mengenbestimmung durchgeführt werden um festzustellen, ob im zweiten Amplifizierungsschritt eine amplifizierte Sequenz erzeugt wurde. Wenn Protein in der Reaktionsmischung die Mengenbestimmung beeinträchtigt (üblicherweise aufgrund der Anwesenheit von Polymerase) kann dio Reaktionsmischung gereinigt werden, z.B. durch Verwendung eines 100000-MW-Ausschlußfilters. Solche Filter sind im Handel erhältlich von Millipore und von Centricon.
Wie oben erörtert, hängt die verwendete Methode zur Analyse der amplifizierten DNA-Sequenz zwecks Charakterisierung des oder der AIIeIe, die in der Proben-DNA anwesend sind, von der genetischen Variation in der Sequenz ab. Wenn die Unterschiede zwischen Allelen primerdefinierte Längenpolymorphismen einschließen, werden die amplifizierten Sequenzen aufgrund ihrer Länge getrennt, vorzugsweise unter Verwendung von Gel- oder Kapillarelektrophorese. Wenn zur Analyse die Hybridisierung mit Sonden verwendet wird, läßt man die amplifizierten Sequenzen mit markierten Sonden reagieren. Wenn die Analyse auf RFLP-Fragmentmustern basiert, werden die amplifizierten Sequenzen mit einer oder mehreren Restriktionsendonukleasen in Fragmente gespalten, um ein Fragmentgemisch zu erzeugen, und die resultierenden Fragmente werden aufgrund ihrer Länge getrennt, vorzugsweise unter Verwendung von Gel- oder Kapillarelektrophorese. Wenn die einzige Variation innerhalb der amplifizierten Sequenz eine Sequenzvariation ist, die nicht zu einer Längenveränderung oder einer Änderung einer Restriktionsstelle führt und ungeeignet ist für den Nachweis durch eine Sonde, werden die amplifizierten DNA-Sequenzen sequenziert
Verfahren für jeden Schritt der verschiedenen analytischen Methoden sind wohlbekannt und werden im folgenden beschrieben.
Herstellung von RFLP-Fragmentmustern Restriktionsendonukleasen
Eine Restriktionsendonuklease ist ein Enzym, das DNA an einer bestimmten Nukleotidsequenz, genannt Restriktionsstelle, hydrolytisch^paltet oder schneidet. Sowohl Endonukleasen, die glatte DNA-Fragmente (die Hydrolyse der Phosphordiesterbindungen auf beiden DNA-Strängen geschieht an derselben Stelle) als auch Endonukleasen, die Fragmente mit cohäsiven Enden erzeugen (die Hydrolysestellen auf den Strängen sind durch ein paar Nukleotide voneinander getrennt), können verwendet werden.
Restriktionsenzyme sind im Handel erhältlich aus einer Anzahl von Quellen, einschließlich Sigma Pharmaceuticals, Bethesda Research Labs, Boehringer-Mannheim und Pharmacia. Wie oben erörtert, spaltet eine Restriktionsendonuklease, die in der vorliegenden Erfindung verwendet wird, eine erfindungsgemäß amplifizierte DNA-Sequenz, um ein Fragmentgemisch zu produzieren, welches einen Satz von Fragmenten mit unterschiedlichen Fragmentlängen enthält. Insbesondere differieren die Fragmente für ein AIIeI eines Genorts in der Größe von Fragmenten anderer AIIeIe des Genorts. Die Muster, die durch Trennung und Sichtbarmachung der Fragmente einer Vielzahl solcher Fragmentgemische erzeugt werden, sind ausreichend, um jedes AIIeI des Genorts zu unterscheiden. Insbesondere werden die Endonukleasen so gewählt, daß durch die Verwendung mehrerer Fragmentgemische der amplifizierten Sequenz, vorzugsweise weniger als fünf, besonders bevorzugt zweier oder dreier Fragmentgemische, die AIIeIe eines Genorts unterschieden werden können.
Bei der Auswahl einer Endonuklease ist es wichtig, die Anzahl der Fragmente zu berücksichtigen, die für die amplifizierten Sequenzen der verschiedenen AIIeIe eines Genorts erzeugt werden. Insbesondere muß eine ausreichende Anzahl von Fragmenten erzeugt werden, um zwischen den Allelen zu unterscheiden und, wenn notwendig, dio Bestimmung der Individualität zu ermöglichen. Jedoch darf die Anzahl der Fragmente nicht so groß oder die Größenverteilung nicht so ähnlich sein, daß ein Fragmentmuster erzeugt wird, welches durch die spezielle Nachweismethode nicht unterscheidbar ist von dem anderer Haplotypen. Vorzugsweise haben die Fragmente für jedes AIIeI unterschiedliche Größen. Das heißt, für jedes von einer
Endonuklease erzeugte Fragmentgemisch einer speziellen amplifizlerten Sequenz differieren die Fragmente eines AIIeIs in der Größe vorzugsweise von den Fragmenten für jedes andere AIIeI des Genorts um mindestens 10, vorzugsweise 20, besonders bevorzugt 30, am bevorzugtesten 50 oder mehr Nukleotide.
Ein Durchschnittsfachmann kann leicht feststellen, ob eine Endonuklease RFLP-Fragmente mit unterscheidbaren Fragmentlängen erzeugt. Die Bestimmung kann experimentell durchgeführt werden durch Spalten einer amplifizlerten Sequenz eines jeden AIIeIs mit der ausgewählten Endonuklease auf die erfindungsgemäße Weise. Die Fragmentmuster können dann analysiert werden. Unterscheidbare Muster werden leicht zu identifizieren sein durch die Feststellung, ob der Vergleich von zwei oder mehr Fragmentmustern ausreichend ist, um charakteristische Differenzen zwischen den Mustern der AIIeIe aufzuzeigen. Die Anzahl der Fragmentgemische, die für eine besondere Analyse hergestellt werden müssen, wird von der gewünschten* Information und der speziellen Probe, die analysiert werden soll, abhängen. Da HLA-Analysen für eine Vielzahl von Zwecken verwendet werden, die von Bestimmungen der Individualität In der Gerichtsmedizin und bei Feststellung der Vaterschaft bis zu Gewebebestimmung für Transplantationen reichen, soll der HLA-Komplex als Beispiel verwendet werden. Ein einzelnes Fragmentgemisch kann ausreichend sein, um festzustellen, daß ein Individuum nicht die Person sein kann, deren Blut am Ort eines Verbrechens gefunden wurde. Im allgemeinen jedoch, wenn die DNA-Proben sich nicht unterscheiden, wird die Verwendung von zwei bis drei Fragmentgemischen für jeden der zwei bis drei HLA-Genorte bei Anwendung zur Prüfung von Übereinstimmung (Gerichtsmedizin, Vaterschaft) ausreichend sein. Für eine komplette HLA-Bestimmung muß jeder Genort bestimmt werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform werden Proben-HLA-DNA-Sequenzen in Aliquots aufgeteilt, die ähnliche Mengen an DNA pro Aliquot enthalten, und mit Primerpaaren (oder Kombinationen von Primerpaaren) amplifiziert, um amplifizierte DNA-Sequenzen für eine Anzahl von HLA-Genorten zu erzeugen. Jede Amplifizierungsmischung enthält nur Primerpaare für einen HLA-Genort. Die amplifizierten Sequenzen werden vorzugsweise gleichzeitig weiterbehandelt, so daß eine Anzahl von RFLP-Fragmentmustern aus enzymatischen Spaltungen von einer Probe erzeugt werden kann. Auf diese Weise kann der HLA-Typus für eine Anzahl von Allelen gleichzeitig bestimmt werden.
Als Alternative liefert die Herstellung einer Anzahl von RFLP-Fragmenten zusätzliche Vergleiche von Mustern, um Proben für gerichtsmedizinische oder Vaterschafts-Analysen zu unterscheiden, wo die Analyse von einem Genort häufig nicht ausreicht, um genügend Information zur Bestimmung zu liefern, wenn die Proben-DNA dasselbe AIIeI aufweist wie die DNA, mit der sie verglichen wird.
Erzeugung von RFLP-Fragmenten
Nach der Amplifizierung wird die ι mplifizierte DNA-Sequenz mit einer Endonuklease zusammengebracht, welche die amplifizierte DNA-Sequenz hydrolytisch an einer bestimmten Restriktionsstelle spaltet oder schneidet. Die Kombination der Endonuklease mit der amplifizierten DNA-Sequenz erzeugt ein Fragmentgemisch, welches einen Satz von Fragmenten mit unterscheidbarer Fragmentlänge enthält. Das US-Patent Nr.4582788 beschreibt eine HLA-Bestimmungsmethode, die auf dem Restriktionslängenpolymorphismus beruht (RFLP).
In einer bevorzugten Ausführungsform werden zwei oder mehr Aliquots der Amplifizierungsreaktionsmischung mit ungefähr gleichen Mengen an DNA pro Aliquot hergestellt.
Bequemerweise werden ungefähr S bis ungefähr ΙΟμΙ einer ΙΟΟ-μΙ-Reaktionsmischung für jedes Aliquot verwendet. Jedes Aliquot wird mit einer unterschiedlichen Nuklease kombiniert, um eine Vielzahl von Fragmentgemischen zu erzeugen. Auf diese Weise können durch Verwendung einer Anzahl von Endonukleasen für eine spezielle DNA-Sequenz genortspezifische Kombinationen von Nukleasen, die zur Unterscheidung einer Vielzahl von Allelen eines speziellen Genorts führen, leicht bestimmt werden. Nach der Herstellung der Fragmentgemische kann jedes der Fragmentgemische zur Bildung eines RFLP-Musters verwendet werden. Vorzugsweise können zwei oder mehr Fragmentgemische vor der Musterbildung vereinigt werden.
Als Alternative können zwei oder mehr Restriktionsendonukleasen dazu verwendet werden, ein einziges Fragmentgemisch zu erzeugen. Dieses Fragmentgemisch unterscheidet sich von einem, bei dem jedes Enzym getrennt verwendet wird und die resultierenden Fragmente anschließend vereinigt werden, da die Fragments, die von einem Enzym produziert werden, ein oder mehrere Restriktionsstellen einschließen können, die von dem anderen Enzym in der Mischung erkannt werden. Muster, die durch gleichzeitige Spaltung mit zwei oder mehr Enzymen erzeugt wei den, werden mehr Fragmente enthalten eis die vereinigten Produkte getrennter Spaltreaktionen, bei denen diese Enzyme verwendet wurden, und ihre Analyse wird komplexer sein.
Darüber hinaus können eine oder mehrere Restriktionsendonukleasen verwendet werden, um zwei oder mehr amplifizierte DNA-Sequenzen zu spalten. Das heißt, für eine vollständigere Auflösung aller AIIeIe eines Genorts kann es wünschenswert sein, amplifizierte DNA-Sequenzen herzustellen, die zwei verschiedene Regionen umfassen. Die amplifizierten DNA-Sequenzen können kombiniert und mit mindestens einer Restriktionsendonuklease gespalten werden, um RFLP-Muster zu erzeugen.
Die Spaltung der amplifizierten DNA-Sequenz mit der Endonuklease kann in einer wäßrigen Lösung unter Bedingungen
ausgeführt werden, die die Endonuklease-Aktivität begünstigen. Üblicherweise ist die Lösung auf einen pH von ungefähr 6,5 bis 8 gepuffert. Gemäßigte Temperaturen, vorzugsweise ungefähr 20 bis ungefähr 450C, besonders bevorzugt physiologische Temperaturen (25 bis 4O0C), werden verwendet. Restriktionsendonukleasen erfordern normalerweise Magnesiumionen und in einigen Fällen Co-Faktoren (ATP und S-Adenosylmethionin) oder andere Reagenzien für ihre Aktivität. Deshalb sind Quellen für solche Ionen, z. B. anorganische Magnesiumsalze und wenn nötig andere Reagenzien, in der Reaktionsmischung anwesend.
Geeignete Bedingungen werden vom Hersteller der Endonuklease beschrieben und variieren im allgemeinen insofern, als die Endonuklease Bedingungen mit hohem, mittlerem oder niedrigem Salzgehalt zur maximalen Aktivität braucht.
Die Menge an DNA in der Reaktionsmischung ist üblicherweise im Bereich von 1 bis 20Gew.-%. In den meisten Fällen liefern 5 bis 20pg Gesamt-DNA, die vollständig gespalten werden, eine ausreichende Probe zur Erzeugung von RFLP-Fragmenten. Ein Überschuß an Endonuklease, vorzugsweise 1 bis 5 Einheiten/pg DNA, wird verwendet.
Der Satz von Fragmenten in dem Fragmentgemisch wird vorzugsweise weiterbehandelt, um RFLP-Muster zu erzeugen, die dann analysiert werden. Wenn es gewünscht wird, kann das Fragmentgemisch vor der Weiterbehandlung durch Fällung und anschließende Resuspendierung gereinigt werden, wie beschrieben bei Kan et al., PNAS, Band 75, Seiten 5631-5635 (1978).
Nach der Herstellung werden die Fragmente durch wohlbekannte Methoden analysiert. Vorzugswelse werden die Fragmente unter Verwendung von Elektrophorese analysiert. Die Gel-Elektrophoresemethoden sind im Detail im tolgenden beschrieben. Kapillarelektrophoresemethoden können automatisiert werden (wie z. B. bei Verwendung des Modell 207 A analytischen Kapillarelektrophoresesystems von Applied Biosystems, Foster City, CA) und sind beschrieben in Chin et al., American Biotechnology Laboratory News Edition, Dezember 1989.
Elektrophorese ist die Trennung von DNA-Sequenzfragmenten, die in einem Trägermedium enthalten sind, nach Größe und Ladung enter dem Einfluß eines angelegten elektrischen Feldes. Gelblätter oder -platten, z. B. mit Agarose, Agarose-Acrylamid oder Polyacrylamid, werden üblicherweise für Gele zur Nukleotidgrößenbestimmung verwendet. Die Elektrophoresebedingungen beeinflussen den gewünschten Auflösungsgrad der Fragmente. Eine Auflösung, mit der Fragmente getrennt werden, die sich voneinander in der Größe durch bis zu nur 10 Nukleotiden unterscheiden, ist üblicherweise ausreichend. Vorzugsweise wird das Gel in der Lage sein, Fragmente aufzulösen, die sich durch 3 bis 5 Nukleotide unterscheiden. Jedoch ist es für manche Zwecke (wenn die Differenzen in der Sequenzlänge groß sind) möglich, daß eine Unterscheidung von Sequenzunterschieden von mindestens 100 Nukleotiden ausreichend empfindlich für die Analyse ist. Die Herstellung und Färbung von analytischen Gelen ist wohlbekannt. Beispielsweise ist ein 3% Nusieve 1 % Agarosegel, welches mit Ethidiumbromid gefärbt ist, beschrieben in Boerwinkle et al., PNAS, Band 86, Seiten 212-216 (1989). Der Nachweis von DNA in Polyacrylamidgelen mit Silberfärbung ist beschrieben in Goldman et al., Elektrophoresis, Band 3, Seiton 24-26 (1982); Marshall, Electrophoresis, Band 4, Seiten 269-272 (1983); Tegelstrom, Electrophoresis, Band 7, Seiten 226-229 (1987); und Allen et al., BioTochniques, Band 7, Seiten 736 bis 744 (1989). Die Methode, die von Allen et al. beschrieben wird, wobei rehydratisierbare, mit Silber gefärbte Polyacrylamitlgele mit einer großporigen ultradünnen Schicht verwendet werden, wird vorgezogen. Man kann Größenmarker auf domselben Gel mitlaufen lassen, was eine Abschätzung dor Größe der Restriktionsfragmente erlaubt. Ein Vergleich mit einer oder mehreren Kontrollproben kann zusätzlich zu oder anstelle der Verwendung von Größenmarkern durchgeführt werden. Die Größenmarker oder Kontrollproben werden üblicherweise auf eine oder auf beide Randspuren des Gels aufgetragen und vorzugsweise auch mindestens auf einer Zentralspur. Beim Ausführen der Elektrophorese werden die DNA-Fragmente an einem Ende der Gelplatte aufgetragen (allgemein „Ursprung" genannt), und die Fragmente trennen sich bei dem elektrisch geförderten Transport durch das Gel, wobei die Wanderungsgesohwindigkeit der kleinsten Fragmente vom Ursprung zum anderen Ende der Gelplatte (Anode) am größten ist. Mit einem Agaroseplattengel wird die Elektrophorese typischerweise für 30 bis 45 Minuten bei 100 Volt durchgeführt. Bei einem Polyacrylamidplattengel wird die Elektrophorese typischerweise für 45 bis 60 Minuten bei 200 bis 1200 Volt durchgeführt.
Nach der Elektrophorese wird das Gel für die Sichtbarmachung der Proben vorbereitet Die DNA-Fragmente können sichtbar gemacht werden durch Anfärben des Gels mit einem nukielnsäurespezifischen Farbstoff wie z.B. Ethidiumbromid oder vorzugsweise mit Silberfärbung, welche nicht spezifisch für DNA ist. Ethidiumbromidfärbting wird beschrieben in Boerwinkle et al., wie o'jZ-. angegeben. Silberfärbung wird beschrieben in Goldman et al., Marshall, Tegelstrom und Allen et al., ebenfalls alle wie oben angegeben.
Sonden
Allelspezifische Oligonukleotide oder Sonden werden verwendet, um DNA-Sequenzen zu identifizieren, die Regionen aufweisen, die mit der Sondensequenz hybridisieren. Die amplifizierten DNA-Sequenzen, welche durch einen Genort-spezifischen Primär definiert sind, können als Sonden in RFLP-Analysen, die genomische DNA verwenden, benutzt werden. Die US-Patentschrift Nr. 4 582788 beschreibt eine exemplarische HLA-Bestimmungsmethode, die auf der Analyse von RFLP-Mustern, erzeugt von genomischer DNA, beruht. Die Analyse verwendet cDNA-Sonden zur Analyse aufgetrennter DNA-Fragmente in einer Southern-Blot-Analyse. Wie in dem Patent festgestellt, sind komplementäre DNA-Sonden, die spezifisch sind für eine (Genort-spezifisch) oder mehrere (multi-Genort-spezifisch) bestimmte HLA-DNA-Sequenzen, die am Polymorphismus beteiligt sind, wesentliche Komponenten des Hybridisierungsschritts des Bestimmungsverfahrens (Spalte 6, Zeilen 3-7).
Die amplifizierten DNA-Sequenzen des erfindungsgemäßen Verfahrens können als Sonden in dem im Patent beschriebenen Verfahren oder in dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden, um die Anwesenheit einer amplifizierten DNA-Sequenz eines speziellen AIIeIs nachzuweisen. Insbesondere kann eine amplifizierte DNA-Sequenz mit einem bekannten AIIeI hergestellt und als Sonde verwendet werden, um die Anwesenheit des AIIeIs in der Proben-DNA, welche durch das erfindungsgemäße Verfahren amplifiziert wurde, nachzuweisen.
Wenn eine Sonde dazu verwendet wird, AIIeIe in den erfindungsgemäß amplifizierten DNA-Sequenzen zu unterscheiden, hat die Sonde vorzugsweise jedoch eine relativ kurze Sequenz (im Vergleich zur Länge der amplifizierten DNA-Sequenz), was die Sequenzhomologie von anderen Allelen des Genorts mit der Sondensequenz minimiert. Das heißt, die Sonden werden einer Region der amplifizierten DNA-Sequenz entsprechen, welche die größte Anzahl an Nukleotidunterschieden im Vergleich zu den amplifizierten DNA-Sequenzen von anderen Allelen, die unter Verwendung dieses Primerpaares erzeugt werden, aufweist. Die Sonden können markiert werden mit einem nachweisbaren Atom, Radikal oder Liganden unter Verwendung bekannter Markierungstochniken. Üblicherweise werden radioaktive Markierungen, gewöhnlich "Phosphor, verwendet. Die Sonden können mit "Phosphor markiert werden durch „Nick-Translation" mit einem a-32Phosphor-dNTP (Rigby et al., J. Mol. Biol. Band 113, Seite 237 [1977]), oder anderen verfügbaren Verfahren zur Herstellung der Genort-spezifischen Sonden für die Verwendung in den im Patent beschriebenen Verfahren. Die Sonden sind vorzugsweise markiert mit einem Enzym wie z. B. Wasserstoffperoxidase. Die Kopplung von Enzymmarkern mit Nukleotidsequenzen ist wohlbekannt. Die Analysemethode, die bekann? ist als „Southern Blotting" und von Southern, J. Mol. Biol., Band 98, Seiten 503-517 (1975) beschrieben wurde, ist eine Analysemethode, die auf der Verwendung von Sonden beruht. Beim Southern Blotting werden die DNA-Fragmente einer Elektrophorese unterworfen, dann auf einen Träger, der Nukleinsäure bindet, übertragen und fixiert und mit einer in geeigneter Weise markierten cDNA-Sonde hybridisiert. Die markierten Hybride werden durch Autoradiographie oder, vorzugsweise, durch Verwendung von Enzymmarkierung nachgewiesen.
Reagenzien und Bedingungen für das Blotting-Verfahren sind beschrieben bei Southern, siehe oben; Wahl et al., PNAS, Band 6, Seiten 3683-3687 (1979); Kan et al., PNAS, siehe oben; US-Patent Nr.4302 204 und Molecular Cloning: A Laboratory Manual von Maniatis et al., Cold Spring Harbor Laboratory, 1982. Wenn der Transfer beendet ist, wird das Papier vom Gel getrennt und getrocknet. Die Hybridisiorung (Verschmelzung) der aufgelösten Einzelstrang-DNA auf dem Papier mit einer Sonde wird durch
Inkubation des Papiers mit der Sonde unter Hybridisierungsbedingungen bewirkt. Siehe Southern, wie oben; Kan et al., PNAS, wie oben, und US-Patent Nr.4302204, Spalte 5, Zeile 8 und folgende. Komplementäre DNA-Sonden, die spezifisch sind für ein AIIeI, einen Genort (genortspezifisch) oder mehrere, sind wesentliche Komponenten im Hybridisierungsschritt des Bestimmungsverfahrens. Genortspezifische Sondon können hergestellt werden durch die Amplifizierungsmethoden für genortspezifische amplifizierte Sequenzen, wie oben beschrieben. Die Sondon werden durch Markierung, wie oben beschrieben, nachweisbar gemacht.
Der letzte Schritt im Southern-Blotting-Verfahren ist die Identifizierung markierter Hybride auf dem Papier (oder Gel, wenn die Hybridisierung in Lösung ausgeführt wird). Zum Nachweis der eine radioaktive Markierung enthaltenden Hybride kann Autoradiographie verwende* werden. Enzymatisch^ Markierungen werden durch die Verwendung eines Farbentwicklungssystems, welches spezifisch für das Enzym ist, nachgewiesen. Im allgemeinen spaltet das Enzym ein Substrat, wobei die Spaltung das Substrat veranlaßt, entweder Farbe zu entwickeln oder seine Farbe zu wechseln. Die Farbe kann visuell in natürlichem Licht wahrnehmbar oder ein Fluorochrom sein, das durch eine bekannte Wellenlänge von Licht angeregt wird,
durch die Sequenzierung der amplifizierten DNA-Sequenzen nachgewiesen werden. Methoden zum Sequenzieren von
von Maniatis et al., Cold Spring Harbor Laboratory, 1982. Gegenwärtig kann Sequenzieren durch Verwendung einer Anzahl im
beschriebenen Verfahren verwendet werden. In einer Ausführungsform umfaßt die Ausrüstung mindestens eingenortspezifisches Primerpaar in einem geeigneten Behälter. Vorzugsweise enthält die Ausrüstung zwei oder mehrgenortspezifischer Primerpaare. In einer Ausführungsform sind die Primerpaare für verschiedene Genorte bestimmt undbefinden sich in getrennten Behältern. In einer anderen Ausführungsform sind die Primerpaare spezifisch für denselben Genort.
verschiedene AIIeIe desselben Genorts und in verschiedenen Behältern, wenn sie spezifisch sind für verschiedene Teilederselben allelen Sequenz. Sätze von Primerpaaren, die nacheinanderverwendet werden, können in verschiedenen Behältern inderselben Ausrüstung bereitgestellt werden. Die Primer eines jeden Paares können sich in getrennten Behältern befinden,insbesondere, wenn ein Primer in jedem Satz von Primerpaaren verwendet wird. Jedoch wird jedes Paar vorzugsweise in einer
bereitgestellt werden und können eingefroren werden. Als Alternative können die Primer an Luft getrocknet sein.
erfindungsgemäßen Verfahren nützlich sine1. Die Ausrüstung wird vorzugsweise eine genortspezifische Kombination von
physiologischem Puffer mit 50% Glycerin (zur Aufrechterhaltung der enzymatischen Aktivität), bereitgestellt werden.
interessierenden Genort sein.
separat oder in der Ausrüstung bereitgestellt werden. Die Ausrüstung kann zusätzlich Reagentien zur Herstellung und Färbungeines Gels oder vorgefertigte Gele enthalten.
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Analyse genetischer Variation in einer amplifizierten DNA-Sequenz zur Bestimmung von Alleldifferenzen in der zu untersuchenden DNA kann zur Bestimmung des HLA-Typs verwendet werden. Primerpaare, die speziell genomische DNA amplifizieren, die mit einem HLA-Genort assoziiert ist, werden im folgenden im Detail beschrieben. In einer bevorzugten Ausführungsform definieren die Primer eine DNA-Sequenz, die alle Exons enthält, welche für die allele Variabilität kodieren, die mit dem HLA-Genort assoziiert ist, zusammen mit mindestens einem Teil einer der benachbarten Intronsequenzen. Bei Klasse-I-Genorten sind die variablen Exons die zweiten und dritten Exons. Bei Klasse-Il-Genorten ist das variable Exon das zweite Exon. Die Primer sind vorzugsweise so lokalisiert, daß ein wesentlicher Teil der amplifizierten Sequenz Intronsequenzen entspricht.
Die Intronsequenzen liefern Restriktionsstellen, welche im Vergleich zu cDNA-Sequenzen zusätzliche Information über das Individuum liefern; z. B. den Haplotyp. Der Einfluß von Exons innerhalb der amplifizierten DNA-Sequenzen liefert nicht so viele genetische Variationen, die eine Unterscheidung zwischen Allelen ermöglichen, wie eine Intronsequenz derselben Länge, insbesondere bei konstanten Exons. Diese zusätzliche Intronsequenz-Information ist besonders wertvoll bei Vaterschaftsbestimmungen und in der Gerichtsmedizin. Sie ist ebenfalls wertvoll für Bestimmungen bei Transplantationen bezüglich Gewebeabstimmung, insofern als die variablen Längen der Intronsequenzen, die in der amplifizierten, von den Primern erzeugten Sequenz enthalten sind, es ermöglichen, eine Unterscheidung zwischen bestimmten Heterozygoten (zwei verschiedene Allele) und Homozygoten (zwei Kopien von einem AIIeI) zu treffen.
Alleldifferenzen in den DNA-Sequenzen von HLA-Genorten werden unten erläutert. Die Tabellen veranschaulichen die Sequenzhomologie verschiedener Adele und geben exemplarische Primer-Bindungsstellen an. Tabelle 1 veranschaulicht die Gegenüberstellung („Alignment") der Nukleotide der Klasse IA2, A3, Ax, A24, (früher als A9 bezeichnet), B 27, B58 (früher als B17 bezeichnet), C1, C2 und C3 Allelsequenzen in der intervenierenden Sequenz (IVS) I und III. (Die in den Tabellen und in der Beschreibung verwendeten Gensequenzen und deren Numerierung können in der Genbank und/oder den Sequenzdatenbanken der European Molecular Biological Laboratories [EMBL] gefunden werden.) Die unterstrichenen Nukleotido repräsentieren die Region der Sequenz, an die sich exemplarische genspezifische oder Klasse-l-spezifische Primer binden. Tabelle 2 veranschaulicht die Gegenüberstellung der Nukleotide in IVSI und Il der DQA3-(jetzt DQA1 0301), DQA1.2-(JeUt DQA1 0102) und DQA4.1-(jetzt DQA1 0501) AIIeIe des DQA1-Genorts (früher bezeichnet als DR4-, DR6- und DR3-Allele des DQA1-Genorts). Die unterstrichenen Nukleotide repräsentieren die Fleglonon der Sequenz, an die sich exemplarische DQA1 genortspezlfische Primer binden.
Tabele 3 veranschaulicht die Gegenüberstellung der Nukleotide in IVS I, Exon 2 und IVS Il von zwei Individuen, die das DQw1v. AIIeI (hier als DQw 1va und DQw 1»b für die oberen und unteren Sequenzen in der Tabelle bezeichnet), die DQw2- und DQw8-Allele des DQB1-Genorts aufweisen. Die in den DQw 1vb-, DQw2- und DÜw8-Allelsequenzen angegebenen Nukleotide sind diejenigen, die sich von der OQw 1va-Sequenz unterscheiden. Exon 2 beginnt bei Nukleotid 599 und endet bei Nukleotid 870 der DQw1va-Allelsequenz. Die unterstrichenen Nukleotide repräsentieren die Regionen der Sequenz, an die sich exemplarische DQB1 genortspezifische Primer binden.
Tabelle 4 veranschaulicht die Gegenüberstellung der Nukleotide in IVS I, Exon 2 und IVS Il der DPB4.1-, DPB9-, New- und DPw3-Allelen dos DPBI-Genorts. Die in den DPB9-, New- und DPw3-Allelsequenzen angegebenen Nukleotide sind diejenigen, ate sich von der DPB4.1-Sequenz unterschieden. Exon 2 beginnt bei Nukleotid 7644 und endet bei Nukleotid 7907 der DPB4.1-Allelsequenz. Die unterstrichenen Nukleotide repräsentieren die Region der Sequenz, an die sich exemplarische DPB1 genortspezifische Primer binden.
Tabelle 1 Klasse I
Seq
GATTAGCMT.ATTGTX£GACCTACTGTATCAATAAAC T
38 AAAMGGAMCTGGTCTXn'ATGAGAATXrrcTAa^GGTOCTTTCAGACAA 38 GG
88 (^CTT^OCAGGTTTAMGAGAAMCTOCTGACIX^^ 88
B27 1 G^GCICACTCTCTGGCATCAAGTTC TCCGTG
Cl 138 AGGGO^AGCTX^CTGIXn-GGCAGCMGTTCCCC^TGGTOSAGrTrcCCTG
C2 138 T-
A2 1 MGCTTACTCTCTGGCACCAAAC TCCATGGGATGATTTTTCCTTCC TAG
B27 32 . ATCAGTTTCCCT .
Cl 188 TACAAGAGTCCAAGGGGAGAGGTAaCTGTCCTTT AT TTTGCTGGATGTAG C2 187
A2 50 AAGAGTCCAGGTGGACAGGTAA QGAGTGGGAGT CAGGGAGTC
B 27 44 ACACAAGA TCCAAGAGGAGAGGTAA GGAGT GAG AGGCAGGGAGTC
Cl 238 TTTAATATTACCT GAGGTAAGGTAA.GGC AAAGAGTGGG AGGCAGGGAGTC
C2 237 C- G
A2 98 CAGnCCAGGGACAGAGATTACGGGATAAAAAGTGAAAGGAGAGGGACG GGGXCAT
B27 91 CAGTT C^GGGACAGGGATTCCAGGAGGAGAAGTGAAGGGGAAGC GGG TGGGC
Cl 288 CAGTT CAGGGACGGGGATTCCAGGAGAAG TGAAGGGGAAG GGGCTGGGCG C2 288
A2 149 GOCGAG GGTTTCTCCCTTGTTTCT CAGACAGCTC TTGGGCCA A GAC
B27 141 GCCACIOGGG3TCIXrc<XTG3TTTX^^ GGAC
Cl 338 CAGCC TOGGGGTCIXnOCCTXXnTTOCACAGA(^GATCCTTGGCC AGGAC
C2 337 - - GG
-17- 299 Tabelle 1 (Fortsetzung) Klasse I Seq
A2 195 TCAQGGAGACATTGAGACAGAO: GCTTQGCACAGAAQCAGAGGGGTCAGGG
B27 191 TCAG3CAGACAGTGTGACAAAGAQGCT QGTGTAGGAGAAGAGGSATCAQG
Cl 388 TCAQGCACAaGTGTX^a\MGATQCTTQGTGTAC9GAGAAGAGGGATCAG C2 387 G
A2 246 CGAA GT02AGGG0C(XAGGCGTTGGCTCn^QGGTCIX^GG0G(XGAAGG
B27 241 ACGAACGT0CAAGQ0CCO3GGCG CGG TCTCAGGGTCTCAG3CTCCGAGAG Cl 438 ACGAA GTOCCAGGTOCOQGQCG GGGTTCIX^GGGTCTCAQGCTCEAAGGG
C2 438 -A
A2 296 CG3TCTATGGATKXX93AGTC(XAGanTGGGGATTOCOCMCr<^^ AGTT
A3 9 T A -
Ax 9 TG GC
A24 11 - - T ·
B27 291 OTrGTCKrATTGGQGAQQGGCACAGTTQGQG TTCCOCACTCOCACGAGTT Cl 488 QOCTCTOGCACTGGQGAGGOGOO^^
TCTTTTCTCCC TXnOCCMCETATCTAQGGTOCTTCrTCCTGGAT ACTCAC CTG C A G
C A GC AC C
TG-TCACTTCT TCIOCQUCCTATGTOGCXnXXrrTCTTCCAGGAT ACTCGT
T A
TG G
AA TCA - T
G GACGOGTCCCCATTTC CACIXXCATTGGGTGTCGGGT GTCTAGAGAAG C
GACGanxmj\ATTQCCAC^ TCT AGAAG C
AG C3 36 -ACCNN G
A2 449 CMTX^GTGTCGTCGCQGTXXCQGTTCTAAAGT OCGCACG
A3 164 T C
Ax 159 GCC C C
A24 161 A T
B27 442 CAATX^GTCTXXCXXXiGGTC(XAGTrCTAAAGT CCCCACG
Cl 635 CAATC^GCGTCTOGQCAGTCCajGTTCrAAAGTCCC CAGT
C2 637 C
C3 87 GG G
-18- 299 Tabelle 1 (Fortsetzung) Klasse I Seq
A2 489 CAOCCACXOGGACTCAGA TTCTOCOCAGAOGOCGAQGATQGC C
A3 204 TOGTGGAGAOCAGGC
Ax 199 TG
A24 201
B27 482 CACOCACOCGGACTCAGA ATCTCCTCAGAGGCCGAG ATGCG G
B58 52
Cl 675 CAOCCACCCGGACTCAGA TTCTOCCCAGACGCCGAG ATGCG G
C2 677 G
C3 127
1, EXDM
A2 532 GTCATGGCGCCCCGMXCTCCTOCTGCTACTCTC^^ A3 262 C C
Ax 242 C CGAC
A24 244 G C
B27 524 GTXCACQGOCOCCCGMCOCTOCTCCTOCT^^ B58 94 G
Cl 717 GTCATGCCQCCQCGMCCOCATOCranX^^ C2 719 C3 169 G
A2 574 TGCOCCTGACCCAGACCTGGGCGG
A3 305
Ax 285 C
A24 287 A
B27 567 TGGOCCTGAOCGAGAOCTGGGCTG
B58 137 C
Cl 760 TGGOCCTCACOGAGAOCTOGGCCT
C 2 762
C3 212 G
rvsi
CTGAGTGCGGGGTCGGG AGGGAAACG GCC TCTCT GGGGAGAAGCAACGGGOC G
C AC C GT
A TC T-G- G NG G CG
TCG C C G CG
GTGAGTGOGGGGICAGGCAGGGAAATG GCC TCTCT GGGGAGGAGCGAGGGGA CG
G- C
CTGACTGCGGGGTTGGG AGGGAAACG GCC TCT GOCGAGAGGMCGAGGTGCCCG
G G T T GG
A2 652 OCTGGC GGGGGCGCAGGACCOSGGMGQCGOC^XX&GAG
A3 383 GG C
Ax 357 C G T AG A
A24 367 A
B27 645 CAGGC GGGGGCGC^GGACCCGGGGAGOCGCGCOX^GGAG^
B58 215 TA
Cl 838 CCCGGC AGG CGCm;ACCCGGGa\GCCGa£AGGGAGGAGGGTCGG
C2 840 GG- AGC
C3 291 GGA G
A2 | 599 |
A3 | 329 |
Ax | 309 |
A24 | 311 |
B27 | 591 |
B 58 | 161 |
Cl | 784 |
C2 | 786 |
C3 | 236 |
-19- 299 Tabelle 1 (Fortsetzung) Klasse I Seq
A2 711 OCACrOCTOGTOCOCAG
A3 442 ~ G-C
Ax 417 TC CT
B27 703 (rOCTCCTOGCCCCCAG
Cl 895 OCOCTCCTCGCCCCCAG
C2 898 T '
IVS3
A2 1515 GTACX^GGGGCCAQGG3GCGOCriC(XTGATXXXrTGTAGATCTCO0SG^
Ax 1222 C ACA -
A24 1228 G
C2 1705 T G
C3 1155 - TG
A2 1574 ACMGGAGGGGAGAOUTTGGGAGCM^CTAGMTATCGCOCriCOCTCTGGT
A3 1303 C C GATT
Ax 1280 AA A T
A24 1287 C B27 1567 AOGAGMGAGGAGGAAMTXTtGATCAGOGCTAGMTGTCGXCIXIZCTTGAAT
Cl 1763 ACGAGGAGGGC^GGAAMTXXXHAT^GCGCTAG^TATGGOCCTCCCTGAAAT
A3 1356 T TTT - GA G
Ax 1333 T T
A24 1341 T
B27 1620 GSAGMTGC^TGAGTTTTCCTGAGTTTC
Cl 1816 GGAGAATGGGATGAGTTTTCCTGAGTTTC
A2 1678 CXCIGAGQTKXXZOZTGCICTCtGh (^CMTTAAGGGATAAAATCTCTGAAGGA
A3 1406 TG AA-G
Ax 1372 G- GG-
A24 1392 C
B27 1649 OXrrGAGGGOGCCXnxrnCTCTCT AGGACMITMGGGATXSACGTCTCTGAGGAA
Cl 1845 CTCTGAGGQXOOCICTXCTCTCT AQGACAATTAAQGGATGAAGTCCTTGAGGAA
C3 1295 G A
-20- 299 Tabelle 1 (Fortsetzung) Klasse I Seq
A2 1733 ATGAOGQG MGAaSATCXTXjGMTACTCATGAGTGGTTCOCTTTGACAC A3 1460 G TTGTG G
Ax 1426 ATGM GAG A24 1447 A C
B27 1704 ATGGAC<^KMGACAGTC0CrrAGMTACrcATX^G»3GTCC0CrriTGACCC B58 1278 Cl 1900 ATGGAQGGGMGACAGTOCCTCGMTACTCATX^^^ C2 1901
C3 1351 A
A2 1783 ACA^QGCAGCAGCCTTGGG COOG TGACTTTTOCTXnX^QGCCTTGTTUTCTGC
A3 1510 C GA G
Ax 1477 T C
A24 1497 C A
B27 1755 CTGCAGCAGCCTTGGGMGCG TGACTTTTOCTCTCAGGCCTTGTTCACAGC
B58 1329 T T
Cl 1951 CTTTGACCAClOCAGCAGCTGTQGTCAaxnO^ CTCIO\GGCCTTGTTCTCTGC
C2 1952
C3 1411
A2 1837 TC^CACTCMTXnraxnOCm^
A3 1560 C
/VX JL jZÖ v<. *"i¥--—— ' —— ' \^
A24 1547 C
B27 1806 CTX^CACIO\GTGTGTTTOGGXTXnX^
Cl 2013 CTX^CGTTCMTGTCTTTGMQGTTTGATTOC^^
C3 1464 C
A2 1891 TQCACTCAGGTCAQGAOCaGMGTCQCTGTC^ TTTCCACGGMTAG
A3 1614 TC A
Ax 1567 T
A24 1600 A
B27 1860 TCCACTCAGAT(^QGAGCAGMGTOCCTGTTCCOCGCTCAGAGACt CGMCTTTCCMTGMTAG
Cl 2067 TOC^CTCAGGTX^QGAOCAGMGTOXTGTTOCTOCCICAGAGACrAGMCT^^
A2 1955 GAGATTATQC^QGTOCCTGTGTCC^GGCIOGTGTCI^^ A3 1664 —
Ax 1632 TT CT T
A24 1650 — A ATG
B27 1925 GAGAmTCOCAOgiOCCTXrcnXiaGGCT^ CTTCCCCA
Cl 2132 GAGATTATCC<^GGTGCCTX?IGTCCAG3CTG
Tabelle 1 (Fortsetzung) Klasse I Seq
A2 2014 TCa^GGTGIXXTUrOCATTCTCAAGA TAGOCACATGTGTGCrQGAGGAGTGTCOCATG
A3 1721 G GCT
Ax 1691 C T CA A GCT
A24 1706 G CA T
B27 1983 CECCAGGTGrra^GTCCATTCTC AOGCTTOGTC^CATCGGTGGTCCTAGGGTGTCCCATG
B58 1557 A
Cl 2191 (TCCAQGTCTGCTGTXrATTCTC AGGATGGTICACATCQ30QCTGTTGGAGTGTCGCAAG
C2 2192 A
C3 1642 G
A2 2073 ACAGATCGAAAATGOCTGAATGATCTGACTCT TCCTGACAG 2113
A3 1780 GC TT CT 1820
Ax 1750 GC TT TT C T 1791
A24 1765 G GCAAAA C T 1784
B27 2042 AGAGATCCAMCCGOCTGMTTTTCTGACIXriTCCrAT CAG 2083
B58 1616 1656
Cl 2250 AGACATAC^MOTGTCTGMTTTTCTGACTCTTCCCGT CAG 2290
C2 2251 G 2292
C3 1701 , 1741
Tabelle 2 DQA1 Seq
A3 1 GATCTCTGTC TAGAATGTCCTGTTCTGAGCCAGTCCTGAGAGGAAAGGAAGTATAATCAA
Al.2 1 G A
A4.llC G AACG
A3 61 TTTGTTATTAACTGATGAAAGAATTAAGTGAAAGATAAACCTTAGGAAGC AGAGGGAAGT
Al. 2 61 CA TCC
A4.1 61 GT CA
A3 121 TAA TCTATGACTAAGAAAGTTAAGTACTCTGATAACTCATTCATTCCTTCT
Al. 2 122 A CCTAA TC CAA
A4.1 122 ,A CCTAA C C A CA A
A3 172 TTTGTTCATTTACATT atttaatcacaagtctatgatgtgccaggctctcaggaaata'
Al.2 178 A TCCA
A4.1 178 A G T CG A
A3 230 GTGAAAATTGG CACGCGATATTCTGCCCTTGTGTAGCACACACCGTAGTGGGAAAG
Al. 2 236 AAT G TAG
A4.1 237 ACATT G TTA
A3 28 6 AA GTGCACTTTTAACCGGACAACTATCAACACGAAGCGGGGAGGAAGCAGGGG
Al.2 293 A T . CTA
A4.1 294 A C A C AT A T
A3 339 CTGGAAATGTCCACAGACTTTGCCAAA GACAAAGCCCATAATATCTGAAAGTCAG
Al.2 347 G AA TG T
A4.1 348 T GG TG G T
A3 394 TTTCTTC CATCATTTTGTGTATTAAGGTTCTTTATTCCCCTGTTCTCTGCCTTCCT
Al.2 403 G CT CTC
A4.1 403 CT TCAT GC CA
A3 450 GCTTGTCATCTTCACTCATCAGCTGACCATGTTGCCTCTTACGGTGTAAACTTGTACCAG
Al.2 459 C GT
A4.1 462 CC T .
Tabelle 2 (Fortsetzung) DQA1 Seq
A3 510 Al.2 519 A4.1 522
A3 567 Al.2.576 A4.1 579
A3 622 Al.2 631 A4.1 634
A3 679 Al.2 688 A4.1 688
A3 740 Al.2 749 A4.1 749
A3 789 Al.2 802 A4.1 798
TC CC TCC
C CC TC C
C G G GA A A G
GAAGATTTGACCCGCAATTTGCACTGACAAACATCGCTGTGCTAAAACATAACTTGA G T GGG G G GC C
AA C
GTC A A
CCTTTCTTTAC TGATTTATCCCTTTATACCAAGTTTCATTATTTTCTTT
C TTAA A GC CC G C
CC CA
CCAAGAGGTCCCCAGATC
806 819 815
Tabelle 3 DQB1 Seq
1 MGCTTGTGCTaT^Cn^TGMTAMTGTUICTATXrrAGGACrcAGAGGT
03 TT A
51 GTAGG TiXTTTOCAACATAGAAGGGAGTGA A(XTCAAOGGG ACTTGGGA G
TT TT
C AC C TTT TA C CA AC GTGA CA C
AT AT C A
101 QGTAAATCTAQGCATGGGMQGMGGTATTTTACOCAGGGACCAAGAGAA C
151 TAOGOGTGTCAGMOSAGGOCAGGCTTMTTOCTGGAOCTATCTOGTCAT
G A G - A A A
G CG
201 TOCGTTGMCTCIO^GATTTATUTGGATMCTTTATCTCK^GGTATCC^
C C
G G
AG T T
251 GGAGOTCATGAAAMTGGGATTTCATGCGAGMCGOCCTGAT OCCTCTA
CA
Tabelle 3 (Fortsetzung) DQB1 Seq
C AT
CT CC
351 (^GGCTCACJ^Gr^GA^GGGCTTTCCTCCCITroCTG^^
CG A CC
C G CC C
401 C AGATTO^GMGOCCGCMAGMGGCGGGCAGAGCTGGGCAGAGCCGCC
CG CACCGG G -NNN
GC CGG G
451 GGGAGGATGCC^GGTCTOGAGCGCCAGGC^CJGGGCGGGCGGGMCTGGAG
CG TT
C AA
501 GT0GCG03GXGGTTOCACAGCTCCÄC<XI^
TGT G
551 GGGXGGGCGGGCTGGGGCC TGACTC^CCGGGCC<STGATfCCCCGCAGAG
A - GCA
GGGCCGGGGCC
601 GATTTCGTGTAGCAGTTTMGGGCATCTOT
651 GCGCCTGGGTCTTGTMCCAGACA^TOATMCCGAGAGGAGTACGCG^
G G AG . A AT T
GT A
701 GCITCGACAGCGAGGTGGGGGTCTACOGQGCG^
AT TTT
T .C
CC CA AA
OZ
801 GGCGGAGTTGGA (^CC<STGTC<^GA(^QWVCTACGAGGTOGQGTACCGCG
CG G CTACTA
A C T A CT A
-24- 299 Tabelle 3 (Fortsetzung) DQB1 Seq
851 CKAT0CTOCAGAQGAGAQGTGAGCnCGTOQCCariai3TGAQCGC A(XC
CCTCC GG -TTCGCC
CCT CC G G GCCT
901 TTGGOCGGGAOZOOGAGTCIOTCTGCCGGGAGGGCG ATGGGGGCGAGGTC
1001 OQGGGGTGGTOGGGGCAGGTGCATCGGAGGGGOSGGGACCTAGGGCAGAG
CGGT - C T A
1051 CAGGGGGA^GCAGAGTCGGOCAGGCTGOCT^^
G TA TG-T
A | ATC | G | A A | C A CCG | G CAA TTC GCGAA C C | - CTG C- AA |
AA | -C C | HTG | AGCC | [TCATTOCAOCOCAGGGAAAGGAGGCGGCGG | ||
G | - | 03 . | ||||
:CAG1 | ||||||
C TT |
C C C-T
1151 TATGCGTTTGXTOCTOGTGCCTTAOCTTCGCT
TA
1201 ca^GTGca^co^iciTcri^
A TT G C CG G
1251 ACGCAGCMGXOCACAGTOrGCATTCGCCGCA GGAAGCTT , 1292
T CG G T CTA A AGC CATG AGTGGGAAGCTT
Tabelle 4 DPBI Seq
DPB4.1 7546 GGGAAGATTTGGGAAGAATCGTTAATAT
DPB4.1 7574 TGAGAGAGAGAGGGAGAMGAOGATTAGATGAGAGTQGCGCCTQZGCTCATGTOCQOCa:
DPB4.1 7634 GTOCOOGCAGAGMTTAOCTTTTOCAGGGACGGaGGMTXOACGOTITTAATGGGACA DPB9 GGAT G GCA TT
New GGAT G GCA TT
BPB4.1 7694 (^GOXTTCCTCUAGAC^TACATCTAC^OCGG^
DPB9 T
New T
DPB4.1 7754 GTGGGGGAGTTGCOGQOGGTCACGGAGCrGGGQOGGGCTGCTGCGGAGTACTGGAACAGC DPB9 AAC
New AAC
DPB4.1 7814 aGMGGAC^TGCTGGAGGAGMGOGGGCAGTGXGGAC^GGATGTGCAGACACMCrAC DPB9 G GA
New C GA
DPw3 C GA
DPB4.1 7874 GAGCTGGGOGQXCCATGACQCTQCAGOGCq^ DPB9 AAGG
New AAGG
DPw3 AAGG
DPB4.1 7934 CGC^GQQCAGXOOGCGGGCCCGTGCCCAG
Exemplarische HLA-genortspezi'ische Primer sind im folgenden aufgeführt. Jeder der Primer hybridisiert mit mindestens aufeinanderfolgenden Nukleotiden der ausgewählton Region der Allelsequenz. Die Bezeichnung eines exemplarischen bevorzugten Primers zusammen mit seiner Sequenz ist ebenfalls gezeigt. Bei vielen Primern ist die Sequenz für alle anderen AIIeIe des Genorts nicht identisch. Für jeden der folgenden bevorzugten Primer weisen zusätzliche bevorzugte Primer Sequenzen auf, die den Sequenzen aus der homologen Region von anderen Allelen des Genorts oder deren Komplementen entsprechen. In einer Ausführungsform werden Genorte der Klasse I amplifiziert durch Verwendung eines A-, B- oder C-genortspezifischen Primers zusammen mit einem Klasse-l-genortspezifischen Primer. Der Klasse I Primer hybridisiert bevorzugt mit IVS-lll-Sequenzei (oder deren Komplementen) oder, bevorzugter, mit IVS-I- Sequenzen (oder deren Komplementen). Der Ausdruck „Klasse-l-spezifischer Primer", wie hier verwendet, bedeutet, daß der Primer mit einer Allelsequenz (oder deren Komplement) für mindestens zwei verschiedene Genorte der Klasse I hybridisiert und unter den verwendeten Bedingungen nicht mit Allelsequenzen eines Klasse-Il-Genorts hybridisiert. Vorzugsweise hybridisiert der Klasse-I-Primer mit mindestens einem AIIeI von jedem der A-, B- und C-Genorte. Besonders bevorzugt hybridisiert der Klasse-I-Primer mit einer Vielzahl von, am bevorzugtesten mit allen, Klasse-I-Allel-Genorten oder deren Komplementen. Exemplarische Klasse-l-genortspezifische Primer sind ebenfalls im folgenden aufgeführt.
HLA-Primer
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
nt 1541-1564 von A 2 SGD006.AIVS3.R1NP GCCCGGGAGATCTACAGGCGATCA
nt 1533-1553vonA2
A 2.1
nt 1667-1685 von A 2
A 2.2
nt 1704-1717 von A 2 A 2.3 CACAATTAAGGGAT
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Lokalisierung im AIIeI: Bezeichnung: Sequenz: >
Sequenz:
nt1582-1604vonB17 SGD010.BIVS3.R2NP CTAGGACCACCCATGTGACAGC
nt 500-528 von B 27
B2.1
nt545-566vonB27
B 2.2
nt 1852-1876 von B 27
B 2.3
nt 1945-1976 von B 27
B 2.4
nt 2009-2031 von B27
B 2.5
nt 2054-2079 von B 27
B 2.6
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
nt 1665-1687 von C3 SGD011.CIVS3.R2NP AACAGCGCCCATGTGACCATCCT
nt 499-525 von C1
C2.1
nt 642-674 von C1
C 2.2
nt 738-755vonC1
C 2.3
nt 1970-1987 von C1 C 2.4 TGTGGTCAGGCTGCTGAC
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
nt 2032-2051 von C1 C AAGGTTTGATTCCAGCTT
nt2180-2217vonC1
C
nt 2222-2245 von C1
C
"Jasse-l-Genort-spezlfische Primer
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
nt 599-620 von A SGD005.IIVS1.LNP GTGAGTGCGGGGTCGGGAGGGA
nt 489-506 von A
1.1
nt 574-595vonA2
1.2
nt 691-711 von A
1.3
nt 1816-1831 von A
1.4
nt1980-1923vonA2
1.5
DQA1-Genort-spezifische Primer Lokalisierung im AIIeI: nt 23-41 von DOA
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
Sequenz:
nt 45-64 von DQA
DQA3E1a
nt 444-463 von DQA
DQA3E1D
nt 536-553 von DQA
DQA3E1C
nt 705-723 von DQA
DQA3E1d
nt 789-806 von DQA
SGD003.DQA1.RNP
sequence, Accession No. K01171) Bezeichnung: DRAE1
Lokalisierung im AIIeI: Bezeichnung:
Sequenz: Lokalisierung im AIIeI:
Bezeichnung: Sequenz:
nt98-118vonDRAHUMMHDRAM(1183nt sequence, Accession No. K01171) DRA 5Έ2 (5' indicates the primer is used as the 5'primer) AGAACATQTGATCATCCAGGC
nt 319-341 von DRA HUMMHDRAM (1183 nt sequence, Accession No. K01171) . -DRA3'E2 CCAACTATACTCCGATCACCAAT
sequence, Accession No. K01171 j Bezeichnung: DRB E1
sequence, Accession No. K01171) Bezeichnung: DRBB1E 2
sequence, Accession No. K01171) Bezeichnung: DRB3'E2
hybridisiert und der 3'-stromabwärts-Primer mit dem Komplement des 3'-Endes der Sequenz hybridisiert. Die Primeramplifizieren eine Sequenz zwischen den Regionen der DNA, an die sich die Primer binden, und deren Komplementärsequenzeinschließlich der Region, an die sich die Primer binden. Deshalb hängt für jeden der oben beschriebenen Primer die Bindung anden für HLA kodierenden Strang oder die Bindung an sein Komplement davon ab, ob der Primer in diesem speziellen Primerpaarals 5'-stromaufwärts-Primer oder als 3'-stromabwärts-Pr!mer fungiert.
einen für den A-, B- oder C-Genort spezifischen Primer. Vorzugsweise ist der Klasse-l-genortspezifische Primer der 5'-stromaufwärts-Primer und hybridisiert mit einem Teil des Komplements der IVS I. In diesem Fall ist der genortspezifische Primervorzugsweise der 3'-stromabwärts-Primer und hybridisiert mit IVS III. Die Primerpaare amplifizieren eine Sequenz von ungefähr1,0 bis ungefähr 1,5 Kb.
amplifizieren, die nicht das oder die variablen Exons enthält. In einem Beispiel dieser Ausführungsform sind der3'-stromabwärts-Primer und der 5'-stromaufwärts-Primer Klasse-l-genortspezifische Primer, die mit IVS III und seinem
amplifiziert.
spezifisch für nur einen Genort sind, an der Amplifizierung der DRB-, DQA1-, DQB- und DPB-Genorte beteiligt. Deshalb ist beijedem der bevorzugten Klasse-Il-Genort-Primerpaare jeder Primer des Paares nur an der Amplifizierung des ausgewählten
In einer Ausführungsform schließt die amplifizierte Sequenz genügend große Intronsequenzen ein, um Längenpolymorphismen zu enthalten. Die Primer-definierten Längenpolymorphismen (PDLPs) zeigen das HLA-Genortallel in der Probe an. Für einige HLA-Genorte erzeugt die Verwendung eines einzelnen Primerpaars Primer-definierte Längenpolymorphismen, die zwischen einigen der AIIeIe des Genorts unterscheiden. Für andere Genorte werden zwei oder mehr Primerpaare in getrennten Amplifizierungsschritten verwendet, um die AIIeIe zu unterscheiden. Für weitere Genorte wird die amplifizierte DNA-Sequenz mit einer oder mehreren Restriktionsendonukleasen gespalten, um zwischen den Allelen zu unterscheiden. Die Primerdefinierten Längenpolymorphismen sind besonders nützlich in Screening-Verfahren.
In einer weiteren Ausführungsform liefert die Erfindung ein verbessertes Verfahren, welches PCR Amplifizierung einer genomischen HLA-DNA-Sequenz eines HLA Genorts verwendet. Nach der Amplifizierung wird die amplifizierte DNA-Sequenz mit mindestens einer Endonuklease kombiniert, um ein Fragmentgemisch zu erzeugen. Die Endonuklease spaltet die amplifizierte DNA-Sequenz in einen Satz von Fragmenten mit unterschiedlichen Fragmentlängen. Üblicherweise wird die amplifizierte DNA aufgeteilt und zwei oder mehr Endonukleasen-Fragmentgemische werden erzeugt. Die Fragmentgemische können getrennt oder kombiniert dazu verwendet werden, um RFLP-Muster zu erzeugen, die die Unterscheidung zwischen Individuen erlauben. Zusätzliche Fragmentgemische können hergestellt werden, um vergrößerte Spezif ität zu liefern und um damit sogar eng verwandte Individuen mit demselben HLA-Typ zu unterscheiden.
In einer bevorzugten Ausführungsform kann die Anwesenheit eines bestimmten AIIeIs dadurch verifiziert werden, daß man ein zweistuf iges Amplifizierungsverfahren durchgeführt, in dem eine amplifizierte Sequenz, die von dem ersten Primerpaar erzeugt wurde, mit einem zweiten Primerpaar amplifiziert wird, welches sich an eine Sequenz innerhalb der ersten amplifizierten Sequenz bindet, und damit eine neue Sequenz definiert. Das erste Primerpaar kann für ein oder mehrere AIIeIe des HLA-Genorts spezifisch sein. Das zweite Primerpaar ist vorzugsweise für ein statt für mehrere AIIeIe des HLA-Genorts spezifisch. Die Anwesenheit einer amplifizierten Sequenz zeigt die Anwesenheit dieses AIIeIs an, was durch die Produktion charakteristischer RFLP-Muster Bestätigung findet.
Um RFLP-Muster zu analysieren, werden die Fragmente in dem Fragmentgemisch nach der Größe aufgetrennt und dann sichtbar gemacht. Im Falle der Bestimmung eines speziellen HLA-Genorts ist die Analyse darauf gerichtet, diejenigen zwei Allelsequenzen nachzuweisen, die diesen Genort eindeutig in jedem Individuum charakterisieren. Dies wird üblicherweise durchgeführt, indem die RFLP-Muster des Probenfragmentsgemischs mit einem Muster verglichen werden, welches von einer Kontrollprobe eines bekannten HLA-Alleltyps arzeugt wurde. Wenn die Methode jedoch für Vaterschaftsüberprüfungen oder in der Gerichtsmedizin verwendet wird, muß die Analyse keinen speziellen Genort oder Genorte identifizieren, sondern sie kann ausgeführt werden durch den Vergleich von einzelnen oder mehreren RFLP-Mustern eines Individuums mit denen eines anderen Individuums unter Verwendung derselben Restriktionsendonuklease und derselben Primer, um Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen den Mustern zu bestimmen.
Die Anzahl der Fragmentgemische, die für eine bestimmte Analyse herzustellen sind, wird von der gewünschten Information und der speziellen Probe, welche zu analysieren ist, abhängen. Beispielsweise kann ein Fragmentgemisch ausreichend sein, um festzustellen, daß ein Individuum nicht die Person sein kann, deren Blut am Ort eines Verbrechens gefunden wurde. Im allgemeinen wird die Verwendung von zwei oder drei Fragmentgemischen für jeden der zwei oder drei HLA-Genorte für die Anwendung bei Übereinstimmungsversuchen (Gerichtsmedizin, Vaterschaft) ausreichend sein. Zur vollständigen Bestimmung des HLA-Haplotyps, zum Beispiel für eine Transplantation, kann es nötig sein, zusätzliche Genorte zu analysieren. Wie oben beschrieben, können Kombinationen von Primerpaaren im Amplifizierungsverfahren verwendet werden, um einen bestimmten HLA-DNA-Genort zu amplifizieren, unabhängig von dem in der Probe vorhandenen AIIeI. In einer bevorzugten Ausführungsform werden Proben der HLA-DNA in Aliquote aufgeteilt, welche ähnliche Mengen von DNA enthalten, und mit Primerpaaren (oder Kombinationen von Primerpaaren) amplifiziort, um amplifizierte DNA-Sequenzen für zusätzliche HLA-Genorte zu erzeugen. Jede Amplifizierungsmischung enthält nur Primerpaare für einen HLA-Genort. Die amplifizierten Sequenzen werden vorzugsweise gleichzeitig weiterbehandelt, so daß eine Anzahl von durch Endonukleasen erzeugten RFLP-Fragmentmustern von einer Probe erzeugt werden kann. Auf diese Weise kann der HLA-Typ für eine Anzahl von Allelen gleichzeitig bestimmt werden. ·
Als Alternative liefert die Herstellung einer Anzahl von RFLP-Fragmentmustern zusätzliche Vergleiche von Mustern zur Unterscheidung von Proben in gerichtsmedizinischen und Vaterschaftsanalysen, wo die Analyse eines Genorts häufig nicht ausreicht, genügend Information für die Bestimmung zu liefern, ob die Proben-DNA dasselbe AIIeI hat wie die Vergleichsprobe. Die Verwendung von HLA-Typen in Vaterschaftstests oder Tests für Transplantationen und bei der Diagnose und Vorhersage von Krankheiten wird in Basic & Clinical Immunology, 3.Auflage (1980), Lange Medical Publications, Seiten 187-190, beschrieben. HLA-Bestimmungen fallen in zwei allgemeine Kategorien. Die erste betrifft die Übereinstimmung von DNA eines Individuums und einer Probe. Diese Kategorie schließt Bestimmungen in der Gerichtsmedizin und Vaterschaftstests ein. Für die Analyse der Kategorie 1 ist der spezielle HLA-Typ weniger wichtig als die Frage, ob die DNA der Individuen verwandt ist. Die zweite Kategorie ist die Gewebebestimmung, wie bei der Verwendung bei Transplantationen. In diesem Fall wird die Abstoßung des gespendeten Bluts oder Gewebes davon abhängen, ob der Empfänger und der Spender dieselben oder verschiedene Antigene expremieren. Dies steht im Gegensatz zu Analysen der ersten Kategorie, wo Unterschiede in entweder den Introns oder den Exons der HLA-DNA entscheidend sind.
Zur Anwendung in der Gerichtsmedizin werden die DNA-Probe de» mutmaßlichen Täters und DNA, die am Ort des Verbrechens gefunden wurde, gleichzeitig analysiert und verglichen, um zu beistimmen, ob die DNA vom selben Individuum stammt. Die Bestimmung schließt vorzugsweise die Analysen von mindestens drei Fragmentmustern der amplifizierten DNA des D0A1-Genorts und vorzugsweise auch des A-Genorts ein. Besonders bevorzugt schließt die Bestimmung auch die Analyse von mindestens drei Fragmentgemischen amplifizierter DNA eines zusätzlichen Genorts, z. B. des DPB-Genorts ein. Auf diese Weise erhält man eine ausreichende Wahrscheinlichkeit dafür, daß die Unterschiede zwischen den DNA-Proben feststellbar sind. Für Vaterschaftstests umfaßt die Analyse den Vergleich von DNA des Kindes, der Mutter und des mutmaßlichen Vaters, um die Wahrscheinlichkeit zu bestimmen, daß das Kind den obligaten DNA-Haplotyp des mutmaßlichen Vaters geerbt hat. Daß heißt, jede DNA-Sequenz des Kindes, welche nicht in der DNA der Mutter anwesend ist, muß vom mutmaßlichen Vater stammen können. Die Analyse von zwei oder drei Fragmentgemischen des DQA1-Genorts und vorzugsweise auch des A-Genorts ist
üblicherweise ausreichend. Bevorzugter schließt die Bestimmung auch die Analyse von Fragmentgemischen eines zusätzlichen Genorts, z. B. des DPB-Genorte, ein.
Für Bestimmungen des Gewebetyps für Übereinstimmungstests zur Transplantation, reicht oft die Analyse von drei Genorten (HLAA, B und DR) aus. Vorzugsweise schließt die endgültige Analyse auch den Vergle'ch zusätzlicher Genorte wie DQ und DP ein.
spaltet beispielsweise Bsrl amplifizierte Sequenzen der A2-, A3- und A9-Allele, definiert durch die Primer SGD005.IIVS1 .LNP und
93). Die Fragmentmuster zeigen deutlich auf, welches der drei A-AIIeIe anwesend ist. Die folgende Tabelle zeigt eine Anzahlexemplarischer Endonukleasen, welche unterschiedliche RFLP-Fragmentmuster für exemplarische A-Allelsequenzenerzeugen.
von der Endonuklease erzeugten Satz, aufgelistet. Der erste Teil der Tabelle zeigt die RLFP-Fragmeniiängen unter VerwendungderSGD009.AIVS3.R2NP und SGD005.IIVS1.LNP genannten Primer, welche die längere der zwei beispielhaften Sequenzenerzeugen. Der zweite Teil der Tabelle zeigt RFLP-Fragmentlängen unter Verwendung der SGD006.AIVS3.R1 NP und
SGD003.DQA1.RNP.
unterscheiden ist, welcher der drei A-AIIeIe in der Probe anwesend ist.
A-Lang
Bsrl | A2 A3 A9 | 809 | 740 | 691 | 619 | 462 | 335 | 283 | 256 | 80 | 93 | f |
CfM 01 | A2 A3 A9 | 1055 | 786 | 473 | 399 399 399 | 245 247 | ||||||
Drall | A2 A3 A9 | 698 | 596 | 427 | 369 | 315 | 251 251 251 | 247 | 138 | |||
Fokl | A2 A3 A9 | 1004 | 728 | 515 | 248 | 225 | 213 | 151 151 151 | 72 | |||
Gsul | A2 A3 A9. | 904 | 868 | 638 | 547 | 523 | 419 | 373 | 36 | 51 | ||
Hphl | A2 A3 A9 | 1040 | 643 | 419 419 | 375 373 | 239 | 218 | 163 | 138 | |||
Mboll | A2 A3 A9 | 1349 | 1011 | 893 | 194 | 165 | 143 143 | 132 | 115 | 138 | ||
Ppuml | A2 A3 A9 | 698 | 676 | 503 | 369 | 364 | 295 | ro ro ro cn cn cn | 242 | |||
Pssl | A2 A3 A9 | 695 | 596 | 427 | 366 | 315 | 295 | ro ro ro cn cn cn | 242 | |||
Bsrl A 2 691 254
A3 345 335 283
A9 619 256 93
CfM 01 A 2
A3
A9 Drall A 2
A3
A9
Fokl A 2
A3
A9 Gsul A2
A3
A9
Hphl A 2 A3 A9
Mboll A 2 A3 A9
Ppuml A 2
A3
A 9
Pssl A 2
A3
A 9
315 | 295 | 251 | 210 | 138 | 143 | 129 | 51 | |
251 | 210 | 143 | 129 | 51 | ||||
427 | 293 | 251 | 210 | 146 | 129 | |||
248 | 151 | 36 | ||||||
225 | 213 | 151 | ||||||
539 | 868 | 151 | ||||||
61 | ||||||||
904 | 59 | |||||||
414 | 373 | 178 | ||||||
554 | 411 | 339 | ||||||
414 | 375 | 177 | ||||||
373 | 178 | |||||||
257 | 251 | 212 | 72 | 69 |
251 | 210 | 66 | ||
219 | 211 | 72 | ||
251 | 72 | |||
251 | 207 | 72 | 66 | |
251 | 208 | |||
UD
oo
UD
OJ OJ —I | OJ UD | xi- OO | ι—I | UI co | O ro | UJ co | UJ co | OJ UD | CM CO | co | OJ | OJ | OJ | O | 229 | O co· | UD | 226 | H OO | I^ i—I x* | |
UD co | ι—I xi- | OJ co | OO OJ | CO oo | xi· OJ | 263 | cn ro | ||||||||||||||
xi- UD | UD CO | UD UD | xi- UD | UI | UD CO | UD CO | OO | 300 | |||||||||||||
UD UI | UD UD | CO xi- | O | O xi- | H i—1 xi- xi- H H | ||||||||||||||||
UD | cn co | co co | xi- Xl- | UD Γ-. | CO H | ||||||||||||||||
cn cn | CD CO | co co | OJ ι—I | cn CO | OJ | Xi- UI | ι—I ι—I | ||||||||||||||
332 | CO OJ —I | cn | cn cn | xi- oo ι—I | CO | xi- OJ •—I | |||||||||||||||
338 | OJ OJ ι—I | f—4 O ι—I | cn xl- r—I | 123 | |||||||||||||||||
(O H | OJ CD —I | xi- cn ι—I | UD UD ι—I | OO •—ι | 266 | ||||||||||||||||
OJ ι—I | |||||||||||||||||||||
ι—I CD OJ | UD ι—I | cn 1—· i—4 | 190 | ||||||||||||||||||
287 | I—I OJ | 223 | |||||||||||||||||||
335 | cn t 1 OJ | 366 | 214 | UD ι—I OJ | 458 | ||||||||||||||||
277 | |||||||||||||||||||||
388 | 395 | 353 | IO ι—I CO | 294 | |||||||||||||||||
335 | O xi- | 330 | |||||||||||||||||||
449 | |||||||||||||||||||||
t~- UD CO
CO OJ OJ
UD xi-xi-
CDOO· O1O-O" Cf(O-O- OO1O- O1O1O1 OOO* OO1O
ClOO QQQ QQQ QQQ QQQ ClGtCS QQQ
•r- (U O
>
-a
sz
O Q Σ
UI CD UD O
H OJ OJ CO
Die Träger genetisch bedingter Krankheiten und die von der Krankheit Betroffenen können durch Verwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens identifiziert werden. Abhängig von der Krankheit kann die Screening-Analyse dazu verwendet werden, um die Anwesenheit von einem oder mehreren mit der Krankheit assoziierten Allelen oder die Anwesenheit von mit der Krankheit assoziierten Haplotypen nachzuweisen. Darüber hinaus kann das Verfahren durch die Analyse von Haplotypen genetisch bedingte Krankheiten nachweisen, die nicht mit Variationen in kodierenden Regionen assoziiert sind, sondern in regulatorischen oder anderen nicht translatierten Regionen des Genorts gefunden werden. Das Screening-Verfahren wird im folgenden am Beispiel der Analyse von zystischer Fibröse (CF) erläutert.
Zystische Fibröse ist eine autosomal-rezessive Krankheit, die die Anwesenheit eines mutierten Gens auf jedem Chromosom erfordert. CF ist die häufigste genetisch bedingte Krankheit bei Kaukasiern, die einmal auf 2000 Lebendgeburten auftritt. Es wird geschätzt, daß einer von 40 Kaukasiern Träger für die Krankheit ist.
Kürzlich wurde über eine spezifische Deletion dreier benachbarter Basenpaare im offenen Leserahmen für das mutmaßliche CF-Gen, welche zum Verlust eines Phenylalaninrests an Position 508 des vorhergesagten 1480 Aminosäuren langen Polypeptide führt, berichtet (Kerem et al., Science 245:1073-1080 (1989)). Basierend auf der Haplotyp-Analyse, ist die Deletion möglicherweise für die meisten CF-Mutationen in nordeuropäischen Populationen (ungefähr 68%) verantwortlich. Von einer zweiten Mutation wird berichtet, daß sie in einigen südeuropäischen Populationen vorherrschend ist. Weitere Daten weisen darauf hin, daß mehrere andere Mutationen die Krankheit verursachen können.
Studien der Haplotypen von Eltern von CF-Patienten (die notwendigerweise einen normalen Haplotyp und einen krankheitsassoziierten Haplotyp aufweisen) wiesen darauf hin, daß es mindestens 178 mirdem CF-Genort assoziierte Haplotypen gibt. Von diesen Haplotypen sind 90 nur mit der Krankheit assoziiert, 78 werden nur bei normalen Individuen gefunden und 10 sind sowohl mit der Krankheit als auch mit normalen Individuen assoziiert (Kerem et al., siehe oben). Die Krankheit wird offensichtlich durch mehrere verschiedene Mutationen verursacht, von denen einige mit sehr niedriger Frequenz in der Population auftreten. Wie durch die Information bezüglich des Haplotyps demonstriert, gibt es mehr mit dem Genort assoziierte Haplotypen als es mutierte AIIeIe gibt, die für die Krankheit verantwortlich sind.
Ein genetisches Screenlng-Programm (basierend auf der Amplifizierung von Exon-Regionen und Analyse der resultierenden amplifizierten DNA-Sequenzen mit Sonden, die spezifisch sind für jede der Mutationen, oder mit Enzymen, die RFLP-Muster erzeugen, die charakteristisch sind für jede Mutation) mag Jahre zur Entwicklung benötigen. Solche Tests würden von Nachweis und Charakterisierung jeder der Mutationen abhängen oder mindestens der Mutationen, die ungefähr 90 bis 95% oder mehr der Krankheitsfälle verursachen. Die Alternative ist, nur ungefähr 70 bis 80% der CF-assoziierten Gene nachzuweisen. Diese Alternative wird allgemein als nicht akzeptabel betrachtet und ist der Grund für erhebliche Besorgnis der wissenschaftlichen Fachwelt. Das erfindungsgemäße Verfahren bestimmt direkt die mit dem Genort assoziierten Haplotypen und kann unter den gegenwärtig 178 als mit dem Genort der Krankheit assoziiert erkannten Haplotypen Haplotypen nachweisen. Weitere Haplotypen, die mit der Krankheit assoziiert sind, können leicht durch die schnelle Analyse von DNA zahlreicher CF-Patienten mit Hilfe der erfindungsgemäßen Verfahren bestimmt werden. Darüber hinaus können irgendwelche Mutationen, die mit nicht kodierenden regulatorischen Regionen assoziiert sein können, ebenfalls durch dieses Verfahren nachgewiesen und durch das Screening-Verfahren identifiziert werden. Anstatt zu versuchen, jeden Defekt in einer kodierenden Region, welche die Krankheit verursacht, zu bestimmen und dann nachzuweisen, amplifiziert das erfindungsgemäße Verfahren Intronsequenzen, die mit dem Genort assoziiert sind, um allele und suballele Muster zu bestimmen. Im Gegensatz zur Verwendung von mutationsspezifischen Sonden, mit denen nur bekannte Sequenzdefekte nachgewiesen werden können, zeigen neue PDLP- und RFLP-Muster, die durch Intronsequenzen erzeugt werden, die Anwesenheit eines vorher unerkannten Haplotyps an.
Dieselbe Analyse kann bei Mutationen des Genorts für Phenylalanin-Hydroxylase, welche Phenylketonurie verursacht, und für Beta-Globin-Mutationen, die Beta-Thalassemie und Sichelzellenanämie verursachen, und für andere Genorte, von denen es bekannt ist, daß sie mit einer genetisch bedingten Krankheit assoziiert sind, durchgeführt werden. Darüber hinaus Ist weder die Kenntnis der Mutationsstelle noch der Stelle eines Krankheitsgens nötig, um krankheitsassoziierte Haplotypen zu bestimmen. Amplifizierte Intronsequenzen in den Regionen von ganz in der Nähe befindlichen flankierenden RFLP-Markern, wie sie bekannt sind für die Huntingtonsche Krankheit und viele andere vererbte Krankheiten, können genügend Information für ein Screening-Verfahren für mit der Krankheit assoziierte Haplotypen liefern. '
Muskeldystrophie (MD) ist eine mit dem Geschlecht verknüpfte Krankheit. Das krankheitsassoziierte Gen umfaßt eine 2,3 Millionen Basenpaare lange Sequenz, welche für ein 3685 Aminosäuren-Protein, Distrophin, kodiert. Eine Karte der Mutationen bei 128 von 134 Patienten mit Bekkerscher Muskeldystrophie und 160 Patienten mit Duchenne'scher Muskeldystrophie identifizierte 115 Deletionen und 13 Duplikationen in der Sequenz der kodierenden Region (Den Dünnen et al.. Am. J. Hum. Genet., Band 45, Seiten 835-847 [1989]). Obwohl die Krankheit mit einer großen Anzahl von Mutationen assoziiert ist, die in großem Umfang variieren, haben die Mutationen eine nicht statistische Verteilung in der Sequenz und sind in zwei Hauptmutationsgebieten („hot spots") (Den Dünnen et al., siehe oben) lokalisiert. Weiterhin wurde ein Ort häufiger Rekombination („recombination hot spot") innerhalb der Gensequenz identifiziert (Grimm et al., Am. J. Hum. Genet, Band 45, Seiten 368-372 (1989]).
Zur Analyse von MD werden vorzugsweise Haplotypen auf jeder Seite des bevorzugten Rekombinationsorts („hot spot") bestimmt. Primerpaare, die amplifizierte DNA-Sequenzen definieren, sind vorzugsweise in der Nähe, innerhalb ein bis 10 Kbp auf einer Seite des Rekombinationsortes („hot spots") lokalisiert. Außerdem sind aufgrund der erheblichen Größe des Gens die Primerpaare, welche amplifizierte DNA-Sequenzen definieren, vorzugsweise in der Nähe jedes Endes der Gensequenz lokalisiert und besonders bevorzugt auch an einer Stelle in der Mitte auf jeder Seite des bevorzugten Rekombinationspunktes („hot sport"). Auf diese Weise können mit der Krankheit assoziierte Haplotypen identifiziert werden.
Von anderen Krankheiten, Insbesondere malignen Tumoren, ist gezeigt worden, daß sie das Ergebnis eines vererbten rezessiven Gens zusammen mit einer somatischen Mutation des normalen Gens sind. Ein bösartiger Tumor, der auf einen solchen „Verlust der Heterogenität" zurückgeht, ist das Retinoblastom, ein Krebs in der Kindheit. Der Verlust des normalen Gens durch Mutation wurde demonstriert durch den Nachweis der Gegenwart einer Mutation in allen somatischen Zellen (damit einen Ursprung in der Keimzelle anzeigend) und den Nachweis einer zweiten Mutation in einigen somatischen Zellen (Scheffer et al., Am. J. Hum. Genet., Band 45, Seiten 252-260 [1989]). Die Krankheit kann nachgewiesen werden durch die Amplifizierung genomischer DNA-Sequenzen einer somatischen Zelle, die genügend Intronsequenznukleotide umfaßt. Die amplifizierten DNA-Sequenzen
enthalten vorzugsweise Inkonsequenzen, die In der Nähe von einem oder mehreren der von Scheffer et al. (oben) beschriebenen Marker lokalisiert sind. Vorzugsweise werden eine ampllfizierte DNA-Sequenz, die in der Nähe eines intragenen Markers lokalisiert ist, und eine amplifizierte DNA-Sequenz in der Nähe eines flankierenden Markers verwendet. Eine exemplarische Analyse für CFwird detailliert inden Beispielen beschrieben. Die Analyse von Genorten fürandere genetisch bedingte Krankheiten, die auf ein oder mehrere Gene zurückzuführen sind, kann auf ähnliche Weise durchgeführt werden. Wie die vorstehende Beschreibung zeigt, Ist das erfindungsgemäße Verfahren der Analyse von Inkonsequenzen allgemein anwendbar für den Nachwels jeder Art eines genetischen Merkmals. Andere Merkmale, die von einem oder mehreren Genen verursacht werden, können leicht durch die erfindungsgemäßen Verfahren analysiert werden. Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Analyseverfahren für alle eukaryotischen Zellen anwendbar und werden bevorzugt bei solchen von * Pflanzen und Tieren angewandt. Beispiele der Analyse von BoLA (Rinder-MHC-Determinanten) demonstrieren weiter die generelle Anwendbarkeit der erfindungsgemäßen Verfahren.
Diese Erfindung wird weiter erläutert durch die folgenden spezifischen, aber die Erfindung nicht beschränkenden Beispiele. Verfahren, die zur Umsetzung in die Praxis geeignet sind, werden in der Gegenwartsform beschrieben, und Verfahren, die im Labor ausgeführt worden sind, werden in der Vergangenheitsform beschrieben.
jeden Primers), dNTPs (2,SmM von jedem) und 2,5 Einheiten Taq-Polymeruoe in Amplifizierungspuffer (5OmM KCI; 1OmM
erste Primerpaar enthält die Primer SGD005.IIVS1.LNP und SGD009.AIVS3.R2NP (spezifisch für den Genort A). Das zweite
synthetisiert unter Verwendung eines Applied Biosystems Modell 308 A DNA Synthesizers. Die
jede der Genort-DQAI-spezifischenAmplifizierungsmischungen und Aufrechterhalten der betreffenden Temperatur für1 Minute, verschmolzen. Der Primerverlängerungs-Schritt wird durchgeführt durch Erhitzen jeder der
30mal für jede Amplifizierungsmischung wiederholt.
5 Einheiten des betreffenden Enzyms 60 Minuten lang bei 370C unter den vom Hersteller jeder Endonuklease empfohlenen
VA: 786,619,596,462,427,399,256,251,93,80
TA: 809,786,619,596,473,462,427,399,369,335,315,283,256,251,247,93,80 VD: 388,338,332,277,219,194,122,102,89,79,64,55 TD: 587,449,388,338,335,332,277,271,219,194,187,122,102,99,89,88,79,65,64,55
Die Analyse zeigt, daß das Blut vom Tatort und vom mutmaßlichen Täter nicht vom selben Individuum stammen. Das Blut vom Tatort enthält A3, A9.DQA1 0501, DQA1 0301 und das Blut des mutmaßlichen Täters enthält A9,A9,DQA1 0501, DQA1 0501.
hypotonische Lyse extrahiert. Genauer wurden 100 μΙ Blut in PBS auf 1,5ml verdünnt und zentrifugiert, um den Leukozytenfilmzu entfernen. Nach zwei hypotonischen Lysis-Behandlungen mitderResuspension von Leukozytenzeilen in Wasser, wurden die
gekocht. Fünf 10mm lange „Fronds" der Darmhaut wurden erhalten. Ein „Frond" wurde in 200μΙ Wasser eingetaucht. NaOHwurde bis zu einer Konzentration von 0,05 M zugegeben. Die Probe wurde 20 Minuten lang gekocht und dann mit HCIneutralisiert. Für keine der Proben wurde eine weitere Reinigung durchgeführt.
(2) als DPB Primer die Primer 5'IVS1 (Nukleotlde 7604-7624) und 3'IVS2 (Nukleotlde 7910 bis 7929). Die
pH 8,3; 5OmM KCI; 1,5mM MgCI2; 0,01 % (Gew./Vol.) Gelatine; 200μΜ dNTPs; Wasser bis zu einem Volumen von 100μΙ und2,5 Einheiten Taq-Polymerase.
30 Sekunden lang, dann '< Minute lang bei 720C für 30 Zyklen, abschließend für 10 Minuten bei 720C. Für DPB wurde die
2% Agarose in TBE (Tris-Borat-EDTA) Puffer; es wurde beladen mit 15μΙ der Amplifizierungsreaktionsmischung pro Spur und die
das 10cm lange Gel hineingewandert war.
12 Einheiten bei 370C für 3 Stunden) für DQA1 und RSaI und Fokl (8 bzw. 11 Einheiten bei 370C über Nacht) für DPB1 in 0,5 bis 2 μΙder vom Lieferanten Pharmacia empfohlenen Enzympuffer mit 16-18 μΙ des amplifizierten Produkts verwendet wurden. Diegespaltene DNA wurde der Fragmentlänge nach durch Gelelektrophorese (3% Nusleve) aufgetrennt. Die RFLP-Muster wurdenunter UV-Licht nach Anfärben des Gels mit Ethidiumbromid untersucht.
erwarteten Fragmentgrößen, basierend auf den Sequenzen bekannter Endonukleaserestriktlonsstellen. Die Analyse des
waren konsistent mit der Annahme, daß AV der biologische Vater war.
lymphocytentoxischen Antiseren bestimmt worden waren, vorhergesagt wurden.
eine nicht-Vaterschaft zu:
0,042 X 0,314 - 0,013
d.h., die Wahrscheinlichkeit der Vaterschaft ist (1 - 0,013) oder 98,7%.
Die relative Wahrscheinlichkeit der Vaterschaft ist so 74:75, d. h. die Wahrscheinlichkeit, daß AV nicht der biologische Vater ist, beträgt etwa 1 aus 75. Die Streitparteien entschlossen sich, diese Ergebnisse als Bestätigung der Vaterschaft des angenommenen Vaters für den Fötus zu betrachten.
schwierig, da es nur einen Unterschied von einem Basenpaar zwischen den 0102-Allelen und den 0101- und 0103-Allelen gibt,wobei dieser Unterschied in DQA 1-Allelsequenzen nicht einzigartig ist.
werden. Die Sequenzen der Primer waren: '
SGD 001— 5'TTCTGAGCCAGTCCTGAGA 3'; und SGD 003 —5' GATCTGGGGACCTCTTGG 3'.
Diese Primer hybridisieren mit Sequenzen ungefähr 50 Basenpaare stromaufwärts vom 5'-Ende des zweiten Exons und erzeugen amplifizierte DNA-Sequenzen im Bereich von 700 bis 800bp.
Nach der Amplifizierung wurden die amplifizierten DNA-Sequenzen der Elektrophorese auf einem 4%igen Polyacrylamidgel zur Bestimmung PDLP-Typus unterworfen. In diesem Fall wandern die amplifizierten DNA-Sequenzen für 0102 mit (den genauso langen) 0101-Allelen und eine nachfolgende Enzymspaltung ist notwendig, um sie zu unterscheiden. Die amplifizierten DNA-Sequenzen wurden gespalten unter Verwendung des Restriktionsenzyms AIuI (Bethesda Research Laboratories), welche DNA an der Sequenz AGCT spalten. Die Spaltung wurde durchgeführt durch Mischen von fünf Einheiten (1 μΙ) des Enzyms mit 10μ! der amplifizierten DNA-Sequenz (zwischen ungefähr 0,5 und 1 Mg DNA) im vom Hersteller gelieferten Enzympuffer gemäß Anweisung des Herstellers, um eine Spaltreaktionsmischung herzusteller·. Die Reaktionsmischung wurde dann zur vollständigen enzymatischen Spaltung zwei Stunden lang bei 370C inkubiert.
Die Produkte der Spaltreaktion werden mit ungefähr 0,1 Mg „Leiter"-Nukleotidsequenzen (Nukleotidkontrollsequenzen, die bei einer Länge von 123bp beginnen und in Schritten von 123bp in der Länge zunehmen bis zu einer Endgröße von 5000bp; im Handel erhältlich von Bethesda Research Laboratories, Bethesda MD) gemischt und der Elektrophorese unter Verwendung eines 4%igen horizontalen ultradünnen Polyacrylamidgels (E-C Apparat, Clearwater FLA) unterworfen. Die Banden im Gel wurden sichtbar gemacht (angefärbt) unter Verwendung der Silberfärbungstechnik („Silver Stain") (Allen et al., BioTechniques, Band 7, Seiten 736-744 [1989]).
Drei unterschiedliche Fragmentmuster, die den drei Haplotypen entsprechen, wurden bei Verwendung von AIuI erzeugt. Die Muster {Größenangabe der Fragmente in Basenpaaren) waren:
1. DR15DQ6DW2; 120,350,370,480
2. DR13DQ6DW19: 120,330,350,480
3. DR16DQ6Dw21: 120,330.350
Das Verfahren wurde wiederholt unter Verwendung eines 6,5%igen vertikalen Polyacrylamidgels und Ethidiumbromld als Farbstoff und ergab dieselben Ergebnisse. Jedoch waren die Fragmentmuster bei Verwendung von ultradünnen Gelen und Silberfärbung leichter unterscheidbar·
Dies erläutert beispielhaft die Analyse entsprechend dem erfindungsgemäßen Verfahren. Unter Verwendung desselben Verfahrens wurden 20 der anderen 32 DR/DQ-Haplotypen für DQA1 identifiziert, wobei dasselbe Primerpaar und zwei zusätzliche Enzyme (Ddel und Mboll) verwendet wurden. Die PDLP-Gruppen und Fragmentmuster für jeden der DQA1 Haplotypen mit den drei Endonukleasen sind in Tabelle 6 gezeigt.
DR | Dw | 1 | Dw | AIuI | 41 | 0 i | ί | ro | JO | ,- | 370 | 3 | iO | + | 0 | H | + | 350 | 0 | h | 3 | 0 270 120 100 | + | l· | + | 30 | 2 | + | + | + | 0 | _ | 0 | 0 | T | + | + | + | - + + | + | 1 | 0 | |||
1 | 20 | 4 ( | ι | (t) | )0 | 05 390 360 34 | 3: | 0 | 3( | + | + | + | + | 31 | r -. | I 4- | + | + | |||||||||||||||||||||||||||
PDLP | 1 | 9 | + | + | 3C | + | + | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
14 | 2 | "(+) | + | + | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0101 | 15 | 21 | (+ | + | + | + | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
16 | 19 | (t) | + | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
13 | 18,24 | 105 390 360 3' | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0102 | 13 | 18,25 | 3 4 | I + | A. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
13 | 8.3 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8 | DB2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
11 | 12 | 0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0103 | 15 | ΙΛΓ» 1 UDl | (t | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7 | 17 | "1 | 41C | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7 | 11 | 480 4 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7 | 4(7) | - | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0201 | 4 | 13.2(7) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 4(8) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 10(8) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 13.1(8) | I 4( | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 14(8) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | ΚΤ2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0301 | 4 | 15 | + | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 23 | T | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
9 | 8.1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8 | 8,2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8 | RSH | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 | 3,24 | 3: | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0401 | 3 | 3,25 | 0 | 0 270 120 100 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
11 | 5(9104) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
11 | 16 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
14 | DB6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0501 | 12 | 22 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
16 | 8.3 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
DR | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0601 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
PDLP | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3; | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+ + + | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2- |
Ddel | PDLP | DR | Dw | 1 | Dw | 650 450 4 | + | 520 | 420 | 0 390 2( | 3( | 0 150 | + + | + | O < | 190 | 0 390 200 150 | ,0 | H | • | { | + | )0 | ||
20 | I | 400 | 1« | + | I | < | • | H | 30 50 | + | |||||||||||||||
1 | 9 | H | π | + | |||||||||||||||||||||
0101 | 1 | + | j · | + | • | H | I | ||||||||||||||||||
14 | 2 | j | + | I | ) | h + | 30 50 | ||||||||||||||||||
21 | I | + | I | • | h + | ||||||||||||||||||||
0102 | 15 | 19 | ft | ||||||||||||||||||||||
16 | 18,24 | • | + | • | I | + | |||||||||||||||||||
13 | 18,25 | 300 | H) | r + | |||||||||||||||||||||
13 | 8.3 | t- + | |||||||||||||||||||||||
0103 | 13 | DB2 | • | ||||||||||||||||||||||
8 | 12 | ||||||||||||||||||||||||
11 | DBl | ||||||||||||||||||||||||
15 | 17 | ||||||||||||||||||||||||
0201 | 7 | 11 | |||||||||||||||||||||||
7 | 4(7) | ||||||||||||||||||||||||
7 | 13.2(7) | - | |||||||||||||||||||||||
4 | 4(8) | < | |||||||||||||||||||||||
4 | 10(8) | ||||||||||||||||||||||||
4 | 13.1(8) | ||||||||||||||||||||||||
0301 | 4 | 14(8) | 520 | + | + | ||||||||||||||||||||
4 | KT2 | + | |||||||||||||||||||||||
4 | 15 | ||||||||||||||||||||||||
4 | 23 | ||||||||||||||||||||||||
4 | 8.1 | + | |||||||||||||||||||||||
9 | 8.2 | + | |||||||||||||||||||||||
0401 | 8 | RSH | )0 | + | |||||||||||||||||||||
8 | 3,24 | + | |||||||||||||||||||||||
3 | 3,25 | • | + | ||||||||||||||||||||||
3 | 5 | ||||||||||||||||||||||||
3 | 5(9104) | ||||||||||||||||||||||||
0501 | 11 | 16 | |||||||||||||||||||||||
11 | DB6 | ||||||||||||||||||||||||
14 | 22 | r | |||||||||||||||||||||||
12 | 8.3 | h | |||||||||||||||||||||||
0601 | 16 | ||||||||||||||||||||||||
PDLP | 8 | ||||||||||||||||||||||||
DR | 45 | ||||||||||||||||||||||||
[· | |||||||||||||||||||||||||
+ | |||||||||||||||||||||||||
j- | |||||||||||||||||||||||||
ι | |||||||||||||||||||||||||
400 | |||||||||||||||||||||||||
>0 | |||||||||||||||||||||||||
650 450 4 | |||||||||||||||||||||||||
MboII | PDLP | DR | Dw | 1 | Dw | 390 380 365 350 3; | + | 35 | 3 | 0 | + | + | + | + | 35 | 360l3- | + | + | 370 | + | 360 | 0 | 5 | + | + | 0 | 3: | 305 250 180 1* | • | 0 | 300 | ι | ι | - | 190 | ί | )0 | 1< | 170 | 0 | + | + | )0 | · | 0 | 0 | + |
20 | + | •f | 390 3ί | 3' | + | 0 365 350 3: | 5 | 0 | I | + | 3( | ι: | + | 305 250 180 U | |||||||||||||||||||||||||||||||||
1 | 9 | + | + | + | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0101 | 1 | 2 | t | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
14 | 21 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
15 | 19 | . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0102 | 16 | 18,24 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
13 | 18,25 | 3ί | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
13 | 8.3 | 3< | + + | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
13 | DB2 | \ | + -j | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0103 | 8 | 12 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
11 | DBl | χ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
15 | 17 | + 1 | ι; | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7 | 11 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0201 | 7 | 4(7) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7 | 13.2(7) | - | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 4(8) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 10(8) | + | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 13.1(8) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 14(8) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0301 | 4 | KT2 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 15 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 23 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4 | 8.1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
9 | 8.2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8 | RSH | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0401 | 8 | 3,24 | - | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 | 3,25 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 | 5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 | 5(9104) | 3ί | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
11 | 16 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0501 | 11 | DB6 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
14 | 22 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
12 | 8.3 | h ·+ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
16 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0601 | 8 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
PDLP | DR | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
130 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
unterscheiden. Insbesondere zeigt das Beispiel, daß die PDLP-Analyse fünf der acht AIIeIe stratifiziert. Diese drei
erwarten. Als Alternative Ist bei Verwendung derselben odor anderer Endonukleasespaltungen für eine andere amplifizierte
des Zentromers, vorzugsweise zusammen mit Analyse eines zentralen Genorts, leicht alle Haplotypen dieser Regionunterscheiden.
anwesend sind. Die genomische DNA wird amplifizlert, wie in Beispiel 3 beschrieben. Jede der amplifizierten DNA Sequenzenwird sequenziert um die Haplotypen des Individuums zu identifizieren. Es wird gezeigt, daß das Individuum die Haplotypen
0102 5'TTGCTGAACTCAGGCCACCs' 0301 5'TGCGGAACAGAGGCAACTG 3'
Die Amplifizierung wurde durchgeführt wie in Beispiel 3 unter Verwendung von 30 Zyklen einer Standard-(94°C. 60°C, 720C) PCR-Reaktion. Die Matrizen-DNAs für Jedes der 0101 -, 0301- und 0501-Allele wurden getrennt amplifiziert. Wie durch Elektrophorese nachgewiesen wurde, amplifizierte der0102-Allel-spezifische Primer nur die Matrizen-0102-DNA und der 0301-Allel-spezifische Primer amplifizierte nur Matrizen-0301 -DNA. So war also jeder der Primer Allel-spezifisch.
Das in Beispiel 3 für die Amplifizierung verwendete Verfahren wird wiederholt. Die Sequenzen der Primer sind unten gezeigt. Die ersten zwei Primer sind stromaufwärts-Primer und der dritte ist ein stromabwärts-Primer. Die Primer amplifizieren eine DNA-Sequenz welche die ganze intervenierende Sequenz 1 umfaßt
5'CAG AGG TCG CCT CTG GA3'; 5'AAG GCC AGC GTT GTC TCCA3'; und 3'CCT CAA AAT TGG TCT GGT 5'.
sind. (Die Nukleotid-Nummern sind zu finden in Riordan et al., Science, Band 245, Seiten 1066-1072 [1989]).
unterworfen, um dem PDLP-Typus zu bestimmen. Die amplifizierten DNA-Sequenzen werden getrennt gespalten unter
wie in Beispiel 3 beschrieben. Die Produkte der Spaltreaktion werden der Elektrophorese mit einem 4%igen horizontalenultradünnen Polyacrylamidgel unterworfen und mit Silberfärbung sichtbar gemacht, wie in Beispiel 3 beschrieben.
5'-Primer: 5'TCC TGG TCC TGA CCG AGA 3' (62)
3'-Primer: 1)3'A TGT GCC TTT GGA GGG TCT 5' (62)
(für ein ungefähr 600 bp Produkt)
2) 3' GCC AAC AT GAT CCG CAT 5' (62)
(für ein ungefähr 900 bp Produkt)
Für die etwa 900bp lange Sequenz ist die PDLP-Analyse ausreichend, um die AIIeIe 1 und 3 (893 und 911 bp) zu unterscheiden. Fragmentgemische werden unter Verwendung von AIuI und Ddel wie in Beispiel 3 beschrieben hergestellt. Die folgenden Muster werden von der 900 bp Sequenz erzeugt.
Die 600 bp lange Sequenz produziert ebenfalls unterscheidbare Fragmontmueter für diese AIIeIe. Jedoch sind diese Muster nicht so deutlich unterschiedlich wie die Muster, die durch die Spaltung der 900 bp Sequenz erzeugt werden.
1.1 CACCCACCGGGACTCAGA
1.2 TGGCCCTGACCCAGACCTGGGC
1.3 GAGGGTCGGGCGGGTCTCAGC
1.4 CTCTCAGGCCTTGTTC
1.5 CAGAAGTCGCTGTTCC
DQA 1-Genort-spezlf Ische Primer SGD001.DQA1.LNP TTCTGAGCCAGTCCTGAGA DQA3 E1 a TTGCCCTGACCACCGTGATG DQA3E1b CTTCCTGCTTGTCATCTTCA DQA3E1C CCATGAATTTGATGGAGA DQA3E1d ACCGCTGCTACCAATGGTA SGD003.DQA1 .RNP CCAAGAGGTCCCCAGATC
DRA-Genort-spezlfische Primer DRA E1 TCATCATAGCTRfGCTGATG DRA 5Έ 2 AGAACATGTGATCATCCAGGC DRA 3Έ 2 CCAACTATACTCCGATCACCAAT
DRB-Genort-spezlf frche Primer DRB E1 TGACAGTGACACTGATGGTGCTG DRB5Έ2 GGGGACACCCGACCACGTTTC DRB 3Έ 2 TGCAGACACAACTACGGGGTTG
DPB i-Genort-spezifische Primer DPB E1 TGAGGTTAATAAACTGGAGAA DPB 5'IVS1 GAGAGTGGCGCCTCCGCTCAT DPB3'IVS2 GAGTGAGGGCTTTGGGCCGG
Claims (34)
1. Verfahren zum Nachweis mindestens eines AIIeIs eines Genorts, dadurch gekennzeichnet, daß es die Amplif izierung genomischer DNA mit einem Intron-überspannenden Primerpaar, welches eine DNA-Sequenz definiert, umfaßt, wobei die DNA-Sequenz sich in genetischer Kopplung mit dem Genort befindet und eine genügende Anzahl von Intronsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen, die charakteristisch für das AIIeI ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die amplifizierte DNA-Sequenz mindestens 300 Nucleotide einschließt, die Inkonsequenzen entsprechen,
3. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß sich die Inkonsequenz benachbart zu einem Exon, welches für das AIIeI codieri, befindet.
4. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die amplifizierte DNA-Sequenz charakteristisch ist für mindestens ein nicht-benachbartes AIIeI
5. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die amplifizierte DNA-Sequenz charakteristisch istfürwenigstens ein benachbartes AIIeI und mindestansein nichtbenachbartes AIIeI.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die amplifizierte DNA-Sequenz mindestens 1000 Nukleotide enthält, die Inkonsequenzen entsprechen.
7. Verfahren zum Nachweis mindestens eines AIIeIs eines Genorts, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
a) Amplifizierung genomischer DNA mit einem Intron-überspannenden Primerpaar, welches eine DNA-Sequenz definiert, wobei die DNA-Sequenz sich in genetischer Kopplung mit dem AIIeI befindet und eine genügende Anzahl von Intronsequenznukleotiden enthält, um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen, die charakteristisch ist für das AIIeI; und
b) Analyse der amplifizierten DNA-Sequenz, um die Anwesenheit einer genetischen Variation in der amplifizierten Sequenz nachzuweisen.
8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Variation in der Länge der Primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
9. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Änderung in der Anwesenheit von mindestens einer Restriktionsstelle in der Primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
10. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Variation in der amplifizierten DNA-Sequenz eine Änderung in der Lokalisierung mindestens einer Restriktionsstelle in der Primer-definierten amplifizierten DN ^-Sequenz ist.
11. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Änderung in der amplifizierten DNA-Sequenz die Substitution von mindestens einem Nukleotid in der Primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz ist.
12. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 7 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß der Genort ein Haupthistokompatibilitätsort ist. '
13. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 7 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß das AIIeI mit einer auf ein Gen zurückzuführenden Krankheit assoziiert ist.
14. Verfdhren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß die auf ein Gen zurückzuführende Krankheit zystische Fibröse ist.
15. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 7 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens 70% der Primer-definierten amplifizierten DNA-Sequenz Intronsequenzen entsprechen.
16. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 7 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß die Primerdefinierte amplifizierte DNA-Sequenz eine Länge von 300 bis 500 Nukleotiden hat.
17. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Fragmenten für einen HLA Genort eines Individuums, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
a) Amplifizierung genomischer HLA-DNA des Individuums mit einem Primerpaar, welches unter Bedingungen, die geeignet sind zur Produktion eineramplifizierten DNA-Sequenz spezifisch für den HLA Genort ist; und
b) Herstellung eines Fragmentgemisches durch Kombination der amplifizierten DNA-Sequenz mit mindestens einer Endonuklease, welche die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, um einen Satz von Fragmenten mit unterscheidbaren Fragmentlängen zu ergeben.
18. Verfahren nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, daß es als zusätzlichen Reaktionsschritt die Erzeugung von RFLP-Mustem aus dem Fragmentgemisch enthält.
19. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 17 und 18, dadurch gekennzeichnet, daß die Primer eine DNA-Sequenz definieren, die alle Exons enthält, die für allele Variabilität, die mit dem HLA Genort assoziiert ist, codieren.
20. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Fragmenten für einen HLA Genort eines Individuums, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
a) Amplifizierung genomischer HLA-DNA des Individuums mit einem Primerpaar, welches unter Bedingungen, die geeignet sind zur Herstellung einer amplifizierten DNA-Sequenz, spezifisch ist für den HLA Genort, wobei die Primer eine DNA-Sequenz definieren, die alle Exons enthält, die für allele Variabilität, die mit dem HLA Genort assoziiert ist, codieren; und
b) Erzeugung eines Fragmentgemisches durch Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit mindestens einer Endonuklease, die die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, um einen Satz von Fragmenten mit unterscheidbaren Fragmentlängen zu ergeben.
21. Verfahren zur Herstellung von RFLP-Mustern für einen HLA Genort eines Individuums, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
a) Ampüfizierung von HLA-DNA des Individuums mit einem Primerpaar, welches unter Bedingungen, die geeignet sind, eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen, spezifisch ist für den HLA Genort, wobei die Primer lokalisiert sind in der intervenierenden Sequenz I und in der intervenierenden Sequenz III, wenn der HLA Genort ein Klasse I Genort ist, und in der intervenierenden Sequenz I und der intervenierenden Sequenz II, wenn der Genort ein Klasse Il Genort ist;
b) Erzeugung eines Fraqmentgemisches durch Kombinieren der amplifizierten DNA-Sequenz mit mindestens einer Endonuklease, welche die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, um einen Satz von Fragmenten zu ergeben, die unterscheidbare Fragmentlängen haben; und
c) Erzeugung von RFLP Mustern aus dem Fragmentgemisch.
22. Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß die Amplifizierung umfaßt:
a) Kombination eines HLA Genort-spezifischen Primerpaars mit HLA-DNA des genannten Individuums unter Hybridisierungsbedingungen für einen Zeitraum, der für jeden Primer im Primerpaar ausreicht, ein Verlängerungsprodukt zu produzieren, welches, wenn es von seinem Komplement getrennt ist, als Matrize zur Synthese des Verlängerungsprodukts des anderen Primers dienen kann, um eine Mischung zu erzeugen;
b) Behandlung dergenannten Mischung unter denaturierenden Bedingungen, um die Primer von ihren Verlängerungsprodukten zu trennen;
c) Behandlung der Mischung mit dem HLA Genort-spezifischen Primerpaar, so daß ein Primerverlängerungsprodukt synthetisiert wird, wobei jede der Matrizen, welche in Schritt b) als Matrizen produziert werden, verwendet wird, was die Amplifizierung der HLA-DNA zum Ergebnis hat; und
d) Wiederholung der Schritte b) und c), um eine amplifizierte DNA-Sequenz zu erzeugen.
23. Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß ein zweites Primerpaar, welches spezifisch für den HLA Genort ist, ebenfalls zur Amplifizierung von HLA-DNA verwendet wird.
24. Verfahren nach Anspruch ^1, dadurch gekennzeichnet, daß die Erzeugung der RFLP-Fragmentmuster umfaßt:
a) Kombination der amplifizierten DNA-Sequenz mit mindestens einer Endonuklease, welche die amplifizierte DNA-Sequenz spaltet, um einen Satz von Fragmenten mit unterscheidbaren Fragmentlängen zu ergeben;
b) eine auf den unterschiedlichen Fragmentlängen beruhende Auftrennung der Fragmente zur Erzeugung getrennter Fragmente; und
c) Sichtbarmachung der getrennten Fragmente zur Erzeugung von RFLP-Fragmentmustem.
25. Verfahren nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß die Fragmente durch Gelelektrophorese getrennt werden und unter Verwendung eines Nukleotid-spezifischen Farbstoffs sichtbar gemacht werden.
26. Verfahren zur Feststellung, ob die DNA in einer Probe von einem bestimmten Individuum stammt, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
a) Amplifizierung der DNA des Individuums und der DNA der genannten Probe mit einem Primerpaar, welches unter geeigneten Bedingungen zur Erzeugung einer amplifizierten
DNA-Sequenz von diesem Individuum und von dieser Probe spezifisch ist für einen HLA Genort, wobei die Primer für einen HLA Klasse I Genort in den intervenierenden Sequenzen I und III und für einen Klasse Il Genort in den intervenierenden Sequenzen I und Il lokalisiert sind;
b) Kombination der amplif izierten DNA-Sequenz des Individuums und der amplif izierten DNA der Probe mit mindestens einer Endonuklease, welche die amplifizierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl von Sequenzen ausreichend unterschiedlicher Länge spaltet, um zwischen Allelen des HLA Genorts zu unterscheiden, für einen Zeitraum, der ausreicht zur Spaltung der amplifizierten DNA zwecks Erzeugung eines Fragmentgemisches;
c) Vergleich der polymorphen Restriktionsfragmentlängenmuster, die durch das Fragmentgemisch des Individuums und von der Probe erzeugt wurden.
27. Verfahren zur Feststellung, ob ein Individuum der Vater eines Kindes ist, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
a) Amplifizierung der DNA des Individuums, der DNA des Kindes und der DNA der Mutter mit einem Primerpaar, welches unter geeigneten Bedingungen zur Erzeugung von amplifizierten DNA-Sequenzen spezifisch ist für einen HLA Genort, wobei die Primer lokalisiert sind in den intervenierenden Sequenzen I und III bei einem HLA Klasse I Genort und in den intervenierenden Sequenzen I und Il bei einem Klasse Il Genort;
b) Kombination der amplifizierten DNA-Sequenz des Individuums und der amplifizierten DNA-Probe des Kindes mit mindestens einer Endonuklease, welche die amplifizierte DNA-Sequenz in eine Vielzahl von Sequenzen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen den Allelen des HLA Genorts zu unterscheiden, zur Erzeugung eines Fragmentgemisches; und
c) Vergleich der polymorphen Restriktionsfragmentlängenmuster, welche erzeugt werden von einem Fragmentgemisch, das von dem Individuum, der Mutter des Kindes und dem Kind stammt.
28. Ein HLA Genort-spezifischer Primer, dadurch gekennzeichnet, daß er ausgewählt ist aus einem Klasse I Genort-spezifischen Primer, einem Klasse IA Genort-spezifischen Primer, einem Klasse IB Genort-spezifischen Primer und einem Klasse IC Genort-spezifischen Primer.
29. HLA Genort-spezifischer Primer nach Anspruch 28, dadurch gekennzeichnet, daß der Primer eine Sequenz besitzt, die mindestens 15 aufeinanderfolgenden Nukleotiden entspricht, die ausgewählt sind aus:
CATGTGGCCATCTTGAGAATGGA;
GCCCGGGAGATCTACAGGCGATCA; CGCCTCCCTGATCGCCTGTAG; CCAGAGAGTGACTCTGAGG; CACAATTAAGGGAT;
TCCCCGGCGACCTATAGGAGATGG; CTAGGACCACCCATGTGACCAGC; ATCTCCTCAGACGCCGAGATGCGTCAC;
TCCCCGGCGACCTATAGGAGATGG; CTAGGACCACCCATGTGACCAGC; ATCTCCTCAGACGCCGAGATGCGTCAC;
CTCCTGCTGCTCTGGGGGGCAG; ACTTTACCTCCACTCAGATCAGGAG; CGTCCAGGCTGGTGTCTGGGTTCTGTGCCCCT;
CTGGTCACATGGGTGGTCCTAGG;
CGCCTGAATTTTCTGACTCTTCCCAT;
CTGGTCACATGGGTGGTCCTAGG;
CGCCTGAATTTTCTGACTCTTCCCAT;
ATCCCGGGAGATCTACAGGAGATG; AACAGCGCCCATGTGACCATCCT; CTGGGGAGGCGCCGCGTTGAGGATTCT;
CGTCTCCGCAGTCCCGGTTCTAAAGTTCCCAGT;
ATCCTCGTGCTCTCGGGA; TGTGGTCAGGCTGCTGAC;
AAGGTTTGATTCCAGCTT;
CGTCTCCGCAGTCCCGGTTCTAAAGTTCCCAGT;
ATCCTCGTGCTCTCGGGA; TGTGGTCAGGCTGCTGAC;
AAGGTTTGATTCCAGCTT;
CCCCTTCCCCACCCCAGGTGTTCCTGTCCATTCTTCAGGA; CACATGGGCGCTGTTGGAGTGTCG; GTGAGTGCGGGGTCGGGAGGGA; CACCCACCGGGACTCAGA; TGGCCCTGACCCAGACCTGGGC; GAGGGTCGGGCGGGTCTCAGC; CTCTCAGGCCTTGTTC;
CAGAAGTCGCTGTTCC; TTCTGAGCCAGTCCTGAGA;
TTGCCCTGACCACCGTGATG; CTTCCTGCTTGTCATCTTCA; CCATGAATTTGATGGAGA; ACCGCTGCTACCAATGGTA;
CCAAGAGGTCCCCAGATC; TCATCATAGCTGTGCTGATG;
AGAACATGTGATCATCCAGGC; CCAACTATACTCCGATCACCAAT; TGACAGTGACACTGATGGTGCTG; GGGGACACCCGACCACGTTTC; TGCAGACACAACTACGGGGTTG; TGGCTGAGGGCAGAGACTCTCCC; TGCTACTTCACCAACGGGAC; GGTGTGCACACACAACTAC;
CAGAAGTCGCTGTTCC; TTCTGAGCCAGTCCTGAGA;
TTGCCCTGACCACCGTGATG; CTTCCTGCTTGTCATCTTCA; CCATGAATTTGATGGAGA; ACCGCTGCTACCAATGGTA;
CCAAGAGGTCCCCAGATC; TCATCATAGCTGTGCTGATG;
AGAACATGTGATCATCCAGGC; CCAACTATACTCCGATCACCAAT; TGACAGTGACACTGATGGTGCTG; GGGGACACCCGACCACGTTTC; TGCAGACACAACTACGGGGTTG; TGGCTGAGGGCAGAGACTCTCCC; TGCTACTTCACCAACGGGAC; GGTGTGCACACACAACTAC;
AGGTATTTTACCCAGGGACCAAGAGAT;
ATGTAAAATCAGCCCGACTGCCTCTTC;
GCCTCGTGCCTTATGCGTTTGCCTCCT;
ATGTAAAATCAGCCCGACTGCCTCTTC;
GCCTCGTGCCTTATGCGTTTGCCTCCT;
TGAGGTTAATAAACTGGAGAA; GAGAGTGGCGCCTCCGCTCAT; und GAGTGAGGGCTTTGGGCCGG.
30. Ein HLA Klasse I Genort-spezifisches Primerpaar.
31. Ein HLA Klasse Il Genort-spezifisches Intron-überspannendes Primerpaar.
32. DNA-Sequenz, dadurch gekennzeichnet, daß sie durch ein HLA Genort-spezifisches Primerpaar definiert ist.
33. Ausrüstung, dadurch gekennzeichnet, daß sie mindestens ein HLA Genort-spezifisches Primerpaar in einem geeigneten Behälter enthält, wobei das HLA Genort-spezifische Primerpaar ausgewählt ist aus einem HLA Klasse I Genort-spezifischen Primerpaar und einem HLA Klasse Il Genort-spezifischen, Intron-überspannenden Primerpaar.
34. Ausrüstung nach Anspruch 33, dadurch gekennzeichnet, daß sie zusätzlich mindestens eine Endonuklease enthält, welche eine DNA-Sequenz, die definiert ist durch das HLA Genortspezifische Primerpaar, in eine Vielzahl von Sequenzen mit ausreichend unterschiedlichen Längen spaltet, um zwischen den Allelen des HLA Genorts zu unterscheiden.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US39821789A | 1989-08-25 | 1989-08-25 | |
US40549989A | 1989-09-11 | 1989-09-11 | |
US46586390A | 1990-01-16 | 1990-01-16 | |
US07/551,239 US5192659A (en) | 1989-08-25 | 1990-07-11 | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DD299319A5 true DD299319A5 (de) | 1992-04-09 |
Family
ID=27503418
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DD90343632A DD299319A5 (de) | 1989-08-25 | 1990-08-24 | Intronsequenzanalyseverfahren zum nachweis von benachbarten und entfernten genortallelen als haplotypen |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US5192659A (de) |
EP (1) | EP0414469B1 (de) |
JP (2) | JP3206812B2 (de) |
KR (1) | KR910004814A (de) |
AT (1) | ATE144797T1 (de) |
AU (2) | AU654111B2 (de) |
CA (1) | CA2023888C (de) |
DD (1) | DD299319A5 (de) |
DE (1) | DE69029018T2 (de) |
DK (1) | DK0414469T3 (de) |
ES (1) | ES2095859T3 (de) |
FI (1) | FI904200A0 (de) |
GR (1) | GR3022410T3 (de) |
HK (1) | HK1008053A1 (de) |
IL (1) | IL95467A (de) |
NZ (1) | NZ235051A (de) |
SG (1) | SG47747A1 (de) |
Families Citing this family (1099)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5192659A (en) * | 1989-08-25 | 1993-03-09 | Genetype Ag | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
US20040197775A1 (en) * | 1989-08-25 | 2004-10-07 | Genetype A.G. | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
DK0570371T3 (da) * | 1990-07-11 | 2000-04-17 | Genetype Ag | Genomisk kortlægningmetode ved direkte haplotypebestemmelse ved anvendelse af intron sekvensanalyse |
NL9002259A (nl) * | 1990-10-17 | 1992-05-18 | Eurodiagnostics B V | Werkwijze voor het bepalen van een genotype door het vergelijken van de nucleotidensequentie van leden van een genfamilie, alsmede kit voor het opsporen van genetische variaties. |
GB9024005D0 (en) * | 1990-11-05 | 1990-12-19 | British Bio Technology | Process for amplifying nucleic acid |
EP0577708A4 (en) * | 1991-03-06 | 1998-02-04 | Univ Minnesota | Dna sequence-based hla typing method |
US5424184A (en) * | 1991-05-08 | 1995-06-13 | Regents Of The University Of Minnesota | DNA sequence-based HLA class I typing method |
CA2081582A1 (en) * | 1991-11-05 | 1993-05-06 | Teodorica Bugawan | Methods and reagents for hla class i dna typing |
IL103935A0 (en) * | 1991-12-04 | 1993-05-13 | Du Pont | Method for the identification of microorganisms by the utilization of directed and arbitrary dna amplification |
US6110742A (en) * | 1992-04-15 | 2000-08-29 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Synthetic antisense oligodeoxynucleotides targeted to AChE |
EP0575845A3 (de) * | 1992-06-23 | 1998-01-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Verfahren für Charakterisierung von HLA-DP |
GB9301453D0 (en) * | 1993-01-26 | 1993-03-17 | Clonit Spa | Nucleotide proves |
US6110709A (en) * | 1994-03-18 | 2000-08-29 | The General Hospital Corporation | Cleaved amplified modified polymorphic sequence detection methods |
CA2185902A1 (en) * | 1994-03-18 | 1995-09-28 | Federick Ausubel | Cleaved amplified rflp detection methods |
US5599666A (en) * | 1994-03-28 | 1997-02-04 | Promega Corporation | Allelic ladders for short tandem repeat loci |
US5976798A (en) * | 1994-03-30 | 1999-11-02 | Mitokor | Methods for detecting mitochondrial mutations diagnostic for Alzheimer's disease and methods for determining heteroplasmy of mitochondrial nucleic acid |
US6027883A (en) * | 1994-03-30 | 2000-02-22 | Mitokor | Optimal procedure for isolation of mutant mitochondrial alleles |
AU2635295A (en) * | 1994-06-13 | 1996-01-05 | Henry Ford Health System | A novel neuronal-neonatal gene: neuronatin |
US6479235B1 (en) | 1994-09-30 | 2002-11-12 | Promega Corporation | Multiplex amplification of short tandem repeat loci |
US7008771B1 (en) | 1994-09-30 | 2006-03-07 | Promega Corporation | Multiplex amplification of short tandem repeat loci |
CA2118048C (en) * | 1994-09-30 | 2003-04-08 | James W. Schumm | Multiplex amplification of short tandem repeat loci |
US5843660A (en) * | 1994-09-30 | 1998-12-01 | Promega Corporation | Multiplex amplification of short tandem repeat loci |
US5545539A (en) * | 1994-10-18 | 1996-08-13 | Genzyme Corporation | Method for nucleotide sequence amplification |
EP0708178A1 (de) * | 1994-10-19 | 1996-04-24 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Motoneuronlebenserhaltungsgen: ein Gen für spinale Muskelatrophie |
US6309843B1 (en) | 1994-10-25 | 2001-10-30 | The Curators Of The University Of Missouri | Glycoprotein for use in determining endometrial receptivity |
US20030152909A1 (en) * | 1994-11-16 | 2003-08-14 | Mitrani Eduardo N. | In vitro micro-organs, and uses related thereto |
US5908749A (en) * | 1995-02-17 | 1999-06-01 | Tge Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for high resolution HLA typing |
US20120160687A1 (en) | 1995-03-17 | 2012-06-28 | President And Fellows Of Harvard College | Characterization of individual polymer molecules based on monomer-interface interactions |
US6362002B1 (en) * | 1995-03-17 | 2002-03-26 | President And Fellows Of Harvard College | Characterization of individual polymer molecules based on monomer-interface interactions |
US6653134B2 (en) * | 1995-03-28 | 2003-11-25 | Cp Hahnemann University | Isolated stromal cells for use in the treatment of diseases of the central nervous system |
US5777093A (en) | 1995-05-16 | 1998-07-07 | Ramot-University Authority For Applied Research & Industrial Development Ltd. | cDNAs associated with ataxia-telangiectasia |
CA2227306A1 (en) * | 1995-09-01 | 1997-03-27 | Ramot-University Authority For Applied Research And Industrial Developme Nt Ltd. | Manipulation and detection of protein phosphatase 2c - pp2c.alpha. - expression in tumor cells for cancer therapy, prevention and detection |
DE69610933T2 (de) * | 1996-02-20 | 2001-05-23 | The Perkin Elmer Corp., Foster City | Verfahren und reagenzien zur typisierung von hla-genen der klasse i |
US5811239A (en) * | 1996-05-13 | 1998-09-22 | Frayne Consultants | Method for single base-pair DNA sequence variation detection |
US6156512A (en) * | 1996-05-23 | 2000-12-05 | Promega Corp | Allelic ladders for short tandem repeat loci |
FR2749308B1 (fr) * | 1996-06-03 | 1998-07-24 | Bio Merieux | Sondes nucleotidiques et procede pour determiner le typage hla dqb1 |
EP0951536B1 (de) * | 1996-12-12 | 2007-01-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Synthetische antisense oligodeoxynukleotide und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen |
AU5396498A (en) * | 1996-12-12 | 1998-07-03 | Visible Genetics Inc. | Method and kit for hla class i typing |
US6524795B1 (en) | 1997-03-10 | 2003-02-25 | Interleukin Genetics, Inc. | Diagnostics for cardiovascular disorders |
US6143496A (en) * | 1997-04-17 | 2000-11-07 | Cytonix Corporation | Method of sampling, amplifying and quantifying segment of nucleic acid, polymerase chain reaction assembly having nanoliter-sized sample chambers, and method of filling assembly |
DE69829857T2 (de) | 1997-08-21 | 2006-02-02 | Quark Biotech, Inc., Pleasanton | Hypoxie-regulierte gene |
US20030104973A1 (en) * | 1997-08-21 | 2003-06-05 | Quark Biotech, Inc. | Hypoxia-regulated genes |
US7973156B2 (en) * | 1997-08-21 | 2011-07-05 | Quark Pharmaceuticals Inc. | Hypoxia-regulated genes |
US6284496B1 (en) | 1997-10-03 | 2001-09-04 | University Of South Florida | DNA vector for determining the presence of out-of-reading-frame mutations |
AUPP012097A0 (en) * | 1997-10-30 | 1997-11-27 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Assessing lipid metabolism |
US7687057B2 (en) | 1998-01-09 | 2010-03-30 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | In vitro micro-organs, and uses related thereto |
EP1049772A1 (de) | 1998-01-30 | 2000-11-08 | Genesense Technologies, Inc. | Oligonukleotide sequenzen komplementär zur den genen von thioredoxin oder thioredoxin reductase und verfahren zur deren anwendung in der modulation von zell-wachstum |
US20010055809A1 (en) * | 1998-01-30 | 2001-12-27 | Harpal S. Mangat | Extending tissue preservation |
EP0953650A1 (de) | 1998-04-20 | 1999-11-03 | Innogenetics N.V. | Verfahren für die HLA Typisierung |
US6733967B1 (en) | 1998-04-21 | 2004-05-11 | Interleukin Genetics, Inc. | Fetal testing for prediction of low birth weight |
US20080206206A1 (en) | 1998-05-07 | 2008-08-28 | University Of South Florida | Bone marrow-derived neuronal cells |
US6759192B1 (en) * | 1998-06-05 | 2004-07-06 | Genset S.A. | Polymorphic markers of prostate carcinoma tumor antigen-1(PCTA-1) |
US6344443B1 (en) | 1998-07-08 | 2002-02-05 | University Of South Florida | Peptide antagonists of tumor necrosis factor alpha |
US7605149B1 (en) | 1998-07-13 | 2009-10-20 | University Of South Florida | Modulation of the phospholipase A2 pathway as a therapeutic |
WO2000006696A2 (en) | 1998-07-30 | 2000-02-10 | University Of South Florida | Method for the modulation of function of transcription factors |
US6703228B1 (en) | 1998-09-25 | 2004-03-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and products related to genotyping and DNA analysis |
US6242223B1 (en) * | 1998-09-28 | 2001-06-05 | Creighton University | Primers for use in detecting beta-lactamases |
EP1001037A3 (de) * | 1998-09-28 | 2003-10-01 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Vorselektion und Isolierung eines Einzelnukleotidpolymorphismus |
BR9914465A (pt) * | 1998-09-29 | 2001-10-09 | Gamida Cell Ltd | Métodos para controlar a proliferação e a diferenciação de células-tronco e células progenitoras e uma composição farmacêutica para induzir a diferenciação em uma população de células |
US6565727B1 (en) * | 1999-01-25 | 2003-05-20 | Nanolytics, Inc. | Actuators for microfluidics without moving parts |
US20040235107A1 (en) * | 1999-01-29 | 2004-11-25 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Biosynthesis of TA antibiotic |
EP1026248A3 (de) | 1999-01-29 | 2002-09-18 | RAMOT UNIVERSITY AUTHORITY FOR APPLIED RESEARCH & INDUSTRIAL DEVELOPMENT LTD. | Gencluster |
MXPA01007820A (es) * | 1999-02-04 | 2003-06-19 | Technion Res & Dev Foundation | Metodo y aparato para mantenimiento y expansion de celulas de tallo hemopoyeticas y/o celulas progenitoras. |
ES2430420T3 (es) * | 1999-04-09 | 2013-11-20 | Innogenetics N.V. | Método para la amplificación de alelos HLA Clase I |
US8017112B2 (en) | 1999-05-14 | 2011-09-13 | Henry Ford Health System | Transplantation of bone marrow stromal cells for treatment of neurodegenerative diseases |
WO2000069448A1 (en) * | 1999-05-14 | 2000-11-23 | Henry Ford Health System | Bone marrow transplantation for treatment of stroke |
US20050169896A1 (en) * | 1999-05-14 | 2005-08-04 | Henry Ford Health System | Bone marrow transplantation for treatment of stroke |
US20070160615A1 (en) * | 1999-06-01 | 2007-07-12 | Jun Tan | Methods and compounds for disruption of CD40R/CD40L signaling in the treatment of Alzheimer's disease |
US6787318B1 (en) * | 1999-06-01 | 2004-09-07 | Roskamp Research Institute, Llc | Assay for evaluating the therapeutic effectiveness of agents in reducing Alzheimer's disease pathology |
US7534605B2 (en) * | 1999-06-08 | 2009-05-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | CD44 polypeptides, polynucleotides encoding same, antibodies directed thereagainst and method of using same for diagnosing and treating inflammatory diseases |
US7655423B2 (en) * | 1999-06-14 | 2010-02-02 | Henry Ford Health System | Nitric oxide donors for inducing neurogenesis |
AU782283B2 (en) * | 1999-06-14 | 2005-07-14 | Henry Ford Health System | Nitric oxide donors for inducing neurogenesis |
US7135498B1 (en) | 1999-06-14 | 2006-11-14 | Henry Ford Health System | Nitric oxide donors for inducing neurogenesis |
EP1192453B1 (de) | 1999-06-22 | 2012-02-15 | President and Fellows of Harvard College | Bestimmung von biopolymeren entsprechend der molekularen oder atomaren skala |
AU5423300A (en) * | 1999-06-25 | 2001-01-31 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Method of inducing angiogenesis by micro-organs |
US7058517B1 (en) | 1999-06-25 | 2006-06-06 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Methods for obtaining and using haplotype data |
DE1233364T1 (de) * | 1999-06-25 | 2003-04-10 | Genaissance Pharmaceuticals Inc., New Haven | Verfahren zur herstellung und verwendung von Haplotype Daten |
US20060127366A1 (en) * | 1999-06-25 | 2006-06-15 | Mitrani Eduardo N | Method and device for inducing biological processes by micro-organs |
JP2003508022A (ja) | 1999-06-30 | 2003-03-04 | インターリューキン ジェネティックス インコーポレイテッド | Il−1炎症性ハプロタイプと関連する病気の診断および治療方法 |
US6875582B1 (en) | 1999-08-19 | 2005-04-05 | Omniscience Pharmaceuticals, Inc. | Methods and targets of antibiotic resistance |
US6998232B1 (en) | 1999-09-27 | 2006-02-14 | Quark Biotech, Inc. | Methods of diagnosing bladder cancer |
AU2587701A (en) * | 1999-12-27 | 2001-07-09 | Yale University | Identification of hla class i polymorphisms |
US6544506B2 (en) | 2000-01-05 | 2003-04-08 | Yeda Research & Development Co. Ltd. | Veto cells effective in preventing graft rejection and devoid of graft versus host potential |
AU2001225441A1 (en) * | 2000-01-24 | 2001-07-31 | Agricultural Research Organization The Volcani Center | Plants tolerant of environmental stress conditions, methods of generating same and novel polynucleotide sequence utilized thereby |
ATE472601T1 (de) | 2000-03-27 | 2010-07-15 | Technion Res And Dev Of Founda | Einkettige haupthistokompatibilitätskomplexe der klasse i (mhc-i), kodierende konstrukte und methoden ihrer erzeugung |
WO2001075065A2 (en) * | 2000-04-03 | 2001-10-11 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Haplotypes of the gp1ba gene |
US6844154B2 (en) | 2000-04-04 | 2005-01-18 | Polygenyx, Inc. | High throughput methods for haplotyping |
AU2001253366A1 (en) * | 2000-04-10 | 2001-10-23 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Haplotypes of the slc5a3 gene |
WO2001079223A2 (en) * | 2000-04-12 | 2001-10-25 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Haplotypes of the akr1b1 gene |
AU2001259082A1 (en) * | 2000-04-17 | 2001-10-30 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Haplotypes of the rangap1 gene |
WO2001079235A2 (en) * | 2000-04-17 | 2001-10-25 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Haplotypes of the dnal4 gene |
IL135884A (en) * | 2000-04-30 | 2005-08-31 | Yissum Res Dev Co | Method for measuring non-transferrin bound iron |
US7435541B2 (en) * | 2000-05-23 | 2008-10-14 | Sequenom, Inc. | Restriction enzyme genotyping |
US7659054B1 (en) | 2000-05-23 | 2010-02-09 | Nuvelo, Inc. | Methods for genetic analysis of DNA to detect sequence variances |
US6931326B1 (en) | 2000-06-26 | 2005-08-16 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Methods for obtaining and using haplotype data |
HUP0300810A2 (hu) | 2000-07-20 | 2003-08-28 | M.G.V.S. Ltd. | Mesterséges értranszplantátum, valamint ennek létrehozása és alkalmazása |
US20040037828A1 (en) | 2002-07-09 | 2004-02-26 | Bar-Ilan University | Methods and pharmaceutical compositions for healing wounds |
PT2078531E (pt) | 2000-08-08 | 2012-08-06 | Technion Res & Dev Foundation | Composições farmacêuticas e métodos úteis para modular a angiogénese |
US20030114410A1 (en) * | 2000-08-08 | 2003-06-19 | Technion Research And Development Foundation Ltd. | Pharmaceutical compositions and methods useful for modulating angiogenesis and inhibiting metastasis and tumor fibrosis |
AU2001286499A1 (en) | 2000-08-16 | 2002-02-25 | Matthew Baker | Transfusion medicine leukodepletion filter devices as a source of genetic material for genotyping studies |
EP1683874A3 (de) | 2000-08-29 | 2006-10-11 | YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENT Co. LTD. | Verfahren zur Isolierung von Genen, die für Proteine mit spezifischer Funktion kodieren, und zur Auslese von pharmazeutisch aktiven Wirkstoffen |
US7632522B2 (en) | 2000-09-28 | 2009-12-15 | Nanocyte Inc. | Use of stinging cells/capsules for the delivery of active agents to keratinous substances |
US20070281037A9 (en) * | 2000-09-28 | 2007-12-06 | Nanocyte Inc. | Sterile preparations and compositions including stinging capsules and methods of producing and using same |
WO2002026191A2 (en) * | 2000-09-28 | 2002-04-04 | Nanocyte Inc. | Methods, compositions and devices utilizing stinging cells/capsules for delivering a therapeutic or a cosmetic agent into a tissue |
ES2425321T3 (es) | 2000-11-17 | 2013-10-14 | Vascular Biogenics Ltd. | Promotores que muestran especificidad por células endoteliales y métodos de utilización de los mismos |
US8071740B2 (en) | 2000-11-17 | 2011-12-06 | Vascular Biogenics Ltd. | Promoters exhibiting endothelial cell specificity and methods of using same for regulation of angiogenesis |
WO2002043651A2 (en) * | 2000-11-30 | 2002-06-06 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of utilizing cultured non-gvhd inducing t lymphocytes to treat disease |
EP1463811A2 (de) * | 2001-01-17 | 2004-10-06 | Ramot at Tel Aviv University Ltd. | Aus fleischfressenden pflanzen stammende chitinasen, deren kodierende polynukleotidsequenzen und verfahren zur isolierung und verwendung derselben |
US20050202098A1 (en) | 2001-01-31 | 2005-09-15 | Tolaren | Disease therapy using dying or dead cells |
US20050031618A1 (en) * | 2001-01-31 | 2005-02-10 | Dror Mevorach | Induction of tolerance by apoptotic and/or necrotic cells |
US7718354B2 (en) | 2001-03-02 | 2010-05-18 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals |
US20030027135A1 (en) * | 2001-03-02 | 2003-02-06 | Ecker David J. | Method for rapid detection and identification of bioagents |
US20040121311A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-06-24 | Ecker David J. | Methods for rapid detection and identification of bioagents in livestock |
US7226739B2 (en) | 2001-03-02 | 2007-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc | Methods for rapid detection and identification of bioagents in epidemiological and forensic investigations |
US7666588B2 (en) * | 2001-03-02 | 2010-02-23 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA and characterization of mitochondrial DNA heteroplasmy |
CA2441594A1 (en) * | 2001-03-22 | 2002-10-03 | Scentgene Pollination Ltd. | Method of enhancing entomophilous |
JP3945993B2 (ja) * | 2001-03-29 | 2007-07-18 | 富士通株式会社 | 半導体記憶装置 |
AUPR446801A0 (en) | 2001-04-18 | 2001-05-17 | University Of Queensland, The | Novel compositions and uses therefor |
US6770622B2 (en) | 2001-06-08 | 2004-08-03 | Gary A. Jarvis | N-terminally truncated galectin-3 for use in treating cancer |
WO2003000932A1 (en) * | 2001-06-20 | 2003-01-03 | Dahlia Minc-Golomb | Method for identifying genes that are upstream regulators of other genes of interest |
US20030104428A1 (en) * | 2001-06-21 | 2003-06-05 | President And Fellows Of Harvard College | Method for characterization of nucleic acid molecules |
US7217510B2 (en) | 2001-06-26 | 2007-05-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for providing bacterial bioagent characterizing information |
US8073627B2 (en) * | 2001-06-26 | 2011-12-06 | Ibis Biosciences, Inc. | System for indentification of pathogens |
IL159944A0 (en) * | 2001-07-19 | 2004-06-20 | Yissum Res Dev Co | Polypeptides having carotenoid isomerase catalytic activity, nucleic acids encoding same and uses thereof |
US7442781B2 (en) | 2001-08-16 | 2008-10-28 | Urifer Ltd. | Diagnosis, prevention and treatment of cancer |
US20040136972A1 (en) | 2001-09-07 | 2004-07-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating disease by transplantation of developing allogeneic or xenogeneic organs or tissues |
WO2003024462A1 (en) * | 2001-09-19 | 2003-03-27 | Henry Ford Health System | Cardiac transplantation of stem cells for the treatment of heart failure |
MXPA04003514A (es) | 2001-10-19 | 2004-07-23 | Vascular Biogenics Ltd | Construcciones de polinucleotidos, composiciones farmaceuticas y metodos para reducir la regulacion dirigida de angionesis y terapia anticancer. |
FR2831168B1 (fr) * | 2001-10-22 | 2004-02-06 | Rocher Yves Biolog Vegetale | Procede d'obtention d'un extrait riche en acides nucleiques a partir d'une matiere vegetale |
WO2003048298A2 (en) | 2001-12-05 | 2003-06-12 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Nanoparticles containing polymeric nucleic acid homologs, pharmaceutical compositions and articles of manufacture containing same and methods of use thereof |
US20040267458A1 (en) * | 2001-12-21 | 2004-12-30 | Judson Richard S. | Methods for obtaining and using haplotype data |
US20050085432A1 (en) * | 2001-12-26 | 2005-04-21 | Aviva Lapidot | Methods of using conjugates of saccharides and acetamidino or guanidino compounds for treating bacterial infections |
IL152904A0 (en) * | 2002-01-24 | 2003-06-24 | Gamida Cell Ltd | Utilization of retinoid and vitamin d receptor antagonists for expansion of renewable stem cell populations |
EP1465982A4 (de) * | 2002-01-25 | 2006-06-07 | Gamida Cell Ltd | Verfahren zur expansion von stamm- und vorläuferzellen und damit erhaltene expandierte zellpopulationen |
US7781396B2 (en) * | 2002-01-31 | 2010-08-24 | Tel Aviv University Future Technology Development L.P. | Peptides directed for diagnosis and treatment of amyloid-associated disease |
US20040052928A1 (en) * | 2002-09-06 | 2004-03-18 | Ehud Gazit | Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases |
US20030148288A1 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Yi-Wei Tang | Colorimetric genetic test for clinically significant TNF polymorphism and methods of use thereof |
US6992176B2 (en) | 2002-02-13 | 2006-01-31 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease |
AU2003214614B2 (en) * | 2002-03-18 | 2008-11-20 | Gamida-Cell Ltd. | Methods of inducing differentiation in ex vivo expanded stem cells |
WO2003079967A2 (en) * | 2002-03-26 | 2003-10-02 | Nanocyte Inc. | Stinging cells expressing an exogenous polynucleotide encoding a therapeutic, diagnostic or a cosmetic agent and methods compositions and devices utilizing such stinging cells or capsules derived therefrom for delivering the therapeutic, diagnostic or cosmetic agent into a tissue |
US20040121442A1 (en) * | 2002-05-05 | 2004-06-24 | Ilan Chet | Fungal chitinase, polynucleotide sequences encoding same, promoters of same, and uses thereof |
AU2003231912A1 (en) * | 2002-06-12 | 2003-12-31 | Tel Aviv Medical Center Research Development Fund | Methods of detecting and treating prostate cancer |
WO2004012762A2 (en) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method and composition for protecting neuronal tissue from damage induced by elevated glutamate levels |
EP1396962A1 (de) * | 2002-08-05 | 2004-03-10 | Sony International (Europe) GmbH | Busdienstschnittstelle |
WO2004026109A2 (en) * | 2002-09-20 | 2004-04-01 | Wayne State University | Molecular targets of cancer and aging |
US20040110205A1 (en) * | 2002-09-23 | 2004-06-10 | Hui Wang | Methods and systems for nanopore data analysis |
US7329545B2 (en) | 2002-09-24 | 2008-02-12 | Duke University | Methods for sampling a liquid flow |
US6911132B2 (en) | 2002-09-24 | 2005-06-28 | Duke University | Apparatus for manipulating droplets by electrowetting-based techniques |
US7267981B2 (en) | 2002-10-07 | 2007-09-11 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Human foreskin fibroblasts for culturing ES cells |
AU2003284968A1 (en) * | 2002-10-25 | 2004-05-13 | University Of South Florida | Methods and compounds for disruption of cd40r/cd40l signaling in the treatment of alzheimer's disease |
WO2004040252A2 (en) | 2002-10-30 | 2004-05-13 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Molecules and methods using same for measuring non-transferrin bound iron |
US20050054097A1 (en) * | 2002-11-17 | 2005-03-10 | Tony Peled | EX-VIVO expansion of hematopoietic system cell populations in mononuclear cell cultures |
WO2004050826A2 (en) * | 2002-11-29 | 2004-06-17 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Method of dynamically culturing embryonic stem cells |
CA2508726A1 (en) | 2002-12-06 | 2004-07-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals |
US7491699B2 (en) * | 2002-12-09 | 2009-02-17 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Peptide nanostructures and methods of generating and using the same |
EP2338896B1 (de) | 2002-12-12 | 2015-02-11 | R.B.T. (Rakuto Bio Technologies) Ltd. | Verwendung von Ligninperoxidase zur Haut- und Haaraufhellung |
ES2571355T3 (es) | 2002-12-16 | 2016-05-24 | Technion Res & Dev Foundation | Sistema de cultivo sin células alimentadoras ni xenocontaminantes para células madre embrionarias humanas |
US7511127B2 (en) | 2002-12-31 | 2009-03-31 | Cargill, Incorporated | Compositions, methods and systems for inferring bovine breed |
WO2004060135A2 (en) | 2003-01-02 | 2004-07-22 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Methods of predicting a benefit of antioxidant therapy for prevention of cardiovascular disease in hyperglycemic patients |
EP1583713B1 (de) | 2003-01-07 | 2009-03-25 | Ramot at Tel Aviv University Ltd. | Peptidenanostrukturen die fremdmaterial enthalten, und verfahren zur herstellung derselben |
EP1599598A4 (de) | 2003-03-04 | 2007-08-08 | Yeda Res & Dev | Pon-polypeptide, diese codierende polynukleotide und zusammensetzungen und verfahren unter verwendung davon |
CA2517959A1 (en) * | 2003-03-07 | 2004-09-16 | Gamida-Cell Ltd. | Expansion of renewable stem cell populations using modulators of pi 3-kinase |
US8017113B2 (en) | 2003-03-12 | 2011-09-13 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Compositions and methods for diagnosing and treating an inflammation |
US7294701B2 (en) * | 2003-04-02 | 2007-11-13 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antibody fragment capable of modulating multidrug resistance and compositions and kits and methods using same |
EP2330132B1 (de) | 2003-04-04 | 2013-08-14 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Antikörper gegen MMP2 oder MMP9 und pharmazeutische Zusammensetzungen davon zur Hemmung deren Metalloproteinaktivität |
CA2520023C (en) | 2003-04-08 | 2013-02-05 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Stem cells having increased sensitivity to sdf-1 and methods of generating and using same |
FR2853551B1 (fr) | 2003-04-09 | 2006-08-04 | Lab Francais Du Fractionnement | Formulation stabilisante pour compositions d'immunoglobulines g sous forme liquide et sous forme lyophilisee |
US8046171B2 (en) * | 2003-04-18 | 2011-10-25 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods and apparatus for genetic evaluation |
US8057993B2 (en) | 2003-04-26 | 2011-11-15 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for identification of coronaviruses |
US7964343B2 (en) * | 2003-05-13 | 2011-06-21 | Ibis Biosciences, Inc. | Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture |
US8158354B2 (en) | 2003-05-13 | 2012-04-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture |
AU2005234725B2 (en) * | 2003-05-22 | 2012-02-23 | Evogene Ltd. | Methods of Increasing Abiotic Stress Tolerance and/or Biomass in Plants and Plants Generated Thereby |
CA2978152C (en) | 2003-05-22 | 2021-01-26 | Evogene Ltd. | Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants and plants generated thereby |
US7554007B2 (en) | 2003-05-22 | 2009-06-30 | Evogene Ltd. | Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants |
US20050020499A1 (en) * | 2003-05-27 | 2005-01-27 | Bar Ilan University | Methods of attenuating cocaine seeking behavior employing glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) and pharmaceutical compositions and articles of manufacture suited for use in practice of the method |
US8129514B2 (en) * | 2003-06-19 | 2012-03-06 | Evogene Ltd. | Nucleotide sequences for regulating gene expression in plant trichomes and constructs and methods utilizing same |
US7498428B2 (en) * | 2003-06-19 | 2009-03-03 | Evogene Ltd. | Nucleotide sequences for regulating gene expression in plant trichomes and constructs and methods utilizing same |
JP5137400B2 (ja) | 2003-06-30 | 2013-02-06 | テル アヴィヴ ユニヴァーシティ フューチャー テクノロジー ディヴェロップメント エル.ピー. | アミロイド関連疾患を診断および処置するためのペプチド、それに対する抗体、ならびにその使用方法 |
TWI372050B (en) | 2003-07-03 | 2012-09-11 | Astex Therapeutics Ltd | (morpholin-4-ylmethyl-1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyrazoles |
PL2256106T3 (pl) | 2003-07-22 | 2015-08-31 | Astex Therapeutics Ltd | Związki 3,4-pochodne 1h-pirazolu i ich zastosowanie jako kinazy zależne od cyklin (cdk) i modulatory kinazy syntazy glikogenu-3 (gsk-3) |
CN101076585A (zh) * | 2003-08-14 | 2007-11-21 | 生物平衡公司 | 细菌株系、包括该细菌株系的组合物和其益生菌用途 |
US7846738B2 (en) | 2003-08-15 | 2010-12-07 | President And Fellows Of Harvard College | Study of polymer molecules and conformations with a nanopore |
US20080138808A1 (en) * | 2003-09-11 | 2008-06-12 | Hall Thomas A | Methods for identification of sepsis-causing bacteria |
US20060240412A1 (en) * | 2003-09-11 | 2006-10-26 | Hall Thomas A | Compositions for use in identification of adenoviruses |
US8242254B2 (en) * | 2003-09-11 | 2012-08-14 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions for use in identification of bacteria |
US20100035239A1 (en) * | 2003-09-11 | 2010-02-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for use in identification of bacteria |
US8546082B2 (en) | 2003-09-11 | 2013-10-01 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for identification of sepsis-causing bacteria |
US8097416B2 (en) | 2003-09-11 | 2012-01-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for identification of sepsis-causing bacteria |
US7517647B2 (en) * | 2003-09-29 | 2009-04-14 | New York University | Genetic screen for bioactive peptides |
US7625707B2 (en) | 2003-10-02 | 2009-12-01 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Antibacterial agents and methods of identifying and utilizing same |
IL158287A0 (en) | 2003-10-07 | 2004-05-12 | Yeda Res & Dev | Antibodies to nik, their preparation and use |
ATE509034T1 (de) | 2003-10-07 | 2011-05-15 | Yeda Res & Dev | Antikörper gegen nik, deren herstellung und verwendung |
JP2007508837A (ja) * | 2003-10-23 | 2007-04-12 | ファイザー・プロダクツ・インク | 歯周疾患のためのワクチン |
WO2005040400A2 (en) * | 2003-10-24 | 2005-05-06 | Mmi Genomics, Inc. | Methods and systems for inferring traits to manage non-beef livestock |
CA2547459C (en) | 2003-11-30 | 2013-10-08 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Modulators of nik-siva complex formation for treating immune disorders |
US8163895B2 (en) | 2003-12-05 | 2012-04-24 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions for use in identification of orthopoxviruses |
WO2005059100A2 (en) * | 2003-12-12 | 2005-06-30 | New York University | Methods and compositions relating to cystatin c |
US20100221233A1 (en) * | 2003-12-15 | 2010-09-02 | University Of South Florida | Compositions and methods for enhancing neuroprotection via administration of stem cells and blood brain barrier permeabilizers |
EP1722834B1 (de) | 2003-12-22 | 2012-06-27 | Regentis Biomaterials Ltd. | Matrix mit natürlich vorkommendem vernetztem proteingerüst |
WO2005061463A1 (en) | 2003-12-23 | 2005-07-07 | Astex Therapeutics Limited | Pyrazole derivatives as protein kinase modulators |
US8007847B2 (en) * | 2004-01-13 | 2011-08-30 | Eytan Biderman | Feeding formula appliance |
US7423139B2 (en) * | 2004-01-20 | 2008-09-09 | Insight Biopharmaceuticals Ltd. | High level expression of recombinant human erythropoietin having a modified 5′-UTR |
US20060147946A1 (en) * | 2004-01-27 | 2006-07-06 | Pinchas Akiva | Novel calcium channel variants and methods of use thereof |
EP1758998B1 (de) | 2004-01-30 | 2010-12-15 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonukleotide und verfahren zu deren anwendung bei der behandlung von fibrotischen leiden und anderen krankheiten |
US7666592B2 (en) | 2004-02-18 | 2010-02-23 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for concurrent identification and quantification of an unknown bioagent |
AU2005219441A1 (en) | 2004-03-02 | 2005-09-15 | Acceleron Pharma Inc. | ALK7 and myostatin inhibitors and uses thereof |
US8119336B2 (en) | 2004-03-03 | 2012-02-21 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions for use in identification of alphaviruses |
US8352031B2 (en) | 2004-03-10 | 2013-01-08 | Impulse Dynamics Nv | Protein activity modification |
US7238485B2 (en) | 2004-03-23 | 2007-07-03 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and apparatus for characterizing polynucleotides |
US20050239889A1 (en) * | 2004-04-26 | 2005-10-27 | Jean Gosselin | In vivo release of endogenous anti-microbial mediators by leukotriene B4 (LTB4) administration |
EP2458619B1 (de) | 2004-05-24 | 2017-08-02 | Ibis Biosciences, Inc. | Massenspektrometrie mit selektivem Ionfilter durch digitale Schwelle |
US20050266411A1 (en) * | 2004-05-25 | 2005-12-01 | Hofstadler Steven A | Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA |
EP2336330B1 (de) | 2004-06-14 | 2018-01-10 | Evogene Ltd. | An der Entwicklung von Pflanzenfasern beteiligte Polynukleotide und Polypeptide sowie Verfahren zur Verwendung davon |
US8680062B2 (en) | 2004-07-06 | 2014-03-25 | Deliversir Ltd. | System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei |
US7811753B2 (en) | 2004-07-14 | 2010-10-12 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for repairing degraded DNA |
US20090156471A1 (en) * | 2004-07-15 | 2009-06-18 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Use of anti-amyloid agents for treating and typing pathogen infections |
US20090181092A1 (en) * | 2004-07-16 | 2009-07-16 | Spinal Restoration, Inc. | Methods for Treating Joints and Discs with a Carrier Matrix and Cells |
EP1623996A1 (de) * | 2004-08-06 | 2006-02-08 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Verbessertes Verfahren zur Auswahl eines Proteins von einer Bibliothek |
US7585626B1 (en) | 2004-08-19 | 2009-09-08 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Methods for nucleic acid amplification |
EP1799812A4 (de) * | 2004-09-16 | 2009-09-09 | Gamida Cell Ltd | Verfahren zur ex-vivo-expansion von progenitor- und stammzellen durch gemeinsame kultivierung mit mesenchymzellen |
WO2006035434A2 (en) | 2004-09-28 | 2006-04-06 | Quark Biotech, Inc. | Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of alopecia, acute renal failure and other diseases |
EP3088528B1 (de) | 2004-09-29 | 2019-07-03 | Collplant Ltd. | Kollagenproduzierende pflanzen und verfahren zur erzeugung und verwendung davon |
US7968287B2 (en) | 2004-10-08 | 2011-06-28 | Medical Research Council Harvard University | In vitro evolution in microfluidic systems |
US7781402B2 (en) * | 2004-10-12 | 2010-08-24 | Closed Loop Therapies Ltd. | Methods and implantable devices for treating supraventricular arrhythmias |
MY179032A (en) | 2004-10-25 | 2020-10-26 | Cancer Research Tech Ltd | Ortho-condensed pyridine and pyrimidine derivatives (e.g.purines) as protein kinase inhibitors |
UY29177A1 (es) | 2004-10-25 | 2006-05-31 | Astex Therapeutics Ltd | Derivados sustituidos de purina, purinona y deazapurina, composiciones que los contienen métodos para su preparación y sus usos |
GB0428082D0 (en) * | 2004-12-22 | 2005-01-26 | Welcome Trust The Ltd | Therapeutic compounds |
EP1833819A1 (de) | 2004-12-30 | 2007-09-19 | Astex Therapeutics Limited | Pyrazolverbindungen, die die aktivität von cdk, gsk und aurora-kinasen modulieren |
JP2008529325A (ja) * | 2005-01-16 | 2008-07-31 | ズランゴー リミテッド | 通信ネットワークシステムおよびそれを使用するための方法 |
JP2008527563A (ja) * | 2005-01-16 | 2008-07-24 | ズランゴー リミテッド | アイコニック通信 |
ES2552338T3 (es) | 2005-01-21 | 2015-11-27 | Astex Therapeutics Limited | Compuestos farmacéuticos |
AU2006207321B2 (en) | 2005-01-21 | 2012-09-06 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical compounds |
AU2006207933B2 (en) * | 2005-01-28 | 2010-11-18 | Duke University | Apparatuses and methods for manipulating droplets on a printed circuit board |
WO2006080021A2 (en) | 2005-01-31 | 2006-08-03 | Realbio Technologies Ltd. | Multistep reaction lateral flow capillary device |
EP1871402B1 (de) | 2005-02-25 | 2017-07-26 | State of Israel, Ministry of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (A.R.O.), Volcani Center | Weintraubezellkultur zur behandlung von entzündungen |
US20060205040A1 (en) * | 2005-03-03 | 2006-09-14 | Rangarajan Sampath | Compositions for use in identification of adventitious viruses |
US8084207B2 (en) * | 2005-03-03 | 2011-12-27 | Ibis Bioscience, Inc. | Compositions for use in identification of papillomavirus |
TWI378090B (en) | 2005-04-13 | 2012-12-01 | Astex Therapeutics Ltd | Pharmaceutical compounds |
US8834862B2 (en) * | 2005-04-19 | 2014-09-16 | Nanocyte Inc. | Methods, compositions and devices utilizing stinging cells/capsules for conditioning a tissue prior to delivery of an active agent |
US20090305236A1 (en) * | 2005-05-11 | 2009-12-10 | Genetic Technologies Limited | Methods of enriching fetal cells |
WO2006126208A2 (en) | 2005-05-26 | 2006-11-30 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Compositions and methods using same for delivering agents into a target organ protected by a blood barrier |
WO2006134602A2 (en) | 2005-06-16 | 2006-12-21 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Isolated cells and populations comprising same for the treatment of cns diseases |
US20070225242A1 (en) * | 2005-06-21 | 2007-09-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method and composition for treating and preventing tumor metastasis in vivo |
CA2614531C (en) * | 2005-07-07 | 2015-06-16 | Avraham Hochberg | Nucleic acid agents for downregulating h19, and methods of using same |
WO2007007325A2 (en) | 2005-07-07 | 2007-01-18 | Fulcrum Sp Ltd. | Sp1 polypeptides, modified sp1 polypeptides and uses thereof |
AU2006271181B2 (en) | 2005-07-18 | 2012-07-12 | Protalix Ltd. | Mucosal or enteral administration of biologically active macromolecules |
CA2616281C (en) * | 2005-07-21 | 2014-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for rapid identification and quantitation of mitochondrial dna variants |
WO2007023491A2 (en) | 2005-08-24 | 2007-03-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Universal donor-derived tolerogenic cells for inducing non-syngeneic transplantation tolerance |
ES2664924T3 (es) | 2005-08-26 | 2018-04-24 | Ares Trading S.A. | Procedimiento para la preparación del interferón beta glicosilado |
US8476070B2 (en) | 2005-08-29 | 2013-07-02 | Technion Research & Development Foundation Limited | Media for culturing stem cells |
ATE466079T1 (de) | 2005-09-22 | 2010-05-15 | Yissum Res Dev Co | Nukleinsäure konstrukten, pharmazeutische kompositionen und methoden für die behandlung von krebs |
US20070087437A1 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Jifan Hu | Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo |
MX350551B (es) | 2005-10-24 | 2017-09-08 | Evogene Ltd | Polipeptidos aislados, polinucleotidos que los codifican, plantas transgenicas que expresan los mismos y metodos para usarlos. |
KR20080072748A (ko) | 2005-11-29 | 2008-08-06 | 가미다-셀 리미티드 | 줄기세포 귀소 및 생착을 향상시키는 방법 |
US8846393B2 (en) | 2005-11-29 | 2014-09-30 | Gamida-Cell Ltd. | Methods of improving stem cell homing and engraftment |
EP2363205A3 (de) | 2006-01-11 | 2014-06-04 | Raindance Technologies, Inc. | Mikrofluidische Vorrichtungen Und Verfahren Zur Verwendung Bei Der Bildung Und Kontrolle Von Nanoreaktoren |
US8541177B2 (en) | 2006-01-13 | 2013-09-24 | A Chan Holding B.V. | Treatment and diagnosis of abnormal bone density with an inhibitor of the glypican-sclerostin interaction |
EP1982450A2 (de) * | 2006-01-16 | 2008-10-22 | Zlango Ltd. | Kommunikationsnetzsystem und verfahren zu seiner verwendung |
EP1977312A2 (de) | 2006-01-16 | 2008-10-08 | Zlango Ltd. | Bildzeichenkommunikation |
US9249407B2 (en) | 2006-02-03 | 2016-02-02 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US8759292B2 (en) | 2006-02-03 | 2014-06-24 | Prolor Biotech, Llc | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US10221228B2 (en) | 2006-02-03 | 2019-03-05 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
US8048849B2 (en) | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Modigene, Inc. | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
US8450269B2 (en) | 2006-02-03 | 2013-05-28 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting growth hormone and methods of producing same |
US9458444B2 (en) | 2006-02-03 | 2016-10-04 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US20140113860A1 (en) | 2006-02-03 | 2014-04-24 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
US20150038413A1 (en) | 2006-02-03 | 2015-02-05 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
US8946155B2 (en) | 2006-02-03 | 2015-02-03 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
WO2007092252A2 (en) | 2006-02-03 | 2007-08-16 | Modigene Inc | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
US10351615B2 (en) | 2006-02-03 | 2019-07-16 | Opko Biologics Ltd. | Methods of treatment with long-acting growth hormone |
US8476234B2 (en) | 2006-02-03 | 2013-07-02 | Prolor Biotech Inc. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US8048848B2 (en) | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof |
WO2007091254A1 (en) | 2006-02-06 | 2007-08-16 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Methods and kit for diagnosing t1dm |
WO2007102146A2 (en) | 2006-03-06 | 2007-09-13 | Zetiq Technologies Ltd. | Methods and compositions for identifying a cell phenotype |
MX2008012085A (es) | 2006-03-23 | 2009-01-22 | Pluristem Ltd | Metodos para expansion de celulas y usos de celulas y medios acondicionados producidos de esta manera para terapia. |
EP2004858A4 (de) | 2006-03-28 | 2009-12-09 | Tel Hashomer Medical Res Infrastructure & Services Ltd | Verfahren und kits zur bestimmung einer veranlagung zur warfarin-resistenz |
DK3421471T3 (da) | 2006-04-25 | 2021-06-14 | Astex Therapeutics Ltd | Purin- og deazapurinderivater som farmaceutiske forbindelser |
JP2009534457A (ja) | 2006-04-26 | 2009-09-24 | キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド | がん治療用化合物としてのイミダゾ[4,5−b]ピリジン−2−オンおよびオキサゾロ[4,5−b]ピリジン−2−オン化合物およびその類似体 |
US9562837B2 (en) | 2006-05-11 | 2017-02-07 | Raindance Technologies, Inc. | Systems for handling microfludic droplets |
EP2530167A1 (de) | 2006-05-11 | 2012-12-05 | Raindance Technologies, Inc. | Mikrofluidische Vorrichtungen |
US20070281883A1 (en) * | 2006-06-05 | 2007-12-06 | Hanna Rosenfeld | Development of follicle stimulating hormone agonists and antagonists in fish |
CN100526461C (zh) * | 2006-07-10 | 2009-08-12 | 中国农业科学院棉花研究所 | 获得植物内含子序列扩增多态性的方法及其专用引物 |
WO2008010228A2 (en) | 2006-07-20 | 2008-01-24 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Photosyntheticorganisms and compositions and methods of generating same |
EP2064319B1 (de) | 2006-08-28 | 2017-02-22 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Verfahren zur erzeugung von glia- und neuronalen zellen und verwendung davon für die behandlung medizinischer leiden des zns |
WO2008143627A2 (en) | 2006-09-14 | 2008-11-27 | Ibis Biosciences, Inc. | Targeted whole genome amplification method for identification of pathogens |
US7888059B2 (en) * | 2006-10-05 | 2011-02-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Highly purified and stabilized Na,K-ATPase isoforms and methods of producing same |
EP2079860B1 (de) | 2006-10-05 | 2013-08-07 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Mikroröhrchen und herstellungsverfahren dafür |
US20080260678A1 (en) * | 2006-10-10 | 2008-10-23 | University Of Colorado | Molecular band-aid |
GB0620259D0 (en) | 2006-10-12 | 2006-11-22 | Astex Therapeutics Ltd | Pharmaceutical compounds |
EP2073807A1 (de) | 2006-10-12 | 2009-07-01 | Astex Therapeutics Limited | Pharmazeutische kombinationen |
US8916552B2 (en) | 2006-10-12 | 2014-12-23 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
JP2010507387A (ja) | 2006-10-25 | 2010-03-11 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | 新規のsiRNAおよびその使用方法 |
US20080131887A1 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Stephan Dietrich A | Genetic Analysis Systems and Methods |
MX349479B (es) | 2006-12-20 | 2017-07-31 | Evogene Ltd | Polinucleotidos y polipeptidos involucrados en el desarrollo de fibra vegetal y metodos de uso. |
CN101679408B (zh) | 2006-12-22 | 2016-04-27 | Astex治疗学有限公司 | 作为fgfr抑制剂的双环杂环化合物 |
CN101679409B (zh) | 2006-12-22 | 2014-11-26 | Astex治疗学有限公司 | 双环杂环衍生化合物、其医药组合物和其用途 |
ATE548454T1 (de) * | 2007-01-16 | 2012-03-15 | Yissum Res Dev Co | Nukleinsäurewirkstoffe zur stilllegung von h19 zwecks behandlung rheumatoider arthritis |
WO2008093331A1 (en) * | 2007-01-29 | 2008-08-07 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Antibody conjugates for circumventing multi-drug resistance |
EP2117616A2 (de) | 2007-01-31 | 2009-11-18 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Elektrisch gesponnene gerüste und verfahren zu ihrer erzeugung und verwendung |
CA2676932C (en) | 2007-02-01 | 2015-11-24 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Albumin fibers and fabrics and methods of generating and using same |
WO2008097559A2 (en) | 2007-02-06 | 2008-08-14 | Brandeis University | Manipulation of fluids and reactions in microfluidic systems |
US8871471B2 (en) * | 2007-02-23 | 2014-10-28 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid forensic DNA analysis |
ES2662036T3 (es) | 2007-02-28 | 2018-04-05 | Yeda Research And Development Company Limited | Secuencias que se dirigen al núcleo |
GB0704932D0 (en) | 2007-03-14 | 2007-04-25 | Astex Therapeutics Ltd | Pharmaceutical compounds |
US20100204266A1 (en) * | 2007-03-23 | 2010-08-12 | Ibis Biosciences, INC | Compositions for use in identification of mixed populations of bioagents |
EP2514766A3 (de) | 2007-03-29 | 2013-06-05 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antikörper, Verfahren und Kits zur Diagnose und Behandlung von Melanomen |
WO2008122980A2 (en) * | 2007-04-09 | 2008-10-16 | Evogene Ltd. | Polynucleotides, polypeptides and methods for increasing oil content, growth rate and biomass of plants |
EP1980625A1 (de) * | 2007-04-10 | 2008-10-15 | Stichting Biomedical Primate Research Center | Mittel und Verfahren zur Haplotypisierung von MHC-DRB-Loci bei Säugern und Verwendung dafür |
BRPI0810725A2 (pt) * | 2007-04-10 | 2014-10-21 | Stichting Biomedical Primate Res Ct | Método e uso de um método para determinar um haplótipo de drb em uma amostra, e, uso do kit. |
EP2503008B1 (de) | 2007-04-19 | 2015-04-01 | Molecular Detection Inc. | Verfahren, Zusammensetzungen und Kits zur Erkennung und Analyse von Antibiotika-resistenten Bakterien |
US8592221B2 (en) | 2007-04-19 | 2013-11-26 | Brandeis University | Manipulation of fluids, fluid components and reactions in microfluidic systems |
US9556210B2 (en) | 2007-04-23 | 2017-01-31 | Sabag-Rfa Ltd. | System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei |
US9156865B2 (en) | 2007-04-23 | 2015-10-13 | Deliversir Ltd | System for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei |
PT2144633E (pt) * | 2007-04-23 | 2014-10-27 | Deliversir Ltd | Um sistema para a administração de agentes terapêuticos em células vivas e núcleos de células |
WO2008132753A2 (en) | 2007-05-01 | 2008-11-06 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Methods and kits for detecting fetal cells in the maternal blood |
SG187447A1 (en) | 2007-05-07 | 2013-02-28 | Protalix Ltd | Large scale disposable bioreactor |
US9598724B2 (en) | 2007-06-01 | 2017-03-21 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids |
CA2963857A1 (en) | 2007-06-04 | 2008-12-11 | Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Tri-aryl compounds and compositions comprising the same |
US20090004662A1 (en) | 2007-06-18 | 2009-01-01 | Applera Corporation | Method and compositions for nucleic acid amplification |
WO2009007980A1 (en) | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Nucleic acid construct systems capable of diagnosing or treating a cell state |
CA2696833A1 (en) | 2007-07-15 | 2009-01-22 | Yitzchak Hillman | Disease treatment via antimicrobial peptides or their inhibitors |
IL184627A0 (en) | 2007-07-15 | 2008-12-29 | Technion Res & Dev Foundation | Agents for diagnosing and modulating metastasis and fibrosis as well as inflammation in a mammalian tissue |
AU2008278654B2 (en) | 2007-07-24 | 2014-06-05 | Evogene Ltd. | Polynucleotides, polypeptides encoded thereby, and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance and/or biomass and/or yield in plants expressing same |
ES2402334T3 (es) * | 2007-08-02 | 2013-04-30 | Gilead Biologics, Inc | Procedimientos y composiciones para el tratamiento y el diagnóstico de la fibrosis |
WO2009021233A2 (en) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Advanced Liquid Logic, Inc. | Pcb droplet actuator fabrication |
MX2010001657A (es) | 2007-08-15 | 2010-03-15 | Yeda Res & Dev | Reguladores de mmp-9 y usos de los mismos. |
US20110123481A1 (en) | 2007-08-16 | 2011-05-26 | Remedor Biomed Ltd. | Erythropoietin and fibronectin compositions for therapeutic and cosmetic applications |
EP2195650B1 (de) | 2007-09-12 | 2016-07-06 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Verfahren zur behandlung von tumoren an immunprivilegierten stellen |
EP2200622B2 (de) | 2007-09-19 | 2015-07-29 | Pluristem Ltd. | Haftende zellen von fett- oder plazenta-gewebe und ihre verwendung in der therapie |
GB0720038D0 (en) | 2007-10-12 | 2007-11-21 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
GB0720041D0 (en) | 2007-10-12 | 2007-11-21 | Astex Therapeutics Ltd | New Compounds |
US20100086914A1 (en) * | 2008-10-03 | 2010-04-08 | Roche Molecular Systems, Inc. | High resolution, high throughput hla genotyping by clonal sequencing |
ES2620487T3 (es) | 2007-10-19 | 2017-06-28 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Composiciones que comprenden semaforinas para uso en el tratamiento del cáncer |
TW200930818A (en) | 2007-10-30 | 2009-07-16 | Applied Biosystems | Method and kits for multiplex amplification of short tandem repeat loci |
US8431158B2 (en) | 2007-11-26 | 2013-04-30 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Compositions comprising fibrous polypeptides and polysaccharides |
AU2008337286B2 (en) | 2007-12-19 | 2014-08-07 | Cancer Research Technology Limited | Pyrido[2,3-b]pyrazine-8-substituted compounds and their use |
AU2008344935C1 (en) | 2007-12-27 | 2016-07-14 | Evogene Ltd. | Isolated polypeptides, polynucleotides useful for modifying water user efficiency, fertilizer use efficiency, biotic/abiotic stress tolerance, yield and biomass in plants |
US8185323B1 (en) | 2008-01-06 | 2012-05-22 | Degen Zhuo | Method of identifying exons and introns and diagnostic uses thereof |
GB0806527D0 (en) | 2008-04-11 | 2008-05-14 | Astex Therapeutics Ltd | Pharmaceutical compounds |
PL2288376T3 (pl) | 2008-04-18 | 2016-07-29 | Collplant Ltd | Sposoby generowania i wykorzystywania prokolagenu |
CA2721372A1 (en) | 2008-04-21 | 2009-10-29 | Danziger Innovations Ltd. | Plant viral expression vectors and use of same for generating genotypic variations in plant genomes |
GB0807609D0 (en) * | 2008-04-25 | 2008-06-04 | Cancer Rec Tech Ltd | Therapeutic compounds and their use |
WO2009141824A2 (en) * | 2008-05-22 | 2009-11-26 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficieny |
WO2009144720A1 (en) | 2008-05-27 | 2009-12-03 | Pluristem Ltd. | Methods of treating inflammatory colon diseases |
US8722348B2 (en) | 2008-05-28 | 2014-05-13 | Wayne State University | Method and composition for a protein transduction technology and its applications |
ES2688945T3 (es) | 2008-05-28 | 2018-11-07 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Células madre mesenquimales para el tratamiento de enfermedades del SNC |
WO2009147684A2 (en) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of ear disorders |
GB0810902D0 (en) | 2008-06-13 | 2008-07-23 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
EP2300607A2 (de) | 2008-06-26 | 2011-03-30 | Spectrum Health Innovations, LLC | Verfahren zur behandlung und verhinderung von strahlungsschäden mithilfe genetisch modifizierter mesenchymaler stammzellen |
US20110082191A1 (en) * | 2008-06-26 | 2011-04-07 | Spectrum Health Innovations, LLC | Method for treating or preventing radiation damage by in vivo gene therapy |
EP2326419B1 (de) | 2008-06-29 | 2021-04-07 | Realbio Technologies Ltd. | Flüssigkeitstransfervorrichtung, die besonders gut als einfangvorrichtung in einem biologischen assayverfahren geeignet ist |
US12038438B2 (en) | 2008-07-18 | 2024-07-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enzyme quantification |
EP4047367A1 (de) | 2008-07-18 | 2022-08-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Verfahren zum nachweis von zielanalyten unter verwendung von tropfenbibliotheken |
AU2009279434A1 (en) * | 2008-08-08 | 2010-02-11 | Navigenics, Inc. | Methods and systems for personalized action plans |
EP2657342B1 (de) | 2008-08-08 | 2015-11-18 | Genisphere, LLC | Vor Nukleaseabbruch geschützte DNA-Dendrimere |
AU2009283785B2 (en) | 2008-08-18 | 2016-01-28 | Evogene Ltd. | Isolated polypeptides and polynucleotides useful for increasing nitrogen use efficiency, abiotic stress tolerance, yield and biomass in plants |
ES2522346T3 (es) | 2008-08-22 | 2014-11-14 | Novartis Ag | Compuestos de pirrolopirimidina como inhibidores de CDK |
AU2009288781B2 (en) | 2008-09-02 | 2015-01-29 | Pluri Biotech Ltd | Adherent cells from placenta tissue and use thereof in therapy |
US8367392B2 (en) * | 2008-09-05 | 2013-02-05 | Transalgae Ltd. | Genetic transformation of algal and cyanobacteria cells by microporation |
US20110305682A1 (en) | 2008-09-11 | 2011-12-15 | Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Compositions and Methods for Treating S. Pneumonia Infection |
BRPI0919020A2 (pt) | 2008-09-12 | 2017-08-22 | Univ South Florida | Uso de células de linhagem monocitária enriquecidas para tratar isquemia e para tratar angina pectoris |
AU2009291577A1 (en) * | 2008-09-12 | 2010-03-18 | Navigenics, Inc. | Methods and systems for incorporating multiple environmental and genetic risk factors |
US8550694B2 (en) | 2008-09-16 | 2013-10-08 | Ibis Biosciences, Inc. | Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, systems, and methods |
EP2344893B1 (de) | 2008-09-16 | 2014-10-15 | Ibis Biosciences, Inc. | Mikroplatten-handhabungssysteme und verfahren |
US8148163B2 (en) | 2008-09-16 | 2012-04-03 | Ibis Biosciences, Inc. | Sample processing units, systems, and related methods |
ES2690348T3 (es) | 2008-09-24 | 2018-11-20 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Péptidos y composiciones para la prevención de la adhesión celular y métodos de uso de los mismos |
CA2736729A1 (en) | 2008-09-29 | 2010-04-01 | Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Amyloid beta-peptides and methods of use thereof |
US20100261189A1 (en) * | 2008-10-03 | 2010-10-14 | Roche Molecular Systems, Inc. | System and method for detection of HLA Variants |
US8921658B2 (en) | 2008-10-30 | 2014-12-30 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides encoding a MAP65 polypeptide and methods of using same for increasing plant yield |
US20110229892A1 (en) | 2008-11-17 | 2011-09-22 | Yehuda G Assaraf | Method for predicting a patient's responsiveness to anti-folate therapy |
WO2010058396A1 (en) | 2008-11-19 | 2010-05-27 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | A cd44vra antibody and diagnostic and therapeutic methods using same |
WO2010061383A1 (en) | 2008-11-26 | 2010-06-03 | Biodalia Microbiological Technologies Ltd. | A method of in-situ enrichment of foods with fructan |
WO2010064231A1 (en) | 2008-12-02 | 2010-06-10 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Methods of analyzing a-i rna editing and nucleic acid constructs capable of same |
US20120014927A1 (en) | 2008-12-03 | 2012-01-19 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Methods and kits for determining predisposition to cancer |
EP2373301B1 (de) | 2008-12-05 | 2013-11-06 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Verfahren zur diagnose der motorischen nervenerkrankungen |
EP2808402A3 (de) | 2008-12-29 | 2015-03-25 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Verfahren zur Vorhersage des Ansprechens auf Interferonbehandlung |
AR074925A1 (es) | 2008-12-29 | 2011-02-23 | Evogene Ltd | Polinucleotidos, polipeptidos codificados, y metodos para utilizarlos para modular la tolerancia al estres abiotico, biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan |
CA2967412C (en) | 2008-12-29 | 2018-07-17 | Tel Hashomer Medical Research, Infrastructure And Services Ltd. | Peptides and compositions for prevention of cell adhesion and methods of using same |
WO2010076794A1 (en) | 2008-12-31 | 2010-07-08 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Method of denitrifying brine and systems capable of same |
WO2010080769A2 (en) | 2009-01-06 | 2010-07-15 | Arresto Biosciences, Inc. | Chemotherapeutic methods and compositions |
IL196820A0 (en) | 2009-02-01 | 2009-11-18 | Yissum Res Dev Co | Devitalized, acellular scaffold matrices derived from micro-organs seeded with various cells |
US8691760B2 (en) | 2009-02-02 | 2014-04-08 | Ramot At Tel-Aviv University | Peptides, pharmaceutical compositions comprising same and uses thereof |
WO2010089707A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-08-12 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods and kits for determining sensitivity or resistance of prostate cancer to radiation therapy |
IL313131A (en) | 2009-02-11 | 2024-07-01 | Caris Mpi Inc | Molecular characterization of tumors |
US8158936B2 (en) | 2009-02-12 | 2012-04-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Ionization probe assemblies |
WO2010097793A2 (en) | 2009-02-26 | 2010-09-02 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Isolated populations of renal stem cells and methods of isolating and using same |
MX342016B (es) | 2009-03-02 | 2016-09-09 | Evogene Ltd | Polinucleotidos y polipeptidos aislados, y metodos para usarlos para incrementar el rendimiento de una planta y/o caracteristicas agricolas. |
DK2406279T3 (en) | 2009-03-09 | 2016-04-25 | Univ Ramot | Compositions for prevention and treatment of neurodegenerative diseases |
WO2010103517A1 (en) | 2009-03-12 | 2010-09-16 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Soluble compositions for the treatment of cxcr3-ligand associated diseases |
DK2414542T3 (da) | 2009-03-30 | 2017-11-27 | Tel Hashomer Medical Res Infrastructure & Services Ltd | Fremgangsmåder til forudsigelse af klinisk forløb for og behandling af multipel sklerose |
AU2010231514A1 (en) | 2009-04-01 | 2011-11-03 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | A method of regulating proliferation and differentiation of keratinocytes |
WO2010116375A1 (en) | 2009-04-08 | 2010-10-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Isolated peptides for regulating apoptosis |
GB0906470D0 (en) | 2009-04-15 | 2009-05-20 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
EP2421955A4 (de) | 2009-04-21 | 2012-10-10 | Genetic Technologies Ltd | Verfahren zur gewinnung von fötalem genmaterial |
WO2010125571A1 (en) | 2009-04-30 | 2010-11-04 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Anti ceacam1 antibodies and methods of using same |
CN102576024B (zh) | 2009-05-19 | 2016-10-26 | 泽蒂克科技有限公司 | 宫颈癌细胞和/或组织的鉴别染色的试剂盒和方法 |
GB0908905D0 (en) | 2009-05-26 | 2009-07-01 | Sentinel Oncology Ltd | Pharmaceutical compounds |
CN102639146A (zh) | 2009-05-27 | 2012-08-15 | 耶达研究及发展有限公司 | 蛋白酶体抑制剂及其用途 |
WO2010137013A1 (en) | 2009-05-27 | 2010-12-02 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Crystallized photosystem i units from the pea plant and their use in solid state devices |
US20120078163A1 (en) | 2009-05-27 | 2012-03-29 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Method of generating connective tissue |
WO2010137020A1 (en) | 2009-05-28 | 2010-12-02 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating inflammation |
EP2440214A4 (de) | 2009-06-08 | 2013-07-31 | Quark Pharmaceuticals Inc | Verfahren zur behandlung chronischer nierenkrankheiten |
EP3238534B1 (de) | 2009-06-10 | 2019-11-13 | Evogene Ltd. | Isolierte polynukleotide und polypeptide sowie verfahren zur verwendung davon zur erhöhung der stickstoffverwendungseffizienz, des ertrags, der wachstumsrate, der stärke, der biomasse, des ölgehalts und/oder der abiotischen stresstoleranz |
IN2012DN00715A (de) | 2009-06-24 | 2015-06-19 | Health Corp Rambam | |
US9663778B2 (en) | 2009-07-09 | 2017-05-30 | OPKO Biologies Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
WO2011004379A1 (en) | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Compositions and methods for treating cancer |
EP2454000A4 (de) | 2009-07-17 | 2016-08-10 | Ibis Biosciences Inc | Systeme zur identifizierung von biowirkstoffen |
WO2011008971A1 (en) * | 2009-07-17 | 2011-01-20 | Ibis Biosciences, Inc. | Lift and mount apparatus |
ES2753986T3 (es) | 2009-07-21 | 2020-04-15 | Tel Hashomer Medical Res Infrastructure & Services Ltd | Un método de diagnóstico de cáncer |
GB0913442D0 (en) | 2009-07-31 | 2009-09-16 | Univ Ramot | Cell-targeting nanoparticles comprising polynucleotide agents and uses thereof |
EP2467470A2 (de) | 2009-08-17 | 2012-06-27 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Pericytvorläuferzellen sowie verfahren zu ihrer herstellung und verwendung |
CN102711820A (zh) * | 2009-08-21 | 2012-10-03 | 吉联亚生物科技有限公司 | 治疗肺纤维化疾病的方法和组合物 |
US20110044907A1 (en) * | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Derek Marshall | In vivo screening assays |
CA2770276A1 (en) | 2009-08-21 | 2012-02-24 | Beeologics, Inc. | Preventing and curing beneficial insect diseases via plant transcribed molecules |
WO2011022709A1 (en) * | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Arresto Biosciences, Inc | In vitro screening assays |
EP2467396A4 (de) | 2009-08-21 | 2012-12-26 | Gilead Biologics Inc | Katalytische domänen aus lysyl-oxidase und loxl2 |
US20110076272A1 (en) * | 2009-08-21 | 2011-03-31 | Victoria Smith | Therapeutic methods and compositions |
US9642817B2 (en) | 2009-08-27 | 2017-05-09 | Technion Research & Development Foundation Limited | Liposomal compositions and uses of same |
US9610331B2 (en) | 2009-09-08 | 2017-04-04 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods for hematopoietic precursor mobilization |
EP2475784A1 (de) | 2009-09-08 | 2012-07-18 | Ramot at Tel-Aviv University Ltd. | Verfahren zur diagnose von amyotropher lateralsklerose (als) |
WO2011030329A1 (en) | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Method of treating tumors |
WO2011033506A2 (en) | 2009-09-17 | 2011-03-24 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Isolated pon1 polypeptides, polynucleotides encoding same and uses thereof in treating or preventing organophosphate exposure associated damage |
US8735124B2 (en) | 2009-09-17 | 2014-05-27 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Isolated PON1 polypeptides, polynucleotides encoding same and uses thereof in treating or preventing organophosphate exposure associated damage |
BR112012006005A2 (pt) | 2009-09-17 | 2017-09-19 | Univ Ramot | "peptídeos no tratamento de transtorno associados ao estresse oxidativo" |
US20110081706A1 (en) * | 2009-10-02 | 2011-04-07 | TransAlgae Ltd | Method and system for efficient harvesting of microalgae and cyanobacteria |
US20110091882A1 (en) * | 2009-10-02 | 2011-04-21 | Ibis Biosciences, Inc. | Determination of methylation status of polynucleotides |
EP3272869B1 (de) | 2009-10-14 | 2020-06-24 | Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Zusammensetzungen zur bekämpfung von varroa-milben bei bienen |
US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
EP2957641B1 (de) * | 2009-10-15 | 2017-05-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Multiple-displacement-amplifikation |
US9476060B2 (en) | 2009-10-21 | 2016-10-25 | Danziger Innovations Ltd. | Generating genotypic variations in plant genomes by gamete infection |
AU2010315400B2 (en) | 2009-10-27 | 2016-07-21 | Caris Mpi, Inc. | Molecular profiling for personalized medicine |
IL201999A (en) | 2009-11-08 | 2017-10-31 | Medical Res & Development Fund For Health Services Bnai Zion Medical Center The State Of Israel | A knockout mouse of the 1 – mo gene, a gene associated with morbidly extreme obesity |
WO2011058557A1 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Compositions comprising pedf and uses of same in the treatment and prevention of ovary-related syndromes |
WO2011058555A1 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | A method of editing dna in a cell and constructs capable of same |
DK3633025T3 (da) | 2009-11-12 | 2022-12-12 | Technion Res & Dev Foundation | Dyrkningsmedier, cellekulturer og metoder til dyrkning af pluripotente stamceller i en udifferentieret tilstand |
WO2011061736A1 (en) | 2009-11-17 | 2011-05-26 | Protalix Ltd. | Alkaline alpha galactosidase for the treatment of fabry disease |
EP2504472A1 (de) | 2009-11-24 | 2012-10-03 | Collplant Ltd. | Verfahren zur erzeugung von kollagenfasern |
TW201124160A (en) | 2009-11-26 | 2011-07-16 | Quark Pharmaceuticals Inc | SiRNA compounds comprising terminal substitutions |
NZ600651A (en) | 2009-11-30 | 2014-07-25 | Pluristem Ltd | Adherent cells from placenta and use of same in disease treatment |
WO2011067745A2 (en) | 2009-12-06 | 2011-06-09 | Rosetta Green Ltd. | Compositions and methods for enhancing plants resistance to abiotic stress |
EP2862929B1 (de) | 2009-12-09 | 2017-09-06 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Zusammensetzungen und Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen, Störungen oder Läsionen des ZNS |
AU2010337936B2 (en) | 2009-12-28 | 2016-06-23 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency |
EP3785712A1 (de) | 2009-12-29 | 2021-03-03 | Gamida-Cell Ltd. | Verfahren zur steigerung der proliferation und aktivität natürlicher killerzellen |
US9567605B2 (en) | 2010-01-05 | 2017-02-14 | Vascular Biogenics Ltd. | Methods for use of a specific anti-angiogenic adenoviral agent |
WO2011084193A1 (en) | 2010-01-07 | 2011-07-14 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs |
US20130052165A1 (en) | 2010-01-12 | 2013-02-28 | Livnat Bangio | Methods of Producing Adenovirus Vectors and Viral Preparations Generated Thereby |
CA2787311C (en) | 2010-01-27 | 2017-08-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies that inhibit metalloproteins |
US8815896B2 (en) | 2010-02-01 | 2014-08-26 | The Institute Of Cancer Research: Royal Cancer Hospital | 1-(5-tert-butyl-2-phenyl-2H-pyrazol-3-yl)-3-[2-fluoro-4-(1-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-B]pyridin-7-yloxy)-phenyl]-urea and related compounds and their use in therapy |
RU2549684C2 (ru) | 2010-02-04 | 2015-04-27 | Джилид Байолоджикс, Инк. | Антитела, связывающиеся с лизилоксидазоподобным ферментом-2 (loxl2), и способы их применения |
US9410131B2 (en) | 2010-02-11 | 2016-08-09 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Enzymatic systems for carbon fixation and methods of generating same |
US10351905B2 (en) | 2010-02-12 | 2019-07-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Digital analyte analysis |
US8535889B2 (en) | 2010-02-12 | 2013-09-17 | Raindance Technologies, Inc. | Digital analyte analysis |
US9366632B2 (en) | 2010-02-12 | 2016-06-14 | Raindance Technologies, Inc. | Digital analyte analysis |
US9399797B2 (en) | 2010-02-12 | 2016-07-26 | Raindance Technologies, Inc. | Digital analyte analysis |
WO2011104708A2 (en) | 2010-02-24 | 2011-09-01 | Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Methods for inhibiting necrosis |
WO2011107939A1 (en) | 2010-03-01 | 2011-09-09 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of predicting efficacy of an anti-vegfa treatment for solid tumors |
WO2011107994A1 (en) | 2010-03-04 | 2011-09-09 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of measuring protein stability |
US9267142B2 (en) | 2010-03-08 | 2016-02-23 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Recombinant protein production in heterologous systems |
WO2011112570A1 (en) | 2010-03-08 | 2011-09-15 | Monsanto Technology Llc | Polynucleotide molecules for gene regulation in plants |
WO2011111050A2 (en) | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Jacob Edrei | Methods of generating hydrogen |
EP2556085A2 (de) | 2010-04-05 | 2013-02-13 | Bar-Ilan University | Proteaseaktivierbare, porenbildende polypeptide |
WO2011128897A1 (en) | 2010-04-12 | 2011-10-20 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Populations of pancreatic progenitor cells and methods of isolating and using same |
US9458438B2 (en) | 2010-04-12 | 2016-10-04 | Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Sulfotransferase of a red microalga and uses thereof |
US9518988B2 (en) | 2010-04-18 | 2016-12-13 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies and methods of using same for treating ErbB/ErbB ligands associated diseases |
CA2797200C (en) | 2010-04-28 | 2020-03-31 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics |
GB201007286D0 (en) | 2010-04-30 | 2010-06-16 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
US20130053277A1 (en) | 2010-05-04 | 2013-02-28 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of identifying inhibitors of polypeptides-of-interest |
EP2566500B1 (de) | 2010-05-05 | 2017-04-12 | Rappaport Family Institute for Research in the Medical Sciences | Ccl1 zur verwendung für therapeutische zwecke |
IL208820A0 (en) | 2010-10-19 | 2011-01-31 | Rachel Teitelbaum | Biologic female contraceptives |
EP2569417B1 (de) | 2010-05-13 | 2018-04-18 | Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd. | Isolierte populationen adulter nierenzellen sowie verfahren zu ihrer isolierung und verwendung |
US9624285B2 (en) | 2010-06-03 | 2017-04-18 | Ramot a Tel-Aviv University Ltd. | Methods of treating diabetes and compositions capable of same |
WO2011154940A1 (en) | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Osnat Ashur-Fabian | Methods and kits for diagnosing conditions related to hypoxia |
EP2580588B1 (de) | 2010-06-08 | 2014-09-24 | President and Fellows of Harvard College | Nanoporen-vorrichtung mit graphengetragener künstlicher lipidmembran |
US9187787B2 (en) | 2010-06-16 | 2015-11-17 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Method of diagnosing and treating cancer |
BR112012032126A2 (pt) | 2010-06-16 | 2017-10-17 | Futuragene Israel Ltd Empresa Isralense | polinucleotídeo isolado, estrutura de ácido nucléico, sistema de estrutura de ácido nucléico, polipeptídeo isolado, planta, composição inseticida, e método para controlar ou exterminar um inseto |
NZ604094A (en) | 2010-06-24 | 2014-11-28 | Quark Pharmaceuticals Inc | Double stranded rna compounds to rhoa and use thereof |
US9512188B2 (en) | 2010-07-12 | 2016-12-06 | The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) | Isolated polynucleotides and methods and plants using same for regulating plant acidity |
CN103108955B (zh) | 2010-07-15 | 2015-11-25 | 工业研究与发展基金会有限公司 | 用于提高植物中非生物胁迫耐受性的核酸构建体 |
EP2593551B1 (de) | 2010-07-15 | 2016-09-14 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Isolierte hochaffine einheiten mit t-zell-rezeptorähnlicher spezifität gegenüber nativen komplexen der mhc-klasse ii und autoantigenen gad-peptiden |
EP2593480A2 (de) | 2010-07-15 | 2013-05-22 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antikörper mit t-zell-rezeptorähnlicher spezifität gegenüber nativen komplexen der mhc-klasse ii und diabetes-assoziierten autoantigenen peptiden |
WO2012011113A2 (en) | 2010-07-22 | 2012-01-26 | Shai Yarkoni | Regulatory immune cells with enhanced targeted cell death effect |
WO2012014207A2 (en) | 2010-07-27 | 2012-02-02 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Method for generating induced pluripotent stem cells from keratinocytes derived from plucked hair follicles |
WO2012014208A2 (en) | 2010-07-27 | 2012-02-02 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods and systems for assessing clonality of cell cultures |
US9144585B2 (en) | 2010-07-27 | 2015-09-29 | Technion Research & Development Foundation Limited | Isolated mesenchymal progenitor cells and extracellular matrix produced thereby |
EP2600885A2 (de) | 2010-08-04 | 2013-06-12 | Ramot at Tel Aviv University, Ltd. | Verfahren zur behandlung von autoimmunerkrankungen des zentralnervensystems (zns) und neurodegenerativen erkrankungen |
WO2012025914A1 (en) | 2010-08-22 | 2012-03-01 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Induced pluripotent stem cells derived from human pancreatic beta cells |
WO2012025925A1 (en) | 2010-08-24 | 2012-03-01 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Methods of improving transplantation using sdf-1alpha |
AR082530A1 (es) | 2010-08-30 | 2012-12-12 | Evogene Ltd | Polinucleotidos y polipeptidos aislados, y metodos para utilizarlos para aumentar la eficacia en el uso de nitrogeno, rendimiento, tasa de crecimiento, vigor, biomasa, contenido de aceite y/o tolerancia al estres abiotico |
US20130164288A1 (en) | 2010-09-07 | 2013-06-27 | Protalix Ltd. | Readthrough acetylcholinesterase (ache-r) for treating or preventing parkinson's disease |
WO2012032519A2 (en) | 2010-09-07 | 2012-03-15 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of diagnosing parkinson's disease |
WO2012032510A1 (en) | 2010-09-07 | 2012-03-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Primers for amplifying dna and methods of selecting same |
SG10202109393RA (en) | 2010-09-07 | 2021-10-28 | Technion Res & Dev Foundation | Novel Methods And Culture Media For Culturing Pluripotent Stem Cells |
ES2589678T3 (es) | 2010-09-08 | 2016-11-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Uso de linfocitos T de memoria central anti-terceros para el tratamiento anti-leucemia/linfoma |
WO2012032525A2 (en) | 2010-09-08 | 2012-03-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | An immunosuppressive drug combination for a stable and long term engraftment |
WO2012035539A1 (en) | 2010-09-15 | 2012-03-22 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Methods of expanding and redifferentiating islet beta cells |
WO2012038956A1 (en) | 2010-09-20 | 2012-03-29 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Method of treating neurodegenerative diseases |
WO2012045012A2 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Raindance Technologies, Inc. | Sandwich assays in droplets |
EP3075396A1 (de) | 2010-10-17 | 2016-10-05 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von insulinassoziierten erkrankungen |
WO2012052878A1 (en) | 2010-10-19 | 2012-04-26 | Vascular Biogenics Ltd. | Isolated polynucleotides and nucleic acid constructs for directing expression of a gene-of-interest in cells |
US20130216603A1 (en) | 2010-10-27 | 2013-08-22 | Nanocyte (Israel) Ltd. | Pharmaceutical compositions and delivery devices comprising stinging cells or capsules |
WO2012056455A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-03 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of generating antibodies to metalloenzymes |
CA2815927A1 (en) | 2010-11-03 | 2012-05-10 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusale M Ltd. | Transgenic plants with improved saccharification yields and methods of generating same |
EP2635105B1 (de) | 2010-11-04 | 2017-12-20 | Ben-Gurion University of The Negev Research and Development Authority | Acyl-coa: diacylglyzerin-acyltransferase-1-ähnliches gen (ptdgat1) und verwendungen davon |
CA2817830A1 (en) | 2010-11-15 | 2012-05-24 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Dipeptide analogs for treating conditions associated with amyloid fibril formation |
US20120122093A1 (en) | 2010-11-15 | 2012-05-17 | Life Technologies Corporation | Methods and kits for multiplex amplification of short tandem repeat loci |
US10117895B2 (en) | 2010-11-17 | 2018-11-06 | Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | T-cell therapy to neurodegenerative diseases |
GB201020179D0 (en) | 2010-11-29 | 2011-01-12 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
JP6139410B2 (ja) | 2010-12-02 | 2017-05-31 | テクニオン リサーチ アンド ディベロップメント ファウンデーション リミテッド | 角膜細胞の作製方法および該角膜細胞を含む細胞集団 |
CA2818024C (en) | 2010-12-06 | 2019-09-24 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded oligonucleotide compounds comprising positional modifications |
AU2011253984A1 (en) | 2010-12-07 | 2012-06-28 | Biobalance Llc | Method For Identifying E. Coli M-17 |
WO2012081029A1 (en) | 2010-12-15 | 2012-06-21 | Kadimastem Ltd. | Insulin producing cells derived from pluripotent stem cells |
JP2014501748A (ja) | 2010-12-21 | 2014-01-23 | リコファーマ アーベー | 涙代用物 |
CA2821257C (en) | 2010-12-22 | 2020-12-22 | Evogene Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance, yield, growth rate, vigor, biomass, oil content, and/or nitrogen use efficiency of plants |
SG191768A1 (en) | 2010-12-28 | 2013-08-30 | Kamedis Ltd | Plant extracts for the treatment and prevention of infections |
PT3272861T (pt) | 2011-01-20 | 2020-03-26 | Protalix Ltd | Construção de ácido nucleico para expressão de alfα-galactosidase em plantas e células de plantas |
US20130316358A1 (en) | 2011-01-31 | 2013-11-28 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of diagnosing disease using overlap extension pcr |
WO2012109600A2 (en) | 2011-02-11 | 2012-08-16 | Raindance Technologies, Inc. | Methods for forming mixed droplets |
EP2675819B1 (de) | 2011-02-18 | 2020-04-08 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren für molekulare etikettierung |
US20130330349A1 (en) | 2011-02-23 | 2013-12-12 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | High affinity molecules capable of binding a type a plexin receptor and uses of same |
CN103597078B (zh) | 2011-03-02 | 2016-12-14 | 富途锐基尼以色列有限公司 | 具有功能失调的t3ss蛋白的抗菌性转基因植物 |
US9796979B2 (en) | 2011-03-03 | 2017-10-24 | Quark Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway |
US9365828B2 (en) | 2011-03-03 | 2016-06-14 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Genetically modified muscle cells which express neurotrophic factors |
WO2012118911A1 (en) | 2011-03-03 | 2012-09-07 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway |
AU2012226398B9 (en) | 2011-03-06 | 2017-04-13 | Merck Serono S.A. | Low fucose cell lines and uses thereof |
US9061006B2 (en) | 2011-03-08 | 2015-06-23 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Compositions and methods for diagnosing and treating phenylketonuria (PKU) |
JP2014510084A (ja) | 2011-03-17 | 2014-04-24 | ラモット・アット・テル・アビブ・ユニバーシテイ・リミテッド | 二重特異性および単一特異性の非対称な抗体ならびにそれらの作製方法 |
WO2012123938A1 (en) | 2011-03-17 | 2012-09-20 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Quinolone analogs for treating autoimmune diseases |
EP3483607A1 (de) | 2011-03-18 | 2019-05-15 | Stichting VUmc | Verfahren zur analyse einer blutprobe einer person auf das vorhandensein eines krankheitsmarkers |
KR101835917B1 (ko) | 2011-03-22 | 2018-03-07 | 플루리스템 리미티드 | 방사선 또는 화학적 손상을 치료하는 방법들 |
WO2012127475A1 (en) | 2011-03-24 | 2012-09-27 | Neurim Pharmaceuticals (1991) Ltd. | Neuroprotective peptides |
WO2012131680A2 (en) | 2011-03-28 | 2012-10-04 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Compositions and methods for treating inflammation |
WO2012137202A1 (en) | 2011-04-05 | 2012-10-11 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Composition comprising an iron indicator attached to a microparticle and uses of same for quantifying non-transferrin bound iron (ntbi) and cellular labile iron (lci) |
US8728758B2 (en) | 2011-04-06 | 2014-05-20 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Methods of monitoring and analyzing metabolic activity profiles diagnostic and therapeutic uses of same |
CA2832812C (en) | 2011-04-15 | 2017-12-05 | Pluristem Ltd. | Methods and systems for harvesting cells |
GB201106817D0 (en) | 2011-04-21 | 2011-06-01 | Astex Therapeutics Ltd | New compound |
GB201106814D0 (en) | 2011-04-21 | 2011-06-01 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
US9816076B2 (en) | 2011-05-02 | 2017-11-14 | Wayne State University | Protein-induced pluripotent cell technology and uses thereof |
BR122020018204B1 (pt) | 2011-05-03 | 2021-11-03 | Evogene Ltd | Método para aumentar o rendimento, biomassa, taxa de crescimento, tolerância ao estresse abiótico e/ou eficiência no uso de nitrogênio de uma planta |
US9192670B2 (en) | 2011-05-04 | 2015-11-24 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Regulation of amyloid beta molecular composition for the treatment of alzheimer's disease |
WO2012153333A1 (en) | 2011-05-09 | 2012-11-15 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Regeneration and repair of mesenchymal tissue using amelogenin |
WO2012153336A2 (en) | 2011-05-12 | 2012-11-15 | Rakuto Bio Technologies Ltd. | Methods and device for lightening skin complexion |
WO2012156976A1 (en) | 2011-05-16 | 2012-11-22 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of producing artemisinin in non-host plants and vectors for use in same |
CA2836503C (en) | 2011-05-23 | 2020-09-22 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Use of akt phosphorylation as a biomarker for prognosing neurodegenerative diseases and treating same |
WO2012160526A2 (en) | 2011-05-23 | 2012-11-29 | Ofir Menashe | Formulations of microorganism comprising particles and uses of same |
AU2012264385B2 (en) | 2011-05-31 | 2018-06-28 | Hutchison Biofilm Medical Solutions Limited | Dispersion and detachment of cell aggregates |
US20140113376A1 (en) | 2011-06-01 | 2014-04-24 | Rotem Sorek | Compositions and methods for downregulating prokaryotic genes |
US10166295B2 (en) | 2011-06-02 | 2019-01-01 | Opko Biologics Ltd. | Pegylated OXM variants |
EP3216872B1 (de) | 2011-06-02 | 2020-04-01 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enzymquantifizierung |
WO2012172555A1 (en) | 2011-06-14 | 2012-12-20 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Combination therapy to prevent dcis formation and progression to breast cancer |
KR20140058506A (ko) | 2011-06-23 | 2014-05-14 | 카이마 바이오 아그리테크 리미티드 | 부분적으로 또는 완전히 다중화된 게놈을 가지는 보통계 밀 식물 또는 이의 부분물, 이의 하이브리드와 생성물, 및 이를 생성 및 사용하는 방법 |
US8658430B2 (en) | 2011-07-20 | 2014-02-25 | Raindance Technologies, Inc. | Manipulating droplet size |
MX2014000791A (es) | 2011-07-20 | 2014-10-17 | Kaiima Bio Agritech Ltd | Plantas de maiz que tienen un genoma parcial o completamente multiplicado y sus usos. |
EP2550982A1 (de) | 2011-07-27 | 2013-01-30 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Vorrichtungen für chirurgische Anwendungen |
CN112426538A (zh) | 2011-08-04 | 2021-03-02 | 耶达研究及发展有限公司 | 微rna和包含微rna的组合物 |
US9499793B2 (en) | 2011-08-09 | 2016-11-22 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Downregulation of miR-7 for promotion of beta cell differentiation and insulin production |
US20140212568A1 (en) | 2011-08-14 | 2014-07-31 | Kaiimam Bio Agritech Ltd. | Durum wheat plants having a partially or fully multiplied genome and uses thereof |
WO2013035070A1 (en) | 2011-09-07 | 2013-03-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Olfactory signature and odorant mixture having the same |
ES2657552T3 (es) | 2011-09-08 | 2018-03-05 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Nuevos biomarcadores de riesgo para el cáncer de pulmón |
MX351226B (es) | 2011-09-08 | 2017-10-05 | Yeda Res & Dev | Celulas t con memoria central anti tercera parte, metodos para producirlas y uso de las mismas en transplante y tratamiento de enfermedades. |
US10760086B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-09-01 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
MX350771B (es) | 2011-09-13 | 2017-09-15 | Monsanto Technology Llc | Métodos y composiciones para el control de malezas. |
US9840715B1 (en) | 2011-09-13 | 2017-12-12 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for delaying senescence and improving disease tolerance and yield in plants |
US10806146B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-10-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
US10829828B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-11-10 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
UA115535C2 (uk) | 2011-09-13 | 2017-11-27 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти) |
US9416363B2 (en) | 2011-09-13 | 2016-08-16 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
MX343072B (es) | 2011-09-13 | 2016-10-21 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para controlar malezas. |
US9920326B1 (en) | 2011-09-14 | 2018-03-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for increasing invertase activity in plants |
WO2013054320A1 (en) | 2011-10-11 | 2013-04-18 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam) |
US9145559B2 (en) | 2011-10-27 | 2015-09-29 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating cancer |
GB201118654D0 (en) | 2011-10-28 | 2011-12-07 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
GB201118652D0 (en) | 2011-10-28 | 2011-12-07 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
GB201118675D0 (en) | 2011-10-28 | 2011-12-14 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
GB201118656D0 (en) | 2011-10-28 | 2011-12-07 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
SG11201401648RA (en) | 2011-11-03 | 2014-05-29 | Quark Pharmaceuticals Inc | Methods and compositions for neuroprotection |
WO2013070821A1 (en) | 2011-11-08 | 2013-05-16 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the nervous system |
US9736998B2 (en) | 2011-11-23 | 2017-08-22 | Danziger Dan Flower Farm | Otomeria plants |
EP2782930B1 (de) | 2011-11-27 | 2018-07-11 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Verfahren zur angiogeneseregulierung und zusammensetzungen dafür |
AU2012348574A1 (en) | 2011-12-08 | 2014-07-24 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Mammalian fetal pulmonary cells and therapeutic use of same |
UA116097C2 (uk) | 2011-12-11 | 2018-02-12 | Зе Стейт Оф Ізраел, Міністрі Оф Агрікалче Енд Руерал Девелопмент, Агрікалчерал Рісьоч Організейшн, (А.Р.О.), Волкані Сентре | Спосіб модуляції провідності устячка рослини |
WO2013093921A1 (en) | 2011-12-20 | 2013-06-27 | Collplant Ltd. | Collagen coated synthetic polymer fibers |
EP2794107B1 (de) | 2011-12-22 | 2021-08-11 | Life Technologies Corporation | Sequenzielle lateralfluss-kapillarvorrichtung zur analytbestimmung |
JP6313219B2 (ja) | 2011-12-22 | 2018-04-18 | イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | T細胞/b細胞枯渇化のための特異的プロトコルを使用する安定かつ長期の生着のための併用療法 |
MX2014008083A (es) | 2011-12-28 | 2015-03-19 | Kaiima Bio Agritech Ltd | Una planta de sorgo cultivada que tiene un genoma parcial o totalmente multiplicado y usos de la misma. |
SG11201403756PA (en) | 2012-01-01 | 2014-11-27 | Qbi Entpr Ltd | Endo180-targeted particles for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents |
US20140364484A1 (en) | 2012-01-12 | 2014-12-11 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for treating hearing and balance disorders |
WO2013114363A2 (en) | 2012-01-30 | 2013-08-08 | Yeda Research And Development Co.Ltd. | Antimicrobial agents |
US9603907B2 (en) | 2012-02-01 | 2017-03-28 | Protalix Ltd. | Dry powder formulations of dNase I |
WO2013118120A2 (en) | 2012-02-06 | 2013-08-15 | Rosetta Green Ltd. | Isolated polynucleotides expressing or modulating micrornas or targets of same, transgenic plants comprising same and uses thereof in improving nitrogen use efficiency, abiotic stress tolerance, biomass, vigor or yield of a plant |
GB201202027D0 (en) | 2012-02-06 | 2012-03-21 | Sareum Ltd | Pharmaceutical compounds |
EP2814951B1 (de) | 2012-02-13 | 2019-04-03 | Gamida-Cell Ltd. | Kultivierung mesenchymaler stammzellen |
AU2013219935B2 (en) | 2012-02-14 | 2016-02-04 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US20150023929A1 (en) | 2012-02-19 | 2015-01-22 | Protalix Ltd. | Oral unit dosage forms and uses of same for the treatment of gaucher disease |
EP2844744A2 (de) | 2012-02-22 | 2015-03-11 | Brainstem Biotec Ltd. | Microrns zur erzeugung von astrocyten |
JP2015509366A (ja) | 2012-02-22 | 2015-03-30 | ブレインステム バイオテック リミテッド | 神経幹細胞および運動ニューロンの生成 |
US20150101074A1 (en) | 2012-03-01 | 2015-04-09 | The State of Israel, Ministry of Agriculture & Rural Development, Agriculture Research | Male sterile garlic plants, hybrid offspring of same and methods of generating and using same |
US9631028B2 (en) | 2012-03-07 | 2017-04-25 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Compositions for inhibition of quiescin sulfhydryl oxidase (QSOX1) and uses of same |
EP2828280B1 (de) | 2012-03-22 | 2018-05-02 | Ramot at Tel-Aviv University Ltd. | Multimere plif-peptide und verwendungen davon |
CA2868238A1 (en) | 2012-04-18 | 2013-10-24 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Lipidated glycosaminoglycan particles for the delivery of nucleic acids |
EP2838552A4 (de) | 2012-04-19 | 2016-05-18 | Opko Biolog Ltd | Langwirkende oxyntomodulinvarianten und verfahren zur herstellung davon |
WO2013160895A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-31 | Biokine Therapeutics Ltd. | Peptides and use thereof in the treatment of large cell lung cancer |
ES2627816T3 (es) | 2012-05-09 | 2017-07-31 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Variantes del pro-dominio de tace como inhibidor de TNF-a y su uso médico |
US8865158B2 (en) | 2012-05-22 | 2014-10-21 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Bacteriophages for reducing toxicity of bacteria |
CA2873828A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | A.B. Seeds Ltd. | Naked dsrna for silencing target molecules in plant seeds |
WO2013173923A1 (en) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Diamedica, Inc. | Formulations of human tissue kallikrein-1 for parenteral delivery and related methods |
GB201209609D0 (en) | 2012-05-30 | 2012-07-11 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
GB201209613D0 (en) | 2012-05-30 | 2012-07-11 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
EP2855507B1 (de) | 2012-06-03 | 2018-01-03 | Ben-Gurion University of The Negev Research and Development Authority | Funktionalisierte titanbindende peptide und damit beschichtete implantate |
CA2875599C (en) | 2012-06-04 | 2020-08-18 | Opko Biologics Ltd. | Pegylated oxyntomodulin variants |
HUE032613T2 (en) | 2012-06-04 | 2017-10-30 | Diamedica Therapeutics Inc | Human tissue kallikrein 1 is glycosylated isoforms |
WO2014006621A1 (en) | 2012-07-03 | 2014-01-09 | Nanospun Technologies Ltd. | Methods and devices for adsorption and biodegradation of petroleum |
CA2879443A1 (en) | 2012-07-19 | 2014-01-23 | Zoetis Llc | Bovine influenza virus compositions |
US9567569B2 (en) | 2012-07-23 | 2017-02-14 | Gamida Cell Ltd. | Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells |
US9175266B2 (en) | 2012-07-23 | 2015-11-03 | Gamida Cell Ltd. | Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity |
AU2013295770A1 (en) | 2012-07-27 | 2015-01-29 | Zoetis Services Llc | Tick toxin compositions |
EP3594331A1 (de) | 2012-07-29 | 2020-01-15 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Verwendung des reduktiven glycinpfades zur erzeugung formatotropher und autotropher mikroorganismen |
JP6340366B2 (ja) | 2012-07-31 | 2018-06-06 | イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | 運動ニューロン疾患を診断および処置する方法 |
DK2880151T3 (da) | 2012-08-06 | 2020-08-17 | Brainstorm Cell Therapeutics Ltd | Fremgangsmåder til frembringelse af mesenkymale stemceller, som udskiller neurotrofiske faktorer |
AR092868A1 (es) | 2012-09-03 | 2015-05-06 | A B Seeds Ltd | Metodo para mejorar la tolerancia al estres abiotico de plantas y plantas generadas mediante dicho metodo |
CN104755632B (zh) | 2012-09-06 | 2017-10-03 | 生命技术公司 | 多重y‑str分析 |
ES2872349T3 (es) | 2012-09-12 | 2021-11-02 | Quark Pharmaceuticals Inc | Moléculas de oligonucleótidos bicatenarios para DDIT4 y métodos de uso de las mismas |
EP2895197B1 (de) | 2012-09-12 | 2020-02-26 | Ramot at Tel-Aviv University Ltd. | Immunpartikel, verfahren zu deren herstellung, und deren verwendung |
US9611473B2 (en) | 2012-09-12 | 2017-04-04 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Double-stranded nucleic acid compounds |
DK2895608T3 (en) | 2012-09-12 | 2019-01-21 | Quark Pharmaceuticals Inc | DOUBLE-STRENGTHED OIGONUCLEOTIDE MOLECULES FOR P53 AND PROCEDURES FOR USING IT |
WO2014057490A1 (en) | 2012-10-09 | 2014-04-17 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Methods and kits for predicting prognosis of cancer using soluble mortalin in blood |
EP2908620A4 (de) | 2012-10-18 | 2016-07-27 | Monsanto Technology Llc | Verfahren und zusammensetzungen zur schädlingsbekämpfung bei pflanzen |
AU2013336237A1 (en) | 2012-10-22 | 2015-06-11 | Sabag-Rfa Ltd | A system for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei |
WO2014068408A2 (en) | 2012-10-23 | 2014-05-08 | Caris Life Sciences Switzerland Holdings, S.A.R.L. | Aptamers and uses thereof |
US10942184B2 (en) | 2012-10-23 | 2021-03-09 | Caris Science, Inc. | Aptamers and uses thereof |
WO2014064682A1 (en) | 2012-10-24 | 2014-05-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Combinations of epidermal growth factor receptor targeting antibodies for treating cancer |
US9926564B2 (en) | 2012-10-29 | 2018-03-27 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Aptamers, multimeric aptamers and uses thereof |
SG10201610223PA (en) | 2012-11-20 | 2017-02-27 | Opko Biolog Ltd | Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides |
WO2015079413A2 (en) | 2013-11-28 | 2015-06-04 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Synaptojanin-2 inhibitors and uses thereof |
IN2014MN02655A (de) | 2012-11-29 | 2015-08-21 | Yeda Res & Dev | |
AU2013361323B2 (en) | 2012-12-19 | 2018-09-06 | Caris Science, Inc. | Compositions and methods for aptamer screening |
EP2941488B1 (de) | 2013-01-01 | 2023-03-22 | Monsanto Technology LLC | Verfahren zur einfügung von dsrna in pflanzensamen zur modulation der genexpression |
US10683505B2 (en) | 2013-01-01 | 2020-06-16 | Monsanto Technology Llc | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
WO2014108850A2 (en) | 2013-01-09 | 2014-07-17 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | High throughput transcriptome analysis |
WO2014108854A1 (en) | 2013-01-09 | 2014-07-17 | Fusimab Ltd. | Monospecific anti-hgf and anti-ang2 antibodies and bispecific anti-hgf/anti-ang2 antibodies |
CN104937412B (zh) | 2013-01-17 | 2018-05-25 | 诺威尔卢斯德克有限公司 | 用于鉴定患者特定驱动突变物的方法和系统 |
US10000767B2 (en) | 2013-01-28 | 2018-06-19 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for plant pest control |
US10000737B2 (en) | 2013-02-04 | 2018-06-19 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Generation of cytotoxic tumor specific cell lines and uses thereof |
KR20150108405A (ko) | 2013-02-22 | 2015-09-25 | 조에티스 서비시즈 엘엘씨 | 가금류 성능 개선을 위한 성장 인자의 난내 투여 |
WO2014136117A1 (en) | 2013-03-06 | 2014-09-12 | Protalix Ltd. | USE OF PLANT CELLS EXPRESSING A TNFalpha POLYPEPTIDE INHIBITOR IN THERAPY |
US20160017021A1 (en) | 2013-03-06 | 2016-01-21 | Protalix Ltd. | TNF alpha INHIBITOR POLYPEPTIDES, POLYNUCLEOTIDES ENCODING SAME, CELLS EXPRESSING SAME AND METHODS OF PRODUCING SAME |
WO2014135984A2 (en) | 2013-03-07 | 2014-09-12 | Recopharma Ab | Glycosylated mucin-immunoglobulin fusion protein coated device |
WO2014164797A2 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-09 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
MX364458B (es) | 2013-03-13 | 2019-04-26 | Monsanto Technology Llc | Métodos y composiciones para el control de malezas. |
US20140283211A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Monsanto Technology Llc | Methods and Compositions for Plant Pest Control |
US10568328B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-02-25 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
WO2014147622A1 (en) | 2013-03-21 | 2014-09-25 | Collplant Ltd. | Compositions comprising collagen and prp for tissue regeneration |
CA2906314A1 (en) | 2013-03-24 | 2014-10-02 | Biolinerx Ltd. | Methods of treating myeloid leukemia |
EP2986627B1 (de) | 2013-04-18 | 2019-04-10 | Carmel Haifa University Economic Corporation Ltd. | Inhibitoren des eph-a rezeptors und verwendungen davon |
RU2015149680A (ru) | 2013-04-21 | 2017-05-24 | Йеда Ресеарч Энд Девелопмент Ко. Лтд. | Агенты для подавления активности и/или снижения количества bcl-xl и/или bcl-w |
ES2831424T3 (es) | 2013-04-23 | 2021-06-08 | Yeda Res & Dev | Células madre pluripotentes naif aisladas y métodos para generarlas |
CN105555796B (zh) | 2013-04-25 | 2019-09-17 | 耶达研究及发展有限公司 | 抑制肽对治疗炎性疾病的用途 |
GB201307577D0 (en) | 2013-04-26 | 2013-06-12 | Astex Therapeutics Ltd | New compounds |
US20140343982A1 (en) * | 2013-05-14 | 2014-11-20 | Landmark Graphics Corporation | Methods and systems related to workflow mentoring |
EP2999717B1 (de) | 2013-05-21 | 2018-08-08 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Behandlung von mastzellen-vermittelten erkrankungen |
EP3626310A1 (de) | 2013-05-27 | 2020-03-25 | Rakuto Bio Technologies Ltd. | Enzymatisches system mit kosmetischen zusammensetzungen |
ES2938044T3 (es) | 2013-06-24 | 2023-04-04 | Univ Ramot | Estructura a base de epiplón y sistema de suministro |
RU2703498C2 (ru) | 2013-07-19 | 2019-10-17 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Композиции и способы борьбы с leptinotarsa |
US9850496B2 (en) | 2013-07-19 | 2017-12-26 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
WO2015015489A1 (en) | 2013-07-30 | 2015-02-05 | Biolinerx Ltd. | Antibody for treating diabetes and autoimmune diseases |
WO2015015498A1 (en) | 2013-07-31 | 2015-02-05 | Qbi Enterprises Ltd. | Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds |
US9889200B2 (en) | 2013-07-31 | 2018-02-13 | Qbi Enterprises Ltd. | Sphingolipid-polyalkylamine-oligonucleotide compounds |
IL228026B (en) | 2013-08-19 | 2018-05-31 | Technion Res & Dev Foundation | Discovery of genetic sequences using pna sensors and isotachophoresis |
CN105980615A (zh) | 2013-08-28 | 2016-09-28 | 卡里斯生命科学瑞士控股有限公司 | 寡核苷酸探针及其用途 |
US9938316B2 (en) | 2013-08-29 | 2018-04-10 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Selective inhibitors of α2 isoform of Na,K-ATPase and use thereof for reduction of intra-ocular pressure and as cardiotonic agents |
US20160251410A1 (en) | 2013-09-03 | 2016-09-01 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Compositions and methods for expressing recombinant polypeptides |
IL228284A (en) | 2013-09-03 | 2016-12-29 | Technion Res & Dev Foundation | Implants from cellular scaffolding and blood vessel stalk |
WO2015033344A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-12 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods and kits for inhibiting pathogenicity of group a streptococcus (gas) or group g streptococcus (ggs) |
WO2015037009A1 (en) | 2013-09-16 | 2015-03-19 | Plexicure Ltd. | Isolated proteins capable of binding plexin-a4 and methods of producing and using same |
ES2717446T3 (es) | 2013-09-17 | 2019-06-21 | Yeda Res & Dev | Péptidos derivados de ERK y usos de los mismos |
US20160237404A1 (en) | 2013-10-01 | 2016-08-18 | Kadimastem Ltd. | Directed differentiation of astrocytes from human pluripotent stem cells for use in drug screening and the treatment of amyotrophic laterial sclerosis (als) |
US11901041B2 (en) | 2013-10-04 | 2024-02-13 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Digital analysis of nucleic acid modification |
KR20220130254A (ko) | 2013-10-21 | 2022-09-26 | 옵코 바이오로직스 리미티드 | 장시간-작용하는 폴리펩티드, 그의 생산 방법, 및 그의 투여 방법 |
US20150158926A1 (en) | 2013-10-21 | 2015-06-11 | Opko Biologics, Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
EP3060656A1 (de) | 2013-10-24 | 2016-08-31 | Yeda Research and Development Co., Ltd. | Polynukleotide zur codierung von brex-system-polypeptiden und verfahren zur verwendung davon |
KR20200057108A (ko) | 2013-10-25 | 2020-05-25 | 웨인 스테이트 유니버시티 | 단백질-유도 생체내 세포 재프로그래밍을 통한 세포 전환 방법, 시스템 및 조성물 |
AU2014343214B2 (en) | 2013-10-31 | 2020-04-09 | Biolinerx Ltd. | Methods of treating acute myeloid leukemia with a FLT3 mutation |
AR098295A1 (es) | 2013-11-04 | 2016-05-26 | Monsanto Technology Llc | Composiciones y métodos para controlar infestaciones de plagas y parásitos de los artrópodos |
GB201320729D0 (en) | 2013-11-25 | 2014-01-08 | Cancer Rec Tech Ltd | Therapeutic compounds and their use |
GB201320732D0 (en) | 2013-11-25 | 2014-01-08 | Cancer Rec Tech Ltd | Methods of chemical synthesis |
ES2754207T3 (es) | 2013-11-28 | 2020-04-16 | Tel Hashomer Medical Res Infrastructure & Services Ltd | Inhibidores de la ARN polimerasa I y usos de los mismos |
EP3074533B1 (de) | 2013-11-29 | 2021-10-27 | Technion Research & Development Foundation Limited | Verfahren und vorrichtung für beschleunigt oberflächenbasierte reaktionen |
US9885688B2 (en) | 2013-11-29 | 2018-02-06 | Technion Research And Development Foundation Limited | Continuous cell detection by isotachophoresis |
UA119253C2 (uk) | 2013-12-10 | 2019-05-27 | Біолоджикс, Інк. | Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл |
CA2933252A1 (en) * | 2013-12-10 | 2015-06-18 | Conexio Genomics Pty Ltd | Methods and probes for identifying gene alleles |
US10053712B2 (en) | 2013-12-10 | 2018-08-21 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Use of enzymes which catalyze pyruvate synthesis from formate and acetyl-CoA and bacteria expressing same |
US9944977B2 (en) | 2013-12-12 | 2018-04-17 | Raindance Technologies, Inc. | Distinguishing rare variations in a nucleic acid sequence from a sample |
RU2696310C1 (ru) | 2013-12-20 | 2019-08-01 | Астекс Терапьютикс Лимитед | Бициклические гетероциклические соединения и их применение в терапии |
CN105979770B (zh) | 2014-01-15 | 2019-07-05 | 孟山都技术公司 | 用于使用epsps多核苷酸的杂草控制的方法和组合物 |
WO2015114633A1 (en) | 2014-01-30 | 2015-08-06 | Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Actin binding peptides and compositions comprising same for inhibiting angiogenes is and treating medical conditions associated with same |
JP2017506259A (ja) | 2014-02-03 | 2017-03-02 | イッスム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム・リミテッドYissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | 幹細胞を枯渇させるためのカゼインキナーゼi阻害剤の使用 |
CA2936158C (en) | 2014-02-05 | 2023-06-13 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Use of mir-135 or precursor thereof for the treatment and diagnosis of a bipolar disease |
US10066014B2 (en) | 2014-02-06 | 2018-09-04 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Anti CD84 antibodies, compositions comprising same and uses thereof |
US20170101633A1 (en) | 2014-02-10 | 2017-04-13 | Protalix Ltd. | Method of maintaining disease stability in a subject having gaucher's disease |
US10564149B2 (en) | 2014-02-11 | 2020-02-18 | Brainstorm Cell Therapeutics Ltd. | Populations of mesenchymal stem cells that secrete neurotrophic factors |
CN106255882A (zh) | 2014-03-03 | 2016-12-21 | 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司 | 用于检测铜绿假单胞菌的方法和装置 |
JO3512B1 (ar) | 2014-03-26 | 2020-07-05 | Astex Therapeutics Ltd | مشتقات كينوكسالين مفيدة كمعدلات لإنزيم fgfr كيناز |
CN106456648B (zh) | 2014-03-26 | 2021-11-02 | 阿斯特克斯治疗有限公司 | Fgfr抑制剂和igf1r抑制剂的组合 |
RS61536B1 (sr) | 2014-03-26 | 2021-04-29 | Astex Therapeutics Ltd | Kombinacije fgfr- i cmet-inhibitora za lečenje kancera |
EP2923709A1 (de) | 2014-03-28 | 2015-09-30 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Mehrstufiger Mehrkomponenten-Malariaimpfstoff |
CN110506752B (zh) | 2014-04-01 | 2022-02-18 | 孟山都技术公司 | 用于控制虫害的组合物和方法 |
US11433163B2 (en) | 2014-04-10 | 2022-09-06 | Bonus Therapeutics Ltd. | Bone repair compositions |
EP3132055A2 (de) | 2014-04-14 | 2017-02-22 | Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Verfahren und kit zur bestimmung des gewebe- oder zellursprungs von dna |
ES2764504T3 (es) | 2014-04-17 | 2020-06-03 | Yeda Res & Dev | Métodos y equipos para analizar restos de unión al ADN fijados al ADN |
SG11201608772UA (en) | 2014-04-27 | 2016-11-29 | Ccam Biotherapeutics Ltd | Humanized antibodies against ceacam1 |
US11427647B2 (en) | 2014-04-27 | 2022-08-30 | Famewave Ltd. | Polynucleotides encoding humanized antibodies against CEACAM1 |
CN106460048B (zh) | 2014-04-28 | 2021-01-05 | 耶达研究及发展有限公司 | 针对试剂的微生物组应答 |
BR112016024555A2 (pt) | 2014-05-04 | 2018-01-23 | Forrest Innovations Ltd | composições e métodos de utilização das mesmas para reduzir a resistência contra larvicidas para mosquitos |
EP3145947A2 (de) | 2014-05-22 | 2017-03-29 | Yeda Research and Development Co., Ltd. | Rekombinante mikroorganismen zur kohlenstofffixierung |
WO2015186129A1 (en) | 2014-06-02 | 2015-12-10 | Technion Research & Development Foundation Limited. | Compositions and methods of selectively inhibiting irp1 and treating inflammation |
EP3149155B1 (de) | 2014-06-02 | 2020-09-23 | Kadimastem Ltd. | Verfahren zur induzierung der myelinisierung und reifung von oligodendrozyten |
WO2015200223A1 (en) | 2014-06-23 | 2015-12-30 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for regulating gene expression via rna interference |
EP3145951A1 (de) | 2014-06-24 | 2017-03-29 | InSight Biopharmaceuticals Ltd. | Verfahren zur reinigung von antikörpern |
US11807857B2 (en) | 2014-06-25 | 2023-11-07 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression |
WO2015198334A2 (en) | 2014-06-25 | 2015-12-30 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Identification of cancer stem cells and use of same for diagnosis and treatment |
WO2015198326A1 (en) | 2014-06-26 | 2015-12-30 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Liposomal formulations for delivery of nucleic acids |
WO2016005985A2 (en) | 2014-07-09 | 2016-01-14 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Method for reprogramming cells |
WO2016009436A1 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-21 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Isolated polypeptides of cd44 and uses thereof |
JP6700249B2 (ja) | 2014-07-21 | 2020-06-10 | ノベルラスディクス リミテッド | 患者特有の変異の薬物応答を測定する方法 |
CA2955414A1 (en) | 2014-07-21 | 2016-01-28 | Novellusdx Ltd. | Methods and systems for determining oncogenic index of patient specific mutations |
UA125244C2 (uk) | 2014-07-29 | 2022-02-09 | Монсанто Текнолоджі Елелсі | Спосіб умертвіння або припинення росту комахи |
JP2017525351A (ja) | 2014-07-30 | 2017-09-07 | イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッドYeda Research And Development Co.Ltd. | 多能性幹細胞の培養用培地 |
CN111624346A (zh) | 2014-08-14 | 2020-09-04 | 米密德诊断学有限公司 | 用于预测及/或决定预后的套组 |
WO2016030899A1 (en) | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating amyotrophic lateral scleroses |
JP2017534574A (ja) | 2014-09-08 | 2017-11-24 | イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッドYeda Research And Development Co.Ltd. | チロシンキナーゼ阻害薬(tki)に耐性のがんを処置するための組成物および方法 |
EP2992895A1 (de) | 2014-09-08 | 2016-03-09 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Mehrstufiger Dreikomponenten-Malariaimpfstoff |
CA2959716A1 (en) | 2014-09-08 | 2016-03-17 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Anti-her3 antibodies and uses of same |
IL234638A0 (en) | 2014-09-14 | 2014-12-02 | Yeda Res & Dev | NMDA receptor antagonists for the treatment of Gaucher disease |
US10174320B2 (en) | 2014-09-21 | 2019-01-08 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Downregulating miR-132 for the treatment of lipid related disorders |
US10570368B2 (en) | 2014-11-13 | 2020-02-25 | Enzootic Holdings Ltd. | Functional sex-reversal of decapod crustacean females |
CA2967233A1 (en) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method of analyzing microbiome |
US20180042994A1 (en) | 2014-11-17 | 2018-02-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating diseases related to mitochondrial function |
BR112017010555A2 (pt) | 2014-11-20 | 2018-02-27 | Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd | composições e métodos para produção de polipeptídeos com padrão de glicosilação modificado em células vegetais |
JP6860483B2 (ja) | 2014-11-26 | 2021-04-14 | テクノロジー イノベーション モメンタム ファンド(イスラエル)リミテッド パートナーシップTechnology Innovation Momentum Fund(israel)Limited Partnership | 細菌遺伝子の標的化削減 |
US10883111B2 (en) | 2014-11-27 | 2021-01-05 | Danziger Innovations Ltd. | Nucleic acid constructs for genome editing |
WO2016092555A2 (en) | 2014-12-11 | 2016-06-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Isolated phosphotriesterase polypeptides, polynucleotides encoding same and uses thereof in treating or preventing organophosphate exposure associated damage |
EP3233099A1 (de) | 2014-12-17 | 2017-10-25 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem, Ltd. | Phagentherapie gegen enterokokken |
WO2016103269A1 (en) | 2014-12-23 | 2016-06-30 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Populations of neural progenitor cells and methods of producing and using same |
CA2972580A1 (en) | 2014-12-30 | 2016-07-07 | Cell Cure Neurosciences Ltd. | Assessing retinal pigment epithelial cell populations |
AU2015373050B2 (en) | 2014-12-30 | 2022-09-29 | Cell Cure Neurosciences Ltd. | RPE cell populations and methods of generating same |
RU2017125957A (ru) | 2015-01-04 | 2019-02-04 | Проталикс Лтд. | Модифицированная днказа и ее применения |
WO2016116935A1 (en) | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Use of rasa2 as a prognostic and therapeutic marker for melanoma |
US10968449B2 (en) | 2015-01-22 | 2021-04-06 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
JOP20200201A1 (ar) | 2015-02-10 | 2017-06-16 | Astex Therapeutics Ltd | تركيبات صيدلانية تشتمل على n-(3.5- ثنائي ميثوكسي فينيل)-n'-(1-ميثيل إيثيل)-n-[3-(ميثيل-1h-بيرازول-4-يل) كينوكسالين-6-يل]إيثان-1.2-ثنائي الأمين |
US20180071280A1 (en) | 2015-02-26 | 2018-03-15 | Urifer Ltd. | Modulators of cell death processes |
WO2016135732A1 (en) | 2015-02-26 | 2016-09-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method of promoting hair growth |
AU2016229076B2 (en) | 2015-03-09 | 2022-01-20 | Caris Science, Inc. | Oligonucleotide probes and uses thereof |
EP3268475B1 (de) | 2015-03-11 | 2020-10-21 | Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Köderoligonukleotide zur behandlung von krankheiten |
EP3268380B1 (de) | 2015-03-12 | 2018-12-26 | Zoetis Services LLC | Pyolysinverfahren und -zusammensetzungen |
IL237852A0 (en) | 2015-03-19 | 2016-03-24 | Yeda Res & Dev | Antibodies against amphigoline, medical preparations containing them and their use |
US20180064748A1 (en) | 2015-03-27 | 2018-03-08 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating motor neuron diseases |
KR20170132293A (ko) | 2015-03-31 | 2017-12-01 | 예다 리서치 앤드 디벨럽먼트 캄파니 리미티드 | 글루타메이트 옥살로아세테이트 트랜스아미나제 1(got1) 제제와 이의 제조방법 및 용도 |
US10960035B2 (en) | 2015-04-01 | 2021-03-30 | The State of Israel, Ministry of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (ARO) (Voleaui Center) | Erodium crassifolium L'Her plant extracts and uses thereof |
US10478494B2 (en) | 2015-04-03 | 2019-11-19 | Astex Therapeutics Ltd | FGFR/PD-1 combination therapy for the treatment of cancer |
DK3280401T3 (da) | 2015-04-07 | 2021-11-15 | Ela Pharma Ltd | Sammensætninger til behandling og/eller forebyggelse af celle- eller vævsnekrose specielt rettet mod kathepsin c og/eller cela1 og/eller cela3a og/eller strukturelt relaterede enzymer dertil |
EP3081575A1 (de) | 2015-04-12 | 2016-10-19 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Anti-plasmodium-parasiten-antikörper |
WO2016174674A1 (en) | 2015-04-27 | 2016-11-03 | The Medical Research, Infrastructure and Health Services Fund of the Tel Aviv Medical Center | Egr1 targeting molecules for the treatment of inflammatory and hyperproliferative conditions |
BR112017023448A2 (pt) | 2015-04-29 | 2018-07-31 | The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) | composições anti-fitopatogênicas |
US20190031759A1 (en) | 2015-04-30 | 2019-01-31 | Technion Research & Development Foundation Limited | Chimeric antigen receptors and methods of their use |
EP3292219B9 (de) | 2015-05-04 | 2022-05-18 | Ramot at Tel-Aviv University Ltd. | Verfahren und kits zur fragmentierung von dna |
WO2016181393A1 (en) | 2015-05-11 | 2016-11-17 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Citrin inhibitors for the treatment of cancer |
WO2016185471A1 (en) | 2015-05-17 | 2016-11-24 | The Medical Research, Infrastructure and Health Services Fund of the Tel Aviv Medical Center | Compositions and methods for treating cancer |
WO2016185457A1 (en) | 2015-05-19 | 2016-11-24 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of promoting lymphangiogenesis |
US10849985B2 (en) | 2015-05-20 | 2020-12-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method of targeting senescent cells |
WO2016185469A1 (en) | 2015-05-21 | 2016-11-24 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Bacterial populations for promoting health |
EP3302571B1 (de) | 2015-05-29 | 2020-11-18 | OPKO Biologics Ltd. | Pegylierte oxyntomodulin-varianten |
UY36703A (es) | 2015-06-02 | 2016-12-30 | Monsanto Technology Llc | Composiciones y métodos para la administración de un polinucleótido en una planta |
WO2016196782A1 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-08 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for introducing nucleic acids into plants |
NL2014935B1 (en) | 2015-06-08 | 2017-02-03 | Applied Immune Tech Ltd | T cell receptor like antibodies having fine specificity. |
ES2917884T3 (es) | 2015-06-18 | 2022-07-12 | Yeda Res & Dev | Protocolos de acondicionamiento y uso de los mismos para la regeneración de tejidos |
WO2016203476A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods and compositions for diagnosing and treating urothelial cancer |
ES2893616T3 (es) | 2015-06-19 | 2022-02-09 | Opko Biologics Ltd | Factores de coagulación de acción prolongada y métodos para la producción de los mismos |
FR3037970B1 (fr) * | 2015-06-23 | 2018-11-30 | Idemia Identity And Security | Kit de pcr pour l'electrophorese capillaire |
US10590425B2 (en) | 2015-06-29 | 2020-03-17 | Caris Science, Inc. | Therapeutic oligonucleotides |
AU2016291825B2 (en) | 2015-07-16 | 2022-08-11 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Genetically modified anti-third party central memory T cells and use of same in immunotherapy |
WO2017009843A2 (en) | 2015-07-16 | 2017-01-19 | Biokine Therapeutics Ltd. | Compositions, articles of manufacture and methods for treating cancer |
EP3325494B1 (de) | 2015-07-19 | 2020-12-30 | Yeda Research and Development Co., Ltd. | Selektive inhibitoren der alpha2-haltigen isoformen der na, k-atpase und deren verwendung zur reduzierung des augeninnendruckes |
WO2017013661A1 (en) | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Phytopharma International Ltd. | Bee-ingestible compositions, methods of using same for producing honey and honey produced thereby |
CA2993652A1 (en) | 2015-07-28 | 2017-02-02 | Caris Science, Inc. | Targeted oligonucleotides |
US11230696B2 (en) | 2015-07-29 | 2022-01-25 | Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. | Large scale production of retinal pigment epithelial cells |
EP3331546B1 (de) | 2015-08-03 | 2023-10-04 | Biokine Therapeutics Ltd. | Cxcr4-antagonist zur behandlung von krebs |
WO2017021961A1 (en) | 2015-08-04 | 2017-02-09 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of screening for riboswitches and attenuators |
EA201890424A1 (ru) | 2015-08-05 | 2018-06-29 | Селл Кьюр Нейросайансес Лтд. | Получение клеток пигментного эпителия сетчатки |
EA201890442A1 (ru) | 2015-08-05 | 2018-07-31 | Селл Кьюр Нейросайансес Лтд. | Получение фоторецепторов для лечения заболеваний сетчатки |
EP3334449B1 (de) | 2015-08-10 | 2021-09-29 | The Medical Research, Infrastructure, And Health Services Fund Of The Tel Aviv Medical Center | Verfahren und pharmazeutische zusammensetzungen zur verbesserung der wundheilung mithilfe von cd24 |
US20180237790A1 (en) | 2015-08-13 | 2018-08-23 | Forrest Innovation Ltd. | Formulations and compositions for delivery of nucleic acids to plant cells |
AU2016307935B2 (en) | 2015-08-14 | 2022-08-18 | The University Of Melbourne | Mycoplasma bovis compositions |
WO2017033188A1 (en) | 2015-08-24 | 2017-03-02 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Algal oil and biofuel and methods of producing same |
US10765706B2 (en) | 2015-09-03 | 2020-09-08 | University Of South Florida | Method of stem cell delivery into the brain during chronic disease using blood brain barrier permeabilizers |
US10647981B1 (en) | 2015-09-08 | 2020-05-12 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Nucleic acid library generation methods and compositions |
WO2017042814A1 (en) | 2015-09-10 | 2017-03-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Use of perforin positive immature dendritic cells in disease treatment |
DK3353177T3 (da) | 2015-09-23 | 2020-08-24 | Janssen Pharmaceutica Nv | Tricykliske heterocykler til behandling af cancer |
RU2747644C2 (ru) | 2015-09-23 | 2021-05-11 | Янссен Фармацевтика Нв | Бигетероарил-замещенные 1,4-бензодиазепины и пути их применения для лечения рака |
GB201517217D0 (en) | 2015-09-29 | 2015-11-11 | Astex Therapeutics Ltd And Cancer Res Technology Ltd | Pharmaceutical compounds |
CN108473472B (zh) | 2015-10-02 | 2021-02-12 | 圣提内尔肿瘤学有限公司 | 作为p70s6激酶抑制剂的2-氨基喹唑啉衍生物 |
WO2017072757A1 (en) | 2015-10-25 | 2017-05-04 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies targeting quiescin sulfhydryl oxidase (qsox1) and uses of same |
WO2017072763A1 (en) | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Cell Cure Neurosciences Ltd. | Preparation of retinal pigment epithelium cells |
CA3002767C (en) | 2015-10-27 | 2023-03-14 | Zvi VOGEL | Compositions comprising cannabidiol and second therapeutic agents for the treatment of cancer |
IL242380A0 (en) | 2015-10-29 | 2016-02-01 | Yeda Res & Dev | A method for inducing the division of cardiomyocytes and treating heart diseases |
EP3370791A1 (de) | 2015-11-03 | 2018-09-12 | Ariel-University Research and Development Company Ltd. | Zusammensetzungen zur regeneration und reparatur von nervengewebe |
WO2017081689A1 (en) | 2015-11-11 | 2017-05-18 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Methods of detecting 5-hydroxymethylcytosine and diagnosing of cancer |
WO2017094001A1 (en) | 2015-11-30 | 2017-06-08 | Kadimastem Ltd | Methods for differentiating and purifying pancreatic endocrine cells |
EP3176183A1 (de) | 2015-12-02 | 2017-06-07 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von krebs ohne resistenz gegen einen tyrosinkinasehemmer (tki) |
WO2017103930A1 (en) | 2015-12-16 | 2017-06-22 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Particles comprising decellularized omentum |
WO2017115367A1 (en) | 2015-12-28 | 2017-07-06 | The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. | Composition and method for treating amyotrophic lateral sclerosis |
EP3400068A1 (de) | 2016-01-06 | 2018-11-14 | Yeda Research and Development Co., Ltd. | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von bösartigen, autoimmun- und entzündungserkrankungen |
EP3403091B1 (de) | 2016-01-11 | 2021-12-22 | Technion Research & Development Foundation Limited | Verfahren zur bestimmung der prognose von sepsis und behandlung davon |
BR112018014902A2 (pt) | 2016-01-21 | 2018-12-18 | The State Of Israel Ministry Of Agriculture & Rural Development Agricultural Res Organization Aro Vo | plantas partenocárpicas do tipo solanácea, frutos e sementes de uma planta, produtos processados comestíveis, métodos de produção e de reprodução de uma planta, |
IL243838A (en) | 2016-01-28 | 2017-07-31 | Sp Nano Ltd | The composition containing sp1 protein and carbon nanoparticles and its uses |
IL243839B (en) | 2016-01-28 | 2018-01-31 | Sp Nano Ltd | Conductive wires |
EP3408376A1 (de) | 2016-01-31 | 2018-12-05 | Hadasit Medical Research Services and Development Ltd. | Autosomale-identische pluripotente stammzellpopulationen mit nicht identischer geschlechtschromosomenzusammensetzung und verwendungen davon |
JP7072508B2 (ja) | 2016-02-04 | 2022-05-20 | イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド | 変異型p53と関連している疾患、障害または病状の処置におけるペプチドおよびその使用 |
EP3414346B1 (de) | 2016-02-14 | 2019-11-13 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Mikrobiombasierte diagnose, vorhersage und behandlung von rezidivierender fettleibigkeit |
US20190046497A1 (en) | 2016-02-14 | 2019-02-14 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Methods of modulating protein exocytosis and uses of same in therapy |
JP2019508422A (ja) | 2016-02-16 | 2019-03-28 | イッスム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム・リミテッドYissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | シアノバクテリアおよび植物の増殖を阻害するための非タンパク質性フェニルアラニン類似体 |
EP3420075A4 (de) | 2016-02-23 | 2019-10-16 | Chaya Brodie | Erzeugung von krebsstammzellen und verwendung davon |
RU2756275C2 (ru) | 2016-03-01 | 2021-09-29 | Юссум Рисёрч Девелопмент Компани Оф Зэ Хибру Юниверсити Оф Иерусалим Лтд. | Антитела, специфические к рецептору полиовируса (pvr) человека |
CN108699609A (zh) | 2016-03-03 | 2018-10-23 | 米密德诊断学有限公司 | 分析rna用于诊断感染类型 |
US20190216891A1 (en) | 2016-03-06 | 2019-07-18 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Method for modulating myelination |
IL244649A0 (en) | 2016-03-17 | 2016-06-30 | Yeda Res & Dev | Methods for the isolation of barrel-like proteases and the identification of peptides that are cleaved by Alidan |
WO2017161357A1 (en) | 2016-03-18 | 2017-09-21 | Caris Science, Inc. | Oligonucleotide probes and uses thereof |
US10421785B2 (en) | 2016-04-11 | 2019-09-24 | Bar-Ilan University | Delta receptor agonist peptides and use thereof |
EP3463402B1 (de) | 2016-05-22 | 2021-06-23 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Verfahren zur verwendung von lungenzellen zur transplantation und induktion von toleranz |
WO2017203526A1 (en) | 2016-05-23 | 2017-11-30 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of diagnosing cancer using cancer testis antigens |
IL245861A0 (en) | 2016-05-25 | 2016-09-04 | Yeda Res & Dev | Use of substances to treat drug-resistant tumors |
IL298701B2 (en) | 2016-05-25 | 2024-03-01 | Caris Science Inc | Oligonucleotide probes and their uses |
WO2017208247A1 (en) | 2016-06-02 | 2017-12-07 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Assay for the removal of methyl-cytosine residues from dna |
EP3464322B1 (de) | 2016-06-05 | 2023-04-05 | Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd. | Neuartige moleküle zur behandlung von entzündungen |
WO2017212494A1 (en) | 2016-06-09 | 2017-12-14 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting oxyntomodulin formulation and methods of producing and administering same |
US11859232B2 (en) | 2016-06-19 | 2024-01-02 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Screening for chemotherapy resistance in human haploid cells |
IL246378A0 (en) | 2016-06-21 | 2016-11-30 | Technion Res & Dev Foundation | A hybrid matrix of polymers that adhere to the mucosa and a lipidic drug release system for the treatment of oral cancer |
US10961504B2 (en) | 2016-06-27 | 2021-03-30 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Veto cells generated from memory T cells |
EP3482201B1 (de) | 2016-07-10 | 2022-12-14 | Memed Diagnostics Ltd. | Frühe diagnose von infektionen |
CN109661578B (zh) | 2016-07-10 | 2022-05-10 | 米密德诊断学有限公司 | 用于区分细菌和病毒感染的蛋白质特征 |
WO2018011803A1 (en) | 2016-07-11 | 2018-01-18 | The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. | Fusion proteins with extended serum half life |
JP7268943B2 (ja) | 2016-07-11 | 2023-05-08 | ボーナス セラピューティックス リミテッド | 組織再生のための細胞組成物 |
US20200080050A1 (en) | 2016-07-11 | 2020-03-12 | Yaakov Nahmias | Systems and methods for growing cells in vitro |
IL246722A0 (en) | 2016-07-11 | 2016-09-29 | Yeda Res & Dev | Combined treatment to increase endogenous synthesis of nitric oxide |
PT3481855T (pt) | 2016-07-11 | 2023-11-27 | Opko Biologics Ltd | Fator vii de coagulação de ação prolongada e métodos de produção do mesmo |
WO2018015881A1 (en) | 2016-07-18 | 2018-01-25 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Modular platform for targeted therapeutics |
US20190203270A1 (en) | 2016-07-24 | 2019-07-04 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Methods and kits for analyzing dna binding moieties attached to dna |
EP3497231B1 (de) | 2016-08-08 | 2023-10-04 | Technology Innovation Momentum Fund (Israel) Limited Partnership | Bakterielle systeme zur analyse von ubiquitinierten polypeptiden |
US20190180846A1 (en) | 2016-08-10 | 2019-06-13 | Memed Diagnostics Ltd. | System and method for analysis of biological data |
US10633706B2 (en) | 2016-08-10 | 2020-04-28 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Analysis of methylation status and copy number |
SG11201901272WA (en) | 2016-08-14 | 2019-03-28 | Univ Ramot | Mesenchymal cell-derived exosomes to treat neurological disorders |
IL247368A0 (en) | 2016-08-18 | 2016-11-30 | Yeda Res & Dev | Diagnostic and therapeutic uses of exosomes |
WO2018037416A1 (en) | 2016-08-25 | 2018-03-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods and compositions for treating autoimmune diseases |
IL265100B2 (en) * | 2016-08-31 | 2023-11-01 | Taro Pharma Ind | Topical formulations of phenoldopam for the treatment of skin problems |
WO2018047154A1 (en) | 2016-09-07 | 2018-03-15 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Anti-nkp46 antibodies and therapeutic use of same |
EP3512943B1 (de) | 2016-09-14 | 2023-04-12 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Crisp-seq, integriertes verfahren für massiv parallele einzelzellen-rna-seq und crispr-gepoolte screens |
WO2018051355A1 (en) | 2016-09-19 | 2018-03-22 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Tamoxifen or tamoxifen in combination with arginine/citrulline for the use in the treatment of muscular dystrophy |
WO2018060998A1 (en) | 2016-09-29 | 2018-04-05 | Memed Diagnostics Ltd. | Methods of prognosis and treatment |
US11119068B2 (en) | 2016-10-06 | 2021-09-14 | Technion Research & Development Foundation Limited | Device and method for isotachophoretic focusing large sample volumes |
IL248468A0 (en) | 2016-10-13 | 2017-01-31 | Technion Res & Dev Foundation | Use of caspase-3 inhibitors and caspase-3 activators in the preparation of medical preparations for cancer treatment and wound healing |
IL248385A0 (en) | 2016-10-18 | 2017-02-01 | Yeda Res & Dev | Treatment of circadian rhythm disorder |
WO2018087759A1 (en) | 2016-11-10 | 2018-05-17 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Phosphotriesterases for treating or preventing organophosphate exposure associated damage |
US11542508B2 (en) | 2016-11-28 | 2023-01-03 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for expressing an expression product of interest |
US20190343782A1 (en) | 2016-11-30 | 2019-11-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating liver toxicity and disorders |
MX2018016003A (es) | 2016-12-01 | 2019-05-16 | Univ Ramot | Tratamiento combinado para lesiones neurológicas. |
IL267340B2 (en) | 2016-12-15 | 2023-12-01 | Nat Inst Biotechnology Negev Ltd | Monoclonal antibodies against PCNA and their use |
US11555178B2 (en) | 2017-01-18 | 2023-01-17 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Genetically modified veto cells and use of same in immunotherapy |
IL250479A0 (en) | 2017-02-06 | 2017-03-30 | Sorek Rotem | Genetically engineered cells expressing a disarm system that confers resistance to phages and methods for their production |
IL250799A0 (en) | 2017-02-26 | 2017-04-30 | The Nat Inst For Biotechnology In The Negev Ltd | Soluble chimeras of dr3 and pro-pilot ether and their use |
IL250916A0 (en) | 2017-03-02 | 2017-06-29 | Geiger Benjamin | Methods for growing t cells in culture and their use |
CA3054962A1 (en) | 2017-03-09 | 2018-09-13 | Rick PAULS | Dosage forms of tissue kallikrein 1 |
EP3596469A1 (de) | 2017-03-12 | 2020-01-22 | Yeda Research and Development Co., Ltd. | Verfahren zur diagnose und prognose von krebs |
WO2018167780A1 (en) | 2017-03-12 | 2018-09-20 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of prognosing and treating cancer |
KR20200031559A (ko) | 2017-03-16 | 2020-03-24 | 리니지 셀 테라퓨틱스, 인크. | 망막 질환 요법의 치료 효과를 측정하는 방법 |
EP4317971A3 (de) | 2017-04-05 | 2024-04-17 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Ex-vivo-kultursystem und verfahren zur verwendung davon |
IL252151A0 (en) | 2017-05-07 | 2017-07-31 | Fainzilber Michael | Treatment of stress disorders |
JP7445429B2 (ja) | 2017-05-10 | 2024-03-07 | アリエル サイエンティフィック イノベーションズ リミテッド | 抗体の精製法 |
EP3652541B1 (de) | 2017-05-21 | 2022-12-14 | The Medical Research, Infrastructure, And Health Services Fund Of The Tel Aviv Medical Center | Kombination von markern zur diagnose von krebs |
US20200172604A1 (en) | 2017-05-23 | 2020-06-04 | Technion Research & Development Foundation Limited | Agents which inhibit gads dimerization and methods of use thereof |
GB201708665D0 (en) | 2017-05-31 | 2017-07-12 | Tropic Biosciences Uk Ltd | Compositions and methods for increasing extractability of solids from coffee beans |
EP3630973A1 (de) | 2017-05-31 | 2020-04-08 | Tropic Biosciences UK Limited | Verfahren zur auswahl von zellen mit genomeditierungsereignissen |
GB201708662D0 (en) | 2017-05-31 | 2017-07-12 | Tropic Biosciences Uk Ltd | Compositions and methods for increasing shelf-life of banana |
JOP20190280A1 (ar) | 2017-06-02 | 2019-12-02 | Janssen Pharmaceutica Nv | مثبطات fgfr2 لعلاج سرطان الأوعية الصفراوية |
WO2018229767A1 (en) | 2017-06-13 | 2018-12-20 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods for improving cell protein production yields |
WO2018229764A1 (en) | 2017-06-13 | 2018-12-20 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Treatment of advanced or progressive multiple sclerosis |
WO2019001419A1 (en) | 2017-06-27 | 2019-01-03 | Janssen Pharmaceutica Nv | NEW COMPOUNDS OF QUINOLEINONE |
EP4403646A2 (de) | 2017-07-13 | 2024-07-24 | Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Dna-ziele als gewebespezifische methylierungsmarker |
EP3652343A1 (de) | 2017-07-13 | 2020-05-20 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Digitale tröpfchen-pcr-strategie mit zwei sonden zur spezifischen detektion gewebespezifischer zirkulierender dna-moleküle |
EP3652342A1 (de) | 2017-07-13 | 2020-05-20 | Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Erkennung gewebespezifischer dna |
US20200140810A1 (en) | 2017-07-15 | 2020-05-07 | Aleph Farms | Cultured meat compositions |
IL253642A0 (en) | 2017-07-24 | 2017-09-28 | Seger Rony | Combined treatment for cancer |
IL253984A0 (en) | 2017-08-14 | 2017-09-28 | Yeda Res & Dev | Immunotherapy against aranviruses that bind through transferrin receptor 1 (tfr1 |
US11692166B2 (en) | 2017-08-23 | 2023-07-04 | Technion Research & Development Foundation Limited | Compositions and methods for improving alcohol tolerance in yeast |
EP3684796A4 (de) | 2017-09-18 | 2021-06-16 | B.G. Negev Technologies and Applications Ltd., at Ben-Gurion University | Succinat-regulierende polypeptide und deren verwendung |
WO2019058253A1 (en) | 2017-09-19 | 2019-03-28 | Tropic Biosciences UK Limited | MODIFICATION OF THE SPECIFICITY OF NON-CODING RNA MOLECULES FOR SILENCING GENE EXPRESSION IN EUKARYOTIC CELLS |
IL255664A0 (en) | 2017-11-14 | 2017-12-31 | Shachar Idit | Hematopoietic stem cells with enhanced properties |
CA3082509A1 (en) | 2017-11-24 | 2019-05-31 | Janssen Pharmaceutica Nv | Pyrazolopyridinone compounds |
JP7329510B2 (ja) | 2017-11-24 | 2023-08-18 | ヤンセン ファーマシューティカ エヌ.ベー. | ピラゾロピリジノン化合物 |
EP3717032B1 (de) | 2017-11-29 | 2023-02-15 | Ramot at Tel-Aviv University Ltd. | Verfahren zur vorbeugung oder behandlung von neurogenem schock |
CA3083436A1 (en) | 2017-11-29 | 2019-06-06 | Weedout Ltd. | Compositions, kits and methods for controlling weed of the amaranthus genus |
WO2019106680A1 (en) | 2017-12-03 | 2019-06-06 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Treatment of an ischemic heart disease |
EP3723785A1 (de) | 2017-12-17 | 2020-10-21 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Komplexe modulatoren des cop9-signalosoms (csn) und deren verwendung |
EP3731965A1 (de) | 2017-12-28 | 2020-11-04 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Verfahren zur wiedergabe von biorhythmen auf einem mikrofluidischen chip |
CN113597312A (zh) | 2018-01-25 | 2021-11-02 | M·里维特 | 用于改善的免疫疗法的方法 |
IL257225A (en) | 2018-01-29 | 2018-04-09 | Yeda Res & Dev | Treatment of sarcoma |
IL257269A (en) | 2018-01-31 | 2018-04-09 | Olender Tsviya | Signaling is directed to the endoplasmic reticulum |
EP3749689A1 (de) | 2018-02-08 | 2020-12-16 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Inhibitoren des 20s-proteasoms |
EP3921626A4 (de) | 2018-02-08 | 2022-10-19 | Phenofast Ltd | Vorrichtung und verfahren zur echtzeitzellenüberwachung |
WO2019155465A1 (en) | 2018-02-08 | 2019-08-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of identifying and using agents for treating diseases associated with intestinal barrier dysfunction |
US20210087630A1 (en) | 2018-02-18 | 2021-03-25 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalmem Ltd. | Cell free dna deconvolusion and use thereof |
EP3755340A4 (de) | 2018-02-23 | 2021-11-17 | Carmel-Haifa University Economic Corporation Ltd. | Verfahren zur behandlung von gedächtnisstörungen und kognitiver dysfunktion |
EP3759493A1 (de) | 2018-02-28 | 2021-01-06 | The Medical Research, Infrastructure and Health Services Fund of the Tel Aviv Medical Center | Verfahren zur diagnose und behandlung von blasenkrebs |
EP3765034A1 (de) | 2018-03-12 | 2021-01-20 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Behandlung einer herzkrankheit |
US11781183B2 (en) | 2018-03-13 | 2023-10-10 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Diagnostic use of cell free DNA chromatin immunoprecipitation |
CA3093647A1 (en) | 2018-03-15 | 2019-09-19 | Biond Biologics Ltd. | Methods and compositions for decreasing soluble immune receptor cd28 |
JP7518498B2 (ja) | 2018-03-29 | 2024-07-18 | テクニオン・リサーチ・アンド・ディベロップメント・ファウンデーション・リミテッド | Pten阻害剤を含む小胞およびその使用 |
IL258467A (en) | 2018-03-29 | 2018-07-04 | Ilana Kolodkin Gal | Methods of disrupting a biofilm and/or preventing formation of same |
EP3774047A1 (de) | 2018-03-29 | 2021-02-17 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Verwendung von elektrischen feldgradienten zur kontrolle der genexpression |
EP3773677A1 (de) | 2018-04-12 | 2021-02-17 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Anti-aging-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung |
EP3788626A1 (de) | 2018-04-29 | 2021-03-10 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem, Ltd. | Verfahren zur auswahl einer patientenspezifischen therapie |
GB201807192D0 (en) | 2018-05-01 | 2018-06-13 | Tropic Biosciences Uk Ltd | Compositions and methods for reducing caffeine content in coffee beans |
IL259392A (en) | 2018-05-15 | 2018-08-01 | Yeda Res & Dev | Vaccination with cancer neo-antigens |
WO2019220441A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. | Compositions and methods for treating cancer resistant to an anti-cancer agent |
AU2019277908A1 (en) | 2018-05-27 | 2021-01-07 | Biolinerx Ltd. | AGI-134 combined with a checkpoint inhibitor for the treatment of solid tumors |
WO2019234754A1 (en) | 2018-06-07 | 2019-12-12 | The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) | Nucleic acid constructs and methods of using same |
WO2019234750A1 (en) | 2018-06-07 | 2019-12-12 | The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) | Methods of regenerating and transforming cannabis |
EP3810636A1 (de) | 2018-06-25 | 2021-04-28 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Systeme und verfahren zur erhöhung der effizienz von genomeditierung |
EP3818075A1 (de) | 2018-07-04 | 2021-05-12 | Ukko Inc. | Verfahren zum de-epitoping von weizenproteinen und verwendung davon zur behandlung von zöliakie |
US20210269860A1 (en) | 2018-07-08 | 2021-09-02 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Person-specific assessment of probiotics responsiveness |
CA3100961A1 (en) | 2018-07-11 | 2020-01-16 | Immunity Pharma Ltd. | Peptide compounds and therapeutic uses of same |
BR112021000360A2 (pt) | 2018-07-11 | 2021-04-13 | Kahr Medical Ltd. | Proteína de fusão variante sirpalpha-4-1bbl e métodos de uso da mesma |
EP3827087A1 (de) | 2018-07-31 | 2021-06-02 | CollPlant Ltd. | Transgenes tabakereignis und verfahren zur detektion und verwendung davon |
IL261156A (en) | 2018-08-14 | 2020-02-27 | Fass Deborah | Chimeric quiescin sulfhydryl oxidase (qsox1) antibodies and uses of same |
US20210169908A1 (en) | 2018-08-16 | 2021-06-10 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Treatment for gene reactivation |
JP2021535100A (ja) | 2018-08-24 | 2021-12-16 | イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッドYeda Research And Development Co.Ltd. | M2マクロファージ極性化を調節する方法及び治療におけるその使用 |
CA3112135A1 (en) | 2018-09-20 | 2020-03-26 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating amyotrophic lateral sclerosis |
KR20210064274A (ko) | 2018-09-21 | 2021-06-02 | 얀센 파마슈티카 엔.브이. | 담관암종의 치료 |
US20210338767A1 (en) | 2018-09-25 | 2021-11-04 | Biolinerx Ltd. | Methods of selecting treatment for cxcr4-associated cancer |
WO2020069029A1 (en) | 2018-09-26 | 2020-04-02 | Emendobio Inc. | Novel crispr nucleases |
IL262658A (en) | 2018-10-28 | 2020-04-30 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Prevention of age related clonal hematopoiesis and diseases associated therewith |
KR20210091226A (ko) | 2018-11-08 | 2021-07-21 | 이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디. | 부착 비의존성 세포 및 그 용도 |
IL263184A (en) | 2018-11-21 | 2020-05-31 | Yarden Yosef | Method of treating cancer and compositions for same |
IL311084A (en) | 2018-11-30 | 2024-04-01 | Caris Mpi Inc | New generation molecular characterization |
EP3902806A4 (de) | 2018-12-26 | 2022-09-28 | Janssen Pharmaceutica NV | Thienopyridinonverbindungen |
EP3914698A1 (de) | 2019-01-23 | 2021-12-01 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Kulturmedien für pluripotente stammzellen |
IL264768A (en) | 2019-02-10 | 2020-08-31 | Sagi Irit | ANTI-MATRIX METALLOPROTEINASE 7 (MMP-7) inhibitory antibody and its use |
IL264854A (en) | 2019-02-14 | 2020-08-31 | Bahat Anat | Spt5 inhibitors and methods of use thereof |
WO2020170239A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of generating organoids for high throughput screening of drugs |
EP3927378A1 (de) | 2019-02-21 | 2021-12-29 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Verfahren zur reduktion von arzneimittelinduzierter nephrotoxizität |
CN113692225B (zh) | 2019-03-05 | 2023-04-18 | 以色列农业和农村发展部农业研究组织(范卡尼中心) | 经基因组编辑的鸟类 |
WO2020183322A1 (en) | 2019-03-08 | 2020-09-17 | Taro Pharmaceutical Industries Ltd. | Stable topical compositions of fenoldopam |
CN113795887A (zh) | 2019-03-10 | 2021-12-14 | 阿尔缇玛基因组学公司 | 用于序列判定的方法和系统 |
WO2020183473A1 (en) | 2019-03-14 | 2020-09-17 | Biond Biologics Ltd. | Small shedding blocking agents |
GB201903521D0 (en) | 2019-03-14 | 2019-05-01 | Tropic Biosciences Uk Ltd | No title |
GB201903519D0 (en) | 2019-03-14 | 2019-05-01 | Tropic Biosciences Uk Ltd | Introducing silencing activity to dysfunctional rna molecules and modifying their specificity against a gene of interest |
GB201903520D0 (en) | 2019-03-14 | 2019-05-01 | Tropic Biosciences Uk Ltd | Modifying the specificity of non-coding rna molecules for silencing genes in eukaryotic cells |
IL265486A (en) | 2019-03-19 | 2020-09-30 | Yeda Res & Dev | Bistable type ii opsins and uses thereof |
WO2020194317A1 (en) | 2019-03-28 | 2020-10-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method of treating lipid-related disorders |
SG11202109902SA (en) | 2019-03-29 | 2021-10-28 | Janssen Pharmaceutica Nv | Fgfr tyrosine kinase inhibitors for the treatment of urothelial carcinoma |
JP2022527482A (ja) | 2019-03-29 | 2022-06-02 | ヤンセン ファーマシューティカ エヌ.ベー. | 尿路上皮癌の治療のためのfgfrチロシンキナーゼ阻害剤 |
EP3946611A2 (de) | 2019-03-31 | 2022-02-09 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Antivirale und antitumorale verbindungen |
EP3947728A1 (de) | 2019-04-03 | 2022-02-09 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Primer für multiplex-pcr |
EP3956477A2 (de) | 2019-04-17 | 2022-02-23 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Marker für die methylierung von krebszellen und verwendung davon |
IL266433B (en) | 2019-05-02 | 2020-11-30 | Sagi Irit | Compositions comprising the propeptide of lysyl oxidase and uses thereof |
US20220220559A1 (en) | 2019-05-13 | 2022-07-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Cell-free mirna biomarkers for prognosis and diagnosis of neurodegenerative diseases |
IL266728B (en) | 2019-05-19 | 2020-11-30 | Yeda Res & Dev | Identification of recurrent mutant neopeptides |
JP2022533745A (ja) | 2019-05-22 | 2022-07-25 | ハダシット メディカル リサーチ サービシーズ アンド ディベロップメント リミテッド | ヒト多能性細胞を培養する方法 |
CA3141995A1 (en) | 2019-06-12 | 2020-12-17 | Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. | Methods of generating oligodendrocytes |
US20220307008A1 (en) | 2019-06-16 | 2022-09-29 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method for stabilizing intracellular rna |
WO2020261281A1 (en) | 2019-06-27 | 2020-12-30 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Semaphorin 3a antibodies and uses thereof |
CA3145972A1 (en) | 2019-07-04 | 2021-01-07 | Ukko Inc. | De-epitoped alpha gliadin and use of same for the management of celiac disease and gluten sensitivity |
US20220267409A1 (en) | 2019-07-11 | 2022-08-25 | Kahr Medical Ltd. | Heterodimers and methods of use thereof |
WO2021009740A1 (en) | 2019-07-16 | 2021-01-21 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Compositions and methods for the treatment of tuberculosis |
IL268111A (en) | 2019-07-16 | 2021-01-31 | Fainzilber Michael | Methods of treating pain |
WO2021019526A1 (en) | 2019-07-29 | 2021-02-04 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating and diagnosing lung cancer |
US20220298522A1 (en) | 2019-07-30 | 2022-09-22 | The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization | Methods of controlling cannabinoid synthesis in plants or cells and plants and cells produced thereby |
WO2021028909A1 (en) | 2019-08-12 | 2021-02-18 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Dna repair blood test for predicting response of lung cancer patients to immunotherapy |
MX2022001841A (es) | 2019-08-12 | 2022-08-17 | Biond Biologics Ltd | Anticuerpos contra ilt2 y uso de los mismos. |
US20220295799A1 (en) | 2019-08-14 | 2022-09-22 | Lavie Bio Ltd. | Bacterial strains having fungicidal activity, compositions comprising same and use thereof |
GB201911928D0 (en) | 2019-08-20 | 2019-10-02 | Otsuka Pharma Co Ltd | Pharmaceutical compounds |
US20240140988A1 (en) | 2019-08-22 | 2024-05-02 | Ariel Scientific Innovations Ltd. | Scaled-up methods for purifying antibodies |
WO2021038569A1 (en) | 2019-08-27 | 2021-03-04 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Treatment of bacterial vaginosis |
WO2021048852A1 (en) | 2019-09-11 | 2021-03-18 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of treating breast cancer |
WO2021059270A2 (en) | 2019-09-23 | 2021-04-01 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | TREATMENT OF GENETIC DISEASES CHARACTERIZED BY UNSTABLE mRNAs |
IL269674B (en) | 2019-09-25 | 2020-08-31 | Roy Bar Ziv | Assembling protein complexes on a chip |
GB201913921D0 (en) | 2019-09-26 | 2019-11-13 | Sentinel Oncology Ltd | Pharmaceutical compounds |
IL270306A (en) | 2019-10-30 | 2021-05-31 | Yeda Res & Dev | Prevention and treatment of pre-myeloid and myeloid malignancies |
WO2021084526A1 (en) | 2019-10-31 | 2021-05-06 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Engineered autotrophic bacteria for co2 conversion to organic materials |
CA3160506A1 (en) | 2019-11-11 | 2021-05-20 | Ibi-Ag Innovative Bio Insecticides Ltd. | Insect control nanobodies and uses thereof |
US20230022576A1 (en) | 2019-11-19 | 2023-01-26 | Protalix Ltd. | Removal of constructs from transformed cells |
IL270800A (en) | 2019-11-20 | 2021-05-31 | Yeda Res & Dev | A method for treating Alzheimer's disease |
KR20220130108A (ko) | 2019-12-02 | 2022-09-26 | 캐리스 엠피아이, 아이엔씨. | 범-암 백금 반응 예측기 |
IL271656A (en) | 2019-12-22 | 2021-06-30 | Yeda Res & Dev | System and methods for identifying cells that have undergone genome editing |
EP4077731A1 (de) | 2019-12-22 | 2022-10-26 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Diagnose einer frontotemporalen demenz |
GB201919219D0 (en) | 2019-12-23 | 2020-02-05 | Otsuka Pharma Co Ltd | Cancer biomarkers |
IL271778A (en) | 2019-12-31 | 2021-06-30 | Ichilov Tech Ltd | Methods for treating atopic dermatitis |
US20230048719A1 (en) | 2019-12-31 | 2023-02-16 | Kahr Medical Ltd. | Methods of culturing t cells with a 4-1bbl fusion polypeptide and uses of same |
US20230048361A1 (en) | 2019-12-31 | 2023-02-16 | Kahr Medical Ltd. | Methods of culturing t cells and uses of same |
WO2021137241A1 (en) | 2020-01-02 | 2021-07-08 | Edity Therapeutics Ltd. | Delivery compositions and methods |
IL272074B1 (en) | 2020-01-15 | 2024-08-01 | Immunity Pharma Ltd | Peptide compounds and their use in methods of treating diseases |
IL272194A (en) | 2020-01-22 | 2021-07-29 | Yeda Res & Dev | Multi-target antibodies for use in the treatment of diseases |
WO2021152584A1 (en) | 2020-01-28 | 2021-08-05 | Ariel Scientific Innovations Ltd. | Methods of analyzing cell membranes |
WO2021152586A1 (en) | 2020-01-30 | 2021-08-05 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of analyzing microbiome, immunoglobulin profile and physiological state |
EP4096647A1 (de) | 2020-01-30 | 2022-12-07 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Behandlung einer akuten lebererkrankung mit tlr-mik-inhibitoren |
IL272389A (en) | 2020-01-30 | 2021-08-31 | Yeda Res & Dev | Kits containing antibodies to PD-L1 and their uses in therapy |
IL272390A (en) | 2020-01-30 | 2021-08-31 | Yeda Res & Dev | Cancer treatment methods |
IL295500A (en) | 2020-02-09 | 2022-10-01 | Nlc Pharma Ltd | Rapid detection test for sars-cov-2 |
IL272586A (en) | 2020-02-10 | 2021-08-31 | Yeda Res & Dev | A method for cell cluster analysis |
TW202140012A (zh) | 2020-02-12 | 2021-11-01 | 比利時商健生藥品公司 | 用於治療尿路上皮癌的fgfr酪胺酸激酶抑制劑和抗pd1藥劑 |
CN115103678A (zh) | 2020-02-12 | 2022-09-23 | 詹森药业有限公司 | 用于治疗高风险非肌层浸润性膀胱癌的fgfr酪氨酸激酶抑制剂 |
WO2021181388A1 (en) | 2020-03-09 | 2021-09-16 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of diagnosing and treating p53 mutant cancer |
US20230127559A1 (en) | 2020-03-16 | 2023-04-27 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Peptide analogs and use of same in treating diseases, disorders or conditions associated with mutant p53 protein |
BR112022019510A2 (pt) | 2020-03-29 | 2022-11-16 | Yeda Res & Dev | Variantes de beta-glucocerebrosidase para uso no tratamento de doença de gaucher |
EP4125440A1 (de) | 2020-03-31 | 2023-02-08 | Biomuse Ltd. | Bakterien zur vorbeugung und behandlung von rauchinduzierten lungenschäden |
WO2021205444A1 (en) | 2020-04-06 | 2021-10-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of diagnosing cancer and predicting responsiveness to therapy |
WO2021205453A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods for nucleic acid detection |
EP4132479A1 (de) | 2020-04-07 | 2023-02-15 | Ramot at Tel-Aviv University Ltd. | Cannabidiolhaltige zusammensetzungen und verwendungen davon |
US20230135456A1 (en) | 2020-04-13 | 2023-05-04 | Exoprother Medical Ltd. | Cell-derived vesicles comprising wild-type p53 protein for antiviral therapy |
WO2021209993A1 (en) | 2020-04-13 | 2021-10-21 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Use of metabolic regulators for the treatment of covid-19 |
US20210322483A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Ichilov Tech Ltd. | Cell-derived particles presenting heterologous cd24 and use thereof in therapy |
CN115867265A (zh) | 2020-05-01 | 2023-03-28 | 耶路撒冷希伯来大学伊萨姆研发有限公司 | 作为抗covid-19药剂的e蛋白通道阻断剂和orf3抑制剂 |
WO2022113069A1 (en) | 2020-11-24 | 2022-06-02 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | E protein channel blockers and orf3 inhibitors as anti-covid-19 agents |
WO2021229577A1 (en) | 2020-05-12 | 2021-11-18 | Collplant Ltd. | Collagen as a delivery tool for metal-based anti-viral agents |
IL274811B (en) | 2020-05-20 | 2021-05-31 | Yeda Res & Dev | Spatial information is developed for the analysis of individual cells |
US20230293530A1 (en) | 2020-06-24 | 2023-09-21 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Agents for sensitizing solid tumors to treatment |
WO2022013874A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Composition comprising cannabinoids, terpenes, and flavonoids for treating depression |
IL276599A (en) | 2020-08-09 | 2022-03-01 | Yeda Res & Dev | T cell receptor unique to mage-a1 and its uses |
IL276627A (en) | 2020-08-10 | 2022-03-01 | Yeda Res & Dev | Compositions for diagnosis and treatment of coronavirus infections |
IL300588A (en) | 2020-08-12 | 2023-04-01 | Biond Biologics Ltd | Antibodies against ILT-2 and their use |
US20230309480A1 (en) | 2020-08-18 | 2023-10-05 | International Rice Research Institute | Methods of increasing outcrossing rates in gramineae |
JP2023539867A (ja) | 2020-08-27 | 2023-09-20 | 大塚製薬株式会社 | Mdm2アンタゴニストを用いた癌治療に関するバイオマーカー |
WO2022053697A1 (en) | 2020-09-14 | 2022-03-17 | Janssen Pharmaceutica Nv | Fgfr inhibitor combination therapies |
IL277488A (en) | 2020-09-21 | 2022-04-01 | Yeda Res & Dev | Weight regulation method |
WO2022064494A2 (en) | 2020-09-23 | 2022-03-31 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods and compositions for treating coronaviral infections |
GB202015187D0 (en) | 2020-09-25 | 2020-11-11 | Sentinel Oncology Ltd | A pharmaceutical salt |
IL277743A (en) | 2020-10-01 | 2022-04-01 | Yeda Res & Dev | A method for diagnosing breast cancer |
WO2022074646A1 (en) | 2020-10-05 | 2022-04-14 | Protalix Ltd. | Dicer-like knock-out plant cells |
WO2022074656A1 (en) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | Protalix Ltd. | Long-acting dnase |
EP4228637A1 (de) | 2020-10-15 | 2023-08-23 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Verfahren zur behandlung von myeloidmalignitäten |
IL278401A (en) | 2020-10-29 | 2022-05-01 | Yeda Res & Dev | Polynucleotides for editing RNA and a method for using them |
IL302594A (en) | 2020-11-09 | 2023-07-01 | 1E Therapeutics Ltd | Methods based on catalytic sequences for the treatment or prevention of bacterial infections |
EP4251641A1 (de) | 2020-11-26 | 2023-10-04 | Ukko Inc. | Modifizierte gluteninuntereinheit mit hohem molekulargewicht und verwendungen davon |
IL279559A (en) | 2020-12-17 | 2022-07-01 | Yeda Res & Dev | Controlling the ubiquitination process of mlkl for disease treatment |
KR20230133859A (ko) | 2020-12-28 | 2023-09-19 | 1이 테라퓨틱스 엘티디. | p21 mRNA 표적화 DNA자임 |
WO2022144882A2 (en) | 2020-12-28 | 2022-07-07 | 1E Therapeutics, Ltd. | P21 mrna target areas for silencing |
WO2022144903A1 (en) | 2021-01-03 | 2022-07-07 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Cancer driver mutation diagnostics |
JP2024502377A (ja) | 2021-01-10 | 2024-01-18 | スーパーミート ザ エッセンス オブ ミート リミテッド | 培養肉産業用の多能性幹細胞凝集体及びそれから得られる微小組織 |
WO2022153286A1 (en) | 2021-01-14 | 2022-07-21 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of producing vitamin d |
MX2023008604A (es) | 2021-01-21 | 2023-10-10 | Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd | Nanopartículas de arni y métodos de uso de las mismas en agricultura. |
IL280340B (en) | 2021-01-21 | 2022-04-01 | Yeda Res & Dev | Antibodies, peptides and their combinations for the treatment and prevention of corona virus infections |
JP2024506955A (ja) | 2021-02-18 | 2024-02-15 | イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | ワクチンを作製する方法 |
EP4294429A1 (de) | 2021-02-18 | 2023-12-27 | Yeda Research and Development Co. Ltd | Genetisch modifizierte bakterien zur erzeugung von impfstoffen |
GB202103080D0 (en) | 2021-03-04 | 2021-04-21 | Otsuka Pharma Co Ltd | Cancer biomarkers |
IL281561A (en) | 2021-03-16 | 2022-10-01 | Yeda Res & Dev | Methods and devices for growing mouse embryos outside the uterus |
CA3213424A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Lior Moshe ZELCBUCH | Pseudomonas bacteriophage and uses thereof |
IL282188A (en) | 2021-04-08 | 2022-11-01 | Yeda Res & Dev | Combined use of ketamine and bretigabine for the treatment of psychiatric disorders |
KR20240004540A (ko) | 2021-04-20 | 2024-01-11 | 비온드 바이오로직스 엘티디 | 세포내 전달 조성물 |
AU2022272135A1 (en) | 2021-05-12 | 2024-01-04 | Biomx Ltd. | Staphylococcus bacteriophage and uses thereof |
WO2022243467A1 (en) | 2021-05-19 | 2022-11-24 | Janssen Pharmaceutica Nv | Fgfr tyrosine kinase inhibitors for the treatment of advanced solid tumors |
EP4348265A2 (de) | 2021-05-25 | 2024-04-10 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Diagnose von autismusspektrumsstörungen durch multiomics-plattform |
IL283563A (en) | 2021-05-30 | 2022-12-01 | Yeda Res & Dev | Profiling of amps for the diagnosis, monitoring and treatment of microbiome-related diseases |
IL309061A (en) | 2021-06-06 | 2024-02-01 | Yeda res & development co ltd | Combined cancer treatment |
CN117836402A (zh) | 2021-06-13 | 2024-04-05 | 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司 | 重编程人细胞的方法 |
WO2022264076A1 (en) | 2021-06-16 | 2022-12-22 | Seedx Technologies Inc. | Methods of sorting matthiola seeds |
NL2028466B1 (en) | 2021-06-16 | 2022-12-21 | Sakata Holland B V | Methods of sorting matthiola seeds |
WO2023275590A1 (en) | 2021-06-29 | 2023-01-05 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Detection of phosphoinositides in blood cells as a biomarker for alpha synuclein associated pathologies and a method of treatment of parkinson's disease and the related neurodegenerations |
CA3223344A1 (en) | 2021-07-02 | 2023-01-05 | Tropic Biosciences UK Limited | Delay or prevention of browning in banana fruit |
WO2023003809A1 (en) | 2021-07-18 | 2023-01-26 | Gamida-Cell Ltd. | Therapeutic nk cell populations |
WO2023002492A1 (en) | 2021-07-22 | 2023-01-26 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Codon optimization of nucleic acids |
KR20240040770A (ko) | 2021-08-03 | 2024-03-28 | 제니시티 리미티드 | 조작된 tcr 복합체 및 이의 사용 방법 |
GB202111193D0 (en) | 2021-08-03 | 2021-09-15 | Phoremost Ltd | Pharmaceutical compounds |
EP4130028A1 (de) | 2021-08-03 | 2023-02-08 | Rhazes Therapeutics Ltd | Manipulierter tcr-komplex und verfahren zur verwendung davon |
EP4384603A1 (de) | 2021-08-10 | 2024-06-19 | Gamida-Cell Ltd. | Manipulierte nk-zellen, verfahren zu deren herstellung und verwendungen davon |
US20240279335A1 (en) | 2021-09-06 | 2024-08-22 | Biond Biologics Ltd. | Cd28 shedding blocking agents |
GB202112865D0 (en) | 2021-09-09 | 2021-10-27 | Tropic Biosciences Uk Ltd | Resistance to black sigatoka disease in banana |
GB202112866D0 (en) | 2021-09-09 | 2021-10-27 | Tropic Biosciences Uk Ltd | Resistance to fusarium wilt in a banana |
IL286430A (en) | 2021-09-14 | 2023-04-01 | Yeda Res & Dev | Multispecific antibodies for use in the treatment of diseases |
TW202333720A (zh) | 2021-10-12 | 2023-09-01 | 美商塔里斯生物醫學有限責任公司 | 用於膀胱內施用的厄達替尼調配物及系統 |
IL287372A (en) | 2021-10-18 | 2023-05-01 | Trojan Bio Ltd | Bifunctional antigen-related molecules |
IL312140A (en) | 2021-10-18 | 2024-06-01 | Belgian Volition Srl | Using nanoporous tiling to determine the source of DNA in the bloodstream |
WO2023079553A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Biond Biologics Ltd. | Intracellular delivery compositions |
AU2022404031A1 (en) | 2021-12-08 | 2024-07-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Multipotent lung progenitor cells for lung regeneration |
IL313528A (en) | 2021-12-15 | 2024-08-01 | Immunyx Pharma Ltd | Inhibitors of neutrophil exocytosis |
WO2023119301A1 (en) | 2021-12-26 | 2023-06-29 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of screening and treating fragile x syndrome |
WO2023148732A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Method for selecting an improved genetically modified plant |
WO2023157003A1 (en) | 2022-02-16 | 2023-08-24 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods for shortening lag phase duration in microorganisms |
TW202400174A (zh) | 2022-02-18 | 2024-01-01 | 美商塔里斯生物醫學有限責任公司 | 用於膀胱內施用的Erdafitinib調配物及滲透系統 |
WO2023195009A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Genetically modified bacteria and use thereof |
WO2023209716A1 (en) | 2022-04-25 | 2023-11-02 | Biond Biologics Ltd. | Anti-ilt3 antibodies and use thereof |
WO2023209708A1 (en) | 2022-04-25 | 2023-11-02 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Compositions for altering cyclic adp-ribose secondary messenger signalling |
WO2023214405A1 (en) | 2022-05-01 | 2023-11-09 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Reexpression of hnf4a to alleviate cancer-associated cachexia |
WO2023218450A1 (en) | 2022-05-09 | 2023-11-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | A commensal fungus and uses thereof |
WO2023233413A1 (en) | 2022-06-01 | 2023-12-07 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | eIF4G1-eIF1 INHIBITORS AND USE THEREOF |
WO2023238131A1 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Methods of treating x-linked genetic diseases |
WO2023248220A1 (en) | 2022-06-20 | 2023-12-28 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Particles comprising double stranded rna and use of same in agriculture |
WO2024013742A1 (en) | 2022-07-11 | 2024-01-18 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Improving adoptive cell transfer therapy (act) treatment |
WO2024038457A1 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | A method for determining the tissue or cell of origin of dna |
IL300306A (en) | 2023-01-30 | 2024-08-01 | Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd | Methods for immunotherapy targeted against CD48 |
WO2024170495A1 (en) | 2023-02-13 | 2024-08-22 | Janssen Pharmaceutica Nv | Fgfr tyrosine kinase inhibitors for the treatment of high-risk non-muscle invasive bladder cancer |
WO2024173377A1 (en) | 2023-02-13 | 2024-08-22 | Taris Biomedical Llc | Erdafitinib for intravesical administration for use in the treatment of bladder cancer |
WO2024173716A1 (en) | 2023-02-17 | 2024-08-22 | Taris Biomedical Llc | Erdafitinib for intravesical administration for use in the treatment of bladder cancer |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4582788A (en) * | 1982-01-22 | 1986-04-15 | Cetus Corporation | HLA typing method and cDNA probes used therein |
US4582778A (en) * | 1983-10-25 | 1986-04-15 | Sullivan Donald F | Multi-function photopolymer for efficiently producing high resolution images on printed wiring boards, and the like |
US4683194A (en) * | 1984-05-29 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Method for detection of polymorphic restriction sites and nucleic acid sequences |
US4683195A (en) * | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4772549A (en) * | 1986-05-30 | 1988-09-20 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Polymorphisms related to lipid metabolism: ApoB, ApoCII, ApoE, ApoAIV |
US6194561B1 (en) * | 1986-03-13 | 2001-02-27 | Roche Molecular Systems, Inc. | Characterization and detection of sequences associated with autoimmune diseases |
US5310893A (en) * | 1986-03-31 | 1994-05-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method for HLA DP typing |
US4965190A (en) * | 1986-07-31 | 1990-10-23 | Howard Hughes Medical Institute | Methods for the identification of mutations in the human phenylalanine hydroxylase gene using DNA probes |
WO1988003175A1 (en) * | 1986-10-29 | 1988-05-05 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Apoai-ciii-aiv, apoaii, apob, apoci, and ldl receptor polymorphisms for genetic fingerprinting and predictive of atherosclerosis |
WO1989012697A1 (en) * | 1988-06-22 | 1989-12-28 | The Board Of Regents Of The University Of Washingt | Method for detecting abnormal genes |
CA1339731C (en) * | 1988-10-12 | 1998-03-17 | Charles T. Caskey | Multiplex genomic dna amplification for deletion detection |
US5192659A (en) * | 1989-08-25 | 1993-03-09 | Genetype Ag | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
-
1990
- 1990-07-11 US US07/551,239 patent/US5192659A/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-20 DE DE69029018T patent/DE69029018T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-20 SG SG1996004155A patent/SG47747A1/en unknown
- 1990-08-20 AT AT90309107T patent/ATE144797T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-08-20 DK DK90309107.2T patent/DK0414469T3/da active
- 1990-08-20 ES ES90309107T patent/ES2095859T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-20 EP EP90309107A patent/EP0414469B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-23 IL IL9546790A patent/IL95467A/xx active IP Right Grant
- 1990-08-23 CA CA002023888A patent/CA2023888C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-24 AU AU61319/90A patent/AU654111B2/en not_active Expired
- 1990-08-24 DD DD90343632A patent/DD299319A5/de unknown
- 1990-08-24 KR KR1019900013222A patent/KR910004814A/ko not_active Application Discontinuation
- 1990-08-24 JP JP22417690A patent/JP3206812B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-24 NZ NZ235051A patent/NZ235051A/en unknown
- 1990-08-24 FI FI904200A patent/FI904200A0/fi not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-09-23 US US07/949,652 patent/US5612179A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-09-08 AU AU72850/94A patent/AU672519B2/en not_active Expired
-
1996
- 1996-07-16 US US08/682,054 patent/US5789568A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-01-29 GR GR970400134T patent/GR3022410T3/el unknown
-
1998
- 1998-06-26 HK HK98107074A patent/HK1008053A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-28 JP JP2001092923A patent/JP2001309796A/ja active Pending
- 2001-12-03 US US10/005,626 patent/US20030119003A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE144797T1 (de) | 1996-11-15 |
EP0414469A3 (en) | 1992-09-23 |
EP0414469A2 (de) | 1991-02-27 |
JP2001309796A (ja) | 2001-11-06 |
US5192659A (en) | 1993-03-09 |
DK0414469T3 (da) | 1997-04-14 |
FI904200A0 (fi) | 1990-08-24 |
DE69029018T2 (de) | 1997-05-22 |
CA2023888C (en) | 2004-06-08 |
JP3206812B2 (ja) | 2001-09-10 |
US5612179A (en) | 1997-03-18 |
NZ235051A (en) | 1992-01-29 |
US5789568A (en) | 1998-08-04 |
AU7285094A (en) | 1994-11-24 |
DE69029018D1 (de) | 1996-12-05 |
AU654111B2 (en) | 1994-10-27 |
IL95467A0 (en) | 1991-06-30 |
AU6131990A (en) | 1991-02-28 |
IL95467A (en) | 1995-07-31 |
US20030119003A1 (en) | 2003-06-26 |
HK1008053A1 (en) | 1999-04-30 |
CA2023888A1 (en) | 1991-02-26 |
EP0414469B1 (de) | 1996-10-30 |
SG47747A1 (en) | 1998-04-17 |
JPH03139300A (ja) | 1991-06-13 |
KR910004814A (ko) | 1991-03-29 |
ES2095859T3 (es) | 1997-03-01 |
GR3022410T3 (en) | 1997-04-30 |
AU672519B2 (en) | 1996-10-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DD299319A5 (de) | Intronsequenzanalyseverfahren zum nachweis von benachbarten und entfernten genortallelen als haplotypen | |
DE69603723T2 (de) | Verfahren zum nachweis von nukleinsäuren | |
US7008771B1 (en) | Multiplex amplification of short tandem repeat loci | |
DE69531831T2 (de) | Verfahren mit einer hohen umsatzrate für das auffinden von sequenzen oder genetischen veränderungen in nukleinsäuren | |
US5683872A (en) | Polymers of oligonucleotide probes as the bound ligands for use in reverse dot blots | |
DE69131233T2 (de) | Verfahren und reagens zum nachweis von spezifischen nukleotid-variationen | |
EP0873419B1 (de) | Verfahren und vorrichtung für diagnostischen dns-test | |
DE68926784T2 (de) | Verfahren zur charakterisierung von hla dp | |
AU581582B2 (en) | Dna probes to fingerprint genomes at hypervariable or minisatellite regions | |
DE68925717T2 (de) | Verfahren und Reagenzkombination zur Bestimmung von Nukleotidsequenzen | |
DE3789679T2 (de) | Genetische Sonden. | |
DE60035691T2 (de) | Verfahren zur Erkennung von Einzel-Nukleotid-Polymorphismen | |
DE69507646T2 (de) | Mikrosatelliteverbindung für detektion genetisches polymorphismen | |
DE60029876T2 (de) | Verfahren und Oligonukleotide zum Nachweis von Nukleinsäuresequenzvariationen | |
DE60025840T2 (de) | Methode zum nachweis von variationen oder polymorphismen | |
WO2000031306A9 (en) | Multiplex amplification of short tandem repeat loci | |
DE69004632T2 (de) | Verfahren zum Nachweis von Nucleinsäuren. | |
DE10130800A1 (de) | Verfahren zum Nachweis von Cytosin-Methylierung mit hoher Sensitivität | |
DE60014350T2 (de) | Verfahren zur erkennung und/oder analyse, unter verwendung von primertechniken, von einfachen nukleotidpolymorphismen in restriktionsfragmenten speziell aus amplifizierten restriktionsfragmenten generiert durch aflp | |
DE69332666T2 (de) | Verfahren zur einfachen nukleotid-primer-verlängerung zum nachweis spezifischer allele und dafür geeigneter kit | |
DE69131691T2 (de) | Genomische genkartierungsmethode durch direkten nachweis von haplotypen mittels intronsequenzanalyse | |
JPH025863A (ja) | 相補的鎖からなる関連する対象および参照高分子の処理方法 | |
DE69636725T2 (de) | Verfahren zur trennung und/oder erkennung von dns-molekülen | |
Cotton | Detection of mutations in DNA | |
US20040197775A1 (en) | Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RPI | Change in the person, name or address of the patentee (searches according to art. 11 and 12 extension act) |
Owner name: GENETIC TECHNOLOGIES LIMITED, FITZROY, VICTORIA 30 |
|
RPV | Change in the person, the name or the address of the representative (searches according to art. 11 and 12 extension act) |
Representative=s name: PATENTANWALT DR. PETER BARZ, 80803 MUENCHEN |
|
ASS | Change of applicant or owner |
Owner name: GENETIC TECHNOLOGIES LIMITED, FITZROY, VICTORIA 30 Effective date: 20021218 |
|
IF04 | In force in the year 2004 |
Expiry date: 20100825 |