DD150508A1

DD150508A1 - METHOD AND MEASURING DEVICE FOR CONCENTRATION DETERMINATION OF METABOLIC PRODUCTS

Info

Publication number: DD150508A1
Application number: DD21784379A
Authority: DD
Inventors: Frieder Scheller; Dorothea Pfeiffer; Michael Jaenchen; Ingrid Seyer; Martina Siepe; Rudi Pittelkow
Original assignee: Frieder Scheller; Dorothea Pfeiffer; Michael Jaenchen; Ingrid Seyer; Martina Siepe; Rudi Pittelkow; Semm Juergen; Wiegand Peter; Holesch Horst; Lange Gerald; Bertermann Karl; Kahrig Erwin; Mohr Peter; Walzel Gerd
Priority date: 1979-12-19
Filing date: 1979-12-19
Publication date: 1981-09-02
Also published as: DD150508B1

Abstract

Es besteht das Ziel, die Konzentration in mikrobiologischen und physiologischen Loesungen einfach und damit oekonomisch guenstig zu bestimmen. Die Erfindung loest die Aufgabe mit einem Meszgeraet auf der Basis einer Enzymelektrode, die in die geruehrte Meszzelle oder eine Durchfluszanordnung eingefuehrt ist, ohne selektive Membranen oder Differenzmessung, indem der maximale Anstieg der Strom-Zeit-Kurve nach Zugabe der Meszprobe als Meszsignal dient. Die Enzymelektrode besitzt vor der Indikatorelektrode eine Gelatineschicht von 5 bis 50 my Dicke, die 2 bis 100 Einheiten/cm&exp2! des Enzyms eingeschlossen sind. Zur Angleichung des kolloidosmotischen Drucks an die zu untersuchende Probe ist der Meszloesung ein Polymer zugesetzt. Die Meszzelle befindet sich zur Konstanthaltung der Temperatur an der Innenwand eines Badthermostaten, dessen Umwaelzpumpe zum Entleeren der Loesungen aus der Meszzelle verwendet wird.The aim is to determine the concentration in microbiological and physiological solutions simply and therefore economically favorable. The invention solves the problem with a Meszgeraet based on an enzyme electrode, which is introduced into the stirred cell or a flow-through, without selective membranes or differential measurement, by the maximum increase of the current-time curve after adding the Meszprobe serves as Meszsignal. The enzyme electrode has in front of the indicator electrode a gelatin layer of 5 to 50 my thickness, which is 2 to 100 units / cm & exp2! of the enzyme are included. To match the colloid-osmotic pressure to the sample to be investigated, a polymer is added to the mesz solution. The measuring cell is used to keep the temperature constant on the inner wall of a bath thermostat whose circulating pump is used to empty the solutions from the measuring cell.

Description

-a- 247843 -a- 247843

Erfinder: Dr. F. Scheller D· Pfeiffer M. Jänohen I. Seyer M. Siepe R. PittelkowInventor: Dr. F. Scheller D · Pfeiffer M. Jänohen I. Seyer M. Siepe R. Pittelkow

Verfahren und Meßgerät zur Konzentrationsbestimmung von S toffwechs eiprodukt en Method and instrument for determining the concentration of tissue metabolites

Anwendungsgebiet der Erfindung Field of application of the invention

Die"Erfindung betrifft ein Verfahren und ein Meßgerät zur Bestimmung von Stoffwechselprodukten in Fermentationslösungen sowie in verdünntem Serum, Plasma oder Vollblut,, Das Verfahren eignet sich für.die Konzentrationsbestimmung von Stoffwechselprodukten, z. B. Glukose, im mikrobiologischen und im klinischen Labor,The invention relates to a method and a measuring instrument for the determination of metabolic products in fermentation solutions and in diluted serum, plasma or whole blood. The method is suitable for determining the concentration of metabolic products, eg glucose, in the microbiological and clinical laboratory.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen Amperornetrische Enzymelektroden gewinnen wachsende Bedeutung für die Konzentrationsbestimmung im klinischen sowie mikrobiologischen Labor sowie im.Umweltschutz (D. Gray, M. Keyes, B. Watson; Analyt. Chem. 49, 1067 (1977)). Die Anwendbarkeit wird.durch Störungen, die von Bestandteilen der Meßprobenj ζ. Be des Blutes hervorgerufen werden, eingeschränkt: Lösungsbestandteile, die beim Potential der Indikatorreaktion (H₂0₂-Oxydation: + 600 mV; 0₂-Reduktion: - 600 mV) ebenfalls umgesetzt werden, führen zu einer fehlerhaften Vergrößerung des Meßwertes. Das gilt vor allem für die Messung des stationären Stroms oder auch für die kinetische Methode (G. Quilbault, Methods in Enzymology XLIV, 585 (1976)). Zur Ausschaltung dieser Störungen sind selektive Membranen geeignet, die nur das Substrat der Indikatorreaktion zur Elektrode gelangen lassen. Zum Beispiel wird durch eine spezielle "HoO^- ve Membran" die '.'Restreduktion¹¹ des Blutes ausgeschaltet (US Patent 3.979.274). Characteristics of the known technical solutions Amperornetric enzyme electrodes are becoming increasingly important for determining the concentration in the clinical and microbiological laboratory as well as in environmental protection (D. Gray, M. Keyes, B. Watson, Analyt Chem., 49, 1067 (1977)). Applicability is determined by perturbations that are inherent in constituents of the test samples. Reduced components of the solution which are also reacted at the potential of the indicator reaction (H ₂ O ₂ -oxidation: + 600 mV; 0 ₂ -reduction: -600 mV) lead to an erroneous increase in the measured value. This is especially true for the measurement of steady-state current or for the kinetic method (G. Quilbault, Methods in Enzymology XLIV, 585 (1976)). To eliminate these disorders, selective membranes are suitable which allow only the substrate of the indicator reaction to pass to the electrode. For example, the '.' Residual reduction ^{11 of} the blood is switched off by a special "HoO ve membrane" (US Pat. No. 3,979,274).

Der gleiche Effekt wird durch Og-permeable Membranen (z. B, Teflon oder Polyethylen),die z.-B« von Sauerstoffelektroden bekannt sind, erreicht» Dieses Prinzip ist nur bei der Messung des Op-Verbrauches möglich, es ergibt aber in Fermentationslösungen oder in venösem Blut zu hohe Meßwerte für die Konzentration des Stoffwechselproduktes, da sich die Erniedrigung der O₂-Konzentration in der Meßprobe zum Wert.des Op-Abfalls in der Enzymschicht vor der Elektrode addiert. Die Sättigung der Meßlösung durch Einleiten von Luft während der Messung löst dieses Problem nicht befriedigend, da die Reproduzierbarkeit schlecht und außerdem ein Zusatz von Antischaummittel notwendig ist. (P₀ Reitnauer, DDR Patent 127861)« Dagegen führt eine Differenzmessung mit je einer Enzym- und einer enzymfreien Elektrode (BRD Patent 1598285) zu reproduzierbaren und richtigen Ergebnissen sowohl bei der Op- als auch der HpO₂~Messung_e Allerdings erfordert diese Anordnung einen hohen apparativen und elektronischen Aufwand, da die zeitlichen Veränderungen beider Elektroden ständig abgeglichen werden müssen (S. Bessman et« al. Diabetes 25, 81 (1976)).The same effect is achieved by Og-permeable membranes (eg, Teflon or polyethylene), known for example as oxygen electrodes. "This principle is only possible when measuring Op consumption, but results in fermentation solutions or in venous blood too high measured values for the concentration of the metabolite, since the decrease in the O ₂ concentration in the test sample adds to the value of the Op waste in the enzyme layer in front of the electrode. The saturation of the measurement solution by introducing air during the measurement does not solve this problem satisfactorily, since the reproducibility is poor and also an addition of antifoam agent is necessary. (P ₀ Reitenauer, DDR patent 127 861), "the other hand, performs a differential measurement with one enzyme and an enzyme-free electrode (BRD Patent 1598285) to reproducible and correct results both in the Op and the HPO ₂ ~ measurement _e, however, requires this arrangement a high expenditure on equipment and electronics, since the temporal changes of both electrodes must be constantly adjusted (S. Bessman et al., Diabetes 25, 81 (1976)).

Eine weitere Störung (sowohl bei der Op- als auch der HpOp-Anzeige) zeigt sich in der Wechselwirkung der Messungen zwischen Meßprobe und proteinfreien Eichstandards. So erfolgt eine Erniedrigung um 10 - 20 % der Meßwerte für die Standards nach etwa 5-10 Blut- oder Serumproben, so daß.eine häufige Eichung notwendig ist (D₀ Thevenot et. al. Proc. 9th ISE-Meeting, Budapest, 1978). Es wurde bereits vorgeschlagen (F. Scheller et. al. DDR Patentschrift 131203), zur Verkürzung der Meßzeit bei der stationären Messung mit Enzymelektroden die Meßlösung stark zu rühren sowie die Indikatorelektrode fest gegen die Enzymschicht anzupressen,, Auch diese Maßnahmen reichen noch nicht aus, um den Einfluß von störenden Substanzen auf den Meßwert zu eliminieren, so daß zu hohe Y/erte erhalten werden.und außerdem auch noch Vergiftungserscheinungen auftreten«Another disturbance (both in the Op and the HpOp display) is shown in the interaction of measurements between the test sample and protein-free calibration standards. Thus, a 10-20% reduction in the standard readings is obtained after about 5-10 blood or serum samples, so that frequent calibration is necessary (D ₀ Thevenot et al., Proc. 9th ISE Meeting, Budapest, 1978 ). It has already been proposed (F. Scheller et al., DDR Patent Specification 131203), to strongly reduce the measurement time in the stationary measurement with enzyme electrodes, the measurement solution to stir strongly and the indicator electrode firmly against the enzyme layer, even these measures are not enough, in order to eliminate the influence of interfering substances on the measured value, so that excessively high values are obtained and, in addition, signs of intoxication also occur «

Object of the invention

Das Ziel der Erfindung besteht darin, ein Verfahren und ein Meßgerät zur Konzentrationsbestimmung von Stoffwechselprodukten in physiologischen oder mikrobiologischen Lösungen zu entwickeln, das bei einfachem Aufbau die aufgezeigten Nachteile nicht-besitzt und damit breit anwendbar, ökonomisch günstig ist.The object of the invention is to develop a method and a measuring device for determining the concentration of metabolic products in physiological or microbiological solutions, which does not possess the disadvantages shown in a simple structure and thus is widely applicable, economically favorable.

Darlegung des Wesens der Erfindung Presentation of the essence of the invention

Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren und ein Meßgerät zur Bestimmung von Stoffwechselprodukten zu entwickeln, das auf der Grundlage der Anzeige des maximalen Anstiegs der Strom-Zeit-Kurve (kinetisches Verfahren) einer Enzymelektrode ohne selektive Membranen oder Differenzmessung (zu einer enzymfreien Elektrode) in physiologischen oder mikrobiologischen Lösungen die schnelle und genaue Bestimmung der Konzentration von Stoffwechselprodukten ermöglichte Das erfindungsgemäße Verfahren und Meßgerät basiert auf.einer Enzymelektrode zur Bestimmung von Stoffwechselprodukten. Sie besitzt eine Enzymschicht von 5-50 /Um Dicke, in.der 2-100 Einheiten des Enzyms in Gelatine eingebettet sind, unmittelbar vor der Indikatorelektrode. Als Enzyme dienen HgOg-erzeugende bzw. 0₂-verbrauchende Enzyme wie Glukose-oxydase, Urikase, Cholesterol-oxydase und Aminosäure-oxydase. In manchen Fällen ist es zweckmäßig, ein zweites Enzym, das die Konzen~ tration des angezeigten Substrates verändert, zuzusetzen. In Betracht kommen beispielsweise Invertase, Hexokinase und Cholesterol-esterase.The object of the invention is to develop a method and a measuring instrument for the determination of metabolic products based on the indication of the maximum increase in the current-time curve (kinetic method) of an enzyme electrode without selective membranes or differential measurement (to an enzyme-free electrode) in physiological or microbiological solutions the rapid and accurate determination of the concentration of metabolic products made possible The method and measuring device according to the invention is based on an enzyme electrode for the determination of metabolic products. It has an enzyme layer of 5-50 / um thickness, in.the 2-100 units of the enzyme are embedded in gelatin, just in front of the indicator electrode. The enzymes used are HgOg-producing or O _2- consuming enzymes such as glucose oxidase, uricase, cholesterol oxydase and amino acid oxidase. In some cases it is expedient to add a second enzyme which alters the concentration of the indicated substrate. For example, invertase, hexokinase and cholesterol esterase may be considered.

Die Enzymelektrode ist in die gerührte Meßzelle oder eine Durchflußkammer eingeführt und wird auf ein konstantes Potential von + 600 mV bei der H₂o₂-Messung bzw. - 600 mV bei der O₂-Verbrauchsmessung gegenüber der Ag/AgCl-Bezugselektrode polarisiert. Der maximale Anstieg der Strom-Zeit-Kurve (bei konstantem Potential) nach Zugabe der Meßprobe.wird durch das elektronische Meßgerät ermittelt und angezeigt.The enzyme electrode is introduced into the stirred measuring cell or a flow chamber and is polarized to a constant potential of + 600 mV in the H ₂ o ₂ measurement or - 600 mV in the O ₂ consumption measurement relative to the Ag / AgCl reference electrode. The maximum increase in the current-time curve (at constant potential) after addition of the sample is determined and displayed by the electronic instrument.

Der Meßwert stellt sich durch dieses Meßprinzip sowie die wendeten Membranen bereits ein, bevor störende Bestandteile die Indikatorelektrode erreichen»The measured value is already established by this measuring principle and the used membranes before disturbing components reach the indicator electrode »

Weiterhin wird der kolloidosmotische Druck der wäßrigen Eichstandards und der Spüllösung durch Zusatz eines Polymeren dem der Meßlösungen angeglichen, so daß sich die Quellung der Enzymschicht beim Messen und Spülen nicht veränderte Da'die Messung eine Temperierung der Meßlösung, der Zelle sowie der Elektrode erfordert, wird die Meßzelle direkt an der Innenwand eines Badthermostaten angebracht, wobei die Enzymelektrode durch eine Bohrung von außen horizontal in die Meßzelle eingeführt wird» Die horizontale Anordnung der Elektrode am Rande der zylindrischen Meßzelle sichert eine starke Konvektion bei Verwendung eines Magnetrührers_o Zur Verringerung der Einwirkdauer der Meßprobe auf die Enzymelektrode wird die Lösung unmittelbar nach Erreichen des Meßwertes aus der Meßzelle durch'eine Bohrung im Boden abgesaugt. Zur Erzeugung des Vakuums in einem Abfallgefäß wird zweckmäßig die Pumpe des Thermostaten verwendeteFurthermore, the colloid-osmotic pressure of the aqueous calibration standards and the rinsing solution is adjusted by addition of a polymer of the measurement solutions, so that the swelling of the enzyme layer during measurement and rinsing not changed Da'die measurement requires a temperature control of the measurement solution, the cell and the electrode is the measuring cell is mounted directly on the inner wall of a bath thermostat, wherein the enzyme electrode is inserted horizontally into the measuring cell through a hole from the outside »The horizontal arrangement of the electrode at the edge of the cylindrical measuring cell ensures strong convection when using a magnetic stirrer _o To reduce the duration of the test sample The solution is aspirated from the measuring cell through a hole in the bottom immediately after reaching the measured value on the enzyme electrode. To generate the vacuum in a waste container, the pump of the thermostat is suitably used

Ausfuhr ungsbeispieleExamples of export

Die Erfindung soll nachstehend an 2 Ausführungsbeispielen erläutert werden:The invention will be explained below with reference to two embodiments:

Beis_p_iel__lBeis_p_iel__l

Präparati^on^der Enzymmembran; Preparation of the enzyme membrane;

Zur Immobilisierung von lyophilisierter Uricase wird eine 5 %ige Gelatine-Wasser-Lösung hergestellte Dazu wird die Fotogelatine mit der Hälfte der Flüssigkeit 1 h bei Zimmertemperatur vorgequollen und anschließend nach Zugabe der restlichen Flüssigkeitsmenge bei 40⁰O ca. 1 h vollständig gelöst, wobei die Lösung in zeitlichen Abständen von 15 min durchgeschüttelt wird.For immobilization of lyophilized uricase, a 5% gelatin-water solution is prepared. For this purpose, the photographic gelatin is preswollen with half of the liquid for 1 h at room temperature and then completely dissolved after addition of the remaining amount of liquid at 40 ⁰ O for about 1 h, wherein the Shake solution at intervals of 15 min.

0,4 ml der fertigen Gelatinelösung werden mit 100 U Uricase0.4 ml of the finished gelatin solution are mixed with 100 U uricase

2 gut vermischt und anschließend auf 10 cm einer unsubstrier-2 well mixed and then to 10 cm of unsubbed

17 8 4 317 8 4 3

ten planen Filmunterlage ausgestrichen. Nach 12h Trocknungsdauer wird die Enzymmembran abgenommen und im Kühlschrank gelagert.plan to film document. After 12 h drying time, the enzyme membrane is removed and stored in the refrigerator.

Meßlösungen Measuring lösun g s

Zur Herstellung des Harnsäure-Einchstandards, der Spüllösung sowie zum Verdünnen der Blutproben wird folgende Grundlösung verwendet: 1 Liter enthält:The following basic solution is used to prepare the standard uric acid solution, the rinsing solution and to dilute the blood samples: 1 liter contains:

1,8 g KH₂PO₄; 9,6 g Ua₂HPO₄ · 2H₂O; 1,05 g Ia-Benzoat; 2,3 g KaCl; 0,3 g KaF; 1 g K₃C₂O₄ · H₂O; 2 g Dextran M 75 (pH 7,3).1.8 g of KH ₂ PO ₄ ; 9.6 g Ua ₂ HPO ₄ .2H ₂ O; 1.05 g of Ia-benzoate; 2.3 g of KaCl; 0.3 g of KaF; 1 g of K ₃ C ₂ O ₄ .H ₂ O; 2 g Dextran M 75 (pH 7.3).

Die Eichstandards werden durch Einwägen von wasserfreier Harnsäure hergestellte Die Blutproben v/erden wie folgt präpariert: 50 /Ul Blut werden in 450 ,ul der Grundlösung gegeben und kurz durchmischt„The calibration standards are by weighing of anhydrous uric acid produced Blood samples v / ground prepared as follows: 50 / Ul of blood are given in 450, ul of the stock solution and briefly mixed "

Meßvorgangmeasuring

Vor Beginn einer neuen Messung ist die Temperierung der Meßlösung zu sichern. Die Einbrenndauer des Gerätes beträgt etwa 20 Minuten nach dem Einschalten.Before starting a new measurement, the temperature of the measurement solution must be ensured. The burn-in time of the device is about 20 minutes after switching on.

Die Meßzelle-wird mit etwa 2 ml Grundlösung gefüllt und wieder entleert«,The measuring cell is filled with about 2 ml of ground solution and emptied again,

Danach erfolgt die exakte Vorgabe der Meßlösung (2 ml)₉ und nach der Einstellung des O-Wertes wird die Meßprobe (0,5 ml) zügig in die Meßzelle gegeben. Sofort nach Erreichen des Meßwertes, wird die Probe entfernt,und die Zelle kann gespült werden.Thereafter, the exact specification of the measuring solution (2 ml) ₉ and after the setting of the O value, the test sample (0.5 ml) is rapidly added to the measuring cell. Immediately after reaching the reading, the sample is removed and the cell can be rinsed.

Am Anzeigegerät wird der Meßwert in mg/dl angezeigt. Bei der Eichung erfolgt über ein Potentiometer die Einstellung auf den deklarierten Wert.The display will show the measured value in mg / dl. During calibration, the setting is made to the declared value via a potentiometer.

Meßgerätgauge

Ein rundes Membranstück von 3 mm Querschnitt wird zwischen einer Zelluloseacetat- (16 /um Dicke) und einer Polyethylenmembran auf der Stirnseite des Mantels einer üblichen O₀-A round membrane piece of 3 mm cross-section is placed between a cellulose acetate (16 / um thick) and a polyethylene membrane on the face of the jacket of a conventional O ₀ -

. ·- 6 - 2., · - 6 - 2.

Stabmeßzelle gespannt. In den Elektrodenmantel werden 0,2 ml 0,1 M KCl gegeben und der Elektrodenkörper eingeführt, so daß durch eine Überwurfmutter die Pt-»Indikatorelektrode straff gegen die Membranen an der Stirnseite angepreßt wird«' Die präparierte Enzymelektrode wird in eine Bohrung der Meßzelle durch die Thermostatenwand eingeführt und mit einer zweiten Überwurfmutter straff gegen die Außenwand der Meßzelle gepreßt. Dabei befindet sich die Indikatorelektrode unmittelbar in ein'er durchgehenden Bohrung, so daß die.Membran mit der Lösung in der Meßzelle in Kontakt gelangen. An der Unterseite der Meßzelle ist in einem' angeschraubten Gehäuse ein Rührmotor mit Scheibenmagnet untergebracht, der mittels Rühr-flow die Strömung in der Meßzelle erzeugt.Stabmeßzelle tensioned. 0.2 ml of 0.1 M KCl are added to the electrode sheath and the electrode body is inserted, so that the Pt "indicator electrode is pressed tightly against the membranes on the front side by a union nut." The prepared enzyme electrode is passed through into a bore of the measuring cell introduced the thermostat wall and pressed tightly against the outer wall of the measuring cell with a second union nut. In this case, the indicator electrode is located directly in a through hole, so that the membrane come into contact with the solution in the measuring cell. At the bottom of the measuring cell, a stirring motor with disc magnet is housed in a 'screwed housing, which generates the flow in the measuring cell by means of stirring flow.

Am Boden der Meßzelle ist eine Kanüle angebracht, die mit einem- dünnen.Schlauch mit einem Vakuumvorratsgefäß in Verbindung steht_β Diese Verbindung wird durch ein Magnetventil verschlossen, und das Vakuum wird durch die Saugpumpe des Thermostaten erzeugt. Die Temperatur im Thermostatbad wird auf 25⁰G eingeregelt«At the bottom of the measuring cell, a cannula is mounted which communicates with einem- dünnen.Schlauch with a vacuum reservoir in communication _β This connection is closed by a solenoid valve, and the vacuum is generated by the suction pump of the thermostat. The temperature in the thermostatic bath is adjusted to 25 ⁰ G «

Die Enzymelektrode ist an ein elektronisches Meßgerät angeschlossen, das die Indikatorelektrode auf -6OO mV gegenüber der Ag/AgCl-Elektrode polarisiert, die Strom-Zeit-Kurve differenziert sowie der maximale Wert den Anstieg digital anzeigt«,The enzyme electrode is connected to an electronic measuring device which polarizes the indicator electrode at -600 mV with respect to the Ag / AgCl electrode, differentiates the current-time curve and the maximum value digitally indicates the increase.

At game 2

Präparation der ^ Enzymmembran Preparation of the enzyme membrane

200 ml 5 %ige Gelatinelösung, die als Weichmacher 0,01 % Propylenglykol enthält, wird wie.im Beispiel 1 beschrieben, vorgequollen und bei 40⁰C gelöst. Danach werden 250.000 U Glukose-oxidase zugegeben und die Lösung in den Trog einer Filmbeschichtungsmaschine gegeben. Als Unterlage wird ein geschlossenes Band von Azethylzellulose von I30 cm Länge und 20 cm Breite verwendete Dieses Band wird 6 mal durch Eintauchen in der Enzymlösung beschichtet, wobei die Dicke der. Ge-200 ml of 5% gelatin solution containing as plasticizer 0.01 % propylene glycol is, as described in Example 1, pre-swollen and dissolved at 40 ⁰ C. Thereafter, 250,000 U of glucose oxidase are added and the solution is placed in the trough of a film coating machine. The backing used is a closed tape of acetone cellulose of I30 cm length and 20 cm width. This tape is coated 6 times by immersion in the enzyme solution, the thickness of the. overall

- τ - 2- τ - 2

latineschicht etwa 40 /tun beträgt. Uach dem Trocknen im Kühlschrank wird die Enzymschicht von der Unterlage abgenommen und in kleine Blättchen geschnitten.latin layer is about 40 / do. After drying in the refrigerator, the enzyme layer is removed from the base and cut into small leaflets.

Measuring instrument and measuring process

Die Mikromeßkammer (VEB Metra Radebeul) wird wie folgt präpariert:The microemetry chamber (VEB Metra Radebeul) is prepared as follows:

Über den Spannring wird eine Zelluloseazetatmembran (20 ,um) befestigt, darauf in der Mitte eine runde Scheibe der Enzymmembran von 3 mm 0 gelegt und darüber ein Dialyseschlauch von 16 /um Dicke gespannt. Der so präparierte Ring wird in die Öffnung der Meßzelle eingeführt.A cellulose acetate membrane (20 μm ) is attached by way of the clamping ring, a round disc of the enzyme membrane of 3 mm 2 is placed in the center and a dialysis tube 16 μm thick is stretched over it. The thus prepared ring is inserted into the opening of the measuring cell.

Es wird 1 Tropfen 1 %iges 0,1 M KCl Gel auf die Zellulose«- azetatmembran gegeben und der Elektrodenkörper eingelegt und mit der Überwurfmutter gespannt.1 drop of 1% 0.1 M KCl gel is added to the cellulose acetate membrane and the electrode body is inserted and tensioned with the union nut.

Die Elektrode wird an das im Beispiel 1 beschriebene elektronische Meßgerät angeschlossen und die Polarität so gewählt, daß die Pt-Indikatorelektrode auf +600 mV Ag/AgCl gebracht wi r d (Hp C>2 -Me s s ung) ·The electrode is connected to the electronic measuring device described in Example 1 and the polarity is chosen so that the Pt indicator electrode is brought to +600 mV Ag / AgCl (Hp C> 2 -mesh).

Die Mikromeßkammer wird auf 25⁰C temperiert und mit Silikonschläuchen über eine peristaltische Pumpe an einen automatischen Probenspeicher angeschlossen, in dem sich Blutproben (1 : 20'; verdünnt) befinden. Dabei beträgt die Spülzeit 20 und die Probenahmezeit 30 s. Eichung und Ablesung erfolgen analog zu Beispiel 1.The Mikromeßkammer is tempered to 25 ⁰ C and connected with silicone tubing via a peristaltic pump to an automatic sample storage in which blood samples (1: 20 ', diluted) are. The rinsing time is 20 and the sampling time is 30 s. Calibration and reading are carried out analogously to Example 1.

Claims

1, method and instrument for determining the concentration of metabolic products, characterized in that an enzyme electrode consisting of an indicator electrode with an enzyme which is embedded in a gelatin layer, in the measurement solution, which is used to approximate the colloid osmotic pressure to the sample to be examined with a polymer , Preferably dextran is added, introduced and the measurement is carried out in the stirred measuring cell in a conventional manner or in Durchflußanordnung,. The maximum increase in the current-time curve after addition of the sample to be examined serves as a measurement signal.

Enzyme electrode according to 1, characterized in that the gelatin layer has a thickness of 5 to 50 Ai and additives, in particular wetting agents, plasticizers or

Contains crosslinker.

3. Enzyme electrode according to 1 and 2, characterized in that the concentration of the enzyme in the gelatin layer 2 -

ρ
100 units per cm.

4 »Method according to claim 1, characterized in that the enzyme used is glucose oxidase, uricase, cholesterol oxidase, amino acid» optionally with the addition of a second enzyme »

5 »Method according to 1, characterized in that in the glucose determination in one-tenth diluted blood 2 g of dextran (MW 40000) / 1 measuring solution are added.

6. The method according to 1, ₉ characterized in that the measuring cell is attached to the inner wall of a thermostat and a circulating pump is used for suction of the solution from the cell.