CZ305750B6 - Způsob výroby N-9 substituovaných analogů purinu - Google Patents

Abstract

Způsob výroby N-9 substituovaných analogů purinu obecného vzorce III, kde Z je H nebo aminoskupina, Q je aminoskupina, alkylamin C.sub.1-15.n., dialkylamin C.sub.1-15.n., heterocyklický amin, arylamin, diarylamin, hydroxyskupina, alkoxyskupina C.sub.1-15.n., thioskupina, alkylthioskupina C.sub.1-15.n., azidoskupina a R.sub.1.n. je alkyl C.sub.1-15.n., alkenyl C.sub.2-15.n., alkynyl C.sub.2-15.n., cykloalkyl C.sub.3-10.n., cykloalkenyl C.sub.3-10.n., aryl, heteroaryl, vyznačující se tím, že v prvním kroku se primární amin nebo diamin se substituentem R.sub.1.n., jak byl popsán výše, či jeho sůl ponechá jako substrát reagovat s činidlem, jímž je pyrimidinový prekurzor obecného vzorce I, kde Z je H nebo aminoskupina, ve vhodném rozpouštědle za přítomnosti nenukleofilní báze, za zahřívání, čímž dojde na aminoskupině substrátu k postupné výstavbě purinové báze, jíž je substituovaný 6-chlorpurin vzorce II, kde substituenty Z a R1 jsou stejné jako bylo popsáno výše, přičemž dusíkový atom takové aminoskupiny se stane pozicí N-9 vzniklé nukleobáze; ve druhém kroku se volitelně k reakční směsi bez izolace chlorpurinového meziproduktu přidá nukleofilní činidlo a vzniklý substituovaný analog chlorpurinu obecného vzorce III se následně oddělí. Meziprodukt reakce, 9-substituovaný 6-chlorpurin, se rovněž může bez provedení druhého reakčního kroku přímo získat ze surové reakční směsi. Sloučeniny vzorce II jsou meziprodukty pro výrobu léčiv, sloučeniny vzorce III jsou použitelné jako léčiva.

Description

Způsob výroby N-9 substituovaných analogů purinu

Oblast techniky

Usnadněný způsob výroby substituovaných analogů purinu, použitelných jako meziprodukty pro výrobu léčiv nebo přímo jako léčiva.

Dosavadní stav techniky

Látky obsahující purinovou nukleobázi obecného vzorce III s cukernou nebo pseudocukemou složkou v poloze C-9 (zejména nukleosidy, nukleotidy, jejich karbocyklické a acyklické analogy, nukleosid fosfonáty a další) vykazují mimo jiné silné imunosupresivní, protivirové a protinádorové účinky. Vhodnými příklady takových látek jsou např. Abacavir lile (US 5 089 500), Adefovir Illd (WO 96/33200) nebo Entacavir Hle (US 5 206 244).

(Ill)

c) Z = NH₂, Q=[>—NH

Y-OH

d) Z = H,Ri= C xOH Q = NH₂ ř^0H ^vw

e) Z = NH₂,R₁= Q = OH

HO''^-OH

Doposud známé syntetické postupy pro přípravu těchto typů látek vždy zahrnují v některé fázi zavedení purinové báze do struktury produktu. To je možné realizovat například přímou alkylací nukleobáze (např. Vrbková, S. Tetrahedron: Asymmetry (18, 2233, 2007; Lambertucci, C. Bioorg. Med. Chem. 17, 2812, 2009; Holý, A Collect. Czech. Chem. Commun. 66, 1545, 2001), Mitsunobuovou reakcí (např. Lu, W. J. Org. Chem. 72, 5012, 2007; Guo, H. J. Org. Chem. 75, 3863, 2010; Douadi, A. Synlett 1, 111, 2011), Vorbruggenovu reakcí (např. Enders. D. Synthetis, 19, 3239, 2005; Botta, O. Tetrahedron 54, 13529, 1998; Alibés, R. Org. Lett. 8, 491, 2006), Michaelovu adicí (např. Guo, H. Chem. Eur. J. 17, 4095, 2011; Guillarme, S. Tetrahedron 59, 2177, 2003, Bookser, B. C. J. Org. Chem. 72, 173, 2007), palladiem katalyzovanou reakcí volné nukleobáze s acylovanou alkoholovou skupinou v allylové poloze (např. Agrofoglio, L. A. Tetrahedron 60, 8397, 2004, Peel, M. R. J. Org. Chem. 56,4990, 1991).

Purinové nukleobáze sloučenin obecného vzorce III lze také připravit uzavíráním imidazolového kruhu na příslušném pyrimidinovém prekurzoru a tento postup výstavby nukleobáze lze výhodně použít například při syntéze karbocyklických analogů nukleosidů. Vhodnou nukleobázi používanou při přípravě takových látek je 6-chlorpurin nebo 2-amino-6-chlorpurin, a to hlavně proto, že mohou být snadno převedeny v jiné, „přirozené“ nukleobáze jako je adenin, guanin, hypoxantin nebo v deriváty nukleobázi, které se na „přirozené“ nukleobáze biotransformují - zejména 6alkylamino purin a 2-amino-6-alkylaminopuriny.

Výstavba 6-chlorpurinové báze se v současnosti obvykle provádí reakcí aminu s 5-amino-4,6dichlorpyrimidinem nebo s 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinem s následným uzavíráním imi- 1 CZ 305750 B6 dazolového kruhu dietoxymethyl-acetátem nebo triethyl-ortoformiátem za kyselé katalýzy podle schématu I.

R-NH₂

Cl

HC(OEt)3 H⁺ nebo (EtO)₂CHOAc

Cl

Y = H, CHO

Z = H, NH₂₁ NHCHO

Schéma I

Uvedený postup je realizován ve dvou až třech krocích, kdy v prvním a posledním kroku je nezbytné čištění produktu. Reakce probíhá pomalu, reakční doba se pohybuje od několika hodin (7 hodin v případě Lee, M. G., J. Org. Chem. 62, 1991, 1997) u jednoduchých reakčních komponent, jakými jsou např. aktivované aminy na primárním uhlíku, až po několik týdnů (WO 2008/131 501) u málo reaktivních aminů, jako je například adamant-l-yl amin při použití méně reaktivního 5-amino-4,6-dichlorpyrimidinu, a nelze ji zkrátit zvyšováním reakční teploty, neboť se uplatňují rozkladné reakce. Celkové výtěžky výstavbové sekvence se zde pohybují kolem 30 až 60 %, výjimečně lze dosáhnout až 80% výtěžku.

Výstavba 2-amino-6-chlorpurinové báze se v současnosti provádí analogicky, reakcí alifatického aminu s 2,5-diamino-4,6-dichlorpyrimidinem, 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinem nebo 4,6-dichlor-2,5-diformamidopyrimidinem s následným uzavíráním imidazolového kruhu dietoxymethyl-acetátem nebo triethyl-ortoformiátem za kyselé katalýzy. Experimentální provedení reakce je rovněž analogické výstavbě 6-chlorpurinu, pouze u posledně jmenovaného prekurzoru je nutné v posledním kroku reakční sekvence odstranit formylovou skupinu z aminoskupiny v poloze C-2. Zde se celkové výtěžky pohybují kolem 40 až 75 % při reakční době 10 až 30 hodin pro reaktivnější formylované prekurzory (Daluge, S., M. Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 19, 297, 2000; US 6 137 007; EP 1 857 458; WO 2008/155 613) nebo 3 až 11 dnů při použití 2,5-diamino-4,6-dichlorpyrimidinu (Šála, M., Tetrahedron 65, 9291, 2009; Šála, M., Collect. Czech. Chem. Commun. 71, 635, 2006).

Další známou variantou výstavby 2-amino-6-chlorpurinové nukleobáze je mnohastupňová syntéza, při které se reakcí aminu s 2-amino-4,6-dichlorpyrimídinem získá 4-substituovaný 2amino-6-chlorpyrimidin, do jehož molekuly se reakcí s aryldiazoniovou solí a poté redukcí vzniklé azosloučeniny zavede aminoskupina do polohy C-5 pyrimidinového kruhu. Uzavření imidazolového kruhu se provádí stejně, jako je popsáno v předchozím odstavci. Čistá reakční doba činí cca 3 dny s výtěžky 10 až 40 %, je to tedy metoda použitelná pouze pro snadno dostupné aminové substráty (Elliot, R. D. J. Med. Chem. 37, 739, 1994; Patil, S. D. J. Med. Chem. Vol. 35, 3372, 1992; Gonzalez-Diaz, H., Bioorg. Med. Chem. Lett. 15, 1651, 2005).

Jak je zřejmé, hlavní nevýhodou doposud známých postupů je především velká pracnost a časová náročnost - syntézy vyžadují desítky až stovky pracovních hodin a minimálně dvojí (často i víceré) čištění produktů jednotlivých reakcí. Uzavírání imidazolového kruhu triethylortoformiátem vyžaduje použití silné kyseliny (nejčastěji chlorovodíkové), což může být nevhodné pro některé typy substrátů, použití dietoxymethyl-acetátu pro tutéž reakci je ekonomicky velmi náročné. Při použití málo reaktivních výchozích látek také bývá častým problémem nízký výtěžek reakční sekvence.

Podstata vynálezu

Vynález předkládá nový, jednoduchý, časově nenáročný a ekonomicky velmi výhodný způsob výroby sloučenin obecného vzorce III a meziproduktů obecného vzorce IL

Cl

(II)

Předmětem vynálezu je tedy způsob výroby C-6, N-9 substituovaných analogů purinu obecného vzorce III

kde Z je vodík nebo aminoskupina,

Q je aminoskupina, alkylamin Ci-i₅, dialkylamin Ci_|₅, heterocyklický amin, arylamin, diarylamin, hydroxyskupina, alkoxyskupina C₍_|₅, merkaptoskupina, alkylthioskupina Cj_₁₅, azidoskupina a Rj je alkyl Ci—]5? alkenyl C₂—]5, alkynyl C₂_]5, cykloalkyl C3—10, cykloalkenyl C3—10? bicyklo— alkyl C₄_|₀, bicykloalkenyl C5-10, aryl či heteroaryl přičemž

- alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, bicykloalkyl, bicykloalkenyl může mít jednu nebo více -CH₂- skupin nahrazenu -O-, -S- nebo -NR₂- skupinou, kde R₂ je ze skupiny, zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl či heteroaryl jak jsou zde definovány;

- aryl je uhlovodíková skupina obsahující 6 až 14 uhlíkových atomů, obsahující alespoň jedno aromatické jádro, s výhodou fenyl, benzyl, naftyl;

- heteroaryl je aryl, v němž jsou 1 až 4 uhlíkové atomy nahrazeny heteroatomy vybrané nezávisle z kyslíku, síry, a dusíku;

- skupiny R! mohou být nesubstituované nebo substituované 1 až 10 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, =0, =S, =N, =CH₂, chlor, fluor, aryl, heteroaryl, -SO₃H, N₃, SO₂NH₂, SCN, -CN, -P(O)(OR3)₂, -COOR3, kde R₃ je vodík nebo alkyl C। _io, přičemž takovýto substituent může být ke skupině R| vázán přímo nebo prostřednictvím alkylového řetězce, který může mít jednu nebo více -CH₂- skupin nahrazenu -O-, -S-, nebo -NR^, kde R₂ má shora uvedený význam;

charakterizovaný tím, že, v prvním kroku se primární amin nebo diamin nesoucí substituent R_b jak byl popsán výše, či jeho sůl ponechá jako substrát reagovat s činidlem, jímž je pyrimidinový prekurzor obecného vzorce I,

-3CZ 305750 B6

0), kde Zje vodík nebo aminoskupina, ve vhodném rozpouštědle za přítomnosti nenukleofílní báze, za zahřívání, čímž dojde na aminoskupině substrátu k postupné výstavbě substituované chlorpurinové báze, obecného vzorce II,

Cl

(II), kde substituenty Z a R| jsou stejné jak bylo popsáno výše, přičemž dusíkový atom takové aminoskupiny se stane pozicí N-9 vzniklé nukleobáze;

volitelně se ve druhém kroku k reakční směsi bez izolace chlorpurinového meziproduktu přidá nukleofilní činidlo a vzniklý 6,9-substituovaný purin vzorce III, jak byl uveden výše, se oddělí.

Význakem popsaného způsobu výroby je to, že jako organické rozpouštědlo se použije alifatický nebo aromatický uhlovodík, alifatický alkohol, nitril organické kyseliny, alifatický nebo alicyklický ether nebo směs dvou či více těchto rozpouštědel, nebo směs některého z těchto rozpouštědel s vodou.

Význakem popsaného způsobu výroby je také skutečnost, že jako nenukleofílní báze se použije alifatický nebo aromatický terciární amin nebo derivát pyridinu, s výhodou diisopropylethylamin, triethylamin či 2,6-lutidin.

Rovněž je význakem popsaného způsobu výroby to, že zahříváním popsaným v kroku 1 se rozumí konvenční nebo mikrovlnné zahřívání na teplotu 100 až 200 °C, po dobu 0,2 až 8 h. Význakem popsaného způsobu výroby je dále skutečnost, že jako nukleofilní činidlo se ve druhém kroku použije roztok amoniaku, primární nebo sekundární amin, thiomočovina, alkylthiol, roztok hydroxidu alkalického kovu, roztok alkoxidu alkalického kovu nebo azid alkalického kovu.

Konečně je význakem uvedeného způsobu výroby i fakt, že krok 2 nukleofilní substituce, realizovaný přidáním nukleofílního činidla, se případně neuplatní a meziprodukt, 9-substituovaný 6chlorpurinový derivát vzorce II, jak je popsáno v nároku 1, se přímo oddělí ze surové reakční směsi.

Syntetický postup je založen na zjištění, že zahříváním primárního aminu s 4,6-dichlor-5formamidopyrimidinem nebo 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinem dochází k výstavbě purinové báze, jíž je 9-substituovaný 6-chlorpurin, respektive 9-substituovaný 2-amino-6chlorpurin, viz schéma 1 (substituenty Q, Rl a Z odpovídají výše uvedenému popisu):

-4CZ 305750 B6

Uvedený postup je založen na překvapivém zjištění, že reakci lze provést pouhým krátkodobým zahříváním v celé řadě organických rozpouštědel popř. v jejich směsích nebo v jejich směsích s vodou za přítomnosti vhodné nenukleofilní báze; jako nenukleofilní bázi lze použít terciární alifatický amin, jako trialkyl- či dialkylarylamin, s výhodou diisopropylethylamin (DIPEA), triethylamin (TEA), nebo pyridinové báze, jako např. 2,6-lutidin.

Vhodným rozpouštědlem jsou aromatické uhlovodíky (např. toluen, xyleny), alifatické alkoholy Cl až C8, nitrily organických kyselin (např. acetonitril), alicyklické ethery (např. dioxan, tetrahydrofuran), glykolové ethery (např. bis(2-methoxyethyl)ether) a další; rovněž lze použít směsi uvedených rozpouštědel i organická rozpouštědla zředěná vodou. Ohřev reakční směsi se provádí mikrovlnně nebo konvenčně na teplotu 100 až 200 °C po dobu 0,2 až 8 hodin. Optimální molámí poměr sloučeniny I : aminokomponenty : nenukleofilní báze je 1,2 : 1 : 2; optimální množství rozpouštědla činní 5 ml na 1,2 mmol sloučeniny I. Produkt reakce se izoluje po odpaření těkavých podílů chromatograficky a dočistí se překrystalováním.

Způsob výroby sloučenin obecného vzorce III a popřípadě jejich meziproduktů podle vynálezu je jednoduchý, účinný a univerzálně použitelný; lze jej použít pro libovolně substituovaný primární amin a průběh reakce není ovlivněn ani přítomností většiny běžných chránících a funkčních skupin. Na rozdíl od postupu, využívajícího diethoxymethylacetát nebo triethylortoformiát k uzavírání imidazolového kruhu, je předkládaný způsob výroby velmi ekonomicky výhodný (nevyžaduje žádná další činidla), respektive se vyhýbá použití silné minerální kyseliny, a je tudíž vhodný i pro acidolabilní výchozí sloučeniny. Při použití stericky bráněných aminů nebo aminů s nestabilními substituenty, jakými jsou např. diester fosfonátu nebo t-butyloxykarbonylová chránící skupina, mohou výtěžky reakce poklesnout z důvodu rozkladných reakcí; dosahované výtěžky však zpravidla neklesají pod 50 %. Při použití aminů s diesterem fosfonátu dochází v průběhu reakce k hydrolýze jedné z esterových fimkcí a produktem reakce je tedy monoester fosfonátu.

Zásadní výhodou způsobu výroby podle předkládaného vynálezu je skutečnost, že v postupu lze vynechat čištění chlorpurinového derivátu a izoluje se až finální produkt, což vzhledem k vysokým výtěžkům celé reakční sekvence činí tento postup velmi atraktivní pro průmyslové využití. To je ukázáno například na přípravě používaného léčiva Abacaviru (příklad 6).

Podstata vynálezu je zřejmá z uvedených příkladů provedení, které vynález ilustrují, ale nikterak neomezují jeho platnost.

Příklady uskutečnění vynálezu

Uváděné reakční teploty jsou teploty reakce, na olejové lázně (měřeno IČ senzorem). Kapalinové chromatografie byly prováděny pomocí tzv. „flash chromatografie“, složení chromatografických soustav je udáváno v objemových procentech, jejichž rozmezí určuje začátek a konec použitého gradientu. Za dokončenou reakci byla považována taková, kde se již nevyskytoval meziprodukt výstavby.

-5CZ 305750 B6

Seznam zkratek
Et	ethyl
Ac	acetyl
DIPEA	diisopropylethylamin
HPLC	vysoce účinná kapalinová chromatografie
TEA	triethylamin
AcOEt	ethylacetát
MeOH	methanol
m-BuOH	«-butanol
NaOH	hydroxid sodný
MeONa	methoxid sodný

Příklad 1

6-chlor-9^yklohexyl-9//-purin (Ila, Z=H, R]=cyklohexyl)

Cl

Č

K roztoku 230 mg 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (1,2 mmol) v 5 ml dioxanu se přidá 115 μΐ cyklohexylaminu (1 mmol) a 349 μΐ DIPEA (2 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 160 °C po dobu 2 hodin. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se přečistí sloupcovou chromatografií (25 až 35 % AcOEt v hexanu). Získá se 204 mg (86 % teorie) produktu čistoty >98 % (dle HPLC). Produkt je možné překrystalovat z cyklohexanu.

NMR spektra produktu odpovídají literatuře (Lambertucci, C. Bioorg. Med. Chem. 17, 2812, 2009).

Reakci lze uskutečnit za použití různých nenukleofilních bází i rozpouštědel, jak dokumentují výsledky optimalizačních pokusů, uvedených v tabulce 1 a 2.

Tabulka 1

Vliv nenukleofilních bází na výtěžek reakce v různých rozpouštědlech

	Toluen	Dioxan	«-BuOH
	Podmínky	Výtěžek	Podmínky	Výtěžek	Podmínky	Výtěžek
DIPEA	140 °C/2 h	80%	160 °C /2 h	86%	140 °C/2h	73%
Et3N	140 °C/2 h	81 %	160 °C/2 h	82%	140 °C/2 h	70%
2,6-Lutidin	140 °C/3 h	81 %	140 °C/6 h	50%	140 °C/3 h	64%

-6CZ 305750 B6

Tabulka 2

Vliv rozpouštědla na výtěžek reakce

	Podmínky	Výtěžek
Toluen	140 °C /2 h	80%
1,4-Dioxan	160 °C/2h	86%
MeCN	140 °C/2 h	50%
n-BuOH	140 °C/2 h	73%
í-PrOH	140 °C/2 h	61 %
EtOH	140 °C/2 h	58%

Jako nenukleofilní báze byl použit DIPEA.

Stejně byla provedena reakce 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu s dalšími alicyklíckými, alifatickými acyklickými a aromatickými aminy jako 1-adamantylamin, anilin, apod. Podmínky a 10 výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 3.

Tabulka 3

Sloučeniny vzorce Ila připravené podle příkladu 1

Amin	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek
nh2 ó	1,4-Dioxan	160 °C /2 h	80%
.ΝΗ2 H	n-BuOH	140 °C/2h	93%
	n-BuOH	140 °C/2h	56%
^nh2 F	1,4-Dioxan	160 °C/2h	94%
nh2 Φ /0	m-BuOH	140 °C /2 h	84%

Příklad 2

6-chlor-9-cyklohexyl-9/Z-purin-2-amin (lib, Z=NH₂, R|=cyklohexyl)

K. suspenzi 250 mg 2-amino—4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (1,2 mmol) v 5 ml směsi ethanokvoda (1:1) se přidá 115 μΐ cyklohexylaminu (1 mmol) a 349 μΐ DIPEA (2 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 140 °C po dobu 1 hodiny. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se přečistí sloupcovou chromatografií (40 až 60 % AcOEt v hexanu). Získá 162 mg (64 % teorie) produktu čistoty >98 % (HPLC). Produkt je možné překry stalo vat z toluenu.

NMR spektra produktu odpovídají literatuře (Legraverend, M. Bioorg. Med. Chem. Ί, 1281, 1999).

Reakce lze uskutečnit za použití různých nenukleofilních bází i rozpouštědel, jak dokumentují výsledky optimalizačních pokusů, uvedených v tabulce 4 a 5.

Tabulka 4

Vliv nenukleofilních bází na výtěžek reakce v různých rozpouštědlech

	Toluen	n-BuOH	EtOH/H2O (1:1)
	Podmínky	Výtěžek	Podmínky	Výtěžek	Podmínky	Výtěže k
DIPEA	160 °C/2h	58%	160 °C/2 h	64%	140 °C/1 h	64%
Et3N	160 °C/2 h	65%	160 °C/2h	61 %	140 °C/2h	64%
2,6-Lutidin*	140 °C/2h	62%	140 °C /4 h	35%	140 °C/4h	54%

* Při použití alkoholu jako rozpouštědla vzniká 6-alkoxy purinový derivát

Tabulka 5

Vliv rozpouštědla na výtěžek reakce

Jako nenukleofilní báze byl použit DIPEA.

-8CZ 305750 B6

	Podmínky	Výtěžek
Toluen	160 °C/2 h	58%
1,4-Dioxan	160 °C/2 h	66%
MeCN	160 °C/2 h	62%
n-BuOH	160 °C /2h	64%
z-PrOH	155 °C/2h	56%
EtOH	145 °C/2h	54%
EtOH/H2O (1:1)	140°C/lh	64%

Stejně byla provedena reakce 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu s dalšími alifatickými cyklickými, alifatickými acyklickými a aromatickými aminy jako 1-adamantylamin, anilin, 5 apod. podmínky a výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 6.

Tabulka 6 io Sloučeniny vzorce lib připravené podle příkladu 2

Amin	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek
nh2 ó	n-BuOH	160°C/2h	73%
q IZ z w	n-BuOH	160°C / 2 h	97%
	n-BuOH	160°C/2h	66%
^NH’ F	zz-BuOH	160°C/2h	93%
nh2 /0	zz-BuOH	160°C/2h	80%

Příklad 3 (1R*,2R*)-2-{6-chlor-9//-purin-9-yl)cyklohexanol

-9CZ 305750 B6

K roztoku 230 mg 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (1,2 mmol) v 5 ml n-butanolu se přidá 152 mg hydrochloridu (17?*,2J?*)-2-aminocyklohexanolu (1 mmol) a 523 μΐ DIPEA (3 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 140 °C po dobu 2 hodin. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se přečistí sloupcovou chromatografií (70 až 90 % AcOEt v hexanu). Získá se 215 mg (85 % teorie) produktu čistoty >98 % (dle HPLC). Produkt je možné překrystalovat ze směsi cyklohexan - toluen.

'H NMR: 3 1,31 - 1,42 (m, 3H, H-4ax, H-5ax, H-6ax), 1,74 - 1,79 (m, 2H, H-4eq, H-5eq), 1,95 - 2,04 (m, 2H, H-3eq, H-6eq), 2,14 (m, 1H, H-3ax), 4,01 (m, 1H, H-l), 4,26 (ddd, 1H, J₂,3ax = 12,5, J_2>1 = 10,0, J_2;3eq = 4,3, H-2), 4,94 (d, 1H, J_0H,i = 5,3, OH), 8,74 a 8,75 (s, 2H, H-2', H-8'). ¹³C NMR: J24,13 a 24,85 (C^l, C-5), 30,78 (C-3), 34,85 (C-6), 62,14 (C-2), 7é,28 (C1), 131,39 (C-5'), 147,14 (C-8'), 148,97 (C-6'), 151,18 (C-2'), 152,36 (C^l'). ESI MS m/z (%): 253.1 (22) [M+H]; 275.1 (100) [M+Na]; HRMS ESI (CnH^ONíClNa) vypočteno: 275.06701; nalezeno: 275.06708. Pro CnH^NqClO (252,70) vypočteno: 62,28 % C, 5,19 % H, 22,17 % N, 14,03 % Cl; nalezeno: 52,33 % C, 5,22 % H, 22,40 % N, 13,89 % Cl.

Stejně byla provedena reakce 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu s aminoalkoholy jako aminoethanol, 2-aminopropan-l,3-diol, (l-aminocyklopentyl)methanol apod. Podmínky a výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 7.

Tabulka 7

Sloučeniny vzorce Ila připravené podle příkladu 3

Amin	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek
nh2 HO^/^OH	n-BuOH	140 °C / 2h	66%
ho^NH2	n-BuOH	140 °C/2h	94%
OH ho^J^nh2	n-BuOH	140 °C / 2h	88%
O$NH! HO	1,4-Dioxan	160 °C/2h	61 %
z^/S^NH2 HO VJ	n-BuOH	140 °C/2h	70%

Příklad 4 (17?*,27č*)-2-(2-amino-6-chlor-9//-purin-9-y l)cyklohexanol

-10CZ 305750 B6

Cl

K suspenzi 250 mg 2-amino—4,6-dichlor-5-fbrmamidopyrimidinu (1,2 mmol) v 5 ml nbutanolu se přidá 152 mg hydrochloridu (ÍR*,2J?*)-2-aminocyklohexanolu (1 mmol) a 523 μΐ DIPEA (3 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 160 °C po dobu 2 hodin. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se přečistí sloupcovou chromatografií (1 až 3 % MeOH v AcOEt). Získá se 206 mg (77 % teorie) produktu čistoty >98 % (dle HPLC). Produkt je možné překrystalovat z ethylacetátu.

NMR spektra produktu odpovídají literatuře (Liboska, R. Collect. Czech. Chem. Commun., 61, 313, 1996).

Stejně byla provedena reakce 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu s aminoalkoholy jako aminoethanol, 2-aminopropan-l,3-diol, (l-aminocyklopentyl)methanol apod. Podmínky a výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 8.

Tabulka 8

Sloučeniny vzorce lib připravené podle příkladu 4

Amin	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek
nh2 ho^A^oh	w-BuOH	160°C/2h	82%
H0 x^NH2	n-BuOH	160°C/2h	92%
OH HOXxAXz,NH2	n-BuOH	160°C/2h	82%
HO	n-BuOH	160°C/2h	66%

Příklad 5 (4-{2-amino-6-chlor-9Z/-purin-9-yl)cyklopent-2-enyl)methanol

Cl

K. suspenzi 2-amino—4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (250 mmol, 1,2 mmol) ve směsi ethanohvoda 1:1 (5 ml) se přidá (4-aminocyklopent-2-enyl)methanol (113 mg, 1 mmol) a DIPEA (349 μΐ, 2 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 140 °C po dobu 1 ho

-11 CZ 305750 B6 diny. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se čistí sloupcovou chromatografií (3 až 8 % methanolu v ethylacetátu). Získá se 211 mg (80 % teorie) produktu čistoty >98 % (dle HPLC). Produkt je možné překrystalovat ze směsi toluen - ethylacetát.

NMR spektra produktu odpovídají literatuře (Daluge, S., M. Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 19,297,2000).

Příklad 6 (4-(2-amino-6-(cyklopropylamino)-977-purin-9-yl)cyklopent-2-enyl)methanol

K surové reakční směsi z přípravy (4-(2-amino-6-chlor-9H-purin-9-yl)cyklopent-2-enyl)methanolu (příklad 5) se přidá cyklopropylamin (350 μΙ, 5 mmol) a reakční směs se zahřívá na 140 °C po dobu 20 minut. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se čistí sloupcovou chromatografií (5 až 15 % methanolu v ethylacetátu). Získá se 215 mg (75 % teorie vzhledem k výchozímu aminu) produktu čistoty >98 % (dle HPLC). Produkt je možné překrystalovat z ethylacetátu.

NMR spektra produktu odpovídají literatuře (Daluge, S., M. Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 19,297,2000).

Příklad 7

Isopropyl (6-chlor-977-purin-9-yl)methylfosfonát

Cl

K roztoku 230 mg 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (1,2 mmol) v 5 ml n-butanolu se přidá 195 mg diisopropyl-aminomethylfosfonátu (1 mmol) a 523 μΐ DIPEA (3 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 140 °C po dobu 2 hodin. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se přečistí HPLC (5 až 50 % MeOH v 1 mold“¹ roztoku TEAB ve vodě). Získá se 264 mg (63 % teorie) TEA soli monomeru fosfonátu čistoty >98 % (dle HPLC).

’H NMR: <5 0,98 (d, 6H, J_CH3ch = 6,2, P-O-CH-CH₃), 1,20 - 1,24 (m, 15H, N-CH-CH₃, NCH₂-CH₃), 3,05 (m, 2H, N-CH₂-CH₃), 3,52 (m, 2H, N-CH-CH3), 4,18 - 4,26 (m, 3H, P-CH₂P-O-CH-CH3), 8,67 (s, 1H, H-8), 8,76 (s, 1H, H-2), 9,61 (bs, 1H, NH). ¹³C NMR: δ 12,37 (NCH₂-CH3), 16,81 a 18,10 (N-CH-CH₃), 24,42 (d, J_C-o-o-p = 3,6, P-O-CH-CH₃), 41,50 (d, J_C,_P = 137,8, CH₂P), 41,65 (N-CH₂-CH₃), 53,29 (N-CH-CH3), 67,09 (d, J_C-o-_P = 5,8, CH₂P), 130,39

- 12CZ 305750 B6 (C-5), 147,91 (C-8), 148,84 (C-6), 151,46 (C-2), 152,17 (CM). negESI MS m/z (%): 289.0 (100) [M-H]; HRMS negESI (CfjHnQMClP) vypočteno: 289.02628; nalezeno: 289.02611.

Stejně byla provedena reakce 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu s aminy nesoucími kyselou funkční skupinu nebo její ester. Podmínky a výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 9.

Tabulka 9

Sloučeniny vzorce Ila připravené podle příkladu 7

Amin	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek
HO3S^__^NH2	1,4-Dioxan	160°C/2h	83%
1	n-BuOH	140°C/2h	50%

Příklad 8

Isopropyl (2-amino-6-chlor-9J/-purin-9-yl)methylfosfbnát

K suspenzi 250 mg 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (1,2 mmol) v 5 ml směsi ethanol:voda (1:1) se přidá 195 mg diisopropyl-aminomethylfosfonátu (1 mmol) a 523 μΐ DIPEA (3 mmol) a reakční směs se zahřívá v uzavřené tlakové nádobě na 140 °C po dobu 1 hodiny. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se přečistí HPLC (5 až 50 % MeOH v 1 mokl”' roztoku TEAB ve vodě). Získá se 276 mg (68 % teorie) TEA soli monoesteru fosfonátu čistoty >98 % (dle HPLC).

^lH NMR: <50,97 (bs, 6H, P-O-CH-CH3), 1,23 - 1,27 (m, 15H, N-CH-CH3, N-CH2-CH3), 3,07 (m, 2H, N-CH2-CH3), 3,54 (m, 2H, N-CH-CH3), 3,97 (bs, 2H, P-CH2), 4,21 (m, 1H, P-O-CHCH3), 6,80 (bs, 2H, NH2), 8,21 (bs, 1H, H-8), 9,66 (bs, 1H, NH). ¹³C NMR: 812,32 (N-CH2CH₃), 16,84 a 18,10 (N-CH-CH₃), 24,44 (P-O-CH-CH3), 41,61 (N-CH₂-CH₃); 53,29 (N-CHCH₃), 122,97 (C-5), 143,85 (C-8), 149,07 (C-6), 154,45 (C^l), 159,78 (C-2). negESI MS m/z (%): 304.0 (100) [M-H]; HRMS negESI (C₉Hi₂C1N₅O3P) vypočteno: 304.03718; nalezeno: 304.003731.

Stejně byla provedena reakce 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu s aminy nesoucími jinou kyselou funkční skupinu nebo její ester. Podmínky a výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 10.

- 13CZ 305750 B6

Tabulka 10

Sloučeniny vzorce lib připravené podle příkladu 8

Amin	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek
HO3S^__^NH2	«-BuOH	160°C/2h	72%
NH=	EtOH-H2O (1:1)	140°C/2h	42%

Příklad 9 l,3-bis(6-chlor-9//-purin-9-yl)propan-2-ol

K roztoku 4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (460 mg, 2,4 mmol) v dioxanu (10 ml) se přidá l,3-diaminopropan-2-ol (90 mg, 1 mmol) a DIPEA (700 μΐ, 4 mmol) a reakční směs se zahřívá v uzavřené tlakové nádobě na 160 °C po dobu 2 hodin. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se čistí sloupcovou chromatografií (5 až 15 % MeOH v AcOEt). Získá se 320 mg (88 % teorie) produktu čistoty >98 % (HPLC). Produkt je možné překrystalovat z ethylacetátu.

'H NMR: <54,30 (dd, 2H, J_gem = 14,1, = 7,9, H-Tb), 4,43 (m, 1H, H-2'), 4,52 (dd, 2H, J_gem = 14,1, Jra,2- = 3,7, H-Ta), 5,65 (d, 1H, J_OH,2· = 5,6, OH), 8,63 (s, 2H, H-8), 8,78 (s, 2H, H-2). ¹³C NMR: <547,52 (C-T), 66,82 (C-2'), 130,94 (C-5), 148,29 (C-8), 149,06 (C-6), 151,62 (C2), 152,40 (C^l). ESI MS m/z: 365,0 (11) [M+H]; 387,0 (100) [M+Na]; HRMS ESI (CnHnONsCh) vypočteno: 365,04274; nalezeno: 365,04273. Pro CnHioNgCLO (365,18) vypočteno: 42,76 % C, 2,76 % H, 30,68 % N, 19,42 % Cl; nalezeno: 42,64 % C, 2,73 % H, 30,89 % N, 19,55% Cl.

Příklad 10 l,3-bis(2-amino-6-chlor-9í/-purin-9-yl)propan-2-ol

NH₂

K. suspenzi 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (500 mg, 2,4 mmol) v n-butanolu (10 ml) se přidá l,3-diaminopropan-2-ol (90 mg, 1 mmol) a DIPEA (700 μΐ, 4 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 160 °C po dobu 2 hodin. Velmi nerozpustný produkt se odfiltruje, krátce povaří v methanolu a po ochladnutí znovu zfiltruje. Získá se 340 mg (86 % teorie) produktu čistoty >98 % (HPLC).

- 14CZ 305750 B6 'H NMR: 54,00 (dd, 2H, J_gem = 14,3, J_r,_b,2- = 8,1, H-l'b), 4,19 (dd, 2H, J_gem = 14,2, J_Va>2. = 3,5, H-l'a), 4,27 (m, 1H, H-2'), 5,60 (d, 1H, J_Oh,2· = 5,6, OH), 6,88 (bs, 4H, NH₂), 8,05 (s, 2H, H-8). ^,3C NMR: J47,06 (C-l'), 66,73 (C-2'), 123,43 (C-5), 144,10 (C-8), 149,43 (C-6), 154,50 (C4), 159,90 (C-2). ESI MS m/z (%): 395.1 (11) [M+H]; 417.1 (100) [M+Na]; HRMS ESI (C₁₃H_I3ONioC1₂) vypočteno: 395,06454; nalezeno: 395,06444. Pro Ci₃H₁₂N₁₍₎CI₂O (395,21) vypočteno: 39,51 % C, 3,06 % H, 35,44 % N, 17,94 % CI; nalezeno: 39,66 % C, 3,10 % H, 35,17 % N, 18,02% Cl.

Příklad 11

9-(2-( 1 #-indol-3-yl)ethyl)-9//-purin-6-amin

K suspenzi 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (230 mg, 1,2 mmol) vn-butanolu (5 ml) se přidá tryptamin (160 mg, 1 mmol) a DIPEA (349 μΐ, 2 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 160 °C po dobu 2 hodin. K surové reakční směsi se přidá ethanolický roztok amoniaku (3,5 mol.1¹, 8 ml) a reakční směs se dále zahřívá na 120 °C po dobu 30 minut. Všechny těkavé komponenty se odpaří na vakuové odparce a surový produkt se čistí sloupcovou chromatografii (40 až 60 % ethylacetátu v hexanu). Získá se 240 mg (86 % teorie vzhledem k výchozímu aminu) produktu čistoty >98 % (HPLC). Produkt je poté možné ještě krystalovat ze směsi voda - methanol.

'H NMR: 53,25 (m, 2H, H-3'-CH₂), 4,42 (m, 2H, N-CH₂), 6,98 (ddd, 1H, J₅-_>4- = 7,9, J₅._>6· = 7,0, J_{5 ;7}' = 1,1, H-5'), 7,05 - 7,08 (m, 2H, H-2', H-6'), 7,15 (bs, 2H, NH₂), 7,33 (dm, 1H, J_A6< = 8,1 H-7'), 7,55 (dm, 1H, J_4;y = 7,9, H-4'), 7,99 (s, 1H, H-8), 8,18 (s, 1H, H-2), 10,84 (bs, 1H, H1'). ¹³C NMR: 525,63 (3'-CH₂), 43,80 (N-CH₂), 110,54 (C-3'), 111,60 (C-7'), 118,36 (C^l'), 118,56 (C-5'), 118,94 (C-5), 121,22 (C-6'), 123,20 (C-2'), 127,14 (C-3'a), 136,36 (C-7'a), 140,96 (C-8), 149,70 (C^I), 152,54 (C-2), 156,10 (C-6). ESI MS m/z (%): 279,4 (100) [M+H]; 301,3 (39) [M+Na]; HRMS ESI (C_I5H₁₅N₅) vypočteno: 279,13527; nalezeno: 279,13539. Pro C₁₅H₁₄N_é (278,31) vypočteno: 64,73 % C, 5,07 % H, 30,20 % N; nalezeno: 64,53 % C, 5,00 % N, 30,41 %N.

Stejně byla tato reakce provedena s použitím dalších nukleofilních činidel. Podmínky a výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 11.

Tabulka 11

Nukleofilní substituce 6-chlor-9-[2-(l/Z-indol-3-yl)ethyl]-977-purinu

-15CZ 305750 B6

Činidlo	Molámí přebytek činidla*	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek**
Cyklopropylamin	5 ekviv.	«-BuOH	140°C/20 min	91%
Morfolin	5 ekviv.	«-BuOH	140 °C/20 min	87%
Thiomočovina	2 ekviv.	n-BuOH	120 °C/60 min	80%
MeONa (1 molT1)	10 ekviv.	dioxan	80 °C/10 min	82%
NaOH (2 molT1)	10 ekviv.	dioxan	100°C/10 min	79 %

*molámí přebytek činidla je udáván vzhledem k výchozímu aminu **výtěžek je udáván vzhledem k výchozímu aminu

Příklad 12

6-chlor-9-[2-( 177-indol-3-y l)ethy]]-9H-purin-2-amin

K suspenzi 2-amino-4,6-dichlor-5-formamidopyrimidinu (250 mg, 1,2 mmol) v «-butanolu (5 ml) se přidá tryptamin (160 mg, 1 mmol) a DIPEA (349 μΐ, 2 mmol) a reakční směs se v uzavřené tlakové nádobě zahřívá na 160 °C po dobu 2 hodin. K surové reakční směsi se přidá ethanolický roztok amoniaku (3,5 mol.l’¹, 8 ml) a reakční směs se dále zahřívá na 140 °C po dobu 60 minut. Velmi nerozpustný produkt se odfiltruje, krátce povaří ve směsi voda:methanol (1:1, 20 ml) a po ochladnutí znovu zfiltruje. Získá se 290 mg (92 % teorie vzhledem k výchozímu aminu) produktu čistoty >98 % (HPLC). Produkt je poté možné ještě krystalovat z toluenu.

‘H NMR: 53,18 (m, 2H, H-3'-CH₂), 4,24 (m, 2H, N-CH₂), 5,80 (bs, 2H, NH₂), 6,62 (bs, 2H, 6NH₂), 6,98 (ddd, 1H, J_5;4' = 7,9, = 7,0, J_y>r =1,1, H-5'), 7,06 - 7,09 (m, 2H, H-2', H-6'),

7,34 (dm, 1H, J₇ ,₆· = 8,1, H-7'), 7,56 (s, 1H, H-8), 7,56 (dm, 1H, J_<5· = 7,9, H-4'), 10,84 (bs, 1H, H-l'). ¹³C NMR: 525,59 (3'-CH₂), 43,15 (N-CH₂), 110,82 (C-3'), 111,58 (C-7'), 113,42 (C-5), 118,48 (C^T), 118,56 (C-5'), 121,22 (C-6'), 123,05 (C-2'), 127,18 (C-3'a), 136,36 (C-7'a), 137,64 (C-8), 151,94 (C^l), 156,26 (C-6), 160,41 (C-2). ESI MS m/z (%): 294,1 (100) [M+H]; 316,1 (63) [M+Na]; HRMS ESI (C|₅Hi₆N₇) vypočteno: 294,14617; nalezeno: 294,14619. Pro C₁₅H₁₅N₇ (293,33) vypočteno: 61,42 % C, 5,15 % H, 33,43 % N; nalezeno: 61,30 % C, 5,17 % H, 33,70 % N.

Stejně byla tato reakce provedena s použitím dalších nukleofilních činidel. Podmínky a výtěžky reakcí jsou uvedeny v tab. 12.

Tabulka 12

Nukleofilní substituce 6-chlor-9-[2-( l//-indol-3-yl)ethyl]-9H-purin-2-aminu

-16CZ 305750 B6

Činidlo	Molámí přebytek činidla*	Rozpouštědlo	Podmínky	Výtěžek**
Cyklopropylamin	5 ekviv.	n-BuOH	140 °C/30 min	82 %
Morfolin	5 ekviv.	n-BuOH	140 °C/30 min	83 %
Thiomočovina	2 ekviv.	n-BuOH	120 °C/3h	84%
MeONa(lmol.r')	10 ekviv.	dioxan	100 °C/10 min	93 %
NaOH (2 mol.11)	10 ekviv.	dioxan	100 °C/20 min	88%

*molámí přebytek činidla je udáván vzhledem k výchozímu aminu ** výtěžek je udáván vzhledem k výchozímu aminu

Průmyslová využitelnost

N-9-substituované analogy purinu obecného vzorce III jsou použitelné jako léčiva, chlorpurinové meziprodukty jsou obecně používanými meziprodukty pro výrobu léčiv. Způsob výroby podle tohoto vynálezu zásadním způsobem zjednodušuje, usnadňuje a zlevňuje výrobu léčiv obecného vzorce lil.

Claims (6)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Způsob výroby N-9 substituovaných analogů purinu obecného vzorce III, Q

   (III), kde Z je vodík nebo aminoskupina,

   Q je aminoskupina, alkylamin Cj-is, dialkylamin C|_]₅, heterocyklický amin, arylamin, diarylamin, hydroxyskupina, alkoxyskupina C]_i₅, merkaptoskupina, alkylthioskupina Ci_₎₅, azidoskupina a Ri je alkyl Cmj, alkenyl C215, alkynyl C₂_]₅, cykloalkyl C₃ 10, cykloalkenyl C₃__l0, bicykloalkylC4-10, bicykloalkenyl C₅_io, aryl či heteroaryl, přičemž

   - alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, bicykloalkyl, bicykloalkenyl může mít jednu nebo více -CH₂- skupin nahrazenu -O-, -S- nebo -NR₂- skupinou, kde R₂ je ze skupiny, zahrnující alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl či heteroaryl jak jsou zde definovány;

   - aryl je uhlovodíková skupina obsahující 6 až 14 uhlíkových atomů, obsahující alespoň jedno aromatické jádro, s výhodou fenyl, benzyl, naftyl;

   - heteroaiyl je aryl, v němž jsou 1 až 4 uhlíkové atomy nahrazeny heteroatomy vybrané nezávisle z kyslíku, síry a dusíku;

   - skupiny Ri mohou být nesubstituované nebo substituované 1 až 10 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -OH, =0, =S, sN, =CH₂, chlor, fluor, aryl, heteroaryl, -SO₃H, N₃, SO₂NH₂, SCN, -CN, -P(O)(OR₃)₂, -COOR₃, kde R₃ je vodík nebo alkyl Ci ₎₀, přičemž takovýto substituent může být ke skupině Ri vázán přímo nebo prostřednictvím alkylového řetězce, který může mít jednu nebo více -CH₂- skupin nahrazenu -O-, -S-, nebo -NR₂-, kde R₂ má shora uvedený význam;

   - 17CZ 305750 B6 vyznačující se tím, že v prvním kroku se primární amin nebo diamin se substituentem R_b jak byl popsán výše, či jeho sůl jako substrát ponechá reagovat s činidlem, jímž je pyrimidinový prekurzor obecného vzorce I

   (I), kde Z je H nebo NH₂, ve vhodném rozpouštědle za přítomnosti nenukleofilní báze, za zahřívání, čímž dojde na aminoskupině substrátu k postupné výstavbě substituované chlorpurinové báze, obecného vzorce II

   Cl

   Ri (II), kde substituenty Z a Ri jsou stejné jak bylo popsáno výše, přičemž dusíkový atom takové aminoskupiny se stane pozicí N-9 vzniklé nukleobáze, a volitelně se ve druhém kroku k reakční směsi bez izolace chlorpurinového meziproduktu přidá nukleofilní činidlo a vzniklý 6,9-substituovaný purin vzorce III, kde substituenty Z, Q a R¹ jsou stejné, jak bylo popsáno výše, se oddělí.
2. 2. Způsob výroby nároku 1, vyznačující se tím, že jako organické rozpouštědlo se použije alifatický nebo aromatický uhlovodík, alifatický alkohol, nitril organické kyseliny, alifatický nebo alicyklický ether nebo směs dvou či více těchto rozpouštědel, nebo směs některého z těchto rozpouštědel s vodou.
3. 3. Způsob výroby nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že jako nenukleofilní báze se použije alifatický nebo aromatický terciární amin nebo derivát pyridinu, s výhodou diisopropylethylamin, triethylamin či 2,6-lutidin.
4. 4. Způsob výroby podle nároků 1, 2 nebo 3, vyznačující se tím, že zahříváním popsaným v kroku 1 se rozumí konvenční nebo mikrovlnné zahřívání na teplotu 100 až 200 °C, po dobu 0,2 až 8 h.
5. 5. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž4, vyznačující se tím, že jako nukleofilní činidlo se použije roztok amoniaku, primární nebo sekundární amin, thiomočovina, alkylthiol, roztok hydroxidu alkalického kovu, roztok alkoxidu alkalického kovu nebo azid alkalického kovu.
6. 6. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž4, vyznačující se tím, že se případně neuplatní krok 2 nukleofilní substituce realizované přidáním nukleofilního činidla a meziprodukt, 9-substituovaný 6-chlorpurin vzorce II, jak je popsán v nároku 1, se přímo oddělí ze surové reakční směsi.